CZ271898A3

CZ271898A3 - Farmaceutická kompozice pro léčbu osteoporózy

Info

Publication number: CZ271898A3
Application number: CZ982718A
Authority: CZ
Inventors: Hua Zhu Ke; David D. Thompson
Original assignee: Pfizer Inc.
Priority date: 1996-02-28
Filing date: 1996-12-23
Publication date: 1999-06-16
Also published as: HK1018210A1; NO20063853L; CZ297452B6; ATE405273T1; PT883404E; PL187219B1; SI0883404T1; HRP970118A2; IL154379A0; CN1515317A; BG102726A; EP1236475A2; EP1932543A3; CL2004000119A1; PE20011302A1; EP0883404A1; AR005987A1; CO4761063A1; AP9700934A0; US20010009920A1

Description

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutické kombinace agonistů/antagonistů estrogenu a činidel, která stimulují tvorbu kosti a zvyšují kostní hmotu. Dále se vynález týká kitů zahrnujících takové kombinace a použití těchto kombinací pro léčbu stavů, které se projevují nízkou kostní hmotou, u savců, včetně člověka.

Dosavadní stav techniky

Osteoporosa je systemická kosterní choroba, pro niž je charakteristická nízká kostní hmota a zhoršování kostní tkáně, v jejichž důsledku dochází ke zvýšení křehkosti kostí a náchylnosti ke zlomeninám. V USA tato choroba postihuje více než 25 milionů lidí a vyvolává každý rok více než 1,3 milionu zlomenin zahrnujících 500 000 zlomenin páteře, 250 000 zlomenin kyčle a 240 000 zlomenin zápěstí. Nejvážnější jsou zlomeniny kyčle, poněvadž 5 až 20 % pacientů s těmito zlomeninami umírá do jednoho roku a u více než 50 % přeživších zůstává invalidních.

Starší lidé jsou vystaveni největšímu riziku osteoporosy a předpokládá se, že se tento problém bude významně zvětšovat se stárnutím populace. Odhaduje se, že ve světovém měřítku dojde v průběhu následujících 60 let ke ztrojnásobení počtu zlomenin a podle jedné studie má dojít roku 2050 ve světě celkem ke 4,5 milionu zlomenin kyčle.

··»· ·« ···· Μ» · ·· » · · · · · · ϊ · * · · · · • · · ······ » · · · · · • Ο ·· ·· ·®

Ženy jsou ohroženy osteoporosou více než muži.

U žen dochází k významnému urychlení ztráty kostní hmoty bezprostředně po menopauze. Z jiných faktorů zvyšujících ztrátu kostní hmoty vedoucí k osteoporose, je možno uvést kouření, abúsus alkoholu, sedavý životní styl a nízký příjem vápníku.

Při prevenci osteoporosy nebo při ztrátě kostní hmoty u žen po přechodu se jako léčiva první volby používá estrogenu. Kromě toho Black et al. oznámili v EP 0 605 193 AI, že estrogen, zejména když se podává orálně, snižuje hladinu LDL v plasmě a zvyšuje hladinu prospěšných lipoproteinů s vysokou hustotou (HDL). Dlouhodobá léčba estrogenem se však dává do souvislosti s různými poruchami včetně zvýšeného ohrožení rakovinou dělohy, rakovinou endometria a možná rakovinou prsu, což vede mnoho žen k tomu, aby se takovému léčení vyhýbaly nebo braly léky jen po krátké období. Přestože se předpokládá, že riziko endometriální rakoviny je možno snížit současným podáváním progestogenu, obava z možného zvýšeného ohrožení rakovinou prsu při podávání estrogenu přetrvává. Nedávno navržené léčebné režimy zaměřené na snížení ohrožení rakovinou, jako je podávání kombinací progesteronu a estrogenu, vyvolávají u pacientů nepřijatelné krvácení. Dále se má za to, že kombinace progesteronu s estrogenem zřejmě otupuje účinnost estrogenu na snižování cholesterolu v séru. Významné nežádoucí účinky spojené s léčením estrogenem podtrhují nutnost vyvinout alternativní terapie osteoporosy, které by měly žádoucí příznivý vliv na hladinu LDL v séru, ale které by neměly nežádoucí vedlejší účinky.

Před nedávnou dobou byla pro léčení osteoporosy navržena řada agonistů/antagonistů estrogenu. Bylo oznámeno (Osteoporosis Conference, Scrip. No. 1812/13. dubna 16/20, 1993, str. 29), že raloxifen, 6-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)• · · · • · · ·

3-(4-( 2-piperidinoethoxy)benzoyl]benzo[b]thiofen, napodobuje příznivý účinek estrogenu na kosti a lipidy, ale na rozdíl od estrogenu má minimální stimulační účinek na dělohu [Black, L. J. et al., Raloxifene (LY139481 Hel) Prevents Bone Loss and Reduces Sérum Cholesterol Without Causing Uterine Hypertrophy in Ovariectomized Rats, J. Clin.

Invest., 1994, 93:63 až 69].

Tamoxifen, 1-(4-p-dimethylaminoethoxyfenyl)-1,2-difenylbut-l-en, je antiestrogen, který byl navržen jako léčivo osteoporosy. Tato látka má paliativní účinek na rakovinu prsu, ale bylo oznámeno, že má estrogenní účinnost v děloze. Gill-Sharma et al., J. Reproduction and Fertility (1993) 99, 395, uvádějí, že tamoxifen v dávce 200 a 400 mg/kg/den snižuje hmotnost varlat a sekundárních pohlavních orgánů u samců potkana.

V US patentu č. 5 254 594 (který je zde citován náhradou za přenesení celého jeho obsahu do tohoto textu) je popsáno použití droloxifenu pro léčbu chorob kostí, jako je osteoporosa.

Činidla jako droloxifen zabraňují ztrátě kostní hmoty, a tím snižují ohrožení frakturou, bez vedlejších účinků estrogenu. 0 estrogenu a agonistech estrogenu samotných se však předpokládá, že snižují riziko zlomenin jen o asi 50 %, a přibližně 50 % ostepenických žen stále zůstává ohroženo osteoporotickými frakturami.

Pro léčbu osteoporosy jsou také navrhovány neestrogenové agonisty/antagonisty, jako jsou bisfosfonáty. Bisfosfonátem pro léčení osteoporosy, který je v současné době na trhu je například Fosamax(^R). Jako jiné bisfosfonáty, které v současné době podstupují povolovací řízení, je možno uvést risedronát, tiludronát a ibandronát.

·· · · · · • · « • · · 4 ·· ·9

Frost et al. v Treatment of Osteoporosis by Manipulation of Coherent Bone Cell Populations, Clinical Orthopedics and Related Research, 143, 227 (1979) popisují teoretický model, v němž je navrženo, že by mělo být možné synchronizovat aktivitu a metabolismus kostních buněk tak, že se nejprve podá aktivační činidlo kostních buněk a poté inhibiční činidlo resorpce kosti, načež se nechá vytvořit normální kost.

Tang et al., Restoring and Maintaining Bone in Osteogenic Female Rat Skeleton: I. Changes in Bone Mass and Structure, J. Bone Minerál Research 7 (9), str. 1093 až 1104, 1992 uvádějí údaje o konceptu ztráty, obnovení a udržování (LRM koncept = Lose, Restore and Maintain Concept), který představuje praktický přístup k reversi existující osteoporosy. LRM koncept využívá pro obnovení kostní hmoty a architektury kosti (fáze +) anabolických činidel a poté za účelem zachování nové kostní hmoty (fáze +/-)· přejde k činidlům s ověřenou schopností udržovat kostní hmotu. Při studii na potkanech bylo použito PGE₂ a risedronátu (bisfosfonátu) a ukázalo se, že převážnou část nové spongiosní a kortikální kostní tkáně indukované PGE₂ je možno podáváním risedronátu zachovat alespoň 60 dnů po přerušení podávání pge₂.

Kombinace bisfosfonátů a prostaglandinů pro léčbu osteoporosy jsou známé. V EP patentové přihlášce 0 381 296 je popsáno použití kitu, při němž po období aktivace kosti či léčebného režimu následuje režim inhibice resorpce kosti. Jako příklady sloučenin aktivujících kostní tkáň jsou v tomto dokumentu uvedeny parathyroidní hormon (PTH), anorganické fosfáty, růstový hormon, fluorid, thyroidní hormon (například thyroxin), určité metabolity vitaminu D a prostaglandiny (PGE₂ při dávkovém režimu 10 mg/kg/den). Jako ···· « ·· ···· ·· ··

činidla inhibující resorpci kosti jsou zde uvedeny polyfosfonáty.

V PCT/US93/08529 je popsána simultánní dodávka aktivačního činidla kostní tkáně, jako prostaglandinu, které je chemicky kopulováno ke sloučenině inhibující resorpci kosti, která selektivně dodává aktivační činidlo kosti do cílové oblasti. Hydrolytické produkty vzniklé postupnou hydrolýzou této nové sloučeniny jsou schopné zajistit inhibiční účinnost na resorpci kosti (působením bisfosfonátů) a růst kosti nebo stimulaci aktivity kosti (působením PGE₂).

Účinky kombinace prostaglandinu E2 a risedronátu (bisfosfonátů) jsou zkoumány ve studii Lin et al., Effects of Prostaglandin E2 and Risedronate Administration on Cancellous Bone in Older Female Rats, Bone 15(5), str. 489 až 496, 1994.

Qiu et al. v Experimental Study on Antiatherosclerotic Treament by PGE₂ Combined With Vitamin E and Estradiol, Chinese Medical Journal, 108(1), str. 33 až 36, 1995 uvádějí že jediná dávka PGE₂ kombinovaná s vitaminem E a estradiolem vykazovala lépe koordinovanou inhibici v případě aortálních a koronárních atherosklerodických lézích, jakož i agregace destiček, proliferace buněk hladkého svalstva a peroxidace lipidů, než jediná dávka PGE₂·

V abstraktu publikace Nonhormonal Alternatives for the Management of Ěarly Menopause in Younger Women with Breast Cancer, Monogr. Nati. Cancer Inst. (16), 161 až 167, 1994 se uvádí: Používání několika neestrogenových přístupů při prevenci a léčení osteoporosy představuje příslib do budoucna. Tradiční doporučení pro zachování celistvosti kostry, jako jsou posilovači cvičení, strava bohatá na vápník a omezování kofeinu, alkoholu a proteinů? vystříhání se kouření; a opatření jak minimalizovat úrazy, se rozšiřují o použití nebo zkoumání léčiv (samotných nebo v kombinaci). Jako příklady takových léčiv je možno uvést progestiny, metabolity vitaminu D, injekčně nebo intranasálně podávaný syntetický lososí kalcitonin, bisfosfonáty, fluorid sodný, pyrathyroidní hormon, růstové faktory, tamoxifen atd..

Přestože již existují různé způsoby léčení osteoporosy, vzhledem k jen omezeným úspěchům současné medicíny při snižování osteoporotických fraktur, na tomto poli nadále přetrvává potřeba a hledání alternativních léčebných možností.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je farmaceutická kompozice, která zahrnuje agonisty/antagonisty estrogenu a anabolická činidla a její použití pro léčbu stavů, u nichž je přítomna ztráta kostní hmoty, jako je osteoporosa u savců (například lidí, zejména žen).

Kombinace zahrnuje terapeuticky účinné množství první sloučeniny, kterou je agonista/angatonista estrogenu a terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, kterou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu.

Jako přednostní agonisty/antagonisty estrogenu je možno uvést droloxifen, raloxifen, tamoxifen, 4-hydroxytamoxifen, cis—6— (4-f luorf enyl) -5- [ 4- (2-piperidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-) -cis-6-f enyl-5- [ 4- (2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

• · · · • · · ·' · · · ·· ·'·

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[ 6 ' -pyrrolidinoethoxy-3 ' -pyridyl ]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1-(4 ' -pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-f luorfenyl )-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6- (4-hydroxyf enyl) — 5— [ 4-( 2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol a l-( 4’-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin.

Jako přednostní anabolická činidla je možno uvést PGDj, PGD₂, PGE₂, PGE_1z PGF₂, PGF₂a a 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-[6-(lH-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanon.

Podle dalšího aspektu je předmětem vynálezu způsob léčení savců, kteří vykazují nízkou kostní hmotu, při němž se savci, který vykazuje nízkou kostní hmotu podává

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je agonista/antagonista estrogenu; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu.

Jako přednostní agonisty/antagonisty estrogenu je možno uvést droloxifen, raloxifen, tamoxifen, 4-hydroxytamoxifen,

4444 4 44 4444 ·4 44 « 4 * 4 4 4 4 4 4 ·

4 444 4 · 4 4

4 4 · 4 4 · 444 444

4 4 4444 4 4 cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-l-[6’-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1-(4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol a

1-(4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin.

Jako přednostní anabolická činidla je možno uvést PGDj, PGD₂, PGE₂, PGEj, PGF₂, PGF₂a a 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-[6-(lH-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanon.

V přednostním provedení je stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, osteoporosa.

Podle jiného přednostního provedení se při tomto způsobu první sloučenina a druhá sloučenina podávají v podstatě současně.

Podle j iného přednostního provedení se při tomto způsobu druhá sloučenina podává po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let.

9999

Po podávání druhé sloučeniny popřípadě následuje podávání první sloučeniny po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let, přičemž druhá sloučenina se po dobu tohoto druhého období (asi 3 měsíců až asi 3 let) nepodává.

Alternativně je podávání druhé sloučeniny následováno podáváním první sloučeninu po dobu delší než asi 3 roky, přičemž druhá sloučenina se během tohoto více než tříletého období nepodává.

Podle dalšího aspektu je předmětem vynálezu synertická farmaceutická kompozice, která zahrnuje

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je agonista/antagonista estrogenu; a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné je nedostatečné pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, kterých se dosáhne jestliže se podávají současně a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

Podle ještě dalšího aspektu je předmětem vynálezu synergický způsob léčby savců, u nichž se projevuje nízká kostní hmota, při němž se savci trpícímu takovým stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou podává • 9 9999

- 10 9 9 ·· • * 9 9 · · 9 • · 9 9 · · · • « «9 · · · 9 9 9 • · · 0 · ·

9 9 9 9 ··

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné je nedostatečné pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, kterých se dosáhne jestliže se podávají současně a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě.

Podle dalšího aspektu je předmětem vynálezu kit pro léčbu stavu, který je projevuje nízkou kostní hmotou, který obsahuje:

a. terapeuticky účinné množství agonisty/antagonisty estrogenu a farmaceuticky vhodný nosič v první jednotkové dávkovači formě ;

b. terapeuticky účinné množství prostaglandinu nebo agonisty/antagonisty prostaglandinu a farmaceuticky vhodný nosič ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

c. obalový prostředek pro první a druhou dávkovači formu.

Podle jiného aspektu je předmětem vynálezu farmaceutická kompozice, která zahrnuje

* 99 9	• 99	9 49·	··	99
«	9	9 9	•	• ·	9 4
•	9	9 9	9	9 9	• 9
•	9	9 9 9	9	9 99 9	49 9
• ·	9	• 9	9 9	•	9

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je droloxifen, raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný nebo

N-[1(R)-[1,2-dihydro-l-methansulfonylspiro[3H-indol-3, 4 ’ piperidin]-1 ’ -yl)karbonyl]-2-(fenylmethyloxy)ethyl]-2amino-2-methylpropanamid: MK-677.

V přednostním provedení této kompozice je první sloučeninou droloxifen.

Podle jiného aspektu je předmětem vynálezu způsob léčby savců, kteří vykazují nízkou kostní hmotu, při němž se savcům, kteří jsou postiženi stavem, který je projevuje nízkou kostní hmotou podává

N-[1(R)-[1,2-dihydro-l-methansulf onylspiro [ 3H-indol-3,4 ' piperidin ] -1' -yl) karbonyl ] -2- (fenylmethyloxy) ethyl ] -2amino-2-methylpropanamid: MK-677.

V přednostním provedení tohoto způsobu je první sloučeninou droloxifen.

Podle jiného přednostního provedení tohoto způsobu je stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, osteoporosa.

Podle j iného přednostního provedení se při tomto způsobu první sloučenina a druhá sloučenina podávají v podstatě současně.

Podle jiného přednostního provedení se při tomto způsobu druhá sloučenina podává po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let.

Po podávání druhé sloučeniny popřípadě následuje podávání první sloučeniny po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let bez podávání druhé sloučeniny po dobu těchto asi 3 měsíců až asi 3 let.

Alternativně podávání je druhé sloučeniny následováno podáváním první sloučeniny po dobu delší než asi 3 roky bez podávání druhé sloučeniny po tuto dobu.

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je droloxifen, raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný nebo N-[l(R)-[l,2-dihydro-l-methansulfonylspiro[3H-indol-3,4'-piperidin]-l'-yl)karbony 1 ]-2-(fenylmethyloxy)ethyl]-2-amino-2-methylpropanamid: MK-677, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné je nedostatečné pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resórpce kostní hmoty, kterých se dosáhne jestliže se podávají současně a přičemž kombinovaný účinek množství

4« *·«· ·· ··

9 · 9 9 9 9

9 · * · * · • · < 9 9 999 99·'

9 9 9 9 9

99 9 9 9 9 99 první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

V přednostním provedení této synergické kompozice je první sloučeninou droloxifen.

Podle ještě dalšího aspektu je předmětem vynálezu synergický způsob léčby savců, kteří vykazují nízkou kostní hmotu, při němž se savci trpícímu takovým stavem, podává

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný nebo N-[l(R)-[l,2-dihydro-l-methansulf onylspiro[ 3H-indol-3,4 ’-piperidin]-l' -yl)karbonyl ] -2- (f enylmethyloxy) ethyl ] -2-amino-2-methylpropanamid: MK-677, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné je nedostatečné pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty t a snížení resorpce kostní hmoty, kterých se dosáhne jestliže se podávají současně a přičemž kombinovaný účinek množství ' první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

4·« 4 tt 4444 4·' ·· * ♦· 4 4 4 · · · · • 4 4 4 '4 · 4 · 4

4 4 4-9 -4 4 »4 4 »··

4 4494 4 4 »» ··» '44 4· 4 4 '44

V přednostním provedení tohoto synergického způsobu léčby je první sloučeninou droloxifen.

