CN117843811A - Hbv疫苗和治疗hbv的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于引发针对HBV的免疫应答的HBV免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、表达此类免疫原性多肽的载体；包含此类多肽、多核苷酸或载体的药物和免疫原性组合物和试剂盒，以及用于治疗和/或预防HBV的方法。

Description

HBV疫苗和治疗HBV的方法
本申请是申请日为2020年9月28日、申请号为202080068039.0、发明名称为“HBV疫苗和治疗HBV的方法”的发明专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请根据美国35U.S.C.§119(e)要求2019年9月30日提交的美国临时申请号62/908,494的权益，该临时申请据此全文以引用方式并入本文用于所有目的。
序列表
本申请包含序列表，该序列表以ASCII格式以电子方式提交并且据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2020年9月4日，名称为1324_PF_SL.txt，并且大小为296,675字节。
背景技术
已经有许多尝试使用疫苗接种来治疗慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者，以改善HBV表面抗原(sAg)损失率，这是功能性治愈的主要标志物。此类尝试已包括用重组蛋白(Dikici等人，J Gastroenterol Hepatol.(2003)18(2):218-22；Pol等人，J Hepatol.(2001)34(6):917-21；Vandepapeliere等人，Vaccine(2007)25(51):8585-97；Yalcin等人，J Clin Gastroenterol.(2003)37(4):330-5；Al-Mahtab,Hepatol Int.(2013)7(4):981-9；Hoa等人，Antimicrob Agents Chemother.(2009)53(12):5134-40；和Yalcin等人，Infection.(2003)31(4):221-5)、重组DNA(Mancini-Bourgine等人，Hepatology.(2004)40(4):874-82；Yang等人，World J Gastroenterol.(2017)23(2):306-17；Yang等人，J ViralHepat.(2012)19(8):581-93；Yoon等人，Liver Int.(2015)35(3):805-15；Cavenaugh等人，PLoS One.(2011)6(2):e14626；和Godon等人，Mol Ther.(2014)22(3):675-84)、树突状细胞(Luo等人，Vaccine.(2010)28(13):2497-504；和Wei等人，Int Immunopharmacol.(2015)27(2):238-43)、酵母载体(Gane.等人，J Hepatol.(2019)Epub 2019/07/16.doi:10.1016/j.jhep.2019.06.028.PubMed PMID:31306680)和一些病毒载体(Cavenaugh等人，同上；和Zoulim等人，Hum Vaccin Immunother.(2019)Epub 2019/08/03.doi:10.1080/21645515.2019.1651141.PubMed PMID:31373537)疫苗接种。尽管有这些许多尝试，但迄今为止，没有治疗性疫苗接种方法在慢性HBV感染(CHB)中显示出一致的益处。先前疫苗方法中的缺陷可解释先前疫苗方法的失败。
此类缺陷包括抗原设计和所用疫苗技术的限制。最佳抗原将含有HBV蛋白的高度保守部分，并排除保守性差的区域，因为高度保守区域可诱导针对在疫苗抗原和在治疗患者中存在的病毒中相同的表位的应答，而保守性差的区域可引发针对在患者的感染性病毒菌株中不存在的表位的免疫显性T细胞应答(Swadling等人，Vaccines(Basel).(2016)4(3).Epub 2016/08/05.doi:10.3390/vaccines4030027.PubMed PMID:27490575)。然而，一些现有疫苗使用不满足这些标准的抗原设计(Yalcin等人，J Clin Gastroenterol.(2003)37(4):330-5；Hoa等人，同上；Yalcin等人，Infection.(2003)31(4):221-5；Mancini-Bourgine等人，同上；Yang等人，J Viral Hepat.(2012)19(8):581-93；Cavenaugh等人，同上；Godon等人，同上；Gane.等人，同上；和Obeng-Adjei等人，Cancer Gene Ther.(2013)20(12):652-62)。另外，许多现有疫苗未能诱导病毒特异性CD4+T细胞、CD8+T细胞和抗体应答的完整组合(Dikici等人，同上；Pol等人，同上；Vandepapeliere等人，同上；Yalcin等人，JClin Gastroenterol.(2003)37(4):330-5；Al-mahaster，同上；Hoa等人，同上；Yalcin等人，Infection.(2003)31(4):221-5；Mancini-Bourgine等人，同上；Yang等人，J ViralHepat.(2012)19(8):581-93；Gane.等人，同上；和Zoulim等人，同上)。这些免疫组分对于治疗慢性HBV感染特别重要，因为CD8+T细胞已显示是在黑猩猩急性HBV感染期间负责病毒清除的主要效应细胞(Thimme等人，J Virol.(2003)77(1):68-76)。此外，结合HBV表面抗原(HBsAg)的抗体促进HBsAg清除并防止残余HBV的扩散。此外，高量值的免疫应答可能是实现治疗效果所必需的，但是许多现有的CHB疫苗未能诱导这种强效应答(Mancini-Bourgine等人，同上；Yang等人，J Viral Hepat.(2012)19(8):581-93；Cavenaugh等人，同上；Gane.等人，同上；和Zoulim等人，同上)。最后，一些现有的CHB疫苗抗原在递送载体中还不足够稳定以使得能够进行商业规模的疫苗制造。
发明内容
在一个方面，提供了截短的乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶多肽，例如，能够在施用时在人体中诱导或引发免疫应答。在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽包含失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，并且不包含所有的末端蛋白(TP)结构域和所有或部分的间隔区结构域。在一些实施方案中，多肽的长度不长于600个氨基酸，例如长度不长于595、590、585、580、575、570、565、560、555、550、545、540或535个氨基酸。在一些实施方案中，逆转录酶结构域不包含YMDD基序(SEQ ID NO:97)并且RNA酶H结构域不包含AELL基序(SEQ ID NO:98)。在一些实施方案中，逆转录酶结构域中的YMDD基序(SEQ ID NO:97)突变为YMHD(SEQID NO:99)并且其中RNA酶H结构域中的AELL基序(SEQ ID NO:98)突变为AHLL(SEQ ID NO:100)。在一些实施方案中，多肽来自HBV基因型A、B、C或D。在一些实施方案中，(a)多肽来自HBV基因型B并且不包含SEQ ID NO:50、或与SEQ ID NO:50中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列(例如，该序列被去除或缺失或不被包含)；或(b)多肽来自HBV基因型D并且不包含SEQ ID NO:51、或与SEQ IDNO:51中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列。在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在另一方面，提供了HBV聚合酶缺失突变多肽。在一些实施方案中，HBV聚合酶缺失突变多肽从N-末端到C-末端依次包含末端蛋白(TP)结构域、失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中该突变多肽不包含所有或部分的间隔区结构域。在一些实施方案中，多肽的长度不长于800个氨基酸，例如长度不长于795、790、785、780、775、770、765、760、755、750、745、740、735、730、725、720、715、710或705个氨基酸。在一些实施方案中，逆转录酶结构域不包含YMDD基序(SEQ ID NO:97)并且RNA酶H结构域不包含AELL基序(SEQ ID NO:98)。在一些实施方案中，逆转录酶结构域中的YMDD基序(SEQ ID NO:97)突变为YMHD(SEQ ID NO:99)并且其中RNA酶H结构域中的AELL基序(SEQ ID NO:98)突变为AHLL(SEQ ID NO:100)。在一些实施方案中，多肽来自HBV基因型A、B、C或D。在一些实施方案中，(a)多肽来自HBV基因型A并且不包含SEQ ID NO:42或46、或与SEQ ID NO:42或46中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽；(b)多肽来自HBV基因型B并且不包含SEQ ID NO:43或47、或与SEQ ID NO:43或47中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽；(c)多肽来自HBV基因型C并且不包含SEQ ID NO:44或48、或与SEQ ID NO:44或48中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽；或(d)多肽来自HBV基因型D并且不包含SEQ ID NO:45或49、或与SEQ ID NO:45或49中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽。在一些实施方案中，HBV聚合酶缺失突变多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5-12中的任一项、或与SEQ ID NO:5-12中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，HBV聚合酶缺失突变多肽还包含HBV核心多肽(例如，是包含HBV核心多肽的融合蛋白)。在一些实施方案中，HBV聚合酶缺失突变多肽从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV聚合酶缺失突变多肽，如本文所述。在一些实施方案中，HBV聚合酶缺失突变多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:19-26中的任一项、或与SEQ ID NO:19-26中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在另一方面，提供了一种HBV核心-sAg融合蛋白。在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽。在各种实施方案中，核心多肽来自HBV基因型B或C，并且sAg多肽来自HBV基因型C。在一些实施方案中，核心多肽来自HBV基因型D并且sAg多肽来自HBV基因型D。在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白包含：(a)包含以下或由以下组成的核心多肽：SEQ ID NO:65、或与SEQ ID NO:65至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，和包含以下或由以下组成的sAg多肽：SEQ ID NO:3、或与SEQ ID NO:3至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；或(b)包含以下或由以下组成的核心多肽：SEQ ID NO:66、或与SEQ ID NO:66至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，和包含以下或由以下组成的sAg多肽：SEQ ID NO:4、或与SEQ ID NO:4至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在各种实施方案中，sAg多肽不包含前S1多肽。在各种实施方案中，sAg多肽不包含前S2多肽。在一些实施方案中，sAg多肽不包含HBV前S2多肽，该sAg多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:79-83中的任一项、或与SEQ ID NO:79-83中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，sAg多肽不包含HBV前S1多肽和HBV前S2多肽两者。在一些实施方案中，sAg多肽不包含HBV前S1-前S2多肽，该sAg多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:84-88中的任一项、或与SEQ ID NO:84-88中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在各种实施方案中，核心-sAg融合蛋白包含可操作地连接到HBV核心多肽和HBVsAg多肽并位于其间的可切割接头。在一些实施方案中，可切割接头是2A可切割肽。在一些实施方案中，可切割接头是选自口蹄疫病毒(F2A)、马鼻炎A病毒(E2A)、猪捷申病毒-1(P2A)和明脉扁刺蛾病毒(Thosea asigna virus)(T2A)的2A可切割肽。在一些实施方案中，可切割接头是猪捷申病毒-1(P2A)接头。在一些实施方案中，可切割接头包含以下或由以下组成：ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)、APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:57)、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:58)或EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQ ID NO:59)的氨基酸序列，或与ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)、APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ IDNO:57)、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:58)或EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQ ID NO:59)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，可切割接头包含以下或由以下组成：ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)的氨基酸序列，或与ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白包含可操作地连接到可切割接头的N-末端和HBV核心多肽的C-末端并位于其间的柔性接头和/或弗林蛋白酶识别/切割位点。在一些实施方案中，弗林蛋白酶识别/切割位点包含以下或由以下组成：选自RAKR(SEQ ID NO:60)、REKR(SEQ ID NO:61)和RRKR(SEQ IDNO:62)的氨基酸序列。在一些实施方案中，柔性接头包含聚甘氨酸或聚丙氨酸序列。在一些实施方案中，柔性接头包含以下或由以下组成：选自AA、AAA、AAY、GG、GGG、GGS、GSG和GGGS(SEQ ID NO:63)的聚甘氨酸或聚丙氨酸序列。在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，例如长度不长于445、440、435、430、425、420、415或410个氨基酸。在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项(例如SEQ ID NO:41)、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项(例如SEQ ID NO:41)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。在各种实施方案中，核心-sAg融合多肽不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：X、前核心、前S1和前S2。
关于免疫原性HBV多肽，在一些实施方案中，如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽、HBV聚合酶缺失突变多肽或核心-sAg融合蛋白还包含N-末端信号肽或前导序列。在各种实施方式中，信号肽或前导序列来自选自血清蛋白、细胞因子、趋化因子、伴侣蛋白、不变蛋白和将蛋白引导至溶酶体区室的蛋白的源蛋白。在各种实施方案中，信号肽或前导序列来自选自以下的源蛋白：集落刺激因子2(CSF2、GM-CSF)、组织型纤溶酶原活化剂(PLAT、t-PA)、C-C基序趋化因子配体7(CCL7、MCP-3)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10、IP-10)、连环蛋白β1(CTNNB1)、CD74(p33；DHLAG；HLADG；Ia-GAMMA、不变链)、血清白蛋白(ALB)、聚泛素B/C(UBB/UBC)、钙网蛋白(CALR)、水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP-1)和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)。在一些实施方案中，信号肽或前导序列选自SEQ ID NO:67-78中的任一项、或与SEQ ID NO:67-78中的任一项至少95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在各种实施方案中，如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽、HBV聚合酶缺失突变多肽和/或核心-sAg融合蛋白可重组产生或化学合成。在各种实施方案中，如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽、HBV聚合酶缺失突变多肽和/或核心-sAg融合蛋白能够在人体中诱导、促进或刺激免疫应答(例如，CD8+和/或CD4+T细胞的扩增和/或活化；产生结合和/或中和HBV聚合酶、HBV核心和HBV sAg中的一者或多者的抗体)。在各种实施方案中，如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽、HBV聚合酶缺失突变多肽和/或核心-sAg融合蛋白能够在人体中诱导、促进或刺激针对HBV的免疫应答(例如，其预防HBV感染、延缓HBV感染的进展、抑制和/或逆转HBV感染)。在各种实施方案中，如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽、HBV聚合酶缺失突变多肽和/或核心-sAg融合蛋白能够诱导、促进或刺激选自单核细胞来源的树突状细胞(DC)、CD8+T细胞和CD4+T细胞的一种或多种细胞类型的增殖和/或活化。
在另一方面，提供了编码如本文所述的免疫原性HBV多肽的多核苷酸。例如，提供了编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽、HBV聚合酶缺失突变多肽或核心-sAg融合蛋白中的一者或多者的多核苷酸。在一些实施方案中，多核苷酸包括cDNA、mRNA、自扩增RNA(SAM)、自复制RNA或自扩增复制子RNA(RepRNA)。在一些实施方案中，多核苷酸包括自复制或自扩增的甲病毒复制子。在一些实施方案中，多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:27-37(例如，SEQ ID NO:37)和89-94中的任一项(例如，SEQ ID NO:29、89、90或92)或与SEQ ID NO:27-37(例如，SEQ ID NO:37)和89-94中的任一项(例如，SEQ ID NO:29、89、90或92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
在另一方面，提供了一种包含编码如本文所述的免疫原性HBV多肽的多核苷酸中的一者或多者的脂质纳米颗粒(LNP)。
在另一方面，提供了包含编码如本文所述的免疫原性HBV多肽的多核苷酸中的一者或多者的表达盒，这些多核苷酸可操作地连接到一个或多个调控序列。在一些实施方案中，多核苷酸可操作地连接到组成型启动子并在其控制下。在一些实施方案中，启动子选自巨细胞病毒主要立即早期启动子(CMV)、与鸡β-肌动蛋白启动子(CAG)融合的CMV增强子、人延伸因子-1α(HEF-1α)、小鼠巨细胞病毒(小鼠CMV)、中国仓鼠延伸因子-1α(CHEF-1α)和磷酸甘油酸激酶(PGK)。
在另一方面，提供了包含编码如本文所述的免疫原性HBV多肽的多核苷酸中的一者或多者，或包含此类多核苷酸的一种或多种表达盒。在各种实施方案中，载体是质粒载体、细菌载体或病毒载体。在一些实施方案中，载体是病毒载体。在各种实施方案中，病毒载体是DNA病毒或RNA病毒。在一些实施方案中，病毒载体来自选自腺病毒、腺相关病毒、沙粒病毒、甲病毒、痘病毒、巨细胞病毒、弹状病毒、水泡性口炎病毒、黄病毒、马拉巴病毒和痘苗病毒的病毒。在一些实施方案中，病毒载体来自选自腺病毒科、沙粒病毒科、疱疹病毒科(例如巨细胞病毒)、痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))、黄病毒科(例如黄热病毒)、弹状病毒科(例如水泡性病毒，例如马拉巴水泡性病毒)、披膜病毒科(例如甲病毒)的分类学家族的病毒。在一些实施方案中，病毒载体是选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))、瓜纳瑞托病毒(Guanarito virus)(GTOV)、胡宁病毒(Junin virus)(JUNV)、拉沙病毒(Lassa virus)(LASV)、卢约病毒(Lujo virus)(LUJV)、马丘波病毒(Machupo virus)(MACV)、萨比亚病毒(Sabia virus)(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(Whitewater Arroyo virus)(WWAV)的沙粒病毒载体。在一些实施方案中，病毒载体是选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))的沙粒病毒载体。在一些实施方案中，病毒载体是人腺病毒或猿猴腺病毒(例如，黑猩猩腺病毒、大猩猩腺病毒或恒河猴腺病毒)。在一些实施方案中，病毒载体是选自以下的腺病毒载体：腺病毒血清型5(Ad5)、腺病毒血清型26(Ad26)、腺病毒血清型34(Ad34)、腺病毒血清型35(Ad35)、腺病毒血清型48(Ad48)、黑猩猩腺病毒(例如ChAdOx1、ChAdOx2、ChAd3(AdC3)、ChAd5(AdC5)、ChAd6(AdC6)、ChAd7(AdC7)、ChAd8(AdC8)、ChAd9(AdC9)、ChAd10(AdC10)、ChAd11(AdC11)、ChAd17(AdC17)、ChAd16(AdC16)、ChAd19(AdC19)、ChAd20(AdC20)、ChAd22(AdC22)、ChAd24(AdC24)、ChAdY25、ChAd26(AdC26)、ChAd28(AdC28)、ChAd30(AdC30)、ChAd31(AdC31)、ChAd37(AdC37)、ChAd38(AdC38)、ChAd43(AdC43)、ChAd44(AdC44)、ChAd55(AdC55)、ChAd63(AdC63)、ChAdV63、ChAd68(AdC68)、ChAd73(AdC73)、ChAd82(AdC82)、ChAd83(AdC83)、ChAd143(AdC143)、ChAd144(AdC144)、ChAd145(AdC145)、ChAd147(AdC147))、大猩猩腺病毒(例如GC44、GC45、GC46)和恒河猴腺病毒(例如RhAd51、RhAd52、RhAd53、RhAd54、RhAd55、RhAd56、RhAd57、RhAd58、RhAd59、RhAd60、RhAd61、RhAd62、RhAd63、RhAd64、RhAd65、RhAd66)。在一些实施方案中，病毒载体是复制缺陷性、复制缺陷型、复制减毒型或有复制能力的。在一些实施方案中，病毒载体是具有二分段基因组的复制缺陷性沙粒病毒。在一些实施方案中，病毒载体是具有三分段基因组的复制减毒型沙粒病毒。
在另一方面，提供了沙粒病毒载体。在一个实施方案中，提供了一种沙粒病毒载体，该沙粒病毒载体包含编码HBV核心-sAg融合多肽的多核苷酸，该HBV核心-sAg融合多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项(例如SEQ ID NO:41)、或与SEQ IDNO:38-41中的任一项(例如SEQ ID NO:41)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，并且其中该sAg多肽不包含HBV前S1多肽和/或HBV前S2多肽。在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。在一些实施方案中，多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。在一些实施方案中，沙粒病毒载体具有二分段基因组并且还包含编码截短的HBV聚合酶的多核苷酸，该截短的HBV聚合酶包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，并且其中该截短的HBV聚合酶不包含所有的HBV聚合酶末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的HBV聚合酶间隔区结构域。在一些实施方案中，该截短的HBV聚合酶不包含SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51、或与SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29和89-94中的任一项(例如，SEQ ID NO:29、89、90或92)或与SEQ ID NO:29和89-94中的任一项(例如，SEQ ID NO:29、89、90或92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。在一些实施方案中，沙粒病毒载体是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)载体并且该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。在一些实施方案中，沙粒病毒载体是卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))并且该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
还提供了一种沙粒病毒载体，该沙粒病毒载体包含编码截短的HBV聚合酶的多核苷酸，该截短的HBV聚合酶包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，并且其中该截短的HBV聚合酶不包含所有的HBV聚合酶末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的HBV聚合酶间隔区结构域。在一些实施方案中，该截短的HBV聚合酶不包含SEQ IDNO:50或SEQ ID NO:51、或与SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29和89-94中的任一项(例如，SEQ ID NO:29、89、90或92)或与SEQ ID NO:29和89-94中的任一项(例如，SEQ ID NO:29、89、90或92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。在一些实施方案中，沙粒病毒载体是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)载体并且该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。在一些实施方案中，沙粒病毒载体是卡利(Cali)哺乳动物沙粒病毒载体并且该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。在一些实施方案中，沙粒病毒载体是复制缺陷性、复制缺陷型或无复制能力的。
在另一方面，提供了宿主细胞，其包含编码如本文所述的一种或多种免疫原性HBV多肽的一种或多种多核苷酸，或包含此类多核苷酸的一种或多种载体。在一些实施方案中，编码如本文所述的一种或多种免疫原性HBV多肽的一种或多种多核苷酸不整合到宿主细胞基因组中，例如是游离的。在一些实施方案中，一种或多种多核苷酸被整合到宿主细胞基因组中。在一些实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞，例如人细胞。在各种实施方案中，宿主细胞可以是体外或体内的。
另一方面，提供了包含如本文所述的免疫原性HBV多肽中的一者或多者的免疫原性组合物。在一些实施方案中，免疫原性组合物包含如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)、HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)和/或核心-sAg融合蛋白中的一种或多种(例如两种或更多种)。在一些实施方案中，免疫原性组合物包含编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)、HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)和/或核心-sAg融合蛋白中的一种或多种(例如两种或更多种)的一种或多种(例如两种或更多种)多核苷酸。在一些实施方案中，免疫原性组合物包含一种或多种(例如两种或更多种)载体，其包含编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)、HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)和/或核心-sAg融合蛋白中的一种或多种(例如两种或更多种)的一种或多种(例如两种或更多种)多核苷酸。免疫原性组合物还包含药学上可接受的载体。在一些实施方案中，免疫原性组合物包含DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA形式的一种或多种多核苷酸。在各种实施方案中，免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽或HBV聚合酶缺失突变多肽的多核苷酸；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码核心-sAg融合蛋白的多核苷酸。在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90或92)或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90或92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29或90、或与SEQ ID NO:29或90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在各种实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体独立地来自选自腺病毒科、沙粒病毒科、疱疹病毒科(例如巨细胞病毒)、痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))、黄病毒科(例如黄热病毒)、弹状病毒科(例如水泡性病毒，例如马拉巴水泡性病毒)、披膜病毒科(例如甲病毒)的分类学家族。在各种实施方案中，免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体可来自相同的分类学家族或不同的分类学家族。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体来自沙粒病毒科。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体独立地来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。在一些实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体独立地来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))的沙粒病毒载体。在一些实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制缺陷性或复制缺陷型的。在一些实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制减毒型的。在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在各种实施方案中，在免疫原性组合物中以1:10至10:1，例如1:9至9:1、1:8至8:1、1:7至7:1、1:6至6:1、1:5至5:1、1:4至4:1、1:3至3:1、1:2至2:1或1:1的比率提供第一病毒表达载体和第二病毒表达载体。在一些实施方案中，免疫原性组合物包含每毫升在约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)范围内(例如每毫升约104至约107个病毒FFU或PFU或IU或vp，例如每毫升约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp)的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体中的每一种。在一些实施方案中，免疫原性组合物还包含助剂、洗涤剂、胶束形成剂和油中的一种或多种。在各种实施方案中，免疫原性组合物被配制用于经由选自静脉内、肌内、皮内、皮下和粘膜(例如，颊、鼻内、直肠内、阴道内)的途径施用。在一些实施方案中，免疫原性组合物是水溶液或悬浮液，例如被配制成液体。在一些实施方案中，免疫原性组合物是冻干的。
在另一方面，提供了试剂盒。在各种实施方案中，试剂盒包括一个或多个(例如两个或多个)整体剂量的如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)、HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)和/或核心-sAg融合蛋白中的一种或多种(例如两种或更多种)。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个(例如两个或多个)整体剂量的编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)、HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)和/或核心-sAg融合蛋白中的一种或多种(例如两种或更多种)的一种或多种(例如两种或更多种)多核苷酸。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个(例如两个或多个)整体剂量的一种或多种(例如两种或更多种)载体，其编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)、HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种(例如两种或更多种)和/或核心-sAg融合蛋白中的一种或多种(例如两种或更多种)的包含一种或多种(例如两种或更多种)多核苷酸。在各种实施方案中，试剂盒包括一个或多个(例如两个或多个)整体剂量的如本文所述的一种或多种(例如两种或更多种)免疫原性组合物。在一些实施方案中，试剂盒中的一个或多个整体剂量在单个容器中。在一些实施方案中，试剂盒中的一个或多个整体剂量在两个或更多个单独的容器中。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个选自小瓶、安瓿和预载注射器的容器。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个容器，该容器容纳水溶液或悬浮液中或作为冻干制剂的一种或多种多肽、一种或多种多核苷酸、一种或多种载体或一种或多种免疫原性组合物。在各种实施方案中，一个或多个整体剂量可以相同或不同。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的如本文所述的一种或多种病毒载体，其中该整体剂量在约103至约1012病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)范围内，例如约104至约107个病毒FFU或PFU或IU或vp，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp。在一些实施方案中，试剂盒包括编码至少两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸，或表达至少两种免疫原性多肽的一种或多种载体，或包含至少两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，试剂盒包括编码至少两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸，或表达至少两种免疫原性多肽的一种或多种载体，或包含至少两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，试剂盒包括编码至少两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸，或表达至少两种免疫原性多肽的一种或多种载体，或包含至少两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。在一些实施方案中，试剂盒包括分别编码第一免疫原性多肽和第二免疫原性多肽的第一载体和第二载体，该第一免疫原性多肽和该第二免疫原性多肽分别包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，试剂盒包括第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90或92)或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90或92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在一些实施方案中，试剂盒包括第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29或90、或与SEQ ID NO:29或90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含如本文所述的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体包含复制缺陷型或复制缺陷性卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含如本文所述的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体包含复制缺陷型或复制缺陷性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)。在一些实施方案中，试剂盒包括(a)一个或多个整体剂量的如本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自腺病毒科；和(b)一个或多个整体剂量的如本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))。在一些实施方案中，试剂盒包括(a)一个或多个整体剂量的如本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自沙粒病毒科；和(b)一个或多个整体剂量的如本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自腺病毒科。在一些实施方案中，试剂盒包括第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在一些实施方案中，试剂盒包括第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ IDNO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在各种实施方案中，试剂盒还包括一个或多个整体剂量的一种或多种附加治疗剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种Toll样受体(TLR)的一种或多种激动剂或活化剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂的一种或多种TLR激动剂或活化剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自GS 9620(威沙立德(vesatolimod))、R848(瑞喹莫德(Resiquimod))、DS-0509、LHC-165和TMX-101(咪喹莫特(imiquimod))的TLR7激动剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自GS-9688、R848(瑞喹莫德)和NKTR-262(双TLR7/TLR8激动剂)的TLR8激动剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自IL-2、IL-7、IL-12和IL-15的白介素受体的一种或多种白介素受体激动剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自IL-2、IL-7、IL-12、IL-15以及它们的变体的一种或多种细胞因子。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种先天免疫活化剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种先天免疫活化剂，其包括选自以下的受体的激动剂：fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)、干扰素基因刺激剂(STING)受体、DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名RIG-I)、含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2)。在一些实施方案中，试剂盒还包括一个或多个整体剂量的GS-3583和/或GS-9992。在一些实施方案中，试剂盒还包括抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种拮抗剂或抑制剂和/或刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种活化剂或激动剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的一种或多种免疫检查点蛋白或受体：CD27、CD70；CD40、CD40LG；CD47、CD48(SLAMF2)、含跨膜和免疫球蛋白结构域的2(TMIGD2、CD28H)、CD84(LY9B、SLAMF5)、CD96、CD160、MS4A1(CD20)、CD244(SLAMF4)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；自然杀伤细胞细胞毒性受体3配体1(NCR3LG1、B7H6)；HERV-H LTR相关2(HHLA2、B7H7)；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF8(CD30)、TNFSF8(CD30L)；TNFRSF10A(CD261、DR4、TRAILR1)、TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF10B(CD262、DR5、TRAILR2)、TNFRSF10(TRAIL)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；TNFRSF17(BCMA、CD269)、TNFSF13B(BAFF)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；MHC I类多肽相关序列A(MICA)；MHC I类多肽相关序列B(MICB)；CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域4(TIMD4；TIM4)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；信号转导淋巴细胞活化分子家族成员1(SLAMF1、SLAM、CD150)；淋巴细胞抗原9(LY9、CD229、SLAMF3)；SLAM家族成员6(SLAMF6、CD352)；SLAM家族成员7(SLAMF7、CD319)；UL16结合蛋白1(ULBP1)；UL16结合蛋白2(ULBP2)；UL16结合蛋白3(ULBP3)；视黄酸早期转录物1E(RAET1E；ULBP4)；视黄酸早期转录物1G(RAET1G；ULBP5)；视黄酸早期转录物1L(RAET1L；ULBP6)；淋巴细胞活化3(CD223)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；杀伤细胞凝集素样受体C2(KLRC2、CD159c、NKG2C)；杀伤细胞凝集素样受体C3(KLRC3、NKG2E)；杀伤细胞凝集素样受体C4(KLRC4、NKG2F)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体：CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1配体2(PDCD1LG2、PD-L2、CD273)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；以及杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体：CD27、CD70；CD40、CD40LG；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)。在一些实施方案中，试剂盒还包括一个或多个整体剂量的AGEN-2373和/或AGEN-1223。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体：杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；和杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1、CD94)。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体：CD16、CD226(DNAM-1)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。在一些实施方案中，试剂盒还包括PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)和/或CTLA4的一种或多种蛋白质抑制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的CTLA4的一种或多种蛋白质抑制剂：伊匹单抗(ipilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、BMS-986218、AGEN1181、AGEN1884、BMS-986249、MK-1308、REGN-4659、ADU-1604、CS-1002、BCD-145、APL-509、JS-007、BA-3071、ONC-392、AGEN-2041、JHL-1155、KN-044、CG-0161、ATOR-1144、PBI-5D3H5、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)和AK-104(CTLA4/PD-1)。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的PD-L1(CD274)或PD-1(PDCD1)的一种或多种蛋白质抑制剂：赛帕利单抗(zimberelimab)(AB122)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米单抗(cemiplimab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、AMP-224、MEDI0680(AMP-514)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、ASC22、度伐利尤单抗(durvalumab)、BMS-936559、CK-301、PF-06801591、BGB-A317(替雷利珠单抗(tislelizumab))、GLS-010(WBP-3055)、AK-103(HX-008)、AK-105、CS-1003、HLX-10、MGA-012、BI-754091、AGEN-2034、JS-001(特瑞普利单抗(toripalimab))、JNJ-63723283、杰诺单抗(genolimzumab)(CBT-501)、LZM-009、BCD-100、LY-3300054、SHR-1201、SHR-1210(卡瑞利珠单抗(camrelizumab))、Sym-021、ABBV-181、PD1-PIK、BAT-1306(MSB0010718C)、CX-072、CBT-502、TSR-042(多塔利单抗(dostarlimab))、MSB-2311、JTX-4014、BGB-A333、SHR-1316、CS-1001(WBP-3155、KN-035、IBI-308(信迪利单抗(sintilimab))、HLX-20、KL-A167、STI-A1014、STI-A1015(IMC-001)、BCD-135、FAZ-053、TQB-2450、MDX1105-01、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-013(PD-1/LAG-3)、FS-118(LAG-3/PD-L1)MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、RO-7121661(PD-1/TIM-3)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)、AK-104(CTLA4/PD-1)、M7824(PD-L1/TGFβ-EC结构域)、CA-170(PD-L1/VISTA)、CDX-527(CD27/PD-L1)、LY-3415244(TIM3/PDL1)和INBRX-105(4-1BB/PDL1)。在一些实施方案中，试剂盒还包括CD274(PDL1、PD-L1)、程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)和/或CTLA4的一种或多种小分子抑制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自GS-4224、GS-4416、INCB086550和MAX10181的CD274或PDCD1的一种或多种小分子抑制剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括CTLA4的小分子抑制剂BPI-002。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种抗病毒剂。在一些实施方案中，试剂盒还包括选自以下的一种或多种抗病毒剂：拉米夫定(LAM)、阿德福韦双特戊酯(adefovir dipivoxil)(ADV)、恩替卡韦(entecavir)(ETV)、替比夫定(telbivudine)(LdT)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate)(TDF)、替诺福韦艾拉酚胺(tenofovir alafenamide)(TAF或)和雷迪帕韦(ledipasvir)+索非布韦(sofosbuvir)/>在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种选自以下的治疗剂：HBV抗原抑制剂(例如，HBV核心抗原(HBcAg)抑制剂、HBV表面抗原(HBsAg)抑制剂、HBx抑制剂、HBV E抗原抑制剂)、抗HBV抗原抗体、靶向HBV的抑制性核酸(例如，反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、DNA引导的RNA干扰(ddRNAi))、靶向HBV的基因编辑物(例如，CRISPR-Cas(例如Cas9、Cas12、Cascade、Cas13)、锌指核酸酶、归巢内切核酸酶、归巢大范围核酸酶(例如，ARCUS)、合成核酸酶、TALEN)、共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂和HBsAg分泌或组装抑制剂和HBV病毒进入抑制剂。
