CN105010238B - 共有轻链小鼠 - Google Patents

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Abstract

提供了经遗传修饰的小鼠，其中所述小鼠不能重排和表达内源小鼠免疫球蛋白轻链可变序列，其中所述小鼠仅表达在内源小鼠K基因座处与小鼠κ(K)恒定基因可操作连接的由人免疫球蛋白序列编码的一种或两种人轻链可变结构域，其中所述小鼠表达反向嵌合抗体，所述反向嵌合抗体具有源自仅有的两种人轻链可变区基因区段之一的轻链可变结构域和小鼠K恒定结构域，以及人重链可变结构域和来自内源小鼠重链基因座的小鼠重链恒定结构域。提供了完全为人的双特异性表位结合蛋白，其包括与相同的轻链缔合的两个不同的重链，所述轻链包含源自两种不同的人轻链可变区基因区段之一的可变结构域。

Description

共有轻链小鼠
本申请是2011年2月8日提交的同名发明专利申请201180013714.0的分案申请。
发明领域
提供了经遗传修饰的小鼠，其表达具有与多种人可变/小鼠恒定重链缔合的共有人可变/小鼠恒定轻链的抗体。提供了从小鼠B细胞的人可变区基因序列制备人双特异性抗体的方法。
背景技术
抗体通常包含同二聚重链组分，其中每个重链单体与相同的轻链缔合。需要具有异二聚重链组分的抗体(例如双特异性抗体)作为治疗性抗体。但是已证明了，制备具有能够满意地与双特异性抗体的每个重链缔合的合适的轻链组分的双特异性抗体是有问题的。
在一种方案中，可通过调查所有轻链可变结构域的使用统计学、鉴别出人抗体中最常采用的轻链来选择轻链，并在体外将那种轻链与不同特异性的两个重链进行配对。
在另一种方案中，可通过观察噬菌体展示文库(例如，包含人轻链可变区序列的噬菌体展示文库，例如人ScFv文库)中的轻链序列并从所述文库中选择最常使用的轻链可变区而选择轻链。然后，可在两种不同的目的重链上测试所述轻链。
在另一种方案中，可通过使用两种目的重链的重链可变序列作为探针来测定轻链可变序列的噬菌体展示文库而选择轻链。与两种重链可变序列都缔合的轻链可被选作用于所述重链的轻链。
在另一种方案中，可将候选轻链与重链的共有轻链进行比对，并在所述轻链中进行修饰以更紧密地匹配两种重链的共有轻链共同的序列特征。如果需要使得免疫原性的机会最小化，则所述修饰优选产生在已知人轻链序列中存在的序列，从而基于评估免疫原性可能性的领域中已知的参数和方法(即计算机模拟和湿测定)，蛋白水解加工不太可能产生T细胞表位。
所有上述的方案都依赖于体外方法，其包含若干事先的约束，例如序列同一性，与特定的、预先选择的重链相缔合的能力等。本领域中需要这样的组合物和方法，其不依赖于操控体外条件，而是采用更为生物学上可感知的方案，来制备包括共有轻链的人表位结合蛋白。
附图说明
图1描绘了用人Vκ1-39Jκ5基因区域替换内源小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因区段的靶向策略。
图2描绘了用人Vκ3-20Jκ1基因区域替换内源小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因区段的靶向策略。
图3描绘了用人VpreB/Jλ5基因区域替换内源小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因区段的靶向策略。
发明概述
提供了表达人免疫球蛋白重链和轻链可变结构域的经遗传修饰的小鼠，其中小鼠具有有限的轻链可变集合(repertoire)。提供了用于产生人轻链可变结构域的生物学系统，其中所述人轻链可变结构域与众多集合的亲和-成熟的人重链可变结构域相缔合并一起表达。提供了用于制备包含免疫球蛋白可变结构域的结合蛋白的方法，所述方法包括用目的抗原免疫接种具有有限的免疫球蛋白轻链集合的小鼠，和在特异性结合所述目的抗原的结合蛋白中采用小鼠的免疫球蛋白可变区基因序列。所述方法包括下列方法：用于制备适于在制备多特异性抗原结合蛋白中使用的人免疫球蛋白重链可变结构域的方法。
提供了经遗传工程化的小鼠，其选择源自未重排的人重链可变区基因区段的集合的、合适的亲和-成熟的人免疫球蛋白重链可变结构域，其中所述亲和-成熟的人重链可变结构域与源自一个人轻链可变区基因区段的单一人轻链可变结构域相缔合并一起表达。提供了经遗传工程化的小鼠，其提供两种人轻链可变区基因区段的选择。
提供了经遗传工程化的小鼠，其表达人轻链可变结构域的有限的集合，或者来自人轻链可变区基因区段的有限的集合的单一人轻链可变结构域。所述小鼠经遗传工程化以包括单一的未重排的人轻链可变区基因区段(或两个人轻链可变区基因区段)，其重排以形成表达单一轻链(或表达两条轻链中的任一条或两条)的、经重排的人轻链可变区基因(或两个重排的轻链可变区基因)。经重排的人轻链可变结构域能够与由小鼠选择的多个亲和-成熟的人重链配对，其中所述重链可变区特异性地结合不同的表位。
一方面，提供了经遗传修饰的小鼠，其包括单一的人免疫球蛋白轻链可变(VL)区基因区段，所述基因区段能够重排并编码免疫球蛋白轻链的人VL结构域。另一方面，所述小鼠包括不多于两个人VL基因区段，所述区段能够重排并编码免疫球蛋白轻链的人VL结构域。
一方面，提供了经遗传修饰的小鼠，其包括单一经重排的(V/J)人免疫球蛋白轻链可变(VL)区区段(即V/J区段)，所述区段编码免疫球蛋白轻链的人VL结构域。另一方面，所述小鼠包括不多于两个重排的人VL基因区段，所述区段能够编码免疫球蛋白轻链的人VL结构域。
在一个实施方案中，所述VL基因区段是人Vκ1-39Jκ5基因区段或人Vκ3-20Jκ1基因区段。在一个实施方案中，所述小鼠具有人Vκ1-39Jκ5基因区段和人Vκ3-20Jκ1基因区段两者。
在一个实施方案中，所述人VL基因区段与人或小鼠前导序列可操作地连接。在一个实施方案中，所述前导序列是小鼠前导序列。在具体的实施方案中，所述小鼠前导序列是小鼠Vκ3-7前导序列。
在一个实施方案中，所述VL基因区段与免疫球蛋白启动子序列可操作地连接。在一个实施方案中，所述启动子序列是人启动子序列。在具体的实施方案中，所述人免疫球蛋白启动子是Vκ3-15启动子。
在一个实施方案中，所述经遗传修饰的小鼠包含VL基因座，其不包含能够重排以形成免疫球蛋白轻链基因的内源小鼠VL基因区段，其中所述VL基因座包含能够重排以编码轻链基因的VL区的单一人VL基因区段。在具体的实施方案中，所述人VL基因区段是人Vκ1-39Jκ5基因区段或人Vκ3-20Jκ1基因区段。
在一个实施方案中，所述VL基因座包括前导序列，其5’侧翼(相对于VL基因区段的转录方向)是人免疫球蛋白启动子，而3’侧翼是人VL基因区段，所述人VL基因区段重排并编码包含内源小鼠轻链恒定区(CL)的反向嵌合轻链的VL结构域。在具体的实施方案中，所述VL基因区段位于小鼠κVL基因座，且小鼠CL是小鼠κCL。
在一个实施方案中，所述小鼠包括无功能的λ免疫球蛋白轻链基因座。在具体的实施方案中，所述λ基因座包括所述基因座的一个或多个序列的缺失，其中所述一个或多个缺失使得所述λ基因座不能重排以形成轻链基因。在另一个实施方案中，所述λ基因座的全部或其本上全部VL基因区段都缺失。
在一个实施方案中，经修饰的小鼠的VL基因座是κ基因座，并且所述κ基因座包括小鼠κ内含子增强子(intronic enhancer)，小鼠κ3’增强子，或内含子增强子和3’增强子二者。
在一个实施方案中，小鼠制造这样的轻链：其包含源自人VL基因区段的、体细胞突变的VL结构域。在一个实施方案中，所述轻链包含源自人VL基因区段的、体细胞突变的VL结构域，和小鼠κCL区域。在一个实施方案中，所述小鼠不表达λ轻链。
在一个实施方案中，所述遗传修饰的小鼠能够体细胞超突变人VL区域序列。在具体的实施方案中，所述小鼠包括这样的细胞：其包含源自能够重排和编码VL结构域的人VL基因区段的重排的免疫球蛋白轻链基因，并且所述重排的免疫球蛋白轻链基因包含体细胞突变的VL结构域。
在一个实施方案中，所述小鼠包括这样的细胞：其表达包含与小鼠κCL相连的体细胞突变的人VL结构域的轻链，其中所述轻链与包含源自人VH基因区段的、体细胞突变的VH结构域的重链相缔合，并且其中所述重链包含小鼠重链恒定区(CH)。
在一个实施方案中，所述小鼠包含用一个或多个人VH基因区段对内源小鼠VH基因区段的替换，其中人VH基因区段与小鼠CH区基因可操作地连接，从而所述小鼠重排所述人VH基因区段并且表达包含人VH结构域和小鼠CH的反向嵌合免疫球蛋白重链。在一个实施方案中，90-100％的未重排的小鼠VH基因区段被至少一个未重排的人VH基因区段替换。在具体的实施方案中，所有或基本上所有的内源小鼠VH基因区段被至少一个未重排的人VH基因区段替换。在一个实施方案中，所述替换是用至少19，至少39，或者至少80或81个未重排的人VH基因区段进行的。在一个实施方案中，所述替换是以至少12个有功能的未重排的人VH基因区段、至少25个有功能的未重排的人VH基因区段，或至少43个有功能的未重排的人VH基因区段进行的。在一个实施方案中，所述小鼠包括用至少一个未重排的人D区段和至少一个未重排的人J区段替换所有的小鼠D和J区段。在一个实施方案中，所述至少一个未重排的人D区段选自D1-7，D1-26，D3-3，D3-10，D3-16，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13，D7-27，以及它们的组合。在一个实施方案中，所述至少一个未重排的人J区段选自J1，J3，J4，J5，J6，以及它们的组合。在具体的实施方案中，所述一个或多个人VH基因区段选自人VH基因区段的1-2，1-8，1-24，2-5，3-7，3-9，3-11，3-13，3-15，3-20，3-23，3-30，3-33，3-48，4-31，4-39，4-59，5-51，6-1，以及它们的组合。
在一个实施方案中，所述小鼠包含表达特异性结合目的抗原的结合蛋白的B细胞，其中所述结合蛋白包括源自人Vκ1-39/Jκ5重排或人Vκ3-20/Jκ1重排的轻链，并且其中所述细胞包括源自人基因区段的重排的经重排的免疫球蛋白重链基因，所述人基因区段选自VH2-5，VH3-23，VH3-30，VH 4-39，VH4-59和VH5-51基因区段。在一个实施方案中，所述一种或多种人VH基因区段是以选自J1，J3，J4，J5和J6的人重链J基因区段重排的。在一个实施方案中，所述一个或多个人VH和J基因区段是用选自D1-7，D1-26，D3-3，D3-10，D3-16，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13和D7-27的人D基因区段重排的。在具体的实施方案中，所述轻链基因具有1，2，3，4或5或更多体细胞超突变。
在一个实施方案中，所述小鼠包括包含重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列的B细胞，所述重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列包括选自下列的VH，JH和DH基因区段：VH 2-5+JH1+D6-6，VH3-23+JH4+D3，VH3-23+JH4+D3-10，VH3-30+JH1+D6-6，VH3-30+JH3+D6-6，VH3-30+JH4+D1-7，VH3-30+JH4+D5-12，VH3-30+JH4+D6-13，VH3-30+JH4+D6-6，VH3-30+JH4+D7-27，VH3-30+JH5+D3-22，VH3-30+JH5+D6-6，VH3-30+JH5+D7-27，VH4-39+JH3+D1-26，VH4-59+JH3+D3-16，VH4-59+JH3+D3-22，VH4-59+JH4+D3-16，VH5-51+JH3+D5-5，VH5-51+JH5+D6-13和VH5-51+JH6+D3-16。在具体的实施方案中，所述B细胞表达结合蛋白，所述结合蛋白包括与小鼠重链恒定区融合的人免疫球蛋白重链可变区，以及与小鼠轻链恒定区融合的人免疫球蛋白轻链可变区。
在一个实施方案中，所述人VL基因区段是人Vκ1-39Jκ5基因区段，且所述小鼠表达包含下列的反向嵌合轻链：(i)源自人VL基因区段的VL结构域和(ii)小鼠CL；其中所述轻链与包含下列的反向嵌合重链相缔合：(i)小鼠CH和(ii)源自人VH基因区段的体细胞突变的人VH结构域，所述人VH基因区段选自人VH基因区段的1-2，1-8，1-24，2-5，3-7，3-9，3-11，3-13，3-15，3-20，3-23，3-30，3-33，3-48，4-31，4-39，4-59，5-51和6-1，以及它们的组合。在一个实施方案中，所述小鼠表达经体细胞突变的轻链。在一个实施方案中，所述CL是小鼠κCL。
在一个实施方案中，所述人VL基因区段是人Vκ3-20Jκ1基因区段，且所述小鼠表达包含下列的反向嵌合轻链：(i)源自人VL基因区段的VL结构域，和(ii)小鼠CL；其中所述轻链与包含下列的反向嵌合重链相缔合：(i)小鼠CH，和(ii)源自选自下列的人VH基因区段的体细胞突变的人VH：人VH基因区段的1-2，2-5，3-7，3-9，3-11，3-20，3-23，3-30，3-33，4-59和5-51，以及它们的组合。在一个实施方案中，所述小鼠表达经体细胞突变的轻链。在一个实施方案中，所述CL是小鼠κCL。
在一个实施方案中，所述小鼠包括人Vκ1-39Jκ5基因区段和人Vκ3-20Jκ1基因区段两者，并且所述小鼠表达包含下列的反向嵌合轻链：(i)源自人Vκ1-39Jκ5基因区段或人Vκ3-20Jκ1基因区段的VL结构域，和(ii)小鼠CL；其中所述轻链与包含下列的反向嵌合重链相缔合：(i)小鼠CH，和(ii)源自选自下列的人VH基因区段的体细胞突变的人VH：人VH基因区段的1-2，1-8，1-24，2-5，3-7，3-9，3-11，3-13，3-15，3-20，3-23，3-30，3-33，3-48，4-31，4-39，4-59，5-51，6-1，以及它们的组合。在一个实施方案中，所述小鼠表达经体细胞突变的轻链。在一个实施方案中，所述CL是小鼠κCL。
在一个实施方案中，90-100％的内源未重排的小鼠VH基因区段被至少一个未重排的人VH基因区段替换。在具体的实施方案中，全部或基本上全部内源未重排的小鼠VH基因区段被至少一个未重排的人VH基因区段替换。在一个实施方案中，所述替换是用至少18，至少39，至少80或81个未重排的人VH基因区段进行的。在一个实施方案中，所述替换是用至少12个有功能的未重排的人VH基因区段、至少25个有功能的未重排的人VH基因区段或至少43个未重排的人VH基因区段进行的。
在一个实施方案中，所述经遗传修饰的小鼠是C57BL品系，在具体的实施方案中，其选自C57BL/A，C57BL/An，C57BL/GrFa，C57BL/KaLwN，C57BL/6，C57BL/6J，C57BL/6ByJ，C57BL/6NJ，C57BL/10，C57BL/10ScSn，C57BL/10Cr，C57BL/Ola。在具体的实施方案中，所述经遗传修饰的小鼠是前述129品系与前述C57BL/6品系的混合。在另一个具体的实施方案中，所述小鼠是前述129品系的混合，或前述BL/6品系的混合。在具体的实施方案中，所述混合的129品系是129S6(129/SvEvTac)品系。
在一个实施方案中，所述小鼠表达包括下列的反向嵌合抗体：包含小鼠κCL和源自人Vκ1-39Jκ5基因区段或人Vκ3-20Jκ1基因区段的体细胞突变的人VL结构域的轻链，和包含小鼠CH和源自人VH基因区段的经体细胞突变的人VH结构域的重链，所述人VH基因区段选自人VH基因区段的1-2，1-8，1-24，2-5，3-7，3-9，3-11，3-13，3-15，3-20，3-23，3-30，3-33，3-48，4-31，4-39，4-59，5-51和6-1，其中所述小鼠不表达完全的小鼠抗体并且不表达完全的人抗体。在一个实施方案中，所述小鼠包括这样的κ轻链基因座，其包含用人Vκ1-39Jκ5基因区段或人Vκ3-20Jκ1基因区段对内源小鼠κVL基因区段的替换，并且包括用人VH基因区段的完整或基本上完整的集合对所有或基本上所有内源小鼠VH基因区段的替换。
一方面，提供了分离自如本文中所描述的小鼠的小鼠细胞。在一个实施方案中，所述细胞是ES细胞。在一个实施方案中，所述细胞是淋巴细胞。在一个实施方案中，所述淋巴细胞是B细胞。在一个实施方案中，所述B细胞表达包含源自人基因区段的可变结构域的嵌合重链；和源自重排的人Vκ1-39/J区段，重排的人Vκ3-20/J区段，或它们的组合的轻链；其中所述重链可变结构域与小鼠恒定区相融合，且所述轻链可变结构域与小鼠或人的恒定区相融合。
一方面，提供了杂交瘤，其中所述杂交瘤是由如本文所描述的小鼠的B细胞制成的。在具体的实施方案中，所述B细胞来自如本文所描述的小鼠，所述小鼠经包含目的表位的免疫原免疫接种，并且所述B细胞表达结合所述目的表位的结合蛋白，所述结合蛋白具有经体细胞突变的人VH结构域和小鼠CH，并且具有源自人Vκ1-39Jκ5或人Vκ3-20Jκ1基因区段的人VL结构域和小鼠CL。
一方面，提供了小鼠胚胎，其中所述胚胎包含源自如本文中所描述的小鼠的供体ES细胞。
一方面，提供了靶向载体，所述载体在转录方向中、参照所述载体的5’和3’小鼠同源臂的序列，从5’至3’包括：5’小鼠同源臂，人或小鼠免疫球蛋白启动子，人或小鼠前导序列，和选自人Vκ1-39Jκ5或人Vκ3-20Jκ1基因区段的人LCVR基因区段，以及3’小鼠同源臂。在一个实施方案中，所述5’和3’同源臂使所述载体靶向增强子序列5’的序列，所述增强子序列存在于小鼠κ恒定区基因的5’并临近小鼠κ恒定区基因。在一个实施方案中，所述启动子是人免疫球蛋白可变区因区段启动子。在具体的实施方案中，所述启动子是人Vκ3-15启动子。在一个实施方案中，所述前导序列是小鼠前导序列。在具体的实施方案中，所述小鼠前导序列是小鼠Vκ3-7前导序列。
一方面，提供了如上文所述的靶向载体，但是替代5’小鼠同源臂，人或小鼠启动子的5’侧翼是位点特异性重组酶识别位点(SRRS)，并且替代3’小鼠同源臂，人LCVR基因区段的3’侧翼是SRRS。
一方面，提供了如本文所述的小鼠制备的反向嵌合抗体，其中所述反向嵌合抗体包含含有小鼠CL和人VL的轻链，以及含有人VH和小鼠CH的重链。
一方面，提供了用于制备抗体的方法，所述方法包括在单细胞中表达：(a)与人CH基因序列融合的、如本文所述经免疫的小鼠的第一VH基因序列；(b)与人CL基因序列融合的、如本文所述经免疫的小鼠的VL基因序列；和(c)在足以表达完全人抗体的条件下维持所述细胞，和分离所述抗体。在一个实施方案中，所述细胞包含与人CH基因序列融合的、如本文所述第二经免疫的小鼠的第二VH基因序列，第一VH基因序列编码识别第一表位的VH结构域，而第二VH基因序列编码识别第二表位的VH结构域，其中所述第一表位和所述第二表位是不相同的。
一方面，提供了用于制备表位结合蛋白的方法，所述方法包括使本文所述的小鼠暴露于包含目的表位的免疫原，在足以使所述小鼠产生特异性结合所述目的表位的免疫球蛋白分子的条件下维护所述小鼠，和分离特异性结合所述目的表位的免疫球蛋白分子；其中所述表位结合蛋白包括含有体细胞突变的人VH和小鼠CH的重链，所述重链与包含小鼠CL和源自人Vκ1-39Jκ5或人Vκ3-20Jκ1基因区段的人VL的轻链相缔合。
一方面，提供了表达表位结合蛋白的细胞，其中所述细胞包括：(a)编码源自人Vκ1-39Jκ5或人Vκ3-20Jκ1基因区段的人VL结构域的人VL核苷酸序列，其中所述人VL核苷酸序列与人免疫球蛋白轻链恒定结构域cDNA序列(例如，人κ恒定结构域DNA序列)相融合(直接地或通过连接子)；和(b)第一人VH核苷酸序列，其编码源自第一人VH核苷酸序列的人VH结构域，其中所述第一人VH核苷酸序列与人免疫球蛋白重链恒定结构域cDNA序列相融合(直接地或通过连接子)；其中所述表位结合蛋白识别第一表位。在一个实施方案中，所述表位结合蛋白以下列解离常数结合所述第一表位：低于10-6M，低于10-8M，低于10-9M，低于10-10M，低于10-11M或低于10-12M。
在一个实施方案中，所述细胞包含编码第二人VH结构域的第二人VH核苷酸序列，其中所述第二人VH序列与人免疫球蛋白重链恒定结构域cDNA序列相融合(直接地或通过连接子)，并且其中所述第二人VH结构域不特异性识别所述第一表位(例如显示出下列解离常数：例如10-6M，10-5M，10-4M或更高)，并且其中所述表位结合蛋白识别所述第一表位和所述第二表位，并且其中所述第一和所述第二免疫球蛋白重链每一个都与(a)的相同的轻链相缔合。
在一个实施方案中，所述第二VH结构域以下列解离常数结合所述第二表位：所述解离常数低于10-6M，低于10-7M，低于10-8M，低于10-9M，低于10-10M，低于10-11M或低于10-12M。
