KR20210105890A - 트윈 면역 세포 인게이저 - Google Patents

트윈 면역 세포 인게이저 Download PDF

Info

Publication number
KR20210105890A
KR20210105890A KR1020217018234A KR20217018234A KR20210105890A KR 20210105890 A KR20210105890 A KR 20210105890A KR 1020217018234 A KR1020217018234 A KR 1020217018234A KR 20217018234 A KR20217018234 A KR 20217018234A KR 20210105890 A KR20210105890 A KR 20210105890A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
domain
immune cell
binding
binding domain
cancer
Prior art date
Application number
KR1020217018234A
Other languages
English (en)
Inventor
마틴 프라이어
앨리슨 콜타트
파멜라 와인스틴
패트릭 비엔섹
엠마 가이거
베르너 마이어
Original Assignee
레비토프 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 레비토프 리미티드 filed Critical 레비토프 리미티드
Publication of KR20210105890A publication Critical patent/KR20210105890A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/66—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a swap of domains, e.g. CH3-CH2, VH-CL or VL-CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/035—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal for targeting to the external surface of a cell, e.g. to the outer membrane of Gram negative bacteria, GPI- anchored eukaryote proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor

Abstract

트윈 면역 세포 인게이저 (TWICE)는 제1 성분 및 제2 성분을 포함하는 암 치료용 키트 또는 조성물이다. 각 성분은 암에 의해 발현된 종양 항원 또는 종양 미세환경에서 비암 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 표적화 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분은 각각, 다른 성분의 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 면역 세포 결합 도메인, 및 다른 성분의 상보적 결합 도메인에 결합할 때 상보적 항원에 결합할 수 있는 상보적 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 성분은 암세포 또는 그 미세환경에 표적화될 때 활성을 갖는 상보적 기능성 도메인을 포함한다. 본 TWICE 복합체는 종양 미세환경에서 활성화되는 2-성분 복합체로 여러 기능을 결합하는 독특한 능력을 제공한다. 따라서, 본 복합체는 종양 미세환경에 국재화되고 환자에게 이익이 되는 2가지 다른 신호를 초래할 수 있는 2-성분 복합체를 투여하는 단일 접근법을 갖는 데 있어 의미 있는 이점을 제공한다. 이 독특한 작제물은 선행 기술 작제물에 존재하지 않았던 이점을 제공한다.

