CN112807429A - 用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的功能性抗体片段互补作用 - Google Patents

用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的功能性抗体片段互补作用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的功能性抗体片段互补作用，具体而言，本发明涉及一种用于治疗特征在于存在非所要细胞的病状的靶向T细胞接合剂，其包括靶向部分、第一T细胞接合结构域、至少一个惰性结合配偶体；和至少一个裂解位点，其中所述裂解位点是：(i)由所述非所要细胞表达的酶裂解；(ii)通过在所述非所要细胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；(iii)通过补体依赖性裂解反应来裂解。

Description

用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的功能性抗 体片段互补作用
本申请是申请号为201680065969.4，申请日为2016年11月18日，发明名 称为“用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的功能性抗体片段互补作 用”的中国专利申请的分案申请。
技术领域
本申请涉及用于治疗特征在于存在非所要细胞的病状的靶向T细胞接合剂。 特定来说，它涉及可用于治疗特征在于存在非所要细胞诸如癌细胞或其它致病细 胞的病状的药剂。
背景技术
癌症和由存在非所要细胞引起的其它疾病产生重大生命损失、患病和经济影 响。用于靶向癌症的免疫治疗策略已成为转化临床研究的活跃领域。
多种其它方法已被探索用于免疫治疗，但这些先前方法中的许多对特定非所 要细胞缺乏足够特异性。举例来说，已设计各种半体(demibody)，其各自具有结 合靶标细胞上的不同抗原的scFv部分、允许与互补半体配对的Fc结构域、以及 能够与互补半体上的另一结合配偶体形成缔合的结合配偶体。WO 2007/062466。 然而，这些半体未必对癌细胞具有特异性，并且可结合表达相同抗原的其它细胞 并对所述其它细胞具有活性。也参见WO2013/104804，其提供具有结合第一抗 原的靶向部分和功能性结构域的第一片段的第一多肽，以及具有结合第二抗原的 靶向部分和功能性结构域的互补于所述功能性结构域的所述第一片段的第二片 段的第二多肽。同样，这个方法未必对癌细胞具有特异性，并且可结合表达相同 抗原的其它细胞并对所述其它细胞具有活性。
尽管已在先前方法的情况下显示一些正性测试数据，但临床有效的治疗策略 必须能够在罹患疾病诸如癌症的个体中引发强烈免疫应答。另外，有效疗法应极 具特异性，并且不对身体内的其它细胞类型导致非所要副作用。因此，需要在这 个重定向免疫治疗领域中进行的额外开发。
发明内容
根据描述，本发明者描述一种用于治疗特征在于存在非所要细胞的病状的靶 向T细胞接合剂。这个药剂包括(a)能够靶向非所要细胞的靶向部分；(b)当结合 第二T细胞接合结构域时能够具有活性的第一T细胞接合结构域，其中所述第 二T细胞接合结构域不是所述药剂的一部分；(c)至少一个惰性结合配偶体，其 能够结合所述第一T细胞接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所 述第一T细胞接合结构域不结合所述第二T细胞接合结构域；和(d)至少一个分 隔所述第一T细胞接合结构域和所述惰性结合配偶体的裂解位点。
在一个实施方案中，涵盖一种用于治疗特征在于存在非所要细胞的病状的两 组分系统，其包含：
a.包含靶向T细胞接合剂的第一组分，所述靶向T细胞接合剂包含：
i.能够靶向所述非所要细胞的第一靶向部分；
ii.当结合第二T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性的第一T细胞 接合结构域，其中所述第二T细胞接合结构域不是所述第一组分的一部分；
iii.所述第一T细胞接合结构域的第一惰性结合配偶体，其结合所述第一T 细胞接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所述第一T细胞接合结 构域不结合所述第二T细胞接合结构域；和
iv.分隔所述第一T细胞接合结构域和所述第一惰性结合配偶体的裂解位 点，其中所述裂解位点是：
(1)由所述非所要细胞表达的酶裂解；
(2)通过在所述非所要细胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；
(3)通过补体依赖性裂解反应来裂解；或
(4)由通过与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位 于所述非所要细胞的蛋白酶裂解，
b.包含第二T细胞接合结构域的第二组分，所述第二T细胞接合结构域在 结合所述第一T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性，其中所述第一T 细胞接合结构域和所述第二T细胞接合结构域在都不结合于惰性结合配偶体时 能够结合。
在另一实施方案中，两组分系统的第二组分还包含能够靶向非所要细胞的第 二靶向部分。
在另一实施方案中，两组分系统的第二组分还包含第二T细胞接合结构域的 第二惰性结合配偶体，其结合所述第二T细胞接合结构域以使除非移除所述惰性 结合配偶体，否则所述第二T细胞接合结构域不结合所述第一T细胞接合结构 域，以及
a.分隔所述第二T细胞接合结构域和所述第二惰性结合配偶体的裂解位点， 其中所述裂解位点是：
i.由非所要细胞表达的酶裂解；
ii.通过在非所要细胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；
iii.通过补体依赖性裂解反应来裂解；或
iv.由通过与药剂中的靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位于非所要细 胞的蛋白酶裂解，
其中对所述裂解位点的裂解导致丧失所述惰性结合配偶体以及与两组分系 统的第一T细胞接合结构域互补。
在一些实施方案中，两组分系统的第一靶向部分和第二靶向部分是相同的。
在一些实施方案中，两组分系统的第一靶向部分和第二靶向部分是不同的。
在一些实施方案中，第一裂解位点和第二裂解位点是相同的。
在一些实施方案中，第一裂解位点和第二裂解位点是不同的。
在一些实施方案中，至少一个裂解位点是蛋白酶裂解位点。在一些实施方案 中，至少一个裂解位点能够在非所要细胞外部被裂解。
在两组分系统的一些实施方案中，至少一种由非所要细胞表达的酶是蛋白 酶。
在两组分系统的一些实施方案中，至少一个惰性结合配偶体特异性结合T 细胞接合结构域。
在两组分系统的一些实施方案中，至少一个惰性结合配偶体是VH结构域或 VL结构域。
在两组分系统的一些实施方案中，T细胞接合结构域是VH结构域，惰性结 合配偶体是VL结构域，并且当T细胞接合结构域是VL结构域时，惰性结合配 偶体是VH结构域。
在两组分系统的一些实施方案中，至少一个靶向部分是抗体或其功能性片 段。在两组分系统的一些实施方案中，一旦至少一个裂解位点已被裂解，至少一 个惰性结合配偶体即能够解离，并且在解离之后，两个T细胞接合结构域能够彼 此结合并展现T细胞接合活性。
在两组分系统的一些实施方案中，一组核酸分子编码两组分系统的第一组分 和第二组分。在两组分系统的一些实施方案中，核酸分子编码用于两组分系统中 的组分。
在两组分系统的一些实施方案中，一个T细胞接合结构域是VH结构域，并 且另一T细胞接合结构域是VL结构域。
在另一实施方案中，包含第一靶向T细胞接合剂的用于在用于治疗特征在于 存在非所要细胞的病状的两组分系统中使用的组分包含：
a.能够靶向所述非所要细胞的靶向部分；
b.当结合第二T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性的第一T细胞 接合结构域，其中所述第二T细胞接合结构域不是所述第一靶向T细胞接合剂 的一部分；
c.所述第一T细胞接合结构域的惰性结合配偶体，其结合所述第一T细胞 接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所述第一T细胞接合结构域 不结合所述第二T细胞接合结构域；和
d.分隔所述第一T细胞接合结构域和所述惰性结合配偶体的裂解位点，其 中所述裂解位点是：
i.由所述非所要细胞表达的酶裂解；
ii.通过在所述非所要细胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；
iii.通过补体依赖性裂解反应来裂解；或
由通过与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位于所 述非所要细胞的蛋白酶裂解，其中对所述裂解位点的裂解导致丧失所述惰性结合 配偶体以及允许与不是所述药剂的一部分的所述第二T细胞接合结构域互补。
在一些实施方案中，涵盖一种治疗患者的特征在于存在非所要细胞的疾病的 方法，其包括向所述患者施用两组分系统。在一些实施方案中，涵盖一种靶向患 者的对非所要细胞的免疫应答的方法，其包括施用两组分系统。在一些实施方案 中，这些非所要细胞是癌细胞。在一些实施方案中，癌症是以下中的任一者：乳 腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、肾癌、黑素瘤、肺癌、前列腺 癌、睾丸癌、甲状腺癌、脑癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肝癌、白 血病、骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤(nonHodgkin lymphoma)、霍奇金淋巴瘤、急性 骨髓性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴母细胞性白血病、淋巴组织 增生性病症、骨髓发育不良病症、骨髓增生性疾病或恶变前疾病。
额外目标和优势将部分地阐述于随后描述中，并且部分地将根据描述显而易 见，或可通过实践来获悉。目标和优势将借助于在随附权利要求中特别指出的要 素和组合来实现和达到。
应了解上文一般性描述与下文详细描述两者均仅具有示例性和说明性，并且 不限制权利要求。
并入本说明书中并构成本说明书的一部分的附图说明一个(若干)实施方案， 并且连同描述一起用于解释本文所述的原理。
附图说明
图1显示两组分系统的第一组分的一个实施方案，其中所述第一组分是具有 惰性结合配偶体的处于非活性状态的靶向T细胞接合剂。
图2显示可裂解接头被裂解，并且惰性结合配偶体被释放以产生活性实体所 采用的过程。
图3说明在使惰性结合配偶体从两组分系统中的一对互补性组分释放之后 产生活性靶向T细胞接合剂。
图4A-C说明两组分系统中结合靶标细胞的一对互补性组分的裂解(A)、连接 惰性结合配偶体的接头的裂解(A和B)、以及结合以产生能够接合T细胞的活性 部分的逐步过程。
图5A-B提供通过SDS PAGE和考马斯蓝染色(Coomassie blue staining)对构 建体的评估。
图6显示当用各种个别构建体和组合处理癌细胞时的IFNγ表达作为T细胞 应答的代表，其中6245充当阳性对照，并且6248和6249的组合显示有益结果。
图7显示当用各种个别构建体和组合处理癌细胞时的IFNγ表达作为T细胞 应答的代表，其中6245作为阳性对照，并且6248和6249的组合显示有益结果。
图8显示当用不同浓度的构建体处理癌细胞时的IFNγ表达作为T细胞应答 的代表，其中6245作为阳性对照，并且6248和6249的组合显示有益结果。
图9A-B显示当用对照或不同浓度的构建体处理癌细胞时的IFNγ表达作为T 细胞应答的代表，其中6245作为阳性对照，并且6248和6249的组合显示有益 结果。PHA也充当非特异性T细胞活化的阳性对照。
图10显示当用对照或不同浓度的构建体处理癌细胞时的IFNγ表达作为T 细胞应答的代表，其中在仅具有抗CDE3 scFv的VH或VL的构建体的情况下， 水平极低，但阳性对照双特异性构建体(9332与9333两者)显示较高活性水平。
图11提供对两组分系统的互补性构建体的化学计量评估。
图12显示当用对照或不同浓度的构建体处理MCF-7癌细胞时的IFNγ表达 作为T细胞应答的代表。
图13显示当用对照或不同浓度的靶向EpCAM的构建体处理癌细胞时的 IFNγ表达作为T细胞应答的代表。
图14显示当用对照或不同浓度的靶向双互补位(biparatopic)EGFR表位或靶 向EpCAM和EGFR的组合的构建体处理癌细胞时的IFNγ表达作为T细胞应答 的代表。
图15显示蛋白酶抑制剂对含有蛋白酶裂解位点或不含有蛋白酶裂解位点的 构建体的影响。
图16通过使具有VHH靶向部分的构建体与具有scFv部分的构建体成功配 对来显示可使用不同类型的靶向部分。
图17显示构建体6248和6249的序列示意图，其中对各种接头加框，并且 蛋白酶裂解位点用粗体表示并加下划线。His标签也用粗体表示。
序列描述
表1A和1B提供本文引用的某些序列的清单。
Figure BDA0002897548060000081
Figure BDA0002897548060000091
Figure BDA0002897548060000101
Figure BDA0002897548060000111
Figure BDA0002897548060000121
Figure BDA0002897548060000131
Figure BDA0002897548060000141
Figure BDA0002897548060000142
Figure BDA0002897548060000151
Figure BDA0002897548060000161
Figure BDA0002897548060000171
Figure BDA0002897548060000181
Figure BDA0002897548060000191
Figure BDA0002897548060000201
具体实施方式
I.包含至少一个靶向T细胞接合剂的两组分系统
多种靶向T细胞接合剂在不同实施方案中加以描述，并且在一些实施方案中 被描述为包含第一组分和第二组分的两组分系统的一部分。然而，在各实施方案 中，靶向部分可用于将靶向T细胞接合剂递送至非所要细胞的区域中，从而允许 局部递送治疗作用。靶向T细胞接合剂也含有当结合第二T细胞接合结构域时 能够具有活性的第一T细胞接合结构域，但所述第二T细胞接合结构域不是所 述靶向T细胞接合剂的一部分。换句话说，在无不是靶向T细胞接合剂的一部 分的第二T细胞接合结构域下，第一T细胞接合结构域不能够具有T细胞接合 活性。靶向T细胞接合剂也包含能够结合第一T细胞接合结构域以及阻止它结 合第二T细胞接合结构域的惰性结合配偶体。换句话说，惰性结合配偶体结合第 一T细胞接合结构域以使除非移除惰性结合配偶体，否则第一T细胞接合结构 域不结合第二T细胞接合结构域。就不结合来说，本申请不排除非特异性结合或 低水平的结合(例如≤1％、≤5％、≤10％)。所述概念是就重新VH/VL互补作用不 足以达成T细胞靶标结合而言，具有功能性不足的概念。蛋白水解裂解使惰性 VH或VL基团释放，从而允许各对活性VH和VL有机会在细胞表面处重新配 对。此外，靶向T细胞接合剂包括分隔第一T细胞接合结构域和惰性结合配偶 体的裂解位点。当靶向T细胞接合剂处于非所要细胞的微环境中时，裂解位点被裂解。
在一些实施方案中，第二T细胞接合结构域是第二靶向T细胞接合剂的一 部分。因此，在一些实施方案中，试剂盒或组合物可包含两种靶向T细胞接合剂， 一种具有第一T细胞接合结构域，并且另一种具有第二T细胞接合结构域。在 这种试剂盒或组合物中，一旦各药剂中的裂解位点已被裂解，惰性结合配偶体即 可能够解离；在解离之后，两个T细胞接合结构域可能够彼此结合并展现活性。
在具有两个靶向T细胞接合剂的一些实施方案中，两组分系统包含一个可为 VH结构域的T细胞接合结构域和可为VL结构域的另一T细胞接合结构域。在 具有两个靶向T细胞接合剂的实施方案中，第一组分和第二组分中的靶向部分可 相同，或它们可不同。
在具有两个靶向T细胞接合剂的实施方案中，第一组分和第二组分中的裂解 位点可相同，或它们可不同。
图1显示靶向T细胞接合剂构建体的一个实施方案，其包含(a)结合靶标的 包含VH结构域和VL结构域的scFv靶向结构域，其中所述VH结构域和所述 VL结构域由柔性接头连接；(b)结合惰性VH结构域的包含VL结构域的非活性 T细胞接合结构域，其中所述VH结构域和所述VL结构域由具有裂解位点的柔 性接头连接，和(c)将所述靶向结构域和所述非活性T细胞接合结构域连接一起 的柔性接头。
在一些实施方案中，图2显示可裂解接头被裂解，并且惰性结合配偶体被释 放以产生无惰性结合配偶体的实体所采用的过程。这个实体仍然是非活性的，因 为T细胞接合结构域中的VL结构域独自不具有活性。
在一些实施方案中，图3说明在使惰性结合配偶体从一对互补性靶向T细胞 接合剂释放之后产生活性靶向T细胞接合剂。
在一些实施方案中，图4A-C说明结合靶标细胞的靶向T细胞接合剂的裂解 (4A)、惰性结合配偶体的裂解(4A和4B)、以及结合以产生活性靶向T细胞接合 剂(4C)的逐步过程。
在一些替代性实施方案中，第二T细胞接合结构域可不结合于靶向部分和/ 或可不包含裂解位点和惰性结合配偶体。在一些情况下，可使第二T细胞接合结 构域缀合或连接于靶向部分(相同靶向部分或不同靶向部分)，但在这种实施方案 中，将不使它缀合或连接于惰性结合配偶体。在这种实施方案中，仅第一T细胞 接合结构域结合于惰性结合配偶体。在另一实施方案中，第二T细胞接合结构域 也可包含各自如本文所述的靶向部分、裂解位点和惰性结合配偶体。
在一些实施方案中，第一组分的从N末端至C末端的结构排列包括 IBVL-L1-TCEVH-L2-TVL-L3-TVH。在一些实施方案中，第二组分的从N末端 至C末端的结构排列包括TCEVL-L2-TVH-L3-TVL。在一些实施方案中，第二 组分的从N末端至C末端的结构排列包括IBVH-L1-TCEVL-L2-TBVH-L3-TBVL。在这些实施方案各自中，IB代表惰性结 合配偶体，并且IBVL是VL惰性结合配偶体，而IBVH是VH惰性结合结构域。 TCE代表T细胞接合，并且TCEVL是T细胞接合结构域的VL部分，而TCEVH 是T细胞接合结构域的VH部分。TB代表靶标结合结构域，并且TBVH是靶标 结合结构域的VH部分，而TBVL是靶标结合结构域的VL部分。L1是具有蛋 白酶裂解位点的接头，而L2和L3任选是任选不可与L1由相同蛋白酶裂解的接 头。
A.靶向部分
靶向部分在靶向T细胞接合剂中通过将药剂递送至非所要细胞的局部环境 中，从而实现局部化治疗策略来起作用。在某些实施方案中，靶向部分通过特异 性结合非所要细胞来靶向非所要细胞。在一些情况下，靶向部分特异性结合非所 要细胞，甚至当惰性结合配偶体正结合第一T细胞接合结构域时。
在一些实施方案中，第一靶向部分任选由接头结合于第一T细胞接合结构 域，并且作为单独构建体的一部分，第二靶向部分任选由接头结合于第二T细胞 接合结构域。以这个方式，T细胞接合结构域的各互补性部分由单独靶向部分递 送至非所要细胞。在一些实施方案中，靶向部分具有相同类型，并且在一些实施 方案中，靶向部分是不同的。当靶向部分具有不同类型时，它们可靶向非所要细 胞的相同靶标蛋白质上的不同表位(重叠或非重叠)，或它们可靶向不同靶标蛋白 质。在当靶向部分靶向不同蛋白质时情况下，非所要细胞将表达对应于两种类型 的靶向部分中的各者的抗原，从而为这个方法提供额外特异性。
在某些实施方案中，靶向部分是抗体或其功能性部分。就功能性部分来说， 我们意指保留它对非所要细胞上的靶标的结合活性的任何抗体片段，诸如scFv 或VHH或其它功能性片段，包括缺少轻链的免疫球蛋白、Fab、Fab′、F(ab′)2、 Fv、抗体片段、双抗体、scAB、单结构域重链抗体、单结构域轻链抗体、Fd、 CDR区或抗体的能够结合抗原或表位的任何部分或肽序列。除非明确指示为“全 长抗体”，否则当本申请涉及抗体时，它固有地包括提及其功能性部分。
某些抗体靶标(非所要细胞类型的实例在括号中)可包括：Her2/Neu(上皮恶 性肿瘤)；CD22(自体免疫或恶性B细胞)；EpCAM(CD326)(上皮恶性肿瘤)； EGFR(上皮恶性肿瘤)；PMSA(前列腺癌)；CD30(B细胞恶性肿瘤)；CD20(自 体免疫、过敏性或恶性B细胞)；CD33(骨髓性恶性肿瘤)；膜lgE(过敏性B细 胞)；lgE受体(CD23)(过敏性疾病中的肥大细胞或B细胞)、CD80(自体免疫、过 敏性或恶性B细胞)；CD86(自体免疫、过敏性或恶性B细胞)；CD2(T细胞或 NK细胞淋巴瘤)；CA125(包括卵巢癌的多种癌)；碳酸酐酶IX(包括肾细胞癌的 多种癌)；CD70(自体免疫、过敏性或恶性B细胞)；CD74(自体免疫、过敏性或 恶性B细胞)；CD56(T细胞或NK细胞淋巴瘤)；CD40(自体免疫、过敏性或恶 性B细胞)；CD19(自体免疫、过敏性或恶性B细胞)；c-met/HGFR(胃肠道和肝 恶性肿瘤；TRAIL-R1(包括卵巢癌和结肠直肠癌的多种恶性肿瘤)；DRS(包括卵 巢癌和结肠直肠癌的多种恶性肿瘤)；PD-1(自体免疫、过敏性或恶性B细胞)； PD1L(包括上皮腺癌的多种恶性肿瘤)；IGF-1R(包括上皮腺癌的大多数恶性肿 瘤)；VEGF-R2(与包括上皮腺癌的大多数恶性肿瘤相关的血管结构；前列腺干细 胞抗原(PSCA)(前列腺腺癌)；MUC1(上皮恶性肿瘤)；CanAg(诸如结肠癌和胰 腺癌的肿瘤)；间皮素(Mesothelin)(包括间皮瘤以及卵巢腺癌和胰腺腺癌的许多肿 瘤)；P-钙粘着蛋白(P-cadherin)(上皮恶性肿瘤，包括乳腺腺癌)；肌抑素(Myostatin) (GDF8)(包括肉瘤以及卵巢腺癌和胰腺腺癌的许多肿瘤)；Cripto(TDGF1)(包括 结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌和胰腺癌的上皮恶性肿瘤)；ACVRL1/ALK1(包 括白血病和淋巴瘤的多种恶性肿瘤)；MUC5AC(包括乳腺腺癌的上皮恶性肿瘤)； CEACAM(包括乳腺腺癌的上皮恶性肿瘤)；CD137(自体免疫、过敏性或恶性B 细胞或T细胞)；CXCR4(自体免疫、过敏性或恶性B细胞或T细胞)；神经纤毛蛋白1(Neuropilin1)(包括肺癌的上皮恶性肿瘤)；磷脂酰肌醇蛋白聚糖(包括肝 癌、脑癌和乳腺癌的多种癌)；HER3/EGFR(上皮恶性肿瘤)；PDGFRa(上皮恶性 肿瘤)；EphA2(包括神经母细胞瘤、黑素瘤、乳腺癌和小细胞肺癌的多种癌)； CD38(骨髓瘤)；CD138(骨髓瘤)；α4-整合素(α4-integrin)(AML、骨髓瘤、CLL 和大多数淋巴瘤)。