Podle dalšího aspektu je předmětem vynálezu kit pro léčbu stavu, který je projevuje nízkou kostní hmotou, který zahrnuje:

a. terapeuticky účinné množství droloxifenu, raloxifenu, tamoxifenu nebo idoxifenu a farmaceuticky vhodný nosič v první jednotkové dávkovači formě;

b. terapeuticky účinné množství fluoridu sodného nebo N-[1(R)-[1,2-dihydro-l-methansulf onylspirof 3H-indol-3,4' -piperidin ] -1' -yl) karbonyl ] -2- (fenylmethyloxy) ethyl ] -2-amino-2-methylpropanamidu: MK-677 a farmaceuticky vhodný nosič ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

c. obalový prostředek pro první a druhou dávkovači formu.

V přednostním provedení tohoto kitu je první sloučeninou droloxifen.

Podle ještě dalšího aspektu je předmětem vynálezu farmaceutická kompozice, která zahrnuje

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je • cis-6- (4-fluorfenyl) -5- [ 4- (2-piperidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

9999 9 ·9 99·9 99' 9« • '99 9 9 9 9*99

9 9 9 9 9*99 · ♦ · · 9 9 *9 9 9 9 9

9 9 9999 9 9

999 '99 99 9 · 99' cis-6-f enyl-5- [4-( 2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl ]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1- [ 6 ' -pyrrolidinoethoxy-3 ' -pyridyl ] -2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1- (4 ’ -pyrrolidinoethoxyf enyl) -2- (4-f luorf enyl )-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis—6— (4-hydroxy fenyl) -5-[ 4- (2-piperidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1- (4 ' -pyrrolidinolethoxyfenyl) -2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný, parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu.

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je cis-6- (4-fluorfenyl)-5-[ 4—<2-piperiďin-l-ylethoxy j fenylJ-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-) —cis—6—f enyl-5- [ 4- (2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl J -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

9999 9 • ··

9999 99 99

9 9 9-999 • 9 9 9 9 9 9 9-9

-9 9 9 9 9 9 9 99 9 99 9'

9 9 9 9 9 9 9 • 9 999 99 99 99 99 cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3’-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1— (4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1-(4’-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin a

Podle přednostního provedení tohoto způsobu je stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, osteoporosa .

Tento způsob je popřípadě možno provádět tak, že po podávání druhé sloučeniny následuje podávání první ooftfl í) 3ií 30 9*

-3 0 3 š 5 9 9 o 9

3 33-3 99 09

- ~ 3 3 3 3 3 3 \9 30® — X/— 333 9 3 0 3 3 3 <5 _t9d0 3« 9« ť»« '3 0 <

sloučeniny po dobu asi'3 měsíců až asi 3 let bez podávání druhé sloučeniny dobu těchto asi 3 měsíců až asi 3 let.

' í · ’ t

Alternativně je podávání druhé sloučeniny následováno podáváním první’ sloučeninu po dobu delší než asi 3 roky bez podávání druhé sloučeniny v tomto období.

Podle dalšího aspektu je předmětem vynálezu synertická farmaceutická kompozice, která zahrnuje ' r

a. množství první sloučeniny, přičemž touto^první sloučeninou je cis—6—(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)—cis—6—fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-[ 4- (2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-l-[6'-pyrrolidinoethoxy-3’-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

•..1,

1-(4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin; ' cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydroriaftalen-2-ol nebo - ) ~- . t

- '·* fc. ¹ ·,. f .

1-(4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin a‘ » . . ' c

9999 •	• 99'	99 9 9	9 999 9	99 9' 9	9 9 9 9
•	•	• 9	9	9 ·	9' 9
9	•	'9 · '9	9 (9	999	9 99
9 9	•	9 9	• 9	9	9

1- (4 ' -pyrrolidinoethoxyf enyl )-2-(4-f luorf enyl) -6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis—6— (4-hydroxyf enyl) -5- [ 4- (2-piperidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1- (4 ' -pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný, parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné je nedostatečné pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, kterých se dosáhne jestliže se podávají současně a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

Podle dalšího aspektu je předmětem vynálezu kit pro léčbu stavu, který je projevuje nízkou kostní hmotou, který zahrnuj e:

a. terapeuticky účinné množství cis—6— (4-f luorf enyl) -5- [ 4- (2-piperidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

(-) —cis—6—f enyl-5- [ 4- (2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

·· 9999 ·· 99 • 9 · 9 9 9 · • 9 * 9 9 · ·

9 9 9 19 999 99 9

9 9 9 9 9

99 99 99 ·· cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydrona fta1en-2-olu;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalenu;

1-(4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu nebo

1-(4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolinu a farmaceuticky vhodný nosič v první jednotkové dávkovači formě;

b. terapeuticky účinné množství fluoridu sodného, parathyroidního hormonu, růstového hormonu nebo sekretagogu růstového hormonu a farmaceuticky vhodný nosič ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

c. obalový prostředek pro první a druhou dávkovači formu.

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu.

9999 · 99 999 9 9» 99 • '9 9 · 9 · · · · · • · 9 · * 99»9 • 9 9 9 « 9 l· 999 999

999 9999 9 9

Podle ještě dalších aspektů jsou předmětem vynálezu způsoby léčby, synergické kompozice a kity na bázi kompozice popsané bezprostředně výše.

Odborníkům v tomto oboru je zřejmé, že podobným způsobem je možno použít jiných antiresorpčních činidel (bisfosfonátu, estrogenu, estradiolu, premarinu, estronu, estriolu nebo 17a- nebo 17p-ethinylestradiolu) spolu s jinými kostními anabolickými činidly (androgenem, agonistou/antagonistou androgenu) nebo jinými činidly uvedenými v tomto popisu.

Tak lze například antiresorpční činidlo droloxifen kombinovat s jednotlivými kostními anabolickými činidly, jako je parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretatogy růstového hormonu.

Pod pojmem stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou se rozumí stav, při němž je úroveň kostní hmoty pod normální hladinou specifickou pro věk, jak je definována ve standardech Světové zdravotnické organizace Assesment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994), Report of a World Health Organization Study Group. World Health Organization Technical Series 843. Spadají sem také juvenilní idiopatické a primární osteoporosy. Do rozsahu léčby osteoporosy také spadá prevence nebo zmírňování dlouhodobých komplikaci, jako je zakřivení páteře, ztráta výšky, protetická chirurgie a prevence dysfunkcí prostaty. Tato léčba také zahrnuje urychlování hojení zlomenin a urychlování přijetí kostních štěpů. Spadají sem také periodonální choroby a úbytek alveolární kosti.

Pojem stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou se vztahuje také na savce, u nichž je pravděpodob22

9999 • 9 ···· ·· ·· • · · · · · • · i· ··« 9 9 9

9 9 9 9

99 99 nost vývoje některé z výše uvedených chorob, jako je osteoporosa, vyšší než průměrná [například ženy po přechodu, muži nad 60 let a osoby léčené léčivy, o nichž je známo, že jako vedlejší účinek vyvolávají osteoporosu (jako jsou glukokortikoidy)].

Odborníkům v tomto oboru bude zřejmé, že se pod pojmem kostní hmota ve skutečnosti rozumí hmotnost kosti na jednotku plochy, která je někdy (ačkoliv ne zcela přesně) označována jako minerální hustota kosti.

Pojem léčení nebo léčba, jak se ho používá v tomto textu, rovněž zahrnuje preventivní (například profylaktickou) a paliativní léčbu.

Pod pojmem halogen se rozumí chlor, brom, jod nebo fluor.

Pod pojmem alkyl se rozumí nasycený uhlovodíkový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Jako příklady takových alkylskupin je možno uvést methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sek.butyl, terč.butyl, pentyl, isopentyl, hexyl a isohexyl.

Pod pojmem alkoxy se rozumí nasycená alkylskupina s řetězcem přímým nebo rozvětveným, která je vázána přes atom kyslíku. Jako příklady takových alkoxyskupin je možno uvést methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, terč.butoxy, pentoxy, isopentoxy, hexoxy a isohexoxy.

Pod pojmem soli s farmaceuticky vhodnými anionty se rozumějí soli s netoxickými anionty. Jako neomezující příklady takových solí je možno uvést chlorid, bromid, jodid, sulfát, hydrogensulfát, fosfát, acetát, maleát, • toto ·« ···· ·· ·· • » ·· · · • · · · · · • ·« · to · to·· • · · to · · fumarát, oxalát, laktát, tartrát, citrát, glukonát, methansulfonát a 4-toluensulfonát.

Pod pojmem soli s farmaceuticky vhodnými kationty se rozumí soli s netoxickými kationty. Jako neomezující příklady takových solí je možno uvést soli, které obsahují kationty sodíku, draslíku, vápníku, hořčíku, amonia nebo protonovaného benzathinu (N,N'-dibenzylethylendiaminu), * cholinu, ethanolaminu, diethanolaminu, ethylendiaminu, megluminu (N-methylglukaminu), benethaminu (N-benzylfenyl* ethylaminu), piperazinu nebo tromethaminu (2-amino-2hydroxymethyl-l,3-propandiolu).

Znaménka plus nebo minus umístěná v závorce, kterých se zde používá v chemických názvech, označují u konkrétního stereoisomeru směs otáčení roviny polarizovaného světla.

Pod pojmem rozpouštědle inertní vůči reakci nebo inertní rozpouštědlo se v tomto textu rozumí rozpouštědlo, které neinteraguje s výchozími látkami, reakčními činidly, meziprodukty nebo produkty způsobem, který by měl nepříznivé účinky na výtěžek požadovaného produktu.

Odborníku v oboru chemie bude jasné, že určité . sloučeniny podle tohoto vynálezu budou obsahovat jeden nebo více atomů, které mohou být ve zvláštních stereochemických ži nebo geometrických konfiguracích za vzniku stereoisomerů a konfiguračních isomerů. Všechny takové isomery a jejich ’ směsi jsou předmětem tohoto vynálezu. Do jeho rozsahu také spadají hydráty sloučenin podle vynálezu.

Odborníku v tomto oboru bude zřejmé, že určité kombinace substituentů obsahujících heteroatomy, které jsou uvedeny v tomto popisu, definují sloučeniny, jež budou za

9**9 · • ··

9· »f·· » · 9 · · ♦ 9 • 9 * · ···· • 9 · 9 · · 999 ··· • 9 9*9 9 9 fyziologických podmínek méně stabilní (například sloučeniny obsahující acetalové nebo aminalové vazby). Takovým sloučeninám se dává menší přednost.

Farmaceutické kompozice podle vynálezu vedou k rychlejšímu a mohutnějšímu přírůstku kostní hmoty, než jakých se může dosáhnout za použití stejných dávek výše uvedeného agonisty/antagonisty estrogenu samotného nebo výše uvedeného činidla, které stimuluje zvýšení minerální hustoty kosti samotného. Tato kombinace tedy vykazuje synergický účinek, který spočívá ve zvyšování kostní hmoty a snižování četnosti zlomenin ve vyšší míře, než jaké by se dosáhlo za použití kterékoliv ze složek samotné. Tento vynález představuje významný příspěvek v tomto oboru tím, že poskytuje kompozice a způsoby, které zvyšují a zachovávají kostní hmotu, což se projevuje prevencí, retardací a/nebo regresí osteoporosy a příbuzných kostních poruch.

Další znaky a výhody budou zřejmé z popisu a nároků tohoto vynálezu.

Následuje podrobnější popis vynálezu.

První sloučeninou podle tohoto vynálezu je agonista/antagonista savčího estrogenu. Jako první sloučeniny podle vynálezu je možno použít kteréhokoliv agonisty/antagonisty estrogenu. Pod pojmem agonista/antagonista estrogenu se rozumí sloučeniny, které jsou schopné se vázat k receptoru estrogenu, inhibovat obrat v kostech (turnover) a zabraňovat ztrátě kostní tkáně. Takové účinky odborník v tomto oboru snadno stanoví za použití standardních zkušebních postupů, jako jsou zkoušky vazby k receptoru estrogenu (viz In vitro stanovení vazby k receptorům estrogenu dále), a standardních histomorfometrických a densitometrických metod (viz Protokol o zkoušení agonistů/antagonistů

····	··	····	··	00
• ·	• ·	•	• ·	• 4
•	• ·	•	0 0	• 4
4	0 0 0	0	0 ···	009
• 4	0 0	• 0	4	4

estrogenu dále) a Eriksen E. F. etal., Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, str. 1 až 74; Grier S. J. etal., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50 až 62; Wahner H. W. a Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Duál Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice, Martin Dunitz Ltd., London, 1994, str. 1 až 296). Dále jsou uvedeny a popsány různé takové sloučeniny, ačkoliv odborníkům v tomto oboru budou známy ještě jiné agonisty/antagonisty estrogenu.

Přednostním agonistou/antagonistou estrogenu je droloxifen ((E)-3-[l-[4-[2-(dimethylamino)ethoxy]fenyl]-2fenyl-l-butenyl]fenol) a příbuzné sloučeniny, které jsou popsány v US patentu 5 047 431 (tento patent je zde citován náhradou za přenesení celého jeho obsahu do tohoto textu).

Dalším přednostním agonistou/antagonistou estrogenu je tamoxifen (2-hydroxy-l,2,3-propantrikarboxylát (Z)-2-[4-(1,2-difenyl-l-butenyl)fenoxy]-N,N-dimethyl]ethanaminu (1:1)) a příbuzné sloučeniny, které jsou popsány v US patentu 4 536 516. Další podobnou sloučeninou je 4-hydroxytamoxifen, který je popsán v US patentu č. 4 613 660.

(Oba tyto patenty jsou zde citovány náhradou za přenesení jejich celého obsahu do tohoto textu).

Dalším přednostním agonistou/antagonistou estrogenu je raloxifen (hydrochlorid [6-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)benzo[b]thien-3-yl]-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenyl]methanonu a příbuzné sloučeniny, které jsou popsány v US patentu 4 418 068 (tento patent je zde citován náhradou za přenesení celého jeho obsahu do tohoto textu).

Dalším přednostním agonistou/antagonistou estrogenu je toremifen (2-hydroxy-l,2,3-propantrikarboxylát (Z)-2-[4-

-(4-chlor-l, 2-difenyl-l-butenyl)fenoxy]-N,N-dimethylethanaminu (1 : 1)) a příbuzné sloučeniny, které jsou popsány v US patentu 4 996 225 (tento patent je zde citován náhradou za přenesení celého jeho obsahu do tohoto textu).

Dalším přednostním agonistou/antagonistou estrogenu je centchroman (l-[2-[[4-(3,4-dihydro-7-methoxy-2,2-dimethyl-3-fenyl-2H-l-benzopyran-4-yl)fenoxy] ethyl jpyrrolidin) * a příbuzné sloučeniny, které jsou popsány v US patentu

822 287 (tento patent je zde citován náhradou za přenesení _e celého jeho obsahu do tohoto textu).

Dalším přednostním agonistou/antagonistou estrogenu je idoxifen (l-[4-[[l-(4-jodfenyl)-2-fenyl-l-butenyl]fenoxy]ethyl]pyrrolidin) a příbuzné sloučeniny, které jsou popsány v US patentu 4 839 155 (tento patent je zde citován náhradou za přenesení celého jeho obsahu do tohoto textu).

