JP7463366B2 - 新規の抗ジカウイルス抗体及びその使用 - Google Patents

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Description

関連出願情報
本出願は、２０１８年１１月２０日に出願された米国仮出願第６２／７７０１４８の優先権を主張し、本出願の内容は、参照することにより本明細書に組み込まれる。
連邦政府による資金提供を受けた研究の記載
本発明は、米国保健福祉省、事前準備・対応担当次官補局、米生物医学先端研究開発局による契約番号ＨＨＳＯ１００２０１６０００１５Ｃの下で米国政府の支援によってなされたものである。本発明は、米国保健福祉省の一機関である疾病予防管理センターとの共同研究開発協定の履行において成されたものである。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されて、本明細書にその全体が援用される配列表を含む。２０１９年９月２０日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、１１７７４２＿０８０２０＿ＳＬ．ｔｘｔというファイル名である。
ジカウイルス（ＺＩＫＶ）は、フラビウイルス科フラビウイルス属ファミリーにおけるプラス鎖ＲＮＡ節足動物媒介性ウイルス（アルボウイルス）である（参照により本明細書に組み込まれるＧｕｂｌｅｒ，ＤＪ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ：Ｋｎｉｐｅ，ＤＭ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５ｔｈ ｅｄｎ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，２００７：１１５５－２２７）。ネッタイシマカという蚊によってヒトへ主として伝播すると考えられている。蚊による伝播に加えて、ＺＩＫＶは、性的に（参照により本明細書に組み込まれるＦｏｙ，ＢＤ，ｅｔ ａｌ．，（２０１１），Ｅｍｅｒｇ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７：８８０－８８２）及び垂直に（参照により本明細書に組み込まれるＭｌａｋａｒ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，（２０１６），Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７４：９５１～９５８）伝播し得、または、血液製剤もしくは組織試料を介して伝播し得る。ＺＩＫＶは、概して、軽度の疾患を発症させ、大部分の症候性個人において発疹及び軽度の熱性疾患を伴う。しかしながら、妊婦がＺＩＫＶに感染した場合、胎児における小頭症（参照により本明細書に組み込まれるＳｃｈｕｌｅｒ－Ｆａｃｃｉｎｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，（２０１６），ＭＭＷＲ Ｍｏｒｂ．Ｍｏｒｔａｌ．Ｗｌｙ Ｒｅｐ．６５：５９－６２）または他の発達異常（参照により本明細書に組み込まれるＢｒａｓｉｌ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，Ｍａｒｃｈ ４）を発症するリスクが高まる。ＺＩＫＶは、このウイルスに感染した患者のギラン・バレー症候群と関連しているという報告もある（参照により本明細書に組み込まれるＣａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ，ＶＭ，ｅｔ ａｌ．，（２０１６），Ｌａｎｃｅｔ，Ａｐｒ ９；３８７（１００２７）：１５３１－９）。加えて、ＺＩＫＶと脳虚血、脊髄炎及び髄膜脳炎との関連も報告されている（参照により本明細書に組み込まれるＣａｒｔｅａｕｘ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（２０１６），Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７４（１６）：１５９５）。
ＺＩＫＶは、フラビウイルス属に属し、これは、西ナイルウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、及び脳炎を引き起こす可能性のあるいくつかの他のウイルスも含む。フラビウイルスは、エンベロープウイルスであり、正２０面体及び球形のジオメトリを有する。直径は、約５０ｎｍである。ゲノムは、線状のプラスセンスＲＮＡであり、カプシドタンパク質（Ｃ）の複数のコピーと複合体形成した、非セグメントの約１０～１１ｋｂ塩基であり、全て脂質膜に固定されたエンベロープ糖タンパク質（Ｅ）（約５００アミノ酸）、及び膜タンパク質（Ｍ）（約７５アミノ酸）または前駆体膜タンパク質（ｐｒＭ）（約１６５アミノ酸）のそれぞれ１８０コピーからなる正二十面体のシェルに囲まれている。そのゲノムはまた、７つの非構造タンパク質（ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ及びＮＳ５）をコードする（参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１８０１０７８９）。
ＺＩＫＶは、ウガンダのジカ森林で１９４７年にマカクから最初に単離され（参照により本明細書に組み込まれるＧ．Ｗ．Ａ．Ｄｉｃｋ，Ｓ．Ｆ．Ｋｉｔｃｈｅｎ，Ａ．Ｊ．Ｈａｄｄｏｗ，Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ．Ｉ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．４６，５０９－５２０（１９５２））、１９５４年にナイジェリアで最初のヒト感染が報告された（参照により本明細書に組み込まれるＦ．Ｎ．Ｍａｃｎａｍａｒａ，Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ：ａ ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ ｔｈｒｅｅ ｃａｓｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ａｎ ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｏｆ ｊａｕｎｄｉｃｅ ｉｎ Ｎｉｇｅｒｉａ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．４８，１３９－１４５（１９５４））。それ以来、アフリカや東南アジアでは、ＺＩＫＶ感染が散発的に報告されている（参照により本明細書に組み込まれるＤ．Ｍｕｓｓｏ，Ｖａｎ Ｍａｉ Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ，Ｄ．Ｊ．Ｇｕｂｌｅｒ，Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ：ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｐａｔｈ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ａｎｄ ｃｈｉｋｕｎｇｕｎｙａ？ Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ．３８６，２４３－２４４（２０１５））が、２００７年にミクロネシアで（参照により本明細書に組み込まれるＭ．Ｒ．Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａ／．，Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｎ Ｙａｐ Ｉｓｌａｎｄ，Ｆｅｄｅｒａｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｎｅｓｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３６０，２５３６－２５４３（２００９））、２０１３～１４年にフランス領ポリネシアで流行が報告され、ウイルスは、その後、大西洋大陸の他の国々にも広がっている（各々が参照により本明細書に組み込まれるＶ．－Ｍ．Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ，Ｄ．Ｍｕｓｓｏ，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ａｒｂｏｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ．Ｌａｎｃｅｔ．３８４，１５７１－１５７２（２０１４）；Ｄ．Ｍｕｓｓｏ，Ｅ．Ｊ．Ｎｉｌｌｅｓ，Ｖ．－Ｍ．Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ，Ｒａｐｉｄ ｓｐｒｅａｄ ｏｆ ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ ａｒｅａ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．２０，０５９５－６（２０１４））。２０１５年にブラジルに入った後、ＺＩＫＶは、急速に広がり、２０１６年２月に世界保健機関（ＷＨＯ）は、国際問題の公衆衛生緊急事態を宣言した（各々が参照により本明細書に組み込まれるＬ．Ｒ．Ｂａｄｅｎ，Ｌ．Ｒ．Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，Ｄ．Ｊ．Ｊａｍｉｅｓｏｎ，Ａ．Ｍ．Ｐｏｗｅｒｓ，Ｍ．Ａ．Ｈｏｎｅｉｎ，Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７４，１５５２－１５６３（２０１６）；Ａ．Ｓ．Ｆａｕｃｉ，Ｄ．Ｍ．Ｍｏｒｅｎｓ，Ｚｉｋａ Ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｓ －Ｙｅｔ Ａｎｏｔｈｅｒ Ａｒｂｏｖｉｒｕｓ Ｔｈｒｅａｔ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，３７４（７）：６０１－４（２０１６）；Ｄ．Ｌ．Ｈｅｙｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ：ｗｈｙ ｉｓ ｔｈｉｓ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ａ ＰＨＥＩＣ？ Ｌａｎｃｅｔ ３８７，７１９－７２１（２０１６））。
ある特定のフラビウイルスの特徴である現象は、異種ウイルスによる過去の感染によって惹起された交差反応性抗体の疾患増強活性である。４つの血清型が知られているデングウイルス（ＤＥＮＶ）の場合、一次感染が同じ血清型による再感染から防御するが、異なる血清型による再感染時に重症疾患の発症の危険因子であるという疫学的証拠がある（参照により本明細書に組み込まれるＳ．Ｂ．Ｈａｉｓｔｅａｄ，Ｄｅｎｇｕｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｋｎｏｗｎｓ ａｎｄ Ｕｎｋｎｏｗｎｓ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｐｅｃｔｒ．２，２４９－２７１（２０１４））。疾患の悪化が、侵入するウイルスを中和することができないが、その代わりにＦｃ受容体発現（ＦｃＲ＋）細胞によるその捕捉を高め、ウイルス複製及び交差反応性記憶Ｔ細胞の活性化をもたらすＥ及びｐｒＭ特異的抗体によって引き起こされる。その結果として生じるサイトカインストームが、デング出血熱／デングショック症候群として知られる最も重篤な形態の疾患の基礎であると考えられる（各々が参照により本明細書に組み込まれるＳ．Ｂ．Ｈａｉｓｔｅａｄ，Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓｅｓ．Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．６０，４２１－４６７（２００３）；Ｇ．Ｓｃｒｅａｔｏｎ，Ｊ．Ｍｏｎｇｋｏｌｓａｐａｙａ，Ｓ．Ｙａｃｏｕｂ，Ｃ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５，７４５－７５９（２０１５））。重度のデング熱における抗体の役割は、乳児における母体抗体の減少レベルが重度のデング熱の発生のリスクが高いことを示す研究によって裏付けられている（各々が参照により本明細書に組み込まれるＳ．Ｂ．Ｈａｌｓｔｅａｄ，Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓｅｓ．Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．６０，４２１－４６７（２００３）；Ｓ．Ｂ．Ｈａｉｓｔｅａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｎｇｕｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ：ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｉｇｎｏｒｅｄ．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．８，１４７４－１４７９（２００２）；Ｔ．Ｈ．Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｎｇｕｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ ｉｎ ｉｎｆａｎｔｓ：ａ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ．Ｊ Ｉｎ ｆｅｅｔ Ｄｉｓ．１８９，２２１－２３２（２００４）；Ａ．Ｌ．Ｒｏｔｈｍａｎ，Ｄｅｎｇｕｅ：ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｖｅｒｓｕｓ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１３，９４６－９５１（２００４））。
さらに、ＷＨＯによれば、小頭症及びＺＩＫＶ感染に潜在的に関連する他の神経学的障害の症例数の最近の増加は、ＺＩＫＶ感染を検出するための実験室での検査の需要の高まりを後押ししている。この文脈において、ＺＩＫＶ感染を他のフラビウイルスの感染と区別するためには、抗体の高い特異性が必要である。しかしながら、知られた抗ＺＩＫＶ抗体は、典型的には、他のフラビウイルスに対して交差反応性であり、したがって、ＺＩＫＶ感染を他のフラビウイルスの感染と区別するのに有用ではない。
前記に鑑みて、本発明の目的は、ＺＩＫＶエピトープに特異的に結合する新規抗体を提供することである。本発明の目的は、また、強力に中和する抗ＺＩＫＶ抗体を提供することである。そのような抗体は、好ましくは、ＺＩＫＶ感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）に寄与しない。また、本発明の目的は、ＺＩＫＶ感染の診断及び検査に有用な高度に特異的な抗ＺＩＫＶ抗体、及びそのような抗体を用いる診断方法を提供することである。さらに、これらの抗体は、ワクチン原薬またはワクチン製剤の特徴付け、及びワクチン候補に対する免疫応答に使用することができる。
本発明は、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分を提供する。
第１の態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領
域、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶを結合する単離された抗体またはその抗原結合部分を提供し、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、またはその抗原結合部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域をさらに含む。他の実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２に記載のアミノ酸配列または配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号７に記載のアミノ酸配列または配列番号７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１に記載のアミノ酸配列または配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２に記載のアミノ酸配列または配列番号１２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列または配列番号１７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１１に記載のアミノ酸配列または配列番号１１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列または配列番号１６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２２に記載のアミノ酸配列または配列番号２２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２７に記載のアミノ酸配列または配列番号２７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２１に記載のアミノ酸配列または配列番号２１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列または配列番号２６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３２に記載のアミノ酸配列または配列番号３２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３７に記載のアミノ酸配列または配列番号３７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３１に記載のアミノ酸配列または配列番号３１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号３６に記載のアミノ酸配列または配列番号３６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４２に記載のアミノ酸配列または配列番号４２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４７に記載のアミノ酸配列または配列番号４７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４１に記載のアミノ酸配列または配列番号４１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号４６に記載のアミノ酸配列または配列番号４６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５２に記載のアミノ酸配列または配列番号５２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５７に記載のアミノ酸配列または配列番号５７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５１に記載のアミノ酸配列または配列番号５１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号５６に記載のアミノ酸配列または配列番号５６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８６に記載のアミノ酸配列または配列番号８６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号９１に記載のアミノ酸配列または配列番号９１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号９１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