CN110891974A - 间皮素结合蛋白质 - Google Patents

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Abstract

本文公开了MSLN结合蛋白质，其具有改善的结合亲和力和改善的介导表达间皮素的癌细胞的T细胞依赖性杀伤的能力。进一步提供了包含本文公开的结合蛋白质的药物组合物和使用这类制剂的方法。

Description

间皮素结合蛋白质
交叉引用
本申请要求于2017年5月12日提交的第62/505,719号美国临时申请和2018年4月13日提交的第62/657,417号美国临时申请的权益，所述临时申请各自通过引用整体并入本文。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式通过电子方式提交，并且通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2018年5月11日，被命名为47517-719_601_SL.txt，大小为145,039字节。
援引并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度如同特别地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用而并入。
背景技术
本公开提供了间皮素(MSLN)结合蛋白质，其可用于诊断和治疗与MSLN的表达相关的适应症。间皮素(MSLN)是在卵巢癌、胰腺癌、肺癌和三阴性乳腺癌以及间皮瘤中过表达的GPI连接的膜结合肿瘤抗原MSLN。MSLN的正常组织表达局限于内衬于胸膜腔、心包腔和腹膜腔的单细胞间皮层。MSLN的过表达与肺腺癌和三阴性乳腺癌的预后不良相关。MSLN已被用作用于大量方式的癌抗原，包括免疫毒素、疫苗、抗体药物缀合物和CAR-T细胞。临床疗效的早期迹象已确认MSLN为靶标，但是需要疗效改善的疗法来治疗表达MSLN的癌症。
发明内容
一个实施方案提供了一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含一个或多个保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:41、42、43或44相同或相对于SEQ ID NO:41、42、43或44包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:41相同或相对于SEQ ID NO:41包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ IDNO:42相同或相对于SEQ ID NO:42包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:43相同或相对于SEQ ID NO:43包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:44相同或相对于SEQ ID NO:44包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含(i)对应于SEQ ID NO:41的一段氨基酸；(ii)对应于SEQ ID NO:42的一段氨基酸；(iii)对应于SEQ ID NO:43的一段氨基酸；和(iv)对应于SEQ ID NO:44的一段氨基酸。
一个实施方案提供了一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含下式：
f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4
其中，r1与SEQ ID NO:51相同或相对于SEQ ID NO:51包含一个或多个氨基酸残基置换；r2与SEQ ID NO:52相同或相对于SEQ ID NO:52包含一个或多个氨基酸残基置换；且r3与SEQ ID NO:53相同或相对于SEQ ID NO:53包含一个或多个氨基酸残基置换；并且其中f1、f2、f3和f4是框架残基。在一些实施方案中，所述蛋白质包含与选自SEQ ID NO:1-29、30-40、58和60-62的序列至少80％相同的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含一个或多个导致所述结合蛋白质人源化的修饰。在一些实施方案中，所述修饰包括氨基酸残基的置换、添加或缺失。在一些实施方案中，所述蛋白质包含111个氨基酸至124个氨基酸。在一些实施方案中，所述蛋白质包含来源于非人来源的VHH结构域。在一些实施方案中，所述蛋白质包含美洲驼VHH结构域。在一些实施方案中，所述表位位于包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基296-390的区域I、包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基391-486的区域II或包含SEQ IDNO:57的氨基酸残基487-598的区域III中。
一些实施方案提供了一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含一个或多个保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:45、46、47、48、49或50相同或相对于SEQ IDNO:45、46、47、48、49或50包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:45相同或相对于SEQ ID NO:45包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:46相同或相对于SEQ ID NO:46包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:47相同或相对于SEQ ID NO:47包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:48相同或相对于SEQ ID NO:48包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQID NO:49相同或相对于SEQ ID NO:49包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:50相同或相对于SEQ IDNO:50包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含(i)对应于SEQ ID NO:45的一段氨基酸；(ii)对应于SEQ ID NO:46的一段氨基酸；(iii)对应于SEQ ID NO:47的一段氨基酸；(iv)对应于SEQ ID NO:48的一段氨基酸；(v)对应于SEQ IDNO:49的一段氨基酸；和(vi)对应于SEQ ID NO:50的一段氨基酸。
一个实施方案提供了一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含下式：
f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4
其中，r1与SEQ ID NO:54相同或相对于SEQ ID NO:54包含一个或多个氨基酸残基置换；r2与SEQ ID NO:55相同或相对于SEQ ID NO:55包含一个或多个氨基酸残基置换；且r3与SEQ ID NO:56相同或相对于SEQ ID NO:56包含一个或多个氨基酸残基置换；并且其中f1、f2、f3和f4是框架残基。在一些实施方案中，所述蛋白质包含与选自SEQ ID No:30-40、58和60-62的序列至少80％相同的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含111个氨基酸至119个氨基酸。在一些实施方案中，所述蛋白质包含来源于非人来源的VHH结构域。在一些实施方案中，所述蛋白质包含美洲驼VHH结构域。在一些实施方案中，所述蛋白质与包含SEQID NO:57所示序列的人间皮素蛋白质结合。在一些实施方案中，所述蛋白质与间皮素的表位结合，其中所述表位位于包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基296-390的区域I、包含SEQ IDNO:57的氨基酸残基391-486的区域II或包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基487-598的区域III中。在一些实施方案中，所述结合蛋白质是嵌合抗体或人源化抗体。在一些实施方案中，所述结合蛋白质是单结构域抗体。在一些实施方案中，所述结合蛋白质是人源化的单结构域抗体。
一个实施方案提供了一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含一个或多个选自SEQ ID No:51-56和63-179的CDR。在一些实施方案中，所述蛋白质包含CDR1，该CDR1包含SEQ ID No.:51、54和63-101中任一个所示的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含CDR2，该CDR2包含SEQ ID No.:52、55和102-140中任一个所示的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含CDR3，该CDR3包含SEQ ID No.:53、56和141-179中任一个所示的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含框架区1(f1)，该框架区1包含SEQ ID No.:180-218中任一个所示的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含框架区2(f2)，该框架区2包含SEQ ID No:219-257中任一个所示的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含框架区3(f3)，该框架区3包含SEQ ID No:258-296中任一个所示的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含框架区4(f4)，该框架区4包含SEQ ID No:297-335中任一个所示的序列。在一些实施方案中，所述蛋白质包含如SEQ ID No.:1-40和58中任一个所示的氨基酸序列。
一个实施方案提供了一种多核苷酸，其编码根据上述实施方案中任一项的单结构域间皮素结合蛋白质。另一个实施方案提供了一种载体，其包含上述实施方案的多核苷酸。另一个实施方案提供了用根据上述实施方案的载体转化的宿主细胞。
一个实施方案提供了一种药物组合物，其包含(i)根据上述实施方案中任一项的单结构域间皮素结合蛋白质、根据上述实施方案中任一项的多核苷酸、根据上述实施方案中任一项的载体或根据上述实施方案中任一项的宿主细胞，和(ii)药学上可接受的载剂。
另一个实施方案提供了一种产生根据上述实施方案中任一项的单结构域间皮素结合蛋白质的方法，所述方法包括在允许表达间皮素结合蛋白质并从培养物中回收和纯化所产生的蛋白质的条件下培养用载体转化或转染的宿主，该载体包含编码根据上述实施方案中任一项的单结构域间皮素结合蛋白质的核酸序列。
一个实施方案提供了一种治疗或改善增生性疾病或肿瘤性疾病的方法，该方法包括向有需要的受试者施用根据上述实施方案中任一项的间皮素结合蛋白质。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，该方法进一步包括将药剂与根据上述实施方案中任一项的单结构域间皮素结合蛋白质联合施用。在一些实施方案中，所述单结构域间皮素结合蛋白质选择性地结合表达间皮素的肿瘤细胞。在一些实施方案中，所述单结构域间皮素结合蛋白质介导T细胞对表达间皮素的肿瘤细胞的杀伤。在一些实施方案中，所述肿瘤性疾病包括实体瘤疾病。在一些实施方案中，该实体瘤疾病包括间皮瘤、肺癌、胃癌、卵巢癌或三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，该实体瘤疾病是转移性的。
附图说明
本发明的新特征在随附的权利要求书中具体阐述。通过参考以下对利用到本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详细描述及其附图，将会对本发明的特征和优点获得更好的理解，在这些附图中：
图1示出了含有根据本公开的抗MSLN结合蛋白质的示例性MSLN靶向三特异性分子(2A2和2A4)在杀伤表达靶蛋白MSLN的OVCAR8细胞中的效力。
图2示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质引导来自五名供体(供体02；供体86；供体41；供体81；和供体35)的T细胞杀死Caov3细胞。该图还示出了对照三特异性蛋白质(GFP TriTAC)无法引导来自这五名供体(供体02；供体86；供体41；供体81；和供体35)的T细胞杀死Caov3细胞。
图3示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质引导来自五名供体(供体02；供体86；供体41；供体81；和供体35)的T细胞杀死OVCAR3细胞。该图还示出了对照三特异性蛋白质(GFP TriTAC)无法引导来自这五名供体(供体02；供体86；供体41；供体81；和供体35)的T细胞杀死OVCAR3细胞。
图4示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质能够引导来自健康供体的T细胞杀死表达MSLN的细胞(OVCAR3细胞；Caov4细胞；OVCAR3细胞；和OVCAR8细胞)。该图还示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质无法引导来自健康供体的T细胞杀死不表达MSLN的细胞(MDAPCa2b细胞；和NCI-H510A细胞)。
图5示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质能够引导来自食蟹猴的T细胞杀死人卵巢癌细胞系(OVCAR3细胞；Caov3细胞)。该图还示出了对照三特异性蛋白质(GFP TriTAC)无法引导来自食蟹猴的T细胞杀死人卵巢癌细胞系(OVCAR3细胞；Caov3细胞)。
图6示出了在存在或不存在人血清白蛋白(HSA)的情况下，含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质能够引导T细胞杀死表达MSLN的NCI-H2052间皮瘤细胞。
图7示出了在表达MSLN的Caov4细胞的存在下，含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质能够激活来自四名健康供体(供体2；供体86；供体35；和供体81)的T细胞，如通过T细胞分泌TNF-α所证明的。
图8示出了在表达MSLN的OVCAR8细胞的存在下，含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质能够激活来自四名健康供体(供体2；供体86；供体35；和供体81)的T细胞，如通过T细胞上CD69表达的活化所证明的。
图9示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质与表达MSLN的细胞系或不表达MSLN的细胞系的结合。图9A显示了与表达MSLN的细胞(Caov3细胞-左上图；Caov4细胞-右上图；OVCAR3细胞-左下图；OVCAR8细胞-右下图)的结合，所述细胞与含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质结合；图9A进一步示出了对照三特异性蛋白质(GFP TriTAC)无法与相同细胞系结合。图9B显示了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质和GFP TriTAC均无法与不表达MSLN的细胞系(MDCA2b细胞-左图；NCI-H510A细胞-右图)结合。
图10示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质与来自四名健康供体(供体2-左上图；供体35-右上图；供体41-左下图；供体81-右下图)的T细胞的结合。
图11示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质能够在植入表达MSLN的NCI-H292细胞的NCG小鼠中抑制肿瘤生长。
图12示出了含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质的药代动力学曲线。图中显示了在注射至两只食蟹猴后的不同时间点，含有本公开的示例性MSLN结合域(MH6T)的三特异性MSLN靶向抗原结合蛋白质的血清水平。
具体实施方式
虽然本文已经显示并描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到许多变化、改变和替换。应当理解，本文所述的本发明实施方案的各种替代方案均可用于实施本发明。以下权利要求旨在限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
某些定义
本文使用的术语仅用于描述特定情况的目的，而非限制性的。如本文所用的，除非上下文另有明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”也旨在包括复数形式。此外，就具体实施方式和/或权利要求书中使用的术语“包括”、“包含”、“具有”或其变化形式而言，这些术语旨在以与术语“包含”类似的方式为包含性的。
术语“约”或“大约”意指在本领域普通技术人员测定的特定值的可接受误差范围内，该可接受误差范围将部分取决于该值如何测量或测定，例如，测量系统的局限性。例如，根据给定值的实践，“约”可以表示在1个或大于1个标准差内。在本申请和权利要求书中描述特定值的情况下，除非另有说明，否则术语“约”应被认为意指该特定值的可接受误差范围。
术语“个体”、“患者”或“受试者”可互换使用。这些术语均不要求或不限于以医疗保健工作者(例如，医生、注册护士、执业护士、医师助理、护理员或临终关怀工作者)的监督(例如，持续或间歇的)为特征的情况。
术语“框架”或“FR”残基(或区)是指除本文定义的CDR或高变区残基之外的可变域残基。“人共有框架”是代表在选择人免疫球蛋白VL或VH框架序列中最常出现的氨基酸残基的框架。
如本文所用的，“可变区”或“可变域”是指以下情况：可变域的某些部分在抗体之间在序列上广泛不同，并且在每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中使用。然而，变异性并非均匀地分布在抗体的整个可变域中。其集中在轻链和重链可变域中被称为互补决定区(CDR)或高变区的三个区段中。可变域更高度保守的部分被称为框架(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，其主要采取β-折叠构型，通过三个CDR连接，它们形成连接β折叠结构的环，并且在一些情况下形成β折叠结构的一部分。每条链中的CDR通过FR区紧密靠近保持在一起，并且与来自另一条链的CDR一起有助于形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,NationalInstitute of Health,Bethesda,Md.(1991))。恒定域虽然不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应物功能，诸如抗体参与抗体的抗体依赖性细胞毒性。“按照Kabat的可变域残基编号”或“按照Kabat的氨基酸位置编号”及其变化形式是指在Kabat等人,Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第五版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中用于抗体编译的重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用该编号系统，实际的线性氨基酸序列可含有较少的或额外的氨基酸，其对应于可变域的FR或CDR的缩短或向其中的插入。例如，重链可变域可包含在H2的残基52之后的单氨基酸插入(根据Kabat为残基52a)和在重链FR残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat为残基82a、82b和82c等)。可通过将抗体序列在同源性区域与“标准”Kabat编号的序列进行比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。这并不意味着本公开的CDR必然对应于Kabat编号约定。
如本文所用的，用于序列的术语“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在将序列进行比对并引入空位(如果需要)以达到最大序列同一性百分比之后，候选序列中的氨基酸残基与特定序列中的氨基酸残基相同的百分比，并且不认为任何保守置换是序列同一性的一部分。用于确定氨基酸序列同一性百分比目的的比对可通过本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，如EMBOSS MATCHER、EMBOSS WATER、EMBOSSSTRETCHER、EMBOSS NEEDLE、EMBOSS LALIGN、BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。
如本文所用的，“消除半衰期”以其普通含义使用，如在Goodman和Gillman的ThePharmaceutical Basis of Therapeutics 21-25(Alfred Goodman Gilman、LouisS.Goodman和Alfred Gilman编著，第六版1980)中所述。简言之，该术语意在包括药物消除的时间过程的定量量度。大多数药物的消除是指数式的(即，遵循一级动力学)，因为药物浓度通常并未接近消除过程的饱和所需的浓度。指数过程的速率可由其速率常数k或由其半衰期t1/2表示，速率常数k表示每单位时间的分数变化，半衰期t1/2表示该过程完成50％所需的时间。这两个常数的单位分别是时间-1和时间。该反应的一级速率常数和半衰期简单相关(k×t1/2＝0.693)并且可以相应地互换。由于一级消除动力学指示每单位时间损失恒定分数的药物，因此药物浓度的对数相对于时间的图形在初始分布阶段之后(即在药物吸收和分布完成之后)一直是线性的。可从这样的图形准确地确定药物消除的半衰期。
如本文所用的，术语“结合亲和力”是指本公开内容中描述的蛋白质与其结合靶标的亲和力，并且使用“Kd”值以数字表示。如果表明两种或更多种蛋白质对其结合靶标具有相当的结合亲和力，那么各蛋白质与其结合靶标结合的Kd值在彼此的±2倍之内。如果表明两种或更多种蛋白质对单一结合靶标具有相当的结合亲和力，那么各蛋白质与所述单一结合靶标结合的Kd值在彼此的±2倍之内。如果表明蛋白质以相当的结合亲和力结合两种或更多种靶标，那么所述蛋白质与所述两种或更多种靶标结合的Kd值在彼此的±2倍之内。通常，较高的Kd值对应于较弱的结合。在一些实施方案中，使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,N.J.)通过放射性标记的抗原结合测定(RIA)或表面等离子体共振测定来测量“Kd”。在某些实施方案中，还使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,N.J.)通过表面等离子体共振技术来测定“缔合率”或“缔合的速率”或“缔合速率”或“kon”以及“解离率”或“解离的速率”或“解离速率”或“koff”。在另外的实施方案中，使用
Figure BDA0002364167790000101
Systems(Pall Life Sciences)来测定“Kd”、“kon”和“koff”。在使用
Figure BDA0002364167790000112
Systems测量结合亲和力的示例性方法中，将配体(例如，生物素化的人或食蟹猴PSMA)固定在
Figure BDA0002364167790000111
链霉亲和素毛细管传感器端头表面上，然后按照制造商的说明书使用约20-50μg/ml的人或食蟹猴MSLN蛋白质激活该链霉亲和素端头。还引入PBS/酪蛋白溶液作为封闭剂。对于缔合动力学测量，以约10ng/mL至约100μg/mL、约50ng/mL至约5μg/mL或约2ng/mL至约20μg/mL的浓度引入MSLN结合蛋白质变体。在一些实施方案中，MSLN结合单结构域蛋白质以约2ng/mL至约20μg/mL的浓度使用。在阴性对照，即不含结合蛋白质的测定缓冲液的情况下观察到完全解离。然后使用适当的工具例如ForteBio软件来确定结合反应的动力学参数。
本文描述了MSLN结合蛋白质，药物组合物，以及用于制备这类MSLN结合蛋白质的核酸、重组表达载体和宿主细胞。还提供了使用所公开的MSLN结合蛋白质预防和/或治疗疾病、病况和病症的方法。所述MSLN结合蛋白质能够与MSLN特异性结合。在一些实施方案中，所述MSLN结合蛋白质包含另外的结构域，如CD3结合域和白蛋白结合域。
间皮素(MSLN)及其在肿瘤性疾病中的作用
本文涉及间皮素结合蛋白质。间皮素是存在于腹膜、胸膜和心包体腔的间皮内衬细胞表面上的糖蛋白。间皮素基因(MSLN)编码71千道尔顿(kDa)的前体蛋白，该蛋白质被加工成被称为间皮素的40-kDa蛋白质，该蛋白质是存在于细胞表面上的糖基磷脂酰肌醇锚定的糖蛋白(Chang等人，Proc Natl Acad Sci USA(1996)93:136-40)。从由HPC-Y5细胞系制备的文库中克隆间皮素cDNA(Kojima等人(1995)J.Biol.Chem.270:21984-21990)。还使用识别间皮瘤的单克隆抗体K1来克隆cDNA(Chang和Pastan(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:136-40)。间皮素是分化抗原，其在正常人体组织中的表达仅限于内衬于诸如胸膜、心包膜和腹膜等体腔的间皮细胞。间皮素在包括间皮瘤、胰腺腺癌、卵巢癌、胃和肺腺癌在内的几种不同的人类癌症中也高度表达。(Hassan等人,Eur J Cancer(2008)44:46-53)(Ordonez,Am J Surg Pathol(2003)27:1418-28；Ho等人,Clin Cancer Res(2007)13:1571-5)。间皮素在绝大多数原发性胰腺腺癌中过表达，在良性胰腺组织中可见罕有且微弱的表达。Argani P等人.Clin Cancer Res.2001；7(12):3862-3868。上皮恶性胸膜间皮瘤(MPM)普遍表达间皮素，而肉瘤样MPM可能不表达间皮素。大多数浆液性上皮性卵巢癌和相关的原发性腹膜癌均表达间皮素。
与天然膜结合的形式相比，间皮素还作为蛋白质的可溶性形式从肿瘤细胞上脱落(Hellstrom等人,Cancer Epidemiol Biomarkers Prev(2006)15:1014-20；Ho等人,CancerEpidemiol Biomarkers Prev(2006)15:1751)。在结构上，间皮素作为60kDa前体多肽在细胞表面上表达，其被蛋白水解加工成31kDa的脱落组分(对应于MPF)和40kDa的膜结合组分(Hassan等人(2004)Clin.Cancer.Res.10:3937-3942)。间皮素已显示出与CA125(也称为MUC-16)相互作用，CA125是一种存在于肿瘤细胞表面上的粘蛋白样糖蛋白，以前已被鉴定为卵巢癌抗原。此外，CA125与膜结合的间皮素的结合介导异型细胞粘附，并且CA125和间皮素在晚期卵巢腺癌中共表达(Rump,A.等人(2004)J.Biol.Chem.279:9190-9198)。间皮素在腹膜内衬中的表达与卵巢癌的转移形成的优选部位相关，并且间皮素-CA125结合被认为促进卵巢肿瘤的腹膜转移(Gubbels,J.A.等人(2006)Mol.Cancer.5:50)。
间皮素是卵巢癌中的天然免疫应答的靶标，并且已被提出作为癌症免疫疗法的靶标。Bracci L等人Clin Cancer Res.2007；13(2Pt 1):644-653；Moschella F等人CancerRes.2011；71(10):3528-3539；Gross G等人FASEB J.1992；6(15):3370-3378；Sadelain M等人Nat Rev Cancer.2003；3(1):35-45；Muul L M等人Blood.2003；101(7):2563-2569；Yee C等人Proc Natl Acad Sci USA.2002；99(25):16168-16173。间皮素特异性CTL在胰腺癌患者中的存在与总体生存率相关。Thomas A M等人J Exp Med.2004；200:297-306。另外，Pastan及其同事使用与免疫毒素缀合的抗间皮素抗体的可溶性抗体片段来治疗具有间皮素阳性肿瘤的癌症患者。这种方法在胰腺癌中显示出足够的安全性和一定的临床活性。Hassan R等人Cancer Immun.2007；7:20，以及Hassan R等人Clin Cancer Res.2007；13(17):5144-5149。在卵巢癌中，这种治疗策略按照RECIST标准产生了一种微小反应，并且在第二名患者中导致病情稳定，其腹水也已完全消退。
间皮素还可以用作某些类型癌症的诊断和预后的标志物，因为在一些间皮素阳性癌症患者的血液中可以检测到痕量的间皮素(Cristaudo等人,Clin.Cancer Res.13:5076-5081,2007)。据报道，间皮素可通过在其羧基末端缺失或通过从其膜结合形式蛋白水解裂解而释放到血清中(Hassan等人,Clin.Cancer Res.10:3937-3942,2004)。在暴露于石棉的工人中发生恶性间皮瘤之前数年，可检测到间皮素的可溶性形式增加(Creaney和Robinson,Hematol.Oncol.Clin.North Am.19:1025-1040,2005)。此外，卵巢癌、胰腺癌和肺癌患者血清中的可溶性间皮素也升高(Cristaudo等人,Clin.Cancer Res.13:5076-5081,2007；Hassan等人,Clin.Cancer Res.12:447-453,2006；Croso等人,CancerDetect.Prev.30:180-187,2006)。因此，间皮素是疾病预防或治疗方法的合适的靶标，并且需要有效的间皮素特异性抗体。
已经显示，细胞表面成熟间皮素包含三个不同的结构域，即区域I(包含残基296-390)、II(包含残基391-486)和III(包含残基487-598)。(Tang等人,A human single-domain antibody elicits potent antitumor activity by targeting an epitope inmesothelin close to the cancer cell surface,Mol.Can.Therapeutics,12(4):416-426,2013)。
针对治疗性干预生成的第一批抗间皮素抗体被设计为干扰间皮素与CA-125之间的相互作用。噬菌体展示鉴定了Fv SS，对Fv SS进行了亲和力优化，并用其产生靶向间皮素的重组免疫毒素SS1P。同样使用SS1的MORAb-009抗体amatuximab识别间皮素区域I内的氨基末端64个氨基酸中的非线性表位。还使用SS1Fv生成了嵌合抗原受体工程化的T细胞。最近，已经报道了识别间皮素蛋白质其它区域的新抗间皮素抗体。
仍然需要用于治疗与间皮素过表达有关的实体瘤疾病如卵巢癌、胰腺癌、间皮瘤、肺癌、胃癌和三阴性乳腺癌的其它可用选择。在某些实施方案中，本公开提供了与肿瘤靶细胞表面上的MSLN特异性结合的单结构域蛋白质。
MSLN结合蛋白质
在某些实施方案中，本文提供了与MSLN蛋白质中的表位结合的结合蛋白质，如抗MSLN单结构域抗体或抗体变体。在一些实施方案中，该MSLN结合蛋白质与包含SEQ ID NO:57的序列的蛋白质结合。在一些实施方案中，该MSLN结合蛋白质与包含与SEQ ID NO:57相比截短的序列的蛋白质结合。
在一些实施方案中，本文公开的MSLN结合蛋白质识别全长间皮素。在某些情况下，本文公开的MSLN结合蛋白质识别间皮素区域I(包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基296-390)、区域II(包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基391-486)或区域III(包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基487-598)中的表位。预期在一些实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质可以识别并结合位于间皮素的区域I、II或III外部的表位。在另外其它的实施方案中，公开了识别并结合不同于MORAb-009抗体的表位的MSLN结合蛋白质。
在一些实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质在包括另外的免疫球蛋白结构域的多结构域蛋白质内表达。此类多结构域蛋白质可以通过基于免疫毒素的肿瘤生长抑制和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的诱导而发挥作用。在一些实施方案中，含有本公开的MSLN结合蛋白质的多结构域蛋白质表现出补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在一些实施方案中，含有本公开的MSLN结合蛋白质的多结构域蛋白质对表达间皮素的癌细胞既表现出ADCC活性又表现出CDC活性。