在另一方面，提供了在对其有需要的受试者中引发针对人乙型肝炎病毒(HBV)的免疫应答的方法。还提供了在对其有需要的受试者中治疗或预防人乙型肝炎病毒(HBV)的方法。在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用治疗有效量的如本文所述的一种或多种免疫原性组合物。在一些实施方案中，该方法需要施用一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽或HBV聚合酶缺失突变多肽的多核苷酸；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码如本文所述的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸。在一些实施方案中，该方法需要向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，该方法需要向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，该方法需要向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。在一些实施方案中，该方法需要向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90或92)或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90或92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29或90、或与SEQ ID NO:29或90至少为80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在这些方法的一些实施方案中，该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自沙粒病毒科。在这些方法的一些实施方案中，该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。在这些方法的一些实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))的沙粒病毒载体。在这些方法的一些实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制缺陷性或复制缺陷型的。在这些方法的一些实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制减毒型的。在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:29、或与SEQ ID NO:29至少为80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在一些实施方案中，该方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种免疫原性组合物，该一种或多种免疫原性组合物包含含有第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少为80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。在这些方法的一些实施方案中，受试者感染了HBV病毒，疑似感染了HBV病毒，或有感染HBV病毒的风险。在这些方法的一些实施方案中，受试者是无症状的。在这些方法的一些实施方案中，受试者慢性感染了HBV。在这些方法的一些实施方案中，受试者表现出或经历选自肝衰竭、肝癌、肝纤维化和肝硬化的一种或多种症状。在这些方法的一些实施方案中，受试者急性感染了HBV。在这些方法的一些实施方案中，受试者表现出或经历选自黄疸、皮肤上可见的肿胀血管网、深色(例如，橙色或棕色)尿液、浅色粪便、发热、持久疲劳、不适、腹痛、腹液、食欲不振、恶心和呕吐的一种或多种症状。在这些方法的一些实施方案中，受试者共感染了丁型肝炎病毒(HDV)。在这些方法的一些实施方案中，该组合物经由选自静脉内、肌内、皮内、皮下和粘膜(例如，颊、鼻内、直肠内、阴道内)的途径施用。在一些实施方案中，该方法需要向受试者施用约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)，例如每次施用约104至约107个病毒FFU或PFU或IU或vp，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp。在这些方法的一些实施方案中，该一种或多种组合物被多次施用。在一些实施方案中，该方法需要每隔一周(Q2W)或每月(Q4W)静脉内或肌内施用约106至约108个病毒FFU或PFU或IU或vp/施用。在一些实施方案中，该方法需要在至少约2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月或更长的时间段内或直到在受试者的血清或血浆中不能够检测到sAg，多次施用该一种或多种免疫原性组合物。在一些实施方案中，该方法包括初免-加强方案，其包括在第一时间点施用初免组合物并在一个或多个后续时间点施用一种或多种加强组合物。视情况而定，该方法可能需要重复初免-加强方案一次或多次迭代。在这些方法的一些实施方案中，初免组合物和一种或多种加强组合物的施用间隔至少1周且至多至少2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月。在这些方法的一些实施方案中，初免组合物和加强组合物可包含相同的免疫原性组合物或可包含不同的免疫原性组合物。在这些方法的一些实施方案中，初免组合物和加强组合物包含相同的一种或多种多肽和相同的病毒表达载体。在这些方法的一些实施方案中，初免组合物和加强组合物包含不同的多肽和/或不同的病毒表达载体。在一些实施方案中，该方法需要用包含一种或多种(例如，第一和第二)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种(例如，第三和第四)病毒表达载体的加强组合物加强。在各种实施方案中，初免-加强方案包括：(a)用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种多核苷酸的加强组合物加强，其中该一种或多种多核苷酸包含DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA；(b)用包含一种或多种多核苷酸的初免组合物初免，其中该一种或多种多核苷酸包含DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强；(c)用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强，其中该初免组合物中的一种或多种病毒表达载体和该加强组合物中的一种或多种病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；(d)用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的加强组合物加强，其中该初免组合物中的一种或多种复制缺陷型病毒表达载体和该加强组合物中的一种或多种复制缺陷型病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；(e)用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的加强组合物加强，其中该初免组合物中的一种或多种复制减毒型病毒表达载体和该加强组合物中的一种或多种复制减毒型病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；(f)用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的加强组合物加强；(g)用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的加强组合物加强；(h)用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强；(i)用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；(j)用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；(k)用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强；(l)用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的加强组合物加强；(m)用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；(n)用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；(o)用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的加强组合物加强；(p)用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的加强组合物加强；或(q)用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的加强组合物加强。在一些实施方案中，该方法需要一种初免-加强方案，其包括：(a)用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强；(b)用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；(c)用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；或(d)用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强。在一些实施方案中，初免组合物和加强组合物包含如本文所述的免疫原性组合物。在一些实施方案中，受试者未接受抗病毒疗法或在施用该一种或多种免疫原性组合物之前中止抗病毒疗法。在这些方法的一些实施方案中，在一次或多次施用该一种或多种免疫原性组合物之后中止抗病毒疗法。在一些实施方案中，该方法还包括向受试者施用一种或多种附加治疗剂，例如两种、三种、四种或更多种附加治疗剂。在一些实施方案中，该方法包括共同施用一种或多种Toll样受体(TLR)的一种或多种激动剂或活化剂。在一些实施方案中，该方法包括共同施用选自TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂的一种或多种TLR激动剂或活化剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自GS-9620(威沙立德)、R848(瑞喹莫德)、DS-0509、LHC-165和TMX-101(咪喹莫特)的TLR7激动剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自GS-9688、R848(瑞喹莫德)和NKTR-262(双TLR7/TLR8激动剂)的TLR8激动剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自IL-2、IL-7、IL-12和IL-15的白介素受体的一种或多种白介素受体激动剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自IL-2、IL-7、IL-12、IL-15以及它们的变体的一种或多种细胞因子。在一些实施方案中，该方法需要共同施用一种或多种先天免疫活化剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用一种或多种先天免疫活化剂，其包括选自以下的受体的激动剂：fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)、干扰素基因刺激剂(STING)受体、DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名RIG-I)、含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用GS-3583和/或GS-9992。在一些实施方案中，该方法需要共同施用抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种拮抗剂或抑制剂和/或刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种活化剂或激动剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自以下的一种或多种免疫检查点蛋白或受体：CD27、CD70；CD40、CD40LG；CD47、CD48(SLAMF2)、含跨膜和免疫球蛋白结构域的2(TMIGD2、CD28H)、CD84(LY9B、SLAMF5)、CD96、CD160、MS4A1(CD20)、CD244(SLAMF4)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；自然杀伤细胞细胞毒性受体3配体1(NCR3LG1、B7H6)；HERV-H LTR相关2(HHLA2、B7H7)；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF8(CD30)、TNFSF8(CD30L)；TNFRSF10A(CD261、DR4、TRAILR1)、TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF10B(CD262、DR5、TRAILR2)、TNFRSF10(TRAIL)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；TNFRSF17(BCMA、CD269)、TNFSF13B(BAFF)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；MHC I类多肽相关序列A(MICA)；MHC I类多肽相关序列B(MICB)；CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域4(TIMD4；TIM4)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；信号转导淋巴细胞活化分子家族成员1(SLAMF1、SLAM、CD150)；淋巴细胞抗原9(LY9、CD229、SLAMF3)；SLAM家族成员6(SLAMF6、CD352)；SLAM家族成员7(SLAMF7、CD319)；UL16结合蛋白1(ULBP1)；UL16结合蛋白2(ULBP2)；UL16结合蛋白3(ULBP3)；视黄酸早期转录物1E(RAET1E；ULBP4)；视黄酸早期转录物1G(RAET1G；ULBP5)；视黄酸早期转录物1L(RAET1L；ULBP6)；淋巴细胞活化3(CD223)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；杀伤细胞凝集素样受体C2(KLRC2、CD159c、NKG2C)；杀伤细胞凝集素样受体C3(KLRC3、NKG2E)；杀伤细胞凝集素样受体C4(KLRC4、NKG2F)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自以下的一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体：CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1配体2(PDCD1LG2、PD-L2、CD273)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；以及杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自以下的一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体：CD27、CD70；CD40、CD40LG；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用AGEN-2373和/或AGEN-1223。在一些实施方案中，该方法需要共同施用一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自以下的一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体：杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；和杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1、CD94)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自以下的一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体：CD16、CD226(DNAM-1)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)或CTLA4的一种或多种蛋白质抑制剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自以下的CTLA4的一种或多种蛋白质抑制剂：伊匹单抗(ipilimumab)、曲美木单抗(tremelimumab)、BMS-986218、AGEN1181、AGEN1884、BMS-986249、MK-1308、REGN-4659、ADU-1604、CS-1002、BCD-145、APL-509、JS-007、BA-3071、ONC-392、AGEN-2041、JHL-1155、KN-044、CG-0161、ATOR-1144、PBI-5D3H5、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)和AK-104(CTLA4/PD-1)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自以下的PD-L1(CD274)或PD-1(PDCD1)的一种或多种蛋白质抑制剂：赛帕利单抗(zimberelimab)(AB122)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米单抗(cemiplimab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、AMP-224、MEDI0680(AMP-514)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、ASC22、度伐利尤单抗(durvalumab)、BMS-936559、CK-301、PF-06801591、BGB-A317(替雷利珠单抗(tislelizumab))、GLS-010(WBP-3055)、AK-103(HX-008)、AK-105、CS-1003、HLX-10、MGA-012、BI-754091、AGEN-2034、JS-001(特瑞普利单抗(toripalimab))、JNJ-63723283、杰诺单抗(genolimzumab)(CBT-501)、LZM-009、BCD-100、LY-3300054、SHR-1201、SHR-1210(卡瑞利珠单抗(camrelizumab))、Sym-021、ABBV-181、PD1-PIK、BAT-1306(MSB0010718C)、CX-072、CBT-502、TSR-042(多塔利单抗(dostarlimab))、MSB-2311、JTX-4014、BGB-A333、SHR-1316、CS-1001(WBP-3155、KN-035、IBI-308(信迪利单抗(sintilimab))、HLX-20、KL-A167、STI-A1014、STI-A1015(IMC-001)、BCD-135、FAZ-053、TQB-2450、MDX1105-01、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-013(PD-1/LAG-3)、FS-118(LAG-3/PD-L1)MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、RO-7121661(PD-1/TIM-3)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)、AK-104(CTLA4/PD-1)、M7824(PD-L1/TGFβ-EC结构域)、CA-170(PD-L1/VISTA)、CDX-527(CD27/PD-L1)、LY-3415244(TIM3/PDL1)和INBRX-105(4-1BB/PDL1)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用CD274(PDL1、PD-L1)、程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)或CTLA4的一种或多种小分子抑制剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用选自GS-4224、GS-4416、INCB086550和MAX10181的CD274或PDCD1的一种或多种小分子抑制剂。在一些实施方案中，该方法需要共同施用BPI-002(CTLA4的小分子抑制剂)。在一些实施方案中，该方法包括向受试者共同施用一种或多种抗病毒剂。在一些实施方案中，该方法包括共同施用选自以下的一种或多种抗病毒剂：拉米夫定(LAM)、阿德福韦双特戊酯(ADV)、恩替卡韦(ETV)、替比夫定(LdT)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)、替诺福韦艾拉酚胺(TAF或)和雷迪帕韦+索非布韦/>在一些实施方案中，该方法包括向受试者共同施用一种或多种选自以下的治疗剂：HBV抗原抑制剂(例如，HBV核心抗原(HBcAg)抑制剂、HBV表面抗原(HBsAg)抑制剂、HBx抑制剂、HBV E抗原抑制剂)、抗HBV抗原抗体、靶向HBV的抑制性核酸(例如，反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、DNA引导的RNA干扰(ddRNAi))、靶向HBV的基因编辑物(例如，CRISPR-Cas(例如Cas9、Cas12、Cascade、Cas13)、锌指核酸酶、归巢内切核酸酶、归巢大范围核酸酶(例如，ARCUS)、合成核酸酶、TALEN)、共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂和HBsAg分泌或组装抑制剂和HBV病毒进入抑制剂。在一些实施方案中，该方法在受试者中活化靶向一个或多个HBV多肽表位的CD8+T细胞和/或CD4+T细胞。在一些实施方案中，该方法在受试者中引发结合一种或多种HBV多肽的抗体的产生。
附图说明
图1示出了来自基因型(GT)A、B、C和D的表达HBsAg的腺病毒载体在DO小鼠中的免疫原性。给五至七周龄的多样性远系繁殖(DO)小鼠(每组n＝8)肌内注射1×108个腺病毒病毒颗粒(vp)，该腺病毒编码HBV基因型(GT)-A、B、C、D的HBsAg共有序列(分别为SEQ ID NO:1-4)。在注射后第14天，收获脾细胞，并通过干扰素(IFN)-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)评价T细胞应答。每个符号对应于单个小鼠，评估其对对应于GT-A、B、C和D HBsAg的重叠肽池的应答。
图2示出了每种含Pol的抗原设计的示意图。单独地指示每个Pol结构域(TP，末端蛋白；RT，逆转录酶；RNH，RNA酶H)。在RT和RNH结构域下方指示RT中YMDD基序(SEQ ID NO:97)中D至H突变的大致位置和RNH中AELL基序(SEQ ID NO:98)中E至H突变的大致位置。左侧示出了每个构建体的名称，并且右侧示出了GT-A、B、C和D构建体的氨基酸大小范围。“YMHD”和“AHLL”分别公开为SEQ ID NO:99和100。
图3示出了表达核心-Pol融合蛋白的腺病毒载体在C57BL/6小鼠中的免疫原性。给六至八周龄C57BL/6小鼠(每组n＝5)注射1×108个腺病毒病毒颗粒(vp)，该腺病毒编码SEQID NO:15-26的核心-Pol融合变体。每种抗原的基因型显示在每个图上方，而抗原名称显示在水平轴上(Mut：核心-Polmut,Δ1：核心-PolΔ1，Δ3：核心-PolΔ3)。在注射后第14天，收获脾细胞，并使用对应于GT-D核心和Pol的重叠肽池，通过IFN-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)评价T细胞应答。条形图示出了每个组的堆叠的几何平均应答。SFU：点形成单位。
图4A-图4B示出了表达核心-pol融合蛋白的腺病毒载体在DO小鼠中的免疫原性。给五至七周龄的DO小鼠(每组n＝8)肌内注射1×108个腺病毒病毒颗粒(vp)，该腺病毒编码GT-A核心-PolΔ3、或GT-B、C或D核心-PolΔ1。在注射后第14天，收获脾细胞，并通过对对应于GT-A和D核心和Pol的重叠肽池的IFN-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)应答来评价T细胞应答。用Wilcoxon符号秩检验评估接受相同疫苗的小鼠中对不同基因型的肽的应答之间的统计学比较。用Mann-Whitney检验评估接受不同疫苗的小鼠之间的统计学比较。(A)对Pol肽的应答。(B)对核心肽的应答。SFU：点形成单位。
图5示出了表达Pol的腺病毒载体的免疫原性。给六至八周龄的C57BL/6小鼠(每组n＝5)注射1×108个腺病毒病毒颗粒(vp)，该腺病毒表达SEQ ID NO:8.12、13、14、或全长未修饰的GT-D Pol序列(GT-DPolCtrl)的Pol抗原变体。在注射后第14天，收获脾细胞，并使用对应于GT-D pol的重叠肽池，通过IFN-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)评价T细胞应答。SFU：点形成单位。
图6示出了评估表达HBV的Ad5和痘苗载体在CHB(AAV-HBV)的AAV小鼠模型中的功效的研究设计。在第-35天用1012个AAV-HBV基因组拷贝转导六至八周龄的C57BL/6小鼠。在第-7天，基于血清HBsAg水平将小鼠随机分配到治疗组。在第0天肌内施用50μl表达HBV抗原的5型腺病毒初免疫苗，并且在第32天肌内施用50μl表达相同HBV抗原的痘苗加强疫苗。从第46-67天，给予小鼠抗PD-1(抗CD279)单克隆抗体RMP1-14或同种型对照mAb。在第-7、14、27、46、60、67和88天收集血液样品用于病毒抗原测试。在第88天收获脾细胞，并评估IFN-γELISPOT。
图7示出了在AAV-HBV小鼠中Ad5初免-痘苗加强疫苗接种的免疫原性。在图6所示的研究中，在第88天收获脾细胞。使用对应于GT-D sAg和Pol的重叠肽池，通过IFN-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)评价对HBsAg和Pol的T细胞应答。虚线指示在接受对照疫苗的小鼠中观察到的HBsAg ELISPOT中的最高信号。mAb：所施用的单克隆抗体。Iso：同种型对照。αPD-1：抗PD-1。Vax：指示疫苗是含有HBV抗原还是对照(Ctrl)抗原。SFU：点形成单位。
图8示出了表达HBV的Ad5初免-痘苗加强疫苗接种与PD-1阻断组合在AAV-HBV小鼠中的作用。在指定时间点通过ELISA(国际免疫诊断)确定图6中所示研究中的血清HBeAg水平。虚线指示检测下限。Ad：腺病毒5载体。Vac：痘苗载体。Ctrl：对照抗原。同种型：同种型对照抗体。αPD-1：抗小鼠PD-1抗体。
图9A-图9C示出了在本文提供的实施例中所展示的沙粒病毒载体平台的概述。(A)沙粒病毒家族(沙粒病毒科)的系统发育树的示意图。在本文提供的实施例中，选择来自旧世界(OW)进化枝的淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)(NCBI：txid11623)和来自新世界(NW)进化枝的卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))(NCBI：txid2169993)用于产生HBV抗原编码载体。参见例如，Buchmeier等人，2001，“Arenaviridae:The Viruses and Their Replication，”Fields Virology，第2卷，1635-1668。沙粒病毒分类学最近在例如Radoshitzky等人，Arch Virol.(2015)160(7):1851-74中综述。在位于viprbrc.org的病毒病原体资源网站也可获得沙粒病毒科的系统发育信息。(B)WO2009083210中描述的具有二分段基因组的复制缺陷性沙粒病毒载体的示意图，以及(C)WO2016075250和WO2017198726中描述的具有三分段基因组的复制减毒型沙粒病毒载体。WO2009083210中描述并且用于本文提供的实施例中的具有二分段基因组的复制缺陷性沙粒病毒载体编码四种病毒蛋白中的三种(L、Z和NP)和用于插入例如编码抗原的异源多核苷酸的开放阅读框。具有二分段基因组的复制缺陷性沙粒病毒载体仅在以反式递送病毒GP时才能增殖。WO2016075250和WO2017198726中描述的具有三分段基因组的复制减毒型沙粒病毒载体具有基因组S段的人工复制，编码所有四种病毒蛋白(L、Z、NP和GP)并且具有两个开放阅读框以插入例如编码一种或两种抗原的一个或两个异源多核苷酸。
图10示出了Pol抗原在无复制能力的淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)载体中的免疫原性。给六至八周龄的C57BL/6小鼠(每组n＝6)静脉内注射1×106个病灶形成单位(FFU)的表达pol抗原变体GT-D和GT-B PolΔ1(SEQ ID NO:6和8)、PolΔ3(SEQID NO:10和12)和Pol300(SEQ ID NO:13和14)的无复制能力的LCMV载体，或用培养基作为阴性对照。在注射后第7天，收获脾细胞，并使用对应于每组中的免疫抗原基因型的Pol重叠肽池，通过IFN-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)评价T细胞应答。SFU：点形成单位。
图11示出了表达核心-HBsAg融合蛋白的LCMV载体在C57BL/6小鼠中的免疫原性。给六至八周龄的C57BL/6小鼠(每组n＝6)注射1×106个病灶形成单位(FFU)的表达SEQ IDNO:38-41的核心-HBsAg融合变体的无复制能力的LCMV载体或模拟免疫作为阴性对照。在注射后第7天，收获脾细胞，并使用对应于每组中的免疫抗原基因型的核心和HBsAg重叠肽池，通过IFN-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)评价T细胞应答。SFU：点形成单位。
图12示出了在施用表达核心-sAg融合蛋白的无复制能力的LCMV载体的小鼠中获得的对HBsAg的抗体应答。给六至八周龄C57BL/6(左)或Balb/C(右)小鼠(每组n＝5)注射1×106个病灶形成单位(FFU)的表达SEQ ID NO:38-41的核心-sAg融合变体的无复制能力的LCMV载体或用培养基作为阴性对照。在注射后第17天，收集血清并通过ELISA(国际免疫诊断)测试抗HBsAg抗体。虚线指示11mIU/ml的检测下限。*通过Mann-Whitney检验，p<0.05。
图13示出了核苷酸序列修饰对核心-P2A-sAg融合蛋白的T细胞免疫原性的影响。给六至八周龄的C57BL/6小鼠(每组n＝6)注射1×106个病灶形成单位(FFU)的具有GT-D核心-P2A-sAg(SEQ ID NO:36)或GT-DiCore-P2A-sAg(SEQ ID NO:37)的无复制能力的LCMV载体或模拟免疫作为阴性对照。在注射后第7天，收获脾细胞，并使用核心和sAg重叠肽池通过IFN-γELISPOT(BD小鼠IFN-γELISPOT试剂盒，目录号551083)评价T细胞应答。用Mann-Whitney检验进行统计学分析。
图14A-图14B示出了在多样性远系繁殖小鼠中用编码GT-B/C核心-P2A-sAg或GT-DiCore-P2A-sAg(图14A)和GT-B PolΔ3或GT-B Pol300(图14B)的无复制能力的LCMV载体(VV1)进行初免/加强疫苗接种的免疫原性。如表9所述，在第0天和第28天，向动物施用2个剂量的每种疫苗。在第42天收获脾细胞，并使用来自如所指示的各种病毒基因型的sAg、核心和聚合酶肽池，通过IFN-γELISPOT测量对HBV抗原的T细胞应答。数据表示为背景(无肽)扣除值。用Mann-Whitney检验进行统计学分析。ns：统计学上不显著；*p<0.0332。
图15A-图15B示出了在多样性远系繁殖小鼠中用编码GT-D iCore-P2A-sAg(图15A)或GT-B Pol300(图15B)的无复制能力的LCMV(VV1)载体进行初免/加强疫苗接种时产生的HBV特异性T细胞应答的广度。使用来自相同病毒基因型(实心圆)或不同病毒基因型(空心圆)的肽进行IFN-γELISPOT。
图16A-图16C示出了在C57BL/6小鼠中当作为单一载体或作为共同配制的混合物递送时用编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV(VV1)载体进行初免/加强疫苗接种的免疫原性。如表10所述，在第0天和第21天向动物施用2个剂量的载体。在第28天收获脾细胞，并使用核心(16A)、sAg(16B)和Pol(16C)肽池通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。
图17A-图17F示出了在食蟹猴中用编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-BPol300的无复制能力的LCMV载体进行重复疫苗接种的免疫原性。一组动物也用Ad5和编码相同HBV抗原的痘苗载体进行疫苗接种。如表11所述，向动物施用载体。17A：第1组；17B：第2组；17C：第3组；17D；第4组；17E：第5组；17F：第6组。通过在指定的时间点使用sAg、核心和Pol肽池进行IFN-γELISPOT来评估对HBV抗原的T细胞应答。数据表示为总HBV特异性T细胞应答，定义为用sAg、核心和聚合酶肽池刺激后获得的IFN-γELISPOT值的总和。
图18A-图18F示出了如图17和表11中所述在食蟹猴中用编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体进行重复疫苗接种的免疫原性。图18A-图18F聚焦于用核心肽池刺激后获得的IFN-γELISPOT。18A：第1组；18B：第2组；18C：第3组；18D；第4组；18E：第5组；18F：第6组。
图19A-图19F示出了如图17和表11中所述在食蟹猴中用编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体进行重复疫苗接种的免疫原性。图19A-图19F聚焦于用sAg肽池刺激后获得的IFN-γELISPOT。19A：第1组；19B：第2组；19C：第3组；19D；第4组；19E：第5组；19F：第6组。
图20A-图20F示出了如图17和表11中所述在食蟹猴中用编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体进行重复疫苗接种的免疫原性。图20A-图20F聚焦于用Pol肽池刺激后获得的IFN-γELISPOT。20A：第1组；20B：第2组；20C：第3组；20D；第4组；20E：第5组；20F：第6组。
图21A-图21B示出了如表11中所述来自第1组、第2组和第6周的食蟹猴第14周的外周HBV特异性IFN-γCD8+T细胞(A)和CD4+T细胞(B)的频率。数据从在第14周收获并用HBVsAg、核心和聚合酶肽池再刺激的PBMC中获得。然后通过流式细胞术分析CD4+和CD8+T亚群的细胞内IFN-γ。
图22A-图22C示出了如表11中所述来自第1组(22A)、第2组(22B)和第6组(22C)的食蟹猕猴中对HBsAg的抗体应答。在指定的时间点收集血清样品并通过ELISA对抗HBsAg抗体进行定量。虚线指示该测定的定量下限(5mIU/mL)。
图23示出了在AAV-HBV小鼠模型中评估单独或与免疫调节剂抗PD1、抗CTLA4、抗CD137和FLT3L-Fc融合物组合的编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体(HBV疫苗)的免疫原性的研究设计。在第-35天用1011个AAV-HBV基因组拷贝转导六至十周龄的C57BL/6小鼠。在第-11天，基于血清HBsAg水平将小鼠随机分配到治疗组。在第0天、第21天和第42天静脉内(i.v.)施用200μl的编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体。腹膜内给予小鼠200μl：i)在第0天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天、第49天和第56天，盐水溶液；ii)在第42天、第46天、第49天、第53天、第56天和第60天，抗PD-1单克隆抗体RMP1-14；iii)在第0天、第4天、第7天、第11天、第14天、第18天、第21天、第25天、第28天、第32天、第35天、第39天、第42天、第46天、第49天和第53天，抗CTLA-4单克隆抗体克隆9D9；iv)在第0天、第21天和第42天，抗CD137单克隆抗体克隆mAb8(IgG2b)；v)在第-7天、第14天和第35天，FLT3L-Fc融合蛋白。星号描绘了每种免疫调节剂的剂量。在第105天收获脾细胞，并使用sAg、核心和pol肽池评估IFN-γELISPOT。未接受AAV-HBV但单独施用无复制能力的LCMV载体的一组C57BL/6小鼠用作IFN-γELISPOT阳性对照。
图24A-图24C示出了如表12和图23中所述在AAV-HBV小鼠中用编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体进行重复疫苗接种的免疫原性。在第105天收获脾细胞，并使用sAg(24A)、核心(24B)和聚合酶(24C)肽池评估IFN-γELISPOT。用Mann-Whitney检验进行统计学分析。ns：统计学上不显著；*p<0.0332，**p<0.0021，***p<0.0002，****p<0.0001。
图25示出了在C57BL/6小鼠中用编码GT-B Pol300 ori或GT-B Pol300 dint的无复制能力的PICV(VV2)载体进行初免-加强疫苗接种的免疫原性。在第0天和第21天，向动物施用2个剂量的疫苗。在第28天收获脾细胞，并使用Pol肽池通过IFN-γELISPOT测量HBV聚合酶特异性T细胞应答。数据表示为背景(无肽)扣除值。用Mann-Whitney检验进行统计学分析。**p<0.0021。
图26A-图26C示出了在C57BL/6小鼠中用编码GT-D iCore-P2A-sAg或GT-B Pol300的无复制能力的LCMV(VV1)和PICV(VV2)载体进行同源和异源初免/加强疫苗接种的免疫原性。如表15所述，在第0天和第21天向动物施用2个剂量的载体。在第28天收获脾细胞，并使用sAg(26A)、核心(26B)和聚合酶(26C)肽池通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。数据表示为背景(无肽)扣除值。
图27示出了在第0天和第21天使用同源(VV1/VV1)或异源(VV2/VV1)初免/加强疫苗接种施用编码GT-D iCore-P2A-sAg的无复制能力的LCMV和PICV载体的C57BL/6小鼠中对HBsAg的抗体应答。在第28天收集血清样品并通过ELISA对抗HBsAg抗体进行定量。虚线指示该测定的定量下限(20mIU/mL)。用Mann-Whitney检验进行统计学分析。**p<0.0021。
图28A-图28C示出了在C57BL/6小鼠中用编码GT-D核心-P2A-sAg和GT-B Pol300的复制减毒型LCMV(TT1)和PICV(TT2)载体进行同源和异源初免/加强疫苗接种的免疫原性。如表16所述，在第0天和第21天向动物施用2个剂量的载体。在第28天收获脾细胞，并使用sAg(28A)、核心(28B)和聚合酶(28C)肽池通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。
图29示出了在食蟹猴中用编码GT-D核心-P2A-sAg和GT-B Pol300的复制缺陷型LCMV(VV1)和PICV(VV2)载体进行同源和异源初免/加强疫苗接种的免疫原性。向动物施用2个剂量的载体，在第0周一次并且在第4周一次。在第6周收获PBMC，并使用sAg、核心和聚合酶肽池通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。数据表示为总HBV特异性T细胞应答，定义为用sAg、核心和聚合酶肽池刺激后获得的IFN-γELISPOT值的总和。定量下限(LLOQ)ELISPOT(虚线)定义为200个IFN-γ+SFU/106个PBMC。用Mann-Whitney检验进行统计学分析。
图30示出了每周在食蟹猴中施用编码GT-D核心-P2A-sAg和GT-BPol300的复制缺陷型LCMV(VV1)和PICV(VV2)载体进行同源和异源初免/加强疫苗接种的免疫原性。在第0周、第1周、第2周和第3周向动物施用4个剂量的载体。在第4周收获PBMC，并使用sAg、核心和聚合酶肽池通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。数据表示为总HBV特异性T细胞应答，定义为用sAg、核心和聚合酶肽池刺激后获得的IFN-γELISPOT值的总和。定量下限(LLOQ)ELISPOT(虚线)定义为200个IFN-γ+SFU/106个PBMC。
具体实施方式
1.简介
本发明提供了可用于在人体中引发针对一种或多种乙型肝炎病毒(HBV)抗原的保护性免疫应答的多肽。本文所述的免疫原性多肽能够在人体中引发针对一种或多种乙型肝炎病毒(HBV)抗原的预防性和/或治疗性免疫应答。通常，本文所述的免疫原性多肽含有HBV蛋白的高度保守部分，以便诱导针对在疫苗抗原中和在患者中存在的感染性HBV中相同的表位的应答，同时还排除了保守性差的区域，从而避免引发靶向在患者的感染性HBV菌株中不存在的表位的免疫显性T细胞应答。本文所述的免疫原性多肽还诱导CD4+和CD8+T细胞应答以促进受感染细胞的清除，以及另外诱导促进sAg清除的抗sAg抗体应答，从而如果没有完全实现灭菌病毒清除，则减少或消除残余病毒的扩散。此外，本文所述的免疫原性多肽在使用能够在人体中诱导期望应答的疫苗技术递送时被证明是免疫原性的，并且在递送载体中通过足够轮次的载体复制是稳定的，以使得能够进行商业规模的疫苗制造。免疫原性多肽可用于已知在人和其它非人灵长类中诱导CD4+和CD8+T细胞以及抗体应答的各种载体系统。在某些实施方案中，免疫原性多肽从可重复给药而不诱导抗载体抗体的沙粒病毒载体表达，从而克服许多先前病毒载体技术的限制，并且提供通过重复给药增强治疗益处的可能性。
2.可用于促进针对乙型肝炎病毒(HBV)的免疫应答的多肽
提供了可用于促进、诱导和/或引发针对一种或多种乙型肝炎病毒(HBV)抗原的免疫原性应答的免疫原性多肽。在各种实施方案中，免疫原性多肽包含由HBV聚合酶(Pol)基因编码的多肽和/或片段，以及从N-末端到C-末端依次具有由HBV核心基因编码的多肽的变体和/或片段和由表面抗原(sAg)基因编码的多肽的变体和/或片段的及融合多肽。免疫原性多肽可含有基于来自HBV A、B、C或D基因型的共有序列或近共有序列以及它们的组合的氨基酸序列。通常，本文所述的免疫原性多肽不包含HBV X蛋白(HBx)、前核心、前S1、前S2或它们的片段的序列。
在各种实施方案中，本文所述的免疫原性多肽和/或编码此类多肽的多核苷酸以分离的形式提供。这意味着此类多肽或多核苷酸的纯度通常为至少50重量％的由其生产或纯化产生的干扰蛋白质、细胞和其他污染物，但不排除药剂与过量的药学上可接受的载体或旨在促进其使用的其他媒介物组合的可能性。如本文所述，当应用于多肽或多核苷酸时，术语“分离的”表示多肽或多核苷酸基本上不含在天然状态下与其缔合的细胞组分。它可例如处于均质状态并且可处于干燥状态或水溶液中。纯度和均质性可使用已知方法确定，例如分析化学技术，诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳、柱色谱法、薄层色谱法或高效液相色谱(HPLC)分析。作为制剂中存在的主要种类的蛋白质是基本上纯化的。“分离的”或“纯化的”多肽或多核苷酸当通过重组技术产生时基本上不含其它细胞材料或培养基，或当化学合成时基本上不含化学前体或其它化学品。在各种实施方案中，纯化的多肽和/或多核苷酸为至少60％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％(w/w)，从生产或纯化中分离、纯化或不含干扰蛋白质和污染物。通常，药剂是在其纯化之后剩余的主要大分子物质。
HBV聚合酶多肽变体
在各种实施方案中，提供了截短的和/或内部缺失的突变乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶多肽。
野生型HBV聚合酶具有四个结构域，在单个多肽中从N-末端到C-末端串联排列：跨嗜肝病毒保守的末端蛋白(TP)结构域(氨基酸残基1至177)，间隔区区域(氨基酸残基178至335)，将TP连接到逆转录酶(RT)结构域(氨基酸残基336至678；包括NCBI保守结构域pfam00078或cd01645)和C-末端RNA酶H(RH)结构域(氨基酸残基679至832)。参见例如，Lanford等人，J.Virol.(1999)73(3):1885–93；等人，J Virol.(2014)88(5):2584-99和Jones等人，J Virol.(2014)88(3):1564-72。在本文所述的HBV聚合酶变体中，所有或部分的间隔区区域已被缺失或去除。在HBV聚合酶截短突变体中，整个TP结构域已被缺失或去除。
通常，在本文所述的HBV聚合酶蛋白突变体中，酶结构域，即逆转录酶和RNA酶H结构域被失活。在各种实施方案中，逆转录酶结构域不包含YMDD基序(SEQ ID NO:97)。在一些实施方案中，逆转录酶结构域中的YMDD基序(SEQ ID NO:97)被改变为YMHD(SEQ ID NO:99)。在一些实施方案中，RNA酶H结构域不包含AELL基序(SEQ ID NO:98)。在一些实施方案中，RNA酶H结构域中的AELL基序(SEQ ID NO:98)被改变为AHLL(SEQ ID NO:100)。
截短的聚合酶突变体
在一些实施方案中，该截短的HBV聚合酶多肽包含失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中该多肽不包含所有的末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的间隔区结构域(即，末端蛋白(TP)结构域和所有或部分的间隔区结构域被去除、切除或排除)。在本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中，所有的TP结构域和所有或部分的间隔区结构域或区域被缺失或去除。例如，在一些实施方案中，从本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中缺失或去除天然或野生型HBV聚合酶的N-末端300个氨基酸。在各种实施方案中，失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H可直接融合或通过如本文所述的接头可操作地链接或连接。在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽的长度不长于600个氨基酸，例如长度不长于595、590、585、580、575、570、565、560、555、550、545、540或535个氨基酸。在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽包含天然或野生型HBV聚合酶的C-末端528、529、530、531、532、533、534或535个氨基酸。
在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽包含对应于天然或野生型HBV聚合酶的氨基酸残基300-832、301-832、302-832、303-832、304-832、305-832、306-832、307-832、308-832、309-832、310-832、311-832、312-832、313-832、314-832、315-832、316-832、317-832、318-832、319-832、320-832、325-832、326-832、327-832、328-832、329-832、330-832、331-832、332-832、333-832、334-832、335-832或336-832的氨基酸序列。如本文所用，当任何给定聚合物组分(例如，氨基酸、核苷酸，也统称为“残基”)的位置通过参考所选氨基酸或核酸聚合物中的相同或等同位置(例如，基于最佳比对或共有序列)，而不是通过给定聚合物中组分的实际数字位置来指定时，给定氨基酸聚合物或核酸聚合物的编号“对应于”、“与…相对应”或“相对于”所选或参考氨基酸聚合物或核酸聚合物的编号。在各种实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽包含对应于氨基酸残基300-832的氨基酸序列。在此类实施方案中，N-末端对应于原型基因型D pol蛋白的氨基酸位置300。该序列的N-末端6个氨基酸残基在基因型D pol抗原中是SARSQS(SEQ ID NO:95)并且在基因型B pol抗原中是SSRSQS(SEQID NO:96)。文献报告指出，该N-末端起始位点允许RT结构域的功能(参见例如，Lanford等人，同上)和截短的蛋白质的体外表达(参见，例如，等人，同上)。
在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽来自HBV基因型B并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽来自HBV基因型B并且不包含SEQ IDNO:50、或与SEQ ID NO:50中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列(即，该序列被排除、切除或去除；该序列不被包含)。
在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽来自HBV基因型D并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:14、或与SEQ ID NO:14至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽来自HBV基因型D并且不包含SEQ IDNO:51、或与SEQ ID NO:51中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列。
可在本文所述的多肽和编码此类多肽的多核苷酸的结构中进行修饰，并且这些修饰仍然获得编码具有期望(例如，免疫原性)特征的变体或衍生多肽的功能分子。当期望改变多肽的氨基酸序列以产生本文所述的多肽的等同或甚至改善的变体或部分时，本领域技术人员通常将改变编码DNA序列的密码子中的一个或多个。
例如，某些氨基酸可取代蛋白质结构中的其他氨基酸，而不会明显丧失其结合其他多肽(例如抗原)或细胞的能力。由于正是蛋白质的结合能力和性质限定该蛋白质的生物功能活性，因此可以在蛋白质序列中进行某些氨基酸序列取代，当然可以在其基础DNA编码序列中进行某些氨基酸序列取代，但获得具有类似性质的蛋白质。因此可设想，可在所公开的多肽的多肽序列或编码此类多肽的对应DNA序列中作出各种改变，而不会明显丧失它们的生物效用或活性。
如本文所用，“取代”表示一个或多个氨基酸或核苷酸分别被不同的氨基酸或核苷酸替换。
在许多情况下，多肽变体将含有一个或多个保守取代。“保守取代”是其中氨基酸取代具有相似特性的另一个氨基酸，使得肽化学领域技术人员将期望多肽的二级结构和亲水性基本上不变的取代。
如本文所用，“同一性”意指当序列被比对以使序列匹配最大化即考虑空位和插入时两个或更多个序列中相应位置处相同的核苷酸或氨基酸残基的百分比。序列通常在指定区域内进行最大对应性比对，例如长度至少为20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或更多个氨基酸或核苷酸的区域，并且可高达参考多肽或多核苷酸序列的全长。对于序列比较，通常一个序列充当参考序列，将测试序列与该参考序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入到计算机程序中，如果需要，指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。否则，可使用标准参数。然后，序列比较算法基于指定的程序参数，计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
当比较多核苷酸和多肽序列时，如果两个序列中的核苷酸或氨基酸的序列在如下所述进行最大对应比对时相同，则认为这两个序列是“相同的”。通常通过在比较窗口上比较序列来进行两个序列之间的比较，以鉴别和比较序列相似性的局部区。如本文所用，“比较窗口”是指至少约20个连续位置(通常为30个至约75个、40个至约50个)或序列的全长上的区段，其中在将序列和具有相同数量的连续位置的参考序列进行最佳比对后，可将该序列与参考序列进行比较。
用于比较的序列的最佳比对可使用Lasergene生物信息学软件包(DNASTAR，Inc.，Madison，WI)中的Megalign程序使用默认参数进行。该程序体现了以下参考文献中描述的若干比对方案：Dayhoff,M.O.(1978)A model of evolutionary change in proteins-Matrices for detecting distant relationships.In Dayhoff,M.O.(ed.)Atlas ofProtein Sequence and Structure,National Biomedical Research Foundation,Washington DC Vol.5,Suppl.3,pp.345-358；Hein J.(1990)Unified Approach toAlignment and Phylogenes pp.626-645Methods in Enzymology vol.183,AcademicPress,Inc.,San Diego,CA；Higgins,D.G.and Sharp,P.M.(1989)CABIOS 5:151-153；Myers,E.W.and Muller W.(1988)CABIOS 4:11-17；Robinson,E.D.(1971)Comb.Theor 77:105；Santou,N.Nes,M.(1987)Mol.Biol.Evol.4:406-425；Sneath,P.H.A.and Sokal,R.R.(1973)Numerical Taxonomy-the Principles and Practice of Numerical Taxonomy,Freeman Press,San Francisco,CA；Wilbur,W.J.and Lipman,D.J.(1983)Proc.Natl.Acad.,Sci.USA 80:726-730。
另选地，用于比较的序列的最佳比对可通过以下算法进行：局部同一性算法(Smith and Waterman(1981)Add.APL.Math 2:482)、同一性比对算法(Needleman andWunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443)、相似性搜索方法(Pearson and Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:2444)、这些算法的计算机化实施(Wisconsin遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group(GCG)，575ScienceDr.,Madison,WI)或检查。
适于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的一个示例是BLAST和BLAST2.0法，它们分别在Altschul等人(1977)Nucl.Acids Res.25:3389-3402以及Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-410中描述。BLAST和BLAST 2.0可以例如与本文所述的参数一起用于确定本文所述的多核苷酸和多肽的序列同一性百分比。进行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)公开获得。
在一个例示性示例中，对于核苷酸序列，可以使用参数M(一对匹配残基的奖励分数；总是>0)和N(错配残基的惩罚分数；总是<0)来计算累积分数。字词命中在每个方向上的延伸在以下情况下停止：累积比对分数从其最大实现值下降数量X；累积分数由于一个或多个负分数残基比对的累积而变为零或更低；或到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)使用字长(W)11和期望值(E)10作为默认值，以及BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff and Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915)比对，(B)为50，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，以及两条链的比较。
对于氨基酸序列，可以使用评分矩阵来计算累积得分。字词命中在每个方向上的延伸在以下情况下停止：累积比对分数从其最大实现值下降数量X；累积分数由于一个或多个负分数残基比对的累积而变为零或更低；或到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定了比对的灵敏度和速度。
在一种方法中，通过在至少20个位置(例如至少50个位置、至少100个位置或在参考序列的全长上)的比较窗口内比较两个最佳比对的序列来确定“序列同一性百分比”，其中与用于两个序列的最佳比对的参考序列(不包含添加或缺失)相比，多核苷酸或多肽序列在比较窗口中的部分可包含20％或更少(通常为5％至15％，或10％至12％)的添加或缺失(即空位)。通过确定两个序列中相同核酸碱基或氨基酸残基出现的位置数以产生匹配位置数，将匹配位置数除以参考序列中的总位置数(即窗口大小)并将结果乘以100以产生序列同一性百分比来计算百分比。
如本文所用，术语多肽“变体”是通常与本文具体公开的多肽在一个或多个取代、缺失、添加和/或插入方面不同的多肽。此类变体可以是天然存在的或可例如通过修饰本文所述的上述多肽序列中的一个或多个并评估如本文所述的多肽的一种或多种生物活性和/或使用本领域熟知的多种技术中的任一种来合成生成。术语“变体”还可指包含一个或多个核苷酸或氨基酸突变的任何天然存在的或工程化的分子。
用于促进、诱导或引发例如针对由HBV表达的聚合酶抗原的免疫原性应答的例示性HBV聚合酶截短突变体提供于表A中。从本文所述的HBV聚合酶截短突变体中缺失或去除并因此不包含在其中的例示性N-末端序列片段提供于表B中。
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在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽不包含来自另一种HBV蛋白的氨基酸序列或其片段。在一些实施方案中，截短的HBV聚合酶多肽不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：前核心、核心、X和包膜(例如，小、中或大表面抗原(sAg))。
内部缺失聚合酶突变体
进一步提供了HBV聚合酶内部缺失突变多肽。在各种实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽从N-末端到C-末端依次包含末端蛋白(TP)结构域、失活的逆转录酶结构域、失活的RNA酶H，其中该突变多肽不包含所有或部分的间隔区结构域(即所有或部分的间隔区结构域或区域被缺失或去除)。在各种实施方案中，HBV聚合酶缺失突变多肽的长度不长于800个氨基酸，例如长度不长于795、790、785、780、775、770、765、760、755、750、745、740、735、730、725、720、715、710或705个氨基酸。在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽从N-末端到C-末端依次包含：末端蛋白(TP)结构域和对应于天然或野生型HBV聚合酶的氨基酸残基300-832、301-832、302-832、303-832、304-832、305-832、306-832、307-832、308-832、309-832、310-832、311-832、312-832、313-832、314-832、315-832、316-832、317-832、318-832、319-832、320-832、325-832、326-832、327-832、328-832、329-832、330-832、331-832、332-832、333-832、334-832、335-832或336-832的氨基酸序列。在各种实施方案中，末端蛋白(TP)结构域、失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H独立地可直接融合或经由例如如本文所述、例如如表J中所提供的接头可操作地链接或连接。