在某些模式中，抗体包括抗表皮生长因子受体抗体诸如西妥昔单抗(Cetuximab)、抗Her2抗体、抗CD20抗体诸如利妥昔单抗(Rituximab)、抗CD22 抗体诸如伊珠单抗(Inotuzumab)、G544或BU59，抗CD70抗体、抗CD33抗体 诸如hp67.6或吉妥单抗(Gemtuzumab)、抗MUC1抗体诸如GP1.4和SM3、抗 CD40抗体、抗CD74抗体、抗P-钙粘着蛋白抗体、抗EpCAM抗体、抗CD138 抗体、抗E-钙粘着蛋白抗体、(抗CEA抗体、抗FGFR3抗体和抗α4-整合素抗 体诸如那他珠单抗(natalizumab)。
表2A提供癌类型、可能的靶向部分和由那些癌类型表达的蛋白酶的非限制 性实例。为制备两组分系统，可从第1列鉴定癌，选择靶向部分所针对的一个或 两个靶标(根据需要)，以及也选择癌类型的一种或两种蛋白酶(根据需要)。本申 请的其它章节讨论何时使用一个靶向部分对(versus)两个靶向部分，以及一个蛋 白酶裂解位点对两个蛋白酶裂解位点。
Figure BDA0002897548060000241
Figure BDA0002897548060000251
举例来说，当第一组分和第二组分中的靶向部分是不同的时，表2B提供用 以与特定癌类型组合使用的潜在靶向部分的非限制性清单。在两组分系统中，第 一组分的靶向部分将存在，并且第二组分的第二靶向部分可任选存在。如果仅第 一组分具有靶向部分或如果第一组分和第二组分具有相同靶向部分，那么当癌类 型列于第3列中时，可使用表格的第1列或第2列中所列的靶向部分。
Figure BDA0002897548060000252
Figure BDA0002897548060000261
在一些实施方案中，靶向部分不是抗体，而是另一类型的靶向部分。举例来 说，靶向部分可为已知在非所要细胞上表达的蛋白质的结合配偶体。此类表达水 平可包括过度表达。举例来说，以下结合配偶体可结合非所要细胞上的以下靶标：
Figure BDA0002897548060000262
Figure BDA0002897548060000271
结合配偶体无需包含表3中所列的结合配偶体的全长或野生型序列。所需要 的全部是结合配偶体结合非所要细胞上的靶标，并且因此可包括本领域中熟知的 截短形式、类似物、变体和衍生物。
另外，在一些实施方案中，结合配偶体可为能够结合已知在非所要细胞上表 达的蛋白质的适体。结合非所要细胞诸如癌细胞的适体是熟知的，并且用于设计 它们的方法是已知的。
基于细胞的SELEX系统可用于从随机候选文库选择一组靶标细胞特异性适 体。可将ssDNA汇合物溶解于结合缓冲液中，并且使其变性，接着与靶标细胞 一起孵育。在洗涤之后，结合的DNA可通过加热来洗脱，接着与阴性细胞一起 孵育(如果需要)，离心，并且移除上清液。可通过用经生物素标记的引物进行PCR 来扩增上清液。可使用经链霉亲和素涂布的珠粒来使所选有义ssDNA与反义生 物素化链分离。为增加亲和力，洗涤强度可通过增加洗涤时间、缓冲液体积和洗 涤次数来增加。在所需轮数的选择之后，可对所选ssDNA汇合物进行PCR扩增， 并且将其克隆至大肠杆菌(E.coli)中并测序。参见Shangguan等，Aptamersevolved from live cells as effective molecular probes for cancer study，PNAS103(32：11838-11843(2006)；Lyu等，Generating Cell Targeting Aptamers forNanotherapeutics Using Cell-SELEX，Theranostics 6(9)：1440-1452(2016)；也参见 Li等，Inhibition of Cell Proliferation by an Anti-EGFR Aptamer，PLoS One 6(6)：e20229(2011)。这些参考文献中的用于设计适体的特定方法和结合癌细胞的 特定适体据此以引用的方式并入本文。
举例来说，适体可包括SEQ ID NO：94至164。在一些实施方案中，适体可 包括SEQID NO：95。这些适体针对EGFR，并且仅作为可结合非所要细胞上呈 现的靶标的适体的代表加以提供。针对非所要细胞上的其它靶标的其它适体同 等地是本文描述的一部分，并且以引用的方式并入本文，如Zhu等，Progress in Aptamer Mediated Drug DeliveryVehicles for Cancer Targeting，Theranostics 4(9)：931-944(2014)中所述。
在一些实施方案中，供在本文中使用的适体以在纳摩尔至皮摩尔的范围内 (诸如1皮摩尔至500纳摩尔或1皮摩尔至100纳摩尔)的Kd结合非所要细胞上 的靶标。
B.T细胞接合结构域
靶向T细胞接合剂包含不能单独接合T细胞的第一T细胞接合结构域。而 是，第一T细胞接合结构域在结合不是靶向T细胞接合剂的一部分的第二T细 胞接合结构域时能够具有活性。因此，第一T细胞接合结构域和第二T细胞接 合结构域可为单独不具有T细胞接合活性，但在彼此配对时具有所述活性的任何 两个部分。换句话说，第一T细胞接合结构域和第二T细胞接合结构域是功能 性活性蛋白质的互补性半部。
当两个T细胞接合结构域在两组分系统中缔合在一起时，它们可结合T细 胞的表面上的CD3抗原和/或T细胞受体，此时这些结合使T细胞活化。CD3 存在于所有T细胞上，并且由指定为γ、δ、ε、ζ和η的亚单位组成。CD3的细 胞质尾部足以在不存在TCR受体复合物的其它组分下转导为T细胞活化所必需 的信号。通常，T细胞细胞毒性的活化首先取决于TCR与位于单独细胞上的主 要组织相容性复合物(MHC)蛋白质的结合，所述蛋白质自身结合于外来抗原。在 正常情况下，仅当这个初始TCR-MHC结合已发生时才可达成CD3依赖性信号级联，其导致T细胞克隆扩增，以及最终，接着产生T细胞细胞毒性。然而， 在一些本发明实施方案中，当两组分系统结合CD3和/或TCR时，在不存在独立 TCR-MHC下的细胞毒性T细胞活化可借助于CD3和/或TCR分子的交联，从而 模拟免疫突触形成而发生。这意指T细胞可以克隆非依赖性方式在细胞毒性方面 被活化，即以不依赖于由T细胞携带的特定TCR克隆的方式。这允许使整个T 细胞区室，而非仅仅具有某一克隆身份的特定T细胞活化。
在一些实施方案中，第一T细胞接合结构域是VH结构域，并且第二T细 胞接合结构域是VL结构域。在其它实施方案中，第一T细胞接合结构域是VL 结构域，并且第二T细胞接合结构域是VH结构域。在所述实施方案中，当一起 配对时，第一T细胞接合结构域和第二T细胞接合结构域可构成scFv。
如果第一T细胞接合结构域和第二T细胞接合结构域是一对VH结构域和 VL结构域，那么所述VH结构域和VL结构域可对在T细胞的表面上表达的抗 原诸如CD3或TCR具有特异性。如果抗原是CD3，那么一种潜在T细胞接合结 构域可源于莫罗莫那(muromonab)。
C.惰性结合配偶体
靶向T细胞接合剂也包含至少一个能够结合第一T细胞接合结构域以及除 非存在某些条件，否则阻止它结合第二T细胞接合结构域的惰性结合配偶体。当 第一T细胞接合结构域结合于至少一个惰性结合配偶体时，它不具有T细胞接 合活性。换句话说，至少一个惰性结合配偶体通过阻断第一T细胞接合结构域结 合它的互补性配对物(第二T细胞接合结构域)，以及阻止两个结构域连接在一起 以具有T细胞接合活性来削弱第一T细胞接合结构域的功能。换句话说，惰性 结合配偶体结合第一T细胞接合结构域以使除非移除惰性结合配偶体，否则第一 T细胞接合结构域不结合第二T细胞接合结构域。就不结合来说，本申请不排除 非特异性结合或低水平的结合(例如≤1％、≤5％、≤10％)。
在一些实施方案中，惰性结合配偶体特异性结合T细胞接合结构域。
在一些实施方案中，至少一个惰性结合配偶体是VH结构域或VL结构域。 在一些实施方案中，当靶向T细胞接合剂中的T细胞接合结构域是VH结构域 时，惰性结合配偶体可为VL结构域，并且当第一T细胞接合结构域是VL结构 域时，惰性结合配偶体可为VH结构域。
如果第一组分包含靶向部分以及VL T细胞接合结构域和VH惰性结合配偶 体，那么在一些实施方案中，VH惰性结合配偶体具有的结合VL T细胞接合结 构域的平衡解离常数大于VL T细胞接合结构域对它的在第二组分中的配偶体 VH T细胞接合结构域的平衡解离常数。在一些实施方案中，当VH转换为VL 时，先前语句同等正确，并且反之亦然。
基于实施例中的经验证据，据信在构建体中使用惰性结合配偶体作为与T 细胞接合结构域的错误配对配偶体会导致构建体更稳定以及更易于制造。
D.裂解位点
作为概要，裂解位点可(i)由非所要细胞表达的酶裂解；(ii)通过在非所要细 胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；(iii)通过补体依赖性裂解反应来裂解；或(iv) 由通过与药剂中的靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位于非所要细胞的蛋 白酶裂解。在一些实施方案中，裂解位点是蛋白酶裂解位点。
裂解位点起使惰性结合配偶体从第一T细胞接合结构域释放的作用。裂解位 点可以不同方式起在非所要细胞的微环境中使惰性结合配偶体从第一T细胞接 合结构域T细胞表位释放的作用。视采用的策略而定，裂解可发生在非所要细胞 内部或非所要细胞外部。如果裂解发生在非所要细胞外部，那么T细胞接合结构 域可在不首先被内化至细胞中以及接合在经典抗原加工路径中的情况下被呈现。
在某些实施方案中，至少一个裂解位点可由非所要细胞表达的酶裂解。举例 来说，已知癌细胞会表达某些酶诸如蛋白酶，并且这些酶可在这个策略中用于裂 解靶向T细胞接合剂的裂解位点。作为非限制性实例，举例来说，组织蛋白酶B 尤其裂解FR、FK、VA和VR；组织蛋白酶D裂解PRSFFRLGK(SEQ ID NO：45)， ADAM28裂解KPAKFFRL(SEQ ID NO：1)、DPAKFFRL(SEQ ID NO：2)、 KPMKFFRL(SEQ ID NO：3)和LPAKFFRL(SEQ ID NO：4)；并且MMP2裂解 AIPVSLR(SEQ ID NO：46)、SLPLGLWAPNFN(SEQ ID NO：47)、HPVGLLAR (SEQ ID NO：48)、GPLGVRGK(SEQ ID NO：49)和GPLGLWAQ(SEQ ID NO： 50)。也可采用表1A或2A中所列的其它裂解位点。蛋白酶裂解位点和与癌症相 关的蛋白酶在本领域中是熟知的。Oncomine(www.oncomine.org)是一个在线癌基 因表达数据库，因此当本发明的药剂用于治疗癌症时，熟练人士可搜索 Oncomine数据库以鉴定将适于治疗给定癌症类型的特定蛋白酶裂解位点(或两个 蛋白酶裂解位点)。替代性数据库包括欧洲生物信息学研究所(EuropeanBioinformatic Institute)(www.ebi.ac.uk)，特别是(www.ebi.ac.uk/gxa)。蛋白酶数 据库包括PMAP(www.proteolysis.org)、ExPASy Peptide Cutter (ca.expasy.org/tools/peptidecutter)和PMAP.Cut DB(cutdb.burnham.org)。
在一些实施方案中，至少一个裂解位点可通过在非所要细胞内部的pH敏感 性裂解反应来裂解。如果靶向T细胞接合剂被内化至细胞中，那么裂解反应可发 生在细胞内部，并且可由在非所要细胞外部的微环境与细胞内部之间的pH变化 触发。具体来说，已知一些癌类型在癌细胞的内部中具有酸性环境。当非所要细 胞类型内部具有在特征上不同于细胞外微环境(诸如特别是糖萼)的pH时，可采 用这种方法。因为pH裂解可在溶菌酶的情况下发生在所有细胞中，所以当需要 时，在使用pH敏感性裂解位点时对靶向剂的选择可要求更具特异性。举例来说， 当使用pH敏感性裂解位点时，仅结合癌细胞或对癌细胞具有高度优选性的靶向 剂可为需要的(诸如像用于治疗肺癌的结合间皮素的抗体)。
在某些实施方案中，至少一个裂解位点可通过补体依赖性裂解反应来裂解。 一旦靶向T细胞接合剂结合非所要细胞，患者的补体级联即可被触发。在这种情 况下，通过使用对补体蛋白酶敏感的裂解位点，补体级联也可用于使惰性结合配 偶体从第一T细胞接合结构域裂解。举例来说，C1r和C1s以及C3转化酶(C4B，2a 和C3b，Bb)是丝氨酸蛋白酶。C3/C5和C5也是补体蛋白酶。也可使用甘露糖相 关结合蛋白(MASP)，即也涉及于补体级联中以及负责将C4和C2裂解成C4b2b (C3转化酶)的丝氨酸蛋白酶。举例来说并且不加限制，C1s裂解YLGRSYKV和 MQLGRX。MASP2据信会裂解SLGRKIQI。补体组分C2a和补体因子Bb据信 会裂解GLARSNLDE。
在一些实施方案中，至少一个裂解位点可由通过与靶向T细胞接合剂中的靶 向部分相同或不同的靶向部分来共定位于非所要细胞的蛋白酶裂解。举例来说， 任何蛋白酶都可通过使所述蛋白酶缀合于将所述蛋白酶递送至那个位置中的靶 向剂来同时引导至非所要细胞的微环境中。靶向剂可为本文所述的任何靶向剂。 蛋白酶可通过肽或化学接头来固定于靶向剂，并且可在结合于靶向剂时维持足够 酶活性。
在一些实施方案中，第一组分与第二组分两者均与惰性结合配偶体错误配 对。在一些实施方案中，第一组分中的蛋白酶裂解位点和第二组分中的蛋白酶裂 解位点是相同的。在其它实施方案中，第一组分中的蛋白酶裂解位点和第二组分 中的蛋白酶裂解位点是相同蛋白酶的不同裂解位点。在其它实施方案中，第一组 分中的蛋白酶裂解位点和第二组分中的蛋白酶裂解位点是不同蛋白酶的裂解位 点。在采用两种不同蛋白酶的一些实施方案中，非所要细胞表达两种蛋白酶。
在一些实施方案中，在第一组分中，在未裂解状态下，惰性结合配偶体干扰 VL T细胞接合结构域或VH T细胞接合结构域分别与它的在第二组分中的配偶 体VH T细胞接合结构域或VL T细胞接合结构域的特异性结合。在一些实施方 案中，在未裂解状态下，惰性结合配偶体抑制VL T细胞接合结构域或VH T细 胞接合结构域分别与它的在第二组分中的配偶体VH T细胞接合结构域或VL T 细胞接合结构域的结合，以致在未裂解状态下，VL T细胞接合结构域或VH T 细胞接合结构域分别与它的在第二组分中的配偶体VH T细胞接合结构域或VL T细胞接合结构域的解离常数(Kd)是在裂解状态下，VL T细胞接合结构域或VH T细胞接合结构域分别与它的在第二组分中的配偶体VH T细胞接合结构域或 VL T细胞接合结构域的Kd的至少100倍大。
E.接头
除裂解位点之外，接头可任选用于使靶向T细胞接合剂的单独部分连接在一 起。就接头来说，我们包括使这些部分连接在一起的任何化学部分。在一些实施 方案中，接头可为柔性接头。接头包括肽、聚合物、核苷酸、核酸、多糖和脂质 有机物质(诸如聚乙二醇)。在一些实施方案中，接头是肽接头。肽接头的长度可 为约2-100、10-50、或15-30个氨基酸。在一些实施方案中，肽接头的长度可为 至少10、至少15或至少20个氨基酸，以及至多80、至多90或至多100个氨基 酸。在一些实施方案中，接头是具有单一或重复GGGGS(SEQ ID NO：85)、GGGS (SEQ ID NO：86)、GS(SEQ ID NO：87)、GSGGS(SEQ ID NO：88)、GGSG(SEQ ID NO：89)、GGSGG(SEQ ID NO：90)、GSGSG(SEQ ID NO：91)、GSGGG(SEQ ID NO：92)、GGGSG(SEQ IDNO：93)和/或GSSSG(SEQ ID NO：94)序列的肽接头。
在一些实施方案中，接头是顺丁烯二酰亚胺(MPA)或SMCC接头。
F.制备方法
可使用遗传工程改造技术制备如本文所述的靶向T细胞接合剂。具体来说， 可在适合宿主中表达核酸以产生靶向T细胞接合剂。举例来说，可制备包含编码 靶向T细胞接合剂(包括它的所有组成部分和接头)的核酸序列的载体，并且那个 载体可用于转化适当宿主细胞。
视宿主的性质和将核酸引入宿主中的方式，以及需要的是游离型维持还是整 合而定，各种调控元件也可用于载体中。
也可采用化学连接技术，诸如使用顺丁烯二酰亚胺或SMCC接头。
在其中结合配偶体是适体的情况下，本领域普通技术人员将了解如何使适体 缀合于蛋白质，即T细胞接合结构域。可使用硫醇连接或其它标准缀合化学来缀 合适体。可使顺丁烯二酰亚胺、丁二酰亚胺或SH基团固定于适体以使它连接于 T细胞接合结构域。
II.药物组合物
靶向T细胞接合剂可用作药物组合物。因此，它们可连同药学上可接受的载 体一起制备。如果需要胃肠外施用，举例来说，靶向T细胞接合剂可提供于无菌 无热原注射用水或无菌无热原盐水中。或者，靶向T细胞接合剂可以用于在添加 无菌液体载体下进行再混悬的冻干形式提供。
III.治疗方法
A.降低非所要细胞、靶向免疫应答以及治疗癌症
本文所述的靶向T细胞接合剂可用于治疗患者的特征在于存在非所要细胞 的疾病的方法中，所述方法包括向所述患者施用包含至少一个靶向T细胞接合剂 和第二组分的两组分系统，如各组分已在以上各种实施方案中详细所述。另外， 本文所述的药剂也可用于靶向患者对非所要细胞的自身免疫应答的方法中，所述 方法包括向所述患者施用两组分系统。
向患者施用的药剂的量可由患者的医师选择以便提供有效治疗所论述的病 状的量。两组分系统的第一组分和第二组分可于同一制剂中施用，或在足够接近 以在患者中具有活性的时期内于两种不同制剂中施用。
接受治疗的患者可为人。患者可为灵长类动物或任何哺乳动物。或者，患者 可为动物诸如驯化动物(例如狗或猫)、实验室动物(例如实验室啮齿动物诸如小 鼠、大鼠或兔)、或在农业中重要的动物(诸如马、牛、绵羊或山羊)。
特征在于具有非所要细胞的病状可包括癌症。癌症可为实体或非实体恶性肿 瘤。癌症可为实体肿瘤，其中所述实体肿瘤不是淋巴瘤。癌症可为任何癌症，诸 如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、肾癌、黑素瘤、肺癌、前 列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、脑癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肝癌、 白血病、骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、急性淋 巴母细胞性白血病、慢性淋巴母细胞性白血病、淋巴组织增生性病症、骨髓发育 不良病症、骨髓增生性疾病或恶变前疾病。
两组分系统可单独或与其它形式的疗法(包括手术、放射或传统化学疗法)联 合施用。
实施例
实施例1.制备构建体
在实施例中制备和使用各种对照构建体与实验构建体两者。
A.单链scFv双特异性构建体
单链scFv构建体在本申请中用于充当阳性对照。构建体6245(SEQ ID NO： 165)被制备成包含抗EPCAM scFv和抗CD3E scFv的双特异性抗体。这个构建体 不包含与惰性结合配偶体的任何错误配对，并且具有活性靶向部分与T细胞接合 部分两者。
B.使用靶向scFv的预裂解两组分系统构建体
构建体6246(SEQ ID NO：166)和6247(SEQ ID NO：167)是两组分系统中的 互补性预裂解构建体。就预裂解来说，所述描述是指构建体具有功能性靶向部分 和未配对的T细胞接合部分(即未与惰性结合配偶体错误配对的接合部分和也尚 末与它的正确配偶体配对以形成功能性T细胞接合复合物的接合部分)。两个构 建体均包含抗EPCAM scFv。构建体6246包含抗CD3E VH结构域，而构建体 6247包含抗CD3E VL结构域。两个构建体都不含有惰性结合配偶体作为错误配 对配偶体。
C.使用靶向scFv和与惰性结合配偶体错误配对的T细胞接合结构域以及 用于使所述惰性结合配偶体释放的蛋白酶裂解位点的两组分系统构建体
构建体6248(SEQ ID NO：168)和6249(SEQ ID NO：169)是两组分系统中的 互补性构建体。两个构建体均包含抗EPCAM scFv。构建体6248包含抗CD3E VH结构域通过具有MMP2裂解位点(AIPVSLR(SEQ ID NO：46))的25聚体接头 连接于来自甘特如单抗的惰性结合配偶体VL结构域。构建体6249包含抗CD3E VL结构域通过具有MMP2裂解位点(AIPVSLR(SEQ IDNO：46))的25聚体接头 连接于来自克隆α-MUC1-1抗体的惰性结合配偶体VH结构域。
D.具有靶向部分和与惰性结合配偶体错误配对的T细胞接合结构域而无用 于使所述惰性结合配偶体释放的蛋白酶裂解位点的两组分系统构建体
构建体9327(SEQ ID NO：170)和9328(SEQ ID NO：171)是使用scFv靶向结 构域的两组分系统构建体；然而，它们不具有用于使充当错误配对部分的惰性 结合配偶体释放的蛋白酶裂解位点。两个构建体均包含用于使构建体靶向表达 EpCAM的非所要细胞的抗EpCAM scFv。构建体9327包含抗CD3E VH结构域 由不具有对应于实施例中使用的蛋白酶的蛋白酶裂解位点的25聚体接头连接于 来自甘特如单抗的惰性结合配偶体VL结构域。构建体9328包含抗CD3E VL结 构域由不具有对应于实施例中使用的蛋白酶的蛋白酶裂解位点的25聚体接头连 接于来自克隆α-MUC1-1抗体的惰性结合配偶体VH结构域。
因为这些构建体不具有对应于实施例中使用的蛋白酶的蛋白酶裂解位点，所 以惰性结合配偶体将保持连接于构建体，从而阻止两组分系统的两个潜在互补性 组分集合一起以产生活性抗CD3E scFv。
E.提供不同靶向部分的构建体
构建体9329(SEQ ID NO：172)和9330(SEQ ID NO：173)提供不同靶向部 分。这些构建体意图用于两组分系统中，其中一个构建体靶向癌细胞上的第一抗 原，并且第二构建体靶向相同癌细胞上的第二抗原。因为scFv和VHH靶向部分 的相对大小类似，所以这些构建体意图与具有抗CD3E VL结构域的可配对构建 体“混合和匹配”。
构建体9329包含抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3VHH序列。它也包含抗CD3E VH 结构域由包含MMP2裂解位点(AIPVSLR(SEQ ID NO：46))的25聚体接头连接于 来自甘特如单抗的惰性结合配偶体VL结构域。