此外，在一些实施方案中，在含有MSLN结合蛋白质的多结构域蛋白质通过CDC起作用的情况下，该MLSN结合蛋白质可以识别靠近细胞表面的间皮素蛋白质C末端的构象表位。在一些实施方案中，该间皮素蛋白质包含如SEQ ID NO:57所示的序列，并且C末端包含氨基酸残基539-588。
在一些实施方案中，所述MSLN结合蛋白质为抗MSLN抗体或抗体变体。如本文所用的，术语“抗体变体”是指本文所述抗体的变体和衍生物。在某些实施方案中，涉及本文所述的抗MSLN抗体的氨基酸序列变体。例如，在某些实施方案中，预期本文所述的抗MSLN抗体的氨基酸序列变体改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学性质。用于制备氨基酸变体的示例性方法包括但不限于将适当的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成。这样的修饰包括，例如，抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或置换。
可进行缺失、插入和置换的任意组合以得到最终构建体，条件是最终构建体具有期望的特性，例如抗原结合。在某些实施方案中，提供了具有一个或多个氨基酸置换的抗体变体。用于置换诱变的感兴趣的位点包括CDR和框架区。以下描述了此类置换的实例。可将氨基酸置换引入感兴趣的抗体中，并针对所需活性，例如，保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)来筛选产物。保守和非保守的氨基酸置换均考虑用于制备抗体变体。
在用来产生变异抗MSLN抗体的置换的另一个实例中，亲本抗体的一个或多个高变区残基被置换。通常，之后基于与亲本抗体相比的所需性质的改善，例如，增加的亲和力、降低的亲和力、降低的免疫原性、增加的结合的pH依赖性来选择变体。例如，可以使用例如基于噬菌体展示的亲和力成熟技术，如本文所述和本领域已知的技术，来生成亲和力成熟的变异抗体。
在一些实施方案中，本文所述的MSLN结合蛋白质是单结构域抗体，诸如对间皮素具有特异性的重链可变域(VH)、美洲驼(llama)来源的sdAb的可变域(VHH)、肽、配体或小分子实体。在一些实施方案中，本文所述的MSLN结合蛋白质的间皮素结合域是与间皮素结合的任何结构域，包括但不限于来自单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体的结构域。在某些实施方案中，该MSLN结合蛋白质为单结构域抗体。在其它实施方案中，该MSLN结合蛋白质为肽。在进一步的实施方案中，该MSLN结合蛋白质为小分子。
通常，应当注意，本文中以其最广泛的含义使用的术语单结构域抗体不限于特定的生物学来源或特定的制备方法。单结构域抗体是其互补决定区是单结构域多肽的一部分的抗体。实例包括但不限于重链抗体、天然不含轻链的抗体、衍生自常规4链抗体的单结构域抗体、工程抗体以及与衍生自抗体的那些不同的单结构域支架。单结构域抗体可以是本领域的任何单结构域抗体，或任何未来的单结构域抗体。单结构域抗体可来源于任何物种，包括但不限于小鼠、人、骆驼、美洲驼、山羊、兔、牛。例如，在一些实施方案中，通过以下方法获得本公开的单结构域抗体：(1)通过分离天然存在的重链抗体的VHH结构域；(2)通过表达编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列；(3)通过天然存在的VHH结构域的“人源化”或通过表达编码这样的人源化VHH结构域的核酸；(4)通过来自任何动物物种，特别是来自哺乳动物物种，如来自人类的天然存在的VH结构域的“骆驼化”，或通过表达编码这样的骆驼化VH结构域的核酸；(5)通过“结构域抗体”或“Dab”的“骆驼化”，或通过表达编码这样的骆驼化VH结构域的核酸；(6)通过使用合成或半合成技术制备蛋白质、多肽或其它氨基酸序列；(7)通过使用本领域已知的核酸合成技术制备编码单结构域抗体的核酸，然后表达由此获得的核酸；以及/或者(8)通过前述一种或多种的任意组合。
在一个实施方案中，单结构域抗体对应于针对MSLN的天然存在的重链抗体的VHH结构域。如本文进一步描述的，这样的VHH序列通常可以通过以下方法来生成或获得：用MSLN适当地免疫美洲驼物种(即，以产生针对MSLN的免疫应答和/或重链抗体)，获得来自所述美洲驼的合适的生物样品(如血液样品、血清样品或B细胞样品)，并使用本领域已知的任何合适技术从所述样品开始生成针对MSLN的VHH序列。
在另一个实施方案中，这类天然存在的针对MSLN的VHH结构域从骆驼科VHH序列的幼稚文库获得，例如通过使用本领域已知的一种或多种筛选技术使用MSLN或其至少一个部分、片段、抗原决定簇或表位筛查这样的文库。这类文库和技术例如在WO 99/37681、WO 01/90190、WO 03/025020和WO 03/035694中描述。或者，使用衍生自幼稚VHH文库的改进的合成或半合成文库，如通过诸如随机诱变和/或CDR改组等技术从幼稚VHH文库获得的VHH文库，例如WO 00/43507所述。
在进一步的实施方案中，又一种获得针对MSLN的VHH序列的技术涉及适当地免疫能够表达重链抗体的转基因哺乳动物(即，以产生针对MSLN的免疫应答和/或重链抗体)，从所述转基因哺乳动物获得合适的生物样品(如血液样品、血清样品或B细胞样品)，然后使用本领域已知的任何合适技术从所述样品开始生成针对MSLN的VHH序列。例如，为此目的，可以使用表达重链抗体的大鼠或小鼠以及在WO 02/085945和WO 04/049794中描述的其它方法和技术。
在一些实施方案中，本文所述的抗MSLN抗体包括单结构域抗体，其具有对应于天然存在的VHH结构域的氨基酸序列的氨基酸序列，但是已经“人源化”，即通过用存在于来自人类的常规4链抗体(例如，如上所述)的VH结构域中相应位置处的一个或多个氨基酸残基替换所述天然存在的VHH序列(特别是框架序列中)的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基。这可以按本领域已知的方式进行，该方式对于本领域技术人员将会是显而易见的，例如基于本文的进一步描述。此外，应当注意，本公开的此类人源化抗MSLN单结构域抗体以本质上已知的任何合适的方式获得(即，如以上(1)-(8)点所示)，因此不严格限于使用包含天然存在的VHH结构域的多肽作为起始材料获得的多肽。在一些另外的实施方案中，如本文所述的单结构域MSLN抗体包括单结构域抗体，其具有对应于天然存在的VH结构域的氨基酸序列的氨基酸序列，但是已经“骆驼化”，即通过用存在于重链抗体的VHH结构域中的相应位置处的一个或多个氨基酸残基替换来自常规4链抗体的天然存在的VH结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基。此类“骆驼化”置换优选地在形成VH-VL界面和/或存在于VH-VL界面处的氨基酸位置处以及/或者在所谓的骆驼科标志残基处插入(参见例如WO 94/04678，以及Davies和Riechmann(1994和1996))。优选地，用作生成或设计骆驼化单结构域的起始材料或起始点的VH序列优选地是来自哺乳动物的VH序列，更优选地是人类的VH序列，如VH3序列。然而，应当注意，在某些实施方案中，本公开的此类骆驼化抗MSLN单结构域抗体以本领域已知的任何合适的方式获得(即，如以上(1)-(8)点所示)，因此不严格限于使用包含天然存在的VH结构域的多肽作为起始材料获得的多肽。例如，如本文进一步描述的，“人源化”和“骆驼化”均通过分别提供编码天然存在的VHH结构域或VH结构域的核苷酸序列，然后分别以新核苷酸序列编码“人源化”或“骆驼化”单结构域抗体的方式改变所述核苷酸序列中的一个或多个密码子来进行。然后可以表达该核酸，以提供本公开的期望的抗MSLN单结构域抗体。或者，在其它实施方案中，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列，分别设计本公开的期望的人源化或骆驼化抗MSLN单结构域抗体的氨基酸序列，然后使用已知的肽合成技术从头合成。在一些实施方案中，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列或核苷酸序列，分别设计编码本公开的期望的人源化或骆驼化抗MSLN单结构域抗体的核苷酸序列，然后使用已知的核酸合成技术从头合成，之后使用已知的表达技术表达由此获得的核酸，以提供本公开的期望的抗MSLN单结构域抗体。
用于从天然存在的VH序列或VHH序列开始获得本公开的抗MSLN单结构域抗体和/或编码该抗MSLN单结构域抗体的核酸的其它合适方法和技术包括例如以合适的方式组合一个或多个天然存在的VH序列(诸如一个或多个框架(FR)序列和/或互补决定区(CDR)序列)的一个或多个部分、一个或多个天然存在的VHH序列(诸如一个或多个FR序列或CDR序列)的一个或多个部分以及/或者一个或多个合成或半合成序列，以提供本公开的抗MSLN单结构域抗体或编码该抗MSLN单结构域抗体的核苷酸序列或核酸。
在一些实施方案中，考虑到所述MSLN结合蛋白质相当小，并且在一些实施方案中不大于25kD、不大于20kD、不大于15kD或不大于10kD。在某些情况下，所述MSLN结合蛋白质如果是肽或小分子实体，则为5kD或更小。
在一些实施方案中，所述MSLN结合蛋白质是抗MSLN特异性抗体，其包含重链可变互补决定区CDR1、重链可变CDR2、重链可变CDR3、轻链可变CDR1、轻链可变CDR2和轻链可变CDR3。在一些实施方案中，该MSLN结合蛋白质包含与MSLN结合的任何结构域，包括但不限于来自以下的结构域：单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体，或者抗原结合片段如单结构域抗体(sdAb)、Fab、Fab'、F(ab)2和Fv片段，由一个或多个CDR组成的片段、单链抗体(例如，单链Fv片段(scFv))、二硫键稳定的Fv(dsFv)片段、异缀合抗体(例如，双特异性抗体)、pFv片段、重链单体或二聚体、轻链单体或二聚体，以及由一条重链和一条轻链组成的二聚体。在一些实施方案中，该MSLN结合蛋白质是单结构域抗体。在一些实施方案中，抗MSLN单结构域抗体包含重链可变互补决定区(CDR)，CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质是包含氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列由被三个互补决定区/序列中断的四个框架区/序列(f1-f4)组成，如下式所示：f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4，其中r1、r2和r3分别是互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，并且f1、f2、f3和f4是框架残基。本公开的MSLN结合蛋白质的框架残基包含例如75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93或94个氨基酸残基，并且互补决定区包含例如24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36个氨基酸残基。在一些实施方案中，该MSLN结合蛋白质包含选自SEQ ID NO:1-40的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述CDR1包含如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列，或在SEQID NO:51中具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸置换的变体。在一些实施方案中，所述CDR2包含如SEQ ID NO:52所示的序列，或在SEQ ID NO:52中具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸置换的变体。在一些实施方案中，所述CDR3包含如SEQ ID NO:53所示的序列，或在SEQ ID NO:53中具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸置换的变体。
在一些实施方案中，所述CDR1包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列，或在SEQID NO:54中具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸置换的变体。在一些实施方案中，所述CDR2包含如SEQ ID NO:55所示的序列，或在SEQ ID NO:55中具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸置换的变体。在一些实施方案中，所述CDR3包含如SEQ ID NO:56所示的序列，或在SEQ ID NO:56中具有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个氨基酸置换的变体。
在某些实例中，本公开的MSLN结合蛋白质包含一个或多个保守区。所述保守区包含如SEQ ID NO:41-50所示的序列，或相对于所述序列包含一个或多个氨基酸残基置换的变体。示例性的实施方案包括MSLN结合蛋白质，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:41-44的保守区，或相对于所述序列包含一个或多个氨基酸残基置换的变体。在一些情况下，所述MSLN结合蛋白质包含(i)对应于SEQ ID NO:41的一段氨基酸，(ii)对应于SEQ ID NO:42的一段氨基酸，(iii)对应于SEQ ID NO:43的一段氨基酸，和(iv)对应于SEQ ID NO:44的一段氨基酸。
其它示例性实施方案包括MSLN结合蛋白质，其包含一个或多个选自SEQ ID NO:45-50的保守区，或相对于所述序列包含一个或多个氨基酸残基置换的变体。在一些情况下，所述MSLN结合蛋白质包含(i)对应于SEQ ID NO:45的一段氨基酸，(ii)对应于SEQ IDNO:46的一段氨基酸，(iii)对应于SEQ ID NO:47的一段氨基酸，(iv)对应于SEQ ID NO:48的一段氨基酸，(v)对应于SEQ ID NO:49的一段氨基酸，和(vi)对应于SEQ ID NO:50的一段氨基酸。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质与选自SEQ ID NO:1-29、58和60-62的氨基酸序列至少约75％、约76％、约77％、约78％、约79％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质与选自SEQ ID NO:30-40、58和60-62的氨基酸序列至少约75％、约76％、约77％、约78％、约79％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的互补决定区与SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的互补决定区与SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的互补决定区与SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的互补决定区1(CDR1)与SEQ IDNO:63-101中任一个所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的互补决定区2(CDR2)与SEQ IDNO:102-140中任一个所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的互补决定区3(CDR3)与SEQ IDNO:141-179中任一个所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的框架区1(f1)与SEQ ID NO:180-218中任一个所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的框架区1(f1)与SEQ ID NO:219-257中任一个所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的框架区2(f2)与SEQ ID NO:258-296中任一个所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在各个实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质的框架区3(f3)与SEQ ID NO:297-335中任一个所示的氨基酸序列至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％相同。
在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:1的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:2的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:3的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:4的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:5的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:6的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:7的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:8的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:9的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:10的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:11的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:12的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:13的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:14的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:15的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:16的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:17的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:18的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:19的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:20的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:21的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:22的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:23的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:24的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:25的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:26的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:27的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:28的序列的单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:28的序列的单结构域抗体。
在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ IDNO:30的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:31的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:32的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQID NO:33的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:34的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:35的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQID NO:36的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:37的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:38的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQID NO:39的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:40的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:58的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQID NO:60的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:61的序列的人源化单结构域抗体。在一些实施方案中，根据上述实施方案中任一项的MSLN结合蛋白质是包含SEQ ID NO:62的序列的人源化单结构域抗体。
在一些实施方案中，所述MSLN结合蛋白质对人和食蟹猴间皮素具有交叉反应性。在一些实施方案中，该MSLN结合蛋白质对人间皮素是特异性的。在某些实施方案中，本文公开的MSLN结合蛋白质以人Kd(hKd)与人间皮素结合。在某些实施方案中，本文公开的MSLN结合蛋白质以食蟹猴Kd(cKd)与食蟹猴间皮素结合。在某些实施方案中，本文公开的MSLN结合蛋白质分别以食蟹猴Kd(cKd)和人Kd(hKd)与食蟹猴间皮素和人间皮素结合。在一些实施方案中，该MSLN结合蛋白质以相当的结合亲和力(即，hKd和cKd值相差不超过±10％)与人和食蟹猴间皮素结合。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约500nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约450nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约400nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约350nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约300nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约250nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约200nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约150nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约100nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.1nM至约90nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.2nM至约80nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.3nM至约70nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.4nM至约50nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.5nM至约30nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.6nM至约10nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.7nM至约8nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.8nM至约6nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约0.9nM至约4nM的范围内。在一些实施方案中，所述hKd和cKd在约1nM至约2nM的范围内。
在一些实施方案中，任何前述MSLN结合蛋白质(例如，SEQ ID NO:1-40和58的抗MSLN单结构域抗体)是为了易于纯化而标记的亲和肽。在一些实施方案中，亲和肽标签是六个连续的组氨酸残基，也称为6X-his。
在某些实施方案中，可以将根据本公开的MSLN结合蛋白质并入靶向MSLN的三特异性蛋白质中。在一些实例中，该三特异性结合蛋白质包含CD3结合域、人血清白蛋白(HSA)结合域和根据本公开的抗MSLN结合域。在一些情况下，该三特异性结合蛋白质包含以下方向的上述结构域：MSLN-HSA-CD3。
在某些实施方案中，本公开的MSLN结合蛋白质相对于可溶性间皮素优先结合膜结合的间皮素。膜结合的间皮素是指在表达间皮素的细胞的细胞膜表面之中或之上存在间皮素。可溶性间皮素是指不再存在于正表达或已表达间皮素的细胞的细胞膜表面之中或之上的间皮素。在某些情况下，可溶性间皮素存在于受试者的血液和/或淋巴循环中。在一个实施方案中，所述MSLN结合蛋白质与膜结合的间皮素的结合至少是与可溶性间皮素的结合的5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、100倍、500倍或1000倍。在一个实施方案中，本公开的抗原结合蛋白质优先结合膜结合的间皮素，是与可溶间皮素的结合的30倍。使用本领域公知的测定可以容易地确定抗原结合蛋白质与膜结合的MSLN相对于可溶性MSLN的优先结合。
向嵌合抗原受体(CAR)中的整合
在某些实例中，本公开的MSLN结合蛋白质，例如抗MSLN单结构域抗体，可以并入嵌合抗原受体(CAR)中。工程化的免疫效应细胞，例如T细胞或NK细胞，可以用来表达CAR，该CAR包括本文所述的抗MSLN单结构域抗体。在一个实施方案中，包括本文所述的抗MSLN单结构域抗体的CAR经由铰链区连接至跨膜域，并进一步连接至共刺激域，例如获自OX40、CD27、CD28、CD5、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)或4-1BB的功能性信号传导域。在一些实施方案中，该CAR进一步包含编码细胞内信号传导域如4-1BB和/或CD3ζ的序列。
肿瘤生长减少性质
在某些实施方案中，当施用于具有表达间皮素的肿瘤细胞的受试者时，本公开的MSLN结合蛋白质在体内减少肿瘤细胞的生长。肿瘤细胞生长减少的测量可以通过本领域公知的多种不同方法来确定。非限制性实例包括直接测量肿瘤尺寸，测量切除的肿瘤块并与对照对象进行比较，通过可能使用或可能不使用同位素或发光分子(例如萤光素酶)增强分析的成像技术(例如CT或MRI)进行测量，等等。在特定实施方案中，与对照抗原结合剂相比，本公开的抗原结合剂的施用导致肿瘤细胞的体内生长减少至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，肿瘤生长减少约100％表明完全反应和肿瘤消失。在进一步的实施方案中，与对照抗原结合剂相比，本公开的抗原结合剂的施用导致肿瘤细胞的体内生长减少约50-100％、约75-100％或约90-100％。在进一步的实施方案中，与对照抗原结合剂相比，本公开的抗原结合剂的施用导致肿瘤细胞的体内生长减少约50-60％、约60-70％、约70-80％、约80-90％或约90-100％。
MSLN结合蛋白质修饰
本文所述的MSLN结合蛋白质包括衍生物或类似物，其中(i)氨基酸被不是由遗传密码编码的氨基酸残基置换，(ii)成熟多肽与另一化合物如聚乙二醇融合，或(iii)额外的氨基酸与该蛋白质融合，如前导序列或分泌序列或用来阻断免疫原性结构域和/或用于纯化该蛋白质的序列。
典型的修饰包括但不限于乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价附接、血红素部分的共价附接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价附接、脂质或脂质衍生物的共价附接、磷脂酰肌醇的共价附接、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、转移RNA介导的向蛋白质添加氨基酸，如精氨酰化和泛素化。
在本文所述的MSLN结合蛋白质中的任何位置进行修饰，所述位置包括肽骨架、氨基酸侧链和氨基或羧基末端。可用于修饰MSLN结合蛋白质的某些常见肽修饰包括糖基化、脂质附接、硫酸化、谷氨酸残基的γ-羧化、羟基化、多肽中的氨基或羧基或两者被共价修饰的封闭，以及ADP-核糖基化。
编码MSLN结合蛋白质的多核苷酸
在一些实施方案中，还提供了编码本文所述的MSLN结合蛋白质的多核苷酸分子。在一些实施方案中，该多核苷酸分子以DNA构建体的形式提供。在其它实施方案中，该多核苷酸分子以信使RNA转录物的形式提供。
所述多核苷酸分子通过已知方法构建，例如通过组合与合适的启动子以及可选的合适的转录终止子可操作地连接的编码抗MSLN结合蛋白质的基因，并且将其在细菌或其它合适的表达系统例如CHO细胞中表达。
在一些实施方案中，将所述多核苷酸插入载体中，优选表达载体中，这代表进一步的实施方案。该重组载体可根据已知方法来构建。特别感兴趣的载体包括质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、病毒(virii)(例如，逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒、慢病毒等)和粘粒。
可利用多种表达载体/宿主系统，以包含并表达编码所述MSLN结合蛋白质的多肽的多核苷酸。表达载体的实例是用于在大肠杆菌中表达的pSKK(Le Gall等人,J ImmunolMethods.(2004)285(1):111-27)、用于在哺乳动物细胞中表达的pcDNA5(Invitrogen)、PICHIAPINKTMYeast Expression Systems(Invitrogen)、BACUVANCETMBaculovirusExpression System(GenScript)。
因此，在一些实施方案中，如本文所述的MSLN结合蛋白质通过以下步骤产生：将编码如上所述蛋白质的载体引入宿主细胞中，并在允许蛋白质结构域表达的条件下培养所述宿主细胞，可将其分离并任选地进一步纯化。
药物组合物
在一些实施方案中，还提供了药物组合物，其包含本文所述的MSLN结合蛋白质、包含编码该MSLN结合蛋白质的多肽的多核苷酸的载体或被该载体转化的宿主细胞，以及至少一种药学上可接受的载剂。术语“药学上可接受的载剂”包括但不限于不干扰成分的生物活性的有效性且对所施用的患者无毒的任何载剂。合适的药物载剂的实例是本领域公知的，并且包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液如水包油乳液、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。这样的载剂可通过常规方法配制，并且可以以合适的剂量施用于受试者。优选地，该组合物是无菌的。这些组合物还可含有辅料如防腐剂、乳化剂和分散剂。可通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂来确保阻止微生物的作用。另一个实施方案提供了一种或多种上述结合蛋白质，如抗MSLN单结构域抗体或其抗原结合片段，其以冻干形式包装或包装在水性介质中。
在药物组合物的一些实施方案中，本文所述的MSLN结合蛋白质被包封在纳米颗粒中。在一些实施方案中，该纳米颗粒是富勒烯、液晶、脂质体、量子点、超顺磁纳米颗粒、树状聚体或纳米棒。在药物组合物的其它实施方案中，将MSLN结合蛋白质附接至脂质体。在一些情况下，MSLN结合蛋白质与脂质体表面缀合。在一些情况下，MSLN结合蛋白质被包封在脂质体的壳内。在一些情况下，该脂质体为阳离子脂质体。