Dalšími přednostními agonisty/antagonisty estrogenu jsou sloučeniny obecného vzorce I

A představuje skupinu CH₂ nebo NR;

B, D a E představuje nezávisle vždy CH nebo N;

představuje

(a) fenylskupinu, která je popřípadě substituována jedním až třemi substituenty nezávisle zvolenými z množiny substituentú ve významu R⁴;

(b) naftylskupinu, která je popřípadě substituována jedním až třemi substituenty nezávisle zvole. nými z množiny substituentú ve významu R⁴;

Š (c) cykloalkylskupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, která je popřípadě substituována jedním až dvěma & substituenty nezávisle zvolenými z množiny substituentú ve významu R⁴;

(d) cykloalkenylskupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, která je popřípadě substituována jedním až dvěma substituenty nezávisle zvolenými z množiny substituentú ve významu R⁴;

(e) pětičlennou heterocyklickou skupinu, která obsahuje až dva heteroatomy zvolené ze souboru skládajícího se z -0-, -NR²- a -S(0)_n~ a která je popřípadě substituována jedním až třemi substituenty nezávisle zvolenými z množiny substituentú ve významu R⁴;

’ (f) šestičlennou heterocyklickou skupinu, která obsahuje až dva heteroatomy zvolené ze souboru ^ř«. skládajícího se z -0-, -NR²- a -S(0)_n- a která je popřípadě substituována jedním až třemi *' substituenty nezávisle zvolenými z množiny substituentú ve významu R⁴; nebo (g) bicyklický kruhový systém, který je tvořen pěti- nebo šestičlenným heterocyklickým kruhem přikondenzovaným k fenylovému kruhu, přičemž

tento heterocyklický kruh obsahuje až dva heteroatomy zvolené ze souboru skládajícího se z -0-, -NR²- a -S(0)_n- a je popřípadě substituován jedním až třemi substituenty nezávisle zvolenými z množiny substituentú ve významu R⁴;

Z¹ představuje skupinu obecného vzorce (a) -(CH₂)_pW(CH₂)_g-;

(b) -0(CH₂)_pCR⁵R⁶-;

(c) -o(ch₂)_pw(ch₂)_q-;

(d) -OCHR²CHR³-; nebo (e) -SCHR²CHR³-;

G představuje skupinu obecného vzorce (a) NR⁷R⁸;

(b)

-<

(CH₂) kde n představuje číslo 0, 1 nebo 2, m představuje číslo 1, 2 nebo 3, Z² představuje -NH-, -0-, —S— nebo -CH₂~; která je popřípadě kondenzována prostřednictvím sousedních atomů uhlíku s jedním nebo dvěma fenylovými kruhy; a popřípadě nezávisle substituována na uhlíku jedním až třemi substituenty a popřípadě nezávisle substituována na dusíku chemicky vhodným substituentem zvoleným z množiny významů R⁴; nebo (c) bicyklický aminový zbytek s 5 až 12 atomy uhlíku, který je buď přemostěný nebo kondenzovaný a je popřípadě substituován jedním až • · · ·

třemi substituenty nezávisle zvolenými z množiny významů R⁴; nebo

Z¹ a G dohromady představují skupinu obecného vzorce

-OCH

představuje skupinu vzorce (a) -CH₂-;

(b) -CH=CH~;

(c) -0-;

(d) -NR²-;

(e) -S(0)_n-;

(f) O

II

-C-;

(g) -CR²(OH)-;

(h) -CONR²-;

nebo

R představuje atom vodíku nebo alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

R² a R³ nezávisle představuje (a) atom vodíku nebo (b) alkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

R⁴ představuje (a) atom vodíku;

• 9 · ··· • ·

- 30 (b) atom halogenu;

(c) alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

(d) alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

(e) acyloxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

(f) alkylthioskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

(g) alkylsulfinylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

(h) alkylsulfonylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

(i) hydroxyalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

(j) arylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

(k) -CO₂H;

(l) -CN;

(m) -CONHOR;

(n) -SO₂NHR;

(o) -NH₂;

(p) alkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku;

(q) dialkylaminoskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v každé z alkylových částí;

(r) -NHSO₂R;

(s) -N0₂;

(t) arylskupinu; nebo (u) hydroxyskupinu;

R⁵ a R⁶ nezávisle představuje vždy alkylskupinu s 1 až 8 atomy uhlíku nebo dohromady tvoří karbocyklický kruh se 3 až 10 atomy uhlíku;

R⁷ a R⁸ představuje nezávisle vždy ” (a) fenylskupinu;

(b) nasycený nebo nenasycený karbocyklický kruh se 3 až 10 atomy uhlíku;

(c) heterocyklický kruh se 3 až 10 atomy uhlíku, který obsahuje až dva heteroatomy zvolené ze souboru sestávájícho z -0-, -N- a -S-;

(d) atom vodíku;

···· · ·· ···· ·· ·· ··· · · · · · ·

(e) alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku; nebo (f) R⁷ a R⁸ dohromady s R⁵ nebo R⁶ tvoří tří- až osmičlenný kruh, který obsahuje dusík;

8

R a R° v lineární nebo kruhové formě jsou popřípadě substituovány až třemi substituenty nezávisle zvolenými ze souboru sestávajícího z alkylskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, halogenu, alkoxyskupiny, hydroxyskupiny a karboxyskupiny;

kruh, který je tvořen R⁷ a R⁸ je popřípadě kondenzován k fenylovému kruhu;

e	představuje	číslo	0,	1 nebo	2;
m	představuje	číslo	1,	2 nebo	3;
n	představuje	číslo	0,	1 nebo	2;
P	představuje	číslo	0,	1, 2 nebo 3;
q	představuje	číslo	0,	1, 2 nebo 3;

jejich optické a geometrické isomery, netoxické farmakologicky vhodné adiční soli s kyselinami, N-oxidy, estery a kvaterní amonioné soli.

Přednostními sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce

kde G představuje skupinu vzorce

-Cl ’ θ”⁰ O ’ ’

R⁴ představuje atom vodíku, hydroxyskupinu, atom fluoru nebo chloru a

B a E představuje nezávisle vždy CH nebo atom dusíku.

Zvláště přednostní sloučeniny jsou zvoleny ze souboru sestávajícího z cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

(-)—cis—6—fenyl—5—[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]5.6.7.8- tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy1.2.3.4- tetrahydronaftalenu;

1-(4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy1.2.3.4- tetrahydroisochinolinu; _ cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]5.6.7.8- tetrahydronaftalen-2-olu a

1- (4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4tetrahydroisochinolinu.

Výše uvedené sloučeniny podle vynálezu se snadno připravují reakcemi ilustrovanými v dále uvedených schématech.

Některé sloučeniny obecného vzorce I se účelně připravují z nenasycených meziproduktů obecného vzorce II

hydrogenací za přítomnosti katalyzátoru na bázi ušlechtilého kovu v rozpouštědle, které je inertní vůči této reakci. Tlak a teplota nejsou kritickými parametry a hydrogenace se normálně provádí po dobu několika hodin při teplotě místnosti za tlaku vodíku v rozmezí od 137 kPa do 550 kPa.

Hydrogenovaný produkt se izoluje, popřípadě přečistí a etherová skupina se rozštěpí působením kyselého katalyzátoru v rozpouštědle inertním vůči reakci při teplotě v rozmezí od 0 do 100“C v závislosti na použitém kyselém katalyzátoru. Zjistilo se, že pro tuto reakci se hodí bromovodík při zvýšených teplotách, jakož i bromid boritý a chlorid hlinitý při teplotách v rozmezí od 0°C do teploty ^ť okolí.

Produkt obecného vzorce I se může izolovat a přečistit standardními postupy.

• · · ·

Meziprodukty obecného vzorce II, kde A představuje methylenskupinu a B, D a E představují skupiny vzorce CH, jsou popsány v US patentu č. 3 274 213; J. Med. Chem. 10, 78 (1967); J. Med. Chem. 10, 138 (1967) a J. Med. Chem. 12, 881 (1969). Všechny výše i dále uvedené citace jsou zde uvedeny náhradou za přenesení jejich celého obsahu do popisu tohoto vynálezu. Tyto sloučeniny lze také vyrobit postupy popsanými dále.

Výroba sloučenin obecného vzorce I, kde e = 1, A = CH₂, = OCH₂CH₂, G = cykloalkylaminoskupina a B = CH, je znázorněna ve schématu 1. Sloučeniny 1-2, kde D a E představuje vždy skupinu CH, je možno připravit alkylací 4-bromfenolu odpovídajícím N-chlorethylaminem za použití uhličitanu draselného, jako báze, v polárním aprotickém rozpouštědle, jako je dimethylformamid, při zvýšených teplotách. Přednostní teplotou je 100°C. Sloučeniny 1-2, kde D a/nebo E představuje atom dusíku, se syntetizují za použití nukleofilní vytěsňovací reakce. Při této reakci se na dibromidy (1-1) působí hydroxyethylcykloalkylaminy za podmínek fázového přenosu, a tím se získají brómované aminy (1-2) [Synthesis, 77, 573 (1980)]. Po výměně halogenu za kov, která se provádí působením n-butyllithia nebo kovového hořčíku, se brómované aminy (1-2) převedou na odpovídající organolithná nebo organohořečnatá reakční činidla, která se podrobí reakci při nízké teplotě přednostně za přítomnosti chloridu česného (bez chloridu česného tato reakce také probíhá) s 6-methoxy-l-tetralonem. Po kyselém zpracování reakční směsi se získají bud karbinoly (1-3) nebo styreny (1-4). Reakcí karbinolů (1-3) nebo styrenů (1-4) s bromačním činidlem, jako je pyridiniumbromidperbromid, se získají brómované styreny (1-5). Bromidy (1-5) se nechají reagovat s aryl- nebo heteroarylzinkchloridy nebo aryl- nebo heteroarylboronovými kyselinami za přítomnosti katalyzátoru na bázi kovového palladia, jako je například tetrakis(trife35

nylfosfin)palladium(O), za vzniku diarylstyrenů (1-6) [Pure & Applied Chem. 63, 419 (1991) a Bull. Chem. Soc. Jpn. 61, 3008 až 3010 (1988)]. Pro přípravu přednostních sloučenin se při této reakci použije substituovaných fenylzinkchloridů nebo substiutovaných fenylboronových kyselin. Arylzinkchloridy se připravují rozložením odpovídajícího íithiovaného reakčního činidla bezvodým chloridem zinečnatým. Arylboronové kyseliny, které nejsou obchodně dostupné, se připravují rozkladem odpovídajícího aryllithia trialkylborátem, přednostně trimethyl- nebo triisopropylborátem, po němž následuje zpracování vodnou kyselinou (Acta Chemica Scan. 47, 221 až 230 (1993)). Lithiovaná reakční činidla, která nejsou obchodně dostupná se připravují výměnou halogenu za kov z odpovídajícího bromidu nebo jiného halogenidu působením n-butyl- nebo terc.butyllithia. Alternativně je možno lithiované reakční činidlo připravit lithiací usnadněnou přítomností heteroatomu; tento způsob je popsán v Organic Reactions, sv. 27, kapitola 1. Katalytickou hydrogenací sloučenin 1-6 za přítomnosti například hydroxidu palladnatého na aktivním uhlí, se získají odpovídající intermediární dihydromethoxysloučeniny, které se následně demethylují působením bromidu boritého v methylenchloridu při 0°C nebo působením 48% bromovodíku v kyselině octové při teplotě 80 až 100°C, za vzniku cílových struktur 1-7.

Získané sloučeniny jsou racemické a racemáty lze štěpit na enantiomery vysokotlakou kapalinovou chromatografií za použití sloupce chirální stacionární fáze, jako jsou sloupce Chiralcel OD. Optické štěpení lze alternativně provést překrystalováním diastereomerických solí vytvořených s opticky čistými kyselinami, jako je například l,l'-binaftyl-2,2'-diylhydrogenfosfát.

cis-Sloučeniny (1-7) je možno isomerizovat na trans-sloučeniny působením báze.

·«·· ·» ····

Pokud D a/nebo E představuje atom dusíku, mohou se meziprodukty obecného vzorce II a sloučeniny obecného vzorce I připravovat z odpovídajících dihalogenpyridinů nebo pyrimidinů způsobem ilustrovaným ve schématu 1.

Methylether sloučeniny obecného vzorce I, kde e =

1, A = CH₂, Z¹ = OCH₂CH₂, G = pyrrolidinyl, D, E a B = CH a Y = fenyl, je také možno účelně připravovat tak, že se v prvním stupni provede hydrogenace nafoxidinu (Upjohn & Co., 700 Portage Road, Kalamazoo, MI 49 001 USA) v rozpouštědle inertním vůči této reakci za přítomnosti katalyzátoru na bázi ušlechtilého kovu. Teplota a tlak nejsou kritickými parametry při této reakci. Reakce se účelně provádí v ethanolu při teplotě místnosti po dobu přibližně 20 hodin za tlaku 343 kPa.

Druhý stupeň spočívá v odštěpení methoxyskupiny, což se provádí účelně při teplotě místnosti za použití kyselého katalyzátoru, jako je bromid boritý, v rozpouštědle inertním vůči této reakci, při teplotě 80 až 100 °C působením bromovodíku a kyseliny octové. Vzniklý produkt se izoluje konvenčními metodami a popřípadě převede na sůl s kyselinou.

Schéma

···	• 99	·»··	··	99
•	• ·	•	e	9	• ·	9 ·
«	•	•	9	9	9 9	9 9
•	•	• ·	•	9 ·	9 9 9	9 9 9
•	•	9	9	9 ·	»	9

1-6

1-7 • v <··«· «9 · • · · 9 • · · · ·* Β·

Sloučeniny obecného vzorce I, kde B představuje dusík, se připravují postupy ilustrovanými ve schématech 2 a

3.

Syntéza sloučenin obecného vzoce I, kde B představuje dusík, je znázorněna ve schématu 2. Chloridy arylsubstituovaných kyselin (2-1) poskytnou při reakci s primárními aminy arylsubstituované sekundární amidy (2-2). Tyto sloučeniny se redukují lithiumaluminiumhydridem v etherovém rozpouštědle na sekundární aminy (2-3). Následující acylací sloučenin (2-3) aroylchloridy se získají terciární amidy (2-4), které se cyklizují v horkém oxychloridu fosforečném na dihydroisochinoliniové soli (2-5). Redukcí tetrahydroboritanem sodným se ze sloučenin (2-5) získají alkoxytetrahydroisochinoliny. Cílové struktury se získají z posledně uvedených sloučenin demethylací bromidem boritým v methylenchloridu.

Schéma

í.

2-5

1) [ H ] Sloučenina obecného vzorce I

2) BBr₃

B = dusík

Syntéza sloučenin obecného vzorce I, kde B představuje dusík, je také popsána ve schématu 3. Sekundární aminy (3-1) se acylací benzyloxyaroylchloridy (3-2) převedou na terciární amidy (3-3), které cyklizací horkým oxychloridem fosforečným poskytnou soli dihydroisochinolinu (3-4). Redukcí sloučenin (3-4) tetrahydroboritanem _e sodným a následující debenzylací vodnou kyselinou chlorovodíkovou se získají isochinoliny (3-5), které se podrobí § alkylaci vhodně funkcionalizovanými chloridy a demethylaci bromidem boritým za vzniku požadovaných cílových «· struktur.

• 4 · · • · · · · ·

4« 44

4 4

444 444

4 » 4 4 4

Schéma 3

C0C1 ^roOl

3-1 +

fl<CH₂)_eCH₂NHY

T

3-2

POC1₃

sloučenina obecného vzorce I

Jiné agonisty/antagonisty estrogenu jsou popsány v US patentu č. 4 133 814 (který je zde citován náhradou za přenesení celého jeho popisu do tohoto textu). Předmětem US patentu č. 4 133 814 jsou deriváty 2-fenyl-3-aroylbenzothiofenu a 2-fenyl-3-aroylbenzothiofen-l-oxidu.

Lednicer et al., J. Med. Chem., 12, 881 (1969) popisují antagonisty estrogenu, které odpovídají obecnému vzorci

*3 kde R představuje fenylskupinu nebo cyklopentylskupinu a R představuje atom vodíku, skupinu vzorce

-CHjCHe-Tj nebo -CH₂CHOHCH₂OH.

V US patentu č. 3 234 090 jsou popsány agonisty/antagonisty estrogenu obecného vzorce fir tfh *C_nH_2n_₂>

''4R kde Ph představuje 1,2-fenylenový zbytek, Ar představuje monocyklickou karbocyklickou arylskupinu, která je substi·· · · • · · · · · • · tuována terciární amino-nižší alkyloxyskupinou, v níž je terciární aminoskupina oddělena od oxyskupiny alespoň dvěma atomy uhlíku; R představuje atom vodíku, alifatický zbytek, karbocyklický arylový zbytek, karbocyklický aralifatický zbytek, heterocyklický arylový zbytek nebo heterocyklický aralifatický zbytek; skupina obecného vzorce ~(^cn^H2n-2^představuje nerozvětvený alkylenový zbytek se 3 až 5 atomy uhlíku nesoucí skupiny Ar a R; jejich soli, N-oxidy, soli jejich N-oxidů a kvaterní amoniové sloučeniny, jakož i způsob výroby těchto sloučenin.

V US patentu č. 3 277 106 jsou popsány bázické ethery, které vykazují estrogen agonistické/antagonistické účinky, které odpovídají obecnému vzorci .—. Rr ⁵ y

Ph· (C

2^H2n-2⁾ v— kde Ph představuje 1,2-fenylenový zbytek, Ar představuje monocyklický arylový zbytek, který je substituován alespoň jednou amino-nižší alkyloxyskupinou, v níž je atom dusíku oddělen od atomu kyslíku alespoň dvěma atomy uhlíku; R přestavuje arylový zbytek a zbytek vzorce “(^cn^H2n-2^^- Představuje nižší alkylenskupinu, která spolu se zbytkem Ph tvoří šesti- nebo sedmičlenný kruh, jehož dva kruhové atomy uhlíku nesou skupiny Ar a R, jejich soli, N-oxidy, soli jejich N-oxidů a kvaterní amoniové sloučeniny. _

V US patentu č. 3 274 213 jsou popsány agonisty/antagonisty estrogenu obecného vzorce (al koxy)_x

0C_nH_2BN

,R

999· • 9 ·· · · kde Rj a R₂ nezávisle představuje vždy nižší alkylskupinu nebo oba dohromady tvoří spolu s atomem dusíku, k němuž jsou připojeny pěti- až sedmičlenný nasycený heterocyklický zbytek.

Druhou sloučeninou podle vynálezu může být kterákoliv z dále popsaných sloučenin, které rozmnožují kostní hmotu na úroveň, která je nad práhem kostní fraktury (což je podrobně popsáno v World Health Organization Study World Health Organization, Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994). Report of a WHO Study Group. World Health Organization Technical Series 843).

Jako druhou sloučeninu podle vynálezu je možno použít jakýhokoliv prostaglandinu nebo agonisty/antagonisty prostaglandinu. Odborníkům v tomto oboru bude zřejmé, že je rovněž možno použít fluoridu sodného, pyrathyroidního hormonu (PTH), aktivních fragmentů parathyroidního hormonu, růstového hormonu nebo sekretagogů růstového hormonu. V následující odstavcích jsou podrobněji popsány příklady druhé sloučeniny.

Jako druhé sloučeniny podle vynálezu je možno použít jakéhokoliv prostaglandinu. Pod pojmem prostaglandin se rozumí sloučeniny, které jsou analogy přírodních prostaglandinů PGDj, PGD₂, PGE₂, PGEj a PGF₂a, které jsou užitečné pro léčbu osteoporosy. Tyto sloučeniny se vážou k receptorům prostaglandinu. Tuto vazbu může odborník v tomto oboru snadno stanovit za použití standardních zkušebních postupů (například An S. et al., Cloning and Expression of the EP₂ Suptype of Human Receptors for Prostaglandin E₂, Biochemical and Biophysical Research Communication, 1993, 197(1): 263 až 270).