构建体9330包含来自依坦希单抗的抗SDC1 scFv作为靶向部分。它也包含 抗CD3EVH结构域由包含MMP2裂解位点(AIPVSLR(SEQ ID NO：46))的25聚 体接头连接于来自甘特如单抗的惰性结合配偶体VL结构域。
F.VHH/scFv双特异性构建体
构建体9332(SEQ ID NO：174)和9333(SEQ ID NO：175)均是包含抗EGFR VHH部分和抗CD3E scFv部分的VHH/scFv双特异性构建体。这两个构建体不 包含任何惰性结合结构域。
G.使用靶向VHH结构域、与惰性结合配偶体错误配对的T细胞接合结构 域，以及包含用于使所述惰性结合配偶体释放的蛋白酶裂解位点的两组分系统 构建体
构建体9334(SEQ ID NO：176)和9335(SEQ ID NO：177)是使用靶向VHH结 构域的互补性两组分系统构建体。两个构建体均包含用于靶向表达EGFR的非 所要细胞的抗EGFRVHH结构域。构建体9334包含抗CD3E VH结构域由具有 MMP2裂解位点(AIPVSLR(SEQ IDNO：46))的25聚体接头连接于来自甘特如单 抗的惰性结合配偶体VL结构域。制备构建体9335，其包含抗CD3E VH结构域 由具有MMP2裂解位点(AIPVSLR(SEQ ID NO：46))的25聚体接头连接于来自克 隆α-MUC1-1抗体的惰性结合配偶体VH结构域。
因此，作为概述，构建体如表4中所提供，有更多细节和序列以上提供在
表1B中，其中IBD代表惰性结合配偶体。
Figure BDA0002897548060000371
Figure BDA0002897548060000381
H.所有构建体的制备和储存
构建体由DNA2.0(Newark，California)产生，并且在HEK293T细胞中表达。 单链寡核苷酸被设计来涵盖具有C末端六聚组氨酸标签以有助于下游纯化的指 定序列。寡核苷酸以化学方式合成，接着视序列特征而定使用多种专有方案加以 装配。在一些情况下，使用模板非依赖性PCR。在一些情况下，通过使用标准 限制酶消化和连接酶介导的装配来对较小序列进行装配以产生较大序列。接着将 经装配寡核苷酸克隆至标准大肠杆菌质粒中，并且通过在ABI硬件上进行自动 Sanger测序来验证完整双链序列。通过短暂转染来在150ml规模上在HEK293T 细胞中表达构建体，并且使用亲和色谱法纯化抗体片段。
在实验开始之前，使构建体在冰上解冻，并且在无菌条件下等分至低蛋白质 结合管中。将等分试样储存在-80℃下直至需要。在使用之前即刻使等分试样在 冰上解冻。等分试样持续最多五个冷冻-解冻循环加以使用。
实施例2.评估构建体制造
A.图5A：通过SDS PAGE和考马斯蓝染色来评估构建体
使抗体的等分试样在冰上解冻，并且在25mM Tris(pH 7.4)中稀释至2.0 mg/ml的最终浓度。如果构建体已比这个浓度更稀，那么省略稀释步骤。将适当 体积的6X凝胶样品缓冲液(0.5M Tris(pH 6.8)、12％(w/v)SDS、25％(v/v)甘油、 5mM EDTA、200mM N-乙基顺丁烯二酰亚胺)添加至各样品中，接着将其加热 至90℃，持续10分钟。
使10μg的各构建体在4-20％预浇制梯度凝胶上跑胶。一旦跑胶完成，即在 染色缓冲液(10％(v/v)乙酸、50％(v/v)甲醇和40％(v/v)dH2O)中使凝胶固定30 分钟，接着在考马斯蓝R-250(0.25％于染色缓冲液中)中染色2小时，随后在染 色缓冲液中脱除染色2至3小时，根据需要对缓冲液进行数次更换。在文件编制 之前将凝胶储存在7％(v/v)乙酸中。
结果显示于图5A中。这显示蛋白质已被制备，并且具有极高纯度，以及根 据它们的序列预测的正确分子质量。
B.图5B
在图5B中评估额外构建体。将用于图5A的方法用于5B。
构建体6245(不需要配对的双特异性构建体)、6248和6248(具有惰性结合 配偶体和MMP2裂解位点的可配对构建体)被充足产生。构建体6246和6247(不 含有惰性结合配偶体)在低产量下产生，并且据信是不稳定的。有可能的是VH/VL 配对对于片段稳定性是重要的。
因此，我们相信与惰性结合配偶体错误配对的构建体更稳定，并且更易于制 造。
C.产量
在图5B中评估的构建体的产量如下：
Figure BDA0002897548060000391
实施例3.评估与肿瘤细胞系混合以及用各种构建体处理的T细胞中的 IFNγ表达
测试单一构建体和混合构建体的制剂所达成的IFNγ表达以测试两组分系统 中的互补性构建体引发T细胞应答的能力。
IFNγ测定的一般背景：已知体外细胞因子标志物表达诸如IFNγ表达对于T 细胞应答具有预测价值，因此，预示体内结果。如Ghanekar等，Clin Diag Lab Immunol j8(3)：628-31(2001)中所述，CD8+T细胞中的通过细胞因子流式细胞计 量术(CFC)测量的IFNγ表达是细胞毒性T淋巴细胞的应答的替代标志。Ghanekar 在先前著作第628页处显示在由CD8+T细胞达成的IFNγ表达与CTL效应细胞 的活性之间存在强烈关联。Ghanekar在先前著作第630页处显示使用关于IFNγ 表达的数据允许更准确评估临床环境中的CD8+T细胞应答。同前，在第631页 处。这证明已知本文细胞因子表达测定对于体内和临床响应具有预测价值。尽管 因为存在多种用以评估IFNγ表达的方式，所以本文方法未遵循Ghanekar的精确方法步骤，但Ghanekar证明IFNγ表达是T细胞活性的代表。
T细胞系培养：细胞毒性T细胞用于IFNγ测定中，并且在含有4.0mM L- 谷氨酰胺、1％青霉素和链霉素、10％热失活FBS、1％热失活人血清(汇合的AB 血清，TCS Bioscience)和1，000U/ml IL-2的RPMI-1640培养基中培养。使细胞 保持在1-2x 106个细胞/毫升的密度下，并且通过每48小时替换四分之三的培养 基来补料。它们最初通过将10ug HLA-A*0201限定的病毒肽NLVPMVATV添 加至来自HLA-A*0201+供体的1000万个外周血液单核细胞(PBMC)中来产生。 在含有4.0mM L-谷氨酰胺、1％青霉素和链霉素、10％热失活FBS和1％热失活 人血清(汇合的AB血清，TCS Bioscience)的RPMI-1640培养基中培养细胞4天， 随后更换培养基以包括1000U/ml IL-2。T细胞主要是CD8+ T细胞，也伴有少 量CD4+T细胞。
肿瘤细胞系培养：使用以下细胞系：SW620、MCF-7、SNU398和U266。 在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养细胞，例外之处是 SNU398和U266细胞，其在含有10％热失活FBS、2mM谷氨酰胺和1％青霉素 /链霉素溶液的RPMI-1640培养基中加以培养。SW620细胞源于人结肠癌转移物。 MCF-7细胞源于人乳腺癌转移部位(胸腔积液)。SNU398细胞在1990年源于人间 变性肝细胞癌患者。U266细胞源于分泌IgE的人男性多发性骨髓瘤患者。
构建体对IFNγ产生的影响：将粘附细胞系涂铺在96孔板(每孔100,000个 细胞)中至少16小时。在实验当天通过在400xg下离心培养物5分钟以及将细 胞再混悬于T细胞培养基中来涂铺非粘附细胞(每孔100,000个细胞)。添加于T 细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞培养基中配制构建体，并且添 加至培养物中。当使用构建体的混合物时，将这些构建体在添加至培养物中之前 预先混合。培养中的最终体积是每孔200μl。在37、℃5％CO2和100％相对湿度 下孵育培养物24小时。在400xg下离心培养物5分钟，并且将上清液吸出并放 置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ进行分析。
IFNγ ELISA：使用eBioscience Ready-Set-Go ELISA试剂盒(目录号 88-7316-88)或BioLegend人IFNγ ELISA Max试剂盒(目录号430106)，根据制造 商说明书来测定组织培养上清液中的IFNγ水平。
A.图6
评估各种单一构建体和混合构建体所达成的IFNγ。除如所指示之外，使用 以上提供的IFNγ产生和ELISA测定方案。在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素 溶液的DMEM中培养SW620细胞。在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每 孔100,000个细胞)中。在实验当天，吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基 中的每孔20,000个T细胞。在T细胞培养基中配制构建体(1μg/ml的最终浓度)， 并且添加至培养物中。对照是PHA-M(最终浓度10μg/ml)；SW620细胞加T细 胞，不具有添加物；以及SW620细胞，不具有T细胞或其它添加物。各条件一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在37℃5％CO2和100％相对 湿度下孵育培养物24小时。在400xg下离心培养物5分钟，并且将上清液吸出 并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ进行分析。
评估各种单一构建体和混合构建体所达成的IFNγ。评估单一构建体，其中 构建体6425(针对EpCAM和CD3E的双特异性scFv)充当阳性对照。在T细胞 与SW620癌细胞一起、单独SW620癌细胞、以及用植物血球凝集素(PHA)非特 异性刺激T细胞的情况下评估基线IFNγ以显示T细胞进行IFNγ表达的能力。
在SW620肿瘤细胞的情况下，在1μg/ml的最终浓度下使用构建体。将培养 物孵育4小时，并且测定上清液中的IFNγ。提供三重测定的平均值±标准偏差。 对各种单一构建体和混合构建体进行评估。将培养物孵育4小时，并且测定上清 液中的IFNγ。提供三重测定的平均值±标准偏差。在1μg/ml的最终浓度下使用 构建体。将培养物孵育24小时，并且测定上清液中的IFNγ。提供三重测定的平 均值±标准偏差。
构建体6245充当阳性对照，因为这个构建体具有靶向抗EpCAM scFv与抗 CD3EscFv两者；因此，它是不需要配对以达成T细胞接合(TCE)活性的双特异 性构建体。
相比于当单独施用时，当一起配对时，构建体6248和6249(两组分系统的 配对物，各自具有由具有MMP2裂解位点的接头分别与抗CD3E T细胞接合VL 或VH分隔的惰性结合配偶体)显示更多IFNγ表达。相比于6248和6249的组合， 6246和6247(两组分系统的配对物，不具有与惰性结合配偶体的任何错误配对或 为它们进行缔合所需的蛋白酶裂解位点)的组合产生低得多的响应，可能是因为 6246和6247在制造期间未由惰性结合配偶体保护，所述惰性结合配偶体据信会 分别使各构建体中未配对的抗CD3E VH结构域和VL结构域稳定。因此，我们 相信相比于具有未配对的抗CD3E VH结构域或VL结构域的预裂解构建体，具 有惰性结合配偶体的错误配对的构建体更稳定，并且更易于制造。
B.图7
评估各种单一构建体和混合构建体所达成的IFNγ。在含有10％FBS和1％ 青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养SW620细胞。在实验之前一天，将细胞涂 铺在96孔板(每孔100,000个细胞)中。在实验当天，吸出并丢弃培养基。添加于 T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞培养基中配制构建体(1μg/ml 的最终浓度)，并且添加至培养物中。当使用构建体的混合物时，将这些构建体 在添加至培养物中之前预先混合(构建体的最终浓度是每种构建体1μg/ml)。对照 是PHA-M(最终浓度10μg/ml)；SW620细胞加T细胞，不具有添加物；以及SW620 细胞，不具有T细胞或其它添加物。各条件一式三份操作。培养中的最终体积是 每孔200μl。在37℃、5％CO2和100％相对湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物5分钟，并且将上清液吸出并放置在单独板中。在-20℃下储存上 清液直至对IFNγ进行分析。提供三重测定的平均值±标准偏差。
构建体6245充当阳性对照，因为这个构建体具有靶向抗EpCAM scFv与抗 CD3EscFv两者；因此，它是不需要配对以达成T细胞接合(TCE)活性的双特异 性构建体。
相比于当单独施用时，当一起配对时，构建体6248和6249(两组分系统的 配对物，各自具有由具有MMP2裂解位点的接头分别与抗CD3E T细胞接合VL 或VH分隔的惰性结合配偶体)显示更多IFNγ表达。相比于6248和6249的组合， 6246和6247(两组分系统的配对物，不具有任何结合结构域或为它们进行缔合所 需的蛋白酶裂解位点)的组合产生低得多的响应，可能是因为6246和6247在制 造期间未由惰性结合配偶体保护，所述惰性结合配偶体据信会分别使各构建体中 未配对的抗CD3E VH结构域和VL结构域稳定。因此，我们相信相比于具有未 配对的抗CD3E VH结构域或VL结构域的构建体，具有惰性结合配偶体的错误配对的构建体更稳定，并且更易于制造。
C.图8
在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养SW620细胞。 在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每孔100，000个细胞)中。在实验当天， 吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞 培养基中配制构建体(最终浓度在1ng/ml至1μg/ml的范围内)，并且添加至培养 物中。当使用构建体的混合物时，将这些构建体在添加至培养物中之前预先混合 (构建体的最终浓度在每种构建体1ng/ml至1μg/ml的范围内)。对照是SW620 细胞加T细胞，不具有添加物；以及SW620细胞，不具有T细胞或其它添加物。 各条件一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在37℃、5％CO2和100％相对湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物5分钟，并且将上清液 吸出并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ进行分析。三重测定 的平均值±标准偏差显示于图8中。
构建体6245充当阳性对照，并且评估配对构建体6248和6249。对照构建 体与配对两组分系统两者均显示IFNγ表达。这证明惰性VL结构域和VH结构 域分别从构建体6248和6249裂解，并且这两个构建体配对以产生能够接合T 细胞的完整抗CD3E scFv。
相比于双特异性6245构建体，两组分系统(6248和6249)具有较低效能，但 仍然在可接受范围内，并且可实际上在避免副作用方面提供给药优势。
D.图9A-B
在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养SW620细胞。 在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每孔100，000个细胞)中。在实验当天， 吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞 培养基中配制构建体(最终浓度在1ng/ml至1μg/ml的范围内)，并且添加至培养 物中。当使用构建体的混合物时，将这些构建体在添加至培养物中之前预先混合 (构建体的最终浓度在每种构建体10ng/ml至10μg/ml的范围内)。对照是PHA-M (最终浓度10μg/ml)；SW620细胞加T细胞，不具有添加物；以及SW620细胞， 不具有T细胞或其它添加物。各条件一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在37℃5％CO2和100％相对湿度下孵育培养物24小时。在400x g 下离心培养物5分钟，并且将上清液吸出并放置在单独板中。在-200℃下储存上 清液直至对IFNγ进行分析。三重测定的平均值±标准偏差显示于图9A-B中。
对照构建体与配对两组分系统两者均显示IFNγ表达。这证明惰性VL结构 域和VH结构域分别从构建体6248和6249裂解，并且这两个构建体配对以产生 能够接合T细胞的完整抗CD3E scFv。
相比于双特异性6245构建体，两组分系统(6248和6249)具有较低效能，但 仍然在可接受范围内，并且可实际上在避免副作用方面提供给药优势。
E.图10
在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养SW620细胞。 在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每孔100，000个细胞)中。在实验当天， 吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞 培养基中配制构建体(1μg/ml的最终浓度)，并且添加至培养物中。当使用构建体 的混合物时，将这些构建体在添加至培养物中之前预先混合(构建体的最终浓度 是每种构建体1μg/ml)。对照是PHA-M(最终浓度10μg/ml)；SW620细胞加T 细胞，不具有添加物；以及SW620细胞，不具有T细胞或其它添加物。各条件 一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在37℃、5％CO2和100％相对 湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物5分钟，并且将上清液吸出 并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ进行分析。图10提供三 重测定的平均值±标准偏差。
图10显示仅具有抗CD3E scFv的VH或VL的构建体所达成的IFNγ表达水 平极低；然而，具有完全scFv的阳性双特异性构建体(9332和9333)显示较高IFNγ 表达水平。
F.化学计量评估两组分系统的互补性构建体(图11)
将两组分系统的互补性构建体(6248和6249)以不同比率一起添加，如图11 中所示。
在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养SW620细胞。 在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每孔100,000个细胞)中。在实验当天， 吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。以指定比 率在T细胞培养基中预先混合构建体，并且添加至培养物中(构建体的最终浓度 是总计1μg/ml)。将两种组分6248和6249(一种含有CD3活化部分的VH结构域 (6249)，并且另一种含有CD3活化部分的VL结构域(6248))在比率100∶0、90∶10、 75∶25、50∶50、25∶75、10∶90和0∶100下预先混合。将两种组分的混合物添加至 100，000个非所要肿瘤细胞和20,000个T细胞中。对照是PHA-M(最终浓度10 μg/ml)；SW620细胞加T细胞，不具有添加物；以及SW620细胞，不具有T细 胞或其它添加物。各条件一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在 37℃、5％CO2和100％相对湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物 5分钟，并且将上清液吸出并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ 进行分析。
图11中的结果证明T细胞活化随着两种组分的比率达到平衡而增加。当存 在过量的含有CD3活化部分的VH结构域的组分(6249)或含有CD3活化部分的 VL结构域的另一组分(6248)时，T细胞活化降低，因为活化依赖于CD3活化部 分的VH与VL两者集合一起。因此，当提供的所有或几乎所有构建体具有一种 类型或另一类型时，IFNγ表达水平低得多。最高IFNγ表达水平对应于其中提供 等量的两种互补性构建体中的各者的情况。这提供进一步证据证明IFNγ表达由 抗CD3E scFv的两个半部从两组分系统中的两种构建体集合一起引起。
G.使用MCF-7细胞(图12)
图12显示在MCF-7肿瘤细胞系的情况下进行的实验。在含有10％FBS和 1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养MCF-7细胞。在实验之前一天，将细胞 涂铺在96孔板(每孔100,000个细胞)中。在实验当天，吸出并丢弃培养基。添加 于T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞培养基中配制构建体(1μg/ml 的最终浓度)，并且添加至培养物中。对照是PHA-M(最终浓度10μg/ml)；MCF-7 细胞加T细胞，不具有添加物；以及MCF-7细胞，不具有T细胞或其它添加物。 各条件一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在37℃、％CO2和100％ 相对湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物5分钟，并且将上清液 吸出并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ进行分析。
实现与使用的其它细胞系类似的结果。在图12中，相比于仅包含来自抗 CD3E抗体的VH结构域或VL结构域的任何单一组分，阳性对照构建体6245、 9332和9333(各自具有完全抗CD3E scFv)显示高得多的IFNγ表达水平。图12 也提供单独MCF-7细胞或用PHA非特异性刺激的T细胞的基线IFNγ表达水平。