本文所述的MSLN结合蛋白质被考虑用作药物。给药通过不同方式实现，例如，通过静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、局部或真皮内给药。在一些实施方案中，给药途径取决于疗法的种类和药物组合物中包含的化合物的种类。给药方案将由主治医师根据其它临床因素来确定。对于任何一名患者的剂量依赖于许多因素，包括患者体型、体表面积、年龄、性别、待施用的具体化合物、给药时间和途径、疗法的种类、总体健康和其它同时施用的药物。“有效剂量”是指活性成分的量，该量足以影响疾病的病程和严重程度，从而导致这种病理学的减轻或缓解，并且可使用已知方法来确定。
在一些实施方案中，本公开的MSLN结合物以至多10mg/kg的剂量以每周一次的频率施用。在一些情况下，剂量范围为约1ng/kg至约10mg/kg。在一些实施方案中，该剂量为约1ng/kg至约10ng/kg、约5ng/kg至约15ng/kg、约12ng/kg至约20ng/kg、约18ng/kg至约30ng/kg、约25ng/kg至约50ng/kg、约35ng/kg至约60ng/kg、约45ng/kg至约70ng/kg、约65ng/kg至约85ng/kg、约80ng/kg至约1μg/kg、约0.5μg/kg至约5μg/kg、约2μg/kg至约10μg/kg、约7μg/kg至约15μg/kg、约12μg/kg至约25μg/kg、约20μg/kg至约50μg/kg、约35μg/kg至约70μg/kg、约45μg/kg至约80μg/kg、约65μg/kg至约90μg/kg、约85μg/kg至约0.1mg/kg、约0.095mg/kg至约10mg/kg。在一些情况下，该剂量为约0.1mg/kg至约0.2mg/kg、约0.25mg/kg至约0.5mg/kg、约0.45mg/kg至约1mg/kg、约0.75mg/kg至约3mg/kg、约2.5mg/kg至约4mg/kg、约3.5mg/kg至约5mg/kg、约4.5mg/kg至约6mg/kg、约5.5mg/kg至约7mg/kg、约6.5mg/kg至约8mg/kg、约7.5mg/kg至约9mg/kg或约8.5mg/kg至约10mg/kg。在一些实施方案中，给药频率约为少于每天一次、每隔一天一次、少于每天一次、每周两次、每周一次、7天一次、两周一次、两周一次、三周一次、每四周一次或每月一次。在一些情况下，给药频率为每周一次。在一些情况下，给药频率为每周一次，剂量最高为10mg/kg。在一些情况下，给药持续时间为约1天至约4周或更长
治疗方法
在一些实施方案中，本文还提供了用于刺激有需要的个体的免疫系统的方法和用途，其包括施用本文所述的MSLN结合蛋白质。在一些情况下，本文所述的MSLN结合蛋白质的施用诱导和/或保持对表达靶抗原的细胞的细胞毒性。在一些情况下，表达靶抗原的细胞是癌细胞或肿瘤细胞、病毒感染的细胞、细菌感染的细胞、自身反应性T或B细胞、受损红细胞、动脉斑块或纤维化组织。
本文还提供了用于治疗与靶抗原相关的疾病、病症或病况的方法和用途，其包括向有需要的个体施用本文所述的MSLN结合蛋白质或包含该MSLN结合蛋白质的多特异性结合蛋白质。与靶抗原相关的疾病、病症或病况包括但不限于病毒感染、细菌感染、自身免疫病、移植排斥、动脉粥样硬化或纤维化。在其它实施方案中，与靶抗原相关的疾病、病症或病况为增生性疾病、肿瘤性疾病、炎性疾病、免疫性病症、自身免疫病、传染性疾病、病毒性疾病、变态反应、寄生虫反应、移植物抗宿主病或宿主抗移植物病。在一个实施方案中，与靶抗原相关的疾病、病症或病况为癌症。可以用本公开的MSLN结合蛋白质治疗、预防或控制的癌症及其使用方法包括但不限于上皮细胞起源的癌症。此类癌症的实例包括以下：白血病，例如但不限于急性白血病，急性淋巴细胞白血病，急性髓细胞性白血病，如成髓细胞性、早幼粒细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病，以及骨髓增生异常综合征；慢性白血病，例如但不限于慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病；真性红细胞增多症；淋巴瘤，例如但不限于霍奇金病、非霍奇金病；多发性骨髓瘤，例如但不限于郁积型多发性骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤；瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症；意义不明的单克隆丙种球蛋白病；良性单克隆丙种球蛋白病；重链病；骨和结缔组织肉瘤，例如但不限于骨骼的肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤；脑瘤，例如但不限于神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质瘤、听神经鞘瘤、颅咽管瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、松果体细胞瘤、松果体母细胞瘤、原发性脑淋巴瘤；乳腺癌，包括但不限于导管癌、腺癌、小叶(小细胞)癌、导管内癌、髓样乳腺癌、粘液性乳腺癌、小管性乳腺癌、乳头状乳腺癌、佩吉特病和炎性乳腺癌；肾上腺癌，例如但不限于嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌；甲状腺癌，例如但不限于乳头状或滤泡状甲状腺癌、髓样甲状腺癌和间变性甲状腺癌；胰腺癌，例如但不限于胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、病毒瘤、分泌促生长素抑制素的肿瘤以及类癌或胰岛细胞瘤；垂体癌，例如但不限于库欣病、分泌催乳素的肿瘤、肢端肥大症和尿崩症；眼癌，例如但不限于眼黑素瘤，如虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤和睫状体黑素瘤，以及视网膜母细胞瘤；阴道癌，如鳞状细胞癌、腺癌和黑素瘤；外阴癌，如鳞状细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤和佩吉特病；宫颈癌，例如但不限于鳞状细胞癌和腺癌；子宫癌，例如但不限于子宫内膜癌和子宫肉瘤；卵巢癌，例如但不限于卵巢上皮癌、交界瘤、胚细胞瘤和基质肿瘤；食管癌，例如但不限于鳞状癌、腺癌、腺样囊性癌、粘液表皮样癌、腺鳞癌、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌和燕麦细胞(小细胞)癌；胃癌，例如但不限于腺癌、蕈状(息肉样)、溃疡性、浅表扩散、弥散性扩散、恶性淋巴瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和癌肉瘤；结肠癌；直肠癌；肝癌，例如但不限于肝细胞癌和肝母细胞瘤；胆囊癌，如腺癌；胆管癌，例如但不限于乳头状、结节状和弥漫性；肺癌，如非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌；睾丸癌，例如但不限于生殖细胞瘤、精原细胞瘤、间变性、经典(典型)、精细胞癌、非精原细胞瘤、胚胎性癌、畸胎瘤、绒毛膜癌(卵黄囊瘤)，前列腺癌，例如但不限于前列腺上皮内瘤样病变、腺癌、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤；松果体癌；口腔癌，例如但不限于鳞状细胞癌；基底癌；唾液腺癌，例如但不限于腺癌、粘液表皮样癌和腺样囊性癌；咽癌，例如但不限于鳞状细胞癌和疣状；皮肤癌，例如但不限于基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤，浅表扩散性黑素瘤、结节性黑素瘤、痣样恶性黑素瘤、肢端着色斑性黑素瘤；肾癌，例如但不限于肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或子宫)；维尔姆斯瘤；膀胱癌，例如但不限于移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤。此外，癌症包括粘液肉瘤、成骨性肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、血管母细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管原癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌和乳头状腺癌(关于这类病症的综述，参见Fishman等人,1985,Medicine,第2版,J.B.Lippincott Co.,Philadelphia，以及Murphy等人,1997,Informed Decisions:TheComplete Book of Cancer Diagnosis,Treatment,and Recovery,Viking Penguin,Penguin Books U.S.A.,Inc.,United States of America)。
本公开的MSLN结合蛋白质也可用于治疗或预防多种癌症或其它异常增生性疾病，包括(但不限于)以下：癌，包括膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌；包括鳞状细胞癌；淋巴谱系的血液系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、急性淋巴母细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤；骨髓谱系的血液系统肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病和早幼粒细胞白血病；间充质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其它肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、四癌、神经母细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间充质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌瘤和骨肉瘤；以及其它肿瘤，包括黑素瘤、着色性干皮病、角膜动化瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎瘤。还想到由凋亡异常引起的癌症也可以通过本公开的方法和组合物治疗。此类癌症可包括但不限于滤泡性淋巴瘤，具有p53突变的癌，乳腺、前列腺和卵巢的激素依赖性肿瘤，以及癌前病变，如家族性腺瘤性息肉病和骨髓增生异常综合征。在特定的实施方案中，在皮肤、肺、结肠、乳房、前列腺、膀胱、肾、胰腺、卵巢或子宫中治疗或预防恶性或增生异常改变(如化生和发育异常)或过度增生性疾病。在其它具体的实施方案中，治疗或预防肉瘤、黑素瘤或白血病。
在一些实施方案中，如本文所用的，“治疗”或“处理”是指治疗性处理，其中目的是减缓(减轻)不期望的生理病况、病症或疾病，或是获得有益或期望的临床结果。对于本文所述的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于症状的减轻；病况、病症或疾病程度的减小；病况、病症或疾病状态的稳定(即不恶化)；病况、病症或疾病的延迟发作或进展减缓；病况、病症或疾病状态的改善；以及病况、病症或疾病的可检测到的或不可检测的缓解(部分或全部的)或者增强或改善。治疗包括引发临床上显著的反应，而没有过高水平的副作用。治疗还包括与不接受治疗的情况下预期的生存期相比延长生存期。在其它实施方案中，“治疗”或“处理”是指预防性措施，其中目的是例如在易患疾病的人(例如，携带诸如乳腺癌等疾病的遗传标志物的个体)中，延迟不希望的生理病况、病症或疾病的发作或者降低其严重程度。
在本文所述的方法的一些实施方案中，如本文所述的MSLN结合蛋白质与用于治疗特定疾病、病症或病况的药剂联合施用。药剂包括但不限于涉及抗体、小分子(例如，化疗药物)、激素(甾体、肽等)的疗法、放射疗法(γ射线、X射线，和/或放射性同位素、微波、UV辐射等的定向递送)、基因疗法(例如，反义，逆转录病毒疗法等)和其它免疫疗法。在一些实施方案中，本文所述的MSLN结合蛋白质与止泻剂、止吐剂、镇痛药、阿片类药物和/或非甾体抗炎剂联合施用。在一些实施方案中，本文所述的MSLN结合蛋白质与抗癌剂联合施用。可在本公开的各个实施方案(包括本公开的药物组合物和剂型和试剂盒)中使用的抗癌剂的非限制性实例包括：阿西维辛；阿柔比星；盐酸阿考达唑；阿克罗宁；阿多来新；阿地白介素；六甲蜜胺；安波霉素；醋酸阿美蒽醌；氨鲁米特；安吖啶；阿那曲唑；安曲霉素；天冬酰胺酶；曲林菌素；阿扎胞苷；阿扎替派；阿佐霉素；巴马司他；苯佐替派；比卡鲁胺；盐酸比生群；二甲磺酸双奈法德；比折来新；硫酸博来霉素；布喹那钠；溴匹立明；白消安；放线菌素C；卡鲁睾酮；卡醋胺；卡贝替姆；卡铂；卡莫司汀；盐酸卡柔比星；卡折来新；西地芬戈；苯丁酸氮芥；西罗霉素；顺铂；克拉屈滨；甲磺酸克雷斯托；环磷酰胺；阿糖胞苷；达卡巴嗪；放线菌素D；盐酸柔红霉素；地西他滨；右奥马铂；地扎胍宁；甲磺酸地扎胍宁；地吖醌；多西他赛；多柔比星；盐酸多柔比星；屈洛昔芬；柠檬酸屈洛昔芬；丙酸屈他雄酮；达佐霉素；依达曲沙；盐酸依氟乌氨酸；依沙芦星；恩洛铂；恩普氨酯；依匹哌啶；盐酸表柔比星；厄布洛唑；盐酸依索比星；雌莫司汀；雌莫司汀磷酸钠；依他硝唑；依托泊苷；磷酸依托泊苷；艾托卜宁；盐酸法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；氟尿苷；磷酸氟达拉滨；氟尿嘧啶；氟西他滨；磷喹酮；福司曲星钠；吉西他滨；盐酸吉西他滨；羟基脲；盐酸依达比星；异环磷酰胺；伊莫福新；白介素II(包括重组白介素II或rIL2)；干扰素α-2a；干扰素α-2b；干扰素α-n1；干扰素α-n3；干扰素β-I a；干扰素γ-Ib；异丙铂；盐酸伊立替康；醋酸兰瑞肽；来曲唑；醋酸亮丙瑞林；盐酸利阿唑；洛美曲索钠；洛莫司汀；盐酸洛索蒽醌；马索罗酚；美坦辛；盐酸氮芥；醋酸甲地孕酮；醋酸美伦孕酮；美法仑；美诺立尔；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；甲氨蝶呤钠；氯苯氨啶；美妥替哌；米丁度胺；米托克星(mitocarcin)；丝裂红素(mitocromin)；米托洁林；丝裂马星；丝裂霉素；米托司培；米托坦；盐酸米托蒽醌；霉酚酸；诺考达唑；诺加霉素；奥马铂；奥昔舒仑；紫杉醇；培门冬酶；培利霉素；戊氮芥；硫酸培洛霉素；培磷酰胺；哌泊溴烷；哌泊舒凡；盐酸吡罗蒽醌；普卡霉素；普洛美坦；卟吩姆钠；泊非霉素；泼尼莫司汀；盐酸丙卡巴肼；嘌呤霉素；盐酸嘌呤霉素；吡唑呋喃菌素；利波腺苷；罗谷亚胺；沙芬戈；盐酸沙芬戈；司莫司汀；辛曲秦；斯帕膦酸钠；司帕霉素；盐酸螺旋锗；螺莫司汀；螺铂；链黑菌素；链脲霉素；磺氯苯脲；他利霉素；替可加兰钠；替加氟；盐酸替洛蒽醌；替莫泊芬；替尼泊苷；替罗昔隆；睾内酯；硫咪嘌呤；硫鸟嘌呤；噻替哌；噻唑羧胺核苷；替拉扎明；柠檬酸托瑞米芬；醋酸曲托龙；磷酸曲西立滨；三甲曲沙；葡糖醛酸三甲曲沙；曲普瑞林；盐酸妥布氯唑；乌拉莫司汀；乌瑞替派；伐普肽；维替泊芬；硫酸长春碱；硫酸长春新碱；长春地辛；硫酸长春地辛；硫酸长春匹定；硫酸长春甘酯；硫酸长春罗新；酒石酸长春瑞滨；硫酸长春罗定；硫酸长春利定；伏氯唑；折尼铂；净司他丁；盐酸佐柔比星。抗癌药的其它实例包括但不限于：20-表-1,25二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；腺环戊醇；阿多来新；阿地白介素；ALL-TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；amidox；氨磷汀；氨基酮戊酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯；抗背侧化形态发生蛋白-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)；抗雄激素；前列腺癌；抗雌激素；抗瘤酮；反义寡核苷酸；甘氨酸阿非科林；凋亡基因调节剂；凋亡调节剂；无嘌呤酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；芥子碱(asulacrine)；阿他美坦；阿莫司汀；阿奇他汀(axinastatin)1；阿奇他汀2；阿奇他汀3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮络氨酸；浆果赤霉素III衍生物；balanol；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯并二氢扑酚(benzochlorins)；苯甲酰基星状孢菌素(benzoylstaurosporine)；β-内酰胺衍生物；β-alethine；betaclamycin B；桦木酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；双吖丙啶基精胺；双奈法德；双曲群A(bistratene A)；比折来新；breflate；溴匹立明；布朵替坦；丁硫氨酸硫酸亚胺；卡泊三醇；钙磷酸蛋白C；喜树碱衍生物；金丝雀痘IL-2；卡培他滨；羧酰胺-氨基-三唑；羧胺三唑；CaRest M3；CARN 700；软骨衍生抑制剂；卡折来新；酪蛋白激酶抑制剂(ICOS)；栗树精胺；天蚕抗菌肽B；西曲瑞克；二氢卟酚；氯喹喔啉磺酰胺；西卡前列素；顺式卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；collismycin A；collismycin B；康普瑞汀A4；康普瑞汀类似物；conagenin；crambescidin816；克雷斯托；念珠藻素8；念珠藻素A衍生物；curacin A；环戊蒽醌；环铂(cycloplatam)；塞匹霉素；阿糖胞苷十八烷基磷酸盐；溶细胞因子；磷酸己烷雌酚(cytostatin)；达昔单抗；地西他滨；脱氢膜海鞘素B；地洛瑞林；地塞米松；右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；膜海鞘素B；didox；二乙基去甲精胺；二氢-5-氮杂胞苷；9-二氢泰素；二氧杂霉菌素(dioxamycin)；二苯基螺莫司汀；多西他赛；廿二醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；多卡米星SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗(edrecolomab)；依氟鸟氨酸；榄香烯；乙嘧替氟；表柔比星；爱普列特；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；夫拉平度；氟卓斯汀；fluasterone；氟达拉滨；盐酸氟道诺霉素(fluorodaunorunicinhydrochloride)；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；德卟啉钆(gadoliniumtexaphyrin)；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；hepsulfam；调蛋白；六亚甲基双乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；艾多昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑并吖啶酮；咪喹莫特；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-I受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白介素；碘苄胍；碘代多柔比星；4-甘薯苦醇；伊罗普拉；伊索拉定；异邦格唑；异高软海绵素B；伊他司琼；加斯普拉诺利得(jasplakinolide)；卡哈拉里德F(kahalalide F)；三乙酸片螺素-N；兰瑞肽；雷那霉素；来格司亭；硫酸香菇多糖；雷波斯他汀；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙瑞林+雌激素+黄体酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；线性多胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂；蚯蚓磷脂；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；HMG-CoA还原酶抑制剂(诸如但不限于洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、他汀类、辛伐他汀和阿托伐他汀)；洛索立宾；勒托替康；lutetium texaphyrin；lysofylline；裂解肽；美坦辛；曼诺他汀A；马立马司他；马索罗酚；乳腺丝抑蛋白；基质溶解因子抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；美巴龙(merbarone)；阿伏瑞林；甲硫氨酸酶(methioninase)；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福星；米立司亭；错配的双链RNA；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；迈托毒素成纤维细胞生长因子-皂草素；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体；单磷酰脂质A+分支杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；多重耐药基因抑制剂；基于多肿瘤抑制物1的疗法；芥子抗癌剂；印度洋海绵B(mycaperoxide B)；分枝杆菌细胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰地那林；N-取代的苯甲酰胺；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性内肽酶；尼鲁米特；尼萨霉素；一氧化氮调节剂；硝基氧抗氧化剂；nitrullyn；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；oracin；口服细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；oxaunomycin；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；palmitoylrhizoxin；帕米膦酸；人参三醇；帕诺米芬；parabactin；泊泽普汀；培门冬酶；培得星(peldesine)；戊聚糖多硫酸钠；喷司他丁；喷曲唑；全氟溴烷；培磷酰胺；紫苏醇；吩嗪霉素(phenazinomycin)；苯乙酸盐；磷酸酶抑制剂；溶链菌制剂(picibanil)；盐酸毛果芸香碱；吡柔比星；吡曲克辛；placetin A；placetin B；纤溶酶原激活物抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠；泊非霉素；强的松；丙基双吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白质A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂；微藻；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；红紫素；甲氧基吡唑啉吖啶；吡哆基化血红蛋白聚氧乙烯缀合物；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法尼基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基化瑞替普汀；铼Re 186依替膦酸盐；根霉素；核糖酶；RII异维A酰胺；罗谷亚胺；罗希吐碱；罗莫肽；罗喹美克；rubiginone B1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；肌植醇A；沙格司亭；Sdi 1模拟物；司莫司汀；衰老衍生的抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；穗霉素D(spicamycinD)；螺莫司汀；斯耐潘定；海绵抑素1(spongistatin 1)；角鲨胺；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；stipiamide；溶基质蛋白酶抑制剂；sulfinosine；强效血管活性肠肽拮抗剂；suradista；苏拉明；苦马豆素；合成的糖胺聚糖；他莫司汀；它莫西芬甲硫碘化物；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxid)；tetrazomine；菌体胚素(thaliblastine)；噻可拉林(thiocoraline)；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；本紫红素乙酯锡(tin ethyletiopurpurin)；替拉扎明；二氯化二茂钛(titanocene bichloride)；topsentin；托瑞米芬；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸；三乙酰尿苷；曲西立宾；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗特来；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)；UBC抑制剂；乌苯美司；泌尿生殖窦衍生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；载体系统；红细胞基因疗法；维拉雷琐；藜芦胺；verdins；维替泊芬；长春瑞滨；vinxaltine；
Figure BDA0002364167790000391
伏罗唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C(zilascorb)；和净司他丁斯酯。其它抗癌药物是5-氟尿嘧啶和亚叶酸。当在使用沙利度胺和拓扑异构酶抑制剂的方法中使用时，这两种药剂特别有用。在一些实施方案中，本公开的抗MSLN单结构域结合蛋白质与吉西他滨联合使用。
在一些实施方案中，本文所述的MSLN结合蛋白质在手术之前、期间或之后施用。
间皮素表达的检测方法和间皮素相关癌症的诊断
根据本公开的另一个实施方案，提供了用于在体外或体内检测间皮素表达的试剂盒。该试剂盒包括前述的MSLN结合蛋白质(例如，标记的抗MSLN单结构域抗体或其抗原结合片段)，以及一种或多种用于检测标记物的化合物。在一些实施方案中，该标记物选自荧光标记物、酶标记物、放射性标记物、核磁共振活性标记物、发光标记物和发色团标记物。
在一些情况下，在生物样品中检测间皮素表达。该样品可以是任何样品，包括但不限于来自活检、尸检和病理学标本的组织。生物样品还包括组织切片，例如，用于组织学目的冷冻切片。生物样品还包括体液，如血液、血清、血浆、痰、脊髓液或尿液。生物样品通常获自哺乳动物，如人或非人灵长类动物。
在一个实施方案中，提供了一种通过使来自受试者的样品与本文公开的抗MSLN单结构域抗体接触并检测该单结构域抗体与样品的结合来确定受试者是否患有癌症的方法。与抗体与对照样品的结合相比，抗体与样品的结合的增加确定该受试者患有癌症。
在另一个实施方案中，提供了一种通过使来自被诊断出患有癌症的受试者的样品与本文公开的抗MSLN单结构域抗体接触并检测该抗体与样品的结合来确认受试者中癌症的诊断的方法。与抗体与对照样品的结合相比，抗体与样品的结合的增加确认了受试者中癌症的诊断。
在所公开方法的一些实例中，所述单结构域抗体被直接标记。
在一些实例中，所述方法进一步包括使与所述单结构域抗体特异性结合的第二抗体与所述样品接触；以及检测第二抗体的结合。与第二抗体与对照样品的结合相比，第二抗体与样品的结合的增加检测出受试者中的癌症或证实了受试者中癌症的诊断。
在一些情况下，所述癌症是间皮瘤、前列腺癌、肺癌、胃癌、鳞状细胞癌、胰腺癌、胆管癌、三阴性乳腺癌或卵巢癌，或表达间皮素的任何其它类型的癌症。
在一些实例中，对照样品是来自没有癌症的受试者的样品。在特定的实例中，样品是血液或组织样品。
在一些情况下，结合(例如特异性结合)间皮素的抗体直接用可检测标记物标记。在另一个实施方案中，结合(例如，特异性结合)间皮素的抗体(第一抗体)未被标记，而第二抗体或可以结合特异性结合间皮素的抗体的其它分子被标记。选择第二抗体，使其能够特异性结合特定种类和类别的第一抗体。例如，如果第一抗体是美洲驼IgG，则第二抗体可以是抗美洲驼IgG。可以与抗体结合的其它分子包括但不限于蛋白A和蛋白G，两者均可商购获得。抗体或第二抗体的合适的标记物如上所述，并且包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、磁性剂和放射性材料。合适的酶的非限制性实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶。合适的辅基复合物的非限制性实例包括链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素。合适的荧光材料的非限制性实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白。非限制性的示例性发光材料是鲁米诺；非限制性的示例性磁性剂是钆，而非限制性的示例性放射性标记物包括125I、131I、35S或3H。
在备选的实施方案中，可以通过竞争性免疫测定在生物样品中测定间皮素，该测定采用以可检测物质标记的间皮素标准品和特异性结合间皮素的未标记抗体。在该测定中，将生物样品、标记的间皮素标准品和特异性结合间皮素的抗体混合在一起，并测定与未标记的抗体结合的标记的间皮素标准品的量。生物样品中间皮素的量与同特异性结合间皮素的抗体结合的标记间皮素标准品的量成反比。
本文公开的免疫测定和方法可以用于多种目的。在一个实施方案中，特异性结合间皮素的抗体可用来检测细胞培养物中的细胞中间皮素的产生。在另一个实施方案中，该抗体可以用来检测生物样品如组织样品或血液或血清样品中间皮素的量。在一些实例中，该间皮素是细胞表面间皮素。在其它实例中，该间皮素是可溶性间皮素(例如，细胞培养上清液中的间皮素或体液样品如血液或血清样品中的间皮素。
在一个实施方案中，提供了用于检测生物样品如血液样品或组织样品中的间皮素的试剂盒。例如，为了确认受试者中的癌症诊断，可以进行活检以获得用于组织学检查的组织样品。或者，可以获取血液样品以检测可溶性间皮素蛋白质或片段的存在。根据本公开内容，用于检测多肽的试剂盒通常将包含特异性结合间皮素的单结构域抗体。在一些实施方案中，该试剂盒中包括抗体片段，如scFv片段、VH结构域或Fab。在进一步的实施方案中，该抗体被标记(例如，用荧光、放射性或酶标记物标记)。
在一个实施方案中，试剂盒包括说明材料，其公开了使用结合间皮素的抗体的手段。该说明材料可以用电子形式(如计算机软盘或光盘)书写，也可以是可视的(如视频文件)。试剂盒还可以包括其它组件，以方便试剂盒设计所针对的特定应用。因此，例如，该试剂盒可以另外包含检测标记物的手段(例如用于酶标记物的酶底物，用于检测荧光标记物的滤光器套件，合适的第二标记物，如第二抗体等)。该试剂盒可以另外包括常规用于实施特定方法的缓冲液和其它试剂。这样的试剂盒和合适的内容物是本领域技术人员熟知的。
在一实施方案中，诊断试剂盒包括免疫测定。尽管免疫测定的细节可随所采用的特定形式而不同，但是检测生物样品中间皮素的方法通常包括使生物样品与在免疫反应性条件下与间皮素多肽特异性反应的抗体接触的步骤。使抗体在免疫反应性条件下特异性结合以形成免疫复合物，并直接或间接检测免疫复合物(结合的抗体)的存在。
确定细胞表面标志物存在与否的方法是本领域公知的。例如，抗体可以与包括但不限于酶、磁珠、胶体磁珠、半抗原、荧光染料、金属化合物、放射性化合物或药物的其它化合物缀合。抗体也可用于免疫测定，例如但不限于放射免疫测定(RIA)、ELISA或免疫组织化学测定中。抗体也可用于荧光激活的细胞分选(FACS)。FACS使用多个颜色通道、低角度和钝角光散射检测通道以及阻抗通道，以及其它更复杂的检测级别，来对细胞进行分离或分类(参见第5,061,620号美国专利)。如本文所公开的，结合间皮素的任何单结构域抗体均可在这些测定中使用。因此，这些抗体可以用于常规的免疫测定中，包括但不限于ELISA、RIA、FACS、组织免疫组织化学、Western印迹法或免疫沉淀。
实施例
以下实施例进一步说明所描述的实施方案，而非限制本发明的范围。
实施例1：本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体介导T细胞杀死表达间皮素的癌细胞的 能力
将示例性的抗MSLN单结构域抗体序列转染到Expi293细胞(Invitrogen)中。使用具有蛋白A尖端的Octet仪器，且使用对照抗MSLN抗体制作标准曲线，对来自转染的Expi293细胞的条件培养基中示例性抗MSLN抗体的量进行定量。
将条件培养基的滴定添加到TDCC测定(T细胞依赖性细胞毒性测定)中，以评估抗MSLN单结构域抗体是否能够在T细胞与表达间皮素的卵巢癌细胞系OVCAR8之间形成突触。48小时后测量OVCAR8细胞的活力。可以看出，示例性的抗MSLN单结构域抗体介导T细胞杀伤。