···· * 99 9999 99 99

99 · · · · · · 9 · · · 9 9999

999* 99 ··« 999

99 9 · 9 9 9 9

999 9· 99 99 99

Prostaglandiny jsou alicyklické sloučeniny odvozené od základní sloučeniny, kyseliny prostanové. Atomy uhlíku základního prostaglandinu se počítají od karboxylového uhlíku přes cyklopentylový kruh k terminálnímu uhlíku na sousedním postranním řetězci. Normálně mají sousední vedlejší řetězce orientaci trans. Přítomnost oxoskupiny na uhlíku C9 cyklopentylového zbytku je charakteristická pro prostaglandiny ze třídy E, zatímco PGE₂ obsahuje trans nenasycenou dvojnou vazbu mezi uhlíky v polohách C₁₃-C₁₄ a cis dvojnou vazbu mezi uhlíky v polohách C₅-C₆.

V následujícím textu jsou popsány nebo uvedeny různé prostaglandiny. Odborníkům v tomto oboru však budou známy ještě další prostaglandiny. Příklady prostaglandinů jsou uvedeny v US patentech 4 171 331 a 3 927 197 (které jsou zde citovány náhradou za přenesení celého jejich textu do tohoto popisu).

Norrdin et al., The Role of Prostaglandins in Bone In Vivo, Prostaglandins Leukotriene Essential Fatty Acids 41, 139 až 150, 1990 podává přehled o prostaglandinech s účinkem na kostní tkáň.

Jako druhé sloučeniny podle vynálezu je možno použít jakéhokoliv agonisty/antagonisty prostaglandinu. Pod pojmem agonista/antagonista prostaglandinu se rozumějí sloučeniny, které se vážou k receptorům prostaglandinu (například An S. et al., Cloning and Expression of the EP₂Suptype of Human Receptors for Prostaglandin E₂, Biochemical and Biophysical Research Communication, 1993, 197(1): 263 až 270) a napodobují účinek prostaglandinu in vivo (například stimulují tvorbu kosti a zvyšují kostní hmotu). Takové účinky odborník v tomto oboru snadno stanoví za použití standardních zkušebních postupů, (například Protokol o zkoušení anabolických činidel uvedený dále; Eriksen E. F.

···· *· ···»

et al., Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, str. 1 až 74; Grier S. J. et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50 až 62; Wahner H. W. a Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Duál Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice, Martin Dunitz Ltd., London, 1994, str. 1 až 296). Příklady agonistů/antagonistů prostaglandinu jsou uvedeny dále, odborníkům v tomto oboru je však zřejmé, že existují i další agonisty/antagonisty prostaglandinu. Konkrétní příklady agonistů/antagonistů prostaglandinu lze například nalézt v dále uvedených dokumentech.

V US patentu č. 3 932 389 jsou popsány 2-deskarboxy-2- (tetrazol-5-yl) -ll-desoxy-15-substituované-omega-pentanorprostaglandiny, které jsou užitécné pro tvorbu kostní tkáně.

V US patentu č. 4 018 892 jsou popsány p-bifenylestery 16-aryl-13,14-dihydro-PGE₂, které jsou užitečné pro tvorbu kostní tkáně.

V US patentu č. 4 219 483 jsou popsány 2,3,6-substituované-4-pyrony, které jsou užitečné pro tvorbu kostní tkáně.

V US patentu č. 4 132 847 jsou popsány 2,3,6-substituované-4-pyrony, které jsou užitečné pro tvorbu kostní tkáně. _ _ _

V US patentu č. 4 000 309 jsou popsány p-bifenylestery 16-aryl-13,14-dihydro-PGE₂, které jsou užitečné pro tvorbu kostní tkáně.

V US patentu č. 3 982 016 jsou popsány p-bifenyl46

9999 •	9 • ·	· 9 9	•99» 9· • · ·	9 9 • ·
•	9	9 9	9 9 9	9 9
9	9	9 9 9	9 < 9 -9 9	999
9 9	•	9 ·	9 9 9	9

estery 16-aryl-13,14-dihydro-PGE₂, které jsou užitečné pro tvorbu kostní tkáně.

V US patentu č. 4 621 100 jsou popsány substituované cyklopentany, které jsou užitečné pro tvorbu kostní tkáně.

V US patentu č. 5 216 183 jsou popsány cyklopentanony, které jsou užitečné pro tvorbu kostní tkáně.

Jako druhé sloučeniny podle vynálezu je možno použít také fluoridu sodného. Pod pojmem fluorid sodný se rozumí všechny jeho formy (například fluorid sodný s pomalým uvolňováním, fluorid sodný s přetrvávajícím uvolňováním). Fluorid sodný s přetrvávajícím uvolňováním je popsán v US patentu 4 904 478 (který je zde citován náhradou za přenesení celého jeho textu do tohoto popisu). Odborník v tomto oboru snadno stanoví účinnost fluoridu sodného za použití standarních biologických protokolů (viz například Protokol o zkoušení anabolických činidel, zde a Eriksen E. F. et al., Bone Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, str. 1 až 74; Grier S. J. et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50 až 62; Wahner H. W. a Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Duál Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice, Martin Dunitz Ltd., London, 1994, str. 1 až 296).

Jako druhé sloučeniny podle vynálezu je možno použít jakéhokoliv parathyroidního hormonu (PTH). Pod pojmem parathyroidní hormon se rozumí pyrathyroidní hormon, jeho fragmenty a metabolity a jejich strukturní analogy, které mohou stimulovat tvorbu kostní tkáně a zvyšovat kostní hmotu. Tuto funkční účinnost odborník v tomto oboru snadno stanoví za použití standarních zkušebních postupů (viz například Protokol o zkoušení anabolických činidel, zde • 999

to« to··· · · ·· • · ♦ · · · · • · to · · · to • « ·· ··to ··· to to « to to · toto ·· ·· ·· a Eriksen E. F. et al., Histomorphometry, Raven Press, New York, 1994, str. 1 až 74; Grier S. J. et al., The Use of Dual-Energy X-Ray Absorptiometry In Animals, Inv. Radiol., 1996, 31(1): 50 až 62; Wahner H. W. a Fogelman I., The Evaluation of Osteoporosis: Duál Energy X-Ray Absorptiometry in Clinical Practice, Martin Dunitz Ltd., London, 1994, str. 1 až 296). Dále jsou uvedeny a popsány různé takové sloučeniny, ačkoliv odborníkům v tomto oboru budou známy ještě jiné parathyroidní hormony. Příklady parathyroidních hormonů jsou zmíněny v dále uvedených citacích: Human Parathyroid Peptide Treatment of Vertebral Osteoporosis, Osteoporosis Int., 3, (doplněk 1): 199 až 203; PTH 1-34 Treatment of Osteoporosis with Added Hormone Replacement Therapy: Biochemical, Kinetic and Histological Responses, Osteoporosis Int. 1: 162 až 170.

Jako druhé sloučeniny podle vynálezu je možno použít jakéhokoliv růstového hormonu nebo sekretagogu růstového hormonu. Pod pojmem sekretagog růstového hormonu se rozumí sloučeniny, které stimulují uvolňování růstového hormonu nebo napodobují jeho účinek (například zvyšují tvorbu kostní tkáně vedoucí ke zvýšení kostní hmoty). Tuto účinnost odborník v tomto oboru snadno stanoví za použití standardních zkušebních postupů (například výše uvedených). Různé tyto sloučeniny jsou například popsány v následující PCT patentových publikacích: WO 95/14666, WO 95/13069, WO 94/19367, WO 94/13696 a WO 95/34311. Odborníkům v tomto oboru však budou známy ještě jiné sekretagogy růstového hormonu.

Jako sekretagogu růstového hormonu se zvláštní přednost dává N-[l(R)-[l,2-dihydro-l-methansulfonylspiro[3H-indol-3,4'-piperidin]-1'-yl)karbonyl]-2-(fenylmethyloxy)ethyl]-2-amino-2-methylpropanamidu: MK-677.

Jako jiné přednostní sekretagogy růstového hormonu je možno uvést:

2-amino-N-[2-(3a-(R)-benzyl-2-methyl-3-oxo-2,3,3a,4,6,7-hexahydropyrazolo[4,3-c]pyridin-5-yl)-1-(R)-benzyloxymethyl-2-oxoethyl]isobutyramid a jeho L-tartrátovou sůl;

2-amino-N-{1-(R)-benzyloxymethyl-2-[3a-(R)-(4-fluorbenzyl) -2-methyl-3-oxo-2,3,3a,4,6,7-hexahydropyrazolo[4,3-c]pyridin-5-yl]-2-oxoethyl}isobutyramid a

2-amino-N-[2-(3a-(R)-benzyl-3-oxo-2,3,3a,4,6,7-hexahydropyrazolo[4,3-c]pyridin-5-yl)-l-(R)benzyloxymethyl-2-oxoethyl]isobutyramid.

Obecně lze sloučeniny podle vynálezu připravovat Způsoby, které zahrnují postupy známé v oboru chemie, konkrétněji ve světle následujícího popisu.

Některé preparativní metody pro výrobu sloučenin podle vynálezu mohou vyžadovat chránění vzdálených funkčních skupin (tj. primárních a sekundárních aminoskupin a dále karboxyskupin). Potřeba takového chránění se může měnit v závislosti na druhu vzdálené funkční skupiny a podmínkách použitých při přípravě. Potřebu takového chránění může odborník v tomto oboru snadno určit. Používání metod zavádění/odštěpování chránících skupin leží v rozsahu zkušeností běžného odborníka. Obecný popis chránících skupin a jejich používání je možno nalézt v publikaci T. W. Greene,

Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, USA, 1991. Výchozí látky a reakční činidla pro výrobu sloučenin podle vynálezu jsou také snadno dostupné, nebo je lze snadno syntetizovat běžnými metodami organické syntézy známými odborníkům v tomto oboru. Tak například mnohé používané sloučeniny jsou příbuzné přírodním sloučeni49

• · 4 4 4 4 4 4 44

4 4 4 4 4 4

4 4 4 4 «β· 4 4 4 · 4 4 4 4 nám nebo se jedná o jejich deriváty. Na látky tohoto typu se upírá značný vědecký zájem a existuje po nich značná obchodní potávka, a v důsledku toho jsou mnohé z těchto meziproduktů obchodně dostupné nebo jsou popsány v literatuře nebo jsou snadno připravitelné z jiných běžně dostupných látek metodami citovanými v literatuře. Takovými sloučeninami jsou například prostaglandiny.

Některé sloučeniny podle vynálezu obsahují asymetrické atomy uhlíku, a proto se vyskytují ve formě enantiomerů nebo diastereomerů. Diasteromerické směsi je možno dělit na individuální diastereomery na základě jejich fyzikálně chemických odlišností o sobě známými metodami, například chromatografií a/nebo frakční krystalizací. Enantiomery je možno dělit tak, že se enantiomerická směs převede na diasteromerickou směs reakcí s vhodnou opticky aktivní sloučeninou (například alkoholem), potom se oddělí diastereomery a jednotlivé diastereomery se převedou (například hydrolýzou) na odpovídající čisté enantiomery. Do rozsahu vynálezu spadají všechny takové isomery, včetně diastereomerů a enantiomerů, jakož i jejich směsi.

Přestože mnohé ze sloučenin podle vynálezu nejsou ionizovatelné za fyziologických podmínek, některé ze sloučenin podle vynálezu naopak ionizovatelné za fyziologických podmínek jsou. Tak například některé ze sloučenin podle vynálezu jsou kyselé a mohou tvořit soli s farmaceuticky vhodnými kat i on ty. Všechny takové soli spadají do rozsahu tohoto vynálezu a je možno je připravovat konvenčními metodami. Tak například je možno je připravit jednoduše tak, že se kyselé a zásadité složky smíchají, obvykle ve stechiometrickém poměru, ve vodném, nevodném nebo zčásti vodném prostředí, podle toho, jak je to vhodné. Soli se izolují bud filtrací nebo srážením nerozpouštědlem s následující filtrací, nebo

9999 •9 9999

99

odpařením rozpouštědla nebo v případě vodných roztoků také lyofilizací, podle toho, jak je to vhodné.

Kromě toho, některé ze sloučenin podle vynálezu jsou bázické a mohou tvořit soli s farmaceuticky vhodným aniontem. Všechny takové soli spadají do rozsahu tohoto vynálezu a je možno je připravovat konvenčními metodami. Tak například je možno je připravit jednoduše tak, že se kyselé a zásadité složky smíchají, obvykle ve stechiometrickém poměru, ve vodném, nevodném nebo zčásti vodném prostředí, podle toho, jak je to vhodné. Soli se izolují buď filtrací nebo srážením nerozpouštědlem s následující filtrací, nebo odpařením rozpouštědla nebo v případě vodných roztoků také lyofilizací.

Některé ze sloučenin podle vynálezu také tvoří hydráty nebo solváty a také tyto formy spadají do rozsahu vynálezu.

Farmaceutické kombinace a postupy podle tohoto vynálezu jsou všechny přizpůsobeny pro léčebná použití jako činidla, která buď aktivují obrat kosti nebo zabraňují resorpci kosti nebo zvyšují tvorbu kostní tkáně u savců, zejména lidí. Jelikož jsou tyto procesy mají úzkou spojitost s vývojem osteoporosy a kostních chorob, kombinace podle vynálezu svým účinkem zabraňují osteoporose nebo ji zpomalují, potlačují nebo revertují.

Užitečnost sloučenin podle vynálezu jako léčiv vhodných pro léčení stavů, které jsou doprovázeny nízkou kostní hmotou (například osteoporosy) u savců, (například lidí, zejména u žen) je možno demonstrovat pomocí účinnosti sloučenin podle vynálezu při konvenčních zkouškách a při zkouškách účinnosti in vitro a in vivo popsaných dále (Protokol o kombinační a postupné léčbě; Protokol o zkoušení

	• ····>·	99	9 9
•	• ·	• · ·	9 9	9 9
•	•	• · ·	9 9	• ·
•	9	9 · · 9 9'	9.9 ·	• * ·
• »	•	9 9 9 9	9	•

agonistů/antagonistů estrogenu; Protokol o zkoušení anabolických činidel; In vitro stanovení vazby k receptorům estrogenu; a Protokol o zkoušení růstového hormonu/sekretagogů růstového hormonu). Tyto zkoušky představují rovněž prostředek umožňující porovnání účinnosti sloučenin podle vynálezu navzájem a s účinností jiných známých sloučenin. Výsledky těchto srovnávacích zkoušek jsou užitečné pro určení úrovně dávkování u savců, včetně člověka, při léčení takových chorob.

Protokol o kombinační a postupné léčbě

Následující protokoly samozřejmě odborníci v tomto oboru mohou obměňovat. Tak je při studii například možno použít intaktních samců nebo samic potkana, potkaních samců nebo samic s deficiencí pohlavních hormonů (orchidektomizovaných nebo ovariektomizovaných). Kromě toho je pro zkoušky možno použít samců nebo samic potkana o různém stáří (jako asi 12 měsíců). Potkani mohou být buď intaktní nebo kastrovaní (ovariektomií nebo orchidektomií), přičemž se jim podávají anabolická činidla, jako prostaglandin E2 (PGE2) v různých dávkách (jako 1, 3 nebo 6 mg/kg/den) po určitou dobu (jako 2 týdny až 2 měsíce), načež se jim podává antiresorpční činidlo, jako droloxifen, v různých dávkách (jako 1, 5, mg/kg/den) po určitou dobu (jako 2 týdny až 2 měsíce). Alternativně se potkani mohou podrobit kombinačnímu ošetření anabolickým činidlem a antiresorpčním činidlem v různých dávkách po určitou dobu (jako 2 týdny až 2 měsíce). V případě kastrovaných potkanů může ošetření začít následující den po výkonu (pro účely zabránění ztrátě kostní tkáně) nebo v době, kdy již došlo ke ztrátě kostní tkáně (pro účely j ej ího znovuobnovení).

Dále jsou uvedeny protokoly o zkouškách za použití PGE2, jako kostního anabolického činidla, a droloxifenu,

jako antiresorpčního činidla. Za použití tohoto protokolu je však možno zkoušet i jiná anabolická a antiresorpční činidla.

Stočtyři samic potkana Sprague-Dawley (Charles River, Wilmington, MA, USA) o stáří 12 měsíců se v měsíci 0 podrobí fiktivní operaci nebo se ovariektomizuje (OVX).

Tři měsíce po výkonu se ovariektomizovaným potkanům po dobu 2 měsíců podává bud prostaglandin E₂ (PGE₂), známé kostní anabolické činidlo, v dávce 3 mg/kg/den (subkutánní injekcí) nebo PGE₂ v dávce 3 mg/kg/den (subkutánní injekcí) v kombinaci s droloxifenem (DRO) v dávce 10 mg/kg/den (orálně).

Poté se ošetřování PGE₂ přeruší a potkani se po dobu 1,5 měsíce ošetřují bud vehikulem (10% alkohol v solném roztoku) nebo DRO (10 mg/kg/den, orálně) tak, jak je popsáno dále.

Skupina I: Osm potkanů se obdukuje v čase 0 měsíců, jako základní kontrola.

Skupina II: Osm fiktivně operovaných potkanů se obdukuje v čase 3 měsíce, jako kontrola stavu před ošetřením.

Skupina III: Osmi fiktivně operovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců orálně podává vehikulum (10% ethanol v solném roztoku) a v čase 5 měsíců se provede jejich obdukce.

Skupina IV: Osmi fiktivně operovaným potkanům se v čase 3 až 6,5 měsíce orálně podává vehikulum (10 % ethanol v solném roztoku) a čase 6,5 měsíce se provede jejich obdukce.

Skupina V: Osm ovariektomizováných potkanů se v čase 3 měsíce obdukuje, jako kontrola stavu před ošetřením.

···· ·· 00··

44 • · · ·

4 4 4 •44 444

Skupina VI: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců orálně podává vehikulum (10% ethanol v solném roztoku) a v čase 5 měsíců se provede jejich obdukce.

Skupina VII: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 6,5 měsíce orálně podává vehikulum (10% ethanol v solném roztoku) a v čase 6,5 měsíce se provede jejich obdukce.

Skupina VIII: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíce subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a v čase 5 měsíců se provede jejich obdukce.

Skupina IX: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a čase 5 až 6,5 měsíce vehikulum a v čase 6,5 měsíce se provede jejich obdukce.