８５に記載のアミノ酸配列または配列番号８５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号９０に記載のアミノ酸配列または配列番号９０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９６に記載のアミノ酸配列または配列番号９６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０１に記載のアミノ酸配列または配列番号１０１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９５に記載のアミノ酸配列または配列番号９５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１００に記載のアミノ酸配列または配列番号１００に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１００に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列または配列番号１０６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１１に記載のアミノ酸配列または配列番号１１１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０５に記載のアミノ酸配列または配列番号１０５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１１０に記載のアミノ酸配列または配列番号１１０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２９に記載のアミノ酸配列または配列番号１２９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３４に記載のアミノ酸配列または配列番号１３４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号１３４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列または配列番号１２８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列または配列番号１３３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分として、ＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合部分であって、エピトープは、配列番号１２７に存在するＴ３０９、Ｔ３３５、Ｇ３３７、及びＳ３６８のアミノ酸を含む、抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合部分であって、エピトープは、配列番号１２７に存在するＴ３６９及びＥ３７０のアミノ酸を含む、抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合部分であって、エピトープは、配列番号１２７に存在するＴ３３５、Ｓ３６８、Ｔ３６９、及びＥ３７０のアミノ酸を含む、抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合部分であって、エピトープは、配列番号１２７に存在するＥ１６２、Ｇ１８１、Ｇ１８２、Ｋ３０１、及びＧ３０２のアミノ酸を含む、抗体またはその抗原結合部分を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、抗体またはその抗原結合部分であって、エピトープは、配列番号１２７に存在するＩ３１７、Ｔ３９７、Ｈ３９８、及びＨ３９９のアミノ酸を含む、抗体またはその抗原結合部分を提供する。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、１つ以上のＺＩＫＶ株によって引き起こされるウイルス感染を中和する。いくつかの実施形態では、１つ以上のＺＩＫＶ株は、ジカＳＰＨ（ブラジル２０１５、ＫＵ３２１６３９．１）、ブラジル－ＺＫＶ（ブラジル２０１５、ＫＵ４９７５５５．１）、ＰＲＶＡＢＣ５９（プエルトリコ２０１５、ＫＵ５０１２１５．１）、ハイチ１２２５（ハイチ２０１４、ＫＵ５０９９９８．１）、ナタールＲＧＮ（ブラジル、ＫＵ５２７０６８．１）、ＳＶ０１２７～１４（タイ２０１４、ＫＵ６８１０８１．３）、ＣＰＣ－０７４０（フィリピン２０１２、ＫＵ６８１０８２．３）、ＳＳＡＢＲ１（ブラジル、ＫＵ７０７８２６．１）、ＶＥ＿Ｇａｎｘｉａｎ（中国、ＫＵ７４４６９３．１）、ＭＲ７６６－ＮＩＩＤ（ウガンダ、ＬＣ００２５２０．１）、ＭＲ７６６（ウガンダ１９４７、ＡＹ６３２５３５．２）、及びＨ／ＰＦ（フランス領ポリネシア２０１３、ＫＪ７７６７９１．１）（ＷＯ２０１７／１０９２２５、参照により組み込む）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、約１０－９Ｍ以下のＩＣ５０またはＥＣ５０でＺＩＫＶをインビトロで中和する。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶ感染動物においてインビボでの防御作用を示す。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶ感染のＡＤＥに寄与しない。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、デングウイルスに結合しない。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分である。いくつかの実施形態では、前記単離された抗体またはその抗原結合部分は、組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合部分である。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、ヒト抗体またはその抗原結合部分である。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、ヒト化抗体またはその抗原結合部分である。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧアイソタイプのものである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１アイソタイプである。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ２アイソタイプである。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ３アイソタイプである。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、100nM以下の解離定数（KD）でＺＩＫＶに結合する。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、精製抗体、一本鎖抗体、Fab、Fab’、F（ab’）2、FvまたはscFvである。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、ラベルで標識される。いくつかの実施形態では、標識は、ビオチン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）、アルカリホスファターゼ（AP）、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、Alexa色素、FITC、TRITC、DyLight fluor、緑色蛍光タンパク質（GFP）、及びR-フィコエリトリンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、標識は、ビオチンまたは西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）である。
ある特定の態様では、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分は、多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、二重特異性抗体である。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分、及び薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む、医薬組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結乾燥組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、液体組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、-65℃以下の温度で凍結される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、単回用量製品として提供される。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される医薬組成物を含む、注射器を提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号６２の核酸配列または配列番号６２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４の核酸配列または配列番号６４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号６１の核酸配列または配列番号６１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号６３の核酸配列または配列番号６３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号６６の核酸配列または配列番号６６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６８の核酸配列または配列番号６８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号６５の核酸配列または配列番号６５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号６７の核酸配列または配列番号６７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号７０の核酸配列または配列番号７０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７２の核酸配列または配列番号７２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号６９の核酸配列または配列番号６９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号７１の核酸配列または配列番号７１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号７４の核酸配列または配列番号７４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７６の核酸配列または配列番号７６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号７３の核酸配列または配列番号７３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号７５の核酸配列または配列番号７５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号７８の核酸配列または配列番号７８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８０の核酸配列または配列番号８０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号７７の核酸配列または配列番号７７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号７９の核酸配列または配列番号７９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号８２の核酸配列または配列番号８２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８４の核酸配列または配列番号８４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号８１の核酸配列または配列番号８１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号８３の核酸配列または配列番号８３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１１６の核酸配列または配列番号１１６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８の核酸配列または配列番号１１８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１１５の核酸配列または配列番号１１５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１１７の核酸配列または配列番号１１７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２０の核酸配列または配列番号１２０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２２の核酸配列または配列番号１２２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１１９の核酸配列または配列番号１１９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１２１の核酸配列または配列番号１２１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２４の核酸配列または配列番号１２４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６の核酸配列または配列番号１２６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１２３の核酸配列または配列番号１２３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１２５の核酸配列または配列番号１２５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１３９の核酸配列または配列番号１３９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１４１の核酸配列または配列番号１４１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１３８の核酸配列または配列番号１３８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１４０の核酸配列または配列番号１４０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の核酸配列のいずれか１つは、シグナルペプチドをコードするリーダー配列を含んでいてもまたは含んでいなくてもよい。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される核酸分子を含む、ベクターを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される核酸分子またはベクターを発現する、単離された細胞を提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分、及び使用説明書を含む、キットを提供する。
一態様では、本発明は、感染性ＺＩＫＶの中和方法であって、感染性ＺＩＫＶに感染した細胞を、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分に暴露することを含み、暴露することは、ウイルス感染または細胞死から細胞の防御強化をもたらす、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、防御強化は、単離された抗体を単独で使用する場合、または少なくとも１つの追加の治療剤または抗ＺＩＫＶ治療モダリティと組み合わせて使用する場合に観察される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ウイルス薬、抗炎症薬、前記感染性ＺＩＫＶに対する異なる抗体、前記感染性ＺＩＫＶ用のワクチン、免疫調節薬及びインターフェロンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、コルチコステロイド及び非ステロイド系抗炎症薬からなる群から選択される。
一態様では、本発明は、ＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状を予防、治療もしくは寛解させるか、またはＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状の頻度もしくは重症度を低下させる方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載される少なくとも１つの単離された抗体またはその抗原結合部分、または本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの症状は、発熱、頭痛、関節痛、筋肉痛及び斑状丘疹性発疹からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、それを必要とする対象は、ＺＩＫＶ感染の曝露についてのリスク、またはＺＩＫＶ感染を受けるリスクにあり、対象は、ＺＩＫＶへ曝露された、またはＺＩＫＶを保有していると疑われる蚊に刺された妊婦、ＺＩＫＶが大流行している地域に住んでいる、またはＺＩＫＶが大流行している地域を訪れており、妊娠中とみなされている女性、免疫不全容態の個人、ＺＩＫＶを保有している人へ曝露されたと疑われる人、ＺＩＫＶ感染した個人と物理的に接触しているもしくは物理的に緊密な人、病院職員、医薬研究者、ＺＩＫＶ感染した患者が治療された病院施設もしくは研究所を清掃する責任のあるメンテナンス業者、ＺＩＫＶが大流行していることが知られているもしくは大流行していると疑われる地域もしくは国を訪れたもしくは訪れることを計画している個人、またはＺＩＫＶを保有している蚊を有していることが知られている国からなる群から選択される。
一態様では、本発明は、妊婦の胎児にＺＩＫＶ感染を伝播させる尤度を低下させる方法、及び／または男性生殖器官への伝播の予防方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載される少なくとも１つの単離された抗体または抗原結合部分、または本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分、または医薬組成物は、それを必要とする対象へ予防的または治療的に投与される。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分、または医薬組成物は、第２の治療剤との組み合わせで投与され、第２の治療剤は、抗ウイルス薬、抗炎症薬、ＺＩＫＶに対する異なる抗体、ＺＩＫＶ用のワクチン、免疫調節薬、及びインターフェロンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗炎症薬は、コルチコステロイド及び非ステロイド系抗炎症薬から選択される。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分、または医薬組成物は、皮下に、静脈内に、皮内に、筋肉内に、鼻腔内に、または経口で投与される。いくつかの実施形態では、有効量の単離された抗体またはその抗原結合部分は、７５０ｍｇを超えない、好ましくは、５００ｍｇを超えない、より好ましくは、２５０ｍｇを超えない、及びさらにより好ましくは、１００ｍｇを超えない。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合部分は、約０．００１～約６０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは、約０．００１～約１、約１～約５、約５～約１０、約１０～約２０、または約２０～約６０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量で投与される。ヒト対象の平均体重は、６０～８０ｋｇである。本明細書に開示する全ての実施形態は、互いにさらに組み合わせることができる。