此外，可以看出，示例性抗MSLN单结构域抗体的TDCC活性对表达间皮素的细胞是特异性的，因为该示例性抗体不介导T细胞对不表达间皮素的LNCaP细胞的杀伤。
实施例2：评估数种含有根据本公开的MSLN结合域的MSLN靶向三特异性抗原结合蛋白 质的结合和细胞毒活性的方法
蛋白质产生
将含有根据本公开的MSLN结合蛋白质的MSLN靶向三特异性分子的序列克隆到哺乳动物表达载体pCDNA 3.4(Invitrogen)中，其之前是前导序列，之后是6x组氨酸标签。将Expi293F细胞(Life Technologies A14527)以0.2-8×1e6个细胞/mL悬浮保持在OptimumGrowth Flasks(Thomson)中的Expi 293培养基中。根据Expi293 Expression System Kit(Life Technologies，A14635)方案，将纯化的质粒DNA转染到Expi293细胞中，并在转染后保持4-6天。在条件培养基中，使用带有蛋白A尖端的Octet仪器，且使用对照三特异性蛋白质制作标准曲线，对条件培养基中来自转染的Expi293细胞的所测示例性三特异性蛋白质的量进行定量。
细胞毒性测定
使用人T细胞依赖性细胞毒性(TDCC)测定来测量T细胞接合物(包括三特异性分子)引导T细胞杀伤肿瘤细胞的能力(Nazarian等人,2015.J Biomol Screen.20:519-27)。在该测定中，将T细胞和目标癌细胞系细胞在384孔板中以10:1的比例混合在一起，并添加不同量的所测三特异性蛋白质。将肿瘤细胞系工程化为表达萤光素酶蛋白质。48小时后，为了对剩余的存活肿瘤细胞进行定量，使用Steady-
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Luminescent Assay(Promega)。
在本研究中，将条件培养基的滴定添加到TDCC测定(T细胞依赖性细胞毒性测定)中，以评估抗MSLN单结构域抗体是否能够在T细胞与表达间皮素的卵巢癌细胞系OVCAR8之间形成突触。48小时后测量OVCAR8细胞的活力。可以看出，所述三特异性蛋白质介导了T细胞杀伤。图1显示了用所测三特异性蛋白质2A2和2A4进行的示例细胞活力测定。以下表1列出了几种其它所测三特异性蛋白质的TDCC活性的EC50。
表1：含有根据本公开的MSLN结合蛋白质的MSLN靶向三特异性蛋白质的TDCC活性
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Figure BDA0002364167790000451
此外，观察到所测靶向MSLN的三特异性蛋白质的TDCC活性对表达间皮素的细胞是特异性的，因为所测三特异性蛋白质不介导T细胞对不表达间皮素的LNCaP细胞的杀伤。特别是，三特异性蛋白质2A2、11F3、9H2、5C2、10B3、2F4、5F2、7F1、2F4、5H1、3B4和7H2对LnCaP细胞不显示任何TDCC活性。
实施例3：本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体的ADCC活性
该研究旨在确定与作为本公开的示例性抗体的没有序列修饰或置换的比较美洲驼抗MSLN抗体相比，本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体介导ADCC的能力。这两种抗体均被表达为包含另外的免疫球蛋白结构域的多结构域蛋白质。
材料
对供体进行白细胞分离术，并由细胞纯化小组使用Milteni AutoMacs Pro阴性选择系统从白细胞包(leukopack)中分离NK细胞。将NK细胞在摇床上于4℃保持过夜，然后洗涤，计数，并以4×106个细胞/mL重悬于完全RPMI中以用于ADCC测定。
靶标：根据间皮素表达选择肿瘤细胞靶标。洗涤靶标并计数。将6×106个靶标重悬于完全RPMI中，并以10μM钙黄绿素(Sigma#C1359-00UL CALCEIN AM 4 MM IN ANHYDROUSDMSO)的最终浓度在37℃、5％CO2下标记40分钟。将细胞在PBS中洗涤两次，重悬于完全RPMI中，并在37℃、5％CO2下孵育2小时。标记后，将靶细胞洗涤，重新计数，并以0.2×106个细胞/mL的浓度重悬于完全RPMI中，以用于ADCC测定。
方法
ADCC测定在96孔圆底组织培养板(Corning 3799)中进行。通过在1000μL含10％FCS的完全RPMI中包含10μL(1:10稀释)，将测试蛋白质从20μg/mL滴定至0.0002μg/mL。加入50μL钙黄绿素标记的靶标以包含10,000个细胞。将靶细胞和各种浓度的含有示例性抗MSLN单结构域抗体或比较抗体的多结构域蛋白质在4℃下孵育40分钟，然后加入NK细胞效应物50μL以包容100,000个细胞(10:1E:T比)。将培养物在37℃下孵育4小时，然后取出上清液，并通过在Wallac Victor II 1420 Multilable HTS计数器上测量485-535nm处的荧光来测定钙黄绿素的释放。通过用Igepal 630去污剂(每孔3μL)裂解六个孔的标记靶标来确定100％裂解值，并且通过测量来自单独靶标的上清液中的荧光来确定自发裂解值。
统计分析
特异性裂解百分比(％)被定义为(样品荧光)-(自发裂解荧光)/(100％裂解-自发裂解荧光)。自发裂解通过仅包含靶标的孔来确定，而100％裂解通过用IGEPAL CA 630去污剂裂解靶标的孔来确定。将原始数据输入嵌有公式的Excel电子表格中，以计算％特异性裂解，并将所得值转移到图形程序(GraphPad Prism)，在此程序中将数据转换成曲线拟合图。随后在GraphPad中进行后续分析(线性回归计算)以生成EC50值。
结果与讨论
与含有比较抗MSLN抗体的多结构域蛋白质孵育的孔中的效应NK细胞不能介导对钙黄绿素标记的靶细胞的杀伤，而通过特异性裂解活性(％特异性裂解)所测量的，具有含有本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体的多结构域蛋白质的孔中的效应物能够介导抗体依赖性细胞毒性。
结论
与没有序列置换、修饰或人源化的比较美洲驼抗MSLN单结构域抗体相比，本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体介导对表达间皮素的靶细胞的显著更高水平的杀伤。
实施例4：本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体的CDC活性
为了评价根据本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体对癌细胞的抗肿瘤活性，在人血清作为补体来源的存在下，测试了在A431/H9和NCI-H226细胞模型中的细胞毒性活性。示例性抗MSLN单结构域抗体被表达为含有另外的免疫球蛋白结构域的多结构域蛋白质。可见含有本公开的示例性抗MSLN单结构域抗体的多结构域蛋白质通过杀死约40％的A431/H9和超过30％的NCI-H226间皮瘤细胞系而发挥有效的CDC活性，并且对间皮素阴性A431细胞系没有显示出活性。不具有如本公开的示例性抗体的序列修饰或置换的比较美洲驼抗MSLN抗体在相同浓度下不显示活性。
为了分析补体在示例性抗MSLN单结构域抗体的抗肿瘤活性中的作用，按照用于表征利妥昔单抗、奥法木单抗和其它抗CD20治疗性mAb的成熟方案(Pawluczkowycz等人,JImmunol 183:749-758,2009；Li等人,Cancer Res 68:2400-2408,2008)，采用流式细胞术确定C1q与同抗间皮素人mAb反应的癌细胞的结合。先前已经证明，与MORAb-009一样，对细胞表面间皮素区域I(远离细胞表面)具有特异性的HN1人mAb对表达间皮素的癌细胞不表现出任何CDC活性(Ho等人,Int J Cancer 128:2020-2030,2011)。
然而，可以看出，在示例性抗MSLN单结构域抗体的存在下，C1q补体与A431/H9或NCI-H226细胞结合。相反，在比较美洲驼抗MSLN抗体的存在下未发现C1q结合。而且，C1q与癌细胞的结合以剂量响应方式与示例性抗MSLN单结构域抗体的细胞结合相关。这些结果证明，相对于比较美洲驼抗MSLN抗体，示例性抗MSLN单结构域抗体表现出改善的CDC活性。
虽然本文已经显示并描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域技术人员显而易见的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现将想到许多变化、改变和替换。应当理解，本文所述的本发明实施方案的各种替代方案均可用于实施本发明。以下权利要求旨在限定本发明的范围，并由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
实施例5：含有根据本公开的MSLN结合域(MH6T)的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白 质引导T细胞杀死表达MSLN的卵巢癌细胞
使用人T细胞依赖性细胞毒性(TDCC)测定来测量T细胞接合物(包括三特异性分子)引导T细胞杀死肿瘤细胞的能力(Nazarian等人.2015.J Biomol Screen.20:519-27)。该测定中使用的Caov3细胞被工程化为表达萤光素酶。将来自5名不同健康供体(供体02、供体86、供体41、供体81和供体34)的T细胞和目标癌细胞Caov3混合在一起，加入不同量的含有MSLN结合域(MH6T)的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(SEQ ID NO:58)，并将混合物在37℃下孵育48小时。Caov3细胞和T细胞也与靶向GFP的对照三特异性分子GFP TriTAC(SEQ ID NO:59)在37℃下孵育48小时。48小时后，通过发光测定对剩余的活肿瘤细胞进行定量。
观察到含有MSLN结合域(MH6T)的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质能够引导来自所有5名健康供体的T细胞杀死目标癌细胞Caov3(如图2所示)，而对照GFP TriTAC分子则不能引导来自这5名健康供体中任一名的T细胞杀死Caov3细胞(也显示在图2中)。
使用与上述相同的方案，使用OVCAR3细胞进行进一步的测定。观察到，含有MSLN结合域(MH6T)的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质能够引导来自所有5名健康供体的T细胞杀死目标癌细胞OVCAR3(如图3所示)，而对照GFP TriTAC分子则不能引导来自这5名健康供体中任一名的T细胞杀死OVCAR3细胞(也显示在图3中)。
以下表II中列出了关于杀死表达MSLN的靶细胞的EC50值。
表II：靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)引导来自5名不同健康供体的T细胞杀死表达MSLN的卵巢癌细胞系的EC50值。原始数据的代表图示在图2和图3中提供。
Figure BDA0002364167790000481
Figure BDA0002364167790000491
实施例6：含有根据本公开的MSLN结合域(MH6T)的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白 质引导T细胞杀死表达MSLN的细胞，但不引导杀死不表达MSLN的细胞
在该试验中，将来自健康供体的T细胞与表达MSLN的目标癌细胞(Caov3细胞、Caov4细胞、OVCAR3细胞和OVCAR8细胞)或不表达MSLN的目标癌细胞(NCI-H510A细胞、MDAPCa2b细胞)一起孵育。本研究中使用的每个靶细胞均被工程化为表达萤光素酶。将不同量的含有MH6T结构域的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(SEQ ID NO:58)添加到上面列出的T细胞与目标癌细胞的混合物中。将混合物在37℃下孵育48小时。48小时后，使用发光测定对剩余的活目标癌细胞进行定量。
观察到含有MH6T结构域的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质能够引导T细胞杀死表达MSLN的目标癌细胞(即，Caov3、Caov4、OVCAR3和OVCAR8细胞，如图4所示)。然而，含有MH6T结构域的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质不能引导T细胞杀死不表达MSLN的目标癌细胞(MDAPCa2b和NCI-H510A细胞)，也如图4所示。
以下表III中列出了关于杀死表达MSLN的癌细胞的EC50值。
表III：靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)引导T细胞杀死表达MSLN的癌细胞系的EC50值。
Figure BDA0002364167790000492
Figure BDA0002364167790000501
实施例7：含有根据本公开的MSLN结合域(MH6T)的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白 质引导来自食蟹猴的T细胞杀死人卵巢癌细胞系
在该试验中，将来自食蟹猴供体的外周血单个核细胞(PBMC；T细胞是PBMC的组成部分)与表达MSLN的目标癌细胞(CaOV3细胞和OVCAR3细胞)混合，将不同量的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域，SEQ ID NO:58)加入混合物中，并在37℃下孵育48小时。平行地，如上所述，将食蟹猴PBMC与表达MSLN的细胞的混合物与不同量的靶向GFP的对照TriTAC分子GFP TriTAC(SEQ ID NO:59)在37℃下孵育48小时。该试验中使用的目标癌细胞被工程为表达萤光素酶。48小时后，使用发光测定对剩余的活靶细胞进行定量。
如图5所示，观察到靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)能够有效地引导食蟹猕猴PBMC杀死表达MSLN的细胞(即Caov3和OVCAR)，而对照GFP TriTAC分子却无法引导食蟹猕猴PBMC杀死所述细胞(也显示在图5中)。靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的EC50值对于OVCAR3细胞为2.9pM，而对于Caov3细胞为3.0pM，与使用人T细胞观察到的EC50值没有显著差异，如表II中所示。
实施例8：在存在或不存在人血清白蛋白的情况下，靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白 质(含有MH6T结构域)引导T细胞杀死表达MSLN的NCI-H2052间皮瘤细胞
本研究的目的是评估靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域；SEQID NO:58)与人血清白蛋白(HSA)的结合是否影响该蛋白质引导T细胞杀死表达MSLN的细胞的能力。本研究中使用的NCI-H2052间皮瘤细胞被工程化为表达萤光素酶。将来自健康供体的T细胞和表达MSLN的细胞(NCI-H2052)混合，并将不同量的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)添加至该混合物中。在存在或不存在HSA的情况下，将混合物在37℃下孵育48小时。还在存在或不存在HSA的情况下，将NCI-H2052细胞与T细胞的混合物与靶向GFP的对照三特异性分子GFP TriTAC(SEQ ID NO:59)在37℃下孵育48小时。48小时后，使用发光测定对剩余的活靶细胞进行定量。
观察到在存在或不存在HSA的情况下，靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)能够有效引导T细胞杀死NCI-H2052细胞(如图6所示)，而对照GFP TriTAC分子则无法实现(同样如图6所示)。还观察到在HSA的存在下，细胞杀伤的EC50值增加了约3.2倍(如表IV中所示)
在存在或不存在15mg/ml HSA的情况下，采用另外的表达MSLN的细胞系，使用靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)进行进一步的TDCC测定，其EC50值在表IV中呈现。
表IV：在存在或不存在HSA的情况下，靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)引导T细胞杀死表达MSLN的癌细胞的EC50值
Figure BDA0002364167790000511
Figure BDA0002364167790000521
实施例9：在靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)和表达MSLN的 Caov4细胞的存在下，来自4名不同供体的T细胞分泌TNF-α
在该试验中使用的目标癌细胞CaOv4被工程化为表达萤光素酶。在该试验中，将来自4名不同健康供体(供体02、供体86、供体35和供体81)的T细胞和Caov4细胞混合在一起，添加不同量的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域；SEQ ID NO:58)，并将混合物在37℃下孵育48小时。还将Caov4细胞和T细胞与靶向GFP的对照三特异性分子GFPTriTAC(SEQ ID NO:59)在37℃下孵育48小时。在48小时时收集来自TDCC测定的条件培养基，之后使用发光测定来测量目标癌细胞的活力。使用AlphaLISA测定试剂盒(PerkinElmer)测定条件培养基中TNF-α的浓度。
观察到在Caov4细胞和靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的存在下，TNF-α分泌到培养基中，而在Caov4细胞和对照GFP TriTAC分子的存在下则不分泌，如图7所示。
此外，在靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的存在下，对于来自所有4名健康供体的T细胞观察到有效杀伤，但在对照GFP TriTAC分子的存在下未观察到有效杀伤。还针对其它表达MSLN的细胞系(Caov3细胞、OVCAR3细胞和OVCAR8细胞)建立了TDCC测定，并观察到类似的TNF-α表达。靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)诱导TNF-α表达的EC50值在表V中呈现。但是，当使用不表达MSLN的癌细胞(NCI-H510A细胞或MDAPCa2b细胞)进行测定时，没有观察到靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)引导TNF-α分泌(数据未示出)。因此，该研究表明，在表达MSLN的目标癌细胞的存在下，靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)能够激活T细胞。
表V：靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)诱导来自4名不同T细胞供体的T细胞和4种不同的表达MSLN的细胞系表达TNF-α的EC50值
Figure BDA0002364167790000531
实施例10：在靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)和表达MSLN的 OVCAR8细胞的存在下，来自4名不同供体的T细胞上CD69表达的活化
该试验中使用的OVCAR8细胞被工程化为表达萤光素酶。在该试验中，将来自4名不同健康供体(供体02、供体86、供体35和供体81)的T细胞和OVCAR8细胞混合在一起，添加不同量的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域；SEQ ID NO:58)，并将混合物在37℃下孵育48小时。OVCAR8细胞和T细胞也与靶向GFP的对照三特异性分子GFP TriTAC(SEQ ID NO:59)在37℃下孵育48小时。48小时后，收集T细胞，并通过流式细胞术测量T细胞上的CD69表达。
如图8所示，在OVCAR8细胞和靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的存在下，在来自所有4名健康供体的T细胞上检测到CD69表达，但在阴性对照GFPTriTAC和OVCAR8细胞的存在下未检测到CD69表达。还针对其它表达MSLN的细胞(Caov3细胞、OVCAR3细胞和OVCAR8细胞)建立了TDCC测定，并观察到类似的CD69表达。表VI中呈现了靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)诱导Caov3细胞和OVCAR8细胞中CD69活化的EC50值。
表VI：在靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)和表达MSLN的OVCAR8细胞或Caov3细胞的存在下，来自4名不同供体的T细胞上CD69表达活化的EC50值。
Figure BDA0002364167790000541
当使用不表达MSLN的癌细胞(NCI-H510A细胞或MDAPCa2b细胞)进行该试验时，未观察到靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)诱导的CD69活化(数据未示出)。因此，该研究表明，在表达MSLN的目标癌细胞的存在下，靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)能够激活T细胞。
实施例11：靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)与表达MSLN/不表 达MSLN的细胞系的结合的测量
对于本研究，将某些表达MSLN的目标癌细胞(Caov3细胞、CaOV4细胞、OVCAR3细胞和OVCAR8细胞)和某些不表达MSLN的癌细胞(MDAPCa2b细胞和NCI-H510A细胞)与靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域；SEQ ID NO:58)或对照GFP TriTAC分子(SEQID NO:59)一起孵育。孵育后，洗涤细胞以除去未结合的MH6T或GFP TriTAC分子，并进一步与同Alexa Fluor 647缀合的第二抗体一起孵育，该第二抗体能够识别TriTAC分子中的抗白蛋白结构域。通过流式细胞术测量靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)或GFP TriTAC与表达MSLN或不表达MSLN的细胞的结合。
观察到靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)与表达MSLN的细胞系(Caov3、Caov4、OVCAR3和OVCAR8)的牢固结合，如图9A所示(左上图显示含有MH6T结构域的靶向MSLN的三特异性靶抗原结合蛋白质与Caov3细胞的结合；右上图显示含有MH6T结构域的靶向MSLN的三特异性靶抗原结合蛋白质与Caov4细胞的结合；左下图显示含有MH6T结构域的靶向MSLN的三特异性靶抗原结合蛋白质与OVCAR3细胞的结合；右下图显示含有MH6T结构域的靶向MSLN的三特异性靶抗原结合蛋白质与OVCAR8细胞的结合)；而如图9B所示，在不表达MSLN的细胞系中未观察到结合(左图显示靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)无法与MDAPCa2b细胞结合，右图显示靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)无法与NCI-H510A细胞结合)。此外，当将任何细胞类型与GFPTriTAC分子一起孵育时，均未观察到结合，如图9A和图9B所示。
实施例12：靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)与来自供体的T细 胞的结合的测量
对于本研究，将来自4名健康供体的T细胞与靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域；SEQ ID NO:58)或缓冲液(作为阴性对照)一起孵育。孵育后，洗涤细胞以去除未结合的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)，并与Alexa Fluor647缀合的第二抗体进一步孵育，该抗体能够识别靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)中的抗白蛋白结构域。通过流式细胞术测量结合。
在用靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)处理的来自所有四名供体的T细胞中观察到牢固结合，如图10所示(左上图显示靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)与来自供体2的T细胞的结合；右上图显示靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)与来自供体35的T细胞的结合；左下图显示靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)与来自供体41的T细胞的结合；右下图显示靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)与来自供体81的T细胞的结合)。
实施例13：用靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)处理的小鼠中肿 瘤生长的抑制
对于该研究，将107个NCI-H292细胞和107个人PBMC共同皮下植入两组NCG小鼠中(每组8只小鼠)。5天后，每天以0.25mg/kg的剂量向一组小鼠注射靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域；SEQ ID NO:58)，持续10天(第5-14天)；而另一组小鼠则注射媒介物对照。每隔几天测量一次肿瘤体积，并在第36天终止研究。与注射媒介物对照的小鼠相比，在注射靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的小鼠中观察到显著的肿瘤生长抑制，如图11所示。
实施例12：靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)在食蟹猴中的药代 动力学
对于该研究，向两只食蟹猴静脉内注射10mg/kg剂量的靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域；SEQ ID NO:58)，并在注射后的不同时间点收集血清样品。在电化学发光测定中，使用识别靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的抗独特型抗体测量血清中靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的量。图12显示了在不同时间点，靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的血清水平的图。然后使用这些数据计算靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的药代动力学性质，如表VII中所示。
表VII：靶向MSLN的三特异性抗原结合蛋白质(含有MH6T结构域)的药代动力学参数
Figure BDA0002364167790000561
Figure BDA0002364167790000571
序列表
Figure BDA0002364167790000572
Figure BDA0002364167790000581
Figure BDA0002364167790000591
Figure BDA0002364167790000601
Figure BDA0002364167790000611
Figure BDA0002364167790000621
本公开的各种示例性MSLN结合域的CDR1序列
Figure BDA0002364167790000622
Figure BDA0002364167790000631
本公开的各种示例性MSLN结合域的CDR2序列
Figure BDA0002364167790000632
本公开的各种示例性MSLN结合域的CDR3序列
序列ID No. 示例性MSLN结合域 CDR3序列
141 9B1 GPY
142 9F3 GRFKGDYAQRSGMDY
143 7H2 QRSGVRAF
144 3B4 DRVEGTSGGPQLRDY
145 4A2 RTYTRHDY
146 12D1 GGGPLGSRWLRGRH
147 3G1 RRTYLPRRFGS
148 2A1 APGAARNY
149 6F3 APGAARNV
150 1H2 GGSLSRSS
151 3F2 VRGWLDERPGPGPIVY
152 12C2 NRGSYEY
153 2D1 IADWRGY
154 6H2 RRRGWGRTLEY
155 5D2 SDFRRGTQY
156 7C4 QRWGRGPGTT
157 5F2 DDSGIARDY
158 2C2 YRRFGINKNY
159 5G2 LRTYYLNDPVVFS
160 9H2 YIPLRGTLHDY
161 5D4 RKWGRNY
162 2A4 KRREWAKDFEY
163 7F1 IADWRGY
164 5C2 YIPYGGTLHDF
165 2F4 IADWRGY
166 2A2 DTIGTARDY
167 11F3 RTTSYPVDF
168 10B3 YIPYGGTLHDF
169 MH1 ASY
170 MH2 ASY
171 MH3 YIPYGGTLHDF
172 MH4 YIPYGGTLHDF
173 MH5 YIPYGGTLHDF
174 MH6 DTIGTARDY
175 MH7 DTIGTARDY
176 MH8 DTIGTARDY
177 MH9 RTTSYPVDF
178 MH10 RTTSYPVDF
179 MH11 RTTSYPVDF
各种示例性MSLN结合域的框架区1(f1)序列
Figure BDA0002364167790000651
Figure BDA0002364167790000661
各种示例性MSLN结合域的框架区2(f2)序列
Figure BDA0002364167790000662
Figure BDA0002364167790000671
各种示例性MSLN结合域的框架区3(f3)序列
Figure BDA0002364167790000672
Figure BDA0002364167790000681
各种示例性MSLN结合域的框架区4(f4)序列
Figure BDA0002364167790000682
Figure BDA0002364167790000691
序列表
<110> 哈普恩治疗公司
<120> 间皮素结合蛋白质
<130> 47517-719.601
<140>
<141>
<150> 62/657,417
<151> 2018-04-13
<150> 62/505,719
<151> 2017-05-12
<160> 336
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Val Arg
20 25 30
Gly Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Gly Asn Asn Arg Ala Leu Val Ala
35 40 45
Thr Met Asn Pro Asp Gly Phe Pro Asn Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Trp Asp Ile Ala Glu Asn Thr Val Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Asn Ser Glu Asp Thr Thr Val Tyr Tyr Cys Asn Ser
85 90 95
Gly Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 2
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Pro Ser Ile Glu
20 25 30
Gln Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Leu Thr Ser Gly Gly Arg Ala Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Asn Val Arg Asn Met Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Ala Gly Arg Phe Lys Gly Asp Tyr Ala Gln Arg Ser Gly Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser Gly Thr Thr Tyr Thr Phe Asp
20 25 30