在一个实施方案中，所述表位结合蛋白包含第一免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白重链，每一个都与源自选自人Vκ1-39Jκ5或人Vκ3-20Jκ1基因区段的人VL基因区段的相同的轻链相缔合，其中所述第一免疫球蛋白重链以纳摩尔至皮摩尔范围内的解离常数结合第一表位，所述第二免疫球蛋白重链以纳摩尔至皮摩尔范围内的解离常数结合第二表位，所述第一表位和所述第二表位不是完全相同的，所述第一免疫球蛋白重链不结合所述第二表位或者以弱于微摩尔范围(例如毫摩尔范围)的解离常数结合所述第二表位，所述第二免疫球蛋白重链不结合所述第一表位或以弱于微摩尔范围(例如毫摩尔范围)的解离常数结合所述第一表位，并且VL、所述第一免疫球蛋白重链的VH，以及所述第二免疫球蛋白重链的VH中的一个或多个是经体细胞突变的。
在一个实施方案中，所述第一免疫球蛋白重链包含蛋白A-结合残基，且所述第二免疫球蛋白重链缺少蛋白A-结合残基。
在一个实施方案中，所述细胞选自CHO，COS，293，HeLa，和表达病毒核酸序列的视网膜细胞(例如PERC.6TM细胞)。
一方面，提供了反向嵌合抗体，其包含人VH和小鼠重链恒定结构域，人VL和小鼠轻链恒定结构域，其中所述抗体是通过下列方法制备的，所述方法包括：用包含表位的免疫原免疫接种本文所述的小鼠，且所述抗体特异性结合用于免疫接种小鼠的免疫原的所述表位。在一个实施方案中，所述VL结构域是经体细胞突变的。在一个实施方案中，所述VH结构域是经体细胞突变的。在一个实施方案中，VL结构域和VH结构域二者都是经体细胞突变的。在一个实施方案中，VL与小鼠κ恒定结构域相连。
一方面，提供了小鼠，所述小鼠包含在内源小鼠基因座处用人重链可变基因区段替换所有或基本上所有小鼠重链可变基因区段；用不多于一个或两个选自重排的Vκ1-39/J和重排的Vκ3-20/J区段或其组合的人轻链可变基因区段替换所有小鼠轻链可变基因区段；其中所述人重链可变基因区段与小鼠恒定基因相连，且其中所述人轻链可变基因区段与人或小鼠恒定基因相连。
一方面，小鼠ES细胞包含用人重链可变基因区段替换所有或基本上所有小鼠重链可变基因区段，以及不多于一个或两个重排的人轻链V/J区段，其中所述人重链可变基因区段与小鼠免疫球蛋白重链恒定基因相连，并且所述人轻链V/J区段与小鼠或人免疫球蛋白轻链恒定基因相连。在具体的实施方案中，所述轻链恒定基因是小鼠恒定基因。
一方面，提供了由本文所述的小鼠制备的抗原结合蛋白。在具体的实施方案中，所述抗原结合蛋白包括与小鼠恒定区相融合的人免疫球蛋白重链可变区，和源自Vκ1-39基因区段或Vκ3-20基因区段的人免疫球蛋白轻链可变区，其中所述轻链恒定区是小鼠恒定区。
一方面，提供了由本文所述的小鼠的免疫球蛋白可变区基因序列制备的完全人抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白包含含有源自本文所述的小鼠的序列的人可变区的完全的人重链，和含有Vκ1-39或Vκ3-20可变区的完全的人轻链。在一个实施方案中，所述轻链可变区包含一个至五个体细胞突变。在一个实施方案中，所述轻链可变区是在所述小鼠的B细胞中与重链可变区配对的共有轻链可变区。
在一个实施方案中，所述完全的人抗原结合蛋白包含第一重链和第二重链，其中所述第一重链和所述第二重链包含非完全相同的可变区，它们独立地源自本文所述的小鼠，并且其中从宿主细胞表达的所述第一和第二重链中的每一个与源自Vκ1-39基因区段或Vκ3-20基因区段的人轻链相缔合。在一个实施方案中，所述第一重链包含特异性结合第一抗原的第一表位的第一重链可变区，且第二重链包含特异性结合第二抗原的第二表位的第二重链可变区。在具体的实施方案中，所述第一抗原和所述第二抗原是不同的。在具体的实施方案中，所述第一抗原和所述第二抗原是相同的，并且所述第一表位和所述第二表位不是完全相同的；在具体的实施方案中，所述结合蛋白的第一分子与所述第一表位的结合不阻碍所述结合蛋白的第二分子与所述第二表位的结合。
一方面，源自本文所述的小鼠的人免疫球蛋白序列的完全人结合蛋白包含第一免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白重链，其中所述第一免疫球蛋白重链包含与第二免疫球蛋白重链的可变区不完全相同的第一可变区，并且其中所述第一免疫球蛋白重链包含野生型蛋白A结合决定簇，且所述第二重链缺少野生型蛋白A结合决定簇。在一个实施方案中，所述第一免疫球蛋白重链在分离条件下结合蛋白A，且所述第二免疫球蛋白重链不结合蛋白A或与第一免疫球蛋白重链在分离条件下与蛋白A的结合相比，对蛋白A的结合弱至少10倍，100倍，或1000倍。在具体的实施方案中，所述第一和第二重链是IgG1同种型，其中所述第二重链包括选自95R(EU 435R)、96F(EU 436F)及其组合的修饰，并且其中所述第一重链缺少此种修饰。
一方面，提供了制备双特异性抗原结合蛋白的方法，所述方法包括使本文所述的第一小鼠暴露于包含第一表位的第一目的抗原，使本文所述的第二小鼠暴露于包含第二表位的第二目的抗原，允许所述第一和所述第二小鼠各自发动对于目的抗原的免疫应答，在所述第一小鼠中鉴别出结合第一目的抗原的第一表位的第一人重链可变区，在所述第二小鼠中鉴别出结合第二目的抗原的第二表位的第二人重链可变区，制备编码结合所述第一目的抗原的第一表位的第一重链的第一完全人重链基因，制备编码结合所述第二目的抗原的第二表位的第二重链的第二完全人重链基因，在表达源自人Vκ1-39或人Vκ3-20基因区段的单一完全人轻链的细胞中表达所述第一重链和所述第二重链，以形成双特异性抗原结合蛋白，以及分离所述双特异性抗原结合蛋白。
在一个实施方案中，所述第一抗原和所述第二抗原不是完全相同的。
在一个实施方案中，所述第一抗原和所述第二抗原是完全相同的，且所述第一表位和所述第二表位不是完全相同的。在一个实施方案中，所述第一重链可变区与所述第一表位的结合不阻碍所述第二重链可变区与所述第二表位的结合。
在一个实施方案中，所述第一抗原选自可溶性抗原和细胞表面抗原(例如肿瘤抗原)，且所述第二抗原包括细胞表面受体。在具体的实施方案中，所述细胞表面受体是免疫球蛋白受体。在具体的实施方案中，所述免疫球蛋白受体是Fc受体。在一个实施方案中，所述第一抗原和所述第二抗原是相同的细胞表面受体，并且所述第一重链与所述第一表位的结合不阻碍所述第二重链与所述第二表位的结合。
在一个实施方案中，所述轻链的轻链可变结构域包含2至5个体细胞突变。在一个实施方案中，所述轻链可变结构域是体细胞突变的共有轻链，其在所述第一或第二经免疫的小鼠的B细胞中与所述第一或第二重链可变结构域一起表达。
在一个实施方案中，所述第一完全人重链携带减少其对于蛋白质A的亲和力的氨基酸修饰，且所述第二完全人重链不包含减少其对于蛋白质A的亲和力的修饰。
一方面，提供了根据本发明制备的包含人重链可变结构域的抗体或双特异性抗体。另一方面，提供了本文所述的小鼠在制备完全人抗体或完全人双特异性抗体中的用途。
本文所描述的任何实施方案和方面均可被用于与另一个相结合，除非另行指明或从上下文来看是显然的。通过回顾随后的描述，其它的实施方案对于本领域技术人员而言将变得显然。
发明详述
本发明不限于特定的方法以及所描述的实验条件，因为此种方法和条件可能变化。还将理解，本文中所使用的术语仅仅是用于描述具体实施方案的目的，而不意在是限制性的，因为本发明的范围是由权利要求限定的。
除非另外定义，本文中所使用的所有术语和短语包括所述术语和短语在本领域中所获得的含义，除非从所述术语或短语所使用的上下文中清楚地显示了或显而易见是与此相反的。虽然与本文中所描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料均可被用于实施或测试本发明，现在描述了特定的方法和材料。所述及的所有出版物均在此通过引用而并入。
如本文中所使用的，术语"抗体"包括包含四条多肽链的免疫球蛋白分子，两条重链(H)和两条轻链(L)通过二硫键相互连接。每条重链包含重链可变(VH)区和重链恒定区(CH)。所述重链恒定区包含三个结构域CH1，CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变(VL)区和轻链恒定区(CL)。所述VH和VL区域可被进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布更为保守的被称为框架区(FR)的区域穿插分布。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，以下列顺序从氨基端至羧基端排列:FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4(重链CDR可被简称为HCDR1，HCDR2和HCDR3；轻链CDR可被简称为LCDR1，LCDR2和LCDR3)。术语“高亲和力”抗体是指这样的抗体：其相关于其靶表位具有的KD为约10-9M或更低(例如，约1x 10-9M，1x 10-10M，1x 10- 11M，或约1x 10-12M)。在一个实施方案中，KD是通过表面等离子共振(例如BIACORETM)测量的；在另一个实施方案中，KD是通过ELISA测量的。
短语“双特异性抗体”包括能够选择性地结合两个或更多个表位的抗体。双特异性抗体通常包含两条不完全相同的重链，其中每条重链特异性地结合不同的表位—在两种不同的分子上(例如两个不同免疫原上的不同表位)或在相同的分子上(例如同一免疫原上的不同表位)。如果双特异性抗体能够选择性地结合两个不同的表位(第一表位和第二表位)，则与所述第一重链对所述第二表位的亲和力相比，所述第一重链对所述第一表位的亲和力将通常低至少一至二或三或四或更多个数量级，反之亦然。所述双特异性抗体所特异性结合的表位可以在相同或不同的靶标上(例如，在相同或不同的蛋白上)。可例如，通过将识别同一免疫原上的不同表位的重链相结合来制备双特异性抗体。例如，编码识别同一免疫原的不同表位的重链可变序列的核酸序列可与编码相同或不同重链恒定区的核酸序列相融合，并且这种序列可在表达免疫球蛋白轻链的细胞中表达。典型的双特异性抗体具有两条重链，其中每一条具有三个重链CDR，随后是(N-末端至C-末端)CH1结构域，铰链，CH2结构域和CH3结构域；和免疫球蛋白轻链，其不赋予表位结合的特异性但是能够与每条重链缔合，或者能够与每条重链缔合并且能够结合重链表位结合区所结合的一个或多个表位，或者能够与每条重链缔合并且使得所述重链中的一条或者两条能够与一个或两个表位相结合。
术语“细胞”包括适于表达重组核酸序列的任何细胞。细胞包括下列的细胞：原核和真核(单细胞或多细胞)，细菌细胞(例如大肠杆菌的菌株、芽孢杆菌属、链霉菌属等)，分枝杆菌细胞，真菌细胞，酵母细胞(例如，酿酒酵母，裂殖酵母，毕赤酵母，甲醇毕赤酵母等)，植物细胞，昆虫细胞(例如SF-9，SF-21，杆状病毒感染的昆虫细胞，粉纹夜蛾等)，非人动物细胞，人细胞，或细胞融合物例如，杂交瘤或四价体瘤(quadroma)。在一些实施方案中，所述细胞是人，猴，猿，仓鼠，大鼠或小鼠细胞。在一些实施方案中，所述细胞是真核的并且选自下列细胞:CHO(例如CHO K1，DXB-11CHO，Veggie-CHO)，COS(例如COS-7)，视网膜细胞，Vero，CV1，肾(例如HEK293，293 EBNA，MSR 293，MDCK，HaK，BHK)，HeLa，HepG2，WI38，MRC 5，Colo205，HB 8065，HL-60，(例如BHK21)，Jurkat，Daudi，A431(表皮)，CV-1，U937，3T3，L细胞，C127细胞，SP2/0，NS-0，MMT 060562，塞尔托利氏细胞，BRL 3A细胞，HT1080细胞，骨髓瘤细胞，肿瘤细胞，和源自前述细胞的细胞系。在一些实施方案中，所述细胞包含一个或多个病毒基因，例如表达病毒基因的视网膜细胞(例如PER.C6TM细胞)。
短语“互补决定区”或术语“CDR”包括由生物体的免疫球蛋白基因的核酸序列编码的氨基酸序列，其通常(即在野生型动物中)出现在免疫球蛋白分子(例如抗体或T细胞受体)的轻链或重链的可变区中的两个框架区之间。CDR可由例如下列编码：种系序列或者经重排或未重排的序列，以及例如由幼稚或成熟的B细胞或T细胞编码。CDR可以是经体细胞突变的(例如与动物种系中所编码的序列不同)，人源化的，和/或以氨基酸置换、添加或缺失进行修饰的。在一些情形中(例如，对于CDR3)，CDR可由两个或更多个序列(例如种系序列)编码，所述两个或更多个序列是不连续的(例如，在未重排的核酸序列中)但是在B细胞核酸序列中是连续的，例如作为剪接或连接所述序列的结果(例如V-D-J重组以形成重链CDR3)。
当用于描述保守的氨基酸置换时，术语"保守的”包括一个氨基酸残基被含有具有相似化学特性(例如电荷或疏水性)的侧链R基团的另一个氨基酸残基所置换。通常，保守的氨基酸置换将不会实质上改变目的蛋白的功能特性，例如，可变区以所需的亲和力特异性结合靶表位的能力。含有具有相似化学特性的侧链的氨基酸的组的实例包括：脂肪族侧链，例如甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸和异亮氨酸；脂肪族-羟基侧链，例如丝氨酸和苏氨酸；含有酰胺的侧链，例如天冬酰胺和谷氨酰胺；芳香族侧链，例如苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸；碱性侧链，例如赖氨酸，精氨酸和组氨酸；酸性侧链，例如天冬氨酸和谷氨酸；以及含硫的侧链，例如半胱氨酸和甲硫氨酸。保守性氨基酸置换组包括例如，缬氨酸/亮氨酸/异亮氨酸，苯丙氨酸/酪氨酸，赖氨酸/精氨酸，丙氨酸/缬氨酸，谷氨酸/天冬氨酸，天冬酰胺/谷氨酰胺。在一些实施方案中，保守性氨基酸置换可以是用丙氨酸置换蛋白中的任何天然残基，如在例如丙氨酸扫描诱变中所使用的。在一些实施方案中，进行的保守性置换在PAM250log-可能性矩阵(在Gonnet等人(1992)Exhaustive Matching of the Entire ProteinSequence Database，Science 256:1443-45中公开，在此通过引用而并入)中具有正值。在一些实施方案中，所述置换是中等保守的置换，其中所述置换在PAM250log-可能性矩阵中具有非负值。
在一些实施方案中，免疫球蛋白轻链或重链中的残基位置以一个或多个保守性氨基酸置换而不同。在一些实施方案中，免疫球蛋白轻链或其功能性片段(例如允许从例如B细胞表达和分泌的片段)中的残基位置与那些在本文中列出了其氨基酸序列的轻链不完全相同，但是以一个或多个保守性氨基酸置换而不同。
短语“表位结合蛋白”包括具有至少一个CDR并且能够选择性地识别表位的蛋白，例如，能够以约1微摩尔或更低的KD(例如约1x 10-6M，1x 10-7M，1x 10-9M，1x 10-9M，1x 10- 10M，1x 10-11M，或约1x 10-12M的KD)结合表位。治疗性的表位结合蛋白(例如治疗性抗体)通常要求纳摩尔或皮摩尔范围内的KD。
短语“功能性片段”包括表位结合蛋白的片段，所述片段能够被表达、分泌并且以微摩尔、纳摩尔或皮摩尔范围内的KD特异性地结合表位。特异性识别包括具有至少在微摩尔范围、纳摩尔范围或皮摩尔范围内的KD。
术语“种系”包括指非体细胞突变的细胞(例如非体细胞突变的B细胞或pre-B细胞或造血细胞)中的免疫球蛋白核酸序列。
短语“重链”或“免疫球蛋白重链”包括来自任何生物体的免疫球蛋白重链恒定区序列。除非另行指明，重链可变结构域包括三个重链CDR和四个FR区域。重链的片段包括CDR，CDR和FR，以及它们的组合。在可变结构域之后，典型的重链具有(从N-末端至C-末端)CH1结构域，铰链，CH2结构域和CH3结构域。重链的功能性片段包括这样的片段：其能够特异性地识别表位(例如，以微摩尔、纳摩尔或皮摩尔范围内的KD识别表位)，能够表达并从细胞分泌，和包含至少一个CDR。
当与序列相关联而使用时，术语“同一性”包括如由本领域中已知的、可被用于测量核苷酸和/或氨基酸序列同一性的多个不同的算法确定的同一性。在本文中所描述的一些实施方案中，同一性是使用下列确定的：ClustalW v.1.83(slow)比对(采用10.0的开放缺口处罚，0.1的延伸缺口处罚)，和使用Gonnet相似性矩阵(MacVectorTM 10.0.2，MacVector Inc.，2008)。关于序列同一性所比较的序列的长度将取决于特定的序列，但是在轻链恒定结构域的情形中，所述长度应该含有这样的序列：其长度足以折叠成为能够自我缔合以形成典型轻链恒定结构域的轻链恒定结构域，例如能够形成两个包含β链的β片并且能够与人或小鼠的至少一个CH1结构域相互作用。在CH1结构域的情形中，序列的长度应当含有这样的序列：其长度足以折叠成为CH1结构域，所述CH1结构域能够形成两个包含β链的β片并且能够与小鼠或人的至少一个轻链恒定结构域相互作用。
短语“免疫球蛋白分子”包括两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链。所述重链可以相同或不同，且所述轻链可以相同或不同。
短语“轻链”包括来自任何生物体的免疫球蛋白轻链序列，并且除非另行指明，其包括人κ和λ轻链，VpreB以及替代轻链(surrogate light chain)。除非另行指明，轻链可变(VL)结构域通常包括三个轻链CDR和四个框架(FR)区。通常，全长轻链从氨基端到羧基端包括VL结构域(其包括FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4)，和轻链恒定结构域。轻链包括，例如不选择性地结合表位结合蛋白(它们出现在所述表位结合蛋白中)所选择性地结合的第一或第二表位的那些。轻链也包括结合和识别、或者协助重链结合和识别表位结合蛋白(它们出现在所述表位结合蛋白中)所选择性地结合的一个或多个表位的那些。常见的轻链是源自人Vκ1-39Jκ5基因区段或人Vκ3-20Jκ1基因区段的那些，并且包括它们的体细胞突变的版本(例如，亲和成熟的)。
短语“微摩尔范围”意在指1-999微摩尔；短语“纳摩尔范围”意在指1-999纳摩尔；短语“皮摩尔范围”意在指1-999皮摩尔。
短语“体细胞突变的”包括指来自经历了类别转换的B细胞的核酸序列，其中所述经类别转换的B细胞中的免疫球蛋白可变区的核酸序列(例如，重链可变结构域或包括重链CDR或者FR序列)与类别转换之前的B细胞中的核酸序列不完全相同，例如未经历类别转换的B细胞和经历了类别转换的B细胞之间在CDR或框架核酸序列中的差异。“体细胞突变的”包括指来自与非亲和-成熟的B细胞中的相应免疫球蛋白可变区序列(即，种系细胞的基因组中的序列)不完全相同的亲和-成熟的B细胞的核酸序列。短语“体细胞突变的”也包括指使B细胞暴露于目的表位之后来自所述B细胞的免疫球蛋白可变区核酸序列，其中所述核酸序列区别于使所述B细胞暴露于目的表位之前的相应核酸序列。短语“体细胞突变的”是指来自如下抗体的序列：所述抗体是响应于免疫原刺激而在具有人免疫球蛋白可变区核酸序列的动物(例如小鼠)中产生的，并且其产生自所述动物中固有运行的选择过程。
当指核酸序列时，术语“未重排的”包括在动物细胞的种系中存在的核酸序列。
短语“可变结构域”包括免疫球蛋白轻链或重链(按所需进行修饰)的氨基酸序列，所述序列以从N-末端至C-末端的顺序包含下列氨基酸区域(除非另行指明):FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。
共有轻链(common light chain)
之前的制备有用的多特异性表位结合蛋白(例如双特异性抗体)的努力被通常有共同范式的多种问题所阻碍:序列的体外选择或操控以合理地工程化，或者通过尝试-和-错误(适于配对异二聚双特异性人免疫球蛋白的形式)进行工程化。不幸地，大多数(如果不是所有的)体外工程化方法主要提供适于(如果有的话)个体分子的即时定位。另一方面，未曾实现采用复杂生物体来选择能够产生人类治疗剂的适当配对的体外方法。
一般地，幼稚小鼠序列常常不是用于人治疗序列的良好来源。至少由于这一原因，产生与共有人轻链配对的小鼠重链免疫球蛋白可变区具有有限的实际用处。更多的体外工程化努力将花费在尝试-和-错误方法上，以试图人源化小鼠重链可变序列，同时希望保留表位特异性和亲和力而维持与共有人轻链偶联的能力，这具有不确定的结果。在此种过程结束时，终产物可保持某些特异性和亲和力，并与共有轻链缔合，但是在人中的最终免疫原性将有可能仍是严重的风险。
因此，用于制备人治疗剂的合适的小鼠将包括人重链可变区基因区段的适当大的集合，替代内源小鼠重链可变区基因区段。所述人重链可变区基因区段应当能够与内源小鼠重链恒定结构域重排及重组以形成反向嵌合重链(即，包含人可变结构域和小鼠恒定区的重链)。所述重链应当能够进行类别转换和体细胞超突变，从而可获得重链可变结构域的适当大的集合，以使小鼠选择能够与人轻链可变区的有限的集合相缔合的重链。
