PT2861604T - Inibidores macrocíclicos de vírus flaviridae - Google Patents

Inibidores macrocíclicos de vírus flaviridae Download PDF

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Neil Pettit Simon
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Lazarides Linos
Kenneth Dean David
Andrew Dunbar Neil
John Highton Adrian
John Keats Andrew
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James Schrier Adam
Jansa Petr
Yves Chiva Jean
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Description

DESCRIÇÃO
INIBIDORES MACROCÍCLICOS DE VÍRUS FLAVIRIDAE
CAMPO O presente pedido proporciona novos compostos que inibem vírus, composições contendo tais compostos, e métodos terapêuticos que compreendem a administração de tais compostos.
ANTECEDENTES Vírus de ARN que compreendem a família Flaviviridae incluem pelo menos três géneros distinguíveis incluindo pestivírus, flavivírus, e hepacivi'rizs (Calisher, et al. , J. Gen. Virol., 1993, 70, 37-43). Embora os pestivírus causem muitas doenças em animais economicamente importantes tais como o vírus da diarreia bovina viral (BVDV), vírus da febre suína clássica (CSFV, cólera suína) e doença da fronteira de ovelhas (BDV), sua importância em doença humana é menos caracterizada (Moennig, V., et al., Adv. Vir. Res. 1992, 48, 53-98). Os flavivírus são responsáveis por importantes doenças humanas tais como dengue e febre amarela enquanto os hepacivírus causam infeções por vírus da hepatite C em seres humanos. Outras infeções virais importantes causadas por Flaviviridae incluem vírus West Nile (WNV), vírus da encefalite japonesa (JEV), vírus da encefalite originada em carraça, vírus Junj in, encefalite de Murray Valley, encefalite St Louis, vírus da febre hemorrágica Omsk e vírus Zika. 0 vírus da hepatite C (HCV) é a causa principal de doença hepática crónica em todo o mundo (Boyer, N. et al. J Hepatol. 32:98-112, 2000) deste modo um significativo foco da investigação antiviral atual é dirigida para o desenvolvimento de métodos melhorados tratamento de infeções HCV crónicas em seres humanos (Di Besceglie, A.M. e Bacon, B. M. , Scientific American, Oct.: 80-85, (1999);
Gordon, C. P., et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 1-20; Maradpour, D., et al. , Nat. Rev. Micro. 2007, 5(6), 453 -4 63) . Um número de tratamentos de HCV são revistos por Dymock et al. em Antiviral Chemistry 0 Chemotherapy, 11:2; 79-95 (2000). Curas virológicas de pacientes com infeção crónica por HCV são difíceis de conseguir devido à quantidade enorme de produção diária de vírus em pacientes infetados cronicamente e à alta mutabilidade espontânea do vírus HCV (Neumann, et al., Science 1998, 282, 103-7; Fukimoto, et al., Hepatology, 1996, 24, 1351-4; Domingo, et al., Gene 1985, 40, 1-8; Martell, et al. , J. Virol. 1992, 66, 3225-9.
Atualmente, existem essencialmente dois compostos antivirais, ribavirina, um análogo de nucleósido, e interferão-alfa (a) (IFN), que são utilizados para o tratamento de infeções de HCV crónicas em seres humanos. A ribavirina sozinha não é eficaz em reduzir os níveis de ARN virai, tem toxicidade significativa, e é conhecida por induzir anemia. A combinação de IFN e ribavirina foi relatada como sendo eficaz na gestão de hepatite C crónica (Scott, L. J., et al. Drugs 2002, 62, 507-556), porém menos da metade dos pacientes que tomam este tratamento mostram um benefício persistente. Como tal, existe uma necessidade de desenvolver terapêuticas anti-HCV mais eficazes. 0 macrociclo sanglifehrina e derivados são imunomodu1atodores e ligam-se a peptidil-prolilo cis/trans isomerase (PPIase) ciclofilinas de uma maneira única (documentos WO 97/02285; WO 98/07743; J. Am. Chem. Soc 2003, 125, 3849-3859; J. Org. Chem. 2000, 65, 9255-9260; Angew. Chem. Int. Ed. 1999, 38, 2443-2446) . As ciclofilinas são peptidil-prolilo cis/trans isomerases (PPIase) que regulam a dobragem da proteína in vivo e inibem o vírus da hepatite C (Lin et al. , documento W02006/138507) . Inibidores adicionais da HCV protease são divulgados, por exemplo nos documentos WO 2012/040040, WO 2011 /144924 e W02 011/098808.
Contudo, nenhuma das sanglifehrinas ou os seus derivados se tornou disponível para a terapêutica antiviral humana. Como tal, existe uma necessidade contínua de desenvolver sanglifehrinas macrocíclicas com atividade anti-vírus da família Flaviviridae particularmente atividade anti-HCV.
SUMÁRIO
Numa forma de realização, é proporcionado um composto representado pela Fórmula I:
Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: A é uma ligação, -0-, -S (0) n- , -NH-, -N ( (Ci-C4) alquil) -ou (Ci-C2) alquileno; A1 é -CR9=CR9-,
em que B é arileno, heteroarileno, cicloalquileno ou heterocicloalquileno; A2 é -CH (R8) -arileno, -CH (R8) -heteroarileno, -CH (R8) -heterocicloalquileno, -CH (R8)-cicloalquileno, arileno, heteroarileno ou cicloalquileno, em que A2 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em oxo, -OR9, -SR9, -S(0)R9, -S(0)2R9, -N(R9)2, halo, halo (Ci-C4) alquilo, (C1-C4) alcoxi (C1-C4) alquilo, halo (C1-C4) alcoxi, ciano e (Ci-C8) alquilo; X1 é uma ligação, -0-, -NH-, -N ( (C;L-C4) alquilo) - ou heterocicloalquileno; R1 e R2 são independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2_ C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, halo, ciano ou (Ci- C4) alcanoilo; ou R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C(=0)-, -C(=S)- ou -C (=N (Ci-C4) alquilo) - ; RJ é H ou (C1-C4) alquilo que é opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxi ou (Ci-C4)alcoxi; R4a e R4b são independentemente H, (C:l-C8) alquilo, arilo, aril (C1-C4) alquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo (Ci~C4) alquilo, cicloalquilo ou cicloalquil (C1-C4) alquilo, em que cada de R4a e R4e é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em ciano, (Ci-Ce) alcoxi, -C00H, -C (0) 0- (Ci-Ca) alquilo, halo, hidroxilo, amino, mono (Cx-Cs) alquilamino, di (C:L-Cs) alquilamino, -C (0) -mono (Ci-Cs) alquilamino, -C (0) -di (Ci-C3)alquilamino, -C(0)-heterocicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo e heteroarilo, em que cada substituinte é opcionalmente substituído com um ou mais halo, heterocicloalquilo ou arilo,* RSa e Rbb são independentemente H, (C;L-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril (Ci-C4) alquilo, cicloalquilo (C1-C4) alquilo ou heterocicloalquilo (Ci-C4) alquilo, em que R5a e R5b são independentemente opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -N3, ciano, -COOH, halo, hidroxilo, amino, mono(Ci-
C8)alquilamino, di(C1-C3)alquilamino, arilo e heteroarilo, ou R5a e R5b juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a): (a), em que um ou mais átomos do anel de carbono da Fórmula (a) é opcionalmente substituído por um átomo de azoto, oxigénio ou enxofre, e em que um átomo do anel da Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, -NH2, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo, -C (0) -di (Ci-C8) alquilamino, -C (0) - (Ci-C8) alquilo, -C (0) - heterocicloalquilo, -S (0) 2Ri0, -OSi (R10) 3, (C1-C4) alquilo, ciano (C1-C4) alquilo, halo (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alcoxi, (Ci-C8) alcanoilo e aril (C:1-C4) alquilo; RSa, R6b, R7a e R7b são independentemente H, hidroxilo, ciano, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, -CH2CH2CR9 (=N (C1-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S(0)R9, - S(0)2R9 ou -N(R9)2, em que cada de RSa, R6b, RVa e R7b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, ciano, (C1-C4) alquilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono (Ci-C8) alquilamino, di (Ci-C8) alquilamino, -NHS (0) R9, -NHC (0) R9, -0C (0) - (Ci- C8) alquilo -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo e (Ci~C8) alcanoilo, em que cada -0C (0) - (Ci-C8) alquilo ou (Ci-C8) alcoxi é opcionalmente substituído com um ou mais amino, -0C(0)0- (Ci-Cs) alquilo ou -Si (R10) 3; ou Rõa e Rsb juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a); cada R8 é independentemente H, (Ci-C4) alquilo, halo (Ci-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo ou cicloalquilo, em que R8 é opcionalmente substituído com -OR, -N (R9) 2, - CON(R9) 2 ou ciano; cada R9 é independentemente H, (Ci-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; cada R10 é independentemente H, (C:L-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, cicloalquilo (Οχ-C4) alquilo ou arilo, em que R10 é opcionalmente substituído com um ou mais halo; cada n é independentemente 0, 1 ou 2; e m é 1, 2, 3, 4 ou 5.
Noutra forma de realização, é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um composto de Fórmula I ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo e um ou mais excipientes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis. Num aspeto da forma de realização, a composição farmacêutica compreende ainda um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
Ainda noutra forma de realização, é proporcionado um composto para utilização num método para o tratamento infeção virai por Flaviviridae que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável a um mamífero em necessidade da mesma. Num aspeto da forma de realização, o tratamento resulta na redução da carga virai ou eliminação de ARN virai num paciente.
Ainda noutra forma de realização, é proporcionado um composto para utilização num método para o tratamento infeção virai por Coronaviridae que compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de
Formula I ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável do mesmo a um mamífero em necessidade do mesmo. Num aspeto da forma de realização, o tratamento resulta na redução da carga virai ou eliminação de ARN virai num paciente. DESCRIÇÃO DETALHADA Definições A menos que seja indicado de outro modo, os seguintes termos e frases tal como são utilizados no presente documento são destinados a ter os seguintes significados: "Alcanoilo" é RC (0) - ; "alcanoiloxi " é RC (0) O- ,- e "alcanoilamino" é RC(0)NR'-; onde R é um grupo alquilo como definido no presente documento, e R' é hidrogénio ou alquilo. "Alquenilo" refere-se a um grupo hidrocarbilo linear ou ramificado com pelo menos um sítio de insaturação, ou seja, uma ligação dupla sp2 de carbono-carbono. Nalgumas formas de realização, alquenilo é um grupo C2-C2o alquenilo, um grupo C2-Ci0 alquenilo ou um grupo C2-C6 alquenilo. Exemplos de grupo alquenilo incluem, mas não estão limitados a, vinilo (-CH=CH2) , alilo (-CH2CH=CH2) , ciclopentenilo (-C5H7) , e 5-hexenilo (-CH2CH2CH2CH2CH=CH2) . "Alquenileno" refere-se a um radical hidrocarboneto insaturado, de cadeia ramificada ou linear ou cíclica que tem dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogénio do mesmo ou dois diferentes átomos de carbono de um alqueno parental. Por exemplo, um grupo alquenileno pode ter de 2 a 20 átomos de carbono, de 2 a 10 átomos de carbono ou de 2 a 6 átomos de carbono. Radicais alquenileno típicos incluem, mas não estão limitados a, 1,2-etenileno (-CH=CH-). "Alcoxi" é RO- onde R é alquilo, conforme definido no presente documento. Exemplos não limitantes de grupos alcoxi incluem metoxi, etoxi e propoxi. "Alquilo” refere-se a um grupo hidrocarbilo de cadeia linear ou ramificada. Numa forma de realização, alquilo tem desde 1 até 20 átomos de carbono (ou seja, Ci-C2o alquilo) . Nalgumas formas de realização, alquilo é um grupo C1-C10 alquilo ou um grupo Ci-C6 alquilo. Exemplos de grupos alquilo incluem, mas não estão limitados a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo e decilo. "Alqui leno" refere-se a um radical hidrocarboneto insaturado, de cadeia ramificada ou linear ou cíclica que tem dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogénio do mesmo ou dois diferentes átomos de carbono de um alcano parental. Por exemplo, um grupo alqui leno pode ter de 1 a 20 átomos de carbono, de 1 a 10 átomos de carbono, ou de 2 a 6 átomos de carbono. Exemplos de radicais alquileno incluem, mas não estão limitados a, metileno (-CH2-) , etileno (-CH2CH2-) , propileno (-CH2CH2CH2-) e butileno (-CH2CH2CH2CH2- ) . "Alquinilo" refere-se a um hidrocarboneto contendo átomos de carbono normais, secundários ou terciários com pelo menos um sítio de insaturação, ou seja, uma ligação tripla sp, de carbono-carbono. Por exemplo, um grupo alquinilo pode ter de 2 a 20 átomos de carbono (isto é, C2-C20 alquinilo) , de 2 a 12 átomos de carbono (isto é, C2-Ci2 alquino, ) ou de 2 a 6 átomos de carbono (isto é, C2-C6 alquinilo). Exemplos de grupo alquinilo incluem, mas não estão limitados a, acetilénico (~C=CH) e propargilo (-CH2C=CH). "Alquilamino" refere-se a um grupo amino substituído com um ou mais grupos alquilo. "Mono(alqui1)amino" ou "(alquil)amino" é RNH-, e "di(alqui1)amino" ou " (alqui 1) 2amino" é R2N-, onde cada um dos grupos R é alquilo como definido no presente documento e são os mesmos ou diferentes. Exemplos de grupo alquilamino incluem, mas não estão limitados a, metilamino, etilamino, propilamino, butilamino, dimetilamino, dietilamino e metiletilamino. "Amino" refere-se a -NH2. "Alcoxialquilo" refere-se a uma fração alquilo substituída com um grupo alcoxi. "Alquinileno" refere-se a um radical hidrocarboneto insaturado, de cadeia ramificada ou linear ou cíclica que tem dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogénio do mesmo ou dois diferentes átomos de carbono de um alquino parental. Por exemplo, um grupo alquinileno pode ter de 2 a 20 átomos de carbono, de 2 a 10 átomos de carbono ou de 2 a 6 átomos de carbono. Radicais alquinileno típicos incluem, mas nâo estão limitados a, acetileno (-C^C-), propargileno (-CH2CsC-) e 4-pentinileno (-CH2CH2CH2C=C-). "Arilo" refere-se a qualquer anel de carbono monocíclico ou bicíclico de até 7 átomos em cada anel, em que pelo menos um anel é aromático, ou um sistema de anel aromático de 5 a 14 átomos de carbono que inclui um grupo aromático carbocíclico fundido com um grupo cicloalquilo de 5 ou 6 membros. Exemplos de grupos arilo incluem, mas não estão limitados a, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo e indanilo. "Arilalquilo" refere-se a um alquilo como definido no presente documento substituído com um radical arilo. "Arileno" refere-se a um arilo como foi definido acima que tem dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogénio de dois diferentes átomos de carbono de um arilo parental. Radicais arileno típicos incluem, mas não estão limitados a, fenileno, por exemplo,
e naftileno, por exemplo,
"Arilalquileno" refere-se a um arilalquilo como definido anteriormente tendo dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de um átomo de hidrogénio a partir do radical arilo e o outro hidrogénio removido a partir do radical alquilo do grupo. "Azidoalquilo" refere-se a uma fração alquilo substituída com um grupo azida (-N3) . "Cianoalquilo" refere-se a uma fração alquilo substituída com um grupo ciano (-CN). "Cicloalquilo" refere-se a um grupo hidrocarbilo contendo pelo menos uma estrutura em anel saturada ou parcialmente insaturada e ligada através de um carbono de anel. Grupos cicloalquilo incluem anéis mono, bi e poli -cíclicos de hidrocarboneto, fundidos, com ponte ou espiro. Em várias formas de realização, refere-se a uma fração cíclica C3-C1.2 saturada ou parcialmente insaturada, exemplos da qual incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo e ciclooctilo. "Cicloalquilalquilo" refere-se a uma fração de alquilo substituída com um grupo cicloalquilo. Exemplos de grupos cicloalquilo incluem ciclopropilmetilo, ciclobutilmetilo, ciclopentiletilo e ciclohexilmetilo. "Cicloalquileno" refere-se a um cicloalquilo, conforme é definido no presente documento, que tem dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogénio dos mesmos ou dois diferentes átomos de carbono de um cicloalquilo parental. Exemplos de cicloalquileno incluem, mas não estão limitados a, ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno e ciclohexileno. "Dialquiloaminoalquilo" refere-se a uma fração alquilo substituída com um grupo dialquilamino, em que dialquiloamino é como definido no presente documento.
"Éster" significa qualquer éster de um composto no qual qualquer das funções-COOH da molécula é substituída por uma função -C(0)OR, ou no qual qualquer das funções -OH da molécula é substituída com uma função -0C(0)R, na qual a fração R do éster é qualquer grupo contendo carbono que forma uma fração éster estável, incluindo mas não limitado a alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, arilalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo e derivados substituídos dos mesmos. "Halo" refere-se a cloro (-C1), bromo (-Br), flúor (-F) ou iodo (-1) . "Haloalcoxi" refere-se a alcoxi, conforme é definido no presente documento, substituído com um ou mais radicais halo. "Haloalcoxialquilo" refere-se a uma fração alquilo substituída com um grupo haloalcoxi, conforme definido no presente documento. "Haloalquilo" refere-se a um grupo alquilo, em que um ou mais átomos de hidrogénio do grupo alquilo é substituído com um átomo de halogéneo. Exemplos de grupos haloalquilo incluem, mas não estão limitados a, -CF3, -CHF2, -CFH2 e - CH2CF3. "Heterocicloalquilo" refere-se a um grupo monocíclico, bicíclico ou tricíclico saturado ou parcialmente insaturado com 2 a 14 átomos de carbono do anel e, além dos átomos de carbono do anel, 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de P, N, 0 e S. Em várias formas de realização o grupo heterocíclico está ligado através de um átomo de carbono ou através de um heteroátomo, e quando um substituinte está presente, o substituinte pode estar num átomo de carbono ou um heteroátomo do heterocicloalquilo. Exemplos de heterociclilo incluem azetidinilo, benzoimidazolilo, benzofuranilo, benzofurazanilo, benzopirazolilo, benzotriazolilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, carbazolilo, carbolinilo, cinolinilo, furanilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, indolazinilo, indazolilo, isobenzofuranilo, isoindolilo, isoquinolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, naftpiridinilo, oxadiazolilo, oxazolilo, oxazolino, isoxazolino, oxetanilo, piranilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridopiridinilo, piridazinilo, piridilo, pirimidilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolilo, quinoxalinilo, tetraidropiranilo, tetraidrotiopiranilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrazolilo, tetrazolopiridilo, tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo, triazolilo, azetidinilo, 1,4-dioxanilo, hexahidroazepinilo, piperazinilo, piperidinilo, piridin-2-onilo, pirrolidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, dihidrobenzoimidazolilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzotiofenilo, dihdrobenzoxazolilo, diidrofuranilo, dihidroimidazolilo, dihidroindolilo, dihidroisooxazolilo, dihidroisotiazolilo, dihidrooxadiazolilo, dihidrooxazolilo, dihidropirazinilo, dihidropirazolilo, dihidropiridinilo, dihidropirimidinilo, dihidropirrolilo, dihidroquinolinilo, dihidrotetrazolilo, dihidrotiadiazolilo, dihidrotiazolilo, diidrotienilo, dihidrotriazolilo, dihidroazetidinilo, metilendioxibenzoilo, tetraidrofuranilo, e tetrahidrotienilo e N-óxidos dos mesmos. "Heterocicloalquileno" refere-se a um heterocicloalquilo, conforme definido acima, que tem dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogénio do mesmo ou dois diferentes átomos de carbono de um heterocicloalquilo parental. "Heterocicloalquilalquilo" refere-se a um grupo alquilo, conforme é definido no presente documento, no qual um átomo de hidrogénio foi substituído com um grupo heterocicloalquilo. "Heteroarilo" refere-se a um anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico tendo até 7 átomos em cada anel, em que pelo menos um anel é aromático e contém desde 1 até 4 heteroátomos no anel selecionados a partir do grupo que consiste em N, 0 e S. Exemplos não limitantes de heteroarilo incluem piridilo, tienilo, furanilo. pirimidilo, imidazolilo, piranilo, pirazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazoilo, pirrolilo, piridazinilo, pirazinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzofuranilo, dibenzofuranilo, dibenzotiofenilo, benzotienilo, indolilo, benzotiazolilo, benzooxazolilo, benzimidazolilo, isoindolilo, benzotriazolilo, purinilo, tianaftenilo e pirazinilo. A ligação de heteroarilo pode ocorrer através de um anel aromático, ou, se o heteroarilo é bicíclico ou tricíclico e um dos anéis não é aromático ou não contém heteroátomos, através de um anel não-aromático ou um anel que não contém heteroátomos. "Heteroarilo" também se entende como incluindo o derivado de N-óxido de qualquer heteroarilo contendo azoto. "Heteroarilalquilo" refere-se a um grupo alquilo, conforme é definido no presente documento, no qual um átomo de hidrogénio foi substituído com um grupo heteroarilo. "Heteroarileno" refere-se a um heteroarilo, conforme definido acima, que tem dois centros de radicais monovalentes derivados pela remoção de dois átomos de hidrogénio do mesmo ou dois diferentes átomos de carbono de um heteroarilo parental. Exemplos não limitantes de grupos heteroarileno:
"Hidroxialcoxi" refere-se a um alcoxi, conforme é definido no presente documento, substituído com um grupo hidroxilo (-OH). Um exemplo de hidroxialcoxi é hidroxietoxi. "Hidroxialquilo" refere-se a um grupo alquilo substituído com pelo menos um grupo hidroxi. Exemplos de grupos hidroxialquilo incluem, mas não estão limitados a, hidroximetilo, hidroxietilo, hidroxipropilo e hidroxibutilo. 0 termo "opcionalmente substituído" refere-se a uma fração em que todos os substituintes são hidrogénio ou em que um ou mais dos hidrogénios da fração são substituídos por substituintes não hidrogénio. São também permitidas múltiplas substituições no mesmo átomo quando sejam quimicamente viáveis (por exemplo, uma substituição de dioxo para proporcionar -S(0)2-, substituintes geminais, anéis de espiro cicloalquilo ou heterocicloalquilo, etc.). Nalgumas formas de realização, "um ou mais" substituintes é desde um a três substituintes.
Abrangidos no presente documento, onde for aplicável, estão os isómeros permissíveis tais como tautómeros, racematos, enantiómeros, diastereómeros, atropisómeros, isómeros configuracionais de ligações duplas (E e/ou Z) , configurações cis e trans em padrões de substituição de anel e variantes isotópicas.
Um composto de uma dada Fórmula (por exemplo, o composto de Fórmula I) destina-se a abranger os compostos da divulgação, e os sais farmaceuticamente aceitáveis, esteroisomeros, mistura de estereoisómeros ou tautómeros de tais compostos. Adicionalmente, os compostos da presente invenção podem possuir um ou mais centros assimétricos, e podem ser produzidos como uma mistura racémica ou como enantiómeros individuais ou diaestereoisómeros. 0 número de estereoisómeros presentes em qualquer dado composto de uma dada fórmula depende do número de centros assimétricos presente (existem 2n estereoisómeros possíveis onde n é o número de centros assimétricos) . Os estereoisómeros individuais podem ser obtidos pela resolução de uma mistura racémica ou não racémica de um intermediário em algum estágio apropriado da síntese ou por resolução do composto por meios convencionais. Os estereoisómeros individuais (incluindo enantiómeros individuais e diaestereoisómeros) bem como misturas racémicas ou não racémicas de estereoisõmeros são abrangidos dentro do âmbito da presente divulgação, a totalidade dos quais são destinados a ser representados pelas estruturas desta memória a menos que seja especificamente indicado de outro modo. "Isómeros" são diferentes compostos que têm a mesma fórmula molecular. Isómeros incluem estereoisómeros, enantiómeros e diastereómeros. "Estereoisómeros" são isómeros que diferem somente na forma em que átomos estão dispostos no espaço. Estereoisómeros incluem enantiómeros e diastereómeros. "Enantiómeros" são um par de estereoisómeros que são imagem de espelho não sobreponíveis uma da outra. Uma mistura 1:1 de um par de enantiómeros é uma mistura "recémica". 0 termo " (±)" é utilizado para designar uma mistura racémica onde for apropriado. "Diaestereoisómeros" são estereoisómeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens de espelho uns dos outros. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema Cahn Ingold Prelog R S. Quando o composto é um enantiómero puro a estereoquímica em cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida são designados (μ) ou (-) dependendo da direção (dextro-ou levógiro) que giram o plano da luz polarizada no comprimento de onda da linha do sódio D.
Alguns dos compostos existem como isómeros tautoméricos ou "tautómeros". Os isómeros tautoméricos estão em equilíbrio entre si. Por exemplo, compostos contendo amida podem existir em equilíbrio com tautómeros de ácido imídico. independentemente de qual tautómero é mostrado, e independentemente da natureza do equilíbrio entre os tautómeros, os compostos são entendidos por um perito na especialidade que compreendem tanto amida como tautómeros de acido imídico. Consequentemente, os compostos contendo amida são entendidos que incluem seus de tautómeros de ácido imídico. Igualmente, os compostos contendo ácido imídico são entendidos que incluem seus de tautómeros de amida. "Farmaceuticamente aceitável" significa adequado para utilização em preparações farmacêuticas, geralmente considerado como seguro para tal utilização, oficialmente aprovado por uma agência reguladora de um governo nacional ou estatal para tal utilização, ou listado na Farmacopeia dos E.U.A. ou outra farmacopeia geralmente reconhecida para utilização em animais e mais particularmente em seres humanos. "Veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um diluente, adjuvante, excipiente, ou veículo, ou outro ingrediente que é farmaceuticamente aceitável e com o qual um composto da invenção é administrado. "Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal que pode melhorar a atividade farmacológica desejada. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição de ácido formados com ácidos orgânicos ou inorgânicos, sais de metais e sais de amina. Exemplos de sais de adição de ácido formados com ácidos inorgânicos incluem sais com ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico e ácido fosfórico. Exemplos de sais de adição de ácido formados com ácidos orgânicos como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido heptanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido o- (4-hidroxi-benzoilo)-benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido 1,2-etanodissulfónico, ácido 2-hidroxietano-sulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido p- clorobenzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido canforsulfónico, ácido 4-metil-biciclo[2.2.2]oct-2-eno-l-carboxílico, ácido gluco-heptónico, ácido 4,4'-metilenobis(3-hidroxi-2-naftoico), ácido 3 -fenilpropiónico, ácido trimetil-acético, ácido butilacético terciário, ácido lauril sulfúrico, ácido glucónico, ácido glutâmico, ácido hidroxi-naftoico, ácido salicílico, ácido esteárico e ácido mucónico. Exemplos de sais de metais incluem sais com iões sódio, potássio, cálcio, magnésio, alumínio, ferro e zinco. Exemplos de sais de amina incluem sais com amónia e bases azotadas orgânicas suficientemente fortes para formar sais com ácidos carboxílicos.
Qualquer fórmula ou estrutura dada no presente documento, incluindo qualquer composto proporcionado no presente documento, é também destinada a representar formas não marcadas bem como formas isotopicamente marcadas dos compostos. Um "isótopo" pode ter estruturas ilustradas pelas fórmulas dadas no presente documento exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo uma massa atómica ou número de massa selecionado. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos da divulgação incluem isótopos de hidrogénio, carbono, azoto, oxigénio fósforo, flúor e cloro, tais como, mas não limitados a, ":H (deutério, D) , 3H (trítio) , liC, 13C 14C 15N, 1SF, 31P, 32P, 35S j6C1 e 125I. Vários compostos isotopicamente marcados da presente divulgação, por exemplo, aqueles nos quais isótopos radioativos, tais como 3H, i3C e 14C são incorporados. Tais compostos isotopicamente marcados podem ser úteis em estudos metabólicos, estudos de reação cinética, técnicas de deteção ou obtenção de imagens, como tomografia de emissão de positrões (PET) ou tomografia c ompu t ado r i z ada de emissão de fotão individual (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de fármaco ou substrato em tecido ou no tratamento radioativo de pacientes. A divulgação também inclui um composto proporcionado no presente documento no qual de 1 a n hidrogénios ligados a um átomo de carbono é/são substituído(s) por deutério, no qual n é o número de hidrogénios na molécula. Tais compostos exibem uma resistência aumentada frente ao metabolismo e são, portanto, úteis para aumentar a semivida de qualquer composto proporcionado no presente documento quando administrados a um mamífero. Veja-se, por exemplo Foster, "Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism", Trends Pharmacol. Sci. 5(12):524-527 (1984). Tais compostos são sintetizados por meios bem conhecidos na técnica, por exemplo, empregando materiais de partida nos quais um ou mais hidrogénios foram substituídos por deutério.
Compostos terapêuticos substituídos ou marcados com deutério da divulgação podem ter propriedades de DMPK (metabolismo de fãrmaco e farmacocinética) melhoradas, com relação à distribuição, metabolismo e excreção (ADME). A substituição com isótopos mais pesados tal como deutério pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultando de maior estabilidade metabólica, por exemplo, semivida in vivo aumentada, requisitos de dosagem reduzidos e/ou uma melhoria no índice terapêutico. Um composto marcado com iSF pode ser útil para estudos de PET ou SPECT. Os compostos isotopicamente marcados desta divulgação e profármacos dos mesmos podem geralmente ser preparados levando a cabo os procedimentos divulgados nos esquemas ou nos exemplos e preparações descritos a seguir pela substituição de um reagente isotopicamente marcado facilmente disponível por um reagente não isotopicamente marcado. É entendidos que deutério neste contexto é considerado como um substituinte num composto proporcionado no presente documento. A concentração de tal isótopo mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida por um fator de enriquecimento isotópico. Nos compostos desta divulgação qualquer átomo não especificamente designado como um isótopo particular destina-se a representar qualquer isótopo estável desse átomo. A menos que seja indicado de outro modo, quando uma posição é designada especificamente como "H" ou "hidrogénio", a posição é entendida que têm hidrogénio na sua composição isotópica de abundância natural. Consequentemente, nos compostos desta divulgação qualquer átomo especificamente designado como um deutério (D) destina-se a representar deutério. "Quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade de um composto que, quando é administrada a um indivíduo para tratar uma doença, é suficiente para realizar tal tratamento para a doença. "Quantidade terapeuticamente eficaz" pode variar dependendo do composto, da doença e da sua gravidade, a idade, do peso, etc. do indivíduo a ser tratado. 0 termo "tratar", e equivalentes biológicos dos mesmos, quando utilizados no contexto do tratamento de uma doença, significa abrandar ou interromper a progressão de uma doença, ou melhorar pelo menos um sintoma de uma doença, mais preferivelmente melhorar mais do que um sintoma de uma doença. Por exemplo, o tratamento de uma infeção pelo vírus da hepatite C pode incluir reduzir a carga viral de HCV num ser humano infetado com HCV, e/ou reduzir a gravidade da icterícia presente num ser humano infetado com HCV.
Compostos 0 presente pedido proporciona um composto representado pela Fórmula I:
Formula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: A é uma ligação, -0-, -S (0) n- , -NH-, -N ((C1-C4) alquil) -ou (Ci-C2) alquileno; A1 é -CR9=CR9-,
em que B é arileno, heteroarileno, cicloalquileno ou heterocicloalquileno; A2 é -CH (R8)-arileno, -CH (R8) -heteroarileno, -CH (R8) -heterocicloalquileno, -CH (R8)-cicloalquileno, arileno, heteroarileno ou cicloalquileno, em que A" é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em oxo, -0R9, -SR9, -S (0) R9, -S (0) 2R9, -N (R9) 2, halo, halo (Ci-C4) alquilo, (C1-C4) alcoxi (C1-C4) alquilo, halo (C1-C4) alcoxi, ciano e (Ci-C8) alquilo; X1 é uma ligação, -0-, -NH-, -N( (C1-C4) alquilo) - ou heterocicloalquileno; R1 e R2 são independentemente H, (C, -C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, halo, ciano ou (Ci-C4)alcanoilo; ou R1 e R2, quando tomados juntamente com ο carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C(=0)-, C(=S) - ou -C (=N (Ci-C4) alquilo) - ; R3 é H ou (Ci-C4) alquilo que é opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxi ou (Ci-C4)alcoxi; R4a e R4b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, arilo, aril(Ci-C4)alquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo(Ci-C4)alquilo, cicloalquilo ou cicloalquil (Ci-C4) alquilo, em que cada de R4a e R4b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em ciano, (Ci~C8) alcoxi , -C00H, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo, halo, hidroxilo, amino, mono (Ci-C8) alquilamino, di (Ci-C8) alquilamino, -C (0) -mono (Ci-C8) alquilamino, -C (0) -di (Ci-C8)alquilamino, -C(0)-heterocicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo e heteroarilo, em que cada substituinte é opcionalmente substituído com um ou mais halo, heterocicloalquilo ou arilo; R5a e R5b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, (C2-Cs) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril(C1-C4)alquilo, cicloalquilo (C1-C4) alquilo ou heterocicloalquilo (Ci-C4) alquilo, em que R5a e R5b são independentemente opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -N3, ciano, -C00H, halo, hidroxilo, amino, mono(Ci-C8)alquilamino, di(Ci-C8)alquilamino, arilo e heteroarilo, ou R5a e R5b juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a):
(a), em que um ou mais átomos do anel de carbono da Fórmula (a) é opcionalmente substituído por um átomo de azoto, oxigénio ou enxofre, e em que um átomo do anel da Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, -NH2, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo, -C (0) -di (Ci-C8) alquilamino, -C (0) - (Ci-C8) alquilo, -C (0) - heterocicloalquilo, -S (0) 2R10, -OSi (R10) 3, (Ci-C4) alquilo, ciano (Ci-C4) alquilo, halo (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alcoxi, (Ci-C8) alcanoilo e aril (C1-C4) alquilo; r63, Rsb^ R7a e R7b sgQ indepen(jentemente H, hidroxilo, ciano, (C1 — C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-Cs) alcoxi , -CH,CH2CR9 (=N (C1-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S (0) R9, -S (0) 2R9 ou -N (R9) 2, em que cada de R6a, R6b, R7a e R7b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, ciano, (Ci-C4) alquilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono(Ci-C8) alquilamino, di (Ci-Cs) alquilamino, -NHS (0) R9, NHC (0) R9, -0C (0) - (Ci-C8) alquilo, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo e (Ci-C8) alcanoilo, em que cada -0C (0) - (Ci-C8) alquilo ou (Ci-C8) alcoxi é opcionalmente substituído com um ou mais amino, -0C (0) 0- (Ci-C8) alquilo ou -Si (R10) 3; ou R6a e R6b juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a) ; cada R8 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, halo (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo ou cicloalquilo, em que R8 é opcionalmente substituído com -OR, -N (R9) 2, - CON(R9) 2 ou ciano; cada R9 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; cada R10 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, cicloalquilo (Ci-C4) alquilo ou arilo, em que R10 é opcionalmente substituído com um ou mais halo; cada n é independentemente 0, 1 ou 2; e m é 1, 2, 3, 4 ou 5.
Numa forma de realização, A é metileno.
Numa forma de realização, A1 é etenileno, propenileno, etileno, propileno oxipropileno, oxipropenileno, pirazolileno, fenileno ou pirimidinileno.
Numa forma de realização. A1 é
Numa forma de realização, A2 é -CH(R8) -arileno ou -CH(RS)-heteroarileno.
Numa forma de realização. A2 é -CH (R8)-quinolinileno, -CH(R8) -isoquinolinileno, -CH (R8) -naf tiridinileno, - CH (R8) -cinolinileno, -CH(R8) -quinoxalinileno, -CH (R8)-fenileno ou -CH(R8) -halofenileno.
Numa forma de realização, A2 é
Numa forma de realização, X1 é -0- ou -NH-.
Numa forma de realização, R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C (=0) - -
Numa forma de realização, R3 é H.
Numa forma de realização, RSa é H e Rbb é H ou ^1- C4) alquilo, ou R5a e Ròb juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a).
Numa forma de realização,
R6a e Rsb formam
Numa forma de realização, R3 é H; R5a é H; R5b é H, (Ci-C8) alquilo, hidroxi (C1-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (C;L-C8) alquilo, arilo, cicloalquilo, aril (C1-C4) alquilo, cicloalquil (C1-C4) alquilo, heterocicloalquil(C1-C4)alquilo ou arilheterocicloaquil(Ci-C4) alquilo; RSa é H; e R6b é H, (C]-C4) alquilo ou hidroxi (C] -C4) alquilo.
Numa forma de realização, X1 é -0- ou -NH-; R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C(=0) R3 é H; R4a é H; R4b é meti lo; R5a é H e R5b é iso-propilo, propenilo ou propinilo; e R8 é metilo.
Nalgumas formas de realização, o presente caso está dirigido a compostos de Fórmula I:
Formula 1 ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que A é uma ligação, -0-, -S(0)n-, -NH-, -N ((Ci-C4) alquil) -ou (Ci-C2) alquileno; A1 é -CR9=CR9-,
em que B é arileno, lieteroarileno, cicloalquileno ou heterocicloalquileno; A2 é -CH (R8) -arileno, -CH(R8) -heteroarileno, -CH (Rs) -heterocicloalquileno, -CH (R8)-cicloalquileno, arileno ou cicloalquileno, em que A2 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de 0R9, -SR9, -S (0) R9, -S (0) 2R9, -N(R9) 2, halo, halo (C1-C4) alquilo, halo (C1-C4) alcoxi, ciano e (Ci-C8) alquilo; X1 é uma ligação, -0-, -NH-, -N( (C2.-C4) alquilo) - ou heterocicloalquileno; R1 e R2 são independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2- C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, halo, ciano ou (Ci-C4)alcanoilo; ou R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C(=0)-, -C(=S)- ou -C (=N (Ci-C4) alquilo) - ; R3 é H ou (Ci-C4) alquilo que é opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxi ou alcoxi; R4a e R4b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, arilo, aril (C1-C4) alquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo (C1-C4) alquilo, cicloalquilo ou cicloalquil (C1-C4) alquilo, em que cada de R4a e R4b e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de ciano, -C00H, halo, hidroxilo, amino, mono (Ci-C8) alquilamino, di (Ci.-C8) alquilamino, arilo e heteroarilo;
Raa e R5b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril (C1-C4) alquilo, cicloalquilo (C1-C4) alquilo ou heterocicloalquilo (Ci-C4)alquilo, em que R5 e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de -N3, ciano, -C00H, halo, hidroxilo, amino, mono(Ci-C8)alquilamino, di (Ci-C8)alquilamino, arilo e heteroarilo, ou R5d e R3b juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a):
(a), em que um átomo do anel de carbono de Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais heteroátomos selecionados a partir de SO, S02, 0 e N, e em que um átomo do anel de carbono de Fórmula (a) opcionalmente tem um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, hidroxilo, -NH2, (C1-C4) alquilo e (C1-C4) alcoxi;
Rfea, Rsb, R7a e R7b são independentemente H, hidroxilo, (Ci“C8) alquilo, (C2-Cs) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, -CH2CH2CR9 (=N(Ci-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S(0)R9, -S(0)2R9 ou -N (R9) 2, em que cada de RSa, Rfeb, R7a e R7b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, hidroxilo, ciano, (Ci-C4) alquilo, (Ci-C8)alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono(Ci-C8)alquilamino, di(Ci-
Ca) alquilamino, -NHS (0) R9, -NHC (0) R9 e (Ci~C8) alcanoilo; ou RSa e Rfeb juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a); cada R8 é independentemente H, (Ci-C4) alquilo, halo (Ci.-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo ou cicloalquilo, em que R8 é opcionalmente substituído com -OR, -N (R9) 2, - CON (R9) 2, ou ciano; cada R9 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; cada n é independentemente 0, 1 ou 2 ,* e mél, 2, 3, 4 ou 5.
Num aspeto da forma de realização, A1 é etenileno, propenileno, etileno, propileno, oxipropileno, oxipropenileno, pirazolileno, fenileno ou pirimidinileno.
Noutro aspeto da forma de realização, A2 é -CH(R8)-quinolinileno, -CH(R8)-isoquinolinileno, -CH(R8) - naftiridinileno, -CH (R8)-cinolinileno, -CH(Rs) - quinoxalinileno, -CH (R8)-fenileno ou -CH (R8)-halofenileno. Em vários aspetos da forma de realização, A2 é selecionado a partir de
em que a ligação esquerda do ligante A5 está ligada a X1.
Noutro aspeto da forma de realização, X1 é -0- ou -NH-; R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C (=0) -; R3 é H; R4a é H; R4b ê metilo; R5 é iso-propilo, propenilo ou propinilo; e R8 é metilo.
Noutro aspeto da forma de realização, RSa é H e R6b é H ou (C1-C4) alquilo, ou RSa e Rob juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a).
Numa forma de realização, é proporcionado um composto de Fórmula II:
Formula lí ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: A2 é -CH (R8) -arileno, -CH(R8) -heteroarileno, -CH(R8) - heterocicloalquileno, -CH(R8)-cicloalquileno ou cicloalquileno; X1 é uma ligação, -0-, -NH,
-N(CH3) - , R3 é H ou (C1-C4) alquilo; R4a e R4b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, arilo, aril (C1.-C4) alquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo (C1-C4) alquilo, cicloalquilo ou cicloalquil (C1-C4) alquilo, em que cada de R4a e R4b é opcionalmente substituído com urn ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em ciano, (Ci-C8) alcoxi , -C00H, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo, halo, hidroxilo, amino, mono (Ci-C8) alquilamino, di (Ci-C8) alquilamino, -C (0) -mono (Ci-C8) alquilamino, -C (0) -di (Ci-C8)alquilamino, -C(0)-heterocicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo e heteroarilo, em que cada substituinte é opcionalmente substituído com um ou mais halo, heterocicloalquilo ou arilo; R5 é (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-Cs) alquinilo, (Cx-Cs)alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril (C1-C4) alquilo, cicloalquilo (C1-C4) alquilo ou heterocicloalquilo (C1-C4) alquilo, em que R5 e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de -N?1, ciano, -C00H, halo, hidroxilo, amino, mono (Ci-C8) alquilamino, di (Ci~Cs) alquilamino, arilo e heteroarilo, Rba e Reb são independentemente H, hidroxilo, ciano, (C;l-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi , -CH2CH2CR9 (=N (C1-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S (0) R9, -S (0) 2R9 ou -N (R9) 2, em que cada de R6a e R6b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, ciano, (C1-C4) alquilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono (Ci-C8) alquilamino, di (Ci-C8) alquilamino, -NHS (0)R9, -NHC (0) R9, -0C(0) - (Ci- C8) alquilo -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo e (Ci-C8) alcanoilo, em que cada -0C (0) - (Ci-C8) alquilo ou (Ci-C8) alcoxi é opcionalmente substituído com um ou mais amino, -0C(0)0-(Ci-C8) alquilo ou -Si (R10) 3; ou
RSa e R6b juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a); (a), em que um ou mais átomos do anel de carbono da Fórmula (a) é opcionalmente substituído por um átomo de azoto, oxigénio ou enxofre, e em que um átomo do anel da Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, -NH2, -C (0) 0-(Ci-C8) alquilo, -C (0) -di (Ci-C8) alquilamino, -C (0) - (Ci-C8) alquilo, -C (0) - heterocicloalquilo, -S (0) 2R10, -OSi (R10) 3, (Ci-C4) alquilo, ciano (C1-C4) alquilo, halo (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alcoxi, (Ci-C8) alcanoilo e aril (C1-C4) alquilo; e R8 é H ou (C1-C4) alquilo; cada R9 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; e cada R10 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, cicloalquilo (Ci-C4) alquilo ou arilo, em que R1C é opcionalmente substituído com um ou mais halo.
Noutra forma de realização, é proporcionado um composto de Fórmula II:
Fórmula íí ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: A2 é -CH (R8) -arileno, -CH(R8) -heteroarileno, -CH(R8)-heterocicloalquileno, -CH(R8)-cicloalquileno ou cicloalquileno; X1 é uma ligação, -0-, -NH, -N(CH3) - ,
R3 é H ou (C1-C4) alquilo que é opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxi ou (C1-C4)alcoxi; R4a e R4b são independentemente H, (C1-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (C;L-C8) alquilo;
Rb é H, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8)alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril (C1.-C4) alquilo, cicloalquilo (Ci- C4) alquilo ou heterocicloalquilo (C1-C4) alquilo, em que Rb e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de -N3, halo, hidroxilo, di(Ci-C8)alquilamino, arilo ou heteroarilo; RSa e Rsb são independentemente H, -OH, (C1-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo, em que cada de Rba ed R5b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, hidroxilo, (Ci-C4) alquilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, di (Ci-C8) alquilamino e (Ci-C8) alcanoilo; ou RSa e R6b juntamente formam
e R8 é H ou (C1-C4) alquilo.
Ainda noutra forma de realização, é proporcionado um composto de Fórmula lia:
Fórmula lia ou um sal f armac eut i c ament e aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: R6a e R6b são independentemente H, hidroxilo, ciano, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci~ C8) alcoxi, -CH2CH2CR9 (=N (C1-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S(0)R9, -S(0) 2R9 ou -N(R9)2, em que cada de Rfea e Rsb é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, ciano, (C1.-C4) alquilo, (Ci.-C8) alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono(Ci~C8)alquilamino, di(Ci~ C8) alquilamino, -NHS (0) R9, -NHC(0)R9, -0C (0) - (Ci- C8) alquilo -C (0) 0-(C;L-C8) alquilo e (C:L-C8) alcanoilo, em que cada -OC (0) - (Ci-C8) alquilo ou (C].-C8) alcoxi é opcionalmente substituído com um ou mais amino, -0C(0)0-(Ci-C8) alquilo ou -Si (R10) 3 ou
RSa e R6b juntamente formam um espirociclo tendo a Formula (a); (a). em que um ou mais átomos do anel de carbono da Fórmula (a) é opcionalmente substituído por um átomo de azoto, oxigénio ou enxofre, e em que um átomo do anel da Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, -NH2, -C (0) 0- (Ci~C8) alquilo, -C (0) -di (Ci-C8) alquilamino, -C (0) - (Ci-C8) alquilo, -C (0) - heterocicloalquilo, -S(O)2Ri0, -OSi(R10)3, (Ci-C4) alquilo, ciano (Ci-C4) alquilo, halo (C1-C4) alquilo, (Ci-C4) alcoxi, (Ci-C8) alcanoilo e aril (Ci-C4) alquilo; cada R9 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; e cada R10 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4)alquenilo, (C2 -C4) alquinilo, cicloalquilo(Ci- C4) alquilo ou arilo, em que R10 é opcionalmente substituído com um ou mais halo.
Em vários aspetos da forma de realização, A2 é
Num aspeto da forma de realização, RJ é H; R5 é H, (C]_-C8) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, arilo, cicloalquilo, arilo (Ci-C4) alquilo ou cicloalquil (C1-C4) alquilo; e RSa e Rsb são H. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Fórmula (li-a)
Noutro aspeto da forma de realização, R3 é H; R5 é H, (Ci-C8) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (Ci-C8) alquilo, arilo, aril (Ci- C4) alquilo, cicloalquil (Ci-C4) alquilo, heterocicloalquil (Cj.-C4) alquilo ou arilheterocicloaquil (Ci-C4) alquilo; R6a é H; e R6b é (Ci-C4) alquilo ou hidroxi (Ci-C4) alquilo. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Fôrmyla íli-fe)
Também estão incluídos compostos que têm as seguintes fórmulas:
em que os compostos das fórmulas acima têm a mesma combinação ou padrão de substituintes dados no quadro para os Compostos b-1 a b-8.
Noutro aspeto da forma de realização, R3 é H; R3 é H, (C1-C3) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (Ci-Cs) alquilo, arilo, aril (Ci- C4) alquilo, cicloalquil (C1-C4) alquilo, heterocicloalquil (Ci-C4) alquilo ou heteroarilheterocicloalquil (C1-C4) alquilo; e ambos R6a e R6b são metilo. Num aspeto desta forma de realização, R5 é
-CH2CH=CH2 ou -CH2C=CH. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Fórrntila (íí-c)
Também estão incluídos compostos que têm as seguintes fórmulas:
em que os compostos das fórmulas acima têm a mesma combinação ou padrão de substituintes dados no quadro para os Compostos c-1 a c-14.
Noutro aspeto da forma de realização, R3 é H; R3 é H, (Ci-Cs) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (Ci-C8) alquilo, arilo, aril (Ci-C4) alquilo, cicloalquil (Ci-C4) alquilo, heterocicloalquil (Ci-C4) alquilo ou heteroarilheterocicloalquil (Ci-C4) alquilo; e ambos RSa e R6b são hidroximetilo. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Noutro aspeto da forma de realização, R3 é H; e R6a e Rsb formam um espirociclo selecionado a partir de
Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Formula (ii-d)
Ainda noutra forma de realização, é proporcionado um composto de Fórmula III:
Formula ill ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoi sómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que A2 é -CH (R8) -arileno, -CH(R8) -heteroarileno, -CH(R8)-heterocicloalquileno, -CH(R8)-cicloalquileno ou cicloalquileno; A3 é -CH2~ ou -0-; X1 é -0- , -N(CH3) - OU -NH-; R3 é H ou (C1-C4) alquilo; R4a é H; R4b é H, (C1.-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci- C8) alquilo; R5 é H, (Ci-C8) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (Ci-C8) alquilo, cicloalquilo, aril(C1-C4)alquilo, cicloalquil(Ci- C4) alquilo, heterocicloalquil (C1-C4) alquilo ou heteroarilheteroaril(C1-C4)alquilo; RSa e Rfeb são independentemente H, -OH, (C:L-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo, em que cada de RSa ed Rsb é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, (C:L-C4) alquilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, di(Ci-C8) alquilamino e (Ci-C8) alcanoilo; ou R6a e Rsb juntamente formam e
R8 é H ou (Ci-C4) alquilo.
Num aspeto da forma de realização, A2 é
Num aspeto da forma de realização, R3 é H; e A3 é -CH2-. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Formule pil-e)
Também estão incluídos compostos que têm as seguintes fórmulas:
em que os compostos das fórmulas acima têm a mesma combinação ou padrão de substituintes dados no quadro para os Compostos e-1 a e-8.
Noutro aspeto da forma de realização, R3 é H; e Ά3 é -0~. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Ainda noutra forma de realização, é proporcionado um composto de Fórmula IV:
Formula i¥ ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que A2 é -CH (R8) -arileno, -CH(R8) -heteroarileno, -CH (R8) -heterocicloalquileno, -CH(R8)-cicloalquileno ou cicloalquileno; A4 é uma ligação ou -0-. X1 é -0-, -N(CH3) - ou -NH-; R3 é H ou (C1-C4) alquilo; R4a é H; R4b é H; (C].-C4) alcoxi, halo (C:L-C4) alcoxi ou (Cj.-C8) alquilo; R5 é H, (Ci-C8) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (Ci-C8) alquilo, cicloalquilo, aril(Ci-C4)alquilo, cicloalquil(Ci- C4) alquilo, heterocicloalquil (Ci-C4) alquilo ou heteroarilheteroaril(Ci-C4)alquilo; R60* e RbC são independentemente H, -OH, (C1-C4) alcoxi, halo (Ci-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo, em que cada de RSa e R6b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de halo, (C:L-C4) alquilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, di(04-C8) alquilamino e (Ci-C8) alcanoilo; e R8 é H ou (Ci.-C4) alquilo.
Num aspeto da forma de realização, A2 é -CH (R8) -arileno ou -CH (R8) -heteroarileno; RJ é H; e A4 é -0-. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
e
Noutro aspeto da forma de realização, A2 é -CH(R8) - ., -ΓΗ (R8) -heteroarileno; R3 é H; e A4 é uma arileno ou ligação Exempl°s não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Ainda num outro aspeto da forma de realização, A1 ê etenileno; A2 é -CH(R8) -arileno, arileno, -CH(R8)- heteroarileno, -CH(R8)-heterocicloalquileno, -CH(R8)- cicloalquileno ou cicloalquileno; X1 ê -0-, -MH- ou -N((C:i.-C4)alquilo)-. Exemplos não limitativos de tais compostos incluem os seguintes compostos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
Um perito na especialidade reconhecerá que substituintes e outras frações dos compostos das fórmula genéricas do presente documento deveriam ser selecionados com a finalidade de proporcionar um composto que é suficientemente estável para proporcionar um composto f armaceuticamente útil que pode ser formulado numa composição farmacêutica aceitavelmente estável. Os compostos que têm tal estabilidade são contemplados como estando dentro do âmbito da presente invenção. Deve ser entendido por um perito na especialidade que qualquer combinação das definições e substituintes descrita acima não deve resultar numa espécie ou composto inoperável. Preparação de compostos macrocíclicos
Um composto da presente invenção como aqueles das Fórmulas (I) e (II) pode ser preparado de acordo com os esquemas descritos abaixo, mas deve ser apreciado que modificações dos processos ilustrados ou outros processos também podem ser utilizadas. Como ilustrado no Esquema 1, os compostos macrocíclicos M (Q é NH) são sintetizados a partir dos cinco componentes chave A-E através da sua combinação em sequência com a utilização apropriada de grupos protetores (PGi-PG8) por um perito na especialidade. As linhas tracejadas numeradas 1-5, aqui referidas como Conexão 1, Conexão 2, etc., respetivamente, são as 5 conexões para combinar os Componentes A-E. A ordem pela qual as conexões específicas podem ocorrer, pode variar, e depende da escolha dos grupos protetores e química necessários. Tipicamente, as Conexões 3, 4 ou 5 são utilizadas como a etapa de macrociclização final.
Esquema 1
Pftx - grupe de pssíeceo raní3^eS<sr«s£«s5á?ã3 ®
De forma ilustrativa, As conexões 1 a 5 podem ser realizadas como descrito abaixo:
As Conexões 1, 2 e 3 são ligações de amida. As conexões são feitas entre o respetivo ácido e amina utilizando agentes de acoplamento peptídicos padrão (EDC/HOBT, DCC, PyBOP, PyBROP, HATU, HBTU, COMU, etc.) conhecidos por um perito na especialidade. Os parceiros de acoplamento de ácido e amina são combinados com o agente de acoplamento num solvente orgânico, por exemplo, DMF, diclorometano, acetonitrilo, etc., na presença de uma base, por exemplo, DIPEA, trietilamina, etc., à temperatura ambiente ou temperatura ligeiramente elevada. Quando qualquer uma destas três etapas é escolhida como a etapa de macrociclização final, mais tipicamente a Conexão 3, então são preferidas condições de macrolactamização. Procedimentos de macrolactamização adequados incluem, mas não estão limitados a, aqueles encontrados em Davies, J. S. J. Peptide Sei. 2003, 9, 471-501. A Conexão 4 é tipicamente uma ligação de carbono-carbono ou uma ligação de heteroátomo-carbono onde o heteroátomo é 0, S ou N. Quando a Conexão 4 é uma ligação de carbono-carbono, então os procedimentos de formação de ligações de carbono-carbono padrão, tipicamente envolvendo reações de acoplamento cruzado mediadas por metal, são preferidos. Preferentemente, a ligação de carbono-carbono é formada utilizando uma reação de acoplamento do tipo Heck entre um grupo halogeneto sp2 e um alqueno terminal, um acoplamento de Suzuki entre um grupo halogeneto sp2 e um boronato de vinilo ou arilo, ou metátese de encerramento de anel (RCM) entre dois alquenos. Reações de Stille também podem ser realizadas entre um estanano de vinilo e um halogeneto de arilo ou vinilo como descrito em Nicolaou et al. Journal of American Chemical Society 2000, 122, 3830. Em cada dos exemplos acima, o grupo halogeneto de arilo ou vinilo também pode ser um triflato de arilo ou vinilo.
Por exemplo, quando Y em A é um alceno, preferivelmente -CH=CH2, e A1 em B contém um alceno terminal ou Me-CH=CH-, é então realizada uma reação de metátese cruzada. Os dois componentes são misturados em solvente, por exemplo, acetonitrilo ou tolueno, e um catalisador de metátese, por exemplo, Grubbs I, Grubbs II, Hoyveda-Grubbs I, Hoyveda-Grubbs II, etc., é adicionado seguido de aquecimento. Se esta conexão for utilizada para fechar o anel macrocíclico, são preferidas condições de RCM (por exemplo, condições mais diluídas para evitar a dimerização). Para condições e exemplos de RCM relevantes veja-se Sedrani et al. Journal of American Chemical Society 2003, 125, 3849 e Nicolaou et al. Journal of American Chemical Society 2000, 122, 3830. Um procedimento de RCM típico inclui aquecimento (seja convencionalmente ou por micro-ondas) do precursor acíclico num solvente como tolueno, ou 1,2-dicloroetano, na presença de um catalisador de RCM, por exemplo, Grubbs I, Grubbs II, Hoyveda-Grubbs I, ou Hoyveda-Grubbs II.
Alternativamente, quando a Conexão 4 é feita através de uma reação de acoplamento de Heck, o halogeneto de vinilo ou arilo, ou o triflato A e o componente de alqueno B são misturados num solvente polar, por exemplo, acetonitrilo ou tolueno, na presença de um catalisador de paládio(II), por exemplo, paládio(OAc)2, um ligando de fosfina, por exemplo, P(o-tolueno)3 ou P(t-butilo)3/ etc., e uma base, por exemplo, trietilamina. A mistura de reação é aquecida convencionalmente ou num reator de micro-ondas.
Alternativamente, quando a Conexão 4 é feita através de uma reação de acoplamento de Suzuki, o halogeneto de vinilo ou arilo, ou o triflato A e o boronato de vinilo ou arilo B são misturados num solvente adequado, por exemplo, ciclopentil metil éter, tolueno, DMF, DME, etc., na presença de um catalisador de paládio (por exemplo, paládio (II) Cl2 (p-NMe2Ph) 2 e K3P04 ou tetraquis(trifenilfosfina)paládio(O), e uma base, tal como carbonato de potássio. A mistura de reação é aquecida convencionalmente ou num reator de micro-ondas. Também é possível em tal reação de acoplamento inverter as funcionalidades reativas nos dois materiais de partida, de modo que A é um boronato de arilo ou vinilo e B contém um halogeneto ou triflato de vinilo ou arilo.
Alternativamente, a Conexão 4 pode ser uma ligação de carbono-oxigénio, e neste caso podem ser utilizadas condições de substituição aromática nucleofílica ou de alquilação entre um grupo hidroxilo e um halogeneto de alquilo, ou halogeneto de arilo (ou heteroarilo). 0 reagente de hidroxilo é misturado com o haleto de alquilo ou heteroarilo (preferentemente um iodeto ou brometo), num solvente inerte, por exemplo, CPME, DMF, THF, etc., na presença de uma base, por exemplo, carbonato de césio, hidróxido de césio, hidreto de sódio, NaHMDS, etc., e a reação é aquecida.
Alternativamente, a Conexão 4 pode ser uma ligação de carbono-azoto, e neste caso alquilação típica, substituição nucleofílica aromática ou condições de Buchwald podem ser utilizadas entre o grupo amina e um haleto de alquilo ou haleto de heteroarilo. Por exemplo, a amina e o haleto de alquilo ou heteroarilo são misturados e aquecidos num solvente inerte, por exemplo, CPME, na presença de uma base, por exemplo, carbonato de césio, hidreto de sódio, etc. Um processo alternativo para a conexão de carbono-azoto é realizar uma aminação redutora entre a amina e um composto carbonilo. Tipicamente a amina e aldeído ou cetona são misturados num solvente inerte, por exemplo, dioxano e tratados após um período de tempo com acetoxi boroidreto de sódio ou agente redutor alternativo. A conexão 5 é tipicamente uma amida (X1 = -NH ou N substituída), ou ligação éster (X1 = 0) . Ao formar a ligação amida, podem ser utilizados procedimentos de acoplamento padrão descritos para as conexões 1-3. Frequentemente, esta é a etapa final no fechamento de macrociclo. Como tal os procedimentos de acoplamento de macrolactamização são mais eficazes. Procedimentos de macrolactamização adequados incluem, mas não estão limitados a, aqueles encontrados nas seguintes referências: Davies, J. S. J. Peptide Sei. 2003, 9, 471-501.
Ao formar a ligação éster, reagentes de acoplamento (por exemplo, EDC, DCC, PyBOP, HATU, COMU) podem ser utilizados, ou quando esta é a etapa final na formação do macrociclo, os procedimentos de macrolactamização são preferidos (por exemplo, Shiina, Yamaguchi) . Um método de exemplo para a etapa de macrolactamização pode ser encontrado em Journal of American Chemical Society 2002, 124, 4257 Paquette et al. ou Chemical Reviews 2006, 106(3), 911-939. Tipicamente, o ácido e o álcool são misturados num solvente polar, por exemplo, DMF, acetonitrilo, etc., na presença do agente de acoplamento e uma base, por exemplo, DIPEA, DMAP. A conexão 5 também pode ser uma ligação éter onde R1e R2 são ambos hidrogénio ou grupos alquilo. Neste exemplo os procedimentos de formação de ligação carbono-oxigénio descritos acima para a conexão 4 são utilizados para conectar os 2 componentes. A conexão 5 também pode ser uma ligação amina onde R1 e R2 são ambos hidrogénio ou grupos alquilo e os procedimentos para conectar os componentes amina e carbonilo também são descritos acima com relação à conexão 4.
Os seguintes esquemas gerais proporcionam exemplos gerais e sequências para a construção do composto macrocíclico M a partir dos precursores A-E.
Esquema 2: Utiiízação do Método de RCM para a Conexão 4
Os compostos A-E em primeiro lugar são desprotegidos (PG2-PG8) utilizando as condições descritas em Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Inc. (no presente documento "Greene and Wuts") para proporcionar os compostos la-lf.
Em muitos casos, os grupos de proteção e seus métodos de desproteção são como se segue. Para o composto E o grupo de proteção típico PG1 para o ácido (quando R1 e R2 são C=0) é um éster metilico ou triclorometílico. Os ésteres metilico ou triclorometílico podem ser removidos por uma base, por exemplo, LiOH num solvente polar, THF aquoso, etc. 0 éster triclorometílico também pode ser removido por meio de tratamento com acetato de zinco e amónio num solvente polar, por exemplo, THF. Tipicamente, PG2 e PG4 são grupos lábeis ácidos, por exemplo, BOC e são desprotegidos utilizando HC1 em dioxano, ou TMSOTf em dioxano, diclorometano. Tipicamente, PG3 e PG5 são grupos éster, removido por meio de tratamento com hidróxidos de metal alcalino em THF aquoso ou dioxano. Tipicamente PGfa é um grupo lábil ácido, por exemplo, BOC para amina e removido conforme descrito para PG2; ou silil éter para um grupo hidroxilo e removido por tratamento com HF piridina ou TBAF num solvente orgânico, por exemplo, diclorometano. Tipicamente PG8 é um grupo de proteção de amina, por exemplo, BOC e removido conforme descrito para PG2 ou um silil éter para um grupo hidroxilo e removido conforme descrito para PG6, ou um grupo acetato removido por meio de tratamento com hidróxidos de metal alcalino em THF aquoso ou dioxano. 0 composto lf é depois acoplado ao ácido la utilizando as condições descritas acima para a conexão 1 para produzir o composto lg. 0 composto lg é depois desprotegido utilizando condições descritas em Greene e Wuts e acoplado a 1 c para proporcionar lh utilizando as condições descritas acima para a conexão 2. Uma sequência alternativa para gerar lh é em primeiro lugar acoplar a amina 1 b ao ácido 1 c utilizando condições como descritas para a conexão 2 acima, para formar li; deproteção do grupo de proteção PG3 em li utilizando condições descritas em Greene e Wuts, e finalmente acoplamento com a amina lf utilizando condições descritas para a conexão 1 acima forma 1 h. 0 composto lh é desprotegido a PG6 utilizando condições descritas em Greene e Wuts e depois é acoplado a ld utilizando as condições descritas acima para a conexão 3 para formar 1 j . 0 grupo de proteção PG1 no composto 1 j depois é removido utilizando as condições descritas em Greene e Wuts, e o ácido é depois acoplado a le utilizando as condições descritas acima para a conexão 5 para formar o intermediário acíclico 1 k. Uma sequência alternativa para lk é em primeiro lugar, a desproteção de PG1 e depois acoplamento ale conforme descrito para a conexão 5; e depois desproteção de PG5 conforme descrito em Greene e Wuts, seguido de acoplamento aid utilizando as condições descrita para a conexão 3 para formar 1 k. 0 intermediário acíclico lk é depois submetido ao RCM conforme descrito acima para a conexão 4 para formar o macrociclo M.
Esquema 3: Macrolactamização^aeroiactonização da Conexão 5
0 composto A é acoplado ao composto B utilizando as condições descritas acima para a Conexão 4 para gerar 2a. 0 composto 2a é então desprotegido a PG7 conforme descrito em Greene e Wuts para gerar o ácido 2b. 0 ácido 2b é então acoplado ao produto desprotegido de 1 h (preparado a partir de lh por meio de desproteção de PG° descrito em Greene e Wuts) para gerar o precursor 2c. A desproteção de 2c é levada a cabo utilizando condições descritas em Greene e Wuts, e então o produto é ciclizado utilizando as condições descritas acima para macrolactamização ou macrolactonização em Conexão 5, para proporcionar o composto M.
Esquema 4: Macroiactsmização/lílacrolaetonizaçio da Conexão 5
0 composto 2a é desprotegido a PG8 conforme descrito em Greene e Wuts e acima na Conexão 5 para gerar 3a que é então acoplado, utilizando condições descritas acima para a Conexão 5, ao produto desprotegido de Ih (preparado a partir de lh por meio de desproteção de PG1 descrito em Greene e Wuts) para gerar o precursor 3b. A desproteção de 3b é levada a cabo utilizando condições descritas em Greene e Wuts, e então ciclizado utilizando as condições descritas acima para macrolactamização ou macrolactonização em Conexão 3, para proporcionar o composto M.
Esquema 5: Transformação adicional de compostos macrociciicos M a B81-M5
0 macrociclo final M dos esquemas acima com frequência contém grupos de proteção nas cadeias laterais que precisam de remoção adicional para geral o composto final M. Por exemplo, quando M contém um C=C como um resultado de RCM, o composto M é misturado num solvente tal como etanol, metanol, etc., na presença de catalisador de paládio em carbono sob uma atmosfera de gás hidrogénio para proporcionar o Composto Ml reduzido. Grupos de proteção no R4c\ R*d, R°a, R5b, A1, A2 e/ou X1 são removidos utilizando condições descritas em Greene e Wuts para gerar o composto M2. Química click pode ser utilizada para proporcionar triazol M3. Tal transformação é realizada pelo tratamento do alcino ou azida em M, em solvente (por exemplo, DMF) com um alcino ou azida como apropriado na presença de Cul para formar M3. 0 composto desprotegido M2 pode ser ainda transformado a macrociclo M adicional, por exemplo, tratamento de M2 contendo um grupo hidroxilo com um haleto de alquilo na presença de base, por exemplo, carbonato de césio, em solvente, por exemplo, DMF, acetonitrilo, etc., forma o produto alquilado M4. M2 contendo um grupo cetona é tratado em solvente (por exemplo, DMF, metanol, etc) com uma amina seguido da adição de acetoxiborohidreto de sódio para formar o produto amina M5.
Esquema 6: Preparação de ácidos ou ésteres δ
Muitos componentes B contendo um ácido ou éster com um alceno terminal ou Me-CH=C- ou grupos boronato de vinil/arilo estão comercialmente disponíveis ou são descritos na literatura e estes podem ser utilizados nos esquemas acima diretamente. Além disso, os seguintes esquemas abaixo são exemplos de métodos que podem ser utilizados para gerar componentes B adicionais.
No Esquema 7, parte 1, um ácido protegido é tratado com um base de desprotonação forte, por exemplo, LDA num solvente inerte, por exemplo, THF a -78°C e EMPA. Uma solução pré-arrefecida de dicloroacteileno (preparado pelo tratamento de tricloreteno com hidreto de potássio e MeOH (catalítico) em THF) é então adicionado para gerar o produto de cloro acetileno. Este produto é então reduzido, por exemplo, pelo tratamento com Cu em ácido acético e THF para gerar o alcino que é então ainda reduzido ao alceno, por exemplo, pelo tratamento de uma solução alcoólica do alcino com um agente de redução de paládio envenenado (por exemplo, Lindlar) na presença de gás hidrogénio. Alternativamente o alcino é tratado com Cp2ZrHCl em diclorometano na presença de pinacolborano para formar o boronato de vinilo.
No Esquema 7, parte 2, um beta-ceto éster com substitução alfa é convertido ao triflato de vinilo, por exemplo, pelo tratamento de uma solução de THF do beta-ceto éster com uma base, por exemplo, LDA em THF a -78°C, seguido de adição de PhN(Tf)2. 0 produto de triflato é então tratado com piridina a temperatura elevada para formar o alcino. 0 alcino é então tratado conforme descrito acima em Exemplo 1 para gerar os produtos alceno ou boronato de vinilo.
No Esquema 7, parte 3, uma reação de aldol quiral é utilizada. Um acilo grupo é em primeiro lugar unido a um auxiliar quiral, por exemplo, Evans, Ορροίzer sultam (veja-se JACS 1990, 112, p2767) utilizando as condições de formação de ligação amida padrão descritas para a Conexão 1-3. 0 produto auxiliar Oppolzer é tratado com o aldeído de escolha, TBDMSOTf e base, por exemplo, trietilamina em solvente anidro, por exemplo, diclorometano. 0 auxiliar
Evans é tratado com base, por exemplo, LDA, KHMDS, DIPEA em solvente orgânico, por exemplo, THF a -78°C e o aldeído de escolha na presença de um ácido de Lewis, por exemplo, TiCl4, SnCl4, BF3OEt2. A proteção do álcool resultante da reação de aldol é realizada conforme descrito em Greene e Wuts, ou alternativamente alquilação com um haleto de alquilo ou reagente de Meerwein, isto é, tratamento com tetrafluoroborato de trimetiloxónio num solvente inerte, por exemplo, diclorometano é realizada. O auxiliar é então removido utilizando condições de remoção de hidróxido de metal alcalino padrão, por exemplo, LiOH em THF, ou LiOH e peróxido de hidrogénio em THF para proporcionar o produto ácido livre.
No Esquema 7, parte 4, um auxiliar Evans é alilado com um haleto de alilo conforme descrito em Synlett 2002, 12, 2039-2040. 0 produto é então isómeroizado pelo tratamento com RhCl3 em etanol e então o auxiliar removido pela base e peróxido, por exemplo, LiOH e H202 em THF/Água. Alternativamente o auxiliar é diretamente removido por LiOH e H202 em THF/Água para proporcionar o alceno terminal.
No Esquema 7, parte 5, uma reação Horner Wadsworth Emmons é utilizada num aldeído (contendo um terminal alceno) para gerar o éster alfa-beta insaturado que é então seletivamente reduzido ao éster. Por exemplo o fosfonato é tratado com base, por exemplo, hidreto de sódio em THF a baixa temperatura, seguido de adição do aldeído e aquecimento para gerar o éster insaturado. O produto é reduzido pelo tratamento com magnésio em pó em metanol.
No Esquema 7, parte 6, um ácido alfa-beta insaturado ou é convertido ao auxiliar de Evans insaturado (veja-se Organic Letters 2007, 9, pl635) e é tratado com um aldeído para gerar correspondente produto alceno. O grupo hidroxilo é então protegido utilizando métodos descritos em Greene e Wuts e então o auxiliar é removido pelo tratamento com base e peróxido, por exemplo, LiOH e H202 em THF/Água. 0 hidroxilo pode também ser alquilado conforme descrito acima para o aldol no Esquema 7, parte 3.
No Esquema 7, parte 7, uma cetona é transformada via a nitro olefina conforme descrito em Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45 (46), 7736. A nitro olefina é então tratada com brometo de vinil magnésio num solvente inerte, por exemplo, THF, na presença de um sal de cobre(I), por exemplo, Cul e cloreto de trimetilsililo. 0 produto nitro alquilo após a adição do grupo vinilo é então convertido ao ácido pelo tratamento de com nitrito de sódio e ácido acético num solvente polar inerte, por exemplo, DMSO. Vários tipos de A (ou AI como mostrado) estão disponíveis comercialmente ou descritos na literatura onde X1 =0 ou NH e Y é um haleto ou alceno. Os esquemas abaixo descrevem métodos gerais adicionais para gerar AI.
No Esquema 8, parte 1 (Y é um halogéneo em Al) ; o Composto 6a de partida é tipicamente um composto aromático comercialmente disponível, que contém o halogéneo Y e um grupo Z que pode ser transformado à cetona 6b. Os grupos Z típicos são haleto, ácido, aldeído.
Por exemplo, quando Z é um ácido, 6a é tratado com um agente de acoplamento, por exemplo, HATU, EDC na presença de uma base, por exemplo, DIPEA e a amina Weinreb (Me-NH-OMe) para formar a amida Weinreb. A amida é então tratada com um nucleófilo, por exemplo, TMS-CF3 para formar a cetona substituída CF3 6b ou com um agente Grignard, por exemplo, MeMgBr num solvente, por exemplo, THF a -78°C para formar a metil cetona 6b.
Quando Z é um halogéneo, então a conversão inicial, se for necessário, a um mais halogéneo reativo é realizada pelo tratamento com Nal e cloreto de acetilo num solvente inerte, por exemplo, acetonitrilo. 0 halogéneo é então transformado à cetona por uma reação de Stille com um etoxivinilo estanano. 0 haleto é tratado num solvente inerte, por exemplo, tolueno, com o estanano e um catalisador de paládio (II), por exemplo, PdCl2 (PPh3) 2, seguido de tratamento do produto com HC1 a 2 M para proporcionar a cetona 6b. Nalguns casos a formação de um alquilo lítio reagente do grupo haleto pode ser realizada utilizando nBuLi a -78°C em THF e adicionando N-metoxi-N-metilo amida para proporcionar a cetona 6b (por exemplo, N-metoxi-N-metilacetamida proporciona o R8 é metilo em cetona 6b). Um método final para gerar a cetona 6b é através de um grupo vinilo. 6a é tratado com um viniltrifluoroborato na presença de um catalisador de paládio, por exemplo, PdCl2(dppf) e então o produto de vinilo é subsequentemente ozonolizado num solvente polar, por exemplo, metanol a baixa temperatura para dar um aldeído. 0 aldeído é então feito reagir com um nucleófilo, por exemplo, TSM-CF3 ou um reagente Grignard, por exemplo, MeMgBr para proporcionar um produto de álcool secundário. 0 álcool secundário é então oxidado com Periodinano de Dess Martin para dar a cetona desejada 6b ou pode ser utilizado como o próprio AI. Álcool quiral (X1 é 0) e amina (X1 é NH) AI são gerados utilizando métodos de redução Quiral na cetona 6b. 0 álcool quiral 6c é formado a partir de 6b utilizando um dos numerosos métodos de redução quiral disponíveis na literatura. Tipicamente, dímero de dicloro(p-cumeno) ruténio (II) e (IR, 2R) - (-) -N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina são combinados em água, e formato de sódio e 6b é adicionado num solvente miscível em água tal como tetrahidrofurano. A reação é então agitada a uma temperatura entre ambiente e refluxo para produzir 6c onde X1 ê 0. Alternativamente, uma redução quiral de CBS pode ser realizada num solvente inerte, por exemplo, THF a baixa temperatura para também proporcionat o álcool quiral 6c. A proteção do OH em 6c é realizada utilizando métodos descritos em Greene e Wuts, tipicamente um grupo éter ou acetilo TBS são utilizados para proporcionar AI (X1 é 0) .
Alternativamente, para preparar AI quiral (X1 é NH) , a cetona 6b é em primeiro lugar convertida a uma imina quiral (R10 é grupo quiral) e então reduzida utilizando uma variedade de métodos descritos na literatura. Por exemplo, uma sulfinamida quiral é feita reagir com a cetona 6b para proporcionar uma sulfinimina quiral 6d, que é então reduzida com um agente de redução adequado, tipicamente NaBH4, ou selectrida, ou uma redução de tipo Noyori conforme descrito para o álcool quiral acima, com dímero de dicloro (p-cumeno) ruténio (II) e (1 R, 2R) - (-) -N'-p-tosil-l, 2-difeniletilenodiamina. 0 auxiliar de sulfinamida é então removido pelo tratamento com ácido mineral, preferentemente HC1 num solvente orgânico adequado tal como metanol, para proporcionar 6e onde X1 é NH. Proteção do grupo NH pode então ser realizada conforme descrito em Greene e Wuts para gerar AI (X1 é NH) .
Na parte 2 do Esquema 8, a síntese de composto AI onde Y é -CH=CH2, um precursor para a metãtese e reações deacoplamento cruzado são ilustrados.
Por exemplo, o composto 6c ou 6e gerado no Esquema 8, parte 1 é em primeiro lugar opcionalmente protegido em X1 utilizando um grupo de proteção adequado conforme descrito em Greene e Wuts, e então um grupo vinilo é introduzido por meio de um método de acoplamento cruzado adequado sobre o arilo ou sp2 haleto. Por exemplo, um acoplamento mediado por metal de transição com um vinilo estanano ou tetrafluoroborato de vinilo utilizando um catalisador de paládio adequado, por exemplo, PdCl2 (dppf) 2 ou PdCl2(PPh3)2 num solvente orgânico adequado, por exemplo, acetonitrilo, diclorometano, etc., com aquecimento térmico ou por micro-ondas proporciona o alceno AI.
Outro método típico que pode ser utilizado para introduzir um grupo vinilo é partindo da cetona 6b onde Y é OH. Inicialmente, a triflação do álcool é realizada pelo tratamento com Tf20 na presença de uma base, por exemplo, piridina. 0 grupo cetona é então reduzido com uma redução de Noyori, ou conforme descrito acima através da sulfonamida, para proporcionar o álcool quiral ou amina. 0 álcool quiral ou amina é então protegido conforme descrito em Greene e Wuts, e então o triflato é feito reagir com um reagent de acoplamento cruzado de vinilo, por exemplo, vinilo estanano num acoplamento de Stille, ou um viniltrifluoroborato conforme descrito acima para introduzir o alceno. Um exemplo adicional de geração de alceno utilizando a cetona 6b é via introdução de um grupo alilo. Assim, 6b onde Y é OH é tratado num solvente inerte na presença de uma base adequada, por exemplo, carbonato de metal alcalino, preferentemente carbonato de potássio com brometo de alilo para formar 6f. 0 composto 6f é então semelhante à cetona 6b e é, portanto, capaz de ser transformado conforme descrito acima na parte 1 a Composto AI onde X1 é 0 ou NH com grupo de proteção PG8.
Formulações farmacêuticas
Os compostos desta invenção são formulados com veículos e excipientes convencionais, que serão selecionados de acordo com a prática ordinária. Comprimidos conterão excipientes, deslizantes, cargas, aglutinantes e semelhantes. Formulações aquosas são preparadas em forma estéril, e quando são destinadas para administração diferente de administração oral geralmente serão isotónicas.
Embora seja possível para os ingredientes ativos serem administrados em separado pode ser preferível apresenta-los como formulações farmacêuticas. As formulações da invenção, tanto para utilização veterinária e como para humana, compreendem pelo menos um ingrediente ativo, juntamente com um ou mais veículos aceitáveis, e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos.
As formulações da presente invenção adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades diferenciadas tais como cápsulas, cachets ou comprimidos cada um dos quais contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos; como uma solução ou uma suspensão num líquido aquoso ou não aquoso; ou como uma emulsão líquida de óleo-em-água ou uma emulsão líquida de ãgua-em-óleo. 0 ingrediente ativo pode também ser administrado como um bolus, electuário ou pasta. A dose eficaz de um ingrediente ativo depende pelo menos da natureza da condição patológica a ser tratada, toxicidade, se o composto está a ser utilizado profilaticamente (doses menores) ou contra uma infeção virai ativa, o método de administração, e a formulação farmacêutica, e será determinada pelo clínico utilizando estudos de escalonamento de dose convencionais. A dose eficaz pode ser esperada que seja de cerca de 0,0001 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia; tipicamente, desde cerca de 0,01 até cerca de 10 mg/kg de peso corporal por dia; mais tipicamente, desde cerca de 0,01 até cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dia; o mais tipicamente, desde cerca de 0,05 até cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal por dia. Por exemplo, a dose diária candidata para um ser humano adulto de aproximadamente 70 kg de peso corporal variará desde 1 mg até 1000 mg, preferentemente entre 5 mg e 500 mg, e pode tomar a forma de doses individuais ou múltiplas.
Terapêutica de Combinação
Os compostos da presente invenção podem ser combinados com um ou mais agentes ativos. Exemplos não limitantes de agentes ativos adequados a serem combinados incluem um ou mais interferões, ribavirina ou seus análogos, inibidores de HCV NS3 protease, inibidores de NS5a, inibidores de alfa- glucosidase 1, hepatoprotetores, antagonistas de mevalonato decarboxilase, antagonistas do sistema renina-angiotensina, outros agentes anti-fibróticos, antagonistas de endotelina, inibidores de nucleósido ou nucleótido de HCV NS5B polimerase, inibidores não nucleósido de HCV NS5B polimerase, inibidores de HCV NS5A, agonistas de TLR-7, inibidores de ciclofilina, inibidores de HCV IRES, potenciadores farmacocinéticos e outros fármacos para o tratamento de HCV; ou misturas dos mesmos.
Mais especif icamente, um ou mais compostos a serem combinados são selecionados a partir do grupo que consiste em: 1) interferões, por exemplo, rIFN-alfa 2b pegilado, (PEG-Intron), rIFN-alfa 2a pegilado, (Pegasys), rIFN-alfa 2b (Intron A) , rIFN-alfa 2a (Roferon-A), inteferão alfa (MOR-22, OPC-18, Alfaferona, Alfanativa, Multiferon, subalin), interferão alfacon-1 (Infergen), interferão alfa-nl (Wellferon), interferão alfa-n3 (Alferon), inteferão-beta (Avonex, DL-8234), interferão -omega (omega DUROS, Biomed 510), albinterferão alfa-2b (Albuferon) , IFN alfa XL, BLX-883 (Locteron), DA-3021, inteferão glicosilado alfa-2b (AVI-005), PEG-Infergen, inteferão pegilado lambda (PEGylated IL-29), e belerofon; 2) ribavirina e seus análogos, por exemplo, ribavirina (Rebetol, Copegus), e taribavirina (Viramidina); 3) inibidores de HCV NS3 protease, por exemplo, boceprevir (SCH-503034, SCH-7), telaprevir (VX-950), VX-813, TMC-435 (TMC435350), ABT-450, BI-201335, BI-1230, MK-7009, SCH-900518, VBY-376, VX-500, GS-9256, GS-9451, BMS-790052, BMS-605339, PHX-1766, AS-101, YH-5258, YH5530, YH5531, e ITMN-191 (R-7227); 4) inibidores de alfa- glucosidase 1, por exemplo, celgosivir (MX-3253), Miglitol, e UT-231B; 5) hepatoprotetores, por exemplo, emericasan (IDN-6556), ME-3738, GS-9450 (LB-84451), silibilin, e MitoQ;
6) inibidores nucleósido ou nucleótido de HCV NS5B polimerase, por exemplo, R1626, R7128 (R4048), IDX184, IDX-102, PSI-7851, BCX-4678, valopicitabina (NM-283), GS-6620 e MK-0608; 7) inibidores não nucleósido de HCV NS5B polimerase, por exemplo, filibuvir (PF-868554), ABT-333, ABT-072, BI-207127, VCH-759, VCH-916, JTK-652, MK-3281, VBY-708, VCH-222, A848837, ANA-598, GL60667, GL59728, A-63890, A- 48773, A-48547, BC-2329, VCH-796 (nesbuvir), GSK625433, BILN-1941, XTL-2125, e GS-9190; 8) inibidores de HCV NS5A, por exemplo, AZD-2836 (A- 831), AZD-7295 (A-689), e BMS-790052; 9) agonistas de TLR-7,, por exemplo, imiquimod, 852A, GS-9524, ANA-773, ANA-975, AZD-8848 (DSP-3025), PF- 04878691, e SM-360320; 10) inibidores de ciclofilina, por exemplo, DEBIO-025, SCY-635, e NIM811; 11) inibidores de HCV IRES, por exemplo, MCI-067; 12) melhoradores farmacocinéticos, por exemplo, BAS- 100, SPI-452, PF-4194477, TMC-41629, GS-9350, GS-9585, e roxitromicina; 13) outros fármacos para o tratamento de HCV, por exemplo, timosina alfa 1 (Zadaxin), nitazoxanida (alínea), NTZ), BIVN-401 (virostat), PYN-17 (altirex), KPE02 003 002, actilon (CPG-10101) , GS-9525, KRN-7000, civacir, GI-5005, XTL-6865, BIT225, PTX-111, ITX2865, TT-033Í, ANA 971, NOc-205, tarvacin, EHC-18, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, BMS-650032, BMS-791325, Bavituximab, MDX- 1106 (ONO-4538), Oglufanide, FK-788, e VX-497 (merimepodib); 14) antagonistas de mevalonato decarboxilase, por exemplo, estatinas, inibidores de HMGCoA sintase (por exemplo, himeglusina), inibidores de síntese de esqualeno (por exemplo, ácido zaragózico) ,· 15) antagonistas do recetor de angiotensina II, por exemplo, losartan, irbesartan, olmesartan, candesartan, valsartan, telmisartan, eprosartan; 16) inibidores da enzima de conversão de angiotensina, por exemplo, captopril, zofenopril, enalapril, ramipril quinapril, perindopril, lisinopril, benazepril, fosinopril; 17) outros agentes anti-fibróticos, por exemplo, amilorida; e 18) antagonistas de endotelina, por exemplo, bosentan e ambrisentan.
Ainda noutra forma de realização, O presente pedido de patente proporciona uma terapêutica de combinação que compreende uma composição da presente invenção e uma segunda composição farmacêutica que compreende pelo menos um agente terapêutico adicional selecionado a partir do grupo que consiste em compostos inibidores da protease do VIH, inibidores não nucleósidos de HIV de transcriptase reversa, inibidores nucleósidos de HIV de transcriptase reversa, inibidores nucleótidos de HIV de transcriptase reversa, inibidores de VIH integrase, inibidores de gp41, inibidores de CXCR4, inibidores de gpl2Q, inibidores de CCR5, interferões, análogos de ribavirina, inibidores de NS3 protease, inibidores de NS5a, inibidores de alfa-glucosidase 1, inibidores de ciclofilina, hepatoprotetores, inibidores não nucleósidos de HCV, e outros fármacos para o tratamento de HCV, e combinações dos mesmos.
Mais especificamente, um ou mais compostos da presente invenção podem ser combinados com um ou mais compostos selecionados a partir do grupo que consiste em 1) inibidores de HIV protease, por exemplo, amprenavir, atazanavir, fosamprenavir, indinavir, lopinavir, ritonavir, lopinavir μ ritonavir, nelfinavir, saquinavir, tipranavir, brecanavir, darunavir, TMC-126, TMC-114, mozenavir (DMP-450), JE-2147 (AG1776), AG1859, DG35, L-756423, RO0334649, KNI-272, DPC-681, DPC-684, e GW640385X, DG17, PPL-100, 2) um inibidor não nucleósido de HIV de transcriptase reversa,, por exemplo, capravirina, emivirina, delaviridina, efavirenz, nevirapina, (μ) calanolida A, etravirina, GW5634, DPC-083, DPC-961, DPC-963, Mb-150, e TMC-120, TMC-278 (rilpivirina), efavirenz, BILR 355 BS, VRX 840773, UK-453,061, RDEA806, 3) um inibidor nucleósido de HIV de transcriptase reversa,, por exemplo, zidovudina, emtricitabina, didanosina, estavudina, zalcitabina, lamivudina, abacavir, amdoxovir, elvucitabina, alovudina, Mb-210, racivir (6-FTC), D-d4FC, emtricitabina, fosfazida, fozivudina tidoxil, fosalvudina tidoxil, apricitibina amdoxovir, KP-1461, abacavir μ lamivudina, abacavir μ lamivudina μ zidovudina, zidovudina μ lamivudina, 4) um inibidor nucleótido de HIV de transcriptase reversa,, por exemplo, tenofovir, tenofovir disoproxil fumarato μ emtricitabina, tenofovir disoproxil fumarato μ emtricitabina μ efavirenz, e adefovir, 5) um inibidor de HIV integrase, por exemplo, curcumina, derivados de curcumina, ácido chicórico, derivados de ácido chicórico, ácido 3,5-dicafeoilquínico, derivados de ácido 3,5- dicafeoilquínico, ácido aurintricarboxílico, derivados de ácido aurintricarboxílico, éster fenetílico de ácido cafeico, derivados de éster fenetílico de ácido cafeico, tirfostina, derivados de tirfostina, quercetina, derivados de quercetina, S-1360, zintevir (AR-177), L-870812, e L-870810, MK-0518 (raltegravir), BMS-707035, MK-2048, BA-011, BMS-538158, GSK364735C, 6) um inibidor de gp41, por exemplo, enfuvirtida, sifuvirtida, FB006M, TRI-1144, SPC3, DES6, Locus gp41, CovX, e REP 9, 7) um inibidor de CXCR4, por exemplo, AMD-070, 8) um inibidor de entrada, por exemplo, SP01A, TNX-355, 9) um inibidor de gpl20, por exemplo, BMS-488043 e BlockAide/CR, 10) um inibidor de G6PD e NADH-oxidase, por exemplo, imunitina, 10) um inibidor de CCR5, por exemplo, aplaviroc, vicriviroc, INCB9471, PRO-140, INCB15050, PF-232798, CCR5mAb004, e maraviroc, 11) um interferão, por exemplo, rIFN-alfa 2b pegilado, rIFN-alfa 2a pegilado, rIFN-alfa 2b, IFN alfa-2b XL, rIFN- alfa 2a, IFN alfa consenso, infergen, rebif, locteron, AVI-005, PEG-infergen, IFNIFN-beta pegilado, inteferão alfa oral, reaferon, intermax alfa, r-IFN-beta, infergen μ actimune, IFN-omega com DUROS, e albuferon, 12) análogos de ribavirina, por exemplo, rebetol, copegus, VX-497, e viramidina (taribavirina) 13) inibidores de NS5a, por exemplo, A-831, A-689 e BMS-790052, 14) inibidores de NS5b polimerase, por exemplo, NM-283, valopicitabina, R1626, PSI-6130 (R1656), IDX184, PSI-7851, HCc-796, BILB 1941, MK-0508, NM-107, R7128, VCH-759, PF-868554, GSK625433, e XTL-2125, 15) inibidoresde NS3 protease, por exemplo, SCH-503034 (SCH-7), VX-950 (Telaprevir), ITMN-191, e BILN-2065, 15) inibidores de alfa- glucosidase 1, por exemplo, MX-3253 (celgosivir) e UT-231 B, 17) hepatoprotetores, por exemplo, IDN-6556, ME 3738, MitoQ, e LB-84451, 18) inibidores não nucleósidos de HCV, por exemplo, derivados de benzimidazol, derivados de benzo-1,2,4-tiadiazina, e derivados de fenilalanina, 19) outros fármacos para o tratamento de HCV, por exemplo, zadaxin, nitazoxanide (alinea), BIVN-401 (virostat) , DEBIO-025, VGX-410C, EMZ-702, AVI 4065, bavituximab, oglufanide, PYN-17, KPE02003002, actilon (CPG-10101), KRN-7000, civacir, GI-5005, ANA-975, XTL-ANA 971, NOc-205, tarvacin, EHC-18, e NIM811, 19) melhoradores farmacocinéticos, por exemplo, BAS-100, SPI-452, PF-4194477, TMC-41629, GS-9350, GS- 9 5 8 5, e roxitromicina, 20) inibidores de RNAse H, por exemplo, ODN-93 e ODN-112, 21) outros agentes anti-VIH, por exemplo, VGc-1, PA-457 (bevirimat), ampligen, HRG214, citolina, polimune, VGX-410, KD247, AMZ 0026, CYT 99007, A-221 HIV, BAY 50-4798, MDX010 (iplimumab), PBS119, ALG889, e PA-1050040.
Num aspeto específico desta forma de realização, o agente terapêutico adicional é selecionado a partir de ribavirina, telaprevir, boceprevir e sofosbuvir (GS-7977 (anteriormente PSI-7977)).
Uma terapêutica de combinação descrita no presente documento pode ser administrada como um regime simultâneo ou sequencial. Quando é administrada sequencialmente, a combinação pode ser administrada em duas ou mais administrações. A co-administração de um composto da invenção com um ou mais outros agentes ativos geralmente refere-se a administração simultânea ou sequencial de um composto da invenção e um ou mais outros agentes ativos, tal que as quantidades terapeuticamente eficazes do composto da invenção e um ou mais outros agentes ativos estão ambas presentes no corpo do paciente.
Um ou mais compostos da invenção são administrados por qualquer via apropriada para a condição patológica a ser tratada. As vias adequadas incluem oral, retal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal e parentérica (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosas, intradérmica, intratecal e epidural), e semelhantes. Será apreciado que a via preferida pode variar com, por exemplo, a condição patológica do recetor. Uma vantagem dos compostos desta divulgação é que são oralmente biodisponíveis e podem ser dosifiçados oralmente. Método para o tratamento de infeção virai 0 presente pedido proporciona um composto para utilização num método para o tratamento de uma infeção virai de Flaviviridae que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, isótopo, estereoisõmero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, a um ser humano em necessidade do mesmo.
Também e proporcionado um composto para utilização num método para o tratamento de uma infeção virai de Flaviviridae que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, a um ser humano em necessidade do mesmo.
Numa forma de realização, 0 método de inibição ou tratamento de uma doença compreende administrar a um animal uma composição que compreende uma quantidade eficaz de um ou mais compostos da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável. A composição a ser administrada pode ainda conter um agente terapêutico secundário conforme descrito acima.
Um método do presente pedido é particularmente adequado para utilização com seres humanos, mas pode ser utilizado com outros animais, particularmente mamíferos, tais como, por exemplo, primatas não humanos, animais de companhia, animais de produção, animais de laboratório, e animais selvagens e/ou de zoo.
Um método do presente pedido é particularmente útil para tratar doenças causadas direta ou indiretamente pelo vírus Flaviviridae uma vez que os compostos da presente invenção têm atividade inibitória contra esses vírus. Nalgumas formas de realização, como tal, um método da presente invenção é utilizado na inibição ou tratamento de doenças causadas por um vírus da hepatite C. Nalgumas formas de realização, como tal, um método da presente invenção é utilizado na inibição ou tratamento de doenças causadas por um vírus da hepatite B. Num aspeto, tal método é aplicado a um paciente com uma doença causada pela infeção virai tal como a febre da dengue, febre amarela, hepatite C, encefalite japonesa, doença da floresta de Kyasanur, encefalite de Murray Valley, encefalite de St. Louis, encefalite transmitida por carraças ou encefalite de West Nile.
Nalgumas formas de realização, uma resposta virológica sustentada é conseguida em cerca de 12 semanas, em cerca de 10 semanas, em cerca de 8 semanas, em cerca de 6 semanas, ou em cerca de 4 semanas, ou em cerca de 4 meses, ou em cerca de 5 meses, ou em cerca de 6 meses, ou em cerca de 1 ano, ou em cerca de 2 anos.
Um método do presente pedido também é particularmente útil para tratar doenças causadas direta ou indiretamente pelo vírus Coronaviridae uma vez que os compostos da presente invenção têm atividade inibitória contra esses vírus. Nalgumas formas de realização, como tal, um método da presente invenção é utilizado na inibição ou tratamento de doenças causadas por um coronavírus SARS. Num aspeto, tal método é aplicado a um paciente com uma doença causada pela infeção virai tal como a síndrome respiratória aguda grave (SARS), cancro, inflamação, obesidade, síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA), ou cirrose.
Noutro aspeto, os compostos divulgados no presente documento podem ser utilizados para o tratamento de cancro.
Ainda noutro aspeto, os compostos divulgados no presente documento podem ser utilizados para imunomodulação. Nalgumas formas de realização, como tal, um método da presente invenção compreende ajustar uma resposta imune a um nível desejado, como em i munopo tenciação, imunossupressão, ou indução de tolerância imunilõgica.
Nalgumas formas de realização, o composto é administrado durante cerca de 12 semanas. Em formas de realização adicionais, o composto é administrado durante cerca de 12 semanas ou menos, durante cerca de 10 semanas ou menos, durante cerca de 8 semanas ou menos, durante cerca de 6 semanas ou menos, ou durante cerca de 4 semanas ou menos. 0 composto pode ser administrado uma vez ao dia, duas vezes ao dia, em dias alternados, duas vezes por semana, três vezes por semana, quatro vezes por semana, ou cinco vezes por semana.
EXEMPLOS
Os seguintes exemplos são meramente ilustrativos, e não limitam de qualquer forma esta divulgação. Para os exemplos 1 a 120, a menos que seja indicado de outro modo, foi realizada HPLC num sistema de HPLC Gilson, utilizando uma coluna semi-preparativa Eclipse XDB/C18 de 7 micra, 250 x 21,2 mm e uma fase móvel de acetonitrilo/água a uma taxa de fluxo de 20 ml/min.
Para os exemplos 121 a 175, a menos que seja indicado de outro modo, foi realizada HPLC num sistema de HPLC Shimadzu, utilizando uma coluna semi-preparativa de 21,2 x 2 50mm 10 micra C18 Phenomenex Gemini e uma fase móvel de acetonitrilo/água a uma taxa de fluxo de 20 ml/min.
Lista de abreviações e acrónimos Significados das abreviações °C Graus Celcius di- 2-Di-terc-butilfosfino-3,4,5,6 -tetrametil- tBuXPhos 2',4',6'-triisopropil-l,1'-bifenilo 2,6-lut. 2,6-lutidina MNBA anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico 4AMS Crivos moleculares de 4 angstrom
Ac Acetilo ACN acetonitrilo ap aparente
Aq Aquoso BINAP (2,2'-bis (difenilfosfino)-1,1'-binaftilo)
Bn Benzilo
Boc terc-Butoxicarbonilo
Boc-Val-OH ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirico BOP hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxi- tris-(dimetilamino)-fosfónio Br largo
Bu Butilo cat Catalico CBS Corey Bakshi Shibata CDMT 2-cloro-4,6-dimetoxil,3,5-triazina cm centímetro cod ciclooctadieno COMU hexafluorofosfato de (l-ciano-2-etoxi-2- oxoe tili denoami nooxi)dime t i1amino-morpho1ino-carbenio CP/Cp Ciclopentilo CPME Ciclopentil metil éter CSA Ácido canforssulfónico
Cy/cHex ciclohexilo d dupleto DAST trifluoreto dietilaminoenxofre dba dibenzilidenoacetona DBU 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno DCC N, N' -diciclohexilcarbodiimida DCE Dicloroetano DCM Diclorometano dd Dupleto de dupleto ddd Dupleto de dupleto de dupleto ddt Dupleto de dupleto de tripleto DIAD azodicarboxilato de di-isopropilo DIPEA N,N-diisopropiletilamina DMAP 4-dimetilaminopiridina DME 1,2-dimetoxietano DMF Dimet i1formamida DMSO Sulfóxido de dimetilo dppf 1,1'-bis(di-fenilfosfino)ferroceno dq Dupleto de quarteto dt Dupleto de tripleto dtd Dupleto de tripleto de dupleto EA Acetato de etilo EDC l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
Equiv/eq Equivalentes Et Etilo g Gramas HATU hexafluorofosfato de (dimetilamino)-N,N- dimetil(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)methaniminio HBTU hexafluorofosfato de (2-(lH-benzotriazol-1- il)-1,1,3,3 -tetrametilurónio HDMS Hexametildisilazano HEX hexano HMPA Hexametilfosforamida HOAc/AcOH Ácido acético HOST Hidroxibenzotriazol HPLC Cromatografia líquida de alto desempenho h Horas
Hz Hertz IC50 A concentração inibitória máxima de 50%
Im imidazol i-Pr/iPr Isopropilo íPr2NEt N, N- diisopropiletilamina J constante de acoplamento
Kg Quilograma KHMDS bis(trimetilsilil)amida de potássio LCMS cromatografia líquida-espectrometria de massa LDA Diisopropilamida de litio
LiHMDS bis(trimetilsilil)amida de litio M Molar m Multipleto m/z razão de massa para carga Μμ pico de massa m-CPBA ácido meta-cloroperoxibenzoico
Me Metilo mg Miligrama MHz Megahertz min minutos ml Mililitro mM Milimolar mm Milímetro mmol Milimol mol Mol
Ms metanossulfonilo MW Microondas N Normal nM Nanomolar
NaHMDS bis(trimetilsilil)amida de sódio NMM N-metilmorfolina RMN Ressonância magnética nuclear nPr n-propilo o-Tol o-tolilo
Ph Fenilo
Pin Pinacolato
Piv Pivaloilo pTSA Ácido p-toluenossulfónico
Py/'pyr Piridina
PyAOP Hexafluorofosfato de 7-azabenzotriazol-l- iloxi)tripirrolidinofosfónio
PyBop Hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il- oxitripirrolidinofosfónio q Quarteto quant Qantitativo rac Racémico
Rf Fator de retenção TA/ta/t. a. Temperatura ambiente s Singleto sat. Saturado SEMCI cloreto de 2-trimetilsililetioximetilo t Tripleto TBAF Fluoreto de tetra-n-butilamónio TBDMS/TBS terc-Butildimetilsililo TBDPS terc-Butildifenilsililo t-Bu terc-butilo td Tripleto de dupletos TEA Trietilamina
Tf Trifluorometanossulfonilo TFA ácido trifluoroacético THF Tetrahidrofurano TLC cromatografia de camada fina TMEDA tetrametiletilenodiamina TMS Trimetilsililo
Tr/tr Tempos de retenção
Ts Tosilo tt Tripleto de tripletos UV Ultravioleta p peso δ Desvio químico μΐ Microlitro μΜ Micromolar μπιοί Micromol EXEMPLO 1: (E) - (2R,5S, US, 14S, 17R, 18R) -18-Hidroxi-14- isopropil-2,11,17-trimetil-3,9,12,15,28-pentaaza- triciclo[21,3.1,1 *5,9*]octacosa-1(26),21,23(27),24- tetraeno-4,10,13,16-tetraona: Composto 1
Uma solução de 1-((IR,5S)-10,10-dimetil-3,3-dioxo-31ambdaÀ6À-tia-4-aza-triciclo [5,2.1,0À1,5À] dec-4-il) -propan-l-ona (3,95 g, 14,55 mmol) em tolueno (50 ml) foi preparada, então evaporada até a secura. Este processo foi repetido e o sólido branco resultante foi dissolvido em diclorometano anidro (16 ml). Uma pequena quantidade de hidreto de cálcio foi adicionada antes de adicionar trifluorometanossulfonato de terc-butildimetilsililo (3,83 ml, 14,5 mmol) e trietilamina anidra (2,33 ml, 16,7 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA ("TA") sob uma atmosfera de azoto durante 15 horas ("h"). A solução resultante foi evaporada para render uma pasta espessa, que foi re-dissolvida em diclorometano anidro (15 ml) e adicionada gota a gota a uma solução agitada de 4-pentenal (2,69 g, 32,0 mmol) e tetracloreto de titânio (1 M em diclorometano, 32 ml, 32 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) a -78°C, sob uma atmosfera de azoto. A reação foi agitada a -78°C durante 30 minutos ("min") antes de diluir com solução saturada aquosa de cloreto de amónio (100 ml). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 50 ml). 0 extrato combinado foi seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado para dar uma goma castanha. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para render o composto do título (3,09 g, 60%) como uma goma incolor.
Uma solução de 1 a (12,0 g, 0,034 mol) em diclorometano anidro (520 ml) foi arrefecida até 0°C, antes de adicionar piridina (5,5 ml, 0,068 mol) então trifluorometanossulfonato de terc-butildimetilsililo (9 ml, 0,039 mol) . A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 15 min então deixada a aquecer a TA e agitado durante mais 1,5 h. A mistura de reação foi lavada com bicarbonato de sódio saturado (400 ml). A lavagem aquosa foi retro-extraída com diclorometano (200 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura diluída (200 ml) e ácido clorídrico a 2 M (200 ml) . A solução foi seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada para dar o produto do título (15,29 g, 96%) como um sólido branco.
Uma solução de 1 b (15,29 g, 0,0325 mol) em tetrahidrofurano (300 ml) foi preparada e uma solução aquosa a 2 M de hidróxido de lítio (120 ml) foi adicionada. A mistura agitada foi aquecida até 60°C durante 15 h. A reação foi diluída com ácido clorídrico a 2 M (250 ml). As camadas foram separadas e a aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 200 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar um sólido creme (16,7 g) . 0 sólido foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando 3:7 acetato de etilo/ iso-hexanos para render o produto do título (7,18 g, 81ã) como uma goma incolor.
Uma solução de ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propiónico (3,28 g, 17,32 mmol) em acetonitrilo (160 ml) foi arrefecida até 0°C antes de adição de N,N- diisopropiletilamina (12 ml, 69,3 mmol) então hexafluorofosfato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,1,3,3- tetrametilurónio (6,57 g, 17,32 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 20 min e uma solução de sal 2,2,2- trifluoroacético do éster tricloroetílico do ácido (S)-hexahidropiridazina-3- carboxílico ácido (preparação descrita em Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1999, 38, 2443, 6,4 9 g, 17,3 mmol) em acetonitrilo (80 ml) foi adicionada. A reação foi deixada a aquecer a TA e foi agitada durante 15 h. A mistura de reação foi evaporada então re-dissolvida em acetato de etilo (150 ml) . A solução foi lavada com salmoura (150 ml). A salmoura foi retro-extraída com acetato de etilo (50 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar um óleo escuro. 0 óleo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para render o composto do título (6,88 g, 92ã) como uma goma incolor.
Uma solução de ld (6,88 g, 15,9 mmol) em diclorometano (200 ml) foi preparada e ácido trifluoroacético (50 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a TA durante 2 h. TLC mostrou que a reação estava concluída. A solução foi evaporada para dar um óleo castanho. Isto foi azeotropizado com tolueno (50 ml) e o óleo resultante foi seco a vácuo para dar sal trifluoroacético do éster 2,2,2 -tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-amino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido (7,8 g) como uma goma castanha. Uma solução de éster terc-butílico do ácido ((S)- 1-carbamoi1-2-met ilpropi1)-carbámico em acetonitrilo (300 ml) foi arrefecida até 0°C antes de adicionar N, N-diisopropiletilamina (13,8 ml, 79,7 mmol) e hexafluorofosfato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (6,33 g, 16,7 mmol). A reação foi agitada a 0°C durante 15 min antes de adicionar uma solução do sal de ácido trifluoroacético do éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-amino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (ca. 15,9 mmol) em acetonitrilo (85 ml) . A reação foi agitada a 0°C durante mais 20 min então deixada a aquecer a TA e agitada durante 15 h. A mistura de reação foi evaporada então redissolvida em acetato de etilo (250 ml) . A solução foi lavada com água (150 ml) então seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada para dar um óleo vermelho. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 7:3 então iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para render o composto do título (8,2 g, 92ã) como um sólido amorfo laranja pálido.
Uma solução de 1 e (10,0 g, 18,5 mmol) em diclorometano anidro (200 ml) foi preparada e trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (5 ml, 27,75 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a TA durante 2 h, então N,N-diisopropiletilamina (13,2 ml, 75,8 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi evaporada até a secura. O resíduo foi re-dissolvido em acetonitrilo (200 ml) e uma solução de ácido (2R,3R)-3-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-2-metil-hept-6-enoico (5,04 g, 18,5 mmol) em acetonitrilo (60 ml) foi adicionada seguido de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (5,0 g, 26,4 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol (4,4 g, 26,4 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA durante 15 h. Foi evaporada para dar um óleo amarelo espesso. 0 óleo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando 1:1 acetato de etilo/íso-hexanos então 3:2 acetato de etilo/iso-hexanos para render o produto do título (8,75 g, 69ã) como um sólido branco.
Uma solução de (R)-bromo-a-metilbenzilamina (1,023 g, 5,112 mmol) em diclorometano (20 ml) foi subsequentemente tratada com trietilamina (720 μΐ, 5,112 mmol) e dicarbonato de di-terc-butilo (1,784 g, 8,179 mmol). Após agitação durante a noite a TA, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um 50 g Isolute cartucho eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/dietilo éter de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (1,552 g, lOOã) como um sólido branco.
Uma solução de lg (10,26 g, 0,0342 mol.) e tributil(vinil)estanho (32,5 g, 30 ml, 0,103 mol.) em tolueno (175 ml) foi purgada com azoto durante 30 min antes de adição de dicloreto de bis(trifenilfosfina) paládio (II) (2,38 g, 0,0034 mol.). A mistura agitada foi aquecida até 60°C durante 16 h antes de arrefecimento até TA. A mistura de reação foi filtrada através de hyflo-supercel então evaporada para dar um óleo de cor escura. 0 óleo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 19:1 para render o composto do título (6,95 g, 82%) como um óleo amarelo.
Uma solução de 1 h (6,95 g, 28,1 mmol.) em 1,4-dioxano (30 ml) foi preparada e uma solução de cloreto de hidrogénio em 1,4 dioxano (4 M, 60 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a TA durante 2 h então evaporada até a secura. 0 sólido resultante foi redis solvido em tolueno e evaporado. O sólido foi triturado com dietil éter, que foi removido por meio de decantação. 0 sólido foi então seco a vácuo para dar o composto do título (4,96 g, 96%) como um sólido branco pérola.
Uma solução de If (8,75 g, 12,75 mmol) em tetrahidrofurano (350 ml) foi preparado e zinco em pó (8,44 g, 127,5 mmol) foi adicionado seguido de uma solução aquosa a 1 M de acetato de amónio (90 ml, 90 mmol) · A mistura de reação foi vigorosamente agitada durante 16 h então filtrada através de hyflo-supercel. A solução foi arrefecida sobre um banho de gelo antes de adição de solução aquosa de cloreto de amónio (350 ml). Foi deixada a arrefecer novamente antes de acidificar a pH 1 pela adição de ácido clorídrico a 2 M. As camadas foram separadas e a aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 250 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio filtradas e evaporadas para dar um sólido branco. 0 sólido foi azeotropizado com tolueno (3 x 200 ml) então seco a vácuo para dar um sólido branco (6,16 g) , que foi dissolvido em acetonitrilo (400 ml) antes de adicionar li (2,34 g, 12,75 mmol) seguido de N, JV-diisopropi let i lamina (8,9 ml, 51 mmol) e hexafluorofosfato de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio metanamínio (6,8 g, 17,85 mmol) . A mistura de reação foi agitada a TA durante 16 h e então evaporada para dar uma goma castanha. A goma foi purificada por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo então 1:4 acetona/acetato de etilo para render o composto do título (5,51 g, 76K ) como um sólido creme.
Uma solução de Ij (0,50 g, 0,88 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) foi arrefecida sobre um banho de gelo, antes de adicionar piridina (92 μΐ, 1,14 mmol) e trifluorometanossulfonato de terc-butildimetilsililo (242 μΐ, 1,05 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 15 min, então deixada a aquecer a TA e agitada durante 1 hora. A mistura de reação foi evaporada e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo para render o produto do título (477 mg, 80%) como um sólido branco.
Uma solução de lk (477 mg, 0,7 mmol) em 1,2-dicloroetano (250 ml) foi preparada e catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (43 mg, 0,07 mmol) foi adicionado. A mistura de reação agitada foi aquecida até 80°C durante 1 hora. A mistura de reação foi arrefecida até TA antes de adicionar gel de sílica. A mistura foi agitada durante 10 min então evaporada e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando acetato de etilo para render o produto do título (198 mg, 43%) como um sólido branco.