Description

트윈 면역 세포 인게이저
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2018년 12월 17일에 출원된 미국 가출원 번호 62/780,770의 우선권의 이익을 주장하며, 이는 임의의 목적을 위해 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 제출된다. 서열 목록은 2019년 12월 12일에 생성된 "2019-12-12_01131-0023-00PCT_ST25.txt"라는 제목의 파일로 제공되며, 크기는 212,992 바이트이다. 전자 형식의 서열 목록의 정보는 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
분야
본 출원은 암세포의 존재를 특징으로 하는 상태를 치료하기 위한 개선된 표적화된 면역 세포 인게이징 항체 복합체에 관한 것이다. 특히, 본 출원은 암세포의 존재를 특징으로 하는 상태를 치료하는 데 사용될 수 있는 제제에 관한 것이다.
암은 심각한 인명 손실, 고통 및 경제적 충격을 야기한다. 암 표적화를 위한 면역치료 전략은 중개 임상 연구(translational clinical research)의 활발한 영역이었다.
원치 않는 세포의 존재로 인한 암 및 기타 질환을 해결하기 위해 다양한 면역종양학 접근법이 개발되었다. 한 맥락에서, 표적화된 T-세포 인게이징 항체 복합체는 유망한 데이터를 보여주었다. US 10,035,856을 참조한다. 이러한 차폐된 조성물은 원치 않는 세포에 결합하고 종양 미세환경 내의 각각의 성분으로부터 불활성 결합 파트너가 방출된 후 서로 결합할 수 있게 되는 제1 성분 및 제2 성분을 포함한다. 제1 성분과 제2 성분이 서로 결합한 후 활성 T-세포 결합 도메인을 형성한다.
다른 개발에서는 (T 세포 활성화에 더하여) 다른 면역 개입이 암 및 기타 질환을 지닌 환자에게 유익하다는 것을 보여주었다. 예를 들어, PD-L1 경로 억제는 면역 회피를 차단하고 일부 종양의 T-세포 고갈을 역전시킬 수 있다 (참조: Chen DS 등 Clin Cancer Res. 18:6580-6587 (2012)). T 세포의 동시 활성화와 체크포인트 분자와 같은 종양-관련 항원의 결합은 암세포에 대해 T 세포를 활성화하기 위한 보다 강력하고 선택적인 접근 방식으로 제안되었다 (참조: Harris 등 Cancer Biol Med 13(2):171-193 (2016) 및 Kobold 등 Front Oncol 8:285 (2018)). 그러나 다양한 기능이 원하는 치료 부위에서만 활성화되는 방식으로 이러한 모든 특징을 포함하는 단일 치료 접근법은 없다.
따라서, 질환과 환자에 따라, 추가 면역종양학 또는 기타 생물학적 개입도 환자에게 도움이 될 수 있다. 일부 이전 작제물은 종양 미세환경에서 T 세포를 활성화하는 능력이 있었지만 임의의 다른 속성은 없었다. 특히, 활성을 원하는 치료 부위로 제한한 이전 작제물은 추가의 기능적 도메인을 통합할 어떠한 방법도 없었다. 따라서, 이 재방향성 면역요법 분야에서 추가적인 개발이 필요하다.
본 TWICE 복합체는 종양 미세환경에서 활성화되는 2-성분 복합체로 여러 기능을 결합하는 독특한 능력을 제공한다. 따라서, 본 복합체는 종양 미세환경에 국재화되고 환자에게 이익이 되는 2가지 다른 신호를 초래할 수 있는 2-성분 복합체를 투여하는 단일 접근법을 갖는 데 있어 의미 있는 이점을 제공한다. 이 독특한 작제물은 선행 기술 작제물에 존재하지 않았던 이점을 제공한다.
본 설명에 따르면, 본 출원은 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 제1 표적화 모이어티; 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제1 면역 세포 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 성분의 일부가 아니고, 제1 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인 또는 VL 도메인인, 제1 면역 세포 결합 도메인; 및 제2 상보적 결합 도메인에 결합할 때 상보적 항원에 결합할 수 있는 제1 상보적 결합 도메인으로서, 제2 상보적 결합 도메인은 제1 성분의 일부가 아니고, 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인일 때, 제1 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이고, 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인일 때, 제1 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이고, 여기서 제1 상보적 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 제1 면역 세포 결합 도메인이 제1 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 제1 면역 세포 결합 도메인은 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는, 제1 상보적 결합 도메인을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제1 성분; 및 제2 표적화 모이어티; 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제2 면역 세포 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL인 경우 VH이고, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH인 경우 VL인, 제2 면역 세포 결합 도메인; 및 제1 상보적 결합 도메인에 결합할 때 상보적 항원에 결합할 수 있는 제2 상보적 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인일 때, 제2 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이고, 제2 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인일 때, 제2 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이고, 여기서 제2 상보적 결합 도메인은 제2 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 제2 면역 세포 결합 도메인이 제2 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는, 제2 상보적 결합 도메인을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제2 성분을 포함하는 환자에서 암을 치료하기 위한 키트 또는 조성물을 기재한다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 제1 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 제1 면역 세포 결합 도메인에 부착되고; 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 제1 상보적 결합 도메인에 부착되고; 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 제2 T-세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 제2 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 제2 T-세포 결합 도메인에 부착되고; 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 제2 상보적 결합 도메인에 부착되고; 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 링커는 절단 가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 링커는 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 링커는 상이하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 링커는 5개 내지 30개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 링커는 8개 내지 16개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 절단 가능한 링커의 프로테아제 절단 부위는 암 또는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 프로테아제에 의해 절단된다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 절단 가능한 링커의 프로테아제 절단 부위는 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화되고, 제1 성분 또는 제2 성분 중 적어도 하나의 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 프로테아제에 의해 절단된다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 이량체화 도메인은 둘 다 류신 지퍼; 면역글로불린 도메인; 또는 T-세포 수용체 (TCR) 도메인이다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 도메인은 면역글로불린 가변 도메인 또는 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 불변 도메인은 CH1/CL, CH2, CH3, 또는 CH4를 포함한다. 일부 구현예에서, TCR 도메인은 TCR 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 성분의 이량체화 도메인은 제2 성분의 이량체화 도메인과 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 성분의 이량체화 도메인은 제2 성분의 이량체화 도메인과 상이하다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 암에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 면역 체크포인트 분자, RANK 또는 RANKL, 또는 세포-사멸-유도 항원에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 면역 체크포인트 분자에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, PD-L1에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 아테졸리주맙, 더발루맙, 또는 아벨루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, RANK에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, RANKL에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 데노수맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 세포-사멸-유도 항원에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, Fas/CD95/Apo1, TNFR1/p55/CD120a, DR3/Apo3/WSL-1/TRAMP/LARD, TRAIL-R1/DR4, DR5/Apo2/TRAIL-R2/TRICK2/KILLER, DR6, 또는 CAR1에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, TRAIL-R1/DR4에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 마파투무맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, DR5/Apo2/TRAIL-R2/TRICK2/KILLER에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 코나투무맙 (AMG655), 렉사투무맙, 티가투주맙 (CS1008), 또는 드로지투맙 (PRO95780)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 세포외 기질과 연합된 분자에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포, 대식세포, 또는 자연 살해 세포에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3, 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3), 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), CD28, CD137, OX40, CD27, 글루코코르티코이드 유도 TNF 수용체 (GITR 또는 TNFRSF18), Ig 및 ITIM 도메인이 있는 T 세포 면역 수용체 (TIGIT), 또는 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD3에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 무로모납, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 포라루맙, SP34, 또는 블리나투모맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, PD-1에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 펨브로리주맙 또는 니볼루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CTLA-4에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 이필리무맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, TIM-3에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 TSR-022 또는 Sym023의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, LAG-3에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 BMS-986016의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, KIR에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 리릴루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD28에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 테랄리주맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD137에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 우토밀루맙 또는 우렐루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, OX40에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 PF-04518600 또는 BMS 986178의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD27에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 발리루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, GITR (TNFRSF18)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 GWN323 또는 BMS-986156의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, TIGIT에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 OMP-313M32, MTIG7192A, BMS-986207, 또는 MK-7684의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, ICOS에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 JTX-2011의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 대식세포에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CSF1R에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 에막투주맙(emactuzumab) 또는 IMC-CS4의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD40에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 CP-870,893의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 자연 살해 세포에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD16A에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 NTM-1633 또는 AFM13의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 동일한 항원에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 동일한 세포에서 상이한 항원에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 그리고 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 상이한 세포에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 및 제2 상보적 결합 도메인에 결합되지 않을 때 Fv를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합되지 않을 때 Fv를 형성할 수 있다.
본 출원은 또한, 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 제1 표적화 모이어티; 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제1 면역 세포 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 성분의 일부가 아니고, 제1 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인 또는 VL 도메인인, 제1 면역 세포 결합 도메인; 제1 면역 세포 결합 도메인에 대한 제1 불활성 결합 파트너로서, 제1 불활성 결합 파트너가 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 제1 면역 세포 결합 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않고, 여기서 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고, 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인, 제1 불활성 결합 파트너; 제1 면역 세포 결합 도메인과 제1 불활성 결합 파트너를 분리하는 프로테아제 절단 부위로서, 프로테아제 절단 부위는 암 또는 종양 미세환경 세포에 의해 발현되거나 (a) 암에 의해 발현되고 작용제의 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 종양 항원 또는 (b) 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된 프로테아제의 존재하에 면역 세포 결합 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있는, 프로테아제 절단 부위; 및 면역 세포 결합이 가능한 제1 상보적 기능성 도메인을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제1 성분, 및 제2 표적화 모이어티; 제2 면역 세포 결합 도메인; 및 선택적으로 면역 세포 결합이 가능한 제2 상보적 기능성 도메인을 포함하는 제2 성분을 포함하는 환자에서 암을 치료하기 위한 키트 또는 조성물을 기재한다.
일부 구현예에서, 제2 성분은 상보적 기능성 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 성분의 상보적 기능성 도메인은 수용체에 대한 리간드를 포함한다. 일부 구현예에서, 상보적 기능성 도메인은 TGF-베타 계열 구성원의 잠재 형태이다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 성분의 상보적 기능성 도메인은 사이토카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원이다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 성분의 상보적 기능성 도메인은 약독화 사이토카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 약독화 사이토카인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원의 변이체이다.
일부 구현예에서, 제2 성분은 추가로 제2 면역 세포 결합 도메인에 대한 제2 불활성 결합 파트너로서, 제2 불활성 결합 파트너는 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 제2 면역 세포 결합 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않고, 여기서 제2 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고, 제2 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인, 제2 불활성 결합 파트너; 및 추가로 제2 면역 세포 결합 도메인과 제2 불활성 결합 파트너를 분리하는 프로테아제 절단 부위로서, 프로테아제 절단 부위는 암에 의해 발현되거나 (a) 암에 의해 발현되고 작용제의 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 종양 항원 또는 (b) 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된 프로테아제의 존재하에 면역 세포 결합 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있는, 프로테아제 절단 부위를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 성분은 제2 성분에 공유 결합되지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 성분은 제2 성분에 공유 결합된다. 일부 구현예에서, 제1 성분은 절단 가능한 링커를 통해 제2 성분에 공유 결합된다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포, 대식세포, 또는 자연 살해 세포에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3, T-세포 수용체, 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3), 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), CD28, CD137, OX40, CD27, GITR (TNFRSF18), TIGIT, 또는 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 무로모납, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 포라루맙, SP34, 또는 블리나투모맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T-세포 수용체에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, PD-1에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 펨브로리주맙 또는 니볼루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CTLA-4에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 이필리무맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, TIM-3에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 TSR-022 또는 Sym023의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, LAG-3에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 BMS-986016의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, KIR에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 리릴루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD28에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 테랄리주맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD137에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 우토밀루맙 또는 우렐루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, OX40에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 PF-04518600 또는 BMS 986178의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD27에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 발리루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, GITR (TNFRSF18)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 GWN323 또는 BMS-986156의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, TIGIT에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 OMP-313M32, MTIG7192A, BMS-986207, 또는 MK-7684의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, ICOS에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 JTX-2011의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 대식세포에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CSF1R에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 에막투주맙 또는 IMC-CS4의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD40에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 CP-870,893의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 자연 살해 세포에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD16A에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 NTM-1633 또는 AFM13의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 상이하다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 동일하다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 DNA 압타머, RNA 압타머, 알부민, 리포칼린, 피브로넥틴, 안키린, 피노머(fynomer), 오바디(Obody), DARPin, 크노틴(knotin), 아비머(avimer), 아트리머(atrimer), 안티-칼린(anti-callin), 아필린(affilin), 애피바디(affibody), 이환 펩티드, 시스-노트(cys-knot), FN3 (애드넥틴, 센트리린(centryrin), 프로넥틴(pronectin), 또는 TN3), 또는 쿠니츠(Kunitz) 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 표적화 모이어티는 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 α4-인테그린; A33; ACVRL 1/ALK1; ADAM17; ALK; APRIL; BCMA; C242; CA125; 카드헤린-19; CAIX; CanAg; 탄산무수화효소 IX; CCN1; CCR4; CD123; CD133; CD137 (4-1BB); CD138/신데칸1; CD19; CD2; CD20; CD22; CD30; CD33; CD37; CD38; CD4; CD40; CD44; CD45; CD48; CD5; CD52; CD56; CD59; CD70; CD70b; CD71; CD74; CD79b; CD80; CD86; CD98; CEA; CEACAM; CEACAM1; CK8; c-Kit; 클라우딘(Claudin)-1 (CLDN1); CLDN18 (CLDN18.2 포함); CLDN6; c-met/HGFR; c-RET; 크립토(Cripto); CTLA-4; CXCR4; DKK-1; DLL3; DLL4; TRAIL-R2/DR5; DRS; EGFL7; EGFR; EGFRvIII; 엔도글린(endoglin); ENPP3; EpCAM; EphA2; 에피시알린(Episialin); FAP; FGFR1; FGFR2; FGFR3; FGFR4; 피브로넥틴 엑스트라-도메인 B; FLT-3; flt4; 엽산 수용체 1; 구아닐릴 시클라아제 C (GCC); GD2; GD3; 글리피칸-3; 글리피칸; GM3; GPNMB; GPR49; GRP78; Her2/Neu; HER3/ERBB3; HLA-DR; ICAM-1; IGF-1R; IGFR; IL-3Ra; 인테그린 α5β1; 인테그린 α6β4; 인테그린 αV; 인테그린 αVβ3; 루이스 Y; 루이스 y/b 항원; LFL2; LIV-1; Ly6E; MCP-1; 메소텔린; MMP-9; MUC1; MUC18; MUC5A; MUC5AC; 미오스타틴; NaPi2b; 뉴로필린 1; NGcGM3; NRP1; P-카드헤린; PCLA; PD-1; PDGFRa; PD-L1; PD-L2; 포스파티딜세린; PIVKA-II; PLVAP; PRLR; 프로가스트린; PSCA; PSMA; RANKL; RG1; 시글렉(Siglec)-15; SLAMF6; SLAMF7; SLC44A4,STEAP-1; TACSTD-2; 테나신 C; TPBG; TRAIL-R1/DR4; TROP-2; TWEAKR; TYRP1; VANGL2; VEGF; VEGF-C; VEGFR-2; 또는 VEGF-R2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 항 α4-인테그린 항체; 항-CD137 항체; 항-CCR4 항체; 항-CD123 항체; 항-CD133 항체; 항-CD138 항체; 항-CD19 항체; 항-CD20 항체; 항-CD22 항체; 항-CD33 항체; 항-CD38 항체; 항-CD40 항체; 항-CD49d 항체; 항-CD52 항체; 항-CD70 항체; 항-CD74 항체; 항-CD79b 항체; 항-CD80 항체; 항-CEA 항체; 항-cMet 항체; 항-크립토 항체; 항-CTLA-4 항체; 항-DLL3 항체; 항-TRAIL-2/DR5 항체; 항-E-카드헤린 항체; 항-엔도글린 항체; 항-EpCAM 항체; 항-표피 성장 인자 수용체 항체; 항-FGFR3 항체; 항-피브로넥틴 엑스트라-도메인 B 항체; 항-엽산 수용체 1 항체; 항-글리피칸 3 항체; 항-gp95/97 항체; 항-Her2 항체; 항-IGF-1R 항체; 항-IL-13R 항체; 항-IL-4 항체; 항-IL-6 항체; 항-MMP-9 항체; 항-MUC1 항체; 항-뮤신 코어 단백질 항체; 항-NGcGM3 항체; 항-P-카드헤린 항체; 항-PD-L1 항체; 항-p-당단백질 항체; 항-PSCA 항체; 항-PSMA 항체; 항-SLAMF7 항체; 항-TRAIL-R1/DR4 항체; 항-트랜스페린 항체; 항-TROP-2 항체; 또는 항-VEGF 항체인 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 알렘투주맙, 안데칼릭시맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, BCD-100, 베바시주맙, BGB-A317, 블리나투모맙, 브렌툭시맙, BU59, 캄렐리주맙, 카로툭시맙, 카투막소맙, 세미플리맙, 세툭시맙, 다라투무맙, 데파툭시주맙, 디누툭시맙, DS-8201, 더발루맙, 에드레콜로맙, 엘로투주맙, G544, 젬투주맙, 글렘바투무맙, GP1.4, hp67.6, IBI308, 이브리투모맙, 이노투주맙, 이필리무맙, 이사툭시맙, L19IL2, L19TNF, 마르게툭시맙, 미르베툭시맙, 모가무이주맙(Mogamuizumab), 목세투모맙, 나탈리주맙, 네시투무맙, 니볼루맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오포르투주맙, 파니투무맙, PDR001, 펨브로리주맙, 퍼투주맙, 폴라투주맙, 라코투모맙, 라무시루맙, 리툭시맙, 로발피투주맙, 사시투주맙, SM3, TAK-164, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트레멜리무맙, 우블리툭시맙, 우렐루맙, 우토밀루맙, XMAB-5574, 또는 졸베툭시맙을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD-1, IL-13, 줄기세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 CD40을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD-1, IL-13, 줄기세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 CD40의 전장 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD-1, IL-13, 줄기세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 CD40의 절단된 형태, 유사체, 변이체, 또는 유도체를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2 수용체, IL-4, IL-6, 멜라닌세포 자극 호르몬 수용체 (MSH 수용체), 트랜스페린 수용체 (TR), 엽산 수용체 1 (FOLR), 엽산 수산화효소 (FOLH1), EGF 수용체, PD-L1, PD-L2, IL-13R, CXCR4, IGFR, 또는 CD40L에 결합한다.
일부 구현예에서, 제2 표적화 모이어티는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 종양 미세환경 세포는 섬유아세포 또는 대식세포이다. 일부 구현예에서, 섬유아세포에 의해 발현된 항원은 섬유아세포 활성화 단백질이다. 일부 구현예에서, 대식세포에 의해 발현된 항원은 MAC-1/CD11b 또는 시데로플렉신 3이다.
본 출원은 또한 환자에게 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 환자에서 제1 표적화 모이어티 및/또는 제2 표적화 모이어티에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암을 치료하는 방법을 기재한다. 일부 구현예에서, 암은 조성물을 투여하기 전에 침윤성 면역 세포의 존재에 대해 평가된다. 일부 구현예에서, 암은 조성물을 투여하기 전에 종양 항원의 존재에 대해 평가된다. 일부 구현예에서, 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티는 동일한 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티는 상이한 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암은 유방암, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 림프구증식성 장애, 골수형성이상 장애, 골수증식성 질환 또는 전암성 질환 중 어느 하나이다.
일부 구현예에서, 환자의 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티 둘 다에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법은 환자에게 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자에서 하나의 종양 항원이 제1 표적화 모이어티에 결합하고, 하나의 종양 항원이 제2 표적화 모이어티에 결합하는 2개의 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법은 환자에게 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 환자의 면역 세포에 사이토카인을 전달하는 방법은 환자에게 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 조성물의 제1 및/또는 제2 상보적 기능성 도메인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원을 포함한다.
추가의 목적 및 이점은 다음의 설명에서 부분적으로 설명될 것이며, 부분적으로는 설명으로부터 명백할 것이거나 실제로 학습될 수 있다. 목적 및 이점은 첨부된 청구범위에서 특히 지적된 요소 및 조합에 의해 실현되고 달성될 것이다.
전술한 일반적인 설명과 다음의 상세한 설명은 모두 예시적이고, 설명적일 뿐이며 청구범위를 제한하지 않음을 이해해야 한다.
본 명세서에 통합되고 그 일부를 구성하는 첨부 도면은 하나의 (여러) 구현예(들)를 예시하고, 설명과 함께, 본원에 기재된 원리를 설명하는 역할을 한다.
도 1a-1b는 트윈 면역 세포 인게이저 (Twin Immune Cell Engager; "TWICE")를 보여준다. 도 1a는 환자에게 투여하기 전 2가지 작제물을 보여준다. 도 1b는 TWICE의 두 성분을 암세포에 표적화한 후 하나의 효과기 (면역) 세포에 있는 2개의 시그널링 분자에 결합하고 인게이징하는 TWICE를 보여준다. 육각형과 다이아몬드는 제1 및 제2 성분의 표적화 모이어티 (4개의 줄무늬 타원형 각각 두 세트)에 의해 결합된 암세포 상의 2개의 상이한 항원을 나타낸다. 각 성분은 면역 세포 결합 도메인 (각 성분의 검은색 도메인) 및 상보적 결합 도메인 (각 성분의 흰색 도메인)을 포함한다. 표적화 모이어티와 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인 사이의 링커도 표시되어 있다. 두 성분이 매우 근접하게 되면, 2개의 면역 세포 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)과 2개의 상보적 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)이 서로 쌍을 이룰 수 있도록 도메인 스와핑이 발생할 수 있다. 삼각형 및 원은 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인 (삼각형으로 표시되는 항원에 결합) 또는 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인 (원으로 표시되는 항원에 결합)에 의해 결합될 수 있는 효과기 세포 상의 상이한 항원을 나타낸다. 도메인 스와핑 및 쌍이 없는 경우, 두 성분의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인은 효과기 세포를 조절하지 않는다.
도 2는 제1 성분을 암세포로 표적화하고, 제2 성분을 비암 세포로 표적화한 후 하나의 효과기 (면역) 세포 상에서 2개의 시그널링 분자를 인게이징하는 TWICE를 보여준다. 육각형은 제1 성분의 표적화 모이어티 (4개의 줄무늬 타원형)에 의해 결합된 암세포 상의 항원을 나타낸다. 정사각형은 제2 성분의 표적화 모이어티 (4개의 줄무늬 타원)에 의해 결합된 종양 미세환경 (예컨대 종양-관련 대식세포 또는 섬유아세포) 내의 비암 세포 상의 항원을 나타낸다. 각 성분은 면역 세포 결합 도메인 (각 성분의 검은색 도메인) 및 상보적 결합 도메인 (각 성분의 흰색 도메인)을 포함한다. 두 성분이 매우 근접하게 되면, 2개의 면역 세포 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)과 2개의 상보적 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)이 서로 쌍을 이룰 수 있도록 도메인 스와핑이 발생할 수 있다. 삼각형 및 원은 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인 (삼각형으로 표시되는 항원) 및 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인 (원으로 표시되는 항원)에 의해 결합될 수 있는 효과기 세포 상의 상이한 항원을 나타낸다. 도메인 스와핑 및 쌍이 없는 경우, 두 성분의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인은 효과기 세포를 조절하지 않는다.
도 3은 TWICE의 두 성분을 암세포에 표적화한 후 2개의 상이한 효과기 (면역) 세포 상의 시그널링 분자에 결합하고 인게이징하는 TWICE를 보여준다. 다양한 표적화 전략이 사용될 수 있다. TWICE에 암세포에 결합하는 2가지 성분이 있는 경우, 3가지 상이한 구성을 이용할 수 있다: (a) TWICE의 두 성분은 동일한 표적화 모이어티의 두 사본을 사용하여 동일한 항원에 결합할 수 있음 (단일 항원 표적화); (b) TWICE는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프를 표적화하는 상이한 표적화 모이어티를 사용하는 단일 항원 전략을 사용할 수 있음; 또는 (c) TWICE의 두 성분은 두 표적화 모이어티가 암세포에 결합할 때 2가지 상이한 항원에 결합할 수 있음 (이중 항원 표적화). 이 도면은 동일한 항원 상의 상이한 에피토프를 표적화하는 상이한 표적화 모이어티를 사용하는 단일 항원 표적화를 나타낸다. 다시 도면으로 돌아가면, 다이아몬드는 제1 및 제2 성분의 표적화 모이어티 (4개의 줄무늬 타원 두 세트)에 의해 결합된 암세포 상의 동일한 항원의 두 분자를 나타낸다. 각 성분은 면역 세포 결합 도메인 (각 성분의 검은색 도메인) 및 상보적 결합 도메인 (각 성분의 흰색 도메인)을 포함한다. 두 성분이 매우 근접하게 되면, 2개의 면역 세포 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)과 2개의 상보적 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)이 서로 쌍을 이룰 수 있도록 도메인 스와핑이 발생할 수 있다. 삼각형 및 원은 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인 (효과기 세포 #1에서 삼각형으로 표시되는 항원에 결합) 및 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인 (효과기 세포 #2에서 원으로 표시되는 항원에 결합)에 의해 결합될 수 있는 2가지 상이한 효과기 세포 상의 항원을 나타낸다. 도메인 스와핑 및 쌍이 없는 경우, 두 성분의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인은 효과기 세포를 조절하지 않는다.
도 4는 효과기 (면역) 세포 상의 시그널링 분자에 결합하고 인게이징하며, TWICE의 두 성분을 암세포에 표적화한 후 암세포 상의 시그널링 분자에 결합하는 TWICE를 보여준다. 다이아몬드는 제1 및 제2 성분의 표적화 모이어티 (4개의 줄무늬 타원형 두 세트)에 의해 결합된 암세포 상의 동일한 항원의 두 분자를 나타낸다. 각 성분은 면역 세포 결합 도메인 (각 성분의 검은색 도메인) 및 상보적 결합 도메인 (각 성분의 흰색 도메인)을 포함한다. 두 성분이 매우 근접하게 되면, 2개의 면역 세포 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)과 2개의 상보적 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)이 서로 쌍을 이룰 수 있도록 도메인 스와핑이 발생할 수 있다. 삼각형은 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인에 의해 결합될 수 있는 효과기 세포 상의 항원을 나타낸다. 줄무늬 직사각형은 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인에 의해 결합될 수 있는 암세포 상의 항원을 나타낸다. 도메인 스와핑 및 쌍이 없는 경우, 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인은 효과기 세포 또는 암세포를 조절하지 않는다.
도 5는 환자에게 투여하기 전 기능적 도메인을 포함하는 TWICE를 보여준다. 제1 및 제2 성분의 표적화 모이어티 (4개의 줄무늬 타원형 각각 두 세트)가 표시되어 있다. 각 성분은 면역 세포 결합 도메인 (각 성분의 검은색 곡선 도메인)을 포함한다. 각 성분은 또한 면역 세포 결합 도메인에 부착된 불활성 결합 도메인 (각 성분의 흰색 곡선 도메인, 불활성 결합 파트너로도 알려짐)을 포함한다. 하나의 성분은 또한 상보적 기능성 도메인 (검은색 삼각형)을 포함한다. 표적화 모이어티와 면역 세포 결합 도메인 또는 상보적 기능성 도메인 사이의 링커도 표시되어 있다. 또한, 링커는 각 성분의 면역 세포 결합 도메인과 불활성 결합 파트너 사이에 표시된다. 불활성 결합 파트너를 부착하는 링커는 종양 미세환경에서 절단되는 절단 가능한 링커일 수 있다. 이 절단은 불활성 결합 파트너를 방출한다.
2개의 성분이 매우 근접하고, 불활성 결합 파트너가 방출된 경우, 2개의 면역 세포 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)이 서로 쌍을 이룰 수 있도록 도메인 스와핑이 발생할 수 있다. 또한, 상보적 기능성 도메인은 이를 표적 세포 (예컨대 암세포 또는 효과기 세포)에 국재화하는 표적화 모이어티에 기초하여 표적 세포에 결합하고 인게이징할 수 있다. 상보적 기능성 도메인의 활성은 또 다른 도메인과 쌍을 이룰 필요 없이 발생하지만, 상보적 기능성 도메인이 표적화 모이어티에 의해 표적 세포에 국재화될 때 향상된다. 도메인 스와핑 및 쌍이 없는 경우, 두 성분의 면역 세포 결합 도메인은 표적 세포를 조절하지 않는다. 일부 구현예에서, 두 성분은 모두 상보적 기능성 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나의 성분만이 불활성 결합 파트너를 포함한다.
도 6은 환자에게 투여하기 전에 이량체화 도메인을 포함하는 TWICE를 보여준다. 제1 및 제2 성분의 표적화 모이어티 (4개의 줄무늬 타원형 각각 두 세트)가 표시되어 있다. 각 성분은 면역 세포 결합 도메인 (각 성분의 검은색 도메인) 및 상보적 결합 도메인 (각 성분의 흰색 도메인)을 포함한다. 표적화 모이어티와 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인 사이의 링커도 표시되어 있다. 이량체화 도메인은 링커를 통해 각 성분의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인에 부착된다 (따라서 각 성분은 결합할 수 있는 이량체화 도메인 A 및 이량체화 도메인 B를 가짐). 한 쌍의 이량체화 도메인 (이량체화 도메인 A와 이량체화 도메인 B의 쌍)의 결합은 각 성분의 VH 및 VL 도메인의 결합을 향상시킨다. 이량체화 도메인 링커는 절단될 수 있어 링커가 절단되고 이량체화 도메인이 종양 미세환경에서의 절단 후에 손실된다. 이량체화 도메인을 제거한 후 두 성분이 매우 근접하게 되면 2개의 면역 세포 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)과 2개의 상보적 결합 도메인 (각 성분에서 하나씩)이 서로 쌍을 이룰 수 있도록 도메인 스와핑이 발생할 수 있다. 도메인 스와핑 및 쌍이 없는 경우, 두 성분의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인은 표적 세포를 조절하지 않는다. 이량체화 도메인 링커의 절단이 없는 경우, 각 성분의 VH 및 VL 도메인은 도메인 스왑 없이 함께 결합된 상태로 유지된다. 일부 구현예에서, 하나의 성분만이 한 쌍의 이량체화 도메인을 포함하고, 다른 성분은 이량체화 도메인을 포함하지 않는다.
도 7a-7c는 다양한 이량체화 도메인 링커 및 이량체화 도메인을 갖는 표 12에 열거된 TWICE 분자의 발현 및 절단을 보여준다. 도 7a는 다양한 이량체화 도메인 링커 및 이량체화 도메인을 갖는 TWICE를 보여준다. TWICE는 SDS-PAGE (도 7b)에 의해 분석되었고, 절단 산물이 또한 분석되었다 (도 7c).
도 8a-8b는 일련의 농도 (도 8a)에 걸쳐 또는 EC50 측정 (도 8b)과 함께 Fab 또는 dsFv 결합 모이어티를 함유하는 TWICE에 의한 표적 결합을 보여준다.
도 9a-9c는 CD3/CTLA4 TWICE와 헤테로-Fc 이량체화 도메인의 가교(bridging) ELISA를 보여준다. 도 9a는 분석 설계를 보여주고, 도 9b는 CD3 가교 결과를 보여주고, 도 9c는 CTLA-4 가교 결과를 보여준다.
도 10a-10b는 CD3 가교 ELISA (도 10a) 또는 CTLA4 가교 ELISA (도 10b)를 사용하는 코일드-코일(coiled-coil) 이량체화 도메인을 갖는 CD3/CTLA4 TWICE에 대한 결과를 보여준다.
도 11a-11b는 CD3 가교 ELISA (도 11a) 또는 CD28 가교 ELISA (도 11b)에서 CD28/CD3 TWICE를 사용한 결과를 보여준다.
도 12a-12b는 테랄리주맙 (항-CD28) 및 우렐루맙 (항-4-IBB) TWICE를 사용한 가교 ELISA를 보여준다. 구체적으로, 이것은 CD28 가교 ELISA (도 12a) 또는 4-1BB 가교 ELISA (도 12b)에서 CD28/4-1BB (CD137) TWICE를 사용한 결과를 보여준다.
도 13은 아테졸리주맙/이필리무맙 TWICE의 PD-L1 결합을 보여준다. 구체적으로, 이것은 PD-L1 가교 ELISA에서 PD-L1/CTLA-4 TWICE를 사용한 결과를 보여준다.
도 14a-14b는 HCT-15 세포에서 사전 절단이 있거나 없는 CD3/CTLA4 TWICE에 의한 T-세포 방향 전환(redirection)을 보여준다. 도 14a는 사전 절단에 의한 활성화를 보여준다. 도 14b는 사전 절단 유무에 따른 실험 결과를 보여준다.
도 15a-15d는 CD3/CTLA-4 TWICE에 의한 T 세포 방향 전환 및 HCT15 세포의 사멸을 보여준다. 도 15a는 절단 분석의 결과를 보여준다. 도 15b는 인터페론 감마 방출을 보여준다. 도 15c 및 15d는 상이한 조건하에 HCT15 세포의 특이적 용해를 측정하는 LDH 방출에 대한 결과를 보여준다.
도 16은 HCT-15에서 CD3/CD28 TWICE에 의한 T-세포 방향 전환을 보여준다. 이 도면은 CD3/CD28 TWICE를 사용하여 LDH 방출에 의해 측정된 HCT-15 세포 사멸을 보여준다.
도 17a-17b는 유세포 분석 (도 17a) 또는 인터페론 감마 방출 (도 17b)에 의해 측정된 HCT15 세포에 대한 사전 활성화/고갈된 말초 혈액 단핵 세포 (PMBC)의 방향 전환을 보여준다.
도 18a-18b는 CD16a 가교 ELISA (도 18a) 또는 LDH 방출 (도 18b)에 의해 측정된 HCT15 세포에 대한 NK 세포의 방향 전환을 보여준다.
표 1은 본원에서 참조된 특정 서열의 목록을 제공한다.
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
구현예에 대한 설명
I. 트윈 면역 세포 인게이저
트윈 면역 세포 인게이저 ("TWICE")는 두 성분의 도메인이 쌍을 이루고 면역 세포에 결합하고, 인게이징될 수 있는 2-성분 복합체를 지칭한다. 이와 같이, 단일 TWICE는 2개의 별개의 폴리펩티드 또는 단일 폴리펩티드에 존재할 수 있는 2개의 성분을 포함한다. 따라서, TWICE는 단일 작제물이거나 두 구성요소의 키트일 수 있다. 달리 구체적으로 논의되지 않는 한, 출원 및 청구범위 전반에 걸쳐 TWICE라는 용어의 사용은 두 구현예를 모두 포함한다. 본 출원은 일련의 TWICE를 설명한다. TWICE는 다양한 항암 효과를 매개하는 상이한 경로를 활성화할 수 있다.
출원에서 설명하는 바와 같이, TWICE는 각각 표적화 모이어티, 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인을 포함하는 제1 및 제2 성분을 포함할 수 있다. 제1 및 제2 성분의 표적화 모이어티는 TWICE를 암세포 또는 종양 미세환경 내의 세포로 표적화하는 기능을 한다. 두 성분의 면역 세포 결합 도메인이 함께 쌍을 이루고/이루거나 두 성분의 상보적 결합 도메인이 함께 쌍을 이루는 경우, 이러한 쌍을 이룬 도메인은 면역 세포 활성을 조절하거나 다른 (즉, 상보적인) 기능을 제공하는 기능을 할 수 있다. 예를 들어, 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인은 면역 체크포인트를 차단하거나 암세포의 사멸 세포 사멸을 유도할 수 있다.
TWICE에서 상보적 결합 도메인의 존재는 상보적 도메인을 포함하지 않는 복합체와 비교하여 (즉, 면역 세포 상의 단일 항원에만 결합하는 복합체와 비교하여) 암 치료에서의 효능을 개선할 것으로 예상된다.
본 출원에서 또한 설명하는 바와 같이, 제1 성분 및 선택적으로 제2 성분은 면역 세포 결합이 가능한 상보적 기능 도메인을 포함할 수 있다. 상보적 기능성 도메인을 포함한 일부 구현예에서, 면역 세포 결합 도메인은 차폐된다. TWICE의 상보적 기능성 도메인은 다른 도메인과 쌍을 이룰 필요 없이 면역 기능을 조절할 수 있다.
본원에 기재된 본 TWICE 복합체의 주요 이점은 면역 세포 결합 도메인, 및 일부 구현예에서 상보적 결합 도메인이, TWICE의 제1 및 제2 성분이 모두 근접할 때 (여기서는 둘 다 암을 표적화하기 때문에 종양 미세환경에 있을 때)만 쌍을 이룰 것이라는 점이다. 암 부위에서 TWICE의 상이한 성분 간의 도메인 쌍은, 면역 세포 결합 도메인과 선택적으로 상보적 결합 도메인이 암세포 또는 그것의 미세환경에서 두 성분의 도메인이 쌍을 이룬 후에만 기능하기 때문에 특이성을 개선하고 표적외 효과를 감소시킬 수 있다.
몇몇 대표적인 유형의 TWICE를 기술한 후, 본 출원은 다른 유형의 TWICE를 포함하는 성분을 기술할 것이다. TWICE는 암 생존 및 항암 면역 반응과 관련된 많은 경로를 조절할 수 있기 때문에 TWICE는 본원의 대표적인 설명으로 제한되지 않는다.
본 TWICE 복합체는 종양 미세환경에서 활성화되는 2-성분 복합체로 여러 기능을 결합하는 독특한 능력을 제공한다. 따라서, 본 복합체는 종양 미세환경에 국재화되고 환자에게 이익이 되는 2가지 다른 신호를 초래할 수 있는 2-성분 복합체를 투여하는 단일 접근법을 갖는 데 있어 의미 있는 이점을 제공한다. 일부 구현예에서, 이러한 신호 중 하나 (쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인으로부터의)는 2-성분 복합체가 합쳐질 때만 활성화된다. 일부 구현예에서, 이들 신호 (쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인으로부터 및 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인으로부터의) 모두는 2-성분 복합체가 합쳐질 때만 활성화된다. 이 독특한 작제물은 선행 기술 작제물에 존재하지 않았던 많은 이점을 제공한다.
1. 한 종류의 면역 세포에서 2가지 시그널링 경로를 활성화하는 TWICE
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 동일한 유형의 면역 세포에 결합한다.
본원에 사용된 바와 같이, 면역 세포는 "효과기 세포"라고도 지칭할 수 있다. 용어 "효과기 세포"는 암에 대한 활성을 매개하는 면역 세포를 의미한다.
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 T 세포에 결합한다.
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 면역 세포 상의 동일한 항원에 결합한다. 이 구현예에서, 2개의 시그널링 경로는 동일하고, 영향이 증폭된다. 일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 면역 세포 상의 상이한 항원에 결합한다. 이 구현예에서, 2개의 시그널링 경로는 상이하고 2개의 상이한 신호가 면역 세포로 전달된다.
일반적으로, T-세포 활성화 과정은 다중 신호를 포함한다. 1차 신호는 T-세포 수용체 (TCR)가 항원 제시 세포 (APC)에 의해 제시된 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자에 결합하는 것에서 비롯된다. 공동 자극 신호는 몇 가지 별개의 T-세포 및 APC 상호작용 중 하나에서 발생할 수 있다 (Buchbinder EI, Desai A Am J Clin Oncol . 39(1):98-106 (2016) 참조). T 세포의 활성화는 CD28, CD137 (4-1BB), OX40, CD27, GITR (TNFRSF18) 및 ICOS와 같은 여러 공동 자극 수용체에 의해 향상된다. T 세포와 APC 또는 암세포 사이의 상호작용에는 T 세포 활성화를 감소시키는 여러 억제/체크포인트 분자, 예컨대 PD-1, CTLA-4, TIM-3, LAG-3 및 KIR이 포함될 수 있다 (Torphy RJ 등 Int J Mol Sci . 18:2642 (2017)). 따라서 공동 자극 또는 공동 억제 수용체에 대한 두 항체의 효과를 조합하면 항종양 T-세포 반응을 향상시킬 수 있다.
TWICE는 (쌍을 이룬 후) T 세포 상의 공동 자극 또는 체크포인트 분자에 대한 2개의 기능적 항체를 포함할 수 있으며, 이는 강력한 T-세포 활성화를 유도한다 (도 1b, 두 성분의 검은색 면역 세포 결합 도메인의 쌍 및 두 성분의 흰색 상보적 결합 도메인의 쌍을 보여줌). 강력한 T-세포 활성화는 T 세포가 종양에 존재하지만 암세포의 면역억제 신호로 인해 비활성일 때 환자에게 유용할 수 있다 (Wu AA 등 OncoImmunology 4:7 (2015)).
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 T 세포에 대한 작용적 또는 길항적 결합을 통해 면역 세포와 결합할 수 있다.
"작용적"이란 항원에 대한 쌍을 이룬 면역 세포 결합 또는 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인의 결합이 시그널링 경로를 활성화함을 의미한다. 항원에 대한 결합이 면역 세포 활성화로 이어질 때 작용적 결합이 관심 대상일 수 있다.
"길항제"란 항원에 대한 쌍을 이룬 면역 세포 결합 또는 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인의 결합이 시그널링 경로를 차단하거나 억제함을 의미한다. 길항적 결합은 천연 리간드와 항원의 결합이 일반적으로 면역 세포 비활성화로 이어질 때 관심 대상일 수 있다. 이러한 방식으로, 본 TWICE의 쌍을 이룬 도메인의 "길항적" 세트의 결합은 일반적으로 면역 세포 무반응 또는 비활성화를 매개하는 경로를 차단하거나 억제함으로써 면역 세포를 활성화할 수 있다.
면역 세포에 대한 길항제 또는 작용제 효과를 갖는 것으로 알려진 항체는 본 TWICE의 쌍을 이룬 결합 도메인을 생성하는 데 사용될 수 있다. 시그널링 경로가 T-세포 활성화를 촉진한다면, 작용적 접근은 T-세포 활성화를 증가시킬 것이다. 시그널링 경로가 T-세포 활성화를 억제한다면, 길항적 접근은 T-세포 활성화를 증가시킬 것이다. 따라서 이 접근 방식으로 여러 다양한 유형의 경로를 사용할 수 있다.
작용 항체의 일 예는 TCR 복합체를 자극하는 CD3 엡실론 항체 (예를 들어, SP34, OKT3)이다. 또 다른 예에서, GITR에 대한 작용 항체는 조절 T 세포 기능을 억제하면서 CD8+ T 효과기 세포를 활성화할 수 있다 (Knee 등, European Journal of Cancer 67:1e10 (2016) 참조. 면역 세포의 자극을 유도하는 길항 항체의 예는 PD-1 항체 (예를 들어, 펨브로리주맙 또는 니볼루맙)이다. PD-1은 면역 세포를 억제하므로 이러한 항체는 PD-1과 그 리간드의 상호작용을 차단하여 억제 신호를 길항한다.
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 2개의 작용 항체를 생성하고, 면역계에 2가지 긍정적인 자극을 제공할 수 있다 (예를 들어, 항-CD137 항체가 있는 항-CD3 엡실론). CD3 및 CD137 모두 T-세포 활성화를 촉진한다.
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 하나의 작용제 항체 및 하나의 길항제 항체 (예를 들어, 항-CD3 입실론 항체 및 항-CTLA4 항체)를 생성할 수 있다. 상기 논의된 바와 같이 CD3은 TCR 복합체를 자극하는 반면 CTLA4는 억제 신호를 제공한다. CTLA4의 억제 신호를 길항하면 T-세포 활성화가 촉진될 것이다.
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 2가지 억제 신호를 차단하는 2개의 길항 항체 (예를 들어 항-CTLA4 항체 및 항-PD-1 항체)를 생성할 수 있다. 상기 논의된 바와 같이, 이들 신호는 모두 T-세포 활성화를 억제하고 이들 신호를 길항하면 T-세포 활성화를 촉진할 것이다.
또 다른 예시적인 TWICE는 CD3 엡실론 (CD3e) 항체를 T-세포 활성화를 촉진하는 또 다른 항체와 조합한다. 현재 증거는 CD3 이중특이적 항체가 다양한 체크포인트 분자를 통해 추가로 조절된다는 것을 시사한다 (Kobold S 등 Front Oncol . 8: 285 (2018) 참조). 또한, T-세포 활성화 이중특이적 항체의 치료 효과는 일부 환자 또는 환경에서 유도된 T-세포 무반응 (특정 항원에 대한 정상적인 면역 반응의 부재)에 의해 제한될 수도 있다. 따라서, T 세포를 활성화하는 항-CD3 엡실론 항체를 T-세포 활성화를 강화하고 무반응을 방지하는 항체와 조합하면 향상되고/되거나 더 오래 지속되는 항-종양 T-세포 반응을 생성할 수 있다.
2. 2개의 면역 세포를 조절하는 TWICE
일부 구현예에서, 함께 쌍을 이룰 때 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 상보적 결합 도메인은 2가지 상이한 면역 세포에 결합한다. 이런 방식으로 TWICE는 2가지 상이한 유형의 면역 세포를 조절할 수 있다. 다음과 같은 대표적인 예를 포함하여, 다양한 면역 세포가 TWICE에 의해 조절될 수 있다. 도 2는 TWICE를 통한 2개의 면역 세포 (효과기 세포 #1 및 효과기 세포 #2)의 대표적인 활성화 모델을 보여준다.
a) T 세포를 자극하고 종양-관련 대식세포를 억제하는 TWICE
2가지 상이한 면역 세포의 결합은 T 세포가 종양에서 제외되고 종양-관련 대식세포 (TAM)가 존재할 수 있는 종양 미세환경에서 유용할 수 있다. TAM은 혈관신생, 면역억제 및 염증을 촉진하여 종양 성장을 용이하게 하는 대안적으로 활성화된 대식세포 부류를 나타낸다 (Poh and Ernst, Front Oncol . 12(8):49 (2018)). 일부 구현예에서, TWICE는, 상보적 결합 도메인과 면역 세포 결합 도메인이 쌍을 이룰 때, TAM 활성을 차단하고 T 세포를 활성화함으로써 활성을 결합한다.
일부 구현예에서, TWICE는 함께 쌍을 이룰 때 T-세포 활성화를 매개하는 면역 세포 결합 도메인과 함께 쌍을 이룰 때 TAM을 억제하는 상보적 결합 도메인을 포함한다.
예를 들어, 항-CSF1R 차단 항체로 TAM을 표적화하면 TAM 침윤이 감소하고, CD8+ T-세포 확장이 촉진된다 (Ries CH 등 Cancer Cell. 25(6):846-59 (2014)). CD40 경로의 활성화는 또한 TAM의 면역억제 효과를 방해할 수 있다. CD40 작용 항체는 종양에 대한 효과적인 면역 반응을 유발하는 데 사용될 수 있는 고전적으로 활성화된 대식세포의 재프로그래밍 또는 동원으로 이어질 수 있다. T-세포 활성화 항체와 CD40 작용 항체 또는 항-CSF1R 차단 항체를 조합한 대표적인 TWICE는, 면역 결합 도메인과 상보적 결합 도메인의 쌍을 이룬 후 이들 항체 중 어느 하나 단독에 비해 부가적인 효능을 제공할 수 있다.
b) T 세포 및 NK 세포를 자극하는 TWICE
TWICE는 T 세포와 NK 세포를 모두 활성화하여 암세포를 사멸시키는 데 사용될 수 있다. T 세포와 NK 세포의 공동 활성화는 어느 세포 단독의 활성화보다 암에 대한 더 강력한 면역 반응을 유발할 수 있다.
일부 구현예에서, TWICE는, 함께 쌍을 이루는 경우, T-세포 활성화를 매개하는 면역 세포 결합 도메인, 및 함께 쌍을 이룰 때, 항-CD16A 항체와 같은 NK-세포 활성화를 매개하는 상보적 결합 도메인을 포함한다. 예를 들어, TWICE440 및 TWICE441을 포함하는 TWICE에서, 항-CD16A 항체는 항-CD3 항체 OKT3과 조합되었다 (서열 번호: 212-215 및 도 18a-18b 참조).
3. 면역 세포를 자극하고 암세포에 미치는 영향을 매개하는 TWICE
TWICE는 또한 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인에 의해 면역 세포에 결합할 수 있고, 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인에 의해 암세포에 결합할 수 있다. 이 치료 전략은 항암 면역 세포 활성화를 매개할 뿐만 아니라 표적화된 암세포에 직접 생물학적 기능을 유도할 수 있다. 암세포에서 유도된 생물학적 기능은, 예를 들어, 사멸 수용체를 통한 세포 사멸 유도 또는 면역억제 신호의 억제일 수 있다.
면역 세포를 활성화할 수 있는 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인은 이미 설명되었으며, TWICE 성분은 또한 암에 결합하는 상보적 결합 도메인을 포함할 수 있다.
a) 면역 세포를 자극하고 암에 의한 면역 세포 비활성화를 차단하는 TWICE
본 TWICE는 면역 세포를 활성화하고 암세포에서 면역 세포로의 억제 신호를 차단하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 면역 세포 활성화를 억제하는 암세포로부터의 신호를 차단할 수 있다.
예를 들어, 일부 암은 PD-L1을 발현시키는데, 이는 T 세포에서 PD-1 또는 B7.1에 결합하여 T-세포 비활성화로 이어질 수 있다. 일부 구현예에서, 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 암세포 상의 PD-L1에 결합한다. 일부 구현예에서, PD-L1에 대한 결합은 T 세포에서 PD-1과의 상호작용을 차단한다. PD-1과 PD-L1의 상호작용을 차단하면 항종양 반응이 개선되는 것으로 나타났다. PD-L1 항체 (예컨대 아테졸리주맙, 더발루맙 및 아벨루맙)는 비-소세포 폐암 및 흑색종을 포함한 여러 악성 질환을 치료하도록 승인되었다.
또 다른 예에서, 일부 암은 항종양 면역 반응을 하향 조절하는 종양 괴사 인자 수용체 (TNFR) 계열 구성원을 발현시킬 수 있다. 이러한 분자의 예는 면역억제 환경을 생성하기 위해 조절 T 세포에서 그 리간드인 RANKL에 결합하는 핵 인자 카파-B (RANK)의 수용체 활성화제이다 (Wu 등 Oncoimmunology. 4(7) (2015) 참조). 일부 구현예에서, 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 암세포 상의 RANK에 결합한다. 일부 구현예에서, RANK에 대한 결합은 T 세포 상의 RANKL과의 상호작용을 차단한다. 길항 항체에 의한 RANKL에 대한 RANK 시그널링 차단은 암의 전임상 마우스 모델에서 T 세포를 활성화할 수 있는 항-CTLA4 항체의 항종양 효과를 향상시킨다 (Ahern 등 Clin Cancer Res. 23(19):5789-5801 (2017)).
b) 면역 세포를 자극하고 암세포의 세포 사멸을 유발하는 TWICE
본 TWICE는 또한 면역 세포를 활성화하고, 암세포의 세포 사멸을 유발하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 암세포에 의해 발현된 수용체에 결합함으로써 암세포의 사멸을 유발할 수 있다.
세포 사멸을 유발하도록 자극될 수 있는 수용체의 예에는 TNFR 패밀리의 구성원, 예컨대 Fas/CD95/Apo1, TNFR1/p55/CD120a, DR3/Apo3/WSL-1/TRAMP/LARD, TRAIL-R1/DR4, DR5/Apo2/TRAIL-R2/TRICK2/KILLER, 또는 CAR1이 포함된다. 암세포에서 세포 사멸을 유도하는 임상 개발에서 TNFR 계열 작용제 항체는 마파투무맙 (NCT01258608)이다. 암세포를 직접 사멸시키고 항암 면역 반응을 활성화하는 활성을 결합한 TWICE는 부가적인 효능을 가질 수 있다.
4. 상보적 기능성 도메인을 포함하는 TWICE
TWICE의 제1 및/또는 제2 성분은 또한 상보적 기능 도메인을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "상보적 기능성 도메인"은 또 다른 도메인과 쌍을 이룰 필요 없이 적절한 면역 세포에 표적화될 때 면역 기능을 조절하는 분자를 지칭한다. 따라서, TWICE는 면역 세포에 대한 상보적 기능성 도메인을 표적화할 수 있고, 표적화 없이 활성이 부족하거나 전신 전달에 너무 독성이 있을 수 있는 상보적 기능성 도메인의 활성을 촉진할 수 있다. 예시적인 상보적 기능성 도메인은 활성을 갖기 위해 적절한 면역 세포에 표적화되어야 하는 약독화 사이토카인이다. 이 구현예는 도 5에 도시되어 있다. 약독화 사이토카인은 CD-122-우선 IL-2 경로 작용제인 벰페갈데스류킨 (NKTR-214)을 사용한 데이터에 의해 나타난 바와 같이 표적 세포를 우선적으로 활성화할 수 있다.
이러한 방식으로, TWICE는 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인의 활성뿐만 아니라 상보적 기능성 도메인으로부터의 활성에 의해 부가적인 항암 면역 반응을 매개하할 수 있으며, 사실상 효과기 세포/암세포 결합 시냅스에서만 활성화되는 효과기 세포를 위한 "케어-패키지"를 전달한다.
B. 단일 폴리펩티드 사슬 또는 2개의 성분
TWICE는 단일 폴리펩티드 사슬 또는 2개의 개별 성분을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 성분은 제2 성분에 공유 결합되지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 성분은 제2 성분에 공유 결합된다.
일부 구현예에서, TWICE는 2개의 개별 성분으로 구성된다. 즉, TWICE는 개별 폴리펩티드인 제1 및 제2 성분으로 구성될 수 있다.
일부 성분에서 TWICE는 단일 폴리펩티드 사슬로 구성된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분은 단일 아미노산 서열 내에 포함된다.
TWICE가 단일 폴리펩티드 사슬로 구성되는 경우, 제1 및 제2 성분은 링커에 의해 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 이 링커는 제1 및 제2 성분에 공유 결합한다. 일부 구현예에서, 이 링커는 절단 가능한 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분 사이의 절단 가능한 링커는 프로테아제 절단 부위를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 성분 및 제2 성분에 공유 결합하는 링커 내에 포함된 절단 부위는 프로테아제 절단 부위이다. 서열 번호: 1-84는 사용될 수 있는 일부 예시적인 프로테아제 절단 부위를 열거하지만, TWICE는 이 세트의 프로테아제 절단 부위로 제한되지 않고, 다른 프로테아제 절단 부위가 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 성분 및 제2 성분에 공유 결합하는 링커 내에 포함된 절단 부위는 종양-관련 프로테아제 절단 부위이다. 종양 관련-프로테아제는 종양과 관련된 것이다. 일부 구현예에서, 종양-관련 프로테아제는 신체의 다른 영역에 비해 종양에서 더 높은 발현을 나타낸다. 표 2 (아래 섹션 IV에 표시됨)는 종양-관련 프로테아제의 예를 제공하지만, 종양에서 발현되는 모든 프로테아제는 TWICE에 대한 종양-관련 프로테아제 절단 부위를 선택하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 프로테아제는 종양 미세환경에서 비암 세포, 예컨대 섬유아세포의 종양-관련 대식세포에 의해 발현된다.
일부 구현예에서, 제1 성분 및 제2 성분에 공유 결합하는 링커 내에 포함된 절단 부위는 혈액에서 발견되는 프로테아제에 대한 절단 부위이다. 혈액에서 발견되는 예시적인 프로테아제에는 트롬빈, 호중구 엘라스타아제 및 푸린이 포함된다.
C. 표적화 모이어티
제1 성분의 표적화 모이어티는 작용제를 암세포의 국소 환경에 전달함으로써 기능하여 국소화된 치료 전략을 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 제1 표적화 모이어티는 암세포에 특이적으로 결합함으로써 암세포를 표적화한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 모두 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 표적화 모이어티는 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하고, 제2 표적화 모이어티는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 항원-결합 단편이란 표적에 대한 결합 활성을 유지하는 임의의 항체 단편, 예컨대 scFv 또는 경쇄가 없는 면역글로불린을 포함하는 다른 기능적 단편, VHH, VNAR, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 항체 단편, 디아바디, scAB, 단일-도메인 중쇄 항체, 단일-도메인 경쇄 항체, Fd, CDR 영역, 또는 항원 또는 에피토프에 결합할 수 있는 항체의 임의의 부분 또는 펩티드 서열을 의미한다. VHH 및 VNAR은 고전적인 항체의 대안이며, 상이한 종 (각각 낙타류 및 상어)에서 생산되지만, 본 발명자들은 이들을 항체의 항원-결합 단편에 포함할 것이다. 일부 구현예에서, Fv 도메인은 이황화-안정화 Fv (dsFv)이다. "전장 항체"로 구체적으로 언급되지 않는 한, 본 출원에서 항체를 지칭할 때 그것은 본질적으로 그의 항원-결합 단편에 대한 지칭을 포함한다.
일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 항체가 아니지만, 또 다른 유형의 표적화 모이어티이다. DNA 압타머, RNA 압타머, 알부민, 리포칼린, 피브로넥틴, 안키린, 피노머, 오바디(Obody), DARPin, 크노틴, 아비머, 아트리머, 안티칼린, 아필린, 아피바디, 이환 펩티드, 시스-노트, FN3 (애드넥틴, 센트리린, 프로넥틴, TN3), 및 쿠니츠 도메인을 포함하여, 암을 표적화할 수 있는 광범위한 표적화 모이어티가 알려져 있다. 이들 및 다른 비-항체 스캐폴드 구조는 암세포를 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 더 작은 비-항체 스캐폴드는 혈류에서 빠르게 제거되며, 단클론 항체보다 반감기가 더 짧다. 상기 스캐폴드는 또한 혈관 내피와 기저막을 통한 모세관 루멘에서의 빠른 유출로 인해 더 빠른 조직 침투를 보여준다. Vazquez-Lombardi 등, Drug Discovery Today 20(1):1271-1283 (2015) 참조. 암을 표적화하는 많은 비-항체 스캐폴드는 이미 임상 개발 중이며, 다른 후보들은 전임상 단계에 있다. Vazquez-Lombardi, 표 1 참조.
1. 암을 표적화할 수 있는 표적화 모이어티
일부 구현예에서, 제1 표적화 모이어티만 암에 의해 발현된 항원에 결합하고, 제2 표적화 모이어티는 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 모두 암에 의해 발현된 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 동일하고 동일한 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 암에 의해 발현된 동일한 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 암에 의해 발현된 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티는 암에 의해 발현된 상이한 항원에 결합한다.
표적화에 사용될 수 있는 특정 종양 항원은 (괄호 안의 암세포 유형의 예와 함께) 다음을 포함한다: Her2/Neu (상피 악성 종양); CD22 (B 세포 악성 종양); EpCAM (CD326) (상피 악성 종양); EGFR (상피 악성 종양); PSMA (전립선 암종); CD30 (B 세포 악성 종양); CD20 (B 세포 악성 종양); CD33 (골수 악성 종양); CD80 (B 세포 악성 종양); CD86 (B 세포 악성 종양); CD2 (T-세포 또는 NK-세포 림프종); CA125 (난소 암종을 포함한 다발성 암); 탄산무수화효소 IX (신세포 암종을 포함한 다발성 암); CD70 (B-세포 악성 종양); CD74 (B-세포 악성 종양); CD56 (T-세포 또는 NK-세포 림프종); CD40 (B-세포 악성 종양); CD19 (B-세포 악성 종양); c-met/HGFR (위장관 및 간 악성 종양; TRAIL-R1/DR4 (난소 및 결장직장 암종을 포함한 다발성 악성 종양); DRS (난소 및 결장직장 암종을 포함한 다발성 악성 종양); PD-1 (B-세포 악성 종양); PD-L1 (상피 선암종을 포함한 다발성 악성 종양); IGF-1R (상피 선암종을 포함한 대부분의 악성 종양); VEGF-R2 (상피 선암종을 포함한 대부분의 악성 종양과 관련된 혈관계; 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA) (전립선 선암종); MUC1 (상피 악성 종양); CanAg (결장 및 췌장의 암종과 같은 종양); 메소텔린 (중피종 및 난소 및 췌장 선암종을 포함한 많은 종양); P-카드헤린 (유방 선암종을 포함한 상피 악성 종양); 미오스타틴 (GDF8) (육종 및 난소 및 췌장 선암종을 포함한 많은 종양); 크립토 (TDGF1) (결장암, 유방암, 폐암, 난소암, 및 췌장암을 포함한 상피 악성 종양); ACVRL 1/ALK1 (백혈병 및 림프종을 포함한 다발성 악성 종양); MUC5AC (유방 선암종을 포함한 상피 악성 종양); CEACAM (유방 선암종을 포함한 상피 악성 종양); CD137 (B-세포 또는 T-세포 악성 종양); CXCR4 (B-세포 또는 T-세포 악성 종양); 뉴로필린 1 (폐암을 포함한 상피 악성 종양); 글리피칸 (간암, 뇌암 및 유방암을 포함한 다발성 암); HER3/ERBB3 (상피 악성 종양); PDGFRa (상피 악성 종양); EphA2 (신경모세포종, 흑색종, 유방암, 및 소세포 폐 암종을 포함한 다발성 암); CD38 (골수종); CD138 (골수종); α4-인테그린 (AML, 골수종, CLL, 및 대부분의 림프종); CCR4 항체 (림프종); CD52 (백혈병); CD79b (림프종); CTLA-4 (비-소세포 폐암, 두경부암, 요로 상피암, 및 간세포 암종을 포함한 다발성 암); DLL3 (폐암); 엔도글린 (연조직 육종, 혈관육종, 및 신세포 암종을 포함한 다발성 암); 피브로넥틴 엑스트라-도메인 B (흑색종); 엽산 수용체 1 (상피 난소암, 복막 암종, 및 자궁관암을 포함한 다발성 암); MMP-9 (위암 또는 위식도 접합부 선암종); NGcGM3 (폐암); SLAMF7 (다발성 골수종); TROP-2 (유방암); 또는 VEGF (결장직장암).