在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型A并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5和9中的任一项、或与SEQ ID NO:5和9中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型A并且不包含SEQ ID NO:42或46、或与SEQ ID NO:42或46中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽。
在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型B并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:6和10中的任一项、或与SEQ ID NO:6和10中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型B并且不包含SEQ ID NO:43或47、或与SEQ ID NO:43或47中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽。
在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型C并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:8和11中的任一项、或与SEQ ID NO:8和11中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型C并且不包含SEQ ID NO:44或48、或与SEQ ID NO:44或48中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽。
在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型D并且包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:9和12中的任一项、或与SEQ ID NO:9和12中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽来自HBV基因型D并且不包含SEQ ID NO:45或49、或与SEQ ID NO:45或49中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽。
在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽不包含来自另一种HBV蛋白的氨基酸序列或其片段。在一些实施方案中，HBV聚合酶内部缺失突变多肽不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：前核心、核心、X和包膜(例如，小、中或大表面抗原(sAg))。
用于促进、诱导或引发例如针对由HBV表达的聚合酶抗原的免疫原性应答的例示性HBV聚合酶内部缺失突变体提供于表C和表E中。从本文所述的HBV聚合酶内部缺失突变体中缺失或去除并因此不包含在其中的例如对应于所有或部分的HBV聚合酶间隔区区域的例示性内部氨基酸序列片段提供于表D和表F中。
核心-聚合酶融合多肽
在各种实施方案中，本文所述的截短和内部缺失HBV聚合酶多肽变体融合到HBV核心多肽。核心多肽可位于HBV聚合酶的N-末端或C-末端。进一步提供了融合多肽，其从N-末端到C-末端依次包含如本文所述的HBV核心多肽和截短或内部缺失HBV聚合酶多肽突变体。在一些实施方案中，核心-Pol融合多肽包含本文所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其从N-末端到C-末端依次包含如本文所述的HBV核心多肽和内部缺失HBV聚合酶多肽突变体。
在一些实施方案中，核心-Pol融合多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:19-26中的任一项、或与SEQ ID NO:19-26中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，HBV核心-聚合酶内部缺失突变融合蛋白不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：X、前核心和包膜(例如小、中或大表面抗原(sAg))。
用于促进、诱导或引发例如针对由HBV表达的核心和/或聚合酶抗原的免疫原性应答的例示性核心-聚合酶融合蛋白提供于表G中。
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核心-sAg融合蛋白
还提供了由包含HBV核心多肽或其免疫原性片段的N-末端部分和包含HBV小表面抗原或其免疫原性片段的C-末端部分构成的融合蛋白。在各种实施方案中，HBV核心多肽或其片段和HBV小表面抗原(sAg)或其片段直接融合或邻接。在一些实施方案中，HBV核心多肽或其片段和HBV小表面抗原或其片段经由接头连接。
HBV核心多肽或其免疫原性片段
在各种实施方案中，核心-sAg融合蛋白的HBV核心多肽或其免疫原性片段独立地可来自HBV基因型A、B/C或D。可用于本文所述的核心-sAg融合蛋白的例示性HBV核心多肽氨基酸序列提供于表H中。
在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽中的核心多肽包含以下或由以下组成：SEQID NO:64-66中的任一项、或与SEQ ID NO:64-66中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
HBV小表面抗原或其免疫原性片段
在各种实施方案中，核心-sAg融合蛋白的HBV sAg多肽或其免疫原性片段独立地可来自HBV基因型A、B、C或D。可用于本文所述的核心-sAg融合蛋白的例示性HBV sAg多肽氨基酸序列提供于以下实施例1中的表1中。
在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽中的sAg多肽包含以下或由以下组成：SEQID NO:1-4中的任一项、或与SEQ ID NO:1-4中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，例如包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者。
关于核心-sAg融合蛋白，HBV核心多肽和HBV sAg多肽可来自相同或不同的HBV基因型。在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽，其中：
·核心多肽来自HBV基因型A并且sAg多肽来自HBV基因型A；
·核心多肽来自HBV基因型B或C并且sAg多肽来自HBV基因型B；
·核心多肽来自HBV基因型B或C并且sAg多肽来自HBV基因型C；
·核心多肽来自HBV基因型D并且sAg多肽来自HBV基因型D；
·核心多肽来自HBV基因型A并且sAg多肽来自HBV基因型B；
·核心多肽来自HBV基因型A并且sAg多肽来自HBV基因型C；
·核心多肽来自HBV基因型A并且sAg多肽来自HBV基因型D；
·核心多肽来自HBV基因型B或C并且sAg多肽来自HBV基因型A；
·核心多肽来自HBV基因型B或C并且sAg多肽来自HBV基因型D；
·核心多肽来自HBV基因型D并且sAg多肽来自HBV基因型A；
·核心多肽来自HBV基因型D并且sAg多肽来自HBV基因型B；或
·核心多肽来自HBV基因型D并且sAg多肽来自HBV基因型C。
在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽，其中：
·核心多肽来自HBV基因型B或C并且sAg多肽来自HBV基因型C；或
·核心多肽来自HBV基因型D并且sAg多肽来自HBV基因型D。
在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含，(i)包含以下或由以下组成的HBV核心多肽：SEQ ID NO:65、或与SEQ ID NO:65至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(ii)包含以下或由以下序列组成的HBV小表面抗原(sAg)多肽：SEQ ID NO:3、或与SEQ ID NO:3至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含，(i)包含以下或由以下组成的HBV核心多肽：SEQ ID NO:66、或与SEQ ID NO:66至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(ii)包含以下或由以下序列组成的HBV小表面抗原(sAg)多肽：SEQ ID NO:4、或与SEQ ID NO:4至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在各种实施方案中，本文所述的核心-sAg融合蛋白包含HBV小表面抗原同种型但不包含HBV中表面抗原同种型或HBV大表面抗原同种型。因此，在一些实施方案中，本文所述的核心-sAg融合蛋白不包含HBV前S1多肽。在一些实施方案中，本文所述的核心-sAg融合蛋白不包含HBV前S2多肽。在一些实施方案中，本文所述的核心-sAg融合蛋白不包含HBV前S1多肽和HBV前S2多肽两者。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的例示性HBV前S2多肽：
MQWNST[A/T]FHQ[T/A]LQDPRVR[A/G]LYFP[A/G]GGSS[L/S]G[A/T][V/I]NPV[L/P]TT[A/V]S[P/H][L/I]SSIF[S/A]RIGDP[A/V][L/M/P/T]N(SEQ ID NO:79)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型A的例示性HBV前S2共有多肽：
MQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTN(SEQ ID NO:80)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型B的例示性HBV前S2共有多肽：
MQWNSTTFHQTLQDPRVRALYFPAGGSSSGTVSPAQNTVSAISSILSKTGDPVPN(SEQ ID NO:81)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型C的例示性HBV前S2共有多肽：
MQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN(SEQ ID NO:82)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型D的例示性HBV前S2共有多肽：
MQWNSTTFHQTLQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRIGDPALN(SEQ ID NO:83)。
在一些实施方案中，本文所述的核心-sAg融合蛋白不包含HBV前S2多肽，其包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:79-83中的任一项、或与SEQ ID NO:79-83中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的例示性HBV前S1-前S2多肽：
MGQNLSTSNPLGFFPDHQL[D/A]PAFRANT[A/G/R]NPDWDFNPNKDTWPDANKVGAGAFGLGFTPPHGGLLGWSPQAQGI[I/L]QT[L/V]PANPPPAS[T/A]NRQ[S/T]GRQPTPLSPPLR[N/D]THPQAMQWNST[A/T]FHQ[T/A]LQDPRVR[A/G]LYFP[A/G]GGSS[L/S]G[A/T][V/I]NPV[L/P]TT[A/V]S[P/H][L/I]SSIF[S/A]RIGDP[A/V][L/M/P/T]N(SEQ ID NO:84)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型A的例示性HBV前S1-前S2共有多肽：
MGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTN(SEQ ID NO:85)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型B的例示性HBV前S1-前S2共有多肽：
MGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFKANSENPDWDLNPHKDNWPDANKVGVGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGLLTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPLSPPLRDTHPQAMQWNSTTFHQTLQDPRVRALYFPAGGSSSGTVSPAQNTVSAISSILSKTGDPVPN(SEQ ID NO:86)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型C的例示性HBV前S1-前S2共有多肽：
MGGWSSKPRQGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPNKDHWPEANQVGAGAFGPGFTPPHGGLLGWSPQAQGILTTVPAAPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTTFHQALLDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRTGDPAPN(SEQ ID NO:87)。
下文提供了不包含在本文所述的核心-sAg融合蛋白中的来自HBV基因型D的例示性HBV前S1-前S2共有多肽：
MGQNLSTSNPLGFFPDHQLDPAFRANTANPDWDFNPNKDTWPDANKVGAGAFGLGFTPPHGGLLGWSPQAQGILQTLPANPPPASTNRQSGRQPTPLSPPLRNTHPQAMQWNSTTFHQTLQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPVPTTASPISSIFSRIGDPALN(SEQ ID NO:88)。
在一些实施方案中，本文所述的核心-sAg融合蛋白不包含HBV前S1-前S2多肽，其包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:84-88中的任一项、或与SEQ ID NO:84-88中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
任选多肽接头
视情况而定，核心-sAg融合蛋白中的HBV核心多肽和HBV sAg多肽可直接邻接或融合，或者可通过一个或多个肽接头接合、连接或链接。在各种实施方案中，该一种或多种肽接头选自聚丙氨酸接头、聚甘氨酸接头、可切割接头、柔性接头、刚性接头以及它们的组合中的一种或多种，例如在接头内或在全长融合多肽内。可用于本发明融合多肽中以连接HBV核心多肽和HBV sAg多肽的例示性融合蛋白接头例如在Chen等人，Adv Drug Deliv Rev.(2013)65(10):1357–1369中有所描述。在一些实施方案中，聚丙氨酸接头包含2或3个连续丙氨酸残基或由其组成，例如AA、AAA、AAY或AAX，其中X是任何氨基酸(例如A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、Y)。在一些实施方案中，使用聚甘氨酸接头，例如GG、GGG、GGS、GSG或GGGS(SEQ ID NO:63)。在一些实施方案中，可切割接头选自2A可切割肽。可用于连接HBV核心多肽和HBV sAg多肽的例示性2A可切割肽例如在Donnelly等人，J.Gen.Virol(2001),82,1027–1041和Chng等人，mAbs(2015)7:2,403-412中有所描述。可用于连接HBV核心多肽和HBV sAg多肽的例示性2A可切割肽包括但不限于2A切割序列(例如口蹄疫病毒(F2A)、马鼻炎A病毒(E2A)、猪捷申病毒-1(P2A)和明脉扁刺蛾病毒(T2A))，任选地与弗林蛋白酶识别/切割序列(例如RAKR(SEQ ID NO:60)、REKR(SEQ ID NO:61)和RRKR(SEQ ID NO:62))组合。在某些实施方案中，弗林蛋白酶识别/切割序列(例如，RAKR(SEQ ID NO:60)、REKR(SEQID NO:61)和RRKR(SEQ ID NO:62))在单个接头中与2A可切割肽(例如口蹄疫病毒(F2A)、马鼻炎A病毒(E2A)、猪捷申病毒-1(P2A)和明脉扁刺蛾病毒(T2A))组合或融合。参见例如，Chng等人，mAbs(2015)7:2,403-412。在一些实施方案中，接头包括猪捷申病毒-1(P2A)接头。在各种实施方案中，2A可切割接头包含以下或由以下组成：ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQID NO:56)、APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:57)、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ IDNO:58)或EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQ ID NO:59)的氨基酸序列，或与ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)、APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:57)、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:58)或EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQ ID NO:59)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同的氨基酸序列。在各种实施方案中，2A可切割接头包含以下或由以下组成：ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)的氨基酸序列，或与ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同的氨基酸序列。视情况而定，在某些实施方案中，弗林蛋白酶识别/切割序列可位于2A接头的N-末端或C-末端。在一些实施方案中，可切割接头包含选自RAKR(SEQ ID NO:60)、REKR(SEQ ID NO:61)和RRKR(SEQ ID NO:62)的弗林蛋白酶识别/切割位点或由其组成。可用于链接或连接HBV核心多肽和HBV sAg多肽的例示性接头提供于表J中。
在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，例如长度不长于445、440、435、430、425、420、415或410个氨基酸。
在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：X、前核心、前S1、前S2和聚合酶。
在一些实施方案中，核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项(例如SEQ ID NO:41)或与SEQ ID NO:38-41中的任一项(SEQ ID NO:41)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。
例如用于促进、诱导或引发例如针对由HBV表达的核心和/或小表面抗原的免疫原性应答的例示性核心-sAg融合蛋白提供于表K中。
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信号或前导序列
在各种实施方案中，本文所述的免疫原性多肽包含信号序列或信号肽，例如，以引导多肽向蛋白酶体或溶酶体区室的细胞内运输。在各种实施方案中，免疫原性多肽在N-末端和/或C-末端包含信号序列。在一些实施方案中，免疫原性多肽包含N-末端信号肽或前导序列。在各种实施方式中，信号肽或前导序列来自选自血清蛋白、细胞因子、趋化因子、伴侣蛋白、不变蛋白和将蛋白引导至溶酶体区室的蛋白的源蛋白。在一些实施方案中，信号肽或前导序列来自选自以下的源蛋白：集落刺激因子2(CSF2、GM-CSF)、组织型纤溶酶原活化剂(PLAT、t-PA)、C-C基序趋化因子配体7(CCL7、MCP-3)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10、IP-10)、连环蛋白β1(CTNNB1)、CD74(p33；DHLAG；HLADG；Ia-GAMMA、不变链)、血清白蛋白(ALB)、聚泛素B/C(UBB/UBC)、钙网蛋白(CALR)、水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP-1)和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)。在各种实施方案中，信号肽或前导序列选自SEQ ID NO:67-76中的任一项、或与SEQ ID NO:67-76中的任一项至少95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。在某些实施方案中，免疫原性多肽包含分别来自LAMP-1的N-末端和C-末端信号序列，例如分别为SEQ ID NO:77和78。表L中提供了可用于本发明免疫原性多肽的例示性信号序列。
还提供了用于制备本文所述的免疫原性多肽的方法。在一些实施方案中，该方法包括使用肽合成构建免疫原性多肽。在一些实施方案中，该方法包括使用合成或重组DNA技术构建编码二价抗原的多肽中的每一者的多核苷酸并从表达载体表达该多肽。在一些实施方案中，该方法还可包括将多核苷酸插入一个或多个载体中，并在细胞中表达编码的多肽。这可采用已知的重组技术进行。
3.编码免疫原性多肽的多核苷酸
提供了编码本文所述的免疫原性多肽的多核苷酸、包含此类多核苷酸的载体以及包含此类多核苷酸或表达载体的宿主细胞(例如，人类细胞、哺乳动物细胞、酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞、细菌细胞，例如大肠杆菌)。本文提供了包含编码本文所提供的免疫原性多肽中任一种的核苷酸序列的多核苷酸，以及包含此类多核苷酸序列的表达盒和载体，例如用于在宿主细胞(例如，哺乳动物细胞)中有效表达的表达载体。在各种实施方案中，多核苷酸是DNA、cDNA、mRNA、自扩增RNA(SAM)、自复制RNA或自扩增复制子RNA(RepRNA)。在一些实施方案中，多核苷酸包含甲病毒自复制或自扩增复制子RNA(RepRNA)或由其表达。作为疫苗递送模式的自复制RNA和自扩增复制子RNA例如在以下文献中有所描述：Tews等人，MethodsMol Biol.(2017)1499:15-35；Démoulins等人，Methods Mol Biol.(2017)1499:37-75；Englezou等人，Mol Ther Nucleic Acids.(2018)12:118-134；McCollough等人，Vaccines(Basel).(2014)2(4):735-54；和McCollough等人，Mol Ther Nucleic Acids.(2014)3:e173。
术语“多核苷酸”和“核酸分子”可互换地指核苷酸的聚合形式，并且包括RNA、cDNA、基因组DNA的有义链和反义链，以及上述的合成形式和混合聚合物。如本文所用，术语“核酸分子”可与术语“多核苷酸”互换。在一些实施方案中，核苷酸是指核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或任一类型的核苷酸的修饰形式以及它们的组合。该术语还包括但不限于单链和双链形式的DNA。另外，多核苷酸例如cDNA或mRNA，可包括通过天然存在的和/或非天然存在的核苷酸键连接在一起的天然存在的和修饰的核苷酸中的一者或两者。如本领域技术人员将容易理解的，核酸分子可以是化学修饰或生物化学修饰的，或者可含有非天然或衍生的核苷酸碱基。此类修饰包括例如标记、甲基化、用类似物取代天然存在的核苷酸中的一者或多者、核苷酸间修饰诸如不带电的键(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)、带电的键(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)、侧链部分(例如，多肽)、嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)、螯合剂、烷基化物和修饰的键(例如，α异头核酸等)。上述术语还旨在包括任何拓扑构象，包括单链构象、双链构象、部分双链构象、三链构象、发夹构象、环状构象和挂锁构象。除非另外指明，否则对核酸序列的提及涵盖其互补序列。因此，对具有特定序列的核酸分子的提及应理解为涵盖其互补链及其互补序列。该术语还包括用于在期望的病毒表达载体或宿主细胞中改善表达的密码子偏好性多核苷酸。
如本文所用，“取代”表示一个或多个氨基酸或核苷酸分别被不同的氨基酸或核苷酸替换。
“分离的”核酸是指已与其天然环境的组分分离的核酸分子。分离的核酸包括包含在通常包含核酸分子的细胞中的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或存在于与其天然染色体位置不同的染色体位置。“编码免疫原性多肽的分离的核酸”是指编码此类免疫原性多肽的一种或多种核酸分子，包括单个载体或多个独立载体中的此类核酸分子，以及存在于宿主细胞中的一个或多个位置处的此类核酸分子。
如本文所用，术语多核苷酸“变体”是通常与本文具体公开的多核苷酸在一个或多个取代、缺失、添加和/或插入方面不同的多核苷酸。此类变体可以是天然存在的或可例如通过修饰本文所述的多核苷酸序列中的一者或多者并评估如本文所述的所编码的多肽的一种或多种生物活性和/或使用本领域熟知的多种技术中的任一种来合成生成。
在一些实施方案中，核酸分子具有密码子偏好性以增强在所需宿主细胞(例如，人细胞、哺乳动物细胞、酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞或细菌细胞，例如大肠杆菌细胞)中的表达。因此，提供了编码本文所述的免疫原性多肽的多核苷酸，其中多核苷酸具有密码子偏好性，包含替换异源信号序列，并且/或者消除了mRNA不稳定性元件。产生密码子偏好性核酸的方法可以通过调整在以下文献中描述的方法进行：例如美国专利号5,965,726；6,174,666；6,291,664；6,414,132；和6,794,498。用于从所需病毒表达载体和/或在所需宿主细胞中表达免疫原性多肽的优选密码子使用例如在kazusa.or.jp/codon/和genscript.com/tools/codon-frequency-table中提供。
在一些实施方案中，编码如本文所描述的免疫原性多肽的多核苷酸具有与选自由如表M中提供的SEQ ID NO:27-37和89-94组成的组的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同的核酸序列。
视情况而定，在某些实施方案中，编码本文所述的免疫原性多肽中的一种或多种的多核苷酸的3'端包含一个或多个串联终止密码子，例如两个或更多个串联TAG(“琥珀(amber)”)、TAA(“赭石(ochre)”)或TGA(“乳白(opal)”或“棕土(umber)”)终止密码子。多个串联终止密码子可以相同或不同。
还提供了包含编码如本文所述的免疫原性多肽的多核苷酸的表达盒，该多核苷酸可操作地连接到一个或多个调控序列。在一些实施方案中，多核苷酸可操作地连接到组成型启动子并在其控制下。在一些实施方案中，启动子选自巨细胞病毒主要立即早期启动子(CMV)、与鸡β-肌动蛋白启动子(CAG)融合的CMV增强子、人延伸因子-1α(HEF-1α)、小鼠巨细胞病毒(小鼠CMV)、中国仓鼠延伸因子-1α(CHEF-1α)和磷酸甘油酸激酶(PGK)。
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4.载体和宿主细胞
还提供了包含编码如本文所述的免疫原性多肽中的一种或多种的一种或多种多核苷酸的载体，或包含此类多核苷酸的表达盒。载体可以是任何类型，例如重组载体，诸如表达载体。载体包括但不限于质粒、粘粒、细菌人工染色体(BAC)和酵母人工染色体(YAC)以及衍生自噬菌体或植物或动物(包括人)病毒的载体。载体可以包括被所提出的宿主细胞识别的复制起点，并且就表达载体而言，包括启动子和被宿主细胞识别的其他调控区。在另外的实施方案中，载体包含编码本公开的一种或多种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸，该一种或多种多核苷酸可操作地连接到启动子和任选的另外的调控元件。某些载体能够在它们所引入的宿主中自主复制(例如，具有细菌复制起点的载体可以在细菌中复制)。其他载体可以在引入宿主时整合到宿主的基因组中，由此与宿主基因组一起复制。载体包括但不限于适用于重组产生本文所公开的免疫原性多肽的那些。
如本文所用，术语“载体”是指能够使与其连接的另一个核酸增殖的核酸分子。该术语包括作为自复制核酸结构的载体以及整合到已引入该载体的宿主细胞的基因组中的载体。一些载体适用于递送本申请的核酸分子或多核苷酸。某些载体能够引导与它们有效连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为表达载体。
术语“可操作地连接”是指通常物理连接并且彼此具有功能关系的两个或更多个核酸序列或多肽序列元件。例如，在核酸序列元件的上下文中，如果启动子能够引发或调控编码序列的转录或表达，则该启动子可操作地连接至编码序列，在这种情况下，该编码序列应理解为“处于该启动子的控制下”。
载体的选择取决于随后的重组程序和使用的宿主。载体向宿主细胞中的引入可通过尤其是磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、lipofectamine转染、电穿孔、病毒感染或经由如本文所述的向受试者施用来实现。载体可自主复制或可与它们所整合的染色体一起复制。在某些实施方案中，载体含有一种或多种选择标志物。标志物的选择可取决于选择的宿主细胞。这些包括但不限于，卡那霉素、新霉素、嘌呤霉素、潮霉素、zeocin、来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶基因(HSV-TK)和来自小鼠的二氢叶酸还原酶基因(dhfr)。本发明还涵盖包含一个或多个编码本文所述免疫原性多肽的核酸分子的载体，这些核酸分子可操作地连接到一个或多个编码可用于分离免疫原性多肽的蛋白质或肽的核酸分子。这些蛋白质或肽包括但不限于谷胱甘肽-S-转移酶、麦芽糖结合蛋白、金属结合多组氨酸、绿色荧光蛋白、荧光素酶和β-半乳糖苷酶。
在其他实施方案中，使用的载体是pcDNATM3.1+(赛默飞世尔科技公司(ThermoFisher,MA)。
在一些实施方案中，载体是病毒载体。视情况而定，病毒载体可以是DNA病毒或RNA病毒，包括自复制RNA病毒。自复制RNA病毒包括甲病毒，并且例如在Lundstrom,Molecules.(2018)23(12).pii:E3310(PMID:30551668)；和Ljungberg等人，Expert Rev Vaccines.(2015)14(2):177-94中有所描述。在各种实施方案中，病毒载体来自选自由以下项组成的组的病毒：腺病毒、腺相关病毒、沙粒病毒、甲病毒、自复制甲病毒、痘病毒、巨细胞病毒、弹状病毒、水泡性口炎病毒、黄病毒、马拉巴病毒和痘苗病毒。在一些实施方案中，病毒载体来自选自由以下项组成的组的病毒家族：腺病毒科(例如腺病毒、腺相关病毒)、沙粒病毒科(例如，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV))、痘病毒科(例如痘苗病毒)、疱疹病毒科(例如巨细胞病毒、疱疹病毒，例如HSV-1)、细小病毒科(例如细小病毒H1)、痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))、黄病毒科(例如黄热病毒)、呼肠孤病毒(例如呼肠孤病毒)、逆转录病毒科(例如慢病毒)、小核糖核酸病毒科(例如，柯萨奇病毒(Coxsackievirus)、塞尼卡谷病毒(Seneca Valley Virus)、脊髓灰质炎病毒(Poliovirus))、副粘病毒科(例如麻疹病毒、新城疫病毒(Newcastle disease virus)(NDV))、弹状病毒科(例如水泡性病毒，包括马拉巴水泡性病毒和水泡性口炎病毒(VSV))、披膜病毒科(VSV)(例如甲病毒，例如自复制甲病毒；辛得比斯病毒(Sindbis virus))、肠病毒科(Enteroviridae)(例如埃可病毒(Echovirus))。用于表达本发明免疫原性多肽的例示性修饰的疫苗病毒载体在例如WO2019/134049中有所描述。
在一些实施方案中，病毒表达载体是选自以下的沙粒病毒载体：淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)(NCBI:txid11623)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德病毒)(NCBI:txid2169993)、瓜纳瑞托病毒(GTOV)(NCBI:txid45219)、阿根廷哺乳动物沙粒病毒(又名胡宁病毒(JUNV))(NCBI:txid2169991)、拉沙病毒(LASV)(NCBI:txid11620)、卢约病毒(LUJV)(NCBI:txid649188)、马丘波病毒(MACV)(NCBI:txid11628)、巴西哺乳动物沙粒病毒(又名萨比亚病毒(SABV))(NCBI:txid2169992)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)(NCBI:txid46919)。在一些实施方案中，病毒表达载体是选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))的沙粒病毒载体。可用作本文所述的免疫原性多肽的递送和表达媒介物的例示性沙粒病毒载体例如在WO 2009/083210、WO 2015/183895、WO 2016/075250、WO 2017/198726和美国专利9,943,585和10,342,861中有所描述，这些专利据此全文以引用方式并入本文以用于所有目的。
在一些实施方案中，病毒表达载体是腺病毒载体，例如，来自人腺病毒或猿猴腺病毒(例如，黑猩猩腺病毒、大猩猩腺病毒或恒河猴腺病毒)。在各种实施方案中，腺病毒载体选自腺病毒血清型5(Ad5)、腺病毒血清型26(Ad26)、腺病毒血清型34(Ad34)、腺病毒血清型35(Ad35)、腺病毒血清型48(Ad48)、黑猩猩腺病毒(例如ChAdOx1、ChAdOx2、ChAd3(AdC3)、ChAd5(AdC5)、ChAd6(AdC6)、ChAd7(AdC7)、ChAd8(AdC8)、ChAd9(AdC9)、ChAd10(AdC10)、ChAd11(AdC11)、ChAd17(AdC17)、ChAd16(AdC16)、ChAd19(AdC19)、ChAd20(AdC20)、ChAd22(AdC22)、ChAd24(AdC24)、ChAdY25、ChAd26(AdC26)、ChAd28(AdC28)、ChAd30(AdC30)、ChAd31(AdC31)、ChAd37(AdC37)、ChAd38(AdC38)、ChAd43(AdC43)、ChAd44(AdC44)、ChAd55(AdC55)、ChAd63(AdC63)、ChAdV63、ChAd68(AdC68)、ChAd73(AdC73)、ChAd82(AdC82)、ChAd83(AdC83)、ChAd143(AdC143)、ChAd144(AdC144)、ChAd145(AdC145)、ChAd147(AdC147))、大猩猩腺病毒(例如GC44、GC45、GC46)和恒河猴腺病毒(例如RhAd51、RhAd52、RhAd53、RhAd54、RhAd55、RhAd56、RhAd57、RhAd58、RhAd59、RhAd60、RhAd61、RhAd62、RhAd63、RhAd64、RhAd65、RhAd66)。可用作本文所述的免疫原性多肽的递送和表达媒介物的例示性黑猩猩、大猩猩和恒河猴腺病毒载体例如在以下文献中有所描述：WO2012/172277(ChAdOx1)、WO2017/221031(ChAdOx2)、WO2019/076880；WO2019/076877；Andrabi等人(2019)Cell Reports 27:2426–2441，Guo等人，Hum Vaccin Immunother.(2018)14(7):1679-1685；Abbink等人，J Virol.(2015)89(3):1512-22；和Abbink等人，J Virol.(2018)92(6).pii:e01924-17。
在各种实施方案中，病毒表达载体不能复制(即复制缺陷性或复制缺陷型)，例如与野生型病毒载体相比具有降低或减少的复制能力(即，复制减毒型)或有复制能力。在各种实施方案中，病毒表达载体是具有二分段基因组的复制缺陷性或复制缺陷型沙粒病毒载体，例如，如WO 2009/083210和WO 2017/076988中所述。在各种实施方案中，病毒表达载体是具有三分段基因组的复制减毒型沙粒病毒载体，例如，如WO 2016/075250、WO 2017/076988和WO 2017/198726中所述。
还提供了宿主细胞，其包含如本文所述的编码免疫原性多肽中的一种或多种的一种或多种多核苷酸或表达免疫原性多肽的一种或多种载体。可以使用各种宿主细胞中的任一种。在一个实施方案中，宿主细胞是原核细胞，例如大肠杆菌。在另一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如酵母细胞、植物细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞，诸如基于中国仓鼠卵巢(CHO)或CHO来源的细胞系(例如，CHO-S、CHO DG44、ExpiCHOTM、ZFN修饰的GS-/-CHO细胞系、CHO-K1、CHO-K1a)、COS细胞、BHK细胞、NSO细胞或Bowes黑素瘤细胞。人宿主细胞的示例尤其是HeLa、911、AT1080、A549和HEK293(例如，HEK293E、HEK293F、HEK293H、HEK293T、Expi293TM)。另外，免疫原性多肽可以在酵母细胞(诸如毕赤酵母(参见例如Powers等人，J Immunol Methods.251:123-35(2001))、汉逊酵母或酿酒酵母)中表达。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，是指已经引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，包括原代转化细胞和由其衍生的后代，不考虑传代数。后代在核酸含量方面可能与亲本细胞不完全相同，而是可含有突变。本文包括与在最初转化的细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物活性的突变后代。
视情况而定，可用如本文所述的编码一种或多种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸来稳定或瞬时转染宿主细胞。视情况而定，可用如本文所述的表达一种或多种免疫原性多肽的一种或多种载体来感染宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞能够被如本文所述的表达一种或多种免疫原性多肽的一种或多种复制减毒型或有复制能力的载体感染并增殖。可用于感染和/或增殖病毒载体的例示性细胞包括但不限于BHK-21、A549、Vero和HEK293(例如，HEK293E、HEK293F、HEK293H、HEK293T、Expi293TM)细胞。在某些实施方案中，宿主细胞表达柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)，例如MDCK、Caco-2或Calu-3宿主细胞。在某些实施方案中，多核苷酸整合到宿主细胞的基因组中。
5.药物组合物/免疫原性组合物
提供了药物组合物或免疫原性组合物，其包含如本文所述的免疫原性HBV多肽中的一种或多种，或编码如本文所述的免疫原性HBV多肽中的一种或多种的多核苷酸，或包含此类多核苷酸中的一种或多种的病毒表达载体，以及药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。“药学上可接受的赋形剂”包括但不限于任何助剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、风味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂，它们已被美国食品药品监督管理局批准为可接受用于人或家畜。
通常，本文所述的药物组合物是免疫原性的。在某些实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的该一种或多种(例如两种或更多种、三种或更多种)免疫原性HBV多肽、或一种或多种(例如两种或更多种、三种或更多种)编码免疫原性HBV多肽中的一种或多种(例如两种或更多种、三种或更多种)的多核苷酸，或一种或多种(例如两种或更多种、三种或更多种)含有一种或多种(例如两种或更多种、三种或更多种)编码免疫原性HBV多肽中的一种或多种的多核苷酸的病毒表达载体。
根据本公开，各种药学上可接受的稀释剂、载剂和赋形剂以及用于制备和使用药物组合物的技术将是本领域技术人员已知的。例示性药物组合物和药学上可接受的稀释剂、载剂和赋形剂也在例如以下文献中描述：Loyd V.Allen Jr(编辑)，“Remington:TheScience and Practice of Pharmacy，”第22版，2012,Pharmaceutical Press；Brunton,Knollman and Hilal-Dandan，“Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis ofTherapeutics，”第13版，2017,McGraw-Hill Education/Medical；McNally and Hastedt(编辑)，“Protein Formulation and Delivery，”第2版，2007,CRC Press；Banga，“Therapeutic Peptides and Proteins:Formulation,Processing,and DeliverySystems，”第3版，2015,CRC Press；Lars Hovgaard,Frokjaer and van de Weert(编辑)，“Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins，”第2版，2012,CRC Press；Carpenter and Manning(编辑)，“Rational Design of Stable ProteinFormulations:Theory and Practice，”2002,Springer(Pharmaceutical Biotechnology(Book13))；Meyer(编辑)，“Therapeutic Protein Drug Products:Practical Approachesto Formulation in the Laboratory,Manufacturing,and the Clinic，”2012,WoodheadPublishing。
在某些实施方案中，多核苷酸或载体被配制成脂质纳米颗粒。例如，在免疫原性HBV多肽由自复制或自扩增RNA分子表达的一些实施方案中，自复制或自扩增RNA可被配制成脂质纳米颗粒(LNP)。如本文所用，术语“脂质纳米颗粒”是指平均直径介于约10纳米至约1000纳米之间并且包括可以溶解亲脂性分子的固体脂质核基质的一个或多个球形纳米颗粒。在某些实施方案中，脂质核由表面活性剂(例如，乳化剂)稳定，并且可以包含以下项中的一种或多种：甘油三酯(例如，三硬脂精)、甘油二酯(例如，甘油山嵛酸酯)、甘油单酯(例如，单硬脂酸甘油酯)、脂肪酸(例如，硬脂酸)、类固醇(例如，胆固醇)和蜡(例如，鲸蜡醇棕榈酸酯)，包括它们的组合。脂质纳米颗粒例如在以下文献中有所描述：Petrilli等人，CurrPharm Biotechnol.15:847-55,2014；以及美国专利号6,217,912、6,881,421、7,402,573、7,404,969、7,550,441、7,727,969、8,003,621、8,691,750、8,871,509、9,017,726、9,173,853、9,220,779、9,227,917和9,278,130，这些文献中的每一篇全文以引用方式并入。在一个实施方案中，编码本文所述的免疫原性HBV多肽中的一种或多种的自复制或自扩增的RNA分子被配制或浓缩成聚乙烯亚胺(PEI)-多聚复合物递送媒介物，例如，如Démoulins等人，Nanomedicine.(2016)4月；12(3):711-722和Démoulins等人，J Control Release.(2017)11月28日；266:256-271中所述，其可以是纳米颗粒。
在免疫原性HBV多肽由病毒表达载体表达的实施方案中，病毒表达载体可被配制用于期望的施用途径，例如，作为适于静脉内、肌内、皮下或皮内施用的等渗药学上可接受的水溶液或悬浮液。在一些实施方案中，病毒表达载体可被配制用于粘膜例如颊、鼻内、阴道内或直肠内递送。可用于本文所述的药物组合物和方法中的病毒表达载体的例示性制剂例如在以下文献中有所描述：Manfredsson和Benskey，编辑，“Viral Vectors for GeneTherapy:Methods and Protocols(Methods in Molecular Biology)，”2019,Book 1937inMethods in Molecular Biology Series,Humana Press；WO 2017/013169(formulationof Adenoviral vectors in an aqueous mixture or freeze dried composition inthe presence of amorphous sugar and low salt concentration)；和Kumru等人，JPharm Sci.(2018)11月；107(11):2764-2774(aqueous formulations buffered in Trisand containing proline,lactose,and mannitol as stabilizing additives)。沙粒病毒载体的制剂例如在WO 2009/083210、WO 2016075250和WO 2017/198726中有所描述。在某些实施方案中，病毒表达载体经由微针介导的递送来递送，例如，如Zaric等人，ExpertOpin Drug Deliv.(2017)10月；14(10):1177-1187中所述。
在一些实施方案中，每种载剂、稀释剂或赋形剂在与药物组合物的其他成分相容并且对受试者没有伤害的意义上是“可接受的”。通常，药学上可接受的载剂是水性pH缓冲液。可以用作药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂的材料的一些示例包括：水；缓冲液，例如，pKa在约6.0至约8.0范围内的缓冲液，例如，生理学上可接受的缓冲液，例如，选自磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、柠檬酸盐、马来酸盐、甘氨酸-甘氨酸、HEPES、HEPPSO、HEPPS、咪唑、BICINE、TRICINE、Tris和BIS-Tris；糖，诸如乳糖、海藻糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可油和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗盐水；汉克氏溶液、林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；氨基酸(例如，带电氨基酸，包括但不限于天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、精氨酸、赖氨酸)；以及药物制剂中所采用的其他无毒相容物质。润湿剂、乳化剂和润滑剂(诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)以及着色剂、释放剂、涂层剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
在一种特定制剂中，本文所述的沙粒病毒载体(例如，LCMV或皮钦德哺乳动物沙粒病毒载体(PICV))在等渗水溶液中配制，该等渗水溶液包含中性或接近中性pH的pKa在约6.0至约8.0范围内的生物相容性缓冲液(例如，HEPES和NaCl)和非离子表面活性剂(例如，PLURONIC F68(又名，泊洛沙姆188))。在一种特定制剂中，本文所述的沙粒病毒载体(例如，LCMV或皮钦德哺乳动物沙粒病毒载体)在包含pH7.4的HEPES缓冲液、NaCl和PLURONIC F68(又名，泊洛沙姆188)的等渗水溶液中配制。Schleiss等人(Clin Vaccine Immunol.2017年1月5日；24(1):e00300-16)描述了在pH7.4的25mM HEPES、150mM NaCl、0.01％ PLURONICF68的稀释剂中配制LCMV载体的LCMV，其可用于配制本文所述的沙粒病毒载体。在低于-60℃冷冻之前，添加最终浓度为10％的山梨糖醇。
药物组合物的制剂和递送方法通常将根据待治疗的部位和疾病进行调整。示例性制剂包括但不限于适合肠胃外施用(例如，静脉内、动脉内、肌内或皮下施用)的那些，包括封装在胶束、脂质体或药物释放胶囊中的制剂(掺在被设计用于缓慢释放的生物相容性涂层内的活性剂)；可摄取制剂；用于局部使用的制剂，诸如乳膏、软膏和凝胶；以及其他制剂，诸如吸入剂、气雾剂和喷雾剂。在一些实施方案中，药物组合物被配制用于肠胃外(例如，静脉内、皮下或口服)施用。在一些实施方案中，药物组合物被配制用于粘膜(例如，颊、鼻内、直肠内和/或阴道内)施用。
在某些实施方案中，药物组合物是无菌的。在某些实施方案中，药物组合物具有在4.5至8.5、4.5至6.5、6.5至8.5、6.0至8.0、6.5至8.5范围内的pH，或者约5.0、约5.5、约6.0、约6.5、约6.6、约6.7、约6.8、约6.9、约7.0、约7.1、约7.2、约7.3、约7.5、约8.0或约8.5的pH。在一个实施方案中，药物组合物具有240-260或250-330mOsmol/L范围内的同渗浓摩。在某些实施方案中，药物组合物是等渗或接近等渗的。
在一些实施方案中，药物组合物是液体或固体。在一些实施方案中，药物组合物包含水溶液或悬浮液。在一些实施方案中，药物组合物是冻干的或者是冷冻液体。
在一些实施方案中，药物组合物还包含一种或多种附加治疗剂，例如第二治疗剂，或第二治疗剂和第三治疗剂，用于如本文所述的联合疗法。
在某些实施方案中，药物组合物还包含佐剂。可与本文所述的免疫原性HBV多肽、编码此类免疫原性HBV多肽的多核苷酸和表达此类免疫原性HBV多肽的载体共同配制或共同施用的例示性佐剂包括但不限于细胞因子、趋化因子、免疫共刺激分子、toll样受体激动剂或免疫抑制途径的抑制剂，如本文所述并且在Li等人，Curr Issues Mol Biol.(2017)22:17-40中有所描述。可与本文所述的免疫原性HBV多肽、编码此类免疫原性HBV多肽的多核苷酸和表达此类免疫原性HBV多肽的载体共同配制或共同给药的其它佐剂包括但不限于矿物盐(例如，铝盐(例如，明矾)、磷酸钙、不完全弗氏佐剂)、脂质颗粒(例如，MF59、蜗形物(cochleates)、病毒样颗粒)、微粒(例如，病毒体(virosome)、聚乳酸(PLA)、聚[丙交酯-共乙交酯](PLG))、免疫增效剂(例如，dsRNA:Poly(I:C)、Poly-IC:LC、单磷酰脂质A(MPL)、LPS、鞭毛蛋白、咪唑喹啉类：咪喹莫特(R837)、瑞喹莫德(848)、CpG寡脱氧核苷酸(ODN)、胞壁酰二肽(MDP)、皂苷(QS-21))和粘膜佐剂(例如，霍乱毒素(CT)、不耐热肠毒素(LTK3和LTR72)、壳聚糖)。可与本文所述的免疫原性HBV多肽、编码此类免疫原性HBV多肽的多核苷酸和表达此类免疫原性HBV多肽的载体共同配制或共同施用的佐剂在Apostólico等人，JImmunol Res.(2016)2016:1459394中有所概述。
在一些实施方案中，药物组合物或免疫原性组合物包含两种或更多种免疫原性HBV多肽、两种或更多种编码此类免疫原性HBV多肽的多核苷酸、或两种或更多种表达此类免疫原性HBV多肽的载体的混合物。在一些实施方案中，药物组合物包含两种或更多种免疫原性HBV多肽、两种或更多种编码此类免疫原性HBV多肽的多核苷酸、或两种或更多种表达此类免疫原性HBV多肽的载体。
在各种实施方案中，免疫原性组合物包含编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸、或能够表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ IDNO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ IDNO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在各种实施方案中，免疫原性组合物包含编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸、或能够表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ IDNO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ IDNO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在各种实施方案中，免疫原性组合物包含编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸、或能够表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
关于免疫原性组合物中的核心-sAg融合多肽，在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4。在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。
在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90和92)或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90和92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:29或90、或与SEQ ID NO:29、89、90或92至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
在一些实施方案中，该免疫原性组合物包含第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
视情况或需要而定，HBV聚合酶多肽突变体和HBV核心-sAg融合蛋白可以在1:10至10:1范围内(例如，在1:9至9:1、1:8至8:1、1:7至7:1、1:6至6:1、1:5至5:1、1:4至4:1、1:3至3:1、1:2至2:1或1:1范围内)的比率在免疫原性组合物中提供。在各种实施方案中，可以空斑形成单位(PFU)、病灶形成单位(FFU)、感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)的单位测量比率。
在各种实施方案中，一种或多种多核苷酸是DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA。
在一些实施方案中，免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽或HBV聚合酶缺失突变多肽的多核苷酸；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码如本文所述的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸。视情况或需要而定，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体可以在1:10至10:1范围内(例如，在1:9至9:1、1:8至8:1、1:7至7:1、1:6至6:1、1:5至5:1、1:4至4:1、1:3至3:1、1:2至2:1或1:1范围内)的比率提供。
在一些实施方案中，免疫原性组合物包含每毫升在约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)范围内(例如约104至约107个病毒FFU或PFU，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp)的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体中的每一种。