Uma solução de II (198 mg, 0,3 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml) foi arrefecida sobre um banho de gelo antes de adicionar uma solução a 1 M de fluoreto de tetrabutilamónio em tetrahidrofurano (1,5 ml, 1,5 mmol). A reação foi deixada a aquecer a TA e foi agitada durante 1 hora. A mistura de reação foi tratada com solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (20 ml) e extraída com acetato de etilo (2 x 20 ml). 0 extrato foi seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando 1:9 acetona / acetato de etilo para render o produto do título (150 mg, 92ã) como um sólido branco. RMN (300 MHz, d6- DMSO) δ 0,83 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,85 (d, J = 6,5 Hz, 3H), I, 12-1,21 (m, 4H) , 1,28 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,36 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,40-1,90 (m, 7H), 1,92-2,08 (m, 1 H) , 2,19- 2,34 (m, 2H), 2,67-2,80 (m, 1 H), 3,56-3,65 (m, 1 H), 3,99- 4,12 (m, 1 H) , 4,22 (dl, J = 12,2 Hz, 1 H) , 4,75 (d, J = II, 8 Hz, 1H) , 4,87-4,99 (m, 1H) , 5,12-5,24 (m, 1H) , 5,40 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 6,14-6,33 (m, 2H), 7,10-7,35 (m, 5H), 7,88 (d, J = 8,3 z, 1 H) , 8,55 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 542,3 [ΜμΗ], Tr = 1,87 min. EXEMPLO 2: (E) - (2R, 5S, US, 14S, 17R, 18R) -14-Isopropil- 2,11,17-trimetil-18-(2,2,2-tri fluoro-etoxi)-3,9,12,15,28-pentaaza-triciclo[21,3.1,1*5,9*]octacosa- 1(26),21,23(27),24-tetraeno-4,10,13,16-tetraona: Composto 2
Uma solução de hexametildissilazano (235 μΐ, 1,13 mmol) em tetrahidrofurano anidro (4 ml) foi arrefecida até -10°C antes de adicionar uma solução a 2,5 M de n-butillítio (380 μΐ, 0,94 mmol). A mistura agitada foi aquecida até 0°C durante 10 min antes de arrefecimento até -78°C. Uma solução de Composto 1 (102 mg, 0,188 mmol) em dimetilformamida anidra (1,5 ml) e tetrahidrofurano anidro (1,5 ml) foi adicionada gota a gota ao longo de 2 min seguido da adição de trifluorometanossulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (135 μΐ, 0,94 mmol). A mistura de reação foi agitada a -78°C sob uma atmosfera de azoto então deixada a aquecer gradualmente até TA. A mistura de reação foi extinta com a adição de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio (15 ml) . A mistura foi extraída com acetato de etilo (2 x 15 ml). 0 extrato foi seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando 1:9 acetona/acetato de etilo para dar uma goma incolor (65 mg). A goma foi ainda purificada por meio de cromatograf ia de fase reversa, utilizando um cartucho de 10 g de C18 eluído com 2:3 acetonitrilo / água. As frações parcialmente evaporadas foram extraída com acetato de etilo (2 x 15 ml). 0 extrato foi seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado para render o produto do título (17 mg, 300 ) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CDC13) 0,92 (d, J = 6,7
Hz, 3H) , 0,96 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,32 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1, 39 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,50 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,74-1,85 (m, 1 H), 1,86-2,08 (m, 3H), 2,10-2,40 (m, 3H), 2,57-2,78 (m, 2H), 3,19-3,31 (m, 1 H), 3,49 (appt, J = 6,7
Hz, 1 Η), 3,58-3,79 (m, 4H), 3,81'4'18 (m' 2H)' 4,49 (d 2' J = 12,3 Hz, 1H), 5,03-5,17 (m, 1^ ' 5'32”5'47 (m' 1 H) ' 6,14-6,30 (ra, 1 H) , 6,37-6,72 (m, ' 7'°6~7'30 4H> · LCMS (m/z) 624,3 [ΜμΗ] , Tr = 2,57 rfd11' EXEMPLO 3: (2R,5S,11S,14S,17R,18R),l8-Hidrox:L-14-isopropil- 2,11,17-trimetil-3,9,12,15,28-penta^za" triciclo [21,3.1,1*5,9*] octacosa-1 (26> '23 (27) , 24-tneno-4,10,13,16-tetraona: Composto 3
Uma solução de Composto 1 (10^ m9' 0,184 mmol) em metanol (5 ml) foi preparada e 10ã de paládio em carbono (5 mg) foi adicionado. A mistura agitada foi colocada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 1,5 h. A mistura de reação foi filtrada através de hyflo-supercel então através de um filtro de 0,2 pm antes de evaporar para dar o composto do título (95 mg, 95ã) como um sólido branco. ^ RMN (300 MHz, CDC13) 0, 93 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 0,96 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,32 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,37-2,16 (m, 12H), 1,54 (d, J - 6,9 Hz, 3H), 2,34-2,46 (m, 1 H), 2,52-2,75 (m, 3H), 3,16- 3,27 (m, 1 H) , 3,43-3,62 (m, 3H) , 3,74 (d, J = 11,8 Hz, 1 H) , 3,98-4,06 (m, 1 H) , 4,50 (d, J = 13,2 Hz, 1 H), 5,11- 5,36 (m, 2H), 6,39-6,50 (m, 2H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,06-7,28 (m, 4H). LCMS (m/z) 544,3 [ΜμΗ], Tr - 1,91 min. EXEMPLO 4: Composto 4
A uma suspensão de hidreto sódio (60gj em óleo mineral, 783 mg, 19,6 mmol) em tetrahidrofurano seco a 0°C, sob azoto foi adicionado gota a gota fosfonoacetato de trietilo (3,38 ml, 19,6 mmol). A suspensão branca foi agitada durante 1 h onde se tornou uma solução, então 2,2-dimetil-4-pentenal (2,42 ml, 17,8 mmol) foi lentamente adicionado e a solução verde/amarelo resultante foi agitada a 0°C e deixada a aquecer a TA. Após 72 h etanol (1 ml) foi adicionado à solução, seguido de água (100 ml) e os orgânicos foram extraídos com dietil éter (2 x 200 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com água (200 ml), secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica, utilizando íso-hexanos (144 ml), então íso-hexanos/dietil éter 50:50 (72 ml), então dietil éter (48 ml) para dar o composto do título (3,20 g, 9918 ) como um óleo.
A 4a (3,20 g, 17,5 mmol) em metanol seco a TA, sob azoto foi lentamente adicionado magnésio em pó (1,28 g, 52,7 mmol) enquanto se monitoriza a elevação da temperatura. Após a adição estar concluída a mistura foi agitada a TA durante a noite. Após este tempo, à reação foi adicionado magnésio em pó adicional (852 mg, 35,1 mmol) e a mistura de reação foi agitada durante 2 h. A mistura foi neutralizada de pH 10 para pH 7 com ácido clorídrico a 2 M e então concentrada a vácuo para dar um resíduo. 0 resíduo foi suspenso em acetato de etilo (300 ml) e água (500 ml) e as camadas separadas. A fase aquosa foi então re-extraída com acetato de etilo (200 ml) e os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar o composto do título (1,96 g, 6lã) como um óleo incolor.
A 4b (2,02 g, 11,0 mmol) numa mistura de tetrahidrofurano (35 ml), metanol (9 ml) e água (9 ml) a TA, foi adicionado hidróxido de lítio monohidrato (1,38 g, 32,9 mmol) e a mistura foi agitada a TA durante 1 h. Após este tempo hidróxido de lítio monohidrato adicional (460 mg, 11,0 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 1 h. Após este tempo mais hidróxido de lítio monohidrato (460 mg, 11,0 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 30 min. A mistura de reação foi então concentrada a vácuo e o resíduo diluído com água (200 ml) e os orgânicos foram extraídos com dietil éter (3 x 50 ml) . A fase aquosa foi acidificada de pH 14 para pH 1 com ácido clorídrico a 2 M e os orgânicos extraídos com acetato de etilo (3 x 50 ml) . Os orgânicos combinado de acetato de etilo foram então secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados a vácuo para dar o produto desejado (1,03 g, 60S ) como um óleo.
Uma solução de 1 e (1,06 g, 2,00 mmol) em diclorometano (10 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água sob azoto. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,591 ml, 4,00 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 1,5 h. A reação foi extinta com Ν,Ν-diisopropiletilamina (1,4 ml, 8,00 mmol) e a mistura de reação foi concentrada a vácuo para dar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino- 3-meti1-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico como um sólido branco que foi utilizado sem purificação adicional. A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico gerado na etapa anterior foi adicionado uma solução de ácido 4,4-dimetil-hept-6-enoico (343 mg, 2,20 mmol) em acetonitrilo (70 ml) . A esta mistura foi adicionado N, N- diisopropile ti lamina (1,4 ml, 8,03 mmol) e a reação foi arrefecida num banho de gelo e água antes da adição de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (1,07 g, 2,80 mmol) . A solução amarela foi então agitada e deixada a aquecer a TA durante a noite. A mistura de reação foi extinta com ácido clorídrico a 2 M (40 ml) e concentrada a vácuo. Ao resíduo foi adicionado água (200 ml) e os orgânicos foram extraídos com acetato de etilo (3 x 150 ml). Os orgânicos combinados foram então lavados com salmoura (100 ml) e hidrogénio carbonato de sódio (200 ml). Os orgânicos foram então secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um óleo amarelo bruto (2,27 g). Isto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 90:10 (300 ml) então íso-hexanos/acetona 50:50 (300 ml) então iso- hexanos/acetona 0:100 para dar o composto do título (1,10 g, 97%) como um óleo incolor.
Uma solução de 4d (1,10 g, 1,94 mmol) em tetrahidrofurano (40 ml) foi preparado e zinco em pó (2,79 g, 42,6 mmol) foi adicionado seguido de uma solução de acetato de amónio (2,24 g, 29,0 mmol) em água (10 ml) . A mistura de reação foi agitada a TA durante 24 h. Hidrogénio sulfato de potássio aquoso saturado (pH 2, 30 ml) e acetato de etilo (50 ml) foram adicionados e a suspensão foi filtrada através de hyflo-supercel lavando através de com acetato de etilo. As camadas foram separadas. E a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 100 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (250 ml), secas em sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar uma goma incolor. 0 resíduo foi azeotropizado com tolueno (3 x 100 ml) para dar o composto do título (816 mg, 96%) como um sólido branco.
4e (439 mg, 1,00 mmol) foi suspenso em acetonitrilo (35 ml) e cloridrato de (R)-1-(3-vinil-fenil)-etilamina (202 mg, 1,10 mmol) foi adicionado seguido de N, N-diisopropiletilamina (700 μΐ, 5,00 mmol) e a mistura arrefecida num banho de gelo e água antes de adição de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (532 mg, 1,40 mmol). A mistura de reação foi agitada e deixada a aquecer a TA ao longo de 72 h. À mistura de reação foi adicionado ácido clorídrico a 2 M (20 ml) e a mistura foi concentrada a vácuo para dar um resíduo. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 100 ml) e as camadas de acetato de etilo combinadas foram lavadas com salmoura seguido de hidrogénio carbonato de sódio (100 ml) então secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para dar um resíduo bruto. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 50:50 então acetato de etilo puro para dar o composto do título (402 mg, 71H ).
A uma solução de 4f (4 02 mg, 0,71 mmol) em 1,2-dicloroetano (210 ml) foi adicionado catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (45 mg, 0,07 mmol) e a mistura de reação aquecida a 80 °C durante 1 h. Após este tempo a mistura foi deixada a arrefecer até TA e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo a acetato de etilo/acetona 75:25. Produto impuro (240 mg) foi recolhido que foi ainda purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo. Após a repurif icação, o produto (43 mg) foi recolhido contendo impurezas menores. As impurezas foram removidos via trituração de dietil éter para dar o composto do título (30 mg, 8® ) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) 0,89 (d, J = 6,1 Hz, 3H) , 0,92 (d, J = 6,1 Hz, 3H) , 0,96
(s, 3H), 0,97 (s, 3H), 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,50 (d, J = 1,1 Hz, 3H), 1,59-1,83 (m, 3H), 1,85-2,00 (m, 3H), 2,09 (d, J = 1,1 Hz, 2H), 2,15-2,25 (m, 1 H), 2,31-2,44 (m, 1H), 2,78 (td, J = 2,1, 12,7 Hz, 1 H) , 3,40-3,72 (m, 2H) , 4,05- 4,17 (m, 1 H) , 4,34 (dl, J = 13,2 Hz, 1 H) , 5,05 (q, J = 7,1 Hz, 1 Η), 5,35 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 6,19-6,32 (m, 1 H), 6,37 (d, J = 15,8 Hz, 1 H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,21-7,29 (m, 2H) , 7,37 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 540,3 [ΜμΗ], Tr = 2,41 min. EXEMPLO 5: Composto 5
Uma solução de 6-bromo-3-cloro-isoquinolina (8,0 g, 33 mmol) e tributil-(1-etoxivinil)-estanho (14,88 g, 14 ml, 41,2 mmol) em tolueno (100 ml) foi desgaseifiçado com azoto durante 30 min. Dicloreto de Bis(trifenilfosfina)paládio(II) (1,16 g, 1,65 mmol, 5 molã) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a 60°C durante 20 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA, a mistura foi filtrado e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 20:1 a 10:1 para proporcionar o composto do título (7,1 g, 92ã) como um sólido amarelo.
Uma solução de 5a (7,1 g, 3 0 mmol) em 1,4-dioxano (60 ml) e ácido clorídrico a 2 M (30 ml) foi agitada a TA durante 30 min. A maior parte do solvente foi evaporado e o resíduo foi particionado entre acetato de etilo e água. Os extratos orgânicos foram combinados, lavada com água e salmoura, secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi triturado com 5§ de éterem iso-hexanos e o sólido resultante foi recolhido e seco para proporcionar o composto do título (6,0 g, 97ã) como um sólido branco.
Uma solução de 5b (1,72 g, 8,3 mmol) em tetrahidrofurano (40 ml) foi agitado sob azoto. Etóxido de Titânio (IV) (3,8 g, 3,45 ml, 16,6 mmol, grau técnico) foi adicionado seguido de (R)-(μ)-2-metil-propanosulfinimida (1,11 g, 9,2 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 60°C sob azoto durante 18 h. (R)-(μ)-2-metil-propanosulfinimida adicional (190 mg, 1,67 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada a 65°C durante mais 2 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA e acetato de etilo e salmoura foram adicionados. A suspensão foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 7:3 a 3:7 para proporcionar o composto do título (2,2 g, 86ã) como um sólido amarelo.
Uma mistura de (1S,2R)-(-)-cís-1-amino-2 -indanol (60 mg, 0,4 mmol), dicloro (p-ciméno) ruténio(II) dímero(122 mg, 0,2 mmol) e crivos moleculares 4 A' em pó (2 g) foi suspenso em 2-propanol anidro (9 ml) e agitado sob azoto. A suspensão foi aquecida a 90°C durante 20 min. A mistura de reação foi arrefecida até 40°C e uma solução de 5c (1,23 g, 4 mmol) em 2-propanol (28 ml) foi adicionado seguido de uma solução de terc-butóxido de potássio (122 mg, 1,1 mmol) em 2-propanol (10 ml). A mistura de reação foi agitada durante 2 h a 40°C e então deixada a arrefecer. A mistura foi vertida diretamente sobre um cartucho de gel de sílica e eluído com acetato de etilo para dar, após a evaporação, o composto do título (1,19 g, 96® ) como uma goma casfcnha.
Uma mistura de 5d (0,66 g, 2,11 mmol) , tributil(vinil)estanho (1,85 ml, 6,35 mmol) e paládio tetrakis(trifenilfosfina) (488 mg, 0,42 mmol) em 1,4-dioxano (10,5 ml) foi vedada num frasco de micro-ondas. A mistura de reação foi irradiada e agitada a 160°C durante 40 min num reator de micro-ondas. Uma segunda reação foi realizada sob escala e condições idênticas e as misturas de reação combinadas e evaporadas. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de 1:3 a 1:0 de acetato de etilo /iso~hexanos para proporcionar o composto do título (1 g) como uma goma castanha. :LH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,27 (s, 9H) , 1,62 (d, J = 7,7 Hz, 3H) , 3,53 (s 1, 1H) , 4,69-4,77 (m, 1H) , 5,51 (dd, J = 10,7, 1,3 Hz, 1 H), 6,39 (dd, J = 17,4, 1,3 Hz, 1 H) , 6, 95 (dd, J = 17,2, 10,7 Hz, 1 H) , 7,55-7,58 (m, 2H) , 7,75 (S, 1 H) , 7,95 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 9,20 (s, 1 H) . LCMS (m/z) 303,0 [ΜμΗ], Tr = 1,48 min.
5e foi suspenso em ácido clorídrico a 4 M em 1,4-dioxano (17 ml, 68 mmol) e metanol foi adicionado (34 ml) . A mistura de reação foi agitada durante 90 min e então evaporada. 0 resíduo foi passado através de um cartucho SCX eluindo com metanol e então amónia metanolica. A fração básica foi recolhida e evaporada para dar o composto do título (530 mg, 630 ao longo de 2 etapas) como um élido bege.
Uma solução de 1-((IR,5S)-10,10-dimetil-3,3-dioxo-31ambdaÂ6A-tia-4-aza-triciclo[5,2.1,0À1,5À]dec-4-il)-propan-l-ona (6,0 g, 22,1 mmol) em diclorometano anidro (24 ml) foi preparado e trifluorometanossulfonato de terc-butildimetilsililo (5,0 ml, 22,1 mmol) foi adicionado, seguido de trietilamina anidra (3,54 ml, 25,4 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA sob uma atmosfera de azoto durante 15 h. Isto deu uma solução escura que foi evaporada para dar um óleo. 0 óleo foi dissolvido em diclorometano anidro (22 ml) e a solução foi adicionada gota a gota a uma solução de crotonaldeído (3,66 ml, 44,2 mmol) e tetracloreto de titânio (1 M em diclorometano, 44,2 ml, 44,2 mmol) em diclorometano (22 ml) a -78 °C sob uma atmosfera de azoto. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 1 hora, antes de adição de solução de cloreto de amónio (30 ml) . A mistura agitada foi deixada a aquecer a TA antes de separar as camadas. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 25 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar um óleo castanho. 0 óleo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para render o composto do título (6,7 g, 89ã) como um sólido incolor.
Uma soluçS o de 5g (4,15 g, 12,1 mmol) em dicloromfeano anidro (80 ml) foi preparada e 1,8- bis(dimetilamino)naftaleno (7,78 g, 36,3 mmol) foi adicionado seguido de tetrafluoroborato de trimetiloxónio (3,6 g, 24,2 mmol). A mistura de reaçS o foi agitadaa TA durante 3 h. A mistura de reaçS o foi tratada com mfeanol (3 ml) e agitada durante 5 min antes de adicionar ácido clorídrico (2 M, 200 ml) e acetato de etilo (250 ml) . A mistura foi filtrada para remover um sólido insolúvel e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 100 ml) . As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto do título (4,80 g, lOOã) como um sólido castanho pálido.
Uma soluçS o de hidróxido de lítio em água (2 M, 50ml, 100 mmol) foi adicionada a uma soluçlES o agitada de 5h (4,80 g, 12,1 mmol) em tetrahidrofurano (130 ml) . A mistura de reaçE o foi aquecida até 60°C durante 15 h. A mis tua de reaç0 o foi arrefecida até TA, antes de parcialmente evaporar e adicionar ácido clorídrico (2 M, 150 ml). A mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 50 ml) . 0 extrato foi seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado para dar um óleo castanho (3,5 g) . O óleo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/dietil éter 1:1 para dar o composto do título (1,132 g, 59ã) como um óleo incolor.
Uma solução arrefecida (0°C) de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-terc- butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (2,174 g, 4,088 mmol) em diclorometano anidro (50 ml) foi tratado com trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (1,2 ml, 6,814 mmol) . Após lha 0°C, a mistura de reação foi tratada com N, N-diisopropiletilamina (2,4 ml, 13,628 mmol) e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar a amina correspondente como uma espuma amarela. A esta amina foi adicionado 5i (539,0 mg, 3,407 mmol), N,N-diisopropiletilamina (2,4 ml, 13,628 mmol) e acetonitrilo (50 ml) . A mistura de reação foi arrefecida até 0°C e tratada com hexafluorofosfato metanamínio de 2- (1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,814 g, 4,770 mmol) . Após agitação durante a noite a TA a reação foi extinta com ácido clorídrico a 1 M (100 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2x). Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:4 para proporcionar o composto do título (2,193 g, 93ã) como um sólido amarelo claro.
Uma solução de 5 j (763,4 mg, 1,335 mmol) em tetrahidrofurano (25 ml) foi subsequentemente tratada com zinco em pó (1,920 g, 29,365 mmol) e uma solução de acetato de amónio (1,543 g, 20,025 mmol) em água (5 ml). Após agitação durante a noite a reação foi filtrada através de Celite e extinta com ácido clorídrico a 2 Μ. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2x). Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. Ácido acético residual foi separado por azeotropia com tolueno para proporcionar o composto do título (566,4 mg, 96ã) como um sólido laranja claro.
Uma solução de 5k (246 mg, 0,6 mmol), (R)-1-(3- dicloridrato de vinil-isoquinolin-6-il)-etilamina (162 mg, 0,6 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (387 mg, 0,52 ml, 3 mmol) em acetonitrilo (20 ml) foi agitado a TA sob azoto. Hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (320 mg, 0,84 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 4 h. 0 solvente foi evaporado. 0 resíduo foi diluído com acetato de etilo e solução saturada de hidrogénio carbonato de sódio. Uma pequena quantidade de metanol (5 ml) foi adicionada à suspensão para dar duas camadas transparentes. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, seca sobre anidro sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando metanol/diclorometano 1:20. 0 resíduo foi triturado com éter e o sólido resultante foi recolhido, lavado com éter e seco para proporcionar o composto do título (238 mg, 64%) como um sólido castanho pálido.
Uma solução de 51 (91 mg, 0,15 mmol) em tolueno (45 ml) foi agitada a TA sob azoto. Catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (10 mg, 0,015 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a refluxo sob azoto durante 2 h. Catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs adicional (10 mg, 0,015 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a refluxo sob azoto durante 6 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA, gel de sílica foi adicionado e a mistura de reação foi evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo/acetona de 20:1 a 5:2. 0 resíduo foi triturado com éter e o sólido resultante foi recolhido, lavada com éter/íso-hexanos (1:1) e seco para proporcionar o composto do título (23 mg, 26ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,04 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,44 (d, J = 7,4
Hz, 3H) , 1,53 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,61 (d, J = 6, 9 Hz, 3H) , 1,68-2,20 (m, 5H) , 2,62-2,74 (m, 2H) , 3,35-3,43 (m, 1H), 3,44 (s, 3H), 3,72 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 3,88-3,92 (m, 2H) , 4,23 (dd, J = 8,9, 6,0 Hz, 1 H) , 4,55-4,60 (m, 1 H) , 5,30-5,37 (m, 1 H) , 5,80-5,90 (m, 1 H) , 6,38 (d, J = 8,9
Hz, 1 H) , 6,43 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 6, 93 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 7,24 (dd, J = 16,3, 8,7 Hz, 1 H) , 7,45 (d, J = 8,7
Hz, 1 H) , 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,69 (s, 1 H) , 7,93 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 9,17 (s, 1 H). LCMS (m/z) 579,3 [ΜμΗ], Tr = 1,40 min. EXEMPLO 6: Composto 6
Uma soluçUS o de Composto 5 (11 mg, 0,019 mmol) em acetato de etilo (10 ml) contendo 10ã de paládio em carbono (10 mg) foi hidrogenada a TA e pressE o durante 3 h. A mistura de reaçlEI o foi filtrada através de filtro asiliar e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo/acetona de 10:1 a 2:1. O resíduo foi triturado com acetato de etilo/éter (1:5) para proporcionar o composto do título (2,0 mg, 18ã) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,93 (d, J = 6,1 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,39 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,55-2,70 (m, 8H) , 1,95-2,50 (m, 5H) , 2,64-2,73 (m, 2H) , 2,95-3,08 (m, 2H), 3,35-3,42 (m, 2H), 3,53 (s, 3H), 3,61 (d, J = 12,1 Hz, 1 H), 4,06-4,11 (m, 1 H), 4,50-4,57 (m, 1 H), 5,25-5,32 (m, 1 H) , 5,64-5,70 (m, 1 H) , 6,39 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6,47-6,51 (m, 1H), 7,21-7,28 (m, 1H), 7,41 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,62 (s, 1 H) , 7,69 (s, 1 H) , 7,92 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 9,15 (s, 1 H). LCMS (m/z) 581,3 [ΜμΗ], Tr = 1,38 min. EXEMPLO 7: Composto 7
Uma mistura de 7-bromo-2-cloro-quinoxalina (1,46 g, 6,00 mmol) e tributil(1-etoxivinil)estanho (2,71 g, 2,54 ml, 7,50 mmol) em tolueno (21 ml) foi desgasei f içado durante 20 min. Dicloreto de
Bis(trifenilfosfina)paládio (II) (427 mg, 0,60 mmol) foi adicionado e a mistura de reação agitada sob azoto e aquecida a 80 °C durante 19 h antes de deixar a arrefecer. Os voláteis foram evaporados e o resíduo suspenso em 1,4-dioxano (15 ml) , ácido clorídrico a 2 M aquoso (15 ml) foi adicionado e a mistura de reação agitada durante 45 min e então evaporada para remover os voláteis. 0 resíduo foi diluído com água e extraída com acetato de etilo (2 x) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. O produto foi purificado por meio de cromatografia utilizando gel de sílica dopado com 10% p/p de carbonato de potássio eluindo utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 9:1 para proporcionar o composto do título (836 mg, 56 %) como um sólido amarelo.
Dímero de Dicloro (p-ciméno) ruténio(II) (12 mg, 0,019 mmol) e (IR,2R)-(-)-N-p-tosil-l,2-difeniletilenodiamina (17 mg, 0,045 mmol) foram suspensos em água desgaseificada (7,5 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A mistura laranja turva resultante foi deixada a arrefecer até TA. Sólido 7a (948 mg, 3,78 mmol) seguido de tetrahidrofurano desgaseifiçado (7,5 ml) e formato de sódio (1,29 g, 18,9 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 3 h e deixada a arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e a mistura lavada com água (2 x) . As lavagens aquosas foram retro-extraídas com acetato de etilo e os orgânicos combinados lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para proporcionar o composto do título (814 mg, 85%) como um sólido púrpura.
A uma mistura de 7b (490 mg, 1,94 mmol), N, N-diciclohexilmet^^am^na (416 mg, 457 μΐ, 2,13 mmol) e 3-butenoato de terc-butilo (648 mg, 739 μΐ, 4,56 mmol) em tolueno (19 ml) foi adicionado bis(tri-terc-butilfosfina)paládio(0) (41 mg, 0,080 mmol) sob azoto e a mistura de reação agitada e aquecida sob refluxo durante 5 h então deixada a arrefecer. A mistura foi evaporada e então purificada por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 3:2 para proporcionar o composto do título (3 67 mg, 60 ã) como um óleo amarelo.
Uma solução de 1 e (804 mg, 1,51 mmol) em tetrahidrofurano (37,7 ml) foi preparada e zinco em pó (2,18 g, 33,3 mmol) foi adicionado seguido de uma solução de acetato de amónio (1,75 g, 22,7 mmol) em água (9,4 ml). A mistura de reação foi agitada a TA durante 72 h. A reação foi filtrada através de lavagem de hyflo-supercel através de com acetato de etilo e hidrogénio sulfato de potássio aquoso saturado. A mistura foi tratada com ácido clorídrico a 1 M (3 ml) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 100 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, filtradas e evaporadas para dar uma goma incolor. 0 resíduo foi azeotropizado com tolueno (3 x 200 ml) para dar o composto do título (605 mg, rendimento quantitativo) como um sólido branco.
A uma solução agitada de 7d (456 mg, 1,14 mmol) e éster terc-butílico do ácido (E)-4-[3-((R)-1-hidroxi-etil)-quinoxalin-6-il]-but-3-enoico (358 mg, 1,14 mmol) em diclorometano (22 ml) foi adicionado 1-hidroxibenzotriazol contendo aproximadamente 20ã de água (270 mg, 1,60 mmol) seguido de 4-dimetilaminopiridina (139 mg, 1,14 mmol) e cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-Ν'-etilcarbodiimida (306 mg, 1,60 mmol) . A reação foi agitada durante 18 h e então diluída com diclorometano, lavada com solução saturada de cloreto de amónio (2x), seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 3:1 a 0:1 para proporcionar o composto do título (335 mg, 45 ã) como uma espuma branca.
A uma solução agitada de 7e (309 mg, 0,444 mmol) em diclorometano (4,5 ml) a 0°C sob azoto foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (346 mg, 359 μΐ, 1,56 mmol) e a mistura de reação foi deixada a aquecer a TA ao longo de 2,5 h. Ν,Ν-diisopropiletilamina (164 mg, 221 μΐ, 1,27 mmol) foi adicionado e a mistura de reação agitada durante mais 10 min, evaporada e então suspensa em acetonitrilo (45 ml). A mistura agitada foi arrefecida até 0°C e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilo urónio (236 mg, 0,622 mmol) e N, N-diisopropi let i lamina (229 mg, 309 μΐ, 1,77 mmol) foram adicionados. Após 90 min a reação foi extinta com uma solução saturada de cloreto de amónio e a mistura evaporada para remover voláteis orgânicos. 0 resíduo foi diluído com diclorometano e a camada orgânica separada e lavada com bicarbonato de sódio saturado (2x) e salmoura então seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com um gradiente de acetato de etilo/acetona de 1:0 a 9:1. 0 resíduo foi ainda purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa utilizando acetonitrilo/água 3:7 para proporcionar o composto do título (7,6 mg, 3% ao longo de 2 etapas) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD30D) δ 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,62 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1. 66-1,75 (m, 2H) , 1,77 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,91- 2,05 (m, 3H), 2. 72-2,82 (m, 1H), 2,98-3,08 (m, 1H), 3,38- 3,41 (m, 1 H) , 3,78-3,84 (m, 1 H) , 4,25 (d, J = 10,5 Hz, 1H) , 4,41 (dl, J = 11,3 Hz, 1 H) , 5,68 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 6,09 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,47 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 6,55-6,63 (m, 1 H), 7,68 (s, 1 H), 7,99 (s, 2H), 8,84 (s, 1 H). LCMS (m/z) 523,2 [M+H], Tr = 1,75 min. EXEMPLOS 8 E 9: Compostos 8 e 9
Dímero de dicloro (p-ciméno) ruténio(II) (3 mg, 0,005 mmol) e (1R, 2R) -(-) -iV-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (4,4 mg, 0,012 mmol) foram suspensos em água desgaseificada (2 ml) e a mistura foi desgaseificada com azoto durante 15 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A solução amarela resultante foi arrefecida até TA. 1-(3-Cloro-isoquinolin-6-il)-etanona (206 mg, 1 mmol), formato de sódio (340 mg, 5 mmol) e tetrahidrofurano desgaseifiçado (1 ml) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseificada com azoto durante 5 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 2,5 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA e foi extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 2:1 para proporcionar o composto do título (193 mg, 92%) como um sólido branco.
1,4 -Dioxano (5 ml) foi desgaseif içado com azoto, 8a (208 mg, 1 mmol), tributil(vinil)estanho (951 mg, 0,9 ml, 3 mmol) e dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (70 mg, 0,1 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida a 150°C num reator de micro-ondas durante 1 h.
Tributil(vinil)estanho adicional (0,3 ml, 1 mmol) e dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (70 mg, 0,1 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi aquecida a 150°C num reator de micro-ondas durante 1 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA e a mistura foi filtrada através de filtro auxiliar e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. 0 filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 2:1 seguido de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 3:1 para proporcionar o composto do título (100 mg, 50ã) como um sólido branco.
Uma solução de 1 e (10,6 g, 20 mmol) em diclorometano (300 ml) foi agitada a 0°C sob azoto. Tri fluorometanos sulfonato de trimetilsililo (6,66 g, 5,4 ml, 30 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1 h. Solução fria saturada de hidrogénio carbonato de sódio (200 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 15 min. A camada orgânica foi separada, lavada com solução saturada de hidrogénio carbonato de sódio e salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-( (S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (20 mmol), que foi utilizado bruto na seguinte etapa. Uma solução de éster 2,2,2 -tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (20 mmol) em acetonitrilo (240 ml) foi agitada a 0°C sob azoto. Ácido (E)-Pent-3-enoico (2,20 g, 2,2 ml, 22 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol hidrato (3,82 g, 20 mmol, humedecido com não menos de 20 0 em peso de água) e cloridratode N-(3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (5,38 g, 28 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 15 min e então a TA durante 20 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi particionado entre acetato de etilo e água. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com água e salmoura, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 3:1 a acetato de etilo puro para proporcionar o composto do título (9,0 g, 88ã) como um sólido branco.
Uma soluçlH o de 8c (9,0 g, 17,5 mmol) em tetrahidrofurano (300 ml) foi agitada a TA sob azoto. Zinco em pó (25,0 g, 385 mmol) foi adicionado seguido de uma soluçUl o de acetato de amónio (20,2 g, 263 mmol) em água (2 00 ml) . A mistura de reaçS o foi agitada a TA sob azoto durante 18 h. A mistura de reaçS o foi filtrada atraés de Celite e a almofada de filtro foi lavada com água (100 ml) e acetato de etilo (200 ml). A camada orgânica foi separada e o solvente foi evaporado a ca. 100 ml e a soluçB o foi extraída com água (100 ml). As camadas aquosas foram combinadas, soluçíH o saturada de cloreto de amónio Í50 ml) foi adicionado e a soluç® o foi acidificada a pH 1 om ácido clorídrico a 2 M aquoso. A soluçB o foi extraída comacetato de etilo e os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi co-evaporado com tolueno (3 x) para proporcionar ácido (S)-1-{(S)-2-[(S)-3-metil-2-((E)-pent-3-enoilamino)-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (5,7 g, 85ã) como um sólido branco que foi utilizado na seguinte reaçH o. Uma solução de ácido (S)-l-{(S)-2-[(S)-3-metil-2-((E)-pent-3-enoilamino)-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina- 3-carboxílico (5,16 g, 13,5 mmol) em diclorometano (280 ml) e tetrahidrofurano (20 ml) foi agitado a TA sob azoto. (R)- 1-(3-Vinil-isoquinolin-6-il)-etanol (2,69 g, 13,5 mmol) foi adicionado seguido de cloridrato de N- {3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (3,63 g, 18,9 mmol) e 4-(dimetilamino)piridina (1,64 g, 13,5 mmol) e a mistura de reação foi agitada a TA durante 6 h. Diclorometano (200 ml) foi adicionado e a solução foi lavada com solução aquosa de ácido cítrico (pH 2-3) . A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo 3:1 a acetato de etilo puro seguido de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 1:8 para proporcionar o composto do título (3,91 g, 51ã) como um sólido branco.
Uma soluçE o de 8d (1,13 g, 2 mmol) em tolueno (600ml) foi agitada a TA sob azoto durante 15 min. catalisador de 2a geraçH o de Hoveyda-Grubbs (125 mg, 0,2 mmol) foi adicionado e a mistura de reaçS o foi aquecida a refuxo sob azoto durante 30 min. Adicional catalisador de 2a geraçES o de Hoveyda-Grubbs (12 5 mg, 0,2 mmol) foi adicionado e a mistura de reaçS o foi aquecida a refluxo durante 30min. A mistura de reaçS o foi arrefecida até TA. A maior pate de o solvente foi evaporado, gel de sílica foi adicionado e o solvente foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo/acetona de 9:1 a 3:2 seguido de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo/metanol 40:1. 0 resíduo foi triturado com acetato de etilo/éter (1:4) e o sólido resultante foi recolhido, lavado com acetato de etilo/éter (1:4) e seco para proporcionar uma mistura -10:1 de Composto 9 e Composto 8, como um sólido castanho pálido (245 mg) . Uma amostra da mistura foi purificada por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar o Composto 8 (4 mg) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 1,01 (d, J = 6,5
Hz, 3H) , 1,02 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,37 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,65 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,70-2,15 (m, 5H), 2,95-3,05 (m, 1H) , 3,70-3,76 (m, 1H) , 4,03-4,10 (m, 2H) , 4,12 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5,64 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 6,10-6,20 (m, 2H), 6,98 (d, J = 11,3 Hz, 1 H) , 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,93 (s, 1 H) , 8,05-8,10 (m, 2H) , 9,21 (s, 1 H) . LCMS (m/z) 522.3 [ΜμΗ], Tr = 1,25 min.
Composto 9, XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,97 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,53 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,71 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,75-2,70 (m, 6H), 3,20-3,40 (m, 2H), 3,63-3,77 (m, 2H), 4,23-4,29 (m, 1 H), 4,53-5,57 (m, 1 H) , 5,65-5,76 (m, 1 H) , 6,04 (q, J = 6,7 Hz, 1H) , 6,38-6,53 (m, 3H), 6,72 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 7,39 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,72 (s, 1 H), 7,92 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 9,13 (s, 1 H). LCMS (m/z) 522,0 [ΜμΗ], Tr = 1,40 min. EXEMPLO 10: Composto 10
10a foi preparado da mesma maneira que 4d utilizando ácido 3-butenoico em vez de ácido 4,4-dimetil-hept-6-enoico em 66ã de rendimento.
10b foi preparado da mesma maneira que 4e utilizando éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-( (S)-2-but-3-enoilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-l-{(S)-2-[(S)-2-(4,4-dimetil-hept-6-enoiloxi)-3-metil-butirilamino3-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em 84ã de rendimento.
10c foi preparado da mesma maneira que 8d utilizando ácido (S)-1-f(S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metil- butirilamino) -propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em vez de ácido (S) -l-{(S)-2-[(S)-3-metil-2-((E)-pent-3-enoilamino)butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3- carboxílico em 84ã de rendimento.
0 composto 9 foi preparado mesma maneira que
Composto 5 utilizando éster (R)-1'(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etílico do ácido (S)-i-[(S)-2-í(S)-2-but-3-enoilamino- 3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em vez de (S)-l-{(S)-2-t(S)-2-((E)-(2R,3R)-3-metoxi-2-metil-hex-4-enoilamino) -3-meti1-butirilamino] propionil}-hexahidro-piridazina-3-cafboxílico ácido [(R)-1- (3-vinil-isoquinolin-6-il)-etil]-amida em 9ã de rendimento.
Uma soluçã o de Composto 9 (16 mg, 0,03 mmol) em acetato de etilo (5 ml) e tetrahidrofurano (2 ml) contendo lOã de paládio em carbono (15 mg) foi hidrogenada a TA e pressã o durante 3 h. A mistura de reaçã o foi filtda através de filtro auxiliar e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. 0 filtrado foi evaporado e o resíduo foi triturado com éter (2x2 ml) e o sólido resultante foi seco para proporcionar o composto do título (7,6 mg, 48ã) como um sólido branco pérola. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,95 (d, J - 6,5
Hz, 3H) , 1,50 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,68 (d, J - 6,5 Hz, 3H), 1,60-2,40 (m, 9H), 2,70-3,10 (m, 3H), 3,68-3,75 (m, 1 H) , 3,90 (d, J = 11,8 Hz, 1 H) , 4,32-4,37 (m, 1 H) , 4,44- 4,49 (m, 1 H), 5,83-5,92 (m, 1 H), 6,05-6,11 (m, 2H), 6,33 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,34 (s, 1 H), 7,36 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 7,80 (s, 1 H) , 7,93 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 9,17 (s, 1 H). LCMS (m/z) 524,3 [ΜμΗ], Tr = 0,59 min. EXEMPLOS 11 E 12: Compostos 11 e 12
A uma solução agitada de le (10,6 g, 20,0 mmol) em diclorometano (400 ml) , a 0°C sob azoto, foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (6,67 g, 5,43 ml, 30,0 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 2 h. W,AT-Diisopropiletilamina (10,3 g, 13,9 ml, 80.0 mmol) foi adicionado e a mistura deixada a aquecer a temperatura ambiente. Os voláteis foram evaporados e o resíduo suspenso em acetonitrilo (250 ml). A mistura agitada foi arrefecida até 0°C sob uma manta de azoto e então N,N-diisopropiletilamina (10,3 g, 13,9 ml, 80 mmol) e ácido 3-butenoico (1,89 g, 1,86 ml, 4,40 mmol) adicionados, seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametilo urónio (10,6 g, 28.0 mmol), porçãowise. A mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e agitada durante 18 h antes de evaporar. O resíduo foi diluído com acetato de etilo e então lavado sucessivamente com solução saturada de bicarbonato de sódio, água, ácido clorídrico a 2 M, água então salmoura, seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:1 a 0:1 para proporcionar uma -1:1 mistura de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico e éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-but-2-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico como uma espuma laranja (7,23 g, 72ã). A uma solução agitada de uma mistura de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-but-3- enoilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3 -carboxílico e éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-{ (S)-2- [ (S)-2-((E)-but-2-enoilamino)-3- metilbutirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (-1:1, 0,99 g, 2,00 mmol) em tetrahidrofurano (40 ml) foi adicionado zinco em pó (2,86 g, 44,0 mmol) e uma solução de acetato de amónio (2,31 g, 30,0 mmol) em água (25 ml) . A mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e agitado durante 18 h, então diluída com acetato de etilo e a mistura filtrado. A partir do filtrado a camada aquosa foi separada e diluída com uma quantidade igual de solução saturada de cloreto de amónio e então acidificada a pH 1 com ácido clorídrico a 2 M. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) e as camadas orgânicas combinadas lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. 0 resíduo foi azeotropizado com tolueno (3 x) para dar uma mistura dos compostos do título (~1:1, 466 mg, 630 ) como uma espuma amarela.
Uma mistura de 11 a e 12b (~1:1, 250 mg, 0,68 mmol) em acetonitrilo (20 ml) foi agitada a TA sob azoto. Dicloridrato de (R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etilamina (136 mg, 0,5 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (323 mg, 0,44 ml, 2,5 mmol) foi adicionado seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (266 mg, 0,7 mmol) e a mistura de reaçã o foi agitada a TA durante 18 h. O solvente foi evaporado. 0 resíduo foi diluído com acetato de etilo e a solução foi lavada com solução saturada de hidrogénio carbonato de sódio, água e salmoura. O extrato orgânico foi seco sobre sulfato de magnésio anidro, filtrado e evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo para metanol/acetato de etilo 1:5 para proporcionar uma mistura -1:1 de [(R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etil]-amida do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metil- butirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxí1ico e [(R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etil]-amida do ácido (S)-1-{(S)-2 - [ (S)-2-((E)-but-2-enoilamino)-3-metilbutirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3 -carboxílico como um sólido branco (153 mg, 56%) que foi utilizado na seguinte etapa sem purificação adicional.
Uma solução de uma mistura de[(R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etil]-amida do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico e [(R)-1-(3-vinil- isoquinolin-6-il)-etil]-amida do ácido (S)-1-{ (S)-2- [ (S)-2-((E)-but-2-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}- hexahidropiridazina-3-carboxí1ico (—1:1, 150 mg, 0,27 mmol) em tolueno (70 ml) foi agitada a TA sob azoto, catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (17 mg, 0,027 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a refluxo sob azoto durante 90 min. Catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs adicional (17 mg, 0,027 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a refluxo sob azoto durante 90 min. A mistura de reação foi arrefecida até TA, gel de sílica foi adicionado e o solvente foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo to acetato de etilo/acetona 1:1. 0 resíduo foi ainda purificado por meio de cromatografia preparativa de camada fina de metanol/acetato de etilo 1:4 seguido de cromatografia em gel de sílica utilizando diclorometano/metanol 20:1 para dar os compostos do título. 0 composto 11 (1,3 mg, lã) como um sólido branco: ΧΗ RMN (300 MHz, CD30D) δ 1,01 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,02 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,61 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,66 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,80-2,05 (m, 5H), 2,71-2,82 (m, 1 H), 2,99-3,05 (m, 1 H), 3,32-3,43 (m, 1 H), 3,64-3,75 (m, 1 H) , 4,27 (d, J = 10,1 Hz, 1 H) , 4,40-4,53 (m, 2H) , 5,12 (q, J = 7,1 Hz, 1H) , 5,62 (q, J = 7,1 Hz, 1H) , 6,47- 6,56 (m, 1H), 6,62 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,61 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz 1H) , 7,74 (s, 1H) , 8,05 (d, J = 8,5
Hz, 1H) , 9,13 (s, 1H) . LCMS (m/z) 521,3 [ΜμΗ] , Tr = 0,97 min.
Composto 12 (1,7 mg, 1,2ã) como um sólido branco: 1H
RMN (300 MHz, CD30D) δ 0, 98 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,03 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,47 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,60 (d, J = 6,9
Hz, 3H) , 1,65-2,16 (m, 5H) , 2,81-2,89 (m, 1H) , 3,61-3,69 im, 1H), 4,04 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,30-4,36 (m, 1H), 4,75 (d, J = 11,6 Hz, 1 H) , 5,23 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,90 (q, J = 6,9 Hz, 1H) , 6,36 (d, J = 13,1 Hz, 1H) , 6,92 (d, J = 13,1 Hz, 1 H) , 7,65 (d, J = 8,5 Hz 1 H) , 7,88 (s, 1 H) ,
8,05 (d, J = 8,5 Hz 1 H), 8,46 (s, 1H), 9,16 (s, 1 H). LCMS (m/z) 507,2 [ΜμΗ], Tr = 0,95 min. EXEMPLO 13: Composto 13
Uma suspensão de cloridrato de (S)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-2,2,2-trifluoro-etilamina (Asiba Pharmatech, Edison, NJ, USA, 397 mg, 1,16 mmol) em diclorometano (10 ml) foi arrefecida utilizando um banho de gelo.
Trietilamina (985 μΐ, 3,48 mmol) foi adicionada e a reação foi agitada até que uma solução homogénea foi observada. Dicarbonato de di-terc-butilo (380 mg, 1,74 mmol) em diclorometano (5 ml) foi então adicionado e a reação foi deixada a agitar durante a noite. Dicarbonato de di-terc-butilo (127 mg, 0,58 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada durante mais 6 h. Dicarbonato de di-terc-butilo (253 mg, 1,16 mmol) foi adicionado juntamente com crivos moleculares de 4 Á e a reação foi deixada a agitar durante a noite. A reação foi lavada com água e salmoura e os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado desde 1:0 até 7:3 de iso-hexanos/acetato de etilo para proporcionar o composto do título (343 mg, 73%) como um sólido laranja.
A um balão de 3 tubuladuras, equipado com uma barra de agitação e termómetro, sob uma atmosfera de azoto e contendo lascas de magnésio (3,02 g, 0,124 mol) foi adicionado tetrahidrofurano anidro (105 ml) . Um cristal único de iodo foi adicionado à reação seguido de l-cloro-3-metil-but-2-eno (2 ml, 17,75 mmol). A reação foi agitada durante 20 min até toda a cor ter deixado a solução. Ιοί oro-3 -met il-but-2 -eno (5,57 ml, 49,45 mmol) foi adicionado. Um aumento gradual de temperatura foi observado até que a reação tinha alcançado refluxo. A reação foi deixada a agitar durante 1 hora, deixando a reação retornar até TA. A reação foi então transferida via cânula a um balão contendo diõxido de carbono sólido (50 g) . A reação foi então agitada durante 2 h. Um banho de gelo de arrefecimento foi adicionado e a reação foi extinta com ácido clorídrico a 2 Μ. A mistura de reação foi então extraída com dietil éter. Os orgânicos foram então secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado desde 1:0 até 9:1 de íso-hexanos/acetato de etilo para proporcionar o composto do título (2,69 g, 350 ) como um pálido óle amarelo. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,35 (s, 6H), 5,10-5,21 (m, 2H), 6,07 (dd, J = 17,6,10,5 Hz, 1H).
13a (343 mg, 0,846 mmol) e 13b (106 mg, 0,931 mmol) foram colocados num vaso de micro-ondas e dissolvidos em acetonitrilo (3 ml). Acetato de paládio(II) (19 mg, 0,0846 mmol), tri(o-tolil)fosfina (51 mg, 0,169 mmol) e trietilamina (236 μΐ, 1,69 mmol) foram adicionados e o vaso foi vedado antes de ser irradiados nas micro-ondas durante 30 min, utilizando tempo de retençã o fixo, em altaabsorçã o a 100°C. 0 solvente foi removido e o resíduo foi absorvido numa mistura de água e acetato de etilo. As fases foram separadas e a aquosa foi extraída com acetato de etilo. Os orgânicos combinados foram então secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo desde 1:0 até 6:4. 0 material isolado foi submetido a uma segunda purificação utilizando as mesmas condições para proporcionar o composto do título (142 mg, 380 ) com um óleo amarelo pálido.
Éster etílico do ácido(S)-l-[(S)-2-((S)-2-Amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (210 mg, 0,486 mmol) e 13c (142 mg, 0,324 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimet i 1 formamida (5 ml) , sob uma atmosfera de azoto, e arrefecidos utilizando um banho de gelo. Hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7- azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (203 mg, 0,535 mmol) e N, .W-diisopropiletilamina (423 μΐ, 2,43 mmol) foram então adicionados e a reação foi deixada a aquecer lentamente até TA e deixada a agitar durante a noite. A reação foi diluída com água e extraída com acetato de etilo. Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo desde 1:0 até 0:1 para proporcionar o produto contaminado com solvente residual. Tolueno foi adicionado e a solução foi concentrada para proporcionar o composto do título (79 mg, 290 ) como um sólido laranja.
13d (79 mg, 0,0925 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (2 ml) e arrefecida utilizando um banho de gelo. Metanol (1 ml) e água (1 ml) foram então adicionados seguido de hidróxido de lítio monohidrato (15 mg, 0,37 mmol) . A reaçES o foi entS o deixada a agitar duranté hora. Ácido clorídrico a 1 M foi adicionado até a soluçS oera de pH 2. 0 solvente foi removido e o sólido resultante foi sequencialmente azeotropizado com metanol, então acetonitrilo e finalmente tolueno para proporcionar o composto do título (67 mg, lOOã) como um sólido amarelo.
13e (66 mg, 0,0916 mmol) foi dissolvido em ácido clorídrico a 4 M em 1,4-dioxano (2 ml) e deixado a agitar durante 30 min. O solvente foi removido e o sólido resultante foi triturado com dietil éter e seco para proporcionar o composto do título (50 mg, 83ã) como um sólido amarelo pálido.
13f (50 mg, 0,0761 mmol) foi dissolvido em diclorometano (76 ml), sob uma atmosfera de azoto e arrefecida utilizando um banho de gelo. Hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (58 mg, 0,152 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (53 μΐ, 0,304 mmol) foram então adicionados e a reação foi deixada a aquecer lentamente até TA e deixada a agitar durante a noite. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando 7:3 íso-hexanos/acetona. O resíduo foi repurifiçado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetona desde 1:0 até 1:1. 0 resíduo foi então eluído através de um sistema HPLC equipado com uma coluna Fenomenex Gemini 10μ 110A, 250 x 21,2 mm utilizando um gradiente contínuo de acetonitrilo/água desde 1:4 até 1:0 fluxo a 20 ml/min para proporcionar o composto do título (7 mg, 15%) como um sólido. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 086-1,08 (m, 6H) , 1,25- 1,54 (m, 8H), 1,57-1,81 (m, 5H), 1,88-2,00 (m, 1 H), 2,37- 2,80 (m, 1 H) , 3,32-3,65 (m, 1 H) , 3,69-3,97 (m, 1 H) , 4.22- 4,39 (m, 1 H), 4,50-4,68 (m, 1 H), 5,74-6,05 (m, 2H), 6.22- 6,39 (m, 1 H), 6,44-6,54 (m, 1 H), 6,63-6,76 (m, 1 H), 7,45 (app t, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,56 (app t, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,81 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 8,19 (s, 1 H), 8,76-9,09 (m, 1 H). LCMS (m/z) 603,1 [ΜμΗ], Tr =2,59 min. EXEMPLO 14: Composto 14
dímero de dicloro (p-ciméno) ruténio(II) {24 mg, 0,040 mmol) e (IR,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (35 mg, 0,096 mmol) foram suspensos em água desgaseifiçada (16 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A mistura laranja turva resultante foi deixada a arrefecer até TA. Sólido 1-(6-bromo-quinolin-3-il)-etanona (preparado como no documento WO2011/063233, 1,92 g, 7,68 mmol) seguido de tetrahidrofurano desgaseifiçado (16 ml) e formato de sódio (2,72 g, 40 mmol) foram adicionados e a mistura de reaç0 o foi desgaseif içada com azoto durante 5 min, mais tetrahidrofurano desgaseifiçado (5 ml) foi adicionado e a mistura dou desgaseifiçada durante outro minuto. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 21 h e deixada a arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e a mistura lavada com água então salmoura, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 7:3 a 0:1 para proporcionar o composto do título (1,65 g, 85ã) como um sólido castanho.
A uma mistura de 14a (356 mg, 1,41 mmol), N,N-diciclohexilmetilamina (275 mg, 301 pl, 1,41 mmol) e 3-butenoato de terc-butilo (470 mg, 537 μΐ, 3,31 mmol) em tolueno (14 ml) foi adicionado bis(tri-terc-butilfosfina)paládio(0) (30 mg, 0,058 mmol) sob azoto e a mistura de reação agitada e aquecida sob refluxo durante 90 min então deixada a arrefecer. A mistura foi evaporada e então purificada por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 2:3 para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo (144 mg, 33 %).
A uma solução agitada de ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (189 mg, 0,473 mmol) e 14b (148 mg, 0,473 mmol) em diclorometano (10 ml) foi adicionado 1-hidroxibenzotriazol contendo aproximadamente 2 0% de água (89 mg, 0,662 mmol) seguido de 4- dimetilaminopiridina (58 mg, 0,473 mmol) então cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-N' -etilcarbodiimida (127 mg, 0,662 mmol) . A reação foi agitada durante 62 h e então diluída com diclorometano, lavada com solução saturada de cloreto de amónio (2 x) e salmoura, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. Purificada por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 3:1 a 2:3 proporcionou o composto do título (126 mg, 38 %) como uma espuma branca.
A uma solução agitada de 14c (126 mg, 0,181 mmol) em diclorometano (1,8 ml) a 0°C sob azoto foi adicionado tri fluorometanos sulfonato de trimetilsililo (141 mg, 147 μΐ, 0,635 mmol) e a mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente ao longo de 1,75 h. Mais tri fluorometanos sulfonato de trimetilsililo (20 mg, 21 μΐ, 0,091 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante mais 15 min antes da adição de N,N-diisopropile ti lamina (164 221 μΐ, 1,27 mmol). Após mais 10 min de agitação a mistura de reação foi evaporada e então suspensa em acetonitrilo (18,1 ml) . A mistura agitada foi arrefecida até 0°C e então hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (96 mg, 0,253 mmol) e N, N-diisopropiletilamina (94 mg, 126 μΐ, 0,724 mmol) foram adicionados. Após 45 min a reação foi extinta com solução saturada de cloreto de amónio (10 ml) e a mistura evaporada para remover voláteis orgânicos. 0 resíduo foi diluído com diclorometano e a camada aquosa foi separada e extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos foram lavados com bicarbonato de sódio saturado, água e então salmoura, secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com acetato de etilo/acetona 9:1 então por meio de HPLC preparativa de fase reversa utilizando um gradiente de acetonitrilo/água de 3:7 a 1:1 para proporcionar o composto do título (6,5 mg, 7% ao longo de 2 etapas) como um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, CD30D) δ 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,03 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,61 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1-75 <d' J = 6-7 Hz-3H), 1,91-2,01 (m, 3H), 2,68-2,79 (m, 1 H)# 3-00 (dd' J = 14,5, 3,6 Hz, 1 H), 3,35-3,42 (m, 1 H), 3,73-3,82 (m, 1 H), 4,29 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,41 (d, j = 12,9 Hz, 1 H), 4,70 (d, J = 12,3 Hz, 1 H), 5,47 (q, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,15 (q, J = 6,6 Hz, 1H) , 6,30-6,40 (m, 1H) , 6,63 <d' J = 16- 1 Hz' 1H), 7,55 (s, 1H), 7,82 (dd, J = 8,7, 1,5 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 8,79 (d, J = 1,8 Hz, 1H). LCMS (m/z) 522,2 [ΜμΗ], Tr = 1,60 min. EXEMPLO 15: Composto 15
A uma mistura agitada de ácido 3-bromo-quinolina-6-carboxílico (preparado como no documento WO2011/090935, I, 94 g, 7,70 mmol) em t et rahidrof urano (77 ml) foi adicionado 2-cloro-4,6-dimetoxi-1,3,5-triazina (2,03 g, II, 5 mmol) e iY-metilmorf olina (2,34 g, 2,54 ml, 23,1 mmol) . A mistura de reação foi agitada durante 90 min e então cloridrato de N, O-dimetilhidroxilamina (751 mg, 7,70 mmol) adicionado em uma porção. A mistura de reação foi agitada durante mais 17 h e mais cloridrato de N, 0- dimetilhidroxilamina (375 mg, 3,85 mmol) foi adicionado e então após 5 h mais uma porção (175 mg, 1,80 mmol) . A mistura de reação foi agitada durante mais hora e então diluída com diclorometano, lavada com água e então solução saturada de cloreto de amónio. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica eluindo com um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 7:3 para proporcionar o composto do título (1,43 g, 66%) como um sólido branco pérola.
A uma solução agitada de cloreto de metil magnésio (3 M em tetrahidrofurano, 4,85 ml, 14,5 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) sob azoto foi adicionado uma solução de 15a (1,43 g, 4,85 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml). A mistura de reação foi agitada durante 1 hora e então extinta com solução saturada de cloreto de amónio. A mistura foi diluída com dietil éter e água, a camada orgânica foi separada e lavada com mais água e as lavagens combinadas aquosas retro-extraídas com dietil éter. Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para proporcionar o composto do título como um sólido branco que foi levado diretamente na seguinte etapa.
Dímero de dicloro (p-ciméno) ruténio(II) (9 mg, 0,015 mmol) e (IR,2R)-(-)-Itf-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (14 mg, 0,037 mmol) foram suspensos em água desgaseifiçada (9 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A mistura laranja turva resultante foi deixada a arrefecer até TA. Sólido 1-(3-bromo-quinolin-6-il)-etanona (771 mg,
3,08 mmol) e formato de sódio (2,72g, 40 mmol) seguido de tetrahidrofurano desgaseifiçado (4,5 ml) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 3 h e deixada a arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e a mistura lavada com água então salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 3:2 a 1:1 para proporcionar o composto do título (616 mg, 79ã) como um sólido cinza.
A uma solução de 15c (560 mg, 2,22 mmol) em tolueno (20 ml) e 1,4-dioxano (5 ml) foi adicionado N,indicie lohexilme ti lamina (740 μΐ, 3,46 mmol) e 3-butenoato de terc-butilo (741 mg, 844 μΐ, 5,22 mmol) foi adicionado bis(tri-terc-butilfosfina)paládio(0) (68 mg, 0,13 mmol) sob azoto e a mistura de reação agitada e aquecida sob refluxo durante 6 h então deixada a arrefecer. A mistura foi evaporada e então purificada por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 0:1 para dar uma goma amarela. A goma foi suspensa em acetato de etilo e lavada com solução saturada de cloreto de amónio (2 x) seguido de água então salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada para proporcionar o composto do título (300 mg, 43ã) como um óleo amarelo.
A uma suspensão agitada de ácido (S)-1-[(S)-2-( (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxí1ico (325 mg, 0,812 mmol), 15d (231 mg, 0,738 mmol) e crivos moleculares 4Ã em pó em diclorometano (16 ml) foi adicionado cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (198 mg, 1,03 mmol), 1-hidroxibenzotriazol hidrato contendo aproximadamente 20® água (174 mg, 1,03 mmol) seguid de 4-dimetilaminopiridina (90 mg, 0,738 mmol). A reação foi agitada sob azoto durante 16 h e então filtrada e o sólido lavada com diclorometano. 0 filtrado foi lavado com solução saturada de cloreto de amónio (2 x) e água, seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo 1:1 to 0:1 para proporcionar o composto do título (307 mg, 60 ® ) cmo uma espuma amarela.
A uma solução agitada de 15e (150 mg, 0,216 mmol) em diclorometano (2 ml) a 0°C sob azoto foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (168 mg, 174 μΐ, 0,755 mmol) got a a got a e a mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente ao longo de 2,25 h. N,N-Diisopropiletilamina (195 mg, 263 μΐ, 1,51 mmol) foi adicionado e a mistura de reação agitada durante mais 10 min, evaporada e então suspensa em acetonitrilo (21,6 ml). A mistura agitada foi arrefecida até 0°C e então hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urõnio (115 mg, 0,320 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (111 mg, 150 μΐ, 0,864 mmol) foram adicionados. Após lha reação foi extinta com solução saturada de cloreto de amónio e a mistura evaporada para remover voláteis orgânicos. 0 resíduo foi diluído com diclorometano e a camada orgânica separada e lavada com cloreto de amónio saturado (2 x) e salmoura então seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa utilizando um gradiente de acetonitrilo/água de 3:7 a 11:9 para proporcionar o composto do título (4,6 mg, 4% ao longo de 2 etapas) como um sólido branco pérola. RMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,01 (app t, J = 6,7 Hz, 6H), 1,62 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,70 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,75-1,85 (m, 1 H) , 1,91- 2,05 (m, 3H), 2,70-2,80 (m, 1 H), 2,98-3,06 (m, 1 H), 3,36- 3,45 (m, 1 H), 3,74-3,84 (m, 1 H), 4,26 (d, J = 10,5 Hz, 1 H) , 4,42 (dl, J = 12,3 Hz, 4,72-4,78 (m, 1 H) , 5,55 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 6,09 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 6,38-6,41 (m, 1
H), 6,71 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 7,68 (dd, J = 8,9, 1,9 Hz, 1 H) , 7,88-8,01 (m, 3H) , 8,86 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 522,3 [M0 H], Tr = 1,64 min. EXEMPLO 16: Composto 16
Uma mistura de 7-bromo-2-cloro-quinolina (1,05 g, 4,32 mmol) e tributil (1-etoxivin.il) estanho (1,95 g, 1,83 ml, 5,40 mmol) em tolueno (21 ml) foi desgaseifiçado durante 20 min. Dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (302 mg, 0,432 mmol) foi adicionado e a mistura de reação agitada sob azoto e aquecida a 80°C durante 24 h antes de deixar a arrefecer. Os voláteis foram evaporados e o resíduo suspenso em 1,4-dioxano (10 ml) e ácido clorídrico a 2 M aquoso (5 ml) foi adicionado e a mistura de reação agitada durante 30 min e então evaporada para remover os orgânicos. 0 resíduo foi diluído com acetato de etilo e água e a camada orgânica lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 produto foi purificado em gel de sílica dopado com lOã p/p de carbonato de potássio eluindo utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 9:1 a 4:1 para proporcionar o composto do título (422 mg, 48 ã) como um sólido amarelo.
Dímero de Dicloro(p-ciméno)ruténio(II) (8,5 mg, 0,014 mmol) e (1 R,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (12,1 mg, 0,033 mmol) foram suspensos em água desgaseifiçada (5,5 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 20 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A mistura laranja turva resultante foi deixada a arrefecer até TA. Sólido 16a (571 mg, 2,78 mmol) e formato de sódio (945 mg, 13,9 mmol) seguido de tetrahidrofurano desgaseifiçado (5,5 ml) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 4 h e deixada a arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e a mistura lavada com água e a camada aquosa retro-extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 7:3 para proporcionar o composto do título (413 mg, 72ã) como um sólido bege.
A uma mistura de 16b (360 mg, 1,73 mmol) , viniltrifluoroborato de potássio (279 mg, 2,08 mmol) e [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II), complexo com diclorometano (27 mg, 0,033 mmol) em n-propanol seco (27 ml) foi adicionado trietilamina (175 mg, 241 μΐ, 1,73 mmol) e o sistema evacuado e purgado com azoto (3x). A mistura de reação foi agitada e aquecida a refluxo durante 3 h antes de ser deixada a arrefecer. A mistura foi vertida em água e extraída com dietil éter (2x) e os extratos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 7:3 a 3:2 para proporcionar o composto do título (270 mg, 78ã) como um sólido branco.
A uma mistura agitada de 16c (100 mg, 0,500 mmol) e ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metil- butirilamino) -propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (203 mg, 0,550 mmol) em diclorometano (10 ml) sob azoto foi adicionado cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (134 mg, 0,700 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (61 mg, 0,500 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 16 h e então diluída com diclorometano, lavada sucessivamente com solução de ácido cítrico, água então salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:1 a 0:1 para proporcionar o composto do título (103 mg, 380 ) como um sólido astanho.
!6d (60 mg, 0,109 mmol) e catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (20,5 mg, 0,0328 mmol) foi suspenso em 1,2-dicloroetano (6 ml) e a mistura aquecida num reator de micro-ondas a 100°C durante 1 h. A mistura resultante foi combinada com um reação idêntica levada a cabo utilizando (10 mg, 0,0182) de the éster (R)-1-(2-vinil-quinolin-7-il)-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico. Os voláteis foram evaporados e o resíduo purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo/acetona de 1:0 a 4:1 para dar uma goma castanha. Isto foi ainda purificado por meio de cromatografia de camada fina preparativa utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 1:3 para proporcionar o composto do título (1,8 mg, 30 ) como um sólido branco. ]Ή RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,84-1,02 (m, 6H) , 1,26 (app S, 3H) , 1,67-1,72 (m, 3H) , 1,83-1,96 (m, 1 H) , 2,00-2,08 (m, 1 H) , 2,63-2,74 (m, 1 H) , 3,24 (d, J = 4,5 Hz, 1 H) , 3,50 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 4,21 (app t, J = 10,3
Hz, 1 H) , 4,53-4,61 (m, 1 H) , 5,55 (app t, J = 7,3 1 H) , 6,04-6,11 (m, 2H) , 6,32 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 6,62 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 6,72-6,80 (m, 1 H), 7,29-7,33 (m, 1 H), 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,72 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 7,97-8,02 (m, 1 H). LCMS (m/z) 552,2 [ΜμΗ], Tr = 1,86 min. EXEMPLO 17: Composto 17
Sob árgon, uma solução de diisopropilamina (2,51 g, 24,8 mmol) em tetrahidrofurano (150 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Uma solução de n-butillítio em hexanos (2,5 M, 9,7 ml, 24 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 2 min, e a solução resultante foi agitada durante 10 min adicionais. A solução foi então arrefecida até -78°C num banho de C02:acetona, e 2,2-dimetil-3-oxobutanoato de metilo (3,2 g, 22 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 30 s. A solução foi agitada durante um 15 min adicionais, e N-fenil- bis(trifluorometanosulfonimida) (8,4 g, 23,5 mmol) foi adicionado como uma solução em tetrahidrofurano (20 ml) via cânula ao longo de 5 min, lavagem com uma porção adicional de tetrahidrofurano (10 ml). A solução resultante foi agitada durante 10 min e foi removida do banho frio. Após agitas 1 h adicional, a mistura de reação foi concentrada a vácuo e diluída com dietil éter (150 ml) . A fase orgânica foi lavada com hidróxido de sódio aquoso a 1 Μ (1 x 100 ml, 1 x 30 ml), seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada, e concentrada para proporcionar o composto do título (6,2 g, 100%) como um líquido âmbar que foi utilizado sem purificação adicional.
Uma solução de 17a (6,2 g, 22 mmol) em piridina anidra (11 ml, 140 mmol) foi aquecida até 70°C. Após 18,5 h, a temperatura foi aumentada até 90°C. Após agitar durante um total de 72 h, a mistura de reação foi particionada entre uma mistura agitada de dietil éter (100 ml) e ácido clorídrico a 3 M aquoso (100 ml). As fases foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio saturado aquoso (75 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada para proporcionar o composto do título (2,7 g, 97%) como um líquido ligeiramente castanho que foi utilizado sem purificação adicional.
Sob ãrgon, cloreto hidreto de bis(ciclopentadienil)zircônio (290 mg, 1,1 mmol) foi arrefecida num banho de gelo e água. Uma solução de 17b (1,4 g, 11,1 mmol) e pinacolborano (2,4 ml, 16,5 mmol) em diclorometano (3 ml) foi adicionado por meio de cânula, lavagem com uma porção adicional de diclorometano (2 ml). A mistura resultante foi removida do banho frio e foi agitado durante 72 h a TA. A reação foi então diluída com acetato de etilo (50 ml) , extinta com água gota a gota (5 ml) , e foi ainda diluída com água (50 ml) . As fases orgânica e aquosa foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (30 ml). As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, e concentradas para proporcionar um resíduo bruto que foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 5 a 15ã de acetato de etilo em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (1,6 g, 57ã) como um óleo incolor que cristalizou em repouso a -15°C.
Uma mistura de 6-bromo-3-cloro-isoquinolina (485 mg, 2,0 mmol), bis(pinacolato)diboro (560 mg, 2,2 mmol), acetato de potássio (392 mg, 4,0 mmol) e [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II), complexo com diclorometano (82 mg, 0,1 mmol) em 1,4-dioxano (4 ml) foi aquecida a 160°C num micro-ondas durante 1 hora. A mistura de reaçS o foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. 0 filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de diclorometano para diclorometano/metanol 9:1 para proporcionar o composto do título (545 mg, 94ã).
Uma soluçS o de 17d (1,74 g, 6,0 mmol) em tetrahidrof urano (45 ml) foi agitada a 0°G sob azoto. SoluçE o de hidróxido de sódio (2 M, 9 ml, 18 mmol) e peróxido de hidrogénio (30ã, 2,5 24 mmol) foram adicionados gota a gota. A mistura de reaçE o foi agitada a 0°Cdurante 30 min. Água (30 ml) foi adicionada e a soluçE o foi acidificada a pH 1 com ácido clorídrico a 2 M. SoluçlEI o de metabissulfito de sódio (1 M) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com água e salmoura. A solução orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (662 mg, 61 â) como um sólido branco pérola.
A uma solução de 17e (1,25 g, 7,07 mmol) e tributil-(1-etoxi-vinil)-estanho (5,09 g, 4,77 ml, 14,1 mmol) em 1.4- dioxano (15 ml) foi adicionado dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (992 mg, 1,41 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 160°C num micro-ondas durante 30 min. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. 0 filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso~hexanos/acetato de etilo de 9:1 a 3:1 para proporcionar 3-(1-etoxi-vinil)-isoquinolin-6-ol (670 mg) como uma goma que foi utilizada bruta na seguinte etapa. 3-(1-Etoxi-vinil)-isoquinolin-6-ol (670 mg) foi suspenso em 1.4- dioxano (4 ml) e cloreto de hidrogénio a 4 M em 1,4-dioxano (8 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 30 min. 0 solvente foi evaporado para proporcionar o composto do título (584 mg, 44ã ao longo de 2 etapas) como um sólido branco.
Uma solução de 17f (384 mg, 2,05 mmol) e piridina (0,51 ml, 6,16 mmol) em diclorometano (30 ml) foi agitada num banho de sal e gelo durante 5 min. anidrido
Trifluorometanossulfónico (0,415 ml, 2,46 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura foi aquecida até TA ao longo de 20 min. Anidrido trifluorometanossulfónico adicional (0,1 ml, 0,6 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 10 min. Solução saturada de cloreto de amónio foi adicionada e a mistura foi extraída com diclorometano. Os extratos orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 19:1 para proporcionar o composto do título (300 mg, 44ã) como um sólido branco.
A dímero de dicloro (p-ciméno) ruténio (II) (2 mg, 0,003 mmol) em água (2 ml) a TA foi adicionado (IR,2R)- (-) -N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (3 mg, 0,008 mmol). O sistema foi desgaseificado durante 15 min e então aquecida até 70°C durante 1,5 h. A reação foi arrefecida e uma solução de 17g (224 mg, 0,70 mmol) em te trahidrof urano desgaseificado anidro (1 ml) foi adicionado seguido de formato de sódio (237 mg, 3,50 mmol). 0 sistema foi desgaseifiçado durante 2 min e então aquecido a 40°C durante 1 hora. Após arrefecimento até TA, água foi adicionada e a água foi extraída com diclorometano (2 x) . As camadas orgânicas combinadas foram secas através de uma frita hidrofóbica e concentradas a vácuo. 0 produto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para proporcionar o composto do título (220 mg, 97ã) como um óleo castanho.
Um balão de fundo redondo foi carregado com 17h (100 mg, 0,31 mmol), éster metílico do ácido (E)-2,2-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2 -il)-but-3-enoico (91 mg, 0,36 mmol), cloreto de bis [ (diciclohexil) (4-dimetilaminofenil)fosfina]paládio(II) (13 mg, 0,02 mmol), fosfato de potássio tribásico (198 mg, 0,93 mmol) e cloreto de lítio (40 mg, 0,93 mmol). 0 sistema foi esguichado com azoto e ciclopent.il metil éter (1 ml) e água (0,5 ml) foram adicionados. A reação foi aquecida durante 1 hora a 90°C e então arrefecida até TA. Acetato de etilo foi adicionado e a solução foi lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:2 para dar o composto do título (70 mg, 75ã) como um óleo amarelo.
A 17i (14 0 mg, 0,47 mmol) em tetrahidrofurano (1 ml), metanol (0,5 ml) e água (0,5 ml) foi adicionado hidróxido de lítio monohidrato (39 mg, 0,93 mmol) a TA. A reação foi agitada durante 3 h e extinta pela adição de ácido clorídrico a 2 M aquoso (0,5 ml) . &amp; reação foi concentrada a vácuo, seguido de co-evaporação de metanol e então tolueno. o sólido amarelo resultante foi utilizado bruto.
A 1 e (250 mg, 0,47 mmol) em diclorometano anidro (5 ml) a 0°C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (128 μΐ, 0,70 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 2 h antes de adicionar N,N-diisopropiletilamina (252 μΐ, 1,41 mmol) e então concentrada a vácuo, e co-evaporada com tolueno para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico como um sólido branco. A 17 j (134 mg, 0,47 mmol) em N,N-dimeti 1 formamida anidra (2 ml) a TA e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (420 μΐ, 2,35 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1 H-7- azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilo urónio (250 mg, 0,66 mmol). A solução foi agitada a TA durante 3 min antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em anidro N, JW-dimetilformamida (2 ml) . A reação foi agitada durante 16 h. A reação foi extinta com água e extraída com acetato de etilo (2 x). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetona 1:1 para dar o composto do título (220 mg, 67% ao longo de 3 etapas) como um sólido branco pérola.
A 17k (220 mg, 0,31 mmol) em tetrahidrofurano (3 ml), metanol (1,5 ml) e água (1,5 ml) foi adicionado hidróxido de lítio monohidrato (53 mg, 1,26 mmol) a TA. A reação foi agitada durante 1,25 h e extinta pela adição de ácido clorídrico a 2 M aquoso (0,64 ml). A reação foi concentrada a vácuo, seguido de co-evaporação de metanol (2 x) e então acetonitrilo (6 x). 0 resíduo resultante foi dissolvido em N,N-dimetilformamida anidra (4 ml) , e adicionado via bomba de seringa ao longo 2 h a uma suspensão de anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (271 mg, 0,79 mmol), 4- dimetilaminopiridina (288 mg, 2,36 mmol) e crivos moleculares de 4Ã em pó (3 g) em 1,2-dicloroetano (103 ml) a 50°C. Seguindo a adição a reação foi agitada a 50°C durante 3 h, arrefecida até TA e filtrada através de Celite. 0 filtrado foi concentrado a 1/3 do seu volume, diluído com diclorometano e lavado com água (2 x). A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetona 1:1 para dar um sólido branco pérola. O sólido foi triturado duas vezes com dietil éter e seco a vácuo durante 16 h para proporcionar o composto do título (65 mg, 380 ao longo de 2 etapas) como um pó branco 1H RMN (300 MHz, CDCl?,) 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,41 (s, 3H) , 1,51 (s, 3H) , 1,61 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,76 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,76 (m, 1H), 1,78-2,03 (m, 3H) , 2,07-2,17 (m, 1H) , 2,62-2,76 (m, 3,62-3,79 (m, 2H) , 4,21-4,31 (m, 1H) , 4,52-4,62 (m, 1H) , 5,82-6,01 (m, 1H) , 6,13 (q, J = 6,1 Hz, 1H), 6,27 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 6,30- 6,41 (m, 2H) , 6,64 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 7,53 (d, J = 8,5
Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,82 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 9,16 (s, 1 H). LCMS (m/z) 549,9 [ΜμΗ], Tr = 5,21 min. EXEMPLO 18: Composto 18
Ao Composto 17 (40 mg, 0,073 mmol) em acetato de
etilo (10 ml) foi adicionado lOã de paládio em carbono (30 mg) a TA. 0 sistema foi purgado com hidrogénio e agitado vigorosamente durante 16 h. A suspensão foi filtrada através de Celite e o filtrado concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetona 1:1 para proporcionar o Composto 18 (8 mg, 2 0ã) como um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, CDCl·?,) 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,00 (d, J = 6,5
Hz, 3H) , 1,27 (s, 3H) , 1,31 (s, 3H) , 1,48 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,64-1,79 (m, 1 H) , 1,75 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,80- 2,12 (m, 5H), 2,45 (td, J = 12,7, 3,6 Hz, 1 H), 2,68-2,93 (m, 2H) , 3,62-3,78 (m, 2H) , 3,86 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,37 (app t, J = 8,3 Hz, 1 H), 4,50-4,61 1H), 5,87-6,00 (m, 1H) , 6,18 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,38 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 6,58 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,42 (S, 1 H) , 7,64 (s, 1 H) , 7,83 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 9,14 (s, 1 H). LCMS (m/z) 552,2 [ΜμΗ], Tr = 5,11 min. EXEMPLO 19: Composto 19
A uma soluç0 o de ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (339 mg, 0,920 mmol) e (R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etanol (183 mg, 0,920 mmol) em diclorometano (4,6 ml) foram adicionados cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν'-etilcarbodiimida (211 mg, 1,10 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (56,2 mg, 0,46 mmol) a 23°C sob uma atmosfera de ãrgon. Após 21 h, a mistura de reação foi purificada diretamente por meio de cromatografia em coluna flash de gel de sílica para proporcionar o composto do título (224 mg, 420 ) com um sólido ocre claro.
A 19a (800 mg, 1,38 mmol) em diclorometano anidro (12 ml) a 0°C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (374 μΐ, 2,07 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 2 h antes de adicionar N, 17-diisopropiletilamina (480 2,75 mmol) e então concentrado a vácuo para proporcionar um sólido branco. Ao sólido foi adicionada uma solução de ácido (E)-(R)-2-etil-pent-3-enoico (188 mg, 1,65 mmol) em acetonitrilo anidro (12 ml) seguido de N,N~ diisopropiletilamina (240 μΐ, 1,38 mmol) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(1 H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilo urânio (733 mg, 1,93 mmol) . A reação foi agitada a ΤΑ durante 3 h e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 1:2 então 1:5 para dar o composto do título (250 mg, 74E3 ao cbngo de 2 etapas) como um óleo amarelo viscoso.
A 19b (200 mg, 0,34 mmol) em tolueno anidro (113 ml) a 70 °C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (42 mg, 0,07 mmol) . A reação foi aquecida a 120°C durante 2 h após que uma quantidade adicional do catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (30 mg, 0,05 mmol) foi adicionada. Após mais 2 h a 120°C a reação foi arrefecida até TA e isocianoacetato de potássio (83 mg) em metanol (2 ml) foi adicionado. A reação foi agitada durante 1 hora, sílica adicionada e então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando acetato de etilo/acetona 3:1 para proporcionar um sólido castanho. Isto foi purificado ainda por meio de HPLC preparativa de fase reversa para dar o composto do título (2,2 mg, 1 ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) 0, 97 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,02 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,11 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,64 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,70 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,71-2,06 (m, 7H), 2,66-2,82 (m, 1 H) , 3,13-3,22 (m, 1 H) , 3,75-3,85 (m, 1 H), 4,30-4,48 (m, 2H) , 5,51-5,67 (m, 1 H) , 6,07 (q, J = 6,3 Hz, 1 H) , 6,48- 6/57 (m, 1 Η), 6,61 (d, J = 16,5 Hz, 1H) , 7,47 (s, 1 H) , 7,58 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 7,89 (s, 1 H) , 8,07 (d, J = 8,7
Hz, 1H), 9,15 (s, 1 H) . LCMS (m/z) 550,2 [ΜμΗ] , Tr = 1,67 min. EXEMPLO 20: Composto 20
A 19a (390 mg, 0,67 mmol) em diclorometano anidro (7 ml) a 0°C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (182 μΐ, 1,01 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1 hora antes de extinção com uma solução aquosa saturada de hidrogénio carbonato de sódio e extração com acetato de etilo (2 x). As camadas orgânicas foram secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para proporcionar um sólido branco. 0 sólido foi dissolvido em acetonitrilo anidro (4 ml) e ácido 2-metil-but-3-enoico (81 mg, 0,81 mmol), cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (184 mg, 0,94 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol monohidrato (103 mg, 0,67 mmol) foram adicionados. A reação foi agitada a TA durante 16 h e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 1:3 para dar o composto do título (259 mg, 69 %) como um óleo viscoso transparente.
A 20a (250 mg, 0,44 mmol) em tolueno anidro desgaseificado (148 ml) foi adicionado 2,6-diclorobenzoquinona (8 mg, 0,04 mmol). A mistura foi aquecida até 105°C e uma solução de catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (83 mg, 0,13 mmol) em tolueno anidro (20 ml) , foi adicionado via bomba de seringa ao longo de 2 h. Uma quantidade adicional de catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (28 mg) foi adicionado e a reação aquecida até refluxo durante 1 h. A reação foi arrefecida até TA, gel de sílica foi adicionado e concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo/acetona 1:0 então 3:1 para proporcionar um óleo. Isto foi triturado com dietil éter e algumas gotas de acetato de etilo para proporcionar um sólido castanho que foi ainda purificado por meio de TLC preparativa utilizando acetato de etilo/acetona 5/1 para dar o composto do título (9 mg, 1 IH ) como um sólidobranco pérola. XH RMN (300 MHz, CDC13) 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,01 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,38 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,62 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,70 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,72-1,82 (m, 2H) , 1,91-2,01 (m, 2H) , 2,03-2,12 (m, 1H) , 2,62-2,74 (m, 1 H), 3,35 (app t, J = 7,4 Hz, 1 H), 3,59 (d, J = 12,5
Hz, 1 H) , 3,65-3,77 (m, 1 H) , 4,26 (app t, J = 8,9 Hz, 1 H) , 4,51-4,60 (m, 1 H) , 5,68-5,79 (m, 1 H) , 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,16 (d, J = 9,2 Hz, 1 H) , 6,27 (d, J = 9,2
Hz, 1 H) , 6,40 (dd, J = 16,0, 7,8 Hz, 1 H) , 6,71 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) , 7,39 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H) , 7,58 (s, 1 H) , 7,74 (s, 1 H) , 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 9,16 (s, 1 H). LCMS (m/z) 536,2 [ΜμΗ], Tr = 1,63 min. EXEMPLO 21: C0iap0st0 21
21 a foi preparado da mesma maneira que 20a substituindo ácido 2-metil-but-3-enoico com ácido (R)-2-metil-pent-4-enoico (preparado conforme descrito em Synlett 2002, Nol2, 2039-2040, 82 mg, 0,72 mmol), para proporcionar o composto do título (280 mg, 67ã) como uma espuma branca.
A 21a (250 mg, 0,43 mmol) em tolueno anidro (144 ml) a TA e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (54 mg, 0,09 mmol). A reação foi aquecida a 120°C durante 2 h após o que uma quantidade adicional do catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (25 mg, 0,04 mmol) foi adicionada. Após mais lha 120°C a reação foi arrefecida até TA e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo/acetona 1:0 então 3:1 para proporcionar um sólido castanho. Isto foi triturado com dietil éter/acetato de etilo 3:1 para dar o composto do título (50 mg, 22ã) como um sólido branco pérola. XH RMN (300 MHz, CDC13) 0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,29 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,59 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,67 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,70-1,84 (m, 1 H), 1,92-2,15 (m, 4H), 2,33-2,48 (m, 1H), 2,63-2,98 (m, 3H) , 3,53 (d, J = 12,2 Hz, 1H) , 3,60-3,72 (m, 1 H) , 4,42 (dd, J = 6,7, 2,2 Hz, 1 H), 4,52-4,61 (m, 1 H), 5,62- 5.74 (m, 1 H), 6,11 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,16 (q, J = 8,9 Hz, 1 H) , 6,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,53-6,66 (m, 1 H) , 6.75 (d, J = 16,1 Hz, 1 H) , 7,37 (dd, J = 8,7, 1,0 Hz, 1 H) , 7,80-7,96 (m, 3H) , 9,16 (s, 1 H) . LCMS (m/z) 550,3 [ΜμΗ], Tr = 1,50 min. EXEMPLO 22: Composto 22
A uma suspensão agitada de 7-bromo-2-cloro-quinolina (8,10 g, 33,4 mmol) e iodeto de sódio (50,0 g, 334 mmol) em acetonitrilo (27 ml) foi lentamente adicionado cloreto de acetilo (3,56 ml, 50,0 mmol). 0 balão foi tampado e vedado e aquecido a 80°C durante 3 h antes de ser deixado a arrefecer. A mistura foi tratada sequencialmente com lOã p/p de solução aquosa de carbonato de potássio (80 ml), 50 p/p solução aquosa de sulfito de sódio (80 ml) e solução saturada aquosa de tiossulfato de sódio (80 ml) e a mistura foi extraída com diclorometano (2x). Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados para dar uma 7-bromo-2-iodo-quinolina bruta. À quinolina foi adicionado tributil(1-etoxivinil)estanho (13,6 ml, 40,1 mmol), 1,4 -dioxano (67 ml) e bis(trifenilfosfina)paládio(II) dicloreto (2,37 g, 3,34 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 100°C durante 5 h antes de deixar a arrefecer. Ácido clorídrico a 2 M aquoso (67 ml) foi adicionado e a reação foi agitada durante 1 h. A mistura foi filtrada e os sólidos lavados com acetato de etilo e o filtrado evaporada para remover ois orgânicos. 0 resíduo foi extraído com acetato de etilo (3 x) e os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 produto foi purificado em gel de sílica doped com 10® p/p de cabonato de potássio eluindo com um gradiente de 0 a 6® de aetato de etilo em iso-hexanos para proporcionar o composto do título (5,5 g, 66® ) como um sólido branco.
Dímero de dicloro (p-ciméno) ruténio(II) (61 mg, 0,100 mmol) e (IR, 2R) - ( -)-JV-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (88 mg, 0,012 mmol) foi suspenso em água desgaseifiçada (40 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 5 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A mistura laranja turva resultante foi deixada a arrefecer até TA. 22a (5,00 g, 20 mmol) em tetrahidrof urano desgaseifiçado (40 ml) foi adicionado seguido de formato de sódio (6,8 g, 100 mmol) e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 4 h e deixada a arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e água e a camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de 0® a 30® de acetato detèlo em iso-hexanos para proporcionar o composto do título (4,96 g, 98ã) como um sólido branco pérola.
A uma solução de 22b (1,00 g, 3,97 mmol) e trietilamina (1,65 ml, 11,9 mmol) em diclorometano anidro a 0°C, foi adicionado anidrido acético (0,75 ml, 7,93 mmol) e 4-(dimetilamino)piridina (24 mg, 0,197 mmol). A mistura de reação foi agitada e deixada a aquecer a TA. Após 1,5 h água (100 ml) foi adicionado e as camadas separadas. A fase aquosa foi re-extraída com diclorometano (2 x 100 ml) e os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (100 ml) , secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos (66 ml) então iso-hexanos/acetato de etilo 95:5 (300 ml), então iso-hexanos/acetato de etilo 9:1 (1066 ml) para render o composto do título (1,16 g, 99H ) comoum óleo incolor.
A uma solução de 22c (1,16 g, 3,95 mmol) em anidro acetonitrilo foi adicionado acetato de paládio(II) (89 mg, 0,395 mmol), ácido 2,2-dimetil-but-3-enoico (496 mg, 4,35 mmol), tri(o-tolil)fosfina (241 mg, 0,790 mmol) e trietilamina (1,09 ml, 7,90 mmol) então a mistura foi aquecida no micro-ondas a 100°C durante 20 min. A mistura de reação foi concentrada a vácuo então água (2 00 ml) foi adicionado e os orgânicos extraídos com acetato de etilo (2 x 50 ml). Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 95:5 (300 ml), então íso-hexanos/acetato de etilo 9:1 (1066 ml) então íso-hexanos/acetato de etilo 3:1 (1066 ml) para render o composto do título (792 mg, 61ã) como um sólido branco.
Uma solução de 1 e (1,29 g, 2,42 mmol) em diclorometano (12 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água sob azoto. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,715 ml, 4,84 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 1 h. A reação foi extinta com N, N-diisopropiletilamina (1,69 ml, 9,68 mmol) e a mistura de reação foi concentrada a vácuo para dar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino- 3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico como um sólido branco que foi utilizado sem purificação adicional. A uma solução de 22d (792 mg, 2,42 mmol) em N,N-dimetilformamida (10 ml) a 0°C sob azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (2,11 ml, 12,1 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,01 g, 2,66 mmol). A mistura resultante foi agitada a TA durante 15 min então re-arrefecida até 0°C e éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico gerado na etapa anterior, foi adicionado como uma solução em N,N-dimetilformamida (10,7 ml). A mistura de reação foi então deixada a aquecer a TA com agitação. Após lha mistura foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e água (100 ml) . As fases foram separadas e a aquosa foi extraída com acetato de etilo (100 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura (100 ml), secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetona 95:5 (1000 ml) então iso-hexanos/acetona 9:1 (1 L) então iso-hexanos/acetona 85:15 (1 L) então iso-hexanos/acetona 3:1 (1 L) então iso-hexanos/acetona 7:3 (1 L) para render o composto do título (1,11 g, 62ã) como um sólido incolor.
Uma solução de 22e (1,11 g, 1,50 mmol) em tetrahidrofurano (14,7 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água e metanol (7,4 ml), água (7,4 ml), e hidróxido de lítio monohidrato (2 52 mg, 6,0 mmol) foram então adicionados. A mistura foi agitada durante 1 h no banho de gelo e água e então extinta com ácido clorídrico aquoso a 1 M (6 ml, 6,0 mmol). A solução resultante foi concentrada a vácuo, e o produto bruto foi concentrado a partir de metanol (4 x 250 ml) então acetonitrilo (4 x 250 ml) e tolueno (5 x 250 ml). 0 sólido isolado foi então deixado no liofilizador durante a noite para proporcionar o composto do título (853 mg, rendimento quantitativo) como um sólido branco.
Sob azoto, anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (2,59 g, 7,51 mmol) e 4-(dimetilamino)piridina (1,38 g, 11,3 mmol) foram dissolvidos em 1,2-dicloroetano (500 ml) e a solução resultante foi aquecida até 50°C. 0 ácido seco bruto da etapa anterior, 22f (853 mg, 1,50 mmol) foi dissolvido em N,N- dimetilformamida (19 ml) e adicionado à mistura de reação gota a gota via bomba de seringa ao longo de 6 h. Após a adição estar concluída, a bomba de seringa foi então enxaguada com adicional N, i7-dimetilformamida (3 ml) e a mistura de reação foi agitada a 50°C durante 40 min. Após este tempo a mistura foi concentrada para dar um resíduo. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos (66 ml), então íso-hexanos/acetona 4:1 (726 ml), então iso-hexanos/acetona 7:3 (726 ml) , então iso-hexanos/acetona 3:2 (726 ml) . Esta coluna inicial deu produto impuro (1,10 g) que continha N,N-dimetilformamida, A isto foi adicionado salmoura (200 ml) e os orgânicos extraídos com acetato de etilo (2 x 100 ml) . Os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar produto impuro (900 mg) que não contém N,N-dimetilformamida. Este resíduo foi purificado por meio de uma segunda cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/ acetona 95:5 (6 L) , então iso-hexanos/acetona 93:7 (1,5 L), então iso-hexanos/acetona 88:12 (3 L) , então íso-hexanos/ acetona 82:16 até a totalidade do produto eluir da coluna. Dois lotes do produto desejado em 87ã de pureza (lote A) e 770 de pureza (lote B) foram isolado. Olote A foi triturado duas vezes com dietil éter a 1000 paa dar o composto do título (241 mg) em aproximadamente 90-950 de pureza. A purificação dos Lote B por meio de HPLC preparativa de fase reversa deu o composto do título (181 mg) em aproximadamente >950 de pureza. Os lotes A eB foram combinados para dar o composto do título (422 mg, 510 ) como um sólido branco. LH RMN (500 MHz, CD30D) 0,94 (app t, J = 6,7 Hz, 6H) , 1,34 (s, 3H), 1,48 (s, 3H), 1,58 (d, J = 7,3
Hz, 3H), 1,62-1,75 (m, 5H), 1,82-1,91 (m, 1 H), 1,92-2,03 (m, 2H), 2,66-2,78 (m, 1 H), 3,78 (app d, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,25-4,33 (m, 1 H) , 4,34-4,43 (m, 1 H) , 5,71 (q, J = 7,3
Hz, 1 H), 5,89 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,24 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) , 6,46 (d, J = 16,0 Hz, 1 H) , 7,27 (dl, J = 9,8 Hz, 1 H) , 7,38 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7,60 (s, 1 H) , 7,75 (ABq, ΔδΑΒ = 0,03, Jab = 8,54 Hz, 2H) , 8,18 (d, J = 7,9 Hz, 1 Η) . LCMS (m/z) 550,1 [ΜμΗ], Tr = 2,24 min. EXEMPLO 23: Composto 23
Uma solução de 6-bromo-3-cloro-isoquinolina (2,0 g, 8,2 5 mmol) em n-propanol (90 ml) foi preparada e viniltrifluoroborato de potássio (1,11 g, 8,25 mmol) foi adicionado. A solução foi purgada com azoto durante 10 min antes de adição de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferrocene]dicloropalãdio(II), complexo com diclorometano (128 mg, 0,157 mmol) e trietilamina (1,15 ml, 8,25 mmol) . A mistura de reação foi então purgada com azoto durante mais 3 min antes de aquecimento a refluxo durante 1 h. A mistura de reação foi então deixada a arrefecer até TA e água foi adicionada. Os orgânicos foram então extraídos com dietil éter (3 x 150 ml). Os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica, utilizando iso-hexanos/dietil éter 9:1 para dar o composto do título (1,26 g, 80ã) como um óleo.
Uma suspense o de 23a (1,24 g, 6,54 mmol) em metanò (125 ml) e diclorometano (125 ml) foi arrefecida até -78 °C. A reaç0 o foi ozonsiada até uma cor azul persisir (em aproximadamente 15 min) , entIEI o azoto foi borbulhadoatravés da mistura de reaçEI o durante 15 min para purgar o oono. A reaçlEI o foi entIEI o tratada com bicarbonato de sódio ó&amp;ido (549 mg, 6,54 mmol) e sulfureto de dimetilo (1,31 ml, 1,31 mmol) . A mistura foi deixada a aquecer a TA e após 3 h a mistura de reaçS o foi concentrada a vácuo Água (200 ml) foi adicionada ao resíduo e a camada aquosa extraída com diclorometano (3 x 200 ml) . Os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar o composto do título (1,02 g, 81 ã) como um óleo.
A uma soluçS o de 23b (1,02 g, 5,32 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) a 0°C foi adicionado soluçS o de trimetil(trifluorometil)silano (3,19 ml, 2 M em tetrahidrofurano, 6,38 mmol) seguido de soluçS o defluoreto de tetrabut i1amónio (0,053 ml, 1 M em tetrahidrofurano,
0,053 mmol) e a soluçS o resultante foi agitada a 0S durante 1,5 h. A mistura de reação foi então deixada a aquecer a TA e ácido clorídrico a 2 M (10 ml) foi adicionado e a mistura agitada durante 10 min antes de adiçS o de água (200 ml). A camada aquosa foi ent0 extraída com acetato de etilo (3 x 100 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados para dar o composto do título (1,30 g, 93ã) como um sólido.
A uma solução de 23c (1,30 g, 4,97 mmol) em diclorometano (14,7 ml) a 0°C foi adicionado solução de Periodinano de Dess-Martin (14,7 ml, 15ã em diclorometano, 6,96 mmol) e a mistura de reação foi agitada e deixada a aquecer a TA. Metabissulfito de sódio a 1 M aquoso (100 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 15 min. A esta mistura foi adicionada solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (100 ml) e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 x 100 ml) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (200 ml) seguido de salmoura (100 ml), secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar o composto do título (1,0 g, 78 ã) como um sólido.
Uma mistura de 23d (686 mg, 2,64 mmol), (R)-2-metil-2- propanosulfinamida (400 mg, 3,30 mmol) e titânio(IV) isopropóxido (1,95 ml, 6,60 mmol) em tetrahidrofurano (27,4 ml) foi aquecida a refluxo durante 16 h então deixada a arrefecer até TA. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e re-dissolvida em dietil éter (27,4 ml) então arrefecida até -78 °C. A esta mistura foi adicionada solução de L-selectride* (7,93 ml, 1,0 M em tetrahidrofurano, 7,93 mmol) e a mistura de reação agitada a -78 °C durante 1 h. Salmoura (30 ml) foi então adicionada e a mistura deixada a aquecer a TA. Mais salmoura (200 ml) e acetato de etilo (300 ml) foram adicionados e as camadas separadas. A fase aquosa foi re-extraída com diclorometano (500 ml). Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica, utilizando gradiente eluição de diclorometano para diclorometano/metanol 99:1 para dar o composto do título (553 mg, 57% de rendimento, 94% d.e.).
A uma solução de 23e (553 mg, 1,52 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado solução de ácido clorídrico a 4 M em 1,4-dioxano (1,52 ml, 6,06 mmol) e a mistura de reação foi agitada a TA durante 30 min. Solução de ácido clorídrico a 4 M adicional em 1,4-dioxano (1,52 ml, 6,06 mmol) foi adicionada e a mistura de reação agitada a TA durante 30 min então concentrada a vácuo para dar o composto do título (507 mg, rendimento quantitativo).
Uma mistura de 23f (507 mg, 1,52 mmol) e trietilamina (0,84 ml, 6,08 mmol) em diclorometano (20 ml) foi agitado a 0°C para dar uma solução. Então orna solução de dicarbonato de di-terc-butilo (497 mg, 2,28 mmol) em diclorometano (4 ml) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada e deixada a aquecer a TA ao longo de 24 h. Água (200 ml) foi adicionada e a camada aquosa extraída com diclorometano (3 x 100 ml), seca em sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo para dar um resíduo (816 mg) . Este resíduo foi dissolvido em diclorometano (20 ml) e arrefecida até 0°C então trietilamina (0,84 ml, 6,08 mmol) foi adicionado seguido de uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (497 mg, 2,28 mmol) em diclorometano (4 ml) e a mistura de reação foi agitada e deixada a aquecer a TA ao longo de 72 h. Dicarbonato de di-terc-butilo adicional (162 mg, 0,74 mmol) foi adicionado e a agitação continuou durante 30 min então água (100 ml) foi adicionado e a camada aquosa extraída com diclorometano (2 x 50 ml) . Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica, utilizando gradiente eluição de iso-hexanos/acetato de etilo 9:1 to iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para dar o composto do título (14 0 mg, 2518 ) como um óleo.
A uma solução de 23g (135 mg, 0,37 mmol) em n-propanol (5 ml) foi adicionado viniltrifluoroborato de potássio (55 mg, 0,412 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino) ferroceno]dicloropaládio(II), complexo com diclorometano (5,8 mg, 0,007 mmol) e trietilamina (0,052 ml, 0,37 mmol). A suspensão foi evacuado e purgada com azoto 3 vezes antes de aquecimento até 100 °C durante 2 h. Após este tempo viniltrifluoroborato de potássio adicional (100 mg, 0,748 mmol) foi adicionado e aquecimento continuado a 100 °C durante 16 h. Após este tempo, [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(II) adicional, complexo com diclorometano (9 mg, 0,011 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida num reator de micro-ondas a 150°C durante 90 min. Após este tempo [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) adicional, complexo com diclorometano (9 mg, 0,011 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida num reator de micro-ondas a 150°C durante 10 min. Água (100 ml) foi adicionado à mistura de reação e a camada aquosa foi então extraída com dietil éter (2 x 100 ml) . Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados a vácuo para dar o composto do título (132 mg, rendimento quantitativo).
A uma solução de 23h (132 mg, 0,37 mmol) em metanol (2 ml) foi adicionado ácido clorídrico a 4 M em 1,4-dioxano (0,37 ml, 0,75 mmol) e a mistura agitada a TA durante 30 min. Ácido clorídrico a 4 M adicional em 1,4-dioxano (3,0 ml, 6,08 mmol) foi adicionado e a agitação continuou durante 2 h então a mistura de reação foi concentrada a vácuo para dar um resíduo. 0 resíduo foi então concentrado de dietil éter (2 ml) , seguido de acetonitrilo (10 ml) e isto foi repetido duas vezes para dar sal de ácido (S) - 2,2,2-trifluoro-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etilamina clorídrico (108 mg, rendimento quantitativo). A uma suspensão de sal de ácido (S)-2,2,2-trifluoro-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etilamina clorídrico (108 mg, 0,374 mmol) em acetonitrilo (2 ml) a 0°C sob azoto foi adicionado ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metilbutirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (138 mg, 0,37 mmol), cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (100 mg, 0,52 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol hidrato (63 mg, 20 wt % em água, 0,37 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 0°C durante 15 min antes de remover do banho de gelo e água e agitar a TA durante 16 h. N,N-Diisopropiletilamina (0,5 ml, 2,87 mmol) foi adicionada e a solução foi agitada a TA durante 2,5 h onde ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-but-3-enoilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico adicional (69 mg, 0,19 mmol) foi adicionado e a agitação continuou. Após 1 h, cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν'-etilcarbodiimida (134 mg, 0,70 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 1 hora. Após este tempo, a mistura foi concentrado a vácuo e o resíduo diluído com acetato de etilo (60 ml) . Água (50 ml) foi adicionado e as camadas separadas. A fase aquosa foi re-extraída com acetato de etilo (2 x 10 ml) e os orgânicos combinados foram então lavados com cloreto de amónio (2 x 50 ml) , secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica, utilizando gradiente eluição de iso-hexanos/acetato de etilo 9:1 a íso-hexanos/acetato de etilo 4:1 a iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 e finalmente iso-hexanos / acetato de etilo 0:1. Isto deu o composto do título (124 mg, 55ã).
A uma solução de 23i (124 mg, 0,21 mmol) em tolueno (69 ml) foi adicionado catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (13 mg, 0,02 mmol) e a mistura de reação aquecida a 115°C durante 1,5 h. Adicional catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (13 mg, 0,02 mmol) foi adicionado e aquecimento continuado a 120°C durante 50 min. Catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs Adicional (13 mg, 0,02 mmol) foi adicionado e o aquecimento continuado a 120°C durante 30 min. Após este tempo a mistura foi deixada a arrefecer até TA e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo a acetato de etilo/acetona 9:1. Produto impuro (28,3 mg) foi recolhido que foi ainda purificado por meio de TLC preparativa eluindo com acetato de etilo/acetona 95:5 para proporcionar o composto do título (4 mg, 3ã) como um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, CD30D) 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 6,7Hz, 3H) , 1,29-1,39 (m, 1 H) , 1,69 (d, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,74-2,01 (m, 5H), 2,73 (td, J = 12,9, 2,9 Hz, 1 H), 2,99-3,11 (m, 1 H) , 3,74-3,83 (m, 1 H) , 4,26 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 4,41 {dl, J = 13,2 Hz, 1 H) , 5,48 (q, J = 7,4 Hz, 1 H), 5,84 (q, J = 8,3 Hz, 1 H), 6,58 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 6,62-6,71 (m, 1 H) , 7,47 (s, 1 H) , 7,76 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7,89 (s, 1 H) , 8,13 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 9,22 (s, 1 H). LCMS (m/z) 575,2 [ΜμΗ], Tr = 1,53 min. EXEMPLO 24: Composto 24
A uma solução de (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etanol (295 mg, 1,17 mmol) em acetonitrilo anidro (12 ml) foram adicionados éster terc-butílico de ácido but-3-enoico (0,44 ml, 2,75 mmol), bis(tri-terc-butilfosfina)paládio(0) (25 mg, 0,049 mmol) e N,N-diciclohexilmetilamina (0,39 ml, 1,83 mmol) entB o a mistura foi aquecida a refluxo duranfe 2 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 95:5 para render o composto do título (348 mg, 95%) como um sólido branco.
A 24a (363 mg, 1,16 mmol) e ácido (S)-l-[(S)-2-((S)-2-tere-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (505 mg, 1,26 mmol) em diclorometano (20 ml) foi adicionado cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (311 mg, 1,62 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (142 mg, 1,16 mmol). A mistura de reação foi então agitada a TA durante 16 h. À mistura foi adicionado solução saturada aquosa de cloreto de amónio (100 ml) e a camada aquosa extraída com diclorometano (2 x 50 ml) . A fase aquosa foi ainda lavada com diclorometano (20 ml) e os orgânicos combinados lavados com salmoura (50 ml) , secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 4:1 (120 ml) então íso-hexanos/acetato de etilo 7:3 (855 ml) então íso- hexanos/acetato de etilo 3:2 (540 ml) para render o composto do título (357 mg, 44%) como um sólido branco.
A uma solução de 24b (342 mg, 0,492 mmol) em diclorometano (2,5 ml) a 0°C foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,18 ml, 0,96 mmol) e a solução amarelo pálido foi agitada a 0°C durante 2,75 h. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo adicional (0,073 ml, 0,45 mmol) foi adicionado e a agitação continuou durante 1,33 h. N,N-Diisopropiletilamina (0,6 ml, 3,44 mmol) foi adicionado e a mistura agitada durante 10 min então concentrada a vácuo para dar o intermediário éster (R)-1-[7-((E)-3 -carboxi-propeni1)-quinolin-2-il]- etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil- butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (266 mg, 0,45 mmol). A uma solução de éster (R)-1-[7-((E)- 3-carboxi-propenil)-quinolin-2-il]-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxilico (266 mg, 0,45 mmol) em acetonitrilo (50 ml) a 0°C sob azoto foi adicionado N,.Ν'-di isopropi let i lamina (0,343 ml, 1,971 mmol) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (262 mg, 0,70 mmol). A mistura foi agitada a 0°C e deixada a aquecer a TA ao longo de 16 h. À mistura de reação foi adicionado solução aquosa ácido clorídrico a 2 M (20 ml) e a mistura foi concentrada a vácuo. A camada aquosa foi extraída com diclorometano/metanol 9:1 (2 x 100 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de hidrogénio carbonato de sódio (2 x 200 ml) , então salmoura (1 x 100 ml), secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados a vácuo para dar um resíduo bruto. Isto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando eluição de gradiente de acetato de etilo/acetona 97:3 to acetato de etilo/acetona 94:6. Recolhido 45 mg de produto impuro que foi triturado com dietil éter para dar o composto do título (25,4 mg, lOã) como um sólido amarelo pálido. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,99 (d, J = 6,48 Hz, 3H) , 1,01 (d, J = 6,7Hz, 3H) , 1,64 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,66-1,72 (m, 1 H) , 1.74 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,85-2,08 (m, 4H), 2,75 (dd, J = 2,9, 12,9 Hz, 1 H), 2,97-3,07 (m, 1 H), 3,35-3,40 (m, 1 H) , 3,79-3,88 (m, 1H), 4,23 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 4,43 (d 1, J = 11,2 Hz, 1 H) , 5,72 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,94 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,41 (d, J = 16,7 Hz, 1 H) , 6,55 (dt, J = 4,7, 16,7 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 1,3, 8,7 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 522,2 [ΜμΗ] , Tr = 1,90 min. EXEMPLO 25: Composto 25
Uma solução arrefecida (-20°C) de (S)-6-bromo-indan-Ιοί (1,0462 g, 4,910 mmol, preparado conforme descrito no documento WO 2009/003719) em tetrahidrofurano anidro (20 ml) foi subsequentemente tratado com trietilamina (2,7 ml, 19,639 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (760 μΐ, 9,820 mmol) . Após agitar a -30°C durante 2,5 h, uma solução de metilamina (2 M em tetrahidrof urano, 25 ml, 50 mmol) foi adicionado. Após agitar a TA durante 22,5 h a mistura de reação foi filtrada. 0 sólido branco foi enxaguado com dietil éter. 0 filtrado foi evaporado até a secura para proporcionar o composto do título (1,11 g, rendimento quantitativo) como um sólido branco.
Uma solução de 25a (1,11 g, 4,910 mmol) foi subsequentemente tratada com dicarbonato de di-terc-butilo (1,714 g, 7,856 mmol) e trietilamina (690 μΐ, 4,91 mmol). Após agitar durante 25,5 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g I solute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 9:1 para proporcionar o composto do título (1,4224 g, 89ã) como um sólido branco como uma mistura de rotâmeros.
Uma solução de 25b (1,4224 g, 4,363 mmol) , [1,1-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio diclorometano complexo (71,3 mg, 0,087 mmol), viniltrifluoroborato de potássio (701,3 mg, 5,236 mmol) e trietilamina (610 μΐ, 4,363 mmol) em anidro n-propanol (40 ml) foi desgaseifiçado borbulhando azoto através de durante 3 0 min. A suspensão vermelha foi então refluxed durante 17,5 h. Após arrefecimento até TA, a mistura foi extinta com água e a camada aquosa foi extraída com dietil éter (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/dietil éter de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (977,3 mg, 82ã) como um sólido branco como uma mistura de rotâmeros.
Uma solução arrefecida (0°C) de 25c (977,3 mg, 3,575 mmol) em diclorometano (20 ml) foi tratado com ácido trifluoroacético (5 ml). Após agitar durante 30 min a TA os voláteis foram removidos a vácuo e o ácido trifluoroacético residual foi retirado por azeotropia com tolueno (3 x) para proporcionar o sal de amónio correspondente como um sólido rosa. Um arrefecida (0°C) solução o sal de amónio bruto, ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico bruto (3,932 mmol) e N,N- diisopropiletilamina (2,5 ml, 14,300 mmol) em acetonitrilo (60 ml) foi tratado com hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,903 g, 5,005 mmol). Após agitar durante 20 ha TA, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 100 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:2 para proporcionar o composto do título numa mistura que foi dissolvida em acetato de etilo e lavada com carbonato de potássio aquoso. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o composto do título (798,9 mg, 360 ) como um sólido banco como uma mistura de rotâmeros.
0 composto 25e foi preparado da mesma maneira que 22e utilizando 25d e ácido 28d em vez de 1 e e 22e, respetivamente em 270 de rendimento como uma mistu® complexa de rotâmeros.
Uma solução de 25e (238,3 mg, 0,390 namol) em dicloroetano (100 ml) foi tratada com catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (48,9 mg, 0,078 mmol). Após agitar a refluxo durante 1,5 h, a reação foi arrefecida até TA e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho 10 g Isolute eluído por gravidade com um gradiente contínuo de acetato de etilo/metanol 1:0 to 95:5 seguido de TLC preparativa eluído com acetato de etilo/metanol 97:3 (2 eluções) para proporcionar o composto final (10,2 mg, 5ã) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CD3CN) δ 0,85-0,97 (m, 6H) , 1,21-1,35 (m, 8H) , 1,42-1,62 (m, 3H) , 1,64-1,77 (m, 2H) , 1,80-1,89 (m, 2H) , 2,27-2,38 (m, 2H) , 2,52 (dd, J = 7,6, 3,1 Hz, 1 H) , 2,76 (s, 3H) , 2,82-3,06 (m, 2H), 3,27-3,35 (m, 1 H), 3,47 (s, 3H), 3,80-
3,91 (m, 1 H), 4,06 (dd, J = 9,1, 8,2 Hz, 1 H), 4,23 (d, J = 11,8 Hz, 1 H) , 4,41 (dd, J = 12,9, 3,6 Hz, 1 H) , 5,44 (app pentet, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,10-6,30 (m, 2H), 6,43 (d, J = 16,0 Hz, 1 H), 6,88 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,96 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,04 (s, 1 H), 7,13-7,28 (m, 2H). LCMS (m/z) 582,3 [ΜμΗ], Tr =2,57 min. EXEMPLO 26: Composto 26
Uma solução de (S)-4-benzil-3-((R)-2-metil-pent-4-enoil)-oxazolidin-2-ona (1,65 g, 6,04 mmol, preparado como em Synlett 2002, 12, 2039-2040) em etanol/água (22 ml, 10:1) foi tratado com cloreto hidrato de ródio(III) (31,6 mg, 0,15 mmol) . Após agitar a 85°C durante 24 h, a mistura de reação foi arrefecida até TA e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/dietil éter de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (892,7 mg, 540 ) como um óleo inolor.
Uma solução arrefecida (0°C) de 26a (893 mg, 3,27 mmol) em tetrahidrofurano/água (30 ml, 2:1) foi subsequentemente tratado com perõxido de hidrogénio (1,7 ml, 16,33 mmol, 30ã em água) e hidróxido de lítio hidrato (274 mg, 6,53 mmol) . Após agitar durante 1,5 h a 0°C, a reaç0 o foi extinta com metabissulfito de sódio (6,2 g, 32,66 mmol). Após agitar a TA durante 40 min, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico (2 M) e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x) . Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (307,1 mg, 82ã) como um óleo incolor.
0 composto 26c foi preparado da mesma maneira que 25c utilizando 22b em vez de 25b em rendimento quantitativo.
Uma solução de ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (261,2 mg, 0,653 mmol), 26c (108,4 mg, 0,544 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (79,7 mg, 0,653 mmol) em diclorometano (10 ml) foi tratado com cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-AT'-etilcarbodiimida (166,9 mg, 0,870 mmol). Após agitar a TA durante 17 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo 1:0 a 1:4 a 0:1 para proporcionar o composto do título (139,6 mg, 44ã) como um sólido branco.
Uma solução arrefecida (0°G) de 26d (139,6 mg, 0,240 mmol) em diclorometano anidro (10 ml) foi tratado com metanossulfonato de trimetilsililo (90 μΐ, 0,480 mmol). Após agitar durante 1,5 ha 0°C, a reação foi extinta com bicarbonato de sódio saturado. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o intermediário amina. Uma soluçlEI o desta amina, ácido (E) - (R) -2-metil-penfc3-enoico (32,9 mg, 0,288 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol (38,9 mg, 0,288 mmol) em acetonitrilo (10 ml) foi tratado com cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (64,4 mg, 0,33 6 mmol) . Após agitar a TA durante 17,5 h os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de í so-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título (69,8 mg, 50ã) como um óleo incolor.
0 composto 2 6 foi preparado da mesma maneira que composto 25 utilizando 26e em vez de 25e em 4ã de rendimento. XH RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,94-1,00 (m, 6H) , 1,47 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 1,63 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,67- 1,80 (m, 5H) , 1,85-2,07 (m, 3H) , 2,76 (td, J = 12,1, 3,3
Hz, 1H) , 3,79-3,86 (m, 1H) , 4,28 (d, J = 10,5 Hz, 1 H) , 4,36-4,46 (m, 1H), 5,73 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,93 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,32-6,51 (m, 2H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,65 (s, 1 H) , 7,77-7,85 (m, 2H) , 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 536,1 [ΜμΗ], Tr = 1,80 min. EXEMPLO 27: Composto 27
Uma solução arrefecida (-78°C) de (R)-4-benzil-3- propionil-oxazolidin-2-ona (3,00 g, 12,9 mmol) em tetrahidrofurano anidro (40 ml) foi tratado com bis(trimetilsilil)amida de potássio (19,3 ml, 19,3 mmol, 1 M em tetrahidrofurano). Após agitar durante 0,45 h a -78°C, a mistura foi tratada com brometo de alilo (5,6 ml, 64,3 mmol) . Após agitar durante 2 h a -40°C, a reação foi extinta com ácido clorídrico a 2 M. 0 aquoso foi extraído com acetato de etilo (2 x 50 Os orgânicos foram combinados, e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (2,73 g, 780 ) como um óleo incolor.
Uma soluçS o de 27a (2,73 g, 9,97 mmol) em etanol/gua (22 ml, 10:1) foi tratada com cloreto hidrato de ródio(III) (52 mg, 0,25 mmol)· Após agitar a 85°C durante 3 h, a mistura de reaçS o foi arrefecida ate TA e os volatès foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (1/76 g, 65ã) como um óleo incolor.
Uma soluçB o arrefecida (0°C) de 27b (1,76 g, 6,44 mmol) em tetrahidrofurano/água (60 ml, 2:1) foi subsequentemente tratada com peróxido de hidrogénio (3,3 ml, 32,2 mmol, 30ã em água) e hidróxido de lítio hidrato (534 mg, 12,9 mmol) . Após agitar durante 2 h a 0°C, a reaçlEI o foi extinta com metabissulfito de sódio (122 g, 64,4 mmol) . Após agitar a TA durante 1 h, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico a 2 M e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 100 ml) . Os orgânicos foram combinados, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (463 mg, 63ã) como um óleo incolor.