针对多个重链选择共有轻链的小鼠具有实际的用处。在多种实施方案中，在只能表达共有轻链的小鼠中表达的抗体将具有能够与完全相同或基本上完全相同的轻链缔合且一起表达的重链。这在制备双特异性抗体中是特别有用的。例如，可用第一免疫原免疫接种此类小鼠以产生表达特异性结合第一表位的抗体的B细胞。可用第二免疫原免疫接种所述小鼠(或遗传学上相同的小鼠)以产生表达特异性结合第二表位的抗体的B细胞。可从所述B细胞克隆可变重链区域并使其与相同的重链恒定区域以及相同的轻链一起表达，并在细胞中表达以制备双特异性抗体，其中所述双特异性抗体的轻链组分经小鼠选择以与所述轻链组分缔合并一起表达。
本发明人对小鼠进行了工程化以产生将与相当多样的重链家族适当配对的免疫球蛋白轻链，所述重链家族包括其可变区偏离种系序列(例如亲和成熟的或体细胞突变的可变区)的重链。在多种实施方案中，小鼠被设计为使人轻链可变结构域与包含体细胞突变的人重链可变结构域配对，因此使得能够产生适于用作人治疗剂的高亲和力结合蛋白的途径。
经过生物体内长且复杂的抗体选择过程，所述经遗传工程化的小鼠在使人重链可变结构域的多样集合与有限数目的人轻链选择配对方面产生了生物学上适当的选择。为了实现这一点，小鼠被工程化以展示有限数目的人轻链可变结构域选择连同广泛的人重链可变结构域选择。当用免疫原刺激后，所述小鼠使其集合中的解决方案数目最大化，以产生针对所述免疫原的抗体，主要或唯一地受到其集合中的轻链选择数目的限制。在多种实施方案中，这包括允许小鼠实现轻链可变结构域的合适的和相容的体细胞突变，然而所述突变将与种类相对多样的人重链可变结构域(特别包括体细胞突变的人重链可变结构域)相容。
为了实现轻链选择的有限的集合，对小鼠进行工程化以使其在制备或重排幼稚小鼠轻链可变结构域的能力方面是无功能的或基本上无功能的。这可通过例如缺失小鼠的轻链可变区基因区段来实现。然后，内源小鼠基因座可被所选择的外源的合适的人轻链可变区基因区段修饰，所述人轻链可变区基因区段与内源小鼠轻链恒定结构域可操作地连接，连接的方式使得所述外源人可变区基因区段能够与内源小鼠轻链恒定区基因重排及重组并形成经重排的反向嵌合轻链基因(人可变，小鼠恒定)。在多种实施方案中，轻链可变区能够成为经体细胞突变的。在多种实施方案中，为了使轻链可变区获得体细胞突变的能力最大化，在小鼠中保留了适当的增强子。例如，当修饰小鼠κ基因座，以用人κ可变区基因区段替代内源小鼠κ可变区基因区段时，有功能地保留了小鼠κ内含子增强子和小鼠κ3’增强子，或者使得它们不被干扰。
提供了经遗传工程化的小鼠，其表达与多种反向嵌合(人可变，小鼠恒定)重链缔合的反向嵌合(人可变，小鼠恒定)轻链的有限的集合。在多种实施方案中，内源小鼠κ轻链可变区基因区段缺失并被与内源小鼠κ恒定区基因可操作地连接的单个(或两个)人轻链可变区基因区段替换。在使得人轻链可变区基因区段的体细胞超突变最大化的实施方案中，保留了小鼠κ内含子增强子和小鼠κ3’增强子。在多种实施方案中，小鼠还包含：无功能的λ轻链基因座，或者其缺失，或者使得所述基因座不能产生λ轻链的缺失。
提供了经遗传工程化的小鼠，在多种实施方案中，所述小鼠包含缺少内源小鼠轻链可变基因区段且包含人可变基因区段的轻链可变区基因座，在一个实施方案中，是与小鼠恒定区可操作地连接的重排的人V/J序列，其中所述基因座能够进行体细胞超突变，且其中所述基因座表达包含与小鼠恒定区相连的人V/J序列的轻链。因此，在多种实施方案中，所述基因座包含与正常的或野生型水平的体细胞超突变相关联的小鼠κ3’增强子。
在多种实施方案中，当用目的抗原免疫接种时，经遗传工程化的小鼠产生展现出人免疫球蛋白重链可变区的多种重排的B细胞，所述重链可变区与一种或两种重排的轻链一起表达及行使功能，这包括下述实施方案：其中所述一种或两种轻链包含含有例如1至5个体细胞突变的人轻链可变区。在多种实施方案中，如此表达的人轻链能够与在所述小鼠中表达的任何人免疫球蛋白重链可变区缔合并一起表达。
结合多于一个表位的表位结合蛋白
本文所述的组合物和方法可用于制备以高亲和力结合多于一个表位的结合蛋白，例如双特异性抗体。本发明的优势包括选择适当高的结合(例如亲和成熟的)重链免疫球蛋白链的能力，每种所述重链免疫球蛋白链都将与单一的轻链缔合。
合成和表达双特异性结合蛋白是有问题的，这一部分是由于与鉴别能够与两种不同的重链缔合并一起表达的合适的轻链相关的问题，一部分是由于分离的问题。本文中所描述的方法和组合物允许经遗传修饰的小鼠通过其它方面为天然的过程来选择能够与多于一种重链(包括经体细胞突变的(例如亲和成熟的)重链)缔合及一起表达的合适的轻链。可鉴别来自如本文所述的经免疫接种的小鼠[其表达具有反向嵌合重链(即，人可变和小鼠恒定)的亲和成熟的抗体]的合适的B细胞的人VL和VH序列，并将其与合适的人恒定区基因序列(例如，人IgG1)符合读框地克隆到表达载体中，其中所述经免疫接种的小鼠。可制备两种此类构建体，其中每种构建体编码结合不同表位的人重链可变结构域。种系序列中的或者来自B细胞(所述B细胞中的序列经体细胞突变)的人VL之一(例如，人Vκ1-39Jκ5或人Vκ3-20Jκ1)可符合读框地与合适的人恒定区基因(例如，人κ恒定基因)融合。可将这三种完全人重链和轻链构建体置于合适的细胞中用于表达。所述细胞将表达两个主要的种类:具有完全相同的轻链的同二聚重链，和具有完全相同的轻链的异二聚重链。为了允许将这些主要的种类容易地分离，对所述重链之一进行修饰以省略蛋白A-结合决定簇，这产生了同二聚结合蛋白与异二聚结合蛋白的不同亲和力。解决这一问题的组合物和方法被描述于USSN12/832,838中，其于2010年6月25日递交，题目为“Readily Isolated BispecificAntibodies with Native Immunoglobulin Format”，作为US 2010/0331527A1被公开，在此通过引用而并入。
一方面，提供了如本文所述的表位结合蛋白，其中人VL和VH序列源自本文所述的、经包含目的表位的抗原免疫接种的小鼠。
在一个实施方案中，提供了表位结合蛋白，其包含第一和第二多肽，所述第一多肽从N-末端至C-末端包含：选择性地结合第一表位的第一表位结合区，随后是恒定区，所述恒定区包含选自IgG1、IgG2、IgG4及其组合的人IgG的第一CH3区；所述第二多肽从N-末端至C-末端包含：选择性地结合第二表位的第二表位结合区，随后是恒定区，所述恒定区包含选自IgG1、IgG2、IgG4及其组合的人IgG的第二CH3区，其中所述第二CH3区包含减少或消除所述第二CH3结构域与蛋白A的结合的修饰。
在一个实施方案中，所述第二CH3区包含H95R修饰(根据IMGT外显子编号；根据EU编号为H435R)。在另一个实施方案中，所述第二CH3区还包含Y96F稀释(IMGT；根据EU为Y436F)。
在一个实施方案中，所述第二CH3区来自经修饰的人IgG1，并进一步包含选自下列的修饰：D16E，L18M，N44S，K52N，V57M和V82I(IMGT；根据EU为D356E，L358M，N384S，K392N，V397M和V422I)。
在一个实施方案中，所述第二CH3区来自经修饰的人IgG2，并进一步包含选自下列的修饰：N44S，K52N和V82I(IMGT；根据EU为N384S，K392N和V422I)。
在一个实施方案中，所述第二CH3区来自经修饰的人IgG4，并且进一步包含选自下列的修饰：Q15R，N44S，K52N，V57M，R69K，E79Q和V82I(IMGT；根据EU为Q355R，N384S，K392N，V397M，R409K，E419Q和V422I)。
用于制备结合多于一个表位的表位结合蛋白的一种方法是用包含第一目的表位的抗原免疫接种根据本发明的第一小鼠，其中所述小鼠包含不含有能够重排并形成轻链的内源小鼠VL的内源免疫球蛋白轻链可变区基因座，其中在所述内源小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因座处，单一的人VL基因区段与小鼠内源轻链恒定区基因可操作地连接，并且所述人VL基因区段选自人Vκ1-39Jκ5和人Vκ3-20Jκ1，所述内源小鼠VH基因区段全部或部分地被人VH基因区段替代，从而使得由所述小鼠制备的免疫球蛋白重链仅仅或基本上是包含人可变结构域和小鼠恒定结构域的重链。当被免疫接种时，此类小鼠将制备反向嵌合抗体，其仅包含两个人轻链可变结构域之一(例如，人Vκ1-39Jκ5和人Vκ3-20Jκ1之一)。一旦鉴别了编码结合目的表位的VH的B细胞，可找回所述VH(以及任选地VL)的核苷酸序列(例如，通过PCR)并将其与合适的人免疫球蛋白恒定结构域符合读框地克隆到表达构建体中。可重复此过程以鉴别出结合第二表位的第二VH结构域，并且可找回第二VH基因序列并将其与第二合适的免疫球蛋白恒定结构域符合读框地克隆到表达载体中。所述第一和第二免疫球蛋白恒定结构域可以是相同或不同的同种型，并且所述免疫球蛋白恒定结构域之一(但另一个不是)可以如本文中或US 2010/0331527A1中所述被修饰，且所述表位结合蛋白可在合适的细胞中被表达并基于其与同二聚表位结合蛋白相比对于蛋白A的不同的亲和力而被分离，例如，如US 2010/0331527A1中所描述的。
在一个实施方案中，提供了用于制备双特异性表位结合蛋白的方法，所述方法包括鉴别来自如本文所描述的小鼠的第一亲和-成熟的(例如，包含一个或多个体细胞超突变)人VH核苷酸序列(VH1)，鉴别来自如本文所描述的小鼠的第二亲和-成熟的(例如，包含一个或多个体细胞超突变)人VH核苷酸序列(VH2)，将VH1与缺少如US 2010/0331527A1中所描述的蛋白A-决定簇修饰的人重链符合读框地克隆以形成重链1(HC1)，将VH2与含有如US2010/0331527A1中所描述的蛋白A-决定簇的人重链符合读框地克隆以形成重链2(HC2)，将包含HC1的表达载体以及包含HC2的相同或不同的表达载体引入细胞中，其中所述细胞还表达人免疫球蛋白轻链，所述人免疫球蛋白轻链包含与人轻链恒定结构域融合的人Vκ1-39/人Jκ5或人Vκ3-20/人Jκ1，允许所述细胞表达包含由VH1编码的VH结构域和由VH2编码的VH结构域的双特异性表位结合蛋白，以及基于其与单特异性同二聚表位结合蛋白相比结合蛋白A的不同能力来分离所述双特异性表位结合蛋白。在具体的实施方案中，HC1为IgG1，HC2为包含修饰H95R(IMGT；根据EU为H435R)且进一步包含修饰Y96F(IMGT；根据EU为Y436F)的IgG1。在一个实施方案中，所述由VH1编码的VH结构域，所述由VH2编码的VH结构域，或者两者，是经体细胞突变的。
与共有人VL一起表达的人VH基因
使来自针对四种不同的抗原产生的亲和-成熟的抗体的多种人可变区与它们的共有轻链一起表达，或者与选自人Vκ1-39Jκ5、人Vκ3-20Jκ1或人VpreBJλ5中的至少一种的人轻链一起表达(见实施例1)。对于针对所述抗原中的每一个的抗体，使来自不同基因家族的经体细胞突变的高亲和力重链与重排的人种系Vκ1-39Jκ5和Vκ3-20Jκ1区域成功地配对并从表达所述重链和轻链的细胞中分泌。对于Vκ1-39Jκ5和Vκ3-20Jκ1，VH结构域源自下列有利地表达的人VH家族:1-2，1-8，1-24，2-5，3-7，3-9，3-11，3-13，3-15，3-20，3-23，3-30，3-33，3-48，4-31，4-39，4-59，5-51和6-1。因此，被工程化以表达来自Vκ1-39Jκ5和Vκ3-20Jκ1之一或两者的人VL结构域的有限的集合的小鼠将产生多样的体细胞突变的人VH结构域群体，所述VH结构域来自经修饰以用人VH基因区段替代小鼠VH基因区段的VH基因座。
小鼠被遗传工程化以表达与单一的经重排的轻链(例如，Vκ1-39/J或Vκ3-20/J)缔合的反向嵌合(人可变，小鼠恒定)的免疫球蛋白重链，当所述小鼠被目的抗原免疫接种时，其产生包含多种人V区段重排且表达多种高亲和力抗原特异性抗体的B细胞，所述抗体关于其阻碍抗原与其配体相结合的能力方面，以及关于其结合所述抗原的变体的能力方面具有多样的特性(见实施例5至10)。
因此，本文所述的小鼠和方法可用于制备和选择人免疫球蛋白重链可变结构域，这包括体细胞突变的人重链可变结构域，所述重链可变结构域产生自多样的重排，其展现出广泛的亲和力(包括展现出约为纳摩尔或更少的KD)，广泛的特异性(这包括结合至同一抗原的不同表位)，并且与相同或基本上相同的人免疫球蛋白轻链可变区缔合及一起表达。
提供了下列实施例以向本领域普通技术人员描述如何制备和使用本发明的方法和组合物，而并不意在限制发明人所认为的发明的范围。进行了努力以确保关于所使用的数字(例如，含量、温度等)的准确性，但是应当将一些实验错误和偏差计算在内。除非另外指明，份数是重量份数，分子量是平均分子量，温度是以摄氏度显示的，且压力是或接近大气的压力。
实施例
实施例1.鉴别与所选的人轻链可变区相缔合的人重链可变区
构建了体外表达系统以确定单一经重排的人种系轻链是否能够与来自抗原特异性人抗体的人重链共表达。
用于在经遗传修饰的小鼠中产生人抗体的方法是已知的(见例如，US 6,596,541，Regeneron Pharmaceuticals，)。技术涉及产生经遗传修饰的小鼠，所述小鼠具有包含与内源小鼠恒定区基因座可操作地连接的人重链和轻链可变区的基因组，从而所述小鼠响应于抗原刺激而产生包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。编码由小鼠产生的抗体的重链和轻链的可变区的DNA完全是人类的。起初，分离了具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体。如下文中所描述的，表征了所述抗体并且就所需的特征对抗体进行选择，所述特征包括亲和力、选择性、表位等。用所需的人恒定区替代小鼠恒定区以产生完全的人抗体，其含有非-IgM同种型，例如，野生型或者经修饰的IgG1，IgG2，IgG3或IgG4。虽然所选择的恒定区可根据具体的应用而变化，高亲和性抗原结合以及靶特异性特征保留在可变区中。
用促进血管生成的生长因子(抗原C)免疫接种小鼠并且分离抗原特异性人抗体，使用本领域中认可的标准技术就V基因使用进行测序。将所选的抗体克隆至人重链和轻链恒定区，并且选择了69种重链用于与下列三种人轻链之一进行配对：(1)与人κ恒定区相连的共有κ轻链，(2)与人κ恒定区相连的经重排的人种系Vκ1-39Jκ5，或(3)与人κ恒定区相连的经重排的人种系Vκ3-20Jκ1。使用标准的技术将每一对重链和轻链共转染到CHO-K1细胞中。在ELISA测定中，通过抗人IgG检测上清中抗体的存在。对于每一对重链/轻链确定抗体效价(ng/ml)并且将不同的经重排的种系轻链的效价与用亲本抗体分子(即，与共有轻链配对的重链)获得的效价进行比较，并且计算出原生效价(nativetiter)的百分比(表1)。VH:重链可变基因。ND:在目前的实验条件下没有检测到表达。
在类似的实验中，用数种不同的抗原免疫接种小鼠，并且就其与不同的经重排的人种系轻链配对的能力测试所选择的抗原特异性人抗体的重链(如上文所述)。在这一实验中所使用的抗原包括参与胆固醇稳态的酶(抗原A)，参与调控葡萄糖稳态的血清激素(抗原B)，促进血管生成的生长因子(抗原C)和细胞表面受体(抗原D)。从每一个免疫接种组的小鼠中分离抗原特异性抗体并且对重链和轻链可变区进行克隆和测序。由所述重链和轻链的序列，确定V基因使用，且将所选择的重链与它们的共有轻链或经重排的人种系Vκ1-39Jκ5区配对。将每一对重链/轻链共转染到CHO-K1细胞中并且在ELISA测定中通过抗人IgG来检测上清液中抗体的存在。对于每一对重链/轻链确定抗体效价(μg/ml)，并且将不同的经重排的人种系轻链的效价与用亲本抗体分子(即，与共有轻链配对的重链)获得的效价进行比较，计算了原生效价的百分比(表2)。VH：重链可变基因。Vκ：κ轻链可变基因。ND：在目前的实验条件下没有检测到表达。
从这些实验获得的结果显示出，来自不同基因家族的体细胞突变的、高亲和力重链能够与重排的人种系Vκ1-39Jκ5和Vκ3-20Jκ1区域配对并作为正常的抗体分子从所述细胞中分泌。如表1中所显示的，与亲本抗体的共有轻链相比，当与经重排的人Vκ1-39Jκ5轻链配对时，对于约61％的(69中的42个)重链，抗体的效价增加，当与经重排的人Vκ3-20Jκ1轻链配对时，对于约29％(69中的20个)的重链，抗体的效价增加。与亲本抗体的共有轻链相比，对于约20％(69中的14个)的重链，两种经重排的人种系轻链都赋予了表达的增加。如表2中所显示的，与亲本抗体的共有轻链相比，经重排的人种系Vκ1-39Jκ5区域赋予特异于一系列不同类别的抗原的数种重链表达的增加。与亲本抗体的共有轻链相比，对于约35％(15/43)的重链，抗体效价增加多于两倍。对于两种重链(315和316)，与亲本抗体相比，增加大于十倍。在相对于亲本抗体的共有轻链显示出表达增加的所有重链中，家族三(VH3)重链相比于其它重链可变区基因家族是超比例代表的。这表明人VH3重链与经重排的人种系Vκ1-39Jκ5和Vκ3-20Jκ1轻链配对的有利关系。
实施例2.产生经重排的人种系轻链基因座
使用技术(见例如，美国专利号6,586,251和Valenzuela等人(2003)High-throughput engineering of the mouse genome coupled with high-resolution expression analysis，Nature Biotech.21(6):652-659)制备了多种经重排的人种系轻链靶向载体以修饰小鼠基因组细菌人工染色体(BAC)克隆302g12和254m04(Invitrogen)。使用这两种BAC克隆，对基因组构建体进行工程化以包含单一经重排的人种系轻链区域并将其插入内源κ轻链基因座内，所述内源κ轻链基因座之前经修饰以删除内源κ可变和连接基因区段。
A.构建经重排的人种系轻链靶向载体
使用本领域中所认可的标准分子生物学技术制备了三种不同的经重排的人种系轻链区域。用于构建这三种区域的人可变基因区段包括经重排的人Vκ1-39Jκ5序列，经重排的人Vκ3-20Jκ1序列和经重排的人VpreBJλ5序列。
通过从新DNA合成(Integrated DNA Technologies)制备了含有小鼠Vκ3-7基因的外显子1(编码前导肽)和内含子1的DNA区段。包括了5’非翻译区的一部分，直至天然存在的BlpI限制性酶位点。从人基因组BAC文库中PCR扩增了人Vκ1-39和Vκ3-20基因的外显子。正向引物具有含有小鼠Vκ3-7基因的内含子1的剪接受体位点的5’延伸。用于人Vκ1-39序列的PCR的反向引物包括编码人Jκ5的延伸，而用于人Vκ3-20序列的PCR的反向引物包括编码人Jκ1的延伸。通过从新DNA合成(Integrated DNA Technologies)制备了人VpreBJλ5序列。从质粒pBS-296-HA18-PISceI中PCR扩增了包括剪接供体位点的人Jκ-Cκ内含子的一部分。正向PCR引物包括编码人Jκ5、Jκ1或Jλ5序列的一部分的延伸。反向引物包括PI-SceI位点，其之前被工程化到了内含子中。
通过重叠延伸PCR将小鼠Vκ3-7外显子1/内含子1，人可变轻链外显子，和人Jκ-Cκ内含子片段连接到一起，用BlpI和PI-SceI消化，并连接到质粒pBS-296-HA18-PISceI中，所述质粒含有来自人Vκ3-15可变基因区段的启动子。用侧翼有NotI和AscI位点的FRT化的潮霉素盒替代质粒pBS-296-HA18-PISceI中的经lox化的潮霉素盒。将此质粒中的NotI/PI-SceI片段连接到经修饰的小鼠BAC 254m04中，所述经修饰的小鼠BAC 254m04含有小鼠Jκ-Cκ内含子的一部分，小鼠Cκ外显子以及小鼠κ基因座下游约75kb的基因组序列，其提供3’同源臂用于小鼠ES细胞中的同源重组。然后将该BAC的NotI/AscI片段连接到经修饰的小鼠BAC 302g12中，其含有FRT化的新霉素盒和内源κ基因座上游约23kb的基因组序列，用于小鼠ES细胞中的同源重组。
B.重排的人种系Vκ1-39Jκ5靶向载体(图1)
在经工程化的轻链插入物的5’和3’端引入限制性酶切位点，用于克隆到靶向载体中：5’端是AscI位点，3’端是PI-SceI位点。在5’AscI位点和3’PI-SceI位点之内，靶向构建体从5’至3’包括：含有从小鼠BAC克隆302g12获得的内源小鼠κ轻链基因座5’的序列的5’同源臂，FRT化的新霉素抗性基因，包括人Vκ3-15启动子、小鼠Vκ3-7可变基因区段的前导序列、小鼠Vκ3-7可变基因区段的内含子序列、经重排的人种系Vκ1-39Jκ5区域的开放阅读框的基因组序列，含有人Jκ-Cκ内含子的一部分的基因组序列，以及含有从小鼠BAC克隆254m04获得的内源小鼠Jκ5基因区段的3’的序列的3’同源臂(图1，中间)。内源小鼠κ轻链基因座上游和Jκ基因区段最3’端下游(例如，内源3’增强子)的基因和/或序列未经靶向构建体修饰(见图1)。SEQ ID NO:1中显示了经工程化的人Vκ1-39Jκ5基因座的序列。