一態様では、本発明は、対象におけるＺＩＫＶ感染のインビトロ診断方法であって、（ｉ）対象から単離試料を、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質、ＶＬＰ、ウイルスまたは不活化ウイルスでコーティングしたプレートと接触させて、プレート上の試料を一定期間インキュベートすること；（ｉｉ）工程（ｉ）においてプレート上でインキュベートされた試料を、本明細書に記載される単離された抗体またはその抗原結合部分と接触させて、一定期間さらにインキュベートすること；及び（ｉｉｉ）単離された抗体またはその抗原結合部分のプレートへの結合の阻害を決定すること、単離された抗体またはその抗原結合部分のプレートへの結合の阻害は、試料における抗ＺＩＫＶ抗体の存在を反映し、試料における抗ＺＩＫＶ抗体の存在は、対象におけるＺＩＫＶ感染を示すことによって、対象におけるＺＩＫＶ感染を診断すること、を含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、試料は、血液、唾液及び尿からなる群から選択される；好ましくは、試料は、血液、例えば、全血、血漿または血清である。いくつかの実施形態では、工程（ｉｉ）で加えた単離された抗体またはその抗原結合部分は、ラベルで標識される。いくつかの実施形態では、標識は、ビオチン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、Ａｌｅｘａ色素、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ、ＤｙＬｉｇｈｔ ｆｌｕｏｒ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、及びＲ－フィコエリトリンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、標識は、ビオチンまたは西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）である。いくつかの実施形態では、対象から単離試料は、例えば、１：５～１：５０、好ましくは、１：５～１：２５、より好ましくは、１：１０に希釈される。いくつかの実施形態では、工程（ｉ）におけるインキュベーションの一定期間は、少なくとも５分、好ましくは、少なくとも１５分、より好ましくは、少なくとも３０分、さらにより好ましくは、少なくとも４５分、及び最も好ましくは、少なくとも６０分である。いくつかの実施形態では、工程（ｉｉｉ）におけるさらなるインキュベーションの一定期間は、少なくとも１分、好ましくは、少なくとも３分、より好ましくは、少なくとも５分、さらにより好ましくは、少なくとも１０分及び最も好ましくは、少なくとも１５分である。
一態様では、本発明は、試験抗ＺＩＫＶ抗体の効力／濃度の決定方法であって、（ａ）プレートのウェルをＰＩＺＶで被覆すること；（ｂ）ウェル上にコーティングしたＰＩＺＶを、試験抗体の複数の溶液のうちの１つでインキュベートすること、試験抗体の複数の溶液は、試験抗体の濃縮溶液の連続希釈によって調製され；（ｃ）ＰＩＺＶに結合する試験抗体を、二次抗体でインキュベートすること、二次抗体の単離された抗体への結合は、シグナルを生成し；（ｄ）シグナルを検出すること；（ｅ）工程（ｂ）で調製された複数の溶液の残りで工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すこと；及び（ｆ）二次抗体のシグナルによる希釈曲線を、工程（ｂ）で調製された複数の溶液の各々の濃度に対してプロットすること、希釈曲線のＩＣ５０は、試験抗体の効力を示す、を含む、方法を提供する。
一態様では、本発明は、試験ＰＩＺＶの効力／濃度の決定方法であって、（ａ）プレートのウェルを、試験ＰＩＺＶ上の第１のエピトープに結合して、試験ＰＩＺＶを捕捉する第１の抗ＺＩＫＶ抗体で被覆すること；（ｂ）被覆ウェルを試験ＰＩＺＶでインキュベートすること；（ｃ）被覆ウェルを、試験ＰＩＶＺ上の第２のエピトープに結合する第２の抗ＺＩＫＶ抗体の複数の溶液のうちの１つでさらにインキュベートすること、第２の抗ＺＩＫＶ抗体の複数の溶液は、第２の抗ＺＩＫＶ抗体の濃縮溶液の連続希釈によって調製され；（ｄ）被覆ウェルを、酵素またはレポーターにコンジュゲートした二次抗体でさらにインキュベートすること、二次抗体の第２の抗ＺＩＫＶ抗体への結合は、シグナルを生成し；（ｅ）シグナルを検出すること；（ｆ）工程（ｃ）で調製された第２の抗ＺＩＫＶ抗体の複数の溶液の残りで工程（ａ）～（ｅ）を繰り返すこと；及び（ｇ）二次抗ＺＩＫＶ抗体のシグナルによる希釈曲線を、工程（ｃ）で調製された第２の抗ＺＩＫＶ抗体の複数の溶液の各々の濃度に対してプロットすること、希釈曲線のＩＣ５０は、試験ＰＩＺＶの効力を示し、第１の抗ＺＩＫＶ抗体及び第２の抗ＺＩＫＶ抗体のうちの少なくとも１つは、本明細書に記載の単離された抗体であり；第１のエピトープは、第２のエピトープと重複しない、を含む、方法を提供する。一実施形態では、第２の抗ＺＩＫＶ抗体は、本明細書に記載の単離された中和抗体のいずれか１つである。
ＭＮＴによる正規化濃度で、インハウスｍＡｂの４Ｇ２及びＣ１０との比較。１０μｇ／ｍｌの各抗体を連続希釈し、生ジカウイルスに対するＭＮＴ試験を施した。相対感染力は、抗体希釈液に対してプロットした。ＩＣ５０値は、曲線データから計算した。 Ａ及びＢ。間接ＥＬＩＳＡによる正規化濃度で、インハウスｍＡｂの４Ｇ２及びＣ１０との比較。１０μｇ／ｍｌの各抗体を連続希釈し、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ（図２Ａ）またはＰＩＺＶ（図２Ｂ）のいずれかに対する結合について試験した。吸光度を抗体希釈液に対してプロットし、シグモイド曲線を生成した。ＩＣ５０値は、プロットから計算した。 ビニング工程によるハイブリドーマサブクローン上清のエピトープビニング。青色のスパイクによる赤丸は、ＶＬＰを示す。第１及び第２のｍＡｂは、異なる色で表す。２つの抗体の同時結合は、プロット（右上）に示されるように、シグナルの増加をもたらし、互いの競合は、平らな線（右下）に示されるように、シグナルの増加をもたらさない。 第１の抗体が結合した後の第２の抗体の結合または非結合を表すセンサーグラムで設定したハイブリドーマ上清の競合ビニング。シグナルの増加は、異なるエピトープでの結合を示し、平らな線またはシグナルの増加なしは、同じエピトープの競合を示す。 ビニングの競合アッセイに基づく、理想的なサンドイッチＥＬＩＳＡ抗体対と、ジカウイルスの三次元構造を示す。小さい空円は、異なるエピトープを示す。大きい空円は、同じエピトープへのクローン結合を表す。右パネルは、サンドイッチＥＬＩＳＡ対を、捕捉または検出ｍＡｂのいずれかとして示す。 トップ５の個クローンのビニング実験のクラスタリングの階層分析。第１のｍＡｂ及び第２のｍＡｂの間に交差する反応ユニットを示す。 ５個のクローンからのエピトープビニングの星座プロット。 ５個のクローンからのエピトープビニングの階層クラスタリング。 トップ１０個のクローンのビニング実験のクラスタリングの階層分析。第１のｍＡｂ及び第２のｍＡｂの間に交差する反応ユニットを示す。 １０個のクローンからのエピトープビニングの星座プロット。 トップ６個のサブクローンのウェスタンブロットスクリーニング。左の数は、分子量マーカーの位置を示す。矢印は、ＥまたはＰｒＭタンパク質の位置を示す。レーン１及び２は、Ｅタンパク質の同定のための陽性対照（抗Ｅタンパク質ｍＡｂ ＤＡＫまたはＩＢＴ）である。レーン３～１１は、ｍＡｂがスクリーニングされたことを示す。全ての抗体をＺＩＫＶ－ＶＬＰに対して試験した。 精製後の抗体ストックのＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１２％ ＣｌｅａｒＰａｇｅゲル）分析。１０２－１。 精製後の抗体ストックのＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１２％ ＣｌｅａｒＰａｇｅゲル）分析。３０６－２。 精製後の抗体ストックのＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１２％ ＣｌｅａｒＰａｇｅゲル）分析。２７０－１２。 精製後の抗体ストックのＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１２％ ＣｌｅａｒＰａｇｅゲル）分析。２８９－３。 精製後の抗体ストックのＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１２％ ＣｌｅａｒＰａｇｅゲル）分析。２４２－３。 精製後の抗体ストックのＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１２％ ＣｌｅａｒＰａｇｅゲル）分析。１１－３。 精製後の抗体ストックのＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１２％ ＣｌｅａｒＰａｇｅゲル）分析。７８－２。 Ａ及びＢ。非還元条件下及び変性条件下でのウェスタンブロット分析。左の数は、分子量マーカーの位置を示す。各レーンのバンドは、Ｅタンパク質のサイズを示す。２８９－３を除いて、他の全てのクローンは、Ｅタンパク質への結合を示す。ジカＶＬＰタンパク質に対する精製ｍＡｂ結合活性（Ａ）、及びジカＰＲＶＡＢＣ５９生ウイルスに対する精製ｍＡｂ結合活性（Ｂ）。 図１４。５個のクローン（１０２－１、２８９－３、２４２－３、２７０－１２、及び３０６－２）のＥタンパク質二量体の結晶構造におけるＦａｂ結合のための必須残基の視覚化。必須残基（明るい球体、すなわち、Ｓ３６８を除いた全ての球体）を、標的タンパク質の結晶構造に視覚化した（ＰＤＢ ＩＤ：５ＩＲＥ、Ｓｉｒｏｈｉ ｅｔ ａｌ，２０１６）。結合に寄与し得る二次残基（暗い球体、すなわち、Ｓ３６８）も示す。 図１４。５個のクローン（１０２－１、２８９－３、２４２－３、２７０－１２、及び３０６－２）のＥタンパク質二量体の結晶構造におけるＦａｂ結合のための必須残基の視覚化。必須残基（明るい球体、すなわち、Ｓ３６８を除いた全ての球体）を、標的タンパク質の結晶構造に視覚化した（ＰＤＢ ＩＤ：５ＩＲＥ、Ｓｉｒｏｈｉ ｅｔ ａｌ，２０１６）。結合に寄与し得る二次残基（暗い球体、すなわち、Ｓ３６８）も示す。 図１４。５個のクローン（１０２－１、２８９－３、２４２－３、２７０－１２、及び３０６－２）のＥタンパク質二量体の結晶構造におけるＦａｂ結合のための必須残基の視覚化。必須残基（明るい球体、すなわち、Ｓ３６８を除いた全ての球体）を、標的タンパク質の結晶構造に視覚化した（ＰＤＢ ＩＤ：５ＩＲＥ、Ｓｉｒｏｈｉ ｅｔ ａｌ，２０１６）。結合に寄与し得る二次残基（暗い球体、すなわち、Ｓ３６８）も示す。
本開示の種々の態様は、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分、及びその医薬組成物、並びに、そのような抗体またはその抗原結合部分を作製する核酸、組換え発現ベクター及び宿主細胞に関する。さらに、本開示の態様は、ＺＩＫＶ感染を治療して、ＺＩＫＶ感染を診断するための本明細書に記載される単離された抗体の使用方法に関する。
Ｉ．定義
本開示をより容易に理解することができるように、ある特定の用語を最初に定義する。加えて、パラメーターの値または値の範囲を記載する場合には、記載した値の中間の値及び範囲も、本発明の部分であることを意図するものとすることに留意すべきである。
「ジカウイルス」または「ＺＩＫＶ」は、フラビウイルス科のメンバーであり、ウイルスへ曝露された妊婦の胎児における小頭症及び他の発達異常と関連しており（Ｓｃｈｕｌｅｒ－Ｆａｃｃｉｎｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，（２０１６），ＭＭＷＲ Ｍｏｒｂ．Ｍｏｒｔａｌ．Ｗｌｙ Ｒｅｐ．６５：５９－６２、参照により本明細書に組み込まれる）、成人におけるギラン・バレー症候群とも関連している（Ｃａｏ－Ｌｏｒｍｅａｕ，ＶＭ，ｅｔ ａｌ．，（２０１６），Ｌａｎｃｅｔ，Ａｐｒ ９；３８７（１００２７）：１５３１－９、参照により本明細書に組み込まれる）。「ＺＩＫＶ」という用語は、異なるＺＩＫＶ単離株から単離されたＺＩＫＶの変異体も含まれ、ジカＳＰＨ（ブラジル２０１５、ＫＵ３２１６３９．１）、ブラジル－ＺＫＶ（ブラジル２０１５、ＫＵ４９７５５５．１）、ＰＲＶＡＢＣ５９（プエルトリコ２０１５、ＫＵ５０１２１５．１）、ハイチ１２２５（ハイチ２０１４、ＫＵ５０９９９８．１）、ナタールＲＧＮ（ブラジル、ＫＵ５２７０６８．１）、ＳＶ０１２７～１４（タイ２０１４、ＫＵ６８１０８１．３）、ＣＰＣ－０７４０（フィリピン２０１２、ＫＵ６８１０８２．３）、ＳＳＡＢＲ１（ブラジル、ＫＵ７０７８２６．１）、ＶＥ＿Ｇａｎｘｉａｎ（中国、ＫＵ７４４６９３．１）、ＭＲ７６６－ＮＩＩＤ（ウガンダ、ＬＣ００２５２０．１）、ＭＲ７６６（ウガンダ１９４７、ＡＹ６３２５３５．２）、及びＨ／ＰＦ（フランス領ポリネシア２０１３、ＫＪ７７６７９１．１）（ＷＯ２０１７／１０９２２５、参照により組み込む）が挙げられる。「ＺＩＫＶ」という用語には、カンボジア２０１０（ＪＮ８６０８８５）またはミクロネシア２００７（ＥＵ５４５９８８）（Ｍｌａｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１６ Ｍａｒ １０；３７４（１０）：９５１－８、参照により組み込む）も含まれる。さらに、「ＺＩＫＶ」という用語は、ＦＬＲ（コロンビア２０１５）株（ＷＯ２０１８／０１７４９７、参照により組み込む）を含む。
本明細書中で「ＺＩＫＶ Ｅタンパク質」と記載されるＺＩＫＶエンベロープ糖タンパク質（Ｅ）のアミノ酸配列は、ウイルスタンパク質の一部として、受託番号ＡＷＨ６５８４９．１としてＧｅｎＢａｎｋにおいて見ることができ、アミノ酸２９１～７９４に対応し、配列番号１２７として以下に提供する。
ＩＲＣＩＧＶＳＮＲＤ ＦＶＥＧＭＳＧＧＴＷ ＶＤＶＶＬＥＨＧＧＣ ＶＴＶＭＡＱＤＫＰＴ ＶＤＩＥＬＶＴＴＴＶ ＳＮＭＡＥＶＲＳＹＣ ＹＥＡＳＩＳＤＭＡＳ ＤＳＲＣＰＴＱＧＥＡ ＹＬＤＫＱＳＤＴＱＹ ＶＣＫＲＴＬＶＤＲＧ ＷＧＮＧＣＧＬＦＧＫ ＧＳＬＶＴＣＡＫＦＡ ＣＳＫＫＭＴＧＫＳＩ ＱＰＥＮＬＥＹＲＩＭ ＬＳＶＨＧＳＱＨＳＧ ＭＩＶＮＤＴＧＨＥＴ ＤＥＮＲＡＫＶＥＩＴ ＰＮＳＰＲＡＥＡＴＬ ＧＧＦＧＳＬＧＬＤＣ ＥＰＲＴＧＬＤＦＳＤ ＬＹＹＬＴＭＮＮＫＨ ＷＬＶＨＫＥＷＦＨＤ ＩＰＬＰＷＨＡＧＡＤ ＴＧＴＰＨＷＮＮＫＥ ＡＬＶＥＦＫＤＡＨＡ ＫＲＱＴＶＶＶＬＧＳ ＱＥＧＡＶＨＴＡＬＡ ＧＡＬＥＡＥＭＤＧＡ ＫＧＲＬＳＳＧＨＬＫ ＣＲＬＫＭＤＫＬＲＬ ＫＧＶＳＹＳＬＣＴＡ ＡＦＴＦＴＫＩＰＡＥ ＴＬＨＧＴＶＴＶＥＶ ＱＹＡＧＴＤＧＰＣＫ ＶＰＡＱＭＡＶＤＭＱ ＴＬＴＰＶＧＲＬＩＴ ＡＮＰＶＩＴＥＳＴＥ ＮＳＫＭＭＬＥＬＤＰ ＰＦＧＤＳＹＩＶＩＧ ＶＧＥＫＫＩＴＨＨＷ ＨＲＳＧＳＴＩＧＫＡ ＦＥＡＴＶＲＧＡＫＲ ＭＡＶＬＧＤＴＡＷＤ ＦＧＳＶＧＧＡＬＮＳ ＬＧＫＧＩＨＱＩＦＧ ＡＡＦＫＳＬＦＧＧＭ ＳＷＦＳＱＩＬＩＧＴ ＬＬＭＷＬＧＬＮＴＫ ＮＧＳＩＳＬＭＣＬＡ ＬＧＧＶＬＩＦＬＳＴＡＶＳＡ（配列番号１２７）
「ＺＩＫＶ感染」という用語は、本明細書で使用する場合、ウイルスへの（例えば、ウイルスを保有する蚊によって刺された後）、もしくは感染した動物への、もしくは感染したヒト患者への曝露、またはＺＩＫＶ感染を有する動物もしくはヒト患者に由来する体液もしくは組織との接触からもたらされる疾患または容態を指す。「ＺＩＫＶ感染と関連した症状」には、発熱、頭痛、関節痛、筋肉痛及び斑状丘疹性発疹が含まれる。「ウイルスへの曝露からもたらされる容態」または「ウイルスへの曝露と関連した容態」には、ウイルスを保有している蚊に刺された後にウイルスに感染した妊婦の胎児の小頭症（または発達異常）も含まれる。別の「ウイルスへの曝露からもたらされる容態」または「ウイルスへの曝露と関連した容態」には、ギラン・バレー症候群が含まれる。
目的の抗原、例えば、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質に「結合する」抗体は、抗体が抗原を発現する細胞の標的化に有用であるように、その抗原に十分な親和性で結合することができるものである。好ましい実施形態では、抗体は、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質に特異的に結合する。抗ＺＩＫＶ抗体の例は、以下の実施例に開示する。特に断りのない限り、「抗ＺＩＫＶ抗体」、「本発明の抗体」、または「本発明の抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、ＺＩＫＶに結合する抗体を指すことを意味する。
「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ）」、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」、「に特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」、または「に特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｔｏ）」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体またはその抗原結合断片が、生理学的条件下で比較的安定である抗原と複合体を形成することを意味する。抗体と抗ＺＩＫＶ抗体の相互作用は、抗原上の特定構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存し；例えば、抗体は、タンパク質全般ではなく、特定のタンパク質構造を認識して、これと結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識した「Ａ」と抗体を含有する反応物中にエピトープＡ（すなわち、遊離した未標識のＡ）を含む分子が存在するならば、標識したＡの抗体結合量は減少する。
一実施形態では、「ＺＩＫＶに結合する（ｂｉｎｄｓ ｔｏ ａ ＺＩＫＶ）」、「ＺＩＫＶに特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ ａ ＺＩＫＶ）」または「ＺＩＫＶに特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ａ ＺＩＫＶ」という語句は、本明細書で使用する場合、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定されるように、抗ＺＩＫＶ抗体が、約１ｐＭ（０．００１ｎＭ）～１，０００ｎＭ、約５００ｐＭ（０．５ｎＭ）～１，０００ｎＭ、約５００ｐＭ（０．５ｎＭ）～５００ｎＭ、約１ｎＭ～２００ｎＭ、約１ｎＭ～１００ｎＭ、約１ｎＭ～５０ｎＭ、約１ｎＭ～２０ｎＭ、または約１ｎＭ～５ｎＭの解離定数（ＫＤ）で、ＺＩＫＶと相互作用する能力を指す。「高親和性」抗体という用語は、少なくとも１０－７Ｍ；好ましくは、１０ｎＭ；より好ましくは、１ｎＭ、さらにより好ましくは、０．１ｎＭ、さらにより好ましくは、０．０１ｎＭ、さらにより好ましくは、０．００１ｎＭのＫＤとして表される、ＺＩＫＶに対する結合親和性を有するｍＡｂを指す。