Um arrefecida (0°C) solução de éster (R)-1-(7-vinil-quinolin-2-il)-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (380 mg, 0,65 mmol) em diclorometano anidro (10 ml) foi tratado com metanossulfonato de trimetilsililo (237 μΐ, 1,31 mmol). Após agitar durante 1 h a 0 °C, a reação foi extinta com bicarbonato de sódio saturado. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os orgânicos foram separados e combinado, voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o intermediário amina (305 mg). Uma solução desta amina, 27c (90 mg, 0,76 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol (103 mg, 0,76 mmol) em acetonitrilo (20 ml) foi tratado com cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-A7/-etilcarbodiimida (170 mg, 0,89 mmol) . Após agitar a TA durante 16 h os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de í so-hexanos/ace tato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título (236 mg, 6 513 ) com um óleo incolor.
0 composto 27 foi preparado da mesma maneira que composto 25 utilizando 27d em vez de (S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((2R,3R)-3-metoxi-2-metil-hept- 6 -enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido metil-((R)-6-vinil-indan-l-il)-amida em 5ã de rendimento. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,85-1,00 (m, 6H) , 1,30 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,58 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,62- 1,80 (m, 6H), 1,83-2,07 (m, 3H), 2,10-2,82 (m, 1 H), 3,38- 3,48 (m, 1 H) , 3,76-3,84 (m, 1 H) , 4,20-4,28 (m, 1 H) , 4,36-4,47 (m, 1 H) , 5,62-5,74 (m, 1 H) . 5,93 (q, J = 6,9
Hz, 1 H) , 6,30-6,51 (m, 2H) , 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,63 (s, 1 H), 7,70-7,80 (m, 2H), 8,13-8,22 (m, 1 H). LCMS (m/z) 536,2 [ΜμΗ], Tr = 2,15 min. EXEMPLO 28: Composto 28
Carbonato de potássio (647 mg, 4,68 mmol) e dicarbonato de di-terc-butilo (716 mg, 3,28 mmol) foram adicionados a 2-(3-bromo-fenil)-piperidina (750 mg, 3,12 mmol) em diclorometano (10 ml). Após agitação durante a noite a TA água (20 ml) foi adicionado à solução. A solução bifásica resultante foi separada em fases orgânicas e aquosas. A fase aquosa foi retro-extraída com diclorometano (20 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas para proporcionar o composto do título (1,03 g, 970 ) com um óleo amarelo pálido.
A uma solução de 2 8a (1,03 g, 3,03 mmol) e viniltrifluoroborato de potássio (488 mg, 3,64 mmol) em n-propanol (30 ml), sob uma atmosfera de azoto foi adicionado 1,1'bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaládio(II), aduto de diclorometano (49 mg, 0,06 mmol) e trietilamina (306 mg, 422 μΐ, 3,03 mmol). A reação foi aquecida até refluxo e deixada a agitar durante 3 h antes de arrefecimento até TA. A mistura de reação foi vertida sobre água e a solução resultante foi extraída com dietil éter (3 x 30 ml) . Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. O resíduo resultante foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (652 mg, 75%) como um óleo amarelo pálido.
Uma solução de (2R, 3R)-1-((1R,5S)-10,10-dimetil-3,3- dioxo-32ambda*6*-tia-4-aza-triciclo[5,2.1,0*1,5*]dec-4-il)-3 -hidroxi-2-metil-hept- 6 -en-1-ona (250 mg, 0,703 mmol) em diclorometano anidro (7 ml) foi preparado e tetrafluoroborato de trimetiloxónio (208 mg, 1,406 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a TA durante 15 h. A mistura de reação foi tratada com metanol (1 ml) , então ácido clorídrico a 2 M (20 ml) e salmoura saturada (20 ml) . A mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 15 ml) e o extrato foi seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado para dar uma goma amarela. A goma foi purificada por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para dar o composto do título (223 mg, 86® ) como uma goma incòor.
Uma solução de 2 M hidróxido de lítio em água (5 ml, 10 mmol) foi adicionada a uma solução agitada de 28c (223 mg, 0,60 mmol) em tetrahidrofurano (15 ml). A mistura agitada foi aquecida até 60°C durante 15 h. A mistura de reação foi parcialmente evaporada antes de adicionar ácido clorídrico a 2 M (20 ml) . A solução foi extraída com acetato de etilo (3 x 15 ml). 0 extrato foi seco em sulfato de sódio, filtrado e evaporado para dar uma goma amarela (209 mg) . A goma foi purificada por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 3:1 para render o composto do título (68 mg, 66%) como uma goma amarela.
Uma solução de éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2 -fcerc-butoxicarbonilamino-3-metilbutirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (316 mg, 0,59 mmol) em diclorometano anidro (10 ml) foi arrefecida até 0°C sob uma atmosfera de azoto antes de adicionar trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (160 μΐ, 0,885 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 2 h antes de adicionar N,N~ diisopropiletilamina (413 μΐ, 2,36 mmol) para proporcionar éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico. A mistura foi evaporada e o resíduo dissolvido com ácido (2R,3R)-3-metoxi-2-metil-hept-6-enoico (162 mg, 0,94 mmol.) em acetonitrilo (13 ml) e cloridrato de N~ {3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (250 mg, 1,32 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol (220 mg, 1,32 mmol) foram adicionados. A reação foi agitada a TA durante 15 h então evaporada para dar um óleo amarelo. 0 óleo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando acetato de etilo para dar o composto do título (425 mg, 77ã) como um sólido branco.
Uma solução de 28e (425 mg, 0,725 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml) foi preparada e zinco em pó (0,48 g, 7,25 mmol) foi adicionado seguido de uma solução aquosa de acetato de amónio (1 M, 5 ml, 5 mmol) . A mistura de reação foi agitada a TA durante 15 h. A reação foi filtrada através de lavagem de hyflo-supercel através de com acetato de etilo. A mistura foi tratada com ácido clorídrico (2 M, 30 ml) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (25 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, filtradas e evaporadas para dar uma goma incolor (2 99 mg) que foi utilizadas diretamente sem purificaçS o adicional.
Uma solução de éster terc-butílico do ácido 2-(3-vinil-fenil)-piperidina-l-carboxílico (650 mg, 2,26 mmol) em diclorometano (15 ml) foi arrefecida até 0°C, antes de adicionar trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (569 μΐ, 3,39 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1 h antes de adicionar AT, .W-diisopropi let i lamina (1,6 ml, 5,24 mmol) para proporcionar the 2-(3-vinilfenil)-piperidina como um sólido amarelo. 0 sólido foi redissolvido, juntamente com 28f (900 mg, 1,98 mmol) em acetonitrilo (20 ml) . A solução foi arrefecida até 0°C, antes de adicionar hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(1 H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilo urónio (1,05 g, 2,77 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (1,4 ml, 7,92 mmol). A mistura de reação agitada foi deixada a aquecer lentamente até TA. Após 2 h, o solvente foi evaporado e o resíduo restante dissolvido em acetato de etilo (30 ml) e lavado com água (3 x 3 0 ml) . Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo resultante foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título (1,25 g, 100%) como um sólido amarelo.
A uma solução agitada de 28g (1,05 mg, 1,68 mmol) em 1,2-dicloroetano (550 ml) foi adicionado catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (105 mg, 0,168 mmol). A solução foi aquecida até 84°C e foi deixada a agitar durante 2,5 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo restante foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo/acetona de 1:0:0 a 0:9:1. Isto material foi então submetido a uma segunda rodada de cromatografia em gel de sílica utilizando o mesmo gradiente para proporcionar um sólido amarelo. Uma rodada final de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo puro e eluindo puramente por gravidade proporcionou o composto do título (175 mg, 18ã) como um sólido branco como um 6:4 mistura de diastereoisómeros. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,84 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 0,91-1,01 (m, 6H) , 1,24-1,37 (m, 6H) , 1,47- 2,03 (m, 14H) , 2,06 (s, 2H) , 2,14-2,25 (m, 1H), 2,43-2,77 (m, 4H) , 3,48 (s, 1H) , 3,56 (s, 2H) , 3,63-3,86 (m, 1 H) , 4,00 (app t, J- = 14,7 Hz, 1 H) , 4,12-4,17 (m, 1 H) , 4,53- 4,65 (m, 1 H) , 5,45 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 6,27-6,50 (m, 2H) , 6,99-7,10 (m, 2H) , 7,14-7,22 (m, 1 H) , 7,32-7,38 (m, 1 H). LCMS (m/z) 596,4 [ΜμΗ], Tr = 2,51 min. EXEMPLOS 29 E 30: Compostos 29 e 30
0 composto 28 (155 mg, 0,26 mmol) foi dissolvido numa mistura 1:1 de acetonitrilo/ãgua a uma concentração de 7,8 mg/ml. Esta solução foi então eluída através de um sistema de HPLC de fase reversa equipado com uma coluna Fenomenex Gemini 10m 110A, 250 x 21,2 mm utilizando um fluxo isocrático 2:3 de acetonitrilo/água a 20 ml/min. A mistura foi resolvida nos 2 diastereoisómeros separados. Em concentração cada diastereoisómero separado rendeu um sólido branco. A estereoquímica de cada isómero não foi determinada. Primeiro isómero eluído, Composto 29 (15 mg, 1013 ).¾ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,89-1,05 (m, 8H) , 1,20- 1,44 (m, 10H), 1,51-1,79 (m, 3H), 1,83-1,99 (m, 4H), 2,03- 2,27 (m, 3H) , 2,33-2,67 (m, 3H) , 2,76 (app t, J ~ 12,3 Hz, 1 H) , 3,09 (app t, J = 12,3 Hz, 1H) , 3,22-3,38 (m, 1H) , 3,47 (s, 3H) , 3,54-3,62 (m, 1H) , 4,17 (d, J = 11,7 Hz, 1 H) , 4,59 (d, J = 10,5 Hz, 1 H) , 5,39-5,53 (m, 1 H) , 6,01 (s, 1 H), 6,09-6,23 (m, 1 H), 6,30-6,55 (m, 2H), 6,99-7,23 (m, 4H). LCMS (m/z) 596,4 [ΜμΗ], Tr = 2,53 min.
Segundo isómero eluído, Composto 30 (22 mg, 140 ) . 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ 0, 98-1,04 (m, 6H) , 1,26-1,38 (m, 7H) , 1,62-1,80 (m, 5H) , 1,83-2,00 (m, 4H) , 2,03-2,14 (m, 1H), 2,16-2,25 (m, 2H), 2,36-2,51 (m, 2H), 2,54-2,66 (m, 1 H) , 2,68-2,82 (m, 1 H) , 3,03-3,16 (m, 1 H), 3,26-3,34 (m, 1 H) , 3,48 (s, 3H) , 3,64-3,73 (m, 1 H) , 3,76-3,86 (m, 1 H) , 4,00 (app t, J = 9,0 Hz, 1 H) , 4,16 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 4,55-4,66 (m, 1H) , 5,41-5,53 (m, 1H) , 5,97-6,06 (m, 1H) , 6,10-6,22 (m, 1 H) , 6,35 (s, 1 H) , 6,38-6,49 (m, 1 H) , 7,00-7,11 (m, 2H) , 7,14-7,23 (m, 3H) . LCMS (m/z) 596,3 [MS Η], Tr = 2,49 min. EXEMPLO 31: Composto 31
Uma solução arrefecida (0°C) de (R)-4-benzil-3-[(R)-2-((S)-1-hidroxi-etil)-but-3-enoil]-oxazolidin-2-ona (233,6 mg, 0,807 mmol, preparada conforme descrito em Org. Lett. 2007, 9, 1635-1638) e imidazol (241,7 mg, 3,551 mmol) em N,N- dimetilformamida (2 ml) foi tratada com cloreto de terc-butildimetilsililo (158,2 mg, 1,049 mmol). Após agitar durante 24 h a TA, a reação foi extinta com cloreto de amónio saturado. A camada aquosa foi extraída com dietil éter (2 x 20 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho dee 25 g I solute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (294,6 mg, 90%) como um óleo incolor.
Uma solução de 31a (294,6 mg, 0,730 mmol), (R)-1-(7- bromo-quinolin-2-il)-etanol (184,0 mg, 0,730 mmol), acetato de paládio(II) (32,8 mg, 0,146 mmol), tri-(o-toluil)fosfina (44,4 mg, 0,146 mmol) em anidro 1,4-dioxano (10 ml) foi tratada com N, N-dicilohexilmetilamina (250 μΐ, 1,168 mmol) . Após agitar a 100°C durante 5 h, a reação foi arrefecida até TA, diluída com diclorometano e bicarbonato de sódio saturado. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 7:3 para proporcionar o composto do título (230,8 mg, 55%) como um óleo incolor.
Uma solução arrefecida (0°C) de 31 b (230,8 mg, 0,401 mmol) em tetrahidrofurano/água (15 ml, 2:1) foi subsequentemente tratada com peróxido de hidrogénio (30% aquoso, 210 μΐ, 2,005 mmol) e hidróxido de lítio hidrato (33,7 mg, 0,803 mmol). Após agitar durante 2 h a 0°C, a reação foi extinta com metabissulfito de sódio (765 mg, 4,1 mmol) . Após agitar durante 3,5 h a TA os voláteis foram removidos a vácuo. A mistura foi então diluída com água e o pH foi ajustado com carbonato de potássio. A camada aquosa foi lavada com diclorometano (2 x 20 ml) e acidificada com ácido clorídrico a 2 M (pH ~1) então extraída com diclorometano (3 x 30 ml). Todos os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título (69,8 mg, 42ã) como um sólido branco.
O composto 31 d foi preparado da mesma maneira que 22e utilizando 31 c em vez de ácido (E)-4-[2-((R)-1-acetoxietil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico em 46ã de rendimento.
0 composto 31 foi preparado da mesma maneira que Composto 22 utilizando 31 d em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}- 3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3 ~ carboxílico em 10a de rendimento. 1H RMN (3 00 MHz, CDC13) δ 1/00 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,22- 1,44 (m, 4H), 1,64 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,68-1,77 (m, 4H), 1,89-2,08 (m, 3H), 2,71-2,84 (m, 1 H), 3,78-3,86 (m, 1H), 4,11 (dd, J = 8,2, 6,2 Hz, 1 H) , 4,17-4,25 (m, 2H) , 4,38- 4,47 (m, 1 H), 5,68 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,94 (q, J = 6,9
Hz, 1 H) , 6,47 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 6,69 (dd, J = 16,5, 5,3 Hz, 1 H) , 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,68 (s, 1 H) , 7,76 (dd, J = 8,7, 1,3 Hz, 1 H), 7,81 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 566,1 [M§ H] , Tr = 1,65 min. EXEMPLO 32: Composto 32
A uma solução arrefecida (0°C) de propionato de etilo (2 ml, 19,735 mmol) em diclorometano (50 ml) foi adicionado gota a gota morfolina (1,7 ml, 19,435 mmol). Após agitar a TA durante 1,5 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com diclorometano/metanol 20:1 para proporcionar o composto do título (3,5034 g, 97%) como um óleo incolor.
Uma solução arrefecida (0°C) de 4-bromoanilina (2,7 g, 15,7 mmol) em água (30 ml) foi subsequentemente tratada com ácido clorídrico concentrado (3,5 ml) e nitrito de sódio (1,3 g, 18,840 mmol). Após 20 min a 0°C, ácido clorídrico concentrado (5,3 ml) e tetrafluoroborato de sódio (6,9 g, 62,847 mmol) foram adicionados. Após 40 min a 0°C, o intermediário diazonio foi filtrado, lavado com água, metanol e dietil éter (2,1021 g) e foi utilizado sem purificação adicional. Uma solução do diazonio (7,762 mmol) em acetonitrilo (50 ml) foi tratado com 32a (1,6614 g, 8,970 mmol). Após lha TA, gel de sílica foi adicionado. Após agitar a TA durante 16 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 9:1 para proporcionar o composto do título (1,9811 g, 85ã) como um sólido altamente colorido e como uma mistura de tautõmeros.
Uma solução de 32b (1,9811 g, 6,623 mmol) em ácido sulfúrico concentrado (25 ml) foi aquecida a 100°C durante 3 h. Após arrefecimento até 0°C, a mistura foi diluída com água (150 ml) e um sólido castanho foi retirado por meio de filtração. 0 filtrado foi extraído com dietil éter (2 x 50 ml) , diclorometano (2 x 50 ml) e acetato de etilo (50 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o composto do título (1,5094 g, 9OKI ) orno um sólido laranja que se tornou escuro em repouso.
Uma solução arrefecida (0°C) de 32c (1,5094 g, 5,964 mmol), cloridrato de N,O-dimetilhidroxilamina (755,9 mg, 7,753 mmol) e N, N- diisopropiletilamina (4,2 ml, 23,856 mmol) em acetonitrilo (50 ml) foi tratado com hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (3,175 g, 8,350 mmol). Após agitar durante 6 h a TA, a mistura foi arrefecida até 0 °C e extinta com ácido clorídrico a 1 M (60 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 50 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (1,4229 g, 81ã) como um sólido amarelo brilhante.
Uma solução arrefecida (-78°C) de 32d (1,4229 g, 4,805 mmol) em tetrahidrofurano (50 ml) foi tratada com cloreto de metilmagnésio (3,2 ml, 9,610 mmol, 3 M em dietil éter). Após 1 h a-78°C e 3 h a 0°C, a reação foi extinta com cloreto de amónio saturado (30 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 50 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (751,5 mg, 620 ) orno um sólido amarelo.
Uma solução de 32e (751,5 mg, 2,993 mmol) em tetrahidrofurano (30 ml) foi tratado com (S)-(-)-2-metil-CBS-oxazaborolidina (3,6 ml, 3,592 mmol, 1 M em tolueno). Após 10 min a TA a mistura foi arrefecida até -60°C e tratado com borano-tetrahidrofurano complexo (6 ml, 5,986 mmol, 1 M em tetrahidrofurano). Após 1,5 h a -55°C to -30°C, a reação foi extinta com metanol (20 ml). Após agitar a ΤΑ durante 16 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (345,0 mg, 450 ) como um sólido amarelo.
Uma solução de 32f (345,0 mg, 1,363 mmol), paládio II acetato (61,2 mg, 0,273 mmol), tri-(o-toluil)fosfina (83,1 mg, 0,273 mmol), éster terc-butílico do ácido 3-butenoico (560 μΐ, 3,407 mmol) e N,N-diciclohexilmetilamina (470 μΐ, 2,181 mmol) em anidro 1,4-dioxano (20 ml) foi aquecida a 100°C durante 1,7 h. Após arrefecimento até TA os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 2:3 para proporcionar o composto do título (244,1 mg, 57ã) como um sólido amarelo.
Uma solução arrefecida (0°C) de 1 e (422,0 mg, 0,793 mmol) em tetrahidrofurano/água (25 ml, 4:1) foi tratada com hidróxido de lítio hidrato (67,0 mg, 1,587 mmol). Após agitar a 0°C durante 1,5 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico a 1 Μ (20 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 30 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo então tricloroetanol residual foi retirado por azeotropia com tolueno (3 x) para dar o intermediário ácido como um sólido branco que foi então combinado com 32g (244,1 mg, 0,793 mmol) , 4-dimetilaminopiridina (97,0 mg, 0,793 mmol), cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (243,3 mg, 1,269 mmol) e diclorometano (20 ml). Após agitar a TA durante 16 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico diluído. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (30 ml) . Os orgânicos foram combinados e filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexano/sacetato de etilo de 1:0 a 1:2 para proporcionar o composto do título (164,4 mg, 300 ao longo de 2 etapas) como um vidro amarelo.
Uma solução arrefecida (0 °C) de 32h (164,4 mg, 0,236 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) foi tratado com metanossulfonato de trimetilsililo (170 μΐ, 0,944 mmol). Após agitar durante lha 0°C, a reação foi extinta com N,N~diisopropiletilamina (330 μΐ, 1,888 mmol) e os voláteis foram removidos a vácuo. Uma solução arrefecida (0°C) do aminoácido bruto em acetonitrilo (80 ml) foi subsequentemente tratado com JW,W-diisopropiletilamina (330
μΐ, 1,888 mmol) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (125,6 mg, 0,330 mmol). Após agitar a ΤΑ durante 2,5 h, os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto final (170,7 mg) como uma mistura. HPLC preparativa de fase reversa que foi eluído com um gradiente de água/acetonitrilo de 95:5 a 0:100 proporcionou o composto do título (30,6 mg, 25ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,03 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,61 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,66-2,07 (m, 8H), 2,68-2,81 (m, 1 H), 2,97-3,07 (m, 1 H), 3,35-3,47 (m, 1 H), 3,76-3,89 (m, 1 H) , 4,28 (d, J = 9,4 Hz, 1 H) , 4,37-4,47 (m, 1 H) , 4,53-4,67 (m, 1 H) , 5,52 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 6,36-6,51 (m, 2H), 6,72 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,97 (dd, J = 8,9, 1,6 Hz, 1 H), 8,06 (s, 1 H), 8,38 (d, J = 8,9 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 523,1 [ΜμΗ], Tr = 1,65 min. EXEMPLOS 33 E 34: Compostos 33 e 34
Uma solução arrefecida (0°C) de éster 3- (2,2,2-tricloro-etilílico) de éster 1,2-di-terc-butílico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxílico (5,5297 g, 11,975 mmol) em tetrahidrofurano/metanol (50 ml, 1:1) foi tratado com fluoreto de tetrabutilamónio (23,9 ml, 23,950 mmol, 1 M em tetrahidrofurano). Após agitar a TA durante 24 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em dietil éter e bicarbonato de sódio saturado. A camada aquosa foi extraída com dietil éter (50 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 9:1 onde as frações misturadas foram ainda purificadas por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (3,9765 g, 96ã) como um óleo incolor e como uma mistura de rotâmeros.
Uma soluçS o arrefecida (-78°C) de 33a (1,4112 g, 4097 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 ml) foi tratada com bis(trimetilsilil)amida de lítio (6,2 ml, 6,146 mmol, 1 M em tetrahidrofurano). Após agitar durante 1,25 h a -78°C, a mistura foi tratada com iodometano (640 μΐ, 10,242 mmol). Após agitar durante lha -78°C, lha 0°C e 1 h a TA, a reaçS o foi extinta com pH 7 tampS o a 0°C. 0 aquoscfoi extraído com diclorometano (2 x 50 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (760,7 mg, 52ã) como um óleo incolor e como uma mistura de rotâmeros.
Uma soluçS o arrefecida (0°C) de ácido (S)-2£erc-butoxicarbonilamino-3-metil-butírico (3,020 g, 13,908 mmol), cloridrato de éster metílico do ácido (S)-2-amino-propiónico (1,9413 g, 13,908 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (17,1 ml, 55,632 mmol) em acetonitrilo (50 ml) foi tratado com hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (7,403 g, 19,471 mmol) . Após agitar a TA durante 6 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 100 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 100 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g I solute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (4,0996 g, 97% ) como um sólido branco.
Uma solução arrefecida (0°C) de 33c (317,0 mg, 1,048 mmol) em tetrahidrofurano/água (12 ml, 5:1) foi tratado com hidróxido de lítio hidrato (88,0 mg, 2,096 mmol). Após agitar a 0°C durante 2,5 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 30 ml) . A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 30 ml) . Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar ácido bruto como um sólido branco.
Uma solução arrefecida (0°C) de 33b (376,0 mg, 1,049 mmol) em diclorometano anidro (15 ml) foi tratada com ácido trifluoroacético (5 ml). Após agitar a 0°C durante 30 min e TA durante 2 h, ácido trif luoroacético (4 ml) foi adicionado. Após 1 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o ácido trifluoroacético residual foi retirado por azeotropia com tolueno (3 x) para proporcionar o sal de amónio de ácido bis-trifluoroacético como um sólido branco pérola. Uma solução arrefecida (0°C) do sal de amónio de ácido bis-trifluoroacético e ácido (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propiónico bruto como preparado na etapa anterior em diclorometano anidro (15 ml) foi subsequentemente tratado com N-metilmorfolina (580 μΐ, 5,240 mmol) e hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-l-il)-Ν,Ν,Ν' ,N'-tetrametilurónio (596,2 mg, 1,572 mmol). Após agitar durante 19 h a TA, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 30 ml) . 0 aquoso foi extraído com diclorometano (2 x 30 ml). Os orgânicos foram combinados, lavados com bicarbonato de sódio saturado aquoso e filtrados através de um separador de fase. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de í so-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:2 para proporcionar o composto do título (373,1 mg, 83ã ao longo de 2 etapas) como uma espuma branca e como uma mistura de diastereoisómeros.
Uma solução arrefecida (0°C) de 33e (373,1 mg, 0,871 mmol) em diclorometano anidro (10 ml) foi tratado com metanossulfonato de trimetilsililo (310 μΐ, 1,741 mmol).
Após agitar durante lha 0°C, a reaç0 o foi extinta com N,N~diisopropiletilamina (610 μΐ, 3,484 mmol) e os voláteis foram removidos a vácuo. Uma solução arrefecida (0°C) da amina bruta e ácido (E)-(2R,3R)-3-metoxi-2-metil-hex-4-enoico (137,8 mg, 0,871 mmol) em acetonitrilo anidro (15 ml) foi subsequentemente tratado com N,N- diisopropiletilamina (610 μΐ, 3,484 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (463,7 mg, 1,219 mmol). Após agitar a TA durante 18 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 30 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 30 ml) . Os orgânicos foram combinados, lavados com bicarbonato de sódio saturado (20 ml) , secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:2 a 1:4 para proporcionar o composto do título (332,2 mg, 81ã) como um sólido incolor e como uma mistura de diastereoisómeros.
0 composto 33g foi preparado da mesma maneira que éster (R)-1-[6-((E)-3-terc-butoxicarbonil-propenil)- cinnolin-3-il]-etílico do ácido (S)-l-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metilbutirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3-carboxí1ico utilizando 33f e (R)-ΙΟ-vinil-isoquinolin-6-il) -etanol em vez de le e éster terc-butílico do ácido (E)-4-[3-((R)-1-hidroxietil)-cinnolin-6-il]-but-3-enoico em 300 de rendimento ao longo de 2 etapas.
Uma solução de 33g (136,2 mg, 0,214 mmol) em tolueno (70 ml) foi desgaseificado borbulhando gás N2 através durante 20 min. catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (27 mg, 0,043 mmol) foi adicionado e a mistura foi submetida a refluxo durante 2,5 h. Mais catalisador de 2a geração de Hoveyda - Grubb s (20 mg) foi adicionado e após agitar a refluxo durante 1 h, a mistura foi arrefecida até TA, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de acetato de etilo/acetona 1:0 a 10:1 para proporcionar ambos os diastereoisómeros em misturas separadas. Ambas as misturas foram purificadas por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 10 g Isolute eluído por gravidade com um gradiente contínuo de acetato de etilo/acetona de 1:0 a 10:1 para proporcionar o diastereoisómero mais polar (19,7 mg, 1513 ) como um solido branco. 0 diastereómero menos polar foi ainda purificado por meio de TLC preparativa eluída com acetato de etilo (4 eluições) e subsequente TLC preparativa eluído com iso-hexanos/acetona 7:3 (2 eluições) para proporcionar o composto do título (7,6 mg, 6ã) como um sólido branco. Estereoquímica relativa não foi designada. Diastereoisómero mais polar 33: ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,83-1,07 (m, 7H) , 1,41 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,47 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,50 (S, 3H), 1,70 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,75-1,90 (m, 2H), 1,96- 2,15 (m, 3H), 2,64 (dd, J = 7,6, 3,1 Hz, 1H), 2,70-2,84 (m, 1H) , 3,42 (s, 3H) , 3,90 (dd, J = 8,7, 3,1 Hz, 1 H) , 4,00 (app t, J = 8,0 Hz, 1 H) , 4,10 (s, 1 H) , 4,58-4,69 (m, 1 H), 6,00 (dd, J = 9,4, 7,1 Hz, 1 H), 6,22 (q, J = 6,2 Hz, 1 H), 6,51 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 6,93 (s, 1 H), 7,13-7,23 (m, 1 H), 7,34-7,43 (m, 1 H), 7,90-7,97 (m, 2H), 8,47 (s, 1 H). LCMS (m/z) 594,3 [ΜμΗ], Tr = 1,87 min.
Diastereoisómero menos polar 34: 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ -0,51- -0,39 (m, 5H) , -0, 30 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 0,06 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 0,15 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 0,19 (s, 3H) , 0,25-0,34 (m, 4H) , 0,38-0,45 (m, 1H) , 0,81-1,02 (m, 2H) , 1,14-1,42 (m, 2H) , 2,69 (dd, J = 8,7, 2,9 Hz, 1 H), 3,00-3,10 (m, 2H), 3,45 (s, 3H), 4,32 (app pentet, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,76 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,53 (d, J = 16,3
Hz, 1H) , 5,85 (dd, J = 16,1, 8,9 Hz, 1H) , 6,20 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,65-6,75 (m, 2H) , 6,91 (s, 1 H) , 7,11 (d, J = 7,3 Hz, 1 H) , 7,79 (s, 1 H). LCMS (m/z) 594,3 [ΜμΗ], Tr = 1,83 min. EXEMPLO 35: Composto 35
Uma soluçEI o arrefecida (0°C) de ácido 2-fluoro-5-hidroxi-benzoico (1,0051 g, 6,438 mmol), cloridrato de N, 0-dimetilhidroxilamina (1,2560 g, 12,856 mmol) e trietilamina (3,6 ml, 25,752 mmol) em diclorometano (35 ml) foi tratado com hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1 -il)-Ν,Ν,Ν' ,N' -tetrametilurónio (3,663 g, 9,658 mmol). Após agitar a TA durante 20 h, a reação foi extinta a 0°C com ácido clorídrico (2 M, 30 ml) . A emulsão foi filtrada em Celite então a camada aquosa foi extraída com diclorometano (50 ml). Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de tolueno/dietil éter de 1:0 a 1:2 para proporcionar o composto do título (260,5 mg, 20%) como um óleo incolor.
Uma solução de 35a (260,5 mg, 1,308 mmol) em acetona (20 ml) foi subsequentemente tratada com carbonato de potássio (903,8 mg, 6,539 mmol) e brometo de alilo (340 μΐ, 3,924 mmol) . Após agitar a TA durante 24 h, a reação foi extinta com água (20 ml). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 30 ml) . Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso- hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 3:2 para proporcionar ο composto do título (289,7 mg, 92ã) como um óleo incolor.
Uma solução arrefecida (-78°C) de 35b (289,7 mg, 1,210 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi tratado com cloreto de metilmagnésio (810 μΐ, 2,422 mmol, 3 M em dietil éter). Após 1,25 h a -78°C, 2 h a 0°C e 16 h a TA, cloreto de metilmagnésio (810 μΐ, 2,422 mmol, 3 M em dietil éter) foi adicionado. Após 2,5 h a -78°C e 1,2 h a TA, a reação foi extinta com gel de sílica e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 9:1 para proporcionar o composto do título (196,7 mg, 840 ) como um óleo incolor.
Uma solução de 35c (196,7 mg, 1,013 mmol) em tetrahidrofurano (15 ml) foi tratada com (S)-(-)-2-metil-CBS-oxazaborolidina (1,2 ml, 1,215 mmol, 1 M em tolueno). Após 10 min a TA a mistura foi arrefecida até -50°C e tratado com borano tetrahidrofurano complexo (2,1 ml, 2,026 mmol, 1 M em tetrahidrofurano) . Após 1,5 h a -50°C to -40°C, a reação foi extinta com metanol (6 ml). Após agitar a TA durante 22 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (179,4 mg, 900 ) como um sólido branco.
Uma solução arrefecida (0°C) de le (1,9973 g, 3,755 mmol) em diclorometano anidro (40 ml) foi tratado com trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (1,4 ml, 7,510 mmol) . Após 30 min a 0°C, a mistura de reação foi tratada com N,N-diisopropiletilamina (2,6 ml, 15,020 mmol) e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar a amina correspondente. Uma solução arrefecida (0°C) desta amina, ácido (E)-(2R, 3R)-2-metilhex-6-enoico (428,6 mg, 3,755 mmol, preparado conforme descrito em Synlett 2002, 12, pp2039-2040) e N, 77-diisopropi let i lamina (2,6 ml, 15,020 mmol) em acetonitrilo (50 ml) foi tratado com hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,999 g, 5,257 mmol). Após agitar a TA durante 2 0 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 100 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 ml) . Os orgânicos foram combinados, lavados com bicarbonato de sódio saturado, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:4 para proporcionar o composto do título (1,6735 g, 84% ) como um castanhoespuma.
Uma solução de 35e (534,7 mg, 1,013 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml) foi subsequentemente tratada com zinco em pó (1,457 g, 22,286 mmol) e uma solução de acetato de amónio (1,171 g, 15,195 mmol) em água (5 ml) . Após agitar a TA durante 24 h, a mistura foi filtrada através de Celite, 0 sólido foi enxaguado com bissulfato de potássio saturado e acetato de etilo. 0 pH do filtrado foi ajustado com ácido clorídrico a 2 M então a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 ml) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. Ácido acético residual foi retirado por azeotropia com tolueno (3x) para proporcionar o ácido correspondente como um sólido branco. Uma solução do ácido bruto, (R)-1-(5-aliloxi-2-fluoro-fenil)-etanol (179,4 mg, 0,914 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (123,7 mg, 1,013 mmol) em diclorometano (15 ml) foi tratado com cloridrato de 17-(3-dimetilaminopropil)-N' -etilcarbodiimida (310,8 mg, 1,621 mmol). Após agitar a TA durante 20 h, a reação foi extinta a 0°C com ácido clorídrico (2 M, 15 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:3 para proporcionar o composto do título (310,5 mg, 59E3 ao longo de 2 etapas) como um sólido branco.
Uma solução de 35f (310,5 mg, 0,540 mmol) em dicloroetano (180 ml) foi tratado com catalisador de 2 a geração de Hoveyda-Grubbs (67,7 mg, 0,108 mmol). Após agitar a refluxo durante 2 h, a reação foi arrefecida até TA e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 então utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído por gravidade com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título (109,9 mg) numa mistura. A purificação por meio de TLC preparativa eluído com íso-hexanos/acetona 3:1 (3 eluições) seguido de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetona de 1:0 a 3:2 proporcionou o composto do título (58,7 mg, 20%) como um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, CD3CN) δ 0,85-0,97 (m, 6H) , 1,17-1,22 (m, 3H) , 1,28-1,39 (m, 4H) , 1,44-1,63 (m, 6H) , 1,70-1,82 (m, 1H) , 1,83-1,92 (m, 1H) , 2,30-2,45 (m, 3H) , 3,62-3,73 (m, 2H), 3,89 (app t, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,28 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 4,40-4,60 (m, 2H) , 5,32 (app pentet, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,62-5,74 (m, 1 H), 5,77-5,89 (m, 1 H), 6,02 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,40 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 6,76-6,85 (m, 2H) , 7,01 (app t, J = 9,4 Hz, 1 H) , 7,19 (s I, 1 H) . LCMS (m/z) 547,2 [ΜμΗ], Tr = 2,39 min. EXEMPLO 36: Composto 36
A uma solução do Composto 35 (44,0 mg, 0,080 mmol) em acetato de etilo (5 ml) foi adicionado paládio em carbono (10% , 5 mg) . A atmosfera foi purgada de oxigénio, pós agitar a TA sob uma atmosfera de hidrogénio durante 2,5 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 20 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 3:2 seguido de TLC preparativa eluído com iso-hexanos/acetona 3:2 para proporcionar o composto final (19,0 mg, 43% ) como um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,85-0,99 (m, 8H), 1,14-1,22 (m, 4H), 1,26-1,42 (m, 4H), 1,48 (d, J = 6,7 Hz, 1H) , 1,52-1,84 (m, 8H) , 2,28-2,42 (m, 1H) , 3,61-3,72 (m, 1H), 3,75-4,10 (m, 4H), 4,25 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 5,26 (app pentet, J = 7,1 Hz, 1 H), 6,02 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,34 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,75-6,86 (m, 2H), 6,95-7,12 (m, 2H). LCMS (m/z) 549,3 [ΜμΗ], Tr = 2,54 min. EXEMPLO 37: (E)-(2R,5S,11S,14S,17R,18R)-2,14-Diisopropil- 18-metoxi-ll,17-dimetil-22-oxa-3,9,12,15,28-pentaaza-triciclo[21,3.1,1*5,9*]octacosa-1(27),19,23,25-tetraeno-4,10,13,16-tetraona: Composto 37
37a foi prepara-do da mesma maneira que 35b utilizando 3-hidroxibenzaldeído em vez de 2-fluoro-5-hidroxi-.W-metoxi-N-metil-benzamida em 780 de rendimento.
Uma suspensão arrefecida (0°C) de 37a (1,36 g, 8,434 mmol) e sulfato de magnésio (5 g) em diclorometano (40 ml) foi tratado com D-valinol (870,0 mg, 8,434 mmol). Após agitar a 0°C to TA durante 23 h, a mistura foi filtrada e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano anidro (40 ml) e foi subsequentemente tratado com trietilamina (1,3 ml, 9,277 mmol) e uma solução de cloreto de trimetilsililo (9,3 ml, 9,277 mmol, 1 M em diclorometano). Após agitar a TA durante 24 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi triturado com dietil éter/iso-hexano (100 ml, 1:1). 0 sólido branco foi retirado por meio de filtração e o filtrado foi evaporado até a secura para proporcionar o intermediário imina. Num balão de fundo redondo com 3 tubuladuras arrefecido (-40°C), equipped com um linha de azoto e um funil de adição foi introduzido anidro dietil éter (25 ml) e uma solução de iso-propillítio (29 ml, 20,242 mmol, 0,7 M em pentano) . A esta mistura, uma solução da imina em dietil éter anidro (25 ml) foi adicionado gota a gota ao longo de 15 min. Após agitar a -40°C durante 2,5 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (2 M, 50 ml) e a mistura foi deixada a aquecer a TA. A camada aquosa ácida foi basifiçada com péletes de NaOH a 0°C e então extraída com dietil éter (2 x). Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluido com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar ο composto do título (470,1 mg, 190 ao longo de 3 etpas) como um óleo incolor.
Uma solução de 3 7b (4 7 0,1 mg, 1,613 mmol) em metanol (10 ml) e meti lamina aquosa (3 ml, 4 0 ã em peso em água) foi tratado com ácido periódico (1,213 g, 5,323 mmol). Após agitar durante 24 h a TA mais aquoso metilamina (4 ml, 40 % em peso em água) e ácido periódico (1,213 g, 5,323 mmol) foram adicionados. Após agitar durante 17 h a TA a mistura foi filtrada em Celite e o sólido enxaguado com metanol. Os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi particionado entre água e dietil éter. A camada aquosa foi extraída com dietil éter, os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com acetato de etilo para proporcionar o composto do título (191,8 mg, 58ã) como um light óleo amarelo.
Uma soluçES o arrefecida (0°C) de ácido (S) -1- [ (S) -2 ((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (324,4 mg, 0,810 mmol) , 37c (166,3 mg, 0,810 mmol) e N, N- diisopropiletilamina (560 μΐ, 3,240 mmol) em acetonitrilo (15 ml) foi tratado com hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilo urânio (431,2 mg, 1,134 mmol) . Após agitar a TA durante 20 h, a reaç0 o foi extinta com ácido clorídrico (2 M, 25 mi a 0 °C. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x). Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título (230,5 mg, 48%) como um sólido.
0 composto 37e foi preparado da mesma maneira que éster metílico do ácido 1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-(2R,3R)-3-metoxi-2-metil-hex-4-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-3-meti1-hexahidropiridazina-3-carboxílico utilizando 37d em vez de éster metílico do ácido 1- [ (S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-3-metil-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em 30% de rendimento ao longo de 2 etapas.
0 composto 37 foi preparado da mesma maneira que 25 utilizando 37e em vez de metil-((R)-6-vinil-indan-l-il)-amida do ácido (S)-l-{(S)-2-[(S)-2-((2R,3R)-3-metoxi-2-metil-hept-6-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em 43§ de rendimnto. 1H RMN (300 MHz, d6-DMS0) δ 0,74-0,91 (m, 12H) , 1,15 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,28 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,40-1,64 (m, 3H), 1,71-1,88 (m, 3H), 1,98 (app sextet, J = 6,7 Hz, 1H), 2,66- 2,75 (m, 2H), 3,38-3,53 (m, 1H), 3,89 (dd, J = 6,7, 2,9 Hz, 1 H) , 4,10 (app t, J = 8,9 Hz, 1 H) , 4,14-4,22 (m, 1 H) , 4,42 (qd, J = 10,0, 4,2 Hz, 1 H), 4,57 (app t, J = 8,2 Hz, 1 H), 4,76 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 5,23 (app t, J = 7,3 Hz, 1 H) , 5,69-5,90 (m, 2H) , 6,77-6,90 (m, 3H) , 7,05 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,16-7,24 (m, 1H), 8,01 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,14 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 586,3 [ΜμΗ] , Tr = 2,34 min. EXEMPLO 38: Composto 38
A uma mistura de (R)-1-(3-bromo-fenil)-etanol (201 mg, 1,00 mmol), ácido 4-(2-etoxi-2-oxoetoxi)benzeneborónico (Acros Organics, 224 mg, 1,00 mmol) em 1,2-dimetoxietano (4 ml) foram adicionados carbonato de potássio (276 mg, 2,00 mmol) e água (1 ml). A mistura foi agitada a TA e tetrakis(trifenilfosfina) paládio(0) (58 mg, 0,05 mmol) foi adicionado então a mistura de reação foi aquecida a 100°C num reator de micro-ondas durante 30 min. A mistura de reação foi então diluída com acetato de etilo e água. As camadas foram separadas e os orgânicos lavados com água e salmoura, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo 9:1 to 7:3 para proporcionar o composto do título (230 mg, 760 ) como um óleo.
Uma solução de 38a (230 mg, 0,77 mmol) em tetrahidrofurano (4 ml) foi agitada a 5°C sob azoto, uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (92 mg, 1,54 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada a 5°C durante 2 h e então a TA durante a noite. A solução foi acidificada com ácido clorídrico a 2 M e extraída com acetato de etilo (2 x). Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com água e salmoura, secos sobre sulfato de magnésio e evaporados para proporcionar o composto do título (175 mg, 840 ) como um sólido braco.
Uma solução de le (372 mg, 0,70 mmol) em diclorometano (15 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água sob azoto. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,18 ml, 1,05 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 1 hora. Solução aquosa saturada fria de hidrogénio carbonato de sódio (15 ml) foi adicionado e a mistura foi agitada a 0°C durante 15 min. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de magnésio e evaporada para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3- metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropi ridaz ina-3 -carboxílico (0,70 mmol) que foi utilizado sem purificação adicional. Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (0,70 mmol) em acetonitrilo (15 ml) foi agitada a 0°C sob azoto. 38b (175 mg, 0,64 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol hidrato (123 mg, 0,64 mmol, humedecido com não menos de 20 % empeso de água) foram adicionados, seguido de cloridrato de N-{3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (173 mg, 0,90 mmol) e a mistura de reação foi agitada a TA durante 2 h. 0 solvente foi evaporado. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a solução foi lavada com água (3 x) seguido de salmoura, seco sobre sulfato de magnésio e evaporada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:2 a 0:1. 0 produto foi triturado com dietil éter e seco para proporcionar o composto do título (367 mg, 83%) como um sólido branco.
Uma solução de 38c (343 mg, 0,50 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi agitada a TA sob azoto. Zinco em pó (715 mg, 11 mmol) foi adicionado seguido de uma solução de acetato de amónio (578 mg, 7,50 mmol) em água (5 ml). A mistura de reação foi agitada a TA sob azoto durante 70 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo e ácido clorídrico a 2 M aquoso. 0 filtrado foi acidificado a pH 2 com ácido clorídrico a 2 M aquoso, cloreto de sódio sólido foi adicionado para saturar a camada aquosa e a mistura foi extraída com acetato de etilo. Os extratos de acetato de etilo foram combinados, lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio e evaporados. O resíduo foi co-evaporado com tolueno (3 x) para proporcionar o composto do título (237 mg, 860 ) como um pó branco.
Uma solução de 38d (100 mg, 0,18 mmol) em diclorometano (180 ml) foi agitado a TA sob azoto. 4-Dimetilaminopiridina (33 mg, 0,27 mmol) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (104 mg, 0,54 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada a TA durante 18 h. 0 solvente foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:2 a 0:1 seguido de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de acetato de etilo a acetato de etilo/acetona 4:1. O resíduo foi co-evaporado com diclorometano então triturado com dietil éter para proporcionar um sólido. 0 sólido foi lavado com éter e seco para proporcionar o composto do título (8 mg, 9ã) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CDC13) 0,95 (d, J = 6,2 Hz, 3H) , 0,96 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,39 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,54-1,80 (m, 5H) , 1,82-2,10 (m, 3H) , 2,52-2,63 (m, 1 H) , 3,29-3,62 (m, 2H), 4,07 (app t, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,45 (d 1, J = 13,6 Hz, 1 H) , 4,67 (ABq, ΔδΑΒ = 0,12, JAB = 16,0 Hz, 2H) , 4,88-5,01 (m, 1 H) , 5, 93-6,00 (m, 2H) , 6,57 (d, J = 10,3 Hz, 1 H) , 6, 94 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,15-7,53 (m, 6 H). LCMS (m/z) 537,2 [ΜμΗ], Tr = 2,34 min. EXEMPLO 39: Composto 39
Uma solução de 4- iodo fenol (2,2 g, 10,0 mmol) , éster metílico do ácido (R)-2-hidroxi-propiónico (0,95 ml, 10,0 mmol) e trifenilfosfina (2,62 g, 10,0 mmol) foi preparado em tetrahidrofurano (40 ml) . Azodicarboxilato de Diisopropilo (2,0 ml. 10 mmol) foi adicionado gota a gota e a reação foi agitada a -5°C durante 1 hora e então a TA durante 2 h. O tetrahidrofurano foi evaporado e dietil éter/iso-hexanos (1:10, 50 ml) foi adicionado. A mistura foi agitada a TA durante 10 min onde um precipitado formou-se. O filtrado foi retirado por meio de decantação e evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 20:1 a 10:1 para proporcionar o composto do título (2,02 g, 660 ) com um óleo.
[0390] (R)-1-(3-bromofenil)-etanol (1,0 g, 4,97 mmol), bis(pinacolato)diboro (1,39 g, 5,47 mmol), 1,1'bis(difenilfosfino)ferrocenodicloropaládio(II), aduto de diclorometano (203 mg, 0,249 mmol) e acetato de potássio (976 mg, 9,94 mmol) foram dissolvidos em 1,4-dioxano (10 ml) e a reação foi aquecida até refluxo e deixada a agitar ao longo de 3 dias. A reação foi deixada a arrefecer até TA antes de ser filtrada através de uma almofada de Hyflo. A almofada foi então lavada com acetato de etilo e os orgânicos combinados foram então concentrado e purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/'acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (936 mg, 76%) como um óleo amarelo pálido.
Uma solução de 39b (496 mg, 2,00 mmol) e 39a (612 mg, 2,00 mmol) em 1,2-dimetoxietano (4 ml) foi agitada a TA sob azoto. Uma solução de carbonato de sódio a 2 M aquoso (4 ml) foi adicionada seguido de tetrakis(trifenilfosfina) paládio (0) (116 mg, 0,1 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 1 hora. A mistura de reação foi arrefecida até TA, água foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etilo. Os extratos de acetato de etilo foram combinados, lavados com salmoura, secos em sulfato de sódio e evaporados. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 17:3 a 1:1 para proporcionar o composto do título (253 mg, 42ã) como uma goma.
Uma solução de 39c (250 mg, 0,83 mmol) em tetrahidrofurano (4 ml) foi agitado a 5°C sob azoto. Uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (42 mg, 1,00 mmol) em água (1 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 5°C durante 1 hora. A mistura de reação foi acidificada a pH 3 com ácido clorídrico a 2 M aquoso e a mistura extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram separados, lavados com água e salmoura, secos sobre sulfato de magnésio e evaporados para proporcionar o composto do título (224 mg, 940 ) com uma espuma branca.
Uma solução de 1 e (478 mg, 0,9 mmol) em diclorometano (15 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água sob azoto. Tri fluorometanos sulfonato de trimetilsililo (0,25 ml, 1,35 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 1 h. Solução aquosa saturada fria de hidrogénio carbonato de sódio (15 ml) foi adicionada e a mistura foi agitada a 0°C durante 15 min. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de magnésio e evaporada para proporcionar éster 2,2,2- tricloro-etílico do acido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (0,9 mmol) que foi utilizado sem purificação adicional. Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (0,9 mmol) em acetonitrilo (15 ml) foi agitada a 0°C sob azoto. 39d (224 mg, 0,78 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol hidrato (184 mg, 0,96 mmol, humedecido com não menos de 20 0 em pesoágua) foram adicionados, seguido de cloridrato de 17-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (225 mg, 1,17 mmol) e a mistura de reação foi agitada a TA durante 2 h. 0 solvente foi evaporado. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a solução foi lavada com água (3 x) seguido de salmoura, seco sobre sulfato de magnésio e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:2 a 0:1 para proporcionar o composto do título (490 mg, 90§ ) como uma goma.
Uma solução de 39e (490 mg, 0,70 mmol) em tetrahidrofurano (15 ml) foi agitada a TA sob azoto. Zinco em pó (1,00 g, 15,40 mmol) foi adicionado seguido de uma solução de acetato de amónio (810 mg, 10,50 mmol) em água (8 ml) . A mistura de reação foi agitada a TA sob azoto durante 24 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo e ácido clorídrico a 2 M aquoso. 0 filtrado foi acidificado a pH 2-3 com ácido clorídrico a 2 M aquoso. Cloreto de sódio sólido foi adicionado para saturar a camada aquosa e a mistura foi extraída com acetato de etilo. Os extratos de acetato de etilo foram combinados e lavados com salmoura. Os extratos orgânicos foram passados através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. 0 resíduo foi co-evaporado com acetato de etilo (3 x) então tolueno (3 x) para proporcionar o composto do título (394 mg, 98ã) como um sólido branco.
Uma solução de 39f (100 mg, 0,18 mmol) em diclorometano (180 ml) foi agitado a TA sob azoto. 4-Dimetilaminopiridina (44 mg, 0,36 mmol) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N' -etilcarbodiimida (138 mg, 0,72 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada a TA durante 4 h. 0 solvente foi evaporado. Acetato de etilo foi adicionado ao resíduo e a mistura foi lavada com ácido cítrico aquoso (pH 4) e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e o solvente foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 3:7 a 0:1. 0 resíduo foi triturado com dietil éter/iso-hexanos 1:1 para proporcionar o composto do título (10 mg, 10% ) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CD30D) 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,51 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,61 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,67 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,72-2,00 (m, 5H) , 2,60-2,69 (m, 1H) , 3,54- 3,63 (m, 1H), 4,13 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,32 (d 1, J = 12, 9 Hz, 1 H) , 4,57-4,66 (m, 2H) , 4,78 (q, J = 7,1 Hz, 1 Η), 5,92 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 6,91 (d, J = 8,9 Hz, 2H) , 7,22 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,34-7,61 (m, 5H) . LCMS (m/z) 551,2 [ΜμΗ], Tr = 2,51 min. EXEMPLO 40: Composto 40
40a foi preparado da mesma maneira que éster metílico do ácido (S)-2-(4-iodo-fenoxi)-propiónico utilizando éster etílico do ácido (S)-2-hidroxi-propiónico em vez de éster metílico do ácido (R)-2-hidroxi-propiónico em 28® d rendimento.
40b foi preparado da mesma maneira que éster metílico do ácido (S)-2-[3'-((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4-iloxi]-propiónico utilizando 40a em vez de éster metílico do ácido (S)-2-(4-iodo-fenoxi)-propiónico em 54® de rendimeho.
40c foi preparado da mesma maneira que ácido (S)-2-[3'-((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4 -iloxi]-propiónico utilizando 40b em vez de éster metílico do ácido (S)-2- [3' -((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4-iloxi]-propiónico em 71% de rendimento.
40d foi preparado da mesma maneira que éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-( (S)-2-{ (S)-2-[3'-((R)-1-hidroxietil)-bifenil-4-iloxi]-propionilamino}-3-metil-butirilamino)-propioni1]-hexahidropiridazina-3-carboxílico utilizando 40c em vez de ácido (S)-2-[3'-((R)- 1-hidroxi-etil) -bifenil-4-iloxi] -propiónico em 71 IE! de rendimento.
40e foi preparado da mesma maneira que ácido ((S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(S)-2-[3'-((R)-1-hidroxietil)-bifenil-4-iloxi]-propionilamino}-3-metil-butirilamino)-propioni1]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico utilizando 40d em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-( (S)-2-{(S)-2 -[3'-((R)-1-hidroxietil)-bifenil-4-iloxi]-propionilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico em 83% de rendimato.
Uma solução de 40e (102 mg, 0,18 mmol) em diclorometano (180 ml) foi agitado a TA sob azoto. 4-
Dimetilaminopiridina (44 mg, 0,36 mmol) e hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-1-iloxi)tripirrolidinofosfónio (114 mg, 0,22 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada a TA durante 4 h. 0 solvente foi evaporado. Acetato de etilo foi adicionado ao resíduo e a mistura foi lavada com ácido cítrico aquoso (pH 4) e salmoura. A camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de magnésio e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo 3:7 to 0:1. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar o composto do título (2,8 mg, 30 )como um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, CD30D) 1,03 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,05 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,25 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,56 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,57 (d, J = 6,3 Hz, 3H) , 1,64- 2,10 (m, 5H), 2,75-2,83 (m, 1 H), 3,60-3,66 (m, 1 H), 4,08 (d, J = 10,0 Hz, 1 H) , 4,32 (d 1, J = 12,9 Hz, 1 H) , 4,74
(q, J = 6,5 Hz, 1 H), 5,22 (q, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,98 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,20-7,25 (m, 1 H) , 7,39-7,51 (m, 5H) . LCMS (m/z) 551,2 [ΜμΗ] , Tr = 2,27 min. EXEMPLO 41: Composto 41
Dicloro (p-ciméno) ruténio(II) dímero (31 mg, 0,05 mmol) e (1 R,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (44 mg, 0,12 mmol) foi suspenso em água desgaseifiçada (20 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 10 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A solução amarela resultante foi arrefecida até TA. Uma solução de 1-(6-bromo-piridin-2-il)-etanona (2,0 mg, 10 mmol) em tetrahidrofurano desgaseifiçado (10 ml) e formato de sódio (3,4 g, 50 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 3 0 min. A mistura de reação foi arrefecida até TA e foi extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com água e salmoura, secos em sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 3:1 a 0:1 para proporcionar o composto do título (1,78 g, 890 ) com um óleo castanho.
A uma mistura de 41 um (101 mg, 0,50 mmol), ácido 4-(2-etoxi-2-oxoetoxi)benzeneborónico (112 mg, 0,50 mmol) em 1,2-dimetoxietano (4 ml) foi adicionado uma solução de carbonato de potássio (138 mg, 1,00 mmol) em água (1 ml). Tetrakis(trifenilfosfina)paládio(0) (29 mg, 0,025 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a 100°C num reator de micro-ondas durante 30 min. A mistura de reação foi então diluída com acetato de etilo e água. Ácido clorídrico a 2 M foi adicionado para ajustar o pH da mistura de reação a pH 3 e os voláteis foram evaporados. Metanol foi adicionado ao resíduo e a mistura foi filtrada através de uma frita hidrofóbica. 0 filtrado foi evaporado e o resíduo foi seco a vácuo para proporcionar o composto do título (143 mg, 930 ) como um solido branco.
Uma solução de le (240 mg, 0,45 mmol) em diclorometano (15 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água sob azoto. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,12 ml, 0,68 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 1 h. Solução aquosa saturada fria de hidrogénio carbonato de sódio (15 ml) foi adicionada e a mistura foi agitada a 0°C durante 15 min. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de magnésio e evaporada para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S) -1-[(S) -2-((S)-2-amino-3- metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (0,45 mmol) que foi utilizado sem purificação adicional. Uma mistura de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (0,45 mmol), 41 b (143 mg, 0,45 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (0,16 ml, 0,9 mmol) em acetonitrilo (15 ml) foi agitada a TA sob azoto. 1-Hidroxibenzotriazol hidrato (108 mg, 0,56 mmol, humedecido com não menos de 2 0 0 em peso de água) e cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil) -27'-etilcarbodiimida (130 mg, 0,675 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 4 h. N,JV-Dimetilformamida (2 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 22 h. Adicional N- (3-dimetilaminopropil)~N'~ etilcarbodiimida cloridrato (87 mg, 0,45 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 6 h. 0 solvente foi evaporado. 0 resíduo foi suspenso numa mistura de acetato de etilo e solução aquosa de ácido cítrico (pH 3) e a mistura foi extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com água seguido de salmoura. A camada orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo para proporcionar o composto do título (71 mg, 23%) como um sólido branco.
Uma solução de 41c (6 9 mg, 0,10 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml) foi agitada a 0°C sob azoto, uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (5 mg, 0,12 mmol) em água (0,5 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1 h. A solução foi acidificada a pH 3 com ácido clorídrico a 2 M e o solvente foi evaporado. O resíduo foi co- evaporado com tolueno (3 x) para proporcionar ácido (S)-l-{(S)-2-[(S)-2-(2 -{4 -[6-((R)-1-hidroxi-etil)-piridin-2-il]-fenoxi}-acetilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxí1ico (58 mg, 0,1 mmol) como um sólido branco que foi utilizado bruto na seguinte etapa. Uma solução de ácido (S)-1-{ (S)-2- [(S)-2-(2-{4-[6-((R)-1-hidroxi-etil)-piridin-2-il]-fenoxi}-acetilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (56 mg, 0,1 mmol) em diclorometano (100 ml) foi agitada a TA sob azoto. 4-Dimetilaminopiridina (49 mg, 0,4 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada durante 5 min. Uma solução de hexafluorofosfato de (7-azabenzotriazol-l-iloxi)tripirrolidinofosfónio (78 mg, 0,15 mmol) em diclorometano (20 ml) foi adicionado gota a gota ao longo de 5 min e a mistura de reação foi agitada a TA durante 2 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando acetato de etilo. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar o composto do título (14 mg, 26ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,36 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,68 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,72-2,05 (m, 5H) , 2,65-2,74 (m, 1 H), 3,53-3,60 (m, 1 H) , 4,14 (d, J = 10,7 Hz, 1 H) , 4,30-4,38 (m, 1 H) , 4,66 (ABq, ΔδΑΒ = 0,13, JM = 15,8 Hz, 2H) , 5,07 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,87 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 6,89 (d, J = 8,9 Hz, 2H) ,
7,26 (dl, J = 7,1 Hz, 1 H) , 7,71-7,78 (m, 2H) , 8,06 (d, J = 8,9 Hz, 2H). LCMS (m/z) 538,2 [ΜμΗ], Tr = 2,07 min. EXEMPLO 42: Composto 42
42a foi preparado da mesma maneira que éster metílico do ácido (S)-2-[3'-((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4-iloxi]-propiónico utilizando éster metílico do ácido 3-(4-bromo-pirazol-l-il)-propiónico ácido éster metílico em vez de (S)-2-(4-iodo-fenoxi)-propiónico em 28ã de rendimento.
42b foi preparado da mesma maneira que ácido (S)-2-[3'-((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4-iloxi]-propiónico utilizando 42a em vez de éster metílico do ácido (S)-2- [3'-((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4-iloxi]-propiónico em 96ã de rendimento.
42c foi preparado da mesma maneira que o composto éster 2,2,2- tricloroetílico do ácido (S)-1-[(S)-2-( (S)-2-{(S)-2-[3'-((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4-iloxi]-propionilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico utilizando 42b em vez de ácido (S)-2 -[3'-((R)-1-hidroxi-etil)-bifenil-4-iloxi]- propiónico em 49ã de rendimento.
0 composto 42 foi preparado da mesma maneira que o composto 41 utilizando 42c em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-l-{(S)-2-[(S)-2-(2-{4-[6-((R)-1-hidroxi-etil)-piridin-2-il]-fenoxi}-acetilamino)-3-metil- butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxilico em 80 de rendimento. ΧΗ RMN (300 MHz, CD30D) 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,37 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,62 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,65-2,05 (m, 5H), 2,61-2,69 (m, 1 H) , 2,88-3,10 (m, 2H) , 3,58-3,63 (m, 1 H) , 3,90-4,00 (m, 1 H) , 4,01 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 4,38-4,44 (m, 1 H) , 4,58-4,67 (m, 1H) , 5,31 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,91 (q, J = 6.5 Hz, 1 H), 7,18 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,31 (app t, J = 7.6 Hz, 1 H) , 7,47 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,58 (s, 1 H) , 7,77 (s, 1 H), 7,95 (s, 1 H). LCMS (m/z) 525,2 [ΜμΗ], Tr = 4,51 min, EXEMPLO 43: Composto 43
Carbonato de potássio (663 mg, 4,80 mmol) e tetrakis (trifenilfosfina)paládio (0) (139 mg, 0,12 mmol) foram adicionados a uma solução de (R)-1-(3-bromofenil)-etanol (483 mg, 2,40 mmol) e ácido 4-(2-metoxi carboniletil) benzeneborónico (500 mg, 2,40 mmol) em 1,2-dimetoxietano (5 ml) num 5 ml vaso de micro-ondas. 0 vaso foi vedado antes de ser aquecido no micro-ondas durante 20 min, utilizando tempo de retenção fixo, em alta absorção a 100°C. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Hyflo e a almofada foi lavada com acetato de etilo. Os orgânicos combinados foram então concentrados e o óleo resultante castanho foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (416 mg, 61ã) como um óleo amarelo.
43a (416 mg, 1,46 mmol) foi dissolvido numa mistura de te trahidrof urano (8 ml) e água (2 ml) e a solução foi arrefecida utilizando um banho de gelo. Hidróxido de lítio monohidrato (175 mg, 2,92 mmol) foi adicionado e a solução foi deixada a aquecer lentamente até TA durante a noite. A solução foi acidificada utilizando ácido clorídrico a 2 M e então extraída com diclorometano (2 x 2 0 ml) . Os orgânicos combinados foram então secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados para proporcionar o composto do título (250 mg, 890 ) como um sólido branco.
Éster 2,2,2 -tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (669 mg, 1,55 mmol) e 43b (350 mg, 1,29 mmol) foram dissolvidos em acetonitrilo anidro (10 ml) e arrefecidos utilizando um banho de gelo.
Hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametil urónio (688 mg, 1,81 mmol) e N,N~ diisopropiletilamina (899 μΐ, 5,16 mmol) foram então adicionados e a reação foi deixada a aquecer lentamente até TA e deixada a agitar durante a noite. 0 solvente foi então removido e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo. A solução foi então lavada com água (3 x 20 ml) e salmoura (20 ml) , seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada e o óleo castanho resultante foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:4 a 0:1 para proporcionar o composto do título (314 mg, 360 ) como um sólido branco.
43c (314 mg, 0,459 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (10 ml). Zinco em pó (300 mg, 4,59 mmol) foi adicionado seguido de acetato de amónio (1 M em água, 3,21 ml, 3,21 mmol). A reação foi então deixada a agitar durante a noite. A mistura de reação foi então filtrada através de uma almofada de Hyflo. A almofada foi então lavada com solução de hidrogénio sulfato de potássio e acetato de etilo. A mistura bifásica foi ainda acidificada utilizando ácido clorídrico a 2 M até que a solução foi aproximadamente pH 1. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas para proporcionar o composto do título (212 mg, 84%) como um sólido amarelo.
43d (100 mg, 0,181 mmol) foi dissolvido em diclorometano (181 ml), sob uma atmosfera de azoto. Cloridrato de N- (3-Dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (142 mg, 0,724 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (44 mg, 0,362 mmol) foram adicionados e a reação foi deixada a agitar durante a noite. 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando 100% de acetato de etilo para proporcioar o composto do título (52 mg, 540 ) como um sólido brano. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,92 (d, J = 6,7 Hz, 6H), 1,24-1,29 (,m, 3H) , 1,60-1,68 (m, 5H), 1,85-1,98 (m, 2H), 2,37-2,49 (m, 1H) , 2,58-2,78 (m, 1H) , 2,83-2,93 (m, 1H) , 3,16-3,28 (m, 1 H), 3,45 (m, 3H), 4,03-4,11 (m, 1 H), 4,45-4,54 (m, 1 H) , 5,06-5,16 (m, 1 H) , 5,92-6,00 (m, 1 H) , 6,25 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7,19 (s, 1 H), 7,22 (s, 2H), 7,39 (app t, J = 7.6 Hz, 1 H) , 7,48-7,56 (m, 3H) , 7,62 (s 2, 1 H) . LCMS (m/z) 535,3 [MB H], Tr = 2,43 min. EXEMPLO 44: Composto 44
Bromoacetato de benzilo (2,07 ml, 13,1 mmol) e trifenilfosfina (3,63 g, 13,8 mmol) foram dissolvidos em tolueno (60 ml) e deixada a agitar ao longo de 3 dias. Um sólido branco foi recolhido por meio de filtração e lavado com dietil éter. Isto proporcionou o composto do título (5,86 g, 930 ) como um sólido branco.
5-bromo-2-piridina carboxaldeído (125 mg, 0,666 mmol) e 44a (655 mg, 1,33 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (5 ml). 1,1,3,3-Tetrametilguanidina (251 μΐ, 2 mmol) foi então adicionado e a reação foi deixada a agitar durante 3,5 h. A reação foi extinta com solução saturada de cloreto de amónio e as fases foram separadas. A fase orgânica foi então lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. O resíduo foi então purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (186 mg, 88ã) como um sólido amarelo.
44b (186 mg, 0,585 mmol), (R)-1-[3- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxaborolan-2-il)-fenil]-etanol (145 mg, 0,585 mmol) , carbonato de césio (476 mg, 1,46 namol) e tetrakis(trifenilfosfina) paládio (0) (66 mg, 0,0585 mmol) foram colocados num vaso de micro-ondas. 1,2-Dimetoxietano (2 ml) e água (0,5 ml) foram adicionados e o vaso foi vedado. A reação foi aquecida no micro-ondas durante 30 min, utilizando tempo de retenção fixo, em alta absorção a 150°C. A mistura de reação foi vertida sobre água e a mistura resultante foi extraída com acetato de etilo. Os orgânicos foram então secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi então purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (150 mg, 770 ) como uma goma laranja.
44c (150 mg, 0,417 mmol) foi dissolvido em etanol (5 ml) . Hidróxido de paládio (II) (20ã em carbono, húmido, 40 mg) foi então adicionado seguido de formato de amónio (132 mg, 2,09 mmol). A reação foi aquecida até refluxo e deixada a agitar durante 30 min. A reação foi deixada a arrefecer até TA e foi então filtrada através de uma almofada de Hyflo. A almofada foi lavada com etanol e os orgânicos combinados foram concentrados para deixar o composto do título (105 mg, 930 ) como uma goma laranja.
44d (105 mg, 0,387 mmol) e éster 2,2,2 -tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (200 mg, 0,454 mmol) foram dissolvidos em acetonitrilo (5 ml) e arrefecidos utilizando um banho de gelo. Hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametil urónio (206 mg, 0,542 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (270 μΐ, 1,55 mmol) foram então adicionados e a reação foi deixada a aquecer lentamente até TA e deixada a agitar durante a noite. 0 solvente foi então removido e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo. A solução foi então lavada com água (3 x 20 ml) e salmoura (20 ml) , seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo/acetona de 3:1:0 a 0:7:3 para proporcionar um sólido castanho (110 mg). Isto foi ainda purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de acetato de etilo/acetona de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (100 mg, 380 ) como um sólido amarelo.
44e (100 mg, 0,146 mmol) foi dissolvido numa mistura de tetrahidrof urano (3 ml) e água (1 ml) e arrefecido utilizando um banho de gelo. Hidróxido de lítio monohidrato (6 mg, 0,153 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada durante 30 min. A solução foi acidificada a pH 1 utilizando ácido clorídrico a 2 M e evaporada até a secura. O resíduo foi então purificado por meio de cromatografia C18 utilizando um gradiente escalonado de acetonitrilo/água de 0:1 a 1:4 para proporcionar o composto do título (25 mg, 310 ) como um sólido branco.
44f {25 mg, 0,045 mmol) foi dissolvido em diclorometano (45 ml) . Cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (35 mg, 0,148 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (11 mg, 0,009 mmol) foram adicionados e a reação foi deixada a agitar durante 4 h. 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de acetato de etilo/acetona de 1:0 a 3:2 para deixar um sólido branco (6 mg) . Isto foi então eluído através de um sistema de HPLC de fase reversa equipado com uma coluna Fenomenex Gemini 10μ 110A, 250 x 21,2 mm utilizando um fluxo isocrático de 2:3 acetonitrilo/água a 20 ml/min para proporcionar o composto do título (1,3 mg, 7ã) como um sólido branco. lU RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,84- 1,00 (m, 7H), 1,10 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,62-1,72 (m, 4H), 1,86-2,08 (m, 3H) , 2,54-2,71 (m, 2H) , 2,90-3,14 (m, 2H) , 3,28-3,54 (m, 3H), 3,98 (appt, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,43-4,52 (m, 1 H) , 5,07 (app t, J = 8,0 Hz, 1 H) , 5,92-6,00 (m, 1 H) , 6,10 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 6,37 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 7,20 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 7,26-7,31 (m, 1 H) , 7,41-7,59 (m, 3H) , 7,75 (dd, J = 8,0, 2,2 Hz, 1 H) , 8,78 (d, J = 2,4
Hz, 1 H). LCMS (m/z) 536,0 [mH H], Tr = 1,47 min. EXEMPLO 45: Composto 45
6-Bromo-3-piridinacarboxaldeído (500 mg, 2,69 mmol) e brometo de benziloxicarbonilmetil-trifenil-fosfõnio (2,64 g, 5,38 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (15 ml). 1,1,3,3-Tetrametilguanidina (1,01 ml, 8,03 mmol) foi então adicionado e a reação foi deixada a agitar durante 3,5 h. A reação foi extinta com solução saturada de cloreto de amónio e as fases foram separadas. A fase orgânica foi então lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. 0 resíduo foi então purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (492 mg, 57%) como um sólido branco.
45a (382 mg, 1,54 mmol), (R)-1-[3-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-etanol (490 mg, 1,54 mmol), carbonato de césio (1,06 g, 3,85 mmol) e tetrakis(trifenilfosfina) paládio(0) (178 mg, 0,154 mmol) foram colocados num vaso de micro-ondas. 1,2-Dimetoxietano (4 ml) e água (1 ml) foram adicionados e o vaso foi vedado. A reação foi aquecida no micro-ondas durante 50 min, utilizando tempo de retenção fixo, em alta absorção a 150°C. A mistura de reação foi vertida sobre água e a mistura resultante foi extraída com acetato de etilo. Os orgânicos foram então secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi então purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar produto impuro. Isto foi submetido a uma segunda rodada de purificação utilizando as mesmas condições para proporcionar o composto do título (195 mg, 35ã) como um sólido amarelo,
4 5b (195 mg, 0,543 mmol) foi dissolvido em etanol (5 ml). Hidróxido de paládio(II) (20ã em carbono, húmido, 40 mg) foi ent.0 o adicionado seguido de formato de amómo (172 mg, 2,72 mmol). A reaçH o foi aquecida até refluxo edeixada a agitar durante 30 min. A reaçlEI o foi deixada a arefecer até TA e foi entS o filtrado através de uma almofada de Hyflo. A almofada foi lavada com etanol e os orgânicos combinados foram concentrados para deixar o composto do título (150 mg, lOOã) como um sólido amarelo pálido.
45c (150 mg, 0,553 mmol) e éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxí1ico (287 mg, 0,664 mmol) foram dissolvidos em acetonitrilo (5 ml) e arrefecidos utilizando um banho de gelo. hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (294 mg, 0,774 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (385 μΐ, 2,21 mmol) foram entSo adicionados e a reaçS o foi deixada a aquecer lentamnte até TA e deixada a agitar durante a noite. Acetato de etilo foi entB o vertido na mistura de reaçS o. A soluçS o refeaàte foi entS o lavada com água (3 x 20 ml) e salmoura (Q ml) , seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo/acetona 3:1:0 a 0:7:3 para proporcionar um sólido (334 mg) . Isto foi ainda purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de acetato de etilo/acetona de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (157 mg, 440 ) como um sólido.
45d (150 mg, 0,234 mmol) foi dissolvido numa mistura de tetrahidrof urano (4 ml) e água (1 ml) e arrefecido utilizando um banho de gelo. Hidróxido de lítio monohidrato (5 mg, 0,153 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada durante 30 min. A solução foi neutralizada utilizando ácido clorídrico a 2 M e evaporada até a secura. 0 resíduo foi então purificado por meio de cromatografia C18 utilizando um gradiente escalonado de acetonitrilo/água de 0:1 a 1:4 para proporcionar o composto do título (21 mg, 160 )como um sólido branco.
45e (21 mg, 0,0379 mmol) foi dissolvido em diclorometano (38 ml) . Cloridrato de N-{3-dimetilaminopropil)-Ν'-etilcarbodiimida (29 mg, 0,152 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (9 mg, 0,0758 mmol) foram adicionados e a reação foi deixada a agitar durante 4 h. 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando 1000 d acetato de etilo. 0 material resultante foi então eluído através de um sistema de HPLC de fase reversa equipado com uma coluna Fenomenex Gemini 10μ 11OA, 250 x 21,2 mm utilizando um fluxo isocrático 3:7 acetonitrilo/água a 20 ml/min para proporcionar o composto do título (1 mg, 50 ) . XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0-91 (d, J = 6,5 Hz, 6H) , 1,48 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,63-1,72 (m, 7H) , 1,81-1,93 (m, 2H), 2,00-2,10 (m, 1 H), 2,25-2,38 (m, 1 H), 2,54-2,67 (m, 1 H), 3,15-3,28 (m, 1 H), 3,39-3,59 (m, 2H), 4,03 (app t, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,43-4,54 (m, 1 H), 5,04-5,16 (m, 1 H), 5,80 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 5,94 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 7,22-1,27 (m, 1 H) , 7,43 (app t, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,55-7,57 (m, 1 H) , 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,92 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,19 (3 1, 1 H) , 8,48 (d, J = 2,2 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 536,2 [ΜμΗ], Tr = 1,61 min. EXEMPLO 46: Composto 46
Ao Composto 21 (25 mg, 0,05 mmol) em acetato de etilo (5 ml) a TA foi adicionado 100 de paládio em carboo (20 mg). 0 sistema foi purgado com hidrogénio e agitado durante 2 h. A reação foi filtrada através de Celite e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de TLC preparativa utilizando acetato de etilo/acetona 5/1 para dar o composto do título (2,2 mg, 9%) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CDC13) 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3H) ,
0,98 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,24 J = 7,1 Hz, 3H), 1,52 (d, J = 6,9 Ης, 3Η) , 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3 Η), 1,55-2,14 (m, 10Η) , 2,53-2,80 (m, 2Η) , 2,92-3,01 (m, 2Η) , 3,45-3,67 (m, 1 Η), 4,14-4,23 (m, 1 Η), 4,49-4,60 (m, 1 Η), 5,39-5,51 (m, 1 Η), 5,96 (d, J = 9,4 Hz, 1 Η), 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 Η), 6,43 (d, J ~ 8,5 Hz, 1 Η), 7,39 (dd, J = 8,5, 1,1 Hz, 1 Η), 7,56 (s, 1 Η), 7,75 (s, 1 Η), 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 1 Η), 9,16 (s, 1 H). LCMS (m/z) = 552,3 [ΜμΗ], Tr = 1,25 min. EXEMPLO 47: Composto 47
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (320 mg, 0,74 mmol) em diclorometano (8 ml) foi adicionado ácido trifluoroacético (2 ml) . A reação foi agitada a TA durante 105 min e foi então concentrada a vácuo. O produto bruto resultante foi dissolvido em acetato de etilo (75 ml) e foi 1 avado com bicarbonato de sódio saturado aquoso. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 40 ml) , e os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados, e concentrados a um resíduo bruto que foi utilizado sem purificação adicional. O resíduo da etapa anterior, 1-hidroxibenzotriazol (152 mg, 1,12 mmol) e ácido (S) -2-terc-butoxicarbonilamino-3-hidroxi-propiónico (154 mg, 0,75 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (6 ml). N,N-Diisopropiletilamina (190 mg, 1,5 mmol) foi adicionada, e a solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e água. N- (3-Dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (149 mg, 0,96 mmol) foi adicionada gota a gota ao longo de 15 s. A reação foi agitada durante 18 h, deixando que banho de gelo expirasse lentamente. A mistura de reação foi então diluída com acetato de etilo (50 ml) e foi lavada com bicarbonato de sódio saturado aquoso e salmoura. A fase orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada para proporcionar um resíduo bruto que foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (75 to lOOã de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o produto do título (211 mg, 55ã) como um óleo.
A uma solução de 47a (64 mg, 0,12 mmol) em diclorometano (1 ml) foi adicionado 2,4,6-colidina (98 mg, 1,28 mmol). trifluorometanossulfonato de terc- butildimetilsililo (98 mg, 0,37 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 20 sec. A mistura de reação foi agitada durante 15 h e foi extinta com bicarbonato de sódio saturado aquoso (1 ml). A mistura foi ainda diluída com acetato de etilo, água, e ácido clorídrico a 0,1 N aquoso para proporcionar uma camada aquosa ácida. As fases foram separadas, e os orgânicos foram secos em sulfato de sódio, filtrados, e concentrados a vácuo para proporcionar um resíduo bruto que foi utilizado sem purificação adicional. 0 produto bruto foi dissolvido em tetrahidrofurano (3 ml). Ácido acético (115 mg, 1,9 mmol) foi adicionado em uma porção e a solução resultante foi agitada durante 3,25 h. A reação foi então diluída com acetato de etilo (25 ml) e lavada com bicarbonato de sódio saturado aquoso (25 ml). As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (25 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 ml) e secas em sulfato de sódio anidro. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado a vácuo para proporcionar bruto amina que foi utilizado sem purificação adicional. A amina bruta foi dissolvida em N,N-dimeti1formamida (1,5 ml). 2,4,6-Colidina (31 mg, 0,26 mmol) e ácido trans-3-pentenoico (15,3 mg, 0,152 mmol) foram adicionados, e a solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e água. (l-Ciano-2-etoxi-2-oxoe tili denami nooxi)dimetilamino-morfolino-carbénio hexafluorofosfato (72,4 mg, 0,169 mmol) foi adicionado em uma porção, e a reação foi agitada durante 30 min. A reação foi então removida do banho frio e aquecida até temperatura ambiente. Após 15 h, a reação foi diluída com acetato de etilo (35 ml) , bicarbonato de sódio saturado aquoso (20 ml) , e salmoura (5 ml) . As fases foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com ácido clorídrico a 0,1 N aquoso (25 ml) e então salmoura (5 ml) . A camada aquosa ácida foi extraída com acetato de etilo (25 ml), e as fases orgânicas combinadas foram então secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas. 0 resíduo resultante bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 50 a 80S de acetato de etilo emiso-hexanos) para proporcionar o composto do título (46,9 mg, 620 ao longo de 3 etapas) como uma espuma branca.
A uma solução de 47b (46,9 mg, 0,0761 mmol) em tetrahidrofurano (1,5 ml) foi adicionado água (0,30 ml), acetato de amónio (96 mg, 1,2 mmol), e zinco em pó (109 mg, 1,7 mmol). A mistura de reação foi agitada vigorosamente a TA durante 17,5 h, em cujo tempo a temperatura foi aumentada até 35°G. Após 25,5 h, zinco em pó adicional (60 mg, 0,92 mmol) foi adicionado e a reação temperatura foi aumentada até 45°C. Após 39,5 h, a mistura de reação foi filtrada através de uma lavagem de almofada de Celite com água e acetato de etilo. A fase aquosa foi acidificada com ácido clorídrico a 2 M aquoso (15 ml) , e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 20 ml), e as fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio, filtradas, e concentradas para proporcionar um sólido branco (34,9 mg, 95ã) que foi utilizado sem purificação adicional. 0 ácido bruto (0,072 mmol) foi dissolvido com (R)-1-(3-vinilisoquinolin-6-il)-etanol (17,4 mg, 0,087 mmol) em diclorometano (1,0 ml). 4-Dimetilaminopiridina (13,3 mg, 0,109 mmol) foi adicionado seguido de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (17 mg, 0,085 mmol). A reação foi agitada durante 16,5 h, em cujo tempo foi carregada diretamente sobre uma coluna de gel de sílica. Eluição com de 60 a 1000 de acetato de etilo em iso-hexanos proporcionou o composto do título (20 mg, 430 ) como um resíduo amorfo.
Uma solução de 4 7c (19,6 mg, 0,0294 mmol) em tolueno (9,4 ml) foi espargido com árgon durante 10 min com agitação. Catalisador de 2a geração Hoveyda-Grubbs (2,8 mg, 0,0045 mmol) foi então adicionado como uma solução em tolueno desgaseificado (0,45 ml), e a solução resultante foi aquecida até 105°C, Após 25 min, uma porção adicional de catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (1,4 mg, 0,0022 mmol) foi adicionada. Após 10 adicional min, a reação foi arrefecida até temperatura ambiente e foi concentrada a vácuo a -4,5 ml. A solução foi carregada diretamente sobre um gel de sílica coluna que foi eluído com de 80 a 100% de acetato de etilo emiso-hexanos para proporcionar o composto do título (6,9 mg, 38% ) com um sólido amorfo.
Num frasco de polipropileno, 47d (4,7 mg, 0,0075 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (0,90 ml) sob árgon e a solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e água. HF·piridina (0,10 ml) foi adicionada gota a gota. Após 10 min, a reação foi extinta pela adição a uma mistura agitada de acetato de etilo (15 ml) e bicarbonato de sódio saturado aquoso (15 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 30 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio, filtradas e concentradas para proporcionar um resíduo bruto. Num frasco de polipropileno sob árgon, o resíduo mencionado anteriormente foi dissolvido em tetrahidrofurano (0,90 ml) e a solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e água. HF-piridina (0,10 ml) foi adicionada gota a gota, e a mistura de reação foi removida do banho frio. Após 45 min, a reação passou por tratamento final conforme descrito acima para proporcionar um resíduo bruto. Purificação por meio de HPLC de fase reversa (de 5 a 100% de acetonitrilo em água, μΟ,ΙΙΕΙ de ácido trifluoroaético) proporcionou o composto do título (1,6 mg, 34(3 ) com um sólido branco amorfo. LH RMN (400 MHz, CD3OD) 9,54 (s, 1 H) , 8,38 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 8,29 (s, 1 H) , 8,17 (s, 1 H), 7,87 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,90-6,75 (m, 2H), 6,18 (q, J = 6, 9 Hz, 1 H) , 5,84-5,74 (m, 1 H) , 4,71-4,64 (m, 1 H) , 4,50-4,42 (m, 1 H) , 3,88-3,81 (m, 2H) , 3,78 (dd, J= 11,3, 6,4 Hz, 1 H), 3,52 (dd, J = 12,9, 6,2 Hz, 1 H), 3,52 (dd, J = 12,9, 6,2 Hz, 1 H), 2,81-2,70 (m, 1 H), 2,11-2,04 (m, 1 H), 1,99-1,91 (m, 1 H), 1,85-1,69 (m, 2H), 1,73 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,60 (d, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS (m/z) 510,2 [ΜμΗ], Tr = 2,19 min. EXEMPLO 48: Composto 48
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico de ácido (S)-1-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (320 mg, 0,74 mmol) em diclorometano (8,8 ml) foi adicionado ácido trifluoroacético (2,2 ml). A reação foi agitada a TA durante 4 5 min e foi concentrada a vácuo. 0 produto bruto resultante foi duas vezes dissolvido em e concentrado de tolueno anidro (10 ml) . 0 resíduo resultante bruto foi utilizado sem purificação adicional. 0 resíduo bruto (ca. 0,74 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (153,8 mg, 1,1 mmol), e ácido (2S,3R)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-hidroxi-butírico (161,2 mg, 0,735 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (4 ml). N,N- Diisopropiletilamina (192 mg, 1,5 mmol) foi adicionado, e a solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e água. N-(3-Dimetilaminopropil)-N'- etilcarbodiimida (132 mg, 0,85 mmol) foi adicionada gota a gota ao longo de 15 s. A reação foi removida do banho frio e foi agitado durante 21,5 h. A mistura de reação foi então diluída com acetato de etilo (50 ml) e lavada com bicarbonato de sódio semi-saturado aquoso (3 0 ml) . A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada para proporcionar um resíduo bruto que foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com de 65 a 90 ã de acetato de etilo em iso-hexanos. Frações impuras foram repurifiçadas por meio de cromatografia em gel de sílica e combinadas com o primeiro produto para proporcionar o composto do título (230 mg, 58ã).
A uma solução de 48a (62,3 mg, 0,12 mmol) em diclorometano (1 ml) foi adicionado 2,4,6-colidina (146 mg, 1,21 mmol). trifluorometanossulfonato de terc-butildimetilsililo (94 mg, 0,36 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 20 s. A mistura de reação foi agitada durante 15 h e foi extinta com bicarbonato de sódio saturado aquoso (1 ml). A mistura foi ainda diluída com acetato de etilo (2 ml) e salmoura (1 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (4 x 1,5 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio, filtradas, e concentradas a vácuo para proporcionar um resíduo bruto que foi utilizado sem purificação adicional. 0 produto bruto foi dissolvido em tetrahidrofurano (3 ml). Ácido acético (104 mg, 1,6 mmol) foi adicionado em uma porção e a solução resultante foi agitada durante 3,5 h. A reação foi então diluída com acetato de etilo (30 ml), bicarbonato de sódio saturado aquoso (20 ml) e salmoura (10 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (20 ml). As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado a vácuo para proporcionar intermediário de amina bruta que foi utilizado sem purificação adicional. A amina bruta foi dissolvida em N,N-dimetilformamida (1,5 ml) . 2,4,6-Colidina (28 mg, 0,23 mmol) e ácido trans-3-pentenoico (14,3 mg, 0,143 mmol) foram adicionados, e a solução resultante foi arrefecida num banho de gelo e água. Hexafluorofosfato de (l-ciano-2-etoxi-2-oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbênio (69 mg, 0,16 mmol) foi adicionado em uma porção, e a reação foi agitada durante 30 min. A reação foi então removida do banho frio e aquecida até temperatura ambiente. Após 15 h, a reação foi diluída com acetato de etilo (25 ml) , ácido clorídrico a 0,1 N aquoso (30 ml) , e salmoura (5 ml) . As fases foram separadas, e a camada aquosa ácida foi extraída com acetato de etilo (25 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio saturado aquoso (25 ml), com salmoura (5 ml), secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, e concentradas. 0 resíduo resultante bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 50 a 75ã de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (74 mg, rendimento quantitativo ao longo de 3 etapas) como uma espuma branca.
A uma solução de 4 8b (74 mg, 0,117 mmol) em tetrahidrofurano (2,3 ml) foi adicionado água (0,47 ml), acetato de amónio (138 mg, 1,8 mmol), e zinco em pó (164 mg, 2,5 mmol) . A mistura de reação foi agitada vigorosamente a TA durante 17,5 h, em cujo tempo a temperatura foi aumentada até 35°C. Após 25,5 h, zinco em pó adicional (85 mg, 1,3 mmol) foi adicionado e a reação temperatura foi aumentada até 45°C. Após 39,5 horas totais, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celite, lavagem com água e acetato de etilo. A fase aquosa foi acidificada com ácido clorídrico a 2 N aquoso (15 ml), e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 20 ml), e as fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, e concentradas para proporcionar um sólido branco amorfo (50 mg, 86ã) que foi utilizado sem purificação adicional. 0 produto bruto (0,10 mmol) foi dissolvido juntamente com (R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etanol (23,9 mg, 0,12 mmol) em diclorometano (1,0 ml). 4-Dimetilaminopiridina (15 mg, 0,12 mmol) foi adicionado seguido de cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (17 mg, 0,019 mmol). A reação foi agitada durante 16 h, em cujo tempo foi carregada diretamente sobre uma coluna de gel de sílica. Eluição com 50 a 85, e então a 100% de acetato de etilo em iso-hexanos proporcionou o composto do título (40 mg, 58ã) como um sólido.
Uma solução de 48c (26 mg, 0,037 mmol) em tolueno (12 ml) foi espargida com árgon durante vários min com agitação, catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (3,4 mg, 0,0054 mmol) foi então adicionado como uma solução em tolueno desgaseifiçado (0,40 ml), e a solução resultante foi aquecida até 105°C. Após 20 min, uma porção adicional de catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (1,7 mg, 0,0027 mmol) foi adicionada como uma solução em tolueno (0,20 ml) . Após 40 min adicionais, a reação foi arrefecida até TA e foi concentrada a vácuo a ~3 ml. A solução foi carregada diretamente sobre uma coluna de gel de sílica, que foi eluída com de 70 a 100% de acetato de etiloem iso-hexanos para proporcionar o composto do título (10 mg, 42% ) como um amorfo sólido.
Num frasco de polipropileno sob atmosfera de árgon, 48d (10 mg, 0,016 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (900 μΐ). HF-piridina (-70S como HF, 100 μΐ) foi adcionado gota a gota via seringa, e a solução resultante foi agitada durante 130 min. Uma alíquota adicional de HF-piridina (100 μΐ) foi então adicionada via seringa, e a solução resultante foi agitada durante 80 min adicionais. A mistura de reação foi extinta pela sua adição cuidadosa a uma mistura agitada de acetato de etilo (50 ml) e bicarbonato de sódio saturado aquoso (50 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 30 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, e concentradas para proporcionar um resíduo bruto que foi purificado por meio de HPLC de fase reversa (C18, de 15 a lOOã de acetonitrilo/ãgua, 0,10 de ácido trifluoroacético).Frações impuras desta rodada foram re-purifiçadas da mesma maneira para proporcionar o composto do título como o sal de ácido trifluoroacético (5,0 mg, 49ã) como um sólido branco amorfo seguindo de liofilização. XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ 9,55 (S, 1 H), 8,38 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,15 (s, 1H) , 7,87 (dd, J = 8,7, 1,4 Hz, 1H) , 6,86-6,75 (m, 2H) , 6.15 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,80-5,70 (m, 1 H), 4,47 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,45 4,38 (m, 1 H), 4,09-4,01 (m, 1 H), 3,83- 3,78 (m, 1H), 3,55 (dd, J = 13,5, 5,6 Hz, 1H), 3,11 (dd, J = 13,2, 4,7 Hz, 1 H), 2,78-2,67 (m, 1 H), 2,09-1,99 (m, 1 H) , 1,96-1,89 (m, 1 H) , 1,82-1,64 (m, 5H) , 1,60-1,54 (m, 3H), 1,25 (d, J = 6,3 Hz, 3H). LCMS (m/z) 524,6 [ΜμΗ], Tr = 2.15 min. EXEMPLO 49: Composto 49
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (865 mg, 2 mmol) em diclorometano (20 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (667 mg, 3 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a TA durante 30 min. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto foi dissolvido em acetonitrilo anidro (25 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0°C, sal dieiclohexilamina de ácido (S)-4-azido-2-(terc- butoxicarbonilamino)butanoico (936 mg, 2,2 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (1034 mg, 8 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1065 mg, 2,8 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA durante 48 h. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e a solução foi lavada com solução a 200 em água de ácido cítrico (2 x 100 ml) água (100 ml) e salmoura (100 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-400 de acetato de etilo μ metanol (4/1) emíso-hexanos) para proporcionar o composto do título (783 mg, 700) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,40, iso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1) .
Sob árgon, (R)-1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etanol (880 mg, 4,23 mmol), éster metilico do ácido (E)-2,2-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-i1) -but-3-enoico (1,24 g, 4,88 mmol), PdCl2 (PCy2 (p-NMe2Ph) ) 2 (bis [ (diciclohexil) (4- dimetilaminofenil)fosfina]paládio(II)cloreto) 173 mg, 0,21 mmol) e fosfato de potássio tribásico (2,64 g, 12,4 mmol) foram dissolvidos em ciclopentil metil éter (11,9 ml) e água (5,1 ml). A mistura bifásica resultante foi vigorosamente agitada a 90°C durante 3,5 h, em cujo tempo a reação foi arrefecida até temperatura ambiente e foi diluída com acetato de etilo (50 ml) e água (40 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 ml). As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro, filtradas, e concentradas para proporcionar um resíduo bruto que foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 25 a 600 de acetato de etilo em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (1,07 g, 850 ) com um óleo amarelo.
A uma solução de 4 9b (6 00 mg, 2 mmol) em tetrahidrofurano (8 ml) foi adicionado metanol (4 ml), água (4 ml) e hidróxido de lítio (96 mg, 4 mmol) . A mistura resultante foi agitada a TA durante 10 h e extinta com ácido clorídrico a 1 M (4,2 ml, 4,2 mmol) . A solução resultante foi concentrada a um resíduo bruto que foi co-distilled duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml), duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (20 ml). 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional (735 mg, rendimento quantitativo).
Uma solução de 49a (169 mg, 0,302 mmol) em diclorometano (10 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (101 mg, 0,455 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a TA durante 30 min. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto foi dissolvido em acetonitrilo anidro (20 ml) sob árgon. Mistura de reação foi agitada a 0°C, ácido (E)-4-[6-((R)-1-hidroxietil)-isoquinolin-3-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (123 mg, 0,333 mmol) e N, N-diisopropiletilamina (151 mg, 1,220 mmol) foram adicionados seguido de hexaf luorofosfato metanamínio de 2- (1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (161 mg, 0,423 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA durante 2 dias. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução a 20E3 em água de ácido cítrico (2 x 50 ml) , água (0 ml) e salmoura (50 ml) , seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-400 de mistura de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (198 mg, 900) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,18, iso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1).
A uma solução de 4 9d (170 mg, 0,23 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml) foi adicionado metanol (1 ml), água (1 ml) e hidróxido de lítio hidrato (7 mg, 0,2 8 mmol) . A mistura foi agitada durante 2 h a temperatura ambiente e foi extinta com aquoso ácido clorídrico a 1 M (0,30 ml, 0,30 mmol). A solução resultante foi concentrada a um resíduo bruto que foi co-evaporado duas vezes com tetrahidrofurano (5 ml), duas vezes com acetonitrilo anidro (5 ml) e duas vezes com tolueno anidro (5 ml) . 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e utilizado sem purificação adicional (151 mg, rendimento quantitativo). Em balão seco no forno purgado com árgon foram colocados anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (317 mg, 0,92 mmol), 4-dimetilaminopiridina (337 mg, 2,76 mmol) e 1,2-dicloroetano anidro (300 ml). A solução resultante foi aquecida a 50°C, e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota por meio de seringa como uma solução em seco N, N-dimetilformamida (5 ml) ao longo de 12 h. Uma porção adicional de N, JV-dime t i 1 f ormamida seca (2x1 ml) foi utilizado para completar a transferência quantitativa. Após agitar durante adicional 2 h a 50°C, a mistura de reação foi transferida a um funil de separação e lavada com água (200 ml, 10 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (100 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (100 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (250 ml) e foi lavado com água (300 ml, 10 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação) . A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (150 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (200 ml, 10 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). Fase resultante aquosa foi extraída com acetato de etilo (150 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (150 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo
foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-4013 de mistura de acetato de etlo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (76 mg, 570 ) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,51, 100 de metanol em diclorometano.XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ 9,03 (s, 1 H), 7,95 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,81 (S, 1 H), 7,49 (s, 1 H), 7,46 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H) , 6,49 (d, J = 16,1 Hz, 1 H) , 6,4 0 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 5,95 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,51 (q, J = 7,2 Hz, 1 H),
4,67 (dd, J = 8,6, 6,3 Hz, 1 H), 4,29 (m, 1 H), 3,68 (dd, J = 11,2, 2,7 Hz, 1 H), 3,28 (td, J = 6,8, 3,7 Hz, 2H), 2,67- 2,56 (m, 1 H) , 1,88 (m, 2H), 1,85-1,60 (m, 4H), 1,57 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,54 (d, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,42 (s, 3H) , 1,27 (s, 3H). LCMS (m/z) 557,3 ([Μ μ H], Tr = 3,15 min. EXEMPLO 50: Composto 50
Num balão seco no forno e purgado com ãrgon, Composto 49 (20 mg, 0,034 mmol) , iode to de cobre (I) (1 mg, 0,005 mmol) e ácido propiólico (5 wg, 0,070 mmol) foram adicionados. O balão foi vedado com septos e repurgado com ãrgon três vezes. N, N-dimetilformamida anidra (5 ml) foi adicionada e a mistura de reação foi repurgada com ãrgon três vezes. Esta mistura de reação foi aquecida a 70°C durante 2 dias. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o resíduo bruto foi dissolvido em acetato de etilo (10 ml) e filtrado através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo (10 ml). Após concentração sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-400 de mistura de acetato de etilo e metanol (4/1 em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (7 mg, 340 ) como um sólido branco, g = 0,36, 50 metanol em diclorometano. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) : δ 9,05 (s, 1 H) , 8,11 (s I, 1 H) , 8,00 (s 1, 1 H) , 7,95 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 7,82 (s, 1 H) , 7,66 (s, 1 H) , 7,48 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 6,50 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 6,42 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 5,97 (m, 1 H), 5,56 (m, 1 H), 4,60 (m, 1 H), 4,29 (m, 1 H), 3,66 (m, 1 H) , 3,21 (m, 2H) , 2,69-2,47 (m, 1 H) , 1,89 (m, 2H), 1,87-1,55 (m, 4H), 1,53 (d, J = 6j7 Hz, 3H), 1,50 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,40 (s, 3H) , 1,28 (s, 3H) . LCMS (m/z) 603,1 [ΜμΗ]' Tr = 2,62 min. EXEMPLO 51: Composto 51
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-I-((S)-2 -1erc-butoxicarbonilamino-propioni1)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (855 mg, 2 mmol) em diclorometano (20 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (667 mg, 3 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a TA durante 30 min. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto foi dissolvido em acetonitrilo anidro (25 ml) sob ãrgon. Mistura de reação foi agitada a 0°C, ácido (S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)pent-4-inoico (469 mg, 2,2 mmol, fonte: Matrix Scientific, Numero de catálogo 041479) e N,N- diisopropiletilamina (1034 mg, 8 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1065 mg, 2,8 mmol) . Mistura de reação foi agitada a TA durante 48 h. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e a solução foi lavada com solução a 200 em água de ácido cítrico (2 xlOO ml) , água (100 ml) e salmoura (100 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-400 de acetato de etilo e metanol (4/1) emiso-hexanos) para proporcionar o composto do título (738 mg, 700) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,30, iso-hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1).
Uma solução de 51a (145 mg, 0,275 mmol) em diclorometano (10 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (92 mg, 0,414 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a TA durante 30 min. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto foi dissolvido em acetonitrilo anidro (20 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0°C, (E) - 4-[6 -((R)-1-hidroxi-etil)-isoquinolin-3-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico ácido (112 mg, 0,303 mmol) e N, N-diisopropiletilamina (137 mg, 1,101 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (147 mg, 0,385 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA durante 2 dias. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução a 200 em água de ácido cítrico (2 x 50 ml), água (6 ml) e salmoura (50 ml) , seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-400 de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (163 mg, 850 ) com um sólido branco após evaporação. Rf = 0,29, íso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1).
A uma solução de 51 b (125 mg, 0,18 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml) foi adicionado metanol (1 ml), água (1 ml) e hidróxido de lítio hidrato (5,2 mg, 0,22 mmol). A mistura foi agitada durante 2 h a temperatura ambiente e foi extinta com ácido clorídrico a 1 M aquoso (0,25 ml, 0,25 mmol). A solução resultante foi concentrada to um resíduo bruto que foi co-evaporada duas vezes com tetrahidrofurano (5 ml), duas vezes com acetonitrilo anidro (5 ml) e duas vezes com tolueno anidro (5 ml) . 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional (113 mg, rendimento quantitativo). Num balão seco no forno e purgado com árgon foram colocados anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (248 mg, 0,72 mmol), 4-dimetilaminopiridina (264 mg, 2,16 mmol) e 1,2-dicloroetano anidro (200 ml) . A solução resultante foi aquecida a 50°C, e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota via seringa como uma solução em N, N-dimetilformamida anidra (5 ml) ao longo de 12 h. Uma porção adicional de N,N-dimetilformamida anidra (2x1 ml) foi utilizada para completar a transferência quantitativa. Após agitar durante 2 h adicionais a 50°C, a mistura de reação foi transferida a um funil de separação e lavada com água (200 ml, 10 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (100 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (100 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (250 ml) e foi lavado com água (300 ml, 10 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (150 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (200 ml, 10 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com acetato de etilo (150 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (150 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40% de acetato de etilo μ metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (56 mg, 57ã) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,53, 100 metanol em diclorometano. ΧΗ RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,03 (s, 1 H) , 7,94 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,79 (s, 1 H) , 7,54 (s, 1 H) , 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,52 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 6,40 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 5,95 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,52 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 4,70 (dd, J = 7,7, 6,7 Hz, 1 H) , 4,30 (m, 1 H) , 4,00 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 3,72-3,64 (m, 1 H) , 2,63 (m, 2,55-2,40 (m, 2H) , 1,91 (s, 1 H) , 1,88 (m, 1 H) , 1,80 (m, 1 H), 1,64 (m, 1 H), 1,57 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,53 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,42 (s, 3H) , 1,27 (s, 3H) . LCMS (m/z) 546,2 [ΜμΗ]' Tr =3,04 min. EXEMPLO 52: Composto 52
Uma solução de Composto 51 (10 mg, 0,018 mmol) numa mistura de acetato de etilo (4 ml) e tetrahidrofurano (4 ml) contendo 50 de paládio em carbonato de cálcio envenenado com catalisador chumbo - Lindlar (10 mg) foi hidrogenada a TA e pressão de hidrogénio durante 3 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (10 ml). 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (10 mg, rendimento quantitativo) como um sólido branco. Rf = 0,19, iso-hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1). 'LU RMN (400 MHz, CD3OD) : δ 9,04 (s, 1 H) , 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,82 (s, 1 H), 7,54 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 6,39 (d, J = 16,1
Hz, 1H) , 5,95 (q, J = 6,4 Hz, 1H) , 5,76-5,62 (m, 1H) , 5,57
(q, J = 7,0 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 4,96 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,61-4,54 (m, 1H), 4,29 (m, 1 H), 3,68n (m, 1H) , 2,61 (m, 1H) , 2,42-2,34 (m, 1H) , 2,30-2,20 (m, 1H) , 1,90 (m, 1H), 1,81 (m, 1 H), 1,68-1,60 (m, 2H), 1,57 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,53 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,39 (s, 3H), 1,26 (s, 3H). LCMS (m/z) 548,3 [ΜμΗ]' Tr = 2,85 min. EXEMPLO 53: Composto 53
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (300 mg, 0,69 mmol) em diclorometano (1,84 ml) foi lentamente adicionado ácido trifluoroacético (460 μΐ, 6,00 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 3 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (3,45 ml) e ácido (S) -terc-Butoxicarbonilaminociclohexil- acético (195 mg, 0,760 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7- azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametil urónio (289 mg, 0,760 mmol), e N, N-diisopropiletilamina (180 μΐ, 1,04 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 18 h, a mistura de reação foi diluída com acetato de etilo (300 ml) , e a mistura resultante foi lavada com salmoura (4 3 100 ml) , foi seca sobre anidro sódio e foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 12 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (380 mg, 96%) como um óleo incolor.
A uma solução de 53a (220 mg, 0,385 mmol) em diclorometano (1,92 ml) foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (128 mg, 0,587 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 1,5 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi diluído com acetonitrilo (1,92 ml) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametil urónio (146 mg, 0,385 mmol), N, N-diisopropiletilamina (267 μΐ, 1,54 mmol), e ácido (E)-pent-3-enoico (39,4 μΐ, 0,385 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 20 h, a mistura de reação foi diluída com diclorometano (40 ml) e a mistura resultante foi lavada com solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (4 0 ml) e com salmoura (2 3 4 0 ml) . A camada orgânica foi separada, foi seca em sulfato de sódio anidro, e foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em coluna flash de gel de sílica (Coluna de 12 g Combiflash HP
Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/so-hexanos) para proporcionar o composto do título (180 mg, 84ã) como um óleo incolor. Rf = 0,75 (acetato de etilo) I2/Sílica stain.
A uma solução de 53b (180 mg, 0,320 mmol) em tetrahidrofurano (5,3 ml) foi adicionado zinco em pó (418 mg, 6,4 0 mmol) seguido de uma solução de acetato de amónio (3 70 mg, 4,80 mmol) em água (3,5 ml) a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 15 h, a mistura de reação foi aquecida até 45 °C. Após 2 h, a mistura de reação foi deixada a arrefecer até TA e foi filtrado através de uma almofada de Celite lavagem com água (10 ml) e acetato de etilo (10 ml). As camadas filtradas foram divididas e a camada aquosa foi diluída com salmoura (80 ml) e foi acidificada a pH 1 com solução a 12 N aquosa de cloreto de hidrogénio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 3 100 ml) , e os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, e foram concentrados sob pressão reduzida. Ácido acético residual foi removido azeotropicamente via adição de tolueno (5 ml) seguido de concentração sob pressão reduzida (3x) para proporcionar o composto do título (74,5 mg, 55ã) como um sólido branco.
A uma solução de 53c (74,5 mg, 0,176 mmol) e (R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etanol (42,1 mg, 0,212 mmol) em diclorometano (3,5 ml) foram adicionados cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-Ν' -etilcarbodiimida (47,2 mg, 0,246 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (11 mg, 88 pmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 18 h, a mistura de reação foi purificada diretamente por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 12 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (67,6 mg, 64%) como um sólido branco.
A uma solução de 53d (25 mg, 41 pmol) em tolueno (8,2 ml) foi adicionado o catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (2,5 mg, 4,1 pmol) a 23 °C sob uma atmosfera de árgon, e a mistura resultante foi aquecida até 110°C. Após 2 h, a mistura de reação foi extinta com etilo vinil éter (300 μΐ) e a mistura resultante foi deixada a arrefecer até 23 °C. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (Coluna de 12 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) . As frações contendo o produto desejado foram combinadas e foram repurifiçadas por meio de HPLC preparativa para proporcionar o composto do título (1,7 mg, 7ã) como um pó branco como um ácido trifluoroacético sal. Rf = 0,40 (acetato de etilo) UV. ΧΗ RMN (400 MHz, CD3OD) δ 59,13 (S, 1 H) , 8,53 (s 1, 1 H) , 8,07 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 8,05 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,83 (s, 1H) , 7,55 (d, J = 8,3
Hz, 1 H) , 7,44 (s, 1 H) , 6,62 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 6,55- 6,45 (m, 1 H), 6,04 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 5,50 (q, J = 6,9
Hz, 1 H), 4,40 (d, J = 14,1 Hz, 1 H), 4,33 (d, J = 9,7 Hz, 1 H), 3,78 (d, J = 11,0 Hz, 1 H), 3,36 (app dd, J = 14,7, 6.7 Hz, 1 H), 2,99 (dd, J = 14,5, 4,9 Hz, 1 H), 2,90-2,66 (m, 4H), 2,02-1,83 (m, 4H), 1,82-1,70 (m, 3H), 1,68 (d, J = 6.7 Hz, 3H) , 1,65 (d, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,33-1,16 (m, 4H) , 1,16-0,94 (m, 2H). HPLC Tr = tR (min), 3,091 (coluna
Synergi 4u hidro-RP, 50 3 4,60 mm 4 micras, 7 min, 2ml/min, 5-100% de acetonitrilo / água, gradiente modificado de 0,05ã de ácido trifluoroacético). LCMS (m/z) 562,3 [ΜμΗ],
Tr = 2,17 min. EXEMPLO 54: Composto 54
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (300 mg, 0,69 mmol) em diclorometano (1,84 ml) foi lentamente adicionado ácido trifluoroacético (460 μΐ, 6,00 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 2 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (3,45 ml) e ácido (S)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3 -fenil-propiónico (201 mg, 0,760 mmol), hexafluorofosfato metanaminio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (289 mg, 0,760 mmol), e N,JV-diisopropiletilamina (180 μΐ, 1,04 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 22 h, a mistura de reação foi diluída com acetato de etilo (300 ml) , e a mistura resultante foi lavada com salmoura (3 3 200 ml) , foi seca em sulfato de sódio anidro, e foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 24 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (319 mg, 96%) como um óleo incolor. Rf = 0,75 (acetato de etilo) I2/coloração de Sílica.
A uma solução de 54a (414 mg, 0,716 mmol) em diclorometano (3,58 ml) foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (238,7 mg, 1,07 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 1 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi diluído com acetonitrilo (3,58 ml) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (272 mg, 0,716 mmol), N, N-diisopropiletilamina (498 μΐ, 2,86 mmol), e ácido (E)-pent-3-enoico (73,3 μΐ, 0,716 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 17 h, a mistura de reação foi diluída com diclorometano (50 ml) e a mistura resultante foi lavada com solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (50 ml) . A camada orgânica foi separada, foi seca em sulfato de sódio anidro, e foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (386 mg, 96ã) como sólido branco.
A uma solução de 54b (443 mg, 0,789 mmol) em tetrahidrofurano (13,2 ml) foi adicionado zinco em pó (1,03 g, 15,8 mmol) seguido de uma solução de acetato de amónio (912 mg, 11,8 mmol) em água (8,77 ml) a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 17 h, a mistura de reação foi aquecida até 45 °C. Após 2 h, a mistura de reação foi deixada a arrefecer até TA e foi filtrada através de uma almofada de Celite lavagem com água (10 ml) e acetato de etilo (10 ml). As camadas filtradas foram divididas e a camada aquosa foi diluída com salmoura (20 ml) e foi acidificada a pH 2 com solução a 12 N aquosa de cloreto de hidrogénio. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 3 100 ml) , e os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, e foram concentrados sob pressão reduzida. Ácido acético residual foi removido azeotropicamente via adição de tolueno (5 ml) seguido de concentração sob pressão reduzida (3x) para proporcionar o composto do título (276,2 mg, 8113 ) como um sólido banco.
A uma solução de 54c (275 mg, 0,640 mmol) e (R)-1-(3-vinil-isoquinolin-6-il)-etanol (153 mg, 0,770 mmol) em diclorometano (3,2 ml) foram adicionados N-{3-dinaetilaminopropil) -Ν' -etilcarbodiimida cloridrato (172 mg, 0,90 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (39 mg, 32 pmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 23 h, a mistura de reação foi purificada diretamente por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 24 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (203 mg, 52%) como um sólido branco.
A uma solução de 54d (170 mg, 278 pmol) em clorobenzeno (56 ml) foi adicionado o catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (8,7 mg, 14,0 pmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon, e a mistura resultante foi aquecida até 110°C. Após 3 h, a mistura de reação foi extinta com etilo vinil éter (300 μΐ) e a mistura resultante foi deixada a arrefecer até 23°C. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (Coluna de 12 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (18,9 mg, 120 ) como um tan sólido, g = 0,25 (acetato de etilo) UV. 1H RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,12 (s, 1H), 8,05 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,84 (s, 1 H), 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 7,32-7,12 (m, 5H), 6,66 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,48 (dt, J = 12,8, 5,6 Hz, 1H), 6,05 (q, J = 6,4 Hz, 1 H) , 5,53 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 4,73 (d, J = 12.2 Hz, 1 H), 4,43 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 3,80 (app t, J = 10.2 Hz, 1 H) , 3,30-3,22 (m, 1 H) , 3,09 (dd, J = 14,5, 4,9 Hz, 1 H), 2,96-2,69 (m, 3H), 2,04-1,87 (m, 2H), 1,82-1,56 (m, 2H) , 1,68 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,64 (d, J = 6, 9 Hz, 3H). HPLC Tr =3,060 min. LCMS (m/z) 570,5 [ΜμΗ], Tr = 2,14 min. EXEMPLO 55: Composto 55
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (500 mg, 0,1.16 mmol) em diclorometano (5,8 ml) foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (386 mg, 1,74 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 1 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi diluído com acetonitrilo (5,8 ml) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametil urónio (485 mg, 1,28 mmol) , N,Ardi isopropi let i lamina (302 μΐ, 1,74 mmol), N- terc- butoxicarbnil-3-(3-piridil)-L-alanine (337 mg, 1,27 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 20 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 40 g Combiflash HP Gold, gradiente de O-lOOã de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (570 mg, 85% ) como óleo amarelo claro.
A uma solução de 55a (570 mg, 0,984 mmol) em diclorometano (5,8 ml) foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (386 mg, 1,74 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de ãrgon. Após 1 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (478 mg) como óleo amarelo claro que foi utilizado sem purificação adicional.
A uma solução de 55b (120 mg, 0,250 mmol) em acetonitrilo (1,25 ml) foram sequencialmente adicionados ácido (E)-4-[6-((R)-1-hidroxi-etil)-isoquinolin-3-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (75 mg, 0,25 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2- (ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (95 mg, 0,25 mmol) , e N, Ardi isopropi let i lamina (173 μΐ, 1,00 mmol) a 23 °C sob uma atmosfera de árgon. N,N~Dimetilformamida (100 μΐ) foi então adicionado para promover a solubilidade dos reagentes. Após 23 h, a mistura de reação foi diluída com solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (25 ml) e salmoura (25 ml) e a mistura resultante foi extraída com diclorometano (2 X 25 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro e foram concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (76 mg, 4118 ) como um sólido incolor.
A uma solução de 55c (76 mg, 0,10 mmol) em tetrahidrofurano (0,3 ml) e água (0,2 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (2,4 mg, 0,10 mmol) a 23°C sob uma atmosfera de ãrgon. Após 2 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (61 mg, 990 ) como um sólido brano sal de carboxilato de lítio.