Leu Met Ser Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Thr Val Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Arg
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Glu Asn Gly Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu
85 90 95
Gly Gln Arg Ser Gly Val Arg Ala Phe Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Asn
20 25 30
Asn Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Thr Arg Gly Gly Tyr Ala Ile Tyr Leu Asp Ala Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ala Ile Tyr Leu
65 70 75 80
Glu Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Val Cys Asn
85 90 95
Ala Asp Arg Val Glu Gly Thr Ser Gly Gly Pro Gln Leu Arg Asp Tyr
100 105 110
Phe Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 5
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Gly Ile Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Arg Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val Ser Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Thr Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Asn
85 90 95
Ala Arg Thr Tyr Thr Arg His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 6
Gln Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ile Ser Ala Phe Arg Leu Met
20 25 30
Ser Val Arg Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Ser Lys Gln Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Asp Gln Leu Gly Arg Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ala Ile Ser Lys Asp Ser Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Met Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Ala Gly Gly Gly Pro Leu Gly Ser Arg Trp Leu Arg Gly Arg His Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 7
Gln Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Pro Phe Ser Ile Asn
20 25 30
Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Phe Thr Tyr Thr Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Ala Arg Arg Thr Tyr Leu Pro Arg Arg Phe Gly Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 8
Gln Val Gln Pro Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Ser Asp Phe Thr Glu Asp
20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val
35 40 45
Ala Phe Val Ser Lys Asp Gly Lys Arg Ile Leu Tyr Leu Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Asp Lys Lys Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ser Ala Pro Gly Ala Ala Arg Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 9
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 9
Gln Val Gln Pro Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Ser Asp Phe Thr Glu Asp
20 25 30
Ala Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val
35 40 45
Ala Phe Val Ser Lys Asp Gly Lys Arg Ile Leu Tyr Leu Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Tyr Lys Lys Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ser Ala Pro Gly Ala Ala Arg Asn Val Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 11
Gln Val Gln Ile Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Leu Thr Tyr Ser Ile Val
20 25 30
Ala Val Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Met Val
35 40 45
Ala Asp Ile Ser Pro Val Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Glu Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His
85 90 95
Ile Val Arg Gly Trp Leu Asp Glu Arg Pro Gly Pro Gly Pro Ile Val
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Phe Gly Val Tyr
20 25 30
Gly Met Glu Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser His Thr Ser Thr Gly Tyr Val Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95
Ala Asn Arg Gly Ser Tyr Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 13
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Thr Thr Ser Ser Ile Asn Ser
20 25 30
Met Ser Trp Tyr Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gln Arg Glu Pro Val Ala
35 40 45
Val Ile Thr Asp Arg Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Thr Cys His Val
85 90 95
Ile Ala Asp Trp Arg Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 14
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Leu Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gln Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Arg Ser Gly Gly Thr Thr Arg Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Ala Asn Thr Phe Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Val Arg Arg Arg Gly Trp Gly Arg Thr Leu Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 15
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gly Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Pro Asn
20 25 30
Ala Met Ile Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Pro Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Ser Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Gly Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Ile Val Lys Asn Thr Met Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Tyr Ser Asp Phe Arg Arg Gly Thr Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 16
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Pro Ser Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ala Thr Ser Ala Ile Thr
20 25 30
Asn Leu Gly Trp Tyr Arg Arg Ala Pro Gly Gln Val Arg Glu Met Val
35 40 45
Ala Arg Ile Ser Val Arg Glu Asp Lys Glu Asp Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Gln Asn Leu Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asn Leu Gln Pro His Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Ala Gln Arg Trp Gly Arg Gly Pro Gly Thr Thr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 17
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Arg Ile Arg
20 25 30
Val Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Asp Ser Gly Ile Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Glu
1 5 10 15
Ser Arg Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Asp Thr Ser Lys Phe Lys
20 25 30
Ala Val Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gln Arg Glu Leu Leu
35 40 45
Ala Trp Ile Asn Asn Ser Gly Val Gly Asn Thr Ala Glu Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Arg Leu Thr Pro Glu Asp Thr Asp Val Tyr Tyr Cys Arg
85 90 95
Phe Tyr Arg Arg Phe Gly Ile Asn Lys Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 19
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Gly Asn Lys
20 25 30
Pro Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Ala Leu Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Glu Ser Leu Val Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Ala Leu Arg Thr Tyr Tyr Leu Asn Asp Pro Val Val Phe Ser Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 20
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn
20 25 30
Thr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ser Val Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ile Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Tyr Ile Pro Leu Arg Gly Thr Leu His Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 21
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Asp Arg Ile Thr
20 25 30
Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asn Arg Gly Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Ala Arg Lys Trp Gly Arg Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Arg Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Thr Ile Gly Ile Asn
20 25 30
Asp Met Ala Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Thr Ile Thr Lys Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Asp
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Lys Arg Arg Glu Trp Ala Lys Asp Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 23
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Ala Ile Gly Ser Ile Asn Ser
20 25 30
Met Ser Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Pro Val Ala
35 40 45
Val Ile Thr Asp Arg Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Thr Cys His Val
85 90 95
Ile Ala Asp Trp Arg Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 24
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn
20 25 30
Thr Met Tyr Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Arg Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ser Val Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ile Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Arg Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Thr Ser Thr Thr Phe Ser Ile Asn Ser
20 25 30
Met Ser Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gln Arg Glu Pro Val Ala
35 40 45
Val Ile Thr Asn Arg Gly Thr Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Val Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asp Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Thr Cys His Val
85 90 95
Ile Ala Asp Trp Arg Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 26
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp
20 25 30
Thr Met Tyr Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Val Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Gln
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn
20 25 30
Thr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ser Val Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ile Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Asp Trp Ser Ala Asn
20 25 30
Phe Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Arg Ile Ser Gly Arg Gly Val Val Asp Tyr Val Glu Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Val Ala Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 30
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Asp Trp Ser Ala Asn
20 25 30
Phe Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Arg Ile Ser Gly Arg Gly Val Val Asp Tyr Val Glu Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Val Ala Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 31
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Asp Trp Ser Ala Asn
20 25 30
Phe Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Ser Gly Arg Gly Val Val Asp Tyr Val Glu Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Val Ala Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 32
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn
20 25 30
Thr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 33
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn
20 25 30
Thr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn
20 25 30
Thr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 35
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly
115
<210> 37
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly
115
<210> 38
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 38
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp
20 25 30
Thr Met Tyr Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Val Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Gly Gly
115
<210> 39
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp
20 25 30
Thr Met Tyr Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Val Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp
20 25 30
Thr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Val Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 41
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
1 5
<210> 42
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 42
Leu Ser Cys
1
<210> 43
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 43
Gly Arg Phe
1
<210> 44
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 44
Val Thr Val Ser Ser
1 5
<210> 45
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 45
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 46
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 46
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
1 5 10
<210> 47
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 47
Ala Ser Gly
1
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 48
Arg Gln Ala Pro Gly
1 5
<210> 49
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 49
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
1 5 10 15
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
20 25 30
Cys
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 50
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 51
Gly Arg Thr Phe Ser Val Arg Gly Met Ala
1 5 10
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 52
Ile Asn Ser Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Gly
1 5 10
<210> 53
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 53
Asn Ala Gly Gly Gly Pro Leu Gly Ser Arg
1 5 10
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 54
Gly Gly Asp Trp Ser Ala Asn Phe Met Tyr
1 5 10
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 55
Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg
1 5 10
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 56
Asn Ala Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp
1 5 10
<210> 57
<211> 630
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 57
Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro
1 5 10 15
Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Val Gln
20 25 30
Pro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gln Glu Ala Ala Pro Leu
35 40 45
Asp Gly Val Leu Ala Asn Pro Pro Asn Ile Ser Ser Leu Ser Pro Arg
50 55 60
Gln Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala Glu Val Ser Gly Leu Ser Thr Glu
65 70 75 80
Arg Val Arg Glu Leu Ala Val Ala Leu Ala Gln Lys Asn Val Lys Leu
85 90 95
Ser Thr Glu Gln Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro
100 105 110
Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro
115 120 125
Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gln Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg Ile
130 135 140
Thr Lys Ala Asn Val Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gln
145 150 155 160
Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Val Arg Gly Ser Leu
165 170 175
Leu Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu
180 185 190
Pro Gly Arg Phe Val Ala Glu Ser Ala Glu Val Leu Leu Pro Arg Leu
195 200 205
Val Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gln Asp Gln Gln Glu Ala Ala Arg
210 215 220
Ala Ala Leu Gln Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp
225 230 235 240
Ser Val Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Val Leu Gly
245 250 255
Gln Pro Ile Ile Arg Ser Ile Pro Gln Gly Ile Val Ala Ala Trp Arg
260 265 270
Gln Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gln Pro Glu Arg Thr Ile
275 280 285
Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser
290 295 300
Gly Lys Lys Ala Arg Glu Ile Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys
305 310 315 320
Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gln Met
325 330 335
Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu
340 345 350
Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val
355 360 365
Ile Gln His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile
370 375 380
Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu
385 390 395 400
Val Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gln Ala Pro Arg Arg Pro Leu
405 410 415
Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp Arg Phe Val Lys Gly Arg Gly Gln
420 425 430
Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr
435 440 445
Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser Ser
450 455 460
Ile Trp Ala Val Arg Pro Gln Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg Gln
465 470 475 480
Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met Asn
485 490 495
Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile Gln Ser Phe Leu Gly Gly Ala Pro
500 505 510
Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp Leu
515 520 525
Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr Val
530 535 540
Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys Ala
545 550 555 560
Glu Glu Arg His Arg Pro Val Arg Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg Gln
565 570 575
Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn
580 585 590
Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu Ser Met Gln Glu Ala Leu Ser Gly Thr
595 600 605
Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro Val Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu
610 615 620
Leu Ala Ser Thr Leu Ala
625 630
<210> 58
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Val Asn Arg Tyr
20 25 30
Ser Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Met Ser Ser Ala Gly Asp Arg Ser Ser Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ala Arg Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Asn Val Asn Val Gly Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Phe Gly Met Ser Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser
165 170 175
Gly Ser Gly Arg Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile Gly Gly
210 215 220
Ser Leu Ser Val Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
245 250 255
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala
260 265 270
Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala
275 280 285
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn
290 295 300
Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Gln Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile
305 310 315 320
Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu
325 330 335
Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Ala Asn Phe
340 345 350
Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
355 360 365
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val
385 390 395 400
Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Ala Ser Ser Thr Gly Ala
405 410 415
Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln
420 425 430
Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Val Pro Gly Thr
435 440 445
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr
450 455 460
Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Thr Leu
465 470 475 480
Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val
485 490 495
Leu His His His His His His
500
<210> 60
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 61
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg
20 25 30
Ala Met Arg Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
85 90 95
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 63
Gly Arg Thr Phe Ser Val Arg Gly Met Ala
1 5 10
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 64
Gly Ser Ile Pro Ser Ile Glu Gln Met Gly
1 5 10
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 65
Gly Thr Thr Tyr Thr Phe Asp Leu Met Ser
1 5 10
<210> 66
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 66
Gly Ser Thr Ser Asn Ile Asn Asn Met Arg
1 5 10
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 67
Gly Ser Thr Phe Gly Ile Asn Ala Met Gly
1 5 10
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 68
Ile Ser Ala Phe Arg Leu Met Ser Val Arg
1 5 10
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 69
Gly Arg Pro Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly
1 5 10
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 70
Gly Ser Asp Phe Thr Glu Asp Ala Met Ala
1 5 10
<210> 71
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 71
Gly Ser Asp Phe Thr Glu Asp Ala Met Ala
1 5 10
<210> 72
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 72
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly Met Ser
1 5 10
<210> 73
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 73
Gly Leu Thr Tyr Ser Ile Val Ala Val Gly
1 5 10
<210> 74
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 74
Gly Leu Thr Phe Gly Val Tyr Gly Met Glu
1 5 10
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 75
Thr Thr Ser Ser Ile Asn Ser Met Ser
1 5
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 76
Gly Arg Thr Leu Ser Arg Tyr Ala Met Gly
1 5 10
<210> 77
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 77
Gly Ser Ile Phe Ser Pro Asn Ala Met Ile
1 5 10
<210> 78
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 78
Gly Ala Thr Ser Ala Ile Thr Asn Leu Gly
1 5 10
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 79
Gly Ser Thr Phe Arg Ile Arg Val Met Arg
1 5 10
<210> 80
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 80
Gly Asp Thr Ser Lys Phe Lys Ala Val Gly
1 5 10
<210> 81
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 81
Gly Ser Thr Phe Gly Asn Lys Pro Met Gly
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 82
Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 83
Gly Arg Thr Asp Arg Ile Thr Thr Met Gly
1 5 10
<210> 84
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 84
Gly Arg Thr Ile Gly Ile Asn Asp Met Ala
1 5 10
<210> 85
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 85
Ala Ile Gly Ser Ile Asn Ser Met Ser
1 5
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 86
Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 87
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 87
Thr Thr Phe Ser Ile Asn Ser Met Ser
1 5
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 88
Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg Ala Met Arg
1 5 10
<210> 89
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 89
Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 90
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 90
Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 91
Gly Gly Asp Trp Ser Ala Asn Phe Met Tyr
1 5 10
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 92
Gly Gly Asp Trp Ser Ala Asn Phe Met Tyr
1 5 10
<210> 93
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 93
Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 94
Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 95
Gly Ser Thr Ser Ser Ile Asn Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 96
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 96
Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg Ala Met Arg
1 5 10
<210> 97
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 97
Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg Ala Met Arg
1 5 10
<210> 98
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 98
Gly Ser Thr Phe Ser Ile Arg Ala Met Arg
1 5 10
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 99
Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 100
Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 101
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 101
Gly Arg Thr Ser Thr Ile Asp Thr Met Tyr
1 5 10
<210> 102
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 102
Thr Met Asn Pro Asp Gly Phe Pro Asn Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 103
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 103
Ala Leu Thr Ser Gly Gly Arg Ala Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 104
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 104
Ser Ile Ser Ser Asp Gly Arg Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Arg Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 105
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 105
Val Ile Thr Arg Gly Gly Tyr Ala Ile Tyr Leu Asp Ala Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 106
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 106
Val Ile Ser Arg Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 107
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 107
Thr Ile Asp Gln Leu Gly Arg Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Ala
<210> 108
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 108
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Phe Thr Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 109
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 109
Phe Val Ser Lys Asp Gly Lys Arg Ile Leu Tyr Leu Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly Arg Phe Thr
20
<210> 110
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 110
Phe Val Ser Lys Asp Gly Lys Arg Ile Leu Tyr Leu Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly Arg Phe Thr
20
<210> 111
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 111
Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly Arg Phe Thr
20
<210> 112
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 112
Asp Ile Ser Pro Val Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 113
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 113
Ser His Thr Ser Thr Gly Tyr Val Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 114
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 114
Val Ile Thr Asp Arg Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 115
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 115
Ala Ile Ser Arg Ser Gly Gly Thr Thr Arg Tyr Ser Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly Arg Phe Thr
20
<210> 116
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 116
Ser Ile Asn Ser Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Gly Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 117
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 117
Arg Ile Ser Val Arg Glu Asp Lys Glu Asp Tyr Glu Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly Arg Phe Thr
20
<210> 118
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 118
Val Ile Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 119
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 119
Trp Ile Asn Asn Ser Gly Val Gly Asn Thr Ala Glu Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 120
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 120
Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Ala Leu Val Lys
1 5 10 15
Gly Arg Phe Thr
20
<210> 121
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 121
Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Ser
<210> 122
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 122
Thr Ile Ser Asn Arg Gly Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 123
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 123
Thr Ile Thr Lys Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val Asp Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 124
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 124
Val Ile Thr Asp Arg Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 125
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 125
Thr Ile Asn Arg Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Ser
<210> 126
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 126
Val Ile Thr Asn Arg Gly Thr Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 127
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 127
Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly Arg
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 128
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 128
Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 129
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 129
Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Ser
<210> 130
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 130
Arg Ile Ser Gly Arg Gly Val Val Asp Tyr Val Glu Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 131
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 131
Arg Ile Ser Gly Arg Gly Val Val Asp Tyr Val Glu Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 132
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 132
Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 133
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 133
Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 134
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 134
Phe Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Val Arg Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 135
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 135
Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly Arg
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 136
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 136
Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly Arg
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 137
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 137
Val Ile Tyr Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ala Val Lys Gly Arg
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 138
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 138
Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 139
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 139
Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 140
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 140
Tyr Val Thr Ser Arg Gly Thr Ser Asn Val Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Arg Phe Thr
<210> 141
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 141
Gly Pro Tyr
1
<210> 142
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 142
Gly Arg Phe Lys Gly Asp Tyr Ala Gln Arg Ser Gly Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 143
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 143
Gln Arg Ser Gly Val Arg Ala Phe
1 5
<210> 144
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 144
Asp Arg Val Glu Gly Thr Ser Gly Gly Pro Gln Leu Arg Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 145
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 145
Arg Thr Tyr Thr Arg His Asp Tyr
1 5
<210> 146
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 146
Gly Gly Gly Pro Leu Gly Ser Arg Trp Leu Arg Gly Arg His
1 5 10
<210> 147
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 147
Arg Arg Thr Tyr Leu Pro Arg Arg Phe Gly Ser
1 5 10
<210> 148
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 148
Ala Pro Gly Ala Ala Arg Asn Tyr
1 5
<210> 149
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 149
Ala Pro Gly Ala Ala Arg Asn Val
1 5
<210> 150
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 150
Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser
1 5
<210> 151
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 151
Val Arg Gly Trp Leu Asp Glu Arg Pro Gly Pro Gly Pro Ile Val Tyr
1 5 10 15
<210> 152
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 152
Asn Arg Gly Ser Tyr Glu Tyr
1 5
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 153
Ile Ala Asp Trp Arg Gly Tyr
1 5
<210> 154
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 154
Arg Arg Arg Gly Trp Gly Arg Thr Leu Glu Tyr
1 5 10
<210> 155