일부 구현예에서, 표적화 모이어티는 α4-인테그린; A33; ACVRL 1/ALK1; ADAM17; ALK; APRIL; BCMA; C242; CA125; 카드헤린-19; CAIX; CanAg; 탄산무수화효소 IX; CCN1; CCR4; CD123; CD133; CD137 (4-1BB); CD138/신데칸1; CD19; CD2; CD20; CD22; CD30; CD33; CD37; CD38; CD4; CD40; CD44; CD45; CD48; CD5; CD52; CD56; CD59; CD70; CD70b; CD71; CD74; CD79b; CD80; CD86; CD98; CEA; CEACAM; CEACAM1; CK8; c-Kit; CLDN1; CLDN18; CLDN18.2; CLDN6; c-met/HGFR; c-RET; 크립토; CTLA-4; CXCR4; DKK-1; DLL3; DLL4; TRAIL-R2/DR5; DRS; EGFL7; EGFR; EGFRvIII; 엔도글린; ENPP3; EpCAM; EphA2; 에피시알린; FAP; FGFR1; FGFR2; FGFR3; FGFR4; 피브로넥틴 엑스트라-도메인 B; FLT-3; flt4; 엽산 수용체 1; GCC; GD2; GD3; 글리피칸-3; 글리피칸; GM3; GPNMB; GPR49; GRP78; Her2/Neu; HER3/ERBB3; HLA-DR; ICAM-1; IGF-1R; IGFR; IL-3Ra; 인테그린 α5β1; 인테그린 α6β4; 인테그린 αV; 인테그린 αVβ3; 루이스 Y; 루이스 y/b 항원; LFL2; LIV-1; Ly6E; MCP-1; 메소텔린; MMP-9; MUC1; MUC18; MUC5A; MUC5AC; 미오스타틴; NaPi2b; 뉴로필린 1; NGcGM3; NRP1; P-카드헤린; PCLA; PD-1; PDGFRa; PD-L1; PD-L2; 포스파티딜세린; PIVKA-II; PLVAP; PRLR; 프로가스트린; PSCA; PSMA; RANKL; RG1; 시글렉-15; SLAMF6; SLAMF7; SLC44A4,STEAP-1; TACSTD-2; 테나신 C; TPBG; TRAIL-R1/DR4; TROP-2; TWEAKR; TYRP1; VANGL2; VEGF; VEGF-C; VEGFR-2; 또는 VEGF-R2에 결합한다.
표 2 (아래 섹션 IV에 표시됨)는 암 유형, 표적화 모이어티에 대해 가능한 표적 및 이들 암 유형에 의해 발현되는 프로테아제의 비제한적인 예를 제공한다. 암과 관련된 프로테아제는 종양-관련 프로테아제라고 지칭할 수 있다. 종양 부위에서 절단을 필요로 하는 TWICE를 제조하기 위해, 암을 식별하고, 표적화 모이어티에 대한 표적이 선택되고 (원하는 경우), 암 유형 또는 원하는 종양 미세환경 세포 (예컨대 TAM 또는 TAF)에 대해 하나 또는 두 개의 프로테아제가 선택될 수 있다. 모든 TWICE가 프로테아제 절단을 필요로 하는 것은 아니지만, 프로테아제 절단은 절단 부위가 있는 단일 분자로 생성되는 TWICE 또는 불활성 결합 파트너를 포함하는 TWICE에 유익할 수 있다.
표 3 (아래 섹션 IV에 표시됨)은 일부 표적화 모이어티가 여러 상이한 유형의 암을 표적화할 수 있다는 사실을 포함하여, 상이한 표적화 모이어티에 의해 표적화될 수 있는 암에 관한 추가 정보를 제공한다. TWICE에서, 제1 성분 및 제2 성분은 모두 암을 표적화할 수 있는 표적화 모이어티를 포함할 수 있다. 제1 성분 및 제2 성분의 표적화 모이어티는 동일한 항원 또는 상이한 항원에 결합할 수 있다.
종양 항원에 결합하고 종양 세포에 대한 특이성을 갖는 항체는 당 업계에 잘 알려져 있다.
FDA는 암 치료용으로 승인된 항체 약물 목록을 유지하고 있으며, 이들 중 다수는 암 항원에 결합하고, 이러한 맥락에서 사용될 수 있다. FDA 웹사이트의 The Orange Book Online 또는 Drugs@FDA 참조. FDA는 또한 질환명으로 검색할 수 있는 clinicaltrials.gov 데이터베이스에서 진행중인 임상 시험 목록을 유지하고 있다. 표 4 (아래 섹션 IV에 표시됨)는 종양 세포에 대한 특이성을 갖는 승인된 항체의 대표적인 목록을 제공한다. 표 5 (아래 섹션 IV에 표시됨)는 종양 세포에 대한 특이성을 갖는 개발중인 항체의 대표적인 목록을 제공한다.
표 6 (아래 섹션 IV에 표시됨)은 종양 항원에 결합하고 TWICE에서 표적화 모이어티로 사용될 수 있는 예시적인 항체에 대한 선택된 간행물을 요약한다. 이들 간행물은 종양 항원에 결합할 수 있는 표적화 모이어티가 본 출원의 출원 당시에 당 업계의 기술과 본 발명자들의 소유 내에 있었다는 것을 보여준다.
당 업계에 잘 알려진 다른 항체는 주어진 암을 표적화하기 위한 표적화 모이어티로서 사용될 수 있다. 항체 및 이의 각각의 항원에는 니볼루맙 (항-PD-1 Ab), TA99 (항-gp75), 3F8 (항-GD2), 8H9 (항-B7-H3), 아바고보맙 (항-CA-125 (모방품)), 아데카투무맙 (항-EpCAM), 아푸투주맙 (항-CD20), 알라시주맙 페골 (항-VEGFR2), 알투모맙 펜테테이트 (항-CEA), 아마툭시맙 (항-메소텔린), AME-133 (항-CD20), 아나투모맙 마페나톡스 (항-TAG-72), 아폴리주맙 (항-HLA-DR), 아르시투모맙 (항-CEA), 바비툭시맙 (항-포스파티딜세린), 벡투모맙 (항-CD22), 벨리무맙 (항-BAFF), 베실레소맙 (항-CEA-관련 항원), 베바시주맙 (항-VEGF-A), 비바투주맙 머탄신 (항-CD44 v6), 블리나투모맙 (항-CD19), BMS-663513 (항-CD137), 브렌툭시맙 베도틴 (항-CD30 (TNFRSF8)), 칸투주맙 머탄신 (항-뮤신 CanAg), 칸투주맙 라브탄신 (항-MUC1), 카프로맙 펜데티드 (항-전립선 암종 세포), 카를루맙 (항-MCP-1), 카투막소맙 (항-EpCAM, CD3), cBR96-독소루비신 면역접합체 (항-루이스-Y 항원), CC49 (항-TAG-72), 세델리주맙 (항-CD4), Ch.14.18 (항-GD2), ch-TNT (항-DNA 관련 항원), 시타투주맙 보가톡스 (항-EpCAM), 식수투무맙(cixutumumab) (항-IGF-1 수용체), 클리바투주맙 테트락세탄(clivatuzumab tetraxetan) (항-MUC1), 코나투무맙 (항-TRAIL-R2), CP-870893 (항-CD40), 다세투주맙 (항-CD40), 다클리주맙 (항-CD25), 달로투주맙 (항-인슐린-유사 성장 인자 I 수용체), 다라투무맙 (항-CD38 (사이클릭 ADP 리보스 가수분해효소)), 뎀시주맙 (항-DLL4), 데투모맙 (항-B-림프종 세포), 드로지투맙 (항-DR5), 둘리고투맙 (항-HER3), 두시지투맙 (항-ILGF2), 에크로멕시맙 (항-GD3 강글리오시드), 에드레콜로맙 (항-EpCAM), 엘로투주맙 (항-SLAMF7), 엘실리모맙 (항-IL-6), 에나바투주맙 (항-TWEAK 수용체), 에노티쿠맙 (항-DLL4), 엔시툭시맙 (항-5AC), 에피투모맙 시툭세탄 (항-에피시알린), 에프라투주맙 (항-CD22), 어투막소맙 (항-HER2/neu, CD3), 에타라시주맙 (항-인테그린 αvβ3), 파라리모맙 (항-인터페론 수용체), 파레투주맙(farletuzumab) (항-엽산 수용체 1), FBTA05 (항-CD20), 피클라투주맙 (항-HGF), 피기투무맙 (항-IGF-1 수용체), 플란보투맙 (항-TYRP1(당단백질 75)), 프레솔리무맙 (항-TGF β), 푸툭시맙 (항-EGFR), 갈릭시맙 (항-CD80), 가니투맙 (항-IGF-I), 젬투주맙 오조가미신 (항-CD33), 지렌툭시맙 (항-탄산무수화효소 9 (CA-IX)), 글렘바투무맙 베도틴 (항-GPNMB), 구셀쿠맙 (항-IL13), 이발리주맙 (항-CD4), 이브리투모맙 튜세탄 (항-CD20), 이크루쿠맙 (항-VEGFR-1), 이고보맙 (항-CA-125), 졸베툭시맙 (IMAB362, 항-CLDN18.2), IMC-CS4 (항-CSF1R), IMC-TR1 (TGFβRII), 임가투주맙 (항-EGFR), 인클라쿠맙 (항-셀렉틴 P), 인다툭시맙 라브탄신 (항-SDC1), 이노투주맙 오조가미신 (항-CD22), 인테투무맙 (항-CD51), 이필리무맙 (항-CD152), 이라투무맙 (항-CD30 (TNFRSF8)), KM3065 (항-CD20), KW-0761 (항-CD194), LY2875358 (항-MET) 라베투주맙 (항-CEA), 람브롤리주맙 (항-PDCD1), 렉사투무맙 (항-TRAIL-R2), 린투주맙 (항-CD33), 리릴루맙 (항-KIR2D), 로르보투주맙 머탄신 (항-CD56), 루카투무맙 (항-CD40), 루밀릭시맙 (항-CD23 (IgE 수용체)), 마파투무맙 (항-TRAIL-R1), 마르게툭시맙 (항-ch4D5), 마투주맙 (항-EGFR), 마브릴리무맙 (항-GMCSF 수용체 a-사슬), 밀라투주맙 (항-CD74), 민레투모맙 (항-TAG-72), 미투모맙 (항-GD3 강글리오시드), 모가물리주맙 (항-CCR4), 목세투모맙 파수도톡스 (항-CD22), 나콜로맙 타페나톡스 (항-C242 항원), 나프투모맙 에스타페나톡스 (항-5T4), 나르나투맙 (항-RON), 네시투무맙 (항-EGFR), 네스바쿠맙 (항-안지오포이에틴 2), 니모투주맙 (항-EGFR), 니볼루맙 (항-IgG4), 노페투모맙 머펜탄, 오크렐리주맙 (항-CD20), 오카라투주맙 (항-CD20), 올라라투맙 (항-PDGF-R α), 오나르투주맙 (항-c-MET), 온툭시주맙 (항-TEM1), 오포르투주맙 모나톡스 (항-EpCAM), 오레고보맙 (항-CA-125), 오틀러투주맙 (항-CD37), 판코맙 (MUC1의 항-종양 특이적 글리코실화), 파르사투주맙 (항-EGFL7), 파스콜리주맙 (항-IL-4), 파트리투맙 (항-HER3), 펨투모맙 (항-MUC1), 퍼투주맙 (항-HER2/neu), 피딜리주맙 (항-PD-1), 피나투주맙 베도틴 (항-CD22), 핀투모맙 (항-선암종 항원), 폴라투주맙 베도틴 (항-CD79B), 프리투무맙 (항-비멘틴), PRO131921 (항-CD20), 퀼리주맙 (항-IGHE), 라코투모맙 (항-N-글리콜릴뉴라민산), 라드레투맙 (항-피브로넥틴 엑스트라 도메인-B), 라무시루맙 (항-VEGFR2), 릴로투무맙 (항-HGF), 로바투무맙 (항-IGF-1 수용체), 롤레두맙 (항-RHD), 로벨리주맙 (항-CD11 & CD18), 사말리주맙 (항-CD200), 사투모맙 펜데티드 (항-TAG-72), 세리반투맙 (항-ERBB3), SGN-CD19A (항-CD19), SGN-CD33A (항-CD33), 시브로투주맙 (항-FAP), 실툭시맙 (항-IL-6), 솔리토맙 (항-EpCAM), 손투주맙(항-에피시알린), 타발루맙 (항-BAFF), 타카투주맙 테트락세탄 (항-알파-태아단백), 타플리투모맙 팝톡스 (항-CD19), 텔리모맙 아리톡스, 테나투모맙 (항-테나신 C), 테넬릭시맙 (항-CD40), 테프로투무맙 (항-CD221), TGN1412 (항-CD28), 티실리무맙 (항-CTLA-4), 티가투주맙 (항-TRAIL-R2), TNX-650 (항-IL-13), 토시투모맙 (항-CS20), 토베투맙 (항-CD140a), TRBS07 (항-GD2), 트레갈리주맙 (항-CD4), 트레멜리무맙 (항-CTLA-4), TRU-016 (항-CD37), 투코투주맙 셀모류킨 (항-EpCAM), 우블리툭시맙 (항-CD20), 우렐루맙 (항-4-1BB), 반틱투맙 (항-프리즐드(anti-Frizzled) 수용체), 바팔릭시맙 (항-AOC3 (VAP-1)), 바텔리주맙 (항-ITGA2), 벨투주맙 (항-CD20), 베센쿠맙 (항-NRP1), 비실리주맙 (항-CD3), 볼로식시맙 (항-인테그린 α5β1), 보르세투주맙 마포도틴 (항-CD70), 보투무맙 (항-종양 항원 CTAA16.88), 잘루투무맙 (항-EGFR), 자놀리무맙 (항-CD4), 자툭시맙 (항-HER1), 지라리무맙 (항-CD147 (바시진)), RG7636 (항-ETBR), RG7458 (항-MUC16), RG7599 (항-NaPi2b), MPDL3280A (항-PD-L1), RG7450 (항-STEAP1), TAK-164 (항-GCC), 및 GDC-0199 (항-Bcl-2)가 포함된다.
이러한 항원에 결합하는 항체는 TWICE에서 특히 다음과 같은 유형의 암을 위해 사용될 수 있다: 아미노펩티다아제 N (CD13), 아넥신 A1, B7-H3 (CD276, 다양한 암), CA125 (난소암), CA15-3 (암종), CA19-9 (암종), L6 (암종), 루이스 Y (암종), 루이스 X (암종), 알파 태아단백 (암종), CA242 (결장직장암), 태반 알칼리성 포스파타아제 (암종), 전립선 특이 항원 (전립선), 전립선 산성 포스파타아제 (전립선), 표피 성장 인자 (암종), CD2 (호지킨병, NHL 림프종, 다발성 골수종), CD3 엡실론 (T-세포 림프종, 폐암, 유방암, 위암, 난소암, 자가면역 질환, 악성 복수), CD19 (B 세포 악성 종양), CD20 (비-호지킨 림프종, B-세포 신생물, 자가면역 질환), CD21 (B-세포 림프종), CD22 (백혈병, 림프종, 다발성 골수종, SLE), CD30 (호지킨 림프종), CD33 (백혈병, 자가면역 질환), CD38 (다발성 골수종), CD40 (림프종, 다발성 골수종, 백혈병 (CLL)), CD51 (전이성 흑색종, 육종), CD52 (백혈병), CD56 (소세포 폐암, 난소암, 메르켈 세포 암종, 및 액체 종양, 다발성 골수종), CD66e (암종), CD70 (전이성 신세포 암종 및 비-호지킨 림프종), CD74 (다발성 골수종), CD80 (림프종), CD98 (암종), CD123 (백혈병), 뮤신 (암종), CD221 (고형 종양), CD22 (유방, 난소암), CD262 (NSCLC 및 기타 암), CD309 (난소암), CD326 (고형 종양), CEACAM3 (결장직장암, 위암), CEACAM5 (CEA, CD66e) (유방, 결장직장암 및 폐암), DLL4 (A-유사-4), EGFR (다양한 암), CTLA4 (흑색종), CXCR4 (CD 184, 헴-종양학, 고형 종양), 엔도글린 (CD 105, 고형 종양), EPCAM (상피 세포 부착 분자, 방광암, 두부암, 경부암, 결장암, NHL 전립선암, 및 난소암), ERBB2 (폐암, 유방암, 전립선암), FCGR1 (자가면역 질환), FOLR (엽산 수용체, 난소암), FGFR (암종), GD2 강글리오시드 (암종), G-28 (세포 표면 항원 당지질, 흑색종), GD3 유전형 (암종), 열충격 단백질 (암종), HER1 (폐암, 위암), HER2 (유방, 폐암 및 난소암), HLA-DR10 (NHL), HLA-DRB (NHL, B 세포 백혈병), 인간 융모성 성선자극호르몬 (암종), IGF1R (고형 종양, 혈액암), IL-2 수용체 (T-세포 백혈병 및 림프종), IL-6R (다발성 골수종, RA, 캐슬만병, IL6 의존성 종양), 인테그린 (다양한 암을 위한 αvβ3, α5β1, α6β4, α11β3, α5β5, αvβ5), MAGE-1 (암종), MAGE-2 (암종), MAGE-3 (암종), MAGE 4 (암종), 항-트랜스페린 수용체 (암종), p97 (흑색종), MS4A1 (막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A 구성원 1, 비-호지킨 B 세포 림프종, 백혈병), MUC1 (유방암, 난소암, 자궁경부암, 기관지암 및 위장암), MUC16 (CA125) (난소암), CEA (결장직장암), gp100 (흑색종), MARTI (흑색종), MPG (흑색종), MS4A1 (막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A, 소세포 폐암, NHL), 뉴클레올린, Neu 종양유전자 생성물 (암종), P21 (암종), 넥틴-4 (암종), 항-(N-글리콜릴뉴라민산의 파라토프, 유방암, 흑색종 암), PLAP-유사 고환 알칼리성 포스파타아제 (난소암, 고환암), PSMA (전립선 종양), PSA (전립선), ROB04, TAG 72 (종양 관련 당단백질 72, AML, 위암, 결장직장암, 난소암), T-세포 막관통 단백질 (암), Tie (CD202b), 조직 인자, TNFRSF10B (종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 10B, 암종), TNFRSF13B (종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 13B, 다발성 골수종, NHL, 기타 암, RA 및 SLE), TPBG (세포영양막 당단백질, 신세포 암종), TRAIL-R1 (종양 괴사 아폽토시스 유도 리간드 수용체 1, 림프종, NHL, 결장직장암, 폐암), VCAM-1 (CD106, 흑색종), VEGF, VEGF-A, VEGF-2 (CD309) (다양한 암). 몇몇 다른 종양 관련 항원 표적이 검토되었다 (Gerber, 등, mAbs 2009 1:247-253; Novellino 등, Cancer Immunol Immunother. 2005 54:187-207, Franke, 등, Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15:459-76, Guo, 등, Adv Cancer Res. 2013; 119: 421-475, Parmiani 등 J Immunol. 2007 178:1975-9). 이러한 항원의 예에는 분화 클러스터 (CD4, CDS5, CD6, CD7, CD8, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD12w, CD14, CD15, CD16, CDw17, CD18, CD21, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD31, CD32, CD34, CD35, CD36, CD37, CD41, CD42, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD53, CD54, CD55, CD58, CD59, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD68, CD69, CD71, CD72, CD79, CD81, CD82, CD83, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD95, CD96, CD100, CD103, CD105, CD106, CD109, CD117, CD120, CD127, CD133, CD134, CD135, CD138, CD141, CD142, CD143, CD144, CD147, CD151, CD152, CD154, CD156, CD158, CD163, CD166, .CD168, CD184, CDw186, CD195, CD202 (a, b), CD209, CD235a, CD271, CD303, CD304), 아넥신 A1, 뉴클레올린, 엔도글린 (CD105), ROB04, 아미노-펩티다아제 N, -유사-4 (DLL4), VEGFR-2 (CD309), CXCR4 (CD184), Tie2, B7-H3, WT1, MUC1, LMP2, HPV E6 E7, EGFRvIII, HER-2/neu, 유전형, MAGE A3, p53 비돌연변이체, NY-ESO-1, GD2, CEA, MelanA/MART1, Ras 돌연변이체, gp100, p53 돌연변이체, 프로테이나아제3 (PR1), bcr-abl, 티로시나아제, 서바이빈, hTERT, 육종 전위 중단점(sarcoma translocation breakpoint), EphA2, PAP, ML-IAP, AFP, EpCAM, ERG (TMPRSS2 ETS 융합 유전자), NA17, PAX3, ALK, 안드로겐 수용체, 사이클린 B 1, 폴리시알산, MYCN, RhoC, TRP-2, GD3, 푸코실 GM1, 메소텔린, PSCA, MAGE A1, sLe(a), CYPIB I, PLAC1, GM3, BORIS, Tn, GloboH, ETV6-AML, NY-BR-1, RGS5, SART3, STn, 탄산무수화효소 IX, PAXS, OY-TES1, 정자 단백질 17, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, B7H3, 레구마인(legumain), Tie 2, Page4, VEGFR2, MAD-CT-1, FAP, PDGFR-β, MAD-CT-2, 및 Fos-관련 항원 1이 포함된다.
일부 구현예에서, 암을 표적화할 수 있는 표적화 모이어티는 항체가 아니라 또 다른 유형의 표적화 모이어티이다. 표 7 (아래 섹션 IV에 표시됨)은 몇 가지 대표적인 비-항체 표적화 모이어티 및 이의 상응하는 표적을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 표적화 모이어티는 암세포에서 발현되는 것으로 알려진 단백질에 대한 결합 파트너일 수 있다. 이러한 발현 수준은 과발현을 포함할 수 있다. 예를 들어, 표 8에 설명된 결합 파트너 (아래 섹션 IV에 표시됨)는 다음과 같은 암세포의 표적에 결합할 수 있다.
결합 파트너는 표 8에 열거된 결합 파트너에 대한 전체 길이 또는 야생형 서열을 포함할 필요가 없다. 필요한 모든 것은 결합 파트너가 암세포의 표적에 결합하므로 당 업계에 잘 알려진 절단된 형태, 유사체, 변이체 및 유도체를 포함할 수 있다는 것이다.
추가로, 일부 구현예에서, 결합 파트너는 암세포에서 발현되는 것으로 알려진 단백질에 결합할 수 있는 압타머일 수 있다. 암세포에 결합하는 압타머는 잘 알려져 있으며 이를 설계하는 방법도 알려져 있다.
세포-기반 SELEX 시스템을 사용하여 무작위 후보 라이브러리로부터 표적 세포-특이적 압타머 패널을 선택할 수 있다. ssDNA 또는 ssRNA 풀은 결합 완충액에 용해되고 변성된 다음 표적 세포와 함께 인큐베이션될 수 있다. 세척 후 결합된 DNA 또는 RNA는 가열에 의해 용리될 수 있으며, 그 다음 음성 세포 (원하는 경우)와 함께 인큐베이션되고, 원심분리되고, 상청액이 제거된다. 상청액은 비오틴 표지된 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 증폭될 수 있다. 선택된 센스 ssDNA 또는 ssRNA는 스트렙타비딘 코팅된 비드를 사용하여 안티센스 비오티닐화된 가닥으로부터 분리될 수 있다. 친화력을 높이기 위해 세척 시간, 완충액 부피, 및 세척 횟수를 늘려 세척 강도를 높일 수 있다. 원하는 라운드의 선택 후, 선택된 ssDNA 또는 ssRNA 풀은 PCR 증폭되고, 이.콜라이(E. coli)로 클로닝되고, 시퀀싱될 수 있다. Shangguan 등, Aptamers evolved from live cells as effective molecular probes for cancer study, PNAS 103(32:11838-11843 (2006); Lyu 등, Generating Cell Targeting Aptamers for Nanotherapeutics Using Cell-SELEX, Theranostics 6(9):1440-1452 (2016) 참조; 또한 Li 등, Inhibition of Cell Proliferation by an Anti-EGFR Aptamer, PLoS One 6(6):e20229 (2011) 참조. 이러한 참고 문헌에서 암세포에 결합하는 특정 압타머 및 압타머를 설계하기 위한 특정 접근법은 본원에 참고로 포함된다.
예를 들어, 압타머는 서열 번호: 94 내지 164를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 압타머는 서열 번호: 95를 포함할 수 있다. 이러한 압타머는 EGFR로 향하며, 암세포에 제시된 표적에 결합할 수 있는 압타머의 대표로서만 제공된다. 암세포 상의 다른 표적에 대한 다른 압타머도 동일하게 본원의 설명의 일부이며, 문헌[Zhu 등, Theranostics 4(9):931-944 (2014)]에 기재된 바와 같이 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 본원에 사용하기 위한 압타머는 나노몰 내지 피코몰 범위 (예컨대 1 피코몰 내지 500 나노몰 또는 1 피코몰 내지 100 나노몰)의 Kd로 암세포 상의 표적에 결합한다.
2. 종양 미세환경 세포를 표적화할 수 있는 표적화 모이어티
현재의 암 면역치료 항체는 효과기 세포가 종양 내에 존재하는 것을 요한다. 그러나 종양은 효과기 세포를 배제하는 면역억제 환경을 생성하여 면역요법의 효과를 떨어뜨릴 수 있다 (Herbst 등 Nature. 515(7528):563-7 (2014) 참조). 효과기 세포가 없는 종양은 "콜드 종양(cold tumor)"이라고 지칭할 수 있다 (Whiteside TL 등 Clin Cancer Res. 22(8):1845-55 (2016) 참조).
효과기 세포는 종양 간질에 의해, 특히 종양-관련 섬유아세포 (TAF)와 같은 종양 미세환경의 비암 세포에 의해 종양으로부터 배제될 수 있다 (Ziani 등, Front Immunol. 9:414 (2018) 참조). 종양 미세환경의 비암 세포는 "종양 미세환경 세포"라고 지칭할 수 있다. 콜드 종양의 T 세포는 간질로 제한될 수 있기 때문에 악성 세포와 간질의 경계면을 표적으로 하는 면역치료제는 잠재적으로 면역 배제를 극복할 수 있다. 따라서 제2 표적 모이어티로 종양 미세환경 세포를 표적화하는 것은 본 키트 또는 조성물에 대한 추가 특이성을 제공할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 표적화 모이어티는 암에 의해 발현된 항원에 결합하고, 제2 표적화 모이어티는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 종양 미세환경 세포는 섬유아세포 또는 대식세포이다. 이들 세포는 종양-관련 섬유아세포 또는 암-관련 섬유아세포 (TAF 또는 CAF) 또는 종양-관련 대식세포 또는 암-관련 대식세포 (TAM 또는 CAM)라고 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 "종양-관련 섬유아세포"는 종양 덩어리에 매우 근접하거나 그 내에서 발견되는 섬유아세포를 지칭한다. 본원에 사용된 "종양-관련 대식세포"는 종양 덩어리에 매우 근접하거나 종양 덩어리와 함께 발견되는 대식세포를 지칭한다.
도 2는 TWICE의 한 성분을 암세포로 표적화하고, 다른 성분을 종양 미세환경에서 비암 세포로 표적화하는 것을 보여준다. 이 유형의 TWICE를 사용하면, 두 성분의 면역 결합 도메인 및/또는 두 성분의 상보적 결합 도메인은 암세포와 비암 종양 미세환경 세포가 매우 근접할 때만 쌍을 이룰 것이다.
TAF는 섬유아세포 활성화 단백질 알파 (FAP) 및 알파-평활근 액틴과 같은 활성화 마커의 발현을 특징으로 하며 (Barnett and Vilar, J Natl Cancer Inst 110(1):11-13 (2018) 참조), 직접 또는 간접 메커니즘에 의해 면역억제 환경을 생성할 수 있다. 직접적인 면역억제 효과는 성장 인자 예컨대 TGF-베타 또는 사이토카인 예컨대 CXCL12에 의해 매개될 수 있고, 간접 면역억제 효과는 종양 미세환경에서 세포외 기질의 리모델링에 의해 매개될 수 있다 (Ziani 등, 2018 참조).
일부 구현예에서, 제2 성분의 표적화 모이어티는 TAF에 의해 발현된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, TAF를 표적화하는 표적화 모이어티는 시브로투주맙과 같은 FAP에 결합하는 항체를 포함한다 (US20120258119A1 참조). FAP는 대부분 정상 섬유아세포가 아니라 종양 기질에서 발현된다 (Brennen 등 Mol Cancer Ther . 11(2): 257-266 (2012)).
일부 구현예에서, 제2 성분의 표적화 모이어티는 TAM에 의해 발현된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, TAM을 표적화하는 표적화 모이어티는 MAC-1/CD11b (EP0488061A2 참조) 또는 시데로플렉신 3 (WO2018020000 참조)에 결합하는 항체를 포함한다.
D. 면역 세포 결합 도메인
제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 면역 세포 상의 항원에 결합할 수 있다. 본원에 사용된 "면역 세포"는 면역계에 포함된 임의의 세포일 수 있다. 면역 세포는 선천적 또는 적응적 면역 반응에 관여하는 세포일 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 세포는 자연 살해 세포 (NK), 대식세포, 또는 T 세포이다. 일부 구현예에서, T 세포는 γδ T 세포 또는 자연 살해 T 세포 (NKT 세포)이다.
1. T-세포 결합 도메인
일부 구현예에서, 제1 T-세포 결합 도메인 및 제2 T-세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 T-세포 결합 도메인 및 제2 T-세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3 또는 T-세포 수용체 (TCR)에 결합할 수 있다.
CD3은 모든 T 세포에 존재하며, γ, δ, ε, ζ, 및 η로 지정된 서브유닛으로 구성된다. TCR은 α, β, γ 및 δ로 지정된 상이한 서브유닛으로 구성된 T 세포에 존재하는 또 다른 분자이다. CD3의 세포질 꼬리는 TCR 수용체 복합체의 다른 성분이 없는 경우 T-세포 활성화에 필요한 신호를 전달하기에 충분하다. 일반적으로 T-세포 세포독성의 활성화는 먼저 TCR과 별도의 세포에 위치한 외래 항원에 자체 결합된 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 단백질과의 결합에 의해 결정된다. 외부 개입 없이, 이 초기 TCR-MHC 결합이 발생했을 때만 T-세포 클론 확장 및 궁극적으로 T-세포 세포독성을 담당하는 CD3 의존적 신호 캐스케이드가 뒤따라 일어날 수 있다. 그러나, 본 구현예 중 일부에서, 제1 T-세포 결합 도메인 및 제2 T-세포 결합 도메인이 CD3 및/또는 TCR에 결합할 때, 독립적인 TCR-MHC의 부재 하에 세포독성 T 세포의 활성화는 면역 시냅스 형성을 모방한 CD3 및/또는 TCR 분자의 가교로 인해 발생할 수 있다. 이것은 T 세포가 클론적으로 독립적인 방식으로, 즉 T 세포에 의해 운반되는 특정 TCR 클론에 독립적인 방식으로 세포독성적으로 활성화될 수 있음을 의미한다. 이것은 특정 클론 정체성의 특정 T 세포만이 아니라 전체 T-세포 구획의 활성화를 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 제1 T-세포 결합 도메인 VH 도메인이고, 제2 T-세포 결합 도메인은 VL 도메인이다. 일부 구현예에서, 제1 T-세포 결합 도메인은 VL 도메인이고, 제2 T-세포 결합 도메인은 VH 도메인이다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 T-세포 결합 도메인은 함께 쌍을 이룰 때 Fv를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "Fv"는 함께 결합된 VH 및 VL을 지칭한다. 즉, 함께 쌍을 이룰 때 제1 및 제2 T-세포 결합 도메인은 VH 및 VL이 VH와 VL 사이에 링커가 있는 단일 사슬 구조에 있지 않다는 사실을 제외하고는 "scFv"를 포함할 수 있다.
제1 및 제2 T-세포 결합 도메인이 VH 및 VL 도메인의 쌍인 경우, VH 및 VL 도메인은 CD3 또는 TCR과 같은 T 세포 표면에서 발현되는 항원에 대해 특이적일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD3 또는 항-TCR 항체는 CD3 또는 TCR의 서브유닛에 결합한다. 항원이 CD3인 경우, 하나의 잠재적인 T-세포 결합 도메인은 무로모납 (무로모납-CD3 또는 OKT3), 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 포라루맙, SP34, 또는 블리나투모맙으로부터 유래될 수 있다. 당업자는 광범위한 항-CD3 항체를 알고 있을 것이며, 이들 중 일부는 승인된 치료법이거나 인간 환자에서 임상적으로 시험되었다 (Kuhn and Weiner Immunotherapy 8(8):889-906 (2016) 참조). 표 9 (아래 섹션 IV에 표시됨)는 예시적인 항-CD3 항체에 대한 선택된 간행물을 제공한다. αβ 및 γδ TCR을 포함하여, TCR에 특이적인 항체도 잘 알려져 있다. 표 10 (아래 섹션 IV에 표시됨)은 예시적인 항-TCR 항체에 대한 선택된 간행물을 제공한다.
T-세포 결합 도메인은 또한 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3), 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), CD28, CD137, OX40, CD27, GITR (TNFRSF18), TIGIT, 또는 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)과 같은 잠재적인 상보적 결합 도메인으로 열거된 임의의 항체를 포함할 수 있다.
2. 자연 살해 세포 결합 도메인
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 자연 살해 (NK) 세포를 활성화할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD16A에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인이 NK 세포 상의 CD16A에 결합하면 CD33-양성 백혈병 세포에 대해 NK 세포가 활성화된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 NTM-1633 (NCT03603665 참조) 또는 AFM13 (NCT01221571 참조)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
3. 대식세포 결합 도메인
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 대식세포에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 대식세포는 활성화된 대식세포이다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CSF1R에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 에막투주맙/RG7155 (NCT01494688) 또는 IMC-CS4 (NCT01346358)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD40에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 CP-870,893의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
E. 상보적 결합 도메인
일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분은 상보적 결합 도메인을 포함한다. 두 성분의 상보적 결합 도메인이 쌍을 이룰 때 추가 기능이 발생한다. 이 추가 기능은, 예를 들어, 암세포의 죽음을 유도하거나 항종양 면역 반응을 증가시키는 것일 수 있다. 추가 기능은 또한 종양 미세환경을 면역 세포에 더 알맞게 만드는 역할을 할 수 있다.
TWICE의 두 성분이 암 또는 종양 미세환경을 표적화하기 때문에, 상보적 결합 도메인의 쌍에 의해 매개되는 추가 기능은 종양 또는 그 미세환경에서 발생할 것이다. 일부 구현예에서, 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인에 의해 매개되는 추가 기능은 종양 및 그 미세환경으로 제한되어 표적외 효과를 감소시킨다. 예를 들어, 종양 및 그 미세환경에 대한 활성을 제한하는 이러한 능력은 광범위한 발현 및/또는 다양한 생리적 기능을 갖는 표적 분자 예컨대 TGF-베타를 활성화 또는 억제하는 데 유리할 수 있다.
일부 구현예에서, 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 동일한 항원에 결합할 수 있다. 예를 들어, 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 T 세포 상의 CD3에 결합할 수 있다. 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인과 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인 둘 모두가 CD3에 결합하면 항암 면역 반응의 보다 강력한 활성화를 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 동일한 세포에서 상이한 항원에 결합할 수 있다. 예를 들어, 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인, 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 T 세포 상의 상이한 항원에 결합할 수 있다. 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인과 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인이 T 세포 상의 2개의 상이한 항원에 결합하면 항암 면역 반응의 강력한 활성화를 유도할 수 있다.
일부 구현예에서, 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 상이한 세포에 결합할 수 있다. 예를 들어, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 암세포에 결합하여 세포 사멸을 초래할 수 있으며, 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합하여 항암 면역 반응을 매개할 수 있다. 종양 세포에서 세포 사멸 경로의 활성화와 항암 면역 반응의 활성화는 종양 퇴행을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T-세포, 대식세포, 또는 NK-세포 활성을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포 상의 공동 자극 항원 또는 공동 억제 항원에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 암에 대한 세포-사멸-유도 활성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 세포-사멸-유도 항원에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이고, 제2 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이고, 제2 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 함께 쌍을 이룰 때 Fv를 포함할 수 있다. 즉, 함께 쌍을 이룰 때 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 VH 및 VL이 단일-사슬 구조에 있지 않다는 사실을 제외하고는 "scFv"를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 공지된 항체의 VH 도메인은 제1 상보적 결합 도메인으로 사용될 수 있는 반면, VL 도메인은 제2 상보적 결합 도메인으로 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 공지된 항체의 VL 도메인은 제1 상보적 결합 도메인으로 사용될 수 있는 반면, VH 도메인은 제2 상보적 결합 도메인으로 사용될 수 있다.
1. T-세포 활성을 조절하는 상보적 결합 도메인 //여기서부터 p66
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, TCR 활성을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T-세포 공동 시그널링 분자에 결합할 수 있다. T-세포 공동 시그널링 분자는 문헌 (Chen L and Flies DB Nat Rev Immunol 13(4): 227-242 (2013) 참조)에서 잘 특성화되었고, 공동 자극 및 공동 억제 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 공동 시그널링 분자는 면역글로불린 수퍼패밀리 (IgSF) 또는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 (TNFRSF)의 구성원이다. 동시 억제 항원은 면역 체크포인트 분자라고도 지칭할 수 있다.
표 11 (아래 섹션 IV에 표시됨)은 T-세포 기능을 조절함으로써 항종양 반응을 유도할 수 있는 임상적으로 연구된 항체의 예를 제공한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD3e에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 무로모납, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 포라루맙, SP34, 또는 블리나투모맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 펨브로리주맙 또는 니볼루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 이필리무맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 TSR-022 또는 Sym023의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 BMS-986016의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 리릴루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD28에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 테랄리주맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD137에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 우토밀루맙 또는 우렐루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, OX40에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 PF-04518600 또는 BMS 986178의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD27에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 발리루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, GITR에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 GWN323 또는 BMS-986156의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, Ig 및 ITIM 도메인이 있는 T 세포 면역수용체 (TIGIT)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 OMP-313M32, MTIG7192A, BMS-986207, 또는 MK-7684의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 JTX-2011 (임상 개발중인 항-ICOS 항체)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
2. 종양-관련 대식세포 (TAM)를 표적화하는 상보적 결합 도메인
일부 구현예에서, TAM 상의 항원에 대한 제1 및 제2 상보적 결합 도메인의 결합은 종양에 대한 증가된 면역 반응을 매개한다. 예를 들어, 항-CSF1R 차단 항체는 TAM 침윤을 감소시키고, CD8+ T-세포 확장을 촉진한다 (Ries CH 등 Cancer Cell. 25(6):846-59 (2014)).
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, TAM을 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 활성 대식세포를 재프로그래밍하거나 동원할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CSF1R에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 에막투주맙/RG7155 (NCT01494688) 또는 IMC-CS4 (NCT01346358)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD40에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 CP-870,893의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
3. NK 세포를 자극하는 상보적 결합 도메인
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, NK 세포를 활성화할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD16A에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, NK 세포 상의 CD16A에 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인의 결합은 CD33-양성 백혈병 세포에 대해 NK 세포를 활성화한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 NTM-1633 (NCT03603665 참조) 또는 AFM13 (NCT01221571 참조)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
4. 암세포에 의해 발현되는 체크포인트 분자를 억제하는 상보적 결합 도메인
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 암세포에 의해 발현되는 체크포인트 분자를 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 면역 세포 활성화를 억제하는 암세포로부터의 신호를 차단할 수 있다. 여러 상이한 면역 체크포인트 분자가 문헌에 설명되어 있다 (Park 등, Experimental & Molecular Medicine 50:109 (2018) 참조, 이는 상이한 면역 체크포인트 분자의 개시를 위해 그 전체가 참고로 포함됨).
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, PD-L1에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 아테졸리주맙, 더발루맙, 또는 아벨루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, CD73에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 CPI-006 또는 MEDI9447의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
5. RANK에 결합하는 상보적 결합 도메인
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, 조절 T 세포의 활성화를 억제할 수 있다.
일부 구현예에서, 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, RANK 또는 RANKL에 결합한다. RANK는 암세포에서 발현되며, 조절 T 세포 상의 RANKL에 결합하여 면역억제 환경을 생성할 수 있다 (de Groot 등, Cancer Treatment Reviews 62:18-28 (2018) 참조). 일부 구현예에서, 암세포 상의 RANK 또는 RANKL에 결합하면 조절 T-세포 활성화를 차단하고 면역 반응을 자극한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, RANK에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, RANKL에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 데노수맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다.
6. 세포-사멸-유도 항원에 결합하는 상보적 결합 도메인
본원에 사용된 "세포-사멸 유도" 항원은 리간드에 의해 결합된 후 세포 사멸을 자극하는 항원이다. 모든 유형의 세포 사멸이 포함된다. 세포 사멸은 프로그래밍되거나 (예를 들어, 아폽토시스) 프로그래밍되지 않을 (예를 들어, 괴사) 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 사멸은 괴사, 아폽토시스 또는 네크롭토시스(necroptosis)이다.
일부 구현예에서, 세포-사멸-유도 항원은 사멸 수용체를 포함한다. 사멸 수용체는 세포내 "사멸 도메인"의 존재를 특징으로 하는 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원이다. 일부 구현예에서, 사멸 수용체는 Fas/CD95/Apo1, TNFR1/p55/CD120a, DR3/Apo3/WSL-1/TRAMP/LARD, TRAIL-R1/DR4, DR5/Apo2/TRAIL-R2/TRICK2/KILLER, DR6, 또는 CAR1이다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, TRAIL-R1/DR4에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 마파투무맙 (항-TRAIL-R1/DR4 사멸 수용체 항체)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함한다. 일 구현예에서, 항-DR5/Apo2/TRAIL-R2/TRICK2/KILLER 항체는 코나투무맙 (AMG655), 렉사투무맙, 티가투주맙 (CS1008), 또는 드로지투맙 (PRO95780)을 포함한다.
F. 이량체화 도메인
일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분은 도 6에 도시된 바와 같이 이량체화 도메인을 추가로 포함한다. 본원에 사용된 "이량체화 도메인"은 2개의 단백질 단량체 (즉, 단일 단백질)가 함께 결합할 수 있도록 하는 아미노산 서열을 지칭한다. 이와 같이, 이량체화 도메인은 2개의 단백질 단량체가 이량체를 형성하게 하는 임의의 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 이 결합은 공유적이다. 일부 구현예에서, 이 결합은 비공유적이다.
이량체화 도메인은 상보적 결합 도메인 또는 면역 세포 결합 도메인에 부착될 수 있다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 제1 상보적 결합 도메인과 제1 면역 세포 결합 도메인 및/또는 제2 상보적 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인의 결합을 촉진한다. 이러한 방식으로, 이량체화는 상보적 결합 도메인이 종양 부위 외부의 면역 세포 결합 도메인으로부터 해리될 가능성을 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 절단 가능한 링커 (즉, 절단 부위를 포함하는 링커)는 제1 성분의 제1 상보적 결합 도메인으로부터 제1 면역 세포 결합 도메인의 해리 및/또는 제2 상보적 결합 도메인으로부터 제2 면역 세포 결합 도메인의 해리를 매개한다. 일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인은 적어도 하나의 절단 가능한 링커가 절단될 때까지 제1 상보적 결합 도메인에 결합하여 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제1 상보적 결합 도메인 중 하나 (또는 둘 다)가 각각의 이량체화 도메인으로부터 방출된다. 일부 구현예에서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 적어도 하나의 절단 가능한 링커가 절단될 때까지 제2 상보적 결합 도메인에 결합하여 제2 면역 세포 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인 중 하나 (또는 둘 다)가 각각의 이량체화 도메인으로부터 방출된다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 제1 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 제1 면역 세포 결합 도메인에 부착되고; 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 제1 상보적 결합 도메인에 부착되고; 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 제2 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 제2 면역 세포 결합 도메인에 부착되고; 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 제2 상보적 결합 도메인에 부착되고; 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커이다.
이량체화 도메인은 공지된 이량체화 도메인 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 이량체화 도메인은 공지된 이량체화 아미노산 서열과 상동성을 갖는 서열을 포함할 수 있지만, 공지된 서열과는 일치하지 않는다. 일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 결합을 개선하도록 최적화된 아미노산을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 전사 인자 또는 수용체/리간드 쌍으로부터의 아미노산 서열을 포함한다. 이량체화 도메인의 비제한적 예는 수용체 티로신 키나아제, 전사 인자, 14-3-3 단백질 및 G-단백질 결합 수용체로부터의 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 류신 지퍼 (코일드 코일로도 알려짐)를 포함한다. 본원에 사용된 "류신 지퍼"는 류신 잔기의 주기적 반복을 포함하는 임의의 아미노산 서열을 지칭한다. 특허 US 9,994,646과 같이 이량체화에 사용하기 위한 매우 다양한 류신 지퍼가 설명되었다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 면역글로불린 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 가변 도메인은 VH 또는 VL 도메인이다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 면역글로불린 불변 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 불변 도메인은 Fc 도메인이다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 불변 도메인은 CH1/CL, CH2, CH3, 또는 CH4이다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 IgE CH2 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 TCR 불변 도메인을 포함한다. TCR 불변 도메인은 임의의 사슬 (예를 들어, α, β, γ, 또는 δ)에서 유래할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 성분의 이량체화 도메인은 제2 성분의 이량체화 도메인과 동일하다. 예를 들어, 제1 성분 및 제2 성분의 이량체화 도메인은 류신 지퍼일 수 있다. 제1 및 제2 성분의 이량체화 도메인이 동일한 경우, 이를 "동종이량체화(homodimerization)"라고 지칭할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 성분의 이량체화 도메인은 제2 성분의 이량체화 도메인과 상이하다. 예를 들어, 제1 성분 및 제2 성분의 이량체화 도메인은 수용체/리간드 쌍을 포함할 수 있다. 제1 성분 및 제2 성분의 이량체화 도메인이 상이한 경우, 이를 "이종이량체화(heterodimerization)"라고 지칭할 수 있다.
이량체화 도메인은 또한 2개의 단백질을 이량체화하기 위해 "놉(knob)" 또는 "홀"을 생성하도록 조작될 수 있다. 이러한 놉-인투-홀(knob-into-hole) 이량체화 서열은 놉-인투-홀 Fc 또는 놉-인투-홀 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 이중특이적 항체의 생산을 위한 광범위한 놉-인투-홀의 예가 설명되었다 (Xu 등, mAbs 7(1):231-242 (2015) 참조).
일부 구현예에서, 이량체화 도메인은 조작된다. "조작된"이란 단백질의 하나 이상의 특성을 변화시키기 위해 아미노산 서열에 돌연변이가 만들어지는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 조작은 이러한 두 도메인이 일반적으로 조작의 부재시 결합하지 않을 때 두 단백질 도메인의 결합을 정전기적으로 유리하게 만든다. 일부 구현예에서, 2개의 면역글로불린 불변 도메인이 조작되고, "조작된 면역글로불린 불변 도메인"이라고 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 영역의 조작은 CH 도메인과 같은 Fc 영역의 이종이량체화를 초래한다.
일부 구현예에서, 2개의 Fc 영역은 반대 전하를 포함하고, 함께 결합되도록 조작된다 (WO2009089004 참조). 일부 구현예에서, 2개의 Fc 영역은 2개의 류신 지퍼를 포함하고, 함께 결합되도록 조작된다 (US 9,994,646 참조). 일부 구현예에서, 2개의 Fc 영역은 라이신 재배치에 의해 조작된다 (WO2017106462 참조).
도메인은, TWICE의 각 성분이 제조, 수송 및 투여 동안 충분히 안정하지만, TWICE의 두 성분이 매우 근접했을 때, 결합 동역학이 여전히 서로에 대한 면역 결합 도메인의 쌍을 선호하며, 해당되는 경우, 서로에 대한 상보적 기능성 도메인의 쌍을 선호할 수 있도록 조작될 수 있다.
이종이량체 Fc를 생성하는 여러 방법은 본원에 기재된 작제물을 만들기 위해 사용될 수 있다. 비대칭 IgG, 즉 이종이량체로 쌍을 이룬 2개의 상이한 중쇄에 의해 형성된 IgG 형태의 이중특이적 항체를 생성하려는 노력으로, Ridgway 등은 한 사슬이 "놉"을 포함하고 다른 사슬이 상응하는 "홀"을 포함하도록 돌연변이에 의해 IgG1의 CH3 도메인을 조작하였다 (J.B. Ridgway, 등 Protein Eng . 9:617-621 (1196)). 이 "놉-인투-홀" 접근법의 2개의 조작된 중쇄는 동종이량체에서 입체적 충돌로 인해 동일한 세포로부터 공발현될 때 우선적으로 이종이량체를 형성할 것이다. 이후 2개의 상이한 사슬 사이에 이종이량체의 형성을 촉진하기 위해 조작된 Fc 도메인에서 입체적 충돌 또는 반발 전하의 유사한 전략을 사용하는 몇 가지 다른 돌연변이가 발표되었다 (Atwell 등 Journal of Molecular Biology 270:26-35 (1997); Gunasekaran 등, Journal of Biological Chemistry 285:19637-46 (2010); Moore 등 mAbs 3, 546-557 (2011); Strop P 등 J. Mol . Biol . 420, 204-219 (2012), Von Kreudenstein 등 2013, mAbs; 5:646-54 (2013)) 입체적 충돌과 반발 전하의 조합도 IgG 중쇄를 조작하여 이종이량체를 효율적으로 형성하는 데 사용되었다 (WO2017106462A1). 상이한 접근법을 사용하여, Davis 등 (Davis 등, Protein Engineering, Design & Selection 23(4):195-202 (2010))은 Fc 이종이량체화를 가능하게 하는 비대칭 CH3 도메인을 조작하기 위해 IgG 및 IgA 서열을 사용하는 가닥-교환 조작 도메인(strand-exchange engineered domain; SEED)을 개발하였다.
G. 상보적 기능성 도메인
일부 구현예에서, 제1 또는 제2 성분은 상보적 기능성 도메인을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "상보적 기능성 도메인"은 특정 세포 유형에 결합할 때 기능을 갖는 도메인을 지칭한다. 상보적 기능성 도메인은 상보적 기능성 도메인이 기능을 갖기 위해 또 다른 도메인과 쌍을 이룰 필요가 없다는 점에서 상보적 결합 도메인과 상이하다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분은 둘 모두 상보적 기능성 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 성분만이 상보적 기능성 도메인을 포함한다.
일반적으로, 수용체에 대한 리간드로 작용하는 세포 표면 단백질의 세포외 도메인은 상보적 기능성 도메인으로 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상보적 기능성 도메인은 T 세포 활성화를 위한 공동 자극 분자이다. 일부 구현예에서, 상보적 기능성 도메인은 인테그린에 결합하기 위한 리간드이다.
일부 구현예에서, 상보적 기능성 도메인은 TGF-베타 계열 구성원의 잠재 형태이다. 일부 구현예에서, 잠재 형태는 종양 미세환경에서 활성화되어 종양 세포에서 국소적으로 작용한다.
일부 구현예에서, 상보적 기능성 도메인은 사이토카인이다. 광범위한 사이토카인이 암에서 임상적으로 시험되었다 (Vazquez-Lombardi 등, Antibodies 2:426-451 (2013) 참조). 또한, 사이토카인을 TWICE의 상보적 기능성 도메인으로 통합하면 사이토카인의 국소 전달이 가능하므로 사이토카인의 전신 투여를 개선할 수 있다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원이다.
일부 구현예에서, 상보적 기능성 도메인은 약독화 사이토카인이다.
본원에 사용된 바와 같이, "약독화 사이토카인"은 종양 또는 종양 간질 미세환경에서 절단될 수 있는 링커에 의해 사이토카인에 연결된 마스크로 "차폐된" 사이토카인 또는 야생형 사이토카인과 비교하여 그 활성을 감소시키는 돌연변이를 갖는 것이다. 따라서 약독화 사이토카인은 천연 발생 사이토카인의 변이형일 수 있다. 일부 구현예에서, 약독화 사이토카인은 표적 세포로 표적화되지 않는 한 활성이 결여된다. 종양을 표적으로 하는 약독화 사이토카인은 제한된 전신 독성으로 강력한 항종양 효과를 나타낼 수 있다 (Pogue 등, PLoS ONE 11(9):e0162472 (2016) 및 Pogue 등, Cytokine 1:66 (2015) 참조).
약독화되지 않은 동일한 사이토카인이 면역계 저하 및 조절 T 세포의 증식을 유발할 수 있는 경우, 약독화 사이토카인은 또한 면역계를 활성화하고 효과기 T 세포의 증식을 유발하기 위해 제안되었다.
일부 구현예에서, 약독화 사이토카인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원의 변이형이다. 일부 구현예에서, 약독화 사이토카인은 기능을 나타내기 위해 암 또는 그 미세환경을 표적으로 해야 한다.
H. 링커
링커에 의해, 본 발명자들은 TWICE의 일부를 함께 부착하는 임의의 화학적 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, TWICE에 사용된 링커는 가요성 링커일 수 있다. 링커에는 펩티드, 중합체, 뉴클레오티드, 핵산, 다당류 및 지질 유기 종 (예컨대 폴리에틸렌 글리콜)이 포함된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 펩티드 링커는 약 2-100, 10-50, 또는 15-30개 아미노산 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 적어도 10개, 적어도 15개, 또는 적어도 20개 아미노산 길이, 및 80개 이하, 90개 이하 또는 100개 이하의 아미노산 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 단일 또는 반복 GGGGS (서열 번호: 85), GGGS (서열 번호: 86), GS (서열 번호: 87), GSGGS (서열 번호: 88), GGSG (서열 번호: 89), GGSGG (서열 번호: 90), GSGSG (서열 번호: 91), GSGGG (서열 번호: 92), GGGSG (서열 번호: 93), 및/또는 GSSSG (서열 번호: 94) 서열(들)을 갖는 펩티드 링커이다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 부위 (즉, 절단 불가능한 링커)를 포함하지 않는다. 절단 부위를 포함하지 않는 예시적인 링커는 말레이미드 (MPA) 또는 SMCC 링커를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 절단 부위 (즉, 절단 가능한 링커)를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 표적화 모이어티를 면역 세포 결합 도메인, 상보적 결합 도메인 또는 상보적 기능성 도메인에 부착한다. 일부 구현예에서, 링커는 이량체화 도메인을 면역 세포 결합 도메인 또는 상보적 결합 도메인에 부착한다.
1. 표적화 모이어티를 부착하는 링커
일부 구현예에서, 링커는 표적화 모이어티를 면역 세포 결합 도메인에 부착한다. 일부 구현예에서, 링커는 표적화 모이어티를 상보적 결합 도메인 또는 상보적 기능성 도메인에 부착한다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티를 상보적 결합 도메인 또는 상보적 기능성 도메인에 부착하는 링커는 절단 불가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 표적화 모이어티를 상보적 결합 도메인 또는 상보적 기능성 도메인에 부착하는 링커는 가요성 링커이다.
2. 이량체화 도메인을 부착하는 링커
일부 구현예에서, 링커는 이량체화 도메인을 면역 세포 결합 도메인에 부착한다. 일부 구현예에서, 링커는 이량체화 도메인을 상보적 결합 도메인에 부착한다.
이량체화 도메인을 면역 세포 결합 도메인 또는 상보적 결합 도메인에 부착하는 데 사용되는 링커는 "이량체화 도메인 링커"라고 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 이량체화 도메인 링커는 절단 가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인 링커는 절단 부위를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 이량체화 도메인 링커는 프로테아제 절단 부위를 포함한다. 일부 구현예에서, 이량체화 도메인 링커는 종양 미세환경에서 절단될 수 있는 프로테아제 절단 부위를 포함한다. 일부 구현예에서, 이량체화 도메인 링커는 하나 이상의 매트릭스 메탈로프로테아제에 대한 절단 부위를 포함한다.
사용된 이량체화 도메인에 따라, 다양한 이량체화 도메인 링커 길이가 TWICE에서 사용될 수 있다. 이량체화 도메인 링커의 길이는 프로테아제 절단을 위한 가요성을 허용하기에 충분히 길어야 할 수 있다. 그러나 너무 긴 이량체화 도메인 링커는 두 이량체화 도메인으로 하여금 이량체화를 보장하기에 너무 공간적으로 멀리 떨어져 있게 할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 이량체화 도메인 링커 및 제2 이량체화 도메인 링커는 길이가 동일하거나 유사하다. 일부 구현예에서, 제1 이량체화 도메인 링커 및 제2 이량체화 도메인 링커는 길이가 상이하다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인 링커 길이는 두 이량체화 도메인의 결합을 촉진하는 데 도움이 된다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 이량체화 도메인 링커는 5-30개 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 이량체화 도메인 링커는 8-16개 아미노산 길이이다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 이량체화 도메인 링커는 5-15개 아미노산 길이이다. 예를 들어, 이량체화 도메인이 CH1/CL인 경우 이 길이의 링커가 적절할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 이량체화 도메인 링커는 12-30개 아미노산 길이이다. 예를 들어, 이량체화 도메인이 류신 지퍼 (코일드 코일)인 경우 이 길이의 링커가 적절할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 이량체화 도메인 링커는 15-20개 아미노산 길이이다. 예를 들어, 이 길이의 링커는 특정 류신 지퍼 이량체화 도메인에 적합할 수 있다.
대표적인 이량체화 도메인 링커의 예는 서열 번호: 203-211을 포함한다.
I. 절단 부위 및 절단 가능한 링커
일부 구현예에서, 절단 부위는 특정 위치에서 작제물의 특정 절단을 허용한다. 절단 부위를 포함하는 링커를 절단 가능한 링커라고 지칭할 수 있다.
예를 들어, 단일 폴리펩티드 작제물인 TWICE는 제1 및 제2 성분 사이에 절단 가능한 링커를 포함할 수 있다. 이 TWICE의 다른 구현예는 또한 이량체화 도메인 링커와 같은 절단 가능한 링커를 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 절단은 원치 않는 세포 외부에서 발생할 수 있으며, 먼저 세포 내로 내재화되고, 고전적인 항원 처리 경로에 참여하지 않는다.
특정 구현예에서, 적어도 하나의 절단 부위는 암세포에 의해 발현되는 효소에 의해 절단될 수 있다. 예를 들어, 암세포는 프로테아제와 같은 특정 효소를 발현시키는 것으로 알려져 있다. 비제한적인 예로서, 예를 들어, 카텝신 B는 그 중에서도 FR, FK, VA 및 VR을 절단하고; 카텝신 D는 PRSFFRLGK (서열 번호: 45)를 절단하고, ADAM28은 KPAKFFRL (서열 번호: 1), DPAKFFRL (서열 번호: 2), KPMKFFRL (서열 번호: 3) 및 LPAKFFRL (서열 번호: 4)을 절단하고; MMP2는 AIPVSLR (서열 번호: 46), SLPLGLWAPNFN (서열 번호: 47), HPVGLLAR (서열 번호: 48), GPLGVRGK (서열 번호: 49), 및 GPLGLWAQ (서열 번호: 50)를 절단한다. 표 1 또는 2에 열거된 다른 절단 부위도 사용될 수 있다. 암과 관련된 프로테아제 절단 부위 및 프로테아제는 당 업계에 잘 알려져 있다. Oncomine (www.oncomine.org)은 온라인 암 유전자 발현 데이터베이스이므로 TWICE의 작용제가 암 치료용인 경우, 숙련가는 주어진 암 유형을 치료하는 데 적합할 수 있는 특정 프로테아제 절단 부위 (또는 2개의 프로테아제 절단 부위)를 식별하기 위해 Oncomine 데이터베이스를 검색할 수 있다. 대안적인 데이터베이스에는 유럽 생물정보 학회(European Bioinformatic Institute; www.ebi.ac.uk), 특히 (www.ebi.ac.uk/gxa)가 포함된다. 프로테아제 데이터베이스에는 ExPASy Peptide Cutter (www.ca.expasy.org/tools/peptidecutter)가 포함된다.
일부 구현예에서, 프로테아제는 섬유아세포의 종양-관련 대식세포와 같은 종양 미세환경의 비암 세포에 의해 발현된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 절단 가능한 링커의 프로테아제 절단 부위는 공동 국재화된 프로테아제에 의해 절단된다. 일부 구현예에서, 프로테아제는 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하고 제1 성분 또는 제2 성분의 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된다. 일부 구현예에서, 프로테아제는 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된다.
절단 가능한 링커의 절단 부위는 상보적 결합 도메인 및/또는 면역 세포 결합 도메인으로부터 이량체화 도메인을 방출하는 기능을 할 수 있다. 절단 부위는 원치 않는 세포의 미세환경에서 제1 및/또는 면역 세포 결합 도메인으로부터 상보적 결합 도메인 및/또는 면역 세포 결합 도메인을 방출하도록 기능할 수 있다.
일부 구현예에서, 이량체화 도메인을 면역 세포 결합 도메인 또는 상보적 결합 도메인에 부착하는 제1 및/또는 제2 절단 가능한 링커의 프로테아제 절단 부위는 암에 의해 발현된 프로테아제에 의해 절단되거나 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된다.
J. 면역 세포 결합 도메인에 대한 상보적 결합 도메인의 결합
일부 구현예에서, 제1 상보적 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 제1 면역 세포 결합 도메인이 제1 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 제1 면역 세포 결합 도메인은 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 제2 상보적 결합 도메인은 제2 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 제2 면역 세포 결합 도메인이 제2 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는다.
상보적 결합 도메인이 면역 세포 결합 도메인으로부터 해리되고, 쌍을 이룬 상보적 도메인과 결합할 때 또는 면역 세포 결합 도메인이 상보적 결합 도메인으로부터 해리되고 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인과 결합할 때, 이것을 도메인 스왑(domain swap)이라고 지칭할 수 있다. 이 도메인 스왑 사건에서, 도메인은 미스매치(mismatched) 구조에서 활성의 쌍을 이룬 구조로 이동한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 및 제2 상보적 결합 도메인에 결합되지 않을 때 Fv를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합되지 않을 때 Fv를 형성할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분은 단일 성분의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인의 결합을 촉진하기 위한 이량체화 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 이량체화 도메인 링커에서 절단 가능한 링커의 절단은 암세포 또는 그 미세환경에서 단일 성분의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인의 해리를 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 성분은 이량체화 도메인을 포함하지 않는다.
K. 불활성 결합 파트너에 의해 차폐
일부 구현예에서, TWICE는 제1 및/또는 제2 면역 세포 결합 도메인을 차폐하기 위한 불활성 결합 파트너를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인만이 차폐된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 둘 모두 차폐된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 불활성 결합 파트너는 도 5 및 섹션 G에 설명된 바와 같이, 상보적 기능성 도메인을 포함하는 TWICE의 성분이다.
일부 구현예에서, 상보적 기능성 도메인을 포함하는 제1 및/또는 제2 성분은 불활성 결합 파트너를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 불활성 결합 파트너는 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 제1 면역 세포 결합 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인이고, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이다. 일부 구현예에서, 제1 면역 세포 결합 도메인은 VL 도메인이고, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인이다.
일부 구현예에서, 프로테아제 절단 부위는 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제1 불활성 결합 파트너를 분리한다. 일부 구현예에서, 프로테아제 절단 부위는 프로테아제의 존재하에 면역 세포 결합 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있다.
일부 구현예에서, 제2 불활성 결합 파트너는 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 제2 면역 세포 결합 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인이고, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이다. 일부 구현예에서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 VL 도메인이고, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인이다.
일부 구현예에서, 프로테아제 절단 부위는 제2 면역 세포 결합 도메인 및 제2 불활성 결합 파트너를 분리한다. 일부 구현예에서, 프로테아제 절단 부위는 프로테아제의 존재하에 면역 세포 결합 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있다.
일부 구현예에서, 프로테아제는 암에 의해 발현된다. 일부 구현예에서, 프로테아제는 TAF 또는 TAM과 같은 종양 미세환경 내의 세포에 의해 발현된다.
일부 구현예에서, 프로테아제는 (a) 암에 의해 발현되고 작용제의 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 종양 항원 또는 (b) 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화되었다.
L. 제조 방법
본원에 기재된 바와 같은 상이한 TWICE는 유전 공학 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 구체적으로, 하나 또는 두 개의 핵산이 TWICE 또는 그 성분을 생성하기에 적합한 숙주에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 모든 구성 부분 및 링커를 포함하는 TWICE를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터를 제조할 수 있으며, 해당 벡터는 적절한 숙주 세포를 형질전환하는 데 사용될 수 있다 (또는 개별 벡터를 사용하여 각 성분을 개별적으로 발현시킬 수 있음).
숙주의 특성 및 숙주에 핵산을 도입하는 방식, 및 에피솜 유지 또는 통합이 요망되는지 여부에 따라 다양한 조절 요소가 또한 벡터에 사용될 수 있다.
말레이미드 또는 SMCC 링커를 사용하는 것과 같은 화학적 연결 기술이 또한 사용될 수 있다.
표적화 모이어티가 압타머인 경우, 당업자는 압타머를 단백질, 즉 면역 세포 결합 도메인 또는 상보적 결합 도메인에 접합하는 방법을 인식할 것이다. 압타머는 티올 연결 또는 기타 표준 접합 화학을 사용하여 접합될 수 있다. 말레이미드, 석신이미드 또는 SH 기는 압타머에 부착되어 이를 면역 세포 결합 도메인 또는 상보적 결합 도메인에 부착할 수 있다.
II. 약제학적 조성물
TWICE는 약제학적 조성물로 사용될 수 있다. 따라서, 이는 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제조될 수 있다. 예를 들어, 비경구 투여가 요망되는 경우, TWICE는 주사용 멸균, 발열원이 없는 물 또는 비경구 투여에 허용되는 멸균, 발열원이 없는 염수 또는 기타 형태로 제공될 수 있다. 대안적으로, TWICE는 멸균 액체 담체의 첨가를 통한 재현탁을 위해 동결건조된 형태로 제공될 수 있다. 별도의 형태인 경우, TWICE는 단일 약제학적 조성물 또는 2개의 약제학적 조성물로 제공될 수 있다.
III. TWICE 사용 방법
본원에 기재된 TWICE는 적어도 제1 및 제2 성분을 포함하는 TWICE를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 암 치료 방법에 사용될 수 있으며, 각 성분은 상기 다양한 구현예에서 상세하게 기재되었다.