使用位于经重排的人种系轻链区域内的序列处的引物，通过聚合酶链式反应(PCR)证实了经重排的人种系Vκ1-39Jκ5区域靶向插入到BAC DNA中。简要地，用引物ULC-m1F(AGGTGAGGGT ACAGATAAGT GTTATGAG；SEQ ID NO:2)和ULC-m1R(TGACAAATGCCCTAATTATA GTGATCA；SEQ ID NO:3)证实了小鼠Vκ3-7前导序列3’的内含子序列。用引物1633-h2F(GGGCAAGTCA GAGCATTAGC A；SEQ ID NO:4)和1633-h2R(TGCAAACTGG ATGCAGCATAG；SEQ ID NO:5)证实了经重排的人种系Vκ1-39Jκ5区域的开放阅读框。用引物neoF(GGTGGAGAGG CTATTCGGC；SEQ ID NO:6)和neoR(GAACACGGCG GCATCAG；SEQ ID NO:7)证实了新霉素盒。然后使用经靶向的BAC DNA电穿孔小鼠ES细胞，以产生经修饰的ES细胞，用于产生表达经重排的人种系Vκ1-39Jκ5区的嵌合小鼠。
通过TAQMANTM筛选以及利用特异于插入到内源基因座中的经工程化的Vκ1-39Jκ5轻链区的探针的染色体核型分析证实了阳性ES细胞克隆。简要地，探针neoP(TGGGCACAACAGACAATCGG CTG；SEQ ID NO:8)在新霉素标记物基因内结合，探针ULC-m1P(CCATTATGATGCTCCATGCC TCTCTGTTC；SEQ ID NO:9)在小鼠Vκ3-7前导序列3’的内含子序列中结合，探针1633h2P(ATCAGCAGAA ACCAGGGAAA GCCCCT；SEQ ID NO:10)在经重排的人种系Vκ1-39Jκ5开放阅读框内结合。然后使用阳性ES细胞克隆植入雌性小鼠以产生表达种系Vκ1-39Jκ5轻链区的一窝幼崽。
备选地，用表达FLP的构建体转染携带经重排的人种系Vκ1-39Jκ5轻链区的ES细胞，从而移除由靶向构建体引入的FRT化的新霉素盒。任选地，通过与表达FLP重组酶的小鼠繁育来移除新霉素盒(例如，US 6,774,279)。任选地，所述新霉素盒保留在所述小鼠中。
C.经重排的人种系Vκ3-20Jκ1靶向载体(图2)
以类似的方式，使用靶向构建体制备了表达经重排的人种系Vκ3-20Jκ1区域的经工程化的轻链基因座，所述靶向构建体从5’至3’包括：含有从小鼠BAC克隆302g12获得的内源小鼠κ轻链基因座5’的序列的5’同源臂，FRT化的新霉素抗性基因，包括人Vκ3-15启动子、小鼠Vκ3-7可变基因区段的前导序列、小鼠Vκ3-7可变基因区段的内含子序列、经重排的人种系Vκ3-20Jκ1区域的开放阅读框的基因组序列，含有人Jκ-Cκ内含子的一部分的基因组序列，以及含有从小鼠BAC克隆254m04获得的内源小鼠Jκ5基因区段的3’的序列的3’同源臂(图2，中间)。SEQ ID NO:11中显示了经工程化的人Vκ3-20Jκ1基因座的序列。
使用位于经重排的人种系Vκ3-20Jκ1轻链区域内的序列处的引物，通过聚合酶链式反应(PCR)证实了经重排的人种系Vκ3-20Jκ1区域靶向插入到BAC DNA中。简要地，用引物ULC-m1F(SEQ ID NO:2)和ULC-m1R(SEQ ID NO:3)证实了小鼠Vκ3-7前导序列3’的内含子序列。用引物1635-h2F(TCCAGGCACC CTGTCTTTG；SEQ ID NO:12)和1635-h2R(AAGTAGCTGCTGCTAACACT CTGACT；SEQ ID NO:13)证实了经重排的人种系Vκ3-20Jκ1区域的开放阅读框。用引物neoF(SEQ ID NO:6)和neoR(SEQ ID NO:7)证实了新霉素盒。然后使用靶向的BACDNA电穿孔小鼠ES细胞以产生经修饰的ES细胞，用于产生表达经重排的人种系Vκ3-20Jκ1轻链的嵌合小鼠。
通过TaqmanTM筛选以及利用特异于插入到内源κ轻链基因座中的经工程化的Vκ3-20Jκ1轻链区的探针的染色体核型分析证实了阳性ES细胞克隆。简要地，探针neoP(SEQ IDNO:8)在新霉素标记物基因内结合，探针ULC-m1P(SEQ ID NO:9)在小鼠Vκ3-7前导序列3’的内含子序列中结合，探针1635h2P(AAAGAGCCAC CCTCTCCTGC AGGG；SEQ ID NO:14)在人Vκ3-20Jκ1开放阅读框内结合。然后使用阳性ES细胞克隆植入雌性小鼠，以产生表达人种系Vκ3-20Jκ1轻链区的一窝幼崽。
备选地，用表达FLP的构建体转染携带人种系Vκ3-20Jκ1轻链区的ES细胞，以移除由靶向构建体引入的FRT化的新霉素盒。任选地，可以通过与表达FLP重组酶的小鼠繁育来移除新霉素盒(例如，US 6,774,279)。任选地，所述新霉素盒保留在所述小鼠中。
D.重排的人种系VpreBJλ5靶向载体(图3)
以类似的方式，使用靶向构建体制备了表达经重排的人种系VpreBJλ5区域的经工程化的轻链基因座，所述靶向构建体从5’至3’包括：含有从小鼠BAC克隆302g12获得的内源小鼠κ轻链基因座5’的序列的5’同源臂，FRT化的新霉素抗性基因，包括人Vκ3-15启动子、小鼠Vκ3-7可变基因区段的前导序列、小鼠Vκ3-7可变基因区段的内含子序列、经重排的人种系VpreBJλ5区域的开放阅读框的基因组序列，含有人Jκ-Cκ内含子的一部分的基因组序列，以及含有从小鼠BAC克隆254m04获得的内源小鼠Jκ5基因区段的3’的序列的3’同源臂(图3，中间)。SEQ ID NO:15中显示了经工程化的人VpreBJλ5基因座的序列。
使用位于经重排的人种系VpreBJλ5区轻链区域内的序列处的引物，通过聚合酶链式反应(PCR)证实了经重排的人种系VpreBJλ5区域靶向插入到BAC DNA中。简要地，用引物ULC-m1F(SEQ ID NO:2)和ULC-m1R(SEQ ID NO:3)证实了小鼠Vκ3-7前导序列3’的内含子序列。用引物1616-h1F(TGTCCTCGGC CCTTGGA；SEQ ID NO:16)和1616-h1R(CCGATGTCATGGTCGTTCCT；SEQ ID NO:17)证实了经重排的人种系VpreBJλ5区域的开放阅读框。用引物neoF(SEQ ID NO:6)和neoR(SEQ ID NO:7)证实了新霉素盒。然后使用靶向的BAC DNA电穿孔小鼠ES细胞以产生经修饰的ES细胞，用于产生表达经重排的人种系VpreBJλ5轻链的嵌合小鼠。
通过TAQMANTM筛选以及利用特异于插入到内源κ轻链基因座中的经工程化的VpreBJλ5轻链区的探针的染色体核型分析证实了阳性ES细胞克隆。简要地，探针neoP(SEQID NO:8)在新霉素标记物基因内结合，探针ULC-m1P(SEQ ID NO:9)在小鼠Ig Vκ3-7前导序列中结合，探针1616h1P(ACAATCCGCC TCACCTGCAC CCT；SEQ ID NO:18)在人VpreBJλ5开放阅读框内结合。然后使用阳性ES细胞克隆植入雌性小鼠以产生表达种系轻链区的一窝幼崽。
备选地，用表达FLP的构建体转染携带经重排的人种系VpreBJλ5轻链区的ES细胞，以移除由靶向构建体引入的FRT化的新霉素盒。任选地，通过与表达FLP重组酶的小鼠繁育来移除新霉素盒(例如，US 6,774,279)。任选地，所述新霉素盒保留在所述小鼠中。
实施例3.产生表达单一经重排的人种系轻链的小鼠
使用上文所描述的靶向的ES细胞作为供体ES细胞，并通过方法(见例如，美国专利号7,294,754和Poueymirou等人(2007)F0 generation mice thatare essentially fully derived from the donor gene-targeted ES cells allowingimmediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1):91-99)将其引入8-细胞阶段的小鼠胚胎中。通过利用等位基因测定法的改进(Valenzuela等人,见上)的基因分型来鉴别独立地携带经工程化的人种系Vκ1-39Jκ5轻链区，Vκ3-20Jκ1轻链区或VpreBJλ5轻链区的其中所述等位基因测定法的改进检测独特的经重排的人种系轻链区域的存在。
对幼崽进行基因分型，并且选择了所述独特的经重排的人种系轻链区为杂合的幼崽用于表征经重排的人种系轻链区的表达。
实施例4.繁育表达单一经重排的人种系轻链的小鼠
A.内源Igλ敲除(KO)
为了优化所述经工程化的轻链基因座的使用，使携带所述经重排的人种系轻链区域之一的小鼠与含有内源λ轻链基因座中的缺失的另一小鼠繁育。以这种方式，所获得的后代将作为其唯一的轻链来表达实施例2中所述的经重排的人种系轻链区域。繁育是通过本领域中所认可的标准技术进行的，且备选地，繁育是由商业繁育者(例如，The JacksonLaboratory)进行的。就存在独特的轻链区域的和不存在内源小鼠λ轻链来筛选携带经工程化的轻链基因座和内源λ轻链基因座的缺失的小鼠品系。
B.人源化的内源重链基因座
使携带经工程化的人种系轻链基因座的小鼠与含有用人重链可变基因基因座替代了内源小鼠重链可变基因基因座的小鼠(见US 6,596,541；小鼠，Regeneron Pharmaceuticals，Inc.)繁育。所述小鼠包含含有与内源小鼠恒定区基因座可操作地连接的人重链可变区的基因组，从而所述小鼠响应于抗原刺激而产生包含人重链可变区和小鼠重链恒定区的抗体。分离了编码抗体的重链可变区的DNA，并使其与编码人重链恒定区的DNA可操作地连接。然后，在能够表达所述抗体的完全人重链的细胞中表达所述DNA。
获得了携带下列的小鼠：以人VH基因座替代了内源小鼠VH基因座，以及在内源κ轻链基因座处为单一经重排的人种系VL区。在用目的抗原进行了免疫接种后，获得了含有经体细胞突变的重链(人VH和小鼠CH)及单一人轻链(人VL和小鼠CL)的反向嵌合抗体。鉴别了表达所述抗体的B细胞的VH和VL核苷酸序列，并且通过使所述VH和VL核苷酸序列与人CH和CL核苷酸序列融合而在合适的表达系统中制备了完全的人抗体。
实施例5.由表达人重链和经重排的人种系轻链区的小鼠产生抗体
在使含有经工程化的人轻链区的小鼠与含有其它内源Ig基因座的修饰和缺失的多种所需品系繁育后(如实施例4中所述)，可用目的抗原免疫接种所选择的小鼠。
通常，用抗原刺激含有单一经重排的人种系轻链区之一的小鼠，并从所述动物的血清回收淋巴细胞(例如B细胞)。将所述淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生的杂交瘤细胞系，并且筛选和选择此类杂交瘤细胞系以鉴别产生含有人重链可变区和经重排的人种系轻链的、特异于用于免疫接种的抗原的抗体的杂交瘤细胞系。分离编码重链和轻链可变区的DNA并将其与所述重链和轻链的所需同型恒定区相连。由于存在内源小鼠序列和所述内源基因座中存在的任何其它顺式作用元件，每种抗体的单一轻链都可以是经体细胞突变的。这为包含单一轻链和多种重链序列的抗原特异性集合添加了额外的多样性。随后，在细胞(例如CHO细胞)中表达所产生的经克隆的抗体序列。备选地，从抗原特异性淋巴细胞中直接鉴别了编码抗原特异性嵌合抗体或所述轻链和重链的可变结构域的DNA。
起初，分离了具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体。如上文中所描述的，对所述抗体进行了表征并就所需的特征进行了选择，所述特征包括亲和性、选择性、表位等。用所需的人恒定区替代小鼠恒定区以产生含有经体细胞突变的人重链和源自本发明的经重排的人种系轻链区的单一轻链的完全的人抗体。合适的人恒定区包括，例如，野生型或经修饰的IgG1或IgG4。
用人细胞表面受体蛋白(抗原E)免疫接种下列分别的小鼠组：所述小鼠组含有人V，D和J基因区段对内源小鼠重链基因座的替换以及经工程化的种系Vκ1-39Jκ5人轻链区或经工程化的种系Vκ3-20Jκ1人轻链区(上文所述)对内源小鼠λ轻链基因座的替换。将抗原E直接施用到小鼠的后足垫上，进行6次连续注射，每3-4天注射一次。在注射前，将两至三微克抗原E与10μg的CpG寡核苷酸(Cat#tlrl-modn-ODN1826寡核苷酸；InVivogen，San Diego，CA)以及25μg的Adju-Phos(磷酸铝凝胶佐剂，Cat#H-71639-250；Brenntag Biosector，Frederikssund，丹麦)混合。在最终的抗原恢复(antigen recall)之前一共进行六次注射，所述抗原恢复在处死前3-5天进行。收集了第4次和第6次注射之后的血液并且通过标准的抗原特异性免疫测定来监测抗体免疫应答。
当实现了所需的免疫应答时，收集脾细胞并且将其与小鼠骨髓瘤细胞融合以保存其存活力并形成杂交瘤细胞系。筛选并选择所述杂交瘤细胞系以鉴别产生抗原E特异性共有轻链抗体的细胞系。使用这种技术获得了数种抗-抗原E特异性共有轻链抗体(即，具有人重链可变结构域，相同的人轻链可变结构域和小鼠恒定结构域的抗体)。
备选地，不与骨髓瘤细胞融合而从抗原阳性B细胞中直接分离抗-抗原E共有轻链抗体，如U.S.2007/0280945A1中所描述的，在此其全部内容通过引用而明确并入。使用这种方法，获得了数种完全的人的抗-抗原E共有轻链抗体(即，具有人重链可变结构域，经工程化的人Vκ1-39Jκ5轻链或经工程化的人Vκ3-20Jκ1轻链区，以及人恒定结构域的抗体)。
在下文所示的部分中详细描述了根据此实施例的方法所产生的示例性抗-抗原E共有轻链抗体的生物学特性。
实施例6.抗原-特异性共有轻链抗体中重链基因区段的使用
为了分析所产生的人抗-抗原E共用轻链抗体的结构，克隆并测序了编码重链抗体可变区的核酸。从所述抗体的核酸序列和预测的氨基酸序列，鉴别了所选择的共有轻链抗体的重链可变区(HCVR)的基因使用，所述所选择的共有轻链抗体获自含有经工程化的人Vκ1-39Jκ5轻链或经工程化的人Vκ3-20Jκ1轻链区的经免疫的小鼠。结果显示在表3和表4中，其显示当采用仅从源自人Vκ1-39或人Vκ3-20的轻链表达轻链的小鼠时，由于重排的多样性，根据本发明的小鼠从多种人重链基因区段产生抗原特异性共有轻链抗体。2、3、4和5家族的人VH基因区段与多种人DH区段和人JH区段重排以产生抗原特异性抗体。
实施例7.通过LuminexTM测定法确定抗原特异性共有轻链抗体的阻断能力
在基于珠子的测定法中，就阻断抗原E的天然配体(配体Y)与抗原E结合的能力测试了针对抗原E产生的98种人共有轻链抗体。
使抗原E的细胞外结构域(ECD)与两个myc表位标签和6X组氨酸标签(抗原E-mmH)缀合，并以MES缓冲液中20μg/mL的浓度与羧化微珠胺偶联。将混合物在室温下孵育两小时，随后用1M Tris pH 8.0对珠子进行灭活，之后在含有0.05％(v/v)Tween-20的PBS中清洗。然后使用含有2％(w/v)BSA(Sigma-Aldrich Corp.，St.Louis，MO)的PBS(IrvineScientific，Santa Ana，CA)封闭所述珠子。在96孔过滤板中，将含有抗原E特异性共有轻链抗体的上清液在缓冲液中进行1:15的稀释。制备了含有仿上清液的阴性对照，所述仿上清液含有与抗体上清液相同的介质组分。将经抗原E标记的珠子加入所述上清液中并在4℃孵育过夜。加入生物素化的配体Y蛋白(终浓度为0.06nM)并在室温下孵育两个小时。用与抗生蛋白链菌素(Moss Inc，Pasadena，MD)缀合的R-藻红蛋白确定与抗原E-myc-myc-6His标记的珠子结合的生物素化的配体Y的检测，随后在基于LuminexTM流式细胞术的分析仪中进行测量。从所有的样品中减去没有配体Y时样品的背景平均荧光强度(MFI)。通过用每个样品的减去了背景的MFI除以经调节的阴性对照值除以、乘以100、并从100减去所产生的值来计算阻断百分比。
在相似的实验中，就阻断抗原E与经配体Y标记的珠子相结合的能力测试了针对抗原E产生的相同的98种人共有轻链抗体。
简要地，使配体Y以在MES缓冲液中稀释的20μg/mL的浓度，与羧化微珠胺偶联。将混合物在室温下孵育两小时，随后用1M Tris pH 8对珠子进行灭活，然后在含有0.05％(v/v)Tween-20的PBS中进行清洗。然后用含有2％(w/v)BSA(Sigma-Aldrich Corp.，St.Louis，MO)的PBS(Irvine Scientific，Santa Ana，CA)对所述珠子进行封闭。在96孔过滤板中，将含有抗原E特异性共有轻链抗体的上清液在缓冲液中进行1:15的稀释。制备了含有仿上清液的阴性对照，所述仿上清液含有与抗体上清液相同的介质组分。加入生物素化的抗原E-mmH(终浓度为0.42nM)并在4℃孵育过夜。然后，向抗体/抗原E混合物中加入经配体Y标记的珠子并在室温下孵育两个小时。用与抗生蛋白链菌素(Moss Inc，Pasadena，MD)缀合的R-藻红蛋白确定与配体Y-珠子结合的生物素化的抗原E-mmH的检测，随后在基于LuminexTM流式细胞术的分析仪中进行测量。从所有的样品中减去没有抗原E时样品的背景平均荧光强度(MFI)。通过用每个样品的减去了背景的MFI除以经调节的阴性对照值、乘以100、并从100减去所产生的值来计算阻断百分比。
表5和表6显示了在两种LuminexTM测定法中所测试的所有98种抗-抗原E共有轻链抗体的阻断百分比。ND:在目前的实验条件下未测定。
在上述的第一种LuminexTM实验中，就阻断配体Y与抗原E标记的珠子相结合的能力测试了含有Vκ1-39Jκ5工程化轻链的80种共有轻链抗体。在这80种共有轻链抗体中，68种显示出>50％的阻断，而12种显示出<50％的阻断(6种为25-50％的阻断，6种为<25％的阻断)。对于含有Vκ3-20Jκ1工程化轻链的18种共有轻链抗体，12种显示出对于配体Y与经抗原E标记的珠子的结合的>50％的阻断，而6种显示出<50％的阻断(3种为25-50％的阻断，3种为<25％的阻断)。
在上述的第二种LuminexTM实验中，就阻断抗原E与配体Y标记的珠子相结合的能力测试了含有Vκ1-39Jκ5工程化轻链的相同的80种共有轻链抗体。在这80种共有轻链抗体中，36种显示出>50％的阻断，而44种显示出<50％的阻断(27种为25-50％的阻断，17种为<25％的阻断)。对于含有Vκ3-20Jκ1工程化轻链的18种共有轻链抗体，1种显示出对于抗原E与配体Y标记的珠子的结合的>50％的阻断，而17种显示出<50％的阻断(5种为25-50％的阻断，12种为<25％的阻断)。
表5和表6的数据确立了表3和表4中描述的重排产生了抗-抗原E特异性共有轻链抗体，其以各种程度的效率阻碍配体Y与其共有受体抗原E的结合，这与表3和表4的抗-抗原E共有轻链抗体一致，其中包含关于抗原E具有重叠和非重叠表位特异性的抗体。
实施例8.通过ELISA确定抗原特异性共有轻链抗体的阻断能力
就阻断抗原E结合经配体Y-涂覆的表面的能力，在ELISA测定中检测针对抗原E产生的人共有轻链抗体。
以在PBS溶液中稀释为2μg/mL的浓度，将配体Y涂覆在96孔板上并孵育过夜，然后在含有0.05％Tween-20的PBS中清洗四次。然后在室温下，用含有0.5％(w/v)BSA(Sigma-Aldrich Corp.，St.Louis，MO)的PBS(Irvine Scientific，Santa Ana，CA)将所述板封闭1小时。在另外的板中，在缓冲液中将含有抗-抗原E共有轻链抗体的上清液1:10稀释。使用含有抗体的相同组分的仿上清液作为阴性对照。以0.150nM的终浓度加入抗原E-mmH(上文所述的)，并在室温下孵育1小时。然后，将抗体/抗原E-mmH混合物加入含有配体Y的板中，并在室温下孵育1小时。使用与抗-Penta-His抗体(Qiagen，Valencia，CA)缀合的辣根过氧化物酶(HRP)确定与配体Y结合的抗原E-mmH的检测，并使用以硫酸中和的四甲基联苯胺(TMB)底物(BD Biosciences，San Jose，CA)通过标准的比色响应进行显色。在OD450处读取吸光度，进行0.1秒。从所有的样品中减去没有抗原E的样品的背景吸光度。如下计算出阻断百分比：用每种样品的减去了背景的MFI除以经调整的阴性对照值，乘以100并从100中减去所产生的值。
表7和表8显示了在ELISA测定中测试的所有98种抗-抗原E共有轻链抗体的阻断百分比。ND:在目前的实验条件下未确定。
如在此实施例中所描述的，在就阻断抗原E与经配体Y涂覆的表面相结合的能力而进行测试的80种含有Vκ1-39Jκ5工程化轻链的共有轻链抗体中，22种显示出>50％的阻断，而58种显示出<50％的阻断(20种为25-50％的阻断，而38种为<25％的阻断)。对于18种含有Vκ3-20Jκ1工程化轻链的共有轻链抗体，1种显示出对于抗原E与配体Y涂覆的表面的结合的>50％的阻断，而17种显示出<50％的阻断(5种为25-50％阻断，而12种为<25％的阻断)。