A uma solução de 55d (61 mg, 0,10 mmol) em diclorometano (50 ml) foram adicionados hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitripirrolidinofosfónio (208 mg, 400 pmol) e 4-dimetilaminopiridina (366 mg, 3,00 mmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 17 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (Coluna de 4 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-20ã metanol/diclorometano) para proporcionar o composto do título (1,2 mg, 2® ) como um sólido incolor. R = 0,4 0 (10® metanol em diclorometano) UV. ΧΗ RMN (400 MHz, CD30D) <5 9,03 (s, 1 H) , 8,31 (d, J = 1,6 Hz, 1 H) , 8,27 (dd, J = 4,9, 1,5 Hz, 1 H) , 7,95 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,82 (s, 1 H) , 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 7,46 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1 H), 7,24 (dd, J = 7,9, 4,9 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 6,37 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 5,95 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 5,57 (q, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,65 (d, J = 12,0
Hz, 1 H) , 4,32 (dl, J = 12,1 Hz, 1 H) , 3,83 (d, J = 11,8
Hz, 1 H) , 3,73-3,65 (m, 1H) , 3,00 (dd, J = 14,2, 5,0 Hz, 1H), 2,83 (dd, J = 13,9, 9,7 Hz, 1 H), 2,64 (br t, J = 11,2 Hz, 1 H), 1,95-1,73 (m, 2H), 1,69-1,59 (m, 1 H), 1,57 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,54 (d, J = 7,2 3H), 1,33 (s, 3H) , 1,16 (s, 3H). HPLC Tr = 4,491 min EXEMPLO 56: Composto 56
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (791 mg, 1,82 mmol) em diclorometano (10,0 ml) foi lentamente adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (483 μΐ, 2,73 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 45 min, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi diluído com diclorometano (10,0 ml) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol- 1-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (761 mg, 2,00 mmol), N, N-diisopropiletilamina (1,26 ml, 7,28 mmol), e ácido (S) -2 -(terc-butoxicarbonilamino)-4-fenilbutanoico (Fluka, 560 mg, 2,00 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 18 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi pré-absorvido em sílica e purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 40 g Isco Rf Gold Coluna, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (799 mg, 74%) como um óleo incolor.
A uma solução de 56a (799 mg, 1,34 mmol) em diclorometano (10,0 ml) foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (356 μΐ, 2,01 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 30 min, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi diluído com acetonitrilo (6,0 ml) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (560 mg, 1,47 mmol), N, N-diisopropiletilamina (932 μΐ, 5,36 mmol), e ácido (E)-pent-3-enoico (150 μΐ, 1,47 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 19 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi pré-absorvido em sílica e purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (598 mg, 78%) como um óleo incolor.
A uma solução de 56b (16 7 mg, 0,2 9 mmol) em tetrahidrofurano (3 ml) , metanol (1 ml) e água (1 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (7,6 mg, 0,32 mmol) a 23°C. Após 15 min, a mistura de reação foi concentrada até a secura sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em água (25 ml) e lavado com acetato de etilo. A camada orgânica foi extraída com solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (25 ml). As camadas aquosas combinadas foram acidificadas com solução a 1 M aquosa de ácido clorídrico a pH ~2 e extraída com acetato de etilo (3 3 25 ml) , e os extratos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro, e foram concentrados sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (129 mg, 100a) como um sólido branco.
A uma solução de 56c (129 mg, 0,29 mmol) e (R) -1 - (3 - vinil-isoquinolin-6-il)-etanol (64 mg, 0,31 mmol) em diclorometano (3,0 ml) foi adicionado cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N' -etilcarbodiimida (89 mg, 0,46 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (18 mg, 0,14 mmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 16 h, a mistura de reação foi purificada diretamente por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (87 mg, 48% ) como um sólido branco.
A uma solução de 56d (84 mg, 0,13 mrnol) em clorobenzeno (27 ml) foi adicionado o catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (8 mg, 13 μιηοΐ) a 23°C sob uma atmosfera de árgon, e a mistura resultante foi aquecida até 110 °C. Após 2 h, o catalisador de 2 a geração de Hoveyda-Grubbs (7,3 mg, 11 pmol) foi adicionado sob ãrgon a 110°C. 0 catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (5 mg, 8 pmol) foi então adicionado no intervalo de 30 min durante três vezes em cujo ponto a reação estava concluída. A mistura de reação foi extinta com etilo vinil éter (1,0 μΐ) e a mistura resultante foi deixada a arrefecer até 23°C. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (24 g Isco Rf Gold Coluna, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos durante 10 mine então 100% de acetato de etilo durante 25 min) para propccionar 0 composto do título (9,1 mg, 12Ê3 ) como um sólido estanho pálido. Rf = 0,20 (acetato de etilo). ΧΗ RMN (400 MHz, CD3OD) δ 9,00 (s, 1H) , 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,71 (s, 1 H), 7,45 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1 H), 7,36 (s, 1 H), 7,20- 7,08 (m, 4H), 7,08-7,00 (m, 1 H), 6,55 (d, J = 15,9 Hz, 1 H) , 6,40 (ddd, J = 15,9, 7,0, 5,1 Hz, 1 H) , 5,95 (q, J = 6.5 Hz, 1 H), 5,40 (q, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,60 (d, J - 12,1
Hz, 1 H) , 4,53 (dd, J = 8,2, 6,9 Hz, 1 H) , 4,30 (d, J = 12.5 Hz, 1H) , 3,70-3,63 (m, 1H) , 3,31-3,23 (m, 1H) , 2,93 (ddd, J = 14,0, 5,1, 1,6 Hz, 1 H), 2,69-2,52 (m, 3H), 2,01- 1,73 (m, 4H), 1,71-1,54 (m, 2H) , 1,59 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,46 (d, J = 7,3 Hz, 3H). HPLC Tr = 5,108 min. LCMS (m/z) 584,3 [ΜμΗ], Tr =2,12 min. EXEMPLO 57: Composto 57
Uma solução de éster 2,2,2,-tricloroetílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3 -metilbutirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (1,61 g, 3,03 mmol) em diclorometano (31 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água sob árgon. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (1,23 g, 5,5 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 2 h. A reação foi extinta com N, N-diisopropiletilamina (1,2 g, 9,2 mmol) e metanol (8,5 ml). A mistura foi concentrada a vácuo e foi redissolvida e concentrada de tolueno (2 x 25 ml) . 0 resíduo resultante bruto contendo éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil] -hexahidro-piridazina-3-carboxílico (1,05 g) foi utilizado sem purificação adicional.
A uma solução de éster metilico do ácido (E)-4-[6-((R)-1-hidroxi-etil)-isoquinolin-3-il]-2,2-dimetil-but-3- enoico (1,05 g, 3,51 mmol) em tetrahidrofurano (8 ml) foi adicionado metanol (4 ml) , água (4 ml) , e hidróxido de lítio hidrato (297 mg, 7,08 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 6 h e foi extinta com ácido clorídrico a 1 M aquoso (7,2 ml, 7,2 mmol) . A solução resultante foi concentrada a um resíduo bruto que foi redissolvido e concentrado de anidro metanol (50 ml) seguido de tolueno (50 ml) . 0 sólido resultante amarelo (1,3 g, 1000 ) ácido (E)-4-[6-((R)-1-hidroxi-etil)-isoquinolin-3-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico foi utilizado sem purificação adicional. Um porção de ácido (E)-4-[6-((R)-1-hidroxi- etil ) -isoquinolin-3-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico bruto (1,05 g, 2,84 mmol) foi dissolvido em N, N-dimetilformamida (12 ml) sob árgon. N, W-diisopropi let i lamina (1,85 g, 14,3 mmol) foi adicionada seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,42 g, 3,73 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 3 min, em cujo tempo 57a bruto foi adicionado como uma solução em N, IV-dimetilformamida (8,5 ml), lavagem com N, N-dimetilformamida adicional (2x5 ml). A reação foi agitada durante 40 min e foi então diluída com acetato de etilo (200 ml) e água (300 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (200 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (150 ml) , e a segunda camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (100 ml) . Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrado, e concentrados. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 35 a 60ã acetona em iso-hexanos, gradiente contínuo) para proporcionar o composto do título (1,51 g, 71ã ao longo de 2 etapas) como um óleo incolor. RF 0,5 (500 acetona emiso-hexanos).
A uma solução de 57b (1,50 g, 2,15 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml) foi adicionado metanol (10 ml) , água (10 ml), e hidróxido de lítio hidrato (365 mg, 8,7 mmol) . A mistura foi agitada durante 75 min a temperatura ambiente e foi então extinta com ácido clorídrico a 1 M aquoso (8,8 ml, 8,8 mmol). A solução resultante foi concentrada a vácuo, e o produto bruto foi duas vezes dissolvido e concentrado de metanol (40 ml) e suspenso e concentrado de acetonitrilo (6 x 30 ml) para proporcionar 1,71 g de um sólido incolor que foi utilizado sem purificação adicional. Sob árgon, anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (1,85 g, 5,37 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (1,97 g, 16,1 mmol) foram dissolvidos em 1,2-dicloroetano (700 A solução resultante foi aquecida até 50°C, e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota via seringa como uma solução em N,N-dimetilformamida (22 ml) ao longo de 6 h. Uma lavagem adicional com N, N-dimetilformamida (1,5 ml) foi então adicionado da mesma maneira ao longo de 15 min. Após agitar um 1,25 h adicional, a mistura de reação foi concentrada a um volume final de 200 ml a vácuo. A solução foi lavada com água (250 ml) , e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (150 ml) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada, e concentrada. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (200 ml) e foi lavada com água (150 ml) . A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (150 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com água (100 ml) , e a segunda fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (100 ml). Os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 35 a 65ã de acetona em íso-hexanos gradiente contínuo) para proporcionar 44 5 mg do composto do título puro como um sólido branco amorfo juntamente com 389 mg de produto impuro. As frações impuras foram purificadas por meio de recristalização de acetona:iso-hexanos para proporcionar um 173,5 mg adicional de composto do título puro (total: 618,5 mg, 52ã) . RF 0,5 (50ã acetona em iso-hexanos) . RMN (400 MHz, CD3OD) δ 9,13 (s, 1 H) , 8,04 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,89 (s, 1 H), 7,55 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H), 7,53 (s, 1 H) , 6,73-6,34 (m, 2H) , 6,03 (q, J = 6,6 Hz, 1 H) , 5,63 (q, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,67 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 4,47-4,21 (m, 2H) , 3,81-3,73 (m, 1 H) , 2,76-2,64 (m, 1 H) , 2,08-1,81 (m, 3H) , 1,80-1,58 (m, 8H) , 1,51 (s, 3H) , 1,35 (s, 3H) , 0,98 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 550,2 [ΜμΗ], Tr = 2,74 min. EXEMPLO 58: Composto 58
Uma solução de N,N- diisopropilamina (2,51 g, 24,8 mmol) em tetrahidrofurano (150 ml) sob árgon foi arrefecida num banho de gelo e água. Uma solução de n-butillítio em hexanos (2,5 M, 9,7 ml, 24 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 2 min, e a solução resultante foi agitada durante 15 minutos adicionais. A solução foi então arrefecida até -78°C via C02(S) :acetona banho, e 1-acetilciclopropanocarboxilato de etilo (3,47 g, 22,2 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 2 min. A solução foi agitada durante um adicional de 2 0 min, e 2V-Fenil-bis(trifluorometanosulfonimida) (8,4 g, 23,5 mmol) foi adicionado como uma solução em tetrahidrofurano (24 ml) via cânula ao longo de 5 min, lavagem com porções adicionais de tetrahidrofurano (2x5 ml) . A solução resultante foi removida do banho frio. Após um adicional 30 min, a mistura de reação foi concentrada a vácuo e foi diluída com dietil éter (200 ml). A fase orgânica foi lavada com hidróxido de sódio aquoso a 1 Μ (1 x 100 ml, 1 x 30 ml), seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada, e concentrada para proporcionar 6,6 g de um óleo bruto que foi utilizado sem purificação adicional. Uma solução dep material bruto da etapa anterior em piridina anidra (11 ml) foi aquecida até 90°C. Após 16,5 h, a mistura de reação foi diluída com dietil éter (200 ml) e ácido clorídrico a 3 M (100 ml) e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada com ácido clorídrico a 3 M (50 ml) e hidróxido de sódio a 1 M (50 ml) , seca sobre sulfato de magnésio, filtrado, e concentrada para proporcionar 2,2 g de um líquido bruto que foi utilizado sem purificação adicional. A um vaso esguichado com árgon contendo dicloreto de zirconoceno (410 mg, 1,6 mmol) foi adicionado uma solução do produto bruto da etapa anterior (2,2 g, ca. 16 mmol) e pinacolborano (3,1 g, 24 mmol) em diclorometano (8 ml) . Após 116 h, a mistura de reação agitada foi diluída com acetato de etilo (50 ml) e foi extinta pela adição gota a gota de água. A mistura foi ainda diluída com água (50 ml) , e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas, e concentradas a um resíduo bruto que foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (5 a 200 de acetato de etilo em iso-hexanos, gradiente contínuo) para proporcionar o composto do título (1,26 g, 210 ao longo de 3 etapas) como tn óleo que cristalizou em repouso a -15°C.
A um balão de fundo redondo foi adicionado (R)-1-(3-cloroisoquinolin-6-il)etanol (204 mg, 0,982 mmol), 58a (314 mg, 1,18 mmol), PdCl2(PCy2(p-NMe2Ph))2 (bis[(diciclohexil)(4-dimetilaminofenil)fosfina] paládio(II) cloreto) (40 mg, 0,049 mmol) e fosfato de potássio tribásico (680 mg, 3,2 mmol). O vaso foi vedado com um tampa de septo e foi esguichado com árgon. Ciclopentil metil éter (2,8 ml) e água (1,2 ml) foram adicionados, e a mistura resultante bifásica foi vigorosamente agitado num banho de óleo pré-aquecido até 90°C. Após 6,75 h, a reação foi arrefecida até temperatura ambiente e foi diluída com acetato de etilo (50 ml) e água (40 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (50 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtrado, e concentrado para proporcionar um resíduo bruto que foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 35 a 60S de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (266 mg, 85E3 ) .
A uma solução de 58b (266 mg, 0,854 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml) foi adicionado metanol (1 ml), água (1 ml), e hidróxido de lítio hidrato (70,8 mg, 1,69 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 3 h e foi então extinta com ácido clorídrico a 1 M aquoso (1,8 ml, 1,8 mmol). Voláteis foram removidos a vácuo, e o sólido resultante foi suspenso em tolueno. Voláteis foram removidos a vácuo, e o sólido resultante amarelo ácido 1-{(E)-2-[6-((R)-1-hidroxietil)-isoquinolin-3-il] -vinil}-ciclopropanocarboxílico foi utilizado sem purificação adicional. Uma solução de éster 2,2,2,-tricloroetílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3- metilbutirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (486 mg, 0,914 mmol) em diclorometano (9,4 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água sob árgon. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (370 mg, 1,7 mmol) foi adicionado gota a gota, e a solução resultante foi agitada durante 4 h. A reação foi extinta com N, N-diisopropiletilamina (360 mg, 2,7 mmol) e metanol (2,5 ml). A mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo resultante foi redissolvido e concentrado de tolueno (2 x 15 ml) . A amina bruta resultante foi utilizada sem purificação adicional. A uma solução de ácido 1-{(E)-2-[6-((R)-1-hidroxietil)-isoquinolin-3-il]-vinil}- ciclopropanocarboxílico bruto (ca. 0,854 mmol) em N,N-dimeti1formamida (3,5 ml) sob árgon foi adicionado N, N-diisopropiletilamina (560 mg, 4,3 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (427 mg, 1,12 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 2 min, em cujo tempo éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3- metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico bruto da etapa anterior foi adicionado como uma solução em N, N-dimetilformamida (2,5 ml) , lavagem com duas porções adicionais de N,N-dimetilformamida (1,5 ml cada). A reação foi agitada durante 45 min e foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e água (150 ml). As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (100 ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (75 ml) , e a segunda camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (75 ml). Os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 35 a 6OKI de aceóna em íso-hexanos, gradiente contínuo) para proporcionar composto do título (467 mg, 780 ao longo de 2 etapas) como m óleo incolor.
A uma solução de 58c (467 mg, 0,67 mmol) em tetrahidrofurano (6 ml) foi adicionado metanol (3 ml), água (3 ml), e hidróxido de lítio hidrato (113 mg, 2,69 mmol). A mistura foi agitada durante 1,75 h a temperatura ambiente e foi extinta com ácido clorídrico a 1 M aquoso (2,8 ml, 2,8 mmol) . A solução resultante foi concentrada a vácuo, e o produto bruto foi suspenso e concentrado from acetonitrilo (5 x 20 ml) para proporcionar 530 mg de um sólido amarelo pálido que foi utilizado sem purificação adicional. Sob árgon, anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (283 mg, 0,82 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (307 mg, 2,51 mmol) foram dissolvidos em 1,2-dicloroetano (100 ml) . A solução resultante foi aquecida até 50°C, e um porção de o ácido seco bruto (260 mg, ca. 0,33 mmol) foi adicionado gota a gota via seringa como uma solução em N,JV-dimetilformamida (3,5 ml) e 1,2-dicloroetano (10 ml) over 6 h. Uma lavagem adicional de N,N- dimetilformamida (1 ml) foi então adicionado da mesma maneira. Após agitar um adicional 1,25 h, a mistura de reação foi concentrada a -35 ml a vácuo. A solução foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e lavada com água (100 ml) . A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (75 ml) , e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 ml). A segunda fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (50 ml) , e os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (de 35 a 60 e então a 100% de acetona em íso-hexanos) para proporcionar 101 mg de produto impuro contendo o composto do título. Este material foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (de 0 a 5l de metanol em acetato de etilo) seguidode HPLC de fase reversa (de 5 a 1000 de acetonitrilo/água (1,10 de ácido trifluoroacético) para proporcionar o composto do título como seu sal de ácido trifluoroacético (37 mg, 17 ã ao longo de 2 etapas). LH RMN (400 MHz, CDs0D) δ 59,55 (s, 1 H) , 8,37 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 8,06 (s, 1 H) , 7,89 (s, 1 H) , 7,85 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6,69 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 6,54 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 6,11 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,75- 5,67 (m, 1 H) , 4,46-4,36 (m, 1 H) , 4,36-4,28 (m, 1 H) , 3,90-3,78 (m, 1 H), 2,80-2,68 (m, 1 H), 2,05-1,86 (m, 3H), 1,80-1,68 (m, 1,66-1,57 (m, 5H), 1,40-1,30 (m, 1 H), 1,30- 1,21 (m, 1 H), 1,03-0,93 (m, 4H), 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3H). LCMS (m/z) 548,4 [ΜμΗ], Tr = 2,79 min. EXEMPLO 59: Composto 59
Num balão seco em forno, purgado com árgon foram colocados hidreto de potássio livre de óleo (from 1740 mg de ca. 30ã dispersão em óleo mineral, ca. 13 mmol), tetrahidrofurano anidro (10 ml) e hexano (1 ml) . 0 balão foi repurgado com árgon e tricloroetileno (900 0 1,1,32 g, 10 mmol) foi adicionado seguido de metanol seco (10 01, 7,9 mg, 0,25 mmol). Esta mistura foi agitada a TA durante duas h. Após este tempo, hexano (10 ml) foi adicionado e a solução resultante foi imediatamente utilizado na etapa seguinte.
Num balão seco em forno, purgado com árgon tetrahidrofurano (50 ml) foi adicionado e a solução foi arrefecida com um banho de gelo. Uma solução a 1,8 M de diisopropilamida de lítio (7,2 ml, 13 mmol) em tetrahidrofurano/heptano/etilbenzeno foi adicionado. A solução resultante foi arrefecida até -78° C, e tratada gota a gota com tetrahidro-2H-piran-4-carboxilato de metilo (1,20 ml. 1,30 g, 9 mmol) seguido de hexametilfosforamida (1,56 ml, 1,61 g, 9 mmol). A solução resultante foi aquecida até 0°C, agitada durante 20 min., arrefecida até -78°C, e tratada gota a gota com solução pré-arref ecida (0°C) de 1,2-dicloro-etino (ca. 10 mmol) . A mistura de reação foi agitada a-78°C durante 30 min e então deixada a aquecer a TA. Após 4 h a TA, a mistura de reação foi vertida em gelo triturado e extraída com dietil éter (200 ml) (5 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). A fase orgânica foi separada e lavada com água (200 ml) . Esta fase de água foi extraída com dietil éter (100 ml). As frações orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml) , seca sobre sulfato de magnésio, filtradas através de uma camada de 2 cm de gel de sílica (a camada de gel de sílica foi lavada com 50 ml de acetato de etilo), e então concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi submetido a cromatograf ia em gel de sílica (gradiente desde 0-15% de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (1,22 g, 67%) como um óleo incolor. Rf = 0,48, 30% de acetato de etilo em iso- hexanos, ácido fosfomolíbdico em etanol.
59b (1,01 g, 5 mmol) e cobre em pó (1,6 g, 25 mmol) foram suspensos em tetrahidrofurano (100 ml). Ácido acético (15 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida até 60°C durante 3 h. Após este tempo, a mistura de reação foi vertida sobre água (o cobre em pó foi retirado por meio de filtração com a utilização do papel de filtração) e extraída com dietil éter (3 x 50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de cloreto de amónio (3 x 50 ml) , com solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 50 ml) e com água (50 ml). Esta fase de água foi extraída com dietil éter (50 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados através de uma camada de 2 cm de gel de sílica (a camada de gel de sílica foi lavada com 50 ml de acetato de etilo) , e concentrado sob pressão reduzida. Após secagem sob alto vácuo durante um dia, o composto do título foi isolado (0,84 g, rendimento quantitativo) como um óleo incolor. Rf = 0,37, 30% de acetato de etilo em iso-hexanos, ácido fosfomolíbdico em etanol.
Num balão seco em forno, purgado com árgon foram colocados 59c (0,84 g, 5 mmol) e diclorometano (2mL) . Esta mistura foi arrefecida até 0°C. Pinacolborano (0,96 g, 7,5 mmol) foi então adicionado gota a gota via seringa. Após a mistura foi agitada durante 1 min., foi transferida por meio de uma seringa em outro balão seco em forno, purgado com árgon, imerso num banho de gelo e protegido da luz, contendo dicloreto de zirconoceno (0,13 g, 0,5 mmol). Uma porção adicional de diclorometano (2 ml) foi utilizado para completar a transferência quantitativa. Após isto a mistura foi aquecida até temperatura ambiente, foi agitado no escuro durante 72 h para conseguir completar A mistura de reação foi diluída com acetato de etilo (50 ml) e cuidadosamente extinta com água (1 ml) . Água (50 ml) foi adicionado e as fases orgânica e aquosa foram separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 40 ml). As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada para proporcionar o resíduo bruto que foi dissolvido em íso-hexanos (50 ml) e extraída com 5-10% aquoso metanol (3 x 50 ml) e com salmoura (50 ml). A fase de hexano foi seca sobre sulfato de magnésio. 0 composto do título foi isolado como o composto cristalino branco após a evaporação (1,42 g, 93%). Rf = 0,38, 30% de acetato de etilo em íso-hexanos, vapor de iodo.
Num balão seco em forno, purgado com árgon foram colocados (R)-1- (3-cloro-isoquinolin-6-il) -etanol (0,83 g, 4 mmol) , 59d (1,40 g, 4,7 mmol), PdCl2 (PCy2 (p-NMe2Ph) ) 2 (bis[(diciclohexil)(4-dimetilaminofenil)fosfina] paládio (II) cloreto) (173 mg, 0,21 mmol) e fosfato de potássio tribásico (2,64 g, 12,4 mmol). 0 balão foi vedado com uma tampa de septo e foi repurgado com árgon. N, N-Dime t i 1 f ormamida (10 ml) foi adicionada e, e a mistura resultante de reação foi vigorosamente agitada num banho de óleo pré-aquecido até 80°C. Após 2 h, a reação foi arrefecida até temperatura ambiente e foi diluída com acetato de etilo (100 ml) e água (100 ml) . As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas, e concentradas para proporcionar um resíduo bruto que foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40% de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (1,06 g, 78%) como um óleo incolor após a evaporação. Rf = 0,48, iso-hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1).
A uma solução de 59e (1,02 g, 3 mmol) em tetrahidrofurano (8 ml) foi adicionado metanol (4 ml), água (4 ml) e hidróxido de lítio hidrato (0,15 g, 6,3 mmol) . A mistura resultante foi agitada a TA durante 10 h e extinta com ácido clorídrico a 1 M (6,5 ml, 6,5 mmol) . A solução resultante foi concentrada a um resíduo bruto que foi co-evaporado duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml), duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (20 ml). 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e utilizado sem purificação adicional (1,24 g, rendimento quantitativo).
Uma solução de le (0,53 g, 1 mmol) em diclorometano (10 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,69 g, 1,80 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C sob árgon, e a
solução resultante foi agitada a TA durante 30 min. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto foi dissolvido em acetonitrilo anidro (12 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0°C, 59f (371 mg, 0,9 mmol) e N, N-diisopropiletilamina (517 mg, 4 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (570 mg, 1,5 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA durante 48 h. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução a 200 em água de ácdo cítrico (2 x 50 ml) , água (50 ml) e salmoura (50 ml) , seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-400 de acetato de etilo e metanò (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (560 mg, 840 ) como um sólido branco após a evaporação. R = 0,13, íso-hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1).
A uma solução de 59g (371 mg, 0,5 mmol) em tetrahidrofurano (8 ml) foi adicionado metanol (4 ml), água (4 ml) e hidróxido de lítio hidrato (36 mg, 1,5 mmol) . A mistura foi agitada durante 2 h a temperatura ambiente e foi extinta com ácido clorídrico a 1 M aquoso (1,6 ml, 1,6 mmol) . A solução resultante foi concentrada a um resíduo bruto que foi co-evaporado duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml) , duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (20 ml) . 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional (365 mg, rendimento quantitativo). Num balão seco em forno, purgado com árgon foram colocados anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (258 mg, 0,75 mmol), 4-dimetilaminopiridina (275 mg, 2,25 mmol) e anidro 1,2-dicloroetano (150 ml) . A solução resultante foi aquecida a 50°C, e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota via seringa como uma solução em seco N,N-dimetilfornaamida (10 ml) ao longo de 12 h. Uma porção adicional de N, Ν'-dime t i 1 f ormamida seca (2 x 5 ml) foi utilizado para completar a transferência quantitativa. Após agitar durante adicional 2 h a 50°C, a mistura de reação foi transferida a um funil de separação e lavada com água (100 ml, 5 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e foi lavado com água (100 ml, 5 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação) . A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (50 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (100 ml, 5 ml de salmoura foi adicionado para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com acetato de etilo (50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40ã de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (72 mg, 240 ) como um sólido branco após evaporação. R = 0,42, 100 de metanol em diclorometano. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) : δ 9,04 (s, 1 H) , 7,95 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,76 (s, 1 H) , 7,47 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1 H) , 7,31 (s, 1 H) , 6,43 (m, 2H) , 5,93 (q, J = 6,6 Hz, 1 H) , 5,44-5,36 (m, 1 H) , 4,33- 4,23 (m, 2H) , 3,84 (dt, J = 11,6, 4,1 Hz, 1H) , 3,76-3,69 (m, 1H) , 3,68-3,61 (m, 2H) , 3,48 (m, 1H) , 2,65-2,56 (m, 1H), 2,16-2,07 (m, 2H), 2,03-1,93 (m, 1 H), 1,91-1,82 (m, 2H), 1,7 9e (m, 1 H), 1,67-1,62 (m, 3H), 1,59 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,51 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,85 (d, J = 6,7 Hz, 3H). LCMS (m/z) 592,3 [ΜμΗ]' Tr = 3,12 min. EXEMPLO 60: Composto 60
Uma solução de Composto 5 9 (10 mg, 0,017 mmol) numa mistura de acetato de etilo (4 ml) e tetrahidrofurano (4 ml) contendo 100 de paládio em carbono (10 mg) foi hidrogenada a TA e a pressão atmosféricas de hidrogénio durante 3 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (10 ml). 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (10 mg, rendimento quantitativo) como um sólido branco. Rf = 0,47, 10% de metanol em diclorometano. ‘‘Ή RMN (4 00 MHz, CD30D) : δ 9,02 (s, 1 H) , 7,94 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,81 (s, 1 H) , 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,20 (s, 1 H), 6,02 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 5,78-5,71 (m, 1 H) , 5,24 (m, 1 H) , 4,33-4,23 (m, 2H) , 3,83-3,61 (m, 6H), 3,52 (m, 1 H), 2,71-2,66 (m, 1 H), 2,43- 2,36 (m, 2H), 2,14-2,05 (m, 2H), 2,08-1,91 (m, 1 H), 1,90-
1,82 (m, 2H), 1,76 (m, 1 H), 1,67-1,62 (m, 2H), 1,57 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,54 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,96 (d, J = 6,7
Hz, 3H) , 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 594,3 [ΜμΗ] '
Tr = 2,72 min. EXEMPLO 61: Composto 61
Uma solução de 1 e (1064 mg, 2 mmol) em diclorometano (30 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (666 mg, 3 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a TA durante 30 min. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto foi dissolvido em acetonitrilo anidro (25 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0°C, ácido hex-5-enoico (251 mg, 2,2 mmol) e N, W-diisopropiletilamina (1034 mg, 8 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1065 mg, 2,8 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA durante 48 h. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (200 ml) e a solução foi lavada com solução a 20% m água de ácido cítrico (2 x 150 ml) , água (150 ml) e salmoura (150 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40% de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (864 mg, 82ã) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,35, iso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1) .
A uma solução de 61 um (830 mg, 1,57 mmol) em tetrahidrofurano (40 ml) foram adicionados água (10 ml) e hidróxido de lítio hidrato (57 mg, 2,38 mmol). A mistura foi agitada durante 2 h a temperatura ambiente e então filtrado através de um 5 cm camada de resina DOWEX D50 x 8 em Ημ cycle (a resina em primeiro lugar foi lavada com água). Resina foi lavada com água adicional (50 ml). Filtrados foram recolhidos, concentrados sob pressão reduzida e co-evaporados duas vezes com tolueno (10 ml). Após secagem sob alto vácuo durante um dia, o composto do título foi isolado (590 mg, 95ã) como um sólido branco. Rf = 0,4, 30ã de metanol em diclorometano.
Num balão seco em forno, purgado com árgon foram adicionados 61 b (238 mg, 0,60 mmol) e (R) -1- (3-vinil-isoquinolin-6-il)-etanol (120 mg, 0,6 mmol). 0 balão foi vedado e a mistura de reação foi repurgada duas vezes com árgon. Diclorometano anidro (10 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi repurgada duas vezes com árgon. Cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (148 mg, 0,77 mmol) foi adicionado seguido de 4-dimetilaminopiridina (67 mg, 0,55 mmol). Mistura de reação foi rapidamente repurgada duas vezes com árgon e foi agitado a TA durante 12 h. A mistura de reação foi diluída com diclorometano (100 ml) e a solução foi lavada com solução a 20% em água de ácido cítrico (2 xl50 ml) , água (150 ml) e salmoura (150 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40% de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (307 mg, 89%) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,29, iso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1).
Uma solução de 61 c (209 mg, 0,362 mmol) em tolueno (150 ml) foi agitado a TA sob árgon. catalisador de 2 a geração de Hoveyda-Grubbs (23 mg, 0,036 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a refluxo sob ãrgon durante 30 min. Mistura de reação foi arrefecida até TA e acetato de etilo (50 ml) foi adicionado. Esta solução foi lavada duas vezes com solução aquosa de tris (hidroximetil) fosf ina (372 mg, 3 mmol em 100 ml de água), com água (2 x 50 ml) e com salmoura (50 ml). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40ã de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (125 mg, 63ã) como um sólido branco após evaporação. R±- = 0,25, iso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1). 1H RMN (400 MHz, CD30D) : δ 9,00 (s, 1 H) , 7,91 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,77 (S, 1 H) , 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,23 (s, 1 H) , 6,64 (m, 1 H), 6,29 (d, J = 15,4 Hz, 1 H), 5,97 (q, J = 5,9 Hz, 1 H) , 5,53 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 4,37-4,18 (m, 2H) , 3,65 (d, J = 9,8 Hz, 1H) , 2,65 (t, J = 12,3 Hz, 1H) , 2,36-2,18 (m, 4H) , 1,98 (m, 1 H) , 1,94-1,73 (m, 3H) , 1,71-1,57 (m, 3H) , 1,55 (d, J = 5,6 Hz, 6H) , 0,83 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 0,78 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 550,2 [ΜμΗ]' Tr = 2,55 min. EXEMPLO 62: Composto 62
Uma solução de Composto 61 (10 mg, 0,018 mmol) numa mistura de acetato de etilo (4 ml) e tetrahidrofurano (4 ml) contendo 10S de paládio em carbono (10 mg) foi hidrogenada a TA e a pressão atmosféricas de hidrogénio durante 3 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (10 ml). O filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (9 mg, 89ã) como um sólido branco. Rf = 0,16, íso-hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1). ]H RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,02 (s, 1 H) , 7,93 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 7,62 (s, 1 H) , 7,47 (s, 1 H), 7,44 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,02-5,93 (m, 1 H), 5,39 (m, 1 H) , 4,03 (m, 1H) , 3,69 (m, 1H) , 2,84 (m, 2H) , 2,27 (s, 1H) , 2,10 (m, 1H) , 1,97 (m, 1H) , 1,85 (m, 2H) , 1,76 (m, 2H) , 1,62 (m, 4H) , 1,54 (d, J = 5,1 Hz, 3H) , 1,39 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,19 (m, 4H) , 0,78 (d, J = 5,0 Hz, 3H) , 0,73 (d, J = 5,8 Hz, 3H). LCMS (m/z) 552,3 [ΜμΗ]' Tr = 2,10 min. EXEMPLO 63: Composto 63
Uma solução de 1 e (1064 mg, 2 mmol) em diclorometano (30 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (666 mg, 3 mmol) foi adicionado gota a gota a 0°C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a TA durante 30 min. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto foi dissolvido em acetonitrilo anidro (25 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0°C, ácido hept-6-enoico (281 mg, 2,2 mmol) e N, N-diisopropiletilamina (1034 mg, 8 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1065 mg, 2,8 mmol) . A mistura de reação foi agitada a TA durante 48 h. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (200 ml) e a solução foi lavada duas vezes com solução a 20ã em água de ácido cítrico (2 x 150 ml), água (150 ml) e salmoura (150 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40ã de acetato de etilo μ metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (817 mg, 75ã) como um sólido branco após evaporaçlEI o. E = 0,37, iso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1).
A uma soluçlEI o de 63a (790 mg, 1,46 mmol) em te trahidrof urano (40 ml) foi adicionado água (10 ml) e hidróxido de lítio hidrato (52 mg, 2,19 mmol). A mistura foi agitada durante 2 h a temperatura ambiente e entS o filtrada através de um 5 cm camada de resina DOWEX D50 x 8 em Ημ cycle (resina em primeiro lugar lavada com água). Resina foi lavada com água adicional (50 ml). Os filtrados foram recolhidos, concentrados sob pressH o reduzidae co-evaporados duas vezes com tolueno (10 ml). Após secagem sob alto vácuo durante um dia, o composto do título foi isolado (583 mg, 97ã) como um sólido branco. Rf = 0,4, 30ã de metanol em diclorometano.
Num balão seco em forno, purgado com árgon foram adicionados 63b (276 mg, 0,67 mmol) e (R)-1-(3-vinil- isoquinolin-6-il) -etanol (134 mg, 0,67 mmol) . 0 balão foi vedado e a mistura de reação foi repurgada duas vezes com árgon. Diclorometano anidro (10 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi repurgada duas vezes com árgon. Cloridrato de N-(3-Dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (168 mg, 0,87 mmol) foi adicionado seguido de 4-dimetilaminopiridina (75 mg, 0,62 mmol). A mistura de reação foi rapidamente repurgada duas vezes com árgon e foi agitado a TA durante 12 h. A mistura de reação foi diluída com diclorometano (100 ml) e a solução foi lavada com solução a 20% em água de ácido cítrico (2 xl50 ml) , água (150 ml) e salmoura (150 ml), seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40% de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (316 mg, 7 9%) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,30, iso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1)-
Uma solução de 63c (255 mg, 0,431 mmol) em tolueno (200 ml) foi agitado a TA sob árgon. catalisador de 2a geração de Hoveyda-Grubbs (27 mg, 0,043 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a refluxo sob árgon durante 30 min. A mistura de reação foi arrefecida até TA e acetato de etilo (50 ml) foi adicionado. Esta solução foi lavada duas vezes com solução aquosa de tris (hidroximetil) fosfina (372 mg, 3 mmol em 100 ml de água) , duas vezes com água (50 ml) e com salmoura (50 ml) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40ã de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (76 mg, 3 lã) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,20, íso- hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1). ΧΗ RMN (400 MHz, CD30D) : δ 9,01 (S, 1 H) , 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,69 (s, 1 H) , 7,57 (s, 1 H) , 7,43 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,55 (m, 1 H) , 5,95 (m, 1 H) , 5,43 (m, 1 H) , 5,23 (m, 3H) , 4,32 (m, 1 H), 4,20 (m, 1 H), 3,67 (m, 1 H), 2,69 (m, 1 H), 2,30 (m, 2H) , 2,13 (m, 2H) , 1,96 (m, 3H) , 1,83 (m, 1 H) , 1,64 (m, 3H) , 1,56 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,44 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 0,92-0,72 (m, 6H). LCMS (m/z) 564,4 [ΜμΗ]' Tr = 2,60 min. EXEMPLO 64: Composto 64
Uma solução de Composto 63 (15 mg, 0,027 mmol) numa mistura de acetato de etilo (4 ml) e tetrahidrofurano (4 ml) contendo 100 de paládio em carbono (10 mg) foi hidrogenada a TA e a pressão atmosféricas de hidrogénio durante 3 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (10 ml) . 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (13 mg, 87ã) como um sólido branco. Rf = 0,11, íso-hexanos/acetato de etilo/metanol (6/4/1). XH RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,02 (s, 1 H) , 7,95 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 7,68 (s, 1 H) , 7,50 (s, 1 H) , 7,45 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 5,93 (q, J = 6,3 Hz, 1 H) , 5,20 (m, 1 H) , 4,21 (m, 1 H) , 4,07 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 3,66 (m, 1 H), 2,83 (m, 4H), 2,25 (m, 1 H), 2,07 (m, 1 H), 1,94 (m, 2H) , 1,80e (m, 1 Η) , 1,63 (m, 3H) , 1,55 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,51-1,42 (m, 2H) , 1,37 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,25 (m, 4H) , 0,83 (d, J = 6,7 Hz, 6H) . LCMS (m/z) 566,3 [ΜμΗ], Tr = 2,27 min. EXEMPLO 65: Composto 65
A uma solução de (R)-1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etanol (250 mg, 1,21 mmol), e fosfato de potássio tribãsico (770 mg, 3,63 mmol) em ciclopentil metil éter (4,5 ml) e água (1,5 ml) preaquecida até 90°C sob uma atmosfera de árgon foram adicionados éster pinacólico do ácido 3-(2-metoxi-2-oxoetil)fenilborónico, (Combi-Blocks, 387 mg, 1,33 mmol) e (A-caPhos) 2PdCl2 (49 mg, 60 pmol) . Após 17 h, a reação foi deixada a arrefecer até 23°C, e foi particionado entre diclorometano (50 ml) e solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (50 ml) . As fases foram divididas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (50 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro, e foram concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 24 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-1000 de acetato de etilo/iiso-hexanos) para proporcionar o composto do título (321 mg, 830 ) com um óleo amarelo desbotado.
A uma solução de 65a (320 mg, 1,00 mmol) em tetrahidrof urano (3 ml) e água (2 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (26 mg, 1,1 mmol) a 23 °C sob uma atmosfera de ãrgon. Após 3 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (Coluna de 24 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-200 de metanol/diclorometano) para proporcionar o composto do título (64,2 mg, 210 ) como um óleo incolor. £ = 0,5 (200 de metanol em diclorometano) I2/cloloração de sílica.
A uma solução de 1 e (104 mg, 0,21 mmol) em diclorometano (1,05 ml) foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (70 mg, 1,07 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 1 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi diluído com acetonitrilo (1,05 ml) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urõnio (79,8 mg, 0,210 mmol), N,N-diisopropile ti lamina (140 μΐ, 0,840 mmol), e 65b (64 mg, 0,21 mmol) foram sequencialmente adicionados a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 18 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (140 mg, 93%) como um óleo amarelo desbotado.
A uma solução de 65c (140 mg, 0,195 mmol) em tetrahidrofurano (0,9 ml) e água (0,3 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (4,6 mg, 0,195 mmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon. Após 3 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (131 mg, 99%) como um sólido branco sal de carboxilato de lítio.
A uma solução de hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfónio (35,3 mg, 68 pmol) e 4 -dimetilaminopiridina (62,3 mg, 510 pmol) em diclorometano (5,7 ml) foi adicionado 65d (10 mg, 17 μπιοί) a 23 °C sob uma atmosfera de árgon. Após 16 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa (coluna Gemini 5u C18 110Â, 5-1000 de acetonitrilo/água, 0,10 ácido trifluoroacético modificados) para proporcionar o composto do título (6,0 mg, 520 ) como um sólido branco sal d. ácido trif luoroacético. ^ RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,70 (s, 1 H) , 8,58 (s, 1 H) , 8,48 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 8,32 (s, 1 H) , 7,97-7,87 (m, 2H), 7,79 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,62 (app t, J = 7,7 Hz, 1 H) , 7,53 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 6,21 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,84-5,71 (m, 1 H), 4,45-4,29 (m, 2H), 3,96 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 3,75 (dd, J = 11,1, 2,7 Hz, 1H), 3,64 (d, J = 15,5 Hz, 1H) , 2,74 (td, J = 12,8, 3,1 Hz, 1H) , 2,13-1,96 (m, 2H), 1,91 (d 1, J = 13,0 Hz, 1H), 1,81-1,65 (m, 2H) , 1,67 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,62 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,01 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,94 (d, J = 6,8 Hz, 3H) . HPLC Tr = 3,040 min. LCMS (m/z) 572,3 [M0 H], Tr = 207 min. EXEMPLO 66: Composto 66
A uma solução de 6-cloropiridin-3-amina (5,00 g, 38,8 mmol) em dioxano (194 ml) foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (10,2 g, 46,7 mmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon, e a mistura resultante foi aquecida até 100°C. Após 17 h, a mistura de reação foi deixada a arrefecer até 23°C, e foi diluída com água (500 ml) . A mistura resultante foi extraída com acetato de etilo (2 3 500 ml) , e os extratos orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro e foram concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (120 g Combiflash HP Gold Coluna, gradiente de 0-1000 de acetato de etilo/'iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (7,69 g, 870 ) como um óleo incolor.
A uma solução de 66a (2,00 g, 8,80 mmol) e tetrametiletilenodiamina (2,70 ml, 18,0 mmol) em dietil éter (44 ml) foi adicionado n-butillítio (2,5 M em hexanos, 7,2 ml, 18,0 mmol) a -78°C sob uma atmosfera de árgon. Após 10 min, a mistura resultante foi deixada a aquecer a -15°C ao longo de um período de 50 min. A mistura de reação foi arrefecida até -78°C, e N, W-dimetilformamida (1,9 g, 26 mmol) foi adicionado via seringa. Após 30 min, a mistura de reação foi extinta com solução saturada aquosa de cloreto de amónio (20 ml) e foi deixada a aquecer a 23°C. A mistura resultante foi extraída com acetato de etilo (2 3 20 ml), e as camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro e foram concentradas sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 120 g Combiflash HP Gold, gradiente de 0-1000 de acetato de etilo/iso-hexano&amp; para proporcionar o composto do título (84 9 mg, 380 ) com óleo incolor.
A uma solução de 66b (258 mg, 1,00 mmol) e (E)-4-(dimetilamino)but-3-en-2-ona (452 mg, 4,00 mmol) em 1,4-dioxano (10 ml) foi adicionado ácido p-toluenossulfónico monohidrato (761 mg, 4 mmol) a 23°C sob uma atmosfera de árgon e a mistura resultante foi aquecida até 80°C. Após 2 h, a mistura de reação foi deixada a arrefecer até 23°C e foi particionado entre solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (200 ml) e acetato de etilo (200 ml). As camadas foram divididas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (200 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de sódio anidro e foram concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (107 mg, 5113 ) com um sólido branco pérola.
Dicloro (p-ciméno) ruténio(II) dímero (5 mg, 8 pmol) e (IR,2R)-(-)-N-p-tosil-l,2-difeniletilenodiamina (7 mg, 19 μιηοΐ) foram suspensos em água desgaseifiçada (6 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com árgon durante 15 min. A mistura foi agitada a 70°C sob árgon durante 90 min. A solução amarela resultante foi arrefecida até TA. 66c (329 mg, 1,56 mmol) , formato de sódio (543 mg, 7,98 mmol) e tetrahidrofurano desgaseifiçado (1 ml) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseifiçada durante 10 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 2,5 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA e foi extraída com acetato de etilo (20 ml) . A camada orgânica foi separada, lavada com água (20 ml) , salmoura (2 0 ml) , seca sobre sulfato de magnésio anidro, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (180 mg, 540 ) como um sólido.
A uma suspensão de fosfato de potássio tribásico (550 mg, 2,59 mmol) em ciclopentil metil éter (4,5 ml) e água (3 ml) foi adicionado 66d (180 mg, 0,89 mmol) e aquecida até 90°C. A esta temperatura, (A-caPhos) 2PdCl2 (35 mg, 43 pmol) foi adicionado e agitado durante 2 min. Uma solução de éster metilico do ácido (E)-2,2-dimetil-4- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-but-3-enoico (286 mg, 1,12 mmol) em ciclopentil metil éter (4,5 ml) foi adicionado gota a gota e agitado durante 19 h a 90°C. A mistura de reação foi arrefecida até TA, diluída com acetato de etilo (40 ml) e água (20 ml). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 20 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro, concentradas e o resíduo resultante bruto foi purificado via cromatografia em gel de sílica (Coluna de 24 g Si02 Isco Rf Gold, gradiente de O-lOOã de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (95 mg, 37ã) como um sólido castanho pálido.
A uma solução de 66e (95 mg, 0,32 mmol) em tetrahidrofurano (1,8 ml), metanol (0,6 ml) e água (0,6 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (15 mg, 0,63 mmol) a 23 °C. Após 16 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e os solventes residuais foram removidos azeotropicamente pela adição de tolueno (5 ml) seguido de concentração sob pressão reduzida (2x) para proporcionar o composto do título. Isto foi utilizado no subsequente acoplamento de amida sem purificação adicional.
A uma solução de le (212 mg, 0,40 mmol) em diclorometano (3 ml) foi lentamente adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (106 μΐ, 0,60 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 1 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e foi utilizado no subsequente acoplamento de amida sem purificação adicional. A uma solução de 66f (90,5 mg, 0,32 mmol) em acetonitrilo (3 ml), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (180 mg, 0,47 mmol), N, N-diisopropiletilamina (330 μΐ, 1,90 mmol) e éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (232 mg, 0,4 mmol) em acetonitrilo (2 ml) foram adicionados sequencialmente a 23°C. Após 16 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado diretamente por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (201 mg, 91ã) como um sólido.
A uma solução de 66g (201 mg, 0,29 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml) , metanol (0,4 ml) e água (0,4 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (14 mg, 0,57 mmol) a 23°C. Após 40 min, hidróxido de lítio hidrato (14 mg, 0,57 mmol) foi adicionado a 23°C. Após 1 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e residual solventes foram removidos azeotropicamente pela adição de tolueno (2 ml) seguido de concentração sob pressão reduzida (3x) para proporcionar o composto do título. Isto foi utilizado na subsequente macrolactonização sem purificação adicional.
A anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (43 mg, 0,12 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (48 mh, 0,39 mmol) foi adicionado 1,2-dicloroetano (20 ml) sob atmosfera de azoto e aquecida até 50°C. A esta temperatura, 66h (28 mg, 0,049 mmol) em N, 27-dimetilformamida (1 ml) foi adicionado gota a gota via bomba de seringa ao longo de 6 h. Uma lavagem adicional de N, N-dimetilformamida (0,5 ml) foi então adicionada da mesma maneira ao longo de 15 min. Após agitar um adicional de 1,25 h, a mistura de reação foi arrefecida até TA. Foi diluída com acetato de etilo (20 ml) e lavada com água (2 x 10 ml). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e filtrada. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa (coluna Gemini 5u C18 110Â, 5-1000 de acetonitrilo/ãgua, 0,10 de ácido trifluoroacético modificador) para proporcionar o composto do título como um pó branco sal de ácido trifluoroacético. Foi lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio para remover impurezas de ácido formadas do anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico para proporcionar o composto do título (1,5 mg, 5% ) como um sólido branco. ΧΗ RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,19 (s, 1 H), 8,86 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 8,67 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) , 8,21 (s, 1 H) , 7,59 (s, 1H) , 6,89 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 6,46 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 6.04 (q, j = 6,4 Hz, 1 H), 5,52-5,41 (m, 1 H) , 4,26 (d, J = 14.4 Hz, 1 H) , 4,18 (app t, J = 9,1 Hz, 1 H) , 3,65 (dd, J = 11,4, 2,8 Hz, 1 H), 2,58 (td, J = 12,9, 3,2 Hz, 1 H), 1,91- 1,75 (m, 3H), 1,68-1,53 (m, 2H), 1,63 (d, J= 6,7 Hz, 3H) , 1,51 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,43 (s, 3H), 1,26 (s, 3H), 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,82 (d, J = 6,7 Hz, 3H) .LCMS (m/z) 551,2 [ΜμΗ], Tr = 2,19 min. EXEMPLO 67: Composto 67
2-(3-Bromofenil)-2-metilpropanoato de metilo (Pharmabridge, Doilestown, PA, USA (190 mg, 0,74 mmol) , 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (206 mg, 0,81 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(II), complexo com diclorometano (27 mg, 0,04 mmol) e acetato de potássio (217 mg, 2,22 mmol) foram colocados num frasco com tampa de rosca e esguichado com um vácuo e ciclo de árgon três vezes. Anidro 1,4-dioxano (4 ml) foi adicionado sob árgon e a mistura resultante foi aquecida até 80°C durante 19 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA e foi diluída com acetato de etilo (20 ml). Celite (~1 g) foi adicionado e filtrado através de uma almofada de celite. Solventes foram removidos sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título que foi utilizado diretamente na subsequente reação.
A uma suspensão de fosfato de potássio tribásico (445 mg, 2,10 mmol} em ciclopentil metil éter (2,5 ml) e água (1,5 ml) foi adicionado (R)-1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etanol (180 mg, 0,89 mmol) e a mistura de reação foi aquecida até 90 °C, A esta temperatura, (A-caPhos) 2PdCl2 (28 mg, 35 pmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 2 min. Uma solução de 67a (225 mg, 0,74 mmol) em ciclopentil metil éter (2,5 ml) foi adicionado gota a gota e agitado durante 19 ha 90°C. A mistura de reação foi arrefecida até TA, diluída com acetato de etilo (3 0 ml) e água (15 ml) . As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (23 15 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro, concentradas e o resíduo resultante bruto foi purificado por meio de coluna de gel de sílica cromatografia para proporcionar o composto do título (267 mg, quantitative) como um sólido castanho pálido.
A uma solução de 67b (244 mg, 0,7 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml), e água (2,5 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (18,5 mg, 0,77 mmol) a 23°C.
Após 48 h, hidróxido de lítio hidrato (17 mg, 0,70 mmol) foi adicionado à mistura de reação. Após 24 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e residual solventes foram removidos azeotropicamente pela adição de tolueno (5 ml) seguido de concentração sob pressão reduzida (2x) para proporcionar o composto do título. Isto foi utilizado no subsequente acomplamento de amida sem purificação adicional.
A uma solução de 1 e (397 mg, 0,75 mmol) em diclorometano (5 ml) foi lentamente adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (199 μΐ, 1,12 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de ãrgon. Após 1 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida para dar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3 - carboxí lico como um sal triflato. Isto foi utilizado no subsequente acomplamento de amida sem purificação adicional. A uma solução de 67c (234 mg, 0,7 mmol) em acetonitrilo (7 ml), hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametil urónio (532 mg, 1,4 mmol) , N, N-diisopropiletilamina (730 μΐ, 4,2 mmol) e éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (435 mg, 0,75 mmol) em acetonitrilo (3 ml) foram adicionados sequencialmente a 23°C. Após 16 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado diretamente por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 40 g Si02 Isco Rf Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (230 mg, 44%) como um sólido.
A uma solução de 67d (94 mg, 0,13 mmol) em tetrahidrofurano (3 ml) , e água (1 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (3,1 mg, 0,13 mmol) a 23°C. Após 48 h, hidróxido de lítio hidrato (17 mg, 0,70 mmol) foi adicionado à mistura de reação. Após 1 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e os solventes residuais foram removidos azeotropicamente pela adição de tolueno (5 ml) seguido de concentração sob pressão reduzida (2x) para proporcionar o composto do título. Isto foi utilizado na subsequente macrolactonização sem purificação adicional.
A uma suspensão de 67e (78 mg, 0,13 mmol) em diclorometano (42 ml) foi adicionado benzotriazol-l-il-oxitripirrolidinofosfónio hexafluorofosfato (520 mg, 0,50 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (462 mg, 4,0 mmol) a 23°C. Após 24 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa (coluna Gemini 5u C18 110Ã, 5-100ã de acetonitrilo/água, 0, lã de ácido trifluoroacêtico modificador) para proporcionar o composto do título (3,2 mg, 4ã) como um pó branco e como um sal de ácido trif luoroacêtico. iH RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,65 (s, 1 Η), 8,69 (s, 1 Η), 8,49 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 8,44 {d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 8,34 (s, 1 H) , 7,90 (dd, J = 8,7, 1,5 Hz, 1 H), 7,83 (d, J = 7,7 Hz, 1 H), 7,78 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,74 (s, 1 H), 7,69 (app t, j = 7,8 Hz, 1 H), 6,82 {d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,21 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 5,92- 5,84 1H) , 4,41-4,30 (m, 2H) , 3,75 (dd, J = 14,4, 6,0 Hz, 1H) , 2,71 (td, J = 13,0, 3,0 Hz, 1H) , 2,06-1,99 (m, 1 H),
1,96 (dd, J = 14,2, 7,1 Hz, 1 H), 1,93-1,86 (m, 1 Η), 1,75 (S, 3H) , 1,73-1,59 (m, 2H) , 1,68 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,63 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,47 (s, 3H) , 0,96 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,84 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . HPLC Tr = 5,319 min. LCMS (m/z) 600,5 [M0 H], Tr = 2,71 min. EXEMPLOS 68 E 69: Compostos 68 e 69
A uma solução de 6-bromo-3-cloroisoquinolina (Frontier Scientific, 1,594 g, 6,57 mmol) e 2,2-dimetilpropano-l,3-diol (684 mg, 6,57 mmol) em ciclopentil metil éter (20 ml) foi adicionado carbonato de césio (2,354 g, 7,23 mmol) a 23°C. A mistura de reação foi aquecida até 120°C durante 18 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA, diluída com acetato de etilo (50 ml) e lavada com água (30 ml) , salmoura (30 ml) e a camada orgânica resultante foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (Coluna de 80 g Isco Rf
Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (461 mg, 23%) como um sólido branco.
A uma solução de 68a (461 mg, 1,49 mmol) em acetonitrilo (10 ml) e água (2,5 ml) foi adicionado ácido periódico (1,698 g, 7,45 mmol) a 23°C. A mistura de reação foi arrefecida até 0°C e trióxido de cromo (30 mg, 0,298 mmol) foi adicionado em uma porção. Após 2,5 hora, a mistura de reação foi diluída com acetato de etilo (30 ml) e água (30 ml) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (30 ml) e combinado camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título que foi utilizado sem purificação (481 mg).
A uma solução de 68b (481 mg, 1,49 mmol) em acetonitrilo (10 ml), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametil urónio (1,133 g, 2,98 mmol), N,N~ diisopropiletilamina (1,55 ml, 8,94 mmol) e cloridrato de 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-metilo (749 mg, 4,47 mmol) foram adicionados sequencialmente a 23°C. Após 16 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado diretamente por meio de cromatograf ia em gel de sílica (Coluna de 24 g Isco Rf Gold, gradiente de 0-100% de acetato de etilo/iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (412 mg, 63% ao longo de 2 etapas) como m óleo castanho.
A uma suspensão de 68c (412 mg, 0,95 mmol) e dicloreto de bis (trifenilfosf ina) paládio (II) em tolueno (5 ml) foi adicionado tributil(l-etoxivinil)estanho (962 μΐ, 2,85 mmol) sob árgon a 23°C. A mistura de reação foi aquecida até 50°C. Após 18 h, água (1 ml) foi adicionado a 50°C. Após 2 h, a mistura de reação foi arrefecida até TA, diluída com acetato de etilo (15 ml) e solução a 1 M de fluoreto de potássio (5 ml) foi adicionado. A mistura resultante foi vigorosamente agitada a 23°C. Após 2 h, a mistura foi filtrada através de uma almofada curta de Celite e lavada com acetato de etilo (10 ml) . 0 filtrado foi lavado com água (15 ml) , salmoura (15 ml) , seco sobre sulfato de magnésio anidro e concentrado. Este resíduo foi dissolvido em 1,4-dioxano (8 ml) e ácido clorídrico a 1 M aquoso (1 ml) foi adicionado a 23°C. Após 5 min, a mistura de reação foi extinta com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (2 ml) e concentrada até a secura. 0 resíduo foi absorvido em acetato de etilo (20 ml) e água (20 ml) e camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 3 10 ml) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 ml) , seco sobre sulfato de magnésio anidro e concentrado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (236 mg, 6213 ) como uma goma castanha.
Dicloro (p-ciméno) ruténio(II) dímero (2 mg, 3 pmol) e (IR,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (2,6 mg, 7 pmol) foram suspensos em água desgaseificada (2,5 ml) e a mistura foi desgaseificada com árgon durante 15 min. A mistura foi agitada a 70°C sob azoto durante 90 min. A solução amarela resultante foi arrefecida até TA. 68d (236 mg, 0,59 mmol) , formato de sódio (200 mg, 2,95 mmol) e tetrahidrofurano desgaseificado (1,25 ml) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseificada durante 10 min. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40°C durante 3,5 h. A mistura de reação foi arrefecida até TA e foi extraída com acetato de etilo (15 ml) . A camada orgânica foi separada, lavada com água (20 ml) , salmoura (20 ml) , seca sobre sulfato de magnésio anidro, e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica para proporcionar o composto do título (196 mg, 830 ) como um sólido castanho páldo.
A uma solução de 6 8e (196 mg, 0,4 87 mmol) em tetrahidrofurano (3 ml) , metanol (1 ml) e água (1 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (23 mg, 0,97 mmol) a 23°C. Após 16 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi absorvido em acetato de etilo (10 ml) e água (10 ml) e acidificada com solução a 1 M aquosa de ácido clorídrico a pH ~2 . As camadas resultantes foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 3 10 ml) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título que foi utilizado sem purificação.
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-I-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (270 mg, 0,62 mmol) em diclorometano (5 ml) foi lentamente adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (165 μΐ, 0,93 mmol) a 0°C sob uma atmosfera de árgon. Após 1 hora, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o sal triflato de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S/R)-1-((S)-2-amino-propionil)-hexahidro- piridazina-3-carboxílico como óleo amarelo que foi utilizado sem purificação. A uma solução de 68f (189 mg, 0,49 mmol) em acetonitrilo (7 ml), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (278 mg, 0,73 mmol), N, N-diisopropiletilamina (730 μΐ, 4,2 mmol) e éster 2,2,2- tricloro-etílico do ácido (S/R)-1-((S)-2-amino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (435 mg, 0,62 mmol) em acetonitrilo (3 ml) foram adicionados sequencialmente a 23°C. Após 16 h, a mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado diretamente por meio de cromatografia em gel de sílica (Coluna de 40 g Si02 Isco Rf Gold, gradiente de 0-1000 de acetato de etlo/iso-hexanos) para proporcionar um mistura diastereomérica inseparável dos compostos do título (43 mg, 130 ) cmo um resíduo incolor.
A uma solução de uma mistura de 68g e 68h (43 mg, 61 μιηοΐ) em t et rahidrof urano (4 ml) e água (2 ml) foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (3,2 mg, 0,13 mmol) a 23°C. Após 1 h, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e solventes residuais foram removidos azeotropicamente pela adição de tolueno (5 ml) seguido de concentração sob pressão reduzida (2x) para proporcionar os compostos do título como uma mistura. Isto foi utilizado na subsequente macrolactonização sem purificação adicional. LCMS (m/z) 572,2 [ΜμΗ], Tr = 2,21 min.
A uma suspensão de 68i e 68j (34,8 mg, 61 pmol) em diclorometano (20 ml) foi adicionado hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxitripirrolidinofosfónio (127 mg, 0,24 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (224 mg, 1,83 mmol) a 23°C. Após 24 h, o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa (coluna Gemini 5u C18 110Ã, 5-100ã de acetonitrilo/ãgua, 0,lã de ácido trifluoroacético modificador) para proporcionar amobos os compostos (12 mg, 35ã) como uma mistura de razE o de diastereómeros. Os diastereómeros foram separados utilizando HPLC Quiral preparativa para proporcionar o primeiro eluente (Tr = 3,73 min) Composto 68 (2,17 mg, 6%) e o segundo eluente (Tr = 5,713 min) Composto 69 (1,85 mg, 5%). 0 composto 68: RMN (400 MHz, CD3OD) ò 8,89 (s, 1 H), 7,94 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,86 (s, 7,37 (dd, J = 8,6, I, 5 Hz, 1 H) , 7,28 (d, J = 9,2 Hz, 1 H) , 6,93 (s, 1 H) , 6,09 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 5,54 (q, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,36- 4,26 (m, 3H) , 4,21 (d, J = 9,7 Hz, 1 H) , 3,69 (dd, J = II, 2, 2,6 Hz, 1 H), 2,77 (td, J= 12,9, 3,0 Hz, 1 H), 2,00- 1,84 (m, 2H) , 1,83-1,77 (m, 1 H) , 1,76-1,62 (m, 2H) , 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,47 (d, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,38 (s, 3H) , 1,27 (S, 3H) , 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3H). HPLC Tr = 5,866 min. LCMS (m/z) 554,2 [M0 H],
Tr = 2,44 min. O composto 69: 1H RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,78 (s, 1 H) , 7,83 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7,74 (s, 1 H) ,
7,24 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1 H) , 7,03 (s, 1 H) , 5,93 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,35 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 9,8
Hz, 1 H) , 4,18 (d, J = 13,3 Hz, 1 H), 4,02 - 3,97 (m, 2H), (d, J = 10,0 Hz, 1 H) , 3,65 (dd, J = 10,8, 2,8 Hz, 1 H) , 2,71 (td, J = 12,7, 2,8 Hz, 1 H) , 1,98 - 1,89 (m, 1 H) , 1,87-1,77 (m, 2H) , 1,73 - 1,64 (m, 1 H) , 1,57 (d, J = 6,7
Hz, 3H) , 1,49 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,40 (s, 3H) , 1,13 (s, 3H) , 0,89 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,85 (d, J = 6,5 Hz, 3H) HPLC Tr = 5,951 min. LCMS (m/z) 555,2 [MB H] , Tr = 249 min. EXEMPLO 70: Composto 70
A 2,7-dibromonaftaleno (1 g, 3,50 mmol) em tetrahidrofurano anidro (18 ml), a-78°C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado uma solução de n-butillítio (2,5 M em hexanos, 1,5 ml, 3,67 mmol) gota a gota. A reação foi agitada a -78°C durante 20 min após que N-metoxi-N- metilacetamida (409 μΐ, 3,85 mmol) foi adicionado. Após 15 min, a reação foi aquecida até TA e agitada durante 30 min. A reação foi extinta com ácido clorídrico a 2 M e extraída duas vezes com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas através de uma frita hidrofóbica e concentradas a vácuo. 0 produto foi purificado por meio de cromatografia flash de sílica (íso-hexanos/acetato de etilo, 7/1) para proporcionar o composto do título (650 mg, 75%) como um sólido incolor.
A dicloro (p-ciméno) ruténio (II) dímero (8 mg, 0,013 mmol) em água (5 ml) a TA foi adicionado (IR, 2R)-{-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (11,5 mg, 0,031 mmol). 0 sistema foi desgaseifiçado durante 15 min e então aquecido até 70°C durante 1,5 h. A reação foi arrefecida e foi adicionado uma solução de 70a (650 mg, 2,61 mmol) em tetrahidrofurano desgaseifiçado anidro (2 ml) seguido de formato de sódio (874 mg, 13,1 mmol). A reação foi aquecida a 40°C durante 3 h, arrefecida até TA e extraída duas vezes com diclorometano. As camadas orgânicas combinadas foram secas através de uma frita hidrofóbica e concentradas a vácuo. 0 produto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (iso-hexanos/acetato de etilo, 4/1) para proporcionar o composto do título (450 mg, 69%) como um sólido incolor.
70b (42 mg, 0,17 mmol) foi dissolvido em acetonitrilo (2 ml) num frasco de micro-ondas, to a mistura foi adicionado ácido 3-butenoico (35 mg, 0,41 mmol), paládio (II) acetato (4 mg, 0,017 mmol), tri-(o-tolil)fosfina (10 mg, 0,034 mmol) e trietilamina (0,12 ml) . 0 frasco foi aquecido a 120° no reator de micro-ondas durante 15 mins. A mistura de reação foi então filtrada, o solvente foi evaporado e purificado com cromatograf ia em coluna combi-flash (Eluent metanol/diclorometano 1:3) para proporcionar o composto do título (35 mg, 81%) como um sólido amarelo.
70c (40 mg, 0,08 mmol) foi dissolvido em N,N- dimetilformamida (2 ml), à solução foi adicionado hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (36 mg, 0,1 mmol), a mistura de reação foi agitada a TA durante 10 min. Então éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino- 3-metilbutirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (0,18 mmol) em N, JV-dimetilf ormamida (1 ml) foi adicionado a above mistura de reação seguido de trietilamina (32 mg, 0,32 mmol). A mistura de reação foi agitada a TA durante 1 h, e então foi diluída com acetato de etilo (20 ml) e lavada com salmoura. A camada aquosa foi retro-extraída com acetato de etilo e o solvente orgânico combinado foi evaporado e purificado com cromatografia em coluna combi-flash (Eluente metanol/diclorometano 1:10) para proporcionar o composto do título (68 mg, 65%) como um sólido amarelo.
70d (55 mg, 0,08 mmol) foi dissolvido em a mistura de tetrahidrofurano (2 ml) , metanol (1 ml) e água (1 ml) . À solução foi adicionado hidróxido de lítio hidrato (4 mg, 0,16 mtnol) . A mistura de reação foi agitada a TA durante 1 h. Diclorometano (10 ml) e água (10 ml) foram adicionados à mistura de reação. Ácido clorídrico a 1 N foi adicionado à camada aquosa até o pH alcançar 2, a camada aquosa ácida foi extraída com diclorometano (2 x 10 ml) . 0 solvente orgânico foi então evaporado para proporcionar o composto do título (37 mg, 840 ) como um sólido branco.
Anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (19 mg, 0,056 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (23 mg, 0,185 mmol) foram dissolvidos em 1,2-dicloroetano (18 ml) e a solução foi aquecida a 50°C. Ã soluçãoo acima foi adicionado 70e (20 mg, 0,03 7 mmol) em N,N~dimetilformamida (1 ml) via bomba de seringa em 10 h. A mistura de reação foi agitada a 50°C durante 2 h após a conclusão da adição. 0 solvente foi então evaporado e o resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa (0-1000 de acetonitril^água) para proporcionar o composto do título (4 mg, 22ã) como um sólido branco. XH RMN (400 MHz, CD30D) δ 7,79-7,72 (m, 3H) , 7,52 (dd, J = 1,6, 8,8 Hz, 1H), 7,41 (s, 1 H), 7,33 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1 H), 6,48 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 6,31-6,24 (m, 1 H) , 6,02 (q, J = 7,6 Hz, 1 H) , 4,64 (d, J = 12,4 Hz, 1 H) , 4,40 (d, J = 12,8 Hz, 1 H) , 4,30 (d, J = 10,4 Hz, 1H) , 3,78-3,72 (m, 1H) , 3,36-3,32 (m, 2H) , 2,99-2,93 (m, 1H), 2,77-2,71 (m, 1H), 1,99-1,69 (m, 5H), 1,66 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,58 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 0,99 (d, J = 6,8 Hz, 6H). LCMS (m/z) 521,1 [M-H], Tr = 3,18 min. EXEMPLO 71: Composto 71
0 composto 70 (5 mg, 0,01 mmol) foi dissolvido em etanol (5 ml) sob árgon, à solução foi adicionado Pd (100 em carbono ativado, 3 mg) . 0 balão de reação foi então purgado e então carregado com H2 utilizando um balão. A reação foi filtrada através de Celite após 2 h, o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa (0-1000 de acetonirilo/ água) para proporcionar o composto do título (3,2 mg, 640 ) como um pó branco. 1H- RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,47 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,97 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,69-7,62 (m, 3H), 7,31 (s, 1 H) , 7,24-7,19 (m, 2H) , 5,97 (dd, J = 12,8, 6,0
Hz, 1 H), 5,62 (pent, J = 7,2 Hz, 1H), 4,76-4,16 (m, 1 H), 4,10 (app t, J = 12,8 Hz, 1 H) , 4,05-3,69 (m, 1 H) , 2,85 (s I, 1 H) , 2,73-2,41 (m, 2H) , 2,40-2,37 (m, 1H) , 2,10-1,93 (m, 1H), 1,92-1,70 (m, 6H), 1,53 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,49 (d, J = 7,6 Hz, 3H) , 0,99 (d, J = 6,8 Hz, 6H) . LCMS (m/z) 523,140 [ΜμΗ], Tr = 3,16 min. EXEMPLO 72: Composto 72
Num balão seco em forno, purgado com árgon Composto 49 (10 mg, 0,017 mmol), iodeto de cobre(I) (1 mg, 0,005 mmol) e prop-2-in-l-ol (4 mg, 0,07 mmol) foram adicionados. Ο balão foi vedado e repurgado com árgon três vezes. N,N-dimetilformamida anidra (5 ml) foi adicionada e a mistura de reação foi repurgada com ãrgon três vezes. Esta mistura de reação foi agitada a TA durante 12 h. Após evaporação do solvente sob pressão reduzida, o resíduo bruto foi dissolvido em acetato de etilo (10 ml) e filtrado através de filtro auxiliar e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo (10 ml) . Após concentração sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-400 de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (10 mg, 930 ) como um sólido branco após evaporação. Rf = 0,33, 100 de metanol em diclorometano. XH RMN (400 MHz, CD30D) δ 9,05 1H), 7,95 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 7,50 (s, 1 H) , 7,46 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6,49 (d, J = 16,0 Hz, 1H) , 6,40 (d, J = 16,0 Hz, 1H) , 5,95 (m, 1H) , 5,50 (m, 1H) , 4,59-4,53 (m, 3H), 4,36 (m, 2H), 4,30 (m, 1 H), 3,68 (m, 1 H), 2,80 (m, 1 H), 2,60 (m, 1 H), 2,23 (m, 1 H), 2,14 (m, 1 H) , 1,90-1,58 (m, 4H) , 1,57 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,55 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 1,41 (s, 3H), 1,27 (s, 3H). LCMS (m/z) 633,4 [ΜμΗ], Tr = 2,66 min. EXEMPLO 73: Composto 73
A 3-Nitrometileno-oxetano (Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45 (46), 7736, 2,5 g, 21,7 mmol) em tetrahidrofurano anidro (40 ml) a TA e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado iodeto de cobre (I) (413 mg, 2,17 mmol) e clorotrimetilsilano (3,0 ml, 23,9 mmol) . A solução amarela resultante foi agitada durante 5 min e arrefecida entre - 15°C e -11 °C com um metanol banho de gelo. Brometo de vinil magnésio (43,5 ml, 43,5 mmol, 1,0 M em tetrahidrofurano) foi lentamente adicionado ao longo de 3 h via uma bomba de seringa. Após a adição a reação foi extinta com uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio, filtrada e extraída com dietil éter (3x). Os orgânicos combinados foram secos através de uma frita hidrofóbica e concentrados a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando dietil éter para dar o composto do título como um óleo amarelo (2,0 g, 64ã).
A 73a (600 mg, 4,2 mmol) em anidro dimetilsulfóxido (13 ml) foi adicionado ácido acético (2,4 ml, 42 mmol) e nitri to de sódio (86 9 mg, 12,6 mmol) e a mistura aquecida até 35°C durante 16 h. A reaçã o foi arrefecida até TA e diluída com água. 0 pH foi ajustado a pH 3-4 com ácido clorídrico a lOã aquoso e o produto extraída com dietil éter (3x) e dietil éter / acetato de etilo (1:1). Os orgânicos combinados foram secos através de uma frita hidrofóbica e concentrados a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo (2/1 entã o 1/1) para proporcionar ácido impuro. Isto foi dissolvido em dietil éter e extraído com uma soluçã o saturada de sódio carbonato. 0 aquoso foi acidificado a pH 2 com ácido clorídrico concentrado e extraído com acetato de etilo (3x). Os orgânicos foram secos através de uma frita hidrofóbica e concentrados a vácuo para dar o composto do título como um óleo amarelo (228 mg, 43ã).
A 73b (150 mg, 1,18 mmol) em dioxano anidro (1 ml), foi adicionado éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)- etílico do ácido acético (347 mg, 1,18 mmol) seguido de diciclohexilmetilamina (0,76 ml, 3,54 mmol), acetato de paládio(II) (53 mg, 0,24 mmol) e Tri(o-tolil) fosfina (72 mg, 0,24 mmol). A mistura foi aquecida a 100°C durante 1 hora. Uma quantidade adicional de acetato de paládio(II) (26 mg, 0,12 mmol) e Tri (o-tolil) fosfina (36 mg, 0,12 mmol) foi adicionado e aquecimento continuado a 100 °C durante um adicional de 45 min. A reação foi arrefecida até TA e HC1 a 2 M adicionado até que pH 3-4 foi alcançado. 0 produto foi extraído com acetato de etilo (3x) e acetato de etilo/10K de metanol (2x) . Os orgânicos combinados foram secos através de uma frita hidrofóbica e concentrados a vácuo para render o composto do título como um óleo castanho.
Uma solução de le (3,01 g, 5,66 mmol) em tetrahidrofurano:metanol (1:1, 60 ml) foi agitado a 0°C. Fluoreto de tetra-n-butilamónio (1 M em tetrahidrofurano, 11,3 ml, 11,3 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 22 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexano a iso-hexano/acetato de etilo 1:1 dá o composto do título (2,14 g, sm ) como Umaespuma branca.
a 73d (365 mg, 0,88 mmol) em diclorometano anidro (15 ml) a 0°C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (239 μΐ, 1,32 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1 hora antes de adicionar N,N-diisopropiletilamina (613 μΐ, 3,52 mmol) e então concentrada a vácuo, e co-evaporada com tolueno para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico como um sólido branco. A 73c (300 mg, 0,88 mmol) em acetonitrilo anidro (9 ml) a 0°C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (766 μΐ, 4,4 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (401 mg, 1,06 mmol). A solução foi agitada a 0°C durante 3 min antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico em acetonitrilo anidro (2 ml). A reação foi aquecida até TA e agitada durante 2 h. A reação foi extinta com HC1 a 1 M e extraída com acetato de etilo (3x) . As camadas orgânicas combinadas foram secas através de uma frita hidrofóbica e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo para dar o composto do título como um óleo amarelo viscoso (160 mg, 22ã, 2 steps).
A 73e (160 mg, 0,25 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) e água (2 ml) foi adicionado hidróxido de lítio monohidrato (53 mg, 1,25 mmol) a 0°C. A reação foi agitada a 0°C durante 2 h e extinta pela adição de 2M aquoso ácido clorídrico (0,63 ml). A reação foi concentrada a vácuo, seguido de co-evaporação de tolueno/metanol (3x) e então tolueno (3x) e seco on um alto vácuo durante 15 min. 0 resíduo resultante foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (83 ml) e a TA foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (223 μΐ, 1,25 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (114 mg, 1,3 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (3 mg, 0,03 mmol). A reação foi agitada durante 24 h, diluída com acetato de etilo e lavada com HC1 a 1 Μ (1 x) e salmoura (1 x). A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo/metanol 1:0 então 20/1 para dar um óleo amarelo viscoso (52 mg) . Isto foi ainda purificado por meio de cromatografia de camada fina preparativa (acetato de etilo) para proporcionar o composto do título como um sólido branco que foi triturado com dietil éter, filtrado e seco a vácuo. (22 mg, 16ã, 2 Steps) . XH RMN (300MHz, CDC13) 0,96 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,00 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,50 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,69 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,81 - 2,16 (m, 4H), 2,63 - 2,74 (m, 1 H) , 3,26 - 3,38 (m 1 H) , 3,70 - 3,83 (m, 1 H) , 3,98 (d, J = 12,3 Hz, 1 H), 4,28 (t, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,33 - 4,43 (m, 1 H) , 4,57 (d, J = 5,8 Hz, 1 H) , 4,86 (q, J = 6,7 Hz, 2H) , 5,13 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 5,73 (t, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,96 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,24 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 6,61 6,73 (m, 1H) , 7,00 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 7,09 - 7,20 (m, 1H) , 7,40 J = 8,5 Hz, 1H) , 7,58 (s, 1 H) , 7,81 - 7,93 (m, 2H) , 8,22 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) = 564,2 [M0 H] ,
Tr = 1,96 min. EXEMPLO 74: Composto 74
O composto 57 (20 mg, 0,036 mmol) foi dissolvido em metanol (5 ml) e quantidade catalítica de lOã de Pd em carbono foi adicionado. A mistura de reação foi agitada sob atmosfera hidrogénio durante 2 h. O catalisador foi removido por meio de filtração e o eluente foi concentrado sob pressão reduzida. A purificação por meio de HPLC preparativa de fase reversa deu o composto do título (8,4 mg, 42% de rendimento) como um põ branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) : δ 9,61 (s, 1H) , 8,42 (d, J= 9,0 Hz, 1 H) , 7,99 (s, 1 H), 7,89 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,83 (s 1, 1H), 7,29 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 6,27-6,21 (m, 1 H) , 5,92-5,82 (m, 1 H) , 3,96-3,5 (m, 4H) , 3,28-3,19 (m, 1 H) , 3,08-2,98 (m, 1 H) , 2,30-2,20 (m, 1 H), 2,10-1,90 (m, 4H), 1,78-1,72 (m, 5H), 1,56-1,51 (m, 6H), 1,21 (s, 3H), 0,89 (d, J = 7,2 Hz, 6H). LCMS (m/z): 552,3 [ΜμΗ], Tr =1,74 min. EXEMPLO 75: Composto 75
Uma solução de acetoacetato de etilo (20 g, 19,4 ml, 0,154 mol) numa mistura de dioxano (120 ml) e formaldeído aquoso (37ã soluça o em água, 57,7 ml, 0,77 mol) foiagitada a TA. Trietilamina (1,0 M em tetrahidrofurano, 7,7 ml, 7,7 mmol) foi adicionado e a mistura de reaçã o foi aqueida a 60 °C durante 20 h e entã o aquecida a 100 °C duranfe 4 h. A mistura de reaçã o foi arrefecida até TA e foi vertda em água (1500 ml) . A soluçã o aquosa foi lavada com toãeno. A camada aquosa foi concentrada a ~50ã do volume inicial e extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram combinados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexano a iso-hexano/acetato de etilo 1:1 seguido de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexano to iso-hexano/acetato de etilo 3:2 para proporcionar o composto do título (2,33 g, 8ã) como um óleo amarelo.
Uma soluçã o de 75a (2,10 g, 11 mmol), 2,2- dimetoxipropano (13,5 ml, 110 mmol) e ácido 4- toluenossulfónico hidrato (209 mg, 1,1 mmol) em acetona (8 ml) foi agitado a TA durante 18 h. Soluçã o saturada de hidrogénio carbonato de sódio foi adicionado e a mistura foi extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com água e salmoura. A camada orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexano/acetato de etilo de 1:5 a 3:7 para proporcionar o composto do título (1,88 g, 74ã) como um óleo incolor.
Uma solução de Ν,Ν-áiisopropiletilamina (0,55 ml, 3,9 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml) foi agitado a -78°C sob azoto. n-Butilo lítio (1,6 M em hexano, 2,25 ml, 3,6 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação foi aquecida até 0°C. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 5 min e então arrefecida até -78°C. Uma solução de 75b (690 mg, 3,0 mmol) em tetrahidrof urano (3 ml) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação foi agitada a -78°C durante 15 min. Uma solução de N-fenil- (bistrifluorometanosulfonamida) (1,18 g, 3,3 mmol) em tetrahidrof urano (10 ml) foi adicionado gota a gota ao longo de 5 min e a mistura de reação foi agitada a -78°C durante 15 min. 0 banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reação foi aquecida até TA e então agitado a TA durante 90 min. 0 solvente foi evaporado e dietil éter (30 ml) foi adicionado. A solução foi arrefecida até 5°C e foi lavada com solução fria a 1 M de hidróxido de sódio (3 x 30 ml) . A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e o solvente evaporado para proporcionar o composto do título (960 mg, 88%) como um óleo amarelo que foi utilizado diretamente na seguinte etapa.
Uma solução de 75c (470 mg, 1,3 mmol) e tri-n-butilamina (721 mg, 0,93 ml, 3,9 mmol) em N,N- dimetilformamida (3 ml) foi agitada a TA sob azoto. Bis (trifenilfosfina)paládio(II) dicloreto (45 mg, 0,065 mmol) e ácido fórmico (12 0 mg, 0,1 ml, 2,6 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a 60 °C durante 90 min. A mistura de reação foi arrefecida até TA e acetato de etilo e água foi adicionado. 0 extrato orgânico foi separado, lavado com água (5x) , e salmoura. A solução orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexano/acetato de etilo 1:9 para proporcionar o composto do título (1,88 g, 740 ) como um óleo incolor.
Uma solução de 75d (150 mg, 0,7 mmol) em tetrahidrofurano (3 ml) foi agitada a 5°C sob azoto. Uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (59 mg, 1,4 mmol) em água (1 ml) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada a 5°C durante 3 0 min e então a TA durante 5 h. Metanol (0,5 ml) foi adicionado para dar uma solução transparente e a mistura de reação foi agitada a TA durante 22 h. 0 solvente foi evaporado. Água (2 ml) foi adicionado ao resíduo e a solução foi acidificada a pH 2 com ácido clorídrico a 2 M. Salmoura foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etilo. Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura. 0 extrato orgânico foi separado, lavado com água (x 5), e salmoura. A solução orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (117 mg, 900 ) como um óleo incolor.
Uma mistura de 75e (96 mg, 0,5 mmol) e ácido acético (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-éster etílico (147 mg, 0,5 mmol) em acetonitrilo (4 ml) foi agitada a TA. Tri (o-tolil)fosfina (46 mg, 0,15 mmol), acetato de paládio(II) (17 mg, 0,075 mmol) e trietilamina (101 mg, 0,14 ml, 1,0 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida num reator de micro-ondas a 100°C durante 20 min. 0 solvente foi evaporado. Água e acetato de etilo foi adicionado e a mistura foi acidificada a pH 3-4 com ácido clorídrico a 2 Μ. A mistura foi extraída com acetato de etilo e os extratos orgânicos foram combinados e lavados com salmoura. A solução orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexano/acetato de etilo 1:1 a acetato de etilo a acetato de etilo/metanol 5:1. 0 resíduo foi co- evaporado com acetato de etilo e então diclorometano e seco para proporcionar o composto do título (134 mg, 670) como uma goma amarela.
Uma solução de éster metílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (150 mg, 0,36 mmol) em diclorometano (5 ml) foi agitado a 0 °C sob azoto. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (160 mg, 0,13 ml, 0,72 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 1 hora. N,N-Diisopropiletilamina (186 mg, 0,2 5 ml, 1,44 mmol) foi adicionado e o solvente foi evaporado para proporcionar éster metílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil] -hexahidro-piridazina-3-carboxílico (0,36 mmol) como um sólido branco que foi utilizado sem purificação adicional. Uma solução de 75f (134 mg, 0,33 mmol) em acetonitrilo foi agitado a 0°C sob azoto. Uma solução de éster metílico do ácido (S)-I-[(S)”2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (0,36 mmol) e N, N-diisopropi let i lamina (129 mg, 0,17 ml, 1,0 mmol) em acetonitrilo (5 ml) foi adicionado seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametil urónio (175 mg, 0,46 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 0°C durante 10 min e então a TA durante 1 hora. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi dividido em porções entre acetato de etilo e água. Os extratos orgânicos foram combinados e lavados com salmoura. A solução orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexano/acetato de etilo 1:5 a acetato de etilo para proporcionar o composto do título (165 mg, 72%) como um sólido amarelo.
Uma solução de 75g (3 5 mg, 0,05 mmol) em tetrahidrofurano (0,5 ml) foi agitado a 5°C sob azoto. Uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (8,4 mg, 0,2 mmol) em água (0,5 ml) foi adicionado seguido de metanol (0,5 ml) e a mistura de reação foi agitada a 5°C durante 1 hora. Ácido clorídrico a 1 M (0,2 ml) foi adicionado e o solvente foi evaporado. 0 resíduo foi co-evaporado com metanol/tolueno (1:1, 2x) seguido de tolueno (2x). 0 resíduo foi triturado com dietil éter (3x) e seco para proporcionar o composto do título (0,05 mmol) como um sólido amarelo pálido que foi utilizado bruto na seguinte reação.
Uma solução de anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (86 mg, 0,25 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (46 mg, 0,38 mmol) em 1,2-dicloroetano (16 ml) foi agitado a TA sob azoto. Um crivo molecular (400 mg) foi adicionado e a suspensão foi aquecida a 50°C. Uma solução de bruto 75h (0,05 mmol) em N,N-dimetilformamida (2 ml) foi adicionado gota a gota ao longo de 4 h e a mistura de reação foi agitada a 50 °C durante um adicional 1 hora. A mistura de reação foi arrefecida até TA e a mistura foi filtrada através de celite. A almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo e o filtrado foi evaporado. 0 resíduo foi diluído com acetato de etilo e a solução foi lavada com salmoura (3x). A camada orgânica foi separada e evaporada. A solução orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa para proporcionar o composto do título (4,2 mg, 13ã) como um sólido branco. ]Ή RMN (300 MHz, CD3OD) 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,01 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,37 (s, 3H), 1,47 (s, 3H), 1,53 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,64- 1,70 (m, 2H) , 1,73 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,85-2,10 (m, 3H) , 2,70-2,80 (m, 1 H), 3,78-3,87 (m, 1 H), 3,87 (d, J = 11,1
Hz, 1H), 4,03-4,07 (m, 1 H), 4,26-4,46 (m, 5H), 5,72 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,93 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 6,38 (s, 2H) , 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,61 (3 1, 1 H) , 7,78-7,86 (m, 2H), 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 622,2 [ΜμΗ], Tr = 2,24 min. EXEMPLO 76: Composto 76
Uma suspensão de 75h bruto (200 mg, 0,25 mmol) em tetrahidrofurano (100 ml) foi agitado a TA sob azoto. N,Ν'-di isopropi let i lamina (161 mg, 0,22 ml, 1,25 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (15 mg, 0,125 mmol) foi adicionado e a suspensão foi agitado durante 5 min. Hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (133 mg, 0,35 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 2 h. Adicional hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (57 mg, 0,15 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a TA durante 1 hora. O solvente foi evaporado e o resíduo foi diluído com acetato de etilo e ácido clorídrico a 2 Μ. A solução orgânica foi separada e lavada com água, solução saturada de hidrogénio carbonato de sódio, e salmoura. A solução orgânica foi filtrada através de uma frita hidrofóbica e o filtrado foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexano/acetato de etilo 7:3 a acetato de etilo a acetato de etilo/metanol 9:1. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa para proporcionar o composto do título (20 mg, 14ã) como um sólido branco. XH RMN (500 MHz, CD30D) 1,00 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,01 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,68 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,73 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,74-2,05 (m, 5H) , 2,72-2,80 (m, 1 H) , 3,70 (d, J = 11,1 Hz, 1 H) , 3,81-4,07 (m, 4H), 4,35-4,47 (m, 3H), 5,77 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,92 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 6,43 (s, 2H) , 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,63 (s, 1 H) , 7,82 (s, 2H) , 8,21 (d, J = 8,5
Hz, 1 H). LCMS (m/z) 582,2 [ΜμΗ], Tr = 1,66 min.
Exemplo 77: Composto 77
Composto 77a. (R)-4-Isopropil-3-((E)-2-metil-but-2- enoil)-oxazolidin-2-ona
Um arrefecida (-20 °C) solução de ácido tíglico (2,005 g, 20,031 mmol) em tetrahidrofurano anidro (50 ml) foi sequencialmente tratada com trietilamina (6,1 ml, 44,068 mmol) e gota a gota cloreto de pivaloilo (2,7 ml, 22,034 mmol) . Após agitar a -20 °C durante 30 min, cloreto de lítio (1,019 g, 24,037 mmol) e (R)-(μ)-4-isopropil-2-oxazolidinona (2,587 g, 20,031 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi deixada a aquecer lentamente até temperatura ambiente, agitada durante 3 dias e foi então extinta com cloreto de amónio saturado. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (3,307 g, 780 ) como um sólido incolor. 1H RMN (300 MHz, CDC13) : δ 0,92 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,83 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,93 (s, 3H), 2,38 (d de heptet, J = 6,9, 4,2 Hz, 1 H), 4,19 (dd, J = 8,9, 4,6 Hz, 1 H), 4,33 (app t, J = 8,9 Hz, 1 H), 4,49-4,58 (m, 1 H), 6,23 (q, J = 7,1 Hz, 1 H). Composto 77b. (R)-4-Isopropil-3-[(R)-2-metil-2-(2- trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoil]-oxazolidin-2-ona
Humidade residual em (R)-4-isopropil-3-((E)-2-metil-but-2-enoil)-oxazolidin-2-ona (458,9 mg, 2,172 mmol) foi removido por azeotropia com tolueno anidro. Um arrefecida (-78 °C) solução de seco (R)-4-isopropil-3-((E)-2-metilbut- 2-enoil)-oxazolidin-2-ona em tolueno anidro (10 ml) foi tratado gota a gota com uma solução de sódio bis (trimetilsilil) amida em tolueno (0,6 M, 5,4 ml, 3,258 mmol) . Após agitar a solução amarela a -78 °C durante 35 min, cloreto de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (1,1 ml, 6,516 mmol) foi adicionado. Após agitar a 0 °C durante 3,5 h, a reação foi extinta com cloreto de amónio saturado. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x) . Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 9:1 para proporcionar o composto do título (543,3 mg, 730 ) como um óleo incolor e como um 5:1 mistura de diastereoisómeros. "H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,01 (s, 9H), 0,77-0,99 (m, 8H) , 1,49 (s, 3H) , 2,36 (d de heptet, J = 6,9, 3,8 Hz, 1 H) , 3,42-3,60 (m, 3H) , 4,15-4,31 (m, 3H) , 4,49-4,57 (m, 1H), 5,00 (d, J = 17,6 Hz, 1H) , 5,10 (d, J = 10,7, 1H) , 6,19 (dd, J = 17,8, 10,7 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 364,1 [MpNa], Tr = 3,32 min.
Composto 77c. ácido (R)-2-Metil-2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico
Uma solução arrefecida (0 °C) de (R)-4-isopropil-3- [(R)-2-metil-2-(2 -trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoil]-oxazolidin-2-ona (543,3 mg, 1,591 mmol) em tetrahidrofurano/água (15 ml, 2:1) foi subsequentemente tratado com peróxido de hidrogénio (30ã, 820 0 1, 7955 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (133,5 mg, 3,181 mmol). Após agitar a 0 °C durante 2 h, a reação foi extinta com metabis sul fito de sódio sólido (3 g, 16 mmol) . Após agitar a temperatura ambiente durante 30 min, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico (1 M) to pH 2, a camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x) . Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (322,3 mg, 88ã) como um óleo incolor. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,03 (s, 9H),0,98 (app t, J = 8,5 Hz, 2H), 1,34 (s, 3H), 3,46 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 3,57-3,67 (m, 3H), 5,19-5,29 (m, 2H), 6,00 (dd, J = 17,4, 10,7 Hz, 1 H), 10,80 (s 1, 1 H).
Composto 77d. ácido (E)-(R)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(2 -trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico
Uma solução de ácido (R)-2-metil-2-(2- trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico (214,1 0,728 mmol), éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etílico do ácido acético (167,7 mg, 0,728 mmol), acetato de paládio(II) (33,0 mg, 0,146 mmol), tri (o-tolil)fosfina (44,4 mg, 0,146 mmol) e N,N- di c iclohexilmeti1amina (390 μΐ, 1,820 mmol) em anidro 1,4-dioxano (10 ml) foi aquecida a refluxo durante 3 h, após que acetato de paládio(II) (33,0 mg, 0,146 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (44,4 mg, 0,146 mmol) foram adicionados. Após 1,5 h, o aquecimento foi parado e a reação foi deixado em repouso a temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi então tratada com acetato de paládio(II) (33,0 mg, 0,146 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (44,4 mg, 0,146 mmol). Após agitar a refluxo durante 3 h, a mistura foi arrefecida até temperatura ambiente, extinta com ácido clorídrico (1 M, 10 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (275,5 mg, 85%) como um óleo amarelo. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,04 (s, 9H), 1,02 (dd, J = 9,1, 7,3 Hz, 2H), 1,50 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 2,18 (s, 3H), 3,59-3,76 (m, 4H), 6,07 (q, J = 6,7 Hz, 1H) , 6,67 (ABq, Δ5αβ = 0,15, Jab = 16,3 Hz, 2H) , 7,44 (d, J = 8,2 1 H) , 7,62 (dd, J- = 8,5, 1,3 Hz, 1 H) , 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 8,12 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 444,1 [M0 H], Tr = 3,29 min.
Composto lie. éster metilico do ácido (S)-1-[ (S)-2-( (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxilico
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etilico do ácido (S)-1-[(S)-2- ((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (3,01 g, 5,66 mmol) em tetrahidrofurano/metanol (1:1, 60 ml) foi agitado a 0 °C. Tetra-n-butilamónio fluoreto (1 M em tetrahidrofurano, 11,3 ml, 11,3 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 22 h. 0 solvente foi removido a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 deu o composto do título (2,14 g, 91%) como uma espuma branca. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ hO, 91 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,32 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,46 (s, 9H), 1,61-2,17 (m, 6H), 2,80-2,88 (m, 1 H) , 3,47-3,58 (m, 1 H) , 3,73-3,78 (s, 3H), 3,94-4,02 (m, 1 H) , 4,33-4,38 (m, 1 H) , 5,13 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 5,27- 5,37 (m, 1 H), 6,75 (d, J = 7,6 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 415,1 [ΜμΗ], Tr = 3,17 min.
Composto 77f. éster metílico do ácido (S)-1-((S)-2-{(S)-2-[(E)-(R)-4-[7-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil- 2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-pi ridaz ina- 3 -carboxi1ico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster metílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (257,4 mg, 0,621 mmol) em diclorometano (15 ml) foi tratado com trimetilsilil-trifluorometanossulfonato (230 0 1 1,242 mmol) . Após agitar a 0 °C durante 50 min, a mistura de reação foi tratada com N,iV-diisopropiletilamina (430 0 1, 2,484 mmol) e os voláteis foram removidos a vácuo. Ao sólido branco foi adicionado uma solução de ácido (E)-(R)- 4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico (275,5 mg, 0,621 mmol) em acetonitrilo (15 ml) e a solução foi arrefecida até 0 °C então tratado com N,iV-diisopropiletilamina (430 0 1, 2,484 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (283,4 mg, 0,745 mmol). Após agitar a temperatura ambiente durante 20 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 20 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x). Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:3 a 0:1 para proporcionar uma goma amarela que foi dissolvida em acetato de etilo e lavada com bicarbonato de sódio saturado. Os orgânicos foram ent0 o secos em alfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o composto do título (319,4 mg, 690 ) como um vidro amarelo. RMN (3 00 MHz, CDC13) δ 0,04 (s, 9H) , 0,83-1,01 (m, 8H) , 1,21-1,34 (m, 4H) , 1,43 (s, 3H) , 1,56-1,76 (m, 5H) , 1,82-1,95 (m, 1 Η) , 1,99-2,11 (m, 1 H) , 2,18 (s, 3H) , 2,23-2,41 (m, 2H) , 2,73-2,88 (m, 1 H) , 3,48-3,57 (m, 1 H), 3,59-3,66 (m, 2H), 3,69-3,81 (m, 4H),
4,07-4,17 (m, 1 H), 4,33-4,43 (m, 2H), 5,31 (app pentet, J = 7,1 Hz, 1 H), 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,73 (ABq, Αδ^ = 0,06, JAB = 16,3 Hz, 2H) , 6,86 (d, J = 7,6 Hz, 1 Η), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 Η), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 1 Η), 7,62 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,74 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,02 (s, 1 H) , 8,11 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 740,4 [ΜμΗ] , Tr = 3,41 min.
Composto 77
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster metílico do ácido (S)-1-((S)-2-{(S)-2-[(E)-(R)-4-[7-((R)-1-acetoxi- etil) -quinolin-7-il] -2-metil-2- (2-trinaetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (319,4 mg, 0,432 mmol) em tetrahidrofurano/água (30 ml, 5:1) foi tratada com hidróxido de lítio monohidrato (130,2 mg, 3,105 mmol) . Após agitar a 0 °C durante 4,75 h, a mistura de reação foi extinta com ácido clorídrico (2 M, 2,1 ml). Os voláteis foram removidos a vácuo. Ácido acético residual e metanol foram retirados por azeotropia com metanol/tolueno (3 x) então tolueno (3 x). Ao sólido branco foi adicionado N, N-dimetilaminopiridina (8,0 mg, 0,062 mmol), crivos moleculares de 4 Â e tetrahidrofurano seco (210 ml) . A mistura de reação foi subsequentemente tratada com N, N-diisopropiletilamina (540 μΐ, 3,105 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (283,3 mg, 0,745 mmol). Após agitar a temperatura ambiente durante 4 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e ácido clorídrico (1 M) . A camada orgânica foi lavada com bicarbonato de sódio saturado, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso- hexanos/acetona de 1:0 a 7:3 para proporcionar o composto do título (152,6 mg, 37ã) como um sólido branco. Uma amostra 20 mg foi purificada por meio de HPLC preparativa de fase reversa eluído com um gradiente de acetonitrilo/água 1:1 a 1:0 para proporcionar o composto do título (5,5 mg, 27ã) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,04 (s, 9H) , 0,90-1,01 (m, 8H) , 1,55 (s, 3H), 1,61 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,65-1,78 (m, 5H), 1,86-2,07 (m, 3H) , 2,67-2,81 (m, 1 H) , 3,47 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 3,54-3,68 (m, 2H), 3,74-3,84 (m, 2H), 4,28 (d, J = 10,5 Hz, 1 H) , 4,35-4,47 (m, 1 H) , 5,72 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,92 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,38 (ABq, Δ5αβ = 0,02, Jab — 16,7 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,73 (dd, J = 8,7, 1,6 Hz, 1 H), 7,80 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 667,1 [ΜμΗ], Tr = 3,40 min.
Exemplo 78: Composto 78
Uma solução de composto 77 (126,2 mg, 0,189 mmol) em ácido clorídrico (4 M em 1,4-dioxano, 10 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante 23 h. A mistura de reação foi então lentamente adicionada a bicarbonato de sódio sólido. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 2:3 para proporcionar o composto do título (53,6 mg, 50ã) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,90-1,02 (m, 6H) , 1,22-1,37 (m, 2H) , 1,52 (s, 3H) , 1,61-1,78 (m, 8H) , 1,86- 2,06 (m, 3H) , 2,68-2,81 (m, 1 H) , 3,65 (d, J = 10,9 Hz, 1H) , 3,76-3,93 (m, 2H) , 4,29 (d, J = 10,5 Hz, 1 H) , 4,35- 4,47 (m, 1H) , 5,75 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,92 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,38 (ABq, AÕab = 0,05, JAB = 16,7 Hz, 2H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,66 (s, 1 H) , 7,75-7,84 (m, 2H) , 8,21 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 566,2 [ΜμΗ] , Tr = 1,83 min.
Exemplo 79: Composto 79
Composto 79a. ácido (E)-(S)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7 -il]-2-metil-2-(2 -trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico
Composto 7 9a (o enantiómero do previamente descrito 77c) foi preparado da mesma maneira que composto 77d utilizando ácido (S)-2-metil-2-(2-trimetilsilanil- etoximetil)-but-3-enoico em vez de ácido (R)-2-metil-2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico em 86% de rendimento. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,04 (s, 9H) , 1,03 (dd, J = 9,6, 7,1 Hz, 2H) , 1,49 (s, 3H) , 1,69 (d, J = 6, 9 Hz, 3H), 2,18 (S, 3H), 3,59-3,77 (m, 4H), 6,07 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,66 (ABq, ΔδΑΒ = 0,16, JAB = 16,3 Hz, 2H) , 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 8,12 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 444,1 [ΜμΗ], Tr = 3,27 min.
Composto 79b. éster metílico do ácido (S)-1-((S)-2-{(S)-2 - [(E)-(S)-4-[7-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2 -metil-2-(2 -trimetilsilaniletoximetil)-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
O composto 79b foi preparado da mesma maneira que composto 77f utilizando ácido (E)- (S)-4-[2-((R)-1-acetoxietil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(2-trimetilsilanil- etoximetil)-but-3-enoico em vez de ácido (E)-(R)-4 -[2- ((R)- 1- acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(2- trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico em 60S de rendimento. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,04 (s, 9H) , 0,83- 1,10 (m, 8H), 1,28 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,45 (s, 3H), 1,64- 1,72 (m, 5H), 1,81-1,94 (m, 1 H), 1,99-2,09 (m, 1H), 2,18 (s, 3H) , 2,19-2,31 (m, 1H) , 2,69-2,79 (m, 1H) , 3,45-3,55 (m, 1H) , 3,59-3,69 (m, 4H) , 3,71-3,80 (m, 4H) , 4,29-4,42 (m, 2H) , 5,28 (app pentet, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,68-6,87 (m, 3H), 7,32 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,66-7,77 (m, 2H) , 8,05 (s, 1 H) , 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 740,4 [ΜμΗ] , Tr = 3,46 min.
Composto 79
O composto 79 foi preparado da mesma maneira que composto 77 utilizando éster metílico do ácido (S)-1- ( (S)- 2- {(S)-2-[(E)-(S)-4-[7-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]- 2- naetil-2- (2-trimetilsilanil-etoximetil) -but-3-enoilamino] - 3- metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3- carboxílico em vez de éster metílico do ácido (S)-1-( (S)-2-{(S)-2-[(E)-(R)-4-[7-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em 71ã de rendimento. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,00 (s, 9H) , 0,93-1,04 (m, 8H) , 1,29 (s, 3H) , 1,63-1,76
(m, 7H), 1,87-2,04 (m, 3H), 2,69-2,82 (m, 1 H) , 3,61-3,72 (m, 4H), 3,77-3,89 (m, 1 H), 4,32-4,47 (m, 3H), 5,75 (q, J = 7,1 Hz, 1 Η) , 5,92 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,38 (ABq, ΔδΑΒ = 0,18, Jab = 16,5 Hz, 2H) , 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,61 (S, 1 H) , 7,76-7,87 (m, 2H) , 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 667,3 [MS H], Tr = 3,28 min.
Exemplo 80: Composto 80
Composto 80 foi preparado da mesma maneira que composto 78 utilizando composto 79 em vez de composto 77 em 13% de rendimento. 1H RMN (3 00 MHz, CD30D) δ 1,01 (d, J = 6,7 Hz, 6H), 1,24 (s, 3H), 1,62-1,76 (m, 8H), 1,84-2,06 (m, 3H), 2,70-2,82 (m, 1 H), 3,72-3,89 (m, 3H), 4,33-4,48 (m, 3H), 5,78 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,93 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,38 (ABq, ΔδΑΒ = 0,12, JAB = 16,5 Hz, 2H) , 7,40 (d, J = 8,5
Hz, 1 H), 7,62 (s, 1 H), 7,82 (s, 2H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 566,2 [ΜμΗ], Tr = 1,99 min.
Exemplo 81: Composto 81
Composto 81a. (S)-4-Benzil-3-(3-ciclopropil- propionil)-oxazolidin-2-ona
Uma solução de ácido 3-ciclopropilpropiónico (5,0 g, 44,0 mmol) em diclorometano anidro (75 ml) foi preparado e cloreto de oxalilo (11,5 ml, 131,5 mmol) foi adicionado seguido de N, N- dime tilformamida (5 ml) . A reação foi agitada a temperatura ambiente e evolução de gás foi observada. Após 1,5 h a solução foi evaporada para render o cloreto ácido como uma goma incolor.
Num balão separado uma solução de (S)-4-benzil-2-oxazolidinona (7,75 g, 43,8 mmol) em tetrahidrofurano anidro (75 ml) foi arrefecida até -78 °C sob uma atmosfera de azoto. Uma solução de n-butillítio (2,5 M em hexanos, 17,5 ml, 43,8 mmol) foi adicionada gota a gota. A reação foi agitada a -78 °C durante 15 minutos. Uma solução de o cloreto ácido em tetrahidrofurano anidro (40 ml) foi então adicionado. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 20 minutos então deixada a aquecer a temperatura ambiente ao longo de 1 h. Uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio (80 ml) foi adicionada. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (50 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e evaporadas para dar um óleo castanho. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo 4:1 para render o composto do título (8,88 g, 74%) como um óleo incolor. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,08-0,15 (m, 2H) , 0,42-0,52 (m, 2H) , 0,73-0,89 (m, 1H) , 1,55-1,67 (m, 2H) , 2,73-2,85 (m, 1H) , 2,97-3,18 (m, 2H) , 3,27-3,37 (m, 1H) , 4,14-4,26 (m, 2H) , 4,65-4,75 (m, 1H) , 7,19-7,40 (m, 5H) . LCMS (m/z) 274,1 [M+H] , Tr = 2,82 min.
Composto 81 b. (S)-4-Benzil-3-((S)-2-ciclopropilmetil-pent- 4-enoil)-oxazolidin-2-ona
Uma solução de Ν,Ν-áiisopropi1amina (5,46 ml, 39 mmol) em tetrahidrofurano anidro (SO ml) foi arrefecida até -10 °C antes de adicionar uma solução de n-butillítio (2,5 M em hexanos, 15 ml, 37,5 mmol) gota a gota ao longo de 10 minutos mantendo a temperatura abaixo de 0 °C. A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 10 minutos antes de arrefecimento até -78 °C. Uma solução de (S)-4-benzil-3-(3-ciclopropil-propionil)-oxazolidin-2-ona (8,88 g, 32,5 mmol) em tetrahidrof urano (35 ml) foi adicionado gota a gota ao longo de 10 minutos mantendo a temperatura abaixo de -70 °C. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 1 h então aquecida até -15 °C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com solução saturada aquosa de cloreto de amónio (100 ml) e extraída com acetato de etilo (2 x 60 ml). 0 extrato foi seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e evaporado para dar uma goma amarela. A goma foi purificada por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para render o composto do título (5,3 g, 52â) como um óleo incolor. lH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,01-0,15 (m, 2H) , 0,35-0,50 (m, 2H), 0,65-0,82 (m, 1 H), 1,50-1,60 (m, 2H), 2,32-2,45 (m, 1 H), 2,47-2,60 (m, 1 H), 2,66-2,77 (m, 1 H), 3,27-3,37 (m, 1 H) , 4,05-4,25 (m, 3H) , 4,65-4,76 (m, 1 H) , 5,03-5,16 (m, 2H) , 5,78-5,93 (m, 1 H) , 7,20-7,36 (m, 5H) . LCMS (m/z) 314,1 [ΜμΗ], Tr = 2,83 min.
Composto 81c. (S)-4-Benzil-3-((E)-(R)-2-ciclopropilmetil- pent-3-enoil)-oxazolidin-2-ona
Uma solução de (S)-4-benzil-3-(2-ciclopropilmetil-pent-4-enoil)-oxazolidin-2-ona (4,3 g, 13,8 mmol) em etanol (35 ml) e água (4,3 ml) foi preparada e cloreto de ródio(III) hidrato (70 mg, 0,35 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida até 80 °C durante 16 h. Uma quantidade adicional de cloreto de ródio(III) hidrato (35 mg, 0,18 mmol) foi adicionada e a reação foi aquecida até 80 °C durante mais 4 h. A mistura de reação foi evaporada e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 7:3 para render o composto do título (3,5 g, 81ã) como um óleo incolor. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,01-0,15 (m, 2H), 0,35-0,50 (m, 2H) , 0,65-0,82 (m, 1 H) , 1,57-1,65 (m, 2H) , 1,74 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 2,74-2,85 (m, 2H), 4,07-4,25 (m, 2H), 4,50-4,60 (m, 1 H), 4,64-4,75 (m, 1 H), 5,49-5,65 (m, 1 H), 5,66-5,82 (m, 1H) , 7,15-7,46 (m, 5H) .
Composto 81 d. ácido (E)-(R)-2-Ciclopropilmetil-pent- 3-enoico
Uma solução de (S)-4-benzil-3-((E)- (R)-2-ciclopropilmetil-pent-3-enoil)-oxazolidin-2-ona (3,50 g, 10,92 mmol) em tetrahidrofurano (75 ml) foi arrefecida até 0 °C antes de adição de um solução aquosa a 30ã de peróxido de hidrogénio (5,8 ml, 56 mmol) e uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (950 mg, 22,6 mmol) em água (37 ml). A reação foi agitada a 0 °C durante 2,5 h. A mistura de reação foi tratada com uma solução aquosa de metabissulfito de sódio e agitada durante 10 minutos antes de acidificar a pH 1 com ácido clorídrico (2 M). A mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 50 ml). 0 extrato foi seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e evaporado para dar um óleo incolor. 0 óleo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 7:3 para render o composto do título (1,32 g, 78%) como um óleo incolor e como uma mistura de 2,5:1 E/Z isómeros. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,02-0,15 (m, 1,96H), 0,39-0,52 (m, 1,96H), 0,65-0,81 (m, 0,98H), 1,47-1,63 (m, 1,96H), 1,71 (d, J=6,7Hz, 2,94H), 3,06-3,17 (m, 0,98H), 3,45-3,56 (m, 0,28H) , 5,40-5,56 (m, 0,98H) , 5,57-5,72 (m, 0, 98H) , 10,5- 12,0 (bs, LCMS (m/z) 153,1 [M-H], Tr = 1,91 min.
Composto 81e. éster (R)-1-(7-vinil-quinolin-2-il) - etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Éster metílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (562 mg, 1,36 mmol) foi suspenso em tetrahidrofurano (14 ml) então hidróxido de lítio monohidrato (63 mg, 1,49 mmol) e água (3 ml) foram adicionados. A mistura foi rapidamente agitado durante 30 minutos e então ácido clorídrico (2 M, 0,68 ml) foi adicionado. A mistura foi evaporada e o resíduo foi então suspenso em diclorometano anidro (13,5 ml) com 4 À crivos moleculares (em pó, 2 g). À mistura agitada, sob azoto, foi adicionado (R)-1-(7-vinil-quinolin-2-il)-etanol (271 mg, 1,36 mmol) em diclorometano anidro (13,5 ml) , seguido de cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (366 mg, 1,90 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (166 mg, 1,36 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. Uma porção adicional de cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (131 mg, 0,68 mmol) e 4 -dimetilaminopiridina (83 mg, 0,68 mmol) foram então adicionados e a mistura de reação agitada durante mais 5 h. A mistura foi filtrada através de Celite e o filtrado lavado com solução saturada aquosa de cloreto de amónio, seguido de água e então salmoura. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e o filtrado evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo 1:3 a 1:1 para proporcionar o composto do título (366 mg, 460 ) como uma espuma banca. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,86-1,00 (m, 6H) , 1,33 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,46 (S, 9H), 1,52-1,61 (m, 1 H), 1,74 (d, J= 6,7 Hz, 3H) , 1,84-2,2/ (m, 4H), 2,74-2,88 (m, 1 H), 3,58-3,69 (m, 1 H), 3,74-3,87 (m, 1 H), 3,91-4,02 (m, 1 H), 4,41-4,51 (m, 1H) , 5,06-5,16 (m, 1 H) , 5,29 (app pentet, J = 6,9 Hz, 1 H) , 5,44 (d, J = 10,9 Hz, 1H) , 5,97 (d, J = 17,6 Hz, 1 H) , 6,13 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,73 (d, J = 7,1 Hz, 1 H) , 6,94 (dd, J = 17,8, 10,7 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,69 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,79 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 8,03 (s, 1 H) , 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 582,2 [ΜμΗ], Tr = 2,58 min.
Composto 81f. éster (R)-1-(7-vinil-quinolin-2-il)- etílico do ácido (S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-(R)-2-Ciclopropilmetil-pent-3-enoilamino)- 3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 1-(7-vinil-quinolin-2-il)- etílico ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (R)- (340 mg, 0,585 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) sob azoto foi tratado com t rimet ilsilil-trifluorometanos sulfonato (212 μΐ, 1,17 mmol) . Após agitar durante 1,5 h a 0 °C, a reação foi extinta com solução saturada de bicarbonato de sódio e agitado durante 20 minutos. A camada orgânica foi separada e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados. Ao resíduo em acetonitrilo anidro (15 ml) foi adicionado crivos moleculares de 4 Ã (1 g) seguido de uma solução de ácido (E)-(R)-2-ciclopropilmetil-pent-3-enoico (108 mg, 0,702 mmol) em acetonitrilo anidro (5 ml). Cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-Ν'-etilcarbodiimida (157 mg, 0,819 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol (119 mg, 0,702 mmol) foram então adicionados e a mistura resultante agitado durante 69 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite com diclorometano e o filtrado foi lavada com solução saturada aquosa de cloreto de amónio, água então salmoura. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 a 0:1 para proporcionar o composto do título (142 mg, 39%) como um sólido branco. XH RMN (3 00 MHz, CDC13) δ 0,03-0,12 (m, 2H), 0,37-0,45 (m, 2H), 0,63-0,71 (m, 1 H) , 0,87-0,94 6H), 1,30 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,45-1,66 (m, 2H), 1,71-1,74 (m, 6H), 1,92-1,95 (m, 1 H), 2,02-2,09 (m, 1 H), 2,12-2,20 (m, 1 H) , 2,75-2,87 (m, 1 H) , 2,93 (q, J = 7,3 Hz, 1 H) , 3,58-3,68 (m, 1 H), 3,81-3,91 (m, 1 H), 4,27 (dd, J = 8,5, 6,1 Hz, 1 H) , 4,45 (d 1 J = 12,5 Hz, 1 H) , 5,28 (app pentet, J = 6,9 Hz, 1 H) , 5,44 (d I J = 10,9 Hz, 1 H) , 5,48-5,65 (m, 2H), 5,98 (d, J = 17,6 Hz, 1 H), 6,13 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 6,19-6,24 (m, 1H), 6,65 (dl, J = 7,6 Hz, 1H), 6,93 (dd, J = 17,5, 10,8 Hz, 1H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,69 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,79 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,04 (s, 1 H) , 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 618,3 [ΜμΗ], Tr = 3,07 min.