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 155
Ser Asp Phe Arg Arg Gly Thr Gln Tyr
1 5
<210> 156
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 156
Gln Arg Trp Gly Arg Gly Pro Gly Thr Thr
1 5 10
<210> 157
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 157
Asp Asp Ser Gly Ile Ala Arg Asp Tyr
1 5
<210> 158
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 158
Tyr Arg Arg Phe Gly Ile Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 159
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 159
Leu Arg Thr Tyr Tyr Leu Asn Asp Pro Val Val Phe Ser
1 5 10
<210> 160
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 160
Tyr Ile Pro Leu Arg Gly Thr Leu His Asp Tyr
1 5 10
<210> 161
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 161
Arg Lys Trp Gly Arg Asn Tyr
1 5
<210> 162
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 162
Lys Arg Arg Glu Trp Ala Lys Asp Phe Glu Tyr
1 5 10
<210> 163
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 163
Ile Ala Asp Trp Arg Gly Tyr
1 5
<210> 164
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 164
Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe
1 5 10
<210> 165
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 165
Ile Ala Asp Trp Arg Gly Tyr
1 5
<210> 166
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 166
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr
1 5
<210> 167
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 167
Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe
1 5
<210> 168
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 168
Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe
1 5 10
<210> 169
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 169
Ala Ser Tyr
1
<210> 170
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 170
Ala Ser Tyr
1
<210> 171
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 171
Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe
1 5 10
<210> 172
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 172
Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe
1 5 10
<210> 173
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 173
Tyr Ile Pro Tyr Gly Gly Thr Leu His Asp Phe
1 5 10
<210> 174
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 174
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr
1 5
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 175
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr
1 5
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 176
Asp Thr Ile Gly Thr Ala Arg Asp Tyr
1 5
<210> 177
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 177
Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe
1 5
<210> 178
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 178
Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe
1 5
<210> 179
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 179
Arg Thr Thr Ser Tyr Pro Val Asp Phe
1 5
<210> 180
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 180
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 181
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 181
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 182
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 182
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Phe Ser
20 25
<210> 183
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 183
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser
20 25
<210> 184
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 184
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 185
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 185
Gln Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 186
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 186
Gln Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 187
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 187
Gln Val Gln Pro Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser
20 25
<210> 188
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 188
Gln Val Gln Pro Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser
20 25
<210> 189
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 189
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 190
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 190
Gln Val Gln Ile Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser
20 25
<210> 191
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 191
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 192
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 192
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 193
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 193
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 194
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 194
Gln Val Gln Leu Gly Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 195
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 195
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Pro Ser Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 196
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 196
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 197
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 197
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Glu
1 5 10 15
Ser Arg Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser
20 25
<210> 198
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 198
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 199
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 200
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 200
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser
20 25
<210> 201
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 201
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Arg Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser
20 25
<210> 202
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 202
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 203
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 203
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 204
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Thr Ser
20 25
<210> 205
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 205
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 206
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 206
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser
20 25
<210> 207
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 207
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 208
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 208
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 209
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 209
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 210
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 210
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 211
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 211
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 212
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 212
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 213
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 213
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 214
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 214
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 215
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 215
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 216
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 216
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser
20 25
<210> 217
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 217
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 218
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 218
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 219
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 219
Trp Tyr Arg Gln Ala Gly Asn Asn Arg Ala Leu Val Ala
1 5 10
<210> 220
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 220
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 221
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 221
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Thr Val Val Ala
1 5 10
<210> 222
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 222
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 223
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 223
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 224
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 224
Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Ser Lys Gln Arg Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 225
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 225
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 226
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 226
Trp Tyr Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val Ala
1 5 10
<210> 227
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 227
Trp Tyr Arg Gln Ala Ser Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val Ala
1 5 10
<210> 228
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 228
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 229
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 229
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Met Val Ala
1 5 10
<210> 230
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 230
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 231
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 231
Trp Tyr Arg Gln Ala Gln Gly Lys Gln Arg Glu Pro Val Ala
1 5 10
<210> 232
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 232
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gln Phe Val Ala
1 5 10
<210> 233
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 233
Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Pro Val Ala
1 5 10
<210> 234
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 234
Trp Tyr Arg Arg Ala Pro Gly Gln Val Arg Glu Met Val Ala
1 5 10
<210> 235
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 235
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val Ala
1 5 10
<210> 236
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 236
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Ala Gln Arg Glu Leu Leu Ala
1 5 10
<210> 237
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 237
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 238
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 238
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 239
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 239
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 240
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 240
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 241
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 241
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Pro Val Ala
1 5 10
<210> 242
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 242
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Glu Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 243
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 243
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Asn Gln Arg Glu Pro Val Ala
1 5 10
<210> 244
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 244
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val Ala
1 5 10
<210> 245
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 245
Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 246
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 246
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 247
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 247
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 248
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 248
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 249
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 249
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 250
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 250
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 251
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 251
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 252
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 252
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Thr Glu Arg Asp Leu Val Ala
1 5 10
<210> 253
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 253
Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 254
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 254
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 255
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 255
Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Asn Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 256
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 256
Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Leu Val Ala
1 5 10
<210> 257
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 257
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 258
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 258
Ile Ser Trp Asp Ile Ala Glu Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ser Glu Asp Thr Thr Val Tyr Tyr Cys Asn Ser
20 25
<210> 259
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 259
Ile Ser Gly Asp Asn Val Arg Asn Met Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser Ala
20 25
<210> 260
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 260
Ile Ser Gly Glu Asn Gly Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gly
20 25
<210> 261
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 261
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ala Ile Tyr Leu Glu Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Val Cys Asn Ala
20 25
<210> 262
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 262
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val Ser Leu Gln Met Asn Thr
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Asn Ala
20 25
<210> 263
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 263
Ile Ser Lys Asp Ser Thr Arg Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Met
1 5 10 15
Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
<210> 264
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 264
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
<210> 265
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 265
Ile Ser Arg Asp Ile Asp Lys Lys Thr Val Tyr Leu Gln Met Asp Asn
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Asn Ser
20 25
<210> 266
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 266
Ile Ser Arg Asp Ile Tyr Lys Lys Thr Val Tyr Leu Gln Met Asp Asn
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Asn Ser
20 25
<210> 267
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 267
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ile
20 25
<210> 268
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 268
Ile Ser Lys Glu Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys His Ile
20 25