H.图13-14
在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养SW620细胞。 在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每孔100,000个细胞)中。在实验当天， 吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞 培养基中配制构建体(1μg/ml的最终浓度)，并且添加至培养物中。当使用构建体 的混合物时，将这些构建体在添加至培养物中之前预先混合(构建体的最终浓度 是每种构建体1μg/ml)。对照是PHA-M(最终浓度10μg/ml)；SW620细胞加T 细胞，不具有添加物；以及SW620细胞，不具有T细胞或其它添加物。各条件 一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在37℃、5％CO2和100％相对 湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物5分钟，并且将上清液吸出 并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ进行分析。
在图13中，数据显示6248和6249的两组分系统如所预期起作用，因为这 些构建体具有可通过MMP2裂解位点裂解的惰性结合配偶体和可配对抗CD3E 可变结构域(6248中的一个VH和6249中的一个VL)。构建体9327和9328不产 生强烈IFNγ信号，因为这些构建体在惰性结合配偶体与抗CD3E可变结构域之 间都不具有裂解位点。
构建体9327和6248不显示任何活性，因为它们均具有抗CD3E抗体的VH 结构域，并且不能产生功能性抗CD3E scFv；另外，9327不具有裂解位点。9327 和6249显示极低活性水平，因为9327不具有裂解位点，并且6249具有裂解位 点，但如果发生某一低水平的自发裂解，那么两者共同可产生抗CD3E scFv。
在图14中，构建体9334和9335的配对(提供用以靶向EFGR的双互补位方 法，其中靶向抗体scFv针对EGFR上的不同表位)不产生IFNγ信号。据信EGFR 上的表位对于两个抗CD3E可变结构域到达彼此来说相隔太远，或表位太接近并 产生关于在抗体侧上结合的空间位阻。然而，测试双互补位组合是极其合理的。 针对EGFR的另一抗体可被鉴定，并且在这个方法中对组合进行测试。
图14也显示靶向在相同癌细胞上表达的两种不同蛋白质。构建体6248结合EpCAM，并且与结合EGFR的9335成功配对。构建体6249也结合EpCAM，并 且与9334成功配对。这确定可靶向癌细胞上的不同分子，从而又为本文所述的 两组分系统的一些实施方案提供另一层特异性。这也提供进一步证据表明组分 9335和9334在其它情形下起作用，并且进一步表明这些组分在上述它们彼此组 合的情况下彼此太接近或太远。
在这个图中，9334和6249的组合提供适用信息，从而证明可实现双重靶向， 因为构建体9334靶向EGFR，并且9249靶向EpCAM。
不预期9334和6248的组合具有活性，因为两种构建体均包含来自抗CD3E 抗体的VH，并且两种构建体都不包含来自那个抗体的VL。
I.图15
在含有10％FBS、2mM谷氨酰胺和1％青霉素/链霉素溶液的RPMI1640中 培养SNU398细胞。在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每孔100,000个细 胞)中。在实验当天，吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基中的每孔20,000 个T细胞。在T细胞培养基中配制构建体(1μg/ml的最终浓度)，并且添加至培 养物中。当使用构建体的混合物时，将这些构建体在添加至培养物中之前预先混 合(构建体的最终浓度是每种构建体1μg/ml)。对照是PHA-M(最终浓度10 μg/ml)；SNU398细胞加T细胞，不具有添加物；以及SNU398细胞，不具有T 细胞或其它添加物。各条件一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在 37℃、5％CO2和100％相对湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物 5分钟，并且将上清液吸出并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ 进行分析。
图15显示添加蛋白酶抑制剂会使具有蛋白酶裂解位点的两组分系统(构建体6248和6249)所达成的IFNγ表达降低。蛋白酶抑制剂不影响6245双特异性构建 体，因为裂解和配对不为活性所需。
J.图16
在含有10％FBS和1％青霉素/链霉素溶液的DMEM中培养SW620细胞。 在实验之前一天，将细胞涂铺在96孔板(每孔100,000个细胞)中。在实验当天， 吸出并丢弃培养基。添加于T细胞培养基中的每孔20,000个T细胞。在T细胞 培养基中配制构建体(1μg/ml的最终浓度)，并且添加至培养物中。当使用构建体 的混合物时，将这些构建体在添加至培养物中之前预先混合(构建体的最终浓度 是每种构建体1μg/ml)。对照是PHA-M(最终浓度10μg/ml)；SW620细胞加T 细胞，不具有添加物；以及SW620细胞，不具有T细胞或其它添加物。各条件 一式三份操作。培养中的最终体积是每孔200μl。在37℃、5％CO2和100％相对 湿度下孵育培养物24小时。在400x g下离心培养物5分钟，并且将上清液吸出 并放置在单独板中。在-20℃下储存上清液直至对IFNγ进行分析。
9335和6248的功能性组合显示不同种类的抗体片段可分别组合在第一组分 和第二组分中。9335采用抗EGFR VHH作为靶向部分，并且6248采用抗EPCAM scFv作为靶向部分。
实施例4.使用两组分系统体内靶向B细胞淋巴瘤
向患有淋巴瘤的患者施用包含第一组分和第二组分的两组分系统。第一组分 包含利妥昔单抗或抗CD22抗体作为靶向部分、来自结合CD3的抗体的VH结 构域作为T细胞接合结构域、VL结构域作为惰性结合配偶体、以及ADAM28 裂解位点KPAKFFRL。第二组分也包含利妥昔单抗或抗CD22抗体作为靶向部 分、来自结合CD3的抗体的互补性VL结构域作为T细胞接合结构域、VH作为 惰性结合配偶体、以及ADAM28裂解位点KPAKFFRL。第一组分的来自结合 CD3的抗体的作为T细胞接合结构域的VH结构域和第二组分的来自结合CD3 的抗体的作为T细胞接合结构域的VL结构域在不结合于惰性结合配偶体时能够 彼此结合，并且具有接合T细胞的活性。
患者用靶向所有B细胞(健康B细胞和恶性B细胞)的药剂输注。在结合恶 性细胞后，药剂与蛋白酶接触，借此，蛋白酶识别结构域的裂解使惰性结合配偶 体从第一T细胞接合结构域与第二T细胞接合结构域两者释放。
由于存在第一T细胞接合结构域和第二T细胞接合结构域的复合物以及所 述复合物具有活性，所以由现时活化的两组分系统复合物结合的恶性B细胞吸 引宿主免疫系统以达成由T细胞进行的细胞溶解。
实施例5.两组分系统的特定实施方案
制备根据表3的选自系统A-E的两组分系统，并且向患有癌症的患者施用。 如果条目被描述为任选，那么表格的所述行描述具有或不具有那个条目的两种两 组分系统。
Figure BDA0002897548060000501
Figure BDA0002897548060000511
Figure BDA0002897548060000521
实施例6.实施方案
以下编号条目提供如本文所述的实施方案，但此处叙述的实施方案不具有限 制性。
条目1.一种用于治疗特征在于存在非所要细胞的病状的两组分系统，其包 含：
a.包含靶向T细胞接合剂的第一组分，所述靶向T细胞接合剂包含：
i.能够靶向所述非所要细胞的第一靶向部分；
ii.当结合第二T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性的第一T细胞 接合结构域，其中所述第二T细胞接合结构域不是所述第一组分的一部分；
iii.所述第一T细胞接合结构域的第一惰性结合配偶体，其结合所述第一T 细胞接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所述第一T细胞接合结 构域不结合所述第二T细胞接合结构域；和
iv.分隔所述第一T细胞接合结构域和所述第一惰性结合配偶体的裂解位 点，其中所述裂解位点是：
(1)由所述非所要细胞表达的酶裂解；
(2)通过在所述非所要细胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；
(3)通过补体依赖性裂解反应来裂解；或
(4)由通过与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位 于所述非所要细胞的蛋白酶裂解，
b.包含第二T细胞接合结构域的第二组分，所述第二T细胞接合结构域在 结合所述第一T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性，
其中所述第一T细胞接合结构域和所述第二T细胞接合结构域在都不结合 于惰性结合配偶体时能够结合。
条目2.如条目1所述的两组分系统，其中所述第二组分还包含能够靶向所 述非所要细胞的第二靶向部分。
条目3.如条目1-2中的任一者所述的两组分系统，其中所述第二组分还包 含所述第二T细胞接合结构域的第二惰性结合配偶体，其结合所述第二T细胞 接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所述第二T细胞接合结构域 不结合所述第一T细胞接合结构域，和
a.分隔所述第二T细胞接合结构域和所述第二惰性结合配偶体的裂解位点， 其中所述裂解位点是：
i.由所述非所要细胞表达的酶裂解；
ii.通过在所述非所要细胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；
iii.通过补体依赖性裂解反应来裂解；或
iv.由通过与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位于 所述非所要细胞的蛋白酶裂解，
其中对所述裂解位点的裂解导致丧失所述惰性结合配偶体以及与所述两组 分系统的所述第一T细胞接合结构域互补。
条目4.如条目1-3中的任一者所述的两组分系统，其中所述第一靶向部分 和所述第二靶向部分是相同的。
条目5.如条目1-3中的任一者所述的两组分系统，其中所述第一靶向部分 和所述第二靶向部分是不同的。
条目6.如条目1-5中的任一者所述的两组分系统，其中所述第一裂解位点 和所述第二裂解位点是相同的。
条目7.如条目1-5中的任一者所述的两组分系统，其中所述第一裂解位点 和所述第二裂解位点是不同的。
条目8.如条目1-7中的任一者所述的两组分系统，其中至少一个裂解位点 是蛋白酶裂解位点。
条目9.如条目1-8中的任一者所述的两组分系统，其中至少一个裂解位点 能够在所述非所要细胞外部被裂解。
条目10.如条目1-9中的任一者所述的两组分系统，其中至少一种由所述非 所要细胞表达的酶是蛋白酶。
条目11.如条目1-10中的任一者所述的两组分系统，其中至少一个惰性结 合配偶体特异性结合所述T细胞接合结构域。
条目12.如条目1-11中的任一者所述的两组分系统，其中至少一个惰性结 合配偶体是VH结构域或VL结构域。
条目13.如条目1-12中的任一者所述的两组分系统，其中
a.当所述T细胞接合结构域是VH结构域时，所述惰性结合配偶体是VL 结构域，并且
b.当所述T细胞接合结构域是VL结构域时，所述惰性结合配偶体是VH 结构域。
条目14.如条目1-13中的任一者所述的两组分系统，其中至少一个靶向部 分是抗体或其功能性片段。
条目15.如条目1-14中的任一者所述的两组分系统，其中一旦至少一个裂 解位点已被裂解，所述至少一个惰性结合配偶体即能够解离，并且在解离之后， 所述两个T细胞接合结构域能够彼此结合并展现T细胞接合活性。
条目16.如条目1-15所述的两组分系统，其中一个T细胞接合结构域是VH 结构域，并且另一T细胞接合结构域是VL结构域。
条目17.一种包含第一靶向T细胞接合剂的用于在用于治疗特征在于存在 非所要细胞的病状的两组分系统中使用的组分，所述第一靶向T细胞接合剂包 含：
a.能够靶向所述非所要细胞的靶向部分；
b.当结合第二T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性的第一T细胞 接合结构域，其中所述第二T细胞接合结构域不是所述第一靶向T细胞接合剂 的一部分；
c.所述第一T细胞接合结构域的惰性结合配偶体，其结合所述第一T细胞 接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所述第一T细胞接合结构域 不结合所述第二T细胞接合结构域；和
d.分隔所述第一T细胞接合结构域和所述惰性结合配偶体的裂解位点，其 中所述裂解位点是：
i.由所述非所要细胞表达的酶裂解；
ii.通过在所述非所要细胞内部的pH敏感性裂解反应来裂解；
iii.通过补体依赖性裂解反应来裂解；或
iv.由通过与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位于 所述非所要细胞的蛋白酶裂解，
其中对所述裂解位点的裂解导致丧失所述惰性结合配偶体以及允许与不是 所述药剂的一部分的所述第二T细胞接合结构域互补。
条目18.如条目17所述的用于在两组分系统中使用的组分，其中所述裂解 位点是蛋白酶裂解位点。
条目19.如条目17-18中的任一者所述的用于在两组分系统中使用的组分， 其中所述裂解位点能够在所述非所要细胞外部被裂解。
条目20.如条目17-19中的任一者所述的用于在两组分系统中使用的组分， 其中由所述非所要细胞表达的所述酶是蛋白酶。
条目21.如条目17-20中的任一者所述的用于在两组分系统中使用的组分， 其中至少一个惰性结合配偶体特异性结合所述T细胞接合结构域。
条目22.如条目17-21中的任一者所述的用于在两组分系统中使用的组分， 其中所述惰性结合配偶体是VH结构域或VL结构域。
条目23.如条目17-22中的任一者所述的用于在两组分系统中使用的组分， 其中
a.当所述T细胞接合结构域是VH结构域时，所述惰性结合配偶体是VL 结构域，并且
b.当所述T细胞接合结构域是VL结构域时，所述惰性结合配偶体是VH 结构域。
条目24.如条目17-23中的任一者所述的用于在两组分系统中使用的组分， 其中所述靶向部分是抗体或其功能性片段。
条目25.一组核酸分子，其编码如条目1-16中的任一者所述的两组分系统 的所述第一组分和所述第二组分。
条目26.一种核酸分子，其编码如条目17-24中的任一者所述的用于在两组 分系统中使用的组分。
条目27.一种治疗患者的特征在于存在非所要细胞的疾病的方法，其包括向 所述患者施用如条目1-16中的任一者所述的两组分系统。
条目28.一种靶向患者的对非所要细胞的免疫应答的方法，其包括向所述患 者施用如条目1-16中的任一者所述的两组分系统。
条目29.如条目27-28中的任一者所述的方法，其中所述非所要细胞是癌细 胞。
条目30.如条目29所述的方法，其中癌症是以下中的任一者：乳腺癌、卵 巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、肾癌、黑素瘤、肺癌、前列腺癌、睾丸 癌、甲状腺癌、脑癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肝癌、白血病、骨 髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞性 白血病、慢性淋巴母细胞性白血病、淋巴组织增生性病症、骨髓发育不良病症、 骨髓增生性疾病或恶变前疾病。
等效物
前述书面说明书被视为足以使得本领域技术人员能够实施实施方案。先前描 述和实施例详述某些实施方案，并且描述由本发明者预期的最佳模式。然而，应 了解无论前述事项可如何详细出现在正文中，实施方案都可以许多方式实施，并 且应根据随附权利要求及其任何等效物加以解释。
如本文所用，术语约是指数值，包括例如整数、分数和百分比，无论是否明 确指示。术语约通常是指本领域普通技术人员将视为等效于所叙述值(例如具有 相同功能或结果)的一定范围的数值(例如所叙述范围的+/-5-10％)。当诸如至少和 约的术语位于一列数值或范围之前时，所述术语修饰所述一列中提供的所有值或 范围。在一些情况下，术语约可包括向最接近的有效数字进行舍入的数值。
序列表
<110> 雷维托普有限公司（REVITOPE LIMITED）
<120> 用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的
功能性抗体片段互补作用
<130> 2014010US01
<140> PCT/US2016/062748
<141> 2016-11-18
<150> US62/257,552
<151> 2015-11-19
<150> US62/270,907
<151> 2015-12-22
<160> 177
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 8
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Ile Met Ala Met Phe Phe Ile Met
1 5
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> ADAM28裂解位点
<400> 29
Ile Pro Ala Met Phe Phe Ile Met
1 5
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> ADAM28裂解位点
<400> 30
Ile Pro Ala Met Phe Phe Tyr Met
1 5
<210> 31
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 31
Phe Arg
1
<210> 32
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 32
Phe Lys
1
<210> 33
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 33
Val Ala
1
<210> 34
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 34
Val Arg
1
<210> 35
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> X = Cit
<400> 35
Val Xaa
1
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 36
His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu
1 5
<210> 37
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 37
Ser Leu Leu Lys Ser Arg Met Val Pro Asn Phe Asn
1 5 10
<210> 38
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 38
Ser Leu Leu Ile Ala Arg Arg Met Pro Asn Phe Asn
1 5 10
<210> 39
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 39
Lys Lys Phe Ala
1
<210> 40
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 40
Ala Phe Lys Lys
1
<210> 41
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶B裂解位点
<400> 41
Gln Gln Gln
1
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶D裂解位点
<400> 42
Pro Arg Ser Phe Phe Arg Leu Gly Lys
1 5
<210> 43
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶D裂解位点
<400> 43
Ser Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr
1 5 10
<210> 44
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织蛋白酶K裂解位点
<400> 44
Gly Gly Pro
1
<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP1裂解位点
<400> 45
Ser Leu Gly Pro Gln Gly Ile Trp Gly Gln Phe Asn
1 5 10
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP2裂解位点
<400> 46
Ala Ile Pro Val Ser Leu Arg
1 5
<210> 47
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP2裂解位点
<400> 47
Ser Leu Pro Leu Gly Leu Trp Ala Pro Asn Phe Asn
1 5 10
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP2裂解位点
<400> 48
His Pro Val Gly Leu Leu Ala Arg
1 5
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP2裂解位点
<400> 49