在各种实施方案中，免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体独立地来自选自腺病毒科、沙粒病毒科、疱疹病毒科(例如巨细胞病毒)、痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))、黄病毒科(例如黄热病毒)、弹状病毒科(例如水泡性病毒，例如马拉巴水泡性病毒)、披膜病毒科(例如甲病毒)的分类学家族。在各种实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体可来自相同的分类学家族或来自不同的分类学家族。例如，在一些实施方案中，免疫原性组合物中第一病毒表达载体和第二病毒表达载体两者均来自腺病毒科、沙粒病毒科或痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))。
在一些实施方案中，免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体来自沙粒病毒科。在一些实施方案中，该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。在一些实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))的沙粒病毒载体。
在各种实施方案中，免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制缺陷性或复制缺陷型的。在一些实施方案中，免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制减毒型的。
6.治疗方法
还提供了在对其有需要的受试者中引发针对人乙型肝炎病毒(HBV)的免疫应答的方法。还提供了在对其有需要的受试者中治疗或预防人乙型肝炎病毒(HBV)的方法。还提供了抑制受感染个体中的HBV复制的方法。还提供了用于减少与HBV感染相关的病毒载量的方法。在各种实施方案中，该方法包括向受试者施用有效量的如本文所述的免疫原性组合物。在各种实施方案中，“受试者”或“个体”是人、土拨鼠、北京鸭、小鼠或非人类灵长类(例如，黑猩猩)。
如本文所用，“治疗(Treatment)”或“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指用于获得有益或期望结果的方法。出于本公开的目的，有益或期望的结果包括但不限于症状的减轻和/或症状程度的减弱、进展的延迟和/或预防与疾病或病症相关联的症状的恶化。“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”可包括以下中的一者或多者：a)抑制疾病或病症(例如，减少由疾病或病症引起的一种或多种症状，和/或减弱疾病或病症的程度)；b)减缓或阻止与疾病或病症相关联的一种或多种症状的发展(例如，稳定疾病或病症，延迟疾病或病症的恶化或进展)；以及c)缓解疾病或病症，例如引起临床症状的消退、改善疾病状态、延迟疾病的进展、提高生活质量和/或延长生存。
如本文所用，“延迟”是指疾病或病症的发展是指延缓、阻碍、减缓、阻滞、稳定和/或推迟疾病或病症的发展。该延迟可具有不同的时间长度，这取决于疾病的历史和/或待治疗的个体。对本领域技术人员显而易见的是，足够或显著的延迟实际上可涵盖预防，因为个体没有发展疾病或病症。
如本文所用，“预防(Prevent)”或“预防(prevention)”或“预防(preventing)”是指防止疾病或障碍发作使得疾病的临床症状不发展的方案。因此，“预防”涉及在受试者中可检测到疾病迹象之前向受试者施用疗法(例如，施用治疗物质)(例如，在受试者中不存在可检测的感染剂(例如，病毒)的情况下向受试者施用治疗物质)。受试者可以是有发展疾病或障碍的风险的个体，诸如具有已知与疾病或障碍的发展或发作相关的一个或多个风险因素的个体。因此，在某些实施方案中，术语“预防HBV感染”是指向没有可检测的HBV感染的受试者施用抗HBV治疗物质。应当理解，用于抗HBV预防性疗法的受试者可以是有感染HBV病毒的风险的个体。还应当理解，预防不需要100％的成功率。在一些情况下，预防可以理解为降低感染的风险，而不是完全消除感染的发生。
如本文所用，“治疗有效量”或“有效量”是指有效引起期望的生物学或医学应答的量，包括当向受试者施用以治疗疾病时足以实现对该疾病的此类治疗的免疫原性组合物的量。有效量将根据免疫原性组合物、待治疗受试者的疾病及其严重性以及年龄、体重等而变化。有效量可包括一系列量。有效量可为一个或多个剂量，即，可需要单剂量或多剂量以实现期望的治疗终点。在施用一种或多种治疗剂的上下文中可以考虑有效量，并且如果与一种或多种其他药剂结合，可以达到或实现期望的或有益的结果，则可以考虑以有效量给予单一药剂。任何共同施用的化合物的合适剂量可任选地由于化合物的联合作用(例如，累加或协同效应)而降低。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽或如本文所述的HBV聚合酶缺失突变多肽的多核苷酸；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码如本文所述的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。此类免疫原性组合物可在初免组合物和/或加强组合物中施用。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ IDNO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。此类免疫原性组合物可在初免组合物和/或加强组合物中施用。
关于所施用的免疫原性组合物中的核心-sAg融合多肽，在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13、或与SEQ IDNO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含编码包含以下或由以下组成的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。此类免疫原性组合物可在初免组合物和/或加强组合物中施用。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90和92)或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90和92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：
SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。此类免疫原性组合物可在初免组合物和/或加强组合物中施用。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、89、90或92、或与SEQ ID NO:29、89、90或92至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。此类免疫原性组合物可在初免组合物和/或加强组合物中施用。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体独立地来自选自腺病毒科、沙粒病毒科、疱疹病毒科(例如巨细胞病毒)、痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))、黄病毒科(例如黄热病毒)、弹状病毒科(例如水泡性病毒，例如马拉巴水泡性病毒)、披膜病毒科(例如甲病毒)的分类学家族，如上文和本文所述。在各种实施方案中，第一病毒表达载体和第二病毒表达载体可来自相同的分类学家族或来自不同的分类学家族。例如，在一些实施方案中，所施用的免疫原性组合物中第一病毒表达载体和第二病毒表达载体两者均来自腺病毒科、沙粒病毒科或痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))。
在一些实施方案中，该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自沙粒病毒科。在一些实施方案中，所施用的免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。在一些实施方案中，所施用的免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))的沙粒病毒载体。
在各种实施方案中，所施用的免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制缺陷性或复制缺陷型的。在一些实施方案中，所施用的免疫原性组合物中的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体是复制减毒型的。
在一些实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含含有第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。此类免疫原性组合物可在初免组合物和/或加强组合物中施用。
在一些实施方案中，所施用的免疫原性组合物包含含有第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体的混合物，其中：(a)该第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。此类免疫原性组合物可在初免组合物和/或加强组合物中施用。
在各种实施方案中，受试者感染了HBV病毒，疑似感染了HBV病毒，或有感染HBV病毒的风险。如本文所用，“有风险的个体”是指有发展待治疗的病症的风险的个体。“有风险”的个体可能具有或可能不具有可检测的疾病或病症，并且在本文所述的方法的治疗之前可能显示或可能不显示可检测的疾病。“有风险的”表示个体具有一种或多种所谓的风险因素，这些风险因素是与疾病或病症的发展相关的并且是本领域已知的可测量参数。具有这些风险因素中的一个或多个风险因素的个体发展疾病或病症的概率高于没有这些风险因素的个体。在各种实施方案中，受试者慢性感染了HBV，例如，感染HBV长于6个月。典型地，个体患有慢性乙型肝炎感染，尽管治疗急性感染HBV的人在本公开的范围内。因此，在一些实施方案中，受试者急性感染了HBV。在一些实施方案中，受试者共感染了丁型肝炎病毒(HDV)。
在各种实施方案中，受试者可以是无症状的。在一些实施方案中，受试者经历或表现出与HBV感染相关的症状。HBV的症状可包括例如黄疸、皮肤上可见的肿胀血管网、深色(例如，橙色或棕色)尿液、浅色粪便、发热、持久疲劳、不适、腹痛、腹液、食欲不振、恶心和呕吐。HBV慢性感染可导致一种或多种症状，包括例如肝衰竭、肝癌、肝纤维化和肝硬化。如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物的一次或多次施用可预防、延迟、缓解、减轻、抑制、逆转或消除与HBV感染相关或由其引起的一种或多种症状。
在一些实施方案中，免疫原性组合物经由选自静脉内、肌内、皮内、皮下和粘膜(例如，颊、鼻内、直肠内、阴道内)的途径施用。
在一些实施方案中，免疫原性组合物的施用剂量包含每毫升在约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)范围内(例如约104至约107个病毒FFU或PFU，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp)的第一病毒表达载体和第二病毒表达载体中的每一种。在一些实施方案中，该方法需要每隔一周(Q2W)或每月(Q4W)静脉内或肌内施用约106至约108个病毒FFU或PFU或IU或vp/施用。
在各种实施方案中，该方法包括初免-加强方案。在一些实施方案中，初免-加强方案需要在第一时间点施用初免组合物并在一个或多个后续时间点施用一种或多种加强组合物。视情况而定，该方法可能需要重复初免-加强方案一次或多次迭代。在各种实施方案中，初免组合物和一种或多种加强组合物的施用间隔至少1周且至多至少2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月。视情况而定，免疫原性组合物的剂量或给药频率可根据施用医师的判断在治疗过程中进行调整。视情况而定，可在至少约2周至3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月或更长的时间内或直到在受试者的血清或血浆中不再检测到sAg，通过多次施用来治疗受试者。
在一些实施方案中，在一次或多次施用如本文所述的一种或多种免疫原性多肽、或编码如本文所述的一种或多种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸或表达如本文所述的一种或多种免疫原性多肽的一种或多种载体、任选地与如本文所述的一种或多种附加治疗剂一起施用之后，在不存在抗病毒治疗的情况下受试者不表现出HBV的症状持续至少6个月、至少1年、至少2年、至少3年或更长时间。在一些实施方案中，在一次或多次施用如本文所述的一种或多种免疫原性多肽、或编码如本文所述的一种或多种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸或表达如本文所述的一种或多种免疫原性多肽的一种或多种载体、任选地与如本文所述的一种或多种附加治疗剂一起施用之后，在不存在抗病毒治疗的情况下在受试者的血清或血浆中不再可检测到sAg持续至少6个月，例如至少1年、至少2年、至少3年或更长时间。
视情况或需要而定，初免组合物和加强组合物可包含相同的免疫原性组合物或不同的免疫原性组合物。在各种实施方案中，初免组合物和加强组合物包含相同的一种或多种多肽和相同的表达载体(例如，病毒表达载体)。在一些实施方案中，初免组合物和加强组合物包含不同的多肽和/或不同的表达载体(例如，病毒表达载体)。例如，在一些实施方案中，初免组合物和加强组合物包含相同的一种或多种多肽和不同的表达载体(例如，来自分类学家族内不同病毒物种的病毒载体、来自不同分类学家族的病毒载体、具有不同复制能力的病毒载体)。在一些实施方案中，初免组合物和加强组合物包含不同的免疫原性多肽和相同的表达载体(例如，病毒表达载体)。
在一些实施方案中，该方法包括用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强。在一些实施方案中，初免-加强方案包括：
a)用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种多核苷酸的加强组合物加强，其中该一种或多种多核苷酸包含DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA；
b)用包含一种或多种多核苷酸的初免组合物初免，其中该一种或多种多核苷酸包含DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强；
c)用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强，其中该初免组合物中的一种或多种病毒表达载体和该加强组合物中的一种或多种病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；
d)用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的加强组合物加强，其中该初免组合物中的一种或多种复制缺陷型病毒表达载体和该加强组合物中的一种或多种复制缺陷型病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；
e)用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的加强组合物加强，其中该初免组合物中的一种或多种复制减毒型病毒表达载体和该加强组合物中的一种或多种复制减毒型病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；
f)用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的加强组合物加强；
g)用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的加强组合物加强；
h)用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强；
i)用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；
j)用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；
k)用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强；
l)用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
m)用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
n)用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
o)用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
p)用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的加强组合物加强；或
q)用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的加强组合物加强。
在一些实施方案中，该方法包括用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强。在一些实施方案中，初免-加强方案包括：
a)用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强；
b)用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；
c)用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；或
d)用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒(PICV)病毒表达载体的加强组合物加强。
在各种实施方案中，初免组合物和加强组合物包含如本文所述的免疫原性组合物。
在一些实施方案中，受试者未接受抗病毒疗法或在施用该一种或多种免疫原性组合物之前中止抗病毒疗法。在一些实施方案中，在一次或多次施用组合物之后中止抗病毒疗法。
在一些实施方案中，该治疗方法在受试者中活化靶向一个或多个HBV多肽表位的CD8+T细胞。在一些实施方案中，该治疗方法在受试者中引发结合一种或多种HBV多肽的抗体的产生。
7.联合疗法
在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种、两种、三种、四种或更多种附加治疗剂组合或共同施用。在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与两种附加治疗剂组合或共同施用。在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与三种附加治疗剂组合或共同施用。在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与四种附加治疗剂组合或共同施用。该一种、两种、三种、四种或更多种附加治疗剂可以是选自相同类别的治疗剂的不同治疗剂，并且/或者它们可选自不同类别的治疗剂。
如本文所用，“共同施用”是指在施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂之前或之后施用单位剂量的如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物。例如，在施用一种或多种附加治疗剂的数秒、数分钟或数小时内施用本文所公开的免疫原性组合物。例如，在一些实施方案中，首先施用单位剂量的本公开的免疫原性组合物，随后在数秒或数分钟内施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂。另选地，在其他实施方案中，首先施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂，随后在数秒或数分钟内施用单位剂量的本公开的免疫原性组合物。在一些实施方案中，首先施用单位剂量的如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物，随后在数小时(例如，1-12小时)之后施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂。在其他实施方案中，首先施用单位剂量的一种或多种附加治疗剂，随后在数小时(例如，1-12小时)之后施用单位剂量的如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物。
如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种附加治疗剂的共同施用通常是指同时或顺序施用本文所公开的免疫原性组合物和一种或多种附加治疗剂，使得治疗有效量的每种药剂存在于患者体内。
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与本文所述的一种或多种附加治疗剂组合或共同施用，组合物的组分作为同时或顺序方案施用。当顺序施用时，该组合可以两次或更多次施用的方式施用。
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种、两种、三种、四种或更多种选自以下的附加治疗剂组合或共同施用：HBV组合药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、HBV抗原抑制剂(例如，HBV核心抗原(HBcAg)抑制剂、HBV表面抗原(HBsAg)抑制剂、HBx抑制剂、HBV E抗原抑制剂)、抗HBV抗原抗体、靶向HBV的抑制性核酸(例如，反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、DNA引导的RNA干扰(ddRNAi))、HBsAg分泌或组装抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、免疫检查点抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、内切核酸酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂、STING激动剂、抗HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺素激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、视黄酸诱导基因1刺激剂、NOD2刺激剂、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、ZCCHC14抑制剂、三级淋巴聚集物诱导剂、核酸聚合物(例如，NAP和STOPS)、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺素α-1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、赖氨酸脱甲基酶(KDM)抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂、基因疗法和细胞疗法、基因编辑、细胞疗法、TCR-T细胞疗法和其他HBV药物。
在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物可与化学治疗剂、免疫调节剂、免疫治疗剂、治疗性抗体、治疗性疫苗、双特异性抗体和“抗体样”治疗性蛋白(诸如抗pMHC TCR样抗体、/>Fab衍生物)、抗体-药物缀合物(ADC)、靶向HBV的基因修饰物或基因编辑物(例如CRISPR-Cas(例如，Cas9、Cas12、Cascade、Cas13)、锌指核酸酶、归巢内切核酸酶、归巢大范围核酸酶(例如，ARCUS)、合成核酸酶、TALEN)、细胞疗法(例如，T-细胞、NK细胞、具有嵌合抗原受体(CAR)的巨噬细胞)和TCR-T(工程化T细胞受体)或它们的任何组合中的一者或多者组合或共同施用。
在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种、两种、三种、四种或更多种附加治疗剂组合或共同施用，例如3-双加氧酶(IDO)抑制剂、载脂蛋白A1调节剂、精氨酸酶抑制剂、B和T弱化因子抑制剂、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CD137抑制剂、CD160抑制剂、CD305抑制剂、CD4激动剂和调节剂、靶向乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的化合物、核心蛋白别构调节剂、共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、内切核酸酶调节剂、表观遗传修饰剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂、HBV DNA聚合酶抑制剂、HBV复制抑制剂、HBV RNA酶抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、HBx抑制剂、乙型肝炎大包膜蛋白调节剂、乙型肝炎大包膜蛋白刺激剂、乙型肝炎结构蛋白调节剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)分泌或组装抑制剂、乙型肝炎病毒E抗原抑制剂、乙型肝炎病毒复制抑制剂、肝炎病毒结构蛋白抑制剂、HIV-1逆转录酶抑制剂、透明质酸酶抑制剂、凋亡抑制蛋白家族蛋白(IAP)抑制剂、IL-2激动剂、IL-7激动剂、免疫调节剂、吲哚胺-2抑制剂、核糖核苷酸还原酶的抑制剂、白介素-2配体、ipi4抑制剂、赖氨酸脱甲基酶抑制剂、组蛋白脱甲基酶抑制剂、KDM1抑制剂、KDM5抑制剂、杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1抑制剂、淋巴细胞活化基因3抑制剂、淋巴毒素β受体活化剂、Axl的调节剂、B7-H3的调节剂、B7-H4的调节剂、CD160的调节剂、CD161的调节剂、CD27的调节剂、CD47的调节剂、CD70调节剂、GITR的调节剂、HEVEM的调节剂、ICOS的调节剂、Mer的调节剂、NKG2A的调节剂、NKG2D的调节剂、OX40的调节剂、SIRPα的调节剂、TIGIT的调节剂、Tim-4的调节剂、Tyro的调节剂、Na+-牛磺胆酸盐共转运多肽(NTCP)抑制剂、自然杀伤细胞受体2B4抑制剂、NOD2基因刺激剂、核蛋白抑制剂、核蛋白调节剂、OX-40受体激动剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、肽基脯氨酰异构酶抑制剂、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂、视黄酸诱导基因1刺激剂、逆转录酶抑制剂、核糖核酸酶抑制剂、RNADNA聚合酶抑制剂、SLC10A1基因抑制剂、SMAC模拟物、Src酪氨酸激酶抑制剂、干扰素基因(STING)激动剂的刺激剂、NOD1的刺激剂、T细胞表面糖蛋白CD28抑制剂、T细胞表面糖蛋白CD8调节剂、胸腺素激动剂、胸腺素α1配体、Tim-3抑制剂、TLR-3激动剂、TLR-7激动剂、TLR-9激动剂、TLR9激动剂或基因刺激剂、toll样受体(TLR)调节剂、病毒核糖核苷酸还原酶抑制剂以及它们的组合。
抑制HBV的抗病毒药物
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种抗病毒剂组合或共同施用。在一些实施方案中，该一种或多种抗病毒剂选自由以下项组成的组：拉米夫定(LAM)、阿德福韦双特戊酯(ADV)、恩替卡韦(ETV)、替比夫定(LdT)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)、富马酸替诺福韦二吡呋酯和恩曲他滨替诺福韦艾拉酚胺(TAF或VEMLIDY)以及雷迪帕韦和索非布韦/>
其他HBV药物
可组合或共同施用的用于治疗HBV的其他药物的示例包括α-羟基托酚酮、氨多索韦、安卓奎诺尔、β-羟基胞嘧啶核苷、ARB-199、CCC-0975、ccc-R08、艾夫他滨、依泽替米贝、环孢素A、龙胆苷(龙胆苦苷)、HH-003、贺普拉肽、JNJ-56136379、硝唑尼特、比瑞那帕、NJK14047、NOV-205(molixan，BAM-205)、寡核苷酸、米伏替酯、feron、GST-HG-131、左旋咪唑、Ka Shu Ning、alloferon、WS-007、Y-101(Ti Fen Tai)、rSIFN-co、PEG-IIFNm、KW-3、BP-Inter-014、石竹素、HepB-nRNA、cTP-5(rTP-5)、HSK-II-2、HEISCO-106-1、HEISCO-106、Hepbarna、IBPB-006IA、Hepuyinfen、DasKloster 0014-01、ISA-204、Jiangantai(Ganxikang)、MIV-210、OB-AI-004、PF-06、胡黄连苷、DasKloster-0039、hepulantai、IMB-2613、富马酸NCO-48、XTYW-001、SFA-001、TCM-800B、还原型谷胱甘肽、RO-6864018、ENOB-HB-01、RG-7834、QL-007索非布韦、雷迪帕韦、UB-551、PA-1010、HPN-BV1、STSG-0002和ZH-2N，以及US20150210682(Roche)、US2016/0122344(Roche)、WO2015173164、WO2016023877、US2015252057A(Roche)、WO16128335A1(Roche)、WO16120186A1(Roche)、US2016237090A(Roche)、WO16107833A1(Roche)、WO16107832A1(Roche)、US2016176899A(Roche)、WO16102438A1(Roche)、WO16012470A1(Roche)、US2016220586A(Roche)和US2015031687A(Roche)中公开的化合物。
可组合或共同施用的用于治疗HBV的组合药物的示例包括富马酸替诺福韦二吡呋酯和恩曲他滨雷迪帕韦和索非布韦/>ABX-203(NASVAC)、拉米夫定和PEG-IFNα；阿德福韦和PEG-IFNα；以及INO-1800(INO-9112和RG7944)。
HBV疫苗
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种HBV疫苗组合或共同施用。可组合或共同施用(例如，在初免-加强预防方案中)的HBV疫苗包括预防性和治疗性疫苗。HBV预防性疫苗的示例包括Vaxelis、Hexaxim、Heplisav、Mosquirix、DTwP-HBV疫苗、Bio-Hep-B、D/T/P/HBV/M(LBVP-0101；LBVW-0101)、DTwP-Hepb-Hib-IPV疫苗、HeberpentaL、DTwP-HepB-Hib、V-419、CVI-HBV-001、Tetrabhay、乙型肝炎预防疫苗(Advax Super D)、Hepatrol-07、GSK-223192A、ENGERIX重组乙型肝炎疫苗(肌内注射，KangtaiBiological Products)、重组乙型肝炎疫苗(多形汉逊(Hansenual polymorpha)酵母，肌内注射，Hualan Biological Engineering)、重组乙型肝炎表面抗原疫苗、Bimmugen、CARG-101、Euforavac、Eutravac、anrix-DTaP-IPV-Hep B、HBAI-20、Infanrix-DTaP-IPV-Hep B-Hib、Pentabio Vaksin DTP-HB-Hib、Comvac 4、Twinrix、Euvax-B、Tritanrix HB、InfanrixHep B、Comvax、DTP-Hib-HBV疫苗、DTP-HBV疫苗、Yi Tai、Heberbiovac HB、Trivac HB、GerVax、DTwP-Hep B-Hib疫苗、Bilive、Hepavax-Gene、SUPERVAX、Comvac5、Shanvac-B、Hebsulin、Recombivax HB、Revac B mcf、Revac B+、Fendrix、DTwP-HepB-Hib、DNA-001、Shan5、Shan6、rhHBsAG疫苗、HBI五价疫苗、LBVD、Infanrix HeXa、YS-HBV-001、IR-101H、TVAX-008和DTaP-rHB-Hib疫苗。
可组合或共同施用(例如，在初免-加强治疗方案中)的HBV治疗性疫苗的示例包括HBsAG-HBIG复合物、ARB-1598、Bio-Hep-B、abi-HB(静脉内)、ABX-203(NASVAC)、Tetrabhay、GX-110E、GS-4774、肽疫苗(εPA-44)、Hepatrol-07、NASVAC(NASTERAP)、IMP-321、BEVAC、Revac B mcf、Revac B+、MGN-1333、KW-2、CVI-HBV-002、AltraHepB、VGX-6200、FP-02、FP-02.2(HepTcell)、NU-500、HBVax、im/TriGrid/抗原疫苗、Mega-CD40L-佐剂疫苗、HepB-v、RG7944(INO-1800)、重组基于VLP的治疗性疫苗(HBV感染，VLP Biotech)、AdTG-17909、AdTG-17910、AdTG-18202、ChronVac-B、TG-1050、VVX-001、GSK-3528869A(ChAd155-hli-HBV+MVA-HBV+Hbc-HBs/AS01B-4)、VBI-2601、VTP-300(ChAdOx1-SIi-HBV-CPmut-TPA-Ssh初免和MVA-SIi-HBV-CPmut-TPA-Ssh加强)、Lm HBV和BM32(Tulaeva等人，EBioMedicine(2020)102953)。HBV沙粒病毒疫苗例如在WO2017076988和WO2017198726中描述。
HBV DNA聚合酶抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种聚合酶抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的HBV DNA聚合酶抑制剂的示例包括阿德福韦恩曲他滨/>富马酸替诺福韦二吡呋酯/>替诺福韦艾拉酚胺、替诺福韦、替诺福韦二吡呋酯、富马酸替诺福韦艾拉酚胺、半富马酸替诺福韦艾拉酚胺、替诺福韦双特戊酯、富马酸替诺福韦双特戊酯、替诺福韦十八烷氧基乙酯、CMX-157、替诺福韦艾克立德(tenofovir exalidex)、贝西福韦、恩替卡韦/>马来酸恩替卡韦、替比夫定/>非洛西韦、普拉德福韦、克拉夫定、利巴韦林、拉米夫定(EPIVIR-/>)、叠氮膦、泛昔洛韦、富沙林(fusolin)、美他卡韦、SNC-019754、FMCA、AGX-1009、AR-II-04-26、HIP-1302、天冬氨酸替诺福韦二吡呋酯、乳清酸替诺福韦二吡呋酯、AiB-001和HS-10234。
免疫调节剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种免疫调节剂(例如，免疫检查点抑制剂、肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族(TNFRSF)激动剂、免疫刺激剂，例如，TLR激动剂)组合或共同施用。可组合或共同施用的免疫调节剂的示例包括雷他莫德、盐酸艾咪朵尔、ingaron、德马韦(dermaVir)、必赖克瘘(羟基氯喹)、普留净、羟基脲、麦考酚酸莫酯(MPA)及其酯衍生物麦考酚酸莫酯(MMF)、JNJ-440、WF-10、AB-452、利巴韦林、IL-12、INO-9112、聚合物聚乙烯亚胺(PEI)、Gepon、VGV-1、MOR-22、CRV-431、JNJ-0535、TG-1050、ABI-H2158、BMS-936559、GS-9688、RO-7011785和对应的前药RO-702053、RG-7854、RO-6871765、AIC-649和IR-103。
Toll样受体(TLR)激动剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与toll样受体(TLR)的一种或多种激动剂或刺激剂组合或共同施用。在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与TLR的激动剂(例如TLR1(NCBI基因ID：7096)、TLR2(NCBI基因ID：7097)、TLR3(NCBI基因ID：7098)、TLR4(NCBI基因ID：7099)、TLR5(NCBI基因ID：7100)、TLR6(NCBI基因ID：10333)、TLR7(NCBI基因ID：51284)、TLR8(NCBI基因ID：51311)、TLR9(NCBI基因ID：54106)和/或TLR10(NCBI基因ID：81793)、TLR11、TLR12和TLR13)的激动剂组合或共同施用。
可组合或共同施用的TLR3激动剂的示例包括雷他莫德、聚ICLC、Apoxxim、/>IPH-33、MCT-465、MCT-475和ND-1.1。
可组合或共同施用的TLR4激动剂的示例包括G-100和GSK-1795091。
可组合或共同施用的示例TLR7激动剂包括但不限于AL-034、DSP-0509、GS-9620(维沙莫特)、LHC-165、TMX-101(咪喹莫特)、GSK-2245035、瑞喹莫德、DSR-6434、DSP-3025、IMO-4200、MCT-465、特拉莫德(telratolimod)(MEDI-9197)、3M-051、SB-9922、3M-052、Limtop、TMX-30X、TMX-202、RG-7863、RG-7854、RG-7795、RO-7011785和对应的前药RO-702053，以及US20100143301(Gilead Sciences)、US20110098248(Gilead Sciences)、andUS20090047249(Gilead Sciences)、US20140045849(Janssen)、US20140073642(Janssen)、WO2014/056953(Janssen)、WO2014/076221(Janssen)、WO2014/128189(Janssen)、US20140350031(Janssen)、WO2014/023813(Janssen)、US20080234251(Array Biopharma)、US20080306050(Array Biopharma)、US20100029585(Ventirx Pharma)、US20110092485(Ventirx Pharma)、US20110118235(Ventirx Pharma)、US20120082658(Ventirx Pharma)、US20120219615(Ventirx Pharma)、US20140066432(Ventirx Pharma)、US20140088085(Ventirx Pharma)、US20140275167(Novira Therapeutics)和US20130251673(NoviraTherapeutics)中所公开的化合物。
可组合或共同施用的示例双TLR7/TLR8激动剂是NKTR-262、特拉莫德和BDB-001。
可共同施用的示例TLR8激动剂包括但不限于E-6887、IMO-4200、IMO-8400、IMO-9200、MCT-465、特拉莫德(MEDI-9197)、莫托莫(motolimod)、瑞喹莫德、塞加莫德(selgantolimod)(GS-9688)、HRS-9950、VTX-1463、VTX-763、3M-051、3M-052、SBT6050，以及US2016289229(Gilead Sciences)、US20140045849(Janssen)、US20140073642(Janssen)、WO2014/056953(Janssen)、WO2014/076221(Janssen)、WO2014/128189(Janssen)、US20140350031(Janssen)、WO2014/023813(Janssen)、US20080234251(Array Biopharma)、US20080306050(Array Biopharma)、US20100029585(Ventirx Pharma)、US20110092485(Ventirx Pharma)、US20110118235(Ventirx Pharma)、US20120082658(Ventirx Pharma)、US20120219615(Ventirx Pharma)、US20140066432(Ventirx Pharma)、US20140088085(Ventirx Pharma)、US20140275167(Novira Therapeutics)和US20130251673(NoviraTherapeutics)、US专利号9670205(Gilead Sciences,Inc.)、US20160289229(GileadSciences,Inc.)、WO2017/048727(Gilead Sciences,Inc.)、US20180065938(GileadSciences,Inc.)和US20180086755(Gilead Sciences,Inc.)中所公开的化合物。
可组合或共同施用的示例TLR9激动剂包括但不限于AST-008、可比托莫德(cobitolimod)、CMP-001、IMO-2055、IMO-2125、S-540956、利尼莫特(litenimod)、MGN-1601、BB-001、BB-006、IMO-3100、IMO-8400、IR-103、IMO-9200、阿格托莫特(agatolimod)、DIMS-9054、DV-1079、DV-1179、AZD-1419、来非莫特(lefitolimod)(MGN-1703)、CYT-003、CYT-003-QbG10、替索托莫德(tilsotolimod)和PUL-042。
可组合或共同施用额TLR7、TLR8和TLR9调节剂的附加示例包括WO2017047769(Teika Seiyaku)、WO2015014815(Janssen)、WO2018045150(Gilead Sciences Inc)、WO2018045144(Gilead Sciences Inc)、WO2015162075(Roche)、WO2017034986(Universityof Kansas)、WO2018095426(Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd)、WO2016091698(Roche)、WO2016075661(GlaxoSmithKline Biologicals)、WO2016180743(Roche)、WO2018089695(Dynavax Technologies)、WO2016055553(Roche)、WO2015168279(Novartis)、WO2016107536(Medshine Discovery)、WO2018086593(Livo(Shanghai)Pharmaceutical)、WO2017106607(Merck)、WO2017061532(Sumitomo Dainippon Pharma)、WO2016023511(ChiaTai Tianqing Pharmaceutical)、WO2017076346(Chia Tai Tianqing Pharmaceutical)、WO2017046112(Roche)、WO2018078149(Roche)、WO2017040233(3M Co)、WO2016141092(Gilead Sciences)、WO2018049089(BristolMyers Squibb)、WO2015057655(Eisai CoLtd)、WO2017001307(Roche)、WO2018005586(BristolMyers Squibb)、WO201704023(3MCo)、WO2017163264(Council of Scientific and Industrial Research(India))、WO2018046460(GlaxoSmithKline Biologicals)、WO2018047081(Novartis)、WO2016142250(Roche)、WO2015168269(Novartis)、WO201804163(Roche)、WO2018038877(3M Co)、WO2015057659(Eisai Co Ltd)、WO2017202704(Roche)、WO2018026620(BristolMyersSquibb)、WO2016029077(Janus Biotherapeutics)、WO201803143(Merck)、WO2016096778(Roche)、WO2017190669(Shanghai De Novo Pharmatech)、US09884866(University ofMinnesota)、WO2017219931(Sichuan KelunBiotech Biopharmaceutical)、WO2018002319(Janssen Sciences)、WO2017216054(Roche)、WO2017202703(Roche)、WO2017184735(IFMTherapeutics)、WO2017184746(IFM Therapeutics)、WO2015088045(TakedaPharmaceutical)、WO2017038909(Takeda Pharmaceutical)、WO2015095780(Universityof Kansas)、WO2015023958(University of Kansas)中公开的化合物。
在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与TLR7、TLR8或TLR9激动剂组合或共同施用。
干扰素α受体配体
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种干扰素α受体配体组合或共同施用。可组合或共同施用的干扰素α受体配体的示例包括干扰素α-2b(INTRON)、聚乙二醇化干扰素α-2a/>聚乙二醇化干扰素α-1b、干扰素α-1bVeldona、Infradure、Roferon-A、YPEG-干扰素α-2a(YPEG-rhIFNα-2a)、P-1101、Algeron、Alfarona、Ingaron(干扰素γ)、rSIFN-co(重组超化合物干扰素)、Ypeg干扰素α-2b(YPEG-rhIFNα-2b)、MOR-22、聚乙二醇化干扰素α-2b(PEG-/>)、Bioferon、Novaferon、Inmutag(Inferon)、/>干扰素α-n1干扰素β-1a/>Shaferon、干扰素α-2b(Axxo)、Alfaferone、干扰素α-2b(BioGeneric Pharma)、干扰素-α2(CJ)、Laferonum、VIPEG、BLAUFERON-A、BLAUFERON-B、Intermaxα、Realdiron、Lanstion、Pegaferon、PDferon-B、干扰素α-2b(IFN，Laboratorios Bioprofarma)、α干扰素a 2b、Kalferon、Pegnano、Feronsure、PegiHep、干扰素α2b(Zydus-Cadila)、干扰素α2a、Optipeg A、Realfa 2B、Reliferon、干扰素α-2b(Amega)、干扰素α-2b(Virchow)、ropeg干扰素α-2b、rHSA-IFNα-2a(重组人血清白蛋白干扰素α2a融合蛋白)、PEG-IFN-α、rHSA-IFNα2b、重组人干扰素α-(1b,2a,2b)、聚乙二醇化干扰素α-2b(Amega)、聚乙二醇化干扰素α-2a、Reaferon-EC、Proquiferon、Uniferon、Urifron、干扰素α-2b(Changchun Institute of Biological Products)、Anterferon、Shanferon、Layfferon、上生雷泰(Shang Sheng Lei Tai)、INTEFEN、SINOGEN、Fukangtai、Pegstat、rHSA-IFNα-2b、SFR-9216和Interapo(Interapa)。
透明质酸酶抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种透明质酸酶抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的透明质酸酶抑制剂的示例包括阿特聚姆(astodrimer)。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种HBsAg抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的HBsAg抑制剂的示例包括AK-074、HBF-0259、GP-605、PBHBV-001、PBHBV-2-15、PBHBV-2-1、REP-9AC、REP-9C、REP-9、REP-2139、REP-2139-Ca、REP-2055、REP-2163、REP-2165、REP-2053、REP-2031和REP-006和REP-9AC'。可组合或共同施用的HBsAg分泌抑制剂的示例包括BM601、GST-HG-131、AB-452和ALG-010093。
亲环蛋白抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种亲环蛋白抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的亲环蛋白抑制剂的示例包括CPI-431-32、EDP-494、OCB-030、SCY-635、NVP-015、NVP-018、NVP-019、STG-175，以及US8513184(Gilead Sciences)、US20140030221(Gilead Sciences)、US20130344030(Gilead Sciences)和US20130344029(Gilead Sciences)中公开的化合物。
HBV病毒进入抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种HBV病毒进入抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的HBV病毒进入抑制剂的示例包括布列维肽(bulevirtide)(Hepcludex；米鲁德西B(myrlidex B))。
抑制性核酸
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种特异性靶向HBV多核苷酸的抑制性核酸(例如，反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、DNA引导的RNA干扰(ddRNAi))组合或共同施用。在一些实施方案中，HBV多核苷酸编码和HBV蛋白(即，位于HBV基因组内的编码区)。
靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种反义寡核苷酸组合或共同施用。可组合或共同施用的靶向病毒mRNA的反义寡核苷酸的示例包括ISIS-HBVRx、IONIS-HBVRx、IONIS-HBV-LRx、IONIS-GSK6-LRx、GSK-3389404、BNC-1701和RG-6004。
短干扰RNA(siRNA)
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种特异性靶向HBV多核苷酸的siRNA组合或共同施用。可组合或共同施用的特异性靶向HBV多核苷酸的siRNA的示例包括TKM-HBV(TKM-HepB)、ALN-HBV、SR-008、HepB-nRNA、ARC-520、ARC-521、ARB-1740、ARB-1467、AB-729、DCR-HBVS、RG-6084(PD-L1)、RG-6217、ALN-HBV-02、JNJ-3989(ARO-HBV)、STSG-0002、LUNAR-HBV和DCR-HBVS(DCR-S219)。
DNA引导的RNA干扰(ddRNAi)
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种特异性靶向HBV多核苷酸的ddRNAi组合或共同施用。可组合或共同施用的特异性靶向HBV多核苷酸的ddRNAi的示例包括BB-HB-331。
内切核酸酶调节剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种内切核酸酶调节剂组合或共同施用。可组合或共同施用的内切核酸酶调节剂的示例包括PGN-514。
核糖核苷酸还原酶抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种核糖核苷酸还原酶抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的核糖核苷酸还原酶抑制剂的示例包括曲米多克斯(Trimidox)。
非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种NNRTI组合或共同施用。可组合或共同施用的NNRTI的示例包括WO2018118826(Merck)、WO2018080903(Merck)、WO2018119013(Merck)、WO2017100108(Idenix)、WO2017027434(Merck)、WO2017007701(Merck)、WO2008005555(Gilead)中公开的化合物。
HBV复制抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种HBV复制抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的HBV复制抑制剂的示例包括GP-31502、异噻氟定(isothiafludine)、IQP-HBV、RM-5038和新加替尔(Xingantie)。
共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种cccDNA抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的cccDNA抑制剂的示例包括BSBI-25、ccc-R08和CHR-101。
法尼醇X受体(FXR)激动剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种FXR激动剂组合或共同施用。可组合或共同施用的FXR激动剂的示例包括EYP-001、希勒氟索(cilofexor)(GS-9674)、EDP-305、MET-409、曲匹氟索(Tropifexor)、AKN-083、RDX-023、BWD-100、LMB-763、INV-3、NTX-023-1、EP-024297和GS-8670。
抗HBV抗体
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种特异性结合HBV抗原(包括存在于主要组织相容性分子(MHC)分子(pMHC)中的HBV肽)的抗体组合或共同施用。可组合或共同施用的靶向乙型肝炎病毒的表面抗原的HBV抗体的示例包括冷维单抗(lenvervimab)(GC-1102)、XTL-17、XTL-19、KN-003、IV Hepabulin SN和完全人源单克隆抗体疗法(乙型肝炎病毒感染，Humabs BioMed)。可组合或共同施用的靶向HBV X蛋白(HBx)的抗体例如在Kornyeyev等人，J Virol.2019年7月30日；93(16).pii:e00248-19中有所描述。
可组合或共同施用的HBV抗体(包括单克隆抗体和多克隆抗体)的示例包括Zutectra、上生甘迪、Uman Big(乙型肝炎超免疫)、Omri-Hep-B、Nabi-HB、Hepatect CP、HepaGam B、igantibe、Niuliva、CT-P24、乙型肝炎免疫球蛋白(静脉内，pH4，HBV感染，上海RAAS血液产品)和Fovepta(BT-088)。
可组合或共同施用的完全人单克隆HBV抗体的示例包括HBC-34。
可组合或共同施用的针对HBV病毒肽/主要组织相容性复合物(MHC)I类(pMHC)复合物的抗体例如在Sastry等人，J Virol.2011年3月；85(5):1935-42和WO2011062562中有所描述。
CCR2趋化因子拮抗剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种CCR2趋化因子拮抗剂组合或共同施用。可组合或共同施用的CCR2趋化因子拮抗剂的示例包括丙帕锗(propagermanium)。
胸腺素激动剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种胸腺素激动剂(例如，重组胸腺素α-1)组合或共同施用。可组合或共同施用的胸腺素激动剂的示例包括胸腺法新(Thymalfasin)和重组胸腺素α1(GeneScience)。重组胸腺素α-1的示例包括NL-004和聚乙二醇化胸腺素α-1。
白介素受体激动剂(例如，细胞因子)