추가로, 본원에 기재된 작용제는 또한 환자에게 TWICE를 투여하는 단계를 포함하는 암세포에 대한 환자 자신의 면역 반응을 표적화하는 방법에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 TWICE는 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티 둘 다에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD3 또는 TCR을 발현시키는 T 세포이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 TWICE는 2개의 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법에 사용될 수 있으며, 여기서 하나의 종양 항원은 제1 표적화 모이어티에 결합하고 하나의 종양 항원은 제2 표적화 모이어티에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 CD3 또는 TCR을 발현시키는 T 세포이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 TWICE는 환자의 면역 세포에 사이토카인을 전달하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, TWICE의 제1 및/또는 제2 상보적 기능성 도메인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원을 포함한다.
일부 구현예에서, 환자는 암이 있거나 전암 상태로 인식되고 있다. 일부 구현예에서, 환자는 암을 감지할 수 없지만, 암 위험 증가와 관련된 돌연변이를 포함하여 암 발병 위험이 높다. 일부 구현예에서, 암 발병 위험이 높은 환자는 전환 위험이 높은 전암 종양이 있다. 일부 구현예에서, 암 발병 위험이 높은 환자는 높은 위험과 관련된 유전적 프로파일을 가지고 있다. 일부 구현예에서, 환자에서 암의 존재 또는 전암 상태는 순환 종양 DNA (ctDNA) 또는 순환 종양 세포의 존재에 따라 결정된다. 일부 구현예에서, 치료는 선제적이거나 예방적이다. 일부 구현예에서, 치료는 암의 발생 또는 재발을 늦추거나 차단한다.
환자에게 투여되는 작용제의 양은 문제의 상태를 치료하기 위한 유효량을 제공하기 위해 환자의 의사에 의해 선택될 수 있다. TWICE의 제1 성분 및 제2 성분은 환자에서 활성화되기에 충분히 가까운 기간 내에 동일한 제형 또는 2개의 상이한 제형으로 투여될 수 있다.
치료를 받는 환자는 인간일 수 있다. 환자는 영장류 또는 임의의 포유동물일 수 있다. 대안적으로, 환자는 가축 (예를 들어, 개 또는 고양이), 실험실 동물 (예를 들어, 마우스, 래트 또는 토끼와 같은 실험실 설치류) 또는 농업에서 중요한 동물 (예컨대 말, 소, 양 또는 염소)와 같은 동물일 수 있다.
암은 고형 또는 비고형 악성 종양일 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 림프종이 아닌 고형 종양일 수 있다. 암은 임의의 암 예컨대 유방암, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 림프구증식성 장애, 골수형성이상 장애, 골수증식성 질환, 및 전암성 질환 또는 치료에 적합한 임의의 다른 암일 수 있다.
일부 구현예에서, 당업자는 치료를 시작하기 전에 종양을 평가할 수 있다.
예를 들어, 당업자는 침윤 T 세포의 존재에 대해 종양을 평가할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 방법은 치료를 시작하기 전에 종양에서 T 세포의 존재를 확인하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 T-세포 침윤을 동반하는 고형 종양을 가질 것이다. 종양 샘플은 T-세포 마커에 대해 염색될 수 있고, 영상화 기술을 사용하여 종양에서 T-세포 침윤의 존재 및 선택적으로 농도를 입증할 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 방법은 치료를 시작하기 전에 종양 항원의 존재를 확인하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 방법은 치료를 시작하기 전에 종양 항원의 농도를 평가하는 것을 포함한다. 예를 들어, 당업자는 종양 항원을 선택하거나 종양에 의해 과발현된 항원의 프로파일에 기초하여 치료할 환자를 선택할 수 있다. 당업자는 또한 특정 항원을 과발현시키는 선택된 환자에 의한 항원 발현 프로파일에 기초하여 TWICE로 치료할 환자를 선택할 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 종양 항원은 세포-표면 종양 항원이다. 종양 샘플은 종양 항원의 존재 및 선택적으로 농도를 입증하기 위해 관심 항원에 대해 염색될 수 있다. 발현의 하한은 또한 특정 TWICE를 사용한 시험관내 T-세포 활성화 분석을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 방법을 통해 연구자는 TWICE를 종양 미세환경에 표적화하는 데 적절한 항원이 환자의 종양에 있는지 확인할 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 방법은 (i) 종양에서 T 세포의 존재를 확인하는 단계; (ii) 종양 항원(들)의 존재를 확인하는 단계 및/또는 (iii) 종양 항원의 농도를 평가하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 표적화 모이어티에 결합하는 종양 항원(들)의 발현은 TWICE의 두 성분을 매우 근접하게 하기에 충분히 높은 수준으로 발현된다.
일부 구현예에서, 바이오마커의 존재는 TWICE를 받을 환자를 선택하는 데 사용된다. www.cancer.gov/about-cancer/diagnosis-staging/diagnosis/tumor-markers-fact-sheet에 설명된 바와 같은 다양한 종양 마커가 당 업계에 알려져 있다. 일부 구현예에서, 종양 마커는 ALK 유전자 재배열 또는 과발현; 알파-태아단백; 베타-2-마이크로글로불린; 베타-인간 융모성 성선자극호르몬; BRCA1 또는 BRCA2 유전자 돌연변이; BCR-ABL 융합 유전자 (필라델피아 염색체); BRAF V600 돌연변이; C-kit/CD117; CA15-3/CA27.29; CA19-9; CA-125; 칼시토닌; 암배아 항원 (CEA); CD20; 크로모그라닌 A (CgA); 염색체 3, 7, 17, 또는 9p21; 상피 기원의 순환 종양 세포 (CELLSEARCH®); 사이토케라틴 분절 21-1; EGFR 유전자 돌연변이 분석; 에스트로겐 수용체 (ER)/프로게스테론 수용체 (PR); 피브린/피브리노겐; HE4; HER2/neu 유전자 증폭 또는 단백질 과발현; 면역글로불린; KRAS 유전자 돌연변이 분석; 락트산 탈수소효소; 뉴런-특이적 에놀라아제 (NSE); 핵 기질 단백질 22; 프로그래밍된 사멸 리간드 1 (PD-L1); 전립선-특이 항원 (PSA); 티로글로불린; 유로키나아제 플라스미노겐 활성화제 (uPA); 플라스미노겐 활성화제 억제제 (PAI-1); 5-단백질 서명(signature) (OVA1®); 21-유전자 서명 (Oncotype DX®); 또는 70-유전자 서명 (Mammaprint®)이다.
TWICE는 단독으로 또는 수술, 방사선, 전통적 화학요법 또는 기타 면역요법을 포함한 다른 형태의 요법과 함께 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 다른 면역요법에는 면역 사이토카인 또는 사이토카인 융합물을 사용한 별도의 치료가 포함될 수 있다. 사이토카인은 면역계를 활성화하고 조절하기 위해 신체에서 자연적으로 만들어지는 세포-시그널링 단백질을 지칭한다. 사이토카인 융합물은 사이토카인의 전부 또는 일부를 포함하는 조작된 분자를 지칭한다. 예를 들어, 사이토카인 융합물은 Darleukin (Zegers 등 (2015) Clin. Cancer Res., 21, 1151-60 참조), Teleukin (WO2018087172 참조)과 같은 종양에 대한 표적화를 허용하는 항체에 부착된 사이토카인의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 다른 면역요법은 암 치료 예방접종이다. 일부 구현예에서, 암 치료 예방접종은 암과 싸우기 위한 신체의 자연 방어력을 강화한다. 이는 공유 종양 항원 (예컨대 E6, E7, NY-ESO, MUC1, 또는 HER2) 또는 개인화된 돌연변이 신생항원에 대한 것일 수 있다.
IV. 구현예
다음의 번호가 매겨진 항목은 본원에 설명된 구현예를 제공하지만, 본원에 열거된 구현예에 제한되지 않는다.
항목 1. 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 제1 표적화 모이어티; 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제1 면역 세포 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 성분의 일부가 아니고, 제1 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인 또는 VL 도메인인, 제1 면역 세포 결합 도메인; 및 제2 상보적 결합 도메인에 결합할 때 상보적 항원에 결합할 수 있는 제1 상보적 결합 도메인으로서, 제2 상보적 결합 도메인은 제1 성분의 일부가 아니고, 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인일 때, 제1 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이고, 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인일 때, 제1 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이고, 여기서 제1 상보적 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 제1 면역 세포 결합 도메인이 제1 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 제1 면역 세포 결합 도메인은 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는, 제1 상보적 결합 도메인을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제1 성분; 및 제2 표적화 모이어티; 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제2 면역 세포 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL인 경우 VH이고, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH인 경우 VL인, 제2 면역 세포 결합 도메인; 및 제1 상보적 결합 도메인에 결합할 때 상보적 항원에 결합할 수 있는 제2 상보적 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인일 때, 제2 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이고, 제2 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인일 때, 제2 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이고, 여기서 제2 상보적 결합 도메인은 제2 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 제2 면역 세포 결합 도메인이 제2 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는, 제2 상보적 결합 도메인을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제2 성분을 포함하는 환자에서 암을 치료하기 위한 키트 또는 조성물.
항목 2. 제1 면역 세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 제1 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 제1 면역 세포 결합 도메인에 부착되고; 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 제1 상보적 결합 도메인에 부착되고; 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커인, 항목 1의 키트 또는 조성물.
항목 3. 제2 T-세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 제2 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 제2 T-세포 결합 도메인에 부착되고; 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 제2 상보적 결합 도메인에 부착되고; 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커인, 항목 1-2 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 4. 제1 및 제2 링커는 절단 가능한 링커인, 항목 2-3 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 5. 제1 및 제2 링커는 동일한, 항목 2-4 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 6. 제1 및 제2 링커는 상이한, 항목 2-4 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 7. 제1 및 제2 링커는 5개 내지 30개의 아미노산 길이인, 항목 2-6 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 8. 제1 및 제2 링커는 8개 내지 16개의 아미노산 길이인, 항목 2-6 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 9. 제1 및/또는 제2 절단 가능한 링커의 프로테아제 절단 부위는 암 또는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 프로테아제에 의해 절단되는, 항목 2-8 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 10. 제1 및/또는 제2 절단 가능한 링커의 프로테아제 절단 부위는 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화되고, 제1 성분 또는 제2 성분 중 적어도 하나의 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 프로테아제에 의해 절단되는, 항목 2-9 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 11. 제1 및 제2 이량체화 도메인은 둘 다 류신 지퍼; 면역글로불린 도메인; 또는 T-세포 수용체 (TCR) 도메인인, 항목 1-10 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 12. 면역글로불린 도메인은 면역글로불린 가변 도메인 또는 면역글로불린 불변 도메인을 포함하는, 항목 11의 키트 또는 조성물.
항목 13. 면역글로불린 불변 도메인은 CH1/CL, CH2, CH3, 또는 CH4를 포함하는, 항목 12의 키트 또는 조성물.
항목 14. TCR 도메인은 TCR 불변 도메인을 포함하는, 항목 11의 키트 또는 조성물.
항목 15. 제1 성분의 이량체화 도메인은 제2 성분의 이량체화 도메인과 동일한, 항목 1-14 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 16. 제1 성분의 이량체화 도메인은 제2 성분의 이량체화 도메인과 상이한, 항목 1-14 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 17. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 암에 결합할 수 있는, 항목 1-16 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 18. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 면역 체크포인트 분자, RANK 또는 RANKL, 또는 세포-사멸-유도 항원에 결합할 수 있는, 항목 17의 키트 또는 조성물.
항목 19. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 면역 체크포인트 분자에 결합할 수 있는, 항목 18의 키트 또는 조성물.
항목 20. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, PD-L1에 결합할 수 있는, 항목 19의 키트 또는 조성물.
항목 21. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 아테졸리주맙, 더발루맙, 또는 아벨루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 20의 키트 또는 조성물.
항목 22. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD73에 결합할 수 있는, 항목 19의 키트 또는 조성물.
항목 23. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 CPI-006 또는 MEDI9447의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 22의 키트 또는 조성물.
항목 24. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, RANK에 결합할 수 있는, 항목 18의 키트 또는 조성물.
항목 25. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, RANKL에 결합할 수 있는, 항목 18의 키트 또는 조성물.
항목 26. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 데노수맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 25의 키트 또는 조성물.
항목 27. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 세포-사멸-유도 항원에 결합할 수 있는, 항목 18의 키트 또는 조성물.
항목 28. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, Fas/CD95/Apo1, TNFR1/p55/CD120a, DR3/Apo3/WSL-1/TRAMP/LARD, TRAIL-R1/DR4, DR5/Apo2/TRAIL-R2/TRICK2/KILLER, DR6, 또는 CAR1에 결합할 수 있는, 항목 27의 키트 또는 조성물.
항목 29. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, TRAIL-R1/DR4에 결합할 수 있는, 항목 28의 키트 또는 조성물.
항목 30. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 마파투무맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 29의 키트 또는 조성물.
항목 31. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, DR5/Apo2/TRAIL-R2/TRICK2/KILLER에 결합할 수 있는, 항목 28의 키트 또는 조성물.
항목 32. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 코나투무맙 (AMG655), 렉사투무맙, 티가투주맙 (CS1008), 또는 드로지투맙 (PRO95780)의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 31의 키트 또는 조성물.
항목 33. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 세포외 기질과 연합된 분자에 결합할 수 있는, 항목 1-16 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 34. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포, 대식세포, 또는 자연 살해 세포에 결합할 수 있는, 항목 1-16 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 35. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합할 수 있는, 항목 34의 키트 또는 조성물.
항목 36. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3, 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3), 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), CD28, CD137, OX40, CD27, GITR (TNFRSF18), TIGIT, 또는 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)에 결합할 수 있는, 항목 35의 키트 또는 조성물.
항목 37. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD3에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 38. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 무로모납, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 포라루맙, SP34, 또는 블리나투모맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 37의 키트 또는 조성물.
항목 39. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, PD-1에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 40. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 펨브로리주맙 또는 니볼루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 39의 키트 또는 조성물.
항목 41. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CTLA-4에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 42. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 이필리무맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 41의 키트 또는 조성물.
항목 43. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, TIM-3에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 44. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 TSR-022 또는 Sym023의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 43의 키트 또는 조성물.
항목 45. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, LAG-3에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 46. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 BMS-986016의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 45의 키트 또는 조성물.
항목 47. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, KIR에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 48. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 리릴루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 47의 키트 또는 조성물.
항목 49. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD28에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 50. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 테랄리주맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 49의 키트 또는 조성물.
항목 51. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD137에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 52. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 우토밀루맙 또는 우렐루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 51의 키트 또는 조성물.
항목 53. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, OX40에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 54. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 PF-04518600 또는 BMS 986178의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 53의 키트 또는 조성물.
항목 55. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD27에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 56. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 발리루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 55의 키트 또는 조성물.
항목 57. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, GITR (TNFRSF18)에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 58. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 GWN323 또는 BMS-986156의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 57의 키트 또는 조성물.
항목 59. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 쌍을 이룰 때, TIGIT에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 60. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 OMP-313M32, MTIG7192A, BMS-986207, 또는 MK-7684의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 59의 키트 또는 조성물.
항목 61. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은, 함께 결합될 때, ICOS에 결합할 수 있는, 항목 36의 키트 또는 조성물.
항목 62. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 JTX-2011의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 61의 키트 또는 조성물.
항목 63. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 대식세포에 결합할 수 있는, 항목 34의 키트 또는 조성물.
항목 64. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CSF1R에 결합할 수 있는, 항목 63의 키트 또는 조성물.
항목 65. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 에막투주맙 또는 IMC-CS4의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 65의 키트 또는 조성물.
항목 66. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD40에 결합할 수 있는, 항목 63의 키트 또는 조성물.
항목 67. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 CP-870,893의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 66의 키트 또는 조성물.
항목 68. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 자연 살해 세포에 결합할 수 있는, 항목 34의 키트 또는 조성물.
항목 69. 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD16A에 결합할 수 있는, 항목 68의 키트 또는 조성물.
항목 70. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 NTM-1633 또는 AFM13의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 69의 키트 또는 조성물.
항목 71. 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 동일한 항원에 결합할 수 있는, 항목 1-70 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 72. 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 동일한 세포에서 상이한 항원에 결합할 수 있는, 항목 1-70 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 73. 서로 결합될 때, 제1 상보적 결합 도메인과 제2 상보적 결합 도메인 및 서로 결합될 때, 제1 면역 세포 결합 도메인과 제2 면역 세포 결합 도메인은 상이한 세포에 결합할 수 있는, 항목 1-70 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 74. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 및 제2 상보적 결합 도메인에 결합되지 않을 때 Fv를 형성할 수 있는, 항목 1-73 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 75. 제1 및 제2 상보적 결합 도메인은 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합되지 않을 때 Fv를 형성할 수 있는, 항목 1-74 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 76. 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 제1 표적화 모이어티; 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제1 면역 세포 결합 도메인으로서, 제2 면역 세포 결합 도메인은 제1 성분의 일부가 아니고, 제1 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인 또는 VL 도메인인, 제1 면역 세포 결합 도메인; 제1 면역 세포 결합 도메인에 대한 제1 불활성 결합 파트너로서, 제1 불활성 결합 파트너가 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 제1 면역 세포 결합 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않고, 여기서 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고, 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인, 제1 불활성 결합 파트너; 제1 면역 세포 결합 도메인과 제1 불활성 결합 파트너를 분리하는 프로테아제 절단 부위로서, 프로테아제 절단 부위는 암 또는 종양 미세환경 세포에 의해 발현되거나; (a) 암에 의해 발현되고 작용제의 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 종양 항원 또는 (b) 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된 프로테아제의 존재하에 면역 세포 결합 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있는, 프로테아제 절단 부위; 및 면역 세포 결합이 가능한 제1 상보적 기능성 도메인을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제1 성분, 및 제2 표적화 모이어티; 제2 면역 세포 결합 도메인; 및 선택적으로 면역 세포 결합이 가능한 제2 상보적 기능성 도메인을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제2 성분을 포함하는 환자에서 암을 치료하기 위한 키트 또는 조성물.
항목 77. 제2 성분은 상보적 기능성 도메인을 포함하는, 항목 76의 키트 또는 조성물.
항목 78. 제1 및/또는 제2 성분의 상보적 기능성 도메인은 수용체에 대한 리간드를 포함하는, 항목 76-77 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 79. 상보적 기능성 도메인은 TGF-베타 계열 구성원의 잠재 형태인, 항목 78의 키트 또는 조성물.
항목 80. 제1 및/또는 제2 성분의 상보적 기능성 도메인은 사이토카인을 포함하는, 항목 78의 키트 또는 조성물.
항목 81. 사이토카인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원인, 항목 78의 키트 또는 조성물.
항목 82. 제1 및/또는 제2 성분의 상보적 기능성 도메인은 약독화 사이토카인을 포함하는, 항목 80의 키트 또는 조성물.
항목 83. 약독화 사이토카인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원의 변이체인, 항목 82의 키트 또는 조성물.
항목 84. 제2 성분은 추가로 제2 면역 세포 결합 도메인에 대한 제2 불활성 결합 파트너로서, 제2 불활성 결합 파트너는 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 제2 면역 세포 결합 도메인은 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않고, 여기서 제2 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고, 제2 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인인 경우, 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인, 제2 불활성 결합 파트너; 및 추가로 제2 면역 세포 결합 도메인과 제2 불활성 결합 파트너를 분리하는 프로테아제 절단 부위로서, 프로테아제 절단 부위는 암에 의해 발현되거나; (a) 암에 의해 발현되고 작용제의 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 종양 항원 또는 (b) 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된 프로테아제의 존재하에 면역 세포 결합 도메인으로부터 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있는, 프로테아제 절단 부위를 포함하는, 항목 76-83 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 85. 제1 성분은 제2 성분에 공유 결합되지 않는, 항목 1-84 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 86. 제1 성분은 제2 성분에 공유 결합되는, 항목 1-85 중 어느 하나의 키트 또는 조성물을 포함하는 분자.
항목 87. 제1 성분은 절단 가능한 링커를 통해 제2 성분에 공유 결합되는, 항목 86의 단일 분자.
항목 88. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포, 대식세포, 또는 자연 살해 세포에 결합할 수 있는, 항목 1-87 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 89. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합할 수 있는, 항목 88의 키트 또는 조성물.
항목 90. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3, T-세포 수용체, 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3), 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), CD28, CD137, OX40, CD27, GITR (TNFRSF18), TIGIT, 또는 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)에 결합할 수 있는, 항목 89의 키트 또는 조성물.
항목 91. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 92. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 무로모납, 오텔릭시주맙, 테플리주맙, 비실리주맙, 포라루맙, SP34, 또는 블리나투모맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 91의 키트 또는 조성물.
항목 93. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T-세포 수용체에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 94. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, PD-1에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 95. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 펨브로리주맙 또는 니볼루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 94의 키트 또는 조성물.
항목 96. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CTLA-4에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 97. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 이필리무맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 96의 키트 또는 조성물.
항목 98. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, TIM-3에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 99. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 TSR-022 또는 Sym023의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 98의 키트 또는 조성물.
항목 100. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, LAG-3에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 101. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 BMS-986016의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 100의 키트 또는 조성물.
항목 102. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, KIR에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 103. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 리릴루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 102의 키트 또는 조성물.
항목 104. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD28에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 105. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 테랄리주맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 104의 키트 또는 조성물.
항목 106. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD137에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 107. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 우토밀루맙 또는 우렐루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 106의 키트 또는 조성물.
항목 108. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, OX40에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 109. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 PF-04518600 또는 BMS 986178의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 108의 키트 또는 조성물.
항목 110. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, CD27에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 111. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 발리루맙의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 110의 키트 또는 조성물.
항목 112. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, GITR (TNFRSF18)에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 113. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 GWN323 또는 BMS-986156의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 112의 키트 또는 조성물.
항목 114. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, TIGIT에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 115. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 OMP-313M32, MTIG7192A, BMS-986207, 또는 MK-7684의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 114의 키트 또는 조성물.
항목 116. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 함께 결합될 때, ICOS에 결합할 수 있는, 항목 90의 키트 또는 조성물.
항목 117. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 JTX-2011의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 116의 키트 또는 조성물.
항목 118. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 대식세포에 결합할 수 있는, 항목 88의 키트 또는 조성물.
항목 119. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CSF1R에 결합할 수 있는, 항목 118의 키트 또는 조성물.
항목 120. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 에막투주맙 또는 IMC-CS4의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 119의 키트 또는 조성물.
항목 121. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD40에 결합할 수 있는, 항목 120의 키트 또는 조성물.
항목 122. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 CP-870,893의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 121의 키트 또는 조성물.
항목 123. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 자연 살해 세포에 결합할 수 있는, 항목 88의 키트 또는 조성물.
항목 124. 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD16A에 결합할 수 있는, 항목 123의 키트 또는 조성물.
항목 125. 제1 및 제2 면역 세포 결합 도메인은 NTM-1633 또는 AFM13의 VH 및/또는 VL의 전부 또는 일부를 포함하는, 항목 124의 키트 또는 조성물.
항목 126. 제1 및 제2 표적화 모이어티는 상이한, 항목 1-125 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 127. 제1 및 제2 표적화 모이어티는 동일한, 항목 1-125 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 128. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 항목 1-127 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 129. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 DNA 압타머, RNA 압타머, 알부민, 리포칼린, 피브로넥틴, 안키린, 피노머, 오바디, DARPin, 크노틴, 아비머, 아트리머, 안티-칼린, 아필린, 애피바디, 이환 펩티드, 시스-노트, FN3 (애드넥틴, 센트리린, 프로넥틴, 또는 TN3), 또는 쿠니츠 도메인을 포함하는, 항목 1-128 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 130. 제2 표적화 모이어티는 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는, 항목 1-129 중 어느 하나의 조성물의 키트.
항목 131. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 α4-인테그린; A33; ACVRL 1/ALK1; ADAM17; ALK; APRIL; BCMA; C242; CA125; 카드헤린-19; CAIX; CanAg; 탄산무수화효소 IX; CCN1; CCR4; CD123; CD133; CD137 (4-1BB); CD138/신데칸1; CD19; CD2; CD20; CD22; CD30; CD33; CD37; CD38; CD4; CD40; CD44; CD45; CD48; CD5; CD52; CD56; CD59; CD70; CD70b; CD71; CD74; CD79b; CD80; CD86; CD98; CEA; CEACAM; CEACAM1; CK8; c-Kit; CLDN1; CLDN18; CLDN18.2; CLDN6; c-met/HGFR; c-RET; 크립토; CTLA-4; CXCR4; DKK-1; DLL3; DLL4; TRAIL-R2/DR5; DRS; EGFL7; EGFR; EGFRvIII; 엔도글린; ENPP3; EpCAM; EphA2; 에피시알린; FAP; FGFR1; FGFR2; FGFR3; FGFR4; 피브로넥틴 엑스트라-도메인 B; FLT-3; flt4; 엽산 수용체 1; GCC; GD2; GD3; 글리피칸-3; 글리피칸; GM3; GPNMB; GPR49; GRP78; Her2/Neu; HER3/ERBB3; HLA-DR; ICAM-1; IGF-1R; IGFR; IL-3Ra; 인테그린 α5β1; 인테그린 α6β4; 인테그린 αV; 인테그린 αVβ3; 루이스 Y; 루이스 y/b 항원; LFL2; LIV-1; Ly6E; MCP-1; 메소텔린; MMP-9; MUC1; MUC18; MUC5A; MUC5AC; 미오스타틴; NaPi2b; 뉴로필린 1; NGcGM3; NRP1; P-카드헤린; PCLA; PD-1; PDGFRa; PD-L1; PD-L2; 포스파티딜세린; PIVKA-II; PLVAP; PRLR; 프로가스트린; PSCA; PSMA; RANKL; RG1; 시글렉-15; SLAMF6; SLAMF7; SLC44A4,STEAP-1; TACSTD-2; 테나신 C; TPBG; TRAIL-R1/DR4; TROP-2; TWEAKR; TYRP1; VANGL2; VEGF; VEGF-C; VEGFR-2; 또는 VEGF-R2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 항목 128의 조성물의 키트.
항목 132. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 항 α4-인테그린 항체; 항-CD137 항체; 항-CCR4 항체; 항-CD123 항체; 항-CD133 항체; 항-CD138 항체; 항-CD19 항체; 항-CD20 항체; 항-CD22 항체; 항-CD33 항체; 항-CD38 항체; 항-CD40 항체; 항-CD49d 항체; 항-CD52 항체; 항-CD70 항체; 항-CD74 항체; 항-CD79b 항체; 항-CD80 항체; 항-CEA 항체; 항-cMet 항체; 항-크립토 항체; 항-CTLA-4 항체; 항-DLL3 항체; 항-TRAIL-2/DR5 항체; 항-E-카드헤린 항체; 항-엔도글린 항체; 항-EpCAM 항체; 항-표피 성장 인자 수용체 항체; 항-FGFR3 항체; 항-피브로넥틴 엑스트라-도메인 B 항체; 항-엽산 수용체 1 항체; 항-글리피칸 3 항체; 항-gp95/97 항체; 항-Her2 항체; 항-IGF-1R 항체; 항-IL-13R 항체; 항-IL-4 항체; 항-IL-6 항체; 항-MMP-9 항체; 항-MUC1 항체; 항-뮤신 코어 단백질 항체; 항-NGcGM3 항체; 항-P-카드헤린 항체; 항-PD-L1 항체; 항-p-당단백질 항체; 항-PSCA 항체; 항-PSMA 항체; 항-SLAMF7 항체; 항-TRAIL-R1/DR4 항체; 항-트랜스페린 항체; 항-TROP-2 항체; 또는 항-VEGF 항체인 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 항목 128의 키트 또는 조성물.
항목 133. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 알렘투주맙, 안데칼릭시맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, BCD-100, 베바시주맙, BGB-A317, 블리나투모맙, 브렌툭시맙, BU59, 캄렐리주맙, 카로툭시맙, 카투막소맙, 세미플리맙, 세툭시맙, 다라투무맙, 데파툭시주맙, 디누툭시맙, DS-8201, 더발루맙, 에드레콜로맙, 엘로투주맙, G544, 젬투주맙, 글렘바투무맙, GP1.4, hp67.6, IBI308, 이브리투모맙, 이노투주맙, 이필리무맙, 이사툭시맙, L19IL2, L19TNF, 마르게툭시맙, 미르베툭시맙, 모가무이주맙, 목세투모맙, 나탈리주맙, 네시투무맙, 니볼루맙, 오비누투주맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 오포르투주맙, 파니투무맙, PDR001, 펨브로리주맙, 퍼투주맙, 폴라투주맙, 라코투모맙, 라무시루맙, 리툭시맙, 로발피투주맙, 사시투주맙, SM3, TAK-164, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트레멜리무맙, 우블리툭시맙, 우렐루맙, 우토밀루맙, XMAB-5574, 또는 졸베툭시맙을 포함하는, 항목 128의 키트 또는 조성물.
항목 134. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD-1, IL-13, 줄기세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 CD40을 포함하는, 항목 1-127 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 135. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD-1, IL-13, 줄기세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 CD40의 전장 서열을 포함하는, 항목 134의 키트 또는 조성물.
항목 136. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2, IL-4, IL-6, α-MSH, 트랜스페린, 엽산, EGF, TGF, PD-1, IL-13, 줄기세포 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 또는 CD40의 절단된 형태, 유사체, 변이체, 또는 유도체를 포함하는, 항목 134의 키트 또는 조성물.
항목 137. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 IL-2 수용체, IL-4, IL-6, 멜라닌세포 자극 호르몬 수용체 (MSH 수용체), 트랜스페린 수용체 (TR), 엽산 수용체 1 (FOLR), 엽산 수산화효소 (FOLH1), EGF 수용체, PD-L1, PD-L2, IL-13R, CXCR4, IGFR, 또는 CD40L에 결합하는, 항목 1-134 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 138. 제2 표적화 모이어티는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는, 항목 1-129 중 어느 하나의 키트 또는 조성물.
항목 139. 종양 미세환경 세포는 섬유아세포 또는 대식세포인, 항목 138의 키트 또는 조성물.
항목 140. 섬유아세포에 의해 발현된 항원은 섬유아세포 활성화 단백질인, 항목 139의 키트 또는 조성물.
항목 141. 대식세포에 의해 발현된 항원은 MAC-1/CD11b 또는 시데로플렉신 3인, 항목 139의 키트 또는 조성물.
항목 142. 환자에게 항목 1-141 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 환자에서 제1 표적화 모이어티 및/또는 제2 표적화 모이어티에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암의 치료 방법.
항목 143. 암은 조성물을 투여하기 전에 침윤성 면역 세포의 존재에 대해 평가되는, 항목 142의 방법.
항목 144. 암은 조성물을 투여하기 전에 종양 항원의 존재에 대해 평가되는, 항목 142-143 중 어느 하나의 방법.
항목 145. 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티는 동일한 항원에 결합하는, 항목 142-144 중 어느 하나의 방법.
항목 146. 제1 표적화 모이어티 및 제2 표적화 모이어티는 상이한 항원에 결합하는, 항목 142-144 중 어느 하나의 방법.
항목 147. 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암은 유방암, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 림프구증식성 장애, 골수형성이상 장애, 골수증식성 질환 또는 전암성 질환 중 어느 하나인, 항목 142-146 중 어느 하나의 방법.
항목 148. 환자에게 항목 1-141 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티 둘 다에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법.
항목 149. 환자에게 항목 1-141 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 하나의 종양 항원이 제1 표적화 모이어티에 결합하고, 하나의 종양 항원이 제2 표적화 모이어티에 결합하는 2개의 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법.
항목 150. 환자에게 항목 76-147 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 환자의 면역 세포에 사이토카인을 전달하는 방법으로서, TWICE의 제1 및/또는 제2 상보적 기능성 도메인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원을 포함하는, 방법.
V. 보조 표
상기 출원에서는 다음의 보조 표를 참조하였다.
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
실시예
실시예 1. 면역 세포에서 2가지 억제 경로를 차단하는 TWICE
TWICE는 다양한 암 및 면역 세포에 작용하도록 개발될 수 있다. 이 실시예는 당업자가 특정 기능을 갖는 TWICE를 어떻게 생성할 수 있는지를 보여주는 역할을 한다.
예를 들어, 2개의 체크포인트 억제 항체의 시너지 조합으로 TWICE가 생성될 수 있다.
첫 번째 단계로서, 당업자는 먼저 주어진 암에 적합한 표적화 모이어티를 선택할 것이다. 표적화 모이어티는 주어진 암 유형 및 특정 항원의 우세에 대한 문헌을 기반으로 선택될 수 있다. 대안적으로, 특정 환자에서 암에 의해 발현되는 항원을 평가할 수 있다. 예를 들어, 리툭시맙 (항-CD20 항체)은 CD20-양성 림프종을 표적화하는 데 사용될 수 있으며, 세툭시맙 (항-EGFR 항체)은 특정 고형 종양을 표적화하는 데 사용될 수 있다.
TWICE는 2개의 표적화 모이어티를 사용할 수 있다. 당업자는 주어진 암에 대해 제1 성분 및 제2 성분 둘 다를 표적화하기 위해 2개의 표적화 모이어티를 선택할 수 있다. 난소암은 한 성분을 표적화하기 위해 CA125를 사용하고, 다른 성분을 표적화하기 위해 EpCAM을 사용하여 표적화될 수 있다.
적절한 표적화 모이어티를 선택한 후, 당업자는 어떤 유형의 면역 세포 결합 도메인 및 상보적 결합 도메인이, 쌍을 이룰 때, 가장 큰 치료 효능을 가질 수 있는지 결정할 수 있다.
도 1은 TWICE가 암세포에 2개의 표적화 도메인을 사용하여 면역 세포에서 2가지 시그널링 경로를 통한 활성화를 가능하게 하는 방법을 보여준다.
항종양 면역 반응을 향상시키기 위해, 2개의 체크포인트 분자를 억제하는 TWICE를 생성하고, 따라서 어느 체크포인트 분자 단독의 억제와 비교하여 항암 면역 반응을 높이기를 원할 수 있다.
예를 들어, 제1 성분이 면역 세포 결합 도메인으로서 이필리무맙 (항-CTLA4 항체)의 VH 및 상보적 결합 도메인으로서 니볼루맙 (항-PD-1 항체)의 VL을 포함하는 TWICE가 생성될 수 있다. 그 다음, 이 TWICE의 제2 성분은 면역 세포 결합 도메인으로서 이필리무맙 (항-CTLA4 항체)의 VL 및 상보적 결합 도메인으로서 니볼루맙 (항-PD-1 항체)의 VH를 포함할 수 있다. 한 성분에 VH가 있고 다른 성분에 VL이 있는 한, TWICE의 기능은 주어진 항체의 VH 또는 VL을 갖는 성분에 의해 영향을 받지 않는다.
이러한 방식으로 TWICE를 생성함으로써, TWICE의 제1 및 제2 성분 둘 다가 암에 표적화될 수 있다. 암 부위에서 이필리무맙의 VH 및 VL과 니볼루맙의 VH 및 VL은 제1 및 제2 성분의 근접성을 기반으로 쌍을 이룰 수 있다. 이는, 도메인이 쌍을 이룬 후, TWICE가 2개의 면역 체크포인트를 차단하고, 강력한 면역 세포 활성화로 이어질 수 있도록 한다.
실시예 2. 면역 세포의 2가지 경로를 자극하는 TWICE
(면역 세포 결합 도메인과 상보적 결합 도메인이 쌍을 이루는 경우) 강력한 항암 효과를 매개하기 위해 면역 세포에서 2가지 경로를 자극하는 TWICE가 개발될 수 있다. 예를 들어, 암은 EGFR을 발현시키는 유방암일 수 있다.
임의의 이들 실시예에 대해, 제2 표적화 모이어티는 종양 미세환경 세포를 표적화하도록 선택될 수 있다. 이 실시예에서, 제2 표적화 모이어티는 종양-관련 대식세포 (TAM)를 표적화하도록 선택될 수 있다. 따라서, 제1 표적화 모이어티 (제1 성분에서)는 종양에 의해 발현된 항원에 결합할 수 있는 반면, 제2 표적화 모이어티 (제2 성분에서)는 TAM에 의해 발현된 항원에 결합할 수 있다. EGFR을 발현시키는 유방암을 표적화하기 위해, 제1 표적화 모이어티는 세툭시맙일 수 있고, 제2 표적화 모이어티는 MAC-1/CD11b일 수 있다.
도 2는 제1 성분이 암세포를 표적화하고, 제2 성분이 비암 세포 (이 실시예에서는 TAM)를 표적화하는 TWICE를 개략적으로 나타낸다. 이 유형의 TWICE는 또한 암세포가 TAM에 매우 근접한 경우에만 도메인 쌍을 이룰 것이다. 면역 세포 결합 도메인의 쌍과 상보적 결합 도메인의 쌍은 면역 효과기 세포에서 2가지 경로를 자극할 수 있다.
예를 들어, 당업자는 CD3e 및 CD137 경로 둘 다를 활성화하도록 선택할 수 있다. 이를 위해, 당업자는 제1 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VH 및 우토밀루맙 (항-CD137 항체)에 대한 VL을 포함하고, 제2 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VL 및 우토밀루맙 (항-CD137 항체)에 대한 VH를 포함하는 TWICE를 생성할 수 있다.
이러한 방식으로 TWICE를 생성함으로써, TWICE의 제1 및 제2 성분 둘 다는 예를 들어 종양 간질에서 TAM에 매우 근접한 암세포를 표적화할 수 있다. SP34의 VH 및 VL과 우토밀루맙의 VH 및 VL은 제1 및 제2 성분의 근접성을 기반으로 쌍을 이룰 수 있다. 이는, 도메인이 쌍을 이룬 후, TWICE가 T 세포에 2개의 긍정적인 자극을 제공할 수 있게 한다.
이 실시예 또는 실시예 1에 기재된 것과 유사한 방식으로, 억제 체크포인트 분자를 (예를 들어, 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인에 의해) 차단하고, 면역계에 (예를 들어 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인에 의해) 긍정적인 자극을 제공하기 위한 TWICE가 생성될 수 있다. 이러한 유형의 작제물은 또한 항암 면역 반응을 강력하게 활성화할 수 있다.
실시예 3. 암 부위에서 2개의 상이한 면역 세포를 활성화하는 TWICE
TWICE는 2개의 상이한 면역 효과기 세포에서 활성을 결합시킬 수 있다. 예를 들어, T-세포 활성화 및 대식세포 활성화를 매개하기 위한 TWICE가 생성될 수 있다.
암세포에 의해 발현된 항원에 대한 표적화 모이어티는 실시예 1에 개략적으로 나타낸 바와 같이 선택될 수 있다. 이 특정 실시예에서, 두 표적화 모이어티는 유방암 세포 상의 HER2에 결합할 수 있다. 2개의 표적화 모이어티는 동일하거나 HER2 상의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 그 다음, 도 3에 나타낸 바와 같이, TWICE의 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인은 제1 효과기 세포 (이 경우에는 T 세포)에 결합할 수 있고, 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인은 제2 효과기 세포 (이 경우에는 대식세포)에 결합할 수 있다.
당업자는 T 세포에서 CD3 및 대식세포에서 CD40 경로 둘 다를 활성화하도록 선택할 수 있다. 이를 위해, 당업자는 제1 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VH 및 CP-870,893 (항-CD40 항체)에 대한 VL을 포함하고, 제2 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VL 및 CP-870,893 (항-CD40 항체)에 대한 VH를 포함하는 TWICE를 생성할 수 있다.
이러한 방식으로 TWICE를 생성함으로써, 제1 및 제2 성분은 암세포를 표적화할 것이다. 암세포에서 SP34의 VH 및 VL과 CP-870,893의 VH 및 VL은 제1 및 제2 성분의 근접성을 기반으로 쌍을 이룰 수 있다. 이는, 도메인이 쌍을 이룬 후, TWICE가 암 부위에서 T 세포와 대식세포 둘 다를 자극할 수 있게 한다.
유사한 방식으로, TWICE는 암 부위에서 T 세포와 NK 세포의 조합을 활성화하도록 설계될 수 있다.
실시예 4. 면역 세포와 암세포를 조절하는 TWICE
TWICE는 또한 면역 세포와 암세포에서 직접 활성을 결합시킬 수 있다. 예를 들어 TWICE는 T-세포 활성화를 매개하고 암세포에 의해 발현된 면역 체크포인트 분자를 차단하기 위해 생성될 수 있다.
유방암 세포 상의 HER2와 같이, 암세포에 의해 발현된 단일 항원에 대한 2개의 표적화 모이어티는 실시예 3에 개략적으로 나타낸 바와 같이 선택될 수 있다. 그 다음, 도 4에 나타낸 바와 같이, TWICE의 쌍을 이룬 면역 세포 결합 도메인은 효과기 세포 (이 경우에는 T 세포)에 결합할 수 있고, 쌍을 이룬 상보적 결합 도메인은 암에 결합할 수 있다.
당업자는 T 세포에서 CD3 및 암세포에서 PD-L1을 활성화하도록 선택할 수 있다. 이를 위해, 당업자는 제1 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VH 및 아벨루맙 (항-PD-L1 항체)에 대한 VL을 포함하고, 제2 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VL 및 아벨루맙 (항-PD-L1 항체)에 대한 VH를 포함하는 TWICE를 생성할 수 있다.
이러한 방식으로 TWICE를 생성함으로써, 두 성분은 암세포를 표적화할 수 있다. 암세포에서, SP34의 VH 및 VL과 아벨루맙의 VH 및 VL은 제1 및 제2 성분의 근접성을 기반으로 쌍을 이룰 수 있다. 이는, 도메인이 쌍을 이룬 후, TWICE가 종양 미세환경에서 T 세포를 자극하고, 암세포에 의해 발현된 PD-L1에 의해 매개되는 면역 억제를 차단할 수 있게 한다.
유사한 방식으로, TWICE는 암세포 상의 세포-사멸-유도 항원 또는 RANK에 결합하는 TWICE를 설계할 수 있다.
예를 들어, 당업자는 T 세포 상에서 CD3를 활성화하고, 암세포 사멸을 직접 유도하도록 선택할 수 있다. 이를 위해, 당업자는 제1 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VH 및 마파투무맙 (항-TRAIL-R1/DR4 사멸 수용체 항체)에 대한 VL을 포함하고, 제2 성분이 SP34 (항-CD3 항체)에 대한 VL 및 마파투무맙 (항-TRAIL-R1/DR4)에 대한 VH를 포함하는 TWICE를 생성할 수 있다. 이는, 암세포에서 도메인이 쌍을 이룬 후, TWICE가 T 세포를 자극하고 암세포 사멸을 직접 유발할 수 있게 한다.
따라서, TWICE는 직접적인 항암 효과를 매개하고, 항암 면역 반응을 자극할 수 있다.
실시예 5. 이량체화 도메인을 포함하는 TWICE
실시예 1-4에 기재된 임의의 작제물에서, TWICE는 또한 도 6에 나타낸 바와 같이 이량체화 도메인을 포함할 수 있다. 쌍의 하나의 이량체화 도메인은 면역 세포 결합 도메인에 부착될 수 있는 반면, 쌍의 다른 이량체화 도메인은 상보적 결합 도메인에 부착될 수 있다. 예를 들어, 각 성분은 한 쌍의 놉-인투-홀 이량체화 서열을 포함할 수 있다. 이량체화 도메인 중 하나 또는 둘 다는 절단 가능한 링커 (이량체화 도메인 링커로 불림), 예컨대 ADAM28 절단 부위 (서열 번호: 1)를 포함하는 링커를 통해 부착될 수 있다.
이러한 방식으로, 각 성분의 놉-인투-홀 이량체화 도메인은 개별 성분의 면역 세포 결합 도메인과 상보적 결합 도메인이 쌍을 이루게 한다. 표적화 모이어티에 의해 종양 미세환경을 표적화한 후, 하나 또는 둘 모두의 이량체화 도메인을 부착하는 절단 가능한 링커가 절단될 수 있고, 이량체화 도메인이 방출될 수 있다. 이러한 방식으로, 면역 세포 결합 도메인 및/또는 상보적 결합 도메인은 종양 미세환경에서만 다른 성분의 상응하는 도메인과 쌍을 이루는 데 이용 가능하게 될 것이다.
따라서, 이량체화 도메인은 종양 미세환경에서 원하는 작용 부위 외부의 각 성분의 면역 세포 결합 도메인과 상보적 결합 도메인이 결합하게 하고, 종양 미세환경 외부 성분 사이에서 잠재적인 도메인 쌍을 차단하는 데 사용될 수 있다. 대조적으로, 종양 미세환경에서 프로테아제에 의한 이량체화 도메인 링커의 절단은 종양에서만 도메인 스와핑 및 활성을 허용할 수 있다.
두 성분이 모두 이량체화 도메인을 포함하거나 하나의 성분만 이량체화 도메인을 포함하는 TWICE가 설계될 수 있다.
실시예 6. 상보적 기능성 도메인을 포함하는 TWICE
다른 TWICE는 도 5에 나타낸 바와 같이 암세포를 표적화할 때 활성을 갖는 상보적 기능성 도메인을 포함할 수 있다. 이 실시예에서 제1 성분은 약독화된 IFN-알파 사이토카인을 포함한다 (Pogue 등, PLoS ONE 11(9): e0162472 (2016) 참조).
제1 및 제2 성분은 둘 다 항-EPCAM scFv를 포함할 수 있다. 제1 성분은 MMP2 절단 부위 (AIPVSLR; 서열 번호: 46)를 갖는 25량체 링커를 통해 간테네루맙의 불활성 결합 파트너 VL 도메인에 연결된 SP34의 것 (즉, 면역 세포 결합 도메인)과 같은 항-CD3E VH 도메인을 포함할 수 있다. 제2 성분은 MMP2 절단 부위 (AIPVSLR; 서열 번호: 46)를 갖는 25량체 링커를 통해 클론 알파-MUC1-1 항체의 불활성 결합 파트너 VH 도메인에 연결된 SP34의 것 (즉, 면역 세포 결합 도메인)과 같은 항-CD3E VL 도메인을 포함할 수 있다.
이러한 방식으로, 제1 및 제2 성분의 면역 세포 결합 도메인은 종양-관련 프로테아제 MMP2에 의해 절단되지 않는 한 차폐된다. 제1 및 제2 성분이 EPCAM-양성 종양을 표적화할 때, MMP2에 의한 절단은 불활성 결합 도메인 (즉, 불활성 결합 파트너)의 방출을 매개할 수 있다. 이러한 방식으로, SP34의 VH 및 VL은 암 부위에서 T 세포에 결합하여 이를 활성화할 수 있다. 또한, EPCAM 항체에 의해 약독화된 IFN-알파를 암세포로 표적화하면 직접적인 항암 효과를 유발할 수 있다. 이 유형의 TWICE는 약독화 사이토카인에 의해 항암 효과를 매개하고, 항암 면역 반응을 자극할 수 있다.
유사하게, TWICE는 T-세포 활성화를 조절하기 위해 IL-15 또는 약독화된 IL-2를 이용할 수 있다.
유사한 방식으로, 제1 성분에서 상보적 기능성 도메인으로서 다른 약독화 사이토카인을 포함하는 TWICE가 설계될 수 있다. 상가 효과를 위해 제1 및 제2 성분 둘 다에 상보적 기능성 도메인을 포함하는 TWICE도 설계될 수 있다.
실시예 7. 다양한 이량체화 도메인 링커 및 다양한 이량체화 도메인을 포함하는 TWICE
TWICE 분자의 예를 구축하기 위해 암세포를 표적화하는 잘 확립된 항-EpCAM 항체를 사용하였다. EpCAM 항체 솔리토맙 (Brischwein K, 등 Mol Immunol . 43(8):1129-43 (2006))이 선택되었고, 이 항체는 2개의 사슬, 즉 중쇄 가변 도메인과 CH1 도메인으로 구성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인과 카파 불변 도메인으로 구성된 경쇄를 포함하는 항원 결합 단편 (Fab)의 형태로 사용되었다.
이들 TWICE 분자의 초기 시험을 위해, 항-CD3엡실론 항체 SP34의 VH는 솔리토맙 Fab 중쇄의 C-말단에 융합되었고, 항-PDL1 항체 아테졸리주맙의 VL은 15개 아미노산 길이의 가요성 링커를 사용하여 솔리토맙 Fab 경쇄의 C-말단에 융합되었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, TWICE 분자는 잘못 쌍을 이룬 가변 도메인을 연결하고, TWICE가 종양 미세환경에서 단백질 분해로 활성화되지 않는 한 도메인 스왑을 방지하는 이량체화 도메인을 함유할 수 있다. 이 이량체화 도메인은 VH 및 VL 도메인 사이에 이종이량체의 효율적인 형성을 강화하고, 동종이량체의 형성을 피하기 위해 이종이량체화로 구축될 수 있다. 여러 이종이량체화 도메인이 문헌에 설명되어 있다. 어떤 이종이량체화 도메인이 TWICE의 조작에 적합한지 시험하기 위해, 여러 TWICE가 다양한 이종이량체화 도메인을 사용하여 작제되고 발현되었다.
먼저, 도 7a에 나타낸 바와 같이 코일드-코일 이종이량체화 도메인을 사용하여 TWICE를 구축하였다. 코일드-코일은 류신 지퍼라고도 하였다. 이종이량체를 형성하기 위해 산 및 염기 코일로 조작된 코일드-코일 도메인의 서열은 US 2016 0002356 A1 및 US 8877893 B2에 열거되어 있다. 본 실시예에서는 TWICE 분자의 중쇄를 염기성 코일 (서열 번호: 201)에 융합시키고, 경쇄를 산 코일 (서열 번호: 202)에 융합시켰다. 당업자는 중쇄가 또한 산 코일에 융합될 수 있고 경쇄가 염기성 코일에 융합될 수 있음을 알 것이다.
표 12는 코일드-코일 TWICE 작제물에 포함된 이량체화 도메인 링커를 열거한다. 이 이량체화 도메인 링커는 프로테아제에 의해 절단될 수 있는 서열을 함유할 수 있다. 프로테아제 절단은 나머지 TWICE 분자로부터 이량체화 도메인의 분리를 야기하며, 이는 도메인 스왑에 의해 2개의 TWICE 사이에 면역 세포 결합 VH 또는 VL 도메인의 상보성을 허용할 것이다. 표 12에 열거된 예에서, 이량체화 도메인 링커의 몇 가지 예가 열거되어 있다. 일부 예에서, 링커는 종양 미세환경에서 기질 메탈로프로테아제에 의해 절단될 수 있는 서열을 함유한다. 다른 예에서, 이량체화 도메인 링커는 시험관내에서 TWICE 분자를 인위적으로 활성화하는 데 사용될 수 있는 인자 Xa (FXa)에 의해 절단될 수 있는 프로테아제 부위를 함유한다. 즉, 인자 Xa가 실험실 환경에서 사용하기 편리하기 때문에 인자 Xa 절단 부위가 프로테아제 절단 부위에 대한 대용물(proxy)로서 실시예에서 사용되었다. 표 12에 열거된 일부 예에서, 하나의 TWICE 분자의 중쇄 및 경쇄는 이량체화 도메인 링커에 동일한 프로테아제 절단 서열을 포함하고, 다른 예에서 하나의 TWICE 분자의 중쇄 및 경쇄는 이량체화 도메인 링커에 상이한 프로테아제 절단 서열을 포함한다.
표 12에 열거된 일부 예에서, TWICE는 이량체화 도메인으로서 이종이량체 Fc를 함유한다. 여기서, WO2017106462A1에 개시된 라이신 재배치 전략을 사용하여 헤테로-Fc 이량체화 도메인을 갖는 TWICE를 구축하였다. 표 12는 TWICE 분자 TWICE191 및 TWICE192에 사용된 이량체화 도메인 링커를 보여준다. TWICE191은 서열 번호: 171의 중쇄 및 서열 번호: 172의 경쇄를 포함하고, TWICE192는 서열 번호: 173의 중쇄 및 서열 번호: 174의 경쇄를 포함한다. 이 TWICE는 중쇄와 경쇄 사이에 헤테로-Fc의 형성을 촉진하기 위해 중쇄의 Fc에서 돌연변이 S364K/K409L 및 경쇄의 Fc에서 K370S/F405K를 함유한다. 헤테로-Fc 이량체화 도메인으로 TWICE를 조작하면 신생아 Fc 수용체인 FcRn에 결합할 수 있으며, 이는 분자의 재활용을 매개하고 혈청 반감기를 연장한다. 이 TWICE 예는 Fc에 N297Q 돌연변이를 추가로 함유하며, 이는 효과기 기능이 손상된 비글리코실화된 분자를 생성한다.
또 다른 예에서 Fab 불변 도메인 (CH1 및 CL)은 TWICE 분자를 구축하기 위해 이량체화 도메인으로 사용되었다. 암 표적화 모이어티로서 Fab를 또한 함유하는 TWICE 분자의 중쇄 및 경쇄의 효율적인 조립을 가능하게 하기 위해 이량체화 도메인 CH1 및 CL을 CrossFab으로 구축하였다 (도 7a). CrossFab은 VH가 CL에 연결되고, VL이 CH1에 연결되도록 Fab 중 하나에서 불변 도메인의 교차에 의해 이중특이적 항체 작제물의 두 경쇄의 효율적인 조립을 가능하게 하는 전략이다 (Schaefer W 등, Proc Natl Acad Sci U S A. 108(27):11187-92 (2011)). CrossFab 이량체화 도메인을 함유하는 TWICE 작제물 (TWICE200 및 TWICE204, 표 13 참조)에서 면역 세포 인게이저의 VH는 이량체화 도메인 링커 서열에 의해 CL 도메인에 연결되고, 상보적 인게이저의 VL은 이량체화 도메인 링커 서열에 의해 CH1 도메인에 연결된다. 모든 이량체화 도메인 링커에는 인자 Xa 프로테아제 절단 서열 (Ile-Glu-Gly-Arg)이 포함되었다. TWICE200의 전체 서열은 서열 번호: 177의 중쇄 및 서열 번호:178의 경쇄를 포함하고, 작제물 TWICE204는 서열 번호: 179의 중쇄 및 서열 번호: 180의 경쇄를 포함한다.
또 다른 예에서, TWICE는 IgE CH2 도메인을 이량체화 도메인으로 사용하여 구축되었다. IgE CH2는 일반적으로 IgE에서 힌지 도메인으로 기능하지만, 이 도메인은 도메인 치환에 의해 유사한 결합 특성을 갖는 Fab-유사 분자를 구축하는 데 사용되었다 (Cooke 등, mAbs . 10(8):1248-1259 (2018)). TWICE189 및 TWICE190에서, IgE CH2 도메인은 표 12에 주어진 이량체화 도메인 링커 서열을 사용하여 면역 세포 인게이저 VH 및 VL 도메인에 융합되었다. 이량체화 도메인 링커는 인자 Xa 절단 서열 (Ile-Glu-Gly-Arg)을 함유한다.
Figure pct00046
Figure pct00047
표 13에 열거된 TWICE 단백질은 각각의 중쇄 및 경쇄의 공동 형질감염에 의해 진탕 플라스크에서 일시적인 HEK293 배양물 (30-50 ml)에서 발현되었다. 발현된 단백질은 IMAC 컬럼 (Histrap Excel, GE)을 사용하는 FPLC에 의해 상청액으로부터 정제되거나 Fc-함유 TWICE 단백질의 경우 단백질 A 컬럼 (MabSelect PrismA, GE)에 의해 정제되었다. 정제된 단백질은 SDS-PAGE로 분석되었고, 시험된 모든 링커 및 이량체화 도메인에 대해 예상된 분자량에서 밴드를 보여주었다 (도 7b). 발현 수준은 코일드-코일 또는 헤테로-Fc 이량체화 도메인이 있는 TWICE에서 가장 높았다.
재조합 FXa 프로테아제로 절단하여 TWICE를 추가로 시험하였다. 15 μl의 반응에서 대략 1 μg의 정제된 TWICE와 0.1 μg FXa (New England Biolabs #P8010)를 100 mM NaCl 및 2 mM CaCl2와 함께 20 mM Tris-HCl (pH 8.0)을 함유하는 완충액에서 1시간 동안 주위 온도에서 인큐베이션하였다. 5 μl 4X LDS 샘플 완충액 (Thermo Fisher NP0007)을 첨가하고 95℃로 2분 동안 가열하여 반응을 중지시켰다. 그 다음 샘플을 SDS PAGE로 분리하여 절단 산물을 분석하였다 (도 7c).
두 이량체화 도메인 링커, 즉 중쇄 및 경쇄 (표 13)에서 FXa 절단 서열을 함유하는 샘플 TWICE193, TWICE191 및 TWICE192를 FXa에 의해 완전히 절단하였다 (도 7c). 중쇄 이량체화 도메인 링커에서 FXa 절단 부위 및 경쇄 이량체화 도메인 링커에서 MMP2 절단 부위를 갖는 TWICE117은 부분적으로만 절단되었다 (도 7b). 두 이량체화 도메인 링커에 포함된 FXa 절단 부위를 갖는 작제물 TWICE200, TWICE204, TWICE189 및 TWICE190은 이러한 조건하에 FXa 프로테아제에 의해 절단되지 않았다. 이 결과는, 길이가 5개 내지 8개 잔기인 작제물 TWICE200, TWICE204, TWICE189 및 TWICE190에서 이량체화 도메인의 구성 (CH1/CL 또는 IgE CH2) 또는 링커 길이 (표 12)가 이러한 특정 작제물에서 프로테아제 절단에 유리하지 않음을 시사한다. 그러나 코일드-코일과 헤테로-Fc는 TWICE117, TWICE193, TWICE192, 및 TWICE193 디자인에 포함된 이량체화 도메인으로, TWICE의 구축에 적합하다. 이러한 이량체화 도메인을 함유하는 TWICE 분자는 잘 발현되고, 재조합 프로테아제로 절단하여 활성화될 수 있다.