这些结果也与含有关于抗原E具有重叠和非重叠表位特异性的抗体的抗原E特异性共有轻链抗体集合相一致。
实施例9.对于抗原特异性共有轻链抗体的BIAcoreTM亲和力确定
使用BIAcoreTM T100设备(GE Healthcare)，通过SPR(表面等离子共振)确定了所选抗体上清液的平衡解离常数(KD)。所有的数据都是使用HBS-EP(10mM Hepes，150mMNaCl，0.3mM EDTA，0.05％表面活性剂P20，pH 7.4)作为运行缓冲液和样品缓冲液，在25℃下获得的。在CM5感应芯片表面(之前使用标准的胺偶联化学，用高密度的抗人Fc抗体对所述表面进行了衍生)上捕获了来自粗制上清液样品的抗体。在捕获步骤中，以3μL/min的流速，横跨抗人Fc表面注射上清液，总共注射3分钟。在所述捕获步骤之后，注射运行缓冲液或者浓度为100nM的分析物，以35μL/min的流速注射2分钟。监测抗原从经捕获的抗体上的解离，监测6分钟。通过简短地注射10mM甘氨酸(pH 1.5)而除去经捕获的抗体。通过从分析物传感图上减去来自缓冲液注射的传感图而对所有的传感图进行了双重参照，从而去除了由于抗体从捕获表面解离而引起的伪差。使用BIAcore T100评估软件v2.1，使每一种抗体的结合数据匹配具有质量转运的1:1结合模型。结果显示在表9和表10中。
含有表3和表4中所显示的重排的共有轻链抗体的结合亲和力是变化的，其中几乎所有的都显示出纳摩尔范围内的KD。所述亲和力数据与产生自表3和表4中所描述的重排可变结构域的组合缔合的共有轻链抗体相一致，其为高亲和力的、克隆选择的，以及经体细胞突变的。与之前所显示的数据相关联，表3和表4中所描述的共有轻链抗体包含对于抗原E的一个或多个表位展现出特异性的、多种高亲和力抗体的集合。
实施例10.通过LuminexTM测定法确定抗原-特异性共有轻链抗体的结合特异性
就结合抗原E的ECD和抗原E ECD变体的能力测试所选的抗-抗原E共有轻链抗体，其中所述抗原E ECD变体包括：猕猴直系同源物(Mf抗原E)，其在约10％的氨基酸残基中区别于人类蛋白；缺少ECD C-末端的最后10个氨基酸的抗原E缺失突变体(抗原E-△CT)；以及在怀疑与配体Y相互作用处含有丙氨酸置换的两种突变体(抗原E-Ala1和抗原E-Ala2)。抗原E蛋白是在CHO细胞中产生的，并且每一种都含有myc-myc-His C-末端标签。
对于结合研究，通过在室温下与1x 106以抗myc单克隆抗体(MAb 9E10，杂交瘤细胞系CRL-1729TM；ATCC，Manassas，VA)共价涂覆的微球(LuminexTM)珠孵育2hr而捕获了1mL培养基中的抗原E ECD蛋白或变体蛋白(上文所述的)。然后在使用前用PBS清洗所述珠子。在缓冲液中1:4稀释含有抗-抗原E共有轻链抗体的上清液并将其加入96孔过滤板中。使用没有抗体的仿上清液作为阴性对照。然后，将含有经捕获的抗原E蛋白的珠子加入抗体样品中(3000珠子/孔)并在4℃下孵育过夜。次日，清洗样品珠子并用R-藻红蛋白-缀合的抗-人IgG抗体检测结合的共有轻链抗体。用基于LuminexTM流式细胞术的分析仪测量珠子的荧光强度(对于结合至每种抗原E蛋白的每种抗体样品，计数大约100个珠子)，并且对于至少100个所计数的珠子(每个珠子/抗体相互作用)，记录中值荧光强度(MFI)。结果显示在表11和表12中。
抗-抗原E共有轻链抗体上清液显示出与连接至抗原E-ECD的珠子的高特异性结合。对于这些珠子，当与抗原E-ECD珠子样品组合时，阴性对照仿上清液产生了可忽略的信号(<10MFI)，而含有抗-抗原E共有轻链抗体的上清液显示出强的结合信号(对于98种抗体上清液，平均MFI为2627；对于91/98种抗体样品，MFI>500)。
作为所选抗-抗原E共有轻链抗体鉴别抗原E的ECD上不同表位的能力的量度，确定了抗体与其变体的相对结合。所有四种抗原E变体都被捕获到了抗-myc LuminexTM珠子上，如上文中对于天然抗原E-ECD结合研究所描述的，并且确定了相对结合比例(MFI变体/MFI抗原E-ECD)。对于表11和12中所显示的98种所测试的共有轻链抗体上清液，每一种变体的平均比例(MFI变体/MFI抗原E-ECD)都不同，很可能反映出珠子上蛋白的不同捕获量(对于抗原E-△CT，抗原E-Ala1，抗原E-Ala2和Mf抗原E，平均比例分别为0.61，2.9，2.0和1.0)。对于每种蛋白变体，对于98种所测试的共有轻链抗体的亚集的结合显示出大大减少的结合，这表示对于表征给定变体的突变的敏感性。例如，所述共有轻链抗体样品中的19种以<8％的MFI变体/MFI抗原E-ECD结合Mf抗原E。由于此组中的许多包括高亲和力或中等高亲和力的抗体(5种具有KD<5nM，15种具有KD<50nM)，此组中较低的信号有可能产生自对于天然抗原E-ECD和给定变体之间序列(表位)差异的敏感性而不是产生自较低的亲和力。
这些数据确立了表3和表4中所描述的共有轻链抗体的确代表特异性识别抗原E上多于一个表位的抗原-E-特异性共有轻链抗体的多样化群体。
本说明书还包括下列内容：
1.制备小鼠的方法，其包括:
(a)在内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区基因座处，以人Vκ1-39/J基因区段、人Vκ3-20/J基因区段或其组合替代所有或基本上所有的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区基因区段，其中所述人基因区段与内源小鼠κ恒定基因可操作地连接；和，
(b)以多种人重链可变区基因区段替代所有或基本上所有的内源小鼠重链可变区基因基因座，其中所述人重链可变区基因区段与内源小鼠重链恒定基因可操作地连接，并且所述人重链可变区基因区段能够重排并形成经重排的人/小鼠嵌合重链基因。
2.实施方式1的方法，其中所述小鼠缺少能够重排并形成编码小鼠κ可变区的基因的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区基因座。
3.实施方式1的方法，其中所述小鼠还包括相对于小鼠轻链恒定区为5’的小鼠κ内含子增强子。
4.实施方式1的方法，其中所述小鼠还包括小鼠κ3’增强子。
5.实施方式1的方法，其中所述多种人重链可变区基因区段包括选自下列的区段：人免疫球蛋白可变区基因区段的1-2，1-8，1-24，2-5，3-7，3-9，3-11，3-13，3-15，3-20，3-23，3-30，3-33，3-48，4-31，4-39，4-59，5-51，6-1。
6.实施方式1的方法，其中所述多种人重链可变区基因区段包括选自下列的区段：D1-7，D1-26，D3-3，D3-10，D3-16，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13，D7-27基因区段，以及它们的组合。
7.实施方式1的方法，其中所述小鼠包括包含经重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列的B细胞，所述经重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列包含人重链可变区基因，所述人重链可变区基因源自选自VH2-5，VH3-23，VH3-30，VH4-39，VH4-59，VH5-51的VH基因区段以及源自选自D1-7，D1-26，D3-3，D3-16，D3-10，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13和D7-27的D基因区段。
8.实施方式1的方法，其中所述人Vκ1-39基因区段存在于含有人Jκ5基因区段的重排中。
9.实施方式1的方法，其中所述人Vκ3-20基因区段存在于含有人Jκ1基因区段的重排中。
10.选择用于制备双特异性抗体的人可变区的方法，其包括:
(a)用目的抗原免疫接种经遗传修饰的小鼠，其中所述小鼠包括(i)在内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区基因座处，以人Vκ1-39/J基因区段、人Vκ3-20/J基因区段或其组合替代所有或基本上所有的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区基因区段，其中所述人基因区段与内源小鼠κ恒定基因可操作地连接；和(ii)以多种人重链可变区基因区段替代所有或基本上所有的内源小鼠重链可变区基因基因座，其中所述人重链可变区基因区段与内源小鼠重链恒定基因可操作地连接，并且所述人重链可变区基因区段能够重排并形成经重排的人/小鼠嵌合重链基因；
(b)允许所述小鼠产生对于目的抗原的免疫应答；和，
(c)鉴别表达特异性结合所述目的抗原的抗体的小鼠的克隆性选择的淋巴细胞，并且从所述淋巴细胞或所述抗体获得编码特异性结合所述目的抗原的人重链可变区的核苷酸序列；和，
(d)采用(c)中的核苷酸序列来制备双特异性抗体。
11.实施方式10的方法，其中所述小鼠缺少能够重排并形成编码小鼠κ可变区的基因的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区基因座。
12.实施方式10的方法，其还包括相对于小鼠轻链恒定区为5’的小鼠κ内含子增强子。
13.实施方式10的方法，其还包括小鼠κ3’增强子。
14.实施方式10的方法，其中所述多种人重链可变区基因区段包括选自下列的区段：人免疫球蛋白可变区基因区段的1-2，1-8，1-24，2-5，3-7，3-9，3-11，3-13，3-15，3-20，3-23，3-30，3-33，3-48，4-31，4-39，4-59，5-51，6-1。
15.实施方式10的方法，其中所述多种人重链可变区基因区段包括选自下列的区段：D1-7，D1-26，D3-3，D3-10，D3-16，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13，D7-27基因区段，以及其组合。
16.实施方式10的方法，其中所述小鼠包括包含经重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列的B细胞，所述经重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列包含人重链可变区基因，所述人重链可变区基因源自选自VH2-5，VH3-23，VH3-30，VH4-39，VH4-59，VH5-51的VH基因区段以及源自选自D1-7，D1-26，D3-3，D3-16，D3-10，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13和D7-27的D基因区段。
17.实施方式10的方法，其中所述人Vκ1-39基因区段存在于含有人Jκ5基因区段的重排中。
18.实施方式10的方法，其中所述人Vκ3-20基因区段存在于含有人Jκ1基因区段的重排中。
19.实施方式10的方法，其中对于第一目的抗原进行第一次步骤(a)至(d)以产生第一人重链可变区序列，且对于第二目的抗原进行第二次步骤(a)至(d)以产生第二人重链可变区序列，并且其中所述第一人重链可变区序列与第一人重链恒定序列融合而表达以形成第一人重链，所述第二人重链可变区序列与第二人重链恒定区融合而表达以形成第二人重链，其中所述第一和第二人重链在源自Vκ1-39或Vκ3-20基因区段的单一人轻链的存在下表达。
20.实施方式19的方法，其中所述第一人重链包含消除或实质上降低所述第一人重链与蛋白A的亲和力的修饰，且所述第二人重链保留与蛋白A结合的能力。
21.实施方式20的方法，其中所述消除或实质上降低所述第一人重链与蛋白A的亲和力的修饰选自95R(EU 435R)，96F(EU 436F)，及其组合。

Claims (40)

1.制造小鼠的方法，所述方法包括：
(a)在内源性小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区座位插入
单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列，或
单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列，
其中所述单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列或单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列可操作地连接于内源性小鼠κ恒定基因，并且其中所述小鼠缺乏能重排及形成编码小鼠κ可变区的基因的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区座位；以及
(b)在内源性小鼠免疫球蛋白重链可变区座位插入多个人免疫球蛋白重链可变区基因段，其中
人免疫球蛋白重链可变区基因段可操作地连接于内源性小鼠免疫球蛋白重链恒定区，及
人免疫球蛋白重链可变区基因段能重排及形成重排的人/小鼠嵌合免疫球蛋白重链基因。
2.权利要求1的方法，其中所述小鼠还在小鼠免疫球蛋白轻链恒定区的5’包含小鼠κ内含子增强子。
3.权利要求1的方法，其中所述小鼠还包含小鼠κ3’增强子。
4.权利要求1的方法，其中所述多个人免疫球蛋白重链可变区基因段包含选自下列的人免疫球蛋白重链可变区基因段：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-59，VH6-1，及其组合。
5.权利要求1的方法，其中所述多个人免疫球蛋白重链可变区基因段包含选自下列的人免疫球蛋白重链可变区基因段：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-39，VH4-59，VH5-51，VH6-1，及其组合。
6.权利要求1的方法，其中所述多个人免疫球蛋白重链可变区基因段包含选自下列的人免疫球蛋白重链可变区基因段：D1-7，D1-26，D3-3，D3-10，D3-16，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13，D7-27，及其组合。
7.权利要求1的方法，其中所述小鼠包含B细胞，所述B细胞包含重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列，所述重链可变区基因序列包含人免疫球蛋白重链可变区基因，所述重链可变区基因
源于选自下列的VH基因段：VH2-5，VH3-23，VH3-30，VH4-39，VH4-59，VH5-51，及
源于选自下列的D基因段：D1-7，D1-26，D3-3，D3-16，D3-10，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13，D7-27。
8.权利要求1～7之任一项的方法，其中所述人Vκ1-39/Jκ序列包括人Jκ5基因段。
9.权利要求1～7之任一项的方法，其中所述人Vκ3-20/Jκ序列包括人Jκ1基因段。
10.遗传修饰的小鼠在制造人共有轻链抗体中的用途，其中所述小鼠包含：
(a)在内源性小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区座位插入
单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列，或
单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列，
其中所述单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列或单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列可操作地连接于内源性小鼠κ恒定基因，并且其中所述小鼠缺乏能重排及形成编码小鼠κ可变区的基因的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区座位；以及
(b)在内源性小鼠免疫球蛋白重链可变区座位插入多个人免疫球蛋白重链可变区基因段，其中
人免疫球蛋白重链可变区基因段可操作地连接于内源性小鼠免疫球蛋白重链恒定基因，及
人免疫球蛋白重链可变区基因段能重排及形成重排的人/小鼠嵌合免疫球蛋白重链基因。
11.权利要求10的用途，其中所述小鼠还在小鼠免疫球蛋白轻链恒定区的5’包含小鼠κ内含子增强子。
12.权利要求10的用途，其中所述小鼠还包含小鼠κ3’增强子。
13.权利要求10的用途，其中所述多个人免疫球蛋白重链可变区基因段中的所述人免疫球蛋白重链可变区基因段是人VH，D和JH基因段，且其中多个人免疫球蛋白重链可变区基因段之内的VH基因段选自：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-59，VH6-1，及其组合。
14.权利要求10的用途，其中所述多个人免疫球蛋白重链可变区基因段中的所述人免疫球蛋白重链可变区基因段是人VH，D和JH基因段，且其中多个人免疫球蛋白重链可变区基因段之内的VH基因段选自：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-39，VH4-59，VH5-51，VH6-1，及其组合。
15.权利要求10的用途，其中所述多个人免疫球蛋白重链可变区基因段中的所述人免疫球蛋白重链可变区基因段是人VH，D和JH基因段，且其中多个人免疫球蛋白重链可变区基因段之内的D基因段选自：D1-7，D1-26，D3-3，D3-10，D3-16，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13，D7-27，及其组合。
16.权利要求10的用途，其中所述小鼠包含B细胞，所述B细胞包含重排的免疫球蛋白重链可变区基因序列，所述重链可变区基因序列包含人免疫球蛋白重链可变区基因，所述重链可变区基因
源于选自下列的VH基因段：VH2-5，VH3-23，VH3-30，VH4-39，VH4-59，VH5-51，及
源于选自下列的D基因段：D1-7，D1-26，D3-3，D3-16，D3-10，D3-22，D5-5，D5-12，D6-6，D6-13，D7-27。
17.权利要求10～16之任一项的用途，其中所述人Vκ1-39/Jκ序列是人Vκ1-39基因段与人Jκ5基因段的排列。
18.权利要求10～16之任一项的用途，其中所述人Vκ3-20/Jκ序列是人Vκ3-20基因段与人Jκ1基因段的排列。
19.制造双特异性抗原-结合蛋白的方法，其包括：
(a)表达包含由第1人免疫球蛋白重链可变区编码的可变结构域的第1人免疫球蛋白重链，所述重链可变区源于已用包含第1表位的第1目标抗原免疫的第1遗传加工的小鼠的B细胞，该小鼠：
(i)具有对于单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列或单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列是纯合或杂合的种系，
其中所述单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列或单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列可操作地连接于小鼠Cκ区，并且其中所述小鼠缺乏能重排及形成编码小鼠κ可变区的基因的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区座位；
(ii)具有包括未重排的人VH基因段，人D基因段，及人JH基因段的种系，该未重排的人VH基因段可操作地连接于小鼠CH区；以及
(iii)包含B细胞群，
其中所述群中的各B细胞表达源于重排的人Vκ1-39/Jκ序列或Vκ3-20/Jκ序列的人免疫球蛋白轻链可变结构域，且
其中所述B细胞群包括表达源于人VH基因段的人免疫球蛋白重链可变结构域的至少一种B细胞；
(b)表达包含由第2人免疫球蛋白重链可变区编码的可变结构域的第2人免疫球蛋白重链，所述重链可变区源于已用包含第2表位的第2目标抗原免疫的第2遗传加工的小鼠的B细胞，该小鼠：
(i)具有对于单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列或单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列是纯合或杂合的种系，