Gly Pro Leu Gly Val Arg Gly Lys
1 5
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP2裂解位点
<400> 50
Gly Pro Leu Gly Leu Trp Ala Gln
1 5
<210> 51
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP3裂解位点
<400> 51
Ser Thr Ala Val Ile Val Ser Ala
1 5
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP7裂解位点
<400> 52
Gly Pro Leu Gly Leu Ala Arg Lys
1 5
<210> 53
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP7裂解位点
<400> 53
Arg Pro Leu Ala Leu Trp Arg Ser
1 5
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP7裂解位点
<400> 54
Ser Leu Arg Pro Leu Ala Leu Trp Arg Ser Phe Asn
1 5 10
<210> 55
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP2/9裂解位点
<400> 55
Gly Ile Leu Gly Val Pro
1 5
<210> 56
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP2/9裂解位点
<400> 56
Gly Pro Leu Gly Ile Ala Gly Gln
1 5
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP9裂解位点
<400> 57
Ala Val Arg Trp Leu Leu Thr Ala
1 5
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP9裂解位点
<400> 58
Pro Leu Gly Leu Tyr Ala Leu
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP9裂解位点
<400> 59
Gly Pro Gln Gly Ile Ala Gly Gln Arg
1 5
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP9裂解位点
<400> 60
Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg
1 5
<210> 61
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP11裂解位点
<400> 61
Ala Ala Ala Thr Ser Ile Ala Met
1 5
<210> 62
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP11裂解位点
<400> 62
Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu
1 5
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP13裂解位点
<400> 63
Gly Pro Gln Gly Leu Ala Gly Gln Arg Gly Ile Val
1 5 10
<210> 64
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP14裂解位点
<400> 64
Pro Arg His Leu Arg
1 5
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MMP14裂解位点
<400> 65
Pro Gln Gly Leu Leu Gly Ala Pro Gly Ile Leu Gly
1 5 10
<210> 66
<400> 66
000
<210> 67
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> PSA / KLK3
<400> 67
His Ser Ser Lys Leu Gln
1 5
<210> 68
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> PSA / KLK3
<400> 68
Ser Ser Lys Leu Gln
1 5
<210> 69
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> KLK4
<400> 69
Arg Gln Gln Arg
1
<210> 70
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> TMPRSS2
<400> 70
Gly Gly Arg
1
<210> 71
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 豆荚蛋白
<400> 71
Ala Ala Asn
1
<210> 72
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> ST14 (蛋白裂解酶)
<400> 72
Gln Ala Arg
1
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> C1s裂解位点
<400> 73
Tyr Leu Gly Arg Ser Tyr Lys Val
1 5
<210> 74
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> C1s裂解位点
<220>
<221> unsure
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸
<400> 74
Met Gln Leu Gly Arg Xaa
1 5
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> MASP2裂解位点
<400> 75
Ser Leu Gly Arg Lys Ile Gln Ile
1 5
<210> 76
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> C2a和Bb裂解位点
<400> 76
Gly Leu Ala Arg Ser Asn Leu Asp Glu
1 5
<210> 77
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> uPa裂解位点
<400> 77
Thr Tyr Ser Arg Ser Arg Tyr Leu
1 5
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> uPa裂解位点
<400> 78
Lys Lys Ser Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Ser Val
1 5 10
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> uPa裂解位点
<400> 79
Asn Ser Gly Arg Ala Val Thr Tyr
1 5
<210> 80
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> uPa裂解位点
<400> 80
Ala Phe Lys
1
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 组织型纤溶酶原活化因子(tPA)
<400> 81
Gly Gly Ser Gly Gln Arg Gly Arg Lys Ala Leu Glu
1 5 10
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> ADAM10
<400> 82
Pro Arg Tyr Glu Ala Tyr Lys Met Gly Lys
1 5 10
<210> 83
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> ADAM12
<400> 83
Leu Ala Gln Ala Phe
1 5
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> ADAM17
<400> 84
Glu His Ala Asp Leu Leu Ala Val Val Ala Lys
1 5 10
<210> 85
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 85
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 86
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 86
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 87
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 87
Gly Ser
1
<210> 88
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 88
Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 89
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 89
Gly Gly Ser Gly
1
<210> 90
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 90
Gly Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 91
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 91
Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 92
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 92
Gly Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 93
Gly Gly Gly Ser Gly
1 5
<210> 94
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 柔性氨基酸接头(可以重复方式呈现)
<400> 94
Gly Ser Ser Ser Gly
1 5
<210> 95
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体(紧密结合剂，具有Kd=2.4 nM)
<400> 95
ugccgcuaua augcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 96
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 96
uggcgcuaaa uagcacggaa auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 97
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 97
ugcuaguaua ucgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 98
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 98
ugccgccaua ucacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 99
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 99
uuccgcugua uaacacggac uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 100
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 100
ugucgcucua uugcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 101
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 101
ugcugcuuua ucccacauau uuuuuccccu cauaacaaua uuucuccccc c 51
<210> 102
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (47)..(47)
<223> n是a、c、g或u
<400> 102
ugcngcuaua ucgcncguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucnangcc g 51
<210> 103
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 103
ugcaaagaaa acgcacguau uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 104
<211> 53
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 104
ugcaucacua ucgaaccuau uuaauccacc aaaauaauug caaguccaua cuc 53
<210> 105
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(6)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (17)..(17)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (48)..(48)
<223> n是a、c、g或u
<400> 105
ugccnnaaua acacacnuau auaaucgccg uacaaaauca ugucaaancc g 51
<210> 106
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 106
ugcagcugua uugcacguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 107
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 107
uuccgauaau cccgcguacu aaaucaccau agucaacaau uuccaaccuc 50
<210> 108
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 108
uccacuauau cacacguauu uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50
<210> 109
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 109
ucccucaacc ucgcuacuau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc u 51
<210> 110
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 110
ugccgcuaua ucacacgaau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 111
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 111
agccccuaga acacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 112
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 112
ugccaauaua uaacacggaa uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 113
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 113
ugccgcuaua gcgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 114
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 114
ugcagauaua ugucacucau uaauccccgu auaaaaacau aacuaagcuc 50
<210> 115
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 115
uguagcugua uugcacacau uaaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 116
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 116
uaccaauaua ucgccacaca uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50
<210> 117
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 117
ugccgcuaug cccacggaau uuaaucgccg uagaaaaaca ugucaaaguc g 51
<210> 118
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 118
ugccgcuauu uagcacggau uaaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 119
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> n是a、c、g或u
<400> 119
ugccgcuauu uagcacggau uaaaucgccg uagaaaagca ugucnaagcc g 51
<210> 120
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (41)..(41)
<223> n是a、c、g或u
<400> 120
uguaguaaua ugacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ngucaaagcc u 51
<210> 121
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 121
ugucgccauu acgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 122
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 122
ugcccccaaa cuacacaaau uuaaucgccg uauaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 123
<211> 49
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 123
ugcacuaucu cacacguacu aaucgccgua uaaaagcaug ucaaagccg 49
<210> 124
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 124
ugucgcaaua auacacuaau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 125
<211> 49
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 125
ugcaacaaua uagcacguau uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagg 49
<210> 126
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 126
cuaccacaaa ucccacauau uuaaucuccc aaucaaaucu uguccauucc c 51
<210> 127
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 127
ugcccuaaac ucacacggau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 128