실시예 8. 다양한 결합 모이어티가 있는 TWICE: Fv 대 Fab
TWICE 분자는 CD3 항체 SP34 및 CTLA4 항체 이필리무맙으로 조작되고, 헤테로-Fc 이량체화 도메인을 함유하였다. 일부 예에서, 항-EpCAM 항체 솔리토맙은 Fab (TWICE277 및 TWICE278)로 사용되었고, 다른 예에서 이 항체는 VH의 잔기 44와 VL의 잔기 100 (Kabat 넘버링 참조) 사이의 이황화물을 조작함으로써 이황화-안정화 Fv (dsFv, TWICE332 및 TWICE335)로 사용되었다. TWICE 분자는 상기 기재된 바와 같이 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 의해 발현 및 정제되었고, EpCAM에 결합하는 능력을 ELISA 결합 분석에서 시험하였다. 재조합 가용성 EpCAM-His6 단백질 (사내(in-house) 생산)을 ELISA 플레이트에 5 μg/ml로 4℃에서 밤새 코팅하고, 플레이트를 PBS 중 1% BSA로 차단하였다. TWICE의 연속 희석액을 EpCAM에 결합시키고, 결합된 TWICE를 마우스 항-인간 Fc 2차 (JDC-10 Abcam, ab99759)로 검출하였다. 그 결과 (도 8a-8b), Fab 또는 dsFv 표적화 모이어티가 있는 TWICE 분자는 유사한 결합 친화도로 항원에 결합하였고, dsFv TWICE의 경우 1.04 nM 내지 1.65 nM 범위의 KD로, Fab TWICE의 경우 1.21 nM 내지 1.22 nM 범위의 KD로 결합하였음을 보여주었다. 따라서, TWICE 분자는 종양 미세환경에서 세포를 표적화하기 위해 상이한 표적화 모이어티, 예를 들어 Fab 또는 dsFv로 구축될 수 있다.
실시예 9. 가교 ELISA에서 CD3/ CTLA -4 TWICE의 시험
TWICE 쌍에 의한 도메인 스왑 및 기능적 파라토프 (즉, 쌍을 이룬 VH/VL 도메인)의 생성을 시험하기 위해, TWICE 쌍이 표적 항원 및 면역 세포 인게이징 분자에 동시에 결합하는 능력을 측정하는 가교 ELISA 분석이 개발되었다. 도 9a의 개략도는 이 가교 ELISA의 원리를 보여준다. 간단히 말하면, ELISA 플레이트는 5 μg/ml 농도의 표적 항원 (재조합 가용성 EpCAM, 검은색 육각형)으로 밤새 코팅된다. TWICE 분자는 상기 기재된 바와 같이 FXa로 절단하여 활성화된 다음 연속 희석으로 플레이트에 첨가될 수 있다. TWICE는 도 9a에서 Fab (4개의 회색 타원형)로 그려진 표적 결합 모이어티를 사용하여 표적 항원에 결합할 수 있다. 플레이트 상의 표적 항원 (EpCAM)에 결합하면 TWICE가 매우 근접하게 되어 면역 세포 결합 도메인과 상보적 결합 도메인이 도메인 스왑을 거쳐 완전한 면역 세포 결합 파라토프를 형성할 수 있다 (도 9a에서 검은색 및 흰색 타원형). 기능적 상보성은 CD3 (도 9a에서 줄무늬 삼각형)과 같은 면역 세포 결합 도메인에 의해 결합된 항원과의 인큐베이션에 의해 측정된다. 항원은 Fc-융합 단백질 (뮤린 IgG2a Fc)로 제공되므로 항-마우스 Fc 2차 항체로 검출될 수 있다. 2차 항체에 의한 이 검출 단계는 명료성을 위해 도 9a의 개략도에서 생략되었다.
도 9b 및 도 9c는 도메인 스왑에 의한 TWICE 쌍의 기능적 상보성을 측정하는 가교 ELISA의 예를 보여준다. 이 예에서, TWICE277 및 278 (표 13에 기재된 바와 같음)이 사용되며, 이는 CD3엡실론에 결합하는 면역 세포 결합 항체 SP34 및 CTLA-4에 결합하는 상보적 항체 이필리무맙을 함유한다. TWICE277에는 CD3 항체의 VH와 CTLA-4 항체의 VL이 포함되어 있고, TWICE278에는 항-CD3의 VL과 항-CTLA-4의 VH가 포함되어 있다. TWICE 분자의 이러한 예는 두 이량체화 도메인 링커에서 헤테로-Fc 이량체화 도메인 및 FXa 절단 부위를 추가로 함유한다. 도 9b는 CD3에 결합하는 TWICE의 능력을 측정하는 CD3 가교 ELISA의 결과를 보여주고, 도 9c는 CTLA-4에 결합하는 TWICE의 능력을 측정하는 CTLA-4 가교 ELISA의 결과를 보여준다. 이 실험에서 개별 TWICE (277 또는 278 단독)는 FXa로 절단하여 활성화된 경우에도 CD3 또는 CTLA-4에 대한 결합을 나타내지 않았다. 또한, TWICE 277과 278이 조합되었지만 FXa로의 절단에 의해 활성화되지 않았을 때, TWICE는 CD3 또는 CTLA-4에 대한 결합을 나타내지 않았다. 이량체화 도메인을 제거하기 위해 TWICE277 및 278이 조합되고 FXa에 의해 절단되었을 때만 용량 의존적 반응으로 CD3 또는 CTLA-4 (도 9b 및 9c의 다이아몬드 기호)에 대한 결합을 보여주었다. 이러한 결과는 두 TWICE가 표적 항원에 결합될 때 TWICE 분자가 도메인 스왑을 거쳐 기능적 면역 세포 결합 도메인을 생성할 수 있음을 입증한다. 또한, 이 TWICE의 이량체화 도메인은 프로테아제 절단에 의해 이량체화 도메인이 제거되지 않는 한 TWICE의 도메인 스왑을 방지하는 잠금 메커니즘으로 의도된 대로 기능한다.
도 10a-10b는 가교 ELISA 실험에서 시험된 CD3/CTLA-4 TWICE 분자의 또 다른 예를 보여준다. 이 실험에 사용된 TWICE281 및 282는 상기 기재된 TWICE277 및 TWICE278과 동일한 EpCAM 표적화 및 CD3 및 CTLA-4 항체를 포함하지만 코일드-코일 이량체화 도메인을 함유한다는 점에서 다르다. 또한, TWICE281 및 282는 중쇄에 FXa 절단 부위를 함유하고, 경쇄에 MMP2 절단 서열을 함유하므로 분자는 FXa 또는 MMP2에 의한 절단에 의해 활성화될 수 있다. 이전 실험과 유사하게, TWICE277 및 278은 FXa로 절단하여 활성화된 경우에만 용량-반응 결합 곡선을 나타냈다 (도 10a 및 10b). FXa에 의한 활성화가 없으면, TWICE는 CD3 또는 CTLA-4에 결합하지 않았다. 따라서 헤테로-Fc 및 코일드-코일 이량체화 도메인은 둘 다 TWICE의 조작에 적합하다. 헤테로-Fc는 TWICE의 연장된 혈청 반감기가 요망될 때 바람직할 수 있다.
실시예 10. CD3/CD28 TWICE
도 11a-11b는 가교 ELISA 실험에서 시험된 CD3 항체 SP34 및 공동 자극 항-CD28 항체 테랄리주맙으로부터 구축된 TWICE의 예 (표 13의 TWICE 394 및 TWICE 395)를 보여준다. TWICE의 이러한 예는 중쇄 및 경쇄 링커 모두에서 헤테로-Fc 이량체화 도메인 및 FXa 절단 부위를 사용하여 다시 조작되었다. 이전 실시예와 유사하게, TWICE394 및 TWICE395는 절단에 의해 조합되고 활성화된 경우에만 면역 세포 항원 CD3 및 CD28에 대한 결합을 나타냈다 (도 11a 및 11b). 개별 TWICE는 면역 세포 항원에 대한 결합을 나타내지 않았다. 절단되지 않은 TWICE가 어떠한 가교 활동도 나타내지 않았다는 사실 (도 11a 및 11b에서 회색 사각형)에 의해 입증된 바와 같이 절단은 도메인 스왑 및 결합에 다시 필요했다.
실시예 11. CD28/4- 1BB TWICE
도 12a-12b는 공동 자극 분자 CD28 및 CD137 (4-1BB)에 결합하는 항체 테랄리주맙 및 우렐루맙으로 구축된 TWICE의 예를 보여준다. TWICE400 및 TWICE401 (표 13에 표시된 바와 같음)은 테랄리주맙 및 우렐루맙의 가변 도메인을 사용하여 구축되고, 두 링커에서 헤테로-Fc 이량체화 도메인 및 FXa 절단 부위를 함유하였다. 이러한 분자가 가교 ELISA 형식으로 시험된 경우, TWICE는 작제물이 FXa로 사전 절단되고 두 TWICE가 모두 존재했을 때 CD28 (도 12a) 및 4-1BB (도 12b)에 대한 결합을 나타냈다. TWICE 단독은 둘 다 CD28 또는 4-1BB에 결합되지 않았다.
실시예 12. CTLA -4/PD-L1 TWICE
도 13은 각각 체크포인트 분자 CTLA-4 및 PD-L1에 결합하는 항체 이필리무맙 및 아테졸리주맙으로 구축된 TWICE의 예를 보여준다. 표 13에 나타낸 바와 같이, TWICE283은 이필루무맙의 VH와 아테졸리주맙의 VL을 함유하고, 상보적인 TWICE284는 아테졸리주맙의 VH와 이필루무맙의 VL을 함유한다. 이러한 TWICE는 코일드-코일 이량체화 도메인과 중쇄의 FXa 절단 부위로 설계되었다. 이러한 TWICE가 EpCAM/PD-L1 가교 ELISA에서 시험된 경우, TWICE 284는 PD-L1에 대한 상당한 결합을 나타냈지만 (도 13), 이 TWICE는 아테졸리주맙의 VH만 함유하고, 동족 아테졸리주맙 VL이 없다. 이 결과는 아테졸리주맙의 VH가 항원 결합을 매개하기에 충분함을 시사한다.
이 개념은 PD-L1과 복합체를 이루는 아테졸리주맙의 결정 구조 (Lee HT 등 Sci Rep 7: 5532-5532 (2017))가 항체의 VL이 항원과 유의한 접촉을 하지 않으므로 항원 결합을 위해 불필요하거나 대체될 수 있음을 보여준 사실과 일치한다. 따라서 아테졸리주맙은 파라토프 (즉, VH/VL 쌍)가 TWICE에서 분할될 때 VH 도메인에서 결합 특성을 유지한다는 사실로 인해, 적어도 이필리무맙과 결합하지 않은 TWICE의 구축에 적합하지 않은 항체의 예이다.
그러나, 도 9a-12b에 도시된 바와 같이, 이필리무맙, SP34, 테랄리주맙, 및 우렐루맙은 파라토프가 분할될 때 결합을 나타내지 않는 예시적인 항체이며, 따라서 이러한 항체는 TWICE의 구축에 적합하다.
실시예 13. TWICE에 의한 면역 세포 활성화
TWICE 작제물에 의한 T 세포의 방향 전환은 시험관내 T-세포 활성화 분석에서 시험되었다. 간단히 말하면, 결장직장암 세포 (HCT-15)를 96웰 플레이트에 5,000개 세포/웰의 밀도로 접종하고, 밤새 부착되도록 두었다. 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)는 10:1의 효과기-대-표적 비율로 첨가되었고, 세포는 TWICE 분자의 연속 희석물로 처리되었다. 일부 실험에서 TWICE 분자는 세포에 첨가하기 전에 FXa 프로테아제 (NEB # P8010L)로 절단하여 사전 활성화되었다.
T 세포 활성화를 정량화하기 위해, IFN감마 ELISA 키트 (Invitrogen 88-7316-88)를 사용하여 TWICE를 첨가하고 24시간 후 배지에서 분비된 인터페론 감마를 검출하였다. 표적 세포 사멸은 용해된 암세포 (CytoTox96, Promega)로부터 락트산 탈수소효소 (LDH)를 정량적으로 측정하는 세포독성 분석을 사용하여 처리를 시작하고 48시간 후에 결정되었다. 표적 세포 사멸은 도 14a-16에 표시된 용량-반응 곡선에서 특이적 용해 (%)로 표현되며, 이는 용해 완충액으로 용해된 세포와 비교된 LDH 방출 분율에 상응하며, 처리되지 않은 세포로부터의 배경 LDH 방출을 공제한다.
도 14a-14b는 이전에 가교 ELISA에서 시험된 TWICE277 및 TWICE278, 및 TWICE281 및 TWICE282를 사용한 세포 사멸 분석의 결과를 보여준다. 상기 기재된 바와 같이, 이러한 TWICE는 항-CD3엡실론 인게이징 항체 SP34 및 CTLA-4 항체 이필리무맙을 함유한다. TWICE277 및 TWICE278은 FXa 절단 서열 Ile-Glu-Gly-Arg를 함유하는 링커 GGGIEGRGGG (서열 번호: 206)를 통해 VH 또는 VL에 부착된 헤테로-Fc 이량체화 도메인으로 구축된다. 대조적으로, TWICE281 및 TWICE282는 중쇄 및 경쇄에 동일하지 않은 링커가 있는 코일드-코일 이량체화 도메인을 함유한다 (도 14a). 이러한 TWICE는 중쇄 링커 GGGGSIEGRGGGGS (서열 번호: 203)의 FXa 절단 부위 및 경쇄 링커 GGPLGVRGKGGGS (서열 번호: 204)의 MMP2 절단 부위로 구축된다. 이 실험의 LDH 방출 데이터 (도 14b)는 TWICE가 세포에 첨가되기 전에 FXa에 의해 사전 활성화되었을 때 두 TWICE 쌍 모두가 PBMC에 의한 암세포의 강력한 사멸을 유도했음을 입증하였다. TWICE277 및 TWICE278은 사전 절단 없이 이러한 사멸 반응을 유도하지 않았으며, 이는 절단이 TWICE 활성화 및 도메인 스왑에 필요하다는 것을 확인하며, 이러한 분자를 사용한 가교 ELISA 실험에서 얻은 데이터와 일치한다 (도 9b-9c). 그러나, 가교 ELISA(도 10a-10b)에서 FXa에 의한 활성화가 또한 필요한 TWICE281 및 TWICE282는 TWICE가 사전 활성화되지 않은 경우에도 용량 의존적 방식으로 PBMC에 의한 HCT15 세포의 사멸을 쉽게 유도하였다.
이러한 결과는 경쇄 링커에서 MMP2 부위를 절단할 수 있는 암세포에 의해 TWICE 분자가 활성화될 수 있음을 보여준다. 이 실험은 모두 다음과 같은 점을 확인하였다: (1) TWICE는 암세포를 사멸시키기 위해 면역 세포와 효율적으로 인게이징할 수 있고; (2) 단백질 분해 절단은 TWICE 활성화에 필요하며, (3) 암세포에 의해 생성된 프로테아제는 TWICE 분자를 활성화할 수 있다.
도 15a-15d는 항-CD3엡실론 인게이징 항체 SP34 및 CTLA-4 항체 이필리무맙을 또한 함유하는, TWICE 285 및 TWICE286을 사용한 절단 분석 (도 15a), T 세포 활성화 분석 (도 15b) 및 사멸 분석 (도 15c-15d)의 결과를 보여준다. TWICE의 이러한 예는 중쇄 및 경쇄 모두에서 이량체화 도메인 링커 GGGGSIEGRGGSGGGS (서열 번호: 205)의 FXa 절단 부위로 설계되고, 이는 상기 도 14a-14b에 나타낸 예의 링커보다 더 길다. 이러한 TWICE의 예는 코일드-코일 이량체화 도메인도 함유한다.
TWICE285가 FXa로 절단될 때, 분자는 SDS-PAGE (도 15a)에서 예상 단편을 생성하였으며, 이는 TWICE가 FXa로 사전 활성화될 수 있음을 보여준다. 도 15b 및 도 15c에 표시된 사이토카인 방출 및 사멸 데이터는 TWICE가 FXa 프로테아제로의 절단에 의해 활성화될 때 TWICE 분자 TWICE285와 TWICE286이 PBMC와 인게이징되고 PBMC를 HCT-15 세포로 방향 전환시킬 수 있음을 입증했다. TWICE285 또는 TWICE286 단독으로는 T 세포에 의한 인터페론 감마의 방출 또는 암세포의 사멸을 유도하지 않았다.
그러나, LDH 방출 실험에서 이러한 TWICE를 사전 절단 없이 함께 시험한 경우, 분자는 FXa에 의한 사전 활성화와 상관없이 암세포 용해를 유도했다 (도 15d). 이 결과는 가교 ELISA 및 T 세포 활성화 분석에서 활성화를 위해 절단이 필요한 상기 기재된 TWICE 예와 대조적이다. 따라서 데이터는 이량체화 도메인 및 링커 길이의 설계가 TWICE 활성화와 관련이 있음을 입증한다. TWICE285 및 TWICE286의 더 긴 특정 링커 GGGGSIEGRGGSGGGS (서열 번호: 205)는 이러한 작제물에 존재하는 코일드-코일 이량체화 도메인과 함께 절단 없이 도메인 스왑을 방지하지 못할 수 있다.
실시예 14. 공동 자극 TWICE
다음으로, 표 13에 나타낸 바와 같이 CD3 및 CD28과 인게이징하는 TWICE394 및 TWICE395를 T 세포 방향 전환 분석에서 시험하였다 (도 16). 상기 기재된 바와 같이, 이러한 TWICE는 항-CD28 항체 테랄리주맙 및 항-CD3 엡실론 항체 SP34로부터 구축된다. 따라서 이러한 분자는 도 11a-11b에 나타낸 바와 같이 CD3 및 CD28에 결합할 수 있으며, 이는 T 세포 활성화를 유발하는 공동 자극 신호를 제공한다. 이러한 TWICE가 T 세포 사멸 분석에서 시험되었을 때, TWICE394 및 TWICE395는 FXa로 사전 활성화한 후 HCT-15 암세포의 강력한 사멸을 유도했지만, 사전 절단 없이는 활성을 나타내지 않았다.
TWICE에 의한 CD28 및 CD3의 인게이지먼트(engagement)로부터 자극 신호를 시험하기 위해, TWICE 활성을 시험하기 전 T 세포를 고갈시키는 프로토콜을 전개하였다. T-세포 활성화 및 고갈을 위해, 전립선암 세포 (PC-3)를 6웰 플레이트에 150,000개 세포/웰의 밀도로 접종하고, 밤새 부착되도록 두었다. 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 10:1의 효과기-대-표적 비율로 첨가하고, 세포를 100 nM의 농도에서 US10035856B2의 서열 번호: 168 및 169에 기초한 2-성분 T 세포 인게이저로 처리하였다. 이 2-성분 시스템은 T 세포가 암세포를 사멸시키는 데 관여한다는 점에서 CD3 이중특이적 항체와 유사하게 작동한다. 그러나 이는 분자가 용액에서 CD3에 결합할 수 없으므로 PBMC를 세척하여 쉽게 제거될 수 있기 때문에 사전 활성화를 위한 종래의 이중특이적 항체보다 이점이 있다. PBMC는 유세포 분석에 의한 사전 활성화 후 48시간 후에 분석되었고, 처리 결과 사전 활성화 및 고갈을 입증하는 CD3+ 세포 상의 활성화 및 고갈 마커의 강력한 상향 조절이 유도됐음을 보여주었다 (도 17a). 이러한 사전 활성화된 면역 세포는 자극되지 않은 PBMC보다 종양 미세환경에서 면역 세포를 더 많이 반영할 수 있는데, 그 이유는 종양-침윤 림프구가 고갈되고, 고갈 마커의 발현 증가를 보이는 것으로 알려져 있기 때문이다 (Baitsch L 등 Trends Immunol . 33(7):364-72 (2012)).
사전-활성화된 PBMC는 이후에 T 세포 활성화를 유발하는 TWICE 분자의 효능을 시험하기 위해 상기 기재된 바와 같이 결장직장암 세포 (HCT-15)에 대한 방향 전환 분석에 사용되었는데, 단, 효과기 대 표적 비율은 이 분석에서 1:4로 변경되었다. 도 17b는 이 T 세포 활성화 분석의 결과를 보여준다. CD3 및 CD28에 결합하는 TWICE394 및 TWICE395는 IFN 감마 분비에 의해 측정된 바와 같이 고갈된 T 세포의 강력한 활성화를 유도했다. CD3 및 CTLA-4에 결합하는 TWICE277 및 TWICE278도 TWICE394 및 TWICE395보다 낮은 수준이지만 IFN감마 분비를 유도했다. 비기능적 VH 및 VL 도메인 (서열 번호: 199 및 200)과 쌍을 이루는 CD3 항체 VH 및 VL 도메인을 함유하는 한 쌍의 대조군 TWICE도 이 분석에 포함되었다. 대조군 TWICE431과 TWICE432는 고갈된 T 세포를 사용한 이 방향 전환 실험에서 낮은 수준의 인터페론 감마를 생성했다. 종합하면, 이러한 결과는 삼중특이적 항체에 의한 CD3와 함께 CD28의 공동 자극 활성화를 보여주었으며, 어느 자극 단독에 비해 우수한 T 세포 활성화를 생성하고, 더 강력한 항종양 면역 반응에 달할 수 있는 최근 간행물과 일치한다 (Wu, L., Seung, E., Xu, L. 등 Trispecific antibodies enhance the therapeutic efficacy of tumor-directed T cells through T cell receptor co-stimulation. Nat Cancer (published online November 18, 2019) doi:10.1038/s43018-019-0004-z). 이 관찰과 일치하게, 본 데이터는 TWICE가 고갈된 T 세포를 강력하게 자극할 수 있으며, 공동 자극 또는 체크포인트 차단의 상가 효과가 CD3 인게이지먼트 단독보다 더 강한 반응을 유도할 수 있음을 시사한다. 그러나 공개된 삼중특이적 항체와 달리, TWICE는 활성화 가능한 방식으로 이러한 공동 자극 신호를 전달할 수 있다.
실시예 15. CD16A를 통한 TWICE 인게이징 NK 세포
또 다른 예에서, TWICE는 CD16A에 대한 항체를 사용하여 자연 살해 (NK) 세포와 인게이징하도록 조작되었다. 이러한 TWICE 분자를 구축하는 데 사용된 항-CD16A 항체는 CD30 및 CD16A를 표적화하는 이중특이적 항체인 AFM13 분자에 대한 임상시험 (NCT01221571)에서 평가되었다. TWICE 쌍에서 이 항체를 평가하기 위해 항-CD16A 항체를 항-CD3 항체 OKT3과 조합하여 헤테로-Fc 이량체화 도메인 및 이량체화 도메인 링커에서 FXa 절단 부위를 포함하는 TWICE 분자 TWICE440 및 TWICE441을 생성했다.
TWICE 분자는 상기 기재된 가교 ELISA 실험과 유사한 CD16A 가교 ELISA에서 먼저 시험되었다. TWICE440 및 TWICE441은 두 TWICE가 모두 존재하고 FXa 프로테아제로 사전 활성화된 경우에만 CD16A에 대한 예상 결합을 나타냈다 (도 18a). 다른 TWICE 분자에서 볼 수 있듯이, TWICE의 사전 절단이 필요했으며, 절단되지 않은 TWICE는 이 가교 ELISA 분석에서 CD16A에 대한 결합을 나타내지 않았다. 또한, 개별 TWICE 분자는 FXa에 의해 사전 절단되었을 때에도 CD16A에 대한 결합을 나타내지 않았다. 따라서 AFM13에서 유래한 항-CD16A 항체는 분할 파라토프 (즉, VH 및 VL)의 절반이 TWICE에서 분리될 때 항원에 결합하지 않기 때문에 TWICE에서 사용하기에 적합하다.
TWICE440 및 TWICE441은 이후 HCT15 결장암 세포 및 NK 세포를 사용하는 방향 전환 분석에서 시험되었다. 상기 기재된 PBMC로 수행된 방향 전환 분석에 대해 상기에서 설명된 바와 같이, 암세포를 96웰 플레이트에 5000개 세포/웰로 접종하고, 밤새 부착되도록 두었다. 다음으로, 정제된 NK 세포 (Stem Cell Technologies, Cat#70036)를 20:1의 효과기-대-표적 비율로 암세포에 첨가하고, 사전 활성화된 TWICE를 다양한 농도로 웰에 첨가하였다. 표적 세포 사멸은 용해된 암세포로부터 LDH를 정량적으로 측정하는 세포독성 분석 (CytoTox96, Promega)을 사용하여 TWICE 첨가 후 24시간 후에 LDH 방출을 측정하여 결정되었다. 이 NK 세포 방향 전환 분석의 결과는 도 18b에 도시되어 있다. 이 실험에서 EpCAM 및 CD16a (CTRL406)를 표적화하는 대조군 이중특이적 항체는 NK 세포에 의한 사멸을 나타내는 암세포로부터 LDH의 방출을 유도하였다.
EpCAM 및 CD3를 표적화하는 대조군 이중특이적 항체는 또한, 가능하게는 일부 NKT 세포의 존재로 인해 CD16a/EpCAM 이중특이적 항체보다 적은 정도로 LDH 방출을 유도하였다. TWICE440 및 TWICE441은 CD16a/EpCAM 이중특이적 항체로 관찰된 사멸량과 유사한 강력한 NK 방향 전환 및 암세포 사멸을 유도하였고, 이는 TWICE 분자가 CD16a 항체를 통해 NK 세포와 인게이징하도록 조작될 수 있음을 입증한다. 항-CD16 항체를 통한 NK 세포의 인게이지먼트는 암세포 사멸을 유도할 수 있다.
등가물
전술한 명세서는 당업자가 구현예를 실시할 수 있도록 충분한 것으로 간주된다. 전술한 설명 및 실시예는 특정 구현예를 상세히 설명하고, 본 발명자들에 의해 고려되는 최상의 모드를 설명한다. 그러나 전술한 내용이 텍스트에 아무리 상세하게 나타나더라도, 구현예는 다양한 방식으로 실행될 수 있으며, 첨부된 청구범위 및 그와 동등한 임의의 등가물에 따라 해석되어야 한다는 것을 이해할 것이다.
본원에 사용된 용어 약은, 명시적으로 표시되었는지 여부에 관계없이, 예를 들어, 정수, 분수 및 백분율을 포함하는 수치 값을 지칭한다. 용어 약은 일반적으로 당업자가 열거된 값과 동등하다고 (예를 들어, 동일한 기능 또는 결과를 가짐) 간주 할 수치 값의 범위 (예를 들어, 열거된 범위의 +/-5-10%)를 지칭한다. 적어도 및 약과 같은 용어가 수치 값 또는 범위 목록 앞에 오면, 해당 용어는 목록에 제공된 모든 값 또는 범위를 수식한다. 일부 예에서, 약이라는 용어는 가장 가까운 유효 숫자로 반올림된 수치 값을 포함할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> REVITOPE LIMITED <120> TWIN IMMUNE CELL ENGAGER <130> 01131-0023-00PCT <150> US 62/780,770 <151> 2018-12-17 <160> 215 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 1 Lys Pro Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 2 Asp Pro Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 3 Lys Pro Met Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 4 Leu Pro Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 5 Leu Pro Met Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 6 Lys Pro Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 7 Tyr Pro Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 8 Lys Trp Ala Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 9 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 9 Asp Pro Met Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 10 Asp Pro Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 11 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 11 Asp Pro Met Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 12 Lys Met Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 13 Lys Met Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 14 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 14 Lys Pro Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 15 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 15 Leu Pro Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 16 Leu Pro Met Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 17 Leu Met Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 18 Leu Met Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 19 Leu Pro Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 20 Leu Pro Ala Met Phe Phe Tyr Met 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 21 Lys Pro Met Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 22 Lys Pro Ala Lys Phe Phe Tyr Met 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 23 Lys Pro Ala Lys Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 24 Ile Pro Met Lys Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 25 Ile Pro Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 26 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 26 Ile Pro Met Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 27 Ile Met Ala Met Phe Phe Arg Leu 1 5 <210> 28 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 28 Ile Met Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 29 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 29 Ile Pro Ala Met Phe Phe Ile Met 1 5 <210> 30 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM28 cleavage site <400> 30 Ile Pro Ala Met Phe Phe Tyr Met 1 5 <210> 31 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 31 Phe Arg 1 <210> 32 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 32 Phe Lys 1 <210> 33 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 33 Val Ala 1 <210> 34 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 34 Val Arg 1 <210> 35 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is citrulline <400> 35 Val Xaa 1 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 36 His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu 1 5 <210> 37 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 37 Ser Leu Leu Lys Ser Arg Met Val Pro Asn Phe Asn 1 5 10 <210> 38 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 38 Ser Leu Leu Ile Ala Arg Arg Met Pro Asn Phe Asn 1 5 10 <210> 39 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 39 Lys Lys Phe Ala 1 <210> 40 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 40 Ala Phe Lys Lys 1 <210> 41 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin B cleavage site <400> 41 Gln Gln Gln 1 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin D cleavage site <400> 42 Pro Arg Ser Phe Phe Arg Leu Gly Lys 1 5 <210> 43 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin D cleavage site <400> 43 Ser Gly Val Val Ile Ala Thr Val Ile Val Ile Thr 1 5 10 <210> 44 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cathepsin K cleavage site <400> 44 Gly Gly Pro 1 <210> 45 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP1 cleavage site <400> 45 Ser Leu Gly Pro Gln Gly Ile Trp Gly Gln Phe Asn 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP2 cleavage site <400> 46 Ala Ile Pro Val Ser Leu Arg 1 5 <210> 47 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP2 cleavage site <400> 47 Ser Leu Pro Leu Gly Leu Trp Ala Pro Asn Phe Asn 1 5 10 <210> 48 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP2 cleavage site <400> 48 His Pro Val Gly Leu Leu Ala Arg 1 5 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP2 cleavage site <400> 49 Gly Pro Leu Gly Val Arg Gly Lys 1 5 <210> 50 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP2 cleavage site <400> 50 Gly Pro Leu Gly Leu Trp Ala Gln 1 5 <210> 51 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP3 cleavage site <400> 51 Ser Thr Ala Val Ile Val Ser Ala 1 5 <210> 52 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP7 cleavage site <400> 52 Gly Pro Leu Gly Leu Ala Arg Lys 1 5 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP7 cleavage site <400> 53 Arg Pro Leu Ala Leu Trp Arg Ser 1 5 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP7 cleavage site <400> 54 Ser Leu Arg Pro Leu Ala Leu Trp Arg Ser Phe Asn 1 5 10 <210> 55 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP2/9 cleavage site <400> 55 Gly Ile Leu Gly Val Pro 1 5 <210> 56 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP2/9 cleavage site <400> 56 Gly Pro Leu Gly Ile Ala Gly Gln 1 5 <210> 57 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP9 cleavage site <400> 57 Ala Val Arg Trp Leu Leu Thr Ala 1 5 <210> 58 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP9 cleavage site <400> 58 Pro Leu Gly Leu Tyr Ala Leu 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP9 cleavage site <400> 59 Gly Pro Gln Gly Ile Ala Gly Gln Arg 1 5 <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP9 cleavage site <400> 60 Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg 1 5 <210> 61 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP11 cleavage site <400> 61 Ala Ala Ala Thr Ser Ile Ala Met 1 5 <210> 62 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP11 cleavage site <400> 62 Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu 1 5 <210> 63 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP13 cleavage site <400> 63 Gly Pro Gln Gly Leu Ala Gly Gln Arg Gly Ile Val 1 5 10 <210> 64 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP14 cleavage site <400> 64 Pro Arg His Leu Arg 1 5 <210> 65 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP14 cleavage site <400> 65 Pro Gln Gly Leu Leu Gly Ala Pro Gly Ile Leu Gly 1 5 10 <210> 66 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP14 cleavage site <400> 66 Pro Arg Ser Ala Lys Glu Leu Arg 1 5 <210> 67 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PSA / KLK3 <400> 67 His Ser Ser Lys Leu Gln 1 5 <210> 68 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PSA / KLK3 <400> 68 Ser Ser Lys Leu Gln 1 5 <210> 69 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KLK4 <400> 69 Arg Gln Gln Arg 1 <210> 70 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TMPRSS2 <400> 70 Gly Gly Arg 1 <210> 71 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Legumain <400> 71 Ala Ala Asn 1 <210> 72 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ST14 (Matriptase) <400> 72 Gln Ala Arg 1 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C1s cleavage site <400> 73 Tyr Leu Gly Arg Ser Tyr Lys Val 1 5 <210> 74 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C1s cleavage site <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 74 Met Gln Leu Gly Arg Xaa 1 5 <210> 75 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MASP2 cleavage site <400> 75 Ser Leu Gly Arg Lys Ile Gln Ile 1 5 <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C2a and Bb cleavage site <400> 76 Gly Leu Ala Arg Ser Asn Leu Asp Glu 1 5 <210> 77 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> uPa cleavage site <400> 77 Thr Tyr Ser Arg Ser Arg Tyr Leu 1 5 <210> 78 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> uPa cleavage site <400> 78 Lys Lys Ser Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Ser Val 1 5 10 <210> 79 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> uPa cleavage site <400> 79 Asn Ser Gly Arg Ala Val Thr Tyr 1 5 <210> 80 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> uPa cleavage site <400> 80 Ala Phe Lys 1 <210> 81 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tissue-type plasminogen activator (tPA) <400> 81 Gly Gly Ser Gly Gln Arg Gly Arg Lys Ala Leu Glu 1 5 10 <210> 82 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM10 <400> 82 Pro Arg Tyr Glu Ala Tyr Lys Met Gly Lys 1 5 10 <210> 83 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM12 <400> 83 Leu Ala Gln Ala Phe 1 5 <210> 84 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ADAM17 <400> 84 Glu His Ala Asp Leu Leu Ala Val Val Ala Lys 1 5 10 <210> 85 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 85 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 86 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 86 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 87 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 87 Gly Ser 1 <210> 88 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 88 Gly Ser Gly Gly Ser 1 5 <210> 89 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 89 Gly Gly Ser Gly 1 <210> 90 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 90 Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 <210> 91 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 91 Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 <210> 92 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 92 Gly Ser Gly Gly Gly 1 5 <210> 93 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 93 Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 <210> 94 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> flexible amino acid linker (may be presented in repeating fashion) <400> 94 Gly Ser Ser Ser Gly 1 5 <210> 95 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer (tight binder with Kd=2.4 nM) <400> 95 ugccgcuaua augcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 96 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 96 uggcgcuaaa uagcacggaa auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 97 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 97 ugcuaguaua ucgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 98 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 98 ugccgccaua ucacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 99 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 99 uuccgcugua uaacacggac uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 100 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 100 ugucgcucua uugcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 101 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 101 ugcugcuuua ucccacauau uuuuuccccu cauaacaaua uuucuccccc c 51 <210> 102 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (45)..(45) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (47)..(47) <223> n is a, c, g, or u <400> 102 ugcngcuaua ucgcncguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucnangcc g 51 <210> 103 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 103 ugcaaagaaa acgcacguau uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 104 <211> 53 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 104 ugcaucacua ucgaaccuau uuaauccacc aaaauaauug caaguccaua cuc 53 <210> 105 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (5)..(6) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (17)..(17) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (48)..(48) <223> n is a, c, g, or u <400> 105 ugccnnaaua acacacnuau auaaucgccg uacaaaauca ugucaaancc g 51 <210> 106 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 106 ugcagcugua uugcacguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 107 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 107 uuccgauaau cccgcguacu aaaucaccau agucaacaau uuccaaccuc 50 <210> 108 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 108 uccacuauau cacacguauu uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50 <210> 109 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 109 ucccucaacc ucgcuacuau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc u 51 <210> 110 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 110 ugccgcuaua ucacacgaau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 111 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 111 agccccuaga acacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 112 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 112 ugccaauaua uaacacggaa uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 113 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 113 ugccgcuaua gcgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 114 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 114 ugcagauaua ugucacucau uaauccccgu auaaaaacau aacuaagcuc 50 <210> 115 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 115 uguagcugua uugcacacau uaaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 116 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 116 uaccaauaua ucgccacaca uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50 <210> 117 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 117 ugccgcuaug cccacggaau uuaaucgccg uagaaaaaca ugucaaaguc g 51 <210> 118 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 118 ugccgcuauu uagcacggau uaaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 119 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (45)..(45) <223> n is a, c, g, or u <400> 119 ugccgcuauu uagcacggau uaaaucgccg uagaaaagca ugucnaagcc g 51 <210> 120 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (41)..(41) <223> n is a, c, g, or u <400> 120 uguaguaaua ugacacggau uuaaucgccg uagaaaagca ngucaaagcc u 51 <210> 121 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 121 ugucgccauu acgcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 122 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 122 ugcccccaaa cuacacaaau uuaaucgccg uauaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 123 <211> 49 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 123 ugcacuaucu cacacguacu aaucgccgua uaaaagcaug ucaaagccg 49 <210> 124 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 124 ugucgcaaua auacacuaau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 125 <211> 49 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 125 ugcaacaaua uagcacguau uuaaucgccg uaguaaagca ugucaaagg 49 <210> 126 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 126 cuaccacaaa ucccacauau uuaaucuccc aaucaaaucu uguccauucc c 51 <210> 127 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 127 ugcccuaaac ucacacggau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 128 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 128 uugucguaug ucacacguau uaaaucgccg uauaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 129 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 129 uuccgcuaua acacacggag aaaaucgccg uaguaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 130 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 130 ugccgauaua acgcacggau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 131 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 131 ugccauuaua cagcacggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 132 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 132 uccagaaaua ugcacacauu uaaucgccgu agaaaagcau gucaaagccg 50 <210> 133 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 133 uccgcuaaac aacacggaua caaucgccgu agaaaagcau guccaagccg 50 <210> 134 <211> 49 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (46)..(48) <223> n is a, c, g, or u <400> 134 ugcacuaucu cacacguacu aaucgccgua uaaaagcaug ucaaannng 49 <210> 135 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (8)..(10) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (21)..(21) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (45)..(45) <223> n is a, c, g, or u <400> 135 aungcnannn uacacguauu naaucgccgu agaaaagcau gucanagccg 50 <210> 136 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 136 ugcugcuaua uugcaauuuu uuaaacuaag uagaaaacca uguacaaguc g 51 <210> 137 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 137 ugucgccaua uugcacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 138 <211> 52 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 138 ugccguuaua acccacggaa uuuaaccucc guagaaaagc augucaaagc cg 52 <210> 139 <211> 52 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (40)..(40) <223> n is a, c, g, or u <400> 139 ugugaauaua uaucacggau uuaaucgccg uauaaaagcn augucaaagc cg 52 <210> 140 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (10)..(11) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (13)..(13) <223> n is a, c, g, or u <400> 140 ugccgauaun nancacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 141 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 141 ugucacuaaa uugcacguau auaaucgccg uaguaagcau gucaaagccg 50 <210> 142 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 142 ugcaaccaua aagcacguaa uaaaucgccg uauauaagca ugucaaagcc g 51 <210> 143 <211> 50 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 143 ugccgcuaua uagcacguau uaaucgccgu aguaaagcau gucaaagccg 50 <210> 144 <211> 52 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 144 ugccgcuaua gcacacggaa uuuaaucgcc guaguaaagc augucaaagc cg 52 <210> 145 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (15)..(15) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (45)..(45) <223> n is a, c, g, or u <400> 145 ugcagguaua uaacncggau uuaaucgccg uagaaaagca ugucnaagcc g 51 <210> 146 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 146 ugcuccuaua acacacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 147 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 147 ugcccguaau ugcacggauu uaaucgccgu agaaaagcau guccaagccg g 51 <210> 148 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <220> <221> misc_feature <222> (12)..(12) <223> n is a, c, g, or u <220> <221> misc_feature <222> (44)..(44) <223> n is a, c, g, or u <400> 148 acucccuaua ungcaacuac auaaucgccg uaaauaagca uguncaagcc g 51 <210> 149 <211> 54 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 149 ugaagcuaga ucacacuaaa uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaaaaa gccg 54 <210> 150 <211> 52 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 150 ugacucuuua ucccccguac auuauucacc gaaccaaagc auuaccaucc cc 52 <210> 151 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 151 ugacgcccua acacacguau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 152 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 152 ugucgcaaaa uagcacguau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 153 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 153 ugaguguaua auucacguau uuaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 154 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 154 ugcuacuaua ucguagguaa cuaaucgccc uacaaacuca cucuaaaacc g 51 <210> 155 <211> 53 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 155 uuacgcuaua ucacacggaa uuuuaaucgc cguagaaaag cauguccaag ccg 53 <210> 156 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 156 cccaucugua cuacaggaau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 157 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 157 ugcccauaaa uagcacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 158 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 158 ugccgcaaua acauacacau auaaucgccg uagaaaagca ugucaaagcc g 51 <210> 159 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 159 ugcaacuaua ucgcacguau guaaucgccg uagaaaaagc augucaaagc c 51 <210> 160 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 160 uuccgcuaua uagcacggaa uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 161 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 161 uuccgcuaag ucacacgaaa uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 162 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 162 uguagcaaua ucacacguaa uuaaucgccg uauauaagca ugucaaagcc g 51 <210> 163 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 163 ugccguuaua uaucacggau uuaaucgccg uagaaaagca uguccaagcc g 51 <210> 164 <211> 49 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EGFR aptamer <400> 164 uaacacauau aucaaguaac uuaucuccuu aguaaccauc uccaagccg 49 <210> 165 <211> 416 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, SP34 VH, FXa, basic coil <400> 165 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met 260 265 270 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg 275 280 285 Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 290 295 300 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 305 310 315 320 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 325 330 335 Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 340 345 350 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 355 360 365 Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ser Lys Asn Ala Gln Cys Lys Lys 370 375 380 Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu 385 390 395 400 Gln Ala Leu Lys Lys Lys Leu Ala Gln Gly His His His His His His 405 410 415 <210> 166 <211> 387 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> REPLACE <400> 166 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Pro Leu Gly Val Arg Gly Lys Gly 340 345 350 Gly Gly Ser Glu Asn Ala Gln Cys Glu Lys Glu Leu Gln Ala Leu Glu 355 360 365 Lys Glu Asn Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln Ala Leu Glu Lys Glu 370 375 380 Leu Ala Gln 385 <210> 167 <211> 475 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, SP34 VH, FXa, IgE CH2 <400> 167 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met 260 265 270 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg 275 280 285 Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 290 295 300 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 305 310 315 320 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 325 330 335 Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 340 345 350 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ile Glu Gly Arg 355 360 365 Gly Pro Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly 370 375 380 His Phe Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr 385 390 395 400 Pro Gly Thr Ile Gln Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp 405 410 415 Val Asp Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser 420 425 430 Thr Gln Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg 435 440 445 Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser 450 455 460 Thr Lys Lys Cys Ala His His His His His His 465 470 475 <210> 168 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Atezolizumab VL, FXa, IgE CH2 <400> 168 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Pro Pro 340 345 350 Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro 355 360 365 Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr 370 375 380 Ile Gln Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu 385 390 395 400 Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser 405 410 415 Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr 420 425 430 Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys 435 440 445 Cys Ala 450 <210> 169 <211> 477 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, SP34 VH, FXa, IgE CH2 <400> 169 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met 260 265 270 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg 275 280 285 Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 290 295 300 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 305 310 315 320 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 325 330 335 Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 340 345 350 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile Glu 355 360 365 Gly Arg Gly Pro Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly 370 375 380 Gly Gly His Phe Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly 385 390 395 400 Tyr Thr Pro Gly Thr Ile Gln Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val 405 410 415 Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu 420 425 430 Ala Ser Thr Gln Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser 435 440 445 Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu 450 455 460 Asp Ser Thr Lys Lys Cys Ala His His His His His His 465 470 475 <210> 170 <211> 578 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Atezolizumab VL, FXa, IgE CH2 <400> 170 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 340 345 350 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 355 360 365 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 370 375 380 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 385 390 395 400 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 405 410 415 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 420 425 430 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 435 440 445 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 450 455 460 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 465 470 475 480 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 485 490 495 Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 500 505 510 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 515 520 525 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 530 535 540 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 545 550 555 560 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 565 570 575 Pro Gly <210> 171 <211> 599 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, SP34 VH, FXa, Fc <400> 171 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met 260 265 270 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg 275 280 285 Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 290 295 300 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 305 310 315 320 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 325 330 335 Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 340 345 350 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile Glu 355 360 365 Gly Arg Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 370 375 380 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 385 390 395 400 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 405 410 415 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 420 425 430 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 435 440 445 Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 450 455 460 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 465 470 475 480 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 485 490 495 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 500 505 510 Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 515 520 525 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 530 535 540 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 545 550 555 560 Ser Leu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 565 570 575 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 580 585 590 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 595 <210> 172 <211> 578 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Atezolizumab VL, FXa, Fc <400> 172 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 340 345 350 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 355 360 365 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 370 375 380 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 385 390 395 400 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 405 410 415 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 420 425 430 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 435 440 445 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 450 455 460 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 465 470 475 480 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 485 490 495 Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 500 505 510 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 515 520 525 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 530 535 540 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 545 550 555 560 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 565 570 575 Pro Gly <210> 173 <211> 601 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, SP34 VH, FXa, Fc <400> 173 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met 260 265 270 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg 275 280 285 Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 290 295 300 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 305 310 315 320 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 325 330 335 Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 340 345 350 