Skupina X: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a v čase 5 až 6,5 měsíce orálně DRO v dávce 10 mg/kg/den, načež se v čase 6,5 měsíce provede jejich obdukce.

Skupina XI: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a orálně DRO v dávce 10 mg/kg/den, načež se v čase 5 měsíců provede jejich obdukce.

Skupina XII: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a orálně DRO v dávce 10 mg/kg/den a v čase 5 až

6,5 měsíce vehikulum, načež se v čase 6,5 měsíce provede jejich obdukce.

9999 9 99 9999 99 99 · 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 ··« · 9 9 9 • · 9 9 9 · 9 999 ·»· • 9 9 99φ« 9 9

999 «9 99 99 99

Skupina XIII: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a orálně DRO v dávce 10 mg/kg/den a v čase 5 až

6,5 měsíce samotný DRO, načež se v čase 6,5 měsíce provede jejich obdukce.

PGE2 (Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI, USA) a droloxifen (Pfizer lne. Groton, CT, USA) ve formě prášku se nejprve rozpustí ve 100% ethanolu. Ethanolické roztoky se dále zředí solným roztokem na požadovanou koncentraci (konečná koncentrace ethanolu je 10 %). Roztok PGE se podává denně subkutánními injekcemi do hřbetu v dávce 1 ml/kg. Roztok droloxifenu se podává perorálně každý den v dávce 1 ml/potkan. Všem potkanům se subkutánními injekcemi dvanáct dnů a dva dny před usmrcením podá 10 mg/kg kalceinu (fluorchromového kostního markéru, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) za účelem zkoumání dynamických změn v kostní tkáni.

Potkani se usmrtí pod anestézí ketaminem. Na závěr zkoušky se provedou následující měření:

Stanovení minerálů ve femuru

Při pitvě se každému potkanu vyjme pravý femur a podrobí skanování za použití zařízení pro rentgenovou absorpciometrii při dvou energetických úrovních (duální fotonová rentgenová technika, DXA, QDR 1000/W, Hologic lne., Waltham, MA, USA) vybaveného softwarem Regional High Resolution Šcan (Hologic lne., Waltham, MA, USA), přičemž velikost snímaného pole je 50,8 x 19,02 mm, rozlišení 0,254 x 0,127 mm a rychlost snímání 7,25 mm/s. Analyzují se skanové obrazce femuru a stanoví se kostní plocha, minerální obsah kosti (BMC) a minerální hustota kosti (BMD) celého femuru (WF), distální femorální metafýzy (DFM), dříku femuru (FS) a proximálního femuru (PF).

·· ····

- 55 Stanovení minerálů v bederní páteři

Za použití zařízení pro rentgenovou absorpciometrii při dvou energetických úrovních (duální fotonová rentgenová technika, DXA, QDR 1000/W, Hologic lne., Waltham, MA, USA) vybaveného softwarem Regional High Resolution Scan (Holo, gic lne., Waltham, MA, USA) se u anestetizovaných potkanů stanoví kostní plocha, minerální obsah kosti (BMC) a mineí rální hustota kosti (BMD) celé bederní páteře a každého ze šesti lumbálních obratlů (LVI až LV6). Potkani se aneste- tizují intraperitoneální injekcí 1 ml/kg směsi ketaminu a rompunu v poměru 4:3a poté umístí na desku pro potkany. Velikost snímaného pole je 60 x 19 mm, rozlišení 0,254 x 0,127 mm a rychlost snímání 7,25 mm/s. Získané skanové obrazce celé bederní páteře se analyzují. Stanoví se kostní plocha (BA) a minerální obsah kosti (BMC). Vypočítá se minerální hustota kosti (BMC děleno BA) pro celou bederní páteř a pro každý ze šesti lumbálních obratlů (LVI až LV6).

Histomorfometrická analýza spongiosy proximální metafýzy tibie

Při pitvě se vyjme pravá holenní kost, svaly se odpreparují a kost se nařeže na tři části. Proximální tibie se fixuje v 70% ethanolu, dehydruje ethanolem o odstupňované , koncentraci, v acetonu zbaví tuku a poté uloží do methylmethakrylátu (Eastman Organic Chemicals, Rochester, NY,

USA). Přední části proximální metafýzy tibie se za použití zařízení pro mikrotomy Reichert-Jung Poíycut S nařežou na ' na tlouštku 4 a 10 μιη. Pro histomorfometrii spongiosní kosti se použije jednoho 4μιη řezu a jednoho ΙΟμιη řezu od každého potkana. Řezy o tloušůce 4 μιη se obarví modifikovaným Massonovým barvivém Trichrome, zatímco ΙΟμιη řezy se ponecháj i neobarvené.

9999 ·· ···· ·· ·· • · * • · · · • 9 999 999

9 9

Pro statická a dynamická histomorfometrická měření sekundární spongiosy proximální metafýzy tibie mezi 1,2 a

3,6 mm distálně k junkci růstové chrupavky a epifýzy se použije histomorfometrického systému Bioquant OS/2 (R&M biometrics, lne., Nashville, TN, USA). Prvních 1,2 mm metafýzové oblasti tibie je třeba vynechat, aby se měření omezilo na sekundární spongiosu. Pro stanovení ukazatelů objemu kosti, struktury kosti a resorpce kosti se použije 4μιη řezů, zatímco pro stanovení ukazatelů tvorby kostní tkáně a obratu kosti se použije ΙΟμπι řezů.

I. Měření a výpočty objemu trámčiny kosti a struktury:

1. Celková plocha metafýzy (TV, mm²); plocha metafýzy mezi 1,2 a 3,6 mm distálně k junkci růstové chrupavky a epifýzy.

2. Plocha trámčité kosti (BV, mm²): celková plocha trámčiny v TV.

3. Obvod trámčité kosti (BS, mm): délka celkového obvodu trámčité kosti.

4. Objem trámčité kosti (BV/TV, %): BV/TV x 100.

5. Trabekulární kostní číslo (TBN, #/mm):

1,199/2XBS/TV.

6. Tloušťka trámčité kosti (TBT, μιη):

(2000/1,199)x(BV/BS).

7. Trabekulární kostní separace (TBS, μπι):

(2000x1,199)x(TV—BV).

99 99	9 9«	9999	99	99
•	'· ·	• ·	9	9 ·	• 9
9	9	9 9	9	9 9	9 9
•	9	9 9 9	9 ’·	999	9 9 9
9 9	9	9 9	9 9	9	9

II. Měření a výpočty resorpce kosti

1. Počet osteoklastů (OCN, #): celkový počet osteoklastů v celé oblasti metafýzy.

2. Obvod osteoklastů (OCP, mm): délka obvodu trámčiny pokryté osteoklasty.

3. Počet osteoklastů na milimetr (OCN/mm, #/mm):

OCN/BS.

4. Procetický obvod osteoklastů (%OCP, %): OCP/BSxlOO.

III. Měření a výpočty tvorby kostní tkáně a obratu kosti

1. Obvod jednou značený kalceinem (SLS, mm): celková délka obvodu trámčité kosti s jednou kalceinovou značkou.

2. Obvod dvakrát značený kalceinem (DLS, mm): celková délka obvodu trámčité kosti se dvěma kalceinovými značkami.

. Vzdálenost mezi značkami (ILW, μιη): průměrná vzdálenost mezi dvěma kalceinovými značkami.

4. Procento mineralizovaného obvodu (PMS, %): (SLS/2 + DLS)/BSxlOO.

5. Rychlost minerální apozice (MAR, μπι/den): ILW/značkový interval.

6. Rychlost tvorby kosti/povrch ref. (BFR/BS, μιη²/άβη/μπι) : ( SLS/2+DLS ) xMAR/BS .

• · « •	• • ·	99 • ·	··«· •	• 9 99 9 · ·
•	•	• ·	•	• · 9
•	•	9 9 ·	9 -9	999 99
•	•	• ·	9 9	9

7. Rychlost obratu kosti (BTR, %/rok):

(SLS/2+DLS)xMAR/BVxlOO .

Statistické metody

Statistické údaje se vypočtou za použití balíčku StatView 4.0 (Abacus Concepts, lne., Berkeley, CA, USA). Pro porovnání rozdílů mezi skupinami je možno použít analýzy variance (ANOVA) a poté Fisherovy PLSD.

Protokol o zkoušení agonistů/antagonistů estrogenu

Agonisté/antagonisté estrogenu představují třídu sloučenin, které inhibují obrat (turnover) kostí a zabraňují ztrátě kostní tkáně indukované nedostatkem estrogenu. Jako modelu postmenopausálního úbytku kostní tkáně se často používá modelu s ovariektomizovanými potkany. Za použití tohoto modelu je možno zkoušet schopnost agonisty/antagonisty estrogenu zabraňovat úbytku kostní tkáně a inhibovat resorpci kosti.

Pro studii se použije samic potkana Sprague-Dawley (Charles River, Wilmington, MA, USA) o různém stáří (například 5 měsíců). Potkani se během období zkoušky chovají jednotlivě v klecích 20 x 32 x 20 cm. Všem zvířatům se ponechá volný přístup k vodě a peletizované potravě dostupné na trhu (Agway ProLab 3000, Agway County Food, lne.,

Syracuse, NY, USA) obsahující 0,97 % vápníku, 0,85 % fosforu a 1,05 IU/g vitaminu D₃.

Skupina potkanů (8 až 10) se podrobí fiktivní operaci a ošetřuje perorálním podáváním vehikula (10 % ethanolu a 90 % solného roztoku, 1 ml/den), zatímco zbývající potkani se oboustranně ovariektomizují (OVX) ,a po určitou dobu (jako 4 týdnů) se jim podává buď vehikulum (perorálně), ·· Φ·φφ φφ ·· • · · · · φ φ · φ φ * φ φ · φ φ · * • φ φ

17p-estradiol (Sigma, Ε-8876, Ε₂, 30 μg/kg, denně subkutánními injekcemi) nebo antagonisté/agonisté estrogenu (jako droloxifen v dávkách 5, 10 nebo 20 mg/kg, denně, perorálně). Za účelem sledování dynamických změn v kostní tkáni se 12 dnů a 2 dny před usmrcením všem potkanům subkutánními injekcemi podá 10 mg/kg kalceinu (fluorchromový kostní markér). Po 4 týdnech ošetřování se provede pitva. Na závěr zkoušky se provedou tato měření:

Přírůstek tělesné hmotnosti: tělesná hmotnost při obdukci minus tělesná hmotnost při chirurgickém výkonu.

Hmotnost a histologie dělohy: Během pitvy se každému potkanu vyjme děloha, která se ihned zváží. Poté se dělohy podrobí histologickým měřením, jako je měření plochy průřezu tkáně, tloušťky stromatu a luminální tloušťky epithelu.

Celkový obsah cholesterolu v séru: Krev získaná srdeční punkcí se nechá vysrážet při 4°C a poté centrifuguje 10 minut při 2000 x g. Vzorky séra se analyzují na celkový sérový cholesterol za použití kalorimetrické vysoce výkonné zkoušky na cholesterol (Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, IN, USA).

Stanovení minerálů ve femuru

Při pitvě se každému potkanu vyjme pravý femur a podrobí skanování za použití zařízení pro rentgenovou absorpciometrii při dvou energetických úrovních (duální fotonová rentgenová technika, DXA, QDR 1000/W, Hologic lne., Waltham, MA, USA) vybaveného softwarem Regional High Resolution Scan (Hologic lne., Waltham, MA, USA), přičemž velikost snímaného pole je 50,8 x 19,02 mm, rozlišení 0,254 x 0,127 mm a rychlost snímání 7,25 mm/s. Analyzují se

4 4 4 9	99	9999	··	4 4
*	• 9	9 »	9	• 4	•
9 9 9	9 9 9	9 9 9 9 9 9 9	9 9 9 9	9 4 • 99 9 4	4 49

skanové obrazce femuru a stanoví se kostní plocha, minerální obsah kosti (BMC) a minerální hustota kosti (BMD) celého femuru (WF), distální femorální metafýzy (DFM), dříku femuru (FS) a proximálního femuru (PF).

Histomorfometrická analýza spongiosy proximální metafýzy tibie

Při pitvě se vyjme pravá holenní kost, svaly se odpreparují a kost se nařeže na tři části. Proximální tibie se fixuje v 70% ethanolu, dehydruje ethanolem o odstupňované koncentraci, v acetonu zbaví tuku a poté uloží do methylmethakrylátu (Eastman Organic Chemicals, Rochester, NY,

USA). Přední části proximální metafýzy tibie se za použití zařízení pro mikrotomy Reichert-Jung Polycut S nařežou na na tlouštku 4 a 10 μτη. Pro histomorfometrii spongiosní kosti se použije jednoho 4μιη řezu a jednoho ΙΟμπι řezu od každého potkana. Řezy o tloušťce 4 μια se obarví modifikovaným Massonovým barvivém Trichrome, zatímco ΙΟμπι řezy se ponechají neobarvené.

3,6 mm distálně k junkci růstové chrupavky a epifýzy se použije histomorfometrického systému Bioquant OS/2 (R&M biometrics, lne., Nashville, TN, USA). Prvních 1,2 mm metafýzové oblasti tibie je třeba vynechat, aby se měření omezilo na sekundární spongiosu. Pro stanovení ukazatelů objemu kosti, struktury kosti a resorpce kosti se použije 4μτη řezů, zatímco pro stanovení ukazatelů tvorby kostní tkáně a obratu kosti se použije ΙΟμπι řezů.

9*9· ·	··	····	··	··
•	··	9 9	9	9 9	9 9
•	•	9	9	9	9 9	9 9
•	•	9 9	9	9 9	999	999
• ·	•	9	9	9 9	9	9

I. Měření a výpočty objemu trámčiny kosti a struktury:

2. Plocha trámčité kosti (BV, mm²): celková plocha trámčiny v TV.

4. Objem trámčité kosti (BV/TV, %): BV/TV x 100.

5. Trabekulární kostní číslo (TBN, #/mm):

I, 199/2XBS/TV.

6. Tloušťka trámčité kosti (TBT, μπι):

(2000/1,199)x(BV/BS).

7. Trabekulární kostní separace (TBS, μπι):

(2000x1,199)x(TV-BV).

II. Měření a výpočty resorpce kosti

2. Obvod osteoklastů (OCP, mm): délka obvodu trámčiny pokryté osteoklasty.

3. Počet osteoklastů na milimetr (OCN/mm, #/mm):

OCN/BS.

• · · ·

4. Procetický obvod osteoklastů (%OCP, %): OCP/BSxlOO.

III. Měření a výpočty tvorby kostní tkáně a obratu kosti

3. Vzdálenost mezi značkami (ILW, μπι): průměrná vzdálenost mezi dvěma kalceinovými značkami.

4. Procento mineralizovaného obvodu (PMS, %):

(SLS/2 + DLS)/BSxlOO.

5. Rychlost minerální apozice (MAR, μιη/den): ILW/značkový interval.

6. Rychlost tvorby kosti/povrch ref. (BFR/BS, μπΐ²/ύβη/μπι): (SLS/2+DLS)xMAR/BS.

7. Rychlost obratu kosti (BTR, %/rok):

(SLS/2+DLS)xMAR/BVxlOO.

Statistické metody

• ••9 • · · · · ·

Protokol o zkoušení anabolických činidel

Účinnost činidel s anabolickým účinkem na kosti při stimulaci tvorby kosti a zvyšování kostní hmoty je možno zkoušet na intaktních samcích nebo samicích potkana nebo na samcích nebo samicích potkana s deficiencí pohlavních hormonů (po orchidektomii nebo ovariektomii).

Pro studii se použije samců nebo samic potkana o různém stáří (jako 3 měsíců). Bud intaktní nebo kastrovaní (ovariektomizovaní nebo orchidektomizovaní) potkani se po určitou dobu (jako 2 týdnů až 2 měsíců) ošetřují subkutánními injekcemi nebo perorálně anabolickými činidly, jako prostaglandinem E2 (PGE2) v různých dávkách (jako 1, 3 nebo 6 mg/kg/den). V případě kastrovaných potkanů se ošetřování zahájí následující den po výkonu (pro účely zabránění ztrátě kostní tkáně) nebo v době, kdy již došlo ke ztrátě kostní tkáně (pro účely jejího znovuobnovení). Všem zvířatům se během zkoušky ponechá volný přístup k vodě a peletizované potravě dostupné na trhu (Teklad Rodent Diet #8064, Harlan Teklad, Madison, WI, USA) obsahující 1,46 % vápníku, 0,99 % fosforu a 4,96 IU/g vitaminu Dg. 12 dnů a 2 dny před usmrcením se všem potkanům subkutánními injekcemi podá 10 mg/kg kalceinu (fluorchromový kostní markér).

Potkani se usmrtí a provedou se následující měření:

Stanovení minerálů ve femuru

Při pitvě se každému potkanu vyjme pravý femur a podrobí skanování za použití zařízení pro rentgenovou absorpciometrii při dvou energetických úrovních (duální fotonová rentgenová technika, DXA, QDR 1000/W, Hologic lne., Waltham, MA, USA) vybaveného softwarem Regional High Resolution Scan (Hologic lne., Waltham, MA, USA), přičemž • · · · · · • · · • * · • · · * · · · velikost snímaného pole je 50,8 x 19,02 mm, rozlišení 0,254 x 0,127 mm a rychlost snímání 7,25 mm/s. Analyzují se skanové obrazce femuru a stanoví se kostní plocha, minerální obsah kosti (BMC) a minerální hustota kosti (BMD) celého femuru (WF), distální femorální metafýzy (DFM), dříku femuru (FS) a proximálního femuru (PF).

Histomorfometrická analýza spongiosy proximální metafýzy tibie

USA). Přední části proximální metafýzy tibie se za použití zařízení pro mikrotomy Reichert-Jung Polycut S nařežou na na tloušťku 4 a 10 μπι. Pro histomorfometrii spongiosní kosti se použije jednoho 4μπι řezu a jednoho ΙΟμπι řezu od každého potkana. Řezy o tloušťce 4 μιη se obarví modifikovaným Massonovým barvivém Trichrome, zatímco ΙΟμπι řezy se ponechají neobarvené.