Composto 81
A uma solução agitada de éster (R)-1-(7-vinil-quinolin-2-il)- etílico do ácido (S)-l-{(S)-2-[(S)-2-((E)-(R)-2-ciclopropilmetil-pent-3-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (128 mg, 0,207 mmol) em 1,2-dicloroetano (85 ml) sob azoto a 80 °C foi adicionado Hoveyda-Grubbs catalisador 2a geração (26 mg, 0,041 mmol) e a mistura de reação aquecida a refluxo durante 45 minutos. Uma porção adicional de catalisador 2a geração Hoveyda-Grubbs (26 mg, 0,041 mmol) foi adicionado e a mistura aquecida a refluxo durante 2,5 h, onde uma porção adicional de catalisador 2a geração Hoveyda-Grubbs (26 mg, 0,041 mmol) foi adicionado e a mistura aquecida a refluxo durante 7 h antes de deixar a arrefecer a temperatura ambiente. Uma solução de isocianoacetato de potássio (76 mg, 0,621 mmol) foi adicionado em metanol (1 ml) e a mistura foi agitada durante 2,5 h. Sílica foi adicionado e os orgânicos evaporada. 0 sólido resíduo foi seco carregado sobre um cartucho de sílica e purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1. Frações contendo o material desejado foram recolhidas, combinadas e re-purifiçadas utilizando HPLC preparativa de fase reversa utilizando um gradiente de acetontrilo/água 2:3 a 3:7 então 1:4 a 3:7 para dar o composto do título (1,5 mg, 1,3ã) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,19-0,25 (m, 2H) , 0,53-0,61 (m, 2H) , 0,86-0,94 (m, 1H) , 0,98 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 0,99-1,08 (m, 1 H) , 1,47-1,50 (m, 1 H) , 1,53-1,60 (m, 1 H) , 1,64 (d, J = 7,1
Hz, 3H), 1,69-1,75 (m, 2H), 1,74 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,86- 1,92 (m, 1 H) , 2,69-2,81 (m, 1 H) , 3,37-3,43 (m, 1 H) , 3,71-3,77 (m, 1 H), 3,79-3,86 (m, 1 H), 4,31 (d, J = 10,3 Hz, 1 H) , 4,45 (d 1, J = 11,6 Hz, 1 H) , 5,74 (q, J = 7,1
Hz, 1 H), 5,93 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,38 (d, J = 16,7 Hz, 1H) , 6,49 (dd, J = 16,5, 3,8 Hz, 1H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,65 (s, 1H) , 7,77 (dd, J = 8,7, 1,3 Hz, 1 H) , 7,82 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,21 (d, J ~ 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 576,2 [MS H], Tr = 2,49 min.
Exemplo 82: Composto 82
Composto 82a. éster 2,2,2-trieloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-1ere-Butoxicarbonilamino-3- (terc-butil-difenil-silaniloxi) -propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A éster 1,2-di-terc-butilico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxilico 3-(2,2,2 -tricloro-etil) éster (5,0 g, 10,8 mmol) em diclorometano anidro (33 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (33 ml, 432 mmol) . A solução foi aquecida até temperatura ambiente e agitado durante 16 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo co-evaporado de tolueno (3 x). 0 óleo viscoso castanho resultante foi dissolvido em acetonitrilo anidro (5 ml) e adicionado a uma solução de ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil- silaniloxi)-propiónico (2,39 g, 5,4 mmol, preparado como em PCT Int. Appl. 2006, WO 2006004880 A2) , N,N- diisopropiletilamina (3,76 ml, 21,6 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l- il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (2,05 g, 5,4 mmol) em acetonitrilo anidro (25 ml) that had been previously agitado a 0 °C durante 20 minutos, A reação foi aquecida até temperatura ambiente e agitado durante 16 h antes de ser concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo 4:1 para dar o composto do título (1,8 g, 49%) como um óleo viscoso transparente. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,08 (s, 9H) , 1,46 (s, 9H) , 1,53-1,67 (m, 1H) , 1,80-2,01 (m, 2H) , 2,82-2,96 (m, 1 H) , 3,19-3,32 (m, 1 H) , 3,62 (d, J = 10,9 Hz, 1 H) , 3,80-3,97 (m, 3H) , 4,23- 4,34 (m, 1H), 4,61 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 4,90 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 5,18-5,27 (m, 1 H), 5,51-5,63 (m, 1 H), 7,35-7,49 (m, 6H) , 7,58-7,70 (m, 4H) . LCMS (m/z) 686,2 [ΜμΗ] , Tr - 4,32 min.
Composto 82b. éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidropi ridaz ina-3 -carboxí1ico
A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi) -propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (1,0 g, 1,46 mmol) em diclorometano anidro (25 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (400 μΐ, 2,19 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 2 h antes de adicionar N,N-diisopropiletilamina (1,0 ml, 5,84 mmol) e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (15 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (763 μΐ, 4,38 mmol), N-(terc-butoxicarbonil)-L-valina, (317 mg, 1,46 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (777 mg, 2,04 mmol) . Following 2 h a temperatura ambiente a reação foi extinta com água e extraída com acetato de etilo (2 x). As camadas orgânicas combinadas foram secas através de uma frita hidrofóbica e concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para dar o composto do título (500 mg, 44%) como uma espuma branca. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,88-1,00 (m, 6H) , 1,07 (s, 9H) , 1,48 (s, 9H) , 1,50-1,70 (m, 2H), 1,78-1,89 (m, 1 Η), 1,92-2,02 (m, 1 H), 2,10-2,25 (m, 1 H), 2,81-3,02 (m, 1 H), 3,15-3,30 (m, 1 H), 3,60 (d, J = 10,7 Hz, 1 H) , 3,95 (d 1, J = 3,6 Hz, 2H) , 3,98-4,06 (m, 1 H), 4,19-4,30 (m, 1 H), 4,59 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,90 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 5,10-5,20 (m, 1 H) , 5,36-5,47 (m, 1 H), 6,77-6,88 (m, 1 H), 7,36-7,50 (m, 6H), 7,56-7,70 (m, 4H) . LCMS (m/z) = 785,3 [MH H] , Tr = 425 min. Composto 82c. (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3 -(fcerc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido 2,2, 2-éster tricloroetílico
A uma solução de (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido 2,2,2-éster tricloroetílico (450 mg, 0,57 mmol) em diclorometano anidro (10 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (156 μΐ, 0,86 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 2 h antes de adicionar N,N-diisopropiletilamina (410 μΐ, 2,30 mmol) e então concentrado a vácuo para proporcionar (S)-1-[(S)-2 -((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-3-(fcerc-butildifenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido éster 2,2,2-tricloro-etílico como um sólido branco. A ácido (e)-4- [2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]- 2,2-dimetil-but-3-enoico (196 mg, 0,57 mmol) em acetonitrilo anidro (5 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N, N-diisopropiletilamina (307 μΐ, 1,72 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7- azabenzotriazol-l-il)-l,l,3,3 -tetrametil urónio (306 mg, 0,80 mmol). A solução foi agitada a 0 °C durante 3 minutos antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-amino-3- metilbutirilamino)-3- (terc-butil-difenil-silaniloxi) -propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em acetonitrilo anidro (2 ml) . A reação foi aquecida até temperatura ambiente, agitada durante 16 h e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para dar o composto do título (350 mg, 620 , 2 feeps) como um óleo viscoso. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,85-0,99 (m, 6H) , 1,05 (s, 9H) , 1,32-1,43 (m, 1 H) , 1,49 (s, 3H) , 1,50 (s, 3H), 1,53-1,57 (m, 1 H), 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,75-2,00 (m, 3H) , 2,08-2,15 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,86- 2,96 (m, 1H) , 3,11-3,22 (m, 1 H) , 3,56 (d, J = 10,9 Hz, 1 H) , 3,90-3,95 (m, 2H) , 4,34 (dd, J = 8,3, 5,1 Hz, 1 H) , 4,58 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,89 (d, J = 12,0 Hz, 1H) , 5,33-5,41 (m, 1 H), 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,45 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6,63 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 6,72 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 7,34-7,49 (m, 7H) , 7,54-7,69 (m, 5H) , 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,03 (s, 1 H), 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) = 994,5 [ΜμΗ], Tr = 4,30 min.
Composto 82d.
A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metilbutirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (350 mg, 0,35 mmol) em tetrahidrofurano (14 ml) e água (3 ml) foi adicionado hidróxido de lítio monohidrato (74 mg, 1,76 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada a 0 °C durante 4 h e extinta por acidificação a pH 6 com ácido clorídrico a 2 M aquoso. A mistura foi concentrada a vácuo, seguido de co-evaporação de acetonitrilo (2 x) e então tolueno (2 x) e seco em alto vácuo durante 16 h. 0 resíduo resultante foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (117 ml) e a temperatura ambiente foi adicionado N, W-diisopropi let i lamina (314 μΐ, 1,76 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (187 mg, 0,49 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (4 mg, 0,1 mmol). A reação foi agitada durante 7 h, diluída com acetato de etilo e lavada com ácido clorídrico (1 Μ, 1 x) e salmoura (1 x) . A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para proporcionar o composto do título (137 mg, 48%) como um óleo viscoso. RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,89-1,03 (m, 6H) , 1,10 (s, 9H) , 1,40 (s, 3H), 1,47 (s, 3H), 1,59-1,64 (m, 1 H), 1,68 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,80-2,03 (m, 4H) , 2,54-2,67 (m, 1H) , 3,46-3,55 (m, 2H), 4,19-4,28 (m, 1H), 4,43-4,54 (m, 1H), 5,87 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 5,92-6,01 (m, 2H) , 6,20 (d, J = 9,1 Hz, 1H) , 6,28 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 6,29 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,39 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,35-7,48 (m, 6H), 7,54-7,61 (m, 2H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,73- 7,83 (m, 5H), 8,05 (d, J = 8,3 Hz, 1 H). LCMS (m/z) = 804,4 [ΜμΗ], Tr = 4,13 min.
Composto 82
A composto 82d (130 mg, 0,16 mmol) em tetrahidrofurano anidro (810 μΐ) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado fluoreto de tetrabutilamónio (1,0 M solução em
THF, 810 μΐ, 0,81 mmol) . A reação foi agitada a 0 °C durante 1 h antes de ser extinta com uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio. A reação foi extraída com diclorometano (2 x), os orgânicos seco através de uma frita hidrofóbica e concentrado a vácuo. 0 produto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetona 1:1 para proporcionar o composto do título (50 mg, 55%) como um sólido branco. 'Ή RMN (300 MHz, CD3CN) õhh 0,94-0,95 (m, 6H) , 1,32 (s, 3H) , 1,47 (s, 3H) , 1,48- 1,50 (m, 2H), 1,55-1,64 (m, 2H), 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,81-2,01 (m, 2H) , 2,59-2,77 (m, 1H) , 3,69-3,86 (m, 2H) , 3,91 (d, J = 12,3 Hz, 1H) , 4,01-4,11 (m, 1 H) , 4,15-4,29 (m, 1 H), 4,30-4,39 (m, 1 H), 5,58-5,67 (m, 1 H), 5,96 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,34 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,43 (s, 2H), 7,10 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,67 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H) , 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,97 (S, 1 H) , 8,24 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) = 566,3 [ΜμΗ], Tr = 2,10 min.
Exemplo 83: Composto 83
Composto 83a. (R)-3-{(R)-2-[(R)-1-(terc-Butil-dimetil- silaniloxi)-etil]-but-3-enoil}-4-isopropil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona
Uma solução arrefecida (0 °C) de (R)-3-[(R)-2-((R)-1-hidroxi-etil)-but-3-enoil]-4-isopropil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona (654 mg, 2,43 mmol, preparado conforme descrito em Tetrahedron 2009, 65, 7837-7851) e imidazol (727 mg, 10,68 mmol) em N, A7-dimetilformamida (5 ml) foi tratado com cloreto de terc-butildimetilsililo (474 mg, 3,16 mmol). Após agitar durante 5 h a temperatura ambiente, a reação foi extinta com cloreto de amónio saturado. A camada aquosa foi extraída com dietil éter (2 x 20 ml). Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (800 mg, 86%) como um óleo incolor. RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,03 (S, 3H) , 0,09 (s, 3H) , 0,84 (s, 9H) , 0,92 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,16 (d, J = 6,2 Hz, 3H) , 1,40 (s, 3H) , 1,50 (s, 3H), 2,05-2,20 (m, 1 H) , 4,17 (d, J = 3,3 Hz, 1 H), 4,25-4,40 (m, 1H), 4,67 (t, J = 9,1
Hz, 1H) , 5,25 (dd, J = 10,3, 1,6 Hz, 1 H) , 5,46 (dd, J = 17,2, 1,3 Hz, 1 H), 5,65-5,79 (m, 1 H).
Composto 83b. ácido (R)-2-[(R)-1-(fcerc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-but-3-enoico
Uma solução arrefecida (0 °C) de (R)-3-{(R)-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-but-3-enoil}-4 -isopropil-5,5-dimetil-oxazolidin-2-ona (400 mg, 1,04 mmol) em tetrahidrofurano/água (15 ml, 2:1) foi subsequentemente tratada com peróxido de hidrogénio (30% aquoso, 537 μΐ,
5,21 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (87 mg, 2,09 mmol) . A mistura foi deixada a aquecer até temperatura ambiente durante a noite. A reação foi extinta com metabissulfito de sódio até papel de Kl/amido negativo. Após agitar durante 2 h a temperatura ambiente os voláteis foram removidos a vácuo. A mistura foi então diluída com água e o pH foi ajustado com carbonato de potássio. A camada aquosa foi lavada com diclorometano (2 x 20 ml) e acidificada com ácido clorídrico (pH ~ 1) então extraída com acetato de etilo (3 x 30 ml) . Todas as camadas de acetato de etilo foram combinadas e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o composto do título (200 mg, 790 ) como um óleo transparente. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,09 (s, 3H), 0,11 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 1,22 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 3,07 (t, J = 8,7 Hz, 4,11 (pentet, J = 6,5 Hz, 1 H), 5,20-5,35 (m, 2H), 5,70-5,90 (m, 1 H).
Composto 83c. ácido (E)-(R)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7 -il]-2 -[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-but-3-enoico
Uma solução de ácido (R)-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -etil]-but-3-enoico (200 mg, 0,82 mmol), éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)- etílico do ácido acético (241 mg, 0,82 mmol) , acetato de paládio (II) (37 mg, 0,16 mmol), tri-(o-tolil)fosfina (50 mg, 0,16 mmol) em anidro 1,4-dioxano (10 ml) foi tratado com N,N- dicilohexilmetilamina (280 μΐ, 1,31 mmol) . Após agitar a
100 °C durante 6 h, a reação foi arrefecida até temperatura ambiente, retirada por meio de filtração e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e ácido clorídrico (1 M). Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de diclorometano/metanol 1:0 a 9:1 para proporcionar o composto do título (115 mg, 310 ) com um óleo incolor. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,10 (s, 3H), 0,11 (s, 3H), 0,89 (S, 9H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,68 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 2,17 (s, 3H), 3,22-3,37 (m, 1 H), 3,65-3,80 (m, 1 H), 4,26 (pentet, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,08 (q, J = 6,7
Hz, 1 H) , 6,40 (dd, J = 15,8, 9,1 Hz, 1H) , 6,76 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,40-7,55 (m, 1H), 7,55-7,75 (m, 1 H) , 8,03 (s, 1 H) , 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 458,2 [M0 H], Tr = 3,45 min.
Composto 83d. éster metilico do ácido (S)-1-[(S)-2 - ( (S)-2-{(E)-(R)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-but-3 -eno i1ami no}-3 -metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico
Composto 83d foi preparado da mesma maneira que composto 77f utilizando ácido (E)-(R)-4-[2-((R)-1-acetoxietil)-quinolin-7-il]-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -etil]-but-3-enoico em vez de ácido (E)-(R)-4-[2 -((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoico em 64% de rendimento. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,09 (s, 3H) , 0,14 (s, 3H) , 0,81-1,03 (m, 13H) , 1,30-1,40 (m, 3H) , 1,55-1,75 (m, 7H) , 1,75-1, 95 (m, 2H) , 2,05 (s, 3H) , 2,10-2,22 (m, 4H) , 3,20-3,60 (m, 2H) , 3,75 (s, 3H) , 4,08-4,42 (m, 3H) , 5,32 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,05 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,42- 6,55 (m, 1 H) , 6,62-6,82 (m, 2H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,55-7,65 (m, 1 H), 7,70-7,80 (m, 1 H), 7,96 (s, 1 H), 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 754,4 [ΜμΗ] , Tr = 3,47 min.
Composto 83e.
Composto 83e foi preparado da mesma maneira que composto 77 utilizan<3o éster metílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2 -{(E)-(R)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em vez de éster metílico do ácido (S)-1-((S)-2-{(S)-2-[(E)-(R)-4-[7-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7 -il]-2-metil-2-(2 -trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em 40% de rendianto. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,09 (s, 3H) , 0,14 (s, 3H) , 0,85- 1,05 (m, 15H) , 1,28 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,50 (d, J = 7,1
Hz, 3H), 1,75 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,85-2,08 (m, 4H), 3,00-3,10 (m, 1 H), 3,60-3,80 (m, 2H), 4,25-4,60 (m, 2H), 5,56 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,94 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,20-6,35 (m, 2H) , 6,52 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 6,69 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,42-7,65 (m, 2H), 7,70 (s, 1H) , 8,02 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 680,4 [ΜμΗ] , Tr = 3,56 min.
Composto 83
Uma solução arrefecida (0 °C) de composto 83e (44 mg, 0,065 mmol), em diclorometano (10 ml) foi tratado com ácido clorídrico (4 M em 1,4-dioxano, 5 ml). Após agitar a 0 °C durante 2 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre diclorometano e bicarbonato de sódio saturado. Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 10 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (18 mg, 49ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CDjOD) δ 0,85-1,05 (m, 6H) , 1,34 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,61 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,74 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,85- 2,08 (m, 4H), 2,68-2,82 (m, 1 H), 3,72-3,83 (m, 1 H), 4,10- 4,28 (m, 3H) , 4,38-4,47 (m, 1 H) , 5,62 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,91 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,35-6,57 (m, 2H), 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,65-7,85 (m, 3H) , 8,19-8,25 (m, 2H) , 8,46 (d, J = 6,9 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 566,2 [ΜμΗ] , Tr = 1,80 min.
Exemplo 84: Composto 84
Composto 84a. éster terc-butílico do ácido ( (S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-Bromo-quinolin-2-il)-etilcarbamoil]-tetrahidro- piridazin-l-il}-l-metil-2-oxo-etil)-carbámico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propioni1)-hexahidropi ridaz ina-3 -carboxí1ico (3,007 g, 6,948 mmol) em tetrahidrofurano/água (60 ml, 5:1) foi tratado com hidróxido de lítio monohidrato (874,4 mg, 20,844 mmol). Após agitar a 0 °C durante 40 minutos a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 50 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. Tricloretanol residual foi retirado por azeotropia com tolueno (3 x) para proporcionar ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico como um sólido branco que foi então combinado com cloridrato de (R) -1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etilamina (1,998 g, 6,948 mmol) e suspenso em acetonitrilo anidro (60 ml) e tetrahidrofurano (10 ml) . A suspensão foi arrefecida até 0 °C e subsequentemente tratado com N,N-diisopropiletilamina (6 ml, 34,740 mmol) e hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H- 1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio 3-oxido (3,699 g, 9,727 mmol). Após aquecimento lentamente até temperatura ambiente e agiação durante 16 h, a reação foi extinta a 0 °C com ácido clorídrico (1 M, 70 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x). Os orgânicos foram combinados, lavados com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:4 para proporcionar o composto do título (3,702 g, 99ã) como uma espuma branca. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,38 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,43 (s, 9H), 1,47-1,55 (m, 2H), 1,58 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,60- 1,78 (m, 2H) , 2,22-2,31 (m,1 H), 2,65-2,78 (m, 1 H) , 3,39- 3,52 (m, 1H) , 4,55 (d, J = 13,4 Hz, 1 H) , 5,18-5,34 (m, 2H) , 5,36-5,45 (m, 1H) , 7,37 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,65 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 6,5 Hz, 1 H), 8,14 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,36 (s, 1 H). LCMS (m/z) 536,1, 537,1 [M0 H], Tr = 2,58 min.
Composto 84b. 3-Metil-3-vinil-dihidro-furan-2-ona
Uma solução arrefecida (-78 °C) de N, N- diisopropilamina (4,7 ml, 33,815 mmol, seco sobre hidreto de cálcio) em tetrahidrofurano anidro (20 ml) foi tratado com Uma solução de n-butillítio em hexanos (12,7 ml, 31,702 mmol, 2,5 M) . Após agitar a -78 °C durante 25 minutos, a mistura foi tratada com 3-metil-dihidro-furan-2-ona (2 ml, 21,135 mmol). Após agitar a 0 °C durante 1 h, a reação foi subsequentemente tratado com uma solução de di-μ- bromobis(tri-terc-butilfosfino)dipaládio(1) (164,2 mg, 0,211 mmol) em tetrahidrofurano anidro (5 ml) e uma solução de vinilo brometo em tetrahidrofurano (31,7 ml, 81,702 mmol, 1 M) . A reação foi lentamente aquecida até temperatura ambiente. Após agitar durante 16 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (2 M) e água. A camada aquosa foi extraída com dietil éter (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrado e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/dietil éter de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (1,272 g, 480 ) como um laranja óleo. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,38 (s, 3H) , 2,11-2,22 (m, 1H) , 2,31-2,41 (m, 1H) , 4,20-4,36 (m, 2H) , 5,16-5,26 (m, 2H), 5,84-5,96 (m, 1H).
Composto 84c . ácido (S)-2-[2-(2-Hidroxi-etil)-2-metil-but- 3-enoilamino]-3-metil-butírico
Cloridrato de éster terc-butílico de L-valina (3,2 g, 15,259 mmol) foi particionado entre diclorometano e uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar éster terc-butí lico de L-valina como um óleo incolor que foi dissolvido em anidro dicloroetano (40 ml). Esta solução foi tratado com Uma solução de trimetilaluminio (15,2 ml, 30,516 mmol, 2 M em tolueno) . Após agitar a temperatura ambiente durante 1,5 h, a mistura foi tratada com uma solução de 3-metil-3 -vinil-dihidro-furan-2-ona (641,7 mg, 5,086 mmol) em dicloroetano (10 ml) . Após agitar a 85 °C durante 15 h, a reação foi arrefecida até 0 °C, lentamente extinta com ácido clorídrico (2 M) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x) , os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o composto do título (1,053 g, 85ã) como um sólido branco e como um 1:1 mistura de diastereoisómeros.
Composto 84d. [(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil]-amida do ácido (S)-1-((S)-2-{(S)-2-[2-(2-Hidroxi-etil)-2-metil-but- 3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster terc-butílico do ácido ((S)-2-{(S)-3-[(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etilcarbamoil]-tetrahidro-piridazin-l-il}-l-metil-2-oxo-etil)-carbámico (432,0 mg, 0,808 mmol) em diclorometano (30 ml) foi tratado com uma solução de ácido clorídrico (2,4 ml, 9,699 mmol, 4 M em 1,4-dioxano). Após agitar durante 2 h a temperatura ambiente os voláteis foram removidos a vácuo. Água residual foi retirado por azeotropia com tolueno para proporcionar um sólido branco que foi combinado com ácido (S)-2-[2-(2-hidroxi-etil)-2-metil-but-3-enoilamino]-3-metil-butírico (196,6 mg, 0,808 mmol) e acetonitrilo anidro (30 ml). Esta mistura foi arrefecida até 0 °C e subsequentemente tratado com N,N- diisopropiletilamina (0,71 ml, 4,04 mmol) e hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H- 1,2,3 -triazolo[4,5-b]piridinio 3-oxido (430,1 mg, 1,131 mmol) . A reação foi lentamente aquecida até temperatura ambiente. Após agitar a temperatura ambiente durante 20 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetona de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (186,4 mg, 35ã) como uma espuma amarela e como um 1:1 mistura de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 659,2, 661,1 [ΜμΗ], Tr = 2,21 min.
Composto 84e. [(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil]-amida de ácido (S)-l-{(S)-2-[(5)-3-Metil-2-(3-metil-2-oxo-3-vinil-pirrolidin-l-il)-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução de [(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil] -amida do ácido (S)-1- ( (S)-2-{(S)-2-[2-(2-hidroxi-etil)-2-metil-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (186,4 mg, 0,282 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (206,7 mg, 1,692 mmol) em diclorometano (20 ml) foi tratado com cloreto de para-toluenosulfonilo (161,6 mg, 0,848 mmol). Após agitar a temperatura ambiente durante 2,5 h, mais 4-dimetilaminopiridina (206,7 mg, 1,692 mmol) e cloreto de para-toluenosulfonilo (161,6 mg, 0,848 mmol) foram adicionados. Após agitar a temperatura ambiente durante 1,5 h, os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 20 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (77,0 mg, 42ã) como uma goma incolor e como um mistura 1:1 de diastereoisõmeros. LCMS (m/z) 643,1 [ΜμΗ] , Tr = 1,90 min e LCMS (m/z) 643,1 [ΜμΗ], Tr = 1,99 min.
Uma solução aquecida (80 0O de [(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil]-amida do ácido (S)-1-{(S)-2- [ (S)-3- metil-2-(3-metil-2-oxo-3-vinil-pirrolidin-l-il)-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (77,0 mg, 0,12 mmol) e AT, AT-die iclohexilmeti lamina (0,08 ml, 0,350 mmol) em anidro 1,4-dioxano (60 ml) foi tratado com acetato de paládio(II) (27 mg, 0,12 mmol) e tri(o-tolil) fosf ina (37 mg, 0,12 mmol). Após agitar a 100 °C durante 40 minutos a reação foi arrefecida até temperatura ambiente, filtrado em Celite e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 20 g I solute eluído com um gradiente contínuo de diclorometano/metanol 1:0 a 9:1 seguido de HPLC preparativa de fase reversa eluído com um gradiente de água/acetonitrilo 95:5 a 0:1 para proporcionar o composto do título (2,9 mg, 4%) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 0, 90 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,07 (d, J = 5,5 Hz, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,57-1,77 (m, 8H) , 1,86-2,08 (m, 2H) , 2,14-2,34 (m, 4H) , 2,65-2,79 (m, 1 H), 3,59-3,67 (m, 1 H), 4,08-4,21 (m, 2H), 4,35-4,52 (m, 2H) , 5,07 (q, J = 6, 9 Hz, 1 H) , 5,70 (q, J = 7,3 Hz, 1 H) , 6,39, 6,52 (ABq, JAB = 16,3 Hz, 2H) , 7,47 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 7,67 (s, 1 H) , 7,78 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H) ,
7,85 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 8,25 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 561,2 [ΜμΗ], Tr = 1,26 min.
Exemplos 85 e 86: Compostos 85 e 86
Composto 85a: éster terc-butílico do ácido 2-ciano-2-metil-but-3-enoico
A uma suspensão agitada de hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 880 mg, 22 mmol) em N,N-dimet i1formamida seca (100 ml) a 0 °C, sob azoto, foi adicionado gota a gota éster terc-butílico ácido ciano-metil- acético (preparado como em J. Am. Chem. Soc. 2011, 133, 8165, 3,10 g, 20 mmol). Qualquer residual éster terc-butílico de ácido ciano-metil- acético foi transferida por lavagem seu vaso original com um pouco de N,N-dimetilformamida e transferência à mistura de reação. A mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente durante 40 minutos e então arrefecida até 0 °C. 1,2-Dibromoetano (3,95 g, 1,81 ml, 21 mmol) foi adicionado gota a gota via bomba de seringa ao longo de 30 minutos. A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante mais 3 h e então deixada a aquecer a temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi vertida em água e extraída com acetato de etilo (3 x) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (3 x) , secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e evaporados. Ao resíduo foi adicionado 1,8-diazabiciclo[5,4.0]undec-7-eno (3,14 g, 3,07 ml, 20,6 mmol) e a mistura agitado e aquecida até 80 °C durante 30 minutos e então deixada a arrefecer. Solução saturada de cloreto de amónio foi adicionado e a mistura extraída com dietil éter (2 x) . Os extratos orgânicos foram lavados com Ácido clorídrico a 0,5 M, solução saturada de bicarbonato de sódio, salmoura saturada, secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo 19:1 para proporcionar o composto do título (3,15 g, 87%) como um óleo amarelo pálido. 1H RMN (300 MHz, CDCla) δ 1,52 (s, 9H) , 1,68 (s, 3H) , 5,37 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5,63 (d, J= 17,0 Hz, 1H), 5,89 (dd, J= 17,0, 10.0 Hz, 1H).
Composto 85b: ácido 2-Ciano-2-metil-but-3-enoico
éster terc-butílico do ácido 2 -C i ano-2 -me til-but-3 -enoico (362 mg, 2 mmol) foi suspenso em ácido clorídrico a 4 M em dioxano (10 ml) e a mistura de reaçao agitada durante 38 h e então evaporada. 0 resíduo foi utilizado diretamente na seguinte reação.
Composto 85c: éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-{(S)-2-[(S)-2-(2-Ciano-2-metil-but-3-enoilamino)-3-metil-butirilaminoj-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução agitada de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (6 92 mg, 1,3 mmol) em seco diclorometano (39 ml) foi arrefecida até 0 °C sob azoto e então trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (578 mg, 471 μΐ, 2,6 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante lhe então extinta com solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi separada e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio adicional (2x), seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. Ao resíduo foi adicionado crivos moleculares de 4 Á (em pó, 1,3 g) e uma solução do ácido 2-ciano-2-metil-but-3-enoico bruto (2 mmol) em seco acetonitrilo (3 9 ml) seguido de 1-hidroxibenzotriazol (contendo 20 % de H20) (307 mg, 1,82 mmol) e cloridrato de N- (3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (349 mg, 1,82 mmol). A mistura foi agitada durante 3,5 h, filtrada através de Celite, lavagem com extra diclorometano e o filtrado lavado com solução saturada de cloreto de amónio, água então salmoura saturada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:1 a 1:3 para proporcionar 0 composto do título (356 mg, 510 ) como um sólido banco como uma mistura de diastereoisómeros. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,90-0,97 (m, 3H) , 0,99 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,33 (app t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,54-1,61 (m, 1 H), 1,70-1,79 (m, 1 H), 1,71 (s, 1,5H), 1,72 (s, 1,5 H), 1,89-2,00 (m, 1 H), 2,09-2,25 (m, 2H) , 2,91-3,02 (m, 1 H), 3,65-3,76 (m, 1 H), 3,84 (d, J = 11,2 Hz, 1 H) , 4,22-4,36 2H) , 4,72 (d, J = 12,1 Hz, 1 H) , 4,97 (dd, J = 12,1 Hz, 2,5Hz, 1 H) , 5,31- 5,38 (m, 1 H) , 5,44 (t, J = 9,8 Hz, 1H) , 5,70 (dd, J = 17,2, 10,3 Hz, 1 H) , 5,87-6,02 (m, 1 H) , 6,53-6,60 (m, 1 H) , 6,73-6,87 (m, 1 H) . LCMS (m/z) 538,0, 540,0, 542,0 [ΜμΗ], Tr = 2,68 min.
Composto 85d: (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(E)-2-Ciano-4-[2-((R)-1- hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido éster 2,2,2-tricloro-etílico
Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-{(S)-2-[(S)-2 -(2-Ciano-2-metil-but-3-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (283 mg, 0,527 mmol), (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etanol (146 mg, 0,580 mmol), acetato de paládio(II) (24 mg, 0,105 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (32 mg, 0,105 mmol) foram suspensos em acetonitrilo anidro e Ν,Ν- diciclohexilmeti lamina (113 mg, 124 μΐ, 0,580 mmol) adicionado. 0 vaso foi vedado e aquecido num reator de micro-ondas a 120 °C durante 40 minutos. A mistura foi evaporada e o resíduo dissolvido em acetato de etilo e lavada com solução saturada de cloreto de amónio (2 x) , água então salmoura saturada. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:1 a 0:1 para dar o composto do título (68 mg, 39%) como
um sólido amarelo como uma mistura de diastereoisómeros. 1H RMN (300 MHz, CD?10D) δ 0,92-0,98 (m, 3H) 1,01 (d, J = 6,9
Hz, 3H), 1,27 (app t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,59 (d, J = 5,5 Hz, 3H) , 1,68-1,81 (m, 2H) , 1,86 (s, 3H) , 1,88-1,99 (m, 1H) , 2,10-2,25 (m, 2H) , 2,86-3,05 (m, 1H) , 3,60-3,75 (m, 1H) , 3,85 (t, j = 8,7 Hz, 1 H), 4,22-4,38 (m, 2H), 4,69 (dd, J = 1.2,0, 8,6 Hz, 1 H) , 4,95 (dd, J = 12,0, 7,2 Hz, 1 H) , 4,98- 5,09 (m, 2H), 5,26-5,42 (m, 1 H), 6,48 (dd, J = 16,1, 13,8
Hz' 1 H) , 6,62-6,68 (m, 1H) , 6,96 (dd, J= 15,5, 8,2 Hz, 1H) ' 7' (dd, J = 16,1, 4,9 Hz, 1 H) , 7,35 (dd, J = 8,5, 2,° Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,5, 2,7 Hz' 1 H) , 8,09 (d, J = 5,4 Hz, 1 H) , 8,13 (d, j = 8,5
Hz' 1 H). LCMS (m/z) 709,1, 711,1, 713,2 [M+H], Tr = 2,38 min.
Éster 2,2,2-trieloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-2-Ciano-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (92 mg, 0,130 mmol) e hidróxido de litio monohidrato (11 mg, 0,260 mmol) foram dissolvidos em tetrahidrofurano (2 ml) e água (2 ml) e a mistura de reação agitada durante 1 h. Mais tetrahidrofurano (6 ml) adicionado e mistura de reação agitada durante 15 minutos. Mais hidróxido de litio monohidrato (5 mg, 0,12 mmol) foi adicionado e a mistura de reação agitada durante mais 30 minutos. ácido clorídrico a 2 Μ (0,190 ml) foi adicionado e a mistura evaporada e triturado várias vezes com éter. 0 resíduo foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (5 ml) e adicionado via bomba de seringa ao longo de 3,5 h a uma suspensão agitada de anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (224 mg, 0,650 mmol), 4-
dimetilaminopiridina (119 mg, 0,975 mmol) e em pó crivos moleculares de 4 Ã (ca 2,3 g) em 1,2-dicloroetano (43 ml) a 50 °C sob azoto. 0 balão original contendo o ácido seco foi lavado com N,N- dimetilformamida (1 ml) e esta lavagem adicionado ao longo de 30 minutos a a mistura de reação via bomba de seringa. A mistura de reação foi agitada a 50 °C durante mais uma h e então deixada a arrefecer. A mistura foi filtrada através de Celite e evaporada até quase a secura. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa utilizando um gradiente de acetontrilo/água de 2:8 a 3:7 para dar os compostos do título.
Segundo eluente, menos polar diastereisómero (6,3 mg, 9ã) 86 como um sólido branco RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,98 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,02 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,63 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,66-1,77 (m, 1 H) , 1,73 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,75 (s, 3H), 1,88-1,95 (m, 1 H), 1,96-2,11 (m, 2H), 2,70- 2,80 (m, 1 H), 3,78-3,84 (m, 1 H), 4,27 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 4,40 {dl, J = 7,4 Hz, 1 H), 5,74 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,93 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,57 (s, 2H) , 7,45 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 7,74 (s, 1 H) , 7,79 (dd, J = 8,7, 1,6 Hz, 1 H) ,
7,88 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 8,5 Hz, 1H). LCMS (m/z) 561,2 [MB H], Tr = 2,35 min.
Primeiro eleuente, mais polar, diastereisõmero (1,0 mg, lã) 85 como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,53 (d, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,67-1,78 (m, 2H) , 1,76 (d, J = 6,9
Hz, 3H) , 1,93 (S, 3H), 1,96-2,11 (m, 2H), 2,61-2,73 (m, 1 H) , 3,70 (app t, J = 10,6 Hz, 1 H) , 4,22 (app t, J = 9,1
Hz, 1 H) , 4,53 (dl, J = 14,0 Hz, 1 H) , 5,85 (app t, J = 7,8 Hz, 1H) , 5,96 (q, J = 6,9 Hz, 1H) , 6,21-6,38 (m, 4H) , 6,73 (d, J = 17,1 Hz, 1H) , 7,58-7,63 (m, 1 H) , 7,72-7,79 (m, 1H), 7,83 (s, 1 H), 8,07-8,14 (m, 2H). LCMS (m/z) 561,2 [ΜμΗ], Tr = 2,19 min.
Exemplos 87 e 88: Compostos 87 e 88
Composto 87a. (S)-3-[2-(1-Hidroxi-etil)-2-metil-but-3- enoil]-4 -isopropil-oxazolidin-2-ona
Uma solução arrefecida (-78 °C) de (S)-4-isopropil-3-((E)-2-metil-but-2-enoil)-oxazolidin-2-ona (o enantiómero do composto previamente descrito 77a) (2,316 g, 10,962 mmol) em diclorometano anidro (50 ml) foi tratado com uma solução de cloreto de titânio(IV) (1 M, 12 ml, 11,510 mmol) em diclorometano. Após agitar a solução laranja durante 5 minutos, a mistura foi tratada com N,N-diisopropiletilamina (4,8 ml, 27,405 mmol). Após agitar a -78 °C durante 2 h, a solução púrpura foi tratada com acetaldeído (4,3 ml, 76,374 mmol) . Após agitar a -78 °C durante 1,5 he a temperatura ambiente durante 50 minutos, a reação foi extinta com uma solução saturada de cloreto de amónio (60 ml). A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os orgânicos foram combinados, filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/dietil éter de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (1,742 g, 62ã) como um 1:1,13:1,85:2,60 mistura de diastereoisõmeros e como um óleo amarelo. Composto 87b. (S)-3 -{2 -[1-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)- etil]-2-metil-but-3-enoil}-4-isopropil-oxazolidin-2-ona
Uma solução de (S)-3-[2-(1-hidroxi-etil)-2-metil-but-3-enoil]-4-isopropi1-oxazolidin-2-ona (1,742 g, 6,809 mmol) e cloreto de terc-butildimetilsililo (1,231 g, 8,17 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (10 ml) foi tratado com imidazol (927 mg, 13,618 mmol). Após agitar a temperatura ambiente durante 6 h, terc-butildimetilsililo cloreto (1,1 g, 7,3 mmol) e imidazol (950 mg, 13,954 mmol) foram adicionados. Após agitar a temperatura ambiente durante 12 dias, a reação foi extinta com uma solução saturada de cloreto de amónio. A camada aquosa foi extraída com dietil éter (2 x). Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/dietil éter de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (1,729 g, 69%) como uma mistura indeterminada de diastereoisõmeros e como um óleo amarelo. LCMS (m/z) 370,1 [ΜμΗ], Tr = 3,96 min e 370,1 [MS H], Tr = 4,22 min.
Composto 87c. ácido 2-[1-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoico
Uma solução arrefecida (0 °C) de (S)-3-{2-[1-(terc- butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoil}-4-isopropiloxazolidin-2-ona (1,729 g, 4,677 mmol) em tetrahidrofurano/água (60 ml, 2:1) foi subsequentemente tratado com peróxido de hidrogénio (30% aquoso, 2,4 ml, 23.385 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (392,4 mg, 9,355 mmol). Após agitar durante 2 dias a temperatura ambiente, peróxido de hidrogénio (30% aquoso, 2,4 ml, 23.385 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (400 mg, 9,535 mmol) foram adicionados a 0 °C. Após agitar a temperatura ambiente durante 4 dias, a reação foi extinta com sólido metabissulfito de sódio (18 g) . Após agitar durante lha temperatura ambiente, o pH foi ajustado com ácido clorídrico (1 M) to pH 2 a 0 °C. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/dietil éter de 1:0 a 7:3 para proporcionar o composto do título (488,0 mg, 40%) como um sólido amarelo e como um par único de enantiómeros juntamente com (S)-3-{2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoil}-4-isopropil-oxazolidin-2-ona não reagido (431,5 mg, 25%, LCMS (m/z) 370,1 [MS H] , Tr = 3,93 min) como o outro par único de enantiómeros como um óleo incolor. λΉ. RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,12 (s, 6H) , 0, 92 (s, 9H) , 1,18 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 1,34 (s, 3H) , 3,99 (q, J = 6,2 Hz, 1H) , 5,18 (d, J == 17,8 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 6,22 (dd, J = 17,6, 11,2 Hz, 1 H).
Composto 87d. ácido (E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin- 7-il] -2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoico
Uma solução de éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etílico d ácido acético (555,4 mg, 1,888 mmol), ácido 2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoico (488,0 mg, 1,888 mmol), acetato de paládio(II) (85 mg, 0,378 mmol), tri(o-tolil)fosfina (115 mg, 0,378 mmol) e N, N-diciclohexilmetilamina (1,0 ml, 4,720 mmol) em anidro 1.4- dioxano (15 ml) foi aquecida a refluxo durante 2 h. Após arrefecimento até temperatura morna a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 30 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrado e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (252,7 mg, 28%) como um sólido amarelo juntamente com uma mistura 1:3 de ácido 2-[1-(terc-butil-dimetilsilaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoico e éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)- etílico do ácido acético (474,6 mg) que foi dissolvido em anidro 1.4- dioxano (10 ml), tratado com acetato de paládio(II) (85 mg, 0,378 mmol), tri(o-tolil)fosfina (115 mg, 0,378 mmol) e N, N-diciclohexilmetilamina (1,0 ml, 4,720 mmol) e aquecida a refluxo durante 5 h. Após arrefecimento até temperatura ambiente a mistura foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 2 0 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) , Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrado e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (149,6 mg, 170 ) como um sólido amarelo. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,12 (s, 3H), 0,15 (s, 3H), 0,93 (s, 9H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,51 (s, 3H) , 4,14 (q, J = 6,2 Hz, 1H) , 6,08 (q, J = 6,7
Hz, 1 H) , 6,74 (ABq, ΔδΑ3 = 0,12, JAB = 16,7 Hz, 2H) , 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,64-7,70 (m, 1 H), 7,76 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 8,03 (s, 1 H) , 8,12 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 472,2 [ΜμΗ], Tr = 3,61 min.
Composto 87e. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (285,0 mg, 0,536 mmol) em diclorometano (15 ml) a 0 °C foi tratado com trimetilsilil-trifluorometanossulfonato (200 μΐ, 1,072 mmol) . Após agitar a 0 °C durante 45 min, a reação foi extinta com uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com diclorometano.
Os orgânicos combinados foram filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S) -1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxí1ico como um sólido branco. To o sólido branco foi adicionado uma solução de ácido (E)- 4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoico (252,7 mg, 0,536 mmol) em acetonitrilo anidro (10 ml) e a solução foi arrefecida até 0 °C então tratada com N, N- diisopropiletilamina (380 μΐ, 2,144 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (244,6 mg, 0,643 mmol). Após agitar a temperatura ambiente durante 20 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 40 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x). Os orgânicos foram combinados, lavados com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:4 para proporcionar o composto do título (377,2 mg, 80ã) como um 1:1 mistura de diastereoisómeros e como uma espuma branca. LCMS (m/z) 886,3/884,5 [M+H], Tr = 4,14 min.
Composto 87f.
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 2,2,2-tricloro- etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2 -[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxí1ico (377,2 mg, 0,426 mmol) em tetrahidrofurano/água (25 ml, 4:1) foi tratado com hidróxido de lítio monohidrato (89 mg, 2,130 mmol) . Após agitar a 0 °C durante 2 h, a mistura de reação foi extinta com ácido clorídrico (2 Μ, 1,1 ml) . Os voláteis foram removidos a vácuo. Ácido acético residual e tricloroetanol foram retirados por azeotropia com tetrahidrofurano/tolueno (6 x) então triturado com dietil éter e seco a vácuo. To o sólido branco foi adicionado tetrahidrofurano seco (150 ml), crivos moleculares de 4 Ã. Esta solução foi arrefecida até 0 °C e subsequentemente tratado com N, 17-diisopropiletilamina (370 μΐ, 2,130 mmol) , N,N-dimetilaminopiridina (5,2 mg, 0,043 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (194,4 mg, 0,511 mmol). Após agitar a temperatura ambiente durante 4 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e ácido clorídrico (1 M) . A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetona de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (134,8 mg, 45%, LCMS (m/z) 694,4 [M+H],
Tr = 3,75 min) como um sólido branco e como uma mistura de diastereoisómeros juntamente com composto 87 (46,1 mg, 19%, LCMS (m/z) 580,3 [M+H] , Tr = 2,02 min) como um sólido branco e como uma mistura de diastereoisómeros.
Uma solução arrefecida (0 °C) de composto 87f (121 mg, 0,174 mmol) em tetrahidrofurano anidro (10 ml) foi tratado com uma solução de n-fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em tetrahidrofurano, 0,87 ml, 0,871 mmol). Após agitar durante 4 h a 0 °C, a solução amarela foi tratada com n-fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em tetrahidrofurano, 0,87 ml, 0,871 mmol) . Após repousar a 4 °C durante 20 ha reação foi extinta com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (20 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrado e os voláteis foram removidos a vácuo. O produto bruto foi combinado com composto não transparente 87 obtido da etapa anterior e purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 10 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 1:1 então por meio de HPLC preparativa de fase reversa eluído com um gradiente de acetonitrilo/água 5:95 to 1:0 para proporcionar dois diferentes diastereoisõmeros.
Exemplo 87, Composto 87 Primeiro eluente Diastereoisómero 1: (3,5 mg, 3,50 ) como um sólido banco. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 1,00-1,07 (m, 6H) , 1,58-1,65 (m, 6H) , 1,70-1,76 (m, 6H) , 1,87-1,97 (m, 4H) , 1,98-2,07 (m, 2H), 2,71-2,84 (m, 1 H), 3,76-3,87 (m, 1 H), 4,23 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 4,38-4,47 (m, 1 H), 5,69 (q, J = 7,4 Hz, 1 H), 5,95 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,45 (ABq, = 0,05, = 16,5 Hz, 2H) , 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,68 (s, 1 H) , 7,74 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H), 7,83 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 580,3 [ΜμΗ] , Tr = 1,94 min.
Exemplo 88, Composto 88 Segundo eluente Diastereoisómero 2: (7,6 mg, 7,5ã) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 1,01-1,11 (m, 6H) , 1,62 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,65-1,77 (m, 9H) , 1,83-1,96 (m, 4H) , 1,98- 2,09 (m, 2H), 2,72-2,86 (m, 1 H), 3,76-3,87 (m, 1 H), 4,34 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 4,38-4,47 (m, 1 H), 5,77 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,95 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,41 (ABq, ΔδΑΒ = 0,15, Jab = 16,5 Hz, 2H) , 7,43 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,6 5 (s, 1H) , 7,74-7,87 (m, 2H) , 8,22 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 580,3 [ΜμΗ], Tr = 2,02 min.
Exemplos 89 e 90: Compostos 89 e 90
Composto 89a. ácido 2-[1-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoico
Uma solução arrefecida (0 °C) de (S)-3 -{2 -[1-(terc- butil-dinaetil-silaniloxi) -etil] -2-metil-but-3-enoil} -4-isopropil-oxazolidin-2-ona recuperada (431,5 mg, 1,167 mmol) em tetrahidrofurano/água (15 ml, 2:1) foi subsequentemente tratada com peróxido de hidrogénio (30% aquoso, 600 μΐ, 5,835 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (98 mg, 2,335 mmol). Após agitar durante 2 dias a temperatura ambiente, peróxido de hidrogénio (30ã aquoso, 600 μΐ, 5,835 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (175 mg, 4,171 mmol) foram adicionados a 0 °C. Após agitar a temperatura ambiente durante 17 dias, a reação foi extinta com sólido metabissulfito de sódio (4,4 g). Após agitar durante lha temperatura ambiente, o pH foi ajustado com ácido clorídrico (1 M) a pH 2 a 0 °C. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/dietil éter de 1:0 a 7:3 para proporcionar o composto do título (115,8 mg, 38ã) como um sólido branco e como um single diastereoisõmero. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,14 (s, 3H) , 0,16 (s, 3H) , 0,92 (s, 9H) , 1,20-1,26 (m, 6H) , 3,97 (q, J = 6,5 Hz, 1H) , 5,16-5,26 (m, 2H), 5,88 (dd, J = 17,4, 10,7 Hz, 1H), 10,33 (s 1, 1H). Composto 89b. ácido (E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoico
Composto 89b foi preparado da mesma maneira que composto 87d. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,10 (s, 3H), 0,16 (S, 3H) , 0,89 (S, 9H) , 1,29 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,40 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 2,18 (s, 3H), 4,07-4,19 (m, 1 H) , 6,06 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 6,44 (d, J = 16,5 Hz, 1H) , 6.70 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,57 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,02 (s, 1 H) , 8,12 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 472,2 [ΜμΗ] , Tr = 3.71 min.
Composto 89c . éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-meti1-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 89c, como uma mistura de diastereoisónaeros, foi preparado da mesma maneira que composto 87e em 63ã de rendimento. LCMS (m/z) 886,3/884,4 [ΜμΗ], Tr = 4,08 min.
Composto 89d.
0 xomposto 89d, como uma mistura de diastereoisómeros, foi preparado da mesma maneira que composto 87f em 42ã de rendimento. LCMS (m/z) 694,5 [ΜμΗ], Tr = 5,61 min.
Uma solução arrefecida (0 °C) de composto 89d (83,0mg, 0,120 mmol) em tetrahidrofurano anidro (2 ml) foi tratado com uma solução de n-fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em tetrahidrofurano, 0,6 ml, 0,600 mmol) e ácido acético (35 μΐ, 0,600 mmol) . Após agitar durante 24 h a 0 °C, a solução amarela foi tratada com n-fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em tetrahidrofurano, 0,6 ml, 0,600 mmol) e ácido acético (35 μΐ, 0,600 mmol). Após repousar a 4 °C durante 7 dias a reação foi extinta com uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto 89d (21,7 mg, 260 ) como um diastereoisómero individual juntamente com composto 89 (54,7 mg, 790 ) como um sólido branco que foi enêo purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa eluído com um gradiente de acetonitrilo/água 5:95 to 1:0 para proporcionar composto 89 (13,6 mg, 190 ) como ta sólido branco e como um diastereoisómero individual. "H RMN (300 MHz, CDjOD) δ 1,02 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,04 (d, J = 6,7
Hz, 3H) , 1,24 (s, 3H) , 1,32 (d, J = 6,3 Hz, 3H) , 1,62-1,75 (m, 8H) , 1,86-2,04 (m, 3H), 2,68-2,81 (m, 1 H) , 3,77-3,88 (m, 1 H) , 3,98 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 4,36-4,47 (m, 2H) , 5,79 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,92 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,28 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,58 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,60 (s, 1 H) , 7,78-7,86 (m, 2H) , 8,20 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 580,2 [M0 H] , Tr = 2,10 min.
Uma solução de composto 89d recumerado da etapa anterior (21,7 mg, 0,031 mmol) em acetonitrilo/tetrahidrofurano (5 ml, 9:1) foi tratado com ácido fluorídrico (48 0 em peso em água, 120 ml, 3127 mmol) . Após agitar a temperatura ambiente durante 6 h, a
mistura foi lentamente vertida sobre uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar composto 90 (5,6 mg, 31ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 6H) , 1,23 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1,48 (s, 3H), 1,63-1,76 (m, 8H), 1,87-2,05 (m, 3H) , 2,67-2,79 (m, 1H) , 3,77-3,87 (m, 1H) , 4,19-4,31 (m, 2H), 4,40 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,71 (q, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,91 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,37 (s, 2H) , 7,41 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 7,66 (S, 1 H) , 7,76-7,85 (m, 2H) , 8,22 (d, J = 8.7 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 580,3 [ΜμΗ], Tr = 2,03 min.
Exemplo 91: Composto 91
Composto 91 a: éster metilico do ácido (2S,3R)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-hidroxi-butírico
Ácido (2S,3R)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-hidroxi-butírico (2 g, 9,12 mmol) foi dissolvido em N, N-dimetilformamida (15 ml), sob uma atmosfera de azoto. Carbonato de potássio (2,02 g, 14,6 mmol) foi adicionado e a reação foi arrefecida utilizando um banho de gelo. Iodometano (679 ilL, 10,9 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada durante 2 h, e deixada a aquecer lentamente até temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com água e extraída com dietil éter. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada para proporcionar o composto do título (1,85 g, 87ã) como um óleo incolor. iH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,26 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,47 (s, 9H), 2,24-2,45 (m, 1 H), 3,78 (s, 3H), 4,15-4,37 (m, 2H), 5,21-5,45 (m, 1 H). LCMS (m/z) 234,0 [ΜμΗ], Tr = 1,57 min.
Composto 91b: éster metilico do ácido (2S,3R)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butírico
Éster metilico do ácido (2S,3R)-2-terc-
Butoxicarbonilamino-3-hidroxi-butírico (1,85 g, 7,93 mmol) foi dissolvido em N, N-dimetilformamida (10 ml), sob uma atmosfera de azoto. terc-Butil(cloro)difenilsilano (2,89 ml, 11,1 mmol) foi adicionado seguido de imidazol (1,08 g, 15,9 mmol) e a reação foi deixada a agitar durante 72 h. A mistura de reação foi diluída com água e então extraída com acetato de etilo. Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso- hexanos/acetato de etilo desde 1:0 até 4:1 para proporcionar o composto do título (3,56 g, 95% ) com um óleo verde pálido. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,04 (s, 9H) , 1,10 (s, 9H) , 3,64 (s, 3H) , 4,18-4,26 (m, 1 H) , 4,39-4,50 (m, 1 H) , 5,34 (d, J = 9,9 Hz, 1 H), 7,36-7,50 (m, 6H), 7,60-7,69 (m, 2H), 7,71-7,77 (m, 2H). LCMS (m/z) 472,2 [ΜμΗ], Tr = 4,13 min.
Composto 91c: ácido (2S,3R)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butírico
Éster metílico do ácido (2S,3R)-2-terc-
Butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butírico (3,56 g, 7,55 mmol) foi absorvido numa mistura de tetrahidrofurano (10 ml) e água (3 ml) e arrefecida utilizando um banho de gelo. Hidróxido de lítio monohidrato (1,27 g, 30,2 mmol) foi então adicionado e a reação foi deixada a agitar durante a noite. A solução foi acidificada utilizando ácido clorídrico (2 M) até a solução ser de pH 2. A solução foi então extraída com acetato de etilo. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados para proporcionar o composto do título (3,41 g, 98%) como um óleo amarelo. LH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,02-1,11 (m, 21 H) , 4,26-4,35 (m, 1 H) , 4,41-4,51 (m, 1 H), 5,34 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,35-7,49 (m, 6H), 7,63-7,77 (m, 4H). LCMS (m/z) 458,1 [ΜμΗ], Tr = 3,68 min.
Composto 91 d: éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(2S,3R)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butiril]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Sal do bis ácido trifluoroacético do éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-Hexahidro-piridaz ina-3 - carboxílico (4,1 g, 8,33 mmol) e ácido (2S,3R)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butírico (3,4 g, 7,45 mmol) foram dissolvidos em acetonitrilo anidro (25 ml) , sob uma atmosfera de azoto e arrefecida utilizando um banho de gelo. hexafluorofosfato metanamínio de 2- (ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (3,95 g, 10,4 mmol) e N, N-diisopropiletilamina (5,2 ml, 29,8 mmol) foram então adicionados e a reação foi deixada a aquecer lentamente até temperatura ambiente e deixada a agitar durante 2 h. 0 solvente foi removido e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e lavada com água. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo desde 1:0 até 1:1 para proporcionar o composto do título (1,95 g, 38%) como um sólido branco. :LH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,07 (s, 9H) , 1,14 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,43-1,51 (m, 10H), 1,73-2,01 (m, 3H) , 2,68-2,84 (m, 1 H) , 3,45 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 4,02-4,09 (m, 1 H) , 4,19-4,31 (m, 1 H) , 4,67 (d, J = 11,4 Hz, 1 H) , 4,83-4,92 (m, 2H), 5,56 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,34-7,47 (m, 6H), 7,58-7,65 (m, 2H), 7,66-7,74 (m, 2H). LCMS (m/z) 702,2 [ΜμΗ], Tr = 4,36 min.
Composto 91e: éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(2S,3R)-2 -((S)-2 -terc-Butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3 -(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butiril]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(2S,3R)-2 -terc-Butoxicarbonilamino-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butiril]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (1,95 g, 2,79 mmol) foi dissolvido em diclorometano (10 ml) , sob uma atmosfera de azoto e arrefecida utilizando um banho de gelo antes de adicionar trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (379 μΐ, 4,19 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 1 h antes de adicionar N,N-diisopropiletilamina (1,95 ml, 11,2 mmol) e remover todos os voláteis. O resíduo foi redissolvido, juntamente com ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butírico (728 mg, 3,35 mmol) em acetonitrilo anidro (10 ml). A solução foi arrefecida utilizando um banho de gelo, antes de adicionar hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(1H-7 - azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urõnio (1,49 g,
3,91 mmol) e N, 27-diisopropi let i lamina (1,95 ml, 11,2 mmol). A mistura de reação foi deixada a aquecer lentamente até temperatura ambiente e deixada a agitar durante a noite. O solvente foi evaporado e o resíduo restante foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (1,02 g, 46% ) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,03 (d, J = 6,9 Hz, 6H) , 1,12 (d, J = 6,3 Hz, 3H) , 1,49 (s, 9H) , 1,21-1,25 (m, 1 H), 1,74-1,94 (m, 2H), 2,12-2,24 (m, 1 H), 2,66-2,86 (m, 2H) , 3,48 (d, J = 11,1 Hz, 1 H) , 4,06-4,29 (m, 4H), 4,76 (ABq, Δδ= 0,24, JM = 11,8 Hz, 2H), 5,16 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 5,25 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,72 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,34-7,47 (m, 6H), 7,57-7,65 (m, 2H), 7,66-7,74 (m, 2H). LCMS (m/z) 801,2 [ΜμΗ], Tr = 4,31 min.
Composto 91f: éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-1-[ (2S,3R)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butiril]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(2S,3R)- 2-((S)-2 -terc-Butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butiril]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (1,02 g, 1,27 mmol) foi dissolvido em diclorometano (10 ml) , sob uma atmosfera de azoto e arrefecido utilizando um banho de gelo antes de adicionar trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (173 μΐ, 1,91 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 1 h antes de adicionar N,N-diisopropiletilamina (885 μΐ, 5,08 mmol) e remover todos os voláteis. O resíduo foi redissolvido, juntamente com ácido (E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (498 mg, 1,52 mmol) em acetonitrilo anidro (10 ml) . A solução foi arrefecida utilizando um banho de gelo, antes de adicionar hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametil urónio (677 mg, 1,78 mmol) e N,.Ν'-diisopropiletilamina (885 μΐ, 5,08 mmol). A mistura de reação foi deixada a aquecer lentamente até temperatura ambiente e deixada a agitar durante a noite. 0 solvente foi evaporado e o resíduo restante foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (671 mg, 53%) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,00-1,05 (m, 6H), 1,07 (s, 9H), 1,10 (d, J= 6,0 Hz, 3H), 1,15-1,20 (m, 1 H), 1,51 (S, 6H), 1,61 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,74-1,93 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,64-2,81 (m, 2H) , 3,45 (d, J = 11,2 Hz, 1 H) , 4,02-4,10 (m, 1 H) , 4,48 (dd, J = 8,0, 5,6 Hz, 1 H) , 4,74 (ABq, Δδ = 0,23, JAE = 11,8 Hz, 2H) , 5,12 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,54 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 6,59-6,82 (m, 3H) , 7,35-7,50 (m, 7H) , 7,58-7,66 (m, 3H), 7,67-7,77 (m, 3H), 8,04 (s, 1 H) , 8,11 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 1010,5 [ΜμΗ] , Tr = 3,80 min.
Composto 91g: ácido (S)-1-[(2S,3R)-3-(terc-Butil-difenil-silaniloxi)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-butiril]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(2S,3R)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il] - 2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-butiril]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (444 mg, 0,440 mmol) foi absorvido numa mistura de tetrahidrofurano (10 ml) e água (3 ml) e arrefecida utilizando um banho de gelo. Hidróxido de lítio monohidrato (14 8 mg, 3,52 mmol) foi então adicionado e a reação foi deixada a aquecer lentamente até temperatura ambiente e deixada a agitar durante oitenta minutos. A solução foi então neutralizada com ácido clorídrico (2 M) e concentrado até que todos os voléteis tinham sido removidos para proporcionar o composto do título (368 mg, 100%) como um sólido amarelo. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,83 (d, J = 6,5
Hz, 3H) , 0,87-93 (m, 7H), 0,96 (s, 9H), 1,16-1,61 (m, 13H), 1,63-1,81 (m, 2H) , 2,10-2,23 (m, 2H), 2,26-2,33 (m, 1 H) , 2,64-2,76 (m, 1 Η), 3,98-4,21 (m, 3H) , 4,86 (d, J = 11,8
Hz, 1 H) , 5,08 (d, J = 9,6 Hz, 1H) , 6,81 (ABq, Δδ = 0,17, JAB = 16,2 Hz, 2H) , 7,13-7,19 (m, 1H) , 7,22-7,29 (m, 1 H) , 7,32-7,47 (m, 6H) , 7,52-7,63 (m, 4H) , 7,72-8,12 (m, 3H) . LCMS (m/z) 836,6 [ΜμΗ], Tr = 3,03 min.
Composto 91 h
Ácido (S)-1-[(2S,3R)-3-(terc-Butil-difenil- silaniloxi)-2-((S)-2-{(E)-4-[2- ((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-butiril]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (368 mg, 0,440 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (150 ml) . N, N-dimetilaminopiridina (5 mg, 0,044 mmol), N,N-diisopropiletilamina (383 μΐ, 2,2 mmol) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (201 mg, 0,528 mmol) foram então adicionados e a reação foi colocada sob uma atmosfera de azoto. A reação foi deixada a agitar durante a noite. Todos os voláteis foram removidos e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e lavado com ácido clorídrico (1 M) . Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 4:1 a 3:2 proporcionou o composto do título (175 mg, 49%) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ 0,94-1,06 (m, 6H) , 1,09 (s, 9H) , 1,15 (s, 9H) , 1,55 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,67-1,79 (m, 2H), 1,92-2,00 (m, 6H) , 2,49-2,61 (m, 1 H) , 2,73-2,86 (m, 1 H) , 3,44 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 3,61 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,14-4,24 (m, 1H), 4,29-4,39 (m, 1H), 4,43-4,52 (m, 1H), 5,62 (dd, J= 8,5, 2,2 Hz, 1H) , 5,82 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 6,29-6,52 (m, 3H) , 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,38-7,54 (m, 6H) , 7,61 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1 H) , 7,71-7,84 (m, 4H), 8,17 (d, J = 8,7 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 818,5 [ΜμΗ], Tr = 4,30 min.
Composto 91h foi dissolvido em tetrahidrofurano (1,07 ml) e arrefecida utilizando um gelo sob uma atmosfera de azoto. 2vT-Fluoreto de tetrabutilamónio (1,07 ml, 0,903 mmol) foi adicionado e a reação foi deixada a agitar durante 2,5 h. A reação foi então extinta com solução saturada de cloreto de amónio e extraída com diclorometano. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:1 a 0:1. 0 material isolado ainda continha tetrabutilamónio sais assim o resíduo foi dissolvido em diclorometano, lavado com solução saturada de cloreto de amónio, seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e concentrado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando 1:1 iso-hexanos/acetato de etilo para proporcionar o composto do título (17 mg, 14%) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,78-1,02 (m, 10H) , 1,23 (S, 6H) , 1,35-1,42 (m, 3H) , 1,69-1,74 (m, 1H) , 1,89-2,12 (m, 3H) , 2,53-2,78 (m, 1H) , 3,63-3, 98 (m, 3H) , 4,16 (m, 2H), 4,51-4,68 (m, 1H), 5,79-6,12 (m, 2H), 6,17- 6,66 (m, 4H), 7,38-7,48 (m, 1 H), 7,53-7,65 (m, 1 H), 7,68- 7,80 (m, 1 H) , 7,88 (s, 1 H) , 8,00-8,17 (m, 1 H) . LCMS (m/z) 580,2 [ΜμΗ], Tr = 2,25 min.
Exemplo 92: Composto 92
Composto 92a. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-3 -terc-Butoxicarbonil-2-(9H-fluoren-9 -ilmetoxi carbonilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A éster 3- (2,2,2-tricloro-etílico) do éster 1,2-di-terc-butílico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxílico (2,0 g, 4,3 mmol) em diclorometano anidro (13 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (13 ml, 173 mmol) . A solução foi aquecida até temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo co-evaporado de tolueno (3 x) . 0 óleo viscoso castanho resultante foi dissolvido em acetonitrilo anidro (5 ml) e adicionado a uma solução de éster 4- terc-butílico do ácido Fmoc-L-aspártico (1,78 g, 4,3 mmol), Ν,Ν-diisopropiletilamina (3,0 ml, 17,3 mmol) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,60 g, 4,3 mmol) em acetonitrilo anidro (25 ml) que tinha sido previamente agitado a 0 °C durante 20 minutos. A reação foi aquecida até temperatura ambiente e agitada durante 16 h antes de ser concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para dar o composto do título (2,5 g, 88%) como um óleo viscoso transparente. RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,46 (s, 9H) , 1,69-1,83 (m, 2H) , 1,87-2,00 (m, 1 H), 2,15-2,27 (m, 1 H), 2,79-2,67 (m, 2H), 2,90-3,02 (m, 1 H), 3,81-3,93 (m, 2H), 4,21-4,29 (m, 1 H), 4,32-4,44 3H) , 4,71 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,96 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 5,31-5,43 (m, 1 H) , 5,85 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,33 (app t, J = 7,4 Hz, 2H) , 7,41 (app t, J = 7,4 Hz, 2H) , 7,59-7,66 (m, 2H) , 7,78 (d, J = 7,6 Hz, 2H) . LCMS (m/z) = 654,2 [ΜμΗ], Tr = 3,63 min.
Composto 92b. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-{(S)-3 -terc-Butoxicarboni1-2 -[(S)-2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-3-meti1-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-3-terc-butoxicarbonil-2 -(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (2,5 g, 3,8 mmol) em acetonitrilo anidro (40 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado dietilamina (7,7 ml, 76,6 mmol) . A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 45 minutos antes de concentrar a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (40 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (2,0 ml, 3,8 mmol), Fmoc-L-valina (1,3 g, 3,8 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-l,1,3,3-tetrametil urónio (2,0 g, 5,4 mmol). Após 16 h a temperatura ambiente a reação foi concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 3:1 então 1:1 para dar o composto do título (2,0 g, 70%) como uma espuma branca. ΧΗ RMN (300 MHz, CDCl?,) 5 0,85-1,05 (m, 6H) , 1,43 (s, 9H), 1,67-1,82 (m, 2H), 1,84-1,99 (m, 1 H), 2,09- 2,29 (m, 2H), 2,65-2,81 (m, 2H), 2,83-3,03 (m, 1 H), 3,79- 3,93 (m, 2H) , 4,04-4,13 (m, 1 H) , 4,25 (t, J = 6,9 Hz, 1 H), 4,29-4,54 (m, 3H), 4,71 (d, J - 12,0 Hz, 1 H), 4,98 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 5,40-5,52 (m, 1 H), 6,87 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 7,34 (app t, J = 7,4 Hz, 2H) , 7,42 (app t, J = 7,4 Hz, 2H) , 7,56-7,67 (m, 2H) , 7,78 (app t, J = 7,4 Hz, 2H) . LCMS (m./z) = 753,3 [ΜμΗ] , Tr = 3,63 min.
Composto 92c. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2 - ( (S)-2-{ (E)-4 - [2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-terc-butoxicarbonil-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico
A éster 2,2,2-trieloro-etílico do ácido (S)-1-{(S)-3-terc-butoxicarbonil-2-[(S)-2 -(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (1,5 g, 1,99 mmol) em acetonitrilo anidro (30 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado dietilamina (4,1 ml, 39,9 mmol). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 45 minutos antes de concentrado a vácuo. Este resíduo foi dissolvido em diclorometano anidro (21 ml) e a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido (E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (434 mg, 1,33 mmol), N,N-diisopropiletilamina (2,8 ml, 16,0 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametil urónio (759 mg, 1,99 mmol) . A solução foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h, extinta com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 1:1, 1:2 então 0:1 para dar o composto do título (550 mg, 330 ) como um óleo viscoso. 1H RMN (300 MHz, CDC13) 5h 0,90 (d, J = 6, 9 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,42 (s, 9H), 1,48 (s, 3H), 1,61 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,69-1,79 (m, 2H), 1,83-1,97 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,10- 2,25 (m, 2H), 2,68-2,76 (m, 2H), 2,83-2,97 (m, 1 H), 3,77- 3,94 (m, 2H) , 4,27-4,41 (m, 2H) , 4,69 (d, J = 11,8 Hz, 1 H) , 4,95 (d, J = 11,8 Hz, 1 H) , 5,36-5,46 (m, 1 H) , 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,37 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,64, 6,78 (ABq, J = 16,3 Hz, 2H) , 6,78-6,88 (m, 1 H) , 7,44 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7,67 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H), 7,76 (d, J = 8.5 Hz, 1 H) , 8,05 (s, 1 H) , 8,12 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) = 840,4 [ΜμΗ], Tr = 3,40 min.
Composto 92
A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metilbutirilamino)-3 -terc-butoxicarbonil-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (500 mg, 0,59 mmol) em tetrahidrofurano (23 ml) e água (5 ml) foi adicionado hidróxido de lítio monohidrato (125 mg, 2,97 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada a 0 °C durante 3 h e extinta acidificando a pH 6 com ácido clorídrico (2 M). A reação foi concentrada a vácuo, seguido de co-evaporação de tolueno (3 x) e então acetonitrilo (3 x) e seco num alto vácuo durante 16 h. 0 resíduo resultante foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (200 ml) e a temperatura ambiente foi adicionado N, N- diisopropiletilamina (523 μΐ, 2,95 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (337 mg, 0,89 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (7 mg, 0,06 mmol). A reação foi agitada durante 16 h. Um further quantidade de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (300 mg, 0,79 mmol) foi adicionado e a reação aquecida até 40 °C durante 6 h. A reação foi arrefecida e concentrado a vácuo. 0 resíduo resultante foi diluído com acetato de etilo e lavado com água. A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 0:1 para proporcionar o composto do título como um óleo. Isto foi ainda purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 0:1 para proporcionar o composto do título como um sólido branco (120 mg, 310 , 2 steps). Uma amostra analítica foi ainda purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa. 1H RMN (300 MHz, CD3CN) δ 0,94-0,87 (m, 6H) , 1,31 (s, 3H) , 1,45 (s, 3H) , 1,47 (s, 9H), 1,58-1,65 (m, 1 H), 1,67 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,80-2,01 (m, 4H) , 2,63-2,75 (m, 1H) , 2,78 (dd, J = 15,4, 5,9 Hz, 1H),2,91 (dd, J = 15,4, 7,8 Hz, 1 H), 3,74-3,87 (m, 1 H) , 3, 96 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 4,21 (t, J = 9,4 Hz, 1 H) , 4,30-4,40 (m, 1 H) , 5,82-5,93 (m, 3H) , 6,36 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,11 (d, J= 7,8 Hz, 1 H), 7,37 (d, J= 8,5 Hz, 1 H), 7,68 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,84 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,97 (s, 1 H) , 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) = 650,3 [ΜμΗ], Tr = 2,88 min.
Exemplo 93: Composto 93
Ao composto 92 (70 mg, 0,11 mmol) em diclorometano anidro (0,5 ml), a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado ácido trifluoroacético (150 μΐ). A reação foi agitada durante 2 h e uma quantidade adicional de ácido trifluoroacético (300 μΐ) foi adicionado. Após mais 2 h de agitação a reação foi concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo/metanol 4:1 para proporcionar o composto do título (40 mg, 610 ) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,89-1,01 (m, 6H) , 1,37 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 1,63-1,79 (m, 2H), 1,72 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 1,84-2,04 (m, 3H), 2,67-2,77 (m, 1 H), 2,88- 3,01 (m, 2H), 3,91-4,01 (m, 1 H), 4,16-4,28 (m, 1H) ,4,42(d, J = 12,9 Hz, 1 H), 5,84-6,00 (m, 2H), 6,47, 6,51 (ABq, J = 16.7 Hz, 2H) , 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,74 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 7,81 (d, d = 8,5 Hz, 1 H) , 7,85-7,93 (m, 1 H) , 8,20 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) = 594,2 [ΜμΗ] , Tr = 2,06 min.
Exemplo 94: Composto 94
Composto 94a. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-(9H-Fluoren-9 -ilmetoxicarbonilamino)-3-(1-tritil-lH-imidazol-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico
A éster 3 -(2,2,2-tricloro-etílico) de éster 1,2-di-terc-butilico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxilico (2,5 g, 5,41 mmol) em diclorometano anidro (16 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trif luoroacético (16 ml, 217 mmol). A solução foi aquecida até temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo co-evaporada de tolueno (3 x) . 0 óleo viscoso castanho resultante foi dissolvido em acetonitrilo anidro (5 ml) e adicionado a uma solução de NQ-Fmoc-W(im) -tritil-L-histidina (3,4 g, 5,4 mmol), N,N- diisopropiletilamina (3,8 ml, 21,6 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (2,1 g, 5,4 mmol) em acetonitrilo anidro (25 ml) que tinha sido previamente agitado a 0 °C durante 20 minutos. A reação foi aquecida até temperatura ambiente e agitada durante 72 h antes de ser concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando acetato de etilo para dar o composto do título (4,0 g, 86ã) como uma espuma branca. 1H RMN (300 MHz, CDC13) 5 1,52-1,91 (m, 4H) , 2,03-2,18 (m, 1 H), 2,93-3,19 (m, 3H), 3,77-3,91 (m, 1 H), 3,99 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 4,21-4,37 (m, 3H), 4,63 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 4,94 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 5,35-5,48 (m, 1 H) , 6,04-6,17 (m, 1 H) , 6,63 (s, 1 H), 7,04-7,47 (m, 20H), 7,52-7,63 (2H), 7,72-7,81 (m, 2H). LCMS (m/z) = 862,3 [ΜμΗ], Tr = 2,97 min.
Composto 94b. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 -[(S)-2-(9H-Fluoren-9 -ilmetoxicarbonilamino)-3-metil-butirilamino]-3 -(l-tritil-lH-imidazol-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2- (9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-3-(1-tritil-lH-imidazol-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (4,0 g, 4,64 mmol) em acetonitrilo anidro (50 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado dietilamina (9,4 ml, 92,8 mmol). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 45 minutos antes de concentrar a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (50 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (2,4 ml, 13,9 mmol), Fmoc-L-valina (1,6 g, 4,64 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (2,5 g, 6,5 mmol). Após 16 h a temperatura ambiente a reação foi concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 0:1 para dar o composto do título (2,5 g, 56ã) como um óleo viscoso. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,88 (d, J - 6,5 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,5
Hz, 3H) , 1,51-1,91 (m, 4H) , 2,07-2,28 (m, 2H) , 2,87-3,09 (m, 3H), 3,77-3,99 (m, 2H), 4,01-4,05 (m, 1 H), 4,18-4,52 (m, 4H), 4,65 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 4,95 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 5,44-5,53 (m, 1 H), 5,58 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,56 (S, 1 H) , 7,03-7,45 (m, 20H) , 7,54-7,65 (m, 2H) , 7,73-7,81 (m, 2H). LCMS (m/z) - 961,5 [ΜμΗ], Tr = 3,02 min.
Composto 94c. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-(l-tritil-lH-imidazol-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3 -carboxílico
A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-[(S)-2- (9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-3-metil-butirilamino]-3-(1-tritil-1H-imidazol-4 -il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (2,5 g, 2,60 mmol) em acetonitrilo anidro (40 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado dietilamina (5,4 ml, 52,0 mmol) . A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 1 h antes de ser concentrada a vácuo. Este resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (28 ml) e a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido (E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-i13-2,2-dimetil-but-3-enoico (567 mg, 1,73 mmol), N,N-diisopropiletilamina (3,7 ml, 20,8 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametil urónio (989 mg, 2,60 mmol). A solução foi agitada a temperatura ambiente durante 16 h e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 0:1 para dar o composto do título (1,5 g, 550 , 2 steps) como um óleo castaho. LCMS (m/z) = 1050,4 [ΜμΗ], Tr = 2,86 min.
A éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metilbutirilamino)-3-(1-tritil-lH-imidazol-4-il)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxilico (1,5 g, 1,43 mmol) em tetrahidrofurano (55 ml) e água (12 ml) foi adicionado hidróxido de lítio monohidrato (300 mg, 7,15 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada a 0 °C durante 3 h e extinta por acidificação a pH 6 com ácido clorídrico (2 Μ) . A reação foi concentrada a vácuo, seguida de co-evaporação de tolueno (3 x) então acetonitrilo (3 x) e seca num alto vácuo durante 16 h. 0 resíduo resultante foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (477 ml) e a temperatura ambiente foi adicionado N, ΛΓ-diisopropiletilamina (1,3 ml, 7,15 mmol) , hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (816 mg, 2,15 mmol) e 4 -dimetilaminopiridina (17 mg, 0,14 mmol) . A reação foi agitada durante 16 h, diluída com acetato de etilo e lavada com água. A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. para render o composto bruto do título como um óleo amarelo (600 mg, 49ã, 2 steps) . Uma amostra analítica foi obtida por meio de HPLC preparativa de fase reversa. XH RMN (300 MHz, CD3CN) δ O, 82-0,97 (m, 6H) , 1,30 (s, 3H) , 1,45 (s, 3H) , 1,48-1,57 (m, 1 H), 1,59 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,63-2,04 (m, 5H), 2,67 (td, J = 12,7, 2,7 Hz, 1H) , 3,02-3,21 (m, 2H) , 3,68-3,81 (m, 1H) , 3,92 (d, J = 11,8 Hz, 1 H) , 4,11-4,20 (m, 1 H) , 4,26-4,39 (m, 1 H) , 5,74-5,85 (m, 1 H) , 5,90 (q, J = 6,7 Hz, 1H) , 6,19 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 6,30-6,40 (m, 1H) , 6,44 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 6,90 (S, 1H) , 6,97-7,12 (m, 6H) , 7,15-7,32 (m, 8H), 7,34-7,43 (m, 2H), 7,60 (s,1H), 7,71 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,85-8,01 (m, 1 H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H)- LCMS (m/z) = 858,5 [ΜμΗ], Tr = 2,44 min.
Exemplo 95: Composto 95
Ao composto 94 (400 mg, 0,47 mmol) em diclorometano anidro (5 ml) , a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado ácido trifluoroacético (500 μΐ). A reação foi agitada durante lhe concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar o composto do título (12 mg, 4%) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) <5 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,33 (s, 3H), 1,50 (s, 1,53-1,73 (m, 2H) , 1,79 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,82-2,01
(m, 3H), 2,62-2,75 (m, 1 H), 3,07-3,30 (m, 3H), 4,27 (t, J = 9,4 Hz, 1 H), 4,32-4,44 (m, 1 H), 5,99 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,11-6,20 (m, 1 H) , 6,26, 6,31 (ABq, J = 16,5 Hz, 2H) , 7,12 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,31 (s, 1 H), 7,49 (d, J = 8,5
Hz, 1H), 7,59 (s, 1 H), 7,67 (d, J= 8,5 Hz, 1 H), 7,86 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,15 (s, 1 H), 8,29 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) = 616,3 [MH H], Tr = 1,55 min.
Exemplo 96: Composto 96
Composto 96a. N- (5-Bromo-2-formil-fenil)-2-(terc-butil-dimeti1-silaniloxi)-propionamida
Uma solução de ácido 2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-propiónico (3,11 g, 15,2 mmol) em diclorometano anidro (40 ml) foi preparada e cloreto de oxalilo (2,0 ml, 22,8 mmol) foi adicionado seguido de N,JV-dimetilformamida (5 μΐ) . A mistura de reação foi agitada durante 2 h a temperatura ambiente e então evaporada para dar um óleo incolor. 0 óleo foi dissolvido em diclorometano anidro (40 ml) e cloreto de oxalilo (1,0 ml, 11,4 mmol) e N, N- dimeti1formamida (5 μΐ) foram adicionados. Após agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, mais cloreto de oxalilo (0,25 ml, 2,8 mmol) foi adicionado. Após agitar durante 30 minutos a mistura de reação foi evaporada até a secura. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano anidro (40 ml) e adicionado a uma solução agitada de 2-amino-4-bromobenzaldeído (2,54 g, 12,7 mmol) e trietilamina (2,12 ml, 15,2 mmol) em diclorometano (60 ml), arrefecida num um banho de gelo. A mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e foi agitada durante 15 h. A solução resultante foi lavada com solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (100 ml). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (80 ml). As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura (120 ml) então secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e evaporadas para dar um óleo amarelo. 0 óleo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 9:1 para render o composto do título (3,64 g, 83ã) como um sólido branco pérola. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,20 (s, 6H), 0,99 (s, 9H), 1,49 (d, J= 6,7 Hz, 3H) , 4,39 (q, J = 6,7 1 H) , 7,40 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 7,54 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 9,10 (s, 1 H) , 9,91 (s, 1 H), 11,82-11,98 (s 1, 1 H). LCMS (m/z) 386,0, 388,0 [ΜμΗ],
Tr = 4,01 min.
Composto 96b. 7-Bromo-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolina
Uma soluça o de amónia em etanol (2 M, 14 ml, 28 mmó) foi adicionado a N- (5-bromo-2-formil-fenil)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi )-propionamida (0,5 g, 1,36 mmol). A mistura foi aquecida num reator de micro-ondas a 150 °C durante 2 h. Um segunda soluçã o de amónia em etanol (2 M, 14 ml, 28 mmol) foi adicionado a N- (5-bromo-2-formil- fenil)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-propionamida (1,0 g, 2,72 mmol). A mistura foi aquecida num reator de micro-ondas a 150 °C durante 2 h. As duas soluções resultantes foram combinados e evaporadas e o resíduo purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/dic 1 or ome t ano 1:1 to 1:3 to 0:1 para render o composto do título (1,34 g, 94ã) como uma goma amarela. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,08 (s, 6H) , 0,91 (s, 9H) , 1,64 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 5,22 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 7,71-7,83 (m, 2H), 8,26 (s, 1 H), 9,40 (s, 1 H). LCMS (m/z) 367,0, 369,0 [ΜμΗ], Tr = 4,00 min.
Composto 96c. éster metilico do ácido (E) -4-{2-[1-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolin-7-il}-2,2 -dimetil-but-3-enoico
Uma solução de éster metilico do ácido 7-bromo-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolina (1,0 g, 2,72 mmol) e (E)-2,2-dimetil-4 -(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-but-3-enoico (650 puro, 108 g, 2,75 mmol) em ciclopentil metil éter (20 ml) e água (10 ml) foi preparado e fosfato de potássio tribásico (1,73 g, 8,16 mmol) e bis[(diciclohexil)(4-dimetilaminofenil)fosfina] paládio(II) cloreto (110 mg, 0,14 mmol) foram adicionados. A mistura agitada foi aquecida até 80 °C durante 4,5 h então arrefecida até temperatura ambiente e diluída com água (30 ml) . A mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 3 0mL) . Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporada para dar um vermelho goma. A goma foi purificada por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 9:1 para render o composto do título (1,07 g, 950 ) como uma goma amarela. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,07 (s, 6H) , 0, 90 (s, 9H), 1,48 (s, 6H), 1,64 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 3,75 (s, 3H), 5,21 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 6,64-6,80 (m, 2H), 7,72 (d, J = 8,5Hz, 1 H) , 7,86 (d, J = 8,5Hz, 1 H) , 7, 96 (s, 1 H) , 9,35 (s, 1 H). LCMS (m/z) 415,2 [ΜμΗ], Tr = 3,97 min.
Composto 96d. ácido (E)-4-{2-[1-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoico
Uma solução de éster metilico do ácido (E)-4-{2- [1- (terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoico (1,07 g, 2,58 mmol) em tetrahidrofurano (50 ml) foi arrefecida até 0 °C antes de adicionar uma solução aquosa de hidróxido de lítio (1 M, 8 ml, 8 mmol) . A mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e foi agitado durante 20 h. A mistura de reação foi diluída com água (50 ml) então lavada com dietil éter (60 ml) antes de acidificar to pH 2 com uma solução saturada de bissulfato de potássio. A mistura resultante foi extraída com dietil éter (3 x 30 ml) . 0 extrato foi seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e evaporada para render o produto do título (0,605 g, 59%) como uma goma amarela. "H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,06 (s, 3H), 0,08 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 1,53 (s, 6H), 1,64 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 5,22 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 6,64-6,81 (m, 2H), 7,73, 7,87 (ABq, J = 8,5 Hz, 2H), 7,99 (s, 1 H) , 9,40 (s, 1 H). LCMS (m/z) 401,2 [ΜμΗ], Tr = 3,43 min.
Composto 96e . éster 2,2,2 -tricloro-etílico do ácido (S)-1-{(S)-2 -[(S)-2-((E)-4 -{2 -[1-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidropiridazina-3-carboxílico
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxílico (645 mg, 1,49 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) foi arrefecida até 0 °C sob uma atmosfera de azoto antes de adicionar tri fluorometanos sulfonato de trimetilsililo (345 μΐ, 3,0 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 1 h, então N,Itf-diisopropiletilamina (1,03 ml, 5,97 mmol) foi adicionado, antes de evaporar até a secura para dar a amina bruta. Uma solução de ácido (E)-4-{2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoico (505 mg, 1,26 mmol) em acetonitrilo (40 ml) foi preparado e NfN-diisopropiletilamina (1,03 ml, 5,97 mmol) e hexafluoro fosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametilo urónio (718 mg, 1,89 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 5 minutos antes da adição de uma solução da amina bruta em acetonitrilo (20 ml). A mistura de reação foi agitada durante 2 h. A solução foi evaporada e o resíduo purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente desde íso-hexanos/acetona 4:1 to 3:2 para render composto do título impuro (1,406 g) como um sólido amarelo e como um 1:1 mistura de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 813,4, 815,3, 817,4 [ΜμΗ], Tr = 3,98 min.
Composto 96f. ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-(1-Hidroxi-etil)-quinazolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução de éster 2,2,2- tricloroetílico do ácido (S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((E)-4-{2 -[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinazolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoilamino)-3-metil-butirilamino]-propionil}-hexahidro-piridazina-3-carboxílico bruto (675 mg, 0,6 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml) foi preparado e uma solução de n-fluoreto de tetrabutilamónio em tetrahidrofurano (1 M, 5 ml, 5 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada a temperatura ambiente durante 3 h e então mais solução de fluoreto de tetrabutilamónio em tetrahidrofurano (1 M, 2 ml, 2 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h então evaporada para dar um óleo amarelo. Isto foi purificado por meio de sílica cromatografia utilizando um gradiente de diclorometano/metanol 1:0 to 19:1 to 4:1 para render o composto do título (76 mg, 22E3 ) como uma goma amarèa e como um 1:1 mistura de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 569,2 [ΜμΗ], Tr = 1,80 min.
Uma solução de (ácido S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-(1-hidroxi-etil)-quinazolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (37 mg, 0,065 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) foi arrefecida até 0 °C antes de adicionar N, 27-diisopropile ti lamina (35 μΐ, 0,195 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urõnio (55 mg, 0,145 mmol). A reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e foi agitado durante 16 h. A mistura de reação foi evaporada até a secura e purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa utilizando uma coluna C18 e um gradiente de água /acetonitrilo 4:1 a 0:1 ao longo de 27 minutos para render o produto do título (3,8 mg, 11 0 ) como um sólido banco. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,96 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,37 (s, 3H)), 1,52 (s, 3H), 1,62 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,65-1,76 (m, 2H) , 1,79 (d, J = 6, 9 Hz, 3H), 1,84-2,07 (m, 2H), 2,67-2,88 (m, 1 H), 3,77-3,89 (m, 1 Η), 4,32 (d, J = 10,5 Hz, 1 Η), 4,40 (d, J = 11,8 Hz, 1 Η), 4,49 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,80 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 5,89 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,30 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 16,5 Hz, 1H) , 7,56 (s, 1H) , 7,91 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 8.00 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 9,39 (s, 1 H). LCMS (m/z) 551,2 [ΜμΗ], Tr = 2,16 min.
Exemplo 97: Composto 97
Ao composto 93 (5 mg, 0,008 mmol) em tetrahidrofurano anidro (100 μΐ) , a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado N,.W-diisopropi let i lamina (7,5 μΐ, 0,04 mmol) , hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (4,8 mg, 0,013 mmol) e agitado durante 2 minutos. Sal cloridrato de dimetilamina (1 mg, 0,013 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h. A mistura de reação foi colocada diretamente em gel de sílica e purificada utilizando acetato de etilo/metanol 4:1 para proporcionar o composto do título (2,5 mg, 50%) como um sólido branco. ΧΗ RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,36 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,73 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,82-2,01 (m, 3H) , 2,67-2,82 (m, 3H) , 2,83 (s, 3H) , 2,96 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 3,00 (s, 3H) , 3,08 (d, J = 7.1 Hz, 1 H) , 3,80-3,87 (m, 1 H) , 4,27 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,39-4,48 (m, 1 H), 5,88 (q, J = 6,7 HZ, 1 H), 6,13 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,49, 6,52 (ABq, J = 16,5 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,71 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,94 (s, 1 H) , 8,20 (d, J = 8,5 Hz, 1H). LCMS (m/z) = 621,3 [ME H], Tr = 1,92 min.
Exemplo 98: Composto 98
Ao composto 93 (9 mg, 0,015 mmol) em tetrahidrofurano anidro (200 μΐ) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado N, 27-diisopropiletilamina (14 μΐ, 0,08 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (9,0 mg, 0,02 mmol) e agitado durante 2 minutos. Piperidina (2 μΐ, 0,02 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada a temperatura ambiente durante 1,5 h. A mistura de reação foi colocada diretamente em gel de sílica e purificada utilizando acetato de etilo/metanol 10:1 para proporcionar o composto do título (2,5 mg, 25ã) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,37 (s, 3H) , 1,51 (s, 3H) , 1,52-1,65 (m, 7H) , 1,66- 1,74 (m, 2H), 1,75 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,83-2,01 (m, 3H), 2,71-2,79 (m, 1 H) , 2,84-2,96 (m, 1 H), 3,10-3,21 (m, 1 H) , 3,46-3,59 1H), 3,67-3,88 (m, 3H), 4,20-4,31 (m, 1 H), 4,38- 4,50 (m, 1 H) , 5,90 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,07 (t, J = 6,5 Hz, 1 H), 6,49, 6,52 (ABq, J = 16,3 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7,72 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,82 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7,95 (s, 1H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H). LCMS (m/z) = 661,2 [ΜμΗ], Tr = 2,14 min.
Exemplo 99: Composto 99
Ao composto 93 (5 mg, 0,008 mmol) em tetrahidrofurano anidro (100 μΐ), a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto, foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (7,5 μΐ, 0,04 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (4,8 mg, 0,013 mmol) e pirrolidine (1 μΐ, 0,013 mmol). A reação foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h. A mistura de reação foi colocada diretamente em gel de sílica e purificada utilizando acetato de etilo/metanol 10:1 para proporcionar o composto do título (3,8 mg, 74ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,93 (d, J = 6,9
Hz, 3H) , 0,96 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,36 (s, 3H) , 1,50 (s, 3H), 1,72 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,72-2,02 (m, 9H), 2,70-2,80 (m, 1 H), 2,89-2,98 (m, 2H), 3,45-3,54 (m, 1H), 3,66-3,78 (m, 1H), 3,83-3,96 (m, 2H), 4,28 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 4,41- 4,50 (m, 1 H), 5,92 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,15 (t, J = 7,4
Hz, 1 H) , 6,47 (s, 2H) , 7,22-7,33 (m, 1 H) , 7,39 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 7,73 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,82 (d, J = 8.5 Hz, 1 H) , 7,84-7,88 (m, 1 H) , 8,20 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) = 647,4 [ΜμΗ], Tr = 2,09 min.
Exemplos 100 e 101: Compostos 100 e 101
Composto 100a. 2-(1-Hidroxi-l-metil-etil)-2-metil-but-3- enoico ácido
Uma solução arrefecida (-78 °C) de N,N- diisopropilamina (12,5 g, 123 mmol) em tetrahidrofurano anidro (100 ml) foi tratada com n-butillítio (solução a 2,5 M em hexanos, 49 ml, 123 mmol). Temperatura foi elevada até 0 °C durante 30 minutos, então re-arrefecida até -78 °C. Ácido tíglico (5,00 g, 49,4 mmol) em tetrahidrofurano anidro (100 ml) foi adicionado gota a gota. Temperatura foi elevada até to temperatura ambiente durante 1 h então re-arrefecida até -78 °C. Acetona (2,86 g, 49,4 mmol) em tetrahidrofurano anidro (100 ml) foi adicionado gota a gota. Após agitar durante 3 h, a reação foi extinta com uma solução saturada de cloreto de amónio e deixada a aquecer até temperatura ambiente. 0 pH foi ajustado to pH 2 pela adição de ácido clorídrico concentrado e dietil éter (400 ml) foi adicionado. A camada orgânica foi separada, e os voláteis removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre dietil éter (200 ml) e uma solução saturada de bicarbonato de sódio (300 ml) . A camada aquosa foi acidificada a pH 1 com ácido clorídrico concentrado, então re-extraída com dietil éter (2 x 100 ml) . Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 100 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetona de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (5,129 g, 66%) como um óleo incolor. ^ RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,27 (s, 3H) , 1,31 (S, 3H), 1,38 (s, 3H), 5,28 (d, J = 17,6 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 6,25 (dd, J = 17,6, 10,9 Hz, 1 H). Composto 100b. ácido 2-[1-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)- 1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoico
Uma solução arrefecida (0 °C) de ácido 2-(1-hidroxi-l-metil-etil)-2-metil-but-3-enoico (2,0 g, 12,6 mmol) e 2,6-lutidine (13,5 g, 126,4 mmol) em diclorometano (150 ml) foi tratado com terc-butildimetilclorosilano (16,7 g, 63,2 mmol). Após agitar durante 1 h, os voláteis foram removidos a vácuo, o resíduo foi absorvido em metanol (100 ml) e água (50 ml) e tratado com carbonato de potássio (20 g) . Após agitar durante 16 h, os voláteis foram removidos a vácuo, o resíduo foi diluído com água (50 ml) , acidificada a pH 2 com hidrogénio sulfato de potássio, e extraída com diclorometano (3 x 25 ml). Todos os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o composto do título (3,288 g, 95% ) cmo um óleo transparente. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,24 (s, 3H), 0,25 (s, 3H) , 0,94 (s, 9H) , 1,34 (s, 3H) , 1,37 (s, 3H) , 1,38 (s, 3H) , 5,29 (m, 2H) , 6,17 (dd, J = 17,6, 10,9 Hz, 1H), 10,99 (s 1, 1H).
Composto 100c. ácido (E) -4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il] -2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoico
Uma solução de ácido
2-Ll-(terc-butil-dimetil-silaniloxi) -1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoico (258 mg, 0,95 mmol), ácido acético (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-éster etílico (279 mg, 0,95 mmol), acetato de paládio(II) (43 mg, 0,19 mmol) , tris- (o-tolil) fosfina (87 mg, 0,29 mmol) em acetonitrilo anidro (3 ml) foi tratado com trietilamina (265 μΐ, 1,90 mmol). Após agitar a 100 °C sob micro-ondas durante 20 min, a reação foi arrefecida até temperatura ambiente e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre diclorometano e uma solução saturada de hidrogénio sulfato de potássio. Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Biotage eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos / acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título (300 mg, 65ã) como um óleo incolor. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,20 (s, 3H), 0,22 (s, 3H), 0,94 (s, 9H), 1,44 (s, 3H), 1,45 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,68 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 2,17 (s, 3H) , 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,76 (m, 2H) , 7,43 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,74 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 8,03 (s, 1 H) , 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 486,3 [ΜμΗ], Tr = 3,64 min.
Composto lOOd e lOOe. éster [1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin- 1-ílÍCO do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil) -quinolin-7-il] -2- [1- (tei-c-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido éster 2,2,2-tricloro-etílico e (E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoico
Composto 100d e lOOe foram preparados da mesma maneira que composto 82c utilizando ácido (E)-4-[2-((R)-1-acetoxietil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoico em vez de ácido (E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2- dimetil-but-3-enoico em 2113 de rendimento para lOOdLCMS (m/z) 898,5, 900,5, 902,5 [ΜμΗ] , Tr = 4,14 min e 540 de rendimento para lOOe. LCMS (m/z) 604,3 [ΜμΗ], Tr = 4,13 min.
Composto lOOf. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{ (E)-4-[2-((R)-1-Acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2 -[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-terc- butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-propionil] -hexahidro-piridazina-3-carboxílico (176,5 mg, 0,332 mmol) em diclorometano (10 ml) foi tratado com trimetilsilil-trifluorometanossulfonato (120 0 1, 0,664 mmol). Apé agitar a 0 °C durante 70 min, a reação foi extinta com uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os orgânicos combinados foram filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-l-[(S)-2-((S)-2-amino-3- metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico como um sólido branco. Ao sólido branco foi adicionado uma solução de éster [1,2,3]triazolo[4,5- b]piridin-l-ílico do ácido (E)-4- [2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoico (200,0 mg, 0,332 mmol) em acetonitrilo anidro (10 ml) e N,N-diisopropiletilamina (120 0 1, 0,664 mmol) . Após agitar a temperatura ambientedurante 19 h, a reação foi extinta a 0 °C com ácido clorídrico (1 M, 30 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo bruto foi combinado com éster 2,2,2-tricloro-etílico dp ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimet i1-s ilaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico obtido na etapa anterior e purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um cartucho de 50 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:3 para proporcionar o composto do título (305,0 mg, 55ã, ao longo de 3 etapas) como um sólido branco e como uma mistura 1:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 898,5/900,5 [ΜμΗ], Tr = 4,16 min.
Composto lOOg e Composto 100
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 2,2,2- tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{ISSO-4-[2-(ISSO-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2-[1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-1-metil-etil]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (305,0 mg, 0,339 mmol) em tetrahidrofurano/água (25 ml, 4:1) foi tratado com hidróxido de lítio monohidrato (72 mg, 1,695 mmol). Após agitar a 0 °C durante 2 h, a mistura de reação foi extinta com ácido clorídrico (2 Μ, 1,0 ml) . Os voláteis foram removidos a vácuo. Ácido acético residual e trieloroetano1 foram retirados por azeotropia com tetrahidrofurano/tolueno (3 x) então o resíduo foi triturado com dietil éter e seco a vácuo. Ao sólido branco foi adicionado tetrahidrofurano seco (120 ml), crivos moleculares de 4 Á. Esta solução foi arrefecida até 0 °C e subsequentemente tratado com N,N-diisopropiletilamina (300 μΐ, 1,695 mmol), N, N- dimetilaminopiridina (4,0 mg, 0,034 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (154,7 mg, 0,407 mmol). Após agitar a 0 °C durante 1,5 h e a temperatura ambiente durante 18 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e ácido clorídrico (1 M, 30 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de isso-hexanos/acetona de 1:0 a 1:1 para proporcionar composto lOOg (59,3 mg, 25%, LCMS (m/z) 708,5 [ΜμΗ], Tr - 3,49 min e 708,5 [ΜμΗ], Tr = 3,98 min) como um sólido branco e como uma mistura de diastereoisómeros juntamente com composto 100 que foi ainda purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar composto 100 (10,3 mg, 5,1%) como um sólido branco e como um diastereoisómero individual. ΧΗ RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,93-1,05 (m, 6H) , 1,33 (s, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,65 (d, J = 7,4
Hz, 3H) , 1,69-1,80 (m, 4H) , 1,85-2,07 (m, 4H) , 2,68-2,81 (m, 1 H) , 3,76-3,86 (m, 1 H) , 4,31 (d, J = 10,3 Hz, 1 H) , 4,35-4,45 (m, 1 H), 5,74 (q, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,93 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,43, 6,59 (Abq, JAB = 16,5 Hz, 2H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,70 (s, 1 H) , 7,76-7,86 (m, 2H) , 8,22 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 594,3 [ΜμΗ], Tr = 2,21 min.
Composto 101
Uma solução de composto 10Og (49,1 mg, 0,070 mmol) em acetonitrilo/tetrahidrofurano (10 ml, 9:1) foi tratada com ácido fluorídrico (48 ã em peso em água, 260 μΐ, 7,062 mmol) . Após agitar a temperatura ambiente durante 2 h, a mistura foi lentamente vertida sobre uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x) . Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar o composto 101 (2,6 mg, 12ã) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,94-1,02 (m, 6H) , 1,33 (s, 3H) , 1,37 (S, 3H) , 1,60-1,76 (m, 7H) , 1,87-1,96 (m, 4H) , 1,97-2,07 (m, 2H), 2,68-2,80 (m, 1 H), 3,74-3,86 (m, 1 H), 4,28-4,50 (m, 2H), 5,73 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,93 (q, J = 6,9 Hz, 1 H) , 6,42, 6,58 (Abq, J = 16,5 Hz, 2H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,70 (s, 1 H) , 7,76-7,86 (m, 2H) , 8,22 (d, J = 8,5
Hz, 1 H). LCMS (m/z) 594,3 [ΜμΗ], Tr = 2,20 min.
Exemplos 102 e 103: Compostos 102 e 103
Composto 102a. 3-Metil-3-vinil-dihidro-furan-ona
Uma solução de JAJA-diisopropi lamina (1,68 ml, 0,012 mol) em tetrahidrofurano anidro (20 ml) foi arrefecida até -30 °C sob uma atmosfera de azoto. Uma solução a 2,5 M de n-butillítio (4,4 ml, 0,011 mol) em hexanos foi adicionada e a reação foi deixada a aquecer a -10 °C. A solução foi agitada durante 10 minutos antes de adicionar 3-metil-dihidrofuran-2-ona (1,0 g, 0,01 mol) em tetrahidrofurano (10 ml). A mistura de reação foi agitada a -5 °C durante 15 minutos antes de adicionar di-p-bromobis(tri-terc-butilfosfino) dipaládio (I) (93 mg, 0,12 mmol) e brometo de vinilo (1 M em tetrahidrofurano, 13 ml, 0,13 mmol). A reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e foi agitada durante 2 h. A mistura de reação foi então arrefecida até -10 °C antes de adicionar solução saturada aquosa de cloreto de amónio (20 ml) então ácido clorídrico (2 M) a pH 1. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com dietil éter (20 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtrado e evaporada para dar uma goma laranja. A goma foi purificada por meio de cromatograf ia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/dietil éter 1:1 para render o produto do título (0,533 g, 420 ) como um óleo amarèo. LH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,38 (s, 3H) , 2,11-2,22 (m, 1 H) , 2,31-2,41 (m, 1 H), 4,20-4,36 (m, 2H), 5,16-5,26 (m, 2H), 5,84-5,96 (m, 1 H).
Composto 102b. 7-Bromo-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinolina
Uma solução de(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etanol (2,52 g, 10 mmol) em diclorometano (55 ml) foi arrefecida até 0°C antes de adicionar trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (2,7 ml, 12 mmol) e 2,6-lutidina (1,75 ml, 15 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 2 h então tratada com uma solução saturada de fosfato de potássio monobásico em água. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os extratos foram combinados, secos sobre sulfato de magnésio anidro e os voláteis foram evaporados. Um segundo lote feito da mesma maneira a partir de (R)-1-(7-bromoquinolin-2-il) -etanol (375 mg, 1,49 mmol) utilizando as mesmas proporções de reagentes. Após o mesmo tratamento final os brutos foram combinados, e purificados por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 99:1 a 24:1 para render o produto do título (3,96 g, 94ã) como um sólido. 1H RMN (300 MHz, CDC13) 5 0,02 (s, 3H) , 0,12 (s, 3H), 0,94 (s, 9H), 1,54 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 5,12 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 7,61 (dd, J = 8,7, 1,8 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,15 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,24 (s, 1 H).
Composto 102c. 3-((E)-2-{2-[(R)-1-(terc-Butil-dimetil- silaniloxi)-etil]-quinolin-7-il}-vinil)-3-metil-dihidro-furan-2-ona
Uma solução de 7-bromo-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinolina (1,26 g, 3,43 mmol) e 3-metil-3 -vinil-dihidro-furan-2-ona em 1,4-dioxano (52 ml) foi preparado e tri(o-tolil)fosfina (420 mg, 1,37 mmol), acetato de paládio (II) (307 mg, 1,37 mmol) e N,N-diciclohexilmetilamina (1,18 ml, 5,5 mmol) foram adicionados. A mistura de reação agitada foi aquecida até refluxo sob uma atmosfera de azoto durante 3,5 h. Foi brevemente arrefecida antes de adicionar mais acetato de paládio (II) (77 mg, 0,34 mmol) e tri (o-tolil) fosfina (105 mg, 0,34 mmol). Foi reaquecida até refluxo e agitada durante 1 h antes de arrefecimento até temperatura ambiente. A mistura de reação foi evaporada até a secura então purificada por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com íso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para render o produto do título como um amarelo semi-sólido. 0 material foi dissolvido em diclorometano (50 ml) e filtrado para remover um sólido insolúvel. A solução foi evaporada para dar o produto do título (1,25 g, 880 ) como uma goma amarela. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,02 (s, 3H) , 0,14 (s, 3H), 0,94 (s, 9H), 1,49 (s, 3H), 1,52 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 2,31-2,43 (m, 1 H), 2,56-2,67 (m, 1 H), 4,32-4,43 (m, 2H), 5,12 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 6,65 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 6,82 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,77 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,89 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,97 (s, 1 H), 8,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 412,2 [ΜμΗ] , Tr = 3,47 min.
Composto 102d. (E)-4-[2-((R)-1-Hidroxi-etil)-quinolin-7- il]-2-(2-metoxi-etil)-2-metil-but-3-enoico ácido éster metilico
Uma solução agitada de 3-((E)-2-{2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinolin-7-il}-vinil)-3-metil-dihidro-furan-2-ona (1,25 g, 3,03 mmol) em metanol (12 ml) foi preparado e ortoformato de trimetilo (1,33 ml, 12,1 mmol) foi adicionado, seguido de ácido sulfúrico concentrado (20 0 1) . Foi aquecida a refluxo durante 18 h. Após breve arrefecimento mais ortoformato de trimetilo (1,33 12,1 mmol) e ácido sulfúrico concentrado (20 0 1) foi adicionado e aquecida a refluxo durante 4,5 h. A mistura de reação foi arrefecida até temperatura ambiente então neutralizada pela adição de algumas gotas de solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio. A solução foi evaporada para dar uma suspensão espessa que foi então particionada entre água (25 ml) e diclorometano (25 ml) . A fase aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 15 ml). As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e evaporadas para dar uma goma castanha. A goma foi purificada por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com diclorometano / metanol 98:2 para render o produto do título (815 mg, 780 ) como óleo amarelo ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) «5 1,50 (s, 3H) , 1,59 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,99-2,11 (m, 1 H), 2,16-2,28 (m, 1 H), 3,33 (s, 3H), 3,48 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 4,98-5,09 (m, 2H), 6,66 (s, 2H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,77 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,00 (s, 1 H), 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 344,2 [ΜμΗ], Tr = 1,55 min. Composto 102e. ácido (E)-4-[2-((R)-1-Hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-(2-metoxi-etil)-2-metil-but-3-enoico
Uma solução de (E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-(2-metoxi-etil)-2-metil-but-3-enoico ácido éster metilico (815 mg, 2,37 mmol) em tetrahidrofurano (25 ml) foi preparada e uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (395 mg, 9,49 mmol) em água (10 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 18 h. Foi então acidificada a pH 1 com ácido clorídrico (2 M) antes de evaporar para dar o produto do título bruto (2,43 g) como um sólido amarelo e como uma mistura de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 330,2 [ΜμΗ], Tr = 1,21 min.
Composto 102f. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2 -{(S)-2-[(E)-4 -[2 -((R)-1-Hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-(2-metoxi-etil)-2-metil-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidropiridazina-3-carboxílico [0785]
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (1,24 g, 2,38 mmol) em diclorometano anidro (40 ml) foi arrefecida até 0 °C antes de adicionar trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (660 μΐ, 3,62 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 1,5 h antes de adição de N,N-diisopropiletilamina (1,65 ml, 9,47 mmol). A mistura de reação foi então evaporada até a secura e o resíduo foi dissolvido em N,27-dimetilformamida (20 ml) e adicionado a uma solução agitada de ácido (E)-4-[2-((R)-
1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2 -(2-metoxi-etil)-2-metil-but-3-enoico bruto (2,43 g) e JA-N-diisopropiletilamina (1,65 ml, 9,47 mmol) em N, AT-dimetilformamida (50 ml) . A reação foi tratada com hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametilurónio (1,37 g, 3,78 mmol) e agitado a temperatura ambiente durante 3 h. Foi evaporada então purificada por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/diclorometano/metanol de 1:1:0 a 0:1:0 a 0:98:2 a 0:24:1 para render o produto do título (1,17 g, 66ã) como um sólido amarelo pálido e como uma mistura de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 742,3, 744,2, 746,2 [ΜμΗ], Tr = 2,15 min.
Composto 102 e 103
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- ( (S)-2 -{ (S) -2- [(E)-4- [2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-(2-metoxi-etil)-2-metilbut-3-enoilamino]- 3-meti1-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (200 mg, 0,242 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi preparado e uma solução de hidróxido de lítio monohidrato (30,5 mg, 0,726 mmol) em água (2 ml) foi adicionado. A solução foi agitada a temperatura ambiente durante 2,5 h. A reação foi diluída com água (20 ml) e lavada com dietil éter (15 ml) . 0 éter foi retro-extraída com água (15 ml) . As fases aquosas foram combinadas e acidificadas a pH 1 com ácido clorídrico (2 M) . A solução foi evaporada para dar uma goma amarela que foi triturado com dietil éter então seco a vácuo durante 24 h para render um sólido amarelo. 0 sólido foi dissolvido em N,N-dimetilformamida anidra (3 ml) e a solução resultante foi adicionada, utilizando um bomba de seringa, a uma solução agitada de anidrido 2-nitro-6-metilbenzoico (418 mg, 1,21 mmol) e 4-(dimetilamino) piridina (206 mg, 1,7 mmol) em 1,2-dicloroetano (82 ml) a 50 °C, ao longode 3 h. Após o final da adição a reação foi agitada durante 30 minutos a 50 °C então arrefecida até temperatura ambiente. A mistura de reação foi lavada com salmoura gelada (50 ml), uma solução a 50 aquosa de ácido cítrico (50 ml) , uma solução quosa saturada de bicarbonato de sódio (50 ml) e salmoura (50 ml). A solução foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrado e evaporada para dar uma goma branca (290 mg) . A goma foi purificada por meio de cromatografia em gel de
sílica eluindo com diclorometano/metanol del:0 a 24:1 para dar uma goma incolor (76 mg) . A goma foi ainda purificada por meio de HPLC utilizando uma coluna Agilent Eclipse XDB/C1B 7 micra, 250x 21,2mm e eluindo com um gradiente de ãgua/acetoni trilo 4:1 to 0:1 ao longo de 30 minutos a 20mL/min para dar os dois diastereoisómeros separados. Composto 102 Primeiro eluente Diastereómero 1 (10,9 mg, 8ã) como um sólido branco lH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,51 (s, 3H) , 1,60-1,76 (m, 1 H), 1,64 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,73 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,85-2,05 (m, 4H), 2,09-2,21 (m, 1 H), 2,66- 2,81 (m, 1 H), 3,30 (s, 3H), 3,46-3,62 (m, 2H), 3,75-3,87 (m, 1 H) , 4,28 (d, J = 10,3 Hz, 1 H) , 4,35-4,47 (m, 2H) , 5,74 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,92 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,28 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,46 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,65 (s, 1 H) , 7,74-7,85 (m, 2H) , 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 594,3 [ΜμΗ] , Tr = 2,21 min.
Exemplo 103 Segundo eluente Diastereómero 2 (24,2 mg, 17ã) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 6H), 1,36 (s, 3H), 1,68-1,75 (m, 1 H), 1,64 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,73 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,84-2,04 (m, 4H), 2,05-2,28 (m, 2H), 2,66-2,81 (m, 1 H), 3,30 (s, 3H), 3,46- 3,63 (m, 2H) , 3,76-3,89 (m, 1H) , 4,31 (d, J = 10,3 Hz, 1 H), 4,36-4,46 (m, 2H), 5,77 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,92 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,26 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,54 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,63 (s, 1H) , 7,79-7,82 (m, 2H) , 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H) . LCMS (m/z) 594,3 [ΜμΗ], Tr = 2,27 min.
Exemplos 104 e 105: Compostos 104 e 105
Composto 104a. (R)-3-((R)-2-Hidroximetil-2-metil-but-3- enoil)-4-isopropil-oxazolidin-2-ona.