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 128
uugucguaug ucacacguau uaaaucgccg uauaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 129
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 129
uuccgcuaua acacacggag aaaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 130
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 130
ugccgauaua acgcacggau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 131
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 131
ugccauuaua cagcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 132
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 132
uccagaaaua ugcacacauu uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50
<210> 133
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 133
uccgcuaaac aacacggaua caaucgccgu agaaaagcau guccaagccg 50
<210> 134
<211> 49
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (46)..(48)
<223> n是a、c、g或u
<400> 134
ugcacuaucu cacacguacu aaucgccgua uaaaagcaug ucaaannng 49
<210> 135
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(10)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> n是a、c、g或u
<400> 135
aungcnannn uacacguauu naaucgccgu agaaaagcau gucanagccg 50
<210> 136
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 136
ugcugcuaua uugcaauuuu uuaaacuaag uagaaaacca uguacaaguc g 51
<210> 137
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 137
ugucgccaua uugcacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 138
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 138
ugccguuaua acccacggaa uuuaaccucc guagaaaagc augucaaagc cg 52
<210> 139
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (40)..(40)
<223> n是a、c、g或u
<400> 139
ugugaauaua uaucacggau uuaaucgccg uauaaaagcn augucaaagc cg 52
<210> 140
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(11)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> n是a、c、g或u
<400> 140
ugccgauaun nancacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 141
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 141
ugucacuaaa uugcacguau auaaucgccg uaguaagcau gucaaagccg 50
<210> 142
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 142
ugcaaccaua aagcacguaa uaaaucgccg uauauaagca ugucaaagcc g 51
<210> 143
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 143
ugccgcuaua uagcacguau uaaucgccgu aguaaagcau gucaaagccg 50
<210> 144
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 144
ugccgcuaua gcacacggaa uuuaaucgcc guaguaaagc augucaaagc cg 52
<210> 145
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(45)
<223> n是a、c、g或u
<400> 145
ugcagguaua uaacncggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucnaagcc g 51
<210> 146
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 146
ugcuccuaua acacacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 147
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 147
ugcccguaau ugcacggauu uaaucgccgu agaaaagcau guccaagccg g 51
<210> 148
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> n是a、c、g或u
<220>
<221> misc_feature
<222> (44)..(44)
<223> n是a、c、g或u
<400> 148
acucccuaua ungcaacuac auaaucgccg uaaauaagca uguncaagcc g 51
<210> 149
<211> 54
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 149
ugaagcuaga ucacacuaaa uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaaaaa gccg 54
<210> 150
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 150
ugacucuuua ucccccguac auuauucacc gaaccaaagc auuaccaucc cc 52
<210> 151
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 151
ugacgcccua acacacguau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 152
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 152
ugucgcaaaa uagcacguau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 153
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 153
ugaguguaua auucacguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 154
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 154
ugcuacuaua ucguagguaa cuaaucgccc uacaaacuca cucuaaaacc g 51
<210> 155
<211> 53
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 155
uuacgcuaua ucacacggaa uuuuaaucgc cguagaaaag cauguccaag ccg 53
<210> 156
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 156
cccaucugua cuacaggaau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 157
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 157
ugcccauaaa uagcacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 158
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 158
ugccgcaaua acauacacau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51
<210> 159
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 159
ugcaacuaua ucgcacguau guaaucgccg uagaaaaagc augucaaagc c 51
<210> 160
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 160
uuccgcuaua uagcacggaa uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 161
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 161
uuccgcuaag ucacacgaaa uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 162
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 162
uguagcaaua ucacacguaa uuaaucgccg uauauaagca ugucaaagcc g 51
<210> 163
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 163
ugccguuaua uaucacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51
<210> 164
<211> 49
<212> RNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 抗EGFR适体
<400> 164
uaacacauau aucaaguaac uuaucuccuu aguaaccauc uccaagccg 49
<210> 165
<211> 502
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 165
Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly
130 135 140
Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn
145 150 155 160
Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp
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Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys
180 185 190
Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala
195 200 205
Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe
210 215 220
Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln
245 250 255
Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys
260 265 270
Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His
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Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
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Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp
465 470 475 480
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<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 166
Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
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<211> 365
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 167
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<221>
<222>
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<400> 168
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 169
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 171
Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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<220>
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<223> 构建体
<400> 172
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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210 215 220
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260 265 270
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275 280 285
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355 360 365
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<211> 508
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
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<400> 173
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
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165 170 175
Gly Thr Gly Arg Thr Ile Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr
180 185 190
Phe Thr Ala Asp Ile Ser Ser Asn Thr Val Gln Met Gln Leu Ser Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Tyr
210 215 220
Tyr Gly Asn Phe Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu Val Gln
245 250 255
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys
260 265 270
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg
275 280 285
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser
290 295 300
Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
305 310 315 320
Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu
325 330 335
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp
340 345 350
His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
355 360 365
Ser Gly Glu Gly Thr Ser Thr Gly Ser Gly Ala Ile Pro Val Ser Leu
370 375 380
Arg Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Asp Asp Ile Val Leu Thr Gln
385 390 395 400
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser
405 410 415
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln
420 425 430
Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser
435 440 445
Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
450 455 460
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr
465 470 475 480
Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly
485 490 495
Thr Lys Val Glu Ile Lys His His His His His His
500 505
<210> 174
<211> 403
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 174
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Ser Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Arg Gly Asp Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Ala Trp Tyr Gly Thr Leu Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu Val Gln
145 150 155 160
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys
165 170 175
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg
180 185 190
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser
195 200 205
Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
210 215 220
Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu
225 230 235 240