3,6 mm distálně k junkci růstové chrupavky a epifýzy se použije histomorfometrického systému Bioquant OS/2 (R&M biometrics, Inc., Nashville, TN, USA). Prvních 1,2 mm metafýzové oblasti tibie je třeba vynechat, aby se měření omezilo na sekundární spongiosu. Pro stanovení ukazatelů objemu kosti, struktury kosti a resorpce kosti se použije 4μπι řezů, zatímco pro stanovení ukazatelů tvorby kostní tkáně a obratu kosti se použije ΙΟμπι řezů.

»· · · · ·

I. Měření a výpočty objemu trámčiny kosti a struktury:

2. Plocha trámčité kosti (BV, mm²): celková plocha trámčiny v TV.

4. Objem trámčité kosti (BV/TV, %): BV/TV x 100.

5. Trabekulární kostní číslo (TBN, #/mm):

I, 199/2XBS/TV.

6. Tloušťka trámčité kosti (TBT, μια):

(2000/1,199)x(BV/BS).

7. Trabekulární kostní separace (TBS, μπι): (2000X1,199)x(TV-BV).

II. Měření a výpočty resórpce kosti

2. Obvod osteoklastů (OCP, mm): délka obvodu trámčiny pokryté osteoklasty.

3. Počet osteoklastů na milimetr (OCN/mm, #/mm):

OCN/BS.

4. Procetický obvod osteoklastů (%OCP, %): OCP/BSxlOO.

III. Měření a výpočty tvorby kostní tkáně a obratu kosti

3. Vzdálenost mezi značkami (ILW, μιη): průměrná vzdálenost mezi dvěma kalceinovými značkami.

4. Procento mineralizovaného obvodu (PMS, %):

(SLS/2 + DLS)/BSxlOO.

5. Rychlost minerální apozice (MAR, μιη/den): ILW/značkový interval.

6. Rychlost tvorby kosti/povrčh ref. (BFR/BS, μιη²/ύθη/μιη): (SLS/2+DLS) xMAR/BS.

7. Rychlost obratu kosti (BTR, %/rok):

(SLS/2+DLS)xMAR/BVxlOO.

Statistické metody

In vitro stanovení vazby k receptorům estrogenu

Provede se vazebná zkouška in vitro, při níž se zjišťuje schopnost estrogen agonistických/antagonistických sloučenin podle vynálezu vytěsnit [³H]-estradiol z humánního receptoru estrogenu získaného rekombinantními metodami v kvasince, za účelem stanovení vazebné afinity sloučenin podle vynálezu k receptoru estrogenu. Při tomto stanovení se použije následujících látek:

1. zkouškového pufru TD-0,3 (obsahujícího lOnM Tris o pH 7,6, 0,3M chlorid draselný a 5mM DTT o pH 7,6);

2. [³H]-estradiolu, jako radioligandu (od firmy New England Nuclear);

3. estradiolu od firmy Sigma, jako studeného ligandu a

4. rekombinantního humánního receptoru estrogenu hER.

Vyrobí se roztok zkoušené sloučeniny v TD-0,3 s přísadou 4 % DMSO a 16 % ethanolu. Tritiovaný estradiol se rozpustí v TD-0,3 na konečnou koncentraci pro stanovení 5nM. Také hER se zředí TD-0,3 tak, aby v každé zkušební jamce bylo přítomno 4 až 10 μg proteinu celkem. Pracuje se s mikrotitrovými miskami a ke každému inkubátu se přidá 50 μΐ studeného estradiolu (nespecifická vazba) nebo roztoku sloučeniny, 20 μΐ roztoku tritiovaného estradiolu a 30 μΐ roztoku hER. V každé misce jsou obsaženy vždy tři replikace celkové vazebné a měnící se koncentrace sloučeniny. Misky se inkubují přes noc při 4°C. Potom se vazebná reakce ukončí přídavkem a promícháním se 100 ml 3% hydroxylapatitu v lOmM Tris o pH 7,6. Inkubace se provádí 15 minut při 4°C. Směsi

se odstředí a pelety se 4 x promyjí vždy 1% roztokem smáčedla Triton X100 v lOmM Tris o pH 7,6. Hydroxylapatitové pelety se suspendují v kapalině Ecoscint A a za použití β= scintigrafie se stanoví radioaktivita. U všech dat se vypočítá střední hodnota počtu radioaktivních impulzů za minutu (cpm) ze tří replikací. Specifická vazba se vypočítá odečtením nespecifického počtu radioaktivních impulsů za minutu (tento počet je definován jako cpm, které zbývají po oddělení reakční směsi obsahující rekombinantní receptor, radioligand a nadbytek neznačeného ligandu) od hodnoty cpm odpovídající celkové vazbě (tato hodnota je definována jako cpm, které zbývají po oddělení reakční směsi obsahující pouze rekombinantní receptor a radioligand). Účinnost (potence) sloučeniny se vyjádří hodnotou IC₅₀ (tato hodnota je definována jako koncentrace sloučeniny, které je zapotřebí pro 50% inhibici celkové specifické vazby tritiovaného estradiolu). Stanoví se specifická vazba za přítomnosti měnících se koncentrací sloučeniny a vypočítá se procentický podíl spe- cifické vazby v celkové specifické vazbě radioligandu. Data se vynesou do grafu jako inhibice sloučeninou (%) (lineární stupnice) proti koncentraci sloučeniny (logaritmická stupnice).

Protokol o zkoušení růstového hormonu/sekretagogů růstového hormonu

Sloučeniny schopné stimulovat sekreci růstového hormonu u kultur buněk potkaní hypofýzy je možno identifikovat za použití následujícího protokolu. Tato zkouška je také užitečná pro porovnání se standardy při stanovování úrovně dávky. Buňky se izolují z podvěsků mozkových šestitýdenních samců potkana Wistar. Po dekapitaci se přední laloky hypofýzy umístí do chladného sterilního Hankova vyváženého solného roztoku, který neobsahuje vápník a hořčík (HBSS). Tkáně se jemně rozmělní, poté podrobí dvěma cyklům ·'·

<

mechanicky podporované enzymatické dispergace za použití bakteriální proteasy (EC 3.4.24.4, Sigma P-6141) v HBSS o koncentraci 10 jednotek/ml. Směs tkáně a enzymu se míchá v rotující nádobě při frekvenci otáčení 30 min^-1 v atmosféře 5% oxidu uhličitého při asi 37°C po dobu asi 30 minut, po asi 15 minutách a asi 30 minutách ručně trituruje za použití lOml pipety. Výsledná směs se asi 5 minut centrifugu je při 200 x g. K supernatantu se přidá koňské sérum, aby se neutralizoval nadbytek proteasy. Peleta se resuspenduje v čerstvé protease a vzniklá suspenze se za výše uvedených podmínek přibližně 30 minut míchá a ručně trituruje, na závěr jehlou o velikosti 23. Přidá se znovu koňské sérum, načež se buňky z obou výluhů spojí, peletizují (200 x g po dobu asi 15 minut), promyjí, resuspendují v kultivačním médiu a spočítají. Buňky se navzorkují v množství asi 6,0 až 6,5 x 10⁴ buněk/cm² do 48-jamkových misek Costar a 3 až 4 dny kultivují v Dulbeccem modifikovaném Eaglově médiu (D-MEM) doplněném 4,5 g/litr glukosy, 10% koňským sérem,

2,5% fetálním hovězím sérem, 1% neesenciálními aminokyselinami, 100 U/ml nystatinu a 50 mg/ml gentamycinsulfátu a poté zkoušejí na sekreci růstového hormonu.

Těsně před zkouškou se kultivační jamky dvakrát promyjí a poté ekvilibrují asi 30 minut v uvolňovacím médiu (D-MEM purfováném 25mM Hepes, pH 7,4 a obsahujícím 0,5% hovězí sérový albumin, při 37°C). Zkoušené sloučeniny se rozpustí v dimethylsulfoxidu a roztok se zředí předehřátým uvolňovacím médiem. Zkoušky se provádějí se čtyřmi replikacemi; Zkouška se zahájí přídavkem 0,5 ml uvolňovacího média (obsahujícího vehikulum nebo zkoušenou sloučeninu) do každé kultivační jamky. Inkubace se provádí při asi 37°C po dobu asi 15 minut a ukončí se odstraněním kultivačního média, které se centrifuguje při 2000 x g po dobu asi 15 minut, aby se odstranil buněčný materiál. Koncentrace potkaního růstového hormonu v supernatantu se stanoví pomocí ···· · ·· ··«>·

<

standardního protokolu radioimunoeseje za použití referenčních vzorků potkaního růstového hormonu (NIDDK-rGH-RP-2) a potkaního antiséra růstového hormonu vypěstovaného v opicích (NIDDK-anti-rGH-S-5) získaného od Dr. A. Parlowa (Harbor-UCLA Medical Center, Torrence, CA, USA). Další potkaní růstový hormon (1,5 jednotky/mg, č. G2414, Scripps, Labs, San Diego, CA, USA) se joduje na specifickou aktivitu přibližně 30 μCi/μg za použití metody s chloraminem T, jako značka. Imunokomplexy se získají přídavkem kozího antiséra k opičímu IgG (Organon Teknika, Durham, NC, USA) a polyethylenglykolu o molekulové hmotnosti 10 000 až 20 000 do konečné koncentrace 4,3%; izolace se provádí centrifugací. Tato zkouška má rozmezí pracovních parametrů 0,08 až 2,5 μg potkaního růstového hormonu na zkumavku nad základními hladinami. Účinné sloučeniny typicky stimulují uvolňování růstového hormonu více než l,4krát. Odkaz: Cheng K., Chán W.-S., Barreto Jr. A., Convey E. M., Smith R. G., 1989.

Zkouška exogenně stimulovaného uvolňování růstového hormonu u potkanů po intravenosním podání zkoušené sloučeniny

Samice potkana Sprague-Dawley o stáří 21 dnů (Charles River Laboratory, Wilmington, MA, USA) se nechají aklimatizovat na místní podmínky vivária (24°C, s cyklem 12 hodin osvitu a 12 hodin tmy) po dobu asi 1 týdne před zkoušením. Všem potkanům se ponechá přístup k vodě a peletizované potravě dostupné na trhu (Agway Country Food, Syracůse, NY, USA) ad libitum.

V den zkoušky se zkoušené sloučeniny rozpustí ve vehikulu obsahujícím 1% ethanol, lmM kyselinu octovou a 0,1% hovězí sérový albumin v solném roztoku. Každá sloučenina se zkouší při n = 3. Potkani se zváží a anestetizují intraperitoneální injekcí sodné soli pentobarbitalu (Nembutol, 50 mg/kg tělesné hmotnosti). 14 minut po podání anestetika se ···· ····

pro odběr krevních vzorků naříznou konce ocasů a krev se nechá nakapat do mikrocentrifugačních zkumavek (základní krevní vzorek, přibližně 100 μΐ). 15 minut po podání anestetika se intravenosními injekcemi do ocasní vény podají zkoušené sloučeniny, při celkovém objemu injekce 1 ml/kg tělesné hmotnosti. Další krevní vzorky se z ocasu odeberou 5, 10 a 15 minut po podání sloučeniny. Krevní vzorky se udržují na ledu až do centrifugačního oddělení séra (1430 x g po dobu 10 minut při 10°C). Sérum se skladuje při -80°C až do stanovení růstového hormonu pomocí radioimunoeseje, i,. jak je popsán výše a dále.

Hodnocení exogenně stimulovaného uvolňování růstového hormonu u psů po orálním podání

V den 1 pokusu se naváží vhodná dávka zkoušené sloučeniny a rozpustí ve vodě. Vždy 4 psům pro každý dávkovači režim se podají žaludeční sondou dávky o objemu 0,5 ml/kg. Vzorky krve (2 ml) se odebírají z jugulární vény přímou punkcí před podáním dávky a 0,08, 0,17, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 2, 4, 6 a 8 hodin po podání za použití 2ml vakutainerů obsahujících lithiumheparin. Připravená plasma se až do analýzy skladuje při -20°C.

Měření psího růstového hormonu ·?

Koncentrace psího růstového hormonu se stanoví & pomocí standardního protokolu radioimunoeseje za použití . psího růstového hormonu (antigen pro jodaci a referenční * vzorek AFP-1983B) a psího antiséra růstového hormonu vypěstovaného v opicích (AFP-21452578) získaného od Dr. A. Parlowa (Harbor-UCLA Medical Center, Torrence, CA, USA), Značka se získá chloramin-T jodaci psího růstového hormonu na specifickou aktivitu 20 až 40 μCi/μg. Imunokomplexy se získají přídavkem kozího antiséra k opičímu IgG (Organon ·· · · ·« ····

<

Teknika, Durham, NC, USA) a polyethylenglykolu o molekulové hmotnosti 10 000 až 20 000 do konečné koncentrace 4,3%; izolace se provádí centrifugací. Tato zkouška má rozmezí pracovních parametrů 0,08 až 2,5 μg psího růstového hormonu na zkumavku.

Sloučeniny podle vynálezu je možno podávat jakýmkoliv způsobem pro systemickou a/nebo místní dodávku ₄ sloučeniny podle vynálezu. Jako tyto způsoby je možno uvést orální podávání, parenterální podávání, intraduode* nální podávání atd. Sloučeniny podle vynálezu se obvykle podávají orálně. Parenterálního podávání (intravenosního, intramuskulárního, subkutánního nebo intramedulárního) je však možno využít například v případech, kdy je orální podávání nevhodné vzhledem ke zvolenému cíli nebo kdy je pacient neschopen pozřít léčivo. Dvě různé sloučeniny podle vynálezu mohou být spolupodávány simultánně nebo následně v jakémkoliv pořadí nebo může být podávána jediná farmaceutická kompozice, která zahrnuje první sloučeninu uvedenou výše a druhou sloučeninu uvedenou výše ve farmaceuticky vhodném nosiči.

Tak například kostní anabolické činidlo je možno používat samotné nebo v kombinaci s antiresorpčním činidlem po dobu tří měsíců až tří let, po níž následuje doba tří

- měsíců až tří let, po kterou se podává samotné antiresorpční činidlo a celý cyklus léčby je možno opakovat. Alternativně je například možno kostní anabolické činidlo podávat samotné nebo v kombinaci s antiresorpčním činidlem po dobu tří i- měsíců až tří let a poté se po zbytek pacientova života podává samotné antiresorpční činidlo. Tak například při jednom přednostním režimu podávání může být výše uvedená druhá sloučenina (například PGE₂) podávána jednou za den a výše uvedená první sloučenina (například agonista/antagonista estrogenu) může být podávána denně ve formě jedné nebo

4444 4		4444 4·	• 4
•	• ·	• ·	« · ·	4 4
*	•	4 ·	• 4 4	4 4
•	•	• 4 ·	4 4 ···	4 4 4
• 4		• 4	4 4 ·	4'

( několika dávek. Alternativně při jiném přednostním režimu podávání je možno podávat dvě sloučeniny následně po sobě, přičemž výše uvedenou druhou sloučeninu (například PGE₂) lze podávat jednou za den po dobu dostatečnou pro zvýšení kostní hmoty na úroveň, která je nad práhem kostní fraktury (Health Organization Study Assessment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994). Report of a WHO Study Group. World Health Organization Technical Series 843), načež následuje denní podávání výše uvedené první sloučeniny (například agonisty/antagonisty estrogenu) ve formě jedné nebo většího počtu dávek.

V přednostním provedení se výše uvedená druhá sloučenina (například PGE₂) podává jednou denně ve formě pro rychlou dodávku, například ve formě pro orální dodávku (přednostně je třeba se vyhnout například dávkovacím formám s přetrvávajícím uvolňováním).

Množství a doba podávání sloučenin v každém případě bude samozřejmě záviset na léčeném subjektu, závažnosti postižení, způsobu podávání a rozhodnutí předepisujícího lékaře. Vzhledem k odlišnostem mezi jednotlivými pacienty je nutno dále uvedené dávkování chápat pouze jako vodítko a ošetřující lékař může dávky léčiva modifikovat, aby se dosáhlo účinnosti (například zvýšení kostní hmoty), kterou považuje na vhodnou pro konkrétního pacienta. Při posuzování stupně požadované účinnosti musí ošetřující lékař zvážit různé faktory, jako výchozí hladinu kostní hmoty, věk pacienta, předchozí chorobu, jakož i přítomnost jiných chorob (například“ kardiovaskulárních). Tak například podávání agonisty/antagonisty estrogenu může mít kladný vliv na kardiovaskulární systém, především u žen po přechodu. V následujících odstavcích jsou uvedena přednostní rozmezí dávek pro různé složky podle vynálezu.

···· ·«·· ·· ·· ·' · 4 4 · · • 4 · · 4 · • 4 4 444 44 · • 4 · · · ·· ·· <

Množství antiresorpčního činidla, kterého se má použít, se stanoví na základě jeho účinnosti jako činidla inhibujícího ztrátu kostní hmoty. Tato účinnost se stanoví prostřednictvím farmakokinetiky jednotlivých sloučenin a jejich minimální a maximální účinné dávky při inhibici ztráty kostní hmoty podle výše popsaného protokolu (protokol o zkoušení agonistů/antagonitů estrogenu).

Pro účely podle vynálezu, například pro účely inhibice resorpce kosti, leží účinná denní dávka první sloučeniny podle vynálezu obvykle v rozmezí od 0,01 do 200 mg/kg, přednostně od 0,5 do 100 mg/kg.

Účinná denní dávka droloxifenu konkrétně leží v rozmezí od 0,1 do 40 mg/kg, přednostně od 0,1 do 5 mg/kg.

Účinná denní dávka raloxifenu konkrétně leží v rozmezí od 0,1 do 100 mg/kg, přednostně od 0,1 do 10 mg/kg.