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 355 360 365 Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 370 375 380 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 385 390 395 400 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 405 410 415 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 420 425 430 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 435 440 445 Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 450 455 460 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 465 470 475 480 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 485 490 495 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 500 505 510 Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 515 520 525 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 530 535 540 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 545 550 555 560 Leu Tyr Ser Leu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 565 570 575 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 580 585 590 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 595 600 <210> 174 <211> 580 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Atezolizumab VL, FXa, Fc <400> 174 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly 340 345 350 Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 355 360 365 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 370 375 380 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 385 390 395 400 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 405 410 415 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser 420 425 430 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 435 440 445 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 450 455 460 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 465 470 475 480 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 485 490 495 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 500 505 510 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 515 520 525 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu 530 535 540 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 545 550 555 560 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 565 570 575 Leu Ser Pro Gly 580 <210> 175 <211> 418 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, SP34 VH, FXa, basic coil <400> 175 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met 260 265 270 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg 275 280 285 Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 290 295 300 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 305 310 315 320 Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 325 330 335 Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr 340 345 350 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 355 360 365 Ile Glu Gly Arg Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Lys Asn Ala Gln Cys 370 375 380 Lys Lys Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp 385 390 395 400 Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Leu Ala Gln Gly His His His His 405 410 415 His His <210> 176 <211> 390 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Atezolizumab VL, FXa, acid coil <400> 176 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly 340 345 350 Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Asn Ala Gln Cys Glu Lys Glu Leu Gln 355 360 365 Ala Leu Glu Lys Glu Asn Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln Ala Leu 370 375 380 Glu Lys Glu Leu Ala Gln 385 390 <210> 177 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, SP34 VH, FXa, Ckappa <400> 177 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val 225 230 235 240 Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser 245 250 255 Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala Met Asn Trp Val 260 265 270 Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser 275 280 285 Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg 290 295 300 Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met 305 310 315 320 Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His 325 330 335 Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 340 345 350 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ile Glu Gly Arg Gly Pro Ser Val 355 360 365 Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 370 375 380 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 385 390 395 400 Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 405 410 415 Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 420 425 430 Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 435 440 445 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 450 455 460 Gly Glu Cys 465 <210> 178 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Atezolizumab VL, FXa, CH1, 6His <400> 178 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile 225 230 235 240 Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg 245 250 255 Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 260 265 270 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser 275 280 285 Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 290 295 300 Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp 305 310 315 320 Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe 325 330 335 Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly 340 345 350 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 355 360 365 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 370 375 380 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 385 390 395 400 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 405 410 415 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 420 425 430 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 435 440 445 Ser Cys His His His His His His 450 455 <210> 179 <211> 460 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Atezolizumab VH, FXa, Ckappa <400> 179 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val 225 230 235 240 Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser 245 250 255 Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His Trp Val 260 265 270 Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Trp Ile Ser Pro 275 280 285 Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 290 295 300 Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser 305 310 315 320 Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg His Trp 325 330 335 Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 340 345 350 Ser Ile Glu Gly Arg Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 355 360 365 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 370 375 380 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 385 390 395 400 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 405 410 415 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 420 425 430 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 435 440 445 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 450 455 460 <210> 180 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, SP34 VL, FXa, CH1, 6His <400> 180 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala 225 230 235 240 Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val 245 250 255 Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr 260 265 270 Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile 275 280 285 Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly 290 295 300 Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala 305 310 315 320 Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp 325 330 335 Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ile Glu Gly 340 345 350 Arg Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 355 360 365 Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 370 375 380 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 385 390 395 400 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 405 410 415 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 420 425 430 Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 435 440 445 Pro Lys Ser Cys His His His His His His 450 455 <210> 181 <211> 579 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Ipilimumab VL, FXa, Fc <400> 181 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu 245 250 255 Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr 260 265 270 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Phe 275 280 285 Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 290 295 300 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala 305 310 315 320 Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln 325 330 335 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly 340 345 350 Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 355 360 365 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 370 375 380 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 385 390 395 400 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 405 410 415 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr 420 425 430 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 435 440 445 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 450 455 460 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 465 470 475 480 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 485 490 495 Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 500 505 510 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 515 520 525 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 530 535 540 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 545 550 555 560 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 565 570 575 Ser Pro Gly <210> 182 <211> 592 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Ipilimumab VH, FXa, Fc <400> 182 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met 260 265 270 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Thr Phe 275 280 285 Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 290 295 300 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 305 310 315 320 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg 325 330 335 Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 340 345 350 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Asp Lys 355 360 365 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 370 375 380 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 385 390 395 400 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 405 410 415 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 420 425 430 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg Val 435 440 445 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 450 455 460 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 465 470 475 480 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 485 490 495 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr 500 505 510 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 515 520 525 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 530 535 540 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Leu Leu Thr Val Asp Lys 545 550 555 560 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 565 570 575 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 580 585 590 <210> 183 <211> 580 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, SP34 VL, FXa, Fc <400> 183 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 225 230 235 240 Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 245 250 255 Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 260 265 270 Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr 275 280 285 Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 290 295 300 Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu 305 310 315 320 Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly 325 330 335 Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly 340 345 350 Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 355 360 365 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 370 375 380 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 385 390 395 400 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 405 410 415 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser 420 425 430 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 435 440 445 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 450 455 460 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 465 470 475 480 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 485 490 495 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 500 505 510 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 515 520 525 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu 530 535 540 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 545 550 555 560 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 565 570 575 Leu Ser Pro Gly 580 <210> 184 <211> 388 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Ipilimumab VL, MMP2, acid coil <400> 184 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu 245 250 255 Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr 260 265 270 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Phe 275 280 285 Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 290 295 300 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala 305 310 315 320 Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln 325 330 335 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Pro Leu Gly Val Arg Gly Lys 340 345 350 Gly Gly Gly Ser Glu Asn Ala Gln Cys Glu Lys Glu Leu Gln Ala Leu 355 360 365 Glu Lys Glu Asn Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln Ala Leu Glu Lys 370 375 380 Glu Leu Ala Gln 385 <210> 185 <211> 409 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Ipilimuab VH, FXa, basic coil <400> 185 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met 260 265 270 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Thr Phe 275 280 285 Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 290 295 300 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 305 310 315 320 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg 325 330 335 Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 340 345 350 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 355 360 365 Gly Ser Lys Asn Ala Gln Cys Lys Lys Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys 370 375 380 Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Leu 385 390 395 400 Ala Gln Gly His His His His His His 405 <210> 186 <211> 389 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, SP34 VL, MMP2, acid coil <400> 186 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 225 230 235 240 Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 245 250 255 Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 260 265 270 Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr 275 280 285 Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 290 295 300 Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu 305 310 315 320 Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly 325 330 335 Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Pro Leu Gly Val Arg Gly 340 345 350 Lys Gly Gly Gly Ser Glu Asn Ala Gln Cys Glu Lys Glu Leu Gln Ala 355 360 365 Leu Glu Lys Glu Asn Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln Ala Leu Glu 370 375 380 Lys Glu Leu Ala Gln 385 <210> 187 <211> 409 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Atezolizumab VH, FXa, basic coil <400> 187 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile 260 265 270 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Trp 275 280 285 Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 290 295 300 Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln 305 310 315 320 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 325 330 335 Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 340 345 350 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 355 360 365 Gly Ser Lys Asn Ala Gln Cys Lys Lys Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys 370 375 380 Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Leu 385 390 395 400 Ala Gln Gly His His His His His His 405 <210> 188 <211> 391 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Ipilimumab VL, FXa, acid coil <400> 188 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu 245 250 255 Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr 260 265 270 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Phe 275 280 285 Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 290 295 300 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala 305 310 315 320 Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln 325 330 335 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg 340 345 350 Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Asn Ala Gln Cys Glu Lys Glu Leu 355 360 365 Gln Ala Leu Glu Lys Glu Asn Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln Ala 370 375 380 Leu Glu Lys Glu Leu Ala Gln 385 390 <210> 189 <211> 411 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Ipilimumab VH, FXa, basic coil <400> 189 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Thr Met 260 265 270 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Thr Phe 275 280 285 Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 290 295 300 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 305 310 315 320 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg 325 330 335 Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 340 345 350 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly Gly Ser 355 360 365 Gly Gly Gly Ser Lys Asn Ala Gln Cys Lys Lys Lys Leu Gln Ala Leu 370 375 380 Lys Lys Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys 385 390 395 400 Lys Leu Ala Gln Gly His His His His His His 405 410 <210> 190 <211> 392 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, SP34 VL, FXa, acid coil <400> 190 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 225 230 235 240 Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 245 250 255 Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 260 265 270 Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr 275 280 285 Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 290 295 300 Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu 305 310 315 320 Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly 325 330 335 Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly 340 345 350 Arg Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Asn Ala Gln Cys Glu Lys Glu 355 360 365 Leu Gln Ala Leu Glu Lys Glu Asn Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln 370 375 380 Ala Leu Glu Lys Glu Leu Ala Gln 385 390 <210> 191 <211> 490 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH 44Cys, Sp34 VH, FXa, Fc <400> 191 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Cys Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly 130 135 140 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr 145 150 155 160 Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175 Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala 180 185 190 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn 195 200 205 Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val 210 215 220 Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp 225 230 235 240 Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 245 250 255 Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 260 265 270 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 275 280 285 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 290 295 300 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 305 310 315 320 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 325 330 335 Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 340 345 350 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 355 360 365 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 370 375 380 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 385 390 395 400 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 405 410 415 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 420 425 430 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 435 440 445 Phe Leu Tyr Ser Leu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 450 455 460 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 465 470 475 480 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 <210> 192 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL 100 Cys, Ipilimumab VL, FXa, Fc <400> 192 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr 115 120 125 Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu 130 135 140 Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr 145 150 155 160 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Phe 165 170 175 Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 180 185 190 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala 195 200 205 Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln 210 215 220 Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly 225 230 235 240 Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr 305 310 315 320 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly 465 <210> 193 <211> 483 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH 44 Cys, Ipilimumab VH, FXa, Fc <400> 193 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Cys Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 115 120 125 Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly 130 135 140 Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser 145 150 155 160 Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 165 170 175 Val Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser 180 185 190 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 195 200 205 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr 210 215 220 Cys Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 225 230 235 240 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly 245 250 255 Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 260 265 270 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 275 280 285 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 290 295 300 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 305 310 315 320 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr 325 330 335 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 340 345 350 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 355 360 365 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 370 375 380 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 385 390 395 400 Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 405 410 415 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 420 425 430 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Leu Leu Thr 435 440 445 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 450 455 460 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 465 470 475 480 Ser Pro Gly <210> 194 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL 100 Cys, SP34 VL, FXa, Fc <400> 194 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 115 120 125 Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 130 135 140 Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ala Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 145 150 155 160 Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr 165 170 175 Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 180 185 190 Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu 195 200 205 Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly 210 215 220 Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly 225 230 235 240 Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly 465 <210> 195 <211> 411 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Theralizumab VH, FXa, Fc <400> 195 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile 260 265 270 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Trp 275 280 285 Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 290 295 300 Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln 305 310 315 320 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 325 330 335 Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 340 345 350 Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly Gly Ser 355 360 365 Gly Gly Gly Ser Lys Asn Ala Gln Cys Lys Lys Lys Leu Gln Ala Leu 370 375 380 Lys Lys Lys Asn Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys 385 390 395 400 Lys Leu Ala Gln Gly His His His His His His 405 410 <210> 196 <211> 578 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Theralizumab VL, FXa, Fc <400> 196 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp Leu Asn Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn 275 280 285 Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 340 345 350 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 355 360 365 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 370 375 380 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 385 390 395 400 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 405 410 415 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 420 425 430 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 435 440 445 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 450 455 460 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 465 470 475 480 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 485 490 495 Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 500 505 510 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 515 520 525 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 530 535 540 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 545 550 555 560 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 565 570 575 Pro Gly <210> 197 <211> 595 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Urelumab VH, FXa, Fc <400> 197 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 225 230 235 240 Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu Thr Leu 245 250 255 Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp 260 265 270 Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu 275 280 285 Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser Arg 290 295 300 Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu 305 310 315 320 Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp 325 330 335 Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly 340 345 350 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly 355 360 365 Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 370 375 380 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 385 390 395 400 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 405 410 415 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 420 425 430 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr 435 440 445 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 450 455 460 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 465 470 475 480 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 485 490 495 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 500 505 510 Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 515 520 525 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 530 535 540 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Leu Leu Thr 545 550 555 560 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 565 570 575 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 580 585 590 Ser Pro Gly 595 <210> 198 <211> 578 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Urelumab VL, FXa, Fc <400> 198 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 245 250 255 Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp Leu Asn Trp Tyr Gln 260 265 270 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Asn 275 280 285 Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 290 295 300 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 305 310 315 320 Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 325 330 335 Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 340 345 350 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 355 360 365 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 370 375 380 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 385 390 395 400 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 405 410 415 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 420 425 430 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 435 440 445 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 450 455 460 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 465 470 475 480 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 485 490 495 Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 500 505 510 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 515 520 525 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 530 535 540 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 545 550 555 560 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 565 570 575 Pro Gly <210> 199 <211> 580 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, Dummy VL, FXa, Fc <400> 199 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr 225 230 235 240 Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr 245 250 255 Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp 260 265 270 Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr 275 280 285 Asn Lys Arg Ala Pro Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu 290 295 300 Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu 305 310 315 320 Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Ala Val Phe Gly 325 330 335 Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly 340 345 350 Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 355 360 365 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 370 375 380 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 385 390 395 400 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 405 410 415 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser 420 425 430 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 435 440 445 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 450 455 460 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 465 470 475 480 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 485 490 495 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 500 505 510 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 515 520 525 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu 530 535 540 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 545 550 555 560 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 565 570 575 Leu Ser Pro Gly 580 <210> 200 <211> 600 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, Dummy VH, FXa, Fc <400> 200 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met 260 265 270 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg 275 280 285 Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp 290 295 300 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln 305 310 315 320 Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg 325 330 335 Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp 340 345 350 Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile 355 360 365 Glu Gly Arg Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 370 375 380 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 385 390 395 400 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 405 410 415 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 420 425 430 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 435 440 445 Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 450 455 460 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 465 470 475 480 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 485 490 495 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 500 505 510 Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 515 520 525 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 530 535 540 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 545 550 555 560 Tyr Ser Leu Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 565 570 575 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 580 585 590 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 595 600 <210> 201 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Basic coil <400> 201 Lys Asn Ala Gln Cys Lys Lys Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Asn 1 5 10 15 Ala Gln Leu Lys Trp Lys Leu Gln Ala Leu Lys Lys Lys Leu Ala Gln 20 25 30 <210> 202 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Acid coil <400> 202 Glu Asn Ala Gln Cys Glu Lys Glu Leu Gln Ala Leu Glu Lys Glu Asn 1 5 10 15 Ala Gln Leu Glu Trp Glu Leu Gln Ala Leu Glu Lys Glu Leu Ala Gln 20 25 30 <210> 203 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Leucine zipper sequence <400> 203 Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 204 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Leucine zipper sequence <400> 204 Gly Gly Pro Leu Gly Val Arg Gly Lys Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 205 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Leucine zipper sequence <400> 205 Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 206 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hetero Fc sequence <400> 206 Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 207 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hetero Fc sequence <400> 207 Gly Gly Gly Gly Ser Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 208 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 sequence <400> 208 Ile Glu Gly Arg Gly 1 5 <210> 209 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CL sequence <400> 209 Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly 1 5 <210> 210 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgE CH2 sequence <400> 210 Gly Ile Glu Gly Arg Gly 1 5 <210> 211 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgE CH2 sequence <400> 211 Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly 1 5 <210> 212 <211> 593 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, OKT3 VH, FXa, Fc <400> 212 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val 245 250 255 Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met 260 265 270 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr 275 280 285 Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 290 295 300 Arg Phe Thr Ile Thr Thr Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 305 310 315 320 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg 325 330 335 Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 340 345 350 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Asp 355 360 365 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 370 375 380 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 385 390 395 400 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 405 410 415 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 420 425 430 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg 435 440 445 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 450 455 460 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 465 470 475 480 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 485 490 495 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys Leu 500 505 510 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 515 520 525 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 530 535 540 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Leu Leu Thr Val Asp 545 550 555 560 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 565 570 575 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 580 585 590 Gly <210> 213 <211> 577 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, OKT3 VL, FXa, Fc <400> 213 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr 225 230 235 240 Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu 245 250 255 Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln 260 265 270 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val 275 280 285 Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 290 295 300 Tyr Ser Leu Thr Ile Asn Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr 305 310 315 320 Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr 325 330 335 Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Asp 340 345 350 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 355 360 365 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 370 375 380 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 385 390 395 400 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 405 410 415 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg 420 425 430 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 435 440 445 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 450 455 460 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 465 470 475 480 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 485 490 495 Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 500 505 510 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 515 520 525 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 530 535 540 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 545 550 555 560 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 565 570 575 Gly <210> 214 <211> 594 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VH-CH1, anti-CD16A VH, FXa, Fc <400> 214 Glu Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly 1 5 10 15 Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn 20 25 30 Tyr Trp Leu Gly Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Asp Ile Phe Pro Gly Ser Gly Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys 50 55 60 Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala 65 70 75 80 Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Leu Arg Asn Trp Asp Glu Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 225 230 235 240 Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu 245 250 255 Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met 260 265 270 His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile 275 280 285 Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly 290 295 300 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 305 310 315 320 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 325 330 335 Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 340 345 350 Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly 355 360 365 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 370 375 380 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 385 390 395 400 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 405 410 415 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 420 425 430 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr 435 440 445 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 450 455 460 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 465 470 475 480 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 485 490 495 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Lys 500 505 510 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 515 520 525 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 530 535 540 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Leu Leu Thr Val 545 550 555 560 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 565 570 575 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 580 585 590 Pro Gly <210> 215 <211> 577 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-EpCAM VL-CL, anti-CD16A VL, FXa, Fc <400> 215 Glu Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr 225 230 235 240 Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser 245 250 255 Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln 260 265 270 Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg 275 280 285 Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr 290 295 300 Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr 305 310 315 320 Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr 325 330 335 Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Ile Glu Gly Arg Gly Gly Gly Asp 340 345 350 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 355 360 365 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 370 375 380 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 385 390 395 400 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 405 410 415 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg 420 425 430 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 435 440 445 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 450 455 460 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 465 470 475 480 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 485 490 495 Thr Cys Leu Val Ser Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 500 505 510 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 515 520 525 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Lys Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 530 535 540 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 545 550 555 560 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 565 570 575 Gly