其中所述单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列或单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列可操作地连接于小鼠Cκ区，并且其中所述小鼠缺乏能重排及形成编码小鼠κ可变区的基因的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区座位；
(ii)具有包括未重排的人VH基因段，人D基因段，及人JH基因段的种系，该未重排的人VH基因段可操作地连接于小鼠CH区；以及
(iii)包含B细胞群，其中
所述群中的各B细胞表达源于重排的人Vκ1-39/Jκ序列或Vκ3-20/Jκ序列的人免疫球蛋白轻链可变结构域，且
B细胞群包括表达源于人VH基因段的人免疫球蛋白重链可变结构域的至少一种B细胞；以及
(c)使表达的包含由第1人免疫球蛋白重链可变区编码的可变结构域的第1人免疫球蛋白重链与人免疫球蛋白轻链配对，及与也与人免疫球蛋白轻链配对的表达的包含由第2人免疫球蛋白重链可变区编码的可变结构域的第2人免疫球蛋白重链配对，由此制造双特异性抗原-结合蛋白。
20.权利要求19的方法，其中所述第1小鼠和第2小鼠包含相同的单一经重排的人轻链可变区序列。
21.权利要求20的方法，其中所述配对步骤包括表达第1人免疫球蛋白重链和第2人免疫球蛋白重链与源于存在于第1和第2小鼠中相同的人Vκ1-39/Jκ序列或相同的人Vκ3-20/Jκ的人免疫球蛋白轻链。
22.权利要求19的方法，其中所述第1和/或第2小鼠种系包括选自下列的一种或更多未重排的人VH基因段：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-59，VH6-1，及其组合。
23.权利要求19的方法，其中所述第1和/或第2小鼠种系包括选自下列的一种或更多未重排的人VH基因段：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-39，VH4-59，VH5-51和VH6-1，及其组合。
24.权利要求19的方法，其中所述第1和/或第2人免疫球蛋白重链可变区源于包括下列的多个人VH/D/JH重排之一：2-5/6-6/1，3-23/3-3/4，3-23/3-10/4，3-30/6-6/1，3-30/6-6/3，3-30/1-7/4，3-30/5-12/4，3-30/6-13/4，3-30/6-6/4，3-30/7-27/4，3-30/3-22/5，3-30/6-6/5，3-30/7-27/5，4-39/1-26/3，4-59/3-16/3，4-59/3-22/3，4-59/3-16/4，5-51/5-5/3，5-51/6-13/5，5-51/3-16/6。
25.权利要求19～24之任一项的方法，其中所述第1小鼠和第2小鼠是相同的小鼠或不同的小鼠。
26.权利要求25的方法，其中在相同的小鼠或不同的小鼠中表达的所述源于重排的人Vκ1-39/Jκ序列或Vκ3-20/Jκ序列的人免疫球蛋白轻链可变结构域由源于相同的重排的人种系J段的核苷酸序列编码。
27.权利要求25的方法，其中所述人免疫球蛋白轻链可变结构域源于重排的人Vκ1-39/Jκ序列，并且所述人Vκ1-39/Jκ序列是Vκ1-39/Jκ5序列。
28.权利要求27的方法，其中所述Vκ1-39/Jκ5序列是SEQ ID NO:1。
29.权利要求25的方法，其中所述人免疫球蛋白轻链可变结构域源于重排的人Vκ3-20/Jκ序列，并且所述重排的人Vκ3-20/Jκ序列是Vκ3-20/Jκ1序列。
30.权利要求29的方法，其中所述Vκ3-20/Jκ1序列是SEQ ID NO:11。
31.权利要求25的方法，其中所述相同的或不同的小鼠不含有能重排而形成编码免疫球蛋白轻链可变结构域的基因的内源性免疫球蛋白轻链可变区基因段。
32.权利要求19的方法，其中所述第1和第2目标抗原是：
2种不同抗原；或者
相同的抗原，且所述第1和第2表位是相同的抗原的2个不同表位。
33.权利要求32的方法，其中所述第1和第2目标抗原是相同的抗原，且双特异性抗原-结合蛋白与所述相同的抗原的结合应答是具有仅第1人免疫球蛋白重链的单特异性抗原-结合蛋白和/或具有仅第2人免疫球蛋白重链的单特异性抗原-结合蛋白的结合应答的至少约2倍。
34.权利要求19的方法，其中所述第1和/或第2小鼠具有包含下列中的每一种的种系：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-59，VH6-1。
35.权利要求19的方法，其中所述第1和/或第2小鼠具有包含下列中的每一种的种系：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-39，VH4-59，VH5-51和VH6-1。
36.权利要求19的方法，其中双特异性抗原-结合蛋白的所述第1或第2人免疫球蛋白重链、但非二者同时带有减小其与蛋白A的亲和性的氨基酸修饰，其中所述修饰选自：95R(EU435R)，96F(EU 436F)，及其组合。
37.宿主细胞，其包含：
(a)第1核酸序列，其编码结合第1抗原的第1人免疫球蛋白重链，其中
所述第1人免疫球蛋白重链包含第1人重链可变结构域的序列，且
所述第1人重链可变结构域的序列由从用第1抗原免疫的第1小鼠获得的核苷酸序列编码；
(b)第2核酸序列，其编码结合第2抗原的第2人免疫球蛋白重链，
其中所述第2人免疫球蛋白重链包含第2人重链可变结构域的序列，且所述第2人重链可变结构域的序列由自用第2抗原免疫的第2小鼠获得的核苷酸序列编码，
其中所述第1和第2小鼠各表达
由单一经重排的人Vκ/Jκ编码的相同的人免疫球蛋白轻链可变结构域，所述单一经重排的人Vκ/Jκ是
(i)单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列，或者
(ii)单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列，
其中所述单一经重排的人Vκ1-39/Jκ序列或单一经重排的人Vκ3-20/Jκ序列可操作地连接于内源性小鼠κ恒定基因，并且其中所述小鼠缺乏能重排及形成编码小鼠κ可变区的基因的内源小鼠κ免疫球蛋白轻链可变区座位，其中所述第1和第2小鼠各自表达多个人免疫球蛋白重链可变结构域；以及
(c)第3核酸序列，其包含源于存在于第1和第2小鼠中相同的单一经重排的人Vκ/Jκ序列的人免疫球蛋白轻链可变区序列，其中所述第3核酸序列编码人免疫球蛋白轻链；
其中所述第1，第2和第3核酸序列表达而产生结合第1和第2抗原的双特异性抗原-结合蛋白。
38.权利要求37的宿主细胞，其中所述第1和/或第2人免疫球蛋白重链可变结构域源于：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-59或VH6-1。
39.权利要求37的宿主细胞，其中所述第1和/或第2人免疫球蛋白重链可变结构域源于：VH1-2，VH1-8，VH1-18，VH1-24，VH2-5，VH3-7，VH3-9，VH3-11，VH3-13，VH3-15，VH3-20，VH3-23，VH3-30，VH3-33，VH3-43，VH3-48，VH4-31，VH4-34，VH4-39，VH4-59，VH5-51或VH6-1。
40.权利要求37的宿主细胞，其中所述第1和/或第2人免疫球蛋白重链可变结构域源于包括下列的多个人VH/D/JH重排之一：2-5/6-6/1，3-23/3-3/4，3-23/3-10/4，3-30/6-6/1，3-30/6-6/3，3-30/1-7/4，3-30/5-12/4，3-30/6-13/4，3-30/6-6/4，3-30/7-27/4，3-30/3-22/5，3-30/6-6/5，3-30/7-27/5，4-39/1-26/3，4-59/3-16/3，4-59/3-22/3，4-59/3-16/4，5-51/5-5/3，5-51/6-13/5，5-51/3-16/6。
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Families Citing this family (187)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
USRE47770E1 (en) 2002-07-18 2019-12-17 Merus N.V. Recombinant production of mixtures of antibodies
ATE514717T1 (de) 2002-07-18 2011-07-15 Merus B V Rekombinante produktion von antikörpermischungen
US20100069614A1 (en) * 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
EP2395016A3 (en) 2003-05-30 2012-12-19 Merus B.V. Design and use of paired variable regions of specific binding molecules
EP2064325B1 (en) 2006-09-01 2011-12-07 Therapeutic Human Polyclonals, Inc. Enhanced expression of human or humanized immunoglobulin in non-human transgenic animals
RU2559524C2 (ru) * 2008-06-27 2015-08-10 Мерюс Б.В. Продуцирующие антитела млекопитающие, не являющиеся человеком
JP5827127B2 (ja) 2008-12-18 2015-12-02 エラスムス・ユニヴァーシティ・メディカル・センター・ロッテルダム ヒト化抗体を発現する非ヒトトランスジェニック動物及びその使用
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
US20120204278A1 (en) 2009-07-08 2012-08-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
US9445581B2 (en) 2012-03-28 2016-09-20 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
PT2517556E (pt) * 2009-07-08 2016-01-20 Kymab Ltd Modelos animais e moléculas terapêuticas
US9796788B2 (en) 2010-02-08 2017-10-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire
US20130045492A1 (en) 2010-02-08 2013-02-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain
US20120021409A1 (en) * 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
LT3095871T (lt) * 2010-02-08 2019-05-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bendros lengvosios grandinės pelė
BR112012033248A2 (pt) * 2010-06-22 2017-11-28 Regeneron Pharma camundongos expressando uma cadeia leve com variável de lâmbda humana e regiões constantes de camundongo
SG10201912639SA (en) 2010-08-02 2020-02-27 Regeneron Pharma Mice that make binding proteins comprising vl domains
CN103348012B (zh) * 2010-11-27 2016-06-08 朱坚 一种人源化的转基因动物
SG10201913160QA (en) 2011-02-25 2020-03-30 Regeneron Pharma Adam6 mice
WO2012116926A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding proteins
KR101572338B1 (ko) 2011-02-28 2015-11-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 1가 항원 결합 단백질
US10130081B2 (en) * 2011-08-05 2018-11-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized universal light chain mice
WO2013041845A2 (en) * 2011-09-19 2013-03-28 Kymab Limited Animals, repertoires & methods
BR112014006394A2 (pt) 2011-09-19 2017-03-28 Kymab Ltd manipulação de diversidade genética de imunoglobulina e terapêuticos multi-anticorpos
GB2495083A (en) * 2011-09-26 2013-04-03 Kymab Ltd Human VpreB and chimaeric surrogate light chains in transgenic non-human vertebrates
CA2791109C (en) 2011-09-26 2021-02-16 Merus B.V. Generation of binding molecules
WO2013045916A1 (en) 2011-09-26 2013-04-04 Kymab Limited Chimaeric surrogate light chains (slc) comprising human vpreb
ES2757473T3 (es) * 2011-09-30 2020-04-29 Dana Farber Cancer Inst Inc Péptidos terapéuticos que comprenden anticuerpos que se unen a la secuencia A relacionada con el polipéptido del CMH de clase I (MICA)
IN2014CN03572A (zh) 2011-10-17 2015-10-09 Regeneron Pharma
EP2770823A4 (en) 2011-10-28 2015-12-09 Trianni Inc TRANSGENIC ANIMALS AND METHOD FOR THEIR USE
US9253965B2 (en) * 2012-03-28 2016-02-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
KR101924805B1 (ko) 2011-12-20 2018-12-04 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화 경쇄 마우스
UY34652A (es) 2012-03-02 2013-09-02 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos frente a toxinas de clostridium difficile
EP3165086A1 (en) * 2012-03-06 2017-05-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common light chain mouse
AU2013204581B2 (en) * 2012-03-16 2015-06-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals expressing pH-sensitive immunoglobulin sequences
RS59076B1 (sr) * 2012-03-16 2019-09-30 Regeneron Pharma Glodari koji eksprimiraju imunoglobulinske sekvence senzitivne na ph
CN104302169B (zh) 2012-03-16 2017-11-17 瑞泽恩制药公司 组氨酸工程改造的轻链抗体和用于生成所述抗体的经基因修饰的非人动物
US20140013456A1 (en) 2012-03-16 2014-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same
AU2015227453B2 (en) * 2012-03-16 2017-05-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals expressing ph-sensitive immunoglobulin sequences
GB2502127A (en) 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
US10251377B2 (en) 2012-03-28 2019-04-09 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies
US9248181B2 (en) * 2012-04-20 2016-02-02 Merus B.V. Methods and means for the production of Ig-like molecules
KR102089526B1 (ko) 2012-05-10 2020-03-17 바이오아트라, 엘엘씨 다중-특이적 모노클로날 항체
KR20150023535A (ko) * 2012-06-05 2015-03-05 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 공통 경쇄를 사용하여 완전한 인간 이중 특이적 항체를 만드는 방법
SG10201913429WA (en) 2012-06-12 2020-03-30 Regeneron Pharma Humanized non-human animals with restricted immunoglobulin heavy chain loci
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
JO3462B1 (ar) 2012-08-22 2020-07-05 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية تجاه gfr?3 وطرق لاستخدامها
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
US10358492B2 (en) * 2012-09-27 2019-07-23 Merus N.V. Bispecific IgG antibodies as T cell engagers
EP2943511B1 (en) 2013-01-14 2019-08-07 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
CN105164153B (zh) * 2013-02-20 2020-04-24 瑞泽恩制药公司 人源化的t细胞共受体的小鼠
TR201810255T4 (tr) * 2013-02-20 2018-08-27 Regeneron Pharma Modifiye edilmiş immunoglobulin ağır zincir sekanslarına sahip olan insan olmayan hayvanlar.