<210> 269
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 269
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Lys Ala
20 25
<210> 270
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 270
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Thr Cys His Val
20 25
<210> 271
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 271
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Ala Asn Thr Phe Tyr Leu Gln Met Asn Asn
1 5 10 15
Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Val
20 25
<210> 272
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 272
Val Ser Arg Asp Ile Val Lys Asn Thr Met Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Tyr
20 25
<210> 273
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 273
Ile Ser Arg Asp Asn Thr Gln Asn Leu Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn
1 5 10 15
Leu Gln Pro His Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ala
20 25
<210> 274
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 274
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
<210> 275
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 275
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Arg
1 5 10 15
Leu Thr Pro Glu Asp Thr Asp Val Tyr Tyr Cys Arg Phe
20 25
<210> 276
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 276
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Glu Ser
1 5 10 15
Leu Val Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
<210> 277
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 277
Val Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ile Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Thr
20 25
<210> 278
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 278
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
<210> 279
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 279
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Thr
20 25
<210> 280
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 280
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Thr Cys His Val
20 25
<210> 281
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 281
Val Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ile Val Tyr Leu Gln Met Asn Arg
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Thr
20 25
<210> 282
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 282
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asp Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Thr Cys His Val
20 25
<210> 283
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 283
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Asn
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
<210> 284
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 284
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Val
20 25
<210> 285
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 285
Val Ser Arg Asp Ser Ala Lys Asn Ile Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Thr
20 25
<210> 286
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 286
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val
20 25
<210> 287
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 287
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val
20 25
<210> 288
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 288
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Thr
20 25
<210> 289
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 289
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Thr
20 25
<210> 290
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 290
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1 5 10 15
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Thr
20 25
<210> 291
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 291
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
1 5 10 15
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 292
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Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn Ala
20 25
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
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20 25
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<212> PRT
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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20 25
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<212> PRT
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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20 25
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 296
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肽
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肽
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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肽
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 302
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 305
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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肽
<400> 306
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 307
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<223> 人工序列的描述：合成
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
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Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
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<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 317
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 319
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 320
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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肽
<400> 321
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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肽
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Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<211> 11
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
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Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
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<210> 324
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 324
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
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<220>
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肽
<400> 325
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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肽
<400> 326
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<220>
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肽
<400> 327
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肽
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肽
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<220>
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肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 332
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
<400> 333
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
1 5 10
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
肽
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<211> 6
<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成
6xHis标签
<400> 336
His His His His His His
1 5

Claims (68)

1.一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含一个或多个保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:41、42、43或44相同或相对于SEQ ID NO:41、42、43或44包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
2.根据权利要求1所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:41相同或相对于SEQ ID NO:41包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
3.根据权利要求1或2所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:42相同或相对于SEQ ID NO:42包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
4.根据权利要求1、2或3所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:43相同或相对于SEQ ID NO:43包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
5.根据权利要求1、2或3所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:44相同或相对于SEQ ID NO:44包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
6.根据权利要求1所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含(i)对应于SEQ ID NO:41的一段氨基酸；(ii)对应于SEQ ID NO:42的一段氨基酸；(iii)对应于SEQ IDNO:43的一段氨基酸；和(iv)对应于SEQ ID NO:44的一段氨基酸。
7.一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含下式：
f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4
其中，r1与SEQ ID NO:51相同或相对于SEQ ID NO:51包含一个或多个氨基酸残基置换；r2与SEQ ID NO:52相同或相对于SEQ ID NO:52包含一个或多个氨基酸残基置换；且r3与SEQ ID NO:53相同或相对于SEQ ID NO:53包含一个或多个氨基酸残基置换；并且其中f1、f2、f3和f4是框架残基。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含与选自SEQ ID NO:1-40、58和60-62的序列至少80％相同的序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含一个或多个导致所述结合蛋白质人源化的修饰。
10.根据权利要求9所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述修饰包括氨基酸残基的置换、添加或缺失。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含111个氨基酸至124个氨基酸。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含来源于非人来源的VHH结构域。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含美洲驼VHH结构域。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质与间皮素的表位结合，其中所述表位位于包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基296-390的区域I、包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基391-486的区域II或包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基487-598的区域III中。
15.一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含一个或多个保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:45、46、47、48、49或50相同或相对于SEQ ID NO:45、46、47、48、49或50包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
16.根据权利要求15所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:45相同或相对于SEQ ID NO:45包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
17.根据权利要求15或16所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:46相同或相对于SEQ ID NO:46包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
18.根据权利要求15、16或17所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:47相同或相对于SEQ ID NO:47包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:48相同或相对于SEQ ID NO:48包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
20.根据权利要求15-19中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:49相同或相对于SEQ ID NO:49包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含保守区，所述保守区包含与SEQ ID NO:50相同或相对于SEQ ID NO:50包含一个或多个氨基酸残基置换的序列。
22.根据权利要求1所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含(i)对应于SEQ ID NO:45的一段氨基酸；(ii)对应于SEQ ID NO:46的一段氨基酸；(iii)对应于SEQID NO:47的一段氨基酸；(iv)对应于SEQ ID NO:48的一段氨基酸；(v)对应于SEQ ID NO:49的一段氨基酸；和(vi)对应于SEQ ID NO:50的一段氨基酸。
23.一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含下式：
f1-r1-f2-r2-f3-r3-f4
其中，r1与SEQ ID NO:54相同或相对于SEQ ID NO:54包含一个或多个氨基酸残基置换；r2与SEQ ID NO:55相同或相对于SEQ ID NO:55包含一个或多个氨基酸残基置换；且r3与SEQ ID NO:56相同或相对于SEQ ID NO:56包含一个或多个氨基酸残基置换；并且其中f1、f2、f3和f4是框架残基。
24.根据权利要求15-23中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含与选自SEQ ID No:30-40、58和60-62的序列至少80％相同的序列。
25.根据权利要求15-24中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含111个氨基酸至119个氨基酸。
26.根据权利要求15-25中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含来源于非人来源的VHH结构域。
27.根据权利要求15-26中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含美洲驼VHH结构域。
28.根据权利要求15-27中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质与包含SEQ ID NO:57所示序列的人间皮素蛋白质结合。
29.根据权利要求15-28中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质与间皮素的表位结合，其中所述表位位于包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基296-390的区域I、包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基391-486的区域II或包含SEQ ID NO:57的氨基酸残基487-598的区域III中。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述结合蛋白质是嵌合抗体或人源化抗体。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的单结构域结合蛋白质，其中所述结合蛋白质是单结构域抗体。
32.根据权利要求15-31中任一项所述的单结构域结合蛋白质，其中所述结合蛋白质是人源化的单结构域抗体。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的单结构域结合蛋白质，其中所述结合蛋白质包含SEQ ID NO:58所示的序列。
34.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1-33中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质。
35.一种载体，其包含根据权利要求34所述的多核苷酸。
36.用根据权利要求35所述的载体转化的宿主细胞。
37.一种药物组合物，其包含(i)根据权利要求1-33中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质、根据权利要求33所述的多核苷酸、根据权利要求35所述的载体或根据权利要求36所述的宿主细胞，和(ii)药学上可接受的载剂。
38.一种产生根据权利要求1-33中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质的方法，所述方法包括在允许表达间皮素结合蛋白质并从培养物中回收和纯化所产生的蛋白质的条件下培养用载体转化或转染的宿主，该载体包含编码根据权利要求1-33中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质的核酸序列。
39.一种治疗或改善增生性疾病或肿瘤性疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用根据权利要求1-33中任一项所述的间皮素结合蛋白质。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述受试者是人。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述方法进一步包括将药剂与根据权利要求1-33中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质联合施用。
42.根据权利要求39-41中任一项所述的方法，其中所述单结构域间皮素结合蛋白质选择性地结合表达间皮素的肿瘤细胞。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述单结构域间皮素结合蛋白质介导T细胞对表达间皮素的肿瘤细胞的杀伤。
44.根据权利要求39-43中任一项所述的方法，其中所述肿瘤性疾病包括实体瘤疾病。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述实体瘤疾病包括间皮瘤、肺癌、胃癌、卵巢癌或三阴性乳腺癌。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述实体瘤疾病是转移性的。
47.一种单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含一个或多个选自SEQ IDNo.:51-56和63-179的CDR。
48.根据权利要求47所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含CDR1，该CDR1包含SEQ ID No.:51、54和63-101中任一个所示的序列。
49.根据权利要求47或48所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含CDR2，该CDR2包含SEQ ID No.:52、55和102-140中任一个所示的序列。
50.根据权利要求47-49中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含CDR3，该CDR3包含SEQ ID No.:53、56和141-179中任一个所示的序列。
51.根据权利要求47-50中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含框架区1(f1)，该框架区1包含SEQ ID No.:180-218中任一个所示的序列。
52.根据权利要求47-51中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含框架区2(f2)，该框架区2包含SEQ ID No.:219-257中任一个所示的序列。
53.根据权利要求47-52中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含框架区3(f3)，该框架区3包含SEQ ID No.:258-296中任一个所示的序列。
54.根据权利要求47-53中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含框架区4(f4)，该框架区4包含SEQ ID No.:297-335中任一个所示的序列。
55.根据权利要求47-54中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质，其中所述蛋白质包含SEQ ID No.:1-40和58中任一个所示的氨基酸序列。
56.一种多核苷酸，其编码根据权利要求47-55中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质。
57.一种载体，其包含根据权利要求56所述的多核苷酸。
58.用根据权利要求57所述的载体转化的宿主细胞。
59.一种药物组合物，其包含(i)根据权利要求47-55中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质、根据权利要求56所述的多核苷酸、根据权利要求57所述的载体或根据权利要求58所述的宿主细胞，和(ii)药学上可接受的载剂。
60.一种产生根据权利要求47-55中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质的方法，所述方法包括在允许表达间皮素结合蛋白质并从培养物中回收和纯化所产生的蛋白质的条件下培养用载体转化或转染的宿主，该载体包含编码根据权利要求47-55中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质的核酸序列。
61.一种治疗或改善增生性疾病或肿瘤性疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用根据权利要求47-55中任一项所述的间皮素结合蛋白质。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述受试者是人。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述方法进一步包括将药剂与根据权利要求1-33中任一项所述的单结构域间皮素结合蛋白质联合施用。
64.根据权利要求61-63中任一项所述的方法，其中所述单结构域间皮素结合蛋白质选择性地结合表达间皮素的肿瘤细胞。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述单结构域间皮素结合蛋白质介导T细胞对表达间皮素的肿瘤细胞的杀伤。
66.根据权利要求61-65中任一项所述的方法，其中所述肿瘤性疾病包括实体瘤疾病。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述实体瘤疾病包括间皮瘤、肺癌、胃癌、卵巢癌或三阴性乳腺癌。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述实体瘤疾病是转移性的。
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