Claims (25)

  1. 다음을 포함하는 환자에서 암을 치료하기 위한 키트 또는 조성물:
    a. 다음을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제1 성분:
    i. 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 제1 표적화 모이어티;
    ii. 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제1 면역 세포 결합 도메인으로서, 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은 상기 제1 성분의 일부가 아니고, 상기 제1 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인 또는 VL 도메인인, 제1 면역 세포 결합 도메인; 및
    iii. 제2 상보적 결합 도메인에 결합할 때 상보적 항원에 결합할 수 있는 제1 상보적 결합 도메인으로서,
    (1) 상기 제2 상보적 결합 도메인은 상기 제1 성분의 일부가 아니고,
    (2) 상기 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인일 때, 상기 제1 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이고,
    (3) 상기 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인일 때, 상기 제1 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이고,
    (4) 여기서 상기 제1 상보적 결합 도메인은 상기 제1 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 상기 제1 면역 세포 결합 도메인이 상기 제1 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 상기 제1 면역 세포 결합 도메인은 상기 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는, 제1 상보적 결합 도메인; 및:
    b. 다음을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제2 성분:
    i. 제2 표적화 모이어티;
    ii. 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제2 면역 세포 결합 도메인으로서, 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은 상기 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL인 경우 VH이고, 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은 상기 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH인 경우 VL인 제2 면역 세포 결합 도메인; 및
    iii. 상기 제1 상보적 결합 도메인에 결합할 때 상보적 항원에 결합할 수 있는 제2 상보적 결합 도메인으로서,
    (1) 상기 제2 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인일 때, 상기 제2 상보적 결합 도메인은 VL 도메인이고,
    (2) 상기 제2 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인일 때, 상기 제2 상보적 결합 도메인은 VH 도메인이고,
    (3) 여기서 상기 제2 상보적 결합 도메인은 상기 제2 면역 세포 결합 도메인에 대한 결합 파트너이므로 상기 제2 면역 세포 결합 도메인이 상기 제2 상보적 도메인에 결합되지 않는 한 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은 상기 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않는, 제2 상보적 결합 도메인.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 면역 세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 상기 제1 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서:
    a. 상기 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 상기 제1 면역 세포 결합 도메인에 부착되고;
    b. 상기 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 상기 제1 상보적 결합 도메인에 부착되고;
    c. 상기 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커인, 키트 또는 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 제2 T-세포 결합 도메인은 제1 이량체화 도메인 및 제2 이량체화 도메인에 의해 상기 제2 상보적 결합 도메인에 결합되고, 여기서:
    a. 상기 제1 이량체화 도메인은 제1 링커에 의해 상기 제2 T-세포 결합 도메인에 부착되고;
    b. 상기 제2 이량체화 도메인은 제2 링커에 의해 상기 제2 상보적 결합 도메인에 부착되고;
    c. 상기 제1 및/또는 제2 링커는 절단 가능한 링커인, 키트 또는 조성물.
  4. 청구항 2에 있어서, 상기 제1 및 제2 링커는 절단 가능한 링커이고; 선택적으로 상기 제1 및/또는 제2 절단 가능한 링커의 프로테아제 절단 부위는 암 또는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 프로테아제에 의해 절단되는, 키트 또는 조성물.
  5. 청구항 2에 있어서, 상기 제1 및 제2 링커는 5개 내지 30개의 아미노산 길이인, 키트 또는 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 제1 및 제2 링커는 8개 내지 16개의 아미노산 길이인, 키트 또는 조성물.
  7. 청구항 2에 있어서, 상기 제1 및 제2 이량체화 도메인은 둘 다
    a. 류신 지퍼;
    b. 면역글로불린 도메인; 또는
    c. T-세포 수용체 (TCR) 도메인
    인, 키트 또는 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 제1 및 제2 이량체화 도메인은 둘 다 면역글로불린 도메인인, 키트 또는 조성물.
  9. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 상보적 결합 도메인 및 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 암에 결합할 수 있고; 선택적으로 상기 제1 상보적 결합 도메인 및 상기 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 면역 체크포인트 분자, RANK 또는 RANKL, 또는 세포-사멸-유도 항원에 결합할 수 있는, 키트 또는 조성물.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 상보적 결합 도메인 및 상기 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포, 대식세포, 또는 자연 살해 세포에 결합할 수 있는, 키트 또는 조성물.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 제1 상보적 결합 도메인 및 상기 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합할 수 있고; 선택적으로 상기 제1 상보적 결합 도메인 및 상기 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3, 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3), 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), CD28, CD137, OX40, CD27, GITR (TNFRSF18), TIGIT, 또는 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)에 결합할 수 있는, 키트 또는 조성물.
  12. 청구항 10에 있어서, 상기 제1 상보적 결합 도메인 및 상기 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 자연 살해 세포에 결합할 수 있고; 선택적으로 상기 제1 상보적 결합 도메인 및 상기 제2 상보적 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD16A에 결합할 수 있는, 키트 또는 조성물.
  13. 다음을 포함하는, 환자에서 암을 치료하기 위한 키트 또는 조성물:
    a. 다음을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제1 성분:
    i. 암에 의해 발현된 종양 항원에 결합하는 제1 표적화 모이어티;
    ii. 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합할 때 면역 세포 결합 활성이 가능한 제1 면역 세포 결합 도메인으로서, 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은 상기 제1 성분의 일부가 아니고, 상기 제1 면역 세포 결합 도메인은 VH 도메인 또는 VL 도메인인, 제1 면역 세포 결합 도메인;
    iii. 상기 제1 면역 세포 결합 도메인에 대한 제1 불활성 결합 파트너로서, 상기 제1 불활성 결합 파트너가 상기 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 상기 제1 면역 세포 결합 도메인은 상기 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 상기 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않고, 여기서 상기 제1 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인인 경우, 상기 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고, 상기 제1 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인인 경우, 상기 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인, 제1 불활성 결합 파트너;
    iv. 상기 제1 면역 세포 결합 도메인과 상기 제1 불활성 결합 파트너를 분리하는 프로테아제 절단 부위로서, 상기 프로테아제 절단 부위는 다음과 같은 프로테아제의 존재하에 상기 면역 세포 결합 도메인으로부터 상기 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있는, 프로테아제 절단 부위:
    (1) 암 또는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 프로테아제; 또는
    (2) (a) 암에 의해 발현되고 상기 작용제의 상기 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 종양 항원 또는 (b) 상기 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된 프로테아제; 및
    v. 면역 세포 결합이 가능한 제1 상보적 기능성 도메인, 및:
    b. 다음을 포함하는 표적화된 면역 세포 결합제를 포함하는 제2 성분:
    i. 제2 표적화 모이어티;
    ii. 제2 면역 세포 결합 도메인; 및
    iii. 선택적으로 면역 세포 결합이 가능한 제2 상보적 기능성 도메인.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 제2 성분은 상보적 기능성 도메인을 포함하고; 선택적으로 상기 제1 및/또는 제2 성분의 상보적 기능성 도메인은 수용체에 대한 리간드를 포함하고; 추가로 선택적으로 상기 상보적 기능성 도메인은 TGF-베타 계열의 구성원 또는 사이토카인의 잠재 형태를 포함하는, 키트 또는 조성물.
  15. 청구항 13항에 있어서, 상기 제2 성분은 상기 제2 면역 세포 결합 도메인에 대한 제2 불활성 결합 파트너로서, 상기 제2 불활성 결합 파트너는 상기 제2 면역 세포 결합 도메인에 결합하므로 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은 상기 불활성 결합 파트너가 제거되지 않는 한 상기 제1 면역 세포 결합 도메인에 결합하지 않고, 여기서 상기 제2 면역 세포 결합 도메인이 VH 도메인인 경우, 상기 불활성 결합 파트너는 VL 도메인이고, 상기 제2 면역 세포 결합 도메인이 VL 도메인인 경우, 상기 불활성 결합 파트너는 VH 도메인인, 제2 불활성 결합 파트너; 및 추가로
    상기 제2 면역 세포 결합 도메인과 상기 제2 불활성 결합 파트너를 분리하는 프로테아제 절단 부위로서, 상기 프로테아제 절단 부위는 다음과 같은 프로테아제의 존재하에 상기 면역 세포 결합 도메인으로부터 상기 불활성 결합 파트너를 방출할 수 있는, 프로테아제 절단 부위를 포함하는, 키트 또는 조성물:
    a. 암에 의해 발현된 프로테아제; 또는
    b. (a) 암에 의해 발현되고 상기 작용제의 상기 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티와 동일하거나 상이한 종양 항원 또는 (b) 종양 미세환경에서 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 표적화 모이어티에 의해 암에 공동 국재화된 프로테아제.
  16. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 면역 세포 결합 도메인 및 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포, 대식세포, 또는 자연 살해 세포에 결합할 수 있는, 키트 또는 조성물.
  17. 청구항 16에 있어서, 상기 제1 면역 세포 결합 도메인 및 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, T 세포에 결합할 수 있고; 선택적으로 상기 제1 면역 세포 결합 도메인 및 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD3, T-세포 수용체, 프로그램화된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4 (CTLA-4), T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 3 (TIM-3), 림프구-활성화 유전자 3 (LAG-3), 살해-세포 면역글로불린-유사 수용체 (KIR), CD28, CD137, OX40, CD27, GITR (TNFRSF18), TIGIT, 또는 유도성 T-세포 동시 자극 (ICOS)에 결합할 수 있는, 키트 또는 조성물.
  18. 청구항 16에 있어서, 상기 제1 면역 세포 결합 도메인 및 상기 제2 면역 세포 결합 도메인은, 서로 결합될 때, 자연 살해 세포에 결합할 수 있고; 선택적으로 상기 제1 면역 세포 결합 도메인 및 상기 제2 면역 결합 도메인은, 서로 결합될 때, CD16A에 결합할 수 있는, 키트 또는 조성물.
  19. 청구항 1에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고; 선택적으로 상기 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티는 α4-인테그린; A33; ACVRL 1/ALK1; ADAM17; ALK; APRIL; BCMA; C242; CA125; 카드헤린-19; CAIX; CanAg; 탄산무수화효소 IX; CCN1; CCR4; CD123; CD133; CD137 (4-1BB); CD138/신데칸1; CD19; CD2; CD20; CD22; CD30; CD33; CD37; CD38; CD4; CD40; CD44; CD45; CD48; CD5; CD52; CD56; CD59; CD70; CD70b; CD71; CD74; CD79b; CD80; CD86; CD98; CEA; CEACAM; CEACAM1; CK8; c-Kit; CLDN1; CLDN18; CLDN18.2; CLDN6; c-met/HGFR; c-RET; 크립토; CTLA-4; CXCR4; DKK-1; DLL3; DLL4; TRAIL-R2/DR5; DRS; EGFL7; EGFR; EGFRvIII; 엔도글린; ENPP3; EpCAM; EphA2; 에피시알린; FAP; FGFR1; FGFR2; FGFR3; FGFR4; 피브로넥틴 엑스트라-도메인 B; FLT-3; flt4; 엽산 수용체 1; GCC; GD2; GD3; 글리피칸-3; 글리피칸; GM3; GPNMB; GPR49; GRP78; Her2/Neu; HER3/ERBB3; HLA-DR; ICAM-1; IGF-1R; IGFR; IL-3Ra; 인테그린 α5β1; 인테그린 α6β4; 인테그린 αV; 인테그린 αVβ3; 루이스 Y; 루이스 y/b 항원; LFL2; LIV-1; Ly6E; MCP-1; 메소텔린; MMP-9; MUC1; MUC18; MUC5A; MUC5AC; 미오스타틴; NaPi2b; 뉴로필린 1; NGcGM3; NRP1; P-카드헤린; PCLA; PD-1; PDGFRa; PD-L1; PD-L2; 포스파티딜세린; PIVKA-II; PLVAP; PRLR; 프로가스트린; PSCA; PSMA; RANKL; RG1; 시글렉-15; SLAMF6; SLAMF7; SLC44A4,STEAP-1; TACSTD-2; 테나신 C; TPBG; TRAIL-R1/DR4; TROP-2; TWEAKR; TYRP1; VANGL2; VEGF; VEGF-C; VEGFR-2; 또는 VEGF-R2에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 키트 또는 조성물.
  20. 청구항 1에 있어서, 상기 제2 표적화 모이어티는 종양 미세환경 세포에 의해 발현된 항원에 결합하고; 선택적으로 상기 종양 미세환경 세포는 섬유아세포 또는 대식세포인, 키트 또는 조성물.
  21. 청구항 20에 있어서, 섬유아세포에 의해 발현된 상기 항원은 섬유아세포 활성화 단백질이거나 대식세포에 의해 발현된 상기 항원은 MAC-1/CD11b 또는 시데로플렉신 3인, 키트 또는 조성물.
  22. 환자에게 청구항 1의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 환자에서 제1 표적화 모이어티 및/또는 제2 표적화 모이어티에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암을 치료하는 방법으로서, 선택적으로 상기 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 상기 암은 유방암, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 방광암, 신장암, 흑색종, 폐암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 뇌암, 식도암, 위암, 췌장암, 결장직장암, 간암, 백혈병, 골수종, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 림프구증식성 장애, 골수형성이상 장애, 골수증식성 질환 또는 전암성 질환 중 어느 하나인, 방법.
  23. 환자에게 청구항 1의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 환자에서 제1 및/또는 제2 표적화 모이어티 둘 다에 결합하는 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법.
  24. 환자에게 청구항 1의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 환자에서 하나의 종양 항원이 제1 표적화 모이어티에 결합하고 하나의 종양 항원이 제2 표적화 모이어티에 결합하는 2개의 종양 항원을 발현시키는 암에 면역 세포를 표적화하는 방법.
  25. 환자에게 청구항 13의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 환자의 면역 세포에 사이토카인을 전달하는 방법으로서, 상기 조성물의 상기 제1 및/또는 제2 상보적 기능성 도메인은 IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, 또는 TNF-수퍼패밀리 구성원을 포함하는, 방법.
KR1020217018234A 2018-12-17 2019-12-16 트윈 면역 세포 인게이저 KR20210105890A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862780770P 2018-12-17 2018-12-17
US62/780,770 2018-12-17
PCT/US2019/066542 WO2020131697A2 (en) 2018-12-17 2019-12-16 Twin immune cell engager