PL2958937T3 (pl) * 2013-02-22 2019-01-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Myszy ekspresjonujące humanizowany główny układ zgodności tkankowej
EP2967015B9 (en) * 2013-03-11 2023-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Transgenic mice expressing chimeric major histocompatibility complex (mhc) class ii molecules
SG11201506294TA (en) * 2013-03-13 2015-09-29 Regeneron Pharma Common light chain mouse
FI3501272T3 (fi) * 2013-03-13 2023-04-06 Regeneron Pharma Rajallista immunoglobuliinin kevytketjuvalikoimaa ilmentäviä hiiriä
WO2014141189A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Erasmus University Medical Center Transgenic non-human mammal for antibody production
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9788534B2 (en) 2013-03-18 2017-10-17 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
KR102049990B1 (ko) 2013-03-28 2019-12-03 삼성전자주식회사 c-Met 항체 및 VEGF 결합 단편이 연결된 융합 단백질
CN105143262A (zh) 2013-04-29 2015-12-09 豪夫迈·罗氏有限公司 结合人fcrn的修饰的抗体和使用方法
US20150033372A1 (en) * 2013-05-01 2015-01-29 Kymab Limited Human VpreB & Chimaeric Surrogate Light Chains in Transgenic Non-Human Vertebrates
US9783618B2 (en) 2013-05-01 2017-10-10 Kymab Limited Manipulation of immunoglobulin gene diversity and multi-antibody therapeutics
US11707056B2 (en) 2013-05-02 2023-07-25 Kymab Limited Animals, repertoires and methods
US9783593B2 (en) 2013-05-02 2017-10-10 Kymab Limited Antibodies, variable domains and chains tailored for human use
CN111019953A (zh) 2013-09-18 2020-04-17 瑞泽恩制药公司 组氨酸工程改造的轻链抗体和用于生成所述抗体的经基因修饰的非人动物
MX2016003617A (es) 2013-09-30 2016-07-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo para producir molecula de enlace al antigeno usando fago auxiliar modificado.
CA2925723A1 (en) * 2013-10-01 2015-04-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
CA2922912A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific domain exchanged common variable light chain antibodies
JP6778110B2 (ja) 2014-01-15 2020-10-28 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 改善されたプロテインＡ結合を有するＦｃ領域バリアント
CA2931986A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and maintained protein a-binding properties
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
WO2015130173A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 Merus B.V. Antibody that binds erbb-2 and erbb-3
AU2015223566B2 (en) 2014-02-28 2020-10-08 Merus N.V. Antibodies that bind EGFR and ErbB3
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
CA3124228A1 (en) * 2014-03-21 2015-09-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals that make single domain binding proteins
MX2016012273A (es) 2014-03-21 2017-02-23 Regeneron Pharma Proteinas de union al antigeno vl que presentan diferentes caracteristicas de union.
MA44179B1 (fr) 2014-05-13 2020-10-28 Univ Pennsylvania Compositions comprenant un virus adeno-associe exprimant des constructions a double anticorps et leurs utilisations
SG10201810507WA (en) 2014-06-06 2018-12-28 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
BR112017005245A2 (pt) 2014-09-19 2017-12-12 Regeneron Pharma animal não humano geneticamente modificado, métodos para produzir célula t, hibridoma de célula t, um ácido nucleico, um anticorpo específico, uma célula humana, um animal não humano geneticamente modificado e para induzir uma resposta imunológica, célula, hibridoma de célula t, ácido nucleico, anticorpo específico, receptor de antígeno quimérico, embrião não humano, locus de um receptor de antígeno quimérico, e, composição de ácidos nucleicos.
JP2017531642A (ja) 2014-10-03 2017-10-26 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー エボラ糖タンパク質に結合する抗体およびその使用
WO2016071377A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and protein a-binding properties
RS60739B1 (sr) 2014-11-17 2020-09-30 Regeneron Pharma Postupci za lečenje tumora upotrebom cd3xcd20 bispecifičnog antitela
EP3725808A1 (en) 2014-11-21 2020-10-21 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against cd73 and uses thereof
LT3223845T (lt) 2014-11-26 2021-08-25 Xencor, Inc. Heterodimeriniai antikūnai, kurie suriša cd3 ir cd20
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
TWI701258B (zh) 2014-12-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 流行性感冒病毒血球凝集素之人類抗體
AU2015365583B2 (en) 2014-12-19 2021-10-28 Regenesance B.V. Antibodies that bind human C6 and uses thereof
BR112017013385A2 (pt) 2014-12-23 2018-02-06 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos para tigit
CN107438622A (zh) * 2015-03-19 2017-12-05 瑞泽恩制药公司 选择结合抗原的轻链可变区的非人动物
UY36687A (es) 2015-05-29 2016-11-30 Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware Anticuerpos contra ox40 y sus usos
JP2018526977A (ja) 2015-06-29 2018-09-20 ザ ロックフェラー ユニヴァーシティ アゴニスト活性が増強されたｃｄ４０に対する抗体
EP3722318A1 (en) 2015-07-06 2020-10-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
EP3757129A1 (en) 2015-07-10 2020-12-30 Merus N.V. Human cd3 binding antibody
JOP20160154B1 (ar) 2015-07-31 2021-08-17 Regeneron Pharma أجسام ضادة مضاد لل psma، وجزيئات رابطة لمستضد ثنائي النوعية الذي يربط psma و cd3، واستخداماتها
JP7023231B2 (ja) 2015-09-23 2022-02-21 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 最適化抗ｃｄ３二重特異性抗体及びその使用
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
SG11201803359VA (en) 2015-10-23 2018-05-30 Merus Nv Binding molecules that inhibit cancer growth
US11213586B2 (en) 2015-11-19 2022-01-04 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR)
EP4257599A3 (en) 2016-01-13 2024-01-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rodents having an engineered heavy chain diversity region
EP3423489A1 (en) 2016-03-04 2019-01-09 The Rockefeller University Antibodies to cd40 with enhanced agonist activity
EA201891983A8 (ru) 2016-03-04 2020-05-28 Бристол-Майерс Сквибб Компани Комбинированная терапия антителами к cd73
EP3448891A1 (en) 2016-04-28 2019-03-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
KR102417687B1 (ko) 2016-05-09 2022-07-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tl1a 항체 및 그의 용도
TWI822521B (zh) 2016-05-13 2023-11-11 美商再生元醫藥公司 藉由投予pd-1抑制劑治療皮膚癌之方法
WO2017201476A1 (en) * 2016-05-20 2017-11-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for breaking immunological tolerance using multiple guide rnas
PL3462853T3 (pl) 2016-06-03 2023-06-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Gryzonie wykazujące ekspresję egzogennej terminalnej transferazy deoksynukleotydowej
WO2017218515A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-c5 antibodies and uses thereof
CN109641049B (zh) * 2016-06-21 2023-07-07 特尼奥生物股份有限公司 Cd3结合抗体
JP7027401B2 (ja) 2016-07-14 2022-03-01 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｔｉｍ３に対する抗体およびその使用
BR112019003601A2 (pt) 2016-08-26 2019-05-21 Sanofi anticorpos multiespecíficos que facilitam pareamento
US10981976B2 (en) 2016-08-31 2021-04-20 University Of Rochester Human monoclonal antibodies to human endogenous retrovirus K envelope (HERV-K) and use thereof
AU2017327723B2 (en) 2016-09-14 2022-11-17 Teneobio, Inc. CD3 binding antibodies
CN110214026B (zh) 2016-09-23 2023-12-05 瑞泽恩制药公司 双特异性抗muc16-cd3抗体和抗muc16药物结合物
WO2018058001A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-steap2 antibodies, antibody-drug conjugates, and bispecific antigen-binding molecules that bind steap2 and cd3, and uses thereof
CN109996560A (zh) 2016-10-13 2019-07-09 麻省理工学院 结合寨卡病毒包膜蛋白的抗体及其用途
EP3580238A1 (en) 2017-02-10 2019-12-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging
BR112019016374A2 (pt) 2017-02-17 2020-04-07 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos para alfa-sinucleína e usos dos mesmos
CN110382529B (zh) 2017-03-02 2024-03-08 诺华股份有限公司 工程化的异源二聚体蛋白质
WO2018182422A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Merus N.V. Erbb-2 and erbb3 binding bispecific antibodies for use in the treatment f cells that have an nrg1 fusion gene
US11603407B2 (en) 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
JP7240335B2 (ja) 2017-06-20 2023-03-15 テネオワン， インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ重鎖のみ抗体
TW201919582A (zh) 2017-07-24 2019-06-01 美商再生元醫藥公司 穩定化之抗體組合物及其製法
SG11202001050PA (en) 2017-08-09 2020-03-30 Merus Nv Antibodies that bind egfr and cmet
AU2018341587A1 (en) 2017-09-29 2020-04-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific antigen-binding molecules that bind a staphylococcus target antigen and a complement component and uses thereof
EP3724226A1 (en) 2017-12-13 2020-10-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-c5 antibody combinations and uses thereof
CR20200322A (es) 2017-12-22 2021-01-12 Teneobio Inc Anticuerpos de cadena pesada que se unen a cd22
US20220089720A1 (en) 2018-01-12 2022-03-24 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
EP3743442A1 (en) 2018-01-26 2020-12-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Human antibodies to influenza hemagglutinin
CN111886256A (zh) 2018-03-23 2020-11-03 百时美施贵宝公司 抗mica和/或micb抗体及其用途
RU2020131383A (ru) 2018-03-24 2022-04-26 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Генетически модифицированные животные, отличные от человека, для выработки терапевтических антител против комплексов пептид-mhc, способы их получения и варианты применения
AU2019262953A1 (en) 2018-04-30 2020-11-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies, and bispecific antigen-binding molecules that bind HER2 and/or APLP2, conjugates, and uses thereof
SG11202011232VA (en) 2018-05-17 2020-12-30 Regeneron Pharma Anti-cd63 antibodies, conjugates, and uses thereof
PL3629720T3 (pl) 2018-06-14 2022-05-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Zwierzęta inne niż człowiek zdolne do rearanżacji dh-dh w sekwencjach kodujących łańcucha ciężkiego immunoglobuliny
CN112351820A (zh) 2018-06-21 2021-02-09 瑞泽恩制药公司 双特异性抗psma x抗cd28抗体及其用途
BR112021000186A2 (pt) 2018-07-19 2021-08-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpos anti-bcma x anti-cd3 biespecíficos e usos dos mesmos
KR20210049863A (ko) 2018-08-23 2021-05-06 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 항-Fc 엡실론-R1 알파 (FCERIA) 항체, FCERIA 및 CD3에 결합하는 이중특이적 항원-결합 분자 및 이들의 용도
CN112771077A (zh) 2018-08-31 2021-05-07 瑞泽恩制药公司 针对cd3/c20双特异性抗体的减轻细胞因子释放综合征的给药策略
SG11202101037QA (en) 2018-10-23 2021-02-25 Regeneron Pharma Anti-npr1 antibodies and uses thereof
EP3880708A1 (en) 2018-11-16 2021-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Anti-nkg2a antibodies and uses thereof
JP7463366B2 (ja) 2018-11-20 2024-04-08 タケダ ワクチン，インコーポレイテッド 新規の抗ジカウイルス抗体及びその使用
MA54540A (fr) 2018-12-19 2021-10-27 Regeneron Pharma Anticorps anti-cd28 x anti-cd22 bispécifiques et leurs utilisations
EP3898695A1 (en) 2018-12-19 2021-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific anti-muc16 x anti-cd28 antibodies and uses thereof
US20220090125A1 (en) 2018-12-21 2022-03-24 Compass Therapeutics Llc Transgenic mouse expressing common human light chain
CA3127236A1 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against il-7r alpha subunit and uses thereof
AU2020226445A1 (en) 2019-02-18 2021-07-08 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified non-human animals with humanized immunoglobulin locus
EP3927153A1 (en) 2019-02-22 2021-12-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rodents having genetically modified sodium channels and methods of use thereof
KR20210142659A (ko) 2019-03-22 2021-11-25 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Egfr×cd28 다중특이성 항체
AU2020289554A1 (en) 2019-06-05 2021-11-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a limited lambda light chain repertoire expressed from the kappa locus and uses thereof
MA56205A (fr) 2019-06-11 2022-04-20 Regeneron Pharma Anticorps anti-pcrv qui se lient à pcrv, compositions comprenant des anticorps anti-pcrv, et leurs méthodes d'utilisation
JOP20210323A1 (ar) 2019-06-14 2023-01-30 Teneobio Inc ارتباط أجسام مضادة ثقيلة السلسلة ومتعددة النوعية بـ cd22 وcd3
US20200399371A1 (en) 2019-06-21 2020-12-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of bispecific antigen-binding molecules that bind muc16 and cd3 in combination with 4-1bb co-stimulation
KR20220024594A (ko) 2019-06-21 2022-03-03 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 Psma 및 cd3에 결합하는 이중 특이적 항원 결합 분자와 4-1bb 공동 자극의 병용
JP2022543669A (ja) 2019-08-08 2022-10-13 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 新規抗原結合分子フォーマット
TW202120553A (zh) 2019-08-15 2021-06-01 美商再生元醫藥公司 用於細胞靶向之多特異性抗原結合分子及其用途
GB201912008D0 (en) 2019-08-21 2019-10-02 Cambridge Entpr Ltd Antibody
EP4051707A1 (en) 2019-10-28 2022-09-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use thereof
CN114901678A (zh) 2019-12-02 2022-08-12 瑞泽恩制药公司 肽-mhc ii蛋白构建体及其用途
AU2020398167A1 (en) 2019-12-06 2022-07-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple myeloma with bispecific anti-BCMA x anti-CD3 antibodies
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
AU2021218675A1 (en) 2020-02-11 2022-08-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-ACVR1 antibodies and uses thereof
EP4186564A1 (en) 2020-04-29 2023-05-31 Teneoone, Inc. Multispecific heavy chain antibodies with modified heavy chain constant regions
EP4149976A1 (en) 2020-05-12 2023-03-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-glp1r antagonist antibodies and methods of use thereof
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
WO2021231732A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
CA3182925A1 (en) * 2020-06-02 2021-12-09 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified non-human animals with common light chain immunoglobulin locus
EP4200332A1 (en) * 2020-08-19 2023-06-28 Xencor, Inc. Anti-cd28 and/or anti-b7h3 compositions
WO2022056276A1 (en) 2020-09-11 2022-03-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Identification and production of antigen-specific antibodies
EP4214234A1 (en) 2020-09-18 2023-07-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antigen-binding molecules that bind cd38 and/or cd28, and uses thereof
IL301702A (en) 2020-10-22 2023-05-01 Regeneron Pharma Anti-FGFR2 antibodies and methods of using them
CN114524878A (zh) 2020-11-23 2022-05-24 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种双特异性抗体及其用途
KR20230147048A (ko) 2020-12-16 2023-10-20 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화 Fc 알파 수용체를 발현하는 마우스
TW202242114A (zh) 2020-12-23 2022-11-01 美商再生元醫藥公司 用於獲得結合至跨膜蛋白之抗體以及抗體生成細胞的方法
US20220195014A1 (en) 2020-12-23 2022-06-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids encoding anchor modified antibodies and uses thereof
KR20230157315A (ko) 2021-01-28 2023-11-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 사이토카인 방출 증후군을 치료하기 위한 조성물 및 방법
KR20230156079A (ko) 2021-03-09 2023-11-13 젠코어 인코포레이티드 Cd3과 cldn6에 결합하는 이종이량체 항체
JP2024509274A (ja) 2021-03-10 2024-02-29 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体
US20230250170A1 (en) 2021-12-06 2023-08-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antagonist anti-npr1 antibodies and methods of use thereof
TW202400228A (zh) 2022-02-25 2024-01-01 美商再生元醫藥公司 減輕細胞激素釋放症候群的給藥方案
WO2023196903A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bispecific antigen-binding molecules that bind and cd3 and tumor associated antigens (taas) and uses thereof
WO2023201226A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for universal tumor cell killing
US20230416396A1 (en) 2022-05-18 2023-12-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multispecific antigen binding molecules that bind cd38 and 4-1bb, and uses thereof
WO2024015816A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to ciliary neurotrophic factor receptor (cntfr) and methods of use thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999045962A1 (en) * 1998-03-13 1999-09-16 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US20070196363A1 (en) * 1997-05-02 2007-08-23 Genentech, Inc. Method for Making Multispecific Antibodies Having Heteromultimeric and Common Components
CN100497642C (zh) * 2000-10-31 2009-06-10 里珍纳龙药品有限公司 修饰真核细胞的方法

Family Cites Families (138)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1341351C (en) 1988-09-06 2002-03-26 Marc D. Better Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
WO1991000906A1 (en) 1989-07-12 1991-01-24 Genetics Institute, Inc. Chimeric and transgenic animals capable of producing human antibodies
US5574205A (en) 1989-07-25 1996-11-12 Cell Genesys Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
DK0502976T3 (da) 1989-12-01 1996-11-11 Pharming Bv Produktion af rekombinante polypeptider ved bovine arter og transgene fremgangsmåder
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) * 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
ATE139258T1 (de) 1990-01-12 1996-06-15 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US6657103B1 (en) 1990-01-12 2003-12-02 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6713610B1 (en) 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
US7041871B1 (en) * 1995-10-10 2006-05-09 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0546073B1 (en) 1990-08-29 1997-09-10 GenPharm International, Inc. production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1994025585A1 (en) 1993-04-26 1994-11-10 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US7084260B1 (en) 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US5667988A (en) * 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
US7067284B1 (en) * 1992-01-27 2006-06-27 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
EP0652950B1 (en) 1992-07-24 2007-12-19 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
DE69308573T2 (de) 1992-08-17 1997-08-07 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
US5693506A (en) 1993-11-16 1997-12-02 The Regents Of The University Of California Process for protein production in plants
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
EP1149898A2 (en) 1993-12-23 2001-10-31 Infigen, Inc. Embryonic stem cells as nuclear donors and nuclear transfer techniques to produce chimeric and transgenic animals
ES2247204T3 (es) 1994-01-31 2006-03-01 Trustees Of Boston University Bancos de anticuerpos policlonales.