在一些实施方案中，将如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、载体、LNP和包含此类多肽或多核苷酸的免疫原性组合物与一种或多种选自IL-2、IL-7、IL-12和IL-15的白介素受体的白介素受体激动剂组合或共同施用。在一些实施方案中，将如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、载体、LNP和包含此类多肽或多核苷酸的免疫原性组合物与一种或多种选自由IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、IL-24及其变体组成的组的细胞因子组合或共同施用。可组合或共同施用的IL-2受体激动剂的示例包括白介素(阿地白介素、IL-2)；西莫白介素(celmoleukin)；聚乙二醇化IL-2(例如，NKTR-214)；IL-2的修饰变体(例如，THOR-707)、贝培阿地白介素、AIC-284、ALKS-4230、CUI-101和Neo-2/15。可组合或共同施用的IL-15受体激动剂的示例包括但不限于ALT-803、NKTR-255和hetIL-15、白介素-15/Fc融合蛋白、AM-0015、NIZ-985、SO-C101、IL-15(聚乙二醇化Il-15)、P-22339和IL-15-PD-1融合蛋白N-809。可组合或共同施用的IL-7受体激动剂的示例包括CYT-107。
核蛋白调节剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种核蛋白调节剂组合或共同施用。核蛋白调节剂可以是HBV核心蛋白或衣壳蛋白抑制剂。可组合或共同施用的核蛋白调节剂的示例包括GS-4882、AB-423、AB-836、AT-130、ALG-001075、ALG-001024、ALG-000184、EDP-514、GLS4、NVR-1221、NVR-3778、AL-3778、BAY 41-4109、甲磺酸莫非赛定(morphothiadine mesilate)、ARB-168786、ARB-880、ARB-1820、GST-HG-141、JNJ-379、JNJ-632、RG-7907、GST-HG-141、HEC-72702、KL-060332、AB-506、ABI-H0731、ABI-H3733、JNJ-440、AK-0605、HRS-5091、VNRX-9945、ABI-H2158、CB-HBV-001、AK-0605、SOC-10、SOC-11和DVR-23。
可组合或共同施用的衣壳抑制剂的示例包括ALG-000184、ABI-H0731、NVR 3-778，以及US2018161307(Gilead Sciences)、US20140275167(Novira Therapeutics)、US20130251673(Novira Therapeutics)、US20140343032(Roche)、WO2014037480(Roche)、US20130267517(Roche)、WO2014131847(Janssen)、WO2014033176(Janssen)、WO2014033170(Janssen)、WO2014033167(Janssen)、WO2015/059212(Janssen)、WO2015118057(Janssen)、WO2015011281(Janssen)、WO2014184365(Janssen)、WO2014184350(Janssen)、WO2014161888(Janssen)、WO2013096744(Novira)、US20150225355(Novira)、US20140178337(Novira)、US20150315159(Novira)、US20150197533(Novira)、US20150274652(Novira)、US20150259324(Novira)、US20150132258(Novira)、US9181288(Novira)、WO2014184350(Janssen)、WO2013144129(Roche)、WO2017198744(Roche)、US20170334882(Novira)、US20170334898(Roche)、WO2017202798(Roche)、WO2017214395(Enanta)、WO2018001944(Roche)、WO2018001952(Roche)、WO2018005881(Novira)、WO2018005883(Novira)、WO2018011100(Roche)、WO2018011160(Roche)、WO2018011162(Roche)、WO2018011163(Roche)、WO2018036941(Roche)、WO2018043747(Kyoto Univ)、US20180065929(Janssen)、WO2016168619(Indiana University)、WO2016195982(The PennState Foundation)、WO2017001655(Janssen)、WO2017048950(Assembly Biosciences)、WO2017048954(Assembly Biosciences)、WO2017048962(Assembly Biosciences)、US20170121328(Novira)、US20170121329(Novira)中公开的化合物。
可组合或共同施用的转录物抑制剂的示例包括以下专利中公开的化合物：WO2017013046(Roche)、WO2017016960(Roche)、WO2017017042(Roche)、WO2017017043(Roche)、WO2017061466(Toyoma chemicals)、WO2016177655(Roche)、WO2016161268(Enanta)、WO2017001853(Redex Pharma)、WO2017211791(Roche)、WO2017216685(Novartis)、WO2017216686(Novartis)、WO2018019297(Ginkgo Pharma)、WO2018022282(Newave Pharma)、US20180030053(Novartis)、WO2018045911(Zhejiang Pharma)。
先天免疫活化剂
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种先天免疫活化剂组合或共同施用。在各种实施方案中，该一种或多种先天免疫活化剂包括选自由以下项组成的组的受体的激动剂：fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)、干扰素基因刺激剂(STING)受体、DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名RIG-I)、含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2)。在一些实施方案中，该方法需要共同施用GS-3583和/或GS-9992。在一些实施方案中，该方法需要组合或共同施用FLT3激动剂，例如GS-3583或CDX-301。
STING激动剂、RIG-I和NOD2调节剂
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与干扰素反应cGAMP相互作用因子1刺激物(STING或STING1；NCBI基因ID：340061)激动剂组合或共同施用。在一些实施方案中，STING/STING1激动剂或活化剂选自由ADU-S100(MIW-815)、SB-11285、MK-1454、SR-8291、AdVCA0848、STINGVAX、GSK-532、SYN-STING、MSA-1、SR-8291、5,6-二甲基呫吨酮-4-醋酸(DMXAA)、环状GAMP(cGAMP)和环状二AMP组成的组。可组合或共同施用的STING激动剂的示例包括以下专利中公开的化合物：WO 2018065360(Biolog Life Science InstituteForschungslabor und Biochemica-Vertrieb GmbH,Germany)、WO 2018009466(AduroBiotech)、WO 2017186711(InvivoGen)、WO 2017161349(Immune Sensor)、WO 2017106740(Aduro Biotech)、US 20170158724(Glaxo Smithkline)、WO 2017075477(AduroBiotech)、US 20170044206(Merck)、WO 2014179760(University of California)、WO2018098203(Janssen)、WO2018118665(Merck)、WO2018118664(Merck)、WO2018100558(Takeda)、WO2018067423(Merck)、WO2018060323(Boehringer)。
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名，视黄酸诱导基因1(RIG-I)、RIG1、RIGI、RLR-1、SGMRT2；NCBI基因ID：23586)组合或共同施用。可组合或共同施用的例示性RIG-I激动剂包括伊纳吉韦吡呋酯(inarigivir soproxil)(SB-9200；GS-9992)；SB-40、SB-44、ORI-7246、ORI-9350、ORI-7537、ORI-9020、ORI-9198、ORI-7170和RGT-100。
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2；NCBI基因ID：64127)激动剂诸如伊纳吉韦吡呋酯(SB-9200；GS-9992)和IR-103组合或共同施用。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与以下项的抑制剂组合或共同施用：磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基，例如磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA、CLAPO、CLOVE、CWS5、MCAP、MCM、MCMTC、PI3K、PI3K-α、p110-α；NCBI基因ID：5290)；磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基β(PIK3CB、P110BETA、PI3K、PI3KBETA、PIK3C1；NCBI基因ID：5291)；磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基γ(PIK3CG、PI3CG、PI3K、PI3Kγ、PIK3、p110γ、p120-PI3K；基因ID：5494)；以及/或者磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基δ(PIK3CD、APDS、IMD14、P110DELTA、PI3K、p110D，NCBI基因ID：5293)。在一些实施方案中，PI3K抑制剂是泛PI3K抑制剂。PI3K抑制剂的示例包括但不限于ACP-319、AEZA-129、AMG-319、AS252424、AZD8186、BAY 1082439、BEZ235、比米利昔布(bimiralisib)(PQR309)、布帕昔布(buparlisib)(BKM120)、BYL719(艾培昔布(alpelisib))、羧胺三唑乳清酸盐(carboxyamidotriazole orotate)(CTO)、CH5132799、CLR-457、CLR-1401、考班昔布(copanlisib)(BAY 80-6946)、DS-7423、杜维昔布(duvelisib)(IPI-145)、非美诺司他(fimepinostat)(CUDC-907)、吉达昔布(gedatolisib)(PF-05212384)、GDC-0032、GDC-0084(RG7666)、GDC-0077、皮克昔布(pictilisib)(GDC-0941)、GDC-0980、GSK2636771、GSK2269577、艾迪昔布(idelalisib)INCB040093、INCB50465、IPI-443、IPI-549、KAR4141、LY294002、LY3023414、/>(来那替尼(neratinib))、奈米昔布(nemiralisib)(GSK2269557)、奥米昔布(omipalisib)(GSK2126458、GSK458)、OXY111A、帕努昔布(panulisib)(P7170、AK151761)、PA799、哌立福辛(perifosine)(KRX-0401)、皮拉昔布(Pilaralisib)(SAR245408；XL147)、甲磺酸普喹替尼(puquitinib mesylate)(XC-302)、SAR260301、塞来昔布(seletalisib)(UCB-5857)、塞拉昔布(serabelisib)(INK-1117、MLN-1117、TAK-117)、SF1126、索诺昔布(sonolisib)(PX-866)、RG7604、瑞戈替布钠(rigosertib sodium)(ON-01910钠)、RP5090、特纳昔布(tenalisib)(RP6530)、RV-1729、SRX3177、泰尼昔布(taselisib)、TG100115、温布昔布(umbralisib)(TGR-1202)、TGX221、沃塔昔布(voxtalisib)(SAR245409)、VS-5584、WX-037、X-339、X-414、XL499、XL756、渥曼青霉素(wortmannin)、ZSTK474，以及WO 2005/113556(ICOS)、WO 2013/052699(GileadCalistoga)、WO 2013/116562(Gilead Calistoga)、WO 2014/100765(Gilead Calistoga)、WO 2014/100767(Gilead Calistoga)和WO 2014/201409(Gilead Sciences)中描述的化合物。
免疫检查点调节剂
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂和/或与一种或多种刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种刺激剂、活化剂或激动剂组合或共同施用。抑制性免疫检查点的阻断或抑制可正向调节T细胞或NK细胞活化并防止感染细胞的免疫逃逸。刺激免疫检查点的活化或刺激可以增强免疫检查点抑制剂在感染性治疗中的效果。在各种实施方案中，免疫检查点蛋白或受体调节T细胞应答(例如，在Xu等人，J Exp Clin Cancer Res.(2018)37:110中综述)。在各种实施方案中，免疫检查点蛋白或受体调节NK细胞应答(例如，在Davis等人，Semin Immunol.(2017)31:64–75以及Chiossone等人，Nat Rev Immunol.(2018)18(11):671-688中综述)。
免疫检查点蛋白或受体的示例包括但不限于CD27(NCBI基因ID：939)；CD70(NCBI基因ID：970)；CD40(NCBI基因ID：958)；CD40LG(NCBI基因ID：959)；CD47(NCBI基因ID：961)；CD48(SLAMF2；NCBI基因ID：962)；含跨膜和免疫球蛋白结构域的2(TMIGD2、CD28H；NCBI基因ID：126259)；CD84(LY9B、SLAMF5)；NCBI基因ID：8832)；CD96(NCBI基因ID：10225)；CD160(NCBI基因ID：11126)；MS4A1(CD20；NCBI基因ID：931)；CD244(SLAMF4；NCBI基因ID：51744)；CD276(B7H3；NCBI基因ID：80381)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4；NCBI基因ID：79679)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA；NCBI基因ID：64115)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3；NCBI基因ID：152404)；自然杀伤细胞细胞毒性受体3配体1(NCR3LG1、B7H6；NCBI基因ID：374383)；HERV-H LTR相关2(HHLA2、B7H7；NCBI基因ID：11148)；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278；NCBI基因ID：29851)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2；NCBI基因ID：23308)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40；NCBI基因ID：7293)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L；NCBI基因ID：7292)；TNFRSF8(CD30；NCBI基因ID：943)；TNFSF8(CD30L；NCBI基因ID：944)；TNFRSF10A(CD261、DR4、TRAILR1；NCBI基因ID：8797)；TNFRSF9(CD137；NCBI基因ID：3604)；TNFSF9(CD137L；NCBI基因ID：8744)；TNFRSF10B(CD262、DR5、TRAILR2；NCBI基因ID：8795)；TNFRSF10(TRAIL；NCBI基因ID：8743)；TNFRSF14(HVEM、CD270；NCBI基因ID：8764)；TNFSF14(HVEML；NCBI基因ID：8740)；CD272(B和T淋巴细胞相关((BTLA)；NCBI基因ID：151888)；TNFRSF17(BCMA、CD269；NCBI基因ID：608)；TNFSF13B(BAFF；NCBI基因ID：10673)；TNFRSF18(GITR；NCBI基因ID：8784)；TNFSF18(GITRL；NCBI基因ID：8995)；MHC I类多肽相关序列A(MICA；NCBI基因ID：100507436)；MHC I类多肽相关序列B(MICB；NCBI基因ID：4277)；CD274(CD274、PDL1、PD-L1；NCBI基因ID：29126)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1；NCBI基因ID：5133)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152；NCBI基因ID：1493)；CD80(B7-1；NCBI基因ID：941)；CD28(NCBI基因ID：940)；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112；NCBI基因ID：5819)；CD226(DNAM-1；NCBI基因ID：10666)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155；NCBI基因ID：5817)；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R；NCBI基因ID：79037)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT；NCBI基因ID：201633)；含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域4(TIMD4；TIM4；NCBI基因ID：91937)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3；NCBI基因ID：84868)；半乳凝素9(LGALS9；NCBI基因ID：3965)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223；NCBI基因ID：3902)；信号转导淋巴细胞活化分子家族成员1(SLAMF1、SLAM、CD150；NCBI基因ID：6504)；淋巴细胞抗原9(LY9、CD229、SLAMF3；NCBI基因ID：4063)；SLAM家族成员6(SLAMF6、CD352；NCBI基因ID：114836)；SLAM家族成员7(SLAMF7、CD319；NCBI基因ID：57823)；UL16结合蛋白1(ULBP1；NCBI基因ID：80329)；UL16结合蛋白2(ULBP2；NCBI基因ID：80328)；UL16结合蛋白3(ULBP3；NCBI基因ID：79465)；视黄酸早期转录物1E(RAET1E；ULBP4；NCBI基因ID：135250)；视黄酸早期转录物1G(RAET1G；ULBP5；NCBI基因ID：353091)；视黄酸早期转录物1L(RAET1L；ULBP6；NCBI基因ID：154064)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A；NCBI基因ID：3821)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314；NCBI基因ID：22914)；杀伤细胞凝集素样受体C2(KLRC2、CD159c、NKG2C；NCBI基因ID：3822)；杀伤细胞凝集素样受体C3(KLRC3、NKG2E；NCBI基因ID：3823)；杀伤细胞凝集素样受体C4(KLRC4、NKG2F；NCBI基因ID：8302)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1；NCBI基因ID：3802)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2；NCBI基因ID：3803)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3；NCBI基因ID：3804)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1、KIR、CD158E1；NCBI基因ID：3811)(例如，利瑞鲁单抗(IPH2102/BMS-986015)、IPH-4102)；和杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1；NCBI基因ID：3824)。
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂组合或共同施用。例示性T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体包括但不限于CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1配体2(PDCD1LG2、PD-L2、CD273)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；以及杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)。在各种实施方案中，将如本文所述的试剂与一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂组合。例示性T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体包括但不限于CD27、CD70；CD40、CD40LG；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；CD244(2B4、SLAMF4)、脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)。参见例如Xu等人，J ExpClin Cancer Res.(2018)37:110。
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂组合或共同施用。例示性NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体包括但不限于杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾区1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；和杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1、CD94)。
在一些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂组合或共同施用。例示性NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体包括但不限于CD16、CD226(DNAM-1)；CD244(2B4、SLAMF4)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；SLAM家族成员7(SLAMF7)。参见例如Davis等人，SeminImmunol.(2017)31:64–75；Fang等人，Semin Immunol.(2017)31:37-54；以及Chiossone等人，Nat Rev Immunol.(2018)18(11):671-688。
细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)的抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)(CD152；NCBI基因ID：1493)的一种或多种抑制剂组合或共同施用。可共同施用的CTLA4的抑制剂的示例包括但不限于伊匹单抗、曲美木单抗、BMS-986218、AGEN1181、AGEN1884、AGEN2041、BMS-986249、MK-1308、REGN-4659、ADU-1604、CS-1002、BCD-145、APL-509、JS-007、BA-3071、ONC-392、JHL-1155、KN-044、CG-0161、ATOR-1144、PBI-5D3H5、BPI-002、贝拉西普(belatacept)、PSI-001、PRS-010、JHL-1155，以及多特异性抑制剂FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)和AK-104(CTLA4/PD-1)。
PD-L1(CD274)或PD-1(PDCD1；CD279)的抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与程序性细胞死亡1配体1(PD-L1；CD274；NCBI基因ID：29126)或程序性细胞死亡1(PD-1；PDCD1；CD279；NCBI基因ID：5133)的一种或多种抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的PD-L1(CD274)或PD-1(PDCD1)的抑制剂的示例包括但不限于赛帕利单抗(AB122)、派姆单抗、纳武单抗、西米单抗、匹地利珠单抗、AMP-224、MEDI0680(AMP-514)、斯巴达珠单抗、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗(MSB0010718C)、ASC22、度伐利尤单抗、ALN-PDL、BMS-936559、CK-301、PF-06801591、BGB-108、BGB-A317(替雷利珠单抗)、GLS-010(WBP-3055)、AK-103(HX-008)、GB-226、AK-105、CS-1003、HLX-10、MGA-012、BI-754091、PDR-001、AGEN-2034、JS-001(特瑞普利单抗)、JNJ-63723283、杰诺单抗(CBT-501)、LZM-009、BCD-100、LY-3300054、SHR-1201、SHR-1210(卡瑞利珠单抗)、Sym-021、ABBV-181、PD1-PIK、BAT-1306、RO-6084(PD-L1反义寡核苷酸)、STI-1110、GX-P2、RG-7446、mDX-400、CX-072、CBT-502、TSR-042(多塔利单抗)、MSB-2311、JTX-4014、BGB-A333、SHR-1316、CS-1001(WBP-3155)、MEDI-0680、恩沃利单抗(envafolimab)(KN-035)、KD-033、KY-1003、IBI-308(信迪利单抗)、HLX-20、KL-A167、STI-A1014、STI-A1015(IMC-001)、BCD-135、FAZ-053、TQB-2450、MDX1105-01、MSB-0010718C、GS-4224、GS-4416、INCB086550、MAX10181，以及双特异性抑制剂FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-013(PD-1/LAG-3)、FS-118(LAG-3/PD-L1)MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、RO-7121661(PD-1/TIM-3)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)、AK-104(CTLA4/PD-1)、M7824(PD-L1/TGFβ-EC结构域)、CA-170(PD-L1/VISTA)、CDX-527(CD27/PD-L1)、LY-3415244(TIM3/PDL1)、GNS-1480(表皮生长因子受体拮抗剂；程序性细胞死亡配体1抑制剂)、M-7824(PD-L1/TGF-β双功能融合蛋白)和INBRX-105(4-1BB/PDL1)。
可组合或共同施用的PD-1抑制剂的示例还包括以下专利中公开的化合物：WO2017112730(Incyte Corp)、WO2017087777(Incyte Corp)、WO2017017624、WO2014151634(BristolMyers Squibb Co)、WO201317322(BristolMyers Squibb Co)、WO2018119286(Incyte Corp)、WO2018119266(Incyte Corp)、WO2018119263(Incyte Corp)、WO2018119236(Incyte Corp)、WO2018119221(Incyte Corp)、WO2018118848(BristolMyersSquibb Co)、WO20161266460(BristolMyersSquibb Co)、WO2017087678(BristolMyersSquibb Co)、WO2016149351(BristolMyers Squibb Co)、WO2015033299(AurigeneDiscovery Technologies Ltd)、WO2015179615(Eisai Co Ltd；Eisai ResearchInstitute)、WO2017066227(BristolMyers Squibb Co)、WO2016142886(AurigeneDiscovery Technologies Ltd)、WO2016142852(Aurigene Discovery TechnologiesLtd)、WO2016142835(Aurigene Discovery Technologies Ltd；Individual)、WO2016142833(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2018085750(BristolMyersSquibb Co)、WO2015033303(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2017205464(Incyte Corp)、WO2016019232(3M Co；Individual；Texas A&M University System)、WO2015160641(BristolMyers Squibb Co)、WO2017079669(Incyte Corp)、WO2015033301(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2015034820(BristolMyers Squibb Co)、WO2018073754(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2016077518(BristolMyersSquibb Co)、WO2016057624(BristolMyers Squibb Co)、WO2018044783(Incyte Corp)、WO2016100608(BristolMyers Squibb Co)、WO2016100285(BristolMyers Squibb Co)、WO2016039749(BristolMyers Squibb Co)、WO2015019284(Cambridge Enterprise Ltd)、WO2016142894(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2015134605(BristolMyersSquibb Co)、WO2018051255(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2018051254(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2017222976(Incyte Corp)、WO2017070089(Incyte Corp)、WO2018044963(BristolMyers Squibb Co)、WO2013144704(AurigeneDiscovery Technologies Ltd)、WO2018013789(Incyte Corp)、WO2017176608(BristolMyers Squibb Co)、WO2018009505(BristolMyers Squibb Co)、WO2011161699(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2015119944(Incyte Corp；Merck Sharp&Dohme Corp)、WO2017192961(Incyte Corp)、WO2017106634(Incyte Corp)、WO2013132317(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2012168944(Aurigene DiscoveryTechnologies Ltd)、WO2015036927(Aurigene Discovery Technologies Ltd),WO2015044900(Aurigene Discovery Technologies Ltd)、WO2018026971(ArisingInternational)。
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)或CTLA4的一种或多种蛋白质(例如，抗体或其片段，或抗体模拟物)抑制剂组合或共同施用。在一些实施方案中，一种或多种免疫检查点抑制剂包括PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)或CTLA4的有机小分子抑制剂。在一些实施方案中，CD274或PDCD1的小分子抑制剂选自由GS-4224、GS-4416、INCB086550和MAX10181组成的组。小分子PD-L1抑制剂的附加示例包括美国公开号US2018305315(Gilead Sciences)、US2020017471(Gilead Sciences)和US2019270727(Gilead Sciences)中公开的那些。在一些实施方案中，CTLA4的小分子抑制剂包括BPI-002。
具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)的抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)(NCBI基因ID：201633)的一种或多种抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的示例抗TIGIT抗体包括伊替吉单抗(etigilimab)、BMS-986207、替拉格鲁单抗(tiragolumab)(又名，MTIG-7192A；RG-6058；RO 7092284)、AGEN1307、AGEN1327、AGEN1777、COM-902、IBI-939、AB154、MG1131和EOS884448(EOS-448)。
TNF受体超家族(TNFRSF)成员激动剂或活化剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与一种或多种TNF受体超家族(TNFRSF)成员的一种或多种激动剂组合或共同施用，例如以下项中的一种或多种的激动剂：TNFRSF1A(NCBI基因ID：7132)、TNFRSF1B(NCBI基因ID：7133)、TNFRSF4(OX40、CD134；NCBI基因ID：7293)、TNFRSF5(CD40；NCBI基因ID：958)、TNFRSF6(FAS，NCBI基因ID：355)、TNFRSF7(CD27，NCBI基因ID：939)、TNFRSF8(CD30，NCBI基因ID：943)、TNFRSF9(4-1BB、CD137，NCBI基因ID：3604)、TNFRSF10A(CD261、DR4、TRAILR1，NCBI基因ID：8797)、TNFRSF10B(CD262、DR5、TRAILR2，NCBI基因ID：8795)、TNFRSF10C(CD263、TRAILR3，NCBI基因ID：8794)、TNFRSF10D(CD264、TRAILR4，NCBI基因ID：8793)、TNFRSF11A(CD265、RANK，NCBI基因ID：8792)、TNFRSF11B(NCBI基因ID：4982)、TNFRSF12A(CD266，NCBI基因ID：51330)、TNFRSF13B(CD267，NCBI基因ID：23495)、TNFRSF13C(CD268，NCBI基因ID：115650)、TNFRSF16(NGFR、CD271，NCBI基因ID：4804)、TNFRSF17(BCMA、CD269，NCBI基因ID：608)、TNFRSF18(GITR、CD357，NCBI基因ID：8784)、TNFRSF19(NCBI基因ID：55504)、TNFRSF21(CD358、DR6，NCBI基因ID：27242)和TNFRSF25(DR3，NCBI基因ID：8718)。
可组合或共同施用的示例抗TNFRSF4(OX40)抗体包括但不限于MEDI6469、MEDI6383、MEDI0562(他沃立珠单抗)、MOXR0916、PF-04518600、RG-7888、GSK-3174998、INCAGN1949、BMS-986178、GBR-8383、ABBV-368，以及WO2016179517、WO2017096179、WO2017096182、WO2017096281和WO2018089628中所述的那些。
可组合或共同施用的示例抗TNFRSF5(CD40)抗体包括但不限于RG7876、SEA-CD40、APX-005M和ABBV-428。
在一些实施方案中，组合或共同施用抗TNFRSF7(CD27)抗体伐立鲁单抗(CDX-1127)。
可组合或共同施用的示例抗TNFRSF9(4-1BB、CD137)抗体包括但不限于乌瑞鲁单抗、乌托鲁单抗(PF-05082566)、AGEN-2373和ADG-106。
可组合或共同施用的示例抗TNFRSF18(GITR)抗体包括但不限于MEDI1873、FPA-154、INCAGN-1876、TRX-518、BMS-986156、MK-1248、GWN-323，以及WO2017096179、WO2017096276、WO2017096189和WO2018089628中所述的那些。在一些实施方案中，共同施用共同靶向TNFRSF4(OX40)和TNFRSF18(GITR)的抗体或其片段。此类抗体例如在WO2017096179和WO2018089628中描述。
吲哚胺-吡咯-2,3-双加氧酶(IDO1)抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1；NCBI基因ID：3620)的一种或多种抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的IDO1抑制剂的示例包括但不限于BLV-0801、艾帕卡得司他(epacadostat)、瑞明司他(resminostat)、F-001287、GBV-1012、GBV-1028、GDC-0919、因多莫得(indoximod)、NKTR-218、基于NLG-919的疫苗、PF-06840003、吡喃萘醌衍生物(SN-35837)、SBLK-200802、BMS-986205和shIDO-ST、EOS-200271、KHK-2455、LY-3381916，以及US20100015178(Incyte)、US2016137652(FlexusBiosciences,Inc.)、WO2014073738(Flexus Biosciences,Inc.)和WO2015188085(FlexusBiosciences,Inc.)中公开的化合物。
LAG-3和TIM-3抑制剂
在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与抗TIM-3抗体诸如TSR-022、LY-3321367、MBG-453、INCAGN-2390组合或共同施用。在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与抗LAG-3(淋巴细胞活化)抗体诸如瑞拉利单抗(relatlimab)(ONO-4482)、LAG-525、MK-4280、REGN-3767、INCAGN2385组合或共同施用。
凋亡抑制蛋白家族蛋白(IAP)
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与凋亡抑制蛋白家族蛋白(IAP)组合或共同施用。IAP抑制剂的示例包括APG-1387。
布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与布鲁顿酪氨酸激酶(BTK、AGMX1、AT、ATK、BPK、IGHD3、IMD1、PSCTK1、XLA；NCBI基因ID：695)的抑制剂组合或共同施用。BTK抑制剂的示例包括但不限于(S)-6-氨基-9-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-3-基)-7-(4-苯氧基苯基)-7H-嘌呤-8(9H)-酮、ABBV-105、阿卡替尼(acalabrutinib)(ACP-196)、AC-058、AC-0025、ARQ-531、BMS-986142、达沙替尼(dasatinib)、依鲁替尼(ibrutinib)(PCI-32765、CRA-032765)、GDC-0853、PRN-1008、SNS-062、BGB-3111、CB988、HM71224、KBP-7536、M-2951(伊沃替尼(evobrutinib))、M7583、替拉鲁替尼(tirabrutinib)(ONO-4059)、ML-319、MSC-2364447、PRN-1008、RDX-022、RG-7845、司培替尼(spebrutinib)(CC-292)、TAK-020、TAS-5315、TP-0158、TP-4207、维卡替尼(vecabrutinib)(SNS-062)、ARQ-531、SHR-1459、DTRMWXHS-12，以及US20140330015(Ono Pharmaceutical)、US20130079327(OnoPharmaceutical)和US20130217880(Ono Pharmaceutical)中的公开的化合物。
赖氨酸脱甲基酶(KDM)抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与赖氨酸脱甲基酶(KDM)的抑制剂组合或共同施用。可组合或共同施用的KDM5抑制剂的示例包括WO2016057924(Genentech/Constellation Pharmaceuticals)、US20140275092(Genentech/ConstellationPharmaceuticals)、US20140371195(Epitherapeutics)、US20140371214(Epitherapeutics)、US20160102096(Epitherapeutics)、US20140194469(Quanticel)、US20140171432、US20140213591(Quanticel)、US20160039808(Quanticel)、US20140275084(Quanticel)和WO2014164708(Quanticel)中公开的化合物。
可组合或共同施用的KDM1抑制剂的示例包括US9186337B2(Oryzon Genomics)中公开的化合物、GSK-2879552、RG-6016和ORY-2001。
精氨酸酶抑制剂
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与精氨酸酶抑制剂组合或共同施用。精氨酸酶抑制剂的示例包括CB-1158、C-201和Resminostat。
双特异性和三特异性自然杀伤(NK)细胞衔接物
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与双特异性NK细胞衔接物(BiKE)或三特异性NK细胞衔接物(TriKE)(例如，不具有Fc)或者抗以下项的双特异性抗体(例如，具有Fc)组合或共同施用：NK细胞活化受体(例如，CD16A)、C型凝集素受体(CD94/NKG2C、NKG2D、NKG2E/H和NKG2F)、天然细胞毒性受体(NKp30、NKp44和NKp46)、杀伤细胞C型凝集素样受体(NKp65、NKp80)、Fc受体FcγR(其介导抗体依赖性细胞毒性)、SLAM家族受体(例如，2B4、SLAM6和SLAM7)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)(KIR-2DS和KIR-3DS)、DNAM-1和CD137(41BB)。视情况而定，抗CD16结合双特异性分子可具有或可不具有Fc。可共同施用的例示性双特异性NK细胞衔接物靶向CD16和一种或多种如本文所述的HBV相关抗原。BiKE和TriKE例如在以下文献中描述：Felices等人，Methods Mol Biol.(2016)1441:333–346；Fang等人，Semin Immunol.(2017)31:37-54。
长效治疗
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与长效治疗组合或共同施用。长效恩替卡韦(皮下贮库)、长效替诺福韦(TFD和TAF)植入物(装置)或皮下贮库。长效恩替卡韦的示例在Henry等人，Eur J Pharm Sci.(2019)136:104958中有所描述。
基因疗法和细胞疗法
在各种实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与基因或细胞疗法方案组合或共同施用。基因疗法和细胞疗法包括但不限于使基因沉默的基因修饰；直接杀伤感染细胞的基因方法；免疫细胞的输注，所述免疫细胞被设计成替换大部分患者自身的免疫系统以增强对被感染细胞的免疫应答，或激活患者自身的免疫系统以杀死被感染细胞，或找到并杀死被感染细胞；修饰细胞活性的基因方法，以进一步改变针对感染的内源性免疫应答。
基因编辑物
基因组编辑系统可选自由以下项组成的组：CRISPR/Cas9系统、锌指核酸酶系统、TALEN系统、归巢内切核酸酶系统和大范围核酸酶系统(例如，ARCUS系统)；例如，经由靶向裂解进行cccDNA消除以及改变乙型肝炎病毒(HBV)病毒基因中的一种或多种。改变(例如，敲除和/或敲低)PreC、C、X、PreSI、PreS2、S、P或SP基因是指(1)减少或消除PreC、C、X、PreSI、PreS2、S、P或SP基因表达，(2)干扰前核心、核心、X蛋白、长表面蛋白、中间表面蛋白、S蛋白(也称为HBs抗原和HBsAg)、聚合酶蛋白和/或乙型肝炎剪接蛋白功能(HBe、HBc、HBx、PreS1、PreS2、S、Pol和/或HBSP，或者(3)减少或消除HBe、HBc、HBx、LHB、MHB、SHB、Pol和/或HBSP蛋白的细胞内、血清和/或实质内水平。PreC、C、X、PreSI、PreS2、S、P和/或SP基因中的一种或多种的敲低通过靶向HBV cccDNA和/或整合HBV DNA内的这些基因来进行。基因组编辑系统的附加示例包括但不限于US2019284543(Gilead Sciences)和US2019338263(Gilead Sciences)中公开的那些。
基因疗法的示例诸如肝靶向抗HBV基因疗法(使用ARCUS技术)或使用CRISPR/Cas9基因编辑技术或EBT-106(LNP递送的CRISPR/CasX核酸酶)。
CAR-T细胞疗法
CAR-T细胞疗法包括经工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫效应细胞群，其中CAR包括HBV抗原结合结构域。在某些实施方案中，抗原结合结构域是本文所公开的结构域。在某些实施方案中，抗原结合结构域不同于本文所公开的结构域。在某些实施方案中，抗原是HBsAg(即HbsAg-CART)。免疫效应细胞是T细胞或NK细胞。在某些实施方案中，T细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞或它们的组合。细胞可以是自体的或同种异体的。针对HBV的CART的示例在Kruse等人，Cytotherapy.(2018)20(5):697-705中有所描述。
TCR-T细胞疗法
TCR-T细胞疗法包括表达HBV特异性T细胞受体的T细胞。TCR-T细胞经工程化以靶向被病毒感染细胞的表面上存在的HBV来源的肽。针对HBV的TCR示例在Wisskirchen等人，JClin Invest.(2019)129(7):2932-2945中有所描述。
TCR-T细胞疗法包括表达HBV表面抗原(HBsAg)特异性TCR(诸如IMC-I109V)的T细胞。
TCR-T细胞疗法包括针对治疗HBV的TCR-T疗法，诸如LTCR-H2-1。
在另一个具体实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与HBV DNA聚合酶抑制剂、选自由以下项组成的组的一种或多种附加治疗剂组合或共同施用：免疫调节剂、TLR调节剂、HBsAg抑制剂、HBsAg分泌或组装抑制剂、HBV治疗疫苗、HBV抗体(包括靶向乙型肝炎病毒的表面抗原的HBV抗体)和双特异性抗体和“抗体样”治疗蛋白(诸如Fab衍生物或TCR样抗体)、亲环蛋白抑制剂、视黄酸诱导基因1的刺激剂、RIG-I样受体的刺激剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、精氨酸酶抑制剂、PI3K抑制剂、IDO抑制剂和NOD2的刺激剂，以及选自由以下项组成的组的一种或多种附加治疗剂：HBV病毒进入抑制剂、NTCP抑制剂、HBx抑制剂、cccDNA抑制剂、靶向乙型肝炎病毒的表面抗原的HBV抗体、siRNA、miRNA基因治疗剂、sshRNA、KDM5抑制剂和核蛋白调节剂(HBV核心蛋白或衣壳蛋白调节剂)。
在另一个具体实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与选自由以下项组成的组的至少第二附加治疗剂组合或共同施用：HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、TLR调节剂、HBsAg抑制剂、HBV治疗疫苗、HBV抗体(包括靶向乙型肝炎病毒的表面抗原的HBV抗体)和双特异性抗体和“抗体样”治疗蛋白(诸如抗pMHC TCR样抗体、Fab衍生物或TCR样抗体)、亲环蛋白抑制剂、视黄酸诱导基因1的刺激剂、RIG-I样受体的刺激剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、精氨酸酶抑制剂、PI3K抑制剂、IDO抑制剂和NOD2的刺激剂。
在另一个具体实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与选自由以下项组成的组的至少第二附加治疗剂组合或共同施用：HBV DNA聚合酶抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、NTCP抑制剂、HBx抑制剂、cccDNA抑制剂、靶向乙型肝炎病毒的表面抗原的HBV抗体、siRNA、miRNA基因治疗剂、sshRNA、KDM5抑制剂和核蛋白调节剂(HBV核心蛋白或衣壳蛋白调节剂)。
在具体实施方案，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与诸如以下文献中公开的那些化合物组合或共同施用：美国公开号2010/0143301(Gilead Sciences)、美国公开号2011/0098248(Gilead Sciences)、美国公开号2009/0047249(Gilead Sciences)、美国专利号8722054(Gilead Sciences)、美国公开号2014/0045849(Janssen)、美国公开号2014/0073642(Janssen)、WO2014/056953(Janssen)、WO2014/076221(Janssen)、WO2014/128189(Janssen)、美国公开号2014/0350031(Janssen)、WO2014/023813(Janssen)、美国公开号2008/0234251(Array Biopharma)、美国公开号2008/0306050(Array Biopharma)、美国公开号2010/0029585(Ventirx Pharma)、美国公开号2011/0092485(Ventirx Pharma)、US2011/0118235(Ventirx Pharma)、美国公开号2012/0082658(Ventirx Pharma)、美国公开号2012/0219615(Ventirx Pharma)、美国公开号2014/0066432(Ventirx Pharma)、美国公开号2014/0088085(Ventirx Pharma)、美国公开号2014/0275167(NoviraTherapeutics)、美国公开号2013/0251673(Novira Therapeutics)、美国专利号8513184(Gilead Sciences)、美国公开号2014/0030221(Gilead Sciences)、美国公开号2013/0344030(Gilead Sciences)、美国公开号2013/0344029(Gilead Sciences)、US20140275167(Novira Therapeutics)、US20130251673(Novira Therapeutics)、美国公开号2014/0343032(Roche)、WO2014037480(Roche)、美国公开号2013/0267517(Roche)、WO2014131847(Janssen)、WO2014033176(Janssen)、WO2014033170(Janssen)、WO2014033167(Janssen)、WO2015/059212(Janssen)、WO2015118057(Janssen)、WO2015011281(Janssen)、WO2014184365(Janssen)、WO2014184350(Janssen)、WO2014161888(Janssen)、WO2013096744(Novira)、US20150225355(Novira)、US20140178337(Novira)、US20150315159(Novira)、US20150197533(Novira)、US20150274652(Novira)、US20150259324(Novira)、US20150132258(Novira)、US9181288(Novira)、WO2014184350(Janssen)、WO2013144129(Roche)、US20100015178(Incyte)、US2016137652(Flexus Biosciences,Inc.)、WO2014073738(Flexus Biosciences,Inc.)、WO2015188085(Flexus Biosciences,Inc.)、美国公开号2014/0330015(OnoPharmaceutical)、美国公开号2013/0079327(Ono Pharmaceutical)、美国公开号2013/0217880(Ono pharmaceutical)、WO2016057924(Genentech/ConstellationPharmaceuticals)、US20140275092(Genentech/Constellation Pharmaceuticals)、US20140371195(Epitherapeutics)和US20140371214(Epitherapeutics)、US20160102096(Epitherapeutics)、US20140194469(Quanticel)、US20140171432、US20140213591(Quanticel)、US20160039808(Quanticel)、US20140275084(Quanticel)、WO2014164708(Quanticel)、US9186337B2(Oryzon Genomics)和用于治疗HBV的其他药物以及它们的组合。
在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与5mg-30mg富马酸替诺福韦艾拉酚胺、半富马酸替诺福韦艾拉酚胺或替诺福韦艾拉酚胺组合或共同施用。在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与5mg-10mg、5mg-15mg、5mg-20mg、5mg-25mg、25mg-30mg、20mg-30mg、15mg-30mg、或10mg-30mg富马酸替诺福韦艾拉酚胺、半富马酸替诺福韦艾拉酚胺或替诺福韦艾拉酚胺组合或共同施用。在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与10mg富马酸替诺福韦艾拉酚胺、半富马酸替诺福韦艾拉酚胺或替诺福韦艾拉酚胺组合或共同施用。在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与25mg富马酸替诺福韦艾拉酚胺、半富马酸替诺福韦艾拉酚胺或替诺福韦艾拉酚胺组合或共同施用。可将如本文所公开的药剂以任何剂量的化合物(例如，50mg至500mg的化合物)与如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物组合，如同具体地和单独地列出剂量的每种组合一样。