Účinná denní dávka tamoxifenu konkrétně leží v rozmezí od 0,1 do 100 mg/kg, přednostně od 0,1 do 5 mg/kg.

Účinná denní dávka cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

(-)-cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-6-f enyl-5-[ 4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-1- [ 6 ' -pyrrolidinoethoxy-3 ' -pyridyl ] -2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalenu;

···# 9	9 • ·	• 9 9 ·	···· 9	99 • 9	44 • 9
9 9 9 9	9 9 9	9 4 4 4 4 9 9	9 9 9 • 4	9 4 944 9	9 9 494 9

<

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-1-ylethoxy)fenyl]—5,6,7,8—tetrahydronaftalen—2—olu nebo

1-(4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu leží konkrétně v rozmezí od 0,0001 do 10 mg/kg, přednostně od 0,001 do 10 mg/kg.

Účinná denní dávka 4-hydroxytamoxifenu konkrétně leží v rozmezí od 0,0001 do 100 mg/kg, přednostně od 0,001 do 10 mg/kg.

Kostního anabolického činidla (například PGE₂) se obvykle používá v množství, které je dostatečné pro zvýšení kostní hmoty na úroveň, která je nad práhem kostní fraktury (podrobněji World Health Organization Study citovaná výše).

Účinná denní dávka kostního anabolického činidla uvedeného výše obvykle leží v rozmezí od 0,001 do 100 mg/kg, přednostně od 0,1 do 10 mg/kg.

Účinná denní dávka PGE₂ leží konkrétně v rozmezí od 0,001 do 10 mg/kg, přednostně od 0,01 do 1 mg/kg.

, Účinná denní dávka 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanonu konkrétně leží v rozmezí od 0,001 do 20 mg/kg, přednostně od 0,01 do 10 mg/kg.

Účinná denní dávka fluoridu sodného konkrétně leží v rozmezí od 0,01 do 50 mg/kg, přednostně od 0,2 do 10 mg/kg.

···· • i ···· ·· ·· • 44 · · 4 4 4 4 4 • 4 4 · 4 · · · · • 4 4 4 · 4 4 444 444 • 4 · 4 4 4 4 · 4

4· «44 44 44 4'4 ··

Účinná denní dávka parathyroidního hormonu, jeho metabolitů a fragmentů konkrétně leží v rozmezí od 0,00001 mg/kg do 1 mg/kg, přednostně od 0,001 do 0,5 mg/kg.

Účinná denní dávka růstového hormonu nebo sekretagogů růstového hormonu konkrétně leží v rozmezí od 0,0001 do 100 mg/kg, přednostně od 0,01 do 5 mg/kg.

Sloučeniny podle vynálezu se obvykle podávají ve formě farmaceutické kompozice, která obsahuje alespoň jednu ze sloučenin podle vynálezu spolu s farmaceuticky vhodným vehikulem nebo ředidlem. Sloučeniny podle vynálezu mohou být tedy podávány jednotlivě nebo společně v podobě kterékoliv z obvyklých orálních, pareterálních nebo transdermálních dávkovačích forem.

Pro orální podávání se může použít roztoků, suspenzí, tablet, pilulí, tobolek, prášků apod. Lze použít tablet obsahujících různé excipienty, jako je citran sodný, uhličitan vápenatý a fosforečnan vápenatý, spolu s různými bubřidly, jako je škrob (přednostně kukuřičný, bramborový nebo tapiokový škrob) a určité komplexní silikáty s granulačními pojivý, jako je polyvinylpyrrolidon, sacharosa, želatina a klovatina. Pro tabletovací účely mohou být přídavně přítomna lubrikační činidla, jako je stearan hořečnatý, natriumlaurylsulfát a mastek. Pevné prostředky podobného typu mohou být také přítomny jako náplně v měkkých nebo tvrdých želatinových tobolkách. V tomto případě obsahu j i použité prostředky přednostně také laktosu nebo vysokomolekulární polyethylenglykoly. Při výrobě vodných suspenzí a/nebo elixírů, které se hodí pro orální podávání, se může účinná přísada mísit s různými sladidly nebo aromatizačními látkami, barvicími přísadami či barvivý a - pokud je to zapotřebí - emulgátory a/nebo suspenzními činidly

···· Φ	·*	····	··	99
•	• ·	• ·	•	• ·	• ·
•	•	• ·	•	9 9	9 9
•	•	• · ·	• ·	99 9	• · ·
• ·	•	• ·	• ·	9	•

a dále také takovými ředidly, jako je voda, ethanol, propylenglykol, glycerol a jejich různé kombinace.

Pro parenterální podávání se může použít roztoků bud) v sezamovém nebo arašídovém oleji, nebo ve vodném propylenglykolu, jakož i sterilních vodných roztoků odpovídající vodorozpustné soli. Vodné roztoky by měly být účelně pufrovány (pokud je to nutné) a kapalné ředidlo by mělo být nejprve isotonizováno přidáním dostatečného množství solného roztoku nebo glukosy. Takové vodné roztoky se hodí pro intravenosní, intramuskulární, subkutánní a intraperitoneální injekční podávání. Výroba všech takových roztoků za sterilních podmínek se snadno provádí standardními farmaceutickými technologiemi, které jsou dobře známy odborníkům v tomto oboru.

Pro účely transdermálního (například topického) podávání se používá zředěných sterilních vodných nebo zčásti vodných roztoků (obvykle o koncentraci 0,1 až 0,5%), které se připravují podobným způsobem jako parenterální roztoky.

Způsoby výroby různých farmaceutických kompozic, které obsahují určité množství účinné složky jsou známé nebo budou odborníku v tomto oboru zřejmé z tohoto popisu (viz například Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa, 15. vydání (1975)).

Farmaceutické kompozice podle vynálezu mohou obsahovat 0,1 až 95 %, přednostně 1 až 70 %, sloučeniny nebo sloučenin podle vynálezu. V každém případě však podávaná kompozice nebo přípravek podle vynálezu bude obsahovat sloučeninu nebo sloučeniny podle vynálezu v množství účinném pro léčbu choroby/stavu léčeného subjektu.

·· · · ·· 44*4 ·· 44 *i 4 '4 4 · 4 ·

4 · 4 4 4 4

4 44 4 44 444 444

4444 4 4

444 44 44 44 44 <

Jelikož se vynález týká zvyšování a udržování kostní hmoty za použití kombinace účinných složek, které mohou být podávány odděleně, je předmětem vynálezu také kombinace oddělených farmaceutických kompozic ve formě kitu. Kit zahrnuje dvě oddělené farmaceutické kompozice: agonistu/antagonistu estrogenu a anabolické činidlo. Kit zahrnuje kontejner pro oddělené kompozice, jako rozdělenou lahvičku nebo rozdělený foliový balíček. Kit obvykle zahrnuje pokyny pro podávání oddělených složek. Forma kitu je zvlášť výhodná, když se oddělené složky přednostně podávají v různých dávkovačích formách (například orálně a parenterálně), různých dávkových intervalech nebo když předepisující lékař vyžaduje odměřování jednotlivých složek kombinace.

Jako příklad takového kitu je možno uvést tzv. blistrová (protlačovací) balení. V obalovém průmyslu jsou blistry dobře známy a ve velkém měřítku se jich používá pro balení farmaceutických jednotkových dávkovačích forem (tablet, tobolek apod.). Blistry obvykle sestávají z listu relativně tuhého materiálu povlečeného folií z přednostně transparentního plastického materiálu. Během balicího procesu se v plastické folii vytvarují dvorce. Dvorce mají velikost a tvar balených tablet nebo tobolek. Poté se do dvorců umístí tablety nebo tobolky a na opačnou stranu (vzhledem ke směru v němž byly vytvořeny dvorce) plastické folie se připevní list relativně tuhého materiálu. Výsledkem je, že tablety nebo tobolky jsou uzavřeny ve dvorcích mezi plastickou folií a listem. Pevnost listu je přednostně taková, že tablety nebo tobolky je možno z blistru vyj ímat tak, že se rukou zatlačí na dvorec, přičemž otvor v listu vznikne v místě dvorce. Tablety nebo tobolky je možno vyjímat výše popsaným postupem.

Do blízkosti tablet nebo tobolek je vhodné umístit pomůcku usnadňující kontrolu odebírání dávkových forem z ··· 9 ·» ···· 99 99 * · · 9 · 9 9 9 9 ·

9 ··· · 9 · ·

9 99 9 99 999999 • · 9999 9 9 <

balení. Tato pomůcka může mít podobu čísel, která odpovídají dnům režimu, v němž mají být tablety brány. Jako další příklad je možno uvést kalendář, jako První týden, pondělí, úterý ... atd., Druhý týden, pondělí, úterý ... atd. Další varianty takových pomůcek jsou zcela zřejmé. Denní dávku je možno podávat ve formě jediné tablety nebo tobolky nebo ve formě několika pilulí nebo tobolek, které se berou v daný den. Denní dávka kostního anabolického činidla může sestávat z jedné tablety nebo tobolky, zatímco denní dávka antiresorpčního činidla může sestávat z několika tablet nebo tobolek. Tento případ by měl být zohledněn v pomůckách usnadňujících kontrolu odebírání dávkových forem z balení.

Podle jiného konkrétního provedení se používá dávkovače uzpůsobeného pro dávkování denních dávek v určitou dobu v zamýšleném pořadí. Dávkovač je přednostně vybaven pomůckou usnadňující odebírání dávkových forem, pokud to napomáhá zvyšování kompliance s režimem. Jako příklad pomůcky usnadňující kontrolu odebírání dávkových forem je možno uvést mechanické počítadlo oddělených denních dávek. Jiným přikladen takové pomůcky je mikročipová parně t napájená z baterie spojená s displejem s tekutými krystaly nebo zvukovým upomínacím signálem, který například ukazuje datum, kdy byla odebrána poslední dávka a/nebo připomíná kdy se má brát další dávka.

Příklad provedení vynálezu

—.....—.............. p ř i k 1 a d

Tři měsíce po výkonu se ovariektomizovaným potkanům po dobu 2 měsíců podává buď prostaglandin E₂ (PGE₂), známé kostní ···· · ···· ·· ·· • · v · · * · • · « · · · · • « · ·· ♦····· • · · · · · • · * ·· · · ·· anabolické činidlo, v dávce 3 mg/kg/den (subkutánní injekcí) nebo PGE₂ v dávce 3 mg/kg/den (subkutánní injekcí) v kombinaci s droloxifenem (DRO) v dávce 10 mg/kg/den (orálně).

Poté se ošetřování PGE₂ přeruší a potkani se po dobu 1,5 měsíce ošetřují buď vehikulem (10% alkohol v solném roztoku) nebo DRO (10 mg/kg/den, orálně) tak, jak je popsáno dále.

Skupina V: Osm ovariektomizovaných potkanů se v čase 3 měsíce obdukuje, jako kontrola stavu před ošetřením.

99 9· 9	9·	«9*9	99	• 9
•	• 9	• 9	9	» 9	9 9
9	9	• 9	9	• 9	9 9
9	9	9 9 <	9 9	• 9 9	999
• 9	9	9 9	• 9	9	•

<

Skupina XII: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a orálně DRO v dávce 10 mg/kg/den a v čase 5 až 6,5 měsíce vehikulum, načež se v čase 6,5 měsíce provede jejich obdukce.

Skupina XIII: Osmi ovariektominovaným potkanům se v čase 3 až 5 měsíců subkutánní injekcí podává PGE2 v dávce 3 mg/kg/den a orálně DRO v dávce 10 mg/kg/den a v čase 5 až 6,5 měsíce samotný DRO, načež se v čase 6,5 měsíce provede jejich obdukce.

PGE₂ (Cayman Chemical Co., Ann Arbor, MI, USA) a droloxifen (Pfizer lne. Groton, CT, USA) ve formě prášku se nejprve rozpustí ve 100% ethanolu. Ethanolické roztoky se dále zředí solným roztokem na požadovanou koncentraci (ko82

···· *	··	···»	··	··
•	• ·	•	•	•	9 ·	• ·
•	•	•	•	•	• ·	• ·
•	•	• ·	•	•	9 ···	♦ ··
• ·	•	• ·	• ·	•	•

nečná koncentrace ethanolu je 10 %). Roztok PGE₂ se podává denně subkutánními injekcemi do hřbetu v dávce 1 ml/kg. Roztok droloxifenu se podává perorálně každý den v dávce 1 ml/potkan.

Stanovení minerálů v bederní páteři

Za použití zařízení pro rentgenovou absorpciometrii při dvou energetických úrovních (duální fotonová rentgenová technika, DXA, QDR 1000/W, Hologic Inc., Waltham, MA, USA) vybaveného softwarem Regional High Resolution Scan (Hologic Inc., Waltham, MA, USA) se u anestetizovaných potkanů stanoví kostní plocha, minerální obsah kosti (BMC) a minerální hustota kosti (BMD) celé bederní páteře a každého ze šesti lumbálních obratlů (LVI až LV6). Potkani se anestetizují intraperitoneální injekcí 1 ml/kg směsi ketaminu a rompunu v poměru 4:3a poté umístí na desku pro potkany. Velikost snímaného pole je 60 x 19 mm, rozlišení 0,254 x 0,127 mm a rychlost snímání 7,25 mm/s. Získané skanové obrazce celé bederní páteře se analyzují. Stanoví se kostní plocha (BA) a minerální obsah kosti (BMC). Vypočítá se minerální hustota kosti (BMC děleno BA) pro celou bederní páteř a pro každý ze šesti lumbálních obratlů (LVI až LV6).

V době 3, 5 nebo 6,5 měsíce po chirurgii je u ovariektomizovaných potkanů ve srovnání s fiktivně operovanými kontrolními zvířaty pozorováno významné snížení BMC a BMD celé bederní páteře i všech bederních obratlů, a to o 15 až 27“%T”Poťkahi’3 měsíce po ovariektomii ošetřovaní bud samotným PGE₂ nebo kombinací s DRO po dobu 2 měsíců mají minerální obsah kosti (BMC) a minerální hustotu kosti (BMD) zcela obnoveny na úroveň fiktivně operovaných kontrolních zvířat. Nebyl zjištěn žádný rozdíl v BMC a BMD u ovariektomizovaných potkanů léčených PGE₂ samotným nebo PGE₂v kombinaci s DRO, což ukazuje, že DRO neoslabuje anabolické ···· účinky PGE₂. Po přerušení léčení PGE₂ bylo pozorováno významné snížení BMD LVI, LV2 a LV3 a BMC LV2. Oproti tomu, když těmto ovariektomizovaným potkanům byl po přerušení podávání PGE₂ podáván DRO, byla PGE₂~obnovená kostní tkáň zcela zachována. Podobně přerušení podávání jak PGE₂, tak DRO po dobu 1,5 měsíce vedlo k významnému snížení BMD LV3. Když se však přeruší podávání PGE₂ a v léčení DRO se pokračuje po dobu 1,5 měsíce, v bederní páteři ovariektomizovaných potkanů není zjištěna žádná ztráta kostní tkáně.

Dospěli jsme k závěru, že DRO, antiresorpční činidlo, u osteogenických potkanů neoslabuje anabolické účinky PGE₂. Kromě toho jsme zjistili, že DRO je účinný pro zachování PGE₂-obnovené kostní tkáně po přerušení léčby PGE₂· Tato data podporují opodstatněnost přístupu, který spočívá v tom, že se nejprve použije anabolického činidla, aby se v osteoporotické kostře obnovila kostní hmota a poté antiresorpčního činidla, aby se obnovená kostní hmota zachovala.

Vynález se neomezuje na konkrétní popsaná provedení a může být obměňován nebo modifikován, aniž by to představovalo odklon od ducha vynálezu či jeho rozsahu, který je dán připojenými patentovými nároky.

«* ·

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutická kompozice, vyznačuj ící se t í m , že zahrnuje

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je agonista/antagonista estrogenu; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu.

2. Farmaceutická kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje farmaceutický nosič.

3. Farmaceutická kompozice podle nároku 2, vyznačující se tím, že agonistou/antagonistou estrogenu je droloxifen, raloxifen, tamoxifen, 4-hydroxytamoxifen, cis-6-(4-fluorfenyl)-5-(4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

V* J. O w ξ j XC VilvAjf '/ťCIIj J- J J/Ό g / 'g Ό

-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

····

1- (4 ' -pyrrolidinoethoxyfenyl )-2-(4*'-f luorf enyl )-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1- (4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin.

4. Farmaceutická kompozice podle nároku 3, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je PGD_lr PGD₂, PGE₂, PGE-^, PGF₂, PGF₂<x nebo 3S-(3-hydroxy4-f enylbutyl) -2R- [ 6- (lH-tetrazol-5-yl) hexyl ] cyklopentanon.

5. Farmaceutická kompozice podle nároku 4, vyznačující se tím, že agonistou/antagonistou estrogenu je droloxifen.

6. Farmaceutická kompozice podle nároku 5, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je pge₂ .

7. Farmaceutická kompozice podle nároku 5, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je 3S- (3-hydroxy-4-f enylbutyl) -2R- [ 6- (2H-tetrazol-5-yl) hexyl ] cyklopentanon.

8. Farmaceutická kompozice podle nároku 4, v y z načujícíse t í m , že agonistou/antagonistou estrogenu je cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

<

(-) -cis-6-f enyl-5- [ 4- (2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5- [ 4- ( 2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1- [ 6 ' -pyrrolidinoethoxy-3 ' -pyridyl ]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1- (4 ' -pyrrolidinoethoxyf enyl )-2-(4 -f luorf enyl) -6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6- (4-hydroxy fenyl) -5- [ 4- (2-piperidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1- (4 ' -pyrrolidinolethoxyf enyl) -2-fenyl-6-hydroxy-l ,2,3,4-tetrahydroisochinolin.

9. Farmaceutická kompozice podle nároku 8, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je pge₂.

10. Farmaceutická kompozice podle nároku 8, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je 3S- (3-hydroxy-4-f enylbutyl) -2R- [ 6- (2H-tetrazol-5-yl) hexyl ] cyklopentanon.

11. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, v y z na č u j i c i se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se pro je vuje nízkou kostní hmotou podává

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je agonista/antagonista estrogenu; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu.

12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se t i m , že agonistou/antagonistou estrogenu je droloxifen, raloxifen, tamoxifen, 4-hydroxytamoxifen, cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)—cis—6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1- (4 ’ -pyrrolidinoethoxyf enyl )-2-(4 -f luorf enyl) -6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1-(4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin.

13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se t i m , že druhou sloučeninou je PGDj, PGD₂, PGE₂, PGEj, PGF₂, PGF₂a nebo 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-[6-(lHtetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanon.

14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se t i m , že agonistou/antagonistou estrogenu je droloxifen.

15. Způsob podle nároku 14, vyznačující tím, že druhou sloučeninou je PGE₂·

16. Způsob podle nároku 14, vyznačující se t i m , že druhou sloučeninou je 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-[6-(lH-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanon.

17. Způsob podle nároku 14, vyznačující se t i m , že stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, je osteoporosa.

18. Způsob podle nároku 13, vyznačující se t i m , že agonistou/antagonistou estrogenu je cis—6—(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen; . — - ----1-(4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo ··· <

1- (4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin.

19. Způsob podle nároku 18, vyznačující se t i m , že druhou sloučeninou je PGE₂.

20. Způsob podle nároku 18, vyznačující se t i m , že druhou sloučeninou je 3S-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-2R-[6-(lH-tetrazol-5-yl)hexyl]cyklopentanon.

21. Způsob podle nároku 18, vyznačující se t i m , že stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, je osteoporosa.

22. Způsob podle nároku 14, vyznačující se t i m , že první sloučenina a druhá sloučenina se podávají v podstatě současně.

23. Způsob podle nároku 14, vyznačující se t i m , že druhá sloučenina se podává po dobu od asi měsíců do asi 3 let.

24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se t i m , že po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let, přičemž druhá sloučenina se po dobu tohoto období asi 3 měsíců až asi 3 let nepodává.

25. Způsob podle nároku 23, vyznačující se t i m , že po něm následuje podávání prvnísloučeniny po dobu delší než asi 3 roky, přičemž druhá sloučenina se během tohoto více než asi tříletého období nepodává.

26. Způsob podle nároku 18, vyznačující se t i m , že první sloučenina a druhá sloučenina se podávají v podstatě současně.

44*4 • · ·· • 4 *· • · 4 • 4 4

444 444

4 • 44 4 4 44 «· 44 vyznačuj ící podává po dobu od asi vyznačuj ící

- 90 - *, • 4 ··

27. Způsob podle nároku 18, se t í m , že druhá sloučenina se 3 měsíců do asi 3 let.

28. Způsob podle nároku 27, se t í m , žé po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let, přičemž druhá sloučenina se po dobu tohoto období asi 3 měsíců až asi 3 let nepodává.

29. Způsob podle nároku 27, vyznačující se t í m , že po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu delší než asi 3 roky, přičemž druhá sloučenina se během tohoto více než asi tříletého období nepodává.

30. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t í m , že se savci vykazujícímu stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou podává farmaceutická kompozice podle nároku 1.

31. Farmaceutická kompozice, vyznačuj í cí se tím, že zahrnuje

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je agonista/antagonista estrogenu; a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu, — - ™ přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství ···· ·· ···· ·* ·· · · ♦ · · · první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

32. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou podává

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je agonista/antagonista estrogenu; a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je prostaglandin nebo agonista/antagonista prostaglandinu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

33. Kit pro léčení stavu, který je projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačující se tím, že obsahuje

a. terapeputicky účinné množství agonisty/antagonisty estrogenu a farmaceuticky vhodný nosič v první jednotkové dávkovači formě ;

9 99

b. terapeuticky‘účinné množství prostaglandinu nebo agonisty/antagonisty prostaglandinu a farmaceuticky vhodný nosič ve druhé jednotkové dávkovači formě ; a

c. obalový prostředek pro první a druhou dávkovači formu.

34. Farmaceutická kompozice, vyznačuj i cí se tím, že zahrnuje

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je droloxifen, raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný nebo N-[1(R)-[1,2-dihydro-l-methansulfonylspiro[3H-indol-3,4’piperidin]-1'-yl)karbonyl]-2-(fenylmethyloxy)ethyl]-2amino-2-methylpropanamid: MK-677.

35. Farmaceutická kompozice podle nároku 34, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje farmaceutický nosič.

36. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou podává

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je droloxifen, raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný nebo

N-[ l(R)-[ 1,2-dihydro-l-methansulfonylspiro[3H-indol-3,4'piperidin]-1'-yl)karbonyl]-2-(fenylmethyloxy)ethyl] -2amino-2-methylpropanamid: MK-677.

37. Způsob podle nároku 36, vyznačujíc se t i m , že stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, je osteoporosa.

38. Způsob podle nároku 36, vyznačujíc se t i m , že první sloučenina a druhá sloučenina se podávají v podstatě současně.

39. Způsob podle nároku 36, vyznačujíc se t i m , že druhá sloučenina se podává po dobu od asi 3 měsíců do asi 3 let.

40. Způsob podle nároku 39, vyznačujíc se t i m , že po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let, přičemž druhá sloučenina se po dobu tohoto období asi 3 měsíců až asi 3 let nepodává

41. Způsob podle nároku 39, vyznačujíc se t i m , že po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu delší než asi 3 roky, přičemž druhá sloučenina se během tohoto více než asi tříletého období nepodává.

42. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící s e t í m , že se savci vykazujícímu stav, který se proje vuje nízkou kostní hmotou podává farmaceutická kompozice podle nároku 34.

43. Farmaceutická kompozice, vyznačuj i cí se tím, že zahrnuje

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je droloxifen, raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný nebo N-[l(R)-[l,2-dihydro-l-methansulfonylspiro [ 3H-indol-3,4 ' -piperidin ] -1' -yl)karbonyl ] -2 - (f enylmethyloxy) ethyl ] -2-amino-2-methylpropanamid:

,5 MK-677, „ přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

44. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se proje vuje nízkou kostní hmotou podává

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je droloxifen, raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a ’ ’ '

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný nebo N-[l(R)-[l,2-dihydro-l-methansulf onylspiro[ 3H-indol-3,4 ' -piperidin] -1' -yl)karbonyl ] -2 - (f enylmethyloxy) ethyl ] - 2-amino-2-methylpropanamid:

MK-677 • ··· ·· • 4 <

přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

45. Kit pro léčení stavu, který je projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačující se tím, že obsahuje

a. terapeuticky účinné množství droloxifenu, raloxifenu, tamoxifenu nebo idoxifenu a farmaceuticky vhodný nosič v první jednotkové dávkovači formě ;

b. terapeuticky účinné množství fluoridu sodného nebo N- [ 1 (R) - [ 1,2-dihydro-l-methansulfonylspiro [ 3H-indol-3,4' -piperidin]-l'-yl) karbonyl]-2-(fenylmethyloxy) ethyl]-2amino-2-methylpropanamidu: MK-677 a farmaceuticky vhodný nosič ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

c. obalový prostředek pro první a druhou dávkovači formu.

46. Farmaceutická kompozice, vyznačuj i cí se tím, že zahrnuje

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)—cis—6—fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1-(4’-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4”-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1-(4’-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný, parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu.

47. Farmaceutická kompozice podle nároku 46, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje farmaceutický nosič.

48. Farmaceutická kompozice podle nároku 47, v y z n a č u j i c i se t i m , že druhou sloučeninou je fluorid sodný.

49. Farmaceutická kompozice podle nároku 47, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je parathyroidní hormon.

··· ·· ··>· ·♦' ·· <

1- (4 ' -pyrrolidinolethoxyf enyl) -2-f enyl-6-hydroxy-l ,2,3,4-tetrahydroisochinolin a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný, parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu.

53. Způsob podle nároku 52, vyznačující se t í m , že druhou sloučeninou je fluorid sodný.

54. Způsob podle nároku 52, vyznačující se t í m , že druhou sloučeninou je parathyroidní hormon.

55. Způsob podle nároku 52, vyznačující se t í m , že druhou sloučeninou je růstový hormon.

56. Způsob podle nároku 52, vyznačující se t i m , že druhou sloučeninou je sekretagog růstového hormonu.

57. Způsob podle nároku 52, vyznačující se t í m , že stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, je osteoporosa.

58. Způsob podle nároku 52, vyznačující se t í m , že první sloučenina a druhá sloučenina se podávají v podstatě současně.

59. Způsob podle nároku 52, vyznačující se t í m , že druhá sloučenina se podává po dobu od asi měsíců do asi 3 let.

60. Způsob podle nároku 59, vyznačující tím, že po něm následuje podávání první sloučeniny ·φφ· · ·♦ Φ'Φ-ΦΦ ΦΦ Φ· • ·· Φ» '· « · · ♦ — 97 — · ♦ ··· φφφφ · * Φ « Φ Φ 9 Φ ··· ·Φ'Φ « Φ Φ '··#·· · Φ «» 999 99 99 ·· ♦ ·

50. Farmaceutická kompozice podle nároku 47, vy značující se tím, že druhou sloučeninou je růstový hormon.

51. Farmaceutická kompozice podle nároku 47, vy značující se tím, že druhou sloučeninou je sekretagog růstového hormonu.

52. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t í m , že se savci vykazujícímu stav, který se proje vuje nízkou kostní hmotou podává

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[6'-pyrrolidinoethoxy-3’-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1-(4’-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[ 4—(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

9999 ·♦·· 99 99 » · 9 · · · ·

I 9 9 9 9 9 9

J * 99 999 999 '9 9 9 9 · 9

9 9' 9 9 « 9 9 po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let, přičemž druhá sloučenina se po dobu tohoto období asi 3 měsíců až asi 3 let nepodává

61. Způsob podle nároku 59, vyznačujíc se t i m , že po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu delší než asi 3 roky, přičemž druhá sloučenina se během tohoto více než asi tříletého období nepodává.

62. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačující se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se pro je vuje nízkou kostní hmotou podává farmaceutická kompozice podle nároku 46.

63. Farmaceutická kompozice, vyznačuj i cí se tím, že zahrnuje

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-) -cis-6-f enyl-5- [ 4- (2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1- [ 6 ' -pyrrolidinoethoxy-3 ' -pyridyl ]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1- (4 ' -pyrrolidinoethoxyf enyl) -2- (4 -f luorf enyl) -6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

100

9444 4 44 49-44 4 9' ·· • 44 4 4 4 4 4 · · 4 4 4 4 41 9 4 4 4 4 4 4 4 4 444 44 4 4 4 '4 · 4 4 9

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenylJ-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1- (4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný, parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

64. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se proje vuje nízkou kostní hmotou podává

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je cis-6-(4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

(-)-cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

101 ···· •

9· ·

9 • 9 ···· ·· ♦'· ' 9 9 <999

9 9 9 9 9 9

9 9 9 99 · ·»· • 9 9 9 · ·

9 99 9 9 9 9 cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrólidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol;

cis-1-[6’-pyrrolidinoethoxy-3'-pyridyl]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalen;

1-(4'-pyrrolidinoethoxyfenyl)-2-(4-fluorfenyl)-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin;

cis-6-(4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-ol nebo

1-(4'-pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l,2,3,4-tetrahydroisochinolin a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je fluorid sodný, parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a fármáčěutičky vhodné ředidlo nebo nosič. ™

65. Kit pro léčení stavu, který je projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačující se tím, že obsahuje

102

9999 4

9 ···· 9* ··

9 9 9 9 9

9 · 9 9 ·

9 9 999 999 • · · 9 ^τ4

a. terapeuticky účinné množství cis-6- (4-fluorfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

(-) -cis-6-f enyl-5- [ 4- (2-pyrrolidin-l-ylethoxy) fenyl ] -5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-6-fenyl-5-[4-(2-pyrrolidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu;

cis-1- [ 6 ' -pyrrolidinoethoxy-3 ' -pyridyl ]-2-fenyl-6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaftalenu;

1- (4 ' -pyrrolidinoethoxyf enyl) -2- (4 ”-f luorf enyl) -6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu;

cis-6- (4-hydroxyfenyl)-5-[4-(2-piperidin-l-ylethoxy)fenyl]-5,6,7,8-tetrahydronaftalen-2-olu nebo

1- (4 ’ -pyrrolidinolethoxyfenyl)-2-fenyl-6-hydroxy-l ,2,3,4-tetrahydroisochinolinu a farmaceuticky vhodný nosič v první jednotkové dávkovači formě ;

b. terapeuticky účinné množství fluoridu sodného, parathyroidního hormonu, růstového hormonu nebo sekretagogu růstového hormonu a farmaceuticky vhodný nosič ve druhé jednotkové dávkovači formě ; a___ _ _ __

c. obalový prostředek pro první a druhou dávkovači formu.

66. Farmaceutická kompozice podle nároku 34, vyznačující se tím, že první sloučeninou je droloxifen.

103

4444 · 4· • 4 44 4 4 44 • 44 4 · 4 4 · • · 4 4 4 4 4 . • · 4 · 4 4 ,· 4 4 4 • 44 4 44 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4

67. Způsob podle nároku 36, vyznačující se t í m , že první sloučeninou je droloxifen.

68. Způsob podle nároku 40, vyznačující se t í m , že první sloučeninou je droloxifen.

69. Způsob podle nároku 41, vyznačující se t í i , že první sloučeninou je droloxifen.

70. Farmaceutická kompozice podle nároku 43, vyznačující se tím, že první sloučeninou je droloxifen.

71. Způsob podle nároku 44, vyznačující se t í m , že první sloučeninou je droloxifen.

72. Kit podle nároku 45, vyznačující se t í m , že první sloučeninou je droloxifen.

73. Farmaceutická kompozice, vyznačuj í cí se tím, že zahrnuje

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu.

74. Farmaceutická kompozice podle nároku 73, vyznačující se tím, že přídavně obsahuje farmaceutický nosič.

104

0000 40

4 4

4 4 «40 00«0 0 0

75. Farmaceutická kompozice podle nároku 74, vyznačující se tím, že první sloučeninou je raloxifen.

76. Farmaceutická kompozice podle nároku 74, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je parathyroidní hormon.

77. Farmaceutická kompozice podle nároku 74, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je růstový hormon.

78. Farmaceutická kompozice podle nároku 74, vyznačující se tím, že druhou sloučeninou je sekretagog růstového hormonu.

79. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačující se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou podává

a. terapeuticky účinné množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. terapeuticky účinné množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu.

80. Způsob podle nároku 79, vyznačující se t i m , že první sloučeninou je raloxifen.

81. Způsob podle nároku 79, vyznačující tím, že druhou sloučeninou je parathyroidní hormon.

105

• «99 · • 9 9999 «9 • 9 9 · · * · ' · · · • · • · • · • · · • · 9 · • 9 · • · 99 · • · 9 9 9 9 9 · • 9 9 •

82. Způsob podle nároku 79, vyznačující se t i m , že druhou sloučeninou je růstový hormon.

83. Způsob podle nároku 79, vyznačující se t i m , že druhou sloučeninou je sekretagog růstového hormonu.

84. Způsob podle nároku 79, vyznačující se t i m , že stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, je osteoporosa.

85. Způsob podle nároku 79, vyznačující se t i m , že první sloučenina a druhá sloučenina se podávají v podstatě současně.

86. Způsob podle nároku 79, vyznačující se t i m , že druhá sloučenina se podává po dobu od asi měsíců do asi 3 let.

87. Způsob podle nároku 86, vyznačující se t i m , že po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu asi 3 měsíců až asi 3 let, přičemž druhá sloučenina se po dobu tohoto období asi 3 měsíců až asi 3 let nepodává.

88. Způsob podle nároku 86, vyznačující se t i m , že po něm následuje podávání první sloučeniny po dobu delší než asi 3 roky, přičemž druhá sloučenina se během tohoto více než asi tříletého období nepodává.

89. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t i m , že se savci vykazujícímu stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou podává farmaceutická kompozice podle nároku 73.

106

totototo • to to· • to • to·* 9 ·· • · ·· • · • • · • • · to to • • · to • · • · · • · · • to to to • to to •

90. Farmaceutická kompozice, vyznačuj í cí se tím, že zahrnuje

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. množství druhé sloučeniny,⁽přičemž touto druhou sloučeninou je parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutických účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

91. Způsob léčení savců, postižených stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačuj ící se t í m , že se savci vykazujícímu stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou podává

a. množství první sloučeniny, přičemž touto první sloučeninou je raloxifen, tamoxifen nebo idoxifen; a

b. množství druhé sloučeniny, přičemž touto druhou sloučeninou je parathyroidní hormon, růstový hormon nebo sekretagog růstového hormonu, přičemž množství první sloučeniny samotné a množství druhé sloučeniny samotné nepostačuje pro dosažení terapeutic107

99 9 9 9 9· 9999 99 9· • • · 9 9 9 9 9 • · • 9 9 9 • 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 ··· 999 • 9 9 9 9 9 9 9 9

<

kých účinků, které spočívají ve zvýšení tvorby kostní hmoty a snížení resorpce kostní hmoty, jichž se dosáhne při současném podání a přičemž kombinovaný účinek množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny je větší než součet léčebných účinků dosažitelných za použití množství první sloučeniny a množství druhé sloučeniny jednotlivě, a farmaceuticky vhodné ředidlo nebo nosič.

92. Kit pro léčení stavu, který je projevuje nízkou kostní hmotou, vyznačující se tím, že obsahuje

a. terapeuticky účinné množství raloxifenu, tamoxifenu nebo idoxifenu a farmaceuticky vhodný nosič v první jednotkové dávkovači formě;

b. terapeuticky účinné množství parathyroidního hormonu, růstového hormonu nebo sekretagogu růstového hormonu a farmaceuticky vhodný nosič ve druhé jednotkové dávkovači formě; a

c. obalový prostředek pro první a druhou dávkovači formu.

01-1534-98-Ho