A uma solução agitada de (R)-4-isopropil-3-[(R)-2-metil-2-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-but-3-enoil] -oxazolidin-2-ona (2,93 g, 8,58 mmol) numa mistura de acetonitrilo (86 ml) e água (1,72 ml) foi adicionado tetrafluoroborato lítio (1 M em acetonitrilo, 42,9 ml, 42,9 mmol). A mistura foi aquecida a refluxo sob azoto durante 5 h e deixada a arrefecer até temperatura ambiente. Mais lítio tetraf luoroborato (1 M em acetonitrilo, 8,6 ml, 8,6 mmol) foi adicionado e a mistura aquecida a refluxo durante mais 75 minutos e deixada a arrefecer até temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água/dietil éter (2:3, 100 ml) e a camada orgânica foi separada e lavada com água. As lavagens combinadas aquosas foram retro-extraídas com dietil éter e os extratos orgânicos combinados secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados para dar o composto do título (1,89 g, 91%) como um óleo amarelo. RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,89 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,35 (s, 3H), 2,36-2,47 (m, 1 H), 2,56-2,70 (s I, 1 H) , 3,47-3,54 (m, 1 H) , 3,91 (d, J = 11,6 Hz, 1 H) , 4,22-4,31 (m, 2H), 4,47-4,53 (m, 1H), 4,97 (d, J = 17,8 Hz, 1H) , 5,17 (d, J = 10,7 Hz, 1H) , 6,09 (dd, J = 17,8, 10,7
Hz, 1 H). LCMS (m/z) 242,2 [ΜμΗ], Tr = 1,82 min.
Composto 104b. (R)-3-[(R)-2-(terc-Butil-dimetil- silaniloximetil)-2-metil-but-3-enoil]-4-isopropil-oxazolidin-2 -ona
A uma solução agitada de (R)-3-((R)-2-hidroximetil-2-meti 1 -but-.3-enoi 1) -4-isopropi 1 -oxazolidin-2-ona (660 mg, 2,74 mmol) e cloreto terc-butildimetilsililo (533 mg, 3,56 mmol) em N,N-dimetilformamida (10 ml) a 0 °C sob azoto foi adicionado em uma porção imidazol (821 mg, 12,1 mmol) . A reação foi agitada a 0 °C durante 15 minutos e então deixada a aquecer a temperatura ambiente e agitado durante 5 h. A mistura foi concentrada e então particionada entre soluçB o saturada de cloreto de amónio e éter. A caada orgânica foi separada e lavada com água (3 x) , seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 19:1 para proporcionar o composto do título (316 mg, 32%) como um óleo incolor. LH RMN (300 MHz, CDC13) <5 0,05 (s, 3H), 0,06 (S, 3H) , 0,86-0,94 (m, 6H) , 0,89 (s, 9H) , 1,45 (s, 3H) , 2,27-2,40 (m, 1 H) , 3,71 (d, J = 9,6 Hz, 1 H) , 4,10-4,30 (m, 2H) , 4,43 (d, J = 9,6 Hz, 1 H) , 4,49-4,55 (m, 1 H) , 4,99 (d, J = 17,8 Hz, 1 H), 5,10 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 6,17 (dd, J = 17,8, 10,9 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 356,2 [ΜμΗ], Tr = 4,02 min
Composto 104c. (R)-3-{(E)-(R)-2-(fcerc-Butil-dimetil- silaniloximetil)-4-[7-((R)-1-hidroxi-etil)-naftalen-2-il]- 2-metil-but-3-enoil}-4 -isopropi1
-oxazolidin-2-ona
Uma solução de (R)-1-(7-bromo-naftalen-2-il)-etanol (121,5 mg, 0,484 mmol), (R)-3-[(R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-2-metil-but-3-enoil]-4 -isopropil-oxazolidin-2-ona (172,0 mg, 0,484 mmol), acetato de paládio(II) (22 mg, 0,097 mmol), tri(o-tolil)fosfina (29,5 mg, 0,097 mmol) e N, 77-die ilohexilme ti lamina (0,26 ml, 1,210 mmol) em 1,4-dioxano anidro (10 ml) foi aquecida a refluxo durante 1,5 h. A mistura foi tratada com acetato de paládio(II) (22 mg, 0,097 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (29,5 mg, 0,097 mmol). Após agitar a refluxo durante 24 h e arrefecimento até temperatura de aquecer a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 20 ml) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. Os orgânicos combinados foram lavados com uma solução saturada de bicarbonato de sódio secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (116,7 mg, 46ã) como um sólido amarelo. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,07 (s, 6H) , 0,91 (s, 9H), 1,15-1,30 (m, 6H), 1,55-1,65 (m, 6H), 2,29- 2,46 (m, 1 H) , 3,83 (d, J = 9,6 Hz, 1 H) , 4,10-4,33 (m, 2H) , 4,50-4,60 (m, 2H) , 5,00-5,15 (m, 1 H) , 6,47 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 6,70 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 7,11-7,22 (m, 2H), 7,40-7,50 (m, 2H), 7,72-7,82 (m, 2H). LCMS (m/z) 526,3 [ΜμΗ], Tr = 4,03 min.
Composto 104d. ácido (E)-(R)-2-(terc-Butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[7-((R)-1-hidroxietil)-naftalen-2-il]-2-metilbut-3-enoico
Uma solução arrefecida (0 °C) de (R)-3-{(E)-(R)-2- (terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[7-((R)-1-hidroxietil)-naftalen-2-il]-2“metil“but-3-enoil}-4-isopropil-oxazolidin-2-ona (116,7 mg, 0,222 mmol) em tetrahidrofurano/água (12 ml, 5:1) foi subsequentemente tratada com peróxido de hidrogénio (30ã aquoso, 120 μΐ, 1,110 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (18,6 mg, 0,444 mmol). Após agitar a 0 °C durante 3,5 h, a mistura de reação foi tratada com peróxido de hidrogénio (3012 aquoso, 120 μΐ, 1,110 mmol) e hidróxido de lítio monohidrato (18,6 mg, 0,444 mmol). Após agitar a 0 °C durante 2,5 h a reação foi extinta com metabissulfito de sódio sólido (850 mg). Após agitar a temperatura ambiente durante 45 mins a mistura foi acidificada com ácido clorídrico (1 M, 20 ml) . A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x) . Os orgânicos combinados foram filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 3:2 para proporcionar o composto do título (77,1 mg, 84E3 ) como um sólido amarelo. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,15 (s, 6H), 0,94 (s, 9H), 1,47 (s, 3H), 1,60 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 3,79, 3,92 (ABq, Jm = 9,6 Hz, 2H) , 5,08 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 6,43 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 7,06-7,22 (m, 2H) , 7,40-7,60 (m, 2H) , 7,70-7,84 (m, 2H) . LCMS (m/z) 415,2 [M0 H], Tr = 3,40 min.
Composto 104e. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2 -{(E)-(R)-2 -(terc-Butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-naftalen-7-il]- 2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-l-[(S)-2-((S)-2-terc- butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (98,9 mg, 0,186 mmol) em diclorometano (10 ml) foi tratado com trimetilsilil-trifluorometanossulfonato (70 μΐ, 0,372 mmol). Após agitar a 0 °C durante 60 min, a reação foi extinta com uma solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi extraída com diclorometano. Os orgânicos combinados foram filtrados através de um separador de fase e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 -((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico como um sólido branco. Ao sólido branco foi adicionado uma solução de ácido (E)-(R)-2-(terc-butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[7-((R)-1-hidroxi-etil)-naftalen-2-il]-2-metil-but-3-enoico (77,1 mg, 0,186 mmol) em acetonitrilo anidro (10 ml) e a solução foi arrefecida até 0 °C então tratado com N,N-diisopropiletilamina (130 μΐ, 0,744 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (85 mg, 0,223 mmol). Após agitar a temperatura ambiente durante 20 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 20 ml). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x). Os orgânicos foram combinados, lavados com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 25 g Isolute eluído com um gradiente contínuo de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:4 para proporcionar o composto do título (48,0 mg, 310 ) como uma goma amarela. XH RMN (3 00 MHz, CDC13) δ 0,11-0,16 (m, 6H) , 0,95 (s, 9H) , 1,20-1,35 (m, 9H) , 1,43 (s, 3H) , 1,60 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,66-1,79 (m, 2H), 1,88-1,97 (m, 1H) , 2,13-2,29 (m, 2H) , 3,63-3,73 (m, 1H) , 3,78-3,85 (m, 2H) , 3,92 (d, J = 10,0 Hz, 1 H) , 4,30-4,44 (m, 2H) , 4,72 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 4,95 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 5,02-5,13 (m, 1H) , 5,25-5,36 (m, 1H) , 6,56 (d, J = 16,5 Hz, 1H) , 6,69-6,78 (m, 2H), 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,48 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,59 (dd, J = 8,7, 1,6 Hz, 1 H), 7,69-7,83 (m, 4H). LCMS (m/z) 829,4/827,4 [ME H], Tr = 388 min. Composto 104 e 105
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 2,2,2 -tricloro-etilico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-(R)-2-(terc-Butil-dimetil-silaniloximetil)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-naftalen-7 -il]-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (48,0 mg, 0,058 mmol) em tetrahidrofurano/água (6 ml, 5:1) foi tratada com hidróxido de litio monohidrato (31,2 mg, 0,743 mmol). Após agitar a 0 °C durante 1,6 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (2 Μ, 380 μΐ, 0,743 mmol). Os voláteis foram removidos a vácuo e o ácido acético residual e tricloroetanol foram retirados por azeotropia com tolueno/tetrahidrofurano (6 x). 0 sólido foi então triturado com dietil éter para proporcionar (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-(R)-4-[7-((R)-1-hidroxi-etil)-naftalen-2 -il]-2-hidroximetil-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico ácido como um sólido branco. LCMS (m/z) 583,3 [M0 H] Tr = 1,97 min. Num balão de 3 tubuladuras de 100 ml de fundo redondo foi introduzido crivos moleculares de 4 Â, 2 anidrido -metil-6-nitrobenzoico (50 mg, 0,145 mmol), N,N-dimetilaminopiridina (53,1 mg, 0,435 mmol) e 1,2-dicloroetano (20 ml). A mistura foi mantida a 50 °C enquanto uma solução de ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)- (R)- 4-[7-((R)-1-hidroxietil)-naftalen-2-il]-2-hidroximetil-2- metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico em N, jW-dimetilformamida (1,5 ml) foi adicionada via bomba de seringa ao longo de 2 h. 0 balão foi enxaguado com Ν,Ν-dimetilformamida (1,5 ml) que foi então adicionado à mesma taxa à a mistura de reação. Após agitar a 50 °C durante 2 h, 2-metil-6-nitrobenzoico anidrido (50 mg, 0,145 mmol) e N,N-dimetilaminopiridina (53,1 mg, 0,435 mmol) foram adicionados. Após agitar a 50 °C durante l h, o aquecimento foi parado e a reação foi deixada em repouso a temperatura ambiente durante a noite. Os voláteis foram removidos a vácuo e a I\7,JV-dimeti 1 formamida residual foi retirada por azeotropia com tolueno. O resíduo foi particionado entre acetato de etilo e ácido clorídrico (1 M) . Os orgânicos foram então lavados com uma solução saturada de bicarbonato de sódio, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi em primeiro lugar purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho de 10 g Isolute eluído com acetato de etilo então por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar o composto 104 (2,9 mg, 8,8%) como um sólido branco e composto 105 (3,7 mg) como um sólido branco.
Exemplo 104, Composto 104. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,96 (d, J = 6,1 Hz, 3H) , 1,01 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,50 (s, 3H), 1,61-1,81 (m, 7H), 1,86-2,03 (m, 3H), 2,67-2,79 (m, 1 H), 3,69 (d, J = 10,9 Hz, 1 H), 3,74-3,85 (m, 2H), 4,32- 4,44 (m, 2H) , 4,63 (d, J = 12,5 Hz, 1H) , 5,64 (q, J = 7,1
Hz, 1 H), 6,02 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 6,25, 6,46 (ABq, JM = 16,5 Hz, 2H) , 7,36 (dd, J = 8,5, 1,8 Hz, 1 H) , 7,49 (s, 1
H) , 7,60 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 7,75-7,85 (m, 3H) . LCMS (m/z) 565,3 [ΜμΗ], Tr = 2,31 min.
Composto 105. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,84 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 0,96 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,33 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,52 (s, 3H) , 1,64-1,78 (m, 5H) , 2,08-2,19 (m, 1H) , 2,29 (s, 3H), 2,37 (app sextet, J = 6,7 Hz, 1 H), 2,81-2,94 (m, 1 H), 3,52-3,62 (m, 1 H), 4,21-4,31 (m, 1 H), 4,36-4,44 (m, 2H) , 4,62-4,77 (m, 2H) , 5,20 (d, J = 10,9 Hz, 1 H) , 6,35 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 6,77 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 7,04 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 7,52-7,62 (m, 2H), 7,66 (d, J = 7,3
Hz, 1 H) , 7,76 (dd, J = 8,7, 1,3 Hz, 1 H) , 7,83-7,95 (m, 4H) , 8,03 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 728,4 [M0 H] , Tr = 3,08 min.
Exemplo 106: Composto 106
Composto 106a. Éster benzílico do ácido (S)-2- dibenzilamino-3-hidroxi-propiónico
Uma solução de L-serina (2,1 g, 20 mmol) em acetonitrilo/água (52 ml, 25:1) foi adicionada a carbonato de potássio sólido (13,8 g, 100 mmol) e a mistura foi tratada com brometo de benzi lo (8,92 ml, 75 mmol) . Após agitar durante 20 h a 55 °C a mistura foi arrefecida até a temperatura ambiente, filtrada, diluída com acetato de etilo e os orgânicos foram lavados com água, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 para proporcionar o composto do título (3,9 g, 52 %) como um óleo amarelo pálido. !H RMN (300 MHz, CDC13) δ 2,52 (dd, J = 7,3, 4,5 Hz, 1 H) , 3,61 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 3,67 (d, U = 13,6 Hz, 2H) , 3,75-3,85 (m, 2H), 3,92 (d, J = 13,6 Hz, 2H) , 5,23, 5,32 (ABq, Jffl = 12,0 Hz, 2H) , 7,22-7,37 (m, 10H), 7,38-7,48 (m, 5H). LCMS (m/z) 376,2 [ΜΗ H], Tr= 3,25 min.
Composto 106b. Éster benzilico do ácido (S)-2 - dibenzilamino-3-difluorometoxi-propiónico
Uma solução de éster benzilico do ácido (S)-2-dibenzilamino-3-hidroxi-propiónico (4,9 g, 13,1 mmol) em acetonitrilo (50 ml) foi tratada com sulfato de sódio anidro (466 mg, 3,28 mmol) e aquecida até 40 °C. Ácido difluoro(fluorosulfonil)acético (1,62 ml, 19,7 mmol) foi então adicionado ao longo de 90 minutos utilizando uma bomba de seringa. Após o final da adição, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 95:5 para proporcionar (760 mg, 14 %) como um óleo amarelo pálido. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 3,64 (d, J = 13,8 Hz, 2H) , 3,73 (t ap, J = 6,5 Hz, 1 H), 3,87 (d, J = 13,8 Hz, 2H) , 4,09 (dd, J = 10,3, 6,2 Hz, 1 H) , 4,22 (dd, J = 10,3, 6,9 Hz, 1 H) , 5,21, 5,32 (ABq, Jffl = 12,3 Hz, 2H), 6,16 (t, J = 74,7 Hz, 1 H) , 7,21-7,37 (m, 10H) , 7,38-7,47 (m, 5H) . LCMS (m/z) 426,1 [ΜμΗ], Tr = 3,76 min.
Composto 106c. Ácido (S)-2 -1erc-butoxicarbonilamino-3- difluorometoxi-propiónico
Uma solução de éster benzílico do ácido (S)-2-dibenzilamino-3-difluorometoxi-propiónico (760 1,79 mmol) em metanol (10 ml) foi tratada com hidróxido de paládio em carbono (carga de 20 ã em peso, suporte húmido, 30 mg) e a atmosfera foi purgada de oxigénio, esguichada com azoto e a reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 16 h. A mistura foi filtrada em Celite e hidróxido de paládio fresco em carbono (carga de 20 0 em peso, aporte húmido, 30 mg) foi adicionado. A atmosfera foi purgada de oxigénio, esguichada com azoto e a reação foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio durante 40 h. A mistura foi filtrada em Celite e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar uma mistura 1:1 de ácido (S)-2-amino-3-difluorometoxi-propiónico e ácido (S)-2-benzilamino-3- difluorometoxi-propiónico (208 mg) como um sólido cinza que foi então dissolvido em metanol/água (10 ml, 4:1) e a mistura foi subsequentemente tratada com bicarbonato de sódio (225 mg, 2,68 mmol) e di-terc-butil-dicarbonato (351 mg, 1,61 mmol). Após agitar à temperatura ambiente durante 16 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi particionado entre acetato de etilo e ácido clorídrico (1 M) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. Os orgânicos foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar o composto do título (170 mg, 50 ã) como um óleo amarelo e como uma mistura complexa de rotâmeros. LCMS (m/z) 254,0 [M-H], Tr = 2,59 min.
Composto 106d. Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-di fluorometoxi-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 3-(2,2,2- tricloro-etílico) do éster 1,2-di-terc-butílico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxílico (923 mg, 2,0 mmol) em diclorometano (3 ml) foi tratada com ácido trifluoroacético (3 ml). Após agitar à temperatura ambiente durante 1,5 h, os voláteis foram removidos a vácuo e ácido trifluoroacético residual foi retirado por azeotropia com tolueno. 0 resíduo foi combinado com ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-difluorometoxi-propiónico (260 mg, 1,02 mmol) e dissolvido em acetonitrilo anidro (10 ml). A mistura arrefecida (0 °C) foi subsequentemente tratada com hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5- b] piridínio (543 mg, 1,43 mmol) e N, JV-diisopropiletilamina (0,71 ml, 4,08 mmol). Após agitar à temperatura ambiente durante 3 dias, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi particionado entre acetato de etilo e água. Os orgânicos foram separados, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com um gradiente escalonado de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 7:3 para proporcionar o composto do título (143 mg, 28 ã) como uma goma verde pálida e como uma mistura complexa de rotâmeros. LCMS (m/z) 498,0, 500,0 [ΜμΗ], Tr = 2,91 min.
Composto 106e. Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3 -di fluorometoxi-propioni1]-hexahidro- piridazina-3-carboxílico
Uma solução arrefecida (0 °C) de éster 2,2,2 -tricloro-etílico do ácido (S)-l-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-difluorometoxi-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (143 mg, 0,287 mmol) em diclorometano (5 ml) foi tratada com trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (72 μΐ, 0,431 mmol). Após agitar a 0 °C durante 30 minutos a mistura de reação foi tratada com N,N- diisopropile ti lamina (0,2 ml, 1,15 mmol) e os voláteis foram removidos a vácuo para proporcionar um sólido castanho que foi então dissolvido em acetonitrilo anidro (5 ml) e esta mistura foi subsequentemente tratada com N-(terc-butoxicarbonil)-L-valina (75 mg, 0,344 mmol), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1 H-l,2,3-triazolo[4,5- b]piridínio (153 mg, 0,402 mmol) e N, N- diisopropiletilamina. Após agitar à temperatura ambiente durante 16 h, os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi particionado entre acetato de etilo e água. Os orgânicos foram secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica eluindo com um gradiente escalonado de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (105 mg, 61 %) como um pálido goma amarela e como uma mistura complexa de rotâmeros. LCMS (m/z) 597,0, 599,0 [M+H], Tr = 3,18 min.
Composto 106f . éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3 -di fluorometoxi-propioni1]-hexahidropi ridaz ina-3-carboxí1ico
0 composto 106f foi preparado da mesma maneira que ο composto 82c utilizando éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 -((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3-difluorometoxi-propioni1]-hexahidro-piridazina-3-carboxí1ico em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S) -1-[(S)-2-((S)-2-terc- butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em 41 ã de rendimento. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,81-0,98 (m, 6H), 1,17 (s, 3H), 1,22 (s, 3H), 1,34-1,60 (m, 4H), 1,68 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,71-1,81 (m, 1H), 2,17 (s, 3H) , 2,90-3,05 (m, 1H), 3,66-3,81 (m, 1H), 3,92 (d, J = 10,7 Hz, 1 H), 4,05-4,20 (m, 1 H), 4,21-4,39 (m, 3H), 4,69 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,95 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 5,46- 5,54 (m, 1 H), 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,21 (t, J = 73,8
Hz, 1 H), 6,34 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,63, 6,79 (ABq, Jm = 16,0 Hz, 2H) , 6, 95 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,43 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,66 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H), 7,76 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 8,05 (S, 1 H) , 8,12 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 806,4, 808,4 [ΜμΗ], Tr = 3,19 min.
0 composto 106 foi preparado da mesma maneira que o composto 82d utilizando éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-difluorometoxi-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}- 3-metil-butirilamino)-3 -(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em 9 ã de rendimento. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,77-0,91 (m, 1 H) , 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,02 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,17- 1,36 (m, 1H) , 1,41 (s, 3H) , 1,49 (s, 3H) , 1,65-1,79 (m, 4H), 1,88-2,13 (m, 3H), 2,60-2,74 1H), 3,56-3,82 (m, 2H), 4,20-4,35 (m, 2H), 4,48-4,60 (m, 2H), 5,94 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 5,99-6,08 (m, 1 H) , 6,16 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 6,33, 6,43 (ABq, Jab = 16,5 Hz, 2H) , 6,47 (t, J = 73,8 Hz, 1 H) , 6,52-6,60 (m, 1 H) , 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,73 (d, J =
8,5 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 8,08 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 616,3 [ΜμΗ], Tr = 2,63 min.
Exemplo 107: Composto 107
Composto 107a. (R)-4-Isopropil-3-((R)-2-metoximetil-2- metil-but-3-enoil)-oxazolidin-2-ona
A uma solução agitada de (R)-3-((R)-2-hidroximetil-2-metil-but-3-enoil)-4 -isopropil-oxazolidin-2-ona (724 mg, 3,00 mmol) e Ν,Ν,Ν' ,AT/-tetrametil-1,8-naftalenodiamina (2,57 g, 11,0 mmol) em diclorometano (15 ml) a 0 °C sob azoto foi adicionado tetrafluoroborato de trimetiloxónio (1,33 g, 9,00 mmol). A reação foi agitada a 0 °C durante 15 minutos e então 4,5 h a temperatura ambiente. A solução saturada de cloreto de amónio foi adicionada e a mistura diluída com diclorometano. A camada aquosa foi separada e extraída com diclorometano e os extratos orgânicos combinados lavados com solução de cloreto de amónio, secos em sulfato de sódio anidro filtrados e evaporados. 0 resíduo foi suspenso em dietil éter e filtrado, os sólidos foram lavados com dietil éter e o filtrado evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 4:1 seguido de purificação num cartucho SCX eluindo com metanol para dar o composto do título (263 mg, 34 %) como um óleo incolor. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,91 (t ap, J = 7,0 Hz, 6H) , 1,50 (s, 3H), 2,32-2,43 (m, 1 H) , 3,35 (S, 3H) , 3,46 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 4,19 (dd ap, J = 9,1, 3,6 Hz, 1 H), 4,27 (t ap, J = 8,6 Hz, 1 H), 4,50-4,57 (m, 1 H), 5,00 (d, J = 17,9 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 10,7 Hz, 1 H) , 6,19 (dd, J = 17,9, 10,7 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 256,2 [ΜμΗ], Tr = 2,53 min.
Composto 107b: Éster (R)-l-{7-[(E)-(R)-4-((R)-4 -isopropil- 2-oxo-oxazolidin-3-il)- 3-metoximetil-3-metil-4-oxo-but-1-enil]-quinolin-2-il}-etílico do ácido acético
A uma mistura de (R)-4-isopropil-3-((R)-2-metoximetil-2-metil-but-3-enoil)-oxazolidin-2-ona (226 mg, 0,769 mmol), éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etílico do ácido acético (196 mg, 0,666 mmol), acetato de paládio(II) (35 mg, 0,154 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (47 mg, 0,154 mmol) foram suspensos em 1,4-dioxano anidro (15 ml) e N, N-diciclohexilmeti lamina (222 mg, 244 μΐ, 1,14 mmol) foi adicionada. A mistura foi agitada a refluxo durante 90 minutos sob azoto e mais acetato de paládio (II) (35 mg, 0,154 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (47 mg, 0,154 mmol) foram adicionados e a mistura aquecida durante 2 h. Mais acetato de paládio(II) (18 mg, 0,077 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (24 mg, 0,077 mmol) foram adicionados e o aquecimento continuou durante 45 minutos. A reação foi deixada a arrefecer e diluída com acetato de etilo e lavada com solução saturada de cloreto de amónio (2 x) , salmoura saturada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo 4:1 a 7:3 para dar o composto do título (22 7 mg, 73 0 ) como uma espuma amarela^H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,90 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,64 (s, 3H) , 1,68 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,36-2,48 (m, 1H), 3,40 (s, 3H) , 3,59 (d, J = 8,9 Hz, 1 H) , 4,19 (dd, J = 9,1, 3,1 Hz, 2H) , 4,23-4,32 (m, 2H) , 4,55-4,61 (m, 1 H) , 6,05 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,49 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 6,79 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,65 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 1 H), 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 469,2 [ΜΗ H], Tr = 2,91 min.
Composto 107c. ácido (E)-(R)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metoximetil-2-metil-but-3-enoico
Uma solução agitada de éster (R)-1-{7-[(E)-(R)-4-((R)-4 -isopropil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-3-metoximetil-3-metil-4-oxo-but-l-enil]-quinolin-2-il}-etílico do ácido acético (183 mg, 0,391 mmol) em tetrahidrofurano (4 ml) e água (2 ml) foi arrefecida até 0 °C e peróxido de hidrogénio (30 % em água, 222 mg, 201 μΐ, 1,96 mmoL) e monoidrato de hidróxido de lítio (49 mg, 1,17 mmol) foram adicionados. Após um minuto a mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e agitada durante 4 h após que foi arrefecida até 0 °C. Metabissulfito de sódio foi adicionado até que a solução estivesse saturada e a mistura de reação agitada durante 15 minutos e então acidificada a pH 1 com ácido clorídrico (2 M) e extraída com diclorometano (3 x) . A camada aquosa foi saturada com cloreto de sódio e extraída com 1:9 metanol:diclorometano e os orgânicos combinados secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cartucho SCX eluindo com metanol e então amónia metanólica e a fração básica recolhida e evaporada para dar o composto do título (101 mg, 82 %) como um filme amarelo. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,53 (s, 3H) , 1,60 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 3,51 (s, 3H) , 3,62 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 3,75 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 5,06 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 6,64, 6,78 (ABq, J = 16,5
Hz, 2H), 7,34 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,64 (dd, J = 8,5, 1,5
Hz, 1 H) , 7,78 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,06 (s, 1 H) , 8,13 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 316,2 [MB H] , Tr = 1,28 min.
Composto 107d. éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 -((S)-2-{(E)-(R)-4 -[2 -((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metoximetil-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropi ridaz ina-3 -carboxí1ico
Ao éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxí1ico (139 mg, 0,321 mmol) recentemente preparado em diclorometano (25 ml) foi adicionado ácido (E)-(R)-4 -[2 -((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metoximetil-2-metil-but-3-enoico (101 mg, 0,321 mmol) e a mistura foi evaporada. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (6,4 ml) e a mistura arrefecida até 0 °C com agitação sob azoto, hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5- b] piridínio (146 mg, 0,38 mmol) e N, N-diisopropiletilamina (168 μΐ, 0,963 mmol) foram adicionados e a mistura de reação agitada durante 5 minutos e então deixada a aquecer a temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 19 h e evaporada e o resíduo dissolvido em diclorometano e lavado sequencialmente com solução saturada de bicarbonato de sódio, água, solução saturada de cloreto de amónio, salmoura então foi seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e evaporado. 0 resíduo foi purificado em sílica eluindo com acetato de etilo para proporcionar o composto do título (123 mg, 53 E ) como uma goma amarela. ΧΗ RMN (300 MHz, CDCI3) δ 0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,33 (d, J — 6,7 Hz, 3H), 1,45 (s, 3H), 1,59 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,67-1,78 (m, 2H) , 1,90-2,00 (m, 1 H) , 2,15- 2,33 (m, 2H), 2,82-2,51 (m, 1 H), 3,47-3,54 (m, 1 H), 3,51 (S, 3H) , 3,60 (d, J = 9,2 Hz, 1 H) , 3,68-3,76 (m, 1H) , 3,73 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 3,85 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,33-4,45 (m, 2H) , 4,72 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,96 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,99-5,08 (m, 2H) , 5,27-5,37 (m, 1 H) , 6,70 (ABq, J =
16,5 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,80 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,66 (dd, J = 8,6, 1,2 Hz, 1H) , 7,77 (d, J = 8,3Hz, 1H), 8,01 (s, 1H) , 8,12 (d, J = 8,7 Hz, 1H) . LCMS (m/z) 728,3, 730,3 [MS H] , Tr =2,25 min.
Composto 107
A uma soluçS o agitada de éster 2,2,2-tricloroetilio do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-(R)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil) -quinolin-7-il] -2-metoxinaetil-2-metil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico (23 mg, 0,032 mmol) em tetrahidrofurano (3 ml) foi adicionado monoidrato de hidróxido de litio (2 mg, 0,047 mmol) e água (0,75 ml) e a mistura de reação agitada durante 30 minutos. Ácido clorídrico (2 Μ, 0,032 ml) foi adicionado a mistura agitada durante 5 minutos então evaporada e tricloroetanol residual foi retirado por azeotropia com tolueno. O resíduo foi dissolvido em terc-butanol e acetonitrile e evaporado (2 x) então azeotropizado com acetonitrilo/tolueno (2 x). O resíduo foi dissolvido em tetrahidrofurano (10,5 ml) e arrefecido até 0 °C com agitação. Hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]piridínio (14 mg, 0,038 mmol), 4- dimetilaminopiridina (0,4 mg, 0,003 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (10 μΐ, 0,063 mmol) foram adicionados e a reação agitada durante 10 minutos. N,JV-Dimetilformamida (1 ml) foi adicionada e a reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente ao longo de 5 h. A mistura foi evaporada e então purificada por meio de HPLC preparativa de fase reversa utilizando um gradiente de acetonitrilo/ãgua 4:1 a 1:4 para proporcionar o composto do título (6,3 mg, 3 5 %) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 6,7
Hz, 3H), 1,54 (s, 3H), 1,66 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,67-1,72 (m, 2H), 1,73 (d, J = 6,7 Η, 3H), 1,87-2,04 (m, 3H), 2,69- 2,80 (m, 1 H) , 3,39 (s, 3H) , 3,46 (d, J = 8,9 Hz, 1 H) , 3,75 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 3,78-3,86 (m, 1 H), 4,27 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 4,36-4,47 (m, 1 H), 5,74 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,92 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,37, 6,40 (ABq, JA B= 16,6
Hz, 2H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,66 (dd, J = 8,7, 1,5
Hz, 1H) , 7,76 (S, 1H) , 7,82 (d, J - 8,7 Hz, 1 H) , 8,22 (d, J= 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 580,3 [M0 H], Tr = 2,22 mn. Exemplos 108 e 109: Compostos 108 e 109
Composto 108a: éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S) -1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-pirazol-l-il-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Ao éster 3-(2,2,2-tricloro-etílico) do éster 1,2-di-terc-butílico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxílico (909 mg, 1,97 mmol) em diclorometano anidro (6 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacêtico (6 ml, 173 mmol). A solução foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo co-evaporada a partir de tolueno (3 x) . 0 óleo viscoso castanho resultante foi dissolvido em acetonitrilo anidro (2 ml) e adicionado a uma solução de L-W-Boc-3-pirazol-l-il-alanina (500 mg, 1,97 mmol), N, N-diisopropiletilamina (1,4 ml, 7,87 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2- (1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3 -tetrametil urónio (747 mg, 1,97 mmol) em acetonitrilo anidro (10 ml) tinha sido anteriormente agitado a 0 °C durante 20 minutos. A reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi arrefecida até 0 °C diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico a 1 Μ. A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x). A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 2:1 para dar o composto do título (999 mg, 95 0 ) como uma espuma branca, cmo uma mistura 2:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 500,1 [ΜμΗ],
Tr = 2,71 min.
Composto 108b: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3-pirazol-l-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Ao éster 2,2,2-trieloro-etílico do ácido (S)-1-( (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-pirazol-1-il-propionil) -hexahidropiridazina-3-carboxilico (730 mg, 1,47 mmol) em diclorometano anidro (3 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (1,1 ml, 14,7 mmol) . A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 3 h antes de concentrar a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (7 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (1,3 ml, 7,3 mmol) , N-(terc-Butoxicarbonil)-L-valina (319 mg, 1,5 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (782 mg, 2,1 mmol) . Em seguida a 16 h a temperatura ambiente a reação foi arrefecida até 0 °C, diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico a 1 Μ. A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x) . A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 1:2 então 1:3 para dar o composto do título (460 mg, 52 %) como um óleo viscoso limpo, como uma mistura 2:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 599,1 [ΜμΗ], Tr = 2,83 min. Composto 108c: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-i13-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-pirazol-l-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico
Ao éster 2,2,2-tricloro-etilico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3 -pirazol-l-il-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxí1i co (450 mg, 0,75 mmol) em diclorometano anidro (1 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (0,58 ml, 7,6 mmol). A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 3 h antes de concentrar a vácuo e co-evaporar a partir de tolueno. Este resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (7,5 ml) e a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido (E)-4- [2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (246 mg, 0,75 mmol), N,N-diisopropiletilamina (0,66 ml, 3,76 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2- (1 H-7-azabenzotriazol- 1-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (401 mg, 1,05 mmol). A solução foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 2 h. A reação foi arrefecida até 0 °C, diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico a 1 M. A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x) . A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 0:1 para dar o composto do título (433 mg, 72 %) como um óleo viscoso limpo, como uma mistura 2:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) = 806,3 [Mia H] , Tr = 2,91 min.
Composto 108 e 109
Ao éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimet i1-but-3 -enoilamino}-3-metiIbutirilamino)-3-pirazol-l-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (200 mg, 0,2 5 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) e água (2 ml) foi adicionado monoidrato de hidróxido de lítio (52 mg, 1,24 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada a 0 °C durante 30 minutos e então aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 3 h, antes de ser acidificada a pH 2 com ácido clorídrico a 2 Μ. A reação foi concentrada a vácuo, seguido de co-evaporação de tolueno (3 x) e então acetonitrilo (3 x) . O resíduo resultante foi triturado com dietil éter para render um pó branco pérola. Este pó foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (200 ml) e arrefecido até 0 °C, sob uma atmosfera de azoto. N,N- diisopropiletilamina (216 μΐ, 1,24 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)--1,1,3,3-tetrametil urânio (132 mg, 0,35 mmol) e 4 - dimetilaminopiridina (3 mg, 0,03 mmol) foram então
adicionados e a reação aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi concentrada a vácuo. 0 resíduo subsequente foi diluído com acetato de etilo e lavado com ácido clorídrico a 1 Μ (1 x), uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x) . A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo para render um óleo amarelo viscoso (189 mg). 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa utilizando e coluna Agilent Eclipse XDB/C18 7 micron, 250x 21,2 mm para proporcionar dois diastereoisómeros como sólidos brancos.
Exemplo 108, Composto 108. Primeiro diastereoisómero que eluiu 1: (20,0 mg, 13 0 ) : :1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,92 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,34 (s, 3H), 1,49 (S, 3H), 1,59-1,73 (m, 3H), 1,75 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,81-1,94 (m, 3H) , 2,63-2,77 (m, 1 H) , 3,55-3,62 (m, 1 H) , 4,28 (t, J = 9,4 Hz, 1 H) , 4,32-4,41 (m, 1 H) , 4,59- 4,78 (m, 2H), 5,93 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,27-6,31 (m, 4H), 7,10 (d, J = 9,6 Hz, 1H) , 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,51 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,65 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H), 7,71 (s, 1 H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,40 (d, J = 2,2 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 616,3 [MH H] , Tr = 2,17 min.
Exemplo 109, Composto 109. Segundo diastereoisómero que eluiu 2: (4,0 mg, 3 0):¾ RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,75 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,35 (s, 3H) , 1,43-1,51 (m, 1 H), 1,53 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,74-2,13 (m, 5H), 2,37-2,50 (m, 1 H), 2,65-2,86 (m, 1H), 3,97-4,14 (m, 1H) , 4,26-4,53 (m, 4H) , 5,81-5,91 (m, 1H) , 6,04 (s, 1H), 6,07-6,21 (m, 1 H), 6,58, 6,71 (ABq, J = 16,1 Hz, 2H) , 7,06-7,20 (m, 1 H) , 7,27-7,50 (m, 3H) , 7,62 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 7,87 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 8,02 (s, 1 H) , 8,28 (d, J - 8,9 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 616,3 [M0 H] , Tr = 2,54 min.
Exemplo 110: Composto 110
Composto 110a: éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-( (S) - 2-terc-butoxicarbonilamino-3-tiazol-4-il-propion.il) - hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 110a foi preparado do mesmo modo que para o composto 106d, substituindo ácido L-N-(S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-difluorometoxi-propiónico com ácido (S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3 -1iazol-4 -i1-propiónico (500 mg, 1,84 mmol) para proporcionar o composto do título como um sólido branco pérola (750 mg, 79 ã) . XH RMN (300 MHz, CDC13) 5 1,43 (s, 9H) , 1,61-1,79 (m, 3H) , 1,85-1,97 (m, 1 H) , 2,01-2,20 (m, 1 H) , 2,84-2,97 (m, 1 H) , 3,21-3,28 (m, 2H) , 3,56-3,68 (m, 1 H) , 3,88 (d, J = 10,9 Hz, 1 H) , 4,32 (d, J = 12,9 Hz, 1 H), 4,76, 4,93 (ABq, J = 12,1 Hz, 2H) , 5,38-5,60 (m, 1 H), 7,12 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 8,74 (d, J = 1,8 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 516,9 [ΜμΗ], Tr = 2,68 min. Composto 110b: éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-tiazol-4-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3 -carboxí lico
0 composto 110b foi preparado da mesma maneira que o composto 106e, substituindo éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3 - difluorometoxi-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico com éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)- 1-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-tiazol-4-il-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico para proporcionar o composto do título como uma espuma castanha clara (730 mg, 81 ã) . ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,66-1,96 (m, 4H), 2,09-2,28 (m, 2H) , 2,84-3,00 (m, 1 H) , 3,22-3,42 (m, 2H), 3,80-4,00 (m, 2H), 4,21-4,33 (m, 1 H), 4,72, 4,97 (ABq, J = 11,9 Hz, 2H) , 5,06-5,15 (m, 1H) , 5,57-5,65 (m, 1H) , 6,87 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 7,17 (s, 1H) , 8,72 (d, J = 1,8 Hz, 1H). LCMS (m/z) 616,2 [ΜμΗ], Tr = 2,78 min.
Composto 110c: éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(E)-4- [2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-meti1-butirilamino)-3 -tiazol-4-il-propionil]-hexahidropiridazina-3-carboxílico
0 composto 110c foi preparado da mesma maneira que o composto 82c, substituindo éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxí1ico com éster 2,2,2- tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc- butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3 -tiazol-4-il-propioni1]-hexahidropi ridaz ina-3 -carboxí1ico (730 mg, 1,19 mmol), para proporcionar o composto do título como um óleo viscoso limpo (500 mg, 51 ã) . RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,88 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,48 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,71-1,97 (m, 5H), 2,06 (s, 3H) , 2,07-2,15 (m, 1H) , 2,17 (s, 3H) , 2,86-3,00 (m, 1H) , 3,18-3,37 (m, 2H) , 3,75-3,89 (m, 1H) , 3,93 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 4,27 (dd, J = 6,3, 2,2 Hz, 1 H), 4,70, 4,95 (ABq, J = 11,9 Hz, 2H), 5,59 (q, J = 5,6 Hz, 1 H), 6,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,35 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,63, 6,77 (ABq, J = 16,2 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 7,43 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,65 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H) , 7,76 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,05 (s, 1 H) , 8,13 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,69 (s, 1 H) . LCMS (m/z) 825,3 [ΜμΗ], Tr - 2,97 min.
0 composto 110 foi preparado da mesma maneira que o composto 82d, substituindo éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2 -((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico com éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2- ((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3 -tiazol-4-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (500 mg, 0,61 mmol), para proporcionar o composto do título como um sólido branco (35 mg, 9 M ).¾ RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,34 (s, 3H) , 1,48 (S, 3H), 1,55-1,73 (m, 3H), 1,75 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,81- 2,03 (m, 3H), 2,66-2,80 (m, 1 H) , 3,36-3,61 (m, 3H) , 4,31
(t, J = 9,6 Hz, 1 H), 4,40 (d, J= 13,4 Hz, 1 H), 4,53 (d, J = 12,3 Hz, 1H) , 5,91 (q, J = 6,7Hz, 1 H) , 6,18 (dd, J = 8,3, 6,0 Hz, 1 H), 6,23, 6,33 (ABq, J = 16,4 Hz, 2H), 7,17 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,39 (d, J =8,5 Hz, 1 H), 7,58 (s, 1 H), 7,66 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1 H), 7,79 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,03 (d, J = 1,6 Hz, 1 H) , 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,90 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 633,2 [ΜμΗ] , Tr = 2,23 min.
Exemplo 111: Composto 111
Composto 111 a [1-(7-Bromo-quinolin-2-il)-et-(E)-ilideno]-amida do ácido (R)-2-metil-propano-2-sulfínico
A uma solução de 1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etanona (1,42 g, 5,68 mmol) em THF (28 ml) foi adicionado etóxido de titânio (IV) (2,6 g, 2,35 ml, 11,4 mmol, grau técnico) seguido de (R)-(μ)-2-metil-propanosulfinimida (825 mg, 6,82 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 60°C sob azoto durante 6 horas e deixada a arrefecer. Salmoura foi adicionada seguido de acetato de etilo e a suspensão filtrada através de celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi separada, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexano /acetato de etilo 9:1 a 3:1 para dar o composto
do título (448 mg, 22 0 ) como um sólido laranja. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,38 (s, 9H) , 2,99 (s, 3H) , 7,71 (m, 2H) , 8,16 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 8,24 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 8,37 (s, 1 H). LCMS (m/z) 352,9/354,9 [ΜμΗ], Tr 3,14 minutos.
Composto 111 b [(R)-1-(7-Bromo-quinolin-2-il)-etil]-amida do ácido (R)-2-metil-propano-2-sulfínico.
Uma mistura de (IS, 2R)-(-)-cis-l-amino-2-indanol (19 mg, 0,13 mmol) , [Ru (p-cimeno) Cl2] 2 (39 mg, 0,064 mmol) e Crivos Moleculares de 4 Â em pó (0,7g) foi suspensa em 2-propanol anidro (3 ml) e agitada sob azoto. A suspensão foi aquecida a 90 °C durante 30 minutos. A mistura de reação foi arrefecida até 40 °C e uma solução de [1- (7-bromo-quinolin-2-il)-et-(E)-ilideno]-amida do ácido (R)-2- metil-propano-2-sulfínico (448 mg, 1,27 mmol) em 2-propanol (9 ml) foi adicionada seguido de uma solução de terc-butóxido de potássio (36 mg, 0,32 mmol) em 2-propanol (3 ml) . A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a 40 °C e então deixada a arrefecer. A mistura foi vertida diretamente num cartucho de gel de sílica e eluída com acetato de etilo. Após a concentração, o resíduo foi ainda purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexano /acetato de etilo 1:1 a 0:1 para dar o composto do título (287 mg, 64 S ) como uma goma castanha. RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,33 (s, 9H), 1,60 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 4,80 (m, 1 H), 5,42 (dl, J = 4,2 Hz, 1 H), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,62 (dd, J = 8,5, 1,2 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,12 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,25 (s, 1 H). LCMS (m/z) 354,9/356,8 [MS H], Tr 2,9 min Composto 111c. Éster metílico do ácido (E)-2,2-dimetil-4-{2-[(R)-1-((R)-2-metil-propano-2-sulfinilamino)-etil]-quinolin-7-il}-but-3-enoico
0 composto 111 c foi preparado da mesma maneira que o composto 49b utilizando [(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil]-amida do ácido 2-metilpropano-2-sulfínico 111 b em vez de (R)-1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etanol em 93 S de rendimento. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,33 (s, 9H) , 1,48 (s, 6H), 1,59 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 3,74 (s, 3H), 4,74-4,85 (m, 1 H), 5,48 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 6,63 (s, 2H), 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,62 (dd, J = 8,5, 1,8 Hz, 1 H), 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,93 (s, 1 H), 8,08 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 403,2 [ΜμΗ], Tr = 2,56 min.
Composto 111 d. Éster metílico do ácido (E)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2 -1ere-Butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carbonil}-amino)-etil]-quinolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoico
Uma solução de éster metílico do ácido (E)-2,2-dimetil-4-{2 - [(R)-1-((R)-2-metil-propano-2-sulfinilamino)-etil]-quinolin-7-il}-but-3-enoico (700 mg, 1,74 mmol) em metanol (20 ml) foi tratada com ácido clorídrico em 1,4-dioxano (4 M, 10 ml) . Após agitar à temperatura ambiente durante 2 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 solvente residual foi retirado por azeotropia com tolueno (3 x 15 ml) para dar cloridrato de éster metílico do ácido (E)-4- [2- ( (R)-1-amino-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but- 3-enoico bruto.
Uma solução arrefecida (0 °C) de ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (696 mg, 1,74 mmol) e cloridrato de éster metílico do ácido (E)-4- [2-((R)-1-amino-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico bruto em acetonitrilo (20 ml) foi subsequentemente tratada com N,N-ãiisopropi1-etilamina (1,52 ml, 8,71 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (861 mg, 2,26 mmol). Após agitar à temperatura ambiente durante 2 h, os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, e subsequentemente lavado com solução saturada de cloreto de amónio e solução de hidrogénio carbonato de sódio. Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho Biotage de 100 g eluído com um gradiente contínuo de isohexanos/acetona de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (868 mg, 73 ã) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,82-0,97 (m, 6H), 1,36 (d, J = 6,9
Hz, 3H) , 1,45 (S, 9H) , 1,48 (s, 6H) , 1,61 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,66-1,76 (m, 2H), 1,83-2,12 (m, 3H), 2,78-2,92 (m, 1 H) , 3,52-3,61 (m, 1 H), 3,74 (s, 3H), 3,82-3,95 (m, 1 H) , 4,25-4,35 (m, 1 H), 5,23 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,36 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,36-6,51 (m, 2H), 7,51 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,99 (s, 1 H) , 8,25 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 681,4 [ΜμΗ], Tr = 2,62 min.
Composto 111
Uma solução de éster metílico do ácido (E)-4-{2-[(R)- 1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carbonil}-amino)-etil]-quinolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoico (868 mg, 1,28 mmol) em 1,4-dioxano (100 ml) foi tratada com uma solução de monoidrato de hidróxido de lítio (306 mg, 12,8 mmol) em água (20 ml) Após agitar a 65 °C durante 1 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre água e dietil éter. A camada aquosa foi acidificada a pH 2 pela adição de ácido clorídrico concentrado então extraída com acetato de etilo (3 x) . Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. O resíduo foi dissolvido em diclorometano (20 ml) e tratado com tri fluorometanos sulfonato de trimetilsililo (503 mg, 2,26 mmol) a 0 °C durante 1 h. N,N- diisopropiletilamina (0,5 ml) foi adicionado e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em tetrahidrofurano (850 ml) , tratado com catalítico 4-dimetilaminopiridina (30 mg) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3- tetrametil urónio (515 mg, 1,36 mmol). Após agitar à temperatura ambiente durante 3 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado, a camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrado e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho Biotage de 100 g eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 1:3 para proporcionar o composto do título (420 mg, 60 ã) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,96 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,05 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,37 (s, 3H) , 1,51 (s, 3H) , 1,59 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,64 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,85-2,00 (m, 2H), 2,20-2,35 (m, 1 H), 2,60-2,75 (m, 1H), 3,55-3,65 (m, 1H), 4,35-4,48 (m, 2H) , 4,95-5,15 (m, 2H) , 5,78 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 6,25-6,60 (m, 2H), 7,12 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,67 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,75 (s, 1 H) ,
7,85 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,25 (d, J = 8,5 Hz, 1H). LCMS (m/z) 549,2 [MS H], Tr = 2,21 min.
Exemplos 112 e 113: Compostos 112 e 113
Composto 112a: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[2 -terc-butoxicarbonilamino-3-(tetrahidro-piran-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 112a foi preparado da mesma maneira que o composto 106d, substituindo ácido L-N-(S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-difluorometoxi-propiónico com 2-Boc- 3-(tetrahidropiran-4-il)-DL-alanina (500 mg, 1,83 mmol) para proporcionar o composto do título como um óleo viscoso transparente (940 mg, 100 0 ) e como uma mistura 1:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 516,3 [ΜμΗ], Tr = 2,75 min. Composto 112b: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[2 -((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3 -(tetrahidro-piran-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 112b foi preparado da mesma maneira que o composto 106e, substituindo éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3- di fluorometoxi-propioni1)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico com éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)- 1-[2 -terc-butoxicarbonilamino-3-(tetrahidropiran-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (940 mg, 1,83 mmol) para proporcionar o composto do título como um óleo viscoso limpo (1,0 g, 90 ã) e como uma mistura 1:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 615,7 [ΜμΗ], Tr = 2,78 min. Composto 112c: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[2 -((S)-2 -{(E)-4-[2 -((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]- 2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-meti1-butirilamino)-3 -(tetrahidro-piran-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 112c foi preparado da mesma maneira que o composto 82c, substituindo éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 -((S)-2-1erc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-propionil]-hexahidro-piridaz ina-3 -carboxílico com éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[2-((S)-2-fcerc- butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-3 -(tetrahidropiran-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (1,0 g, 1,63 mmol), para proporcionar o composto do título como uma espuma branco pérola (620 mg, 46 ã) e como uma mistura 1:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 824,3 [ΜμΗ], Tr = 3,04 min.
Compostos 112 e 113
Os compostos 112 e 113 foram preparados da mesma maneira que os compostos 108 e 109, substituindo éster 2.2.2- tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2 - ( (S)-2-{(E)-4-[2 -((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino} -3-met.il-butirilamino) -3-pirazol-l-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico com éster 2.2.2- tricloro-etílico do ácido (S)-1-[2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-(tetrahidro-piran-4-il)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (600 mg, 0,73 mmol), para proporcionar dois diastereoisómeros como sólidos brancos após isolamento via HPLC de fase reversa utilizando e coluna Agilent Eclipse XDB/Cl8 7 micron, 250x 21,2 mm e eluindo com acetonitrilo/água.
Exemplo 112, Composto 112 Primeiro diastereoisómero que eluiu 1 (20,0 mg, 4 ã) ; XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,96 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 1,37 (s, 3H) , 1,25-1,49 (m, 4H), 1,52 (s, 3H), 1,71 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,73-2,10 (m, 9H), 2,19-2,31 (m, 1 H), 2,68-2,82 (m, 1 H), 3,14-3,44 (m, 2H) , 3,62-3,71 (m, 1 H) , 3,74-3,90 (m, 2H), 4,31 (t, J = 9,6 Hz, 1 H) , 4,43 (d, J = 13,2, 1 H) , 5,92
(q, J = 6,7 Hz, 1H), 6,01-6,16 (m, 1H), 6,40, 6,46 (ABq, J = 16,4 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,38 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,75-7,84 (m, 2H) , 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 634,3 [ΜμΗ] , Tr = 2,50 min.
Exemplo 113, Composto 113 Segundo Diastereoisómero que eluiu 2 (20,0 mg, 4 ã) ; XH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,82 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,99 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,05-1,25 (m, 2H) , 1,38 (s, 3H) , 1,53 (s, 3H) , 1,44-1,61 (m, 5H) , 1,70 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,74-2,19 (m, 6H), 2,41-2,54 (m, 1H), 2,71-2,84 (m, 1H) , 2,92-3,06 (m, 1H) , 3,13-3,25 (m, 2H) , 3,47-3,58 (m, 1H) , 3,69-3,84 (m, 1H) , 3,99-4,14 (m, 1H) , 4,34-4,42 (m, 1H) , 4,42-4,53 (m, 1H) , 5,72-5,81 (m, 1H) , 6,07-6,19 (m, 1H), 6,65,6,83 (ABq, J = 15,9 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,60 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,87 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,17 (s, 1 H), 8,26 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 634,3 [M0 H], Tr = 2,55 min.
Exemplo 114: Composto 114
Composto 114a: Ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-propiónico
Ao N-(terc-Butoxicarbonil)-L-serina (1,2 g, 6,06 mmol) em sulfóxido de dimetilo anidro (20 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado hidreto de sódio (60 ã em óleo mineral, 363 mg, 9,1 mmol) em três porções. A reação foi agitada durante 1 h após que foi adicionado 3-bronaometil-3-metil oxetano (obtido junto à Fluorochem Ltd., RU), 1 g, 6,06 mmol) e uma quantidade adicional de hidreto de sódio (60 ã em óleo mineral, 363 mg, 9,1 mmol). A reação foi agitada durante 16 h e extinta pela adição cuidadosa de água. A solução foi lavada com dietil éter (1 x) e acidificada a pH 2 com ácido clorídrico a 2 Μ. A solução foi extraída com acetato de etilo (2 x) e os orgânicos combinados lavados com salmoura. A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo para render o composto do título (1,1 g, 63 ã) como um clear óleo. RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,30 (s, 3H) , 1,48 (s, 9H) , 3,50, 3,53 (ABq, J = 9,4 Hz, 2H) , 3,77 (dd, J = 9,4, 3,8 Hz, 1 H), 3,98 (dd, J = 9,4, 2,9 Hz, 1 Η), 4,37 (d, J = 5,8 Hz, 2H) , 4,47-4,55 (m, 1 Η), 4,57 (d, J = 5,8 Hz, 2H) , 5,4 7 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 289,3 [M0 H], Tr = 1,67 min.
Composto 114b: Éster 2,2,2-tricloro-etilico do ácido (S)-1-[(S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Ao éster 3-(2,2,2-tricloro-etilico) do éster 1,2-di-terc-butilico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxilico (1,76 g, 3,81 mmol) em diclorometano anidro (12 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (12 ml, 152 mmol). A solução foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo co-evaporada a partir de tolueno (3 x) . 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetonitrilo anidro (5 ml) e adicionado a uma solução de ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3 - (3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-propiónico (1,1 mg, 3,81 mmol), N,N-diisopropiletilamina (2,7 ml, 15,2 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1 H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3 -tetrametil urónio (1,40 g, 3,81 mmol) em acetonitrilo anidro (20 ml) tinha sido anteriormente agitado a 0 °C durante 20 minutos. A reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi arrefecida até 0 °C diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico a 1 Μ. A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x). A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para dar o composto do título (1,2 g, 59 ã) como um óleo viscoso transparente. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,27 (s, 3H) , 1,46 (s, 9H) , 1,63-2,18 (m, 5H) , 3,13-3,27 (m, 1H) , 3,45-3,60 (m, 3H) , 3,73-3,87 (m, 2H), 4,05-4,17 (m, 1 H), 4,38 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,57 l dd, J = 7,8, 5,6 Hz, 2H), 4,79 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 4,91 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 5,33-5,60 (m, 2H). LCMS (m/z) 532,3 [ΜμΗ], Tr = 2,75 min.
Composto 114c: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-[(S)-2-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-3-metil-butirilamino]-3-(3-metil-oxetan-3 -ilmetoxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Ao éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (1,2 g, 2,26 mmol) em diclorometano anidro (10 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (1,7 ml, 22,6 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 3 h antes de concentrar a vácuo e co-evaporar a partir de tolueno (1 x) . 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (24 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N, N-diisopropile ti lamina (2,0 ml, 11,3 mmol), 17-(9-fluorenilmetoxicarbonil)-L-valina (767 mg, 2,26 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,2 g, 3,2 mmol). Em seguida a 2 h a temperatura ambiente a reação foi arrefecida até 0 °C, diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico a 1 Μ. A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x) . A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofõbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 então 1:2 para dar o composto do título (1,4 g, 82 ã) como um óleo viscoso limpo. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,89-1,07 (m, 6H) , 1,23 (s, 3H), 1,54-1,95 (m, 5H) , 2,10-2,23 (m, 1 H) , 3,29-3,48 (m, 3H) , 3,52-3,62 (m, 1 H) , 3,72-4,00 (m, 3H), 4,20-4,30 (m, 2H) , 4,31-4,44 (m, 4H) , 4,48 (d, J = 5,6 Hz, 1 H) , 4,54 (d, J = 5,6 Hz, 1 H) , 4,69 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 4,94 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 5,44-5,54 (m, 1 H) , 5,71- 5,82 (m, 1 H) , 6,76 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,30-7,37 (m, 2H) , 7,38-7,46 (m, 2H) , 7,57-7,67 (m, 2H) , 7,75-7,82 (m, 2H). LCMS (m/z) 753,2 [ΜμΗ], Tr - 3,34 min.
Composto 114d: Éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-l-[(S) -2-((S) -2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3 -(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Ao éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-[(S)-2 -(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-3-metil-butirilamino]-3-(3-metil-oxetan-3-ilmetoxi)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboxílico (1,1 g, 1,46 mmol) em acetonitrilo anidro (20 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionada dietilamina (3,0 ml, 29,2 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 2 h antes de concentrar a vácuo e co-evaporar a partir de diclorometano. Este resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (10 ml) e a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido (E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (478 mg, 1,46 mmol), N, N-diisopropiletilamina (1,3 ml, 7,30 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (778 mg, 2,05 mmol). A solução foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico a 1 Μ. A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x) . A camada orgânica foi entB o seca através de uma frita hidroóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo 1:1 então 0:1 para dar o composto do título (650 mg, 53 ã) como um óleo viscoso limpo. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,89 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,22 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,63 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,63-1,95 (m, 4H), 2,08-2,14 (m, 1 H), 2,18 (s, 3H) , 3,26-3,45 (m, 3H), 3,48-3,60 (m, 1 H) , 3,71- 3,87 (m, 2H) , 3,89-4,03 (m, 1 H) , 4,23 (d, J = 9,2 Hz, 1 H) , 4,27-4,41 (m, 3H) , 4,47 (d, J = 5,6 Hz, 1 H) , 4,51 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,67 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 4,92 (d, J = 11,8 Hz, 1 H) , 5,69-5,80 (m, 1 H) , 6,06 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 6,67 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 6,64, 6,78 (ABq, J = 16,3 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,63-7,71 (m, 1 H) , 7,77 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,05 (s, 1 H), 8,13 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 842,4 [ΜμΗ], Tr = 3,02 min.
Ao éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2 -{(E)-4 -[2 -((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-meti1-butirilamino)-3 -(3-metil-oxetan-3 -ilmetoxi)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (600 mg, 0,71 mmol) em tetrahidrofurano (30 ml) e água (6 ml) foi adicionado monoidrato de hidróxido de lítio (150 mg, 3,56 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada a 0 °C durante 2 h e então aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 1 h, antes de ser neutralizada to pH 7 com ácido clorídrico a 2 Μ. A reação foi concentrada a vácuo, seguido de co-evaporação de tolueno (3 x) e então acetonitrilo (3 x) . 0 resíduo resultante foi triturado com dietil éter para render um pó branco pérola. Este pó foi dissolvido em tetrahidrofurano anidro (238 ml) e arrefecida até 0 °C, sob uma atmosfera de azoto. N,N- diisopropiletilamina (621 μΐ, 3,56 mmol), hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (379 mg, 1,00 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (9 mg, 0,07 mmol). A reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. À reação foi adicionado uma quantidade adicional de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (271 mg, 0,71 mmol) e a solução aquecida até 40 °C durante 5 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo subsequente foi diluído com acetato de etilo e lavado com ácido clorídrico a 0,5 M frio (1 x) , uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura (1 x) . A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa para proporcionar o composto do título (30 mg, 6 ã) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,91 -1,01 (m, 6H) , 1,28 (s, 3H) , 1,35 (s, 3H) , 1,50 (s, 3H) , 1,71 (d, J = 6, 7 Hz, 3H) , 1,59-1,80 (m, 3H) , 1,84-2,09 (m, 3H) , 2,69- 2,83 (m, 1 H), 3,68, 3,84 (ABq, J = 9,1 Hz, 2H), 3,88-3,98 (m, 2H), 4,04 (dd, J = 9,6, 5,1 Hz, 1 H), 4,15 (d, J = 5,8 Hz, 1 H) , 4,23 (d, J = 5,8 Hz, 1 H) , 4,30-4,38 (m, 1 H) , 4,38-4,46 (m, 1 H) , 4,52 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 4,58, 4,59 (ABq, J = 3,9 Hz, 2H), 5,91 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 6,12-6,20 (m, 1 H), 6,35, 6,47 (ABq, J = 16,5 Hz, 2H), 7,26 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,38 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,73 (dd, J = 8,5, 1,0 Hz, 1 H) , 7,80 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,86 (s, 1 H) , 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 650,3 [ΜμΗ] , Tr = 2,46 min.
Exemplo 115: Composto 115
Composto 115a. (R)-[(R)-1-(7-Bromo-quinolin-2-il)-etil]- metil-amida do ácido 2-metil-propano-2-sulfínico
Uma solução arrefecida (-20 °C) de ácido 2-metil-propano-2-sulfínico [(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil]-amida (100 mg, 0,28 mmol) em N,N-dimetilformamida (5 ml) foi tratada com bis (trimetilsilil)amida de lítio (0,28 ml, 0,28 mmol, 1 M em hexano) . Após agitar a esta temperatura durante 1 h, iodometano (0,035 ml, 0,56 mmol) foi adicionado e a temperatura elevada até a temperatura ambiente. Após agitar à temperatura ambiente durante 1 h, a reação foi extinta pela adição de água (10 ml) . A mistura foi extraída com dietil éter (3 x 20 ml) . Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho Biotage de 10 g eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (149 mg, 62 0 ) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,25 (s, 9H) , 1,74 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 2,53 (s, 3H) , 4,81 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 7,55-7,70 (m, 3H), 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,27 (s, 1 H) . LCMS (m/z) 369,0, 371,0 [ΜμΗ] , Tr = 2,91 min.
Composto 115b. Éster metílico do ácido (E) - 2,2-dimetil-4-(2 -{(R)-1-[metil-((R)-2-metil-propano-2-sulfinil)-amino]-etil}-quinolin-7 -il)-but-3-enoico
O composto 115b foi preparado da mesma maneira que o composto 49b utilizando (R)-[(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil]-metil-amida do ácido 2-metilpropano-2-sulfínico em vez de (R) -1- (3-cloro-isoquinolin-6-il) -etanol em 46 ã de rendimento. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,26 (s, 9H) , 1,47 (S, 6H) , 1,76 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 2,55 (s, 3H) , 3,74 (s, 3H), 4,80 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,63 (s, 2H), 7,52-7,65 (m, 2H) , 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 8,01 (s, 1 H) , 8,10 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 417,1 [ΜμΗ], Tr = 2,70 min.
Composto 115c. Éster metílico do ácido (E)-4-{2-[(R)-1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-meti1-butirilamino)-propionil]-hexahidro-pi ridaz ina-3 -carboni1}-metil-amino)-etil]-quinolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoico
Uma solução de éster metílico do ácido (E)-2,2-dimetil-4 -(2 -{(R)-I-[metil-((R)-2-metil-propano-2-sulfinil)-amino]-etil}-quinolin-7-il)-but-3-enoico (77 mg, 0,19 mmol) em metanol (10 ml) foi tratada com ácido clorídrico em 1,4-dioxano (4 M, 5 ml) . Após agitar à temperatura ambiente durante 2 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 solvente residual foi removido por meio de azeptropia com tolueno (3 x 10 ml) para dar cloridrato de éster metílico do ácido (E)-2,2-dimetil-4-[2-((R)-1-metilamino-etil)-quinolin-7-il]-but-3-enoico bruto.
Poeira de zinco (273 mg, 4,18 mmol) foi adicionada a uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-ΙΕ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (98 mg, 0,19 mmol) em tetrahidrofurano (15 ml) . Esta suspensão foi tratada com uma solução de acetato de amónio (220 mg, 2,85 mmol) em água (5 ml). Após agitar à temperatura ambiente durante 3 h, resíduos de zinco foram retirados por meio de filtração e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e solução saturada de hidrogénio sulfato de potássio e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 ácido acético residual foi removido por meio de azeptropia com tolueno (3 x 10 ml) para dar ácido (S) -1- [ (S) -2- ( (S) -2- terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico bruto que foi combinado com éster metílico do ácido (E)-2,2-dimetil-4 -[2 -((R)-1-metilamino-etil)-quinolin-7-il]-but-3-enoico bruto em acetonitrilo anidro (10 ml) e N, ÀT-diisopropiletilamina (0,165 ml, 0,95 mmol) . Esta solução foi então tratada com hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (94 mg, 0,25 mmol). Após agitar à temperatura ambiente durante 16 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, e subsequentemente lavado com solução saturada de cloreto de amónio e bicarbonato de sódio solução. Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um cartucho Biotage de 10 g eluído com um gradiente contínuo de iso-hexanos/acetona de 1:0 a 1:1 para proporcionar o composto do título (90 mg, 68 %) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,82-1,00 (m, 6H) , 1,28-1,40 (m, 3H) , 1,50- 1,55 (m, 15H), 1,69 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,73-2,12 (m, 5H), 2,76-2,92 (m, 5H) , 3,74 (s, 3H) , 3,84-4,00 (m, 1 H) , 4,25- 4,45 (m, 1 H), 5,22-5,40 (m, 1 H), 6,25 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,57-6,74 (m, 2H), 7,35-7,48 (m, 1 H), 7,69-7,77 (m, 1 H), 7,80-7,88 (m, 1 H), 7,90-8,00 (m, 2H), 8,18-8,30 (m, 1 H). LCMS (m/z) 695,4 [ΜμΗ],
Tr = 3,00 min.
Uma solução de éster metílico do ácido (E)-4-{2-[(R)- 1-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carbonil}- metil-amino)-etil]-quinolin-7-il}-2,2-dimetil-but-3-enoico (90 mg, 0,13 mmol) em 1,4-dioxano (10 ml) foi tratada com uma solução de monoidrato de hidróxido de litio (31 mg, 1,30 mmol) em água (5 ml). Após agitar a 65 °C durante 1 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre água e dietil éter. A camada aquosa foi acidificada a pH 2 pela adição de ácido clorídrico concentrado então extraída com acetato de etilo (3 x) . Os orgânicos foram combinados e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano (10 ml) e tratado com trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (58 mg, 0,26 mmol) a 0 °C durante 1 h. N,N-diisopropiletilamina (0,079 ml, 0,45 mmol) foi adicionada e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em tetrahidrofurano (150 ml) , tratado com 4- dimetilaminopiridina catalítica (5 mg) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1 H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urõnio (59 mg, 0,16 mmol). Após agitar à temperatura ambiente durante 3 h, os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi particionado entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado, a camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e os voláteis foram removidos a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa para proporcionar o composto do título (7 mg, 10 ã) como um sólido branco. RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,36 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,57 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,72 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,85-2,00 (m, 5H), 2,65- 2,80 (m, 1 H) , 3,37 (s, 3H) , 4,10-4,25 (m, 1 H) , 4,27-4,50 (m, 3H), 5,87 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 6,30-6,48 (m, 2H), 7,43 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,62-7,82 (m, 3H), 8,17 (d, J" = 8,7
Hz, 1 H). LCMS (m/z) 563,3 [ΜμΗ], Tr = 2,25 min.
Exemplo 116: Composto 116
Composto 116a. Éster etílico do ácido (tetrahidrofuran-3-il)- acético
Uma solução de ácido (tetrahidrofurano-3-il) acético (1,03 g, 7,91 mmol) em diclorometano (20 ml) foi preparada e cloreto de oxalilo (1340 μΐ, 15,4 mmol) foi adicionado seguido de 27, AT-dimetilformamida (5 μΐ) . A reação foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h então evaporada até a secura. O resíduo foi dissolvido em diclorometano (10 ml) e etanol anidro (5 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos e então evaporada para dar o produto do título (1,23 g, 98 0 ) como um óleo castanho. *H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,50-1,64 (m, 1 H) , 2,05-2,18 (m, 1 H), 2,40 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 2,54-2,71 (m, 1H) , 3,37-3,45 (m, 1H) , 3,71-3,98 (m, 3H), 4,14(q, J = 7,1 Hz, 2H).
Composto 116b. Éster etílico do ácido 2-(tetrahidro-furan-3-il)-propiónico
Uma solução agitada de 27,27-diisopropilamina (2,38 ml, 17,0 mmol) em tetrahidrofurano anidro (40 ml) foi arrefecida até -20 °C antes de adicionar n-butillítio (6,3 ml, 15,8 mmol, 2,5 M em hexanos) . A reação foi deixada a
aquecer a -10 °C durante 10 minutos então arrefecida até -78 °C. Uma solução de éster etílico do ácido (tetrahidro-furan-3-il)- acético (1,23 g, 7,77 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi adicionada gota a gota. A reação foi agitada durante 2,5 h a -78 °C e então iodeto de metilo (3,92 ml, 63,2 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 15 h de aquecimento gradual até a temperatura ambiente. A reação foi extinta com uma solução saturada aquosa de cloreto de amónio (60 ml) e então extraída com acetato de etilo (3 x 30 ml) . As fases orgânicas foram combinadas, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e evaporadas. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para render o produto do título (0,87 g, 65 ã) como um óleo amarelo. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,13-1,30 (m, 6H), 1,51-1,69 (m, 1 H), 1,96- 2,11 (m, 1 H), 2,29-2,51 (m, 2H) , 3,39-3,48 (m, 1 H), 3,67- 3,80 (m, 1 H), 3,81-3,95 (m, 2H) , 4,08-4,20 (m, 2H) . Composto 116c. Éster etílico do ácido 2-metil-2-(tetrahidro-furan-3 -il)-but-3-enoico
Uma solução de N, N-di i sopropilamina (1,28 ml, 9,1 mmol) em tetrahidrofurano anidro (15 ml) foi arrefecida até -30 °C antes de adicionar n-butillítio (3,22 ml, 8,08 mmol,
2,5 M em hexanos). A mistura de reação foi agitada a -30 °C durante 15 minutos antes de adicionar uma solução de éster etílico do ácido 2-(tetrahidro-furan-3-il)-propiónico (0,87 g, 5,05 mmol) em tetrahidrofurano (6 ml) gota a gota ao longo de 3 minutos. A mistura de reação foi agitada durante mais 15 minutos a -30°C antes de adicionar dibromobis (tributilfosf ina) paládio (II) (40 mg, 50 μηιοί) e então uma solução de vinilbrometo (9,0 ml, 9,0 mmol, 1 M em
tetrahidrofurano). A mistura de reação foi agitada a -30 °C durante 30 minutos então aquecida até a temperatura ambiente durante 18 h. A mistura de reação foi tratada com ácido clorídrico (2 M, 20 ml) . A mistura foi extraída com dietil éter (3 x 20 ml) . 0 extrato orgânico foi seco em sulfato de sódio anidro, filtrado e evaporado. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/dietil éter 3:2 para render o produto do título (237 mg, 24 ã) como um óleo amarelo. ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,14-1,30 (m, 6H) , 1,61-1,75 (m, 1H) , 1,84-1,99 (m, 1H) , 2,68-2,82 (m, 1H) , 3,52-3,95 (m, 4H), 4,10-4,21 (m, 2H), 5,09-5,23 (m, 2H), 5,95-6,07 (m, 1 H) . LCMS (m/z) 199,2 [ΜμΗ] , Tr = 2,17 min.
Composto 116d. Éster etílico do ácido (E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(tetrahidrofurano-3-il)-but-3-enoico
Uma solução de éster etílico do ácido 2-metil-2-(tetrahidro-furan-3-il)-but-3-enoico (187 mg, 0,94 mmol) em 1,4-dioxano (4,5 ml) e acetonitrilo (0,5 ml) foi preparada e 7-bromo-2-[(R)-1-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-quinolina 102b (344 mg, 0,94 mmol) foi adicionada seguido de N, N-diciclohexilmetilamina (403 μΐ, 1,88 mmol), acetato de paládio(II) (85 mg, 0,38 mmol) e tri(o-tolil)fosfina (116 mg, 0,38 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 140 °C num tubo vedado num micro-ondas durante 4 h então evaporada até a secura. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 4:1 para render o produto do título (312 mg, 68 ã) como uma goma amarela e como uma mistura complexa de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 484,2 [ΜμΗ], Tr = 4,11 min.
Composto 116e. Ácido (E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(tetrahidrofurano-3-il)-but-3- enoico
Uma solução de éster etílico do ácido (E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(tetrahidro-furan-3-il)-but-3-enoico (312 mg, 0,645 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi preparada e uma solução de monoidrato de hidróxido de lítio (108 mg, 2,58 mmol) em água (2 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 16 h. Mais monoidrato de hidróxido de lítio (108 mg, 2,58 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida a refluxo durante 20 h. A mistura de reação foi tratada com metanol (2 ml) e aquecida a refluxo durante 3 h. A mistura de reação foi arrefecida com um banho de gelo antes de acidificar com ácido clorídrico (2 M) to pH 1. A solução resultante foi aquecida até a temperatura ambiente, agitada durante lhe evaporada até a secura. 0 resíduo foi dissolvido num mínimo de metanol e carregada num cartucho SCX Isolute de 25 g. O cartucho foi esguichado com metanol, com uma solução de amónia em metanol (7 M, 4 x 10 ml). A solução foi evaporada e deixada a secar a vácuo durante 16 h para render o produto do título (174 mg, 79 %) como uma goma amarela e como uma mistura complexa de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 342,1 [ΜμΗ], Tr = 2,06 min.
Composto 116f. Éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-1-( (S)-2-{ (S)-2 - [ (E)-4 - [2 - ( (R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(tetrahidro-furan-3-il)-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
Uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (343 mg, 0,645 mmol) em diclorometano (12 ml) foi preparada e trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (180 μΐ, 0,98 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada durante 4 h a temperatura ambiente antes de adicionar uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 ml). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 15 ml). As fases orgânicas foram combinadas e filtradas através de um cartucho de separação de fases, evaporadas e deixadas a secar a vácuo para render uma goma incolor. A goma foi dissolvida em N,N-dimetilformamida anidra (5 ml) e adicionada a uma solução de ácido (E)-4- [2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(tetrahidro-furan-3-il)-but-3-enoico (174 mg, 0,51 mmol) em N, N-dimeti1formamida (10 ml) . A mistura agitada foi tratada com N,N-diisopropiletilamina (450 13 1, 2,58 mmol) e hexafluorofosfato de (dimetilamino)-Ν,Ν-ãimetil(3H- [1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metanimínio (513 mg, 1,35 mmol). A reação foi agitada a temperatura ambiente durante 2 0 h então aquecida até 4 0 °C durante 4 h. A mistura de reação foi arrefecida, evaporada e purificada por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de diclorometano/metanol 1:0 a 49:1 a 24:1 para render o produto do título (160 mg, 33 13 ) como uma goma amarela e como uma mistura complexa de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 754,2, 756,1, 758,2 [ΜμΗ], Tr = 1,23 min.
Uma solução de éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-1-((S)-2 -{(S)-2-[(E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2-metil-2-(tetrahidro-furan-3 -i1)-but-3-enoilamino]-3-metil-butirilamino}-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (160 mg, 0,21 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi preparada e uma solução de monoidrato de hidróxido de lítio (27 mg, 0,63 mmol) em água (2 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 1,5 h e diluída com água (20 ml) . A aquosa foi lavada com dietil éter (15 ml) . A orgânica foi extraída com água (10 ml) . As fases aquosas foram combinadas, acidificadas com ácido clorídrico (2 M) ao pH 1 então evaporadas até a secura. O tricloroetanol residual foi retirado por azeotropia com uma mistura de acetonitrilo e tolueno. A goma resultante foi triturada com dietil éter e seca a vácuo para dar um sólido branco (230 mg). 0 sólido foi dissolvido em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml) e a solução resultante foi adicionada ao longo de 4 h via bomba de seringa a uma solução de anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (362 mg, 1,05 mmol) e 4-(dimetilamino) piridina (180 mg, 1,47 mmol) em 1,2-dicloroetano (70 ml) a 50 °C. Agitou-se durante mais 20 minutos a 50 °C, então arrefeceu-se num banho com gelo. A orgânica foi lavada com um solução aquosa de ácido cítrico (5 % , 50 ml), uma solução aquosa saturada de bicarbnato de sódio (50 ml) , salmoura (25 ml) e filtrada através de um cartucho de separação de fases e evaporada para dar um óleo castanho. O resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa de fase reversa, utilizando uma coluna C18 e um gradiente de acetonitrilo/água 0 0,1 B de ácido fmrco 3:7 a 2:3 ao longo de 26 minutos. As frações contendo o produto do título foram combinadas, evaporadas então dissolvidas em diclorometano (2,5 ml), lavadas com uma solução saturada aquosa de bicarbonato de sódio (1 ml) e filtradas através de um cartucho de separação de fases. Os voláteis foram evaporados para render o produto do título (1,5 mg, 1,2 0 ) como um sólido branco e como um único diastereoisómero não atribuído. :LH RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,94 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,34 (s, 3H) , 1,64 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,73 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,85-2,08 (m, 4H) , 2.15- 2,30 (m, 1 H), 2,67-2,80 (m, 1 H), 2,92-3,02 (m, 1 H), 3.16- 3,38 (m, 2H) , 3,65-3,87 (m, 4H) , 3,95-4,05 (m, 1 H) , 4,28-4,43 (m, 2H), 5,72-5,82 (m, 1 H), 5,87-5,96 (m, 1 H), 6,33, 6,59 (ABq, J = 16,7 Hz, 1 H), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,65 (s, 1 H), 7,82 (s, 2H), 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 606,2 [ΜμΗ], Tr = 2,17 min.
Exemplos 117 e 118: Compostos 117 e 118
Composto 117a: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-metoxi-propionil)-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 117a foi preparado da mesma maneira que éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S) -1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3 -pirazol -1-il-propionil)-hexahidro- piridazina-3-carboxí lico 108a utilizando IV-cx-Boc-O-met il serina (1 g, 4,56 mmol) em vez de L-W-Boc-3 - pirazol -1-il-alanina para proporcionar o composto do título como um óleo viscoso transparente (1,5 g, 71 ã) e como uma mistura 1:1 de dois diastereoisómeros. LCMS (m/z) 462,7 [ΜμΗ], Tr = 2,71 min.
Composto 117b: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-metoxi-propioni1]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 117b foi preparado da mesma maneira que éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-pirazol-l-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico utilizando éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3 -metoxi -propioni 1) -hexahidro-piridazina- 3 -carboxí lico (750 mg, 1,62 mmol) em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S) -1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-pirazol-1-il-propioni1)-hexahidro-piridazina- 3 -carboxí lico para proporcionar o composto do título como um óleo viscoso (700 mg, 77 ã) e como uma mistura 1:1 de dois diastereoisómeros. LCMS (m/z) 563,3 [ΜμΗ], Tr = 2,81 min.
Composto 117c: Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2- ( (S)-2-{(E)-4- [2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-metoxi-propioni1]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
0 composto 117c foi preparado da mesma maneira que éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(E) -4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-pirazol-l-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico utilizando éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-metoxi-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (700 mg, 1,25 mmol) em vez de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)- 1- [ (S)-2- ( (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino) -3-pirazol-l-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3 -carboxí lico para proporcionar o composto do título como uma espuma branco pérola (460 mg, 48 ã) e como uma mistura 1:1 de dois diastereoisómeros. LCMS (m/z) 770,2 [ΜμΗ], Tr = 3,06 min.
0 composto 117 foi preparado da mesma maneira que o composto 108, utilizando éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1- [ (S)-2- ( (S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino) -3-metoxi-propioni1]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (450 mg, 0,58 mmol) em vez de éster 2,2,2- tricloro-etílico do ácido (S)-1-[ (S)-2-((S)-2-{(Ξ)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-pirazol-1-il-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico para proporcionar dois diastereoisómeros como sólidos brancos após isolamento em seguida a HPLC utilizando uma coluna Agilent Eclipse XDB/C18 7 micron, 250x 21,2 mm e eluição com acetonitrilo/água.
Exemplo 117, Composto 117 Primeiro diastereoisómero que eluiu 1 (26 mg, 8 H ),-¾ RMN (300 MHz, CD30D) <5 0,96 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,97 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 1,36 (s, 3H) , 1,36-1,43 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,63-1,70 (m, 1 H), 1,71 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,83-2,05 (m, 3H), 2,68-2,81 (m, 1 H), 3,57 (s, 3H) , 3,81-3,98 (m, 3H), 4,31 (d, J = 10,0 Hz, 1 H) , 4,35-4,46 (m, 1 H) , 5,91 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 5,95- 6,02 (m, 1 H), 6,38, 6,48 (ABq, J= 16,6 Hz, 2H), 7,26 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,70-7,92 (m, 3H) , 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 580,2 [mH H] , Tr = 2,40 min.
Exemplo 118, Composto 118 Segundo diastereoisómero que eluiu 2 (20 mg, 6 E ),-¾ RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,84 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,96 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,54 (s, 3H), 1,69 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,74-2,13 (m, 5H), 2,37- 2,52 (m, 1 H) , 2,72-2,89 (m, 1 H) , 3,20 (s, 3H) , 3,41-3,61 (m, 3H), 4,03 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,33-4,45 (m, 1H), 4,50 (d, J = 12,7 Hz, 1H) , 5,81 (s, 1H) , 6,05-6,23 (m, 1 H) , 6,61, 6,78 (ABq, J = 16,3 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,6 Hz, 1 H) , 7,42 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) , 7,86 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 8,11 (s, 1 H), 8,26 (d, J = 8,3
Hz, 1 H) . LCMS (m/z) 580,2 [ME H] , Tr = 2,60 min.
Exemplo 119: Composto 119
Composto 119a. Éster metílico do ácido 1- [ (S)-2- ( (S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-3-metil-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A uma solução de éster metílico do ácido 1- [ (S)-2-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-propionil]-3-metil-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (630 mg, 1,4 7 mmol) em diclorometano (10 ml) a 0 °C foi adicionado ácido trifluoroacético (1,2 ml). A mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente e agitada durante 3 h. Uma alíquota adicional de ácido trifluoroacético (0,5 ml) foi adicionada e a reação agitada durante mais 1 h. Os voláteis foram removidos a vácuo e o ácido trifluoroacético residual retirado por azeotropia com tolueno (3 x). A uma solução da amina bruta em acetonitrilo (10 ml) foi adicionada uma solução de ácido (E)-4-[2- ( (R) -
1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (480 mg, 1,47 mmol) em acetonitrilo (5 ml) a 0 °C. A solução foi tratada com N,N-diisopropiletilamina (1,6 ml, 9,20 mmol) e hexafluorofosfato de (dimetilamino)-N,N-dimetil(3Η- [1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3- iloxi)metanimínio (782 mg, 2,06 mmol). A mistura de reação foi deixada a aquecer a temperatura ambiente, agitada durante 16 he então concentrada a vácuo. 0 resíduo foi redissolvido em diclorometano e lavado com ácido clorídrico (1 M) . Após separação das camadas, a fase aquosa foi reextraída com diclorometano e então as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada aquosa de hidrogénio carbonato de sódio. A fase orgânica foi passada através de uma frita hidrofóbica e o solvente evaporado a vácuo. 0 produto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo 95:5 a 3:2 para proporcionar o composto do título (795 mg, 85 % ao longo de 2 etapas) como uma espuma amarela e como uma mistura 1:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 638 [ΜμΗ], Tr = 2,58 min. Composto 119b. Ácido 1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-3-metil-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A uma solução de éster metílico do ácido 1- [ (S)-2-( (S)-2-{ (E)-4- [2-((R)-1-acetoxi-etil)-quinolin-7-il] -2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-3 -meti1-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (7 90 mg, 1,24 mmol) em tetrahidrofurano/água (60 ml, 5:1) a 0 °C foi adicionado monoidrato de hidróxido de lítio (380 mg, 9,04 mmol). Após agitar a 0 °C durante 5 h, a reação foi extinta com ácido clorídrico (1 M, 12 ml) . Os voláteis foram removidos a vácuo e ácido acético residual e metanol foram retirados por azeotropia com tolueno (3 x) . O resíduo foi particionado entre acetato de etilo e água. Após separação das camadas, a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (4 x) e diclorometano (5 x) . As camadas orgânicas combinadas foram secas em sulfato de magnésio anidro, filtradas e concentradas a vácuo para proporcionar o composto do título (668 mg, 93 ã) como um sólido amarelo pálido e como uma mistura 1:1 de diastereoisómeros. LCMS (m/z) 582 [ΜμΗ], Tr = 1,54 min.
A uma solução de ácido 1-[(S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)- 1-hidroxi-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-propionil]-3-metil-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (500 mg, 0,86 mmol) em tetrahidrofurano (250 ml) a 0 °C foi adicionada 4-dimetilaminopiridina (16 mg, 0,13 mmol), crivos moleculares de 4 Á (2 g), N,N-diisopropiletilamina (1,04 ml, 5,98 mmol) e hexafluorofosfato de (dimetilamino)-Ν,Ν-dimetil(3H-
[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metanimínio (540 mg, 1,42 mmol). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 36 h e então a 45 °C durante mais umas 16 h. A reação foi concentrada a vácuo e então purificada por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/acetato de etilo 2:3 a 0:1. 0 diastereoisómero mais polar foi isolado (110 mg, 23 ã) como um sólido incolor. 1H RMN (300 MHz, CD30D) δ 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,35 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 1,54 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,65 (s, 3H) , 1,70-1,73 (m, 2H) , 1,76 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,81-2,03 (m, 3H) , 2,69 (m, 1H) , 4,25 (m, 1H) , 4,41 (dl, J = 13,6 Hz, 1H) , 5,77 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 5,90 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 6,38, 6,50 (ABq, J = 16,4 Hz, 2H) , 7,41 (d, J = 8,26 Hz, 1 H) , 7,71-7,85 (m, 3H) , 8,22 (d, J = 8,3 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 564 [MH H], Tr = 2,25 min Exemplo 120: Composto 120
Composto 120a. Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-fenil-propionil)-hexahidropiridazina-3-carboxílico
A uma solução de éster 3-(2,2,2-tricloro-etílico) do éster 1,2-di-terc-butílico do ácido (S)-tetrahidro-piridazina-1,2,3-tricarboxílico (1,0 g, 2,2 mmol) em diclorometano anidro (7 ml) a temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido
trifluoroacético (6,7 ml, 86,6 mmol). A solução foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi concentrada a vácuo e o resíduo co-evaporada a partir de tolueno (3 x). 0 óleo viscoso castanho resultante foi dissolvido em acetonitrilo anidro (2 ml) e adicionado a uma solução de Boc-Phe-Ala-OH (574 mg, 2,2 mmol) , N,N-diisopropiletilamina (1,5 ml, 8,7 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (821 mg, 2,5 mmol) em acetonitrilo anidro (10 ml) tinha sido anteriormente agitado a 0 °C durante 20 minutos. A reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reação foi arrefecida até 0 °C diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico (1 M) . A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para dar o composto do título (1,0 g, 91 ã) como uma espuma branca. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,43 (S, 9H) , 1,45-1,51 (m, 1H) , 1,72-1,95 (m, 2H) , 2,14-2,33 (m, 1H) , 2,61-2,76 (m, 1H) , 2,84-3,10 (m, 3,58 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,34-4,48 (m, 1 H), 4,76, 4,76 (ABq, J =12,4 Hz, 2H) , 5,18-5,31 (m, 1H) , 5,46-5,61 (m, 2H) , 7,17-7,36 (m, 5H) . LCMS (m/z) 508,0 [ΜμΗ] , Tr = 3,18 min.
Composto 120b. Éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 -((S)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-fenil-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-((S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-fenil-propionil)-hexahidropiridazina-3-carboxílico (1,0 g, 2,0 mmol) em diclorometano anidro (7 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (1,5 ml, 19,7 mmol) . A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 2 h antes de concentrar a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo anidro (11 ml) , arrefecido até 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado TibN-diisopropiletilamina (1,8 ml, 9,8 mmol), N-
Boc-Val-OH (428 mg, 2,0 mmol) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1,1 g, 2,8 mmol). Após 16 h a temperatura ambiente a reação foi diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico (1 M) . A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e salmoura. A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:1 para dar o composto do título (1,0 g, 84 0) como um óleo viscoso. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,89 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,95 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,47-1,56 (m, 1,72-1,94 (m, 2H), 2,08-2,20 (m, 1
H) , 2,23-2,36 (m, 1 H) , 2,67-2,84 (m, 1H) , 2,91 (dd, J = 12,9, 9,4 Hz, 1H) , 3,05 (dd, J = 12,9, 5,4 Hz, 1H) , 3,53 (d, J = 10,9 Hz, 1H) , 3,90-4,03 (m, 1H) , 4,23-4,36 (m, 1 H), 4,70, 4,84 (ABq, J = 12,0 Hz, 2H), 5,00-5,14 (m, 1 H), 5,73-5,86 (m, 1 H) , 6,55 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 7,16-7,34 (m, 5H). LCMS (m/z) 607,1 [ΜμΗ], Tr = 3,24 min.
Composto 120c. Éster 2,2,2-triclo- etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 -((S)-2-{(E)-4 -[2 -((R)-1-terc-Butoxicarbonilamino-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-fenil-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico
A uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2 -terc-butoxicarbonilamino-3-metil-butirilamino)-3-fenil-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxilico (395 mg, 0,65 mmol) em diclorometano anidro (2 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (0,5 ml, 6,5 mmol). A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 3 h antes de concentrar a vácuo e co-evaporar a partir de tolueno (3 x) . Este resíduo foi dissolvido em acetonitrile anidro (7 ml) e a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado ácido (E)-4-[2-((R)-1-terc-butoxicarbonilamino-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetil-but-3-enoico (250 mg, 0,65 mmol), N, N-diisopropiletilamina (0,57 ml, 3,25 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (346 mg, 0,91 mmol). A solução foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante a noite. A reação foi arrefecida até 0 °C, diluída com acetato de etilo e extinta com ácido clorídrico (1 M) . A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x) e salmoura. A camada orgânica foi então seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:2 para dar o composto do título (324 mg, 57 %) como um óleo viscoso limpo. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,93 (d, J= 6,9 Hz, 3H), 1,41-1,53 (m, 17H), 1,56 (d, J= 6,7 Hz, 3H) , 1,73-1,94 (m, 2H) , 2,10-2,19 (m, 1H) , 2,30- 2,43 (m, 1 H), 2,70-2,85 (m, 1 H), 2,85-3,05 (m, 2H), 3,48- 3,58 (m, 1 H) , 4,20-4,34 (m, 2H) , 4,83 (ABq, J = 12,1 Hz, 2H) , 4,94-5,08 (m, 1H) , 5,69-5,81 (m, 1H) , 6,17-627 (m, 1H), 6,31 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,44 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,63, 6,79 (ABq, J = 16,3 Hz, 2H), 7,13-7,36 (m, 6H), 7,65 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,76 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 8,04 (s, 1 H), 8,08 (d, J = 8,3 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 873,4 [M+H], Tr = 3,41 min.
A uma solução de éster 2,2,2-tricloetílico do ácido (S)-1- [ (S)-2-((S)-2-{(E)-4-[2-((R)-1-terc- butoxicarbonilamino-etil)-quinolin-7-il]-2,2-dimetilbut-3-enoilamino}-3-metil-butirilamino)-3-fenil-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (320 mg, 0,37 mmol) em tetrahidrofurano anidro (5 ml) a 0 °C foi adicionado uma solução aquosa a 0,4 M de hidróxido de sódio (1,1 ml, 0,44 mmol). A reação foi agitada a 0 °C durante 1 h antes de ser acidificada a pH 5 com ácido clorídrico (2 M) e concentrado a vácuo. 0 resíduo resultante foi particionado entre diclorometano e água e a camada orgânica separada, seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em 1,4-dioxano anidro (2 ml) e a temperatura ambiente foi adicionada uma solução a 4 M de ácido clorídrico em 1,4-dioxano (0,46 ml, 1,8 mmol) . A reação foi agitada durante 1,5 h, concentrada a vácuo e o sólido resultante triturado com dietil éter para proporcionar um sólido amarelo claro. O sólido foi dissolvido em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml) e N, N-diisopropiletilamina (0,33 ml, 1,8 mmol) e esta solução foi adicionada a uma solução pré-agitada de hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (209 mg, 0,6 mmol) em diclorometano anidro (122 ml) a 0 °C e sob uma atmosfera de azoto. Em seguida à adição a reação foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de ser concentrada a vácuo. 0 resíduo subsequente foi dissolvido em acetato de etilo e lavado com ácido clorídrico (0,5 M), bicarbonato de sódio saturado, salmoura e cloreto de lítio aquoso a 5 S , A camada orgânica foi seca através de uma frita hidrofóbica e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetona 1:1 para dar o composto bruto do título (130 mg) como um sólido castanho. Este foi ainda purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo 1:3 então 0:1 para dar o composto do título (40 mg, 17 %) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,98 (d, J = 6,7
Hz, 3H) , 1,31 (s, 3H) , 1,33-1,43 (m, 1 H) , 1,48 (s, 3H) , 1,51-1,61 (m, 1 H), 1,65 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,82-1,98 (m, 2H), 2,18-2,28 (m, 2H), 2,55-2,78 (m, 2H), 3,03 (dd, J = 13,2, 9,1 Hz, 1H) , 3,19 (dd, J - 13,2, 6,5 Hz, 1 H) , 4,27 (t, J = 8,9 Hz, 1 H), 4,42-4,52 (m, 1 H), 5,08 (d, J = 12,0
Hz, 1 H) , 5,17 (t, J = 6,5 Hz, 1H) , 5,92 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 6,12 (q, J = 6,5 Hz, 1H) , 6,68 (d, J = 16,1 Hz, 1H) , 6,85 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,07-7,21 (m, 3H), 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,50 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 1 H) , 7,56-7,65 (m, 2H), 7,79 (s, 1 H), 7,84 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,27 (d, J = 8,5 Hz, 1 H). LCMS (m/z) 625,3 [ΜμΗ], Tr = 2,71 min. Exemplo 121: Composto 121
ÇOTipqsto 121a:
Num balão seco em forno, purgado com árgon tetrahidrofurano (50 ml) foi adicionado e a solução foi arrefecida com o banho de gelo. Uma solução a 1,8 M de diisopropilamida de lítio (7,2 ml, 13 mmol) em tetrahidrofurano/heptano/etilbenzeno foi adicionada através dos septos. A solução resultante de di i sopropilamida de lítio foi arrefecida até -78° C, e tratada gota a gota com 4,4-difluorociclohexanocarboxilato de etilo (CAS: 178312-47-5, Oakwood Products, Inc.) (1,73 g, 9 mmol) seguido de hexametilfosforamida (1,56 ml, 1,61 g, 9 mmol). A solução resultante foi aquecida até 0o C, agitada durante 20 min., arrefecida até -78° C, e tratada gota a gota com solução pré-arrefecida (0°C) de 1,2-dicloroetino (ca. 10 mmol). A mistura de reação foi agitada a -78° C durante 30 min e então deixada a aquecer à temperatura ambiente. Após 4 horas a temperatura ambiente, a mistura de reação foi vertida em gelo triturado e extraída com dietil éter (200 ml) (5 ml de salmoura foi adicionada para suportar a separação). A fase orgânica foi separada e lavada com água (200 ml) . Esta fase de água foi extraída com dietil éter (100 ml). As frações orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml) , secas em sulfato de magnésio, filtradas através de uma camada de 2 cm de gel de sílica (a camada gel de sílica foi lavada com 50 ml de acetato de etilo), e então concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi submetido a cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-20 0 de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (1068 mg, 47 13 ) orno um Óleo incolor. LH RMN (400 MHz, CDC13) δ 4,21 (q, J = 7,1
Hz, 2H), 2,08-2,00 (m, 8H), 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Tr = 2,71 min.
Composto 121b:
Uma solução do composto Intermediário 121 a (900 mg, 3,6 mmol) em tetrahidrofurano (100 ml) contendo catalisador de Lindlar (300 mg, Sigma-Aldrich) e carbonato de potássio (2480 mg, 18 mmol) foi hidrogenada a temperatura ambiente e a pressão atmosférica de hidrogénio durante 12 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (50 ml) . 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (780 mg mg, 99 %) como um óleo incolor. ΧΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 5,79 (dd, J = 17,5, 10,7 Hz, 1H) , 5,17 (aproximadamente d, J = 17 Hz, 1 H) , 5,14 (aproximadamente d, J = 10 Hz, 1 H), 4,15 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,30-2,17 (m, 2H), 2,04-1,90 (m, 2H), 1,91-1,67 (m, 4H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H). Tr = 2,66 min.
Composto 121c:
Uma solução de 121b (654 mg, 3 mmol) em tetrahidrofurano/água/metanol (25 ml, 4:1:1) foi tratada com hidróxido de lítio (144 mg, 6 mmol) . Após agitar à temperatura ambiente durante a noite, a reação foi extinta com ácido clorídrico a 1 M (20 ml), concentrada sob pressão reduzida, dissolvida em água (50 ml) e extraída com acetato de etilo (2 x 100 ml) . Os orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secos em sulfato de sódio e filtrados. 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (560 mg, 98 ã) como um sólido branco. RMN (400 MHz, CDC13) δ 5,83 (dd, J = 17,4, 10,7 Hz, 1H) , 5,27 (aproximadamente d, J = 17 Hz, 1H) , 5,23 (aproximadamente d, J = 10 Hz, 1 H) , 2,28-2,19 (m, 2H) , 2,07-1,72 (m, 6H). LCMS (m/z) 188,9 [M-H], Tr = 2,18 min. Composto 121 d:
A uma solução de éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etílico do ácido acético (294 mg, 1 mmol) em acetonitrilo anidro (20 ml) foi adicionado acetato de paládio (II) (22 mg, 0,1 mmol) , 121c (190 mg, 1 mmol) , 2-di-terc- butilfosfino-3,4,5,6 -tetrametil-2' , 4 ' , 6 '-triisopropil-1,1'-bifenilo (48 mg, 0,1 mmol) e trietilamina (0,64 ml, 3 mmol) então a mistura foi aquecida no micro-ondas a 110 °C durante 2 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (30 ml) . 0 filtrado foi evaporado então água (200 ml) foi adicionado e os orgânicos extraídos com acetato de etilo (2 x 50 ml). Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar um resíduo bruto. Este foi submetido a cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 0 de acetato de etilo em i so-hexanos) para proporcionar o composto do título (264 mg, 66 E ) ctno um sólido branco, XH RMN (400 MHz, CDC1?1) δ 8,15 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 8,07 (s, 1 H) , 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,62
(d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,78 (d, J - 16,3 Hz, 1 H) , 6,42 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 6,08 (q, J = 6,6 Hz, 1 H) , 2,48-2,38 (m, 2H) , 2,13 (s, 3H) , 2,10-1,83 (m, 6H) , 1,64 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 404,1 [ΜμΗ] ,
Tr= 3,69 min (coluna Gemini 5u C18 110Â, 50 x 4,60 mm 5 micron, 6 min, 2 ml/min, 5-100 ã de acetonitrilo/água, 0,1 ã de gradiente modificador de ácido acético). O composto 12 le :
Uma solução de 1 e (0,37 g, 0,7 mmol) em diclorometano (10 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água.
Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,31 g, 1,4 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto (LCMS (m/z) 431,2 / 433,3 [ΜμΗ]' Tr = 2,06 min) foi dissolvido em acetonitrilo anidro (12 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0 °C, 121 d (201 mg, 0,5 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (387 mg, 3 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l- il)-1,1,3,3 -tetrametil urónio (285 mg, 0,75 mmol). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 12 horas. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução a 20 I em água de ácido cítrico(2 x 50 ml) , água (50 ml) e salmoura (50 ml) , seca em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-30 E> de acetato de etilo e metanol (4/1) emíso-hexanos) para proporcionar o composto do título (245 mg, 60 S ) como um sólido branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,77-8,68 (m, 1 H) , 8,42 (dd, J = 8,4, 1,3 Hz, 1 H) , 8,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,04-7,94 (m, 2H), 7,87 (d, J = 8,6
Hz, 1 H) , 7,78 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7,57-7,47 (m, 2H) , 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 6,58 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 5,97 (q, J = 6,8 Hz, 1H) , 5,42-5,21 (m, 2H) , 4,97 (d, J = 12,1 Hz, 1H) , 4,76 (d, J = 12,1 Hz, 1H) , 3,83-3,72 (m, 2H) , 2,45-2,33 (m, 2H) , 2,15 (s, 3H) , 2,10-1,73 (m, 10H), 1,66-1,64 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,26 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 0,99-0,89 (m, 6H) . LCMS (m/z) 816,2/818,2 [ΜμΗ]' Tr = 4,34 min.
A uma solução de 121 e (200 mg, 0,24 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi adicionado metanol (4 ml) , água (4 ml) e hidróxido de lítio (12 mg, 0,52 mmol) . A mistura foi agitada durante 2 horas a temperatura ambiente e foi extinta com ácido clorídrico aquoso a 1 M (0,6 ml, 0,6 mmol). A solução resultante foi concentrada a um resíduo bruto que foi co-evaporado duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml), duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (20 ml) . 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional. Num balão seco em forno, purgado com ãrgon foram colocados anidrido 2-metil- 6-nitrobenzoico (344 mg, 1 mmol), 4- dimetilaminopiridina (366 mg, 3 mmol) e anidro 1,2- dicloroetano (200 ml). A solução resultante foi aquecida a 50 °C, e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota via seringa como uma solução em N, N-dimeti 1 formamida seca (10 ml) ao longo de 12 horas. Uma porção adicional de N,N-dimetilfo rmami da seca (2 x 5 ml) foi utilizada para completar a transferência quantitativa. Após agitar durante 2 horas adicionais a 50 °C, a mistura de reação foi transferida a um funil de separação e lavada com água (100 ml, 5 ml de salmoura foi adicionada para suportar a separação). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e foi lavado com 10 0 de ácido cítrico (100 ml) , NaHCQ saturado (100 ml) , água (100 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase resultante aquosa foi extraída com acetato de etilo (50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40 % de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (139 mg, 93 % ) cmo um sólido branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CD30D) : <5 8,55 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 8,09 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,70- 7,66 (rn, 2H) , 7,52-7,48 (rn, 2H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,33 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 5,80 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,67-5,55 (m, 1 H) , 4,32-4,16 (m, 2H) , 3,73-3,64 (m, 1 H), 2,63 (t.d, J = 12,6, 3,3 Hz, 1 H), 2,33-2,17 (m, 2H) , 2,09-1,71 (m, 6H) , 1,82-1,73 (m, 2H) , 1,62 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,61-1,54 (m, 1,51 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 0,89-0,84 (m, 6H) . LCMS (m/z) 626,3 [ΜμΗ] ' Tr = 3,71 min.
Exemplo 122: Composto 122
Uma solução de 1 e (745 mg, 1,4 mmol) em diclorometano (20 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (666 mg, 3 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 0 °C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto (LCMS (m/z) 431,2 /
433,3 [ΜμΗ] ' Tr = 2,06 min) foi dissolvido em acetonitrilo anidro (30 ml) sob A mistura de reação foi agitada a 0 °C, 121c (190 mg, 1 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (387 mg, 3 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (570 mg, 1,5 mmol). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 12 horas. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução a 20 I em água de ácido cítrico (2 x 50 ml) , água (50 ml) e salmoura (50 ml) , seca em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 0 de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (512 mg, 85 § ) cmo um sólido branco após evaporação. XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ 6,02 (dd, J = 17,6, 10,8 Hz, 1 H), 5,53-5,36 (m, 3H), 5,12 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,90 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 7,5 Hz, 1 H) , 3,96-3,84 (m, 1 H) , 2,92-2,90 (s, 4H) , 2,37-2,26 (m, 2H) , 2,24-2,12 (m, 2H) , 2,08-1,86 (m, 7H) , 1,86-1,72 (m, 1 H), 1,39 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,06 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,00 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 603,2 /605,2 [ΜμΗ]' Tr = 3,84 min (coluna Gemini 5u C18 110Â, 50 x 4,60 mm 5 micron, 6 min, 2 ml/min, 5-100 0 de acetonitrilo/água, 0,1 § de gradiente modificador d ácido acético).
Composto 122b: [1-(7-bromo-quinolin-2-il)-et-(E)-ilideno]-amida do ácido (R)-2-metil-propano-2-sulfínico
A uma solução de 1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etanona (1,42 g, 5,68 mmol) em THF (28 ml) foi adicionado etõxido de titânio (IV) (2,6 g, 2,35 ml, 11,4 mmol, grau técnico) seguido de (R)-(μ)-2-metil-propanosulfinimida (825 mg, 6,82 mmol) . A mistura de reação foi agitada a 60°C sob azoto durante 6 horas e deixada a arrefecer. Salmoura foi adicionada seguido de acetato de etilo e a suspensão filtrada através de celite e a almofada de filtro foi lavada com acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi separada, seca em sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexano /acetato de etilo 9:1 a 3:1 para dar o composto do título (448 mg, 22 % ) 122b como um sólido laran§.. 1H RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,38 (s, 9H) , 2,99 (s, 3H) , 7,71 (m, 2H), 8,16 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 8,24 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 8,37 (s, 1 H). LCMS (m/z) 352,9/354,9 [ΜμΗ], Tr 3,14 minutos.
Composto 122c : [(R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etil]-amida do ácido (R)-2-metil-propano-2-sulfínico.
Uma mistura de (IS, 2R)- (-)-cis-l-amino-2-indanol (19 mg, 0,13 mmol), [Ru (p-cimeno) Cl2]2 (39 mg, 0,064 mmol) e Crivos Moleculares de 4 Â em pó (0,7g) foi suspenso em 2-propanol anidro (3 ml) e agitado sob azoto. A suspensão foi aquecida a 90 °C durante 30 minutos. A mistura de reação foi arrefecida até 40 °C e uma solução de [1- (7-bromo-quinolin-2-il)-et-(E)-ilideno]-amida do ácido (R)-2-metil-propano-2-sulfínico (448 mg, 1,27 mmol) em 2-propanol (9 ml) foi adicionado seguido de uma solução de terc-butóxido de potássio (36 mg, 0,32 mmol) em 2-propanol (3 ml). A mistura de reação foi agitada durante 2 horas a 40 °C e então deixada a arrefecer. A mistura foi vertida diretamente num cartucho de gel de sílica e eluída com acetato de etilo. Após a concentração, o resíduo foi ainda purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexano /acetato de etilo 1:1 a 0:1 para dar 122c (287 mg, 64 0 ) como uma goma catanha. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,33 (s, 9H) , 1,60 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 4,80 (m, 1 H) , 5,42 (dl, J = 4,2 Hz, 1 H) , 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,62 (dd, J = 8,5, 1,2 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,12 (d, J - 8,7 Hz, 1 H), 8,25 (s, 1 H). LCMS (m/z) 354,9/356,8 [ΜμΗ], Tr 2,49 min Composto 122d
A uma solução de (R)-N- ((R)-1-(7-bromoquinolin-2-il)etil)-2-metilpropano-2-sulfinamida 122c (36 mg, 0,1 mmol) em acetonitrilo anidro (5 ml) foi adicionado acetato de paládio (II) (4 mg, 0,02 mmol) , 122a (60 mg, 0,1 mmol) , tri(o-tolil)fosfina (6 mg, 0,02 mmol) e trietilamina (20 mg, 0,2 mmol) então a mistura foi aquecida no micro-ondas a 90 °C durante 4 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (10 ml). 0 filtrado foi evaporado então água (20 ml) foi adicionado e os orgânicos extraídos com acetato de etilo (2 x 20 ml). Os orgânicos combinados foram secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar um resíduo bruto. Isto foi submetido a cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 % de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o 122d (32 mg, 37 ã) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD30D) õh8,31 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 7,99 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,89 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 5,42-5,35 (m, 1H) , 5,01 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 12,0 1 H), 4,78-4,73 (m, 1 H), 4,63- 4,59 (m, 1 H), 4,28 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 3,83-3,78 (m, 1 H) , 2,45-2,36 (m, 2H) , 2,16-1,98 (m, 8H) , 1,96-1,83 (m, 2H) , 1,64 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,35 (d, J = 14,4 Hz, 3H) , 1,32 (s, 9H) , 1/29 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,00 (d, J = 6,7
Hz, 3H), 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H). LCMS (m/z) 877,2 /879,2 [ΜμΗ]' Tr = 4,32 min.
Composto 122
Ao 122b (31 mg, 0,035 mmol) em tetrahidrof urano (10 ml) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio (1,4 mg, 0,060 mmol) em água (5 ml) . Após agitar à temperatura ambiente durante 2 hora, ácido clorídrico a 1 M foi adicionado (0,10 ml de solução a 1 M em água, 0,10 mmol) e a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi tratado com cloreto de hidrogénio a 1 M em 1,4-dioxano (5 ml, 5 mmol) a temperatura ambiente sob árgon durante 4 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e seca sob alto vácuo durante um dia. Este resíduo foi dissolvido em N,iV-dimetilformamida (2 ml) e a solução obtida foi adicionada num balão purgado com árgon contendo hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(1H-7- azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (21 mg, 0,056 mmol) , N,N-diisopropiletilanaina (21 mg, 0,159 mmol) e acetonitrilo (50 ml). A mistura de reação foi repurgada com árgon e agitada a temperatura ambiente durante 12 horas. A mistura de reação obtida foi concentrada sob pressão reduzida, dissolvida em acetato de etilo (20 ml) , lavada com água (20 ml) e salmoura (20 ml) , seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 0 de acetato de etilo 0 metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (9 mg, 41 S ) como um sólido branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CD30D) <5 8,34 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,94 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,83-7,76 (m, 2H) , 6,61 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 6,40 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 5,84 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,46-5,42 (m, 1 H) , 5,19-5,13 (m, 1 H) , 4,63-4,44 (m, 2H), 3,74-3,68 (m, 1 H), 2,81-3,72 (m, 1 H), 2,53-2,40 (m, 2H), 2,39-1,92 (m, 12H), 1,77 (d, J= 7,2 Hz, 3H) , 1,68 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,18 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,08 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 625,4 [ME H], Tr = 3,53 min.
Exemplos 123 e 124: Compostos 123 e 124
Num balão seco em forno, purgado com árgon tetrahidrofurano seco (50 ml) foi adicionado e a solução foi arrefecida com o banho de gelo. Uma solução a 1,8 M de diisopropilamida de lítio (7,2 ml, 13 mmol) em tetrahidrofurano/heptano/etilbenzeno foi adicionada através dos septos. A solução resultante de diisopropilamida de lítio foi arrefecida até 0o C, e tratada gota a gota com 2,2-dimetiltetrahidro-2ií-piran-4-carboxilato de etilo (CAS : 371227-37-1, InterBioScreen Ltd.) (1,86 g, 10 mmol). A solução resultante foi aquecida até a t.a. agitada durante 20 min., arrefecida até 0o C, e tratada com dímero de bromo(tri-terc-butilfosfina)paládio(I) (78 mg, 0,1 mmol) em tetrahidrofurano seco (5 ml), seguido de adição lenta da solução a 1 M de bromoeteno (15 ml 1 M, 15 mmol) em tetrahidrofurano. A mistura de reação foi agitada a 0o C durante 30 min. e então deixada a aquecer à temperatura ambiente. Após 4 horas a temperatura ambiente, a mistura de reação foi extinta pela adição de ácido acético aquoso a 1 M (10 ml 1 M, 10 mmol) . Esta mistura foi vertida em gelo triturado e extraída com dietil éter (200 ml) (5 ml de salmoura foi adicionada para suportar a separação). A fase orgânica foi separada e lavada com água (200 ml). Esta fase de água foi extraída com dietil éter (100 ml) . As frações orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio (50 ml) , salmoura (100 ml) , secas em sulfato de magnésio, filtradas através de uma camada de 2 cm de gel de sílica (a camada gel de sílica foi lavada com 50 ml de acetato de etilo), e então concentrada sob pressão reduzida. 0 produto bruto foi submetido a cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-20 H de acetato deetilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (695 mg, 33 IEI ) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 5,78 (dd, J = 17,6, 10,1 Hz, 1 H), 5,10 (s, 1 H), 5,06 (d, J = 5,4 Hz, 1 H) , 4,24-4,03 (m, 2H) , 3,83-3,60 (m, 2H) , 2,23-2,09 (m, 2H) , 1,61-1,47 (m, 2H) , 1,32-1,22 (m, 3H) , 1,19 (s, 3H) , 1,09 (s, 3H) . LCMS (m/z) 213,0 [ΜμΗ] , Tr = 3,31 min.
Composto 123b:
Uma solução de 123a (680 mg, 3,2 mmol) em tetrahidrofurano/água/metanol (25 ml, 4:1:1) foi tratada com hidróxido de lítio (154 mg, 6,4 mmol) . Após agitar a 60° C durante 6 horas, a reação foi extinta com ácido clorídrico a 1 M (20 ml), concentrada sob pressão reduzida, dissolvida em água (50 ml) e extraída com acetato de etilo (2 x 100 ml) . Os orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secos em sulfato de sódio e filtrados. 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (496 mg, 85 0 ) como um sólido branco. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 5,83 (dd, J = 17,5, 10,6 Hz, 1 H), 5,18 (d, J = 6,4 Hz, 1 H) , 5,15 (S, 1 H) , 3,90-3,64 (m, 2H) , 2,29-1,98 (m, 2H) , 1,66-1,59 (m, 1H), 1,56 (d, J = 13,8 Hz, 1H), 1,20 (s, 3H), 1,16 (s, 3H). LCMS (m/z) 182,9 [M-H], Tr = 2,14 min. Composto 123c:
Uma solução de le (1471 mg, 2,77 mmol) em diclorometano (30 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Tri fluorometanos sulfonato de trimetilsililo (837 mg, 3,77 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto (LCMS (m/z) 431,2 / 433,3 [ΜμΗ]' Tr = 2,05 min) foi dissolvido em acetonitrilo anidro (30 ml) sob A mistura de reação foi agitada a 0 °C, 123b (464 mg, 2,51 mmol) e N, J7-diisopropi let i lamina (1297 mg, 10 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1336 mg, 3,51 mmol). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 12 horas. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução a 20 % em água de ácido cítrico (2 x 50 ml) , água (50 ml) e salmoura (50 ml) , seca em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 % de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (1193 mg, 80 %) como um sólido branco após evaporação. ]Ή RMN (4 00 MHz, CDC13) δ 6,56 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,36-6,29 (m, 1 H), 5,90 (dt, J = 17,6, 10,1 Hz, 1 H), 5,32-5,18 (m, 3H), 4,92 (d, J = 11,9 1 H) , 4,68 (d, J = 11,9, 1 H) , 4,22 (td, J = 8,6, 6,1 Hz, 1 H) , 3,90-3,56 (m, 4H) , 2,28-1,87 (m, 4H) , 1,77-1,44 (m, 4H), 1,26 (dd, J = 6,8, 3,8 Hz, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,14 (d, J = 17,1 Hz, 3H), 0,92-0,84 (m, 6H). LCMS (m/z) 597,1/599,0 [ΜμΗ]' Tr = 3,61 min.