「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用する場合、特定の抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すよう企図される。ＫＤは、ｋａ／ｋｄによって算出される。一実施形態では、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、約１，０００ｎＭ以下、約１，０００ｎＭ以下、約５００ｎＭ以下、約２００ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約７５ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下、約２１ｎＭ以下、約１２ｎＭ以下、約１１ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．３ｎＭ以下、約０．１ｎＭ以下、約０．０１ｎＭ以下、または約０．００１ｎＭ以下のＫＤを有する。
「ｋａ」または「ｋｏｎ」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体／抗原複合体を形成するように、抗体が抗原と会合するオン速度定数を指すよう企図される。
「ｋｄ」または「ｋｏｆｆ」という用語は、本明細書で使用する場合、抗体／抗原複合体から抗体が解離するオフ速度定数を指すよう企図される。「緩徐なオフ速度」、「ｋｄ」、または「Ｋｏｆｆ」という用語によって意味されるのは、速度定数が表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）またはバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、１×１０－３秒－１以下、好ましくは、１×１０－４秒－１以下である、ＺＩＫＶから解離する抗体、またはＺＩＫＶ Ｅタンパク質を発現するＺＩＫＶ－ＶＬＰである。
一実施形態では、Ｋｄは、表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法、または当該技術分野で公知の任意の他の方法によって決定される。「表面プラズモン共鳴」という用語は、本明細書で使用する場合、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ及びＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用した、バイオセンサーマトリクス内のタンパク質濃度の変化の検出によって、リアルタイムの生体特異性相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。バイオレイヤー干渉法は、例えば、Ｏｃｔｅｔ（商標）システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を使用した、反射白光の干渉パターンを測定することによって、リアルタイムの生体特異性相互作用の分析を可能にする光学現象を指す。Ｏｃｔｅｔ（商標）システムのさらなる説明については、各々が参照により本明細書に組み込まれるＬｉ，Ｂ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．５４（２）：２８６－２９４及びＡｂｄｉｃｈｅ，Ｙ．Ｎ．，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３８６（２）：１７２－１８０を参照されたい。
本発明による抗体または抗原結合部分は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってよい。多重特異性抗体は、１つの抗原の異なるエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含有するものであっても、または２つ以上の非関連抗原に特異的な抗原結合ドメインを含有するものであってもよい。例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０－６９；Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８－２４４を参照されたい。本発明の多重特異性抗原結合分子またはその変異体のいずれも、当業者には分かるであろう標準の分子生物学的技法（例えば、組換えＤＮＡ及びタンパク質の発現技術）を使用して構築することができる。
「多価抗体」という用語は、２つ以上の抗原結合部位を含む抗体を指すように本明細書で使用する。ある特定の実施形態では、多価抗体は、３つ以上の抗原結合部位を持つように遺伝子操作され、一般に、天然に存在する抗体ではない。
「二重可変ドメイン」または「ＤＶＤ」という用語は、本明細書で相互交換可能に使用され、２つ以上の抗原結合部位を含む抗原結合タンパク質であり、４価または多価の多価結合タンパク質である。このようなＤＶＤは、単一特異性、１つの抗原と結合可能でもよいし、多重特異性、すなわち、２つ以上の抗原と結合可能でもよい。２本の重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２本の軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤ Ｉｇと言う。ＤＶＤ Ｉｇの各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド、及び軽鎖ＤＶＤポリペプチド、及び２つの抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、抗原結合部位当たり合計６つのＣＤＲが抗原結合に関与する。一実施形態では、本明細書に記載のＣＤＲは、抗ＺＩＫＶ ＤＶＤで使用される。
いくつかの実施形態では、ＺＩＫＶ特異的抗体は、ＺＩＫＶの別個のドメインに結合する可変領域が連結して、単一の結合分子内に二重ドメイン特異性が付与された二重特異性形式（「二重特異性」）で生成される。適切に設計された二重特異性体は、特異性及び結合活性の両方が増大することにより、全体的なＺＩＫＶ感染阻害有効性を増強し得る。個々のドメイン（例えば、Ｎ末端ドメインのセグメント）に対する特異性を有する可変領域、または１つのドメイン内の異なる領域に結合することが可能な可変領域を、各領域が別々のエピトープまたは１つのドメイン内の異なる領域に同時に結合することを可能にする構造的足場上で対合させる。一実施例では、二重特異性体のために、１つのドメインに対する特異性を有する結合体由来の重鎖可変領域（ＶＨ）を、第２のドメインに対する特異性を有する一連の結合体由来の軽鎖可変領域（ＶＬ）で組み換えて、元のＶＨと、そのＶＨについての元の特異性を乱さずに対合させることが可能な非コグネイトＶＬパートナーを同定する。このように、単一のＶＬセグメント（例えば、ＶＬ１）を２つの異なるＶＨドメイン（例えば、ＶＨ１及びＶＨ２）と組み合わせて、２つの結合「アーム」（ＶＨ１－ＶＬ１及びＶＨ２－ＶＬ１）で構成される二重特異性体を生成することができる。単一のＶＬセグメントの使用により、二重特異性体を生成するために使用されるクローニング、発現、及び精製プロセスにおける系の複雑さが低下し、それにより、単純化され、かつ効率が上昇する（例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１１／０１９５４５４及びＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照されたい）。
あるいは、１つのドメイン、及び、これだけに限定されないが、例えば、第２の種々の抗ＺＩＫＶ抗体などの第２の標的に結合する抗体を、本明細書に記載の技術または当業者に公知の他の技術を使用して二重特異性形式に調製することができる。別個の領域に結合する抗体可変領域を、例えば、ＺＩＫＶ上の関連する部位に結合する可変領域と連結して、単一の結合分子内に二重抗原特異性を付与することができる。この性質の適切に設計された二重特異性体は、二重の機能を果たす。１つのドメインに対する特異性を有する可変領域を、別のドメインに対する特異性を有する可変領域と組み合わせ、各可変領域が別々の抗原に結合することを可能にする構造的足場上で対合させる。
「抗体」という用語は、ジスルフィド連結により相互接続された２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖の４本のポリペプチド鎖から構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（すなわち、「完全抗体分子」）、またはＩｇ分子の本質的な抗原結合特徴を保持するその任意の機能的断片、突然変異体、変異体、または誘導体を広義に指す。このような突然変異体、変異体、または誘導体抗体形態は、は当該技術分野で公知である。その非限定的な実施形態について以下に記載する。
完全長抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲまたはＶＨと省略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲまたはＶＬと本明細書で省略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ）からなる。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域とともに散在した相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に並べられた３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。本発明のある特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合断片）のＦＲは、ヒト生殖細胞系列配列と同一である場合があり、または天然もしくは人工的に改変されている場合がある。
１つ以上のＣＤＲ残基の置換または１つ以上のＣＤＲの省略も可能である。抗体は、１つまたは２つのＣＤＲが結合のために省かれることができると科学文献に説明されている。Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５ ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－１３９、参照により本明細書に組み込まれる）は、公開された結晶構造に基づいて、抗体とこれらの抗原の間の接触領域を分析し、ＣＤＲ残基の約１／５～１／３のみが実際に抗原と連絡すると結論づけた。Ｐａｄｌａｎは、１つまたは２つのＣＤＲが抗原と接触しているアミノ酸を有さない多くの抗体も発見した（Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．２００２ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２０：４１５－４２８も参照されたい、参照により本明細書に組み込まれる）。
抗原と連絡していないＣＤＲ残基は、先行研究に基づいて、ＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔのＣＤＲの領域から、分子モデリングによって及び／または演繹的に識別することができる（例えば、ＣＤＲＨ２中の残基Ｈ６０～Ｈ６５はしばしば必要ではない）。ＣＤＲまたはその残基（複数可）が省略される場合、そのＣＤＲまたはその残基（複数可）は、別のヒト抗体配列またはこのような配列のコンセンサスにおける対応する位置を占有するアミノ酸と置換される。ＣＤＲ内の置換のための位置及び置換すべきアミノ酸も演繹的に選択することができる。演繹的な置換は、保存的置換または非保存的置換であり得る。
免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）及びクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）またはサブクラスのものであり得る。
抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）または抗体の「抗原結合断片」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原（例えば、ＺＩＫＶ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の「抗原結合部分」及び抗体の「抗原結合断片」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原に特異的に結合して、複合体を形成する任意の天然の、酵素によって入手可能な、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。このような抗体の実施形態は、２つ以上の異なる抗原と特異的に結合する二重特異性、二重特異性、または多重特異性形態でもよい。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（各々が参照により本明細書に組み込まれるＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＣＴ公開第ＷＯ９０／０５１４４ Ａ１号）；及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片のＶＬ及びＶＨの２つのドメインは、別々の遺伝子によりコードされるが、組換え法を使用して合成リンカーにより結合し、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して１価分子を形成する単一タンパク質鎖として作製することができる（１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、参照により本明細書に組み込まれるＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照されたい）。このような１本鎖抗体も抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖ分子は、融合タンパク質に組み込むことができる。ダイアボディなどの他の形態の一本鎖抗体も包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが一本のポリペプチド鎖上で発現される２価の二重特異性抗体であるが、非常に短いリンカーを使用するため、同一鎖上の２つのドメイン間で対合することができず、これらのドメインは、別の鎖の相補性領域と対合し、２つの抗原結合部位を形成する（例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい）。このような抗体結合部分は、当該技術分野で公知である（参照により本明細書に組み込まれるＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，７９０ｐｐ）（ＩＳＢＮ ３－５４０－４１３５４－５））。
本発明は、ＺＩＫＶ感染を治療するために抗ウイルス薬などの治療用部分にコンジュゲートした抗ＺＩＫＶモノクローナル抗体（「免疫コンジュゲート」）を包含する。本明細書で使用される場合、「免疫コンジュゲート」という用語は、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的またはレポーター部分、酵素、ペプチドまたはタンパク質または治療剤と化学的にまたは生物学的に連結した抗体を指す。抗体は、その標的と結合することが可能な限りは分子に沿った任意の位置で、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的またはレポーター部分、酵素、ペプチドまたは治療剤と連結することができる。免疫コンジュゲートの例としては、抗体薬物コンジュゲート及び抗体－毒素融合タンパク質が挙げられる。一実施形態では、薬剤は、ＺＩＫＶまたはＺＩＫＶ Ｅタンパク質に対する第２の異なる抗体であってよい。ある特定の実施形態では、抗体は、ウイルス感染細胞に特異的な薬剤にコンジュゲートすることができる。抗ＺＩＫＶ抗体にコンジュゲートすることができる治療用部分の型は、治療される容態及び達成すべき所望の治療効果を考慮に入れる。免疫コンジュゲートを形成するための適切な薬剤の例は、当該技術分野で公知である；例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
「抗体コンストラクト」という用語は、本明細書で使用する場合、リンカーポリペプチドまたは免疫グロブリン定常ドメインに連結された１つ以上の本明細書に開示する抗原結合部分を含むポリペプチドを指す。リンカーポリペプチドは、ペプチド結合により結合した２つ以上のアミノ酸残基を含み、１つ以上の抗原結合部分と結合するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは、当該技術分野で周知である（例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．， ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい）。免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖または軽鎖定常ドメインを指す。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片などの抗体断片は、それぞれ、全長抗体のパパインまたはペプシン消化などの慣用技術を使用して、全長抗体から調製することができる。さらに、抗体及びその抗原結合部分は、本明細書に記載される標準組換えＤＮＡ技術を使用して取得することができる。
「単離された抗体」は、本明細書で使用する場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すよう企図される（例えば、ＺＩＫＶに特異的に結合する単離された抗体は、ＺＩＫＶ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料及び／または薬品を実質的に含まない場合がある。
一実施形態では、ＺＩＫＶに特異的に結合する単離された抗体は、他のウイルス、例えば、デングウイルスなどの他のフラビウイルスに対する交差反応性を有さない。好ましくは、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、任意のデングウイルス、デングウイルス様粒子、及び／またはデングエンベロープタンパク質（ＤＥＮＶ Ｅタンパク質）に結合しない。より好ましくは、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、４つのＤＥＮＶ血清型ＤＥＮＶ１、ＤＥＮＶ２、ＤＥＮＶ３及びＤＥＮＶ４、デングウイルス様粒子（ＤＥＮＶ－ＶＬＰ）、及び／または４つのＤＥＮＶ血清型ＤＥＮＶ１、ＤＥＮＶ２、ＤＥＮＶ３、及びＤＥＮＶ４のＤＥＮＶ Ｅタンパク質に結合しない。したがって、「に結合しない」とは、抗体またはその抗原結合部分について、ＤＥＮＶ－ＶＬＰ及び／またはＤＥＮＶ Ｅタンパク質に対する標準的ＥＬＩＳＡにおいて、１０２ｎｇ／ｍｌまで、好ましくは、１０３ｎｇ／ｍｌまで、より好ましくは、５×１０３ｎｇ／ｍｌまで、さらにより好ましくは、８×１０３ｎｇ／ｍｌまで、最も好ましくは１０４ｎｇ／ｍｌまで、ＩＣ５０またはＥＣ５０値を測定することができないことを意味する。換言すれば、標準的ＥＬＩＳＡにおけるＤＥＮＶ－ＶＬＰ及び／またはＤＥＮＶ Ｅタンパク質に対する飽和時の最大結合の５０％（ＩＣ５０またはＥＣ５０）を達成するために必要な抗体またはその抗原結合部分の濃度は、典型的には、１０２ｎｇ／ｍｌ超、好ましくは、１０３ｎｇ／ｍｌ超、より好ましくは、５×１０３ｎｇ／ｍｌ超、さらにより好ましくは、８×１０３ｎｇ／ｍｌ超、及び最も好ましくは、１０４ｎｇ／ｍｌ超である。ある特定の実施形態では、ＤＥＮＶ－ＶＬＰは、デングレポーターウイルス粒子（ＲＶＰ）である。
「中和抗体」は、本明細書で使用する場合、（または「遮断抗体」または「ＺＩＫＶ活性を中和する抗体」もしくは「アンタゴニスト抗体」）は、ＺＩＫＶへの結合がＺＩＫＶの少なくとも１つの生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すよう企図される。例えば、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、宿主細胞へのＺＩＫＶの付着、融合及び／または侵入を防止または遮断することができる。加えて、「中和抗体」とは、宿主における感染を開始及び／または持続させる病原体の能力を中和することができる、すなわち、防止、阻害、軽減、妨害または干渉することができるものである。「中和抗体」及び「中和する抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈａｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｓ）」または「中和する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」という用語は、本明細書で相互交換可能に使用される。これらの抗体は、単独でまたは組み合わせにおいて、適切な処方の際に他の抗ウイルス薬とともに予防薬または治療剤として、あるいは活性ワクチン接種と関連して、あるいは診断ツールとして使用することができる。