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210105890A true KR20210105890A (ko) 2021-08-27

Family

ID=69182611

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217018234A KR20210105890A (ko) 2018-12-17 2019-12-16 트윈 면역 세포 인게이저

Country Status (8)

Country Link
US (2) US11702482B2 (ko)
EP (1) EP3897851A2 (ko)
JP (1) JP2022514262A (ko)
KR (1) KR20210105890A (ko)
CN (1) CN113226472A (ko)
AU (1) AU2019402097A1 (ko)
CA (1) CA3120800A1 (ko)
WO (1) WO2020131697A2 (ko)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2015260230A1 (en) 2014-05-13 2016-11-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha T cell-redirected antigen-binding molecule for cells having immunosuppression function
US11649293B2 (en) 2015-11-18 2023-05-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for enhancing humoral immune response
JP6931329B2 (ja) * 2015-11-18 2021-09-01 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
CN108601830B (zh) * 2015-12-18 2023-02-03 比奥根Ma公司 双特异性抗体平台
EP3649147A4 (en) 2017-07-03 2021-04-14 Torque Therapeutics, Inc. POLYNUCLEOTIDES FOR THE ENCODING OF IMMUNSTIMULATORY FUSION MOLECULES AND USES THEREOF
AU2018328291B2 (en) 2017-09-08 2022-10-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
TWI825046B (zh) 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
US11180531B2 (en) 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
EP3934762A1 (en) 2019-03-05 2022-01-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Constrained conditionally activated binding proteins
CN116171167A (zh) * 2020-07-20 2023-05-26 酵活生物制药有限公司 包含配体-受体对和生物功能蛋白的融合蛋白
WO2022036495A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Utc Therapeutics Inc. Lymphocytes-antigen presenting cells co-stimulators and uses thereof
WO2022125583A1 (en) * 2020-12-09 2022-06-16 Janux Therapeutics, Inc. Compositions and methods related to tumor activated antibodies targeting trop2 and effector cell antigens
KR20230141794A (ko) * 2021-01-08 2023-10-10 바이사이클티엑스 리미티드 헤테로탠덤 바이사이클릭 펩티드 복합체
AR126009A1 (es) * 2021-06-02 2023-08-30 Hoffmann La Roche Moléculas agonistas de unión al antígeno cd28 que se dirigen a epcam
WO2023007023A1 (en) * 2021-07-30 2023-02-02 Affimed Gmbh Duplexbodies
US20230295348A1 (en) * 2022-01-24 2023-09-21 Novimmune Sa Composition and methods for the selective activation of cytokine signaling pathways

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5288854A (en) 1990-11-28 1994-02-22 Center For Blood Research, Inc. Functional derivatives of ICAM-1 which are substantially capable of binding to LFA-1 but are substantially incapable of binding to MAC-1
CZ292061B6 (cs) 1994-03-17 2003-07-16 Merck Patent Gmbh Jednořetězcové fragmenty protilátek a protilátky proti receptoru epidermálního růstového faktoru, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek, který je obsahuje
US5610281A (en) 1994-05-03 1997-03-11 Brigham & Women's Hospital, Inc. Antibodies for modulating heterotypic E-cadherin interactions with human T lymphocytes
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
ES2236634T3 (es) 1997-04-07 2005-07-16 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-vegf.
TWI318983B (en) 2000-05-02 2010-01-01 Uab Research Foundation An antibody selective for a tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor and uses thereof
US20060062786A1 (en) 2000-11-08 2006-03-23 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to TRAIL receptors
AR032028A1 (es) 2001-01-05 2003-10-22 Pfizer Anticuerpos contra el receptor del factor de crecimiento similar a insulina
EA007469B1 (ru) 2001-04-26 2006-10-27 Байоджен Айдек Эмэй Инк. Антитела, блокирующие cripto, и их применения
DK1383785T3 (da) 2001-05-03 2011-05-23 Merck Patent Gmbh Rekombinant tumorspecifikt antistof og anvendelse deraf
CA2447602C (en) 2001-05-18 2011-11-01 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Anti-trail-r antibodies
AU2002351208A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Abgenix, Inc. Antibodies against carbonic anhydrase IX (CA IX) tumor antigen
CA2474616A1 (en) 2002-01-28 2003-08-07 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to prostate specific membrane antigen (psma)
AU2003276832A1 (en) 2002-05-10 2004-02-25 Medimmune, Llc EphA2 AGONISTIC MONOCLONAL ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
US20040028685A1 (en) 2002-05-10 2004-02-12 Kinch Michael S. EphA2 monoclonal antibodies and methods of use thereof
CN101658672B (zh) 2002-10-08 2017-09-26 免疫医疗公司 用iii类抗cea单克隆抗体和治疗剂进行联合治疗
US7595379B2 (en) 2003-05-30 2009-09-29 Agensys, Inc. Antibodies and related molecules that bind to PSCA proteins
IL156495A0 (en) 2003-06-17 2004-01-04 Prochon Biotech Ltd Use of fgfr3 antagonists for treating t cell mediated diseases
HN2004000285A (es) 2003-08-04 2006-04-27 Pfizer Prod Inc ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET
US7273608B2 (en) 2004-03-11 2007-09-25 City Of Hope Humanized anti-CEA T84.66 antibody and uses thereof
CN101014367B (zh) 2004-08-24 2012-07-04 中外制药株式会社 使用抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体的辅助疗法
CA2585196C (en) 2004-10-26 2015-01-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-glypican 3 antibody having modified sugar chain
US20090175866A1 (en) 2004-11-04 2009-07-09 Avner Yayon Treatment of b-cell malignancies
KR20070100346A (ko) 2005-01-05 2007-10-10 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 크립토 결합 분자
US8029783B2 (en) 2005-02-02 2011-10-04 Genentech, Inc. DR5 antibodies and articles of manufacture containing same
KR101291640B1 (ko) 2005-02-18 2013-08-05 메다렉스, 엘.엘.시. 푸코실 잔기가 결핍된 전립선 특이적 막 항원(ｐｓｍａ)에대한 단클론성 항체
UA92504C2 (en) 2005-10-12 2010-11-10 Эли Лилли Энд Компани Anti-myostatin monoclonal antibody
US8623356B2 (en) 2005-11-29 2014-01-07 The University Of Sydney Demibodies: dimerization-activated therapeutic agents
US8466263B2 (en) 2005-12-02 2013-06-18 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Carbonic anhydrase IX (G250) anitbodies
ES2385054T3 (es) 2005-12-13 2012-07-17 Medimmune Limited Proteínas de unión específicas para factores de crecimiento de tipo insulina y usos de las mismas
CN101415730B (zh) 2006-03-30 2013-04-10 诺瓦提斯公司 c-Met抗体的组合物和使用方法
AU2007333485A1 (en) 2006-10-31 2008-06-19 Immunogen, Inc. Methods for improving antibody production
KR101683884B1 (ko) 2007-04-04 2016-12-07 시구마-토우인더스트리에파아마슈우티히리유니트에스.피이.에이. 항-ＥｐＣＡＭ 항체 및 이의 용도
AU2008251608B2 (en) 2007-05-08 2014-03-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-MUC16 antibodies and antibody drug conjugates
WO2008143666A2 (en) 2007-05-17 2008-11-27 Genentech, Inc. Crystal structures of neuropilin fragments and neuropilin-antibody complexes
DK2199390T3 (en) 2007-08-30 2017-04-03 Daiichi Sankyo Co Ltd ANTI-EphA2 ANTIBODY
CA2698343C (en) 2007-09-04 2018-06-12 The Regents Of The University Of California High affinity anti-prostate stem cell antigen (psca) antibodies for cancer targeting and detection
US8039597B2 (en) 2007-09-07 2011-10-18 Agensys, Inc. Antibodies and related molecules that bind to 24P4C12 proteins
PE20091163A1 (es) 2007-11-01 2009-08-09 Wyeth Corp Anticuerpos para gdf8
ES2569513T3 (es) 2007-11-26 2016-05-11 Bayer Intellectual Property Gmbh Anticuerpos antimesotelina y usos de los mismos
CA2709847C (en) 2008-01-07 2018-07-10 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
KR20110025215A (ko) 2008-06-30 2011-03-09 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 방사성 동위원소 표지로 표지된 항―ｃｄｈ３ 항체 및 이의 용도
US8877893B2 (en) 2008-12-29 2014-11-04 Children's Medical Center Corporation Stabilized low affinity conformation of integrins for drug discovery
CA2754531A1 (en) 2009-03-06 2010-09-30 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 24p4c12 proteins
GB0909904D0 (en) 2009-06-09 2009-07-22 Affitech As Product
SG179196A1 (en) 2009-09-16 2012-04-27 Genentech Inc Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof
US8999342B2 (en) 2009-10-02 2015-04-07 Ludwig Institute For Cancer Research, Ltd. Anti-fibroblast activation protein antibodies and methods and uses thereof
EP2552959B1 (en) 2010-03-26 2017-01-11 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antibodies to muc16 and methods of use thereof
NO2802607T3 (ko) 2012-01-13 2018-03-03
WO2014028560A2 (en) * 2012-08-14 2014-02-20 Ibc Pharmaceuticals, Inc. T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease
JP7073258B2 (ja) 2015-11-19 2022-05-23 レビトープ リミテッド 望ましくない細胞の再指向性死滅に対する二成分系のための機能的抗体断片相互補完
CN108601830B (zh) 2015-12-18 2023-02-03 比奥根Ma公司 双特异性抗体平台
JP7219207B2 (ja) 2016-07-29 2023-02-07 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 腫瘍関連マクロファージを標的化する抗体及びその使用
NZ754407A (en) 2016-11-09 2023-01-27 Philogen Spa Il2 and tnf mutant immunoconjugates
US20200181263A1 (en) * 2017-06-05 2020-06-11 Numab Therapeutics AG Hetero-dimeric multi-specific antibody format targeting at least cd3 and hsa

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020131697A3 (en) 2020-07-30
CA3120800A1 (en) 2020-06-25
EP3897851A2 (en) 2021-10-27
US11702482B2 (en) 2023-07-18
JP2022514262A (ja) 2022-02-10
AU2019402097A1 (en) 2021-06-10
US20200190213A1 (en) 2020-06-18
WO2020131697A2 (en) 2020-06-25
CN113226472A (zh) 2021-08-06
US20230399415A1 (en) 2023-12-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11702482B2 (en) Twin immune cell engager
US11318201B2 (en) Multimeric IL-15-based molecules
JP6842926B2 (ja) Ｉｌ−１５ベース分子及びその使用方法
CA3089333C (en) Anti-pdl1, il-15 and tgf-beta receptor combination molecules
JP7418364B2 (ja) 抗体腫瘍ターゲティングアセンブリ複合体
JP2019509055A (ja) 多特異性免疫調節抗原結合構築物
JP2018503399A (ja) 多特異性免疫調節抗原結合構築物
CA3090546A1 (en) Chimeric antigen receptors targeting the tumor microenvironment
TW201900672A (zh) 改良之抗原結合受體型式
JP7362614B2 (ja) 癌治療のために免疫チェックポイントを調節する単一特異性および二重特異性タンパク質
KR102412805B1 (ko) 세포 면역 요법을 위한 조성물 및 방법
US20220323600A1 (en) Teac and attac immunooncology compositions and methods