在某些实施方案中，如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物与100mg-400mg富马酸替诺福韦二吡呋酯、半富马酸替诺福韦二吡呋酯或替诺福韦二吡呋酯组合或共同施用。在某些实施方案中，将本文所公开的药剂或其药学上可接受的盐与100mg-150mg、100mg-200mg、100mg-250mg、100mg-300mg、100mg-350mg、150mg-200mg、150mg-250mg、150mg-300mg、150mg-350mg、150mg-400mg、200mg-250mg、200mg-300mg、200mg-350mg、200mg-400mg、250mg-350mg、250mg-400mg、350mg-400mg或300mg-400mg富马酸替诺福韦二吡呋酯、半富马酸替诺福韦二吡呋酯或替诺福韦二吡呋酯组合。在某些实施方案中，将本文所公开的药剂或其药学上可接受的盐与300mg富马酸替诺福韦二吡呋酯、半富马酸替诺福韦二吡呋酯或替诺福韦二吡呋酯组合。在某些实施方案中，将本文所公开的药剂或其药学上可接受的盐与250mg富马酸替诺福韦二吡呋酯、半富马酸替诺福韦二吡呋酯或替诺福韦二吡呋酯组合。在某些实施方案中，将本文的药剂或其药学上可接受的盐与150mg富马酸替诺福韦二吡呋酯、半富马酸替诺福韦二吡呋酯或替诺福韦二吡呋酯组合。可将如本文所公开的药剂以任何剂量的化合物(例如，50mg至500mg的化合物)与如本文所述的免疫原性多肽、编码此类多肽的多核苷酸、包含此类多肽或多核苷酸的载体、LNP和免疫原性组合物组合，如同具体地和单独地列出剂量的每种组合一样。
8.试剂盒
还提供了一种试剂盒，其包括一个或多个整体剂量的如本文所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种、HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种、核心-sAg融合蛋白中的一种或多种、一种或多种多核苷酸、一种或多种载体或一种或多种免疫原性组合物。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的本文所述的截短的HBV聚合酶多肽、HBV聚合酶缺失突变多肽、核心-sAg融合蛋白、多核苷酸、载体或免疫原性组合物中的一者或多者。
在各种实施方案中，视情况或需要而定，一个或多个整体剂量可在单个容器中或在两个或更多个单独的容器中。在各种实施方案中，该一个或多个容器可选自由以下项组成的组：小瓶、安瓿和预载注射器。
在一些实施方案中，该一个或多个容器包括水溶液中的一种或多种多肽、一种或多种多核苷酸、一种或多种载体或一种或多种免疫原性组合物。在一些实施方案中，该一个或多个容器包括作为冻干制剂的一种或多种多肽、一种或多种多核苷酸、一种或多种载体或一种或多种免疫原性组合物。
视情况或需要而定，该一个或多个整体剂量可相同或不同。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的一种或多种能够表达免疫原性多肽的病毒载体。在包括病毒载体的试剂盒中，整体剂量可在约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)的范围内，例如约104至约107个病毒FFU或PFU，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp。
在各种实施方案中，试剂盒包括编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸，或能够表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体，或包含两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ IDNO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ IDNO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在各种实施方案中，试剂盒包括编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸，或能够表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体，或包含两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ IDNO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ IDNO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
在各种实施方案中，试剂盒包括编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸，或能够表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体，或包含两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，这些免疫原性多肽包含：(a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ IDNO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和(b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
关于试剂盒中的核心-sAg融合多肽(例如，可由载体表达；在免疫原性组合物中)，在一些实施方案中，核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQID NO:66。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。在一些实施方案中，核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中位置编号参考SEQ ID NO:41。
在一些实施方案中，试剂盒包括第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90和92)或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项(例如SEQ ID NO:29、89、90和92)至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
在一些实施方案中，试剂盒包括第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：(a)该第一病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、89、90或92、或与SEQ ID NO:29、89、90或92至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
在一些实施方案中，试剂盒包括：(a)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体包含复制缺陷型或复制缺陷性卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))；和(b)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体包含复制缺陷型或复制缺陷性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)。
在一些实施方案中，试剂盒包括(a)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自腺病毒科；和(b)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))。
在一些实施方案中，试剂盒包括(a)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自沙粒病毒科；和(b)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自腺病毒科。
在一些实施方案中，试剂盒包括(a)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自沙粒病毒科；和(b)一个或多个整体剂量的如上文和本文所述的免疫原性组合物，其中该第一病毒表达载体和该第二病毒表达载体来自痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))。
在一些实施方案中，试剂盒包括第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
在一些实施方案中，试剂盒包括第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：(a)该第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且(b)该第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，该多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
在各种实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的一种或多种附加治疗剂。
例如，在一些实施方案中，试剂盒包括一种或多种Toll样受体(TLR)的一种或多种激动剂或活化剂。在各种实施方案中，TLR激动剂或活化剂选自由TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂组成的组。在一些实施方案中，TLR7激动剂选自由GS 9620(维沙莫特)、R848(瑞喹莫德)、DS-0509、LHC-165和TMX-101(咪喹莫特)组成的组，并且/或者其中TLR8激动剂选自由GS-9688、R848(瑞喹莫德)和NKTR-262(双TLR7/TLR8激动剂)组成的组。
在一些实施方案中，试剂盒包括选自IL-2、IL-7、IL-12和IL-15的白介素受体的一种或多种白介素受体激动剂。在一些实施方案中，试剂盒包括选自由以下项组成的组的一种或多种细胞因子：IL-2、IL-7、IL-12、IL-15以及它们的变体。
在一些实施方案中，试剂盒包括一种或多种先天免疫活化剂。在各种实施方案中，该一种或多种先天免疫活化剂包括选自由以下项组成的组的受体的激动剂：fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)、干扰素基因刺激剂(STING)受体、DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名RIG-I)、含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2)。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的GS-3583和/或GS-9992。
在一些实施方案中，试剂盒包括抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种拮抗剂或抑制剂和/或刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种活化剂或激动剂。在各种实施方案中，一种或多种免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：CD27、CD70；CD40、CD40LG；CD47、CD48(SLAMF2)、含跨膜和免疫球蛋白结构域的2(TMIGD2、CD28H)、CD84(LY9B、SLAMF5)、CD96、CD160、MS4A1(CD20)、CD244(SLAMF4)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；自然杀伤细胞细胞毒性受体3配体1(NCR3LG1、B7H6)；HERV-H LTR相关2(HHLA2、B7H7)；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF8(CD30)、TNFSF8(CD30L)；TNFRSF10A(CD261、DR4、TRAILR1)、TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF10B(CD262、DR5、TRAILR2)、TNFRSF10(TRAIL)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；TNFRSF17(BCMA、CD269)、TNFSF13B(BAFF)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；MHC I类多肽相关序列A(MICA)；MHC I类多肽相关序列B(MICB)；CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域4(TIMD4；TIM4)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；信号转导淋巴细胞活化分子家族成员1(SLAMF1、SLAM、CD150)；淋巴细胞抗原9(LY9、CD229、SLAMF3)；SLAM家族成员6(SLAMF6、CD352)；SLAM家族成员7(SLAMF7、CD319)；UL16结合蛋白1(ULBP1)；UL16结合蛋白2(ULBP2)；UL16结合蛋白3(ULBP3)；视黄酸早期转录物1E(RAET1E；ULBP4)；视黄酸早期转录物1G(RAET1G；ULBP5)；视黄酸早期转录物1L(RAET1L；ULBP6)；淋巴细胞活化3(CD223)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；杀伤细胞凝集素样受体C2(KLRC2、CD159c、NKG2C)；杀伤细胞凝集素样受体C3(KLRC3、NKG2E)；杀伤细胞凝集素样受体C4(KLRC4、NKG2F)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。
在一些实施方案中，试剂盒包括一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。在各种实施方案中，一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的阻断剂或抑制剂选自由以下项组成的组：CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1配体2(PDCD1LG2、PD-L2、CD273)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；以及杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)。
在一些实施方案中，试剂盒包括一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。在各种实施方案中，一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的激动剂或活化剂选自由以下项组成的组：CD27、CD70；CD40、CD40LG；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)。在一些实施方案中，试剂盒包括一个或多个整体剂量的AGEN-2373和/或AGEN-1223。
在一些实施方案中，试剂盒包括一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。在各种实施方案中，NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；和杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1、CD94)。
在一些实施方案中，试剂盒包括一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。在各种实施方案中，NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体选自：CD16、CD226(DNAM-1)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。
在试剂盒的各种实施方案中，该一种或多种免疫检查点抑制剂包括PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)或CTLA4的蛋白质抑制剂。在一些实施方案中，CTLA4的蛋白质抑制剂选自由以下项组成的组：伊匹单抗、曲美木单抗、BMS-986218、AGEN1181、AGEN1884、BMS-986249、MK-1308、REGN-4659、ADU-1604、CS-1002、BCD-145、APL-509、JS-007、BA-3071、ONC-392、AGEN-2041、JHL-1155、KN-044、CG-0161、ATOR-1144、PBI-5D3H5、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)和AK-104(CTLA4/PD-1)。在一些实施方案中，PD-L1(CD274)或PD-1(PDCD1)的蛋白质抑制剂选自由以下项组成的组：赛帕利单抗(AB122)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米单抗(cemiplimab)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、AMP-224、MEDI0680(AMP-514)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、阿替利珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、ASC22、度伐利尤单抗(durvalumab)、BMS-936559、CK-301、PF-06801591、BGB-A317(替雷利珠单抗(tislelizumab))、GLS-010(WBP-3055)、AK-103(HX-008)、AK-105、CS-1003、HLX-10、MGA-012、BI-754091、AGEN-2034、JS-001(特瑞普利单抗(toripalimab))、JNJ-63723283、杰诺单抗(genolimzumab)(CBT-501)、LZM-009、BCD-100、LY-3300054、SHR-1201、SHR-1210(卡瑞利珠单抗(camrelizumab))、Sym-021、ABBV-181、PD1-PIK、BAT-1306(MSB0010718C)、CX-072、CBT-502、TSR-042(多塔利单抗(dostarlimab))、MSB-2311、JTX-4014、BGB-A333、SHR-1316、CS-1001(WBP-3155、KN-035、IBI-308(信迪利单抗(sintilimab))、HLX-20、KL-A167、STI-A1014、STI-A1015(IMC-001)、BCD-135、FAZ-053、TQB-2450、MDX1105-01、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-013(PD-1/LAG-3)、FS-118(LAG-3/PD-L1)MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、RO-7121661(PD-1/TIM-3)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)、AK-104(CTLA4/PD-1)、M7824(PD-L1/TGFβ-EC结构域)、CA-170(PD-L1/VISTA)、CDX-527(CD27/PD-L1)、LY-3415244(TIM3/PDL1)和INBRX-105(4-1BB/PDL1)。在一些实施方案中，一种或多种免疫检查点抑制剂包含CD274(PDL1、PD-L1)、程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)或CTLA4的小分子抑制剂。在一些实施方案中，CD274或PDCD1的小分子抑制剂选自由GS-4224、GS-4416、INCB086550和MAX10181组成的组。在一些实施方案中，CTLA4的小分子抑制剂包括BPI-002。
在各种实施方案中，试剂盒包括一种或多种抗病毒剂。可在试剂盒中的例示性抗病毒剂包括拉米夫定(LAM)、阿德福韦双特戊酯(ADV)、恩替卡韦(ETV)、替比夫定(LdT)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)、替诺福韦艾拉酚胺(TAF或)和雷迪帕韦+索非布韦/>在一些实施方案中，试剂盒包括一种或多种选自由以下项组成的组的治疗剂：HBV抗原抑制剂(例如，HBV核心抗原(HBcAg)抑制剂、HBV表面抗原(HBsAg)抑制剂、HBx抑制剂、HBV E抗原抑制剂)、抗HBV抗原抗体、靶向HBV的抑制性核酸(例如，反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、DNA引导的RNA干扰(ddRNAi))、靶向HBV的基因编辑物(例如，CRISPR-Cas(例如Cas9、Cas12、Cascade、Cas13)、锌指核酸酶、归巢核酸内切酶、归巢大范围核酸酶(例如，ARCUS)、合成核酸酶、TALEN)、共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂和HBsAg分泌或组装抑制剂和HBV病毒进入抑制剂。
任选地与此类容器相关联的可以是管理药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构所规定形式的通知，该通知反映了该机构批准用于人施用的制造、使用或销售。
实施例
提供以下实施例以说明而非限制受权利要求书保护的本发明。
实施例1
诱导强基因型交叉反应性T细胞应答的HBV sAg序列的鉴定
在本实施例中，我们在基因型A、B、C和D中鉴定了HBV sAg的近共有的天然存在序列，产生了编码每种抗原的5型腺病毒载体，并测试了在远系繁殖小鼠中由这些载体中的每一种诱导的T细胞的量值和基因型交叉反应性。
近共有的天然存在的HBV sAg序列的选择。在选择用于治疗性疫苗接种的HBV sAg的特定氨基酸序列时，我们寻找既有效表达又加工用于抗原呈递，同时还诱导在广泛范围的HBV基因型中反应的T细胞应答的sAg序列。尽管共有序列或嵌合抗原可被设计成试图改善T细胞基因型反应性，但此类序列在自然界中不存在，并且具有低效表达或不良地加工成T细胞表位的风险。因此，我们从基因型(GT)A、B、C和D中鉴定了近共有的天然存在的HBVsAg序列。使用来自14207名感染这些HBV基因型的个体的sAg序列的数据库，我们构建了每个基因型的共有序列，然后鉴定了最接近每个基因型共有序列的天然存在的sAg序列。HBV基因型A、B、C和D的天然存在的、近共有的sAg序列在表1中分别提供为SEQ ID NO:1-4。
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方法
为了评价每种抗原的免疫原性和评估体内诱导的T细胞跨广泛表位的基因型交叉反应性，使用来自Jackson Laboratories的多样性远系繁殖小鼠(DO小鼠)进行疫苗接种。通过160个协同杂交重组近亲繁殖小鼠品系的随机远交交配来开发DO小鼠，并且通过避免同胞之间的杂交的连续随机交配来维持集落。DO亲本系，即协同杂交品系，是通过杂交八个独特且遗传多样性的近亲繁殖小鼠品系(A/J、C57BL/6J、129S1/SvImJ、NOD/ShiLtJ、NZO/HlLtJ、CAST/EiJ、PWK/PhJ和WSB/EiJ)来开发的。因此，DO小鼠捕获了在高度遗传多样性群体中存在的表位选择和T细胞应答的量值的多样性。
结果
HBV sAg的所有四种天然存在的、近共有序列在DO小鼠中均具有强免疫原性(图1)。诱导的T细胞与GT-A、B、C和D HBV sAg肽反应，具有大致相等的量值，证明T细胞应答的优异基因型交叉反应性。GT-C和GT-D sAg的几何平均应答量值最大。
实施例2
诱导强基因型交叉反应性T细胞应答的HBV核心和pol序列的鉴定
在本实施例中，我们在基因型A、B、C和D中鉴定了HBV核心和HBV聚合酶(Pol)的近共有的天然存在序列，产生了编码pol抗原或核心-Pol融合蛋白的5型腺病毒表达载体，并测试了在近亲繁殖和远系繁殖动物中诱导的T细胞的量值和基因型交叉反应性。
近共有的天然存在的HBV核心和Pol序列的选择。在选择用于治疗性疫苗接种的HBV核心和pol抗原的特定氨基酸序列时，我们寻找既有效表达又加工用于抗原呈递，同时还诱导在广泛范围的HBV基因型中反应的T细胞应答的核心和pol序列。尽管共有序列或嵌合抗原可被设计成试图改善T细胞基因型反应性，但此类序列在自然界中不存在，并且具有低效表达或不良地加工成T细胞表位的风险。因此，我们从基因型A、B、C和D中鉴定了近共有的天然存在的HBV核心和pol序列。使用来自5528名感染HBV基因型A-D的个体的核心序列和来自4713名感染HBV基因型A-D的个体的pol序列的数据库，我们构建了每个基因型的核心和pol共有序列，然后鉴定了最接近每个基因型共有序列的天然存在的核心和pol序列。
然后修饰GT-A、B、C和D pol序列以改善抗原性能。聚合酶的酶活性在过表达时可诱导毒性，因此逆转录酶(RT)和RNA酶H(RNH)结构域的酶活性被催化结构域中的突变消除。RT中的YMDD基序突变为YMHD，并且RNH中的AELL基序突变为AHLL(Radziwill等人，J Virol.(1990)64(2):613-20)。所得Pol序列被称为Polmut。HBV基因型A、B、C和D的Polmut序列在表2中分别提供为SEQ ID NO:52-55。
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然后进一步修饰Polmut序列以去除在HBV菌株和基因型中保守性差的氨基酸区域，以产生不同长度的Pol序列以适应对所编码的抗原大小具有不同限制的病毒载体，并产生核心-Pol融合体以编码具有单个开放阅读框的两种抗原。Pol由四个功能结构域即末端蛋白(TP)、间隔区、RT和RNH组成。其中这三者TP、RT和RNH在HBV菌株和基因型中高度保守，因此可能诱导菌株和基因型交叉反应性T细胞，而间隔区结构域是高度可变的。我们产生了在间隔区区域中具有缺失的GT-A、B、C和D Pol序列。在命名为PolΔ1的一组序列中，缺失基于先前报道的保留体外酶功能的缺失突变体，指示缺失不破坏剩余蛋白质的表达、结构和折叠(Radziwill等人，J Virol.(1990)64(2):613-20)。在命名为PolΔ3的第二组载体中，通过序列比对鉴定了整个保守性差的区域并将其缺失。通过将近共有核心序列与GT-A、B、C和D的Polmut、PolΔ1和PolΔ3序列融合产生核心-Pol融合体。最后，为了适应具有较小包装限制的病毒载体，我们构建了每个近共有失活Pol序列的更短版本，命名为Pol300。Pol300变体具有大的N-末端缺失，其中整个TP和大部分间隔区结构域被去除，但保留RT和RNA酶H结构域(Lanford等人，J Virol.(1999)；73(3):1885-93)。在腺病毒或沙粒病毒载体中测试的含Pol的抗原序列的列表示于表3和图2中。从每个Pol缺失构建体去除的氨基酸的序列在SEQID NO:42-51中提供。
方法
最初在C57BL/6小鼠中测试每种GT-A、B、C和D核心-Pol融合构建体的免疫原性，以诱导与GT-D核心和Pol肽池反应的T细胞应答，以鉴定在每个基因型内诱导最大免疫原性应答的变体(图3)。在所有基因型中，检测到强Pol应答，但核心应答较弱或不存在。弱或不存在核心应答可能是由于已知C57BL/6小鼠仅应答来自GT-D HBV核心的单一肽，即MGLKFRQL(Chiale等人，Antiviral Res.2019年8月；168:156-167)。在C57BL/6小鼠中对该肽的应答通常弱或不存在，并且该肽在MGLKIRQL的GT-A、B和C核心序列中具有替代序列。
结果
所有抗原基因型在核心-Polmut与核心-PolΔ1之间显示很小的免疫原性变化。GT-A抗原对核心-PolΔ3的应答比对核心-Polmut和核心-PolΔ1的应答增加，而GT-B、C和D均证实被核心-PolΔ3降低了免疫原性。
近亲繁殖小鼠品系中的T细胞应答对于比较不同基因型之间的抗原免疫原性不是理想的，因为应答可由一个或几个表位主导，这些表位在抗原之间的序列中可不同。为了更好地比较核心-Pol抗原跨基因型的免疫原性，在DO小鼠中测试免疫原性以捕获跨宽泛的表位范围的应答。将DO小鼠用GT-A核心-PolΔ3或GT-B、C或D核心-PolΔ1免疫，并使用GT-A和GT-D肽池评估T细胞应答的IFN-γELISPOT应答(图4)。GT-B核心-PolΔ1给出对Pol的最佳总体应答，具有对GT-A和GT-D肽池的同样强的ELISPOT应答(图4A)。对GT-B核心-PolΔ1的pol应答在统计学上显著高于对GT-A核心-PolΔ3(使用GT-D肽)和对GT-C核心-PolΔ1(使用两种肽基因型)的应答。对GT-D核心-PolΔ1的几何平均Pol ELISPOT应答在数值上低于GT-B核心-PolΔ1，但该差异在统计学上不显著。对于所有四种抗原基因型，在DO小鼠中明显可检测到对核心的应答(图4B)。核心应答的模式与Pol应答相似，用GT-B核心-PolΔ1产生总体最佳结果，尽管对于核心，抗原基因型之间没有比较达到统计学显著性。
实施例3
较小免疫原性Pol抗原的鉴定
不同的病毒载体系统对所编码的抗原的最大大小具有不同的限制。
方法
为了鉴定大小较小并因此可用于更广泛的载体系统的附加的pol变体，我们评价了在不与核心融合的情况下表达的pol变体的免疫原性。用编码GT-D PolΔ1、PolΔ3和Pol300以及GT-B Pol300的5型腺病毒载体免疫C57BL/6小鼠，并与编码全长未修饰的GT-D聚合酶(GT-D PolCtrl)的对照载体进行比较，并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)模拟疫苗接种作为阴性对照。在用GT-D pol肽池免疫后14天测量IFN-γELISPOT应答(图5)。
结果
所有测试的Pol抗原设计都是免疫原性的，组之间没有统计学上的显著差异。
实施例4
在腺相关病毒(AAV)-HBV小鼠中用近共有序列抗原与抗PD-1组合进行疫苗接种的 功效
我们使用腺相关病毒(AAV)-HBV模型(Dion等人，J Virol.(2013)87(10):5554-63；以及Yang等人，Cell Mol Immunol.(2014)11(1):71-8)以确定我们的近共有抗原设计是否可以在慢性HBV感染模型中具有抗病毒作用。
方法
在该模型中，用编码1.2倍长GT-D HBV基因组的AAV载体转导C57BL/6小鼠，使得肝细胞中持续产生HBV蛋白和病毒粒子，并伴有血清中的抗原血症和病毒血症。由腺病毒(Ad)初免和痘病毒加强组成的异源病毒载体初免-加强方案在人体中产生了强T细胞应答(参见例如，Barnes等人，Sci Transl Med.(2012)4(115):115ra1；Ewer等人，N Engl J Med.(2016)374(17):1635-46；Ewer等人Nat Commun.(2013)4:2836；Green等人，Sci TranslMed.(2015)7(300):300ra126；Swadling等人，Sci Transl Med.(2014)6(261):261ra153)，因此我们基于表达GT-C sAg和GT-B核心-PolΔ1的Western Reserve菌株(NCBI：txid696871)制备了痘苗载体。将AAV-HBV小鼠用Ad5初免和痘苗加强载体进行疫苗接种，该载体编码GT-C sAg和GT-B核心-PolΔ1或不相关的对照抗原β-半乳糖苷酶和绿色荧光蛋白。在加强疫苗接种之后，用抗小鼠PD-1单克隆抗体或同种型对照抗体进一步处理小鼠。AAV-HBV功效研究的图表在图6中示出，并且治疗组在表4中示出。对照组接受HBV疫苗但不接受AAV-HBV，以确定在持续存在HBV的情况下疫苗应答是否降低。
表4
AAV-HBV功效研究中的研究组
Ad：腺病毒5载体。Vac：痘苗载体。β-gal：β-半乳糖苷酶。GFP：绿荧光蛋白。
结果
图7示出了每组中的IFN-γELISPOT应答。注意，使用与AAV-HBV载体中的HBV菌株匹配的GT-D肽池评价应答，因此只有当T细胞应答与AAV-HBV小鼠中存在的病毒反应时才被检测到。测试了对核心的应答，但在任何组中均未检测到，这与C57BL/6小鼠中核心的弱免疫原性一致(Chiale等人，同上)。在接受Ad初免和编码HBV抗原的痘苗加强载体的所有组中检测到强Pol ELISPOT应答。Pol ELISPOT量值在AAV-HBV小鼠和未接受AAV-HBV的对照小鼠中类似，表明AAV-HBV不导致对Pol的T细胞耐受性。相反，与对照小鼠相比，AAV-HBV小鼠对sAg的ELISPOT应答大大降低，这证明AAV-HBV诱导对sAg的T细胞耐受性。然而，在接受AAV-HBV和腺病毒初免-痘苗加强HBV疫苗的小鼠中，每组2-3只小鼠表现出高于对照疫苗接种小鼠中所检测到的那些的sAg ELISPOT应答。ELISPOT应答量值不因抗PD-1处理而改变。
为了评价通过疫苗接种诱导的HBV特异性T细胞的任何抗病毒作用，我们测量了血清e抗原(HBeAg)。血清HBeAg是比血清HBsAg更好的T细胞介导的抗病毒功效的标志物，因为后者可通过由疫苗接种诱导的抗HBsAg抗体的作用而降低。与接受对照疫苗和同种型对照抗体的小鼠相比，单独的HBV疫苗和单独的抗PD-1都不引起血清HBeAg的任何降低。然而，HBV疫苗+抗PD-1的组合导致12只小鼠中的4只血清中可检测HBeAg的损失(图8)。这些数据表明，用编码我们的改进抗原序列的病毒载体进行疫苗接种有助于作为联合疗法策略的一部分的HBV清除。
实施例5
沙粒病毒载体中pol抗原的免疫原性
我们进一步改进了我们的HBV抗原设计以用于沙粒病毒载体。与腺病毒载体和大多数其它病毒载体系统不同，沙粒病毒载体可重复施用而不诱导中和抗载体抗体。另外，可在与用于产生载体的源病毒不同的几种变体中产生沙粒病毒载体，例如具有两区段(即，二分段)基因组的无复制能力载体(Flatz等人，Nat Med.(2010)16(3):339-45)、或具有三区段(即，三分段)基因组的复制减毒型载体(Kallert等人，Nat Commun.(2017)8:15327)(图9)。某些HBV抗原在三分段复制减毒型或二分段复制缺陷性沙粒病毒平台中表达，该平台具有淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒(PICV))载体骨架。所用的复制缺陷性沙粒病毒载体描述于WO 2009/083210中。所用的复制减毒型沙粒病毒载体描述于WO 2016075250(LCMV)和WO 2017/198726(皮钦德)中。
沙粒病毒载体可适应每个开放阅读框约500-800个氨基酸的抗原。因此，我们测试了GT-D和GT-B PolΔ1(SEQ ID NO:6和8)、PolΔ3(SEQ ID NO:10和12)和Pol300(SEQ ID NO:13和14)在无复制能力的LCMV载体中的免疫原性。用106个病灶形成单位(FFU)的无复制能力的LCMV载体静脉内免疫C57BL/6小鼠，并且在免疫后第7天测量IFN-γELISPOT应答。所有GT-B抗原和GT-D Pol300诱导强T细胞应答，而GT-D PolΔ1和PolΔ3与其它抗原设计相比引起降低的ELISPOT应答(图10)。
实施例6
编码免疫原性pol抗原的遗传稳定的无复制能力的LCMV载体的鉴定
各种免疫原性Pol转基因在无复制能力的LCMV载体(VV1)中的稳定性在含有上清液的载体连续传代后通过聚合酶链反应(PCR)来评价。遗传稳定性由显示全长转基因(TG)的正确大小的主带定义。结果在表6中示出。
表6Pol转基因遗传稳定性评估概述表
基因型 载体 稳定TG插入直到
GT-B VV1*-PolΔ1 P1
GT-B VV1-PolΔ3 P1
GT-B VV1-Pol300 P5
GT-D VV1-PolΔ1 P1
GT-D VV1-PolΔ3 P1
GT-D VV1-Pol300 P2
*VV1是指无复制能力的LCMV载体。
“P#”指示传代数(例如，P1等于1次传代)。
实施例7
核心-sAg融合蛋白在无复制能力的LCMV载体中的免疫原性
已经鉴定了编码HBV pol的稳定的免疫原性沙粒病毒载体，我们另外测试了一系列核心-sAg融合蛋白在无复制能力的LCMV载体中的免疫原性。通过融合近共有GT-B核心和GT-C sAg、或GT-D核心和GT-D sAg来产生核心-sAg融合物，其中核心在N-末端并且sAg在C-末端。预期直接融合引发T细胞应答，但由于融合蛋白不分泌sAg，所以可能不诱导抗sAg抗体。因此，用由GSG接头随后是衍生自猪捷申病毒-1(P2A)的2A翻译跳跃位点分隔的核心和sAg测试了另外的抗原设计(Kim等人，PLoS ONE.(2011)6:e18556)。这种取向将在核心的C-末端产生21个氨基酸的延伸，同时使正常的sAg分泌能够引发抗体应答。在沙粒病毒载体中测试的抗原的氨基酸序列和用于编码沙粒病毒载体中的抗原的核苷酸序列的序列鉴定编号在表7中示出。
表7
用于LCMV载体中的序列载体抗原和抗原编码基因
通过免疫C57BL/6小鼠测试编码核心-sAg变体的无复制能力的LCMV载体的免疫原性(图11)。对于所有测试载体，总HBV特异性IFN-γELISPOT应答是不可区分的，并且包含P2A位点对GT-B/C或GT-D抗原的ELISPOT应答没有影响。对于所有测试载体，观察到对核心和sAg两者的应答。核心应答的检测是值得注意的，因为核心T细胞应答往往是微弱的，并且在该小鼠品系中难以检测(Chiale等人，同上)。在用相同载体免疫的Balb/c小鼠中观察到类似的结果。
在疫苗接种无复制能力的LCMV载体后，抗体应答的发展比T细胞应答更慢，因此免疫另外一组C57BL/6小鼠，并在免疫后第17天测量抗体应答(图12)。如所预期的，直接的核心-sAg融合物不引发抗sAg抗体应答。在含P2A的构建体中，仅GT-D核心-P2A-sAg载体一致地诱导抗sAg抗体，而仅在用GT-B/C核心-P2A-sAg免疫的五只小鼠中的一个小鼠中观察到抗sAg抗体。这个结果是出乎意料的，因为蛋白质印迹在GT-D和GT-B/C核心-P2A-sAg载体中都显示核心和sAg的有效分离。为了确认抗sAg抗体应答的差异不是所选择的小鼠品系的人为现象，在Balb/c小鼠中运行相同的实验。Balb/C小鼠的结果与C57BL/6小鼠的结果类似：在用GT-D核心-P2A-sAg免疫的5只Balb/C小鼠中的4只中检测到抗sAg抗体，但在用GT-B/C核心-P2A-sAg免疫的5只小鼠中的仅1只检测到(图12)。
实施例8
编码免疫原性核心-sAg融合蛋白的遗传稳定的无复制能力的LCMV载体的鉴定
各种免疫原性核心-sAg融合转基因在无复制能力的LCMV载体(VV1)中的稳定性在含有上清液的载体连续传代后通过PCR来评价。遗传稳定性由显示全长转基因(TG)的正确大小的主带定义。结果在表8中示出。
表8
核心-sAg转基因遗传稳定性评估概述表
基因型 载体 稳定TG插入直到
GT-B/C VV1-核心-sAg P6
GT-B/C VV1-核心-P2A-sAg P7
GT-D VV1-核心-sAg P4
GT-D VV1-核心-P2A-sAg P2
GT-D VV1-iCore-P2A-sAg P6
*VV1是指无复制能力的LCMV载体。
“P#”指示传代数(例如，P1等于1次传代)。
GT-D核心-P2A sAg诱导强T细胞应答和测试的核心-sAg融合设计的最高抗sAg抗体应答，但在该分析中没有有利的遗传稳定性。然而，经修饰的转基因GT-D iCore-P2A-sAg(多核苷酸SEQ ID NO:37，编码多肽SEQ ID NO:41)在无复制能力的LCMV载体中显示出改善的遗传稳定性(表8)。
为了确认经修饰的转基因不损害GT-D iCore-P2A-sAg的T细胞免疫原性，使用具有GT-D核心-P2A-sAg和GT-D iCore-P2A-sAg设计的无复制能力的LCMV载体免疫C57BL/6小鼠，或模拟免疫，并且7天后通过IFN-γELISPOT测量T细胞应答(图13)。GT-D iCore-P2A-sAg的sAg ELISPOT应答显著更高，并且核心ELISPOT应答在数值上也更高。因此，GT-DiCore-P2A-sAg的经修饰的转基因导致改善的基因稳定性和改善的免疫原性两者。
实施例9
远系繁殖小鼠中无复制能力的LCMV载体的免疫原性
在多样性远系繁殖(DO)小鼠中评价编码各种HBV抗原的无复制能力的LCMV(VV1)载体的免疫原性。这些小鼠比近亲繁殖C57BL/6小鼠具有更多不同的MHC等位基因，因此更好地评价通过疫苗接种诱导的T细胞应答的基因型交叉反应性。
方法
在第0天和第28天，用如表9所指示的无复制能力的LCMV载体免疫DO小鼠两次。在第42天使用脾细胞通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。
表9
免疫原性研究中的研究组
组 N 初免载体-第0天 加强载体-第28天 收获日 剂量/载体
1 8 模拟 模拟 42 -
2 8 VV1-GT-B/C核心-P2A-sAg VV1-GT-B/C核心-P2A-sAg 42 106个FFU
3 8 VV1-GT-D iCore-P2A-sAg VV1-GT-D iCore-P2A-sAg 42 106个FFU
4 8 VV1-GT-B PolΔ3 VV1-GT-B PolΔ3 42 106个FFU
5 8 VV1-GT-B Pol300 VV1-GT-B Pol300 42 106个FFU
结果
编码GT-B/C核心-P2A-sAg和GT-D iCore-P2A-sAg的无复制能力的LCMV载体诱导对其相应核心抗原具有特异性的相当的T细胞应答(图14A)。当与编码GT-B/C核心-P2A-sAg的载体相比，编码GT-D iCore-P2A-sAg的载体诱导更高频率的对其相应sAg抗原具有特异性的T细胞(图14A)。编码GT-B Pol300的载体比编码GT-B PolΔ3的载体诱导对pol抗原具有特异性的数值上更优的T细胞应答(图14B)。因此，在远系繁殖小鼠中，编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的载体比编码GT-B/C核心-P2A-sAg和GT-B PolΔ3的载体更具免疫原性。
除了诱导对其同源抗原(即GT-D核心、GT-D sAg、GT-B pol抗原)具有特异性的T细胞应答之外，GT-D iCore-sAg和GT-B Pol300载体也能够产生对从HBV的不同病毒基因型获得的抗原(即GT-B核心、GT-B sAg、GT-D pol抗原)具有特异性的T细胞应答(图15A和图15B)。因此，编码GT-D iCore-sAg和GT-B Pol300的载体产生对不同基因型的HBV交叉反应的T细胞。
实施例10
在C57BL/6小鼠中作为单一载体或共同配制施用的无复制能力的LCMV载体的免疫 原性
编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体在小鼠中是免疫原性的。我们接着比较了当在C57BL/6小鼠中作为单一载体或作为共同配制混合物递送时两种载体的免疫原性。
方法
在第0天和第21天，用如表10所指示的无复制能力的LCMV载体免疫C57BL/6小鼠两次。在第28天使用脾细胞通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。
表10
免疫原性研究中的研究组
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结果
与上述数据一致，当作为单一载体施用时，编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-BPol300的载体诱导对sAg、核心和Pol具有特异性的T细胞应答(图16A-图16C)。作为共同配制混合物的相同载体的施用诱导相当的T细胞应答(图16A-C)。因此，编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的LCMV载体的共同制剂不干扰它们在C57BL/6小鼠中的免疫原性。
实施例11
食蟹猴中无复制能力的LCMV载体的免疫原性。
我们评价了无复制能力的LCMV(VV1)载体GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300载体在食蟹猴中的免疫原性。还测试了Ad5以及编码核心、sAg和Pol300抗原的痘苗载体。
方法
使用如表11所指示的不同途径、不同剂量和不同免疫计划表免疫食蟹猴。通过IFN-γELISPOT每2周使用PBMC测量HBV特异性T细胞应答。在第14周，还通过流式细胞术对CD4+和CD8+T细胞进行细胞内细胞因子染色。每4周通过ELISA对抗sAg抗体应答进行定量。
表11
免疫原性研究中的研究组
结果
当经由肌内途径(i.m.)并且每4周(第1组和第2组)施用时，对VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300载体的总HBV特异性T细胞应答(定义为图18A-图18F至图20A-图20F中所示的核心、sAg和聚合酶特异性应答的总和)最高(图17A-B)。Ad5和编码相同抗原的痘苗载体也诱导相当的T细胞应答。在第一剂量的VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300载体后，检测HBV特异性免疫应答，并且二至四次剂量诱导HBV特异性ELISPOT量值的逐渐增加。第五剂量和第六剂量没有进一步增加应答，指示在第四剂量后达到对我们的载体的峰值应答。在施用全人剂量的动物(108个FFU，第2组)中，第14周的几何平均应答为1206个SFU/106个PBMC，并且在较低剂量5×106个FFU(第1组)中低约2倍，指示剂量-应答性。
为了定量CD4+和CD8+T细胞对总T细胞应答的贡献，在研究第14周(此时T细胞应答最高)通过细胞内细胞因子染色(ICS)分析来自第1组、第2组和第6组的动物的PBMC。响应于用HBV肽的刺激，第1组和第2组均具有增加的IFN-γ+CD8+T细胞水平。这些细胞的背景校正频率范围为在第1组中0.8％至1.9％和在第2组中0.2％至4％(图21A)。相比之下，对HBV具有特异性的IFN-γ+CD4+T细胞是可检测的，但占总CD4+T细胞的少于0.1％(图21B)。因此，我们的载体在非人灵长类中诱导的T细胞应答主要由CD8+T细胞构成。
抗HBsAg抗体也通过用我们的载体给药来诱导。抗sAg应答随剂量水平和载体的重复施用而增加(图22)。
实施例12
在C57BL/6小鼠中与免疫调节剂组合的无复制能力的LCMV载体的免疫原性
我们在AAV-HBV小鼠模型中评价了单独或与各种免疫调节剂(抗PD-1、抗CTLA-4和抗CD137和FLT3配体)组合的无复制能力的LCMV(VV1)载体GT-D iCore-P2A-sAg和GT-BPol300的免疫原性。
方法
在第0天、第21天和第42天，向AAV-HBV C57BL/6小鼠施用3个剂量的VV1-GT-DiCore-P2A-sAg和GT-B Pol300载体。还用如表12和图23所指示的盐水、抗小鼠抑制性PD-1抗体、抗小鼠抑制性CTLA-4抗体、抗小鼠刺激性CD137抗体和小鼠FLT3-L处理小鼠。对照组小鼠仅接受HBV疫苗但不接受AAV-HBV，以确定在慢性HBV背景下HBV疫苗的免疫原性如何受到影响。在第105天在第一次疫苗接种后使用脾细胞通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。数据表示为减去无肽对照孔中的背景信号。在第-11天和第105天通过ELISA测量HBeAg的血清水平。
表12AAV-HBV免疫原性研究中的研究组
结果
在不存在持续HBV的小鼠中，观察到对所有3种HBV抗原的强IFN-γELISPOT应答(图24)。从接受单独HBV疫苗的AAV-HBV小鼠获得的IFN-γELISPOT应答降低但仍存在，这表明VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300甚至在免疫系统对HBV耐受的情况下也是免疫原性的。VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300与抗PD-1、抗CTLA-4或抗CD137抗体的组合施用进一步改善了对核心和sAg的HBV-特异性IFN-γELISPOT应答，而VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300与FLT3-L的组合得到对所有3种HBV抗原的最高ELISPOT量值。
此外，如第-11天和第105天在基线处测量的，施用VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300降低了那些AAV-HBV小鼠中HBeAg的血清水平(表13)。重要的是，VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300载体与抗PD-1、抗CTLA-4、抗CD137抗体或FTL3-L的组合施用进一步降低HBeAg的血清水平(表13)。因此，VV1 GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300载体在AAV-HBV小鼠模型中显示出抗病毒功效，其可与一些免疫调节剂组合而增强。
表13
AAV-HBV小鼠中血清HBeAg水平的概述表
实施例13
编码免疫原性核苷酸优化的HBV抗原的无复制能力的皮钦德(PICV)载体的鉴定
我们最初使用在无复制能力的LCMV(VV1)载体中鉴定为稳定和免疫原性的相同核苷酸序列，产生了编码GT-D核心-P2A-sAg抗原(SEQ ID NO:41)和GT-B Pol300抗原(SEQ IDNO:13)的无复制能力的PICV(VV2)载体。iCore-P2A-sAg转基因在VV2载体(SEQ ID NO:37)中的稳定性在含有上清液的载体连续传代后通过PCR来评价并且发现对于制造是足够稳定的(表13)。遗传稳定性由显示全长转基因(TG)的正确大小的主带定义。
相比之下，当在VV1载体(SEQ ID NO:29)中使用的相同GT-B Pol300转基因用于VV2载体时，该转基因在连续传代期间迅速变得不稳定(表14)。为了鉴定具有足够的遗传稳定性以进行制造的VV2载体，我们使用不同的核苷酸序列产生了编码相同GT-B Pol300抗原的三个附加的VV2载体，命名为VV2-Pol300_IDT_CpGdel(SEQ ID NO:94)、Pol300 ori(SEQ IDNO:89)和Pol300 dint(SEQ ID NO:90)、Pol300 huCo低GC(SEQ ID NO:91)和Pol300 oridelCpG(SEQ ID NO:92)。在含有上清液的载体连续传代后，通过PCR评价每个载体的转基因稳定性，其中基因稳定性由显示全长转基因(TG)的正确大小的主带定义。结果在表14中示出。令人惊讶的是，尽管编码相同的多肽抗原，但在不同核苷酸序列之间，VV2载体中Pol300转基因的稳定性有很大的差异，其中Pol300 dint、Pol300 ori和Pol300 oridel CpG多核苷酸序列表现出最大的稳定性，例如至少通过五次传代。
表14
VV2-核心-P2A-sAg和Pol300转基因遗传稳定性评估概述表
基因型 核酸SEQ ID NO: 载体 稳定TG插入直到
GT-D 37 VV2-iCore-P2A-sAg P5
GT-B 29 VV2-Pol300 P1
GT-B 94 VV2-Pol300_IDT_CpGdel P3
GT-B 91 VV2-Pol300 huCo lowGC P4
GT-B 89 VV2-Pol300 ori P5
GT-B 92 VV2-Pol300 oridel CpG P5
GT-B 90 VV2-Pol300 dint P5
*VV2是指无复制能力的PICV载体。
“P#”指示传代数(例如，P1等于1次传代)。
接着，为了评估携带Pol300 din和Pol300 ori转基因的载体之间免疫原性的潜在差异，在第0天和第21天用编码GT-B Pol300 ori或GT-B Pol300 din的无复制能力的PICV(VV2)载体免疫C57BL/6小鼠两次。然后使用Pol肽池通过IFN-γELISPOT从脾细胞测量HBV特异性T细胞应答。令人惊讶的是，尽管编码相同的氨基酸序列，VV2-GT-B Pol300 dint诱导比VV2-GT-B Pol300 ori强得多的T细胞应答(图25)。因此，在C57BL/6小鼠中，VV2-GT-B Pol300dint比VV2-GT-B Pol300 ori更具免疫原性。
实施例14
在C57BL/6小鼠中使用同源或异源初免-加强免疫方案的无复制能力的LCMV和 PICV沙粒病毒载体的免疫原性
我们在C57BL/6小鼠中使用同源初免/加强(VV1载体，随后是VV1载体)或异源初免-加强(VV2载体，随后是VV1载体)免疫方案，评价了编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-BPol300的无复制能力的LCMV(VV1)和PICV(VV2)载体的免疫原性。
方法
用如表15所指示的编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV和PICV载体免疫C57BL/6小鼠两次。在第28天使用脾细胞通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。在第28天通过ELISA对抗sAg抗体应答进行定量。
表15
免疫原性研究中的研究组
结果
使用同源初免/加强方案(VV1/VV1)施用编码GT-D iCore-P2A-sAg或编码GT-BPol300的无复制能力的LCMV载体(VV1)，在C57BL/6小鼠中诱导强T细胞应答(图26A-C)。与VV1/VV1方案相比，施用无复制能力的PICV载体(VV2)，随后施用VV1(异源初免-加强方案VV2/VV1)产生了更强的sAg特异性T细胞应答(图26A)和类似的核心和pol特异性T细胞应答(图26B-图26C)。此外，尽管使用同源初免/加强方案(VV1/VV1)施用无复制能力的LCMV载体不一致地诱导低水平的抗sAg抗体，但使用异源初免/加强方案(VV2/VV1)的免疫出乎意料地导致在所有动物中抗sAg抗体的强烈且一致的诱导以及增加约1000倍的平均抗sAg抗体滴度(图27)。
实施例15
在C57BL/6小鼠中使用同源或异源初免-加强免疫方案的复制减毒型LCMV和PICV 沙粒病毒载体的免疫原性
除了无复制能力的沙粒病毒载体LCMV(VV1)和PICV(VV2)之外，也可工程化编码HBV抗原的有复制能力但减毒的载体LCMV(TT1)和PICV(TT2)。与VV1和VV2载体不同，TT1和TT2载体含有三个基因组片段，从而允许基因组空间将两个HBV抗原(融合蛋白GT-D核心-P2A-sAg和蛋白GT-B Pol300)插入同一载体。因为可将每种抗原插入两个不同的基因组片段中，所以如下产生覆盖两种沙粒病毒载体内的不同插入组合的载体：i)插入LCMV主链中的片段1中的GT-D核心-P2A-sAg和插入片段2中的GT-B Pol300(TT1-GT-D核心-P2A-sAg/GT-BPol300)，ii)插入PICV主链中的片段1中的GT-D核心-P2A-sAg和插入片段2中的GT-B Pol300(TT2-GT-D核心-P2A-sAg/GT-B Pol300)，iii)插入LCMV主链中的片段2中的GT-D核心-P2A-sAg和插入片段1中的GT-B Pol300(TT1-GT-B Pol300/GT-D核心-P2A-sAg)以及iv)插入PICV主链中的片段2中的GT-D核心-P2A-sAg和插入片段1中的GT-B Pol300(TT2-GT-B Pol300/GT-D核心-P2A-sAg)。我们接着在C57BL/6小鼠中使用同源或异源初免-加强免疫方案评价这4种载体的免疫原性。
方法
用如表16所指示的编码GT-D核心-P2A-sAg和GT-B Pol300的复制减毒型LCMV和PICV载体免疫C57BL/6小鼠两次。在第28天使用脾细胞通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。
表16
免疫原性研究中的研究组
结果
施用所有有复制能力的载体导致对3种HBV抗原sAg、核心和pol特异的强T细胞应答(图28A-图28C)。因此，表达HBV抗原的TT1和TT2载体在C57BL/6小鼠中具有强烈的免疫原性。
实施例16
在食蟹猴中使用同源或异源初免-加强免疫方案的无复制能力的LCMV和PICV沙粒 病毒载体的免疫原性
我们在食蟹猴中使用同源初免/加强(VV1载体，随后是VV1载体)或异源初免-加强(VV2载体，随后是VV1载体)免疫方案，评价了编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV(VV1)和PICV(VV2)载体的免疫原性。
方法
将食蟹猴(n＝5)在第0周用VV2载体(5×106个FFU/载体)免疫，然后在第4周用VV1载体(5×106个FFU/载体)免疫，并在第6周使用PBMC通过IFN-γELISPOT测量HBV特异性T细胞应答。将数据与来自在第0周和第4周(同源初免加强方案)仅用VV1载体(5×106个FFU/载体)免疫的10只食蟹猴的ELISPOT进行比较。
结果
使用同源初免/加强方案(VV1/VV1)施用编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV载体(VV1)，在10只猕猴中的5只中诱导HBV特异性T细胞应答(图29)。相比之下，与VV1/VV1同源初免加强方案相比，施用无复制能力的PICV载体(VV2)随后是VV1(异源初免/加强方案VV2/VV1)在所有5只动物中产生统计学上更大的HBV特异性T细胞应答(图29)。