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp
245 250 255
His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
260 265 270
Ser Gly Glu Gly Thr Ser Thr Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Ala Asp Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu
290 295 300
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val
305 310 315 320
Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg
325 330 335
Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe
340 345 350
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu
355 360 365
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370 375 380
Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys His His His
385 390 395 400
His His His
<210> 175
<211> 406
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 175
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Val Ala Ile Asn Trp Ser Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Met Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Tyr Gln Ile Asn Ser Gly Asn Tyr Asn Phe Lys Asp Tyr
100 105 110
Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln
145 150 155 160
Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys
165 170 175
Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His
180 185 190
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile
195 200 205
Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
210 215 220
Phe Thr Ile Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu
225 230 235 240
Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr
245 250 255
Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Gly Glu Gly Thr Ser Thr Gly Ser Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Ser Gly Gly Ala Asp Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr
290 295 300
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser
305 310 315 320
Gln Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
325 330 335
Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
385 390 395 400
His His His His His His
405
<210> 176
<211> 412
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 176
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Ser Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Arg Gly Asp Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Ala Gly Ser Ala Trp Tyr Gly Thr Leu Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu Val Gln
145 150 155 160
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys
165 170 175
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180 185 190
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser
195 200 205
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210 215 220
Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu
225 230 235 240
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp
245 250 255
His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
260 265 270
Ser Gly Glu Gly Thr Ser Thr Gly Ser Gly Ala Ile Pro Val Ser Leu
275 280 285
Arg Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Asp Asp Ile Val Leu Thr Gln
290 295 300
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser
305 310 315 320
Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln
325 330 335
Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser
340 345 350
Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
355 360 365
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr
370 375 380
Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly
385 390 395 400
Thr Lys Val Glu Ile Lys His His His His His His
405 410
<210> 177
<211> 412
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<221>
<222>
<223> 构建体
<400> 177
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
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50 55 60
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115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val
145 150 155 160
Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
165 170 175
Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser
195 200 205
Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala
225 230 235 240
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly
245 250 255
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Glu Gly Thr Ser Thr Gly Ser Gly
260 265 270
Ala Ile Pro Val Ser Leu Arg Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Asp
275 280 285
Asp Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
290 295 300
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
305 310 315 320
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
325 330 335
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
340 345 350
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
355 360 365
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
370 375 380
Ala Arg Asp Phe Leu Ser Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
385 390 395 400
Leu Val Thr Val Ser Ser His His His His His His
405 410

Claims (19)

1.一种用于治疗患者中癌症的试剂盒或组合物，其包含：
a.包含靶向T细胞接合剂的第一组分，所述靶向T细胞接合剂包含：
i.第一靶向部分，其结合由所述癌症表达的肿瘤抗原；
ii.当结合第二T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性的第一T细胞接合结构域，其中所述第二T细胞接合结构域不是所述第一组分的一部分，并且其中所述第一T细胞接合结构域是VH结构域或VL结构域；
iii.所述第一T细胞接合结构域的第一惰性结合配偶体，其结合所述第一T细胞接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所述第一T细胞接合结构域不结合所述第二T细胞接合结构域，其中如果所述第一T细胞接合结构域是VH结构域，则所述惰性结合配偶体是VL结构域，并且如果所述第一T细胞接合结构域是VL结构域，则所述惰性结合配偶体是VH结构域；和
iv.分隔所述第一T细胞接合结构域和所述第一惰性结合配偶体的蛋白酶裂解位点，其中所述蛋白酶裂解位点能够在蛋白酶存在下将惰性结合结构域从所述T细胞接合结构域释放，其：
(1)由所述癌症表达；
(2)通过靶向部分来共定位于所述癌症，所述靶向部分结合由所述癌症表达的肿瘤抗原且与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同，和
b.包含第二T细胞接合结构域的第二组分，所述第二T细胞接合结构域在结合所述第一T细胞接合结构域时能够具有T细胞接合活性，其中所述第一和第二T细胞接合结构域在都不结合于惰性结合配偶体时能够结合CD3或T细胞受体(TCR)，并且进一步地，其中如果所述第一T细胞接合结构域是VH结构域，则所述第二T细胞接合结构域是VL结构域，并且如果所述第一T细胞接合结构域是VL结构域，则所述第二T细胞接合结构域是VH结构域，并且其中所述第二组分任选地还包含第二靶向部分，其结合由所述癌症表达的肿瘤抗原。
2.如权利要求1所述的试剂盒或组合物，其中所述第二组分还包含第二靶向部分，所述第二靶向部分结合由所述癌症表达的肿瘤抗原，任选地，其中所述第一和第二靶向部分靶向不同的肿瘤抗原，进一步任选地，其中所述第一和第二靶向部分靶向相同肿瘤抗原上的不同表位。
3.如权利要求1或权利要求2所述的试剂盒或组合物，其中所述第一和/或第二靶向部分包含抗体或其抗原结合片段，任选地，其中：
a.所述抗体或其抗原结合片段结合Her2/Neu、CD22、PSMA、CD30、CD20、CD33、CD80、CD86、CD2、CA125、碳酸酐酶IX、CD70、CD74、CD56、CD40、CD19、c-met/HGFR、TRAIL-R1、DRS、PD-1、IGF-1R、VEGF-R2、PSCA、MUC1、CanAg、间皮素、P-钙粘着蛋白、肌抑素、Cripto、ACVRL1/ALK1、MUC5AC、CEACAM、CD137、CXCR4、神经纤毛蛋白1、磷脂酰肌醇蛋白聚糖、HER3/EGFR、PDGFRa、EphA2、CD38、CD138/粘结蛋白聚糖1、α4-整合素、EpCAM、ADAM17、CD59、整合素αV、整合素αVβ3、MCP-1、PCLA、RANKL、RG1、SLC44A4、STEAP-1、VEGF-C、CCN1、CD44、CD98、c-RET、DLL4、上皮唾蛋白、GPNMB、整合素α6β4、LFL2、LIV-1、Ly6E、MUC18、NRP1、磷脂酰丝氨酸、PRLR、TACSTD-2、腱生蛋白C、TWEAKR、VANGL2、PD-L1、PD-L2、BCMA、DKK-1、ICAM-1、GRP78、FGFR3、SLAMF6、CD48、CD71、APRIL、DR5、CD37、HLA-DR、CD70b、CAIX、TPBG、ENPP3、FGFR1、VEGFR-2、CLDN18、GCC、C242、FGFR2、GPR49、IGFR、ALK、GD2、EGFRvIII、CD4、CD5、IL-3Ra、整合素α5β1、Lewis y/b抗原、EGFL7、NaPi2b、flt4、CD133、CD123、CD45、c-Kit、Lewis Y、Siglec-15、FLT-3、CEACAM1、钙粘着蛋白-19、GM3、TYRP1、GD3、MUC5A、CLDN6、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3、FGFR4、PIVKA-II、PLVAP、前胃泌素、CEA、CLDN1、A33、CK8或FAP；
b.所述抗体或其抗原结合片段是抗表皮生长因子受体抗体、抗Her2抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD70抗体、抗CD33抗体、抗MUC1抗体、抗CD40抗体、抗CD74抗体、抗P-钙粘着蛋白抗体、抗EpCAM抗体、抗CD138抗体、抗E-钙粘着蛋白抗体、抗CEA抗体、抗FGFR3抗体、抗α4-整合素抗体、抗CD80抗体、抗粘蛋白核心蛋白抗体、抗转铁蛋白抗体、抗gp95/97抗体、抗p-糖蛋白抗体、抗TRAIL-R1抗体、抗DR5抗体、抗IL-4抗体、抗IL-6抗体、抗CD19抗体、抗PSMA抗体、抗PSCA抗体、抗Cripto抗体、抗PD-L1抗体、抗IGF-1R抗体、抗CD38抗体、抗CD133抗体、抗CD123抗体、抗CD49d抗体、抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体、抗cMet抗体或抗IL-13R抗体；或
c.所述抗体或其抗原结合片段是西妥昔单抗、利妥昔单抗、伊珠单抗、G544、BU59、hp67.6、吉妥单抗、GP1.4、SM3或那他珠单抗。
4.如权利要求1-3任一项所述的试剂盒或组合物，其中所述第一和/或第二靶向部分包含适体。
5.如权利要求4所述的试剂盒或组合物，其中所述适体：
a.包含DNA；
b.是单链的；
c.是从随机候选文库选择的靶标细胞特异性适体；
d.是抗EGFR适体，任选地，其中所述抗EGFR适体包含SEQ ID NO：95-164任一项；和/或
e.以1皮摩尔至500纳摩尔的Kd结合非所要细胞上的靶标，任选地，其中所述适体以1皮摩尔至100纳摩尔的Kd结合非所要细胞上的靶标。
6.如权利要求1-5任一项所述的试剂盒或组合物，其中所述第一和/或第二靶向组分：
a.包含IL-2、IL-4、IL-6、α-MSH、转铁蛋白、叶酸、EGF、TGF、PD1、IL-13、干细胞因子、胰岛素样生长因子(IGF)或CD40；
b.包含IL-2、IL-4、IL-6、α-MSH、转铁蛋白、叶酸、EGF、TGF、PD1、IL-13、干细胞因子、胰岛素样生长因子(IGF)或CD40的全长序列；
c.包含IL-2、IL-4、IL-6、α-MSH、转铁蛋白、叶酸、EGF、TGF、PD1、IL-13、干细胞因子、胰岛素样生长因子(IGF)或CD40的截短形式、类似物、变体或衍生物；或
d.结合IL-2受体、IL-4、IL-6、黑素细胞刺激激素受体(MSH受体)、转铁蛋白受体(TR)、叶酸受体1(FOLR)、叶酸羟化酶(FOLH1)、EGF受体、PD-L1、PD-L2、IL-13R、CXCR4、IGFR或CD40L。
7.如权利要求1-6任一项所述的试剂盒或组合物，其中所述第二组分进一步包含：
a.所述第二T细胞接合结构域的第二惰性结合配偶体，其结合所述第二T细胞接合结构域以使除非移除所述惰性结合配偶体，否则所述第二T细胞接合结构域不结合所述第一T细胞接合结构域，其中如果所述第二T细胞接合结构域是VH结构域，则所述惰性结合配偶体是VL结构域，并且如果所述第二T细胞接合结构域是VL结构域，则所述惰性结合配偶体是VH结构域；和
b.分隔所述第二T细胞接合结构域和所述第二惰性结合配偶体的蛋白酶裂解位点，其中所述蛋白酶裂解位点：
i.由所述癌症表达的蛋白酶裂解或
ii.由通过结合所述癌症表达的肿瘤抗原且与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位于所述癌症的蛋白酶裂解，
其中对所述蛋白酶裂解位点的裂解导致丧失所述惰性结合配偶体以及与所述试剂盒或组合物的所述第一T细胞接合结构域互补。
8.如权利要求7所述的试剂盒或组合物，其中所述第一和第二靶向部分是不同的和/或所述第一组分和第二部分的蛋白酶裂解位点是不同的。
9.如权利要求7或权利要求8所述的试剂盒或组合物，其中所述第一组分和/或第二组分的所述蛋白酶裂解位点由所述癌症表达的蛋白酶裂解，或由通过结合所述癌症表达的肿瘤抗原且与所述药剂中的所述靶向部分相同或不同的靶向部分来共定位于所述癌症的蛋白酶裂解。
10.如权利要求7-9任一项所述的试剂盒或组合物，其中一旦每一个惰性结合配偶体的至少一个蛋白酶裂解位点已被裂解，所述每一个惰性结合配偶体即能够解离，并且在解离之后，所述两个T细胞接合结构域能够彼此结合并展现T细胞接合活性。
11.一组核酸分子，其编码如权利要求1-10任一项所述的试剂盒或组合物的所述第一和第二组分。
12.如权利要求1-10任一项所述的组合物在制备用于治疗受试者中表达结合所述第一靶向部分的肿瘤抗原的癌症的药物中的用途。
13.如权利要求1-10任一项所述的组合物在制备用于在受试者中将表达CD3或TCR的T细胞靶向表达结合所述第一靶向部分的肿瘤抗原的癌症的药物中的用途。
14.如权利要求12或权利要求13所述的用途，其中所述表达结合所述第一靶向部分的肿瘤抗原的癌症是以下中的任一者：乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、膀胱癌、肾癌、黑素瘤、肺癌、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、脑癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肝癌、淋巴组织增生性病症、骨髓发育不良病症、骨髓增生性疾病或恶变前疾病。
15.如权利要求12-14任一项所述的用途，其中所述癌症是实体瘤。
16.如权利要求14所述的用途，其中所述表达结合所述第一靶向部分的肿瘤抗原的癌症是白血病。
17.如权利要求14所述的用途，其中淋巴组织增生性病症是急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴母细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤的任一项。
18.如权利要求14所述的用途，其中骨髓增生性疾病是骨髓瘤。
19.如权利要求14所述的用途，其中骨髓增生性疾病是急性骨髓性白血病。
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HU (1) HUE054131T2 (zh)
PL (1) PL3377103T3 (zh)
PT (1) PT3377103T (zh)
WO (1) WO2017087789A1 (zh)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2017014908A (es) 2015-05-21 2018-08-15 Harpoon Therapeutics Inc Proteinas de union triespecificas y metodos de uso.