これらの抗体を使用して、不活化抗原（ワクチン）が、免疫応答を刺激するのに重要なこれらの中和エピトープを保持することを確実にすることもできる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、約１０－１１Ｍ～約１０－９Ｍの範囲、例えば、約１０－１１Ｍ、５×ｌ０－１１Ｍ、１０－１０Ｍ、５×１０－１０Ｍ、及び１０－９ＭのＩＣ５０またはＥＣ５０を有する、ＺＩＫＶに対する中和効力を呈する。
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト種（例えば、マウス）に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／またはＶＬ配列の少なくとも一部が「ヒト類似性」を増すように、すなわち、ヒト生殖細胞系列可変配列との類似性を増すように改変された抗体を指す。特に、「ヒト化抗体」という用語は、目的の抗原と免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域、及び実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体またはその変異体、誘導体、アナログもしくは断片である。本明細書で使用する場合、ＦＲの文脈における「実質的に」という用語は、ヒトＦＲのアミノ酸に対して少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％一致するアミノ酸配列を有するＦＲを指す。本明細書で使用する場合、ＣＤＲの文脈における「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％一致するアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である少なくとも１つ、典型的には、２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の実質的に全部を含む。好ましくは、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖、並びに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含む。単離された抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域も含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含む。他の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／またはヒト化重鎖のみを含む。
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む任意クラスの免疫グロブリン、及び、限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意アイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプに由来する配列を含むことができ、特定の定常ドメインは、当該技術分野で周知の技術を使用して、所望エフェクター機能を最適化するように選択することができる。
本発明は、１つ以上の保存的置換を有する本明細書に開示するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む完全ヒト抗ＺＩＫＶモノクローナル抗体も含む。例えば、本発明は、本明細書に開示するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対して、例えば、１０個以下、８個以下、６個以下、４個以下、３個以下などの保存的アミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＺＩＫＶ抗体を含む。
本明細書に開示する完全ヒト抗ＺＩＫＶモノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比較して、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク及び／またはＣＤＲ領域に１つ以上のアミノ酸置換、挿入及び／または欠失を含み得る。このような変異は、本明細書中に開示するアミノ酸配列を、例えば公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することによって容易に確認することができる。本発明は、本明細書に開示するアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体及びその抗原結合断片を含み、１つ以上のフレームワーク及び／またはＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸は、抗体が由来した生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基（複数可）へ、または対応する生殖系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換へ変異する（このような配列変化はまとめて、「生殖系列変異」と本明細書で呼ばれる）。当業者は、本明細書に開示する重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列から出発して、１つ以上の個々の生殖系列変異またはこれらの組み合わせを含む多数の抗体及び抗原結合断片を容易に産生することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨ及び／またはＶＬドメイン内のフレームワーク及び／またはＣＤＲ残基は全て、抗体が由来した元の生殖系列配列において認められる残基へと変異し戻される。他の実施形態では、ある特定の残基のみが元の生殖系列配列へと変異し戻され、例えば、変異した残基は、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内に、もしくは変異した残基はＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に認められ、または変異した残基は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内にのみ認められる。他の実施形態では、フレームワーク及び／またはＣＤＲ残基（複数可）の１つ以上は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が本来由来した生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の対応する残基（複数可）へ変異する。さらに、本発明による抗体または抗原結合部分は、フレームワーク及び／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖系列変異の任意の組み合わせを含有してもよく、例えば、ある特定の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基へ変異するのに対し、元の生殖系列配列とは異なるある特定の他の残基は、維持され、または異なる生殖系列配列の対応する残基へ変異する。いったん得られれば、１つ以上の生殖系列変異を含有する抗体及び抗原結合断片は、結合特異性の寛解、結合親和性の増大、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の寛解または亢進（場合により得る）、免疫原性の低下などの１つ以上の所望の特性について容易に試験することができる。この一般的な様式で得られた抗体及び抗原結合断片は、本発明に包含される。
「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むよう企図される。本発明のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ、特に、ＣＤＲ３における、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によってまたはインビボでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）によってコードされないアミノ酸残基を含み得る。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトＦＲ配列へと移植されたｍＡｂを含むよう企図されるものではない。この用語は、非ヒト哺乳動物において、または非ヒト哺乳動物の細胞において組換え産生された抗体を含む。この用語は、ヒト対象から単離された、またはヒト対象において生成された抗体を含むよう企図されるものではない。
「組換え」という用語は、本明細書で使用する場合、例えば、ＤＮＡスプライシング及びトランスジェニック発現を含む組換えＤＮＡ技術として当該技術分野で既知の技術または方法によって作製、発現、単離または得られた本発明による抗体またはその抗原結合断片を指す。この用語は、非ヒト哺乳動物（トランスジェニック非ヒト哺乳動物、例えば、トランスジェニックマウスを含む）、もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系において発現した抗体、または組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体を指す。
「Ｋａｂａｔナンバリング」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔラベリング」という用語は、本明細書で相互交換可能に使用される。これらの用語は、当該技術分野において認識され、抗体またはその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域において他のアミノ酸残基よりも可変度の高い（すなわち、超可変性）アミノ酸残基のナンバリングシステムを指す。（各々が参照により本明細書に組み込まれるＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２－３９１及びＫａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）。重鎖可変領域では、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸３１～３５位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０～６５位、及びＣＤＲ３のアミノ酸９５～１０２位に位置する。軽鎖可変領域では、超可変領域は、ＣＤＲ１のアミノ酸２４～３４位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０～５６位、及びＣＤＲ３のアミノ酸８９～９７位に位置する。
本明細書で使用する場合、「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）の可変領域の各々に３個のＣＤＲが存在し、可変領域の各々でＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（または具体的には、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、及びＬＣ ＣＤＲ３）と呼ばれる。「ＣＤＲセット」という用語は、本明細書で使用する場合、抗原に結合することができる単一可変領域に存在する３個１組のＣＤＲを指す。これらのＣＤＲの厳密な境界は、種々のシステムにより種々に定義されている。Ｋａｂａｔにより記載されているシステム（参照により本明細書に組み込まれるＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基ナンバリングシステムを規定するのみならず、３つのＣＤＲを定義する厳密な残基境界を規定する。これらのＣＤＲをＫａｂａｔ ＣＤＲと言う場合がある。Ｃｈｏｔｈｉａ及びその同僚（各々が参照により本明細書に組み込まれるＣｈｏｔｈｉａ ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７（１９８７）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内のある特定のサブ部分が、アミノ酸配列のレベルでは多様性に富んでいるにも拘わらず、ほぼ同一のペプチド主鎖構造をとることを見出した。これらのサブ部分は、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３またはＨ１、Ｈ２及びＨ３と呼ばれ、ここで「Ｌ」及び「Ｈ」は、それぞれ、軽鎖領域と重鎖領域を表す。これらの領域をＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ぶ場合があり、その境界は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（参照により本明細書に組み込まれるＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３～１３９（１９９５）、及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（参照により本明細書に組み込まれるＪ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２（５）：７３２－４５（１９９６））に記載されている。上記システムの１種に厳密には従わないとしても、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するさらに他のＣＤＲ境界定義もあるが、特定の残基もしくは残基群またはＣＤＲ全体が抗原結合に有意に影響を与えないという予想または実験結果に基づいて短くしたものや長くしたものがある。本明細書で使用する方法は、これらのシステムのいずれに従って定義されたＣＤＲも使用することができるが、好ましい実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａの定義によるＣＤＲを使用する。
本明細書で使用する場合、「フレームワーク」または「フレームワーク配列」という用語は、可変領域からＣＤＲを除いた残りの配列を指す。ＣＤＲ配列の厳密な定義は、種々のシステムにより決定することができるので、フレームワーク配列の意味は、相応に種々に解釈される。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３、及び重鎖のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３）は、軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域をさらに各鎖で４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１は、ＦＲ１とＦＲ２の間、ＣＤＲ２は、ＦＲ２とＦＲ３の間、ＣＤＲ３は、ＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４と特定せずに、単にフレームワーク領域と言う場合もあるが、その場合には、１本の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わせたＦＲを表す。本明細書で使用する場合、ＦＲは、４つのサブ領域の１つを表し、ＦＲｓは、フレームワーク領域を構成する４つのサブ領域の２つ以上を表す。
ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤＲ領域は、親配列に厳密に対応する必要はなく、例えば、その部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基がドナー抗体またはコンセンサスフレームワークのいずれにも対応しないように、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／または欠失によりドナー抗体ＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークを突然変異誘発してもよい。好ましい実施形態では、このような突然変異は、しかしながら、広範にならない。通常では、ヒト化抗体残基の少なくとも８０＋、好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、及び最も好ましくは、少なくとも９５％が、親ＦＲ及びＣＤＲ配列のものに対応する。本明細書で使用する場合、「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書で使用する場合、「コンセンサス免疫グロブリン配列」という用語は、近縁免疫グロブリン配列のファミリーに最高頻度で存在するアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ １９８７を参照されたい）。免疫グロブリンファミリーにおいて、コンセンサス配列における各位置は、このファミリーでこの位置に最高頻度で存在するアミノ酸により占有される。２つのアミノ酸が同等の高頻度で存在する場合には、どちらをコンセンサス配列に加えてもよい。
「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、ペプチドまたはポリペプチド配列に関しては、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列を整列させ、必要に応じて、ギャップを挿入した後、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮せずに、特定のペプチドまたはポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のための整列は、当該技術分野における技術の範囲内にある様々な様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、整列を測定するために適切なパラメーターを決定することができ、比較される配列の全長にわたって最大整列を達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムが挙げられる。一実施形態では、本開示は、配列番号１～６０、８５～１１４、及び１２８～１３７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有するアミノ酸配列を含む。好ましくは、同一ではない残基の位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を備えた側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。概して、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させないことになっている。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換だけ互いに異なる場合、相同性の百分率または程度は、置換の保存的性質を補正するために上向きに調整してもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７－３３１を参照されたい。類似の化学的特性を備えた側鎖を有するアミノ酸の基の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン、２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリン及びトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及びヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸、並びに７）含硫側鎖：システイン及びメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸及びアスパラギン－グルタミンである。あるいは、保存的置換とは、参照により本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３ ４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する何らかの変化である。「適度に保存的な」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負以外の値を有する何らかの変化である。