实施例17
在食蟹猴中使用具有1周给药间隔的同源或异源初免-加强免疫方案的无复制能 力的LCMV和PICV沙粒病毒载体的免疫原性
我们在食蟹猴中使用同源初免/加强(VV1载体，随后是VV1载体)或异源初免-加强(VV2载体，随后是VV1载体)免疫方案，以1周给药间隔施用，评价了编码GT-D iCore-P2A-sAg和GT-B Pol300的无复制能力的LCMV(VV1)和PICV(VV2)载体的免疫原性。
方法
食蟹猴如表17所述进行免疫。在第4周通过IFN-γELISPOT使用PBMC测量HBV特异性T细胞应答。
表17
免疫原性研究中的研究组
结果
与用单独VV1载体疫苗接种相比，施用无复制能力的PICV载体(VV2)随后是VV1(异源初免/加强方案VV2/VV1)产生更大的HBV特异性T细胞应答(图30)。
应当理解，本文所述的实施例和实施方案仅用于例示性目的，并且本领域技术人员将根据这些实施例和实施方案提出各种修改或改变，并将这些修改或改变包括在本申请的精神和权限以及所附权利要求书的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请据此全文以引用方式并入以用于所有目的。
优选的实施方案：
1.一种截短的乙型肝炎病毒(HBV)聚合酶多肽，其包含失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中所述多肽不包含所有的末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的间隔区结构域。
2.根据项目1所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中所述多肽的长度不长于600个氨基酸，例如长度不长于595、590、585、580、575、570、565、560、555、550、545、540或535个氨基酸。
3.根据项目1至2中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中所述逆转录酶结构域不包含YMDD基序并且所述RNA酶H结构域不包含AELL基序。
4.根据项目3所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中所述逆转录酶结构域中的所述YMDD基序突变为YMHD，并且其中所述RNA酶H结构域中的所述AELL基序突变为AHLL。
5.根据项目1至4中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中所述多肽来自HBV基因型A、B、C或D。
6.根据项目5所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中：
a)所述多肽来自HBV基因型B并且不包含SEQ ID NO:50、或与SEQ ID NO:50中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列；或
b)所述多肽来自HBV基因型D并且不包含SEQ ID NO:51、或与SEQ ID NO:51中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列。
7.根据项目1至6中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
8.根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中所述多肽不包含来自另一种HBV蛋白的氨基序列或其片段。
9.根据项目1至8中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽，其中所述多肽不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：前核心、核心、X和包膜(例如，小、中或大表面抗原(sAg))。
10.一种HBV聚合酶缺失突变多肽，其从N-末端到C-末端依次包含末端蛋白(TP)结构域、失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中所述突变多肽不包含所有或部分的间隔区结构域。
11.根据项目1所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中所述多肽的长度不长于800个氨基酸，例如长度不长于795、790、785、780、775、770、765、760、755、750、745、740、735、730、725、720、715、710或705个氨基酸。
12.根据项目10至11中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中所述逆转录酶结构域不包含YMDD基序并且所述RNA酶H结构域不包含AELL基序。
13.根据项目12所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中所述逆转录酶结构域中的所述YMDD基序突变为YMHD，并且其中所述RNA酶H结构域中的所述AELL基序突变为AHLL。
14.根据项目10至13中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中所述多肽来自HBV基因型A、B、C或D。
15.根据项目14所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中：
a)所述多肽来自HBV基因型A并且不包含SEQ ID NO:42或46、或与SEQ ID NO:42或46中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽；
b)所述多肽来自HBV基因型B并且不包含SEQ ID NO:43或47、或与SEQ ID NO:43或47中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽；
c)所述多肽来自HBV基因型C并且不包含SEQ ID NO:44或48、或与SEQ ID NO:44或48中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽；或
d)所述多肽来自HBV基因型D并且不包含SEQ ID NO:45或49、或与SEQ ID NO:45或49中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽。
16.根据项目10至15中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5-12中的任一项、或与SEQ ID NO:5-12中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
17.根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其还包含HBV核心多肽。
18.根据项目17所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽。
19.根据项目17至18中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:19-26中的任一项、或与SEQ ID NO:19-26中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
20.根据项目10至19中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽，其中所述多肽不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：X、前核心和包膜(例如，小、中或大表面抗原(sAg))。
21.一种融合蛋白，其从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽，其中：
a)所述核心多肽来自HBV基因型B或C并且所述sAg多肽来自HBV基因型C；或
b)所述核心多肽来自HBV基因型D并且所述sAg多肽来自HBV基因型D。
22.根据项目21所述的融合蛋白，其包含
a)包含以下或由以下组成的核心多肽：SEQ ID NO:65、或与SEQ ID NO:65至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，和包含以下或由以下组成的sAg多肽：SEQ ID NO:3、或与SEQ ID NO:3至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；或
b)包含以下或由以下组成的核心多肽：SEQ ID NO:66、或与SEQ ID NO:66至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，和包含以下或由以下组成的sAg多肽：SEQ ID NO:4、或与SEQ ID NO:4至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％
相同的序列的氨基酸序列。
23.根据项目21至22中任一项所述的融合蛋白，其中所述核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
24.根据项目21至23中任一项所述的融合蛋白，其中所述sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4。
25.根据项目21至24中任一项所述的融合蛋白，其中所述sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
26.根据项目21至25中任一项所述的融合蛋白，其中所述sAg多肽不包含前S2多肽。
27.根据项目21至26中任一项所述的融合蛋白，其中所述sAg多肽不包含HBV前S2多肽，所述sAg多肽包含以下或由以下组成：SE QID NO:79-83中的任一项、或与SEQ ID NO:79-83中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
28.根据项目21至27中任一项所述的融合蛋白，其中所述sAg多肽不包含HBV前S1多肽和HBV前S2多肽两者。
29.根据项目21至28中任一项所述的融合蛋白，其中所述sAg多肽不包含HBV前S1-前S2多肽，所述sAg多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:84-88中的任一项、或与SEQ IDNO:84-88中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
30.根据项目21至29中任一项所述的融合蛋白，所述融合蛋白包含可操作地连接到所述HBV核心多肽和所述HBV sAg多肽并位于其间的可切割接头。
31.根据项目30所述的融合蛋白，其中所述可切割接头是2A可切割肽。
32.根据项目30至31中任一项所述的融合蛋白，其中所述可切割接头是选自由以下项组成的组的2A可切割肽：口蹄疫病毒(F2A)、马鼻炎A病毒(E2A)、猪捷申病毒-1(P2A)和明脉扁刺蛾病毒(T2A)。
33.根据项目30至32中任一项所述的融合蛋白，其中所述可切割接头包含以下或由以下组成：ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)、APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ IDNO:57)、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:58)或EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQ ID NO:59)的氨基酸序列，或与ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)、APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQID NO:57)、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:58)或EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQ ID NO:59)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同的氨基酸序列。
34.根据项目30至33中任一项所述的融合蛋白，其中所述可切割接头是猪捷申病毒-1(P2A)接头。
35.根据项目30至32中任一项所述的融合蛋白，其中所述可切割接头包含以下或由以下组成：ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)的氨基酸序列，或与ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO:56)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或至少99％相同的氨基酸序列。
36.根据项目30至35中任一项所述的融合蛋白，其还包含可操作地连接到所述可切割接头的N-末端和所述HBV核心多肽的C-末端并位于其间的柔性接头和/或弗林蛋白酶识别/切割位点。
37.根据项目36所述的融合蛋白，其中所述弗林蛋白酶识别/切割位点包含选自由以下项组成的组的氨基酸序列或由其组成：RAKR(SEQ ID NO:60)、REKR(SEQ ID NO:61)和RRKR(SEQ ID NO:62)。
38.根据项目36至37中任一项所述的融合蛋白，其中所述柔性接头包含聚甘氨酸或聚丙氨酸序列。
39.根据项目36至38中任一项所述的融合蛋白，其中所述柔性接头包含选自由以下项组成的组的聚甘氨酸或聚丙氨酸序列或由其组成：AA、AAA、AAY、GG、GGG、GGS、GSG和GGGS(SEQ ID NO:63)。
40.根据项目21至39中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，例如长度不长于445、440、435、430、425、420、415或410个氨基酸。
41.根据项目21至40中任一项所述的融合蛋白，所述融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
42.根据项目21至41中任一项所述的融合蛋白，所述融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:41中的任一项、或与SEQ ID NO:41中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
43.根据项目41至42中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:41。
44.根据项目21至43中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合多肽不包含来自HBV蛋白的选自由以下项组成的组的氨基序列或其片段：X、前核心、前S1和前S2。
45.根据项目1至9中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽、根据项目10至20中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽或根据项目21至44中任一项所述的融合蛋白，其还包含N-末端信号肽或前导序列。
46.根据项目45所述的多肽或融合蛋白，其中所述信号肽或前导序列来自选自血清蛋白、细胞因子、趋化因子、伴侣蛋白、不变蛋白和将蛋白引导至溶酶体区室的蛋白的源蛋白。
47.根据项目45至46中任一项所述的多肽或融合蛋白，其中所述信号肽或前导序列来自选自由以下项组成的组的源蛋白：集落刺激因子2(CSF2、GM-CSF)、组织型纤溶酶原活化剂(PLAT、t-PA)、C-C基序趋化因子配体7(CCL7、MCP-3)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10、IP-10)、连环蛋白β1(CTNNB1)、CD74(p33；DHLAG；HLADG；Ia-GAMMA、不变链)、血清白蛋白(ALB)、聚泛素B/C(UBB/UBC)、钙网蛋白(CALR)、水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP-1)和溶酶体相关膜蛋白2(LAMP-2)。
48.根据项目45至47中任一项所述的多肽或融合蛋白，其中所述信号肽或前导序列选自SEQ ID NO:67-78中的任一项、或与SEQ ID NO:67-78中的任一项至少95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
49.根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽、根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽或根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白，其中所述多肽或融合蛋白是重组产生或化学合成的。
50.根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽、根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽或根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白，其中所述多肽或融合蛋白能够在人体中诱导、促进或刺激免疫应答。
51.根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽、根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽或根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白，其中所述多肽或融合蛋白能够在人体中诱导、促进或刺激针对HBV的免疫应答。
52.根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽、根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽或根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白，其中所述多肽或融合蛋白能够诱导、促进或刺激选自单核细胞来源的树突状细胞(DC)、CD8+T细胞和CD4+T细胞的一种或多种细胞类型的增殖和/或活化。
53.一种多核苷酸，其编码根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽、根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽或根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白。
54.根据项目53所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括cDNA、mRNA、自扩增RNA(SAM)、自复制RNA或自扩增复制子RNA(RepRNA)。
55.根据项目54所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括自复制或自扩增的甲病毒复制子。
56.根据项目53至55中任一项所述的多核苷酸，其包含以下或由以下组成：SEQ IDNO:27-37和89-94中的任一项、或与SEQ ID NO:27-37和89-94中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
57.一种脂质纳米颗粒(LNP)，其包含根据项目53至56中任一项所述的一种或多种多核苷酸。
58.一种表达盒，其包含根据项目53至56中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接到一个或多个调控序列。
59.根据项目58所述的表达盒，其中所述多核苷酸可操作地连接到组成型启动子并在其控制下。
60.根据项目58至59中任一项所述的表达盒，其中所述启动子选自巨细胞病毒主要立即早期启动子(CMV)、与鸡β-肌动蛋白启动子(CAG)融合的CMV增强子、人延伸因子-1α(HEF-1α)、小鼠巨细胞病毒(小鼠CMV)、中国仓鼠延伸因子-1α(CHEF-1α)和磷酸甘油酸激酶(PGK)。
61.一种载体，其包含根据项目53至56中任一项所述的一种或多种多核苷酸，或一种根据项目58至60中任一项所述的表达盒。
62.根据项目61所述的载体，其中所述载体是质粒载体、细菌载体或病毒载体。
63.根据项目61至62中任一项所述的载体，其中所述载体是病毒载体。
64.根据项目61至63中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是DNA病毒或RNA病毒。
65.根据项目61至64中任一项所述的载体，其中所述病毒载体来自选自由以下项组成的组的病毒：腺病毒、腺相关病毒、沙粒病毒、甲病毒、痘病毒、巨细胞病毒、弹状病毒、水泡性口炎病毒、黄病毒、马拉巴病毒和痘苗病毒。
66.根据项目61至65中任一项所述的载体，其中所述病毒载体来自选自腺病毒科、沙粒病毒科、疱疹病毒科(例如巨细胞病毒)、痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))、黄病毒科(例如黄热病毒)、弹状病毒科(例如水泡性病毒，例如马拉巴水泡性病毒)、披膜病毒科(例如甲病毒)的分类学家族的病毒。
67.根据项目61至66中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒)、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。
68.根据项目67所述的载体，其中所述病毒载体是选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒的沙粒病毒载体。
69.根据项目61至66中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是人腺病毒或猿猴腺病毒(例如，黑猩猩腺病毒、大猩猩腺病毒或恒河猴腺病毒)。
70.根据项目69所述的载体，其中所述病毒载体是选自以下的腺病毒载体：腺病毒血清型5(Ad5)、腺病毒血清型26(Ad26)、腺病毒血清型34(Ad34)、腺病毒血清型35(Ad35)、腺病毒血清型48(Ad48)、黑猩猩腺病毒(例如ChAdOx1、ChAdOx2、ChAd3(AdC3)、ChAd5(AdC5)、ChAd6(AdC6)、ChAd7(AdC7)、ChAd8(AdC8)、ChAd9(AdC9)、ChAd10(AdC10)、ChAd11(AdC11)、ChAd17(AdC17)、ChAd16(AdC16)、ChAd19(AdC19)、ChAd20(AdC20)、ChAd22(AdC22)、ChAd24(AdC24)、ChAdY25、ChAd26(AdC26)、ChAd28(AdC28)、ChAd30(AdC30)、ChAd31(AdC31)、ChAd37(AdC37)、ChAd38(AdC38)、ChAd43(AdC43)、ChAd44(AdC44)、ChAd55(AdC55)、ChAd63(AdC63)、ChAdV63、ChAd68(AdC68)、ChAd73(AdC73)、ChAd82(AdC82)、ChAd83(AdC83)、ChAd143(AdC143)、ChAd144(AdC144)、ChAd145(AdC145)、ChAd147(AdC147))、大猩猩腺病毒(例如GC44、GC45、GC46)和恒河猴腺病毒(例如RhAd51、RhAd52、RhAd53、RhAd54、RhAd55、RhAd56、RhAd57、RhAd58、RhAd59、RhAd60、RhAd61、RhAd62、RhAd63、RhAd64、RhAd65、RhAd66)。
71.根据项目61至70中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是复制缺陷性、复制缺陷型、复制减毒型或有复制能力的。
72.根据项目61至68中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是具有二分段基因组的复制缺陷性沙粒病毒。
73.根据项目61至68中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是具有三分段基因组的复制减毒型沙粒病毒。
74.一种沙粒病毒载体，其包含编码HBV核心-sAg融合多肽的多核苷酸，所述HBV核心-sAg融合多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，并且其中所述sAg多肽不包含HBV前S1多肽和/或HBV前S2多肽。
75.根据项目74所述的沙粒病毒载体，其包含编码HBV核心-sAg融合多肽的多核苷酸，所述HBV核心-sAg融合多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:41中的任一项、或与SEQID NO:341中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，并且其中所述sAg多肽不包含HBV前S1多肽和/或HBV前S2多肽。
76.根据项目74至75中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
77.根据项目74至76中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQID NO:4。
78.根据项目74至77中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
79.根据项目74至78中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:41。
80.根据项目74至79中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
81.根据项目74至80中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
82.根据项目74至81中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述载体具有二分段基因组并且还包含编码截短的HBV聚合酶的多核苷酸，所述截短的HBV聚合酶包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，并且其中所述截短的HBV聚合酶不包含所有的HBV聚合酶末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的HBV聚合酶间隔区结构域。
83.根据项目82所述的沙粒病毒载体，其中所述截短的HBV聚合酶不包含SEQ IDNO:50或SEQ ID NO:51、或与SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列。
84.根据项目82至83中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29和89-94中的任一项、或与SEQ ID NO:29和89-94中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
85.根据项目82至84中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述沙粒病毒载体是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)载体并且所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
86.根据项目82至84中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述沙粒病毒载体是卡利哺乳动物沙粒病毒载体并且所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
87.一种沙粒病毒载体，其包含编码截短的HBV聚合酶的多核苷酸，所述截短的HBV聚合酶包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列，并且其中所述截短的HBV聚合酶不包含所有的HBV聚合酶末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的HBV聚合酶间隔区结构域。
88.根据项目87所述的沙粒病毒载体，其中所述截短的HBV聚合酶不包含SEQ IDNO:50或SEQ ID NO:51、或与SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51中的任一项至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的多肽序列。
89.根据项目87至88中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29和89-94中的任一项、或与SEQ ID NO:29和89-94中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
90.根据项目87至89中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述沙粒病毒载体是淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)载体并且所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
91.根据项目87至89中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述沙粒病毒载体是卡利哺乳动物沙粒病毒载体并且所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
92.根据项目74至91中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述沙粒病毒载体是复制缺陷性、复制缺陷型或无复制能力的。
93.一种宿主细胞，其包含根据项目53至56中任一项所述的一种或多种多核苷酸或根据项目61至92中任一项所述的一种或多种载体。
94.根据项目93所述的宿主细胞，其中所述一种或多种多核苷酸不整合到所述宿主细胞基因组中，例如是游离的。
95.根据项目93所述的宿主细胞，其中所述一种或多种多核苷酸被整合到所述宿主细胞基因组中。
96.根据项目93至95中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞，例如人细胞。
97.根据项目93至96中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞在体外。
98.根据项目93至96中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞在体内。
99.一种免疫原性组合物，其包含根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种、根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种、根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白中的一种或多种、根据项目53至56中任一项所述的一种或多种多核苷酸、或根据项目61至92中任一项所述的一种或多种载体；和药学上可接受的载体。
100.根据项目99所述的免疫原性组合物，其包含根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽中的两种或更多种、根据项目10至19中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽中的两种或更多种、根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白中的两种或更多种、根据项目53至56中任一项所述的两种或更多种多核苷酸、或根据项目61至92中任一项所述的两种或更多种载体。
101.根据项目99至100中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述一种或多种多核苷酸是DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA。
102.根据项目99至100中任一项所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽或根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽的多核苷酸；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸。
103.根据项目102所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
104.根据项目102至103中任一项所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
105.根据项目102至104中任一项所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
106.根据项目102至105中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
107.根据项目102至106中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
108.根据项目102至107中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述sAg
多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
109.根据项目102至108中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:41。
110.根据项目102至109中任一项所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项、或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
111.根据项目102至110中任一项所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、89、90或92、或与SEQ ID NO:29、89、90或92至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
112.根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体独立地来自选自腺病毒科、沙粒病毒科、疱疹病毒科(例如巨细胞病毒)、痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))、黄病毒科(例如黄热病毒)、弹状病毒科(例如水泡性病毒，例如马拉巴水泡性病毒)、披膜病毒科(例如甲病毒)的分类学家族。
113.根据项目102至112中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自相同的分类学家族。
114.根据项目113所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自沙粒病毒科。
115.根据项目113至114中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体独立地来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。
116.根据项目113至115中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒的沙粒病毒载体。
117.根据项目113至116中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体是复制缺陷性或复制缺陷型的。
118.根据项目113至116中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体是复制减毒型的。
119.根据项目102至104中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自不同的分类学家族。
120.一种免疫原性组合物，其包含第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
121.一种免疫原性组合物，其包含第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
122.根据项目102至121中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体以在1:10至10:1范围内，例如1:9至9:1、1:8至8:1、1:7至7:1、1:6至6:1、1:5至5:1、1:4至4:1、1:3至3:1、1:2至2:1或1:1的比率提供。
123.根据项目102至122中任一项所述的免疫原性组合物，其包含每毫升在约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)范围内，例如每毫升约104至约107个病毒FFU或PFU或IU或vp，例如每毫升约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp的所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体中的每一种。
124.根据项目99至123中任一项所述的免疫原性组合物，其还包含助剂、洗涤剂、胶束形成剂和油中的一种或多种。
125.根据项目99至124中任一项所述的免疫原性组合物，其被配制以用于经由选自由以下项组成的组的途径施用：静脉内、肌内、皮内、皮下和粘膜(例如，颊、鼻内、直肠内、阴道内)。
126.根据项目99至125中任一项所述的免疫原性组合物，其被配制为液体，例如，为水溶液或悬浮液。
127.根据项目99至125中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述组合物是冻干的。
128.一种试剂盒，其包括一个或多个整体剂量的根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽中的一种或多种、根据项目10至19中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽中的一种或多种、根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白中的一种或多种、根据项目53至56中任一项所述的一种或多种多核苷酸、根据项目61至92中任一项所述的一种或多种载体、或根据项目99至127中任一项所述的一种或多种免疫原性组合物。
129.根据项目128所述的试剂盒，其包括一个或多个整体剂量的根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽、根据项目10至19中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽、根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白、根据项目53至56中任一项所述的多核苷酸、根据项目61至92中任一项所述的载体、或根据项目99至127中任一项所述的免疫原性组合物中的两者或更多者。
130.根据项目128所述的试剂盒，其中所述一个或多个整体剂量在单个容器中。
131.根据项目128所述的试剂盒，其中所述一个或多个整体剂量在两个或更多个单独的容器中。
132.根据项目128至131中任一项所述的试剂盒，其包括一个或多个选自由以下项组成的组的容器：小瓶、安瓿和预装注射器。
133.根据项目128至132中任一项所述的试剂盒，其包括一个或多个容器，所述一个或多个容器容纳水溶液或悬浮液中的所述一种或多种多肽、一种或多种多核苷酸、一种或多种载体或一种或多种免疫原性组合物。
134.根据项目128至132中任一项所述的试剂盒，其包括一个或多个容器，所述一个或多个容器容纳作为冻干制剂的所述一种或多种多肽、一种或多种多核苷酸、一种或多种载体或一种或多种免疫原性组合物。
135.根据项目128至134中任一项所述的试剂盒，其中所述一个或多个整体剂量是相同的。
136.根据项目128至134中任一项所述的试剂盒，其中所述一个或多个整体剂量是不同的。
137.根据项目128至136中任一项所述的试剂盒，其包括一个或多个整体剂量的根据项目61至92中任一项所述的一种或多种病毒载体，其中所述整体剂量在约103至约1012病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)范围内，例如约104至约107个病毒FFU或PFU或IU或vp，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp。
138.根据项目128至137中任一项所述的试剂盒，其包括编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸、或表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体、或包含两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，所述免疫原性多肽包含：
a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和
b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
139.根据项目128至138中任一项所述的试剂盒，其包括编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸、或表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体、或包含两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，所述免疫原性多肽包含：
a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和
b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
140.根据项目128至139中任一项所述的试剂盒，其包括编码两种免疫原性多肽的一种或多种多核苷酸、或表达两种免疫原性多肽的一种或多种载体、或包含两种免疫原性多肽的免疫原性组合物，所述免疫原性多肽包含：
a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13、或与SEQ IDNO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和
b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:41、或与SEQ IDNO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
141.根据项目128至140中任一项所述的试剂盒，其包括分别编码第一免疫原性多肽和第二免疫原性多肽的第一载体和第二载体，所述第一免疫原性多肽和所述第二免疫原性多肽分别包含：
a)包含以下或由以下组成的HBV聚合酶多肽突变体：SEQ ID NO:13、或与SEQ IDNO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；和
b)包含以下或由以下组成的HBV核心-sAg融合蛋白：SEQ ID NO:41、或与SEQ IDNO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
142.根据项目128至141中任一项所述的试剂盒，其中所述核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
143.根据项目128至142中任一项所述的试剂盒，其中所述sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:4。
144.根据项目128至143中任一项所述的试剂盒，其中所述sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
145.根据项目128至144中任一项所述的试剂盒，其中所述核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQID NO:41。
146.根据项目128至145中任一项所述的试剂盒，其包括第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项、或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
147.根据项目128至139中任一项所述的试剂盒，其包括第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、89、90或92、或与SEQ ID NO:29、89、90或92至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
148.根据项目128至147中任一项所述的试剂盒，其包括：
a)一个或多个整体剂量的根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体包含复制缺陷型或复制缺陷性卡利哺乳动物沙粒病毒；和
b)一个或多个整体剂量的根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体包含复制缺陷型或复制缺陷性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)。
149.根据项目128至147中任一项所述的试剂盒，其包括：
a)一个或多个整体剂量的根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自腺病毒科；和
b)一个或多个整体剂量的根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自痘病毒科(例如痘苗病毒，例如改良痘苗Ankara(MVA))。
150.根据项目128至147中任一项所述的试剂盒，其包括：
a)一个或多个整体剂量的根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自沙粒病毒科；和
b)一个或多个整体剂量的根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自腺病毒科。
151.一种试剂盒，其包括第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
152.根据项目151所述的试剂盒，其还包括第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
153.一种试剂盒，其包括第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
154.根据项目128至153中任一项所述的试剂盒，其还包括一个或多个整体剂量的一种或多种附加治疗剂。
155.根据项目154所述的试剂盒，其包括一种或多种Toll样受体(TLR)的一种或多种激动剂或活化剂。
156.根据项目155所述的试剂盒，其中所述TLR激动剂或活化剂选自由TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂组成的组。
157.根据项目155至156中任一项所述的试剂盒，其中所述TLR7激动剂选自由GS9620(维沙莫特)、R848(瑞喹莫德)、DS-0509、LHC-165和TMX-101(咪喹莫特)组成的组，并且/或者其中所述TLR8激动剂选自由GS-9688、R848(瑞喹莫德)和NKTR-262(双TLR7/TLR8激动剂)组成的组。
158.根据项目154至157中任一项所述的试剂盒，其包括选自IL-2、IL-7、IL-12和IL-15的白介素受体的一种或多种白介素受体激动剂。
159.根据项目158所述的试剂盒，其包括选自由以下项组成的组的一种或多种细胞因子：IL-2、IL-7、IL-12、IL-15以及它们的变体。
160.根据项目154至159中任一项所述的试剂盒，其包括一种或多种先天免疫活化剂。
161.根据项目160所述的试剂盒，其中所述一种或多种先天免疫活化剂包括选自由以下项组成的组的受体的激动剂：fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)、干扰素基因刺激剂(STING)受体、DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名RIG-I)、含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2)。
162.根据项目160至161中任一项所述的试剂盒，其包括一个或多个整体剂量的GS-3583和/或GS-9992。
163.根据项目154至162中任一项所述的试剂盒，其包括抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种拮抗剂或抑制剂和/或刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种活化剂或激动剂。
164.根据项目163所述的试剂盒，其中所述一种或多种免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：CD27、CD70；CD40、CD40LG；CD47、CD48(SLAMF2)、含跨膜和免疫球蛋白结构域的2(TMIGD2、CD28H)、CD84(LY9B、SLAMF5)、CD96、CD160、MS4A1(CD20)、CD244(SLAMF4)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；自然杀伤细胞细胞毒性受体3配体1(NCR3LG1、B7H6)；HERV-H LTR相关2(HHLA2、B7H7)；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF8(CD30)、TNFSF8(CD30L)；TNFRSF10A(CD261、DR4、TRAILR1)、TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF10B(CD262、DR5、TRAILR2)、TNFRSF10(TRAIL)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；TNFRSF17(BCMA、CD269)、TNFSF13B(BAFF)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；MHC I类多肽相关序列A(MICA)；MHC I类多肽相关序列B(MICB)；CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域4
(TIMD4；TIM4)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；信号转导淋巴细胞活化分子家族成员1(SLAMF1、SLAM、CD150)；淋巴细胞抗原9(LY9、CD229、SLAMF3)；SLAM家族成员6(SLAMF6、CD352)；SLAM家族成员7(SLAMF7、CD319)；UL16结合蛋白1(ULBP1)；UL16结合蛋白2(ULBP2)；UL16结合蛋白3(ULBP3)；视黄酸早期转录物1E(RAET1E；ULBP4)；视黄酸早期转录物1G(RAET1G；ULBP5)；视黄酸早期转录物1L(RAET1L；ULBP6)；淋巴细胞活化3(CD223)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；杀伤细胞凝集素样受体C2(KLRC2、CD159c、NKG2C)；杀伤细胞凝集素样受体C3(KLRC3、NKG2E)；杀伤细胞凝集素样受体C4(KLRC4、NKG2F)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。
165.根据项目163至164中任一项所述的试剂盒，其包括一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。
166.根据项目165所述的试剂盒，其中所述T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1配体2(PDCD1LG2、PD-L2、CD273)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；以及杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)。
167.根据项目163至166中任一项所述的试剂盒，其包括一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。
168.根据项目167所述的试剂盒，其中所述T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：CD27、CD70；CD40、CD40LG；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)。
169.根据项目167至168中任一项所述的试剂盒，其包括一个或多个整体剂量的AGEN-2373和/或AGEN-1223。
170.根据项目163至169中任一项所述的试剂盒，其包括一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。
171.根据项目170所述的试剂盒，其中所述NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；和杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1、CD94)。
172.根据项目163至171中任一项所述的试剂盒，其包括一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。
173.根据项目172所述的试剂盒，其中所述NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体选自：CD16、CD226(DNAM-1)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。
174.根据项目163至173中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种免疫检查点抑制剂包含PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)或CTLA4的蛋白质抑制剂。
175.根据项目174所述的试剂盒，其中所述CTLA4的蛋白质抑制剂选自由以下项组成的组：伊匹单抗、曲美木单抗、BMS-986218、AGEN1181、AGEN1884、BMS-986249、MK-1308、REGN-4659、ADU-1604、CS-1002、BCD-145、APL-509、JS-007、BA-3071、ONC-392、AGEN-2041、JHL-1155、KN-044、CG-0161、ATOR-1144、PBI-5D3H5、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)和AK-104(CTLA4/PD-1)。
176.根据项目174所述的试剂盒，其中所述PD-L1(CD274)或PD-1(PDCD1)的蛋白质抑制剂选自由以下项组成的组：赛帕利单抗(AB122)、派姆单抗、纳武单抗、西米单抗、匹地利珠单抗、AMP-224、MEDI0680(AMP-514)、斯巴达珠单抗、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、ASC22、度伐利尤单抗、BMS-936559、CK-301、PF-06801591、BGB-A317(替雷利珠单抗)、GLS-010(WBP-3055)、AK-103(HX-008)、AK-105、CS-1003、HLX-10、MGA-012、BI-754091、AGEN-2034、JS-001(特瑞普利单抗)、JNJ-63723283、杰诺单抗(CBT-501)、LZM-009、BCD-100、LY-3300054、SHR-1201、SHR-1210(卡瑞利珠单抗)、Sym-021、ABBV-181、PD1-PIK、BAT-1306(MSB0010718C)、CX-072、CBT-502、TSR-042(多塔利单抗)、MSB-2311、JTX-4014、BGB-A333、SHR-1316、CS-1001(WBP-3155、KN-035、IBI-308(信迪利单抗)、HLX-20、KL-A167、STI-A1014、STI-A1015(IMC-001)、BCD-135、FAZ-053、TQB-2450、MDX1105-01、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-013(PD-1/LAG-3)、FS-118(LAG-3/PD-L1)MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、RO-7121661(PD-1/TIM-3)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)、AK-104(CTLA4/PD-1)、M7824(PD-L1/TGFβ-EC结构域)、CA-170(PD-L1/VISTA)、CDX-527(CD27/PD-L1)、LY-3415244(TIM3/PDL1)和INBRX-105(4-1BB/PDL1)。