Composto 123d:
A uma solução de éster (R)-1-(7-bromo-quinolin-2-il)-etílico do ácido acético (294 mg, 1 mmol) em acetonitrilo anidro (25 ml) foi adicionado acetato de paládio(II) (45 mg, 0,2 mmol) , 123c (598 mg, 1 mmol) , tri (o-tolil) fosfina (61 mg, 0,2 mmol) e trietilamina (202 mg, 2 mmol) então a mistura foi aquecida no micro-ondas a 90 °C durante 6 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (50 ml) . 0 filtrado foi evaporado então água (50 ml) foi adicionado e os orgânicos extraídos com acetato de etilo (2 x 50 ml) . Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos em sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar um resíduo bruto. Este foi submetido a cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 % de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (246 mg, 30 %) como um sólido branco. ]H RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,33 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,98 s, 1 H) , 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,83-7,74 (m, 1 H) , 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,86-6,76 (m, 1 H) , 6,67-6,57 (m, 1 H) , 5,99 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 5,43-5,24 (m, 1 H), 4,31-4,19 (m, 1 H), 4,11 (m, 3,98-3,76 (m, 3H) , 3,66-3,57 (m, 1H) , 3,29-3,16 (m, 2H) , 2,41-2,21 (m, 3H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15-1,95 (m, 3H) , 1,93-1,73 (m, 5H), 1,67 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,28-1,18 (m, 6H), 1,06-0,77 (m, 6H). LCMS (m/z) 810,2 /812,2 [ΜμΗ]' Tr = 4,05 min.
Compostos 123 e 124
Ao 123d (170 mg, 0,21 mmol) em tetrahidrofurano (20 ml) foi adicionado uma solução de hidróxido de lítio (15 mg, 0,63 mmol) em água (10 ml) . Após agitar à temperatura ambiente durante 2 horas, ácido clorídrico a 1 M foi adicionado (0,63 ml de solução a 1 M em água, 0,63 mmol) e a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a um resíduo bruto que foi co-evaporado duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml), duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (20 ml) . 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional. 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional. Num balão seco em forno, purgado com árgon foram colocados anidrido 2-metil-
6-nitrobenzoico (289 mg, 0,84 mmol), 4-dimetilaminopiridina (308 mg, 2,52 mmol) e 1,2-dicloroetano anidro (200 ml) . A solução resultante foi aquecida a 50 °C, e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota via seringa como uma solução em N,N-dimetilformamida seca (10 ml) ao longo de 12 horas. Uma porção adicional de N,Jtf-dimetilformamida seca (2 x 5 ml) foi utilizada para completar a transferência quantitativa. Após agitar durante adicional 2 horas a 50 °C, a mistura de reação foi transferida a um funil de separação e lavada com água (100 ml, 5 ml de salmoura foi adicionada para suportar a separação) . A fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e foi lavado com 10 % de ácido cítrico (100 ml) , NaHC03 saturado (100 ml) , água (100 ml, 5 ml de salmoura foi adicionada para suportar a separação). A fase resultante aquosa foi extraída com acetato de etilo (50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 % de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar em primeiro lugar o Composto 123 (53 mg, 41 %) e então o Composto 124 (42 mg, 32 %) ambos como um sólido branco após evaporação.
Composto 123 XH RMN (500 MHz, CD30D) : δ 8,43 (d, J = 8,5
Hz, 1 H), 7,93 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,87 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1H), 7,71 (s, 1 H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,49 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 6,36 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,00 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,67 (q, J = 7,1 Hz, 1 H) , 4,42-4,35 (m, 1 H), 4,34 (d, J = 10,0 Hz, 1 H), 3,96 (td, J = 12,0, 2,2 Hz, 1 H) , 3,85-3,78 (m, 1 H) , 3,75-3,69 (m, 1 H) , 2,72 (td, J = 12,6, 3,4 Hz, 1 H), 2,42 (dd, J = 14,3, 2,1 Hz, 1 H), 2,28- 2,20 (dq, J = 13,5, 2,1 Hz, 1 H), 2,06-1,98 (m, 2H), 1,99- 1,85 (m, 2H), 1,79 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,73-1,66 (m, 2H), 1.60 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,59-1,54 (m, 1 H) , 1,29 (d, J = 11,7 Hz, 6H) , 0,98 (dd, J = 8,7, 6,7 Hz, 6H) . LCMS (m/z) 620,5 [ΜμΗ]' Tr = 3,19 min (coluna Gemini 5u C18 110Â, 50 x 4.60 mm 5 micron, 6 min, 2 ml/min, 5-100 % de acetonitrilo/ãgua, 0,1 ã de gradiente modificador de ácido acético).
Composto 124 XH RMN (500 MHz, CD30D) : δ 8,37 (d, J = 8,5
Hz, 1 H), 7,89 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,83 (dd, J = 8,8, 1,7
Hz, 1 H) , 7,65 (S, 1 H) , 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,44- 6,36 (m, 2H) , 5,99 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,63 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 4,45-4,37 (m, 1 H), 4,37-4,30 (m, 1 H), 3,88-3,82 (m, 2H) , 3,79-3,74 (m, 1H) , 2,76 (td, J = 12,8, 3,5 Hz, 1 H) , 2,40 (dd, J = 13,8, 1,8 Hz, 1 H) , 2,27-2,18 (m, 1H) , 2,12-2,05 (m, 1H) , 2,05-1,93 (m, 2H) , 1,92-1,87 (m, 2H) , 1,80 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,76-1,61 (m, 3H), 1,59-1,51 (m, 2H) , 1,27 (s, 3H) , 1,21 (s, 3H) , 1,02 (dd, J = 6,6, 2,3 Hz, 6H). LCMS (m/z) 620,5 [ΜμΗ]' Tr = 3,22 min (Gemini 5u C18 110Ã, 50 x 4,60 mm 5 micron coluna, 6 min, 2 ml/min, 5-100 ã de acetonitrilo/água, 0,1 ã de gradiente modificador de ácido acético).
Exemplo 125: Composto 125
Composto 125a
Uma solução de 1 d (981 mg, 2,27 mmol) em diclorometano (2 0 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (756 mg, 3,4 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °G sob árgon, e a solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 60 minutos. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto (LCMS (m/z) 332,2/ 334,3 [ΜμΗ] ; Tr = 2,01 min) foi dissolvido em acetonitrilo anidro (25 ml) sob ãrgon. A mistura de reação foi agitada a 0 °C, N-(terc-Butoxicarbonil)-L-isoleucina (580 mg, 2,5 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (1173 mg, 9,1 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (1300 mg, 3,4 mmol). A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 12 horas. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e a solução foi lavada com solução a 20 % em água de ácido cítrico (2 x 100 ml) , água (100 ml) e salmoura (100 ml) , seca em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40 0 de acetato de etilo μ metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (1109 mg, 89 0 ) orno um sólido branco após evaporação. 1H RMN (4 00 MHz, CD30D) δ
5,55-5,28 (m, 1 H) , 5,05 (d, J = 12,2 Hz, 1 H) , 4,85 (d, J = 12,1 Hz, 1 H) , 4,14 (q, J = 7,1 Hz, 1H) , 4,01-3,93 (m, 1H) , 3,89-3,81 (m, 1H) , 2,17-2,07 (m, 1H) , 2,00-1,81 (m, 3H), 1,80-1,69 (m, 1 H), 1,60-1,50 (m, 2H), 1,48 (s, 9H) , 1,33 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,25-1,11 (m, 1 H), 1,01-0,86 (m, 6H). LCMS (m/z) 545,3 /547,3 [MS H]; Tr = 4,13 min.;(coluna Gemini 5u C18 110Ã, 50 x 4,60 mm 5 micron, 6 min, 2 ml/min, 5-100 ã de acetonitrilo/ água, 0,1 ã de gradiente modificador de ácido acético).
Composto 125b:
Uma solução de 125a (273 mg, 0,5 mmol) em diclorometano (5 ml) foi arrefecida num banho de gelo e água. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (167 mg, 0,75 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C sob árgon, e a solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reação foi evaporada até a secura e o resíduo resultante bruto (LCMS (m/z) 431,2 / 433,3 [ΜμΗ] ' Tr = 2,06 min) foi dissolvido em acetonitrilo anidro (10 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0 °C, o ácido O-Acetil-quinolina carboxílico 22d (164 mg, 0,5 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (260 mg, 2 mmol) foram adicionados seguido de hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametil urónio (266 mg, 0,7 mmol) . A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 12 horas. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução a 20 ã em água de ácido cítrico (2 x 50 ml), água (50 ml) e salmoura (50 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-40 S de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (2 83 mg, 75 S ) como um sólido branco após evaporação. XH RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,33 (d, J = 8,5 Hz,
1 H), 7,99 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,82 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1 H), 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,16 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6,84 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 6,74 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 6,00 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 5,54-5,30 (m, 1H), 5,02 (d, J = 12,1 Hz, 1H) , 4,80 (d, J = 12,1 Hz, 1H) , 4,48- 4,16 (m, 1 H) , 3,81 (dd, J = 7,6, 4,3 Hz, 1 H) , 2,18 (s, 3H), 2,13-2,02 (m, 1 H), 1,96-1,80 (m, 3H), 1,77-1,68 (m, 1 H) , 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,59-1,51 (m, 1 H) , 1,49 (d, J = 1,8 Hz, 6H), 1,31 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,27-1,11 (m, 1 H) , 0,98 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,90 (t, J = 7,4 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 754,3/756,3 [MS H], Tr = 4,28 min.
A uma solução de 12 5b (24 8 mg, 0,33 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) foi adicionado metanol (4 ml) , água (4 ml) e hidróxido de lítio (24 mg, 1 mmol). A mistura foi agitada durante 2 horas a temperatura ambiente e foi extinta com ácido clorídrico aquoso a 1 Μ (1 ml, 1 mmol). A solução resultante foi concentrada a um resíduo bruto que foi co-evaporada duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml) , duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (20 ml). 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional. Num balão seco em forno, purgado com ãrgon foram colocados anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (452 mg, 1,3 mmol), 4-dimetilaminopiridina (481 mg, 4 mmol) e anidro 1,2-dicloroetano (200 ml). A solução resultante foi aquecida a 50 °C, e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota via seringa como uma solução em N,iV-dimetilformamida seca (10 ml) ao longo de 12 horas. Uma porção adicional de N,N- dimetilformamida seca (2x5 ml) foi utilizada para completar a transferência quantitativa. Após agitar durante adicional 2 horas a 50 °C, a mistura de reação foi transferida a um funil de separação e lavada com água (100 ml, 5 ml de salmoura foi adicionada para suportar a separação). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e foi lavado com 10 % de ácido cítrico (100 ml) , NaHC0?1 saturado (100 ml) , água (100 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase resultante aquosa foi extraída com acetato de etilo (50 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica (gradiente desde 0-50 % de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (167 mg, 90 %) como um sólido branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CD30D) : δ 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 1,15-1,63 (m, 2H) , 7,52 (s, 1 H) , 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,37 (d, J = 16,5 Hz, 1H) , 6,15 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 5,80 (q, J= 6,8 Hz, 1 H), 5,63 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 4,33-4,24 (m, 2H) , 3,70 (dd, J = 11,1, 2,8 Hz, 1H) , 2,63 (td, J = 12,6, 3,0 Hz- 1H) - 1-93-1,85 (m, 1H) , 1,83-1,65 (m, 2H) , 1,62 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,52 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,50-1,41 (m, 2H) , 1--38 (s, 3H) , 1,24 (s, 3H) , 1,19-1,02 (m, 2H) , 0,84-0,77 (m, 6H) . LCMS (m/z) 564,3 [ΜμΗ], Tr = 3,51 min.
Exemplo 126: Composto 126
Adicionou-se tetrahidrofurano (50 ml) a um balão purgado com árgon, seco no forno e a solução foi arrefecida com banho de gelo. Adicionou-se uma solução a 1,8 M de di i sopropilamida de lítio (13,9 ml, 25 mmol) em tetrahidrofurano/heptano/etilbenzeno através dos septos. A solução resultante de di i sopropilamida de lítio foi arrefecida até -78 °C e tratada gota a gota com 4-metil-piperidina-l,4-dicarboxilato de 1-terc-butilo (CAS: 124443-68-1, Oakwood Products, Inc.) (2,19 g, 9 mmol) seguido por hexametilfosforamida (1,56 ml, 1,61 g, 9 mmol). A solução resultante foi aquecida a 0 °C, agitada durante 20 min, arrefecida a -78 °C e tratada gota a gota com solução pré- arrefecida (0 °C) de 1,2-dicloroetina (cerca de 10 mmol). A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 30 min. e depois deixou-se aquecer até à temperatura ambiente. Após 4 horas à temperatura ambiente, verteu-se a mistura de reação sobre gelo triturado e extraiu-se com éter dietílico (200 ml) (adicionaram-se 5 ml de salmoura para suportar a separação). A fase orgânica foi separada e lavada com água (200 ml). Esta fase aquosa foi extraída com éter dietílico (100 ml). As frações orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml), secas sobre sulfato de magnésio, filtradas através de uma camada de 2 cm de gel de sílica (a camada de gel de sílica foi lavada com 50 ml de acetato de etilo) e depois concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi submetido a cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-15 % de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (818 mg, 34%) como um sólido branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 3,97-3,83 (m, 2H) , 3,75 (s, 3H), 3,23-3,01 (m, 2H) , 1,92- 1,75 (m, 4H), 1,43 (s, 9H). LCMS (m/z) 202,0 [M-BocpH]. Tr = 4,29 min.
Composto 126b:
Uma solução do composto 126a (787 mg, 2,61 mmol) em tetrahidrofurano (50 ml) contendo catalisador Lindlar (100 mg, Sigma-Aldrich) e carbonato de potássio (1920 mg, 13,9 mmol) foi hidrogenada à temperatura ambiente e à pressão atmosférica de hidrogénio durante 12 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (30 mL). 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (702 mg, rendimento quantitativo) como um sólido branco após evaporação. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 5,75 (dd, J = 17,6, 10,7 Hz, 1 H) , 5,20-5,01 (m, 2H) , 3,67 (s, 3H) , 3,10-2,93 (m, 2H) , 2,16-2,04 (m, 2H) , 1,63-1,48 (m, 2H) , 1,41 (s, 9H) , 1,32-1,14 (m, 2H) . LCMS (m/z) 170,1 [M-BocpH]. Tr = 3,93 min.
Composto 126c:
Tratou-se uma solução de 126b (539 mg, 2 mmol) em tetrahidrofurano/água/metanol (100 ml, 4:1:1) com hidróxido de lítio (96 mg, 4 mmol) a 40 °C durante 5 horas. A reação foi extinta com ácido clorídrico 1 M (4,2 ml, 4,2 mmol), concentrada sob pressão reduzida, dissolvida em água (50 ml) e extraída com acetato de etilo (2 x 100 ml) . Os orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (502 mg, 98 1EI ) como um sólido branco. ]Ή RMN (400 MHz, CDC13) 55,82 (dd, J = 17,5, 10,7 Hz, 1H), 5,27-5,16 (m, 2H), 3,81-3,62 (m, 2H) , 3,20-3,03 2H) , 2,17-2,06 (m, 2H) , 1,70-1,53 (m, 2H), 1,43 (S, 9H). LCMS (m/z) 254,0 [M-H]. Tr = 3,35. Intermediário 126d:
A uma solução de éster (R) -1-(7-bromoquinolin-2-il) -etílico do ácido acético (540 mg, 1,84 mmol) em 60 ml de acetonitrilo anidro adicionou-se acetato de paládio (II) (45 mg, 0,2 mmol), 126c (459 mg, 1,8 mmol), 2-di-terc- butilfosfino-3,4,5,6 -tetrametil-2',4',6'-1ri i sopropi1-1,1'-bifenilo (90 mg, 0,2 mmol) e trietilamina (0,80 ml, 6 mmol), em seguida a mistura foi aquecida no micro-ondas a 90 °C durante 2 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (30 ml) . 0 filtrado foi evaporado, depois adicionou-se água (200 ml) e os orgânicos foram extraídos com acetato de etilo (2 x 50 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para proporcionar um resíduo em bruto. Este foi sujeito a cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-30 % de acetato de etilo em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (732 mg, 87 %) como um sólido branco. RMN (400 MHz, CDC1?1) δ 8,28-8,04 (m, 2H), 7,75 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,61 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,73 (d, J = 16,3
Hz, 1 H) , 6,42 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 6,13-5,96 (m, 1 H) , 3,94-3,75 (m, 1 H), 3,25-3,08 (m, 1 H), 2,38-2,25 (m, 2H), 2,13 (s, 3H), 1,81-1,71 (m, 2H), 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,45 (s, 9H) , 1,36-1,20 (m, 2H) . LCMS (m/z) 469,1 [ΜμΗ] .
Tr= 3,78.
Composto 126e:
Uma solução de 1 e (0,32 g, 0,6 mmol) em diclorometano (10 ml) foi arrefecida num banho de água gelada. Trifluorometanossulfonato de trimetilsililo (0,20 g, 0,90 mmol) foi adicionado gota a gota a 0 °C sob árgon, e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reação foi evaporada até à secura e o resíduo bruto resultante (LCMS (m/z) 431,2/433,3 [ΜμΗ] 'Tr = 2,04 min) foi dissolvido em acetonitrilo anidro (12 ml) sob árgon. A mistura de reação foi agitada a 0 °C, adicionaram-se 126 d (195 mg, 0,40 mmol) e iV,Ardi isopropi let i lamina (0,28 ml, 1,6 mmol) seguidos de hexafluorofosfato de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio metanamínio (228 mg, 0,6 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas. 0 solvente foi evaporado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (50 ml) e a solução foi lavada com solução aquosa a 20 % de ácido cítrico (2 x 50 ml) , água (50 ml) e salmoura (50 ml) seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-40 % de acetato de etilo e metanol (4/1) em íso-hexanos) para proporcionar o composto do título (295 mg, 84 %) como um sólido branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,33 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,99 (s, 1 H), 7,90 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,81 (dd, J = 8,6, 1,5 Hz, 1 H), 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,44 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 6,86 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 6,60 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 6,00 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 5,44-5,26 (m, 1 H) , 5,01 (d, J = 12,1 Hz, 1 H) , 4,80 (d, J = 12,1 Hz, 1 H), 4,61 (sl, 1 H), 4,33-4,19 (m, 1 H), 3,81 (dd, J = 7,4, 4,3 Hz, 1 H) , 3,71-3,59 (m, 2H) 3,53- 3,38 (m, 2H) , 2,34-2,22 (m, 2H) , 2,18 (s, 3H) , 2,15-2,00 (m, 2H) , 1,97-1,81 (m, 3H) , 1,75-1,68 (m, 3H), 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,50 (s, 9H) , 1,29 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,00 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 881,1 /883,1 [ΜμΗ]' Tr = 4,37 min.
A uma solução de 126e (227 mg, 0,26 mmol) em tetrahidrofurano (10 ml) adicionou-se água (4 ml) e hidróxido de lítio (19 mg, 0,77 mmol) . A mistura foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente e foi extinta com ácido clorídrico aquoso 1 M (0,25 ml, 0,25 mmol) . Concentrou-se a solução resultante até se obter um resíduo em bruto que foi co-evaporado duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml), duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (20 ml) . 0 sólido branco resultante foi seco sob alto vácuo durante a noite e foi utilizado sem purificação adicional. Num balão purgado com árgon, seco em estufa foram colocados anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (344 mg, 1 mmol), 4- dimetilaminopiridina (366 mg, 3 mmol) e 1,2-dicloroetano anidro (200 ml). A solução resultante foi aquecida a 50 °C e o ácido seco bruto foi adicionado gota a gota através de uma seringa como uma solução em N,AT-dimetilformamida seca (10 ml) ao longo de 12 horas. Utilizou-se uma porção adicional de N, N-dimetilformamida seca (2 x 5 ml) para completar a transferência quantitativa. Após agitação durante mais 2 horas a 50 °C, a mistura de reação foi transferida para um funil de separação e lavada com água (100 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase aquosa foi extraída com diclorometano (50 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (100 ml) e foi lavado com ácido cítrico a 10 0 (100 ml), NaHCÇ) saturado (100 ml) e água (100 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com acetato de etilo (50 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-40 EEI de acetato de etilo e metanol (4/1) em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (145 mg, 81 E ) cmo um sólido branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CD30D) : δ 8,23 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,04-7,93 (m, 1 H) , 7,82 (s, 2H) , 7,68-7,60 (m, 1 H) , 7,43 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6,47 (d, J = 16,4 Hz, 6,35 (d, J = 16,6 Hz, 1 H), 5,98-5,85 (m, 1 H) , 5,81-5,64 (m, 1 H) , 4,45-4,27 (m, 1 H) , 3,94-3,78 (m, 1 H), 2,34-2,20 (m, 2H), 2,10-1,99 (m, 2H), 1,97-1,87 (m, 2H) , 1,75 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,68 (d, J = 7,2 Hz, 3H) ,
1,51 (s, 9H) , 1,41-1,29 (m, 4H) , 1,07-0,93 (m, 6H) . LCMS (m/z) 691,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,72 min.
Exemplo 127: Composto 127
Dissolveu-se o composto 126 (140 mg, 0,2 mmol) em 1,4-dioxano seco (5 ml) . Esta mistura foi purgada duas vezes com árgon e tratada com cloreto de hidrogénio 4 M em 1,4-dioxano (5 ml, 20 mmol) à temperatura ambiente sob árgon durante 6 horas. Concentrou-se a mistura de reação sob pressão reduzida, co-evaporou-se duas vezes com tetrahidrofurano (20 ml) , duas vezes com acetonitrilo anidro (20 ml) e duas vezes com tolueno anidro (2 0 ml) . Secou-se o sólido branco resultante sob alto vácuo durante a noite para se obter o sal de bis-cloreto de hidrogénio do composto do título (118 mg, rendimento quantitativo) sob a forma de um sólido branco após evaporação. RMN (400 MHz, CD30D) : δ 8,87 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 8,19 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 8,11 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 7,84 (s, 1 H) , 7,64 (d, J = 9,4 Hz, 1 H) , 6,71 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 6,63 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 6,15 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 5,59 (q, J = 7,0 Hz, 1 H) , 4,42-4,35 (m, 1 H) , 4,34-4,25 (m, 1 H) , 3,90-3,79 (m, 1 H), 3,60-3,47 (m, 1 H), 3,19-3,01 (m, 1 H), 2,74-2,45 (m, 3H), 2,39-2,20 (m, 1 H), 2,10-1,92 (m, 4H), 1,89 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,76-1,66 (m, 2H) , 1,59 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,38-1,28 (m, 2H) , 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,97 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 591,3 [ΜμΗ]. Tr = 1,81 min.
Exemplo 128: Composto 128
O composto 127 (9 mg, 0,014 mmol) foi dissolvido em THF seco (5 ml) . Esta mistura foi purgada duas vezes com árgon e adicionou-se benzaldeído (1,6 mg, 0,015 mmol), trietilamina (4,1 mg, 0,04 mmol) e triacetoxiborohidreto de sódio (4 mg, 0,019 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 dias, concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (10 ml) e foi lavado com NaHC03 saturado (10 ml) e água (10 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação) . A fase aquosa resultante foi extraída com acetato de etilo (10 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (coluna Gemini 5u C18 110 À, 5-100 % acetonitrilo/água, modificador de ácido trifluoroacético a 0,1 %) para proporcionar o sal do ácido bis- trifluoroacético do composto do título (2 mg, 16 ã) como um pó branco após evaporação. ^ RMN (400 MHz, CD30D) : δ 8,24 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,85 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,80 (s, 1 H) , 7,66 (s, 1 H) , 7,57 (s, 1 H) , 7,56-7,53 (m, 5H) , 6,39- 6,37 (m, 2H) , 5,93 (q, J = 6,5 Hz, 1 H) , 5,76 (q, J = 7,1
Hz, 1 H), 5,40-5,35 (m, 1H), 4,42-4,30 (m, 2H), 3,90-3,81 (m, 1H) , 3,72-3,61 (m, 3H) , 3,19-3,01 (m, 1H) , 2,80-2,50 (m, 3H), 2,10-1,92 (m, 4H), 1,74 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,73- 1,68 (m, 2H) , 1,67 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,38-1,28 (m, 2H), 0,99 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,95 (d, J = 6,6 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 681,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,21 min.
Exemplo 129: Composto 129
0 composto 127 (9 mg, 0,014 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano seco (5 ml). Esta mistura foi purgada duas vezes com árgon e adicionou-se acetaldeído (1,2 mg, 0,027 mmol), trietilamina (4,1 mg, 0,04 mmol) e triacetoxiborohidreto de sódio (6 mg, 0,027 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante um dia, concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (10 ml) e foi lavado com NaHC03 saturado (10 ml), agua (10 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com acetato de etilo (10 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por HPLC preparativa (coluna Gemini 5u C18 110 Ã, 5-100 % acetonitrilo/água, modificador de ácido trifluoroacético a 0,1 %) para proporcionar o sal do ácido bis-trifluoroacético do composto do título (8 mg, 68 ã) como um pó branco após evaporação. 1H RMN (400 MHz, CD30D) : δ 8,24 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,86 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,83 (S, 1 H), 7,66 (dd, J = 8,4, 1,7 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,72 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 6,31 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 6,23 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,65 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 4,43 (d, J = 9,1 Hz, 1 H) , 3,87-3,77 (m, 1 H) , 3,71- 3,60 (m, 1 H), 3,24-3,12 (m, 2H), 2,90-2,75 (m, 2H), 2,66- 2,57 (m, 1 H), 2,51-2,35 (m, 2H), 1,97-1,81 (m, 1 H), 1,77 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,62 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,43-1,31 (m, 8H), 1,29-1,22 (m, 3H) , 1,10 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,99 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 619,4 [M0 H]. Tr = 1,88 mi. Exemplo 130: Composto 130
Suspendeu-se o composto 127 (15 mg, 0,023 mmol) em diclorometano seco (10 ml) . Esta mistura foi purgada duas vezes com árgon e arrefecida a 0 °C. A trietilamina (9 mg, 0,092 mmol) estava a 0 °C. Após agitação durante 10 minutos a 0 °C, adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (3 mg, 0,025 mmol) sob a forma de uma solução em diclorometano seco (5 ml) através de uma seringa. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos e depois lavada com NaHC03 saturado (10 ml) , água (10 ml, 5 ml de salmoura foi adicionada para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com diclorometano (10 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10 ã de metanol em diclorometano) para proporcionar o composto do título (10 mg, 65 ã) como um sólido branco após evaporação. :lH RMN (400 MHz, CD30D) : δ 8,10 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,75- 7,65 (m, 2H) , 7,52 (s, 1 H) , 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,37 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 6,24 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 5,80 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,61 (q, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,36- 4,24 (m, 1 H), 4,21 (d, J = 10,6 Hz, 1 H), 4,00 (q, J = 7,1 Hz, 1H) , 3,76-3,66 (m, 1H) , 3,63-3,52 (m, 1H) , 3,51-3,41 (m, 1H) , 3,05-2,92 (m, 1H) , 2,86-2,76 (m, 1 H) , 2,74 (s, 3H), 2,68-2,55 (m, 1 H), 2,37-2,18 (m, 2H), 2,07-1,85 (m, 5H), 1,84-1,77 (m, 1 H), 1,69-1,64 (m, 1 H), 1,62 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,56-1,50 (m, 3H) , 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 6H) . LCMS (m/z) 669,3 [ΜμΗ]. Tr = 3,08 min.
Exemplo 131: Composto 131
0 composto 127 (15 mg, 0,023 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano seco (10 ml) . Esta mistura foi purgada duas vezes com árgon e arrefecida a 0 °C. A trietilamina (9 mg, 0,092 mmol) estava a 0 °C. Após agitação durante 10 minutos a 0 °C, foi adicionado 2-bromoacetonitrilo (3 mg, 0,025 mmol) como uma solução em tetrahidrof urano seco (2 ml) através de seringa. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas, concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (10 ml) e foi lavado com NaHC03 saturado (10 ml) e água (10 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com acetato de etilo (10 ml) . Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-15 % de metanol em diclorometano) para proporcionar o composto do título (9 mg, 62 %) como um sólido branco após evaporação. λΗ RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,23 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,85- 7.78 (ίϊί, 2Η) , 7,64 (s, 1 Η) , 7,43 (d, J = 8,5 Hz, 1 Η) , 6,44 (d, J = 16,5 Hz, 1 Η) , 6,34 (d, J = 16,5 Hz, 1 Η) , 5,94 (q, J = 6,8 Hz, 1 Η), 5,74 (q, J = 7,3 Hz, 1 Η), 4,66- 4,57 (m, 1 Η), 4,47-4,39 (m, 1 Η), 4,38-4,29 (m, 2Η), 3,88- 3.79 (m, 1 Η), 3,70 (s, 2Η), 2,94-2,87 (m, 1 Η), 2,85-2,69 (m, 2Η) , 2,66-2,47 (m, 2Η) , 2,47-2,31 (m, 2Η) , 2,14-1,99 (m, 4Η), 1,97-1,88 (m, 1 Η), 1,75 (d, J = 6,9 Hz, 3Η), 1,67 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,05-0, 97 (m, 6H) . LCMS (m/z) 630,3 [ΜμΗ] . Tr = 2,94 min.
Exemplo 132: Composto 132:
Suspendeu-se o composto 127 (15 mg, 0,023 mmol) em diclorometano seco (10 ml) . Esta mistura foi purgada duas vezes com árgon e arrefecida a 0 °C. A trietilamina (9 mg, 0,092 mmol) estava a 0 °C. Após agitação durante 10 minutos a 0 °C, foi adicionado cloroformato de metilo (3,3 mg, 0,025 mmol) como uma solução em diclorometano seco (5 ml) através de seringa. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos e depois lavada com NaHC0.3 saturado (10 ml) , água (10 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com diclorometano (10 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10 % de metanol em diclorometano) para proporcionar o composto do título (9 mg, 50 ã) como um sólido branco após evaporação. XH RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,23 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,87-
7,81 (m, 2H), 7,65 (s, 1 H), 7,46-7,40 (m, 1H), 6,47 (d, J = 16,5 Hz, 1H) , 6,35 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 5,93 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,74 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 4,64-4,59 (m, 1 H) , 4,46-4,40 (m, 1 H) , 4,37-4,28 (m, 2H) , 4,09-4,01 (m, 1 H) , 3,98-3,89 (m, 2H) , 3,87-3,80 (m, 1 H) , 3,73 (s, 3H) , 3,21-3,01 (m, 2H), 2,82-2,71 (m, 1 H), 2,38-2,20 (m, 2H), 2,09-1,88 (m, 6H) , 1,75 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,67 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 4,0 Hz, 3H), 0,99 (d, J = 3,9 Hz, 3H). LCMS (m/z) 649,3 [ΜμΗ]. Tr = 3,18 min.
Exemplo 133: Composto 133
Suspendeu-se o composto 127 (15 mg, 0,023 mmol) em diclorometano seco (10 ml) . Esta mistura foi purgada duas vezes com ãrgon e arrefecida a 0 °C. A trietilamina (9 mg, 0,092 mmol) estava a 0 °C. Após agitação durante 10 minutos a 0 °C, adicionou-se cloreto de pirrolidina-l-carbonilo (4,6 mg, 0,035 mmol) sob a forma de uma solução em diclorometano seco (5 ml) através de seringa. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 12 horas e depois lavada com NaHC03 saturado (10 ml) e água (10 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com diclorometano (10 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10 ã de metanol em diclorometano) para proporcionar o composto do título (10 mg, 63 ã) como um sólido branco após evaporação. ΧΗ RMN (400 MHz, CD30D) δ 8,67 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 8,23 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,85- 7,79 (m, 2H), 7,65 (s, 1 H), 7,48-7,34 (m, 1 H), 6,49 (d, J - 16,6 Hz, 1 H), 6,35 (d, J - 16,4 Hz, 1 H), 5,99-5,87 (m, 1 H) , 5,81-5,69 (m, 1 H), 4,48-4,27 (m, 1 H) , 3,87-3,58 (m, 1 H), 3,45-3,39 (m, 4H), 3,22-3,12 (m, 1H), 3,08-2,97 (m, 1H) , 2,82-2,70 (m, 1H) , 2,37-2,17 (m, 3H) , 2,08-1,97 (m, 6H), 1,97-1,84 (m, 4H), 1,75 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,66-1,44 (m, 2H) , 1,68 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,01 (d, J = 6,6 Hz, 6H). LCMS (m/z) 688,4 [ΜμΗ]. Tr = 3,16 min.
Exemplo 134: Composto 134
Suspendeu-se o composto 127 (15 mg, 0,023 mmol) em diclorometano seco (10 ml) . Esta mistura foi purgada duas vezes com árgon e arrefecida a 0 0 C. A trietilamina (9 mg, 0,092 mmol) estava a 0 °C. Após agitação durante 10 minutos a 0 °C, adicionou-se cloreto de ciclopropilmetanossulfonilo (4 mg, 0,025 mmol) como uma solução em diclorometano seco (5 ml) através de seringa. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos e depois lavada com NaHC03 saturado (10 ml) , água (10 ml, 5 ml de salmoura foram adicionados para suportar a separação). A fase aquosa resultante foi extraída com diclorometano (10 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 ml) e secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica (gradiente de 0-10 ã de metanol em diclorometano) para proporcionar o composto do título (9 mg, 55 ã) como um sólido branco após evaporação. XH RMN (400 MHz, CD30D): δ 8,23 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,87- 7,77 (m, 2H) , 7,66 (s, 1 H) , 7,43 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,48 (d, J = 16,8 Hz, 1 H) , 6,36 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 5,94 (q, J = 7,2 Hz, 1 H) , 5,75 (q, J = 7,3 Hz, 1 H) , 4,48- 4,39 (m, 1 H), 4,37-4,27 (m, 1 H), 3,88-3,76 (m, 2H), 3,71- 3,62 (m, 1 H), 3,28-3,15 (m, 4H) , 3,07-2,96 (m, 1 H), 2,82- 2,66 (m, 1 H), 2,49-2,25 (m, 2H), 2,14-1,85 (m, 3H), 1,75 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,68 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,20-1,07 (m, 1 H) , 1,00 (d, J = 6,2 Hz, 6H) , 0,80-0,64 (m, 4H) , 0,53-0,35 (m, 4H). LCMS (m/z) 709,4 [ΜμΗ]. Tr = 3,43 min. Exemplo 135: Composto 135
A 12 6d (1,3 g, 2,77 mmol) em acetona (30 ml, 0,1 ^ foi adicionado carbonato de potássio (595,2 mg, 5,55 mmol) e iodeto de metilo (0,35 ml, 4,16 mmol) . Após 18 horas, a reação foi filtrada e concentrada a vácuo. A purificação por cromatografia em coluna (25-50 12 EtOAc/hexano)deu 135a (541,4 mg, 41 0 ) como um óleo amarelo. RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,10 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,42 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,63 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 6,37 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 6,04 (q, J = 6,6 Hz, 1H) , 3,80 (m, 2H) , 3,75 (s, 3H) , 3,13 (m, 2H) , 2,28 (m, 2H) , 2,04 (s, 6H) , 1,76 (m,
2H) , 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,46 (s, 9H) . LCMS (m/z) XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,10 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,42 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 6,63 (d, J = 16,3 Hz, 1 H) , 6,37 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 6,04 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 3,80 (m, 2H) , 3,75 (s, 3H) , 3,13 (t, J = 11,2 Hz, 2H), 2,28 (d, J = 14,0 Hz, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,76 (t, J = 10,0 Hz, 2H), 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,47 (d, J - 12,0 Hz, 9H) . LCMS (m/z) 483,51 [ΜμΗ].
Composto 135b
A 135a (541,5 mg, 1,12 mmol) foi adicionada uma solução de HC1 (11,2 ml, 4 M em dioxano, 0,1 M) . Após agitação durante 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo para proporcionar a amina livre como um sólido amarelo (502,0 mg). À amina livre (99,5 mg, 0,220 mmol) em DMF (2,2 ml, 0,1 M) adicionou-se trietilamina (0,10 ml, 0,725 mmol) seguida de cloreto de acetilo (0,02 ml, 0,264 mmol). Após 90 minutos, adicionou-se água (3 ml) e NaHC03(aq) sat. (2 mL) . A reação foi então extraída com EtOAc (2 x 2 0 ml) , lavada com salmoura (20 ml), seca sobre MgS04 e concentrada a vácuo para proporcionar 135b (73,7 mg, 79ã) como um resíduo amarelo. XH RMN (400 MHz, CDC13) 5 8,12 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,64 (d, J = 16,3
Hz, 1H), 6,38 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 6,06 (m, 1H), 4,18 (m, 1H) , 3,77 (s, 3H) , 3,68 (m, 1 H) , 3,33 (m, 1H) , 3,12 (m, 1H) , 2,34 (m, 2H) , 2,16 (s, 3H) , 2,11 (s, 3H) , 1,78 (m, 2H), 1,68 (d, J = 6,7 Hz, 3H). LCMS (m/z) 425,35 [ΜμΗ]. Composto 135c
A 135b (117,3 mg, 0,353 mmol) em THF (1,5 ml, 0,25 M) e água (1,5 ml, 0,25 M) foi adicionado hidróxido de lítio monohidratado (236,7 mg, 1,06 mmol) e a mistura foi aquecida a 40 °C. Após 5 horas, arrefeceu-se a mistura de reação até à ta, acidificou-se com HCl(aq.) 1 M at® pH 4 e 6 5 mq 99 El ) concentrou-se a vácuo para se obter 135c (I6 ' y' como um sólido cor de laranja. LCMS (m/z) 369'10 [ΜμΗ] Composto 135d
Ale (166,5 mg, 0,366 mmol) em DCM (0/73 m1' 0,5 M) foi adicionada uma solução de HC1 (0,37 ml, 4 M em dioxano, 1 M). Após agitação durante 30 minutos, a teação foi concentrada a vácuo para proporcionar o dipéptido livre como um sólido amorfo, amarelo pálido. A 135c (90,0 mg, 0,244 mmol) em DCM (5 ml, 0,05 M) adicionou-se í-Pr2NEt (0,51 ml, 2,93 mmol) e dipéptido em DCM (5 ml), seguido de HATU (110,3 mg, 0,366 mmol). Após 60 minutos, adicionou-se NaHC03(aq) sat. (10 ml) e separaram-se as fases. Extraiu-se a fase aquosa com DCM (2 x 15 ml) e os orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentradas a vácuo. A purificação por cromatografia em coluna (20-100 0 EtOAc/hexano) deu 135d (19,7 mg, 10 0 ) como ma espuma amarela. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,11 (t, J = 7,0
Hz, 1H) , 7,99 (s, 1H) , 7,75 (dd, J = 8,5, 4,5 Hz, 1H) , 7,59 (t, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,34 (Dd, J = 8,4, 3,9 Hz, 1H) , 6,75 (m, 2H), 6,43 (m, 1H), 5,04 (m, 1H), 4,29 (m, 2H), 4,28 (m, 2H) , 3,62 (m, 4H) , 3,10 (m, 1H) , 2,90 (m, 2H) , 2,34 (m, 3H), 1,73 (m, 3H), 1,57 (dd, J = 6,5, 4,3 Hz, 3H), 1,29 (m 3H), 0,88 (m, 2H) Μ, 6H). LCMS (m/z) 781,17 [ΜμΗ].
A 135d (19,7 mg, 0,026 mmol) em THF (1 ml, 0,025 M) foi adicionado NaOH(aq) 0,1 M (0,51 ml, 0,051 mmol). Após, 60 minutos, a reação foi acidificada até -pH 4 com HCl(aq) 1 M, concentrada a vácuo e triturada com Et20.
0 material bruto foi dissolvido em DCE (1 ml, 0,05 M) e adicionado gota a gota através de uma bomba de seringa a uma mistura de DMAP (31,3 mg, 0,230 mmol) e anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (54,1 mg, 0,153 mmol) em DCE (13 ml, 0,005 M) a 45 °C. A reação foi arrefecida até à temperatura ambiente à medida que a adição durou 30 min. Após 18 horas, diluiu-se a mistura de reação com MeCN e purificou-se por HPLC preparativa (Gemini, 30-70 ã MeCN/H20) para se obter o Composto 135 (3,2 mg, 20 ã) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,01 (d, J = 7,9 Hz, 1 H) , 7,71 (s, 1 H) , 7,63 (d, J = 8,2 Hz, 1 H) , 7,51 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7.45 (t, J = 6,3 Hz, 1 H) , 6,33 (dd, J = 22,5, 12,3 Hz, 2H) , 6,14 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 5,86 (m, 1H) , 5,74 (m, 1H) , 4.45 (d, J = 14,1 Hz, 2H) , 3,69 (m, 2H) , 3,60 (m, 1 H) , 2,58 (m, 1 H) , 2,28 (m, 1 Η) , 1,97 (s, 1 H) , 1,93 (s, 3H) , 1,82 (m, 1 H), 1,66 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,60 (m, 2H), 1,53 (d, J = 7,0 Hz, 6H), 1,45 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,91 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,87 (d, J = 6,5 Hz, 3H). LCMS (m/z) 781,17 [ΜμΗ]. LCMS (m/z) 633,28 [ΜμΗ]. Tr = 5,29 min.
Exemplo 136: Composto 136
A 127 (16,5 mg, 0,025 mmol) em DMF (0,50 ml, 0,05 M) a 0 °C adicionou-se i-Pr2NEt (0,30 ml, 1,63 mmol), seguido de trifluorometanossulfonato de 2,2,2-trifluoroetilo (231,3 mg, 0,02 5 mmol) em DMF (0,25 ml, 0,1 M) e a mistura foi aquecida até à ta. Após 30 min, a reação em bruto foi diluída com MeCN (2 ml) e purificada por HPLC preparativa (Gemini, 50-65 % MeCN/H20) para proporcionar o Composto 136 (3,1 mg, 16 %) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,69 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,37 (d, J = 16,3 Hz, 2H), 6.22 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 6,16 (d, J = 10,2 Hz, 1 H) , 5,95 (m, 1 H) , 5,80 (m, 1 H) , 4,53 (d, J = 12,9 Hz, 1 H) , 4.22 (t, J = 9,7 Hz, 1 H), 3,71 (m, 4H), 3,37 (m, 2H), 3,10 (m, 1 H) , 3,01 (m, 3H) , 2,88 (m, 1 H) , 2,69 (m, 2H) , 2,55 (m, 1H) , 2,34 (d, J = 13,8 Hz, 1H) , 2,04 (d, J = 29,6 Hz, 4H) , 1,72 (d, J = 6,8 Hz, 6H) , 1,60 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,52 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,44 (d, J = 6,5 Hz, 6H) , 1,00 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 0,96 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . 19F RMN (376 MHz, CDCI3) δ -69,44 (s) . LCMS (m/z) 673,26 [ΜμΗ] . Tr = 5,13 min,
Exemplo 137, Composto 137
A (7-bromo-2-cloroquinolin-3-il) metanol (obtido de
BioBlocks, Inc.) (2,5 g, 9,17 mmol) em DCM (4 5 ml, 0,2 mmol) adicionou-se N1,N1, N8, N8-tetrametilnaftaleno-1,8 - diamina (9,44 g, 45,9 mmol) e tetrafluoroborato de trimetiloxónio (5,14 g, 45,9 mmol). Após 18 horas, foi adicionado HC1 (aq) 1 M (37 ml, 36,7 mmol) e as camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (75 ml) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (2 00 ml) , secos sobre MgS04 e concentrados a vácuo. A purificação por cromatografia em coluna (20-100 H EtOAc/hexano) deu 137a (1,08 g, 50 ã) como um óleo amarelo pálido. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,23 (s, 1 H), 8,21 (s, 1 H), 7,71 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,65 (dd, J = 8,7, 1,8 Hz, 1 H) , 4,64 (d, J = 1,1 Hz, 2H) , 3,58 (s, 3H) . LCMS (m/z) 288,01 [ΜμΗ].
Composto 137b
A 137a (1,29 g, 4,19 mmol) e dicloreto de bis (trifenilfosfina) paládio (II) (588,2 mg, 0,838 mmol) em dioxano (8,5 ml, 0,5 M) adicionou-se tributil(1- etoxivinil) estanho (1,4 ml (4,19 mmol) e a mistura foi aquecida a 100 °C. Após 2 horas, a reação foi arrefecida até à ta e foi adicionado HCl(aq) 1 M (8,38 ml) . Após 18 horas, a reação foi extraída com EtOAc (100 ml), lavada com NaHC03<aq) sat. (100 ml), seca sobre MgS04 e concentrada a vácuo. A purificação por cromatografia em coluna (0-50 ã EtOAc/hexano) proporcionou 137b (429,6 mg, 33 ã) como um óleo amarelo pálido. Ή RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,45 (s, 1 H) , 8,41 (s, 1 H) , 7,73 (m, 2H) , 4,92 (s, 2H) , 3,56 (s, 3H), 2,84 (s, 3H). LCMS (m/z) 295,82 [ΜμΗ].
Composto 137c
Uma mistura de dímero de dicloro(p-cimeno)ruténio (II) (5,0 mg, 0,007 mmol) e (IR,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (0,6 mg, 0,001 mmol) em água (3 ml) foi pulverizada com árgon. Após 10 minutos, a mistura foi aquecida até 70 °C. Após 90 minutos, a mistura foi arrefecida até à ta. Depois adicionou-se 137b (429,6 mg, 1,46 mmol) em THF (3 ml, 0,5 M) e formato de sódio (484,8 mg, 7,30 mmol) e aqueceu-se a mistura a 40 °C. Depois de 18 horas, arrefeceu-se a mistura de reação até à ta, extraiu-se com EtOAc (60 ml) , lavou-se com água (40 ml) e com salmoura (40 ml), secou-se sobre MgS04 e concentrou-se a vácuo. A purificação por cromatografia em coluna (15-75 0 EtOAc/hexano) proporcionou 137c (152,7 mg, 35 S ) cmo um resíduo amarelo pálido. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,25 (s,
1 H), 8,15 (s, 1 H), 7,68 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,61 (dd, J = 8,7, 1,8 Hz, 1 H), 5,11 (dd, J = 12,7, 6,3 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 2,8 Hz, 2H) , 3,48 (s, 3H) , 1,48 (d, J = 6,4 Hz, 3H). LCMS (m/z). 297,91 [ΜμΗ].
Composto 137d
A 137c (152,3 mg, 0,516 mmol) e o éster de borato indicado (166,4, 0,619 mmol) em éter ciclopentilmetílico (1,7 ml, 0,3 M) foi adicionado cloreto de bis[(diciclohexil)(4-dimetilaminofenil)fosfina]paládio (II) (22,5 mg, 0,025 mmol) e K3P04 aq. 3 M (0,51 ml, 1,55 mmol) e aqueceu-se a 90 °C. Após 60 minutos, a reação foi arrefecida para diluir com água (10 ml) e extraída com
EtOAc (2 x 10 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 e concentradas a vácuo para proporcionar 137d (325,5 mg, 99 0 ) como um óleo castanho Ih RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,13 (s, 1 H) , 8,00 (s, 1 H) , 7,76 (d, J =
8,5 Hz, 1 H) , 7,64 (d, J = 8,5 1 H) , 6,63 (m, 2H) , 5,15 (s, 1 H), 4,62 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 1,51 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,47 (s, 6H). LCMS (m/z) 344,06 [ΜμΗ]. Composto 137e
A 137d (325,5 mg, 0,516 mmol) em THF (9,5 ml, 0,1 M) foi adicionado NaOH(aq) 0,1 M (9,5 ml, 1,03 mmol) e aquecido até 40 °C. Após 4 horas, arrefeceu-se a reação foi arrefecida até à ta, acidificou-se com HCl(aq) 1 M (3,6 ml) até ~pH 4 e concentrou-se a vácuo para se obter 137e (169,8 mg, 99 0 ) como um sólido amarelo. LCMS (m/z) 330,07[ΜμΗ]. Composto 13 7f
Aid (411,0 mg, 0,773 mmol) em D CM (0,6 ml, 0,5 M) foi adicionada uma solução de HC1 (0,78 ml, 4 M em dioxano, 1 M). Após agitação durante 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo para proporcionar o dipéptido livre como um sólido amorfo, amarelo pálido. A 137e (169,8 mg, 0,516 mmol) em DCM (16 ml, 0,3 M) adicionou-se i-Pr2NEt (0,5 ml, 3,09 mmol) seguido de HATU (296,2 mg, 0,773 mmol). Após 15 minutos, adicionou-se o dipéptido livre e Pr2NEt (0,5 ml, 3,09 mmol) em DCM (5 ml) à mistura de éster ativada. Após 60 minutos, adicionou-se NaHC03 (aq) sat. (15 ml) e separaram-se as fases. A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 ml) e as fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 e concentradas a vácuo. A purificação por cromatografia em coluna (50-100 0 EtOAc/hexano) deu 137f (473,6 mg, 95 0 ) comcuma espuma amarela. LH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,12 (s, 1 H) , 8,00 (s, 1 H), 7,76 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,64 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 6,75 (d, J = 16,2 Hz, 1 H) , 6,6 0 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 5,27 (p, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,12 (m, 1 H) , 4,90 (d, J = 11,9 Hz, 1 H) , 4,66 (d, J = 11,9 Hz, 1 H) , 4,60 (d, J = 2,3 Hz, 2H) , 4,25 (m, 1 H) , 3,81 (d, J = 11,0 Hz, 1 H) , 3,70 (m, 3H) , 3,47 (s, 3H) , 3,17 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 1,89 (s, 1 H), 1,69 (t, J = 9,5
Hz, 2H), 1,49 (d, J = 6,2 Hz, 4H), 1,46 (s, 10H), 1,44 (s, 4H) , 1,41 (d, J = 6,6 Hz, 7H) , 1,27 (d, J = 6,9 Hz, 3H) ,
0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,85 (d, J = 6,8 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 744,23 [ΜμΗ].
A 137f (365,0 mg, 0,492 mmol) em THF (10 ml, 0,05 M) foi adicionado NaOH(aq) 0,1 M (10 ml, 1,00 mmol) . Após, 30 minutos, a reação foi acidificada até -pH 4 com HCl(aq) 1 M (0,9 ml), concentrada a vácuo e triturada com THF/hexano. 0 material em bruto foi dissolvido em THF (545 ml, 0,0003 M) e adicionou-se í-Pr2NEt (0,30 ml, 1,63 mmol), DMAP (5,3 mg, 0,032 mmol) e HATU (95,1 mg, 0,245 mmol) . Após 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo, diluída com água (30 ml) , extraída com EtOAc (2 x 30 ml) , seca sobre MgS04 e concentrada sob vácuo. A purificação por HPLC preparativa (Gemini, 40-65 % MeCN/H20) proporcionou o
Composto 137 (33,0 mg, 11 %) como um sólido branco. LH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,17 (s, 2H) , 7,78 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) , 7,65 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,47 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 6,09 (t, J= 8,4 Hz, 2H), 5,99 (m, 2H) , 5,66 (m, 1 H), 4,83 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 4,59 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 4,48 (d, J = 13,8 Hz, 1 Η) , 4,15 (t, J = 8,7 Hz, 1 H) , 3,75 (m, 1 H) , 2,54 (t, J = 11,3 Hz, 1 H) , 1,94 (m, 3H) , 1,84 (s, 3H) , 1,63 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,55 (d, J = 20,0 Hz, 3H), 1,46
(s, 3H) , 1,39 (s, 3H) , 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,90 (d, J = 6,6 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 594,52 [ΜμΗ] . Tr = 5,28 min. Exemplo 138: Composto 138
Uma mistura de 7-Bromo-2,4-dicloroquinolina (obtida de Aces Pharma, Inc.), (1,2 g, 4,1 mmol), trietilamina (2,07 g, 20,5 mmol), 1-(viniloxi)butano (7 ml) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,3 g, 0,26 mmol) em DMSO anidro (10 ml) num tubo de micro-ondas foi aquecida a 150 °C durante 5 horas e diluída com EtOAc (100 ml) . 0 produto bruto foi lavado com água e seco sobre Na2S04. Após concentração, o produto em bruto foi dissolvido em acetonitrilo (20 ml) e HC1 1 N (20 ml). Após extração com EtOAc (2 x 50 ml) , secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se o resíduo por cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo 1:0 até 1:1 para se obter o composto do título 138a (420 mg, 34 ã). 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,16 (s, 1 H), 7,96 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 7,83 (d, J = 8,9 Hz, 1 H) , 2,95 (s, 3H) , 2,8 9 (s, 3H). LCMS (m/z) 286,0[ΜμΗ]. Tr = 2,86 min.
Composto 138b
Dímero de dicloro (p-cimeno) ruténio (II) (5,1 mg, 0,0084 mmol) e (IR,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenediamina (7,5 mg, 0,001 mmol) foram suspensos em água desgaseif içada (7,5 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 minutos. A mistura foi agitada a 70 °C sob azoto durante 90 minutos. A mistura laranja turva resultante foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente. 138a sólido (0,5 g, 1,67 mmol) seguido de tetrahidrofurano desgaseifiçado (7,5 ml) e formato de sódio (0,57 g, 8,35 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 minutos. Agitou-se vigorosamente a mistura de reação a 40 °C durante 3 horas e deixou-se arrefecer. Depois diluiu-se com acetato de etilo e lavou-se a mistura com água (2 x) . As lavagens aquosas foram novamente extraídas com acetato de etilo e os orgânicos combinados lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para proporcionar o composto em do título 138b (0,36 g, 72 ã) como um sólido roxo. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,93 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 8,9, 1,2 Hz, 1H), 7,46 (s, 1 H) , 5,17 - 4,76 (m, 1 H) , 2,91 (d, J = 1,2 Hz, 3H) , 1,57 (dd, J = 6,7, 1,2 Hz, 3H). LCMS (m/z) 288,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,06 min.
Composto 138c
A 138b (152,3 mg, 0,5 mmol) e éster borinato (166,4, 0,619 mmol) em éter ciclopentilmetilico (1,7 ml, 0,3 M) foi adicionado cloreto de bis[(diciclohexil)(4- dimetilaminofenil)fosfina]paládio (II) (22,5 mg, 0,025 mmol) e K3P04 (aq) 3 M (0,51 ml, 1,55 mmol) e aqueceu-se até 90 °C. Após 60 minutos, a reação foi arrefecida até à ta, diluída com água (10 ml) e extraída com EtOAc (2 x 10 ml) . As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 e concentradas a vácuo para proporcionar o Intermediário 138c (325,5 mg, 99 %) como um óleo castanho. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,14 (s, 1 H), 8,00 (s, 1 H), 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,60 (m, 2H) , 5,14 (s, 1 H) , 4,62 (s, 2H) , 3,71 (s, 3H) , 3,49 (s, 3H) , 1,50 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,47 (s, 6H). LCMS (m/z) 334,06 [ΜμΗ].
Composto 138d
Ao Intermediário 138c (325,5 mg, 0,5 mmol) em THF (9,5 mL, 0,1 M) adicionou-se NaOH aq. 0,1 M (9,5 ml, 1,03 mmol) e aqueceu-se até 40 °C. Após 4 horas, a reação foi arrefecida até à ta, acidificada com solução aquosa aq. de HC1 1 Μ (3,6 ml) até -pH 4 e concentrou-se a vácuo para proporcionar 138d (169,8 mg, 99 0 ) como um sólido aarelo. LCMS (m/z) 320,2 [Mi H].
Composto 138e
A Id (411,0 mg, 0,773 mmol) em DCM (0,6 ml, 0,5 M) foi adicionada uma solução de HC1 (0,78 ml, 4 M em dioxano, 1 M) . Após agitação durante 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo para proporcionar o dipéptido livre como um sólido amorfo, amarelo pálido. A 138d (170 mg, 0,516 mmol) em DCM (17 ml, 0,3 M) adicionou-se í-Pr2NEt (0,5 ml, 3,0 9 mmol) seguido de HATU (296,2 mg, 0,773 mmol). Após 15 minutos, adicionou-se o dipéptido livre e íPr2NEt (0,5 ml, 3,09 mmol) em DCM (5 ml) à mistura de éster ativada. Após 60 minutos, adicionou-se NaHC03(aq) sat. (15 ml) e separaram-se as fases. A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 ml) e as fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 e concentradas a vácuo. A purificação por cromatografia em coluna (50-100 ã EtOAc/hexano) proporcionou 138e (473,6 mg, 95 ã) como uma espuma amarela. LH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,12 (s, 1 H) , 8,02 (s, 1 H) , 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,62 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 6,75 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 6,34 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 5,27 (p, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,12 (m, 1 H), 4,95 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,66 (d, J = 11,9 Hz, 1 H) , 4,62 (d, J = 2,3 Hz, 2H) , 4,25 (m, 1 H) , 3,81 (d, J = 11,0 Hz, 1 H) , 3,70 (m, 3H) , 3,47 (s, 3H) , 3,21 (m, 2H), 2,12 (m, 2H), 1,89 (s, 1 H), 1,69 (t, J = 9,5
Hz, 2H), 1,49 (d, J = 6,2 Hz, 4H), 1,46 (s, 10H), 1,34 (s, 4H), 1,41 (d, J = 6,6 Hz, 7H), 1,26 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,92 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,87 (d, J = 6,8 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 733,1 [ΜμΗ].
A 138e (365,0 mg, 0,492 mmol) em THF (10 ml, 0,05 M) foi adicionado NaOH aq. 0,1 M (10 ml, 1,00 mmol) . Após 30 minutos, a reação foi acidificada a -pH 4 com HC1 ( aq) 1 M (0,9 ml), concentrada a vácuo e triturada com THF/hexano.
0 material em bruto foi dissolvido em THF (545 ml, 0,0003 M) e foi adicionado í-Pr2NEt (0,30 ml, 1,63 mmol) , DMAP (5,3 mg, 0,032 mmol) , e HATU (95,1 mg, 0,245 mmol) . Após 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo, diluída com água (30 ml) , extraída com EtOAc (2 x 30 ml) , seca sobre MgS04, e concentrada a vácuo. A purificação por meio de HPLC preparativa (Gemini, 40-65 % MeCN/H20) proporcionou o Composto 138 (30 mg, 10 %) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,11 (d, J = 6 Hz, 1 H) , 7,89 (m, 1 H) , 7,63 (s, 1 H) , 7,56 (s,1 H) , 6,52 (d, J = 12 Hz, 1H) , 6,22 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,84 (m, 1H), 5,69 (m, 1 H), 4,42 (cm, 2H) , 4,26 (d, J = 6 Hz, 1 H) , 3,77 (ml, 1 H) , 2,73 (m, 1 H), 1,90 (m, 3H), 1,65 (m, 6H), 1,44 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 0,94 (m, 6H). LCMS (m/z) 584,5 [ΜμΗ]. Tr = 2,28 min.
Exemplo 139: Composto 139
138e, 50 mg em 5 ml em THF/água é em primeiro lugar hidrolisado para remover o éster TCE. 0 produto bruto resultante foi absorvido em solução de MeOH/NaOMe aquecida a 60 °C durante 1 h. A mistura de reação foi ajustada até pH 7 com HC1 aq. 1 N e a mistura em bruto concentrada até um resíduo que foi absorvido em DMF e ciclizado utilizando HATU. 0 produto de ciclização resultante foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa. O produto resultante, 6 mg, foi obtido após remoção de solvente através rotavap e alto vácuo. RMN (400 MHz, CD3CN) δ 8,03 (s, 1 H) , 7,60 (m, 1H), 7,46 (m, 1H), 6,68 (s, 2H), 6,43 (d, J=12 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,85 (m, 1 H), 5,66 (m,1 H), 4,37 (m, 2H) , 4,06 (s, 3H) , 3,73 (m, 1 H) , 3,49 (m, 1 H) , 1,51 (m, 3H) , 1,70-1,45 (cm, 9H) . LCMS (m/z) 580,1 [ΜμΗ] . Tr = 2,15 min.
Exemplos 140 e 141: Compostos 140 e Composto 141
Composto 138c, 150 mg (0,5 mmol, 1 equiv) em 5 ml em DMA é aquecido com 1,2 equiv de Zn (CN) 2 a 120 °C na presença de catalisador de Pd durante 1 h. 0 produto não purificado (150 mg) foi então hidrolisado, e acoplado com tripéptido le utilizando condições relatadas para o Exemplo 7. Depois da hidrólise de TCE através de tratamento com NaOH e neutralização, o intermediário de ácido seco foi lactonizado utilizando condições Shiina padrão. A mistura de reação foi ajustada até pH 7 com HC1 aq. 1 N e a mistura em bruto concentrada até um resíduo que foi absorvido em DMF e purificado por HPLC preparativa de fase reversa. 0 produto resultante, composto 140, 2 mg, foi obtido num rendimento global de 0,7 % após remoção de solvente por rotavap e alto vácuo. 1H RMN (400 MHz, CD3CN) δ 8,07 (d, J = 6 Hz, 1 H) , 8,02 (m, 1 H) , 7,76 (m, 1 H) , 7,64 (m, J = 6,5 Hz, 1H), 6,73 (m, 1H), 6,48 (m, 1H), 5,99 (m,2H), 5,15 (s, 1H) , 3,83 (ml, 2H) , 2,76 (m, 1H), 1,91-1,65 (cm, 8H) , 0,81 (m, 6H). LCMS (m/z) 575,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,01 min.
Depois de purificação por HPLC, 0,5 mg de um segundo isómero do produto, 141, foram isolados por purificação de HPLC.
XH RMN (400 MHz, CD3CN) : δ 8,05 (d, J = 6,4 Hz, 1 H) , 7,98 (m, 1 H) , 7,86 (m, 1 H) , 7,60 (m, J = 6,5 Hz, 1 H) , 6,65 (m, 1 H) , 6,40 (m, 1 H) , 5,89 (m, 2H) , 5,05 (s, 1 H) , 3,80 (ml, 2H) , 2,71 (m, 1 H), 1,81-1,60 (cm, 8H), 0,88 (m, 6H). LCMS (m/z) 575,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,05 min.
Exemplo 142: Composto 142 Composto 142a
A (R)-1-(7-bromonaftalen-2-il)etanol 70b, (1,5 g, 5,16 mmol) e o éster de borinato indicado 17c (1,66g, 6,6 mmol) em éter ciclopentilmetilico (17 ml, 0,3 M) foi adicionado cloreto de bis[(diciclohexil)(4- dimetilaminofenil)fosfina]paládio(II) (225 mg, 0,25 mmol) e K3PO4 3 M (5,1 ml, 15,5 mmol) e aqueceu-se até 90 °C. Após 60 minutos, a reação foi arrefecida até a ta, diluída com água (10 ml) e extraída com EtOAc (2 x 10 ml). Os orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados a vácuo para proporcionar 142a (1,80 g, cerca de rendimento quantitativo) como um óleo castanho. RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,12 (s, 1H) , 8,01 (s, 1 H) , 7,75 (d, 1 H) , 7,63 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,62 (m, 2H), 5,14 (s, 1 H), 4,61 (s, 2H) , 3,72 (s, 3H) , 3,48 (s, 3H) , 1,50 (d, 3H) , 1,46 (s, 6H). LCMS (m/z) 299,1 [ΜμΗ].
Composto 142b
A 142a (326 mg, 0,516 mmol) em THF (9,5 ml, 0,1 M) foi adicionado NaOH 0,1 M (9,5 ml, 1,03 mmol) e aqueceu-se até 40 °C. Após 4 horas, a reação foi arrefecida até à ta, acidificada com HC1 aq. 1 M (3,6 ml) até ~pH 4 e concentrada a vácuo para proporcionar 142b (307 mg, 99 ã) como um sólido amarelo. LCMS (m/z) 285,2 [ΜμΗ].
Composto 142c
A 1 d (411,0 mg, 0,773 mmol) em D CM (0,6 ml, 0,5 M) foi adicionado uma solução de HC1 (0,78 ml, 4 M em dioxano, 1 M) . Após agitar durante 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo para proporcionar o dipéptido livre como um sólido amorfo, amarelo pálido. A 142b (169,8 mg, 0,516 mmol) em DCM (16 ml, 0,3 M) foi adicionado í-Pr2NEt (0,5 ml, 3,09 mmol) seguido de HATU (296,2 mg, 0,773 mmol). Após 15 minutos, o dipéptido livre e iPr2NEt (0,5 ml, 3,09 mmol) em DCM (5 ml) foram adicionados à mistura de éster ativada. Após 60 minutos, NaHC03 aq. sat. (15 ml) foi adicionado e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 ml); e os orgânicos combinados foram secos sobre MgS04 e concentrados a vácuo. A purificação por meio de coluna de cromatografia (50-100 % EtOAc/hexano) proporcionou 142c (580 mg, 94 %) como uma espuma amarela. RMN (4 00 MHz, CDClj) δ 8,12 (s, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,63 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 6,75 (d, J = 16,2 Hz, 1 H) , 6,62 (d, J = 16,2 Hz, 1H) , 6,35 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 5,28 (p, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,12 (m, 1 H), 4,92 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,64 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,68 (d, J — 2,3 Hz, 2H) , 4,24 (m, 1 H) , 3,80 (d, J = 11,0 Hz, 1 H) , 3,72 (m, 3H) , 3,45 (s, 3H) , 3,15 (m, 2H) , 2,12 (m, 2H) , 1,88 (s, 1 H) , 1,68 (t, J = 9, 5 Hz, 2H) , 1,45 (d, J = 6,2 Hz, 4H) , 1,44 (s, 10H), 1,42 (s, 4H), 1,39 (d, J = 6,6 Hz, 7H), 1,26 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,84 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LCMS (m/z) 696,23 [M+H].
Ao Intermediário 142c (355,0 mg, 0,492 mmol) em THF (10 ml, 0,05 M) foi adicionado NaOH(aq) 0,1 M (10 ml, 1,00 mmol) . Após, 30 minutos, a reação foi acidificada a ~pH 4 com HCl(aq) 1 M (0,9 ml), concentrada a vácuo e triturada com THF/hexano.
O material em bruto foi dissolvido em THF (545 ml, 0,0003 M) e foi adicionado i-Pr2NEt (0,30 ml, 1,63 mmol), DMAP (5,3 mg, 0,032 mmol), e HATU (95,1 mg, 0,245 mmol). Após 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo, diluída com água (30 ml) , extraída com EtOAc (2 x 30 ml) , seca sobre MgS04 e concentrada a vácuo. A purificação por meio de HPLC preparativa (Gemini, 40-65 ã MeCN/H20) proporcionou o Composto 142 (28,0 mg, 11 0 ) como um sólido brano. 1H RMN (400 MHz, CD30D) δ 7,82 (s, 2H) , 7,75 (t, 1 H) , 7,54 (d, 1 H) , 7,45 (s,1 H) , 6,37 (d, J = 12 Hz, 1 H) , 6,24 (d, J = 12 Hz, 1 H), 5,99 (m, 1 H), 5,62 (m, 1 H), 4,62 (d, J = 9 Hz, 1 H) , 4,39 (m, 2H) , 3,75 (m, 1 H) , 2,69 (m, 1 H) , 1,90 (m, 3H) , 1,63 (m, 6H) , 1,46 (s, 3H) , 1,31 (s, 3H) , 0,98 (d, J = 6 Hz, 3H), 0,92 (d, J = 6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 549,52 [ΜμΗ]. Tr = 2,28 min.
Exemplo 143: Composto 143 Composto 143a
Cloridrato de (R)-1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etilamina 143a
Uma solução de [1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etil]-amida de ácido (R,R)-2-metil-propano-2-sulfínico (932 mg, 3 mmol) em metanol (9 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob azoto. HC1 4 M em dioxano (3 ml, 12 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi triturado com éter. 0 sólido laranja foi recolhido, lavado com éter e seco para proporcionar o composto do título (777 mg) . RMN (300 MHz, d6 -DMSO) δ 1,61 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 4,58-4,67 (m, 1H), 7,90 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 8,04 (1, 1 H), 8,05 (1, 1 H), 8,26 (d, J = 8,5, 1 H) , 8,65-8,8 (1, 3H) , 9,25 (s, 1 H) . LCMS (m/z) 207/209 [ΜμΗ], Tr 0,72 minutos. Éster terc-butílico de ácido [(R)-1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etil]-carbâmico 143b
Uma mistura de cloridrato de (R)-1-(3-cloro-isoquinolin-6-il)-etilamina 143a (730 mg, 3 mmol) e trietilamina (909 mg, 1,25 ml, 9 mmol) em diclorometano (25 ml) foi agitada à temperatura ambiente para proporcionar uma solução. Uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (981 mg, 4,5 mmol) em diclorometano (5 ml) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A solução foi lavada com água e salmoura, seca, filtrada e evaporada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com 10-30 0 de acetato de etilo em isohexanos para proporcionar o composto do título (714 mg, 79 0 ao longo de 2 etaps) como um sólido branco. XH RMN (300 MHz, CDC13) δ 1,44 (s, 9H) , 1,53 (d, J = 6,5 Hz, 3H) , 4,9-5,0 (1, 2H), 7,57 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,67 (1, 1 H) , 7,71 (1, 1 H) , 7,96 (d, J = 8,5, 1 H) , 9,05 (S, 1 H) . LCMS (m/z) 307/309 [ΜμΗ], Tr 2,67 minutos.
Composto 143c
143b (200 mg, 0,51 mmol) foi submetido a reação de Suzuki utilizando o método descrito no Exemplo 49. O produto não purificado foi dissolvido em THF (9,5 ml, 0,1 M) e a esta solução foi adicionado NaOH 0,1 M (9,5 ml, 1,03 mmol), seguido de aquecimento até 40 °C. Após 3 horas, a reação foi arrefecida até à ta, acidificada com HC1 1 M (3,6 ml) até ~pH 4 e concentrada a vácuo para proporcionar 143c (191 mg, 99 0 ) como um sólido amarelo. LCMS (çáz) 385,07 [ΜμΗ].
Composto 143d
A 1 e (411,0 mg, 0,773 mmol) em DCM (0,6 ml, 0,5 M) foi adicionada uma solução de HC1 (0,78 ml, 4 M em dioxano, 1 M) . Após agitar durante 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo para proporcionar o dipéptido livre como um sólido amorfo, amarelo pálido. A 143c (170 mg, 0,516 mmol) em DMF (12 ml, 0,3 M) foi adicionado í-Pr2NEt (0,9 ml, 3,09 mmol) seguido de HATU (296,2 mg, 0,773 mmol). Após 15 minutos, o dipéptido livre e iPr2NEt (0,9 ml, 5,09 mmol) em DCM (5 ml) foi adicionado à mistura de éster ativada. Após 60 minutos, NaHC03 aq. sat. (15 ml) foi adicionado e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 ml) ; e os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio e concentrados a vácuo. A purificação por meio de coluna de cromatografia (50-100 0 EtOAc/hexano) proporcionou 143d (780 mg) como uma espuma amarela. ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,14 (s, 1H), 8,00 (s, 1 H), 7,66 (d, J = 8 Hz, 1 H), 7,53
(d, J = 8 Hz, 1 H), 6,75 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 6,34 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 5,27 (m, 1 H), 5,12 (m, 1 H) , 4,85 (m, 1 H) , 4,56 (d, J = 11,9 Hz, 1 H) , 4,60 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 4,25 (m, 1 H), 3,81 (d, J = 11,0
Hz, 1 H) , 3,70 (m, 3H) , 3,47 (s, 3H) , 3,17 (m, 2H) , 2,12 (m, 2H), 1,89 (s, 1 H), 1,69 (t, J = 9,5 Hz, 2H), 1,49 (d, J = 6,2 Hz, 4H) , 1,46 (s, 10H) , 1,44 (s, 4H) , 1,41 (d, J = 6,6 Hz, 7H), 1,27 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,85 (m, 3H). LCMS (m/z) 796,3 [ΜμΗ].
A 143c (350 mg, 0,49 mmol) em THF (10 ml, 0,05 M) foi adicionado NaOH 0,1 M (10 ml, 1,00 mmol). Após, 30 minutos, a reação foi acidificada até -pH 4 com HC1 aq. 1 M (0,9 ml) , concentrada a vácuo, e triturada com THF/hexano. A remoção com N-Boc foi depois levada a cabo utilizando o procedimento padrão para dar o material como um sólido depois da remoção do solvente. 0 material em bruto resultante (cerca de 100 mg) foi dissolvido em THF (445 ml, 0,001 M) e adicionou-se í-Pr2NEt (0,30 ml, 1,63 mmol), DMAP (5,3 mg, 0,032 mmol) e HATU (95,1 mg, 0,245 mmol). Após 18 horas, a reação foi concentrada a vácuo, diluída com água (30 ml), extraída com EtOAc (2 x 30 ml), seca sobre MgS04 e concentrada a vácuo. A purificação por meio de prep HPLC (Gemini, 40-65 ã MeCN/H20) proporcionou o Composto 143 (4 mg) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,17 (s, 2H), 7,78 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 6,47 (d, J = 6,1 Hz, 2H) , 6,09 (t, J = 8,4 Hz, 2H) , 5,99 (m, 2H) , 5,66 (m, 1 H) , 4,83 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 4,59 (d, J = 12,3 Hz, 1 H) , 4,48 (d, J = 13,8 Hz, 1 H) , 4,15 (t, J = 8,7 Hz, 1 H), 3,75 (m, 1 H), 2,54 (t, J = 11,3 Hz, 1 Η) , 1,94 (m, 3H) , 1,84 (s, 3H) , 1,63 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,55 (d, J = 20,0 Hz, 3H), 1,46 (s, 3H), 1,39 (s, 3H), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,90 (d, J = 6,6 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 550,52 [ΜμΗ]. Tr = 1,75 min.
Exemplo 144: Composto 144
Seguindo o esquema sintético do Exemplo 148, 2g 7 -bromo-2-cloro-4-metilquinolina (obtida de BioBlocks, Inc.) foi avançada até que a ciclização final mediada por HATU deu 25 mg do composto final 144. 0 produto bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 144 (20 mg, 0,3 ã) como um sólido branco. 1H RMN (4 00 MHz, Metanol - d4) δ 7,88 (d, J = 6,8 Hz, 1 H) , 7,68 (d, J = 6,8 Hz, 1 H) , 7,53 (s, 1 H), 7,16 (slH), 6,38 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 6,15 (d, J = 12,2 Hz), 5,76 (m, 1 H), 5,64 (m, 1 H), 4,32 (m, 1 H), 4,17 (d, J = 9,0 Hz), 3,71 (m, 1 H), 3,22 (s, 3H), 2,06 (m, 1 H) , 1,92 - 1,71 (m, 8H) , 1,57 (s, 3H) , 1,44 (s, 3H) , 0,93 (m, 6H). LCMS (m/z) 564,2 [ΜμΗ]. Tr = 2,10 min.
Exemplo 145: Composto 145
145 foi preparado utilizando a sequência sintética relatada para o composto 31, iniciando-se alternativamente a partir de 2g de (R)-1-(7-bromonaftalen-2-il)etanol 70b. Após uma sequência de múltiplas etapas seguindo a relatada para o exemplo 31, a remoção final com TBS no penúltimo macrociclo utilizando HF aq./piridina seguida de HPLC forneceu 2 mg (0,05 0 de rendimento) do composto fiai 145. :lH RMN (400 MHz, CD3CN) δ 7,93 (s, 1 H) , 7,81 (cm, 3H) , 7,69-7,60 (cm, 2H), 6,90 (m, 1 H), 6,52 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 6,05 (m,2H), 5,55-5,40 (cm, 2H), 4,98 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 4,42 - 4,15 (m, 1 H), 2,78 (m, 2H), 2,06 (m, 1 H), 1,92 - 1,71 (m, 3H), 1,55-1,51 (m, 3H), 1,46 (m, 6H), 1,25 (m, 3H) , 0,93-0,85 (cm, J = 6,5 Hz, 6H) . LCMS (m/z) 565,2 [ΜμΗ]. Tr = 2,25 min.
Exemplo 146: Composto 146
Uma mistura de ácido D-lático (1,004 g, U.l* nunol) e imidazol (1,895 9' 27'84 mmol> em CH2C12 (15 ml) 6 DMF (5 ml) foi agitada à ta à medida que cloreto de^ terc- butildifenilsililo 0,15 ml, 12,31 mmol) fo1 adicionado. Após a mistura resultante ser agitada à ta durante 3 dias, a mistura de reação foi concentrada para remover CH2C12 e diluída com acetato de etilo antes de lavagem com solução aq. de LiCl a 5 0 (x 2) . Após as frações aquosas seem extraídas com acetato de etilo (xl), as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (120 g coluna) utilizando hexanos-acetato de etilo como eluentes para obter 2,28 g (62 0 ) do produto. *Η RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,71 - 7,58 (m, 4H), 7,53 - 7,34 (m, 6H), 4,33 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 1,31 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,12 (s, 9H). LCMS (m/z) 327,0 [Μ - H], Tr 2,59 min.
Composto 146b
Uma mistura do reagente (1,027 g, 4,776 mmol), ácido 146a (1,572 g, 4,786 mmol) e HATU (2,726 g, 7,169 mmol) em DMF (10 ml) foi agitada à ta à medida que Dl EA (3,25 ml, 19,233 mmol) foi adicionado. Após 2 h, a mistura de reação foi diluída com acetato de etilo e lavada com solução aq. de LiCl a 5 0 (x 2) . Após as frações aquosas serem extraídas com acetato de etilo (x 1) , as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos -acetato de etilo como eluentes para obter 1,298 g (52 E ) do produto. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 11,74 (s, 1 H) , 8.88 (d, J = 1,9 Hz, 1 H), 7,77 - 7,71 (m, 2H), 7,69 - 7,61 (m, 2H) , 7,52 - 7,30 (m, 7H) , 7,27-7,23 (m, 1 H) , 5,82 (s, 2H) , 4,31 (q, J = 6,7 Hz, 1H) , 1,24 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,15 (s, 9H).
Composto 146c
Uma mistura do reagente 146b (1,186 g, 2,257 mmol) e p-TsOH monohidratado (22 mg, 0,116 mmol) em tolueno (20 ml) foi submetida a refluxo durante 15 h. Após adição de p-TsOH monohidrato adicional (64 mg, 0,336 mmol), a mistura foi ainda submetida a refluxo durante 4 h antes de concentração. 0 resíduo foi purificado por meio de
CombiFlash utilizando hexanos - acetato de etilo como eluentes para obter 591 mg (52 EI ) de 146c. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 9,57 (s, 1 H), 8,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7.89 (d, J = 1,7 Hz, 1 H) , 7,70 - 7,64 (m, 2H) , 7,59 (m, 3H) , 7,49 - 7,29 (m, 6H) , 4,97 (q, J = 6, 6 Hz, 1H) , 1,47 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,16 (s, 9H) . LCMS (m/z) 506,9 [Μ μ H], Tr 2,69 min.
Composto 146d
Uma mistura do reagente 146c (200 mg, 0,394 mmol) ,
Pd(OAc)2 (9,2 mg, 0,041 mmol), (o-Tol)3P (12,5 mg, 0,041 mmol), do ácido (50,6 mg, 0,443 mmol) e NEt3 (0,25 ml, 1,794 mmol) em acetonitrilo (4 ml) foi aquecida durante 20 min a 100 °C num reator MW. Após a mistura ser concentrada e o resíduo ser tratado com água (20 ml) e solução saturada de NH4C1 (20 ml) , o produto foi extraído com acetato de etilo (x 2) e os extratos combinados foram secos (Na2S04) e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos-acetato de etilo como eluentes para obter 182 mg (85 %) do produto 146d. ΧΗ RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 10,14 (s, 1 H), 8,19 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,70 (ddd, J = 6,8, 1,9, 1,0 Hz, 2H), 7,61 - 7,52 (m, 3H) , 7,52 - 7,23 (m, 8H) , 6,71 - 6,61 (m, 1 H) , 6,54 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 4,85 (q, J = 6,5 Hz, 1 H), 1,45 (s, 6H) , 1,42 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,16 - 1,10 (m, 9H) . LCMS (m/z) 541,0 [Μ μ H], Tr 2,69 min.
Composto 146e A uma solução do tripéptido (183 mg, 0,344 mmol) em CH2C12 (2 ml) foi adicionado HC1 4 N em dioxano (2 ml) e a mistura foi agitada à ta durante 1 h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi co-evaporado com tolueno (x 3). Após o resíduo ser seco em vácuo e HATU (154 mg, 0,405 mmol) ser adicionado ao resíduo, uma solução do reagente (182 mg, 0,337 mmol) em CH2C12 (2 ml) e DMF (2 ml) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada a 0 °C à medida que DIEA (0,22 ml, 1,263 mmol) foi adicionada. Após 1 h, a mistura de reação foi diluída com solução aq. de LiCl a 5 0 e o produto foi extraído com acetato deetilo (x 2). Os extratos foram lavados com solução aq. de LiCl a 5 ã (x 1) , combinados, secos (Na2S04) e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos -acetato de etilo como eluentes para obter 271 mg (84 0 ) do produto 146e. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,21 (d, J = 8,2 Hz, 1 H) , 7,68 (dd, J = 7,8, 1,7 Hz, 2H) , 7,62 - 7,56 (m, 2H), 7,53 (d, J = 10,3 Hz, 2H), 7,47 (t, J = 6,9 Hz, 1 H) , 7,44 - 7,35 (m, 4H) , 7,32 (dd, J = 8,0, 6,6 Hz, 2H) , 6,69 - 6,54 (m, 3H), 6,30 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 5,33 - 5,23 (m, 1 H) , 4,93 (d, J = 11,9 Hz, 1 H) , 4,85 (1, 1 H) , 4,68 (dd, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,32 (d 1, J = 13,9 Hz, 1 H), 4,29 - 4,23 (m, 1 H), 3,80 (d, J = 11,1 Hz, 1 H), 3,67 (m, 1 H) , 2,89 (1, 1 H), 2,17 (1, 1H), 2,09 (m, 1 Η), 1,91 (1, 1 H), 1,71 (m, 2H), 1,42 (m, 7H), 1,33 - 1,20 (m, 3H), 1,15 (d, J = 1,4 Hz, 9H), 0,92 (dd, J = 6,9, 1,9 Hz, 3H), 0,87 (d, J = 6,5 Hz, 3H). LCMS (m/z) 954,2 [M 0 H], Tr 2,88 min.
Composto 146f
Uma solução do reagente 146e (271 mg, 0,284 mmol) e TBAF (95 mg, 0,363 mmol) em THF (3 ml) foi agitada à ta durante 1 h. A mistura de reação foi diluída com CH2C12 e lavada com água (x 2) . Após as frações aquosas serem extraídas com CH2C12 (x 1) , as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando acetato de etilo - 20 ã MeOH/ acetato de etilo como eluentes para obter 4 3 mg (21 ã) do produto 146f. λΗ RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 7,75 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,50 - 7,18 (m, 4H) , 7,09 (s, 1 H) , 6,56 (s, 2H) , 5,44 - 5,25 (m, 1 H) , 4,98 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 4,88 - 4,75 (m, 1 H), 4,68 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,34 (m, 1 H) , 4,23 (t, J = 8,6 Hz, 1 H) , 3,71 (m, 1 H) , 2,92 (1, 1 H) , 2,18 (m, 2H) , 1,92 (m, 1 H) , 1,73 (m, 3H) , 1,65 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,51 (1, 3H) , 1,45 - 1,30 (m, 7H), 0,98 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,97 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 715,1 [Μ μ H], Tr 2,15 min.
Composto 146g
Uma suspensão do reagente 146f (43 mg, 0,060 mmol) e
LiOH (6,0 mg, 0,143 mmol) em THF (2 ml) e água (2 ml) foi agitada à ta durante 1 h. Depois de a mistura de reação ser concentrada até um pequeno volume, o resíduo restante foi co-evaporado com tolueno (x 4) e DMF (x 1) . O resíduo foi misturado com dioxano e seco por congelação para obter um ácido bruto. LCMS (m/z) 585,1 [Μ μ H], Tr 1,75 min.
Uma solução de anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (126 mg, 0,365 mmol) e DMAP (72 mg, 0,589 mmol) em DCE (50 ml) foi agitada em banho a 50 °C à medida que uma solução do reagente bruto 146 g em DMF (2,5 ml) foi adicionada ao longo de 6 h. Após 4 0 min desde a adição, a solução foi concentrada e a mistura de DMF residual foi diluída com solução de LiCl a 5 S antes de extrações com acetaò de etilo (x 2). Depois de os extratos serem lavados com solução de LiCl a 5 0 (x 1) , combinados, secos (Ν§β04) , e concentrados, o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando acetato de etilo - 20 0 MeOH/acetato de etilo como eluentes. O produto recolhido foi ainda purificado por meio de HPLC preparativa (x 2) . As frações recolhidas foram combinadas, concentradas para remover a maioria de MeCN, diluídas com água, neutralizadas com alguma solução de NaHC03 e extraídas com acetato de etilo (x 2) . Os extratos orgânicos foram lavados com água (x 1) , combinados, secos (Na2S04) , e concentrados para obter o produto puro. O produto foi dissolvido em dioxano e seco por congelação para obter 8,4 mg (25 0 ) . 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,65 (d, J = 6,9 Hz, 1 H) , 8,14 - 7,97 (m, 1 H), 7,65 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1 H), 7,29 (d, J = 1,6 Hz, 1 H) , 7,20 (d, J = 9,6 Hz, 1 H) , 6,49 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 6,22 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 5,61 (p, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,42 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,36 (d, J = 13,2 Hz, 1 H) , 4,27 (t, J = 9,9 Hz, 1 H), 3,79 - 3,66 (m, 1 H), 2,82 - 2,65 (m, 1 H) , 1,99 - 1,79 (m, 2H) , 1,67 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,72 - 1,62 (m, 1 Η), 1,56 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,48 (s, 1,32 (s, 3H) , 1,40 - 1,15 (m, 3H) , 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,92 (d, J = 8,0 Hz, 3H). LCMS (m/z) 567,2 [Μ μ H], Tr 3,70 min. Exemplo 147: Composto 147
Uma suspensão do brometo 146c (435 mg, 0,857 mmol), do éster de boronato 17c (246 mg, 0,968 mmol) ,
PdCl2 [ (cyHex) 2 (Me2NPh) 2P] 2 (38 mg, 0,047 mmol) e K3P04 (556 mg, 2,619 mmol), em éter ciclopentilmetílico (4 ml) e água (2 ml) foi desgaseifiçada e agitada a 90 °C durante 3,5 h. A mistura foi diluída com EA e lavada com água (x 2) .
Depois de as frações aquosas serem extraídas com acetato de etilo (x 1) , as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos - acetato de etilo como eluentes para obter 369 mg (78 %) do produto 147a. XH RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 9,65 (s, 1 H), 8,20 (d, J = 8,3
Hz, 1 H) , 7,69 (dd, J = 8,0, 1,5 Hz, 2H) , 7,58 (dd, J = 6,7, 1,5 Hz, 2H), 7,53 (s, 1 H), 7,47 (td, J= 7,1, 1,6 Hz, 2H), 7,43 - 7,35 (m, 3H), 7,35 - 7,24 (m, 2H), 6,62 (d, J= 16.2 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 4,83 (q, J = 6,6
Hz, 1 H) , 3,70 (s, 3H) , 1,43 (s, 6H) , 1,41 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,14 (s, 9H). LCMS (m/z) 555,1 [Μ μ H], Tr 2,72 min. Composto 147b
Uma solução de 147a (369 mg, 0,665 mmol) em DMF (4 ml) foi agitada a 0 °C à medida que NaH (60 ã em óleo mineral, 42 mg, 1,05 mmol) foi adicionado. Após agitar a 0 °C durante 1 h, Mel (0,1 ml, 1,606 mmol) foi adicionado à suspensão resultante e a mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h. A mistura foi diluída com EA e lavada com solução de LiCl a 5 I (x 2) . Depois de as frações aquosas serm extraídas com acetato de etilo (x 1), as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) , e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos -acetato de etilo como eluentes para obter 358 mg (95 ã) do produto N-alquilado 147b. ‘Ή RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,13 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 7,70 - 7,62 (m, 2H), 7,60 - 7,52 (m, 2H) , 7,48 (d, J = 1,6 Hz, 1 H) , 7,47 - 7,39 (m, 2H) , 7,37 (tt, J = 7,7, 1,2 Hz, 2H), 7,32 - 7,23 (m, 1 H), 7,23 - 7,14 (m, 2H) , 6,60 (d, J = 16,2 Hz, 1 H) , 6,49 (d, J = 16.3 Hz, 1 H) , 5,05 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 3,72 (s, 3H) , 3,63 (S, 3H), 1,59 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,44 (s, 6H), 1,08 (s, 9H) . LCMS (m/z) 569,1 [M 13 H] , Tr 3,02 min.
Composto 147c
Uma mistura de 147b (358 mg, 0,629 mmol) e LiOH (53 mg, 1,263 mmol) em THF (5 ml) , Me OH (5 ml) , e água (5 ml) foi agitada a 0 °C durante 1 h, à ta durante 4 h, e depois a 40 °C durante 1,5 h. Depois de LiOH adicional (106 mg, 2,526 mmol) ser adicionado e agitado a 40 °C durante a noite, a mistura de reação foi neutralizada com HC1 1 N (3,8 ml) e concentrada. 0 resíduo foi co-evaporado com tolueno (x 3 e seco a vácuo para obter um 147c bruto. LCMS (m/z) 317,1 [Μ μ H], Tr 1,91 min.
Composto 147d
A uma solução de 1 e (350 mg, 0,658 mmol) em CH2C12 (3,25 ml) foi adicionado HC1 4 N em dioxano (3,25 ml) e a mistura foi agitada à ta durante 1,5 h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi co-evaporado com tolueno (x 3).
Depois de o resíduo ser seco a vácuo e HATU (379 mg, 0,997 mmol) ser adicionado ao resíduo, uma solução do ácido bruto 147c em CH2C12 (4 ml) e DMF (4 ml) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada a 0 °C à medida que DIEA (0,7 ml, 4,02 mmol) era adicionada. Após 1 h, a mistura de reação foi diluída com solução aq. de LiCl a 5 0 e o prodtio foi extraído com acetato de etilo (x 2) . Os extratos foram lavados com solução aq. de LiCl a 5 % (x 1) , combinados, secos (Na2S04) e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos - acetato de etilo -20 ã MeOH/ acetato de etilo como eluentes para obter 380 mg (83 ã) do produto. XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,21 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 7,68 (s, 1 H), 7,55 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 6,65 (ABqt, J = 16,4 Hz, 2H) , 6,64 - 6,58 (m, 1 H) , 6,33 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,30 (m, 1 H), 4,93 (d, J = 11,7 Hz, 1 H) , 4,92 (m, 1 H), 4,68 (d, J = 11,7 Hz, 1 H) , 4,34 (1, 1 H) , 4,31 - 4,23 (m, 1 H), 3,83 (d, J = 11,2 Hz, 1 H) , 3,69 (m, 1 H) , 3,59 (s, 3H) , 2,90 (1, 1H) , 2,18 (m, 1 H) , 2,14 - 2,06 (m, 1H), 1,92 (s, 1 H), 1,71 (m, 1 Η), 1,56 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,46 (s, 6H), 1,36 - 1,28 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,88 (d, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS (m/z) 729,2 [Μ § H], Tr 2,34 min.
Composto 147e
Uma suspensão do reagente 148d (380 mg, 0,521 mmol) e hidrato de LiOH (30 mg, 0,715 mmol) em THF (5 ml) e água (5 ml) foi agitada à ta durante 2 h. Depois de a mistura de reação ser acidificada com HC1 1 N (0,73 ml) e concentrada até um pequeno volume, o resíduo restante foi co-evaporado com tolueno (x 3) e DMF (x 1) . 0 148e bruto resultante foi utilizado durante a próxima reação. LCMS (m/z) 599,4 [M 0 H], Tr 0,36 min.
Uma solução de anidrido 2-Metil-6-nitrobenzoico (1079 mg, 3,134 mmol) e DMAP (579 mg, 4,739 mmol) em DCE (200 ml) foi agitada em banho a 50 °C à medida que uma solução do 147e bruto em DMF (8 ml) foi adicionada ao longo de 2,5 h.
Após 30 min desde a adição, a solução foi concentrada e a mistura de DMF residual foi diluída com solução de LiCl a 5 0 antes de extrações com acetato de etilo (x 2).Depois de os extratos serem lavados com solução de LiCl a 5 0 (x 1) , combinados, secos (Na2S04) , e concentrados, o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (x 2) utilizando acetato de etilo - 20 8 MeOH/ acetato de etilo como eluentes para obter 66 mg (50) do produto 147,¾ RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,67 - 8,55 (d, J = 6,8 Hz, 1 H) , 8,08 (d, J - 8,5 Hz, 1 H), 7,67 (dd, J = 8,6, 1,8 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,18 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 5,80 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 5,53 - 5,40 (m, 1 H) , 4,35 (d, J = 13,0 1 H) , 4,27 (t, J = 9,9 Hz, 1 H) , 3,68 (s, 3H) , 3,68 (m, 1 H) , 2,78 - 2,65 (m, 1 H) , 1,99 - 1,89 (m, 1,86 (m, 1 H) , 1,71 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,66 (m, 2H) , 1,53 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,47 (s, 3H), 1,32 (s, 3H), 0,94 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,92 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 581,6 [Μ μ H], Tr 0,96 min.
Exemplo 148: Composto 148
Um balão contendo (C0C1)2 (13 ml, 153,6 mmol) foi agitado a 0 °C à medida que éter etilviní lico (9,6 ml, 100,2 mmol) foi adicionado ao longo de 20 min. Após 20 min aO°Cel5hàta, a solução foi evaporada em rotorvap e a mistura escura resultante foi submetida a refluxo a 120 °C durante 30 min e então destilada a 15 mmHg a 65-68 °C para obter 7,828 g (58 %) de 148a. 1H RMN (400 MHz, clorof órnaio- d) δ 7,78 (d, J = 12,1 Hz, 1H) , 5,51 (d, J = 12,1 Hz, 1H) , 4,05 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,39 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
Composto 148b
Uma solução de the anilina (3,008 g, 16,17 mmol) e piridina (2,4 ml, 29,67 mmol) em CH2C12 (50 ml) foi agitada a 0 °C à medida que uma solução do cloreto de acilo 148a (3,264 g, 24,26 mmol) em CH2C12 (10 ml) foi Depois de as frações aquosas serem extraídas com CH2C12 (x 1), as frações orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) , e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando CH2C12 como eluentes para obter 3,3 92 g (74 %) do produto 148b. 1H RMN (400 MHz, Clorof órmio-d) δ 7,69 (d, J = 12,6
Hz, 0,15H) , 7,63 (d, J = 12,0 Hz, Ο,85H) , 7,58 (s, Ο,15H) , 7,53 (S, Ο, 85H) , 7,29 (s, 1H) , 7,15 (s, Ο, 15H) , 7,05 (s, 0,85H) , 6,86 (s, 1H) , 5,28 (d, J = 12,0 Hz, 0,85H), 5,26 (d, J = 12,6 Hz, Ο, 15H) , 3,97 (q, J = 7,0 Hz, 0,3H) , 3,95 (q, J = 7,0 Hz , 1,7H) , 2,33 (s , Ο , 5H) , 2,32 - 2,27 (m, 2,5H), 1,64 (s, 1 H), 1,37 (t, J = 7,0 Hz, Ο,5H), 1,36 (t, J = 7,0 Hz, 2,5H) . LCMS (m/z) 284, Ο [Μ μ H] , Tr 1,40 mill. Composto 148c
Um balão contendo H2S04 (35 ml) foi agitado à ta à medida que o 148b (3,392 g, 11,94 mmol) foi adicionado.
Após agitar à ta durante 2,5 h, a mistura foi vertida em gelo (150 - 180 g) e a mistura resultante foi agitada à ta durante 1 h. A mistura foi filtrada e os sólidos foram lavados com água e éter. Os sólidos recolhidos foram secos a vácuo para obter 2,645 g (93 % de produto como uma mistura de razão 53:47 (148c vs. 148d) . :LH RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ -12,2 (1, 1 H) , 8,25 (d, J = 9,8 Hz, 0,53H), 8,05 (d, J = 9,5 Hz, 0,47H), 7,49 (s, 0,47H), 7,39 (s, 0,53H), 7,28 (s, 0,47H), 7,22 (s, 0,53H), 6,81 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 2,57 (s, 1,41 H), 2,47 (s, 1,59H). LCMS (m/z) 238,0 [Μ μ H], Tr 1,04 &amp; 1,06 min.
Composto 148e
A uma suspensão da mistura do reagente 148c (2,645 g, 11,11 mmol) em DMF (0,95 ml, 12,17 mmol) e CH2C12 (100 ml) foi adicionado S0C12 (2,5 ml, 34,27 mmol). Depois de a mistura ser submetida a refluxo durante 1,5 h, S0C12 adicional (7,5 ml, 102,82 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi ainda submetida a refluxo durante 1 h. A solução foi arrefecida até à ta e extinta com gelo e água e as frações orgânicas separadas foram lavadas com água (x 1) . As frações aquosas foram extraídas com CH2C12 (x 1) , e as frações orgânicas foram combinadas, secas (MgS04) e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de
CombiFlash (x 2) utilizando hexanos - acetato de etilo como eluentes para obter 1,079 g (38 ã) de 148e e 1,358 g (48 ã) de 148f.
Composto 148e: ΧΗ RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,22 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,06 (d, J = 1,9 Hz, 1 H), 7,51 (d, J = 1,9 Hz, 1 H) , 7,42 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 2,79 - 2,54 (s, 3H) . LCMS (m/z) 256,0 [Μ μ H], Tr 1,59 min.
Composto 148f: lH RMN (400 MHz, clorofórmio -d) δ 8,41 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,76 (d, J = 1,5 Hz, 1 H) , 7,68 (d, J =
1,5 Hz, 1 H), 7,40 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 2,54 (s, 3H). LCMS (m/z) 256,0 [Μ μ H], Tr 1,63 min.
Composto 148g
A uma suspensão do reagente 148e (500 mg, 1,949 mmol) e Nal (2,925 g, 19,51 mmol) em MeCN (15,7 ml) foi adicionado AcCl (0,42 ml, 5,907 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 80 °C durante 4 h. Depois de a mistura de reação ser concentrada, o resíduo foi dissolvido em CH2C12 (100 ml) antes de lavagem com K2C03 10 ã (p/p) (x 1) , Na2S203 saturado (x 1) e água (x 1) . Depois de as frações serem extraídas com CH2C12 (x 1), as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) , e concentradas para obter 661 mg (98 ã) do iodeto bruto 148 g. LCMS (m/z) 347,9 [Μ μ Η], Tr 1,71 min.
Composto 148h
Uma mistura do reagente 148g (661 mg, 1,900 mmol),
PdCl2(PPh3) 2 (138 mg, 0,197 mmol), e 1- etoxieteniltributilestanano (0,79 ml, 2,338 mmol) em dioxano (3,9 ml) foi agitada a 100 °C durante 13 h. Após adição de HC1 2 N (4 ml) e agitação à ta durante 1 h, a mistura foi diluída com acetato de etilo (30 ml) e filtrada através de celite. Depois de a fração orgânica no filtrado ser lavada com água (x 1) e as frações aquosas serem extraídas com acetato de etilo (x 1), as frações orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (x 2) utilizando hexanos - acetato de etilo como eluentes para obter 404 mg (81 %) 148h, que continha algumas impurezas. XH RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,36 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 8,22 (sz, 1 H) , 8,11 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,55 (s, 1 H) , 2,83 (s, 3H), 2,67 (s, 3H). LCMS (m/z) 264,0 [Μ μ H], Tr 1,64 min.
Composto 148i
Dímero de dicloro(p-cumeno)ruténio(II) (4,7 mg, 0,008 mmol) e (1 R,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletilenodiamina (6,8 mg, 0,019 mmol) foram suspensos em água desgaseifiçada (3,1 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 minutos. A mistura foi agitada a 70 °C sob azoto durante 1,5 h. A solução amarela resultante foi arrefecida até à temperatura ambiente. 1-(7-bromo-5-metil-quinolin-2-il)- etanona (4,4 mg, 1,530 mmol), formato de sódio (522 mg, 7,675 mmol) e tetrahidrofurano desgaseificado (3,1 ml) foram adicionados e a mistura de reação foi desgaseificada com azoto durante 5 minutos. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40 °C durante 4 h. A mistura de reação foi arrefecida até à ta e diluída com acetato de etilo antes de lavagem com água (x 2). Depois de as frações aquosas serem extraídas com acetato de etilo (x 1), as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) e concentradas. O resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (x 2) utilizando hexanos - acetato de etilo como eluentes para obter 275 mg (68 %) do produto 148i, ΧΗ RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,25 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,09 (s, 1 H) , 7,45 (s, 1 H) , 7,38 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 5,03 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 4,89 (s, 1 H), 2,64 (s, 3H), 1,56 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 266,2 [Μ μ H], Tr 0,81 min.
Composto 148j
Uma solução do reagente (275 mg, 1,033 mmol), DMAP (6,8 mg, 0,056 mmol), e NEt3 (0,45 ml, 3,229 mmol) em CH2C12 (3,5 ml) foi agitada a 0 °C como Ac20 (0,2 ml, 2,116 mmol) foi adicionado. A solução resultante foi agitada a 0 °C durante 2 h e diluída com acetato de etilo antes de lavagem com água (x 2). Depois de as frações aquosas serem extraídas com acetato de etilo (x 1), as frações orgânicas foram combinadas, secas (Na2S04) e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (x 2) utilizando hexanos - acetato de etilo como eluentes para obter 308 mg (97 %) do produto 148j . 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,27 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,13 (s, 1 H), 7,48 (d, J = 8,7
Hz, 1 H) , 7,45 (s, 1 H) , 6,03 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 2,64 (S, 3H) , 2,16 (S, 3H) , 1,66 J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 308.0 [Μ μ H], Tr 1,34 min.
Composto 148k
A uma mistura do reagente (308 mg, 0,999 mmol), Pd(OAc)2 (22,5 mg, 0,100 mmol), e (o-Tol)3P (30,5 mg, 0,100 mmol), e do ácido (128,5 mg, 1,126 mmol) em MeCN (10,5 ml) foi adicionado NEt3 (0,63 ml, 4,52 mmol). A mistura resultante foi agitada a 100 °C durante 20 min num reator MW. Depois de a mistura ser concentrada, o resíduo foi dissolvido em NH4C1 aquoso e o produto foi extraído com acetato de etilo (x 3) . 0 extratos foram combinados, secos (Na2S04) e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (x 2) utilizando hexanos - acetato de etilo como eluentes para obter 337 mg (99 ã) de composto 148k com ~90 ã de pureza. 1H RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,28 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7,95 (s, 1 H) , 7,47 (s, 1 H) , 7,44 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 6,66 (d, J = 16,0 Hz, 1 H), 6,63 (s, J" = 16.0 Hz, 1 H) , 6,09 (q, J = 6,6 Hz, 1 H) , 2,65 (s, 3H) , 2,15 (S, 3H), 1,68 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,49 (s, 6H). LCMS (m/z) 342,1 [Μ IEI H] , Tr 1,04 min.
Composto 1481
A uma solução do tripéptido (525 mg, 0,987 mmol) em CH2C12 (2,5 ml) foi adicionado HC1 4 N em dioxano (2,5 ml) e a mistura foi agitada à ta durante 1 h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi co-evaporado com tolueno (x 2). Depois de o resíduo ser seco a vácuo e HATU (379 mg, 0,997 mmol) ser adicionado ao resíduo, uma solução do ácido 148k (337 mg, 0,987 mmol) em CH2C12 (5 ml) e DMF (5 ml) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada a 0 °C à medida que DIEA (0,7 ml, 4,02 mmol) foi adicionada. Após 1 h, a mistura de reação foi diluída com solução aq. de LiCl a 5 ã e o produto foi extraído com acetato de etilo (x 2). 0 extratos foram lavados com soluçS o aq. de LiCl a5 ã (x 1), combinados, secos (Na2S04) e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos -acetato de etilo como eluentes para obter 664 mg (89 ã) do produto. ‘Ή RMN (400 MHz, clorofórmio-d) δ 8,30 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 7,86 (s, 1 H) , 7,46 (s, 1 H) , 7,45 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,78 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,69 (d, J = 16,2 Hz, 1H) , 6,61 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 6,40 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 6,04 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,27 (p, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,90 (d, J = 11,9 Hz, 1 H) , 4,66 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,28 (dd, J = 8,4, 6,0 Hz, 1 H) , 3,90 (d, J = 11,0 Hz, 1 H) , 3,65 (td, J = 10,5, 3,7 Hz, 1H), 2,89 (s, 1 H), 2,79 (d, J = 1,1 Hz, 2H), 2,65 (s, 3H), 2,15 (s, 3H) , 2,09 (m, J = 6,7 Hz, 1 H), 1,89 (td, J = 9,5, 8,5, 4,4 Hz, 1 H), 1,67 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,45 (s, 6H), 1,35 - 1,25 (m, 4H) , 0,92 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,86 (d, J = 6,7 Hz 3H). LCMS (m/z) 754,1 [Μ μ H], Tr 2,54 min.
Uma mistura do reagente 1481 (116 mg, 0,154 mmol) e
LiOH (15 mg, 0,626 mmol) em THF (4 ml) e água (2 ml) foi agitada à ta durante 2 h. Depois de LiOH adicional (15 mg, 0,626 mmol) ser adicionado, a mistura foi agitada durante 1 h à ta, neutralizada com HC1 1 N (1,25 ml), concentrada e co-evaporada com tolueno (x 3). 0 resíduo foi dissolvido em DMF (20 ml) e necessitou 1 ml durante a purificação do hidroxil-ácido por meio de HPLC para obter 4,5 mg (quantitativo) do hidroxil-ácido.
Os 9 ml da solução de DMF (0,691 mmol) foram concentrados e secos a vácuo. 0 resíduo e DIEA (0,1 ml, 0,574 mmol) em THF (70 ml) foram sonicados e então agitados à ta à medida que HATU (58 mg, 0,153 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada à ta durante 3 h, concentrada, e o resíduo foi tratado com água antes de extração com acetato de etilo (x 2) . Os extratos orgânicos foram lavados com água (x 1) , combinados, secos (Na2S04) e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (x 3) utilizando hexanos - acetato de etilo -20 ã MeOH/ acetato de etilo como eluentes para obter 23,8 mg (61 ã) composto 148. XH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,61 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 8,32 (dd, J = 8,6, 0,9 Hz, 1 H), 7,58 (s, 1 H) , 7,46 (s, 1 H) , 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 7,25 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 6,44 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 6,19 (d, J = 16,5 Hz, 1 H), 5,89 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,76 - 5,62 (m, 1 H) , 4,42 - 4,33 (d, J = 10,8 Hz, 1 H) , 4,28 (t, J = 10,0 Hz, 1H), 3,81 - 3,72 (m, 1H), 2,71 (td, J = 12,6, 3,3 Hz, 1 H) , 2,63 (s, 3H) , 1,95 (m, 3H) , 1,85 (m, 3,7 Hz, 1 H) , 1,70 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,68 - 1,59 (m, 1 H) , 1,55
(d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,47 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 0,94 (t, J = 6,4 Hz, 3H) , 0,92 (t, J = 6,4 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 564,3 [Μ μ H], Tr 2,21 min.
Exemplo 149: Composto 149 Exemplo 149: Composto 149
Uma mistura de 31 (9,7 mg, 0,017 mmol) e esponja de protões (20,2 mgO,094 mmol) em CH2C12 (1 ml) foi agitada a 0 °C à medida que foi adicionado Me3OBF4 (12,7 mg, 0,086 mmol) . Após 1 h, a 0 °C, foi adicionada esponja de protões adicional (31,2 mg, 0,146 mmol) e Me30BF4 (13,5 mg, 0,091 mmol) e a mistura resultante foi agitada a -18 °C durante 63,5 h. Após serem adicionados esponja de protões adicional (24,5 mg, 0,114 mmol) e Me3OBF4 (16,5 mg, 0,112 mmol) a 0 °C, e a mistura resultante ser agitada a 0 °C durante 1 h, a mistura foi tratada com solução de NaHC03 aquoso, e o produto foi extraído com CH2C12 (x 2) . Os extratos foram combinados, secos (Na2S04) , e concentrados. O resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando acetato de etilo - MeOH 20ã/ acetato de etilo como eluentes para obter 5,2 mg (52ã) do produto 149. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,49 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 8,00 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,37 (m, 3H) , 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,57 (dd, J = 16,6, 4,6
Hz, 1H) , 6,30 (dd, J = 16,7, 1,9 Hz, 1H) , 6,01 (q, J = 6,7
Hz, 1H) , 5,61 (m, 1 H) , 4,49 - 4,34 (d, J = 12,0 Hz, 1 H) , 4,25 (d, J = 10,8 Hz, 1 H), 3,78 - 3,69 (m, 1 H), 3,64 (m, 1 H) , 3,48 (s, 3H) , 3,47 - 3,38 (m, 1 H) , 2,84 (td, J = 12,6, 3,5 Hz, 1 H) , 2,04 (m, 1,90 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 1,74 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,71 (m, 2H) , 1,42 (d, J = 7,2
Hz, 3H), 1,28 (s, 1 H) , 1,23 (d, J = 5,9 Hz, 3H) , 1,00 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,97 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS (m/z) 580,3 [Μ μ H], Tr 4,05 min.
Exemplos 150 e 151s Compostos 150 e 151
Uma mistura de le (225 mg, 0,423 mmol) e LiOH (38 mg, 0,906 mmol) em THF (2 ml) , Me OH (2 ml) , e água (2 ml) foi agitada à ta durante 30 min e concentrada para remover THF e MeOH. A solução aquosa resultante foi diluída com água, lavada com éter (x 1), e acidificada com HC1 1 N (0,95 ml). Após a solução aquosa ser saturada com NaCl, o produto ácido foi extraído com acetato de etilo (x 2) , e os extratos foram combinados, secos (Na2S04) , concentrados, e secos a vácuo para obter 169 mg (quant.) do ácido. LCMS (m/z) 401,1 [Μ μ H].
Uma solução do ácido em bruto (169 mg, 0,422 mmol), cloridrato de 2 -(7-bromoquinolin-2-il)pirrolidina (obtido da ASIBA, Inc., 134 mg, 0,427 mmol), e HATU (241 mg, 0,634 mmol) em DMF (3 ml) foi agitado a 0 °C à medida que foi adicionado DIEA (0,35 ml, 2,009 mmol). Após 1,5 h a 0 °C, a mistura de reação foi diluída com solução de LiCl a 5ã e o produto foi extraído com acetato de etilo (x 2). Os extratos foram lavados com solução de LiCl a 50 (x 1) , combinados, secos (Na2S04) , e concentrados. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos acetato de etilo - MeOH 20ã/ acetato de etilo como eluentes para obter 200 mg (72ã) do produto 150a como mistura de diastereómeros. LCMS (m/z) 659,2 [M 0 H] , Tr 1,25 rim. Composto 150b
Uma mistura do 150a (195 mg, 0,296 mmol), borato de vinilo 17c (97,1 mg, 0,361 mmol), PdCl2 (PCy2 (p-NMe2Ph) ) 2 (25 mg, 0,031 mmol), e K3P04 (215 mg, 1,013 mmol) em éter ciclopentilmetílico (5 ml) e H20 (2,5 ml) foi desgaseifiçada e agitada a 90 °C durante 3,5 h antes de serem adicionados 17c adicional (104 mg, 0,409 mmol),
PdCl2 (PCy2 (p-NMe2Ph) ) 2 (25,7 mg, 0,032 mmol), e K3P04 (201 mg, 0,949 mmol). Após desgaseificação, a mistura foi agitada a 90 °C durante 0,5 h, arrefecida até à ta, e dissolvida em acetato de etilo e água antes de filtração através de celite. Após as duas fases serem separadas, a fração aquosa foi extraída com acetato de etilo (x 1) , e as frações orgânicas foram lavadas com água (x 1), combinadas, secas (Na2S04) , e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando hexanos - acetato de etilo - MeOH 200 / acetato de etilo como eluentes paa obter 193 mg (920 ) 150b. LCMS (m/z) 707,2 [M 0 H], Tr 132min.
A um balão contendo o reagente 150b (193 mg, 0,273 mmol) foram adicionados CH2C12 (3 ml) e HC1 4 N em dioxano (3 ml) e a mistura foi agitada à ta durante 1,5 h. A mistura foi concentrada e seca a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em THF (2 ml) , MeOH (2 ml) , e foi adicionada água (2 ml) e LiOH (57,4 mg, 1,368 mmol). Após 5,5 h à ta, foi adicionado LiOH adicional (11,4 mg, 0,271 mmol) e a mistura resultante foi agitada à ta durante mais 17 h. A mistura foi concentrada até ~ 1/3 do volume, neutralizada com HC1 1 N (1,65 ml), e concentrada. Após co-evaporação com tolueno (x 3) e DMF (x 1) , o resíduo foi dissolvido em DMF (3 ml) e utilizado na seguinte reação.
Uma solução de HATU (317 mg, 0,834 mmol) em DMF (135 ml) e CH2C12 (135 ml) foi agitada à ta à medida que foi adicionado DIEA (0,4 ml, 2,30 mmol). A solução resultante foi agitada à ta à medida que a solução de DMF anterior do aminoácido foi adicionada durante 4 h. Após a adição, a mistura foi agitada à ta durante 15 min e foi adicionado HATU adicional (100 mg, 0,263 mmol) a mistura. Após 30 min, a mistura foi concentrada e o resíduo foi diluído com acetato de etilo antes de lavagem com solução de LiCl a 50 (x 3). Após as frações aquosas serem extraídas com acetato de etilo (x 1), as frações orgânicas foram combinados, secas (Na2S04) , e concentradas. 0 resíduo foi purificado por meio de HPLC preparativa. Duas frações recolhidas foram separadamente concentradas para remover MeCN, neutralizadas com alguma solução de NaHC03, e extraídas com acetato de etilo (x 2) . Os extratos foram secos (Na2S04) , e concentrados para obter 28,3 mg (180 ) de 150 e 59,6 mg (380 ) de 151 após purificação por HPLC utilizando ma coluna Fenomenex Gemini 7 micra C18 250 x 21,2mm e utilizando acetonitrilo/água como eluente.