ポリペプチドについての配列類似性は、典型的には、配列解析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失及び他の修飾へ割り当てられた類似性の測定値を用いて類似の配列と一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、異なる種の生物由来の相同ポリペプチドのような密接に関連するポリペプチド間の、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定するための既定パラメーターとともに使用することができるＧＡＰ及びＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧ第６．１版を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧ第６．１版におけるプログラムである、既定パラメーターまたは推奨パラメーターを備えたＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列の間の最良重複の領域の整列及びパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上述）。本発明の配列を、異なる生物由来の多数の配列を含有するデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、既定パラメーターを用いるコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特に、ＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０及び（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２を参照されたい。
「パーセント（％）核酸配列同一性」は、核酸配列に関しては、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列を整列させ、必要に応じて、ギャップを挿入した後、特定の核酸配列におけるヌクレオチドと同一である、候補配列中のヌクレオチドのパーセンテージとして定義される。パーセント核酸配列同一性を決定する目的のための整列は、当該技術分野における技術の範囲内にある様々な様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＡＰソフトウェアを使用して達成することができる。参照核酸分子に対して実質的な同一性を有する核酸分子は、ある特定の例では、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。当業者は、整列を測定するために適切なパラメーターを決定することができ、比較される配列の全長にわたって最大整列を達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムが挙げられる。一実施形態では、本開示は、配列番号６１～８４、１１５～１２６、及び１３８～１４１のいずれか１つに記載の核酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一性を有する核酸配列を含む。
抗体依存性増強（ＡＤＥ）とは、抗ウイルス抗体へ結合したときにウイルスがＦｃ受容体を有する細胞に侵入し、細胞における感染力の上昇をもたらす機序である。ＡＤＥは、多くのウイルスについてインビトロで実証されてきたが、ヒトにおけるＡＤＥについての唯一の注目せざるを得ないデータは、デングウイルス感染に由来する。このウイルスは、この機序を利用してマクロファージを感染させ、通常軽度のウイルス感染を、生命を脅かすものとさせることができる。例えば、初回デング熱ウイルス感染は、自己制限有熱性疾患であるデング熱（ＤＦ）による症例の大部分について臨床的に明らかにされている。まれに致死的ではあるが、ＤＦは、しばしば重度の播種性の身体痛、頭痛、発熱、発疹、リンパ節腫及び白血球減少症を特徴とする。異種性デング熱ウイルスによるその後の感染は、デング出血熱（ＤＨＦ）またはデングショック症候群（ＤＳＳ）の致命的な疾患へとはるかにより重症にする可能性がある。一次感染を引き起こす血清型に対する抗体の存在は、二次感染における異種性血清型による感染を増強するという仮説が立てられている。このような二次感染の間に、異なる血清型のデングウイルスでは、中和していない交差反応性抗体は、単球及びランゲルハンス細胞（樹状細胞）に取り込まれ、感染細胞の数を増加させるウイルス－抗体複合体を形成する。このことは、細胞傷害性リンパ球の活性化をもたらし、このことが、血漿漏出並びにＤＨＦ及びＤＳＳに特徴的な出血性特徴をもたらし得る。この感染の抗体依存性増強は、デング熱ウイルスに対する成功したワクチンの開発が非常に困難であると立証した１つの理由である。あまり頻繁ではないが、ＤＨＦ／ＤＳＳは一次感染の後に起こる可能性があるので、ウイルス毒力及び免疫活性化もこの疾患の病原性に寄与すると考えられている。
「活性」という用語は、抗原に対する抗体、例えば、ＺＩＫＶ抗原に結合する抗ＺＩＫＶ抗体の結合特異性／親和性などの活性を含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体活性は、ＺＩＫＶへのインビトロ結合；ＺＩＫＶに感染した細胞中のＺＩＫＶへのインビボ結合；及びＺＩＫＶのインビトロまたはインビボ中和を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶを中和することができる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶを中和することができない。
「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。逆に、「エピトープ」は、宿主上の特定の細胞受容体または結合部位と相互作用することもできる。その抗体がある特定のエピトープに結合するという事実は、本発明をとても重要なものにしている。単一の抗原は、２つ以上のエピトープを有してもよい。従って、異なる抗体は、抗原上の異なる領域へ結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。例えば、「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞及び／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。この用語は、抗体が結合する抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的と定義され得る。機能的エピトープは、概して、構造エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。抗体が結合するエピトープは、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質内に位置する２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上）のアミノ酸の単一の連続配列からなる（例えば、ドメインにおける直線エピトープ）。エピトープは、立体配座的でもあり得、複数の非連続のアミノ酸、すなわち、非線形アミノ酸から構成される。立体配座エピトープは、典型的には、固有の立体配座において、少なくとも３つのアミノ酸、及びより一般には、少なくとも５つのアミノ酸、例えば、７～１０のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性のある表面群である決定基を含み得、ある特定の実施形態では、特異的三次元構造特徴及び／または比電荷特徴を有し得る。ある特定の実施形態では、抗体は、無傷のＺＩＫＶ、例えば、生きたまたは不活化ＺＩＫＶ上でエピトープを優先的に認識する場合、ＺＩＫＶに特異的に結合すると言われる。
連続的なアミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露の際に保持されるのに対し、三次元折りたたみによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒を用いた処理の際に失われる。
当業者に既知の種々の技術を用いて、抗体がポリペプチドまたはタンパク質内にある「１つ以上のアミノ酸と相互作用する」かどうかを判定することができる。例示的な技術としては、例えば、部位特異的変異（例えば、アラニン走査変異分析）が挙げられる。他の方法には、通例の交差遮断アッセイ（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）、ペプチドブロット分析（参照により本明細書に組み込まれるＲｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：４４３－６３）、ペプチド切断分析結晶学的研究、及びＮＭＲ分析が含まれる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出及び抗原の化学修飾などの方法を採用することができる（参照により本明細書に組み込まれるＴｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９：４８７－４９６）。抗体が相互作用するポリペプチドの内部にあるアミノ酸を識別するために用いることができる別の方法は、質量分析によって検出される水素／重水素交換である。一般にいえば、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素標識した後、抗体を重水素標識タンパク質へ結合させることを包含する。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移し、抗体複合体によって保護されたアミノ酸の内部にある交換可能なプロトンは、界面の一部ではないアミノ酸の内部にある交換可能なプロトンよりも低速で重水素から水素への逆交換を受ける。結果として、タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持することができ、それゆえ、界面に含まれないアミノ酸と比較して相対的に大きな質量を呈する。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断及び質量分析へ供し、それにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識残基を明らかにする。例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＥｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７：２５２－２５９；Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ－２６５Ａを参照されたい。
抗原構造ベースの抗体プロファイリング（ＡＳＡＰ）としても既知の修飾支援プロファイリング（ＭＡＰ）とは、化学的にまたは酵素により修飾された抗原表面に対する各抗体の結合特性の類似性により、同じ抗原に対する多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をカテゴリー分類する方法である（参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００４／０１０１９２０を参照されたい）。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープとは明確に異なるか、または部分的に重複するかのいずれかの独特のエピトープを反映し得る。この技術は、特徴付けが遺伝的に異なる抗体に的を絞ることができるよう、遺伝的に同一の抗体の迅速なフィルタリングを可能にする。ハイブリドーマスクリーニングへ適用する場合、ＭＡＰは、所望の特徴を有するｍＡｂを産生する稀なハイブリドーマクローンの識別を容易にし得る。ＭＡＰを使用して、本発明の抗体を、異なるエピトープを結合する抗体の群に選別することができる。
「競合結合」または「エピトープビニング」という用語は、本明細書で使用する場合、第３の分子、例えば、抗原上の結合部位に関して、第１の抗体が第２の抗体と競合する状況を指す。この用語は、両方の配向における２つの抗体間の競合、すなわち、結合して、第２の抗体またはその抗原結合部分の結合を遮断する第１の抗体またはその抗原結合部分、及びその逆も含む。具体的には、第１の配向では、第１の抗体を、飽和条件下でＺＩＫＶ Ｅタンパク質に結合させ、その後、そのＺＩＫＶ Ｅタンパク質への第２の抗体の結合を評価することができる。第２の配向では、第２の抗体を、飽和条件下でＺＩＫＶ Ｅタンパク質に結合させ、その後、そのＺＩＫＶ Ｅタンパク質への第１の抗体の結合を評価することができる。両方の配向において、飽和抗体のみがＺＩＫＶ Ｅタンパク質に結合することができる場合には、第１の抗体及び第２の抗体は、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質への結合について競合すると結論づけられる。当業者には理解されるであろうが、第２の抗体と結合について競合する第１の抗体は、第２の抗体と同じエピトープに必ずしも結合できるとは限らないが、重複または隣接エピトープを結合することによって第２の抗体の結合を立体的に遮断することがある。
２つの抗体は、それぞれが抗原へのその他の結合を競合的に阻害する（遮断する）場合、同じかまたは重複するエピトープへ結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍過剰量の一方の抗体は、競合結合アッセイにおいて測定されるように、少なくとも５０％、しかし好ましくは、７５％、９０％またはさらには９９％ほど、もう一方の抗体の結合を阻害する（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＪｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０ ５０：１４９５－１５０２を参照されたい）。あるいは、一方の抗体の結合を軽減または排除する抗原における本質的に全てのアミノ酸変異がもう一方の抗体の結合を軽減または排除する場合、２つの抗体は同じエピトープを有する。一方の抗体の結合を軽減または排除するいくつかのアミノ酸変異がもう一方の結合を軽減または排除する場合、２つの抗体は重複しているエピトープを有する。
「競合結合アッセイ」という用語は、２つ以上の抗体が同じエピトープに結合するかどうかを決定するために使用されるアッセイである。アッセイには、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉法アッセイ、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当該技術分野において利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイが含まれる。一実施形態では、２つの抗体間の競合結合は、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉法アッセイによって測定することができる。例えば、試験抗体が、本発明の参照抗ＺＩＫＶ抗体と交差競合するかを決定するために、参照抗体は、飽和条件下でＺＩＫＶ－ＶＬＰに結合することができる。次に、ＺＩＫＶ－ＶＬＰに結合する試験抗体の能力が評価される。試験抗体が、参照抗ＺＩＫＶ抗体との飽和結合後にＺＩＫＶ－ＶＬＰに結合することができる場合には、試験抗体は、参照抗ＺＩＫＶ抗体よりも異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。他方、試験抗体が、参照抗ＺＩＫＶとの飽和結合後にＺＩＫＶ－ＶＬＰに結合することができない場合には、次に、試験抗体は、参照抗ＺＩＫＶ抗体によって結合されるエピトープと同一のエピトープに結合し得る。しかしながら、結合について参照抗体と競合する抗体は、参照抗体と一致するエピトープに必ずしも結合しないが、重複または隣接するエピトープに結合することによって、参照抗体の結合を立体的に遮断することも可能である。一実施形態では、競合結合アッセイは、標識抗体の蛍光シグナルが非標識抗体の導入により低下するか否かを調べることにより、２つ以上の抗体が同一エピトープと結合するか否かを判定するために使用される競合蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）アッセイであり、同一エピトープに関して競合している場合には、蛍光レベルが低下する。
「標識抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、結合タンパク質、例えば、抗体の同定を提供する標識が組み込まれた抗体またはその抗原結合部分を指す。好ましくは、標識は、検出可能なマーカー、例えば、放射標識されたアミノ酸の組み込み、または印をつけたアビジン（例えば、蛍光マーカーまたは光学的方法もしくは比色法によって検出され得る酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドとの結合である。ポリペプチドの標識の例としては、限定されないが、以下：放射性同位体また放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、または１５３Ｓｍ）；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドホスホール）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；第２のリポーター（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン及びエピトープタグ）によって認識される所定のポリペプチドエピトープ；及び磁性物質（例えば、ガドリニウムキレート）が挙げられる。
ＺＩＫＶ－ＶＬＰに特異的な抗体は、追加の標識もしくは部分を全く含有していなくてもよく、またはＮ末端もしくはＣ末端の標識もしくは部分を含有していてもよい。一実施形態では、標識または部分は、ビオチンである。結合アッセイにおいて、標識（存在する場合）の位置は、ペプチドが結合した表面に対するペプチドの向きを決定し得る。例えば、表面がアビジンでコーティングされている場合、Ｎ末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面から遠位になるように向くことになっている。一実施形態では、標識は、放射性核種、蛍光染料、またはＭＲＩ検出可能な標識であり得る。ある特定の実施形態では、そのような標識抗体は、イメージングアッセイを含む診断アッセイで使用され得る。
本発明の種々の態様を以下の小区分でさらに詳細に記載する。
ＩＩ．抗ＺＩＫＶ抗体
本明細書に開示する一態様は、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分を提供する。総称して、新規抗体は、「抗ＺＩＫＶ抗体」と本明細書で呼ばれる。「抗体」という用語は、明細書全体で使用される一方、抗体断片（すなわち、抗ＺＩＫＶ抗体の抗原結合部分）もまた本開示に含まれ、明細書全体に記載される実施形態（方法及び組成物）に含まれ得ることに留意すべきである。ある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体の抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、またはダイアボディである。