US7119248B1 (en) 1994-04-12 2006-10-10 Miltenyi Biotec Gmbh Antibodies against epitopes with homology to self antigens, methods of preparation and applications thereof
US6080560A (en) 1994-07-25 2000-06-27 Monsanto Company Method for producing antibodies in plant cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
ATE218143T1 (de) 1996-09-03 2002-06-15 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verwendung bi-und trispezifischer antikörper zur induktion einer tumorimmunität
KR100643058B1 (ko) 1996-12-03 2006-11-13 아브게닉스, 인크. 복수의 Ｖн 및 Ｖк 영역을 함유하는 인간 면역글로불린 유전자좌를 갖는 트랜스제닉 포유동물 및 이로부터 생성된 항체
BR9808192A (pt) 1997-03-06 2000-10-24 Infigen Inc Processo de clonagem de animais
DK0970126T3 (da) 1997-04-14 2001-08-13 Micromet Ag Hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstillingen af anti-humant antigen-receptorer og anvendelser deraf
DK0979281T3 (da) 1997-05-02 2005-11-21 Genentech Inc Fremgangsmåde til fremstilling af multispecifikke antistoffer med heteromultimere og fælles bestanddele
US6774279B2 (en) 1997-05-30 2004-08-10 Carnegie Institution Of Washington Use of FLP recombinase in mice
CN1277632A (zh) 1997-10-03 2000-12-20 中外制药株式会社 天然人源化抗体
ATE302271T1 (de) 1997-11-18 2005-09-15 Pioneer Hi Bred Int Zusammensetzungen und verfahren für die genetische modifizierung von pflanzen
GB9823930D0 (en) 1998-11-03 1998-12-30 Babraham Inst Murine expression of human ig\ locus
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
ATE536417T1 (de) 1999-04-15 2011-12-15 Crucell Holland Bv Herstellung von rekombinanten proteinen in einer menschlichen zelle mit mindestens einem e1 adenovirus protein
CA2401965A1 (en) 2000-02-29 2001-09-07 Auburn University Production of antibodies in transgenic plastids
CN101498731A (zh) 2000-05-18 2009-08-05 日本烟草产业株式会社 抗协同刺激信号转导分子ailim的人单克隆抗体及其药物用途
US6936747B2 (en) 2000-07-21 2005-08-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Methods for the replacement, translocation and stacking of DNA in eukaryotic genomes
EP1311530A4 (en) 2000-08-03 2004-10-06 Wim-Van Schooten PRODUCTION OF HUMANIZED ANTIBODIES IN TRANSGENIC ANIMALS
EP1184458A1 (en) 2000-08-28 2002-03-06 U-BISys B.V. Differentially expressed CD46 epitopes, proteinaceous molecules capable of binding thereto, and uses thereof
US20020119148A1 (en) 2000-09-01 2002-08-29 Gerritsen Mary E. ErbB4 antagonists
US7105348B2 (en) * 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
ATE464322T1 (de) 2001-01-05 2010-04-15 Pfizer Antikörper gegen den rezeptor für den insulinähnlichen wachstumsfaktor i
US6961875B2 (en) 2001-03-22 2005-11-01 International Business Machines Corporation Method and apparatus for capturing event traces for debug and analysis
GB0110029D0 (en) 2001-04-24 2001-06-13 Grosveld Frank Transgenic animal
EP1399484B1 (en) 2001-06-28 2010-08-11 Domantis Limited Dual-specific ligand and its use
EP1539233B1 (en) 2001-07-12 2011-04-27 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
US20030138440A1 (en) 2001-07-19 2003-07-24 Fang Fang Multimeric proteins and methods of making and using same
PT1652920E (pt) 2001-10-01 2010-11-08 Deutsches Krebsforsch Processo para a produção de bibliotecas de proteínas e para a selecção de proteínas a partir da mesma
WO2003031656A1 (en) * 2001-10-05 2003-04-17 United States Environmental Protection Agency Genetic testing for male factor infertility
US20060199204A1 (en) * 2001-10-05 2006-09-07 U.S. Epa Genetic testing for male factor infertility
DK1461442T3 (en) 2001-11-30 2017-12-04 Amgen Fremont Inc Transgenic animals with human Ig lambda light chain genes
GB0130267D0 (en) 2001-12-19 2002-02-06 Neutec Pharma Plc Focussed antibody technology
AU2003214842A1 (en) 2002-01-17 2003-09-02 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Mutations caused by activation-induced cytidine deaminase
IL162844A0 (en) 2002-01-18 2005-11-20 Inovio As Use of an expression vector for preparing pharmaceutical compositions
US7732149B2 (en) 2002-04-26 2010-06-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of screening agonistic antibodies
KR101143035B1 (ko) 2002-06-14 2012-05-08 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 단클론 항체 ｈＰＡＭ4
CN101962408A (zh) 2002-07-12 2011-02-02 杰斐逊·富特 超人源化抗体
ATE514717T1 (de) * 2002-07-18 2011-07-15 Merus B V Rekombinante produktion von antikörpermischungen
CL2003002461A1 (es) 2002-11-27 2005-01-07 Dow Chemical Company Agroscien Inmunoglobulina que comprende al menos un glicano afucosilado, composicion que la contiene, secuencia nucleotidica y vector que la comprende, procedimiento para producir dicha inmunoglobulina en plantas.
GB0228210D0 (en) 2002-12-03 2003-01-08 Babraham Inst Single chain antibodies
GB0230203D0 (en) 2002-12-27 2003-02-05 Domantis Ltd Fc fusion
EP1439234A1 (en) 2003-01-08 2004-07-21 ARTEMIS Pharmaceuticals GmbH Targeted transgenesis using the rosa26 locus
ATE431423T1 (de) 2003-01-21 2009-05-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Verfahren zum screening der leichten kette eines antikörpers
WO2004067753A2 (en) 2003-01-28 2004-08-12 Cellectis Use of meganucleases for inducing homologous recombination ex vivo and in toto in vertebrate somatic tissues and application thereof.
US20070009957A1 (en) 2003-03-04 2007-01-11 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Vectors used to create hybrid constant regions
US20100069614A1 (en) * 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
EP2395016A3 (en) 2003-05-30 2012-12-19 Merus B.V. Design and use of paired variable regions of specific binding molecules
MXPA06000562A (es) 2003-07-15 2006-03-30 Therapeutic Human Polyclonals Loci de inmunoglobulina humanizada.
US20050153392A1 (en) 2003-08-11 2005-07-14 Roland Buelow Transgenesis with humanized immunoglobulin loci
WO2005038001A2 (en) 2003-10-14 2005-04-28 Therapeutic Human Polyclonals, Inc. Improved transgenesis by sperm-mediated gene transfer
ATE504599T1 (de) 2004-01-16 2011-04-15 Regeneron Pharma Zur aktivierung von rezeptoren fähige fusionspolypeptide
CN1560081A (zh) 2004-02-17 2005-01-05 大连帝恩生物工程有限公司 用能产生人IgGl重链－κ轻链小鼠作为制备人源化单克隆抗体和应用
US7625549B2 (en) 2004-03-19 2009-12-01 Amgen Fremont Inc. Determining the risk of human anti-human antibodies in transgenic mice
EP1802193B1 (en) 2004-10-19 2014-04-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Method for generating a mouse homozygous for a genetic modification
CA2584814A1 (en) 2004-10-22 2006-05-04 Therapeutic Human Polyclonals, Inc. Suppression of endogenous immunoglobulin expression in non-human transgenic animals
CN101132811B (zh) * 2004-10-22 2012-05-30 米迪缪尼有限公司 抗hmgb1的高亲和力抗体及其用法
AU2006242854A1 (en) 2005-04-29 2006-11-09 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Transgenic animals and methods of making recombinant antibodies
MX2007014139A (es) 2005-05-14 2008-10-09 Univ Fudan Piggybac como una herramienta para manipulacion genetica y analisis en vertebrados.
FR2888850B1 (fr) 2005-07-22 2013-01-11 Pf Medicament Nouveaux anticorps anti-igf-ir et leurs applications
EP2314619A1 (en) * 2005-12-05 2011-04-27 Symphogen A/S Anti-orthopoxvirus recombinant polyclonal antibody
BRPI0706750A2 (pt) 2006-01-25 2011-04-05 Univ Erasmus Medical Ct geração de anticorpos de cadeia pesada em animais transgênicos
US7462759B2 (en) 2006-02-03 2008-12-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brittle stalk 2 gene family and related methods and uses
JP5514539B2 (ja) * 2006-03-31 2014-06-04 メダレックス・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー ヒト抗体の調製に用いるためのキメラ抗体を発現するトランスジェニック動物
CA2652976C (en) * 2006-06-02 2015-08-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity antibodies to human il-6 receptor
US8084024B2 (en) 2006-08-22 2011-12-27 G2 Inflammation Pty Ltd Method for producing antibodies
MY149079A (en) 2006-10-02 2013-07-15 Regeneron Pharma High affinity human antibodies to human il-4 receptor
US7608693B2 (en) 2006-10-02 2009-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-4 receptor
RU2448979C2 (ru) 2006-12-14 2012-04-27 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела человека к дельта-подобному лиганду-4 человека
US9127064B2 (en) 2006-12-21 2015-09-08 Novo Nordisk A/S Antibodies against human NKG2D and uses thereof
GB0700194D0 (en) 2007-01-05 2007-02-14 Univ Edinburgh Humanisation of animals
WO2008112922A2 (en) 2007-03-13 2008-09-18 National Jewish Medical And Research Center Methods for generation of antibodies
HUE037302T2 (hu) 2007-06-01 2018-08-28 Open Monoclonal Tech Inc Készítmények és eljárások endogén immunglobulin gének gátlására és transzgenikus humán idiotipikus antianyagok elõállítása
WO2009013620A2 (en) 2007-06-11 2009-01-29 Erasmus University Medical Center Rotterdam Homologous recombination
ITMI20071522A1 (it) * 2007-07-27 2009-01-28 Areta Internat S R L Vaccino idiotipico
JP5588866B2 (ja) 2007-08-10 2014-09-10 メダレックス エル．エル．シー． Ｈｃｏ３２およびｈｃｏ２７、ならびに関連実施例
US8933197B2 (en) 2007-08-15 2015-01-13 Amunix Operating Inc. Compositions comprising modified biologically active polypeptides
DK3124497T3 (da) 2007-09-14 2020-05-11 Adimab Llc Rationelt designede syntetiske antistofbiblioteker og anvendelser deraf
EP2211903A4 (en) 2007-10-17 2011-07-06 Nuvelo Inc CLL-1 ANTIBODY
DK2235064T3 (en) 2008-01-07 2016-01-11 Amgen Inc A process for the preparation of heterodimeric Fc molecules using electrostatic control effects
US8012714B2 (en) 2008-04-14 2011-09-06 Innovative Targeting Solutions, Inc. Sequence diversity generation in immunoglobulins
ES2436044T3 (es) 2008-05-23 2013-12-26 Ablexis, Llc Procedimiento de generación de anticuerpos de dominio VL individual en animales transgénicos
RU2559524C2 (ru) 2008-06-27 2015-08-10 Мерюс Б.В. Продуцирующие антитела млекопитающие, не являющиеся человеком
EP3889265A1 (en) 2008-09-30 2021-10-06 Ablexis, LLC Transgenic mice for the production of chimeric antibodies
WO2010054007A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Combinatorial antibody libraries and uses thereof
JP5827127B2 (ja) 2008-12-18 2015-12-02 エラスムス・ユニヴァーシティ・メディカル・センター・ロッテルダム ヒト化抗体を発現する非ヒトトランスジェニック動物及びその使用
EP2401298A1 (en) 2009-02-24 2012-01-04 Glaxo Group Limited Antigen-binding constructs
CN102427978B (zh) 2009-05-07 2016-01-20 沃尔沃建筑设备公司 工程机械和用于操作工程机械的方法
JP5804521B2 (ja) 2009-05-29 2015-11-04 モルフォシス・アー・ゲー コレクション及びその使用方法
MY164121A (en) 2009-06-26 2017-11-30 Regeneron Pharma Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
PT2517556E (pt) 2009-07-08 2016-01-20 Kymab Ltd Modelos animais e moléculas terapêuticas
US20120204278A1 (en) * 2009-07-08 2012-08-09 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
EP2502993B1 (en) 2009-11-17 2017-07-26 Sanford Applied Biosciences L.L.C. Human artificial chromosome vector
CA2782936C (en) 2009-12-10 2019-06-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice that make heavy chain antibodies
US20130045492A1 (en) * 2010-02-08 2013-02-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain
US9796788B2 (en) 2010-02-08 2017-10-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire
LT3095871T (lt) 2010-02-08 2019-05-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bendros lengvosios grandinės pelė
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
US20130185821A1 (en) 2010-02-08 2013-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
WO2011143545A1 (en) 2010-05-14 2011-11-17 Rinat Neuroscience Corporation Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
CN103228130B (zh) 2010-06-17 2016-03-16 科马布有限公司 动物模型及治疗分子
BR112012033248A2 (pt) 2010-06-22 2017-11-28 Regeneron Pharma camundongos expressando uma cadeia leve com variável de lâmbda humana e regiões constantes de camundongo
SG10201912639SA (en) 2010-08-02 2020-02-27 Regeneron Pharma Mice that make binding proteins comprising vl domains
SG10201913160QA (en) 2011-02-25 2020-03-30 Regeneron Pharma Adam6 mice
US10130081B2 (en) 2011-08-05 2018-11-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized universal light chain mice
CA2791109C (en) 2011-09-26 2021-02-16 Merus B.V. Generation of binding molecules
IN2014CN03572A (zh) 2011-10-17 2015-10-09 Regeneron Pharma
GB201122047D0 (en) 2011-12-21 2012-02-01 Kymab Ltd Transgenic animals
EP3165086A1 (en) 2012-03-06 2017-05-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common light chain mouse
US9248181B2 (en) 2012-04-20 2016-02-02 Merus B.V. Methods and means for the production of Ig-like molecules
KR20150023535A (ko) 2012-06-05 2015-03-05 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 공통 경쇄를 사용하여 완전한 인간 이중 특이적 항체를 만드는 방법
SG11201506294TA (en) 2013-03-13 2015-09-29 Regeneron Pharma Common light chain mouse
FI3501272T3 (fi) 2013-03-13 2023-04-06 Regeneron Pharma Rajallista immunoglobuliinin kevytketjuvalikoimaa ilmentäviä hiiriä

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070196363A1 (en) * 1997-05-02 2007-08-23 Genentech, Inc. Method for Making Multispecific Antibodies Having Heteromultimeric and Common Components
WO1999045962A1 (en) * 1998-03-13 1999-09-16 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
CN100497642C (zh) * 2000-10-31 2009-06-10 里珍纳龙药品有限公司 修饰真核细胞的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Analysis of Heavy and Light Chain Pairings Indicates that Receptor Editing Shapes the Human Antibody Repertoire;Ruud M.T.de wildt 等;《Journal of Molecular Biology》;19990122;第285卷(第3期);第895-901页 *
Engineering of Fc1 and Fc3 from human immunoglobulin G to analysis subclass specificity for staphylococcal protein A;Lena Jendeberg 等;《Journal of Immunological Methods》;19970214;第201卷(第1期);第27页右栏第2段-第28页左栏第1段，附图2 *

Also Published As

Publication number Publication date
SG10201610294RA (en) 2017-02-27
MY166529A (en) 2018-07-10
JP6470789B2 (ja) 2019-02-13
JP5955781B2 (ja) 2016-07-20
KR20190077630A (ko) 2019-07-03
LT2505654T (lt) 2016-12-12
PT2501817E (pt) 2015-11-04
JP6960005B2 (ja) 2021-11-05
DK2501817T4 (da) 2021-07-26
US10143186B2 (en) 2018-12-04
SI2501817T1 (sl) 2015-12-31
CN102791866B (zh) 2015-07-29
EP2501817B1 (en) 2015-08-26
US10986820B2 (en) 2021-04-27
AU2011213585B2 (en) 2014-02-06
PL2505654T5 (pl) 2020-11-30
SI3095871T1 (sl) 2019-06-28
MX350983B (es) 2017-09-27
CN105010238A (zh) 2015-11-04
ZA201205944B (en) 2013-06-26
KR20200060534A (ko) 2020-05-29
RU2015147726A (ru) 2019-01-15
TR201906650T4 (tr) 2019-05-21
BR122014002928A2 (pt) 2015-12-29
NZ719253A (en) 2022-08-26
US20120192300A1 (en) 2012-07-26
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