177.根据项目163至176中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种免疫检查点抑制剂包含CD274(PDL1、PD-L1)、程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)或CTLA4的小分子抑制剂。
178.根据项目177所述的试剂盒，其中所述CD274或PDCD1的小分子抑制剂选自由GS-4224、GS-4416、INCB086550和MAX10181组成的组。
179.根据项目177所述的试剂盒，其中所述CTLA4的小分子抑制剂包含BPI-002。
180.根据项目154至179中任一项所述的试剂盒，其还包括一种或多种抗病毒剂。
181.根据项目180所述的试剂盒，其中一种或多种抗病毒剂选自由以下项组成的组：拉米夫定(LAM)、阿德福韦双特戊酯(ADV)、恩替卡韦(ETV)、替比夫定(LdT)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)、替诺福韦艾拉酚胺(TAF或)和雷迪帕韦+索非布韦
182.根据项目154至181中任一项所述的试剂盒，其还包括一种或多种选自由以下项组成的组的治疗剂：HBV抗原抑制剂(例如，HBV核心抗原(HBcAg)抑制剂、HBV表面抗原(HBsAg)抑制剂、HBx抑制剂、HBV E抗原抑制剂)、抗HBV抗原抗体、靶向HBV的抑制性核酸(例如，反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、DNA引导的RNA干扰(ddRNAi))、靶向HBV的基因编辑物(例如，CRISPR-Cas(例如Cas9、Cas12、Cascade、Cas13)、锌指核酸酶、归巢核酸内切酶、归巢大范围核酸酶(例如，ARCUS)、合成核酸酶、TALEN)、共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂和HBsAg分泌或组装抑制剂和HBV病毒进入抑制剂。
183.一种用于在对其有需要的受试者中引发针对人乙型肝炎病毒(HBV)的免疫应答的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据项目99至127中任一项所述的一种或多种免疫原性组合物。
184.一种在对其有需要的受试者中治疗或预防人乙型肝炎病毒(HBV)的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据项目99至127中任一项所述的一种或多种免疫原性组合物。
185.根据项目99至127中任一项所述的一种或多种免疫原性组合物在引发对人乙型肝炎病毒(HBV)的免疫应答的方法中或在治疗或预防人乙型肝炎病毒(HBV)的方法中的用途。
186.根据项目99至127中任一项所述的一种或多种免疫原性组合物，其用于引发对人乙型肝炎病毒(HBV)的免疫应答的方法中或用于治疗或预防人乙型肝炎病毒(HBV)的方法中。
187.根据项目183至186中任一项所述的方法或用途，所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码根据项目1至7中任一项所述的截短的HBV聚合酶多肽或根据项目10至16中任一项所述的HBV聚合酶缺失突变多肽的多核苷酸；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码根据项目21至44中任一项所述的核心-sAg融合蛋白的多核苷酸。
188.根据项目183至187中任一项所述的方法或用途，所述一种或多种
免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:5-14中的任一项、或与SEQ ID NO:5-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
189.根据项目183至188中任一项所述的方法或用途，所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项、或与SEQ ID NO:13-14中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项、或与SEQ ID NO:38-41中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、
90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
190.根据项目183至189中任一项所述的方法或用途，所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13、或与SEQ ID NO:13至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:41、或与SEQ ID NO:41至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的氨基酸序列。
191.根据项目183至190中任一项所述的方法或用途，其中所述核心多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
192.根据项目183至191中任一项所述的方法或用途，其中所述sAg多肽包含在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
193.根据项目183至192中任一项所述的方法或用途，其中所述sAg多肽包含在对应于位置53的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置68的氨基酸位置处的异亮氨酸(I)残基、在对应于位置125的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置127的氨基酸位置处的脯氨酸(P)残基、在对应于位置161的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置200的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置210的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基和在对应于位置213的氨基酸位置处的亮氨酸(L)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4。
194.根据项目183至193中任一项所述的方法或用途，其中所述核心-sAg融合多肽包含在对应于位置12的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置67的氨基酸位置处的天冬酰胺(N)残基、在对应于位置74的氨基酸位置处的缬氨酸(V)残基、在对应于位置97的氨基酸位置处的苯丙氨酸(F)残基、在对应于位置249的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置250的氨基酸位置处的苏氨酸(T)残基、在对应于位置317的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置318的氨基酸位置处的丝氨酸(S)残基、在对应于位置326的氨基酸位置处的精氨酸(R)残基、在对应于位置338的氨基酸位置处的酪氨酸(Y)残基、在对应于位置363的氨基酸位置处的甘氨酸(G)残基和在对应于位置372的氨基酸位置处的丙氨酸(A)残基中的一者或多者，其中所述位置编号参考SEQ ID NO:41。
195.根据项目183至194中任一项所述的方法或用途，所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项、或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、
93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
196.根据项目183至195中任一项所述的方法或用途，所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、89、90或92、或与SEQ ID NO:29、89、90或92至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、
91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
197.根据项目187至196中任一项所述的方法或用途，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自沙粒病毒科。
198.根据项目187至197中任一项所述的方法或用途，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。
199.根据项目187至198中任一项所述的方法或用途，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒的沙粒病毒载体。
200.根据项目187至199中任一项所述的方法或用途，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体是复制缺陷性或复制缺陷型的。201.根据项目187至199中任一项所述的方法或用途，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体是复制减毒型的。
202.根据项目183至201中任一项所述的方法或用途，其中所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29、或与SEQ ID NO:29至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
203.根据项目183至202中任一项所述的方法或用途，其中所述一种或多种免疫原性组合物包含或还包含含有第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90、或与SEQ ID NO:90至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列；并且
b)所述第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37、或与SEQ ID NO:37至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的序列的核酸序列。
204.根据项目183至203中任一项所述的方法或用途，其中所述受试者感染了HBV病毒，疑似感染了HBV病毒，或有感染HBV病毒的风险。
205.根据项目183至204中任一项所述的方法或用途，其中所述受试者是无症状的。
206.根据项目183至204中任一项所述的方法或用途，其中所述受试者慢性感染了HBV。
207.根据项目206所述的方法或用途，其中所述受试者表现出或经历选自肝衰竭、肝癌、肝纤维化和肝硬化的一种或多种症状。
208.根据项目183至204中任一项所述的方法或用途，其中所述受试者急性感染了HBV。
209.根据项目206至208所述的方法或用途，其中所述受试者表现出或经历选自黄疸、皮肤上可见的肿胀血管网、深色(例如，橙色或棕色)尿液、浅色粪便、发热、持久疲劳、不适、腹痛、腹液、食欲不振、恶心和呕吐的一种或多种症状。
210.根据项目183至209中任一项所述的方法或用途，其中所述受试者共感染了丁型肝炎病毒(HDV)。
211.根据项目183至210中任一项所述的方法或用途，其中所述组合物经由选自静脉内、肌内、皮内、皮下和粘膜(例如，颊、鼻内、直肠内、阴道内)的途径施用。
212.根据项目183至211中任一项所述的方法或用途，其包括施用约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)，例如每次施用约104至约107个病毒FFU或PFU或IU或vp，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp。
213.根据项目183至212中任一项所述的方法或用途，其中一种或多种组合物被多次施用。
214.根据项目183至213中任一项所述的方法或用途，其包括每隔一周(Q2W)或每月(Q4W)静脉内或肌内施用约106至约108个病毒FFU或PFU或IU或vp/施用。
215.根据项目183至214中任一项所述的方法或用途，其包括在至少约2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月或更长的时间段内或直到在所述受试者的血清或血浆中不能够检测到sAg，多次施用所述一种或多种组合物。
216.根据项目183至215中任一项所述的方法或用途，其包括初免-加强方案，所述初免-加强方案包括在第一时间点施用初免组合物并在一个或多个后续时间点施用一种或多种加强组合物。
217.根据项目216所述的方法或用途，其包括重复所述初免-加强方案一次或多次迭代。
218.根据项目216至217中任一项所述的方法或用途，其中所述初免组合物和所述一种或多种加强组合物的施用间隔至少1周且至多至少2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月。
219.根据项目216至218中任一项所述的方法或用途，其中所述初免组合物和所述加强组合物包含相同的免疫原性组合物。
220.根据项目216至218中任一项所述的方法或用途，其中所述初免组合物和所述加强组合物包含不同的免疫原性组合物。
221.根据项目216至218中任一项所述的方法或用途，其中所述初免组合物和所述加强组合物包含相同的一种或多种多肽和相同的病毒表达载体。
222.根据项目216至218中任一项所述的方法或用途，其中所述初免组合物和所述加强组合物包含不同的多肽和/或不同的病毒表达载体。
223.根据项目222所述的方法或用途，其包括用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强。
224.根据项目216至223中任一项所述的方法或用途，其中所述初免-加强方案包括：
a)用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种多核苷酸的加强组合物加强，其中所述一种或多种多核苷酸包含DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA；
b)用包含一种或多种多核苷酸的初免组合物初免，其中所述一种或多种多核苷酸包含DNA、cDNA、mRNA或自复制RNA，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强；
c)用包含一种或多种病毒表达载体的初免组合物初免，并用包含一种或多种病毒表达载体的加强组合物加强，其中所述初免组合物中的所述一种或多种病毒表达载体和所述加强组合物中的所述一种或多种病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；
d)用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的加强组合物加强，其中所述初免组合物中的所述一种或多种复制缺陷型病毒表达载体和所述加强组合物中的所述一种或多种复制缺陷型病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；
e)用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的加强组合物加强，其中所述初免组合物中的所述一种或多种复制减毒型病毒表达载体和所述加强组合物中的所述一种或多种复制减毒型病毒表达载体来自相同、相关或不相关的分类学家族；
f)用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的加强组合物加强；
g)用包含一种或多种复制减毒型病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型病毒表达载体的加强组合物加强；
h)用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
i)用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；
j)用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；
k)用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
l)用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
m)用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
n)用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
o)用包含一种或多种沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
p)用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的加强组合物加强；或
q)用包含一种或多种腺病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种痘病毒病毒表达载体的加强组合物加强。
225.根据项目216至223中任一项所述的方法或用途，其中所述初免-加强方案包括：
a)用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
b)用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；
c)用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；或
d)用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强。
226.根据项目216至225中任一项所述的方法或用途，其中所述初免组合物和所述加强组合物包含根据项目102至111中任一项所述的免疫原性组合物。
227.根据项目183至226中任一项所述的方法或用途，其中所述受试者未接受抗病毒疗法或在施用所述一种或多种免疫原性组合物之前中止抗病毒疗法。
228.根据项目183至227中任一项所述的方法或用途，其中在一次或多次施用所述一种或多种免疫原性组合物之后中止抗病毒疗法。
229.根据项目183至228中任一项所述的方法或用途，其还包括向所述受试者施用一种或多种附加治疗剂，例如两种、三种、四种或更多种附加治疗剂。
230.根据项目229所述的方法或用途，其包括共同施用一种或多种Toll样受体(TLR)的一种或多种激动剂或活化剂。
231.根据项目230所述的方法或用途，其中所述TLR激动剂或活化剂选自由TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂组成的组。
232.根据项目230至231中任一项所述的方法或用途，其中所述TLR7激动剂选自由GS 9620(维沙莫特)、R848(瑞喹莫德)、DS-0509、LHC-165和TMX-101(咪喹莫特)组成的组，并且/或者其中所述TLR8激动剂选自由GS-9688、R848(瑞喹莫德)和NKTR-262(双TLR7/TLR8激动剂)组成的组。
233.根据项目229至232中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用选自IL-2、IL-7、IL-12和IL-15的白介素受体的一种或多种白介素受体激动剂。
234.根据项目233所述的方法或用途，其包括共同施用选自由以下项组成的组的一种或多种细胞因子：IL-2、IL-7、IL-12、IL-15以及它们的变体。
235.根据项目229至234中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用一种或多种先天免疫活化剂。
236.根据项目235所述的方法或用途，其中所述一种或多种先天免疫活化剂包括选自由以下项组成的组的受体的激动剂：fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)、干扰素基因刺激剂(STING)受体、DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名RIG-I)、含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2)。
237.根据项目235至236中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用GS-3583和/或GS-9992。
238.根据项目229至237中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种拮抗剂或抑制剂和/或刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种活化剂或激动剂。
239.根据项目238所述的方法或用途，其中所述一种或多种免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：CD27、CD70；CD40、CD40LG；CD47、CD48(SLAMF2)、含跨膜和免疫球蛋白结构域的2(TMIGD2、CD28H)、CD84(LY9B、SLAMF5)、CD96、CD160、MS4A1(CD20)、CD244(SLAMF4)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；自然杀伤细胞细胞毒性受体3配体1(NCR3LG1、B7H6)；HERV-H LTR相关2(HHLA2、B7H7)；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF8(CD30)、TNFSF8(CD30L)；TNFRSF10A(CD261、DR4、TRAILR1)、TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF10B(CD262、DR5、TRAILR2)、TNFRSF10(TRAIL)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；TNFRSF17(BCMA、CD269)、TNFSF13B(BAFF)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；MHC I类多肽相关序列A(MICA)；MHC I类多肽相关序列B(MICB)；CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；含T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域4(TIMD4；TIM4)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；信号转导淋巴细胞活化分子家族成员1(SLAMF1、SLAM、CD150)；淋巴细胞抗原9(LY9、CD229、SLAMF3)；SLAM家族成员6(SLAMF6、CD352)；SLAM家族成员7(SLAMF7、CD319)；UL16结合蛋白1(ULBP1)；UL16结合蛋白2(ULBP2)；UL16结合蛋白3(ULBP3)；视黄酸早期转录物1E(RAET1E；ULBP4)；视黄酸早期转录物1G(RAET1G；ULBP5)；视黄酸早期转录物1L(RAET1L；ULBP6)；淋巴细胞活化3(CD223)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；杀伤细胞凝集素样受体C2(KLRC2、CD159c、NKG2C)；杀伤细胞凝集素样受体C3(KLRC3、NKG2E)；杀伤细胞凝集素样受体C4(KLRC4、NKG2F)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。
240.根据项目238至239中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用一种或多种T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。
241.根据项目240所述的方法或用途，其中所述T细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：CD274(CD274、PDL1、PD-L1)；程序性细胞死亡1配体2(PDCD1LG2、PD-L2、CD273)；程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)；细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4、CD152)；CD276(B7H3)；含V-set结构域的T细胞活化抑制剂1(VTCN1、B7H4)；V-set免疫调节受体(VSIR、B7H5、VISTA)；免疫球蛋白超家族成员11(IGSF11、VSIG3)；TNFRSF14(HVEM、CD270)、TNFSF14(HVEML)；CD272(B和T淋巴细胞相关(BTLA))；含PVR相关免疫球蛋白结构域(PVRIG、CD112R)；具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)；淋巴细胞活化3(LAG3、CD223)；甲型肝炎病毒细胞受体2(HAVCR2、TIMD3、TIM3)；半乳凝素9(LGALS9)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；以及杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)。
242.根据项目238至239中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用一种或多种T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。
243.根据项目242所述的方法或用途，其中所述T细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：CD27、CD70；CD40、CD40LG；诱导型T细胞共刺激因子(ICOS、CD278)；诱导型T细胞共刺激因子配体(ICOSLG、B7H2)；TNF受体超家族成员4(TNFRSF4、OX40)；TNF超家族成员4(TNFSF4、OX40L)；TNFRSF9(CD137)、TNFSF9(CD137L)；TNFRSF18(GITR)、TNFSF18(GITRL)；CD80(B7-1)、CD28；nectin细胞粘附分子2(NECTIN2、CD112)；CD226(DNAM-1)；脊髓灰质炎病毒受体(PVR)细胞粘附分子(PVR、CD155)。
244.根据项目242至243中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用AGEN-2373和/或AGEN-1223。
245.根据项目238至244中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用一种或多种NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种阻断剂或抑制剂。
246.根据项目245所述的方法或用途，其中所述NK细胞抑制性免疫检查点蛋白或受体选自由以下项组成的组：杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR、CD158E1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾1(KIR2DL1)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾2(KIR2DL2)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、两个Ig结构域和长胞质尾3(KIR2DL3)；杀伤细胞免疫球蛋白样受体、三个Ig结构域和长胞质尾1(KIR3DL1)；杀伤细胞凝集素样受体C1(KLRC1、NKG2A、CD159A)；和杀伤细胞凝集素样受体D1(KLRD1、CD94)。
247.根据项目238至239中任一项所述的方法或用途，其包括共同施用一种或多种NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体的一种或多种激动剂或活化剂。
248.根据项目247所述的方法或用途，其中所述NK细胞刺激性免疫检查点蛋白或受体选自：CD16、CD226(DNAM-1)；杀伤细胞凝集素样受体K1(KLRK1、NKG2D、CD314)；以及SLAM家族成员7(SLAMF7)。
249.根据项目238至241中任一项所述的方法或用途，其中所述一种或多种免疫检查点抑制剂包含PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)或CTLA4的蛋白质抑制剂。
250.根据项目249所述的方法或用途，其中所述CTLA4的蛋白质抑制剂选自由以下项组成的组：伊匹单抗、曲美木单抗、BMS-986218、AGEN1181、AGEN1884、BMS-986249、MK-1308、REGN-4659、ADU-1604、CS-1002、BCD-145、APL-509、JS-007、BA-3071、ONC-392、AGEN-2041、JHL-1155、KN-044、CG-0161、ATOR-1144、PBI-5D3H5、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)和AK-104(CTLA4/PD-1)。
251.根据项目249所述的方法或用途，其中所述PD-L1(CD274)或PD-1(PDCD1)的蛋白质抑制剂选自由以下项组成的组：赛帕利单抗(AB122)、派姆单抗、纳武单抗、西米单抗、匹地利珠单抗、AMP-224、MEDI0680(AMP-514)、斯巴达珠单抗、阿替利珠单抗、阿维鲁单抗、ASC22、度伐利尤单抗、BMS-936559、CK-301、PF-06801591、BGB-A317(替雷利珠单抗)、GLS-010(WBP-3055)、AK-103(HX-008)、AK-105、CS-1003、HLX-10、MGA-012、BI-754091、AGEN-2034、JS-001(特瑞普利单抗)、JNJ-63723283、杰诺单抗(CBT-501)、LZM-009、BCD-100、LY-3300054、SHR-1201、SHR-1210(卡瑞利珠单抗)、Sym-021、ABBV-181、PD1-PIK、BAT-1306(MSB0010718C)、CX-072、CBT-502、TSR-042(多塔利单抗)、MSB-2311、JTX-4014、BGB-A333、SHR-1316、CS-1001(WBP-3155、KN-035、IBI-308(信迪利单抗)、HLX-20、KL-A167、STI-A1014、STI-A1015(IMC-001)、BCD-135、FAZ-053、TQB-2450、MDX1105-01、FPT-155(CTLA4/PD-L1/CD28)、PF-06936308(PD-1/CTLA4)、MGD-013(PD-1/LAG-3)、FS-118(LAG-3/PD-L1)MGD-019(PD-1/CTLA4)、KN-046(PD-1/CTLA4)、MEDI-5752(CTLA4/PD-1)、RO-7121661(PD-1/TIM-3)、XmAb-20717(PD-1/CTLA4)、AK-104(CTLA4/PD-1)、M7824(PD-L1/TGFβ-EC结构域)、CA-170(PD-L1/VISTA)、CDX-527(CD27/PD-L1)、LY-3415244(TIM3/PDL1)和INBRX-105(4-1BB/PDL1)。
252.根据项目238至241中任一项所述的方法或用途，其中所述一种或多种免疫检查点抑制剂包含CD274(PDL1、PD-L1)、程序性细胞死亡1(PDCD1、PD1、PD-1)或CTLA4的小分子抑制剂。
253.根据项目252所述的方法或用途，其中所述CD274或PDCD1的小分子抑制剂选自由GS-4224、GS-4416、INCB086550和MAX10181组成的组。
254.根据项目252所述的方法或用途，其中所述CTLA4的小分子抑制剂包含BPI-002。
255.根据项目229至254中任一项所述的方法或用途，其还包括向所述受试者共同施用一种或多种抗病毒剂。
256.根据项目255所述的方法或用途，其中所述一种或多种抗病毒剂选自由以下项组成的组：拉米夫定(LAM)、阿德福韦双特戊酯(ADV)、恩替卡韦(ETV)、替比夫定(LdT)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)、替诺福韦艾拉酚胺(TAF或)和雷迪帕韦+索非布韦/>
257.根据项目229至256中任一项所述的方法或用途，其还包括向所述受试者共同施用一种或多种选自由以下项组成的组的治疗剂：HBV抗原抑制剂(例如，HBV核心抗原(HBcAg)抑制剂、HBV表面抗原(HBsAg)抑制剂、HBx抑制剂、HBV E抗原抑制剂)、抗HBV抗原抗体、靶向HBV的抑制性核酸(例如，反义寡核苷酸、短干扰RNA(siRNA)、DNA引导的RNA干扰(ddRNAi))、靶向HBV的基因编辑物(例如，CRISPR-Cas(例如Cas9、Cas12、Cascade、Cas13)、锌指核酸酶、归巢核酸内切酶、归巢大范围核酸酶(例如，ARCUS)、合成核酸酶、TALEN)、共价闭环DNA(cccDNA)抑制剂和HBsAg分泌或组装抑制剂和HBV病毒进入抑制剂。
258.根据项目229至257中任一项所述的方法或用途，其中所述方法在所述受试者中活化靶向一个或多个HBV多肽表位的CD8+T细胞和/或CD4+T细胞。
259.根据项目229至258中任一项所述的方法或用途，其中所述方法在所述受试者中引发结合一种或多种HBV多肽的抗体的产生。

Claims (46)

1.一种融合蛋白，其从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，不包含HBV前S1多肽和/或HBV前S2多肽，并且其中：
a)所述核心多肽来自HBV基因型B或C并且所述sAg多肽来自HBV基因型C，其中所述融合蛋白包含以下或由以下组成：
SEQ ID NO:38-39中的任一项的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:
38-39中的任一项的全长至少93％、94％、95％、96％、97％、
98％或99％相同的氨基酸序列；或
b)所述核心多肽来自HBV基因型D并且所述sAg多肽来自HBV基因型D，其中所述融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:40-41中的任一项的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:40-41中的任一项的全长至少97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
2.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1所述的融合蛋白。
3.一种多核苷酸，其编码核心-sAg融合蛋白，所述核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽，其中所述核心多肽来自HBV基因型B或C并且所述sAg多肽来自HBV基因型C，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，并且其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33和34中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:33和34中的任一项的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
4.一种多核苷酸，其编码核心-sAg融合蛋白，所述核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽，所述核心多肽来自HBV基因型D并且所述sAg多肽来自HBV基因型D，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，并且其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:35、36和37中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:35、36和37中的任一项的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括cDNA、mRNA、自扩增RNA(SAM)、自复制RNA或自扩增复制子RNA(RepRNA)。
6.一种载体，其包含根据权利要求2至5中任一项所述的一种或多种多核苷酸。
7.根据权利要求6所述的载体，其中所述载体是病毒载体。
8.根据权利要求6至7中任一项所述的载体，其中所述病毒载体来自选自腺病毒科、沙粒病毒科、疱疹病毒科、痘病毒科、黄病毒科、弹状病毒科、披膜病毒科的分类学家族的病毒。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)、卡利哺乳动物沙粒病毒(又名皮钦德哺乳动物沙粒病毒或皮钦德沙粒病毒)、瓜纳瑞托病毒(GTOV)、胡宁病毒(JUNV)、拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、马丘波病毒(MACV)、萨比亚病毒(SABV)和怀特沃特阿罗约病毒(WWAV)的沙粒病毒载体。
10.根据权利要求9所述的载体，其中所述病毒载体是选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒的沙粒病毒载体。
11.根据权利要求6至7中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是人腺病毒或猿猴腺病毒。
12.根据权利要求6至11中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是复制缺陷性、复制缺陷型、复制减毒型或有复制能力的。
13.根据权利要求6至12中任一项所述的载体，其中所述病毒载体是具有二分段基因组的复制缺陷性沙粒病毒。
14.一种沙粒病毒载体，其包含编码HBV核心-sAg融合多肽的多核苷酸，所述HBV核心-sAg融合多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项的氨基酸序列、或与SEQID NO:38-41中的任一项的全长至少97％、98％或99％相同的氨基酸序列，并且其中所述sAg多肽不包含HBV前S1多肽和/或HBV前S2多肽。
15.根据权利要求14所述的沙粒病毒载体，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:33-37中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
16.根据权利要求14至15中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述载体具有二分段基因组并且还包含编码截短的HBV聚合酶的多核苷酸，所述截短的HBV聚合酶包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项的氨基酸序列，并且其中所述截短的HBV聚合酶不包含所有的HBV聚合酶末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的HBV聚合酶间隔区结构域。
17.根据权利要求16所述的沙粒病毒载体，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29和89-94中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:29和89-94中的任一项的全长至少99％相同的核酸序列。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的沙粒病毒载体，其中所述沙粒病毒载体是复制缺陷性、复制缺陷型或无复制能力的。
19.一种宿主细胞，其包含根据权利要求2至5中任一项所述的一种或多种多核苷酸或根据权利要求6至18中任一项所述的一种或多种载体。
20.一种免疫原性组合物，其包含根据权利要求1所述的的融合蛋白中的一种或多种、根据权利要求2至5中任一项所述的一种或多种多核苷酸、或根据权利要求6至18中任一项所述的一种或多种载体；
和药学上可接受的载体。
21.根据权利要求20所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，其中所述多肽的长度不长于600个氨基酸并且不包含所有的末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的间隔区结构域，其中所述多肽包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:13-14中的任一项的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV核心多肽和HBV小表面抗原(sAg)多肽，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，并且其中：
i)所述核心多肽来自HBV基因型B或C并且所述sAg多肽来自HBV基因型C，其中所述融合蛋白包含以下或由以下组成：
SEQ ID NO:38-39中的任一项的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:
38-39中的任一项的全长至少92％、93％、94％、95％、96％、
97％、98％或99％相同的氨基酸序列；或
ii)所述核心多肽来自HBV基因型D并且所述sAg多肽来自HBV基因型D，其中所述融合蛋白包含以下或由以下组成：
SEQ ID NO:40-41中的任一项的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:
40-41中的任一项的全长至少97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
22.根据权利要求20至21中任一项所述的免疫原性组合物，其包含第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:27-32和89-94中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项的全长至少99％相同的核酸序列；
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:33-37中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项的全长至少85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
23.根据权利要求21至22中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自沙粒病毒科。
24.根据权利要求23所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体来自选自淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)或卡利哺乳动物沙粒病毒的沙粒病毒载体。
25.根据权利要求20至24中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述第一病毒表达载体和所述第二病毒表达载体是复制缺陷性或复制缺陷型的。
26.一种免疫原性组合物，其包含第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一LCMV沙粒病毒表达载体包含编码截短的HBV聚合酶多肽的多核苷酸，所述截短的HBV聚合酶多肽包含失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中所述多肽的长度不长于600个氨基酸并且不包含所有的末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的间隔区结构域，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29的核酸序列、或与SEQID NO:
29的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二LCMV沙粒病毒表达载体包含编码核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV基因型D核心多肽和HBV基因型D小表面抗原(sAg)
多肽，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37的核酸序列、或与SEQ ID NO:37的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
27.一种免疫原性组合物，其包含第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含编码截短的HBV聚合酶多肽的多核苷酸，所述截短的HBV聚合酶多肽包含失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中所述多肽的长度不长于600个氨基酸并且不包含所有的末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的间隔区结构域，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90的核酸序列、或与SEQ ID NO:
90的全长至少88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含编码核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV基因型D核心多肽和HBV基因型D小表面抗原(sAg)
多肽，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37的核酸序列、或与SEQ ID NO:37的全长至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
28.根据权利要求20至27中任一项所述的免疫原性组合物，其被配制为水溶液或悬浮液。
29.一种试剂盒，其包括一个或多个整体剂量的根据权利要求14至18中任一项所述的沙粒病毒载体中的一种或多种、或根据权利要求20至28中任一项所述的一种或多种免疫原性组合物。
30.根据权利要求29所述的试剂盒，其包括第一病毒表达载体和第二病毒表达载体，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:27-32和89-94中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项的全长至少99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:33-37中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项的全长至少85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
31.一种试剂盒，其包括第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一LCMV沙粒病毒表达载体包含编码截短的HBV聚合酶多肽的多核苷酸，所述截短的HBV聚合酶多肽包含失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中所述多肽的长度不长于600个氨基酸并且不包含所有的末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的间隔区结构域，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29的核酸序列、或与SEQID NO:
29的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二LCMV沙粒病毒表达载体包含编码核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV基因型D核心多肽和HBV基因型D小表面抗原(sAg)
多肽，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37的核酸序列、或与SEQ ID NO:37的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
32.根据权利要求31所述的试剂盒，其还包括第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体，其中：
a)所述第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含编码截短的HBV聚合酶多肽的多核苷酸，所述截短的HBV聚合酶多肽包含失活的逆转录酶结构域和失活的RNA酶H，其中所述多肽的长度不长于600个氨基酸并且不包含所有的末端蛋白(TP)结构域并且不包含所有或部分的间隔区结构域，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90的核酸序列、或与SEQ ID NO:
90的全长至少88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含编码核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白从N-末端到C-末端依次包含HBV基因型D核心多肽和HBV基因型D小表面抗原(sAg)
多肽，其中所述融合蛋白的长度不长于450个氨基酸，其中所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37的核酸序列、或与SEQ ID NO:37的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
33.根据权利要求20至28中任一项所述的一种或多种免疫原性组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在对其有需要的受试者中治疗或预防人乙型肝炎病毒(HBV)。
34.根据权利要求33所述的用途，所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含编码HBV聚合酶多肽突变体的多核苷酸，所述HBV聚合酶多肽突变体包含以下或由以下组成：
SEQ ID NO:13-14中的任一项的氨基酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含编码所述核心-sAg融合蛋白的多核苷酸，所述核心-sAg融合蛋白包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:38-41中的任一项的氨基酸序列、或与SEQ IDNO:38-41中的任一项的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、
91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
35.根据权利要求33至34中任一项所述的用途，所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一病毒表达载体和第二病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:27-32和89-94中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:27-32和89-94中的任一项的全长至少99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQID NO:33-37中的任一项的核酸序列、或与SEQ ID NO:33-37中的任一项的全长至少85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
36.根据权利要求33至35中任一项所述的用途，其中所述一种或多种免疫原性组合物包含含有第一LCMV沙粒病毒表达载体和第二LCMV沙粒病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:29的核酸序列、或与SEQ ID NO:29的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二LCMV沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37的核酸序列、或与SEQ ID NO:37的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
37.根据权利要求33至36中任一项所述的用途，其中所述一种或多种免疫原性组合物包含或还包含含有第一皮钦德沙粒病毒表达载体和第二皮钦德沙粒病毒表达载体的混合物，其中：
a)所述第一皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:90的核酸序列、或与SEQ ID NO:90的全长至少88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列；并且
b)所述第二皮钦德沙粒病毒表达载体包含多核苷酸，所述多核苷酸包含以下或由以下组成：SEQ ID NO:37的核酸序列、或与SEQ ID NO:37的全长至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的核酸序列。
38.根据权利要求33至37中任一项所述的用途，其中所述药物被配制用于经由选自静脉内、肌内、皮内、皮下和粘膜(例如，颊、鼻内、直肠内、阴道内)的途径施用。
39.根据权利要求33至38中任一项所述的用途，其中所述药物被配制用于施用约103至约1012个病毒病灶形成单位(FFU)或空斑形成单位(PFU)或感染性单位(IU)或病毒颗粒(vp)，例如每次施用约104至约107个病毒FFU或PFU或IU或vp，例如约103至约104、105、106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒FFU或PFU或IU或vp。
40.根据权利要求33至39中任一项所述的用途，其中所述药物被配制用于每隔一周(Q2W)或每月(Q4W)静脉内或肌内施用约106至约108个病毒FFU或PFU或IU或vp/施用。
41.根据权利要求33至40中任一项所述的用途，其中所述药物被配制用于初免-加强方案，所述初免-加强方案包括在第一时间点施用初免组合物并在一个或多个后续时间点施用一种或多种加强组合物。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述初免-加强方案包括：
a)用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强；
b)用包含一种或多种皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；
c)用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的加强组合物加强；或
d)用包含一种或多种复制缺陷型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎哺乳动物沙粒病毒(LCMV)病毒表达载体的初免组合物初免并用包含一种或多种复制缺陷型皮钦德哺乳动物沙粒病毒病毒表达载体的加强组合物加强。
43.根据权利要求41至42中任一项所述的用途，其中所述初免组合物和所述加强组合物包含根据权利要求20至28中任一项所述的免疫原性组合物。
44.根据权利要求33至43中任一项所述的用途，其中所述药物还包括向一种或多种附加治疗剂，例如两种、三种、四种或更多种附加治疗剂。
45.根据权利要求44所述的用途，其中所述药物包括选自由以下项组成的组的受体的激动剂：fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)、干扰素基因刺激剂(STING)受体、DExD/H-盒解旋酶58(DDX58；又名RIG-I)和含有核苷酸结合的低聚结构域蛋白2(NOD2)。
46.根据权利要求44所述的用途，其中所述药物包括选自PD-L1(CD274)、PD-1(PDCD1)和CTLA4的抗体抑制剂的一种或多种免疫检查点抑制剂。
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