本明細書に記載の抗ＺＩＫＶ抗体及びその抗原結合部分は、説明された抗体のアミノ酸配列とは異なるがＺＩＫＶと反応する能力を保有するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このような変異体抗体及び抗体断片は、親配列と比較してアミノ酸の１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、説明された抗体の生物学的活性とは本質的に等価である生物学的活性を呈する。パーセントアミノ酸同一性は、少なくとも７０％である。同様に、本発明の抗体コードＤＮＡ配列は、開示された配列と比較してヌクレオチドの１つ以上の付加、欠失、または置換を含むが、本発明による抗体またはその抗原結合部分と本質的に生物学的に等価である抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。パーセント核酸同一性は、少なくとも７０％である。
本発明のある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体は、ウイルスを中和する能力を維持すると同時に、そうすることで、正常なウイルス付着及び／または融合の中和を通じてウイルス感染力の低下を可能にすると同時に、ＡＤＥが生じるのを防止するよう作用しながら、マクロファージ及びＦｃ受容体を有する他の細胞上のＦｃ受容体への結合の低下を可能にする抗体のＦｃ領域に対する修飾を含む。
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってもよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープについて特異的であってもよいし、または１つを超える標的ポリペプチドについて特異的な抗原結合性ドメインを含んでもよい。例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０－６９；Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８－２４４を参照されたい。
本発明のある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体は、インビトロアッセイまたはインビボアッセイによって測定されるように、ＺＩＫＶへ結合してその活性を中和することができる。本発明の抗体がＺＩＫＶへ結合してその活性を中和する能力、したがって宿主細胞へのウイルスの付着及び／または侵入に続いて結果として起こるウイルス感染は、実施例３に記載されるような、結合アッセイ（例えば、間接ＥＬＩＳＡ）、または活性アッセイ（例えば、ＴＣＩＤ５０ベースのマイクロ中和力価（ＭＮＴ）アッセイ及びレポーターウイルス粒子（ＲＶＰ）アッセイを含む、当業者に既知の任意の標準的な方法を用いて測定され得る。ＴＣＩＤ５０は、５０％組織培養感染量を表す。いくつかの実施形態では、抗体は、約１０－１１Ｍ～約１０－９Ｍの範囲のＩＣ５０でＺＩＫＶに対する中和効力を呈する。
ＭＮＴアッセイでは、試験抗体の中和効力の判定は、生ＺＩＫＶによるウイルス感染からの細胞の防御強化に基づく。簡潔に言えば、連続希釈した試験試料、例えば、ハイブリドーマ上清は、ジカ生ウイルスの１００個のＴＣＩＤ５０／ウェルと混合した後、９６ウェルプレートにおける細胞（例えば、ベロ細胞）の単層に加え、エンドポイント力価に対する細胞変性効果（ＣＰＥ）の存在または不在について、感染後の少なくとも５日後にプレートを観察する。ジカＲＶＰアッセイでは、試験抗体の中和効力の判定は、ウミシイタケルシフェラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及びＲ－フィコエリトリンなどのレポーター遺伝子の発現低下に基づく。このアッセイでは、ジカＲＶＰをジカ生ウイルスの代わりに使用して、中和抗体力価を決定する。ジカＲＶＰは、カプシド、エンベロープ、プレ膜及び膜タンパク質ＣｐｒＭＥを含む、野生型ビリオンの抗原決定基を保持する。ジカＲＶＰは、許容細胞の感染の際にレポーター遺伝子を発現する。レポーター遺伝子がウミシイタケルシフェラーゼである場合には、抗体の最大半量有効濃度ＥＣ５０力価は、ウミシイタケルシフェラーゼ及びセレンテラジン基質の相互作用によってグロー型発光シグナルを生成する生物発光反応を用いて決定した。発光シグナルは、発光対応プレートリーダーを用いて測定した。血清の存在における発光シグナルの低下は、中和を示す。
本発明のある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体は、ＭＲ７６６（ウガンダ１９４７）、ＰＲＶＡＢＣ５９（プエルトリコ２０１５）、ＦＬＲ（コロンビア２０１５）、ＳＶ０１２７～１４（タイ、２０１４）、ＣＰＣ－０７４０（フィリピン２０１２）、及びフォルタレザ（ブラジル２０１５）を含むＺＩＫＶ株と交差反応する。本発明のある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体は、約８０ｐＭ～約１５０ｎＭの範囲のＩＣ５０またはＥＣ５０でＺＩＫＶ ｐｒＭ／Ｅを発現する細胞に由来するＺＩＫＶ－ＶＬＰへも結合する。
一実施形態では、以下の実施例に記載される、ＺＩＫＶに結合する能力を有する抗ＺＩＫＶ抗体を開示する。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶを中和することができる。ＺＩＫＶは、ＭＲ７６６（ウガンダ１９４７）、ＰＲＶＡＢＣ５９（プエルトリコ２０１５）、ＦＬＲ（コロンビア２０１５）、ＳＶ０１２７～１４（タイ、２０１４）、ＣＰＣ－０７４０（フィリピン２０１２）、及びフォルタレザ（ブラジル２０１５）からなる群から選択される。
実施例１は、ＺＩＫＶ抗体の生成を記載する。ある特定の実施形態では、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、免疫原で免疫付与したウサギから得られ、例えば、ｐｒＭ及びＥタンパク質からなる精製不活化ジカウイルス（ＰＩＺＶ）及び／またはＺＩＫＶ－ＶＬＰである。
結合活性を測定する非限定の例示のインビトロアッセイは、本明細書に記載される実施例３に示される。実施例３では、抗ＺＩＫＶ Ｅの結合は、ｐｒＭ／Ｅを発現する細胞で産生されたＺＩＫＶ－ＶＬＰへの結合を評価することによって決定した。ｋｏｆｆは、Ｏｃｔｅｔ－９６デバイスを用いて、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって決定した。中和アッセイは、ＺＩＫＶの感染力に対する抗ＺＩＫＶ抗体の効果を決定するために使用した。間接ＥＬＩＳＡアッセイは、抗ＺＩＫＶ抗体の交差反応性を決定するために実施した。
これらの抗ＺＩＫＶ抗体の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を表６に記載する。これらの抗ＺＩＫＶ抗体の重鎖及び軽鎖ヌクレオチド配列を表７に記載する。
したがって、一実施形態では、本開示は、配列番号２、１２、２２、３２、４２、５２、８６、９６、１０６及び１２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；及び７、１７、２７、３７、４７、５７、９１、１０１、１１１及び１３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分を含む。一実施形態では、本開示は、配列番号１、１１、２１、３１、４１、５１、８５、９５、１０５、及び１２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖；及び６、１６、２６、３７、４６、５６、９０、１００、１１０及び１３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分を含む。
一実施形態では、本開示は、表６に記載のものから選択されるＨＣ ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）；及び表６に記載のものから選択されるＬＣ ＣＤＲセット（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、１０２－１抗体である。具体的には、１０２－１抗体は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、１０２－１抗体は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、１０２－１抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２に記載のアミノ酸配列または配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号７に記載のアミノ酸配列または配列番号７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１に記載のアミノ酸配列または配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び／または配列番号６に記載のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、２４２－３抗体である。具体的には、２４２－３抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、２４２－３抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、２４２－３抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１２に記載のアミノ酸配列または配列番号１２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列または配列番号１７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１１に記載のアミノ酸配列または配列番号１１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列または配列番号１６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、２８９－３抗体である。具体的には、２８９－３抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、２８９－３抗体は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、２８９－３抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列または配列番号２２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号２７に記載のアミノ酸配列または配列番号２７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列または配列番号２１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列または配列番号２６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、３０６－２抗体である。具体的には、３０６－２抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、３０６－２抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、３０６－２抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列または配列番号３２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号３７に記載のアミノ酸配列または配列番号３７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列または配列番号３１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び配列番号３６に記載のアミノ酸配列または配列番号３６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、１１－３抗体である。具体的には、１１－３抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、１１－３抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、１１－３抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列または配列番号４２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号４７に記載のアミノ酸配列または配列番号４７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列または配列番号４１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び配列番号４６に記載のアミノ酸配列または配列番号４６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、７８－２抗体である。具体的には、７８－２抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、７８－２抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、７８－２抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号５２に記載のアミノ酸配列または配列番号５２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号５７に記載のアミノ酸配列または配列番号５７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号５１に記載のアミノ酸配列または配列番号５１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び配列番号５６に記載のアミノ酸配列または配列番号５６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、２７０－１２抗体である。具体的には、２７０－１２抗体は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、２７０－１２抗体は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、２７０－１２抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９０のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号８６に記載のアミノ酸配列または配列番号８６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号９１に記載のアミノ酸配列または配列番号９１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号８５に記載のアミノ酸配列または配列番号８５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び／または配列番号９０に記載のアミノ酸配列または配列番号９０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、１８１－４／３２９－２抗体である。具体的には、１８１－４／３２９－２抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、１８１－４／３２９－２抗体は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、１８１－４／３２９－２抗体は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号９６に記載のアミノ酸配列または配列番号９６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号１０１に記載のアミノ酸配列または配列番号１０１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号９５に記載のアミノ酸配列または配列番号９５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び／または配列番号１００に記載のアミノ酸配列または配列番号１００に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、２６０－３抗体である。具体的には、２６０－３抗体は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、２６０－３抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、２６０－３抗体は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列または配列番号１０６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号１１１に記載のアミノ酸配列または配列番号１１１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１０５に記載のアミノ酸配列または配列番号１０５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び／または配列番号１１０に記載のアミノ酸配列または配列番号１１０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、２７８～１１抗体である。具体的には、２７８～１１抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域；及び配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む。より具体的には、２７８～１１抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。さらにより具体的には、２７８～１１抗体は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３３のアミノ酸配列を含む軽鎖からなる。
一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１２９に記載のアミノ酸配列または配列番号１２９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を重鎖可変ドメイン；及び配列番号１３４に記載のアミノ酸配列または配列番号１３４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列または配列番号１２８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖；及び／または配列番号１３３に記載のアミノ酸配列または配列番号１３３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
前述の抗ＺＩＫＶ抗体ＣＤＲ配列は、本開示に従って単離され、かつ、表６に列挙されたＣＤＲ配列を含む抗原結合ポリペプチドを含む、ＺＩＫＶ結合タンパク質の新規ファミリーを確立する。