Composto 150, primeiro diastereómero eluído: LH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,73 - 8,64 (m, 1 H) , 8,12 (d, J = 8,4
Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,68 (dd, J = 8,6, 1,7
Hz, 1 H), 7,58 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,22 (d, J = 9,6 Hz, 1 H) , 6,42 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 6,27 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 5,72 (q, J= 7,2 Hz, 1 H), 5,30 (dd, J = 8,0, 3,4 Hz, 1 H) , 4,37 (d, J = 14,0 Hz, 1 H) , 4,30 (t, J = 9,8 Hz, 1 H) , 4,21 - 4,13 (m, 1 H) , 3,99 -
3,80 (m, 2H), 2,69 (td, J = 12,6, 3,4 Hz, 1 H), 2,46 (dq, J = 12,1, 8,0 Hz, 1 H), 2,21 - 2,02 (m, 2H), 1,99 - 1,90 (m, 1 H) , 1,90 - 1,80 (m, 2H) , 1,80 1,65 (m, 2H) , 1,60 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,48 (s, 3H) , 1,33 (s, 3H) , 1,28 (s, 1 H) ,
0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,93 (d, J = 6,6 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 575,3 [Μ μ H], Tr 0,96 min.
Composto 151, segundo diasterómero eluído: XH RMN (400 MHz,
Metanol-d4) δ 8,22 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,00 - 7,90 (m, 1 H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,67 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1 H) , 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,06 (d, J = 9,4 Hz, 1 H) , 6,72 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 6,37 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 5,45 - 5,34 (m, 1H) , 5,19 (q, J = 7,0 Hz, 1 H) , 4,29 - 4,18 (d,
J = 13,6 Hz, 1 H), 3,90 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,81 (ddd, J = 12,1, 9,1, 2,8 Hz, 1 Η), 3,63 - 3,46 (m, 1 H> ' 3,27 (dd'
J = 11,2, 3,2 Hz, 1 H), 2,72 - 2,51 (m, 2H), 2,38 (dd' J 12,8, 6,4 Hz, 1 H) , 2,05 - 1,89 (m, 3H) , I/79 (dt' J = 13,3, 3,3 Hz, 1 H), 1,72 - 1,55 (m, 2H), 1,52 (s' 3H)' 1,44 (S, 3H) , 1,43 - 1,34 (m, 1 H) , 1,28 (s, 1 H) , °'91 (d' J = 6,7 Hz, 3H) , 0,82 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , -0,45 <d' J = 7'1
Hz, 3H). LCMS (m/z) 575,3 [Μ μ H], Tr 1,04 min-Exemplo 152: Composto 152
Composto 152s
Uma mistura do reagente (R) -1- (7-bromoc[uinolin-2-il)etanol (200 mg, 0,793 mmol), (E)-etill-(2-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)vinil)ciclopropanecarboxilato 58a (226 mg, 0,912 mmol), PdCl2(PCy2 (p-NMe2Ph))2 (32 mg, 0,04 mmol) , e K3P04 (509 mg, 2,4 mmol) em éter ciclopentilmetílico (5 ml) e H20 (2,5 ml) foi desgasei ficada e agitada a 90 °C durante 2 h. Após arrefecimento até à ta, foi extraído com EtOAc (x 1) e seca (Na2S04) então concentrada. O resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia flash em gel de sílica com EtOAc/Hexano para obter 240 mg (99%) do produto, metilo 1-(2 -(2 -(1-hidroxietil)quinolin-7- il)vinil)ciclopropanecarboxilato. 1H RMN (400 MHz,
Clorofórmio-d) δ 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,91 (d, J = 1,9 Hz, 1 H), 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,62 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1 H), 7,32 - 7,19 (m, 1 H), 7,10 (d, J = 16,2 Hz, 1 H) , 6,40 (d, J = 16,2 Hz, 1 H) , 5,15 - 4,88 (m, 2H) , 4,18 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,60 (q, J = 4,0 Hz, 2H), 1,55 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,25 - 1,22 (m, 2H), gjl,21 (s, 3H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 312,1; Tr = 1,93 min.
Composto 152b
O 152a (240 mg, 0,791 mmol) foi dissolvido numa mistura de tetrahidrofurano (4 ml) / Metanol (2 ml) a TA. Foi adicionado monoidrato de hidróxido de lítio (67 mg, 1,6 mmol) em água (2 ml) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2h. A solução foi acidificada utilizando ácido clorídrico a 2 M e então concentrado até à secura como ácido em bruto durante a seguinte etapa.
Composto 152c
A uma solução do tripéptido (365 mg, 0,683 mmol) em CH2C12 (4 ml) foi adicionado HC1 4 N em dioxano (2 ml) e a mistura foi agitada à ta durante 1 h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi co-evaporado com tolueno (x 2). Após o resíduo amina ser seco em vac, foi dissolvido em DMF com DIPEA (0,6 ml, 3,4 mmol) e HATU (395 mg, 1,04 mmol). Foi adicionada a solução do ácido 152b (0,791 mmol) em DMF (5 ml). A mistura resultante foi agitada à TA. Após 1 h, a mistura de reação foi diluída com solução de LiCl aq. a 5% e o produto foi extraído com EA (x 2) . Os extratos foram lavados com solução de LiCl aq. a 5% (x 1), combinados, secos (Na2S04) , e concentrados. O resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando MeOH 0-20%/EA como eluentes para obter 330 mg (69%) de 152c. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,25 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,93 - 7,88 (m, 1 H), 7,83 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,75 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1 H) , 7,63 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,33 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6.91 - 6,73 (m, 2H), 5,36 (q, J = 6,9, 6,5 Hz, 1 H), 5,06 - 4.91 (m, 2H), 4,74 (d, J = 12,1 Hz, 1 H), 4,37 - 4,24 (m, 1 H) , 3,76 (dd, J = 7,7, 4,2 Hz, 1 H) , 2,78 (s, 3H) , 2,05 (tt, J = 14,5, 7,4 Hz, 2H) , 1,83 (qd, J = 10,0, 4,1 Hz, 2H), 1,65 J = 10,4, 9,9, 5,8 Hz, 1H), 1,52 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,45 - 1,33 (m, 2H) , 1,28 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 1 H), 1,17 - 1,06 (m, 2H), 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,91 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 696,21, 698,20; Tr = 2,18 min.
Uma mistura do reagente (330 mg, 0,473 mmol) e LiOH (79 mg, 1,894 mmol) em THF (4 ml) e água (2 ml) foi agitada à ta durante 2 h. Foi neutralizada com HC1 1 N e concentrada, e co-evaporada com tolueno (x 3) . 0 resíduo foi dissolvido em DMF (6 ml) como solução A que foi utilizada na seguinte etapa. LCMS [MS h! = 56 6,16 ; Tr = 1,69 min.
Uma solução de anidrido 2-metil-6-nitrobenzoico (415 mg, 1,18 mmol) e DMAP (433 mg, 3,55 mmol) em DCE (450 ml) foi agitada a 50 °C à medida que a solução A (6 ml) foi adicionado durante 6 h por meio de bomba de seringa. Após
24h a 50 °C, a solução foi concentrada e a mistura de DMF residual foi diluída com solução de LiCl a 5% antes de extrações com EA (x 2). Após os extratos serem lavados com solução de LiCl a 5% (x 1) , combinados, secos (Na2S04) , e concentrados, o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash (x 2) utilizando EA - MeOH 20%/EA como eluent.es então HPLC para obter 62 mg (24%) de Composto 152. 1H RMN (400 MHz, Metanol-(¾) δ 8,22 - 8,06 (m, 1 H) , 7,80 - 7,66 (m, 2H) , 7,56 (s, 1H) , 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,36 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 6,04 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,89 (p, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,79 (qd, J = 7,1, 4,3 Hz, 1 H), 4,39 (d, J = 13,4 Hz, 1 H) , 4,30 - 4,17 (m, 1 H) , 3,90 - 3,74 (m, 1 H) , 2,73 (td, J = 12,6, 3,3 Hz, 1 H), 2,12 - 1,80 (m, 2H), 1,70 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,66 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 1,61 (d, J = 7,2 Hz, 2H) , 1,44 - 1,10 (m, 4H) , 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 2H) , 0,92 - 0,87 (m, 3H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 548,21; Tr = 2,17 min.
Exemplo 153: Composto 153
0 Composto 153 foi preparado da mesma maneira que no Exemplo 152 utilizando (E)-metilo 4-(2-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)vinil)tetrahidro-2H-piran-4-carboxilato (345 mg) em vez de (E)-etilo 1-(2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)vinil)ciclopropanecarboxilato. A última etapa de macrociclização utilizando HATU/DIPEA/DMAP/THF proporcionou 153 (107 mg) em 66ã de rendimento. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,17 (dd, J = 8,5, 0,8 Hz, 1 H), 7,74 (d, J = 1,8 Hz, 2H) , 7,56 (d, J = 1,5 Hz, 1 H) , 7,38 (d, J = 8,5
Hz, 1 H) , 6,54 - 6,18 (m, 2H) , 5,88 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,63 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,37 (dd, J = 11,5, 4,3 Hz, 2H), 4,03-3,41 (m, 6H) , 2,71 (td, J = 12,6, 3,4 Hz, 1H) , 2,19 (t, J = 14,3 Hz, 2,09 - 1,91 (m, 3H), 1,84 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) , 1,79 - 1,55 (m, 6H) , 1,47 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 0,94 (t, J = 6,6 Hz, 6H). LCMS [ΜμΗ]μ= 592,24; Tr = 2,13 min. Exemplo 154: Composto 154
Composto 154a:
Num balão seco ao forno, purgado com ãrgon foram colocados hidreto de potássio isento de óleo (a partir de 1740 mg de uma dispersão ca. 300 em óleo mineral, a. 13 mmol) , tetrahidrofurano seco (10 ml) e hexano (1 ml) . 0 balão foi repurgado com ãrgon e foi adicionado tricloroetileno (900 ul, 1,32 g, 10 mmol) através dos septos seguido por metanol seco (10 μΐ, 7,9 mg, 0,25 mmol). Esta mistura foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas (ligada à linha de árgon através da agulha -para remover continuamente o hidrogénio em formação). Após este tempo, foi adicionado hexano (10 ml) e a solução resultante foi imediatamente utilizado em etapas subsequentes.
Composto 154b:
Num balão seco ao forno, purgado com árgon foi adicionado tetrahidrofurano (50 ml) e a solução foi arrefecida com o banho de gelo. Foi adicionada uma solução de diisopropilamida de lítio 1,8 M (7,2 ml, 13 mmol) em tetrahidrofurano/heptano/etilbenzeno através dos septos. A solução resultante de diisopropilamida de lítio foi arrefecida até -78° C, e tratada gota a gota com ciclopentanocarboxilato de metilo (CAS: 4630-80-2, Ark
Pharm, Inc.) (1,15 g, 9 mmol) seguido por hexametilfosforamida (1,56 ml, 1,61 g, 9 mmol). A solução resultante foi aquecida até 0o C, agitada durante 20 min., arrefecida até -78° C, e tratada gota a gota com solução pré-arrefecida (0°C) de 1,2-dicloroetino (ca. 10 mmol, veja-se 154a). A mistura de reação foi agitada a -78° C durante 30 min. e então deixada a aquecer até à temperatura ambiente. Após 4 horas à temperatura ambiente, a mistura de reação foi vertida em gelo triturado e extraída com éter dietílico (200 ml) (foram adicionados 5 ml de salmoura para suportar a separação). A fase orgânica foi separada e lavada com água (200 ml). Esta fase aquosa foi extraída com éter dietílico (100 ml). As frações orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 ml), secas sobre sulfato de magnésio, filtradas através de uma camada de gel de sílica de 2 cm (a camada de gel de sílica foi lavada com 50 ml de acetato de etilo), e então concentradas sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi submetido a cromatografia em gel de sílica (gradiente acetato de etilo a desde 0-150 em iso-hexanos) para proporcionar o composto do título (634 mg, 370 ) como um óleo incolor. RMN (4 00 MHz, CDC13) δ 3,73 (s, 3H), 2,25-2,08 (m, 2H), 2,06-1,93 (m, 2H), 1,86- 1,66 (m, 4H) . LCMS (m/z) sem sinal MS, Tr = 3,34 min (Gemini 5u C18 110Ã, coluna de 5 micra 50 x 4,60 mm, 3,5 min, 2ml/min, acetonitrilo/água a 5-1000 , 0,10 gràénte de modificação de ácido acético).
Composto 154c:
Uma solução de composto 154b (52 0 mg, 2,7 8 mmol) em tetrahidrofurano (50 ml) contendo catalisador Lindlar (100 mg, Sigma-Aldrich) e carbonato de potássio (1920 mg, 13,9 mmol) foi hidrogenada à temperatura ambiente e à pressão atmosférica do hidrogénio durante 12 horas. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e a almofada de filtro foi lavada com tetrahidrofurano (30 ml) . 0 filtrado foi evaporado para proporcionar o composto do título (410 mg, 9613 ) como um óleo incolor. LH RMN (4 00 MHz, CDC13) δ 6,08-5,85 (m, 1 H) , 5,07 (s, 1 H) , 5,04 (d, J = 6,2 Hz, 1 H) , 3,66 (s, 3H) , 2,21-2,06 (m, 2H) , 1,79-1,68 (m, 2H) , 1,67-1,57 (m, 4H) . LCMS (m/z) sem sinal MS, Tr = 3,30 min (Gemini 5u C18 110Ã, coluna 5 micra 50 x 4,60 mm, 3,5 min, 2ml/min, acetonitrilo/água a 5-10013 , 0,1 13 gradieet de modificação de ácido acético).
Composto 154d
Ao reagente (R)-1-(7-bromoquinolin-2-il)acetato de etilo (538 mg, 1,83 mmol) em acetonitrilo anidro (10ml) , foi adicionado l-vinilciclopentanocarboxilato de metilo (310 mg, 2,01 mmol) seguido por trietilamina (0,51 ml, 3,66 mmol), acetato de paládio(II) (41 mg, 0,183 mmol) e Tri(o-tolil) fosfina (111 mg, 0,366 mmol). A mistura foi aquecida a 100° C durante 1,5 horas. A reação foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi adicionado EtOAc. Foi lavada com NH4C1 saturado duas vezes, solução de NaHC03 saturada uma vez e salmoura uma vez. A camada orgânica foi seca através de (Na2S04) , e concentrada; o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando EtOAC/Hexano como eluentes. Rendimento: 124 mg 154d, 18ã. XH RMN (400 MHz, Clorofórmio
-d) <5 8,08 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,00 (s, 1 H), 7,71 (d, J
= 8,5 Hz, 1 H) , 7,57 (dd, J = 8,6, 1,7 Hz, 1 H) , 7,38 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,58 (ã, J = 1,3 Hz, 1 H), 6,03 (q, J = 6,7
Hz, 1 H), 4,10 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,71 (s, 2H), 2,40-2,22 (m, 2H) , 2,14 (s, 3H) , 1,87 (dd, J = 13,2, 6,6 Hz, 2H) , 1.80 - 1,56 (m, 4H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H) , 0,92 - 0,78 (m, 2H) . LCMS [MIEI H? = 367,98; Tr = 2,44 min.
0 composto 154 foi preparado a partir de 154d (124 mg) da mesma maneira conforme relatado, por exemplo, 153. A última etapa de macrociclização foi utilizando condição de HATU/DIPEA/DMAP/THF para dar 15 mg de composto puro em 3613 de rendimento. XH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,63 (d, J = 6,9 Hz, 1 H), 8,16 (dd, J = 8,5, 0,8 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 1,1 Hz, 2H) , 7,55 (s, 1 H) , 7,38 (dd, J = 17,5, 9,1 Hz, 2H) , 6,50 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 6,20 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 5,88 (q, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,69 (p, J = 7,1 Hz, 1 H) , 4,36 (d, J = 12,4 Hz, 1 H) , 4,28 (t, J = 10,1 Hz, 1 H) , 3.80 - 3,71 (m, 1 H), 2,71 (td, J = 12,6, 3,4 Hz, 1H), 2,49 (dt, J = 12,3, 5,8 Hz, 1H) , 2,19 (dd, J = 12,8, 6,8 Hz, 1H), 2,03-1,90 (m, 4H) , 1,85 (ddt, J - 13,9, 9,1, 4,9 Hz, 2H) , 1,79 - 1,61 (m, 8H) , 1,57 (d, J = 7,2 Hz, 4H) , 0,93 (dd, J = 9,6, 6,6 Hz, 6H)- LCMS [ΜμΗ]μ 576,25; Tr = 2,34 min.
Exemplo 155: Composto 155
Composto 1553
Ao reagente (D)-Prolina (4,6 g, 40 mmol) suspenso em acetonitrilo anidro (100 ml), foi adicionado 2,2,2-tricloroacetaldeído (11,78 g, 80 mmol) lentamente. A mistura foi agitada à TA durante 20 horas e foi uma solução transparente. Após concentrado a vácuo, o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash numa coluna de gel de sílica de 80g utilizando EtOAC/Hexano como eluentes para dar (3S,7aR)-3-(triclorometil)tetrahidropirrolo[1,2- c] oxazol -1 (3H)-ona 155a: 3,63g, 37%. LH RMN (400 MHz,
Clorofórmio-d) δ 5,14 (s, 1 H), 4,10 (dd, J = 8,9, 4,7 Hz, 1 H), 3,40 (ddd, J = 10,9, 7,8, 6,0 Hz, 1H), 3,11 (dt, J = 11.4, 6,0 Hz, 1 H), 2,21 (dtd, J = 13,0, 8,5, 6,8 Hz, 1 H), 2,09 (ddt, J = 12,7, 7,0, 5,2 Hz, 1 H) , 1,91 (ddq, J = 12.4, 6,7, 5,7 Hz, 1 H), 1,81 - 1,64 (m, 1 H).
Composto 155b
Ao reagente 155a (4,8 g, 19,8 mmol) suspenso em anidro THF (100 ml) a -78°C, foi adicionado LDA 2,0 M em Hexano (14,9ml, 29,7 mmol) durante um período de 20 min. A mistura foi agitada a -78°C durante 45min, então deixada aquecer até 0°C durante 3 horas. A reação foi monitorizada através de TLC. Após a conclusão, a reação foi extinta através da adição de ácido cítrico aq. 100 lentamente. Foi extaída com EtOAc duas vezes, lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca através de (Na2S04) , e concentrada; o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash utilizando EtOAC/Hexano como eluentes para dar (3S,7aS)-l-oxo-3-(triclorometil)hexahidropirrolo-[1,2-c]oxazol-7a-carbaldeído 155b 1,99 g, 370 . XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 9,58 (s, 1 H), 5,17 (s, 1 H) , 3,51 (ddd, J = 11,3, 7,8, 6,2 Hz, 1 H) , 3,37 - 3,18 (m, 1 H) , 2,45 - 2,32 (m, 2H) , 2,27 (dt, J = 13,3, 6,6 Hz, 1 H) , 2,01-1,89 (m, 1 H) , 1,84 (dtd, J = 14,5, 7,5, 6,1 Hz, 1 H) .
Composto 155c
A solução de CH3P(Ph)3Br (268mg, 0,73 6 mmol) em THF anidro (5ml) foi arrefecida até -78°C sob N2. foi adicionado LiHMDS (1 M em THF, 0,6 9 ml) gota a gota por meio de seringa. A mistura foi agitada a 0°C durante lh então arrefecida até -78°C novamente. A esta, foi adicionado o reagente carbaldeído 155b (125 mg, 0,46 mmol) em THF anidro (5 ml) a -78°C gota a gota. A mistura foi agitada a -78°C to TA ao longo de um período de 2h, então TA durante 2 h. A reação foi monitorizada através de TLC. Após a conclusão, a reação foi extinta através da adição de NH4C1 saturado. Foi extraída com EtOAc duas vezes, lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca através de (Na2S04) , e concentrada; o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando EtOAC/Hexano como eluentes para dar (3S,7aS)-3-(triclorometil)-7a-viniltetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona 30 mg, 240 . 1H RMN (400 MHz, Clorof órmio-d) δ 5,99 (ddd, J = 16,9, 10,3, 1,1 Hz, 1H) , 5,49 (dt, J = 17,0, 1,2 Hz, 1H) , 5,20 (dd, J = 10,3, 1,2 Hz, 1H) , 3,45 (dt, J = 11,1, 6,4 Hz, 1 H) , 3,18 (dt, J = 11,1, 6,5 Hz, 1 H), 2,16 (dt, J = 12,4, 7,4 Hz, 1 H), 2,01 (dt, J = 12,6, 6,3 Hz, 1 H), 1,91 (dtd, J = 12,7, 6,3, 1,1 Hz, 1 H) , 1,87 - 1,76 (m, 1 H) .
Composto 155d
A um balão de fundo redondo contendo 1 ml de MeOH a 0°C sob N2 foi adicionado AcCl (0,08ml, 1,11 mmol) e agitado durante 5 min. Foi adicionado o reagente (3S,7aS)-3 -(triclorometil)-7a-viniltetrahidropirrolo[1,2-c]oxazol-1 (3H) -ona (30 mg, 0,111 mmol) em 1 ml de MeOH gota a gota por meio de seringa. A mistura foi agitada a 0°C durante 10 min então TA ao longo de um período de 4 dias. A reação foi monitorizada através de TLC. Após a conclusão, a reação foi concentrada e co-evaporada com MeOH duas vezes para dar uma mistura em bruto de (S)-metilo 2-vinilpirrolidina-2-carboxilato. À mistura em bruto de (S)-metilo 2-vinilpirrolidina-2-carboxilato em DCM foi adicionado DIPEA/Boc20/DMAP (cat.) para proteção com Boc proteção.
Após ser purificado por meio de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando EtOAC/Hexano como eluentes para dar (S)-1-terc-butilo 2-metilo 2-vinilpirrolidina-l,2- dicarboxilato 155d 14 mg, 500 . lH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 6,37 - 6,20 (m, 1 H) , 5,14 (dd, J = 10,2, 6,5 Hz, 1 H), 5,07 - 4,91 (m, 1H), 3,70 (s, 1 H), 3,66 - 3,43 (m, 2H), 2,17 (qd, J = 12,2, 7,1 Hz, 1 Η) , 1,98 (q, J = 9,7, 8,7 Hz, 1 Η) , 1,91 - 1,72 (m, 2H) , 1,44 - 1,28 (m, 9H).
Composto 155e
A reação de Heck para formar o composto (S)-1-terc-butilo 2-metilo 2-((E)-2-(2-((R)-1-acetoxietil)quinolin-7-il)vinil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato foi realizada da mesma maneira que no Exemplo 154 utilizando 155d (20 mg) como parceiro de reação para dar 155e (17 mg) em 510 de rendimento XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,12 - 8,05 (m, 1 H) , 8,02 (s, 1 H) , 7,95 (s, 0H), 7,77 - 7,57 (m, 2H) , 7,44 - 7,35 (m, 2H), 6,91 (dd, J = 15,5, 10,5 Hz, 1 H), 6,49 (d, J = 15,8 Hz, 1 H) , 6,11 - 5,95 (m, 2H), 3,76 (d, J = 1,5 Hz, 5H), 3,64 (td, J = 10,0, 7,1 Hz, 2H), 2,94 (q, J = 7,3 Hz, 1H) , 2,47 (s, 1 H) , 2,36 - 2,21 (m, 2H) , 2,18 - 2,04 (m, 7H) , 1,97 - 1,79 (m, 3H) , 1,66 (qd, J = 8,6, 7,0, 3,5 Hz, 6H), 1,47 (s, 3H), 1,31 (d, J = 1,8 Hz, 9H), 1,22 (dd, J = 9,2, 5,1 Hz, 4H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 469,28; Tr = 1,12 min.
0 composto 155 (2 mg) foi completado da mesma maneira que no Exemplo 154, partindo de 155e (20 mg) . A última etapa de macrociclização utilizado HATU/DIPEA/DMAP/THF condição. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,91 (d, J = 7,0 Hz, 1 H) , 8,21 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,91 - 7,77 (m, 2H), 7,36 (dd, J = 35,9, 9,3 Hz, 2H), 6,68 - 6,40 (m, 2H), 5,89 (q, J = 6,9 Hz, 2H) , 4,44 - 4,20 (m, 2H), 3,80 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,67 - 3,48 (m, 3H), 3,36 (q, J = 7,2 Hz, 1 H), 2,68 (d, J = 12,5 Hz, 1 H) , 2,42 (q, J = 7,4, 6,7 Hz, 1 H) , 2,08 - 1,74 (m, 3H) , 1,76 - 1,48 (m, 10H) , 1,49 - 1,14 (m, 14H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 677,54; Tr = 1,14 min.
Exemplo 156: Composto 156
exposto 156a
O reagente protegido Boc 155e (59 mg, 0,13 mmol) foi tratado com HC1 4N em Dioxano em DCM durante lh para remover o grupo Boc em condição padrão. Apos ser concentrado até a secura, ao resíduo foi adicionado DCM (2 ml), Et3N (0,067 ml, 0,78 mmol) e MeS02Cl (0,020 ml, 0,26 mmol) . A mistura foi agitada à TA durante 16 horas. Após ser concentrado a vácuo, o resíduo foi purificado por meio de HPLC para dar (S)-2-((E)-2-(2-((R)-1- acetoxietil)quinolin-7-il)vinil)-1- (metilsulfonil)pirrolidina-2-carboxílico ácido 156a, 36 mg, 64S . LCMS [ΜμΗ]μ = 433,53; Tr = 0,95 min.
A partir de 156a (59 mg) , foi preparado o composto 156 (4 roÇf) da mesma maneira que no Exemplo 155. A última etapa de macrociclização utilizou condições de Shiina. ί_Η (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,20 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7.82 (d, J = 1,6 Hz, 2H), 7,72 (s, 1 H), 7,40 (dd, J = 9,1, 5,5 Hz, 2H), 6,58 (s, 2H), 5,95 - 5,77 (m, 2H), 4,41 - 4,24 (m, 2H) , 3,84 - 3,75 (m, 1 H) , 3,65 - 3,54 (m, 2H) , 3,06 (S, 3H) , 2,70 (td, J = 12,6, 3,3 Hz, 1 H) , 2,46 (ddp, J = 19,4, 12,9, 6,9, 6,3 Hz, 2H), 2,29 - 2,02 (m, 2H), 2,01 - 1.82 (m, 4H) , 1,73 - 1,56 (m, 9H) , 0,95 - 0,83 (m, 7H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 655,21; Tr = 2,05 mill.
Exemplos 157 e 158: Compostos 157 e 158
Csíspesfe 1573
0 reagente 4-hidroxiciclohexanocarboxilato de etilo (5,4g, 30,73 mmol) em DCM (100 ml) foi tratado com DIPEA (16,06 ml, 92,2 mmol), DMAP (4,13 g, 30,80 mmol) e TBDPS-C1 (11,8 ml, 46,1 mmol) à TA durante 16h. Após concentrado a vácuo, o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando EtOAC/Hexano como eluentes para dar 4-(terc- butildifeni1si1iloxi)ciclohexanocarboxilato de etilo 157a, 12,6g, 99ã de rendimento. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,77 - 7,58 (m, 4H), 7,47 " 7 - 29 (m, 6H) , 4,09 (dq, J = 34,5, 7,1 Hz, 2H) , 2,32 - 1,96 (m, 2H) , 1,92 - 1,57 (m, 2H) , 1,42 - 1,28 (m, 2H) , 1,27-1,17 (m, 3H), 1,05 (s, 9H). LCMS [ΜμΗ]μ = 411,44; Tr = 1,79 min.
Composto 157b
À soluçS o de LDA (2,0 M em Hexano, 2,44 ml, 4,876 mmol) em tolueno anidro (10ml) a 0 o C sob N2, foi adicionada a soluçS o do reagente 157a (1,82 g, 4,43mmol) em tolueno (10 ml) lentamente. Foi agitada a 0o C durante 10 min, e TA durante 30 min. Foi adicionado [ (tBu3P) PdBr] 2 (34,4 mg, 0,044 mmol) em 5 ml de tolueno seguido por bromoetano (1 M em 5,76 ml, 5,76 mmol) a TA e agitado durante 24h. Após a conclusEI o da reaçS o, foi diluádcom EtOAc, extinta com 1 M AcOH (aq.) (10 ml) para tornar a soluçH o de pH cerca de 7-7,5. Foi extraída com EtOA, lavada com soluç0 o de NaHCQ saturada uma vez e salmoura uma vez. A camada orgânica foi seca através de (Na2S04) , e concentrada; o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando
EtOAC/Hexano como eluentes. Rendimento: 1,15g, 63ã. (foi uma mistura de SM e cis/trans vinilo de vinilciclohexanocarboxilato sobre oxigénio)(SM:Produto=2:1, cis:trans=4:1) .
Composto 157c
A reaç0 o de Heck para formar o composto (R, E) - 1-2-(2-(1-acetoxietil)quinolin-7-il)vinil)-4-(terc- but ildi feni1si1iloxi)c iclohexanocarboxilato de etilo foi realizada da mesma maneira que no Exemplo 154 utilizando a mistura de 157b (1,15g) para gerar o produto intermediário 157c (356 mg) em 630 de rendimento LCMS [ΜμΗ]μ = 650,64; Tr = 1,62 min.
A partir de 157c (356 mg), o composto 157 foi preparado da mesma maneira que no Exemplo 154. A última etapa de macrociclização foi realizada utilizando condições de HATU para gerar 157 (53 mg) em 54ã de rendimento. λΒ. RMN (400 MHz, Metanol - d4) δ 8,64 (á, J = 7,0 Hz, 1 H) , 8,15 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,72 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,66 (ddd, J = 8,0, 4,6, 1,7 Hz, 5H), 7,54 (s, 1 H), 7,39 (dddd, J = 13,4, 10,7, 8,0, 5,3 Hz, 6H), 6,31 - 6,14 (m, 2H), 5,87 (d, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,74 - 5,63 (m, 1 H) , 4,45-4,17 (m, 2H), 3,74 (d, J= 16,0 Hz, 2H), 2,79 (s, 3H), 2,71 (s, 1H), 2,21 (d, J= 14,0 Hz, 2H) , 2,15 - 1,92 (m, 3H) , 1,90-1,40 (m, 4H) , 1,68 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 1,60 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,35-1,23 (m, 4H) , 1,02 (s, 9H) , 1,02 - 0,95 (m, 2H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 844,41; Tr = 2,86 min.
Num frasco de reação de plástico, o material de partida 157 (49 mg, 0,058 mmol) dissolvido em THF (5 ml) foi tratado com solução de HF-Piridina (1 ml). Foi agitado à TA durante 3h. A reação não foi muito limpa e tanto o material de partida como o produto começaram a descompor-se nesta condição. Foram isolados 5 mg de 158 após processamento e HPLC. (cis:trans=3,4:1 por RMN) ΧΗ RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,64 (á, J = 7,0 Hz, 1 H) , 8,16 (dd, J = 8,5, 2,9 Hz, 1 H), 7,80 - 7,67 (m, 2H), 7,56 (d, J = 11,9 Hz, 1 H), 7,44 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,37 (dd, J = 8,5, 4,5 Hz, 1 H) , 6,37 - 6,17 (m, 2H) , 5,88 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,67 (ddt, J = 13,9, 10,8, 7,2 Hz, 1H), 4,43 - 4,24 (m, 2H), 3,79 - 3,70 (m, 1 H), 3,59 (tt, J = 10,4, 4,4 Hz, 1 H), 2,72 (td, J = 12,6, 3,8 Hz, 1 H), 2,41 - 2,24 (m, 2H), 2,06 - 1,80 (m, 5H), 1,79 - 1,59 (m, 5H), 1,56 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,42 (tdd, J = 24,9, 18,0, 11,3 Hz, 2H), 1,27 (s, 1 H), 0,97 (dd, J = 6,7, 4,6 Hz, 6H), 0,93 (dd, J = 6,8, 4,1 Hz, 1 H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 606,26; Tr = 1,97 min. Exemplo 159: Composto 159
Composto 159a
0 reagente 157c (1096 mg, 1,7 mmol) em THF/CH3CN (100/10 ml) foi tratado com HF a 480 em água (7 ml) à TA durante 4 dias. Após extinto com solução de NaHC03 saturada até pH>7, foi extraído com EtOAc e lavado com salmoura uma vez. A camada orgânica foi seca através de (Na2S04) , e concentrado; o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando EtOAC/Hexano como eluentes. Deu 214 mg 159a, 31ã. (cis:trans=4:1 por RMN). 1H RMN (400 MHz, Clorof órmio-d) δ 8,07 (d, J ~ 8,4 Hz, 1 H) , 8,01 - 7,94 (m, 1 H) , 7,70 (dd, J = 8,5, 4,0 Hz, 1 H) , 7,55 (ddd, J = 10,3, 8,5, 1,7 Hz, 1 H) , 7,38 (d, J = 8,4
Hz, 1 H), 6,62 (dd, J = 22,0, 16,3 Hz, 1 H), 6,36 (dd, J = 16,3, 5,2 Hz, 1 H), 6,02 (qd, J = 6,7, 2,5 Hz, 1 H), 4,16 (dq, J = 16,5, 7,1 Hz, 2H), 3,65 (tt, J = 9,5, 4,1 Hz, 1H), 2,61 - 2,27 (m, 2H), 2,13 (d, J = 1,1 Hz, 3H) , 1, 98 - 1,89 (m, 2H) , 1,64 (dd, J = 6,6, 2,0 Hz, 3H) , 1,57 - 1,34 (m, 4H), 1,25 (dt, J = 12,1, 7,1 Hz, 3H). LCMS [ΜμΗ]μ= 412,05; Tr =2,17 min.
Composto 159b
O reagente 159a (214 mg, 0,52 mmol) em DCM (25 ml) foi adicionado com CH3OBF4 (1,21 g, 7,80 mmol) e Proton Spronge (1,67 g, 7,80 mmol) e agitado à TA durante 24h. Após extinção com água, foi extraída com DCM duas vezes. A camada orgânica foi seca através de (Na2S04) , e concentrada; o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando EtOAC/Hexano como eluentes. As frações contendo o produto desejado com contaminação por esponja de protões foram concentradas. Esta mistura foi diluída com EtOAc, lavada com 0,5N HC1 (aq.) solução duas vezes e salmoura uma vez. Após ser seco (Na2S04) , e concentrado, deu 12 mg de produto 159b, 5ã de rendimento. A maior parte do produto secundário foi bis-metilado. LCMS [ΜμΗ]μ = 426,05; Tr = 2,45 min.
A partir do composto 159b (12 mg) , foi preparado o composto 159 da mesma maneira que no Exemplo 154. A última etapa de macrociclização utilizou condições de acoplamento de HATU para efetuar enceramento do anel, que deu 2 mg de composto 159. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,08 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,74 (s, 1 H), 7,68 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,58 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6,47 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 6,37 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 6,28 - 6,12 (m, 2H), 5,94 (t, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,77 - 5,67 (m, 1H) , 4,51 (d, J = 13,1 Hz, 1 H) , 4,17 (t, J = 9,6 Hz, 1H), 3,74 (m, 1 H), 3,34 (s, 3H), 3,26 - 3,15 (m, 1H), 2,63 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 2,42 (d, J = 13,9 Hz, 1 H), 2,14 (d, J = 15,3 Hz, 1H) , 2,03 (m, 1 H) , 1,99 - 1,76 (m, 8H) , 1,73 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,68 (s, 1H), 1,57 (d, J= 7,1 Hz, 3H), 1,39 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 0,96 (dd, J = 6,7, 5,2 Hz, 3H), 0,90-0,80 (m, 2H). LCMS [ΜμΗ]μ = 620,35; Tr = 1,13 min. Exemplos 160 e 161: Compostos 160 e 161
A reação de Heck para formar o composto 1-(2-(2-(1-acetoxietil)quinolin-7-il)vinil)-4 - oxociclohexanecarboxilato de (R,E)-etilo 160a (3,22g) foi realizada da mesma maneira que em Exemplo 154 utilizando 4-oxo-l-vinilciclohexano-carboxilato de etilo (Obtido da Small Inc.) (2,88g), em 80ã de rendimento. ΧΗ RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,09 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 8,02 (d, J = 1,6 Hz, 1 H) , 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,56 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,74 - 6,36 (m, 2H), 6,02 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 4,24 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 2,59 (dt, J = 12,3, 5,5 Hz, 2H) , 2,50-2,39 (m, 4H), 2,13 (s, 3H), 2,07 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 1,65 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 1,29 (t, J = 7,1 Hz, 3H) . LCMS [M0 H^ = 410,27; Tr = 1,11 min.
Compostos 160b e 160c
Ao reagente cetona 160a (3,2 g, 7,81 mmol) em MeOH (40ml) num balão equipado com um funil de gotejamento foi adicionado uma solução de MeOH (40 ml) de NaBH4 (3 55 mg, 9,38 mmol) gota a gota a 0° c· Foi agitado a 0o C durante 10 min, e ΤΑ durante 24h. Após ser extinta com solução de NH4C1 saturada, foi extraída com EtOAc e lavada com salmoura uma vez. A camada orgânica foi seca através de (Na2S04) , e concentrado. Os isómeros cis e trans foram separados através de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando EtOAC/Hexano como eluentes. Em TLC com EA/HEX=1/1, Rf de trans = 0,4, Rf de cis = 0,3, Rf do produto secundário = 0,3. Rendimento: o isómero trans 160c foi 200 mg, o isómero cis 160b foi 420 mg, o produto secundário foi 750 mg. O rendimento total de (cis μ trans) foi 620 mg, 19ã. 160c: XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,09 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,01 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,71 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,57 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1 H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,51 (dd, J = 110,7, 16,3 Hz, 2H) , 6,03 (q, J = 6,7
Hz, 1H), 4,15 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,84 (dt, J = 7,4, 3,8
Hz, 1 H) , 2,14 (s, 3H) , 2,07 (dd, J = 8,5, 4,1 Hz, 2H) , 2,00 (ddd, J = 13,6, 8,6, 4,1 Hz, 2H) , 1,79 (ddt, J = 12,4, 7,9, 3,8 Hz, 2H), 1,65 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,63 - 1,54 (m, 2H) , 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 412,39; Tr = 3,16 min 160b: XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,08 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,98 (s, 1 H) , 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,54 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1 H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,67 - 6,25 (m, 2H) , 6,02 (q, J = 6,7 Hz, 1 H) , 4,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 3,66 (tt, J = 9,4, 4,2 Hz, 1 H) , 2,50 - 2,38 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 2,00 - 1,89 (m, 2H), 1,65 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,59 - 1,36 (m, 4H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H). LCMS [ΜμΗ]μ = 412,39; Tr = 3,14 min
0 composto 160 (23 mg) foi preparado da mesma maneira que no Composto 161 a partir do isómero trans 160c (1R,4R)-etill-((E)-2~(2-((R)-1-acetoxietil)quinolin-7 -il)vinil)-4-hidroxiciclohexanocarboxilato (192 mg) . LH RMN (400 MHz, Metanol”d4) δ 8,57 (d, J= 7,1 Hz, 1 H) , 8,17 (d, J = 8,4
Hz, 1 H), 7,85 - 7,71 (m, 2H), 7,59 (s, 1 H), 7,36 (dd, J = 13,8, 8,9 Hz, 2H) , 6,57 - 6,18 (m, 2H) , 5,88 (q, J = 6,8
Hz, 1 H) , 5,65 (t, J = 7,1 Hz, 1 H) , 4,43 - 4,18 (m, 2H) ,
3,80 (dd, J = 29,3, 7,5 Hz, 2H) , 2,70 (s, 1 H) , 2,18 (t, J = 11,6 Hz, 1 H), 2,06 - 1,91 (m, 4H), 1,92 - 1,73 (m, 1H), 1,70 (d, J = 6,9 Hz, 4H), 1,64 (d, J = 10,2 Hz, 1 H), 1,27 (s, 1 H) , 0,93 (dd, J = 6,6, 2,8 Hz, 6H) . LCMS [ΜμΗ]μ = 606,27; Tr = 1,96 min. 0 composto 16Qd
A hidrólise de 160b (350 mg) com LiOH IN em THF/MeOH para formar (ls,4S)-4-hidroxi-l-((E)-2-(2-((R)-1- hidroxietil)quinolin-7-il)vinil)ciclohexanocarboxílico ácido foi realizada em 3 dias no procedimento padrão em rendimento quantitativo. LCMS [ΜμΗ]μ = 342,17; Tr = 1,50 min.
Ao reagente ciclohexanocarboxílico (237 mg, 0,695 mmol) em D CM (10 ml) foi adicionado DIPEA (1,94 ml, 11,2 mmol) e MOMCI (0,634 ml, 8,34 mmol) . Foi agitado à TA durante 24h. Após extinção com MeOH (5 ml) , foi concentrado; o resíduo foi purificado por meio de CombiFlash em coluna de gel de sílica utilizando
EtOAC/Hexano como eluentes para dar 241 mg de produto protegido com MOM, 73ã de rendimento. LCMS [ΜμΗ]μ = 4 74,12 ; Tr = 2,30 min. A hidrólise do intermediário protegido por MOM (122mg, 0,258 mmol) com LiOH 1 N em THF para formar (Is, 4S) -4-(metoximetoxi)-1-((E)-2 -(2 -((R)-1-(metoximetoxi)etil)quinolin-7- il)vinil)ciclohexanocarboxílico ácido foi realizada em 3h a 60°C no procedimento padrão em rendimento quantitativo. LCMS [ΜμΗ]μ = 430,12; Tr = 2,01 min.
A partir do carboxilato 160d (0,258 mmol), foi preparado o composto 161 da mesma maneira que no Exemplo 154. Após acoplamento de HATU com tripéptido, foi tratado com HC1 4N em dioxano e MeOH para remover o grupo de proteção MOM seguido de hidrólise de LiOH e macrociclização padrão. Deu 23 mg de composto 161. XH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,07 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7.58 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,3 9 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,33 - 7,19 (m, 2H), 5,83 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,52 (q, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,36 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 4,27 (d, J = 10,6 Hz, 2H) , 3,70 - 3,37 (m, 3H) , 2,71 (dtd, J = 25,2, 13,0, 4,1
Hz, 2H) , 2,46 - 2,17 (m, 3H), 2,02 - 1,92 (m, 1 H), 1,90 - 1.67 (m, 6H) , 1,66 - 1,46 (m, 4H) , 1,45 - 1,21 (m, 3H) , 1.17 (dd, J = 9,4, 2,9 Hz, 3H), 1,14 - 1,00 (m, 2H), 0,88 (dd, J = 6,6, 3,2 Hz, 6H). LCMS [ΜμΗ]μ = 606,34; Tr = 1,95 min.
A partir de carboxilato 160d, foi preparado o composto 161 da mesma maneira que no Exemplo 154. Após acoplamento de HATU com tripéptido, foi tratado com HC1 4N em dioxano e MeOH para remover o grupo de proteção MOM seguido de hidrólise de LiOH e macrociclização padrão. LCMS [ΜμΗ]μ = 606,34 lH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,07 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7.58 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,39 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,33 - 7,19 (m, 2H), 5,83 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,52 (q, J = 7,3
Hz, 1 H), 4,36 (d, J = 12,2 Hz, 1 H), 4,27 (d, u = 10,6 Hz, 2H) , 3,70 - 3,37 (m, 3H), 2,71 (dtd, J = 25,2, 13,0, 4,1
Hz, 2H), 2,46 - 2,17 (m, 3H), 2,02 - 1,92 (m, 1 H), 1,90 - 1.67 (m, 6H) , 1,66 - 1,46 (m, 4H), 1,45 - 1,21 (m, 3H), 1.17 (dd, J = 9,4, 2,9 Hz, 3H), 1,14 - 1,00 (m, 2H), 0,88 (dd, J = 6,6, 3,2 Hz, 6H) .
Exemplo 162: Composto 162
Exemplo 163: Composto 163
€e*spos$a 163a
A uma solução de 7-Bromo-2-cloro-3-metilquinolina (obtido da BioBlocks, Inc.), (2,0 g, 7,8 mmol) em acetonitrilo anidro (50 ml) foram adicionados iodeto de sódio (11,7 g, 78 mmol) e cloreto de acetilo (0,92 g, 11,7 mmol) . A mistura foi aquecida até 80 °C durante 4 h. A mistura de reação foi arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com diclorometano (200 ml) , lavada com solução de carbonato de potássio aquosa 20%, solução de tiossulfato de sódio aquosa 20% e seco sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para render o intermediário iodeto (2,3 g, 840 ) como um sólido. CMS (m/z) 348,1/350,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,53 min
Então, uma mistura deste iodeto (2,2g, 6,3 mmol) e tributil(1-etoxivinil)estanho (2,73 g, 2,55 ml, 7,56 mmol) em 1,4-dioxano (20 ml) foi desgaseifiçado durante 20 minutos. Foi adicionado dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio(II) (440 mg, 0,63 mmol) e a mistura de reação agitada sob azoto e aquecida a 80 °C durante 3 horas antes de deixar arrefecer. Os voláteis foram evaporados e o resíduo suspenso em 1,4-dioxano (15 ml), foi adicionado ácido clorídrico a 2 M aquoso (15 ml) e a mistura de reação agitada durante 45 minutos e então evaporada para remover os voláteis. 0 resíduo foi diluído com água e extraída com acetato de etilo (2 x) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e evaporada. 0 produto foi purificado por meio de cromatografia utilizando gel de sílica revestido com carbonato de potássio lOã p/p eluindo utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 9:1 para proporcionar o composto do título 3 (1,5 g, 90 0 ) como um sólido amarelo. XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) <5 8,31 (d, J = 2,3 Hz, 1 H) , 8,11 - 7,85 (m, 1 H) , 7,82 - 7,55 (m, 2H), 2,80 (s, 3H), 2,66 (d, J = 1,0 Hz, 3H). LCMS (m/z) 264,0/266,0 [ΜμΗ]. Tr = 2,58 min. Composto 163b
Dímero de dicloro (p-cimeno) ruténio(II) (12 mg, 0,019 mmol) e (IR,2R)-(-)-N-p-tosil-l,2-difeniletilenodiamina (17 mg, 0,045 mmol) foram suspensos em água desgaseifiçada (7,5 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 minutos. A mistura foi agitada a 70 °C sob azoto durante 90 minutos. A mistura laranj a turva resultante foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente. Foram adicionados 163a (1,0 g, 3,78 mmol) seguido por tetrahidrofurano desgaseifiçado (7,5 ml) e formato de sódio (1,29 g, 18,9 mmol) e a mistura de reação foi desgaseif içada com azoto durante 5 minutos. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40 °C durante 3 horas e deixada arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e a mistura lavada com água (2 x) . As lavagens aquosas foram novamente extraídas com acetato de etilo e os orgânicos combinados lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para proporcionar o composto do título 163b (0,91 g, 910 ) como um sólido púrpura XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,36-8,07 (m, 1 H), 8,03 - 7,78 (m, 1 H), 7,78 - 7,47 (m, 2H), 5,35 - 4,91 (m, 2H), 2,44 (d, J = 1,0 Hz, 3H) , 1,46 (d, J = 6,4 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 266,0/268,0 [ΜμΗ]. Tr = 1,77 min.
Composto 163c
A uma solução de 163b (0,9 g, 3,4 mmol) em diclorometano anidro (20 ml) foram adicionados trietilamina (1,0 g, 10,2 mmol) e acetilo anidrido (0,69 g, 6,8 mmol). A mistura foi agitada â temperatura ambiente durante 1 h. Após concentração, o produto em bruto foi diluído com EtOAc (50 ml), lavada com água (2x) e seco sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar o composto do título 163c (1,0 g, 960 ) como sólido. LCMS (m/z) 308,1/310,1 [ΜμΗ], Tr = 2,44 min.
Composto 163d
A uma mistura de 163c (400 mg, 1,30 mmol) , trietilamina (394 mg 3,9 mmol) e 2,2-dimetilbut-3-enoico ácido (223 mg 1,95 mmol) em acetonitrilo anidro (7 ml) num tubo de micro-ondas foi adicionado acetato de paládio (29 mg, 0,13 mmol) e tri-o-tolifosfina (79 mg, 0,26 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 100 °C durante 20 minutos e diluída com EtOAc (30 ml). 0 produto em bruto foi lavado com água e seco sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar o composto do título 163d como um óleo amarelo (300 mg, 67 0 ).ΧΗ RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 10,06 - 9,39 (s, 1 H), 8,05 (dd, J = 9,1, 2,3 Hz, 1 H) , 7,93 - 7,75 (m, 1 H) , 7,74-7,41 (m, 2H) , 6,62 (m, 2H) , 6,14 (dt, J = 12,6, 6,6 Hz, 1 H) , 2,51 (m, 3H), 2,09 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 1,65 (m, 3H), 1,47 (m, 6H). LCMS (m/z) 342,1 [ΜμΗ]. Tr= 2,31 min.
Composto 163e
A 163d (300 mg, 0,88 mmol) em N, N-dimetilf ormamida anidra (2 ml) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionada W,JV-diisopropiletilamina (568 mg, 4,39 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(1H-7- azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (368 mg, 0,97 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 3 minutos antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloroetílico do ácido (S)-l-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml). A reação foi agitada durante 1 hora. A reação foi extinta com água e extraída com acetato de etilo (2 x) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para dar o composto do título 163e (470 mg, 70%) como um sólido branco. XH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,01 (s, 1 H) , 7,96 (s, 1H) , 7,81 - 7,69 (m, 2H) , 6,78 (d, J = 16,3 Hz, 1H) , 6,66 (d, J = 16,3
Hz, 1 H) , 6,11 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,33 (q, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,96 (d, J = 12,1 Hz, 1 H), 4,75 (d, J = 12,1 Hz, 1 H), 4,24 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 3,76 (dd, J = 7,8, 4,2 Hz, 1 H), 2,10 (s, 3H) , 2,05 (m, 1 Η) , 1,99 (s, 3H) , 1,84 (d, J = 11,9 Hz, 2H) , 1,62 (d, J = 6,7 Hz, 6H) , 1,44 (d, J = 2,6
Hz, 5H) , 1,36 - 1,13 (m, 4H) , 0,92 (dd, J = 26,3, 6,8 Hz, 6H). LCMS (m/z) = 755,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,48 min.
Composto 162
[1180] A uma solução de 163e (0,47 g, 0,62 mmol) em THF (7 ml) e metanol (3,5 ml) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio (0,06 g, 2,5 mmol) em água (3,5 ml). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. (2,5 ml) foi adicionado HC1 1 N à mistura de reação. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter o composto do título 163f (0,324 g, 90S )) como um soldo branco. LH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,82 (s, 1 H) , 8,31 (s, 1 H) , 8,27 - 7,93 (m, 3H) , 7,11 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,05 - 5,76 (m, 2H), 5,47 (q, J = 6,6 Hz, 1 H), 5,42 - 5,17 (m, 1H) , 4,25 (t, J = 7,9 Hz, 1H) , 4,06 (s, 1 H) , 3,66 - 3,38 (m, 1 H), 3,13 - 2,87 (m, 1 H), 2,63 (d, J = 0,9 Hz, 3H), 2,05 (dt, J = 14,8, 7,8 Hz, 2H), 1,87 (d, J = 37,6 Hz, 1 H) , 1,61 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,46 (d, J = 8,7 Hz, 6H) , 1,27 (d, J = 7,0 Hz, 3H) , 0,92 (dd, J = 23,9, 6,7 Hz, 6H).LCMS (m/z) 582,3 [MS H]. Tr = 1,75.
Exemplo 163, Composto 163
A uma solução de 162 (0,02 g, 0,034 mmol) em THF (10 ml) foram adicionados N, N-diisopropiletilamina (0,022 g, 0,17 mmol), DMAP (quantidade catalítica) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,026 g, 0,069 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter o composto do título 163 (0,016 g, 80S ) como um sólid branco. ]H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,95 (s, 1 H) , 7,70 (d, J =
1,1 Hz, 2H) , 7,56 (s, 1H) , 7,17 (d, J = 9,7 Hz, 1H) , 6,45 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,97 (q, J = 6,7 Hz, 1 Η), 5,54 (q, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,46 - 4,11 (m, 2H) , 3,76 (s, 1 H) , 3,64 (s, 1 H) , 2,65 (t, J = 13,2 Hz, 1 H) , 2,52 (d, J = 1,0 Hz, 3H) , 2,04 - 1,76 (m, 2H) , 1,65 (dd, J = 8,1, 6,9 Hz, 6H) , 1,46 (s, 3H) , 1,38 (s, 1 H) , 1,32 (s, 3H) , 0,92 (t, J = 6,5 Hz, 6H) . LCM5 (m/'z) 564,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,19 min.
Exemplo 164: Composto 164
CompsstQ 1§4a:
A uma mistura de bromo-anilina (5,0 g, 27 mmol) e ácido malõnico (4,2 g, 41 mmol) de partida foi adicionado P0C13 (25 ml) . A mistura de reação foi aquecida até ao refluxo durante 2 horas. Então a mistura de reação foi vertida em água galada (100 ml) e extraída com EtOAc (2x100 ml) . Após concentração, o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 5:1 para proporcionar o 164a (2,0 g, 26 %) como um sólido branco. RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,89 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) , 7,76 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,49 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 2,85 (s, 3H). LCMS (m/z) 290,2/292,2 [ΜμΗ].
Composto 164b
Uma mistura de 164a (1,2 g, 4,1 mmol) , trietilamina (2,07 g, 20,5 mmol) , 1- (viniloxi) butano (7 ml) e
Tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,3 g, 0,26 mmol) em DMSO anidro (10 ml) num tubo micro-ondas foi aquecida até 150 °C durante 5 horas e diluída com EtOAc (100 ml) . O produto em bruto foi lavado com água e seco sobre Na2S04. Após concentração, o produto em bruto foi dissolvido em acetonitrilo (20 ml) e HC1 1 N (20 ml). Após extração com EtOAc (2x 50 ml) , seco sobre Na2S04 e concentração, o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar 164b (420 mg, 34 S ) . XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,16 (s, 1 H), 7,96 (d, J = 8,8 Hz, 1 H) , 7,83 (d, J = 8,9 Hz, 1 H) , 2,95 (s, 3H) , 2,89 (s, 3H). LCMS (m/z) 298,1/300,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,96 min. Composto 164c
Dímero de dicloro (p-cimeno) ruténio(II) (5,1 mg, 0,0084 mmol) e (IR, 2R) - (-)-iV-p-tosil-1,2- difeniletilenodiamina (7,5 mg, 0,001 mmol) foram suspensos em água desgaseif içada (7,5 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 minutos. A mistura foi agitada a 70 °C sob azoto durante 90 minutos. A mistura laranja turva resultante foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente. Foram adicionados 164b (0,5 g, 1,67 mmol) seguido por tetrahidrofurano desgaseifiçado (7,5 ml) e formato de sódio (0,57 g, 8,35 mmol) e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 minutos. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40 °C durante 3 horas e deixada a arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e a mistura lavada com água (2x) . As lavagens aquosas foram novamente extraídas com acetato de etilo e os orgânicos combinados lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporadas. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica eluindo com iso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para proporcionar o composto do título 164c (0,36 g, 72ã) como um sólido púrpura. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,93 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,76 (dd, J = 8,9, 1,2 Hz, 1H), 7,46 (s, 1 H) , 5,17 - 4,76 (m, 1H) , 2,91 (d, J = 1,2 Hz, 3H) , 1,57 (dd, J = 6,7, 1,2 Hz, 3H) . LCMS (m/z) 300,1/302,1 [ΜμΗ].
Tr = 2,11 min.
Composto 164d
Um balão de fundo redondo foi carregado com 164c (150 mg, 0,5 mmol), (E)-2,2-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-but-3-enoico ácido éster metílico (140 mg, 0,55 mmol), bis[(diciclohexil)(4- dimetilaminofenil)fosfina]paládio(II) cloreto (20 mg, 0,025 mmol) e fosfato de potássio tribásico (318 mg, 1,5 mmol). 0 sistema foi esguichado com azoto e éter ciclopentilmetílico (2 ml) e água (1 ml) foram adicionados. A reação foi aquecida durante 1 hora a 90 °C e então arrefecida até à temperatura ambiente. Foi adicionado acetato de etilo e a solução foi lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrado e concentrado a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 1:2 para dar 164d (130 mg, 750 ). LCMS (m/z) 348,2 [ΜμΗ].
Tr =2,61 min. Composto 164e
Uma solução de 164d (0,26 g, 0,748 mmol) em tetrahidrofurano (2 ml) e metanol (2 ml) foi preparado e foi adicionada uma solução aquosa de hidróxido de sódio 2M (1 ml) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A reação foi acidificada com ácido clorídrico a 2 Μ (1 ml) . Após extração com EtOAc (2x30ml) , as camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio e concentradas. Ao produto em bruto ácido em N,N-dimetilformamida anidra (5 ml) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionada N, N-diisopropiletilamina (568 mg, 4,39 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (368 mg, 0,97 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 3 minutos antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2 - ((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico resultando a partir da remoção de N-Boc do tripéptido le (0,355 g, 0,823 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml) . A reação foi agitada durante 1 hora. A reação foi extinta com água e extraída com acetato de etilo (2 x) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas in vacuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para dar 164e (500 mg, 90ã) como um sólido branco. LCMS (m/z) 746,2 [ΜμΗ]. Tr = 2,68 min.
A 164e (0,462 g, 0,62 mmol) em THF (7 ml) e metanol (3,5 ml) foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (0,10 g, 2,5 mmol) em água (3,5 ml). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Foi adicionado HC1 1 N (2,5 ml) à mistura de reação. Após concentração, ao ácido em bruto em THF (200 ml) foram adicionados N,N-diisopropiletilamina (0,431 g, 3,34 mmol), D MAP (quantidade catalítica) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1 H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,305 g, 0,802 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 164 (1 mg 0,3ã) como um sólido branco. LH RMN (4 00 MHz, Metanol-d4) δ 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,77 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,69 (s, 1 H), 6,50 (dd, J = 16,1, 1,0 Hz, 1 H), 6,22 (d, J = 16,2 Hz, 1 H), 5,26 (dd, J = 7,0, 2,2 Hz, 1 H) , 4,98 (q, J = 6,6 Hz, 1 H) , 4,42 - 4,15 (m, 1H) , 3,67 (ddd, J = 11,4, 7,1, 5,0 Hz, 2H) , 2,78 (s, 3H) , 2,20 (dd, J = 6,5, 3,0 Hz, 2H) , 2,06 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 1,92 - 1,71 (m, 3H), 1,55 (dd, J = 6,7, 1,0 Hz, 3H) , 1,46 (d, J = 8,2 Hz, 6H) , 1,35 (s, 3H) , 0,93 (t, J = 6,5 Hz, 6H) . LCMS (m/z) 598,2 [ΜμΗ] . Tr = 2,31 min.
Exemplo 165: Composto 165
Partindo de 31 (0,015 g, 0,0265 mmol), isobutírico ácido (0,005 g, 0,053 mmol), N,N-diisopropiletilamina (0,014 g, 0,106 mmol) e DMAP (quantidade catalítica) em THF (1 ml) foi adicionado hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,03 g, 0,08 mmol) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter o 165 (12 mg 79%) como um sólido branco. XH RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,88 - 7,71 (m, 1 H), 7,67 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,58
(d, J = 8,7 Hz, 1 H), 7,38 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 6,37 (dd, J = 16,3, 6,1 Hz, 1 H) , 5,88 (t, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,72 - 5,48 (m, 1 H), 5,27 (dd, J = 9,4, 6,2 Hz, 1 H), 4,49 - 4,28 (m, 1 H), 4,15 (d, J = 10,6 Hz, 1 Η), 3,78 (S, 1 Η), 3,56-3,37 (m, 1Η), 2,72 (s, 1 Η), 2,68 - 2,48 (m, 1 Η), 2,13 - 1,79 (m, 3H) , 1,81 - 1,61 (m, 6H) , 1,63-1,51 (m, 3H), 1,30 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,16 (dd, J = 8,2, 7,0 Hz, 6H) , 0,96 (t, J = 7,0 Hz, 6H) . LCMS (m/z) 636,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,31 min.
Exemplo 166: Composto 166
Procedendo a partir de um intermediário a partir da síntese de Composto 31 (0,01 g, 0,014 mmol) em acetonitrilo (0,5 ml) e THF (0,05 ml) foi adicionado ácido fluorídrico (48 ã em peso em água, 0,2 ml). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter o composto do título 2 (0. 007 g, 730 ) como um sólido branco. ΧΗ RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,84 (d, J = 8,6 Hz, 1 Η), 8,35 - 8,07 (m, 3H), 8,07 - 7,86 (m, 3H) , 7,01 - 6,62 (m, 2H), 5,52 - 5,02 (m, 1 Η), 4,37 - 4,18 (m, 1H) , 4,20 - 4,11 (m, 1 Η) , 3,99 (m, 1 Η) , 3,62 - 3,39 (m, 1 Η) , 2,98 (m, 1 Η) , 2,28 - 1,99 (m, 1 Η) , 1,98 (m, 1 Η), 1,63 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 1,23 (dd, J = 8,8, 6,6
Hz, 6H) , 0,97 (t, J = 6,9 Hz, 6H) .LCMS (m/z) 584,3 [M0 H] .
Tr = 1,67 min.
Exemplo 167: Composto 167
Procedendo a partir de 31, (0,015 g, 0,0265 mmol),
Boc-L-valina (0,012 g, 0,053 mmol), N, .Ν'- di isopropile ti lamina (0,014 g, 0,106 mmol) e DMAP (quantidade catalítica) em THF (1 ml) foi adicionado hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il) -1,1,3,3-tetrametilurónio (0,03 g, 0,08 mmol) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após concentração, o produto em bruto foi tratado com HC1 4 N em dioxano (1 ml) com agitação durante 1 hora para remover o grupo de proteção. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 167 (13 mg 73%) como um sólido branco. ]Ή RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,17 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 7,62 - 7,54 (m, 1 H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,53 (d, J = 16,4 Hz, 1H) , 6,40 (dd, J = 16,3, 6,1 Hz, 1 H) , 5,89 (t, J = 6,8 Hz, 1 H) , 5,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 5,31 (dd, J = 9,6, 6,1 Hz, 1H), 4,51 - 4,29 (m, 1H), 4,17 (d, J = 10,5 1 H), 3,86 - 3,63 (m, 4H), 3,60 - 3,42 (m, 2H), 2,72 (dd, J = 13,4, 9,4 Hz, 1 Η), 2,17 - 1,77 (m, 4H) , 1,80 - 1,58 (m, 4H) , 1,53 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 3H) , 1,32 - 1,19 (m, 1 H), 1,09 - 0,89 (m, 9H), 0,85 (d, J = 6,9 Hz, 3H). LCMS (m/z) 665,3 [ΜμΗ] . Tr = 2,31 min.
Exemplo 168: Composto 168
A 31 (0,025 g, 0,045 mmol) e isopropil carbonato de iodometilo (0,022 g, 0,090 mmol) em DMF (2 ml) foi adicionado Cs2C03 (0,028 g, 0,090mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após filtração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 168 (0,005 g, 170 ) . 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) <5 8,46 (dd, J = 20,7, 8,2 Hz, 2H) , 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,85 - 7,61 (m, 2H) , 7,59 (s, 1 H) , 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,62 (dd, J = 16,6, 5,3 Hz, 1 H), 6,42 (d, J = 16,3 Hz, 1 H), 5,93 (q, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,72 - 5,54 (m, 1 H) , 4,45 (m, 1 H) , 4,38 (m, 1 H) , 4,25- 3,90 (m, 3H) , 3,86 - 3,69 (m, 1H) , 2,75 (m, 1H) , 2,14 - 1,82 (m, 2H), 1,72 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,58 (m, 4H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,11 (dd, J = 27,8, 6,2 Hz, 6H), 0,97 (d, J = 6,6 Hz, 6H). LCMS (m/z) 682,3 [M0 H]. Tr = 2,29 mi.
Exemplos 169 e 170: Compostos 169 e 170
A uma solução de 3-bromo-2-fluoroanilina, obtida da Apollo Scientific, (2,0 g, 10,53 mmol) e piridina (1,5 g, 19,3 mmol) em diclorometano anidro (30 ml) foram adicionados 2 (2,1 g, 15,8 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após concentração, o produto em bruto foi diluído com EtOAc (200 ml), lavada com água (2x) e seco sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar 2,8 g de intermediário de amida que foi dissolvido em H2S04 (10 ml) conc. e agitado durante 3 horas. A mistura de reação foi vertida em água gelada (100 ml) e agitada durante 1 hora. Após filtração, o sólido foi recolhido e seco durante a noite para proporcionar o composto do título 170a (1,5 g, 59ã) como um sólido. LCMS (m./z) 242,2/244,2 [ΜμΗ] . Tr = 2,10 min.
Composto 170b
A uma solução de 170a (1,5 g, 6,2 mmol) e DMF (0,5 g, 6,8 mmol) em diclorometano anidro (50 ml) foram adicionados cloreto de tionilo (2,27 g, 19,1 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada a 50°C durante 3 horas. Após concentração, o produto em bruto foi diluído com EtOAc (200 ml), lavado com água (2x) e seco sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar o composto do título 170b (0,9 g, 560 ) como um sólido. LCMS (çáz) 260,1/262,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,20 min.
Composto 170c
Uma mistura de quinolina (0,9 g, 3,46 mmol), trietilamina (1,75 g, 17,28 mmol), 1-(viniloxi)butano (6 ml) e Tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,3 g, 0,26 mmol) em DMSO anidro (10 ml) num tubo micro-ondas foi aquecida até 150 °C durante 5 horas e diluída com EtOAc (100 ml) . 0 produto em bruto foi lavado com água e seco sobre Na2S04. Após concentração, o produto em bruto foi dissolvido em acetonitrilo (20 ml) e HC1 1 N (20 ml). Após extração com EtOAc (2x 50 ml) , secagem sobre Na2S04 e concentração, o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para proporcionar 170c (0,20 g, 22 0 ) . LCMS (m/z) 268,1/270,1 [ΜμΗ] . Tr = 2,08 min.
Composto 170d
Dímero de dicloro (p-cimeno) ruténio(II) (2,2 mg, 0,0038 mmol) e (1 R,2R)-(-)-N-p-tosil-1,2-difeniletil-enodiamina (3,2 mg, 0,00045 mmol) foram suspensos em água desgaseifiçada (7,5 ml) e a mistura foi desgaseifiçada com azoto durante 15 minutos. A mistura foi agitada a 70 °C sob azoto durante 90 minutos. A mistura laranja turva resultante foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente. Foram adicionados sólido 170c (0,2 g, 0,746 mmol) seguido por tetrahidrofurano desgaseifiçado (7,5 ml) e formato de sódio (0,25 g, 3,7 mmol) e a mistura de reação foi desgaseifiçada com azoto durante 5 minutos. A mistura de reação foi vigorosamente agitada a 40 °C durante 3 horas e deixada arrefecer. Foi então diluída com acetato de etilo e a mistura lavada com água (2 x) . As lavagens aquosas foram novamente extraídas com acetato de etilo e os orgânicos combinados lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica eluindo com íso-hexanos/acetato de etilo 2:1 para proporcionar o 170d(0,18 g, 900 ) como um sólido púpura. LCMS (m/z) 270,1/272,1 [ΜμΗ]. Tr = 1,81 min.
Composto 170e
A uma solução de 17Od (0,18 g, 0,67 mmol) em diclorometano anidro (5 ml) foram adicionados trietilamina (0,226 g, 2,24 mmol) e acetilo anidrido (0,15 g, 1,49 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após concentração, o produto em bruto foi diluído com EtOAc (50 ml) , lavada com água (2x) e seco sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar o 17Oe (0,18 g, 86ã) como um sólido. LCMS (m/z) 312,1/314,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,35 min.
Composto 170f
A uma mistura de 170e (180 mg, 0,577 mmol) , trietilamina (175 mg, 1,73 mmol) e ácido 2,2-dimetilbut-3-enoico (99 mg, 0,865 mmol) em acetonitrilo anidro (2 ml) num tubo micro-ondas foi adicionado paládio acetato (13 mg, 0,058 mmol) e tri-o-tolifosfina (35 mg, 0,12 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 100 °C durante 20 minutos e diluída com EtOAc (30 ml). 0 produto em bruto foi lavado com água e seco sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar 170f (150 mg, 75 ã) . LCMS (m/z) 346,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,20.
Composto 170g
A 170f (100 mg, 0,29 mmol) em N, N-dimetilformamida anidra (5 ml) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionada N,27-diisopropiletilamina (112 mg, 0,87 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (165 mg, 0,44 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 3 minutos antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino- 3-metil-butirilamino)-propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (125 mg, 0,29 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml) . A reação foi agitada durante 1 hora. A reação foi extinta com água e extraída com acetato de etilo (2 x). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para dar o 170g (152 mg, 69ã) como um sólido branco. LCMS (m/z) = 759,2 [ΜμΗ]. Tr = 2,54 min.
Composto 169
A uma solução de 170g (0,152 g, 0,20 mmol) em THF (2 ml) e metanol (2 ml) foi adicionado uma solução de hidróxido de lítio (0,02 g, 0,83 mmol) em água (2 ml). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Foi adicionado HC1 1 N (0,9 ml) à mistura de reação. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 169 (0,110 g, 910 ) como um sólido branco. XH RMN (400 MHz, Metanol-di) δ 8,41 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1 H) , 7,80 (dd, J = 8,7, 6,6 Hz, 1 H), 7,75 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 8,7 Hz, 1 H) , 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 1 H) , 6,92 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 6,72 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 5,22 (q, J = 7,0 Hz, 1 H) , 5,06 (q, J = 6,6 Hz, 1 H) , 4,31 - 4,08 (m, 1 H) , 3.96 (s, 1H) , 3,41 (dd, J = 9,8, 3,6 Hz, 1 H) , 2,88 (s, 1 H), 2,19 - 1,87 (m, 2H), 1,72 (dd, J = 10,4, 5,9 Hz, 1 H), 1,63 - 1,51 (m, 2H), 1,47 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,38 (d, J = 4,5 Hz, 6H), 1,19 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 0,82 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -135,18 (d, J = 6,6 Hz). LCMS (m/z) 586,3 [ΜμΗ] . Tr = 1.97 min.
Composto 170
A uma solução de 169 (0,05 g, 0,085 mmol) em THF (85 ml) foram adicionados N, N-diisopropiletilamina (0,055 g, 0,128 mmol), DMAP (quantidade catalítica) e hexafluorofosfato metanaminio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,048 g, 0,128 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 170 (0,004 g, 8%) como um sólido branco. XH RMN (400 MHz,
Metanol-d4) δ 8,34 - 8,11 (m, 1 H) , 7,72 (dd, J = 8,7, 6,5 Hz, 1 H), 7,68 - 7,52 (m, 1 H), 7,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,17 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 6,77 - 6,31 (m, 2H), 5,84 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,75 - 5,63 (m, 1 H), 4,49 - 4,10 (m, 2H), 3.76 (m, 1 H) , 2,67 (dt, J = 13,5, 6,5 Hz, 1 H) , 1,98 - 1.76 (m, 3H), 1,71 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,63 (m, 1 H), 1,60 - 1,45 (m, 7H) , 1,43 - 1,21 (m, 3H) , 1,13 - 0,79 (m, 6H) . LCMS (m/z) 568,3 [M0 H]. Tr = 2,13 min.
Exemplo 171: Composto 171
Partindo de 31, (0,06 g, 0,106 mmol), ácido acético (0,064 g, 1,06 mmol), 27, Ar-diisopropiletilamina (0,205 g, 1.59 mmol) e DMAP (quantidade catalítica) em THF (1 ml) foi adicionado hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7- azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,201 g, 0,53 mmol) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 171 (50 mg 81%) como um sólido branco. RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,78 (d, J = 9.0 Hz, 1 H), 7,72 - 7,60 (m, 2H), 7,39 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,62 - 6,45 (m, 1 H) , 6,43 (m, 1 H) , 5,91 (m, 1 H) , 5.60 (q, J = 7,3 Hz, 1 H), 5,27 (dd, J = 9,6, 6,1 Hz, 1 H), 4,42 (dd, J = 18,8, 12,5 Hz, 1 H), 4,18 (d, J = 10,5 Hz, 1 H) , 3,77 (d, J = 9,3 Hz, 1 H) , 3,55 - 3,37 (m, 1 H) , 2,74 (t, J = 11,2 Hz, 1 H) , 2,08 (s, 3H) , 2,05 - 1,80 (m, 3H) , 1,71 - 1,62 (m, 5H), 1,58 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,32 (d, J = 6.1 Hz, 3H) , 1,12 - 0,84 (m, 6H) . LCMS (m/z) 608,3 [ΜμΗ] .
Tr = 2,18 min.
Exemplo 172: Composto 172
Partindo de um 31, (0,015 g, 0,0265 mmol), ácido n- butírico (0,023 g, 0,265 mmol), N, N-diisopropiletilamina (0,051 g, 0,398 mmol) e DMAP (quantidade catalítica) em THF (1 ml) foi adicionado hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,05 g, 0,133 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 172 (12 mg 79ã) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,18 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 7,74 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,71 - 7,54 (m, 2H) , 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 6,64 - 6,43 (m, 1 H) , 6,39 (dd, J = 16,4, 5,8 Hz, 1 H), 5,91 (d, J = 6,9 Hz, 1 H), 5,57 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 5,30 (dd, J = 9,6, 6,1 Hz, 1 H), 4,39 (dd, J = 13,8, 3,5 Hz, 1 H) , 4,20 (d, J = 10,5 Hz, 1 H) , 3,85 - 3,66 (m, 1 H), 3,48 (ddd, J = 9,5, 5,8, 1,3 Hz, 1 H), 2,74 (td, J = 12,7, 3,4 Hz, 1 H) , 2,35 (td, J = 7,3, 3,3 Hz, 2H) , 2,11 - 1,80 (m, 3H) , 1,73 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,71 - 1,60 (m, 4H) , 1,52 (d, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,33 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,07 - 0,83 (m, 9H). LCMS (m/z) 636,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,31 min.
Exemplos 173 e 174: Compostos 173 e 174
Composto 173a
[1223] A uma mistura de (R)-1-(7-bromoquinolin-2-il)acetato de etilo (200 mg, 0,683 mmol), trietilamina (137 mg 1,36 mmol) e carboxilato de vinil ciclohexanona distribuído comercialmente (obtido da Small Molecules, Inc.), (134 mg 0,683 mmol) de partida em anidro dioxano (7 ml) num tubo micro-ondas foram adicionados acetato de paládio (29 mg, 0,13 mmol) e tri-o-tolifosfina (79 mg, 0,26 mmol). A mistura de reação foi aquecida até 100 °C durante 20 minutos e diluída com EtOAc (30 ml). 0 produto em bruto foi lavada com água e seco sobre Na2S04. Após concentração, 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando um gradiente de íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para proporcionar 173a (200 mg, 71 %) . LCMS (m/z) 410,2 [ΜμΗ]. Tr = 2,81 min.
Compostos 173b e 174a
Uma solução de 173a (0,3 g, 0,73 mmol) em anidro THF (5 ml) foi arrefecida até -78°C. foi adicionado brometo de metilmagnésio (3,0 M solução em éter, 0,37 ml) à mistura de reação gota a gota. A mistura foi agitada a -78 °C durante 1 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc (30 ml) e extinta com NH4C1 saturado (2 ml) . Após separação das camadas, a camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrado, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar 173b (0,1 g, 32ã) e 174a (0,1 g, 32ã). LCMS (m/z) 426,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,31 min e Tr = 2,44 min.
Composto 173c
Foi preparada uma solução de 173b (0,05 g, 0,118 mmol) em te trahidrof urano (1 ml) e metanol (1 ml) e foi adicionada uma solução aquosa de hidróxido potássio a 1 M (1 ml) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A reação foi acidificada com ácido clorídrico a 1 Μ (1 ml) . Após extração com EtOAc (2x30ml) , as camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio e concentrado. Ao ácido em bruto em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (46 mg, 0,354 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (90 mg, 0,236 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 3 minutos antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (66 mg, 0,153 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml) . A reação foi agitada durante 1 hora. A reação foi extinta com água e extraída com acetato de etilo (2 x) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para dar 173c (70 mg, 770 ) como um sólido branco. LCMS (m/z) 769,2 [M0 H] Tr = 2,65 min.
Composto 173
A uma solução de 173c (0,040 g, 0,052 mmol) em THF (1 ml) e metanol (1 ml) foi adicionada uma solução de KOH 1 N em água (0,21 ml). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Foi adicionado HC1 1 N (0,21 ml) à mistura de reação. Após concentração, o produto em bruto esteve sob alto vácuo durante a noite. Ao ácido em bruto acima em THF (30 ml) foram adicionados N,N~ diisopropiletilamina (0,013 g, 0,104 mmol), DMAP (quantidade catalítica) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,030 g, 0,078 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 173 (0,01 g, 250 ) como um sóido branco. ΧΗ RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,57 (d, J = 7,1 Hz, 1 Η), 8,30 (d, J = 8,4 Hz, 1 Η), 8,02 - 7,72 (m, 2Η), 7,62 (S, 1 Η), 7,47 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,32 (d, J = 9,3 Hz, 1 H) , 6,52 (d, J = 16,5 Hz, 1 H) , 6,35 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 5,93 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,63 (dd, J = 7,9, 5,7 Hz, 1 H), 4,51 - 4,27 (m, 1 H), 3,77 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 2,69 (t, J = 11,5 Hz, 1 H), 2,24 (s, 2H), 1,92 (dt, J = 26,0, 10,1 Hz, 4H), 1,72 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,70- 1,60 (m, 6H), 1,59 (d, J = 7,1 Hz, 3H) , 1,27 (s, 3H) , 0,95 (dd, J = 6,7, 3,3 Hz, 6H). LCMS (m/z) 620,3 [ΜμΗ]. Tr = 2,10 min.
Composto 174b
A uma solução de 174a (0,10 g, 0,235 mmol) em THF (2 ml) e metanol (1 ml) foi adicionado uma solução de KOH 1 N em água (1,2 ml) . A mistura de reação foi agitada â temperatura ambiente durante 1 hora. Foi adicionado 1 N HC1 (1,2 ml) à mistura de reação. Após concentração, o produto em bruto esteve sob alto vácuo durante a noite. 0 produto em bruto acima e 2,6-lutidina (0,15 g, 1,41 mmol) foram dissolvidos em DCM (5 ml). A mistura de reação foi arrefecida até 0°C, foi adicionado TBSOTf (0,248 g, 0,94 mmol) gota a gota to a mistura de reação. Após agitado à temperatura ambiente durante 1 hora e concentrado, o produto em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar 174b (0,07 g, 43%). LCMS (m/z) 698,4 [ΜμΗ]. Tr = 3,79 min.
Composto 174c
Foi preparada uma solução de 174b (0,07 g, 0,10 mmol) em tetrahidrof urano (1 ml) e metanol (1 ml) e foi adicionada uma solução aquosa de carbonato de potássio a 1 M (0,4 ml) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. foi adicionado HC1 1 N aq. em água (0,8 ml) à solução de reação. Após concentração e co-evaporação com tolueno (3x) para dar o ácido em bruto. Ao ácido em bruto em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml) à temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto foi adicionada N/N-diisopropiletilamina (39 mg, 0,30 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (76 mg, 0,20 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 3 minutos antes de adicionar uma solução de éster 2,2,2-tricloro-etílico do ácido (S)-1-[(S)-2-((S)-2-amino-3-metil-butirilamino)- propionil]-hexahidro-piridazina-3-carboxílico (66 mg, 0,153 mmol) em N,N-dimetilformamida anidra (2 ml). A reação foi agitada durante 1 hora. A reação foi extinta com água e extraída com acetato de etilo (2 x) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 0:1 para dar 174c (70 mg, 70ã) como um sólido branco. LCMS (m/z) 997,2 [ΜμΗ] . Tr = 3,24 min.
Composto 174
A uma solução de 174c (0,07 g, 0,07 mmol) em acetonitrilo (2 ml) e THF (2 ml) foi adicionado ácido f luorídrico (48 0 em peso em água, 1,3 ml) . A mis tira de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e arrefecida até 0°C. Foi adicionada solução aquosa saturada de NaHCC>3 gota a gota para neutralizar a mistura de reação. Após extração com EtOAc (2 x) , seco sobre Na2S04 e concentração, o produto em bruto foi dissolvido em THF (2 ml) e MeOH (2 ml) . foi adicionado KOH 1 N em água (0,21 mmol) à mistura de reação. Após ser agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, a mistura de reação foi acidificada através de adição de HC1 1 N em água (0,21 ml). Após concentração e co-evaporação com tolueno (3x), ao ácido em bruto acima em THF (70 ml) foram adicionados N,N-diisopropiletilamina (0,045 g, 0,35 mmol), DMAP (quantidade catalítica) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(1H-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,053 g, 0,14 mmol) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. Após concentração, o produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter 174 (0,014 g, 20ã) como um sólido branco. ^H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,30 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) , 7,95 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,87 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,84 - 7,72 (m, 1 H) , 7,66 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,85 (d, J = 16,4 Hz, 1 H), 6,55 (d, J = 16,4 Hz, 1 H) , 5,48 - 5,20 (m, 1 H) , 5,16 - 4,92 (m, 2H) , 4,77 (d, J = 12,1 Hz, 1 H) , 4,26 (d, J = 7,2
Hz, 1 Η), 3,77 (dd, J = 7,6, 4,2 Hz, 1 H), 2,44 - 2,23 (m, 2H) , 2,21 - 1,94 (m, 2H) , 1,97-1,74 (m, 4H) , 1,80 - 1,57 (m, 4H) , 1,55 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,25 (d, J = 6,9 Hz, 3H) , 1,20 (s, 3H) , 1,03 - 0,75 (m, 9H) . LCMS (m/z) 620,3 [ΜμΗ] . Tr = 2,02 min.
Exemplo 175: Composto 175
A uma solução de 1-(7-bromo-3-metilquinolin-2-il)etanona (4,8 g, 18,1 mmol) em THF anidro (200 ml) foram adicionados etóxido de titânio (8,4 g, 36,7 mmol) e (R)-2-metilpropano-2 - sulf inamida (2,7 g, 22,02 mmol) . A mistura foi agitada a 60 °C durante a noite. Após arrefecida novamente até à temperatura ambiente, foi adicionada salmoura (100 ml) à mistura de reação. 0 sólido foi removido por filtração. 0 filtrado foi extraído com EtOAc (2 x 100ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar 175a (2,8 g, 43%) como um sólido. LCMS (m/z) 367,1/369,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,47 min.
Composto 175b
Uma solução de 175a (0,4 g, 1,09 mmol) em THF anidro (10 ml) foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado NaBH4 (0,062 g, 1,63 mmol) à mistura de reação por porções. Após ser agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, a mistura de reação foi extinta através de adição de água (1 ml) . Então diluída com EA (50 ml) , lavada com salmoura e seca sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar 175b (0,15 g, 380 ) como um sólido. LCMS (m/z) 369,1/371,1 [ΜμΗ]. Tr = 2,41 min.
Cooipssfe 175ε
Um balão de fundo redondo foi carregado com 175b (150 mg, 0,41 mmol), éster metilico de ácido (E)-2,2-dimetil-4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2 -il)-but-3-enoico (114 mg, 0,45 cloreto de bis[(diciclohexil) (4 -dimetilaminofenil)fosfina]paládio(II) (16,7 mg, 0,021 mmol) e fosfato de potássio tribásico (261 mg, 1,23 mmol). 0 sistema foi esguichado com azoto e foram adicionados éter ciclopentilmetílico (2 ml) e água (1 ml) . A reação foi aquecida durante 1 hora a 90 °C e então arrefecida até à temperatura ambiente. Foi adicionado acetato de etilo e a solução foi lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada in vácuo. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia em gel de sílica utilizando íso-hexanos/acetato de etilo 1:2 para dar 175C (140 mg, 820 ). LCMS (m/z) 417,2 [M0 H] . Ts 2,37 min.
Composto 175d
Uma solução de 17 5c (0,14 g, 0,33 6 mmol) foi dissolvida em HC1 4N /dioxano (1 ml) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Após concentração, a amina obtida, 2 (0,20 g, 0,504 mmol), N,N- diisopropiletilamina (0,194 g, 1,5 mmol) e hexafluorofosfato metanamínio de 2-(ΙΗ-7-azabenzotriazol-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio (0,255 g, 0,672 mmol) foi dissolvido em DCM (10 ml) . A mistura de reação foi agitada â temperatura ambiente durante 1 hora, diluída com EA (50 ml), lavada com salmoura e seca sobre Na2S04. Após concentração, o resíduo em bruto foi purificado por meio de cromatografia em gel de sílica utilizando iso- hexanos/acetato de etilo de 1:0 a 1:1 para dar 175d (0,20 g, 860 ) como um sólido. LCMS (m/z) 695,4 [M0 Η] . Ί&amp;2,48 min.
A uma solução de 175d (0,20 g, 0,288 mmol) em THF (2 ml) e MeOH (2 ml) foi adicionado KOH 1 N em água (1,15 ml) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e foi acidificada através da adição de HC1 1 N em água (1,15 ml). Após concentração, o produto em bruto foi dissolvido em HCl/dioxano 4 N (2 ml) e agitado durante 1 hora. Após concentração e co-evaporada com tolueno (3x), o produto em bruto acima foi dissolvido em THF (15 0 ml) . N, N-diisopropiletilamina (0,11 g, 0,86 mmol), DMAP (quantidade catalítica) e hexafluorofosfato metanamínio de 2 -(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3 -tetrametilurónio (0,216 g, 0,57 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. Após concentração, o
produto em bruto foi purificado por meio de HPLC preparativa para obter o composto do título 175 (0,07 g, 200 ) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,22 (s, 1 H) , 7,83 (d, J = 8,9 Hz, 1 H) , 7,71 (d, J = 6,6 Hz, 2H) , 7,04 (d, J = 9,4 Hz, 1 H) , 6,61 - 6,24 (m, 2H) , 5,64 (dd, J = 7,4, 2,5 Hz, 1 H), 5,26 (q, J = 6,7 Hz, 1 H), 4,49 - 4,21 (m, 2H), 3,56 (dd, J = 11,6, 2,9 Hz, 1 H), 2,77 - 2,45 (m, 4H), 2,35 - 2,06 (m, 1 H), 1,96 - 1,76 (m, 2H), 1,57 (m, 8H) , 1,48 (s, 3H) , 1,32 (s, 3H) , 0,95 (dd, J = 35,2, 6,7 Hz, 6H). LCMS (m/z) 563,3 [MH H]. Tr = 2,2 min. Exemplos Biológicos
Atividade de Inibição de Peptidil-prolil isomerase (PPLIase) 0 ensaio de PPIase foi baseado no procedimento relatado por Janowski et al. {Anal. Biochem. 1997, 252, 299) . Tampão de ensaio (1980 1 de uma solução contendo HEPES a 35 mM pH 7,8, DTT a 50 M, e NP40 a 0,Olã) foi pré-equilibrado a 10 °C em cubeta de quartzo equipada com agitador superior. A esta solução foi adicionado 10 1 de concentração em DMSO (concentração final: DMSO a 0,5ã), seguido de 5 L de uma solução de estoque a 2 M de ciclofilina A (concentração final: 5 nM) . A reação foi iniciada com a adição de 5 L de 40 mM do tetrapéptido Succ- AAPF-pNA (concentração final de 100 M) dissolvido numa solução de LiCl a 0,5 M em trifluoroetanol. Após o início da reação, a absorvância do substrato peptídico foi monitorizada a 330 nm durante cinco minutos utilizando um espectrofotómetro Beckman Coulter DU800. As curvas de progresso foram ajustadas com um modelo de decaimento exponencial individual para calcular as taxas. Os valores de IC50 foram calculados com um ajuste logístico de quatro parâmetros utilizando o software GraphPad Prism.
Ensaio de ligação competitiva de Ciclofilina A TR-FRET A potência do inibidor foi medida utilizando um ensaio de ligação competitiva com uma leitura de transferência de energia ressonante de fluorescência resolvida no tempo (TR-FRET) . A um tampão de reação que consiste em HEPES a 35 mM pH 7,8, NaCl a 100 mM, 0,010 de NP-40 (Pierce), DTTa 1 mM, e 10 de DMSO foram adicionados o seguinte: 5 nM de ciclofilina A modificada na terminação N com uma etiqueta de afinidade de 83 histidina (CypA); 150 nM de ciclosporina A modificada com um ligante unido a um fluoróforo Cy5 (CsA-Cy5); 1 nM de anticorpo anti-(63His) marcado com Eu (Perkin-Elmer); e composto de teste a uma de várias concentrações. 0 volume total da solução de ensaio foi de 100 1. Após duas horas de incubação, o TR-FRET foi medido utilizando um leitor de placas Perkin Elmer Envision (excitação a 340 nm, emissão medida a 590 nm e 665 nm) . 0 sinal foi calculado como a razão da emissão a 665 nm a essa a 590 nm. Um valor de ICS0 foi calculado utilizando umjuste logístico de quatro parâmetros.
Quando testados, certos compostos desta invenção foram encontrados que inibem a ligação de ciclofilina conforme listado no Quadro 1 abaixo. Os IC5C são apresentados em que A é < 100 nM, B é 101 a 1000 nM e C é 1001 a 10.000 nM. Atividade Antiviral A atividade antiviral de um composto pode ser medida utilizando protocolos de rastreio padrã: por exemplo,
Ensaio de imunodeteção de Flavivírus baseado em célula e ensaio de efeito citopático de Flavivírus baseado em célula conforme descrito na Publicações de patente US Número US/20130022573, que é pela presente incorporado por referência em sua totalidade.
Um aspeto da invenção refere-se a métodos de inibir infeções virais, que compreende a etapa de tratar um amostra ou indivíduo suspeito de necessitar tal inibição com uma composição da invenção. A atividade antiviral de um composto da invenção pode ser medida utilizando protocolos de rastreio padrão que são conhecidos. A atividade anti-HCV dos compostos desta invenção foi testada numa linha celular de hepatoma humano Huh-7 portando um replicão de HCV. 0 ensaio compreendia as seguintes etapas:
Etapa 1 (preparação de composto e diluição em série): A diluição em série foi realizada em DMSO a 100% uma placa de 384 poços. Preparou-se uma solução contendo um composto com uma concentração de 225 vezes da concentração final de diluição em série em DMSO a 100% e adicionou-se-lhes 15 μΐ aos poços pré-especificados na coluna 3 ou 13 de uma placa de 384 poços de polipropileno. 0 restante da placa de 384 poços foi preenchido com 10 μΐ de DMSO a lOOã, exceto para as colunas 23 e 24, onde 10 μΐ de um inibidor de protease de HCV a 500 μΜ (ITMN-191) em DMSO a lOOã foi adicionado. 0 inibidor de protease de HCV foi utilizado um controlo de lOOã de inibiçS o da replicaçS o de HCV. A placa foèntIEI o colocada numa EstaçUI o de Trabalho Biomek FX para imciar a diluiçB o em série. diluiçB o em série foi realizad durante dez ciclos de diluiçlS o 3 vezes da coluna 3 a 12 ou da coluna 13 a 22.
Etapa 2 (preparação de placa de cultura celular e adição de composto) : A cada poço de uma placa de 384 poços de polipropileno preto, Adicionaram-se 90 μΐ de meio celular contendo 1600 células de replicão de Huh-7 HCV suspensas com uma Estação de Trabalho Biotek uFlow. Transferiu-se um volume de 0,4 μΐ da solução do composto da placa de diluição em série para a placa de cultura de células numa Estação de Trabalho Biomek FX. A concentração de DMSO na condição de ensaio final foi de 0,440 . As placas f®am incubadas durante 3 dias a 37°C com 5ã de C02 e 85ã de humidade.
Etapa 3 (deteção de citotoxicidade e inibição de replicação virai): a) avaliação da citotoxicidade: Os meios na placa de cultura celular de 384 poços foram aspirados com uma lavadora de placas Biotek EL405. Um volume de 50 μΐ de uma solução contendo 4 00 nM de Calceína AM em lOOã de PBS foi adicionado a cada poço da placa com uma Estação de Trabalho Biotek uFlow. A placa foi incubada durante 30 minutos à TA antes do sinal de fluorescência (emissS o 490 nm, excitaçS o 520 nm) fo medido com um leitor de placas Perkin Elmer Envision. b) avaliaç0 o da inibiçS o de replicaç0 o viral: A solução de calceína-PBS na placa de cultura de células de 384 poços foi aspirada com uma lavadora de placas Biotek EL405. Um volume de 20 μΐ de tampão de luciferase Dual-Glo (Promega, Dual-Glo Luciferase Assay Reagent, cat. #E2 98B) foi adicionado a cada poço da placa com uma Estação de Trabalho Biotek uFlow. A placa foi incubada durante 10 minutos A TA. um volume de 2 0 μΐ de uma solução contendo uma mistura 1:100 de substrato Dual-Glo Stop 0 Glo (Promega, Dual-Glo Luciferase Assay Reagent, cat. #E313B) e tampão Dual-Glo Stop 0 Glo (Promega, Dual-Glo Luciferase Assay Reagent, cat. #E314B) foi então adicionado a cada poço da placa com uma Biotek uFlow Workstation. A placa foi incubada à TA durante 10 minutos antes de se medir o sinal de luminescência com um leitor de placas Perkin Elmer Envision.
Etapa 4 (cálculo) .- A percentagem de citotoxicidade foi determinada por conversão de calceína AM em produto fluorescente. 0 sinal fluorescente médio dos poços de controlo de DMSO foi definido como lOOã não tóxico. 0 sinal fluorescente individual do poó tratado com composto de teste foi dividido pelo sinal médio dos poços de controlo de DMSO e depois multiplicado por lOOã para obter a viabilidade percentual, percentagem de atividade de replicação anti-HCV foi determinada pelo sinal de luminescência do poço de teste em comparação com os poços de controlo de DMSO. 0 sinal de fundo foi determinado pelo sinal de luminescência médio dos poços tratados com o inibidor de protease de HCV e foi subtraído do sinal dos poços de teste assim como dos poços de controlo de DMSO. Após as diluições em série de 3 vezes, os valores de EC50 e CC50 foram calculados ajustano a ã de inibição em cada concentração à seguinte equação: % de inibição = 100%/[(EC5O/[l])b + 1] onde b é o coeficiente de Hill. Veja-se, para referência, Hill, A. V., The Possible Effects of the Aggregation of the Molecules of Haemoglobin on its Dissociation Curves, J. Physiol. 40: iv-vii. (1910) . valores de 0 de inibição a uma concentração específica, por exemplo 2 μΜ, também pode ser derivado da fórmula acima.
Quando testados, certos compostos desta invenção foram encontrados que inibem a replicação virai conforme no Quadro 1. No Quadro 1, os EC50 para o Replicão 1 a são apresentados como uma 0 de inibição.
Quadro 1
As respostas farmacológicas e bioquímicas específicas observadas podem variar de acordo com e depender do composto ativo particular selecionado ou se estão presentes veículos farmacêuticos, bem como o tipo de formulação e modo de administração utilizado, e tais variações esperadas ou diferenças nos resultados são contemplados de acordo com a prática da presente invenção.
Embora formas de realização específicas da presente invenção sejam no presente documento ilustradas e descritas em detalhe, a invenção não é limitada às mesmas. As descrições detalhadas acima são fornecidas como exemplares da presente invenção e não devem ser interpretadas como constituindo qualquer limitação da invenção.
REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. Não constitui uma parte integrante do documento de patente europeu. Embora a compilação das referências tenha sido feita com grande cuidado, não são de excluir erros ou omissões e o EPO não aceita qualquer responsabilidade a esse respeito.
Documentos de Patente citados na descrição • WO 9702285 A [0005] • WO 9807743 A [0005] • WO 2006138507 A, Lin [0005] • WO 2012040040 A [0005] • WO 2011144924 A [0005] • WO 2011098808 A [0005] • WO 2011063233 A [0242] • WO 2011090935 A [0247] • WO 2009003719 A [0308] • WO 2006004880 A2 [0627] • US 20130022573 A [1246]
Documentos de não patente citados na descrição • CALISHER et al. J. Gen. Virol. , 1993, vol. 70, 37-43 [0002] • MOENNIG, V. Adv. Vir. Res., 1992, vol. 48, 53-98 [0002] • BOYER, N. J Hepatol., 2000, vol. 32, 98-112 [0003] • Dl BESCEGLIE, A.M. ; BACON, B. R. Scientific American, 1999, 80-85 [0003] • GORDON, C. P. et al. J. Med. Chem. , 2005, vol. 48, 1-20 [0003] • MARADPOUR, D. et al. Nat. Rev. Micro., 2007, vol. 5 (6) , 453-463 [0003] • DYMOCK et al. Antiviral Chemistry &amp; Chemotherapy, 2000, vol. 11 (2), 79-95 [0003] • NEUMANN et al. Science, 1998, vol. 282, 103-7 [0003] • FUKIMOTO et al. Hepatology, 1996, vol. 24, 1351-4 [0003] • DOMINGO et al. Gene, 1985, vol. 40, 1-8 [0003] • MARTELL et al. J. Virol. , 1992, vol. 66, 3225-9 [0003] • SCOTT, L. J. et al. Drugs, 2002, vol. 62, 507-556 [0004] • J. Am. Chem. Soc, 2003, vol. 125, 3849-3859 [0005] • J. Org. Chem., 2000, vol. 65, 9255-9260 [0005] • Angew. Chem. Int. Ed., 1999, vol. 38, 2443-2446 [0005] • FOSTER. Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism. Trends Pharmacol. Sci., 1984, vol. 5 (12) , 524-527 [0059] • DAVIES, J. S. J. Peptide Sci. , 2003, vol. 9, 471-501 [0104] [0111] • NICOLAOU et al. Journal ofAmerican Chemical Society, 2000, vol. 122, 3830 [0105] • SEDRANI et al. Journal ofAmerican Chemical Society, 2003, vol. 125, 3849 [0106] • NICOLAOU et al. Journal of American Chemical Society, 2000, vol. 122, 3830 [0106] • PAQUETTE. Journal ofAmerican Chemical Society, 2002, vol. 124, 4257 [0112] • Chemical Reviews, 2006, vol. 106 (3), 911-939 [0112] • GREENE ; WUTS. Protective Groups in Organic Synthesis.
John Wiley and Sons, Inc, [0115] • JACS, 1990, vol. 112, 2767 [0126] • Synlett, 2002, vol. 12, 2039-2040 [0127] [0315] [0370] • Organic Letters, 2007, vol. 9, 1635 [0129] • Angew. Chem. Int. Ed. , 2006, vol. 45 (46) , 7736 [0130] [0564] • Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1999, vol. 38, 2443 [0168] • Org. Lett., 2007, vol. 9, 1635-1638 [0340] • Tetrahedron, 2009, vol. 65, 7837-7851 [0639] • J. Am. Chem. Soc., 2011, vol. 133, 8165 [0664] • HILL, A. V. The Possible Effects of the Aggregation of the Molecules of Haemoglobin on its Dissociation Curves. J. Physiol., 1910, vol. 40 [1248]

Claims (5)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Um composto da Fórmula I:
    Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisõmero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: A é uma ligação, -0-, -S (0) n- , -NH-, -N ( (Ci-C4) alquil) -ou (Ci-C2) alquileno; A1 é -CR9=CR9-,
    em que B é arileno, heteroarileno, cicloalquileno ou heterocicloalquileno; A2 é -CH (R8) -arileno, -CH (R8) -heteroarileno, -CH (R8) -heterocicloalquileno, -CH (R8)-cicloalquileno, arileno, heteroarileno ou cicloalquileno, em que A2 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em oxo, -0R9, -SR9, -S (0) R9, -S (0) 2R9, -N (R9) 2, halo, halo (C1-C4) alquilo, (C1.-C4) alcoxi (C1.-C4) alquilo, halo (Ci-C4) alcoxi, ciano e (Ci-C8) alquilo; X1 é uma ligação, -0-, -NH-, -N ( (C;L-C4) alquilo) - ou heterocicloalquileno; R1 e R2 são independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, halo, ciano ou (Ci- C4)alcanoilo; ou R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C(=0)-, - C ( = S) - ou -C (=N (Ci-C4) alquilo) - ; R3 é H ou (Ci-C4) alquilo que é opcionalmente substituído com halo, ciano, hidroxi ou (Ci-C4)alcoxi; R4a e R4b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, arilo, aril (C1-C4) alquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo (Ci~C4) alquilo, cicloalquilo ou cicloalquil (Ci-C4) alquilo, em que cada de R4a e R4b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em ciano, (Ci-C8) alcoxi, -C00H, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo, halo, hidroxilo, amino, mono (Ci-C8) alquilamino, di(Ci-C8) alquilamino, -C (0) -mono (Ci-C8) alquilamino, -C (0) -di (Ci-C8)alquilamino, -C(0)-heterocicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo e heteroarilo, em que cada substituinte é opcionalmente substituído com um ou mais halo, heterocicloalquilo ou arilo; R5a e R5b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril (C1-C4) alquilo, cicloalquilo (Ci“C4) alquilo ou heterocicloalquilo (Ci-C4) alquilo, em que R5a e Rbb são independentemente opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -N3, ciano, -C00H, halo, hidroxilo, amino, mono(Ci- C8) alquilamino, di (C].-C8) alquilamino, arilo e heteroarilo, ou R5a e R5b juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a) :
    (a), em que um ou mais átomos do anel de carbono da Fórmula (a) é opcionalmente substituído por um átomo de azoto, oxigénio ou enxofre, e em que um átomo do anel da Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, -NH2, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo, -C (0) -di (Ci-C8) alquilamino, -C (0) - (Ci-C8) alquilo, -C (0) - heterocicloalquilo, -S(0)2R10, -OSi(R10)3, (Ci-C4) alquilo, ciano (Ci-C4) alquilo, halo (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alcoxi, (Ci-C8) alcanoilo e aril (C1-C4) alquilo; RSa, R6b, R7a e R7b são independentemente H, hidroxilo, ciano, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, -CH2CH2CR9 (=N (C1-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S (0) R9, -S (0) 2R9 ou -N (R9) 2, em que cada de R6a, Rsb, R7a e R/b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, ciano, (C1.-C4) alquilo, (C:L-C8) alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono(Ci~ C8) alquilamino, di (Ci-C8) alquilamino, -NHS (0) R9, NHC (0) R9, -0C(0) - (Ci-Cs) alquilo -C (0) 0-(Ci-C8) alquilo e (Ci-C8) alcanoilo, em que cada -0C (0) - (Ci-C8) alquilo ou (Ci~C8) alcoxi é opcionalmente substituído com um ou mais amino, -0C (0) 0-(Ci~C8) alquilo ou -Si (R10) 3; ou R6a e R6b juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a) ; cada R8 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, halo (Ci-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo ou cicloalquilo, em que Rs é opcionalmente substituído com -OR, -N (R9) 2, -CON (R9) 2 ou ciano; cada R9 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2- C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; cada Rlu é independentemente H, (Ci~C4) alquilo, (C2- C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, cicloalquilo (Ci- C4) alquilo ou arilo, em que R10 é opcionalmente substituído com um ou mais halo; cada n é independentemente 0, 1 ou 2; e mél, 2, 3, 4 ou 5. 2. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que A é metileno. 3. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A1 é etenileno, propenileno, etileno, propileno, oxipropileno, oxipropenileno, pirazolileno, fenileno ou pirimidinileno. 4. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A1 é
    5. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A2 é -CH (R8) -arileno ou -CH (R8) - heteroarileno. 6. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A2 é -CH(R8) -quinolinileno, -CH (R8) - isoquinolinileno, -CH (R8)-naftiridinileno, -CH(R8) - cinolinileno, -CH(R8) -quinoxalinileno, -CH(R8)-fenileno ou -CH (R8) -halofenileno. 7. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A2 é
    8. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que X~ é -0- ou -NH-. 9. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C(=0)- - 10. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R3 é H. 11. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R6a é H e R6b é H ou (Ci-C4) alquilo, ou R6a e Rsb juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a). 12. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que RSa e Rsb formam
    13. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R3 é H; R5a é H; R5b é H, (Ci-C8) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (Ci-C8) alquilo, arilo, cicloalquilo, aril (Ci-C4) alquilo, cicloalquil (C1-C4) alquilo, heterocicloalquil (Ci-C4) alquilo ou arilheterocicloaquil (Ci-C4) alquilo; R6a é H; e Rsb é H, (Ci-C4) alquilo ou hidroxi (Ci-C4) alquilo. 14. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que X1 é -0- ou -NH-; R1 e R2, quando tomados juntamente com o carbono ao qual estão ambos unidos, formam -C (=0) -; R3 é H; R4a é H; R4b é metilo; R5a é H e R5b é iso-propilo, propenilo ou propinilo; e R8 é metilo. 15. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, que é um composto de Fórmula II:
    Fórmula II ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisõmeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: A2 é -CH (R8) -arileno, -CH(R8) -heteroarileno, -CH (R8) -heterocicloalquileno, -CH(R8) -cicloalquileno ou cicloalquileno; XL é uma ligação, -0-, -MH, -N(CH3) -,
    R3 é H ou (C1-C4) alquilo; R4a e R4b são independentemente H, (Ci-C8) alquilo, arilo, aril (C3.-C4) alquilo, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo (C1-C4) alquilo, cicloalquilo ou cicloalquil (C1-C4) alquilo, em que cada de R4a e R4d é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em ciano, (Ci-C8) alcoxi, -C00H, -C (0) 0-(Ci-C8) alquilo, halo, hidroxilo, amino, mono (Ci-C8) alquilamino, di(Ci- Cs) alquilamino, -C (0) -mono (Ci-Cs) alquilamino, -C (0) -di (Ci-C8)alquilamino, -C(0)-heterocicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo e heteroarilo, em que cada substituinte é opcionalmente substituído com um ou mais halo, heterocicloalquilo ou arilo; R5 é (Ci~C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8)alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril (Ci-C4) alquilo, cicloalquilo (C].-C4) alquilo ou heterocicloalquilo (Ci~C4) alquilo, em que R5 e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir de -N3j ciano, -COOH, halo, hidroxilo, amino, mono (Ci-C8) alquilamino, di (Ci-C8) alquilamino, arilo e heteroarilo, RSa e R6d são independentemente H, hidroxilo, ciano, (Ci-C8) alquilo, (C2-Cs) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, -CH2CH2CR9 (=N (C1-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S(0)R9, -S(0) 2R9 ou -N (R9) 2, em que cada de Rfea e R6b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, ciano, (C1-C4) alquilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono (Ci~C8) alquilamino, di (Ci- C8) alquilamino, -NHS (0)R9, -NHC(0)R9, -00(0)-((^- C8) alquilo -C (0) 0-(Ci-C8) alquilo e (Ci-C8) alcanoilo, em que cada -0C (0) - (Ci-C8) alquilo ou (Ci-C8) alcoxi é opcionalmente substituído com um ou mais amino, -00(0)0-(Ci-Cs) alquilo ou -Si (R10) 3; ou
    R6a e Rsb juntamente formam um espirociclo tendo a Fórmula (a) ; (a), em que um ou mais átomos do anel de carbono da Fórmula (a) é opcionalmente substituído por um átomo de azoto, oxigénio ou enxofre, e em que um átomo do anel da Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, -NH2, -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo, -C (0) -di (Ci-Cs) alquilamino, -C (0) - (Ci~C8) alquilo, -C (0) - heterocicloalquilo, -S(0)2R10, -OSi(R10)3, (C1-C4) alquilo, ciano (C1-C4) alquilo, halo (Ci-C4) alquilo, (C1-C4) alcoxi, (Ci-C8) alcanoilo e aril (Ci-C4) alquilo; R8 é H ou (Ci-C4) alquilo; cada R9 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2- C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; e cada R±0 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2- C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, cicloalquilo (Ci-C4)alquilo ou arilo, em que R10 é opcionalmente substituído com um ou mais halo. 16. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, que é um composto de Fórmula lia:
    Formula lia ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que: RSa e R6Ei são independentemente H, hidroxilo, ciano, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8) alcoxi, -CH2CH2CR9 (=N (Ci-C4) alcoxi) , arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, -SR9, -S(0)R9, -S(0) 2R9 ou -N (R9) 2, em que cada de RSa e R6D é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, ciano, (Ci-C4) alquilo, (Ci-C8) alcoxi, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, mono (Ci-C8) alquilamino, di(Ci- C8) alqui lamino, -NHS (0) R9, -NHC(0)R9, -0C(0) - (Ci~ C8) alquilo -C (0) 0- (Ci-C8) alquilo e (Ci-C8) alcanoilo, em que cada -0C (0) - (Ci-C8) alquilo ou (Ci.-C8) alcoxi é opcionalmente substituído com um ou mais amino, -0C(0)0-(Ci-C8) alquilo ou -Si (R10) 3; ou R6a e Rsb juntamente formam um espirociclo tendo a Formula
    (a) ; (a), em que um ou mais átomos do anel de carbono da Formula (a) é opcionalmente substituído por um átomo de azoto, oxigénio ou enxofre, e em que um átomo do anel da Fórmula (a) é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, -NH2, -C (0) 0- (C:L-C8) alquilo, -C (0) -di (Ci~C8) alquilamino, -C (0) - (Ci-C8) alquilo, -C(0)- heterocicloalquilo, -S(Q)2R10, -OSi(R10)3, (Ci-C4) alquilo, ciano (Ci-C4) alquilo, halo (Ci-C4) alquilo, (C1.-C4) alcoxi, (Ci-C8) alcanoilo e aril (C1-C4) alquilo; cada R9 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo ou (C2-C4) alquinilo; e cada R10 é independentemente H, (C1-C4) alquilo, (C2-C4) alquenilo, (C2-C4) alquinilo, cicloalquilo (Ci-C4)alquilo ou arilo, em que R10 é opcionalmente substituído com um ou mais halo. 17. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que R4a e R4b são independentemente H, (Ci-C4) alcoxi, halo (Ci-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo; R5 é H, (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, (Ci-C8)alcoxi, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, aril (Ci-C4) alquilo, cicloalquilo (Ci-C4) alquilo ou heterocicloalquilo (Ci-C4) alquilo, em que R5 é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em -N3, halo, hidroxilo, di (Ci-Ca)alquilamino, arilo ou heteroarilo; e rS» e Rsb g~0 independentemente H, -OH, (Ci-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo, em que cada de R6a e R6b é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxilo, (Ci-C4) alquilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, di (Ci-C8) alquilamino e (Ci-C8) alcanoilo; ou R6a e Rsb juntamente formam
    18. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, que é
    ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo. 19. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, que é um composto de Fórmula III:
    Formula III ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que A2 é -CH(R8) -arileno, -CH (R8) -heteroarileno, -CH(R8)-heterocicloalquileno, -CH (R8)-cicloalquileno ou cicloalquileno; A8 é -CH2- ou -0 - ; X1 é -0- , -N(CH3) - OU -NH-; RJ é H ou (Ci-C4) alquilo; R4a é H; R4b é H, (C1-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo; R5 é H, (Ci-C8) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2-C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (Ci-C8) alquilo, cicloalquilo, aril(C1-C4)alquilo, cicloalquil(Ci- C4) alquilo, heterocicloalquil (C1-C4) alquilo ou heteroarilheteroaril(C1-C4)alquilo; Rba e RDb são independentemente H, -OH, (C1-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo, em que cada de R6a e R6b é opcionalmente substituído com um ou mais substituint.es selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4) alquilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, di (Ci-C8) alquilamino e (Ci- C8) alcanoilo; ou RSa e R6b juntamente formam
    e R8 é H ou (C].-C4) alquilo. 20. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A2 é -CH (R8) - ar i leno ou -CH (R8) - heteroarileno; R3 é H; e A3 é -CH2- . 21. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A"' é -CH (R8) -arileno ou -CH (R8) - heteroarileno; R3 é H; e A3 é -0-. 22. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, que é
    ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo. 23. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, que é um composto de Fórmula IV:
    Formula IV ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisõmero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo, em que A2 é -CH (R8) -arileno, -CH(R8) -heteroarileno, -CH (R8) -heterocicloalquileno, -CH(R8)-cicloalquileno ou cicloalquileno; A4 é uma ligação ou -0-. X1 é -0-, -N(CH3)- ou -NH-; R3 é H ou (Ci-C4) alquilo; R4a é H; R4b é H, (C1-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci~C8) alquilo; R5 é H, (Ci-C8) alquilo, hidroxi (Ci-C8) alquilo, (C2- C8) alquenilo, (C2-C8) alquinilo, azido (C;L-C8) alquilo, cicloalquilo, aril(C1-C4)alquilo, cicloalquil(Ci- C4) alquilo, heterocicloalquil (Ci~C4) alquilo ou heteroarilheteroaril (C:1-C4) alquilo; R5a e Rsb são independentemente H, -OH, (C1-C4) alcoxi, halo (C1-C4) alcoxi ou (Ci-C8) alquilo, em que cada de RSa e Rsb é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4) alquilo, arilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, di(Ci-C8)alquilamino e (Ci- C8) alcanoilo; e R8 é H ou (C1-C4) alquilo. 24. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A2 é -CH(R8) -arileno ou -CH (R8) - heteroarileno; R3 é H; e A4 é -0- 25. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A2 é -CH (R8) -arileno ou -CH (R8) - heteroarileno; R3 é H; e A4 é uma ligação. 26. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que A1 é etenileno; A2 é -CH (R8)-arileno, CH (R8) -heteroarileno, -CH(R8) -heterocicloalquileno, - CH (R8) -cicloalquileno ou cicloalquileno; X1 é -0-, -NH- ou -N( (Ci-C4) alquilo) - . 27. 0 composto de acordo com qualquer reivindicação anterior, que é
    ou um sal farmaceuticamente aceitável, isótopo, estereoisõmero, mistura de estereoisómeros, tautõmero ou éster do mesmo.
  2. 28. Uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de acordo com qualquer reivindicação anterior ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
  3. 29. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 28, que compreende ainda pelo menos um agente terapêutico adicional selecionado a partir do grupo que consiste em interferões, ribavirina, inibidores de HCV NS3 protease, inibidores de HCV NS5a, inibidores de nucleósido ou nucleótido de HCV NS5B polimerase, inibidores não nucleósido de HCV NS5B polimerase, e agonistas de TLR-7; ou uma mistura dos mesmos.
  4. 30. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 29, em que o pelo menos um agente terapêutico de adição é ribavirina, telaprevir, boceprevir ou sofosbuvir.
  5. 31. Um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 27 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, isótopo, estereoisómero, mistura de estereoisómeros, tautómero ou éster do mesmo para utilização em terapêutica.
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