ES2873846T3 (es) * 2015-11-19 2021-11-04 Revitope Ltd Complementación de fragmento de anticuerpo funcional para un sistema de dos componentes para eliminación redirigida de células no deseadas
JP7195927B2 (ja) * 2016-03-08 2022-12-26 武田薬品工業株式会社 誘導性結合タンパク質及びその使用方法
SG11201810331YA (en) 2016-05-20 2018-12-28 Harpoon Therapeutics Inc Single chain variable fragment cd3 binding proteins
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
KR102530742B1 (ko) 2016-05-20 2023-05-09 하푼 테라퓨틱스, 인크. 단일 도메인 혈청 알부민 결합 단백질
EP3544629A4 (en) 2016-11-23 2020-06-17 Harpoon Therapeutics, Inc. TRISPECIFIC PROTEINS CIBLANG PSMA AND METHODS OF USE
KR102275008B1 (ko) 2016-11-23 2021-07-13 하푼 테라퓨틱스, 인크. 전립선 특이 막 항원 결합 단백질
US11535668B2 (en) 2017-02-28 2022-12-27 Harpoon Therapeutics, Inc. Inducible monovalent antigen binding protein
EP3596108A4 (en) 2017-03-15 2020-12-23 Pandion Operations, Inc. TARGETED IMMUNOTOLERANCE
WO2018204717A1 (en) * 2017-05-03 2018-11-08 Harpoon Therapeutics, Inc. Compositions and methods for adoptive cell therapies
AU2018265856B2 (en) 2017-05-12 2023-04-27 Harpoon Therapeutics, Inc. Mesothelin binding proteins
CN115028727A (zh) 2017-05-12 2022-09-09 哈普恩治疗公司 靶向msln的三特异性蛋白质及使用方法
JP2020521452A (ja) 2017-05-24 2020-07-27 パンディオン・セラピューティクス・インコーポレイテッド 標的化免疫寛容
KR20200027956A (ko) 2017-06-23 2020-03-13 패쏘백스 엘엘씨 키메라 바이러스-유사 입자 및 면역 반응의 항원-특이적 재지향자로서의 이의 용도
AU2018328291B2 (en) 2017-09-08 2022-10-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
CN111630070A (zh) 2017-10-13 2020-09-04 哈普恩治疗公司 三特异性蛋白质及使用方法
BR112020007249B1 (pt) 2017-10-13 2022-11-22 Harpoon Therapeutics, Inc Roteína de ligação a antígeno de maturação de célula b, proteína de ligação multiespecífica e uso das referidas proteínas
US10946068B2 (en) 2017-12-06 2021-03-16 Pandion Operations, Inc. IL-2 muteins and uses thereof
US10174092B1 (en) 2017-12-06 2019-01-08 Pandion Therapeutics, Inc. IL-2 muteins
WO2020010104A1 (en) 2018-07-02 2020-01-09 The General Hospital Corporation Antibody tumor-targeting assembly complexes
CA3114038A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
KR20210105890A (ko) * 2018-12-17 2021-08-27 레비토프 리미티드 트윈 면역 세포 인게이저
US11560408B2 (en) 2018-12-27 2023-01-24 Verimmune Inc. Conjugated virus-like particles and uses thereof as anti-tumor immune redirectors
EP3934761A1 (en) * 2019-03-05 2022-01-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Conditionally activated binding proteins containing fc regions and moieties targeting tumor antigens
EP3934762A1 (en) * 2019-03-05 2022-01-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
US20220323600A1 (en) * 2019-05-02 2022-10-13 The General Hospital Corporation Teac and attac immunooncology compositions and methods
JP2022533702A (ja) 2019-05-20 2022-07-25 パンディオン・オペレーションズ・インコーポレイテッド ＭＡｄＣＡＭ標的化免疫寛容
AR119382A1 (es) * 2019-07-12 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos de pre-direccionamiento y métodos de uso
US11981715B2 (en) 2020-02-21 2024-05-14 Pandion Operations, Inc. Tissue targeted immunotolerance with a CD39 effector
CA3170833A1 (en) 2020-02-21 2021-08-26 Harpoon Therapeutics, Inc. Flt3 binding proteins and methods of use
JP2023533533A (ja) * 2020-07-10 2023-08-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がん細胞に結合し、当該細胞に対して放射性ヌクレオチドを標的化する抗体
IL302190A (en) 2020-10-19 2023-06-01 Verimmune Inc Virus-induced preparations and methods for redirecting immune responses in the use of said preparations for cancer treatment
WO2022109611A1 (en) 2020-11-20 2022-05-27 Simcere Innovation, Inc. Armed dual car-t compositions and methods for cancer immunotherapy
CR20230385A (es) * 2021-01-12 2023-09-25 F Hoffmann La Roche Ag [ Anticuerpos split que se unen a células cancerosas y dirigen radionúclidos a dichas células
EP4377347A1 (en) 2021-07-27 2024-06-05 MorphoSys AG Combinations of antigen binding molecules

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1551886A (zh) * 2000-12-29 2004-12-01 �Ϳ���ҽҩ��˾ 用于选择性癌症治疗的特异性人抗体
CN1812999A (zh) * 2003-05-31 2006-08-02 麦克罗梅特股份公司 包含EpCAM特异构建体的药物组合物
CN1966525A (zh) * 2001-06-13 2007-05-23 根马布股份公司 表皮生长因子受体(egfr)的人单克隆抗体
CN1976951A (zh) * 2004-02-13 2007-06-06 米克罗麦特股份公司 抗EpCAM免疫球蛋白
WO2007062466A1 (en) * 2005-11-29 2007-06-07 The University Of Sydney Demibodies: dimerisation-activated therapeutic agents
CN102711825A (zh) * 2009-09-18 2012-10-03 米克罗麦特股份公司 用于施用EpCAMxCD3双特异性抗体的给药方案
CN103561771A (zh) * 2011-03-17 2014-02-05 伯明翰大学 重新定向的免疫治疗
CN103748114A (zh) * 2011-08-23 2014-04-23 罗切格利卡特公司 T细胞活化性双特异性抗原结合分子
CN104159923A (zh) * 2012-01-13 2014-11-19 乌利班-马克西姆利安大学 双抗原诱导的双功能互补作用
CN104168916A (zh) * 2012-03-02 2014-11-26 中央研究院 抗上皮细胞黏着分子(EpCAM)抗体及其使用方法
WO2015001361A1 (en) * 2013-07-05 2015-01-08 The University Of Birmingham Immunotherapy
CN104812413A (zh) * 2012-09-18 2015-07-29 伯明翰大学 物质和方法
US20150307564A1 (en) * 2013-10-15 2015-10-29 The California Institute For Biomedical Research Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
CN108289952B (zh) * 2015-11-19 2021-02-05 雷维托普有限公司 用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的功能性抗体片段互补作用

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3578568A (en) 1968-11-29 1971-05-11 Atlantic Richfield Co Purification of low molecular weight epoxides by extractive distillation with a glycol or glycol ether
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0659438A1 (en) 1993-12-23 1995-06-28 Boehringer Mannheim Gmbh Conjugates consisting of peptidic T cell antigens and cell binding groups, and their use for therapy
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
DE69636015T2 (de) 1995-05-03 2007-01-04 Bioenhancementsments Ltd. Bispezifische antikörper in denen die bindungsfähigkeit durch eine mittels licht spaltbare gruppe reversibel inhibiert wird
US20040197336A1 (en) 1995-05-03 2004-10-07 Self Colin Henry Bispecific antibodies in which the binding capability is reversibly inhibited by a photocleavable moiety
EP2057999A3 (en) 1995-12-22 2009-07-29 Immunomedics, Inc. Use of immunoconjugates to enhance the efficacy of multi-stage cascade boosting vaccines
CA2265476A1 (en) 1996-09-12 1998-03-19 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
HRP970566A2 (en) 1996-10-30 1998-08-31 Jones Deborah Defeo Conjugates useful in the treatment of prostate canser
GB9624993D0 (en) 1996-11-30 1997-01-15 Aepact Ltd Tumour therapy
ES2300122T3 (es) 1997-03-20 2008-06-01 The Government Of The Usa As Represented By The Secretary Of Department Of Health And Human Services Anticuerpos recombinantes e inmunoconjugados dirigidos contra celulas y tumores portadores de cd-22.
WO1999002175A1 (en) 1997-07-10 1999-01-21 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
ES2207278T3 (es) 1998-07-28 2004-05-16 Micromet Ag Heterominicuerpos.
US20020076406A1 (en) 2000-07-25 2002-06-20 Leung Shui-On Multivalent target binding protein
WO2002044197A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Fish Eleanor N Cytokine receptor binding peptides
ATE468348T1 (de) 2001-09-26 2010-06-15 Government Of The Us Secretary Mutierte anti-cd22-antikörper mit erhöhter affinität zu cd22-exprimierenden leukämiezellen
EP1451226A1 (en) 2001-11-30 2004-09-01 Crucell Holland B.V. Antigen presenting cell targeting conjugate, an antigen presenting cell contacted with such conjugate, their use for vaccination or as medicament, and methods for their production or generation
EP2295468B1 (en) 2002-02-14 2015-07-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
EP1354600A1 (en) 2002-04-19 2003-10-22 Affimed Therapeutics AG Antibody combination useful for tumor therapy
US8029803B2 (en) 2002-06-20 2011-10-04 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for eliciting an immune response
PT1545613E (pt) 2002-07-31 2011-09-27 Seattle Genetics Inc Conjugados de auristatina e sua utilização para tratamento do cancro, de uma doença autoimune ou de uma doença infecciosa
HUE026914T2 (en) 2002-11-07 2016-08-29 Immunogen Inc Anti-CD33 antibodies and a method of treating acute myeloid leukemia
AU2004210088A1 (en) 2003-02-06 2004-08-19 Micromet Ag Trimeric polypeptide construct to induce an enduring T cell response
US8007805B2 (en) 2003-08-08 2011-08-30 Paladin Labs, Inc. Chimeric antigens for breaking host tolerance to foreign antigens
KR20120125634A (ko) 2003-10-16 2012-11-16 마이크로메트 에이지 다중특이적 탈면역화된 ｃｄ3-바인더
US10000574B2 (en) 2003-11-28 2018-06-19 Amgen Research (Munich) Gmbh Compositions comprising polypeptides
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
GB0404187D0 (en) 2004-02-25 2004-03-31 Biotransformations Ltd Binding agents
US20060045881A1 (en) 2004-08-26 2006-03-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-cancer vaccines
BRPI0515113A (pt) 2004-09-10 2008-07-01 Wyeth Corp anticorpos anti-5t4 humanizados e conjugados de anticorpo anti-5t4/caliqueamicina
CA2597638A1 (en) 2005-02-16 2006-08-24 University Of Zuerich Methods for treating cancer using an immunotoxin comprising an exotoxin a moiety having a furin cleavage site replaced with a cancer-associated protease site cleaved by mmp-2 or mmp-9
CN101300355A (zh) 2005-10-13 2008-11-05 威瑞克斯医药公司 包含丙型肝炎病毒多肽和用于引起免疫应答的Fc片段的嵌合抗原
ATE458000T1 (de) 2005-11-18 2010-03-15 Dabur Pharma Ltd Zielgerichtete fusionsproteine für die krebstherapie
KR20080090441A (ko) 2005-12-21 2008-10-08 메디뮨 엘엘씨 Ｅｐｈａ２ ｂｉｔｅ 분자 및 이의 용도
GB0605702D0 (en) 2006-03-21 2006-05-03 Biotransformations Ltd Materials and methods for immune cell stimulation
WO2008019366A2 (en) 2006-08-07 2008-02-14 Ludwig Institute For Cancer Research Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
CA2668017A1 (en) 2006-10-30 2008-05-08 Viventia Biotech Inc. Improved conjugates
WO2008063113A1 (en) 2006-11-20 2008-05-29 Cepep Iii Ab Cell -penetrating peptides and constructs containing them consisting 15-25 amino acids of tumor supressor protein p14arf or p19arf
EP2423222B2 (en) 2007-01-30 2020-07-29 Epivax, Inc. Regulatory t cell epitopes, compositions and uses thereof
JP5377330B2 (ja) 2007-02-02 2013-12-25 ベイラー リサーチ インスティテュート 抗原提示細胞上に発現されたｄｃｉｒへの抗原のターゲティングに基づくワクチン
CA2696263C (en) 2007-08-15 2017-06-13 Bing Liu Monospecific and multispecific antibodies and method of use
GB0716160D0 (en) 2007-08-17 2007-09-26 Biotransformations Ltd Materials and methods for treating cancers which express folate receptors
EP3492488A1 (en) 2007-08-22 2019-06-05 The Regents of The University of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
SI2352763T2 (sl) 2008-10-01 2022-11-30 Amgen Research (Munich) Gmbh Bispecifična enoverižna protitelesa s specifičnostjo za tarčne antigene z visoko molekulsko maso
US8895702B2 (en) 2008-12-08 2014-11-25 City Of Hope Development of masked therapeutic antibodies to limit off-target effects; application to anti-EGFR antibodies
US20110178279A1 (en) 2009-08-03 2011-07-21 Williams John C Development of masked therapeutic antibodies to limit off-target effects: application to anti-egfr antibodies
CN102482347B (zh) 2009-01-12 2017-04-26 希托马克斯医疗有限责任公司 修饰抗体组合物及其制备和使用方法
CN105884903B (zh) 2009-03-10 2019-12-06 贝勒研究院 靶向抗原呈递细胞的疫苗
CN102573902A (zh) 2009-11-05 2012-07-11 分子医学和免疫学中心 用于基于亚单位的痘病毒疫苗的包含痘病毒衍生肽和针对抗原呈递细胞的抗体的免疫偶联物
US9193791B2 (en) 2010-08-03 2015-11-24 City Of Hope Development of masked therapeutic antibodies to limit off-target effects
MX340558B (es) 2010-08-24 2016-07-14 F Hoffmann-La Roche Ag * Anticuerpos biespecificos que comprenden fragmento fv estabilizado con disulfuro.
WO2012025525A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 Roche Glycart Ag Activatable bispecific antibodies
US8846042B2 (en) 2011-05-16 2014-09-30 Fabion Pharmaceuticals, Inc. Multi-specific FAB fusion proteins and methods of use
EP2814846B1 (en) * 2012-02-13 2020-01-08 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
GB201203442D0 (en) 2012-02-28 2012-04-11 Univ Birmingham Immunotherapeutic molecules and uses
US10040827B2 (en) 2012-03-19 2018-08-07 Deutsches Krebsforschungszentrum B-cell receptor complex binding proteins containing T-cell epitopes
SG11201406943XA (en) 2012-04-27 2014-12-30 Cytomx Therapeutics Inc Activatable antibodies that bind epidermal growth factor receptor and methods of use thereof
IN2014MN02635A (zh) 2012-06-22 2015-10-16 Cytomx Therapeutics Inc
US9856314B2 (en) 2012-06-22 2018-01-02 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies having non-binding steric moieties and methods of using the same
US9682143B2 (en) 2012-08-14 2017-06-20 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for inducing immune response to disease
US9487590B2 (en) 2012-09-25 2016-11-08 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies that bind interleukin-6 receptor and methods of use thereof
EP2941643A4 (en) 2013-01-04 2016-09-28 Cytomx Therapeutics Inc Compositions and methods for detecting proteinase activity in biological systems
EP2970498A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Bayer Healthcare Llc PRODUCT ANTIBODIES DIRECTED AGAINST THE INHIBITOR OF THE PATHWAY OF TISSUE FACTOR
AR095596A1 (es) * 2013-03-15 2015-10-28 Amgen Res (Munich) Gmbh Moléculas de unión de cadena única comprendiendo n-terminal abp
US9517276B2 (en) 2013-06-04 2016-12-13 Cytomx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for conjugating activatable antibodies
CA2918795A1 (en) 2013-07-25 2015-01-29 Cytomx Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies, multispecific activatable antibodies and methods of using the same
AU2014324884B2 (en) 2013-09-25 2020-03-26 Cytomx Therapeutics, Inc Matrix metalloproteinase substrates and other cleavable moieties and methods of use thereof
WO2015066279A2 (en) 2013-10-30 2015-05-07 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies that bind epidermal growth factor receptor and methods of use thereof
DK3628328T3 (da) 2014-01-31 2022-12-05 Cytomx Therapeutics Inc Matriptase- og u-plasminogen-aktivatorsubstrater og andre spaltelige dele og fremgangsmåder til anvendelse deraf
EP3172235A2 (en) 2014-07-25 2017-05-31 Cytomx Therapeutics Inc. Anti-cd3 antibodies, activatable anti-cd3 antibodies, multispecific anti-cd3 antibodies, multispecific activatable anti-cd3 antibodies, and methods of using the same
JP7195927B2 (ja) 2016-03-08 2022-12-26 武田薬品工業株式会社 誘導性結合タンパク質及びその使用方法

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1551886A (zh) * 2000-12-29 2004-12-01 �Ϳ���ҽҩ��˾ 用于选择性癌症治疗的特异性人抗体
CN1966525A (zh) * 2001-06-13 2007-05-23 根马布股份公司 表皮生长因子受体(egfr)的人单克隆抗体
CN1812999A (zh) * 2003-05-31 2006-08-02 麦克罗梅特股份公司 包含EpCAM特异构建体的药物组合物
CN1976951A (zh) * 2004-02-13 2007-06-06 米克罗麦特股份公司 抗EpCAM免疫球蛋白
WO2007062466A1 (en) * 2005-11-29 2007-06-07 The University Of Sydney Demibodies: dimerisation-activated therapeutic agents
CN102711825A (zh) * 2009-09-18 2012-10-03 米克罗麦特股份公司 用于施用EpCAMxCD3双特异性抗体的给药方案
CN103561771A (zh) * 2011-03-17 2014-02-05 伯明翰大学 重新定向的免疫治疗
CN103748114A (zh) * 2011-08-23 2014-04-23 罗切格利卡特公司 T细胞活化性双特异性抗原结合分子
CN104159923A (zh) * 2012-01-13 2014-11-19 乌利班-马克西姆利安大学 双抗原诱导的双功能互补作用
CN104168916A (zh) * 2012-03-02 2014-11-26 中央研究院 抗上皮细胞黏着分子(EpCAM)抗体及其使用方法
CN104812413A (zh) * 2012-09-18 2015-07-29 伯明翰大学 物质和方法
WO2015001361A1 (en) * 2013-07-05 2015-01-08 The University Of Birmingham Immunotherapy
US20150307564A1 (en) * 2013-10-15 2015-10-29 The California Institute For Biomedical Research Peptidic chimeric antigen receptor t cell switches and uses thereof
CN108289952B (zh) * 2015-11-19 2021-02-05 雷维托普有限公司 用于对非所要细胞进行重定向杀灭的两组分系统的功能性抗体片段互补作用

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