ＺＩＫＶに関して好ましいＺＩＫＶ結合及び／または中和活性を有するＣＤＲを生成し、選択するために、抗体またはその抗原結合部分を生成し、その抗体またはその抗原結合部分のＺＩＫＶ結合及び／または中和特性を評価するための当該技術分野で公知の標準方法が使用され得、これらには本明細書中に具体的に記載されている方法が含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＩｇＧ定常ドメイン、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。さらなる実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１重鎖定常領域、ＩｇＧ２重鎖定常領域、ＩｇＧ３定常領域、またはＩｇＧ４重鎖定常領域を有する。好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１重鎖定常領域またはＩｇＧ４重鎖定常領域である。一実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
さらに抗体は、軽鎖定常領域、カッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域のいずれかを含み得る。好ましくは、抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む。
ある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、またはダイアボディである。
ある特定の実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。
抗体エフェクター機能を改変するための、Ｆｃ部分中のアミノ酸残基の置換が記載されている（参照により本明細書に組み込まれるＷｉｎｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．米国特許第５，６４８，２６０号及び同第５，６２４，８２１号）。抗体のＦｃ部分は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）、並びに抗体及び抗原－抗体複合体の半減期／クリアランス率を仲介する。いくつかの例では、これらのエフェクター機能は、治療用抗体に望ましいが、他の例では、治療目的に応じて不要またはさらに有害である可能性がある。ある特定ヒトＩｇＧアイソタイプ、特に、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、それぞれ、ＦｃＲ及び補体Ｃ１ｑとの結合を介して、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを仲介する。新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な構成要素である。さらに別の実施形態では、抗体のエフェクター機能が改変するように、抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域中の少なくとも１つのアミノ酸残基が置換される。
一実施形態は、抗体が１つ以上の機能分子（複数可）（例えば、別のペプチドまたはタンパク質）と誘導体化または連結した、標識された抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗体部分を含む。例えば、標識抗体は、（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合またはその他によって）本開示の抗体または抗体部分と、（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなどの）別の分子と抗体または抗体部分の会合を仲介することができる、別の抗体（例えば、二重特異性抗体またはダイアボディ）、検出剤、タンパク質またはペプチドなどの、１つ以上の他の分子エンティティを機能的に連結させることによって誘導することができる。
単離された抗体またはその抗原結合部分を誘導体化することができる有用な検出剤には、蛍光化合物がある。例示的な蛍光検出剤としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、５－ジメチルアミン－１－ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリスリンなどが挙げられる。単離された抗体またはその抗原結合部分は、例えば、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素で誘導体化することもできる。単離された抗体またはその抗原結合部分を検出可能な酵素で誘導体化する場合、その酵素が検出可能な反応産物を生成するのに用いる追加試薬を加えることによって、それを検出する。例えば、検出剤が西洋ワサビペルオキシダーゼである場合、単離された抗体またはその抗原結合部分は、過酸化水素及びジアミノベンジジンの添加によって検出され、着色反応産物が生成される。単離された抗体またはその抗原結合部分をビオチンで誘導体化し、アビジンまたはストレプトアビジン結合の間接的測定によって検出することもできる。
一実施形態では、抗体は、イメージング剤にコンジュゲートされている。本明細書に記載される組成物及び方法において使用され得るイメージング剤の例としては、放射標識（例えば、インジウム）、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、及びビオチンが挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、抗体は、これに限定されないが、インジウム（１１１Ｉｎ）のような放射標識に連結される。１１１Ｉｎは、ＺＩＫＶの感染の診断において使用する本明細書に記載される抗体を標識するために使用されてもよい。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗ＺＩＫＶ抗体は、二官能性シクロヘキシルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）キレート剤である二官能性キレート剤を介して１１１Ｉｎで標識される（各々が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１２４，４７１号；同第５，４３４，２８７号；及び同第５，２８６，８５０号を参照されたい）。
一般に、本発明による抗体は、グリコシル化されていてもよい。重鎖のＣＨ２ドメインに結合したＮ－結合型グリカンは、例えば、Ｃ１ｑ及びＦｃＲの結合に影響を及ぼすことがあり、アグリコシル化抗体は、これらの受容体に対してより低い親和性を有する。したがって、本発明による抗体のＦｃ部分のＣＨ２ドメインは、グリコシル化残基が非グリコシル化残基で置換された１つ以上の突然変異を含み得る。グリカン構造はまた、活性に影響を及ぼし得る、例えば、補体媒介性細胞死の差は、グリカンの二分岐鎖の末端におけるガラクトース糖の数（０、１、または２）に依存して見られることがある。好ましくは、抗体のグリカンは、投与後にヒト免疫原性応答を引き起こさない。
ＩＩＩ．抗ＺＩＫＶ抗体の調製
Ａ．ウサギモノクローナル抗ＺＩＫＶ抗体の生成
モノクローナル抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって記載されるものなどのハイブリドーマ法を用いて調製することができる。ハイブリドーマ方法を用いて、マウス、ハムスター、ウサギまたは他の適切な宿主動物を免疫付与し、ＺＩＫＶに特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘発する。リンパ球はまた、インビトロにおいても免疫付与することができる。免疫付与後、リンパ球は、単離され、かつ、例えば、ポリエチレングリコールを用い、好適な骨髄腫細胞株と融合され、ハイブリドーマ細胞を形成し、これらは次に融合されないリンパ球と骨髄腫細胞から選別することができる。免疫沈降、免疫ブロット法、またはインビトロ結合アッセイ（例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）；酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））により決定されるように、ＺＩＫＶに対して特異的に向けられたモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、次に、標準方法（参照により本明細書に組み込まれるＧｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）を使用するインビトロ培養において、または動物内の腹水腫瘍としてインビボにおいてのいずれかで増殖することができる。このモノクローナル抗体は次に、先のポリクローナル抗体について説明されたように、培養培地または腹水液から精製することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＰＩＺＶ及び／またはＺＩＫＶ－ＶＬＰで免疫付与されたウサギから得られる。ＰＩＺＶは、ＰＲＶＡＢＣ５９などのＺＩＫＶ株に感染した細胞、例えば、ベロ細胞を培養し；生ＺＩＫＶ粒子を収穫／単離し、単離された生ＺＩＫＶ粒子を精製し；及びＺＩＫＶ粒子を化学的に不活性化することによって産生することができる。ＺＩＫＶ－ＶＬＰは、商用供給源から入手してもよい。ある特定の実施形態では、１つ以上のブースター注射を投与し得る。ある特定の実施形態では、ブースター注射は、初回免疫付与のものとは異なる抗原を含み得る。
一般に、ウサギは、ＰＩＺＶ及び／またはＺＩＫＶ－ＶＬＰで免疫付与され、リンパ細胞（例えば、Ｂ細胞）は、抗体を産生するウサギの脾臓から回収される。リンパ細胞は、骨髄腫細胞株と融合されて、不死ハイブリドーマ細胞株を調製することができ、そのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニングして、ＺＩＫＶに特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定するように選択する。重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離して、重鎖及び軽鎖の所望のアイソタイプ定常領域に連結してもよい。あるいは、抗原特異的軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接単離してもよい。その後、ＤＮＡは、発現ベクター（複数可）にクローニングされる。
下の実験の節と同様に、抗体を特徴付け、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特性について選択する。選択される定常領域は、特定の使用に応じて変動し得るが、可変領域には高親和性の抗原結合性及び標的特異性の特徴が備わっている。
Ｂ．完全ヒトモノクローナル抗ＺＩＫＶ抗体の生成
ヒト抗ＺＩＫＶ抗体を生成する方法は、当該技術分野で公知の種々の技術を用いて直接調製することができる。インビトロで免疫付与された、または免疫付与された個体から単離された、標的抗原に対する抗体を産生する不死化ヒトＢリンパ球を生成することができる（例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＣｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５；及び米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい）。また、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択することができ、例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれるＶａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：３０９－３１４、１９９６；Ｓｈｅｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５：６１５７－６１６２，１９９８；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１，１９９１；及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１、１９９１に説明されるように、ファージライブラリーは、ヒト抗体を発現する。抗体ファージライブラリーの生成及び使用に関する技術はまた、各々が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号；同第６，５９３，０８１号；同第６，３００，０６４号；同第６，６５３，０６８号；同第６，７０６，４８４号；及び、同第７，２６４，９６３号；並びに、Ｒｏｔｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｍｂ．２００７．１２．０１８，２００７にも説明される。親和性成熟戦略及び鎖シャッフリング戦略（参照により本明細書に組み込まれるＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３，１９９２）は、当該技術分野で公知であり、高親和性ヒト抗体を生成するために採用することができる。
ヒト抗ＺＩＫＶ抗体はまた、免疫時に内因性免疫グロブリンを産生することなくヒト抗体の完全レパートリーを産生する能力を有するヒト免疫グロブリン遺伝子座を含有するトランスジェニックマウスでも作製することができる。この手法は、各々が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；及び同第５，６６１，０１６号に記載されている。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＰＩＺＶ及び／またはＺＩＫＶ－ＶＬＰで免疫付与されたトランスジェニックマウスから得られる。マウスは、腹腔内注射（ＩＰ）によって、少なくとも２ラウンド、例えば、５ラウンドのＰＩＺＶ及び／またはＺＩＫＶ－ＶＬＰを受けて、１ヵ月間休ませる。その後、脾臓をＰＩＺＶ及び／またはＺＩＫＶ－ＶＬＰと融合する４日前と２日前に、マウスをブーストする。リンパ細胞（例えば、Ｂ細胞）は、抗体を産生するマウスの脾臓から回収される。リンパ細胞は、骨髄腫細胞株と融合されて、不死ハイブリドーマ細胞株を調製することができ、そのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニングして、ＺＩＫＶに特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定するように選択する。重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離して、重鎖及び軽鎖の所望のアイソタイプ定常領域に連結してもよい。その後、ＤＮＡは、発現ベクター（複数可）にクローニングされる。
Ｃ．ハイブリドーマ由来の抗ＺＩＫＶ抗体のクローニング
重鎖、軽鎖、またはその断片をコードするＤＮＡを単離するため、総ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、ハイブリドーマ細胞から単離される。一本鎖及び二本鎖ｃＤＮＡの合成は、ＯｎｅＴａｑ（登録商標）Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＲＴ－ＰＣＲ キット（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）を用いて行うことができる。ＰＣＲ産物は、アガロース電気泳動によって分離され、断片を切り取って、ＱＩＡｑｕｉｃｋ（登録商標）ゲル抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって精製することができる。断片は、ゴールデンゲートクローニング技術によって、ＢｓｐＱＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏＬａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）との発現ベクターに直接クローニングしてもよい。各反応物から少なくとも４つのコロニーを、例えば、ＳｅｑｕｅＭｉｄ（登録商標）ＤＮＡ精製キット（Ａｌｉｎｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）によって、ミニプレップスケールプラスミド精製のためにスケールアップする。各プラスミドにサンガーシーケンシングを施す。分析後、独自の組換え重鎖を独自の組換え軽鎖と対合させる。これらのプラスミド対を哺乳動物細胞にトランスフェクトする。８～１２日後、各対合からの馴化培地を、ＺＩＫＶまたはＺＩＫＶ Ｅタンパク質に結合するためのＦＬＯＷ（商標）またはＯｃｔｅｔ（商標）によってスクリーニングする。
Ｄ．ヒト化抗ＺＩＫＶ抗体の遺伝子操作
ヒト化抗体の遺伝子操作の方法も用いることができ、当該技術分野において周知である。ヒト化抗体は、非ヒト、例えば、限定されないが、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物である供給源由来の１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば「インポート」残基と称される残基によって置き換えられ、インポート残基は、典型的には、既知のヒト配列の「インポート」可変、定常または他のドメインから取られる。
かかるインポートされた配列を用いて、免疫原性を軽減し、または結合性、親和性、オン速度、オフ速度、アビディティ、特異性、半減期、または当該技術分野において公知の任意の他の好適な特性を軽減し、増強し、または変更することができる。一般に、ＣＤＲ残基は、ＺＩＫＶ結合に直接的かつ最も実質的に関与する。したがって、非ヒトＣＤＲ配列の一部または全てを維持する一方で、可変及び定常領域の非ヒト配列は、ヒトまたは他のアミノ酸に置き換えることができる。
抗体はまた、任意選択で、ＺＩＫＶに対する高親和性を保持しているヒト化であってもよい。この目標を達成するため、ヒト化抗ＺＩＫＶ抗体は、任意選択で、親配列、改変配列、及びヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列及び種々の概念的ヒト化産物を分析するプロセスによって調製することができる。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者は熟知している。選択した候補免疫グロブリン配列の推定上の三次元立体構造を図解及び表示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の見込まれる役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがＺＩＫＶに結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、コンセンサス配列及びインポート配列からフレームワーク（ＦＲ）残基を選択して組み合わせることにより、標的抗原（複数可）に対する親和性の増加など、所望の抗体特性が達成される。
本発明の抗体のヒト化は、限定はされないが、本明細書で引用する参照文献の各々が参照により本明細書に組み込まれるＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２，１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４，１９８８，Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６，１９９３；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７，Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５，１９９２；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３，１９９３；Ｒａｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１（３）：９６９－９７３，１９９４；米国特許第５，６３９，６４１号、同第５，７２３，３２３号；同第５，９７６，８６２号；同第５，８２４，５１４号；同第５，８１７，４８３号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７６３，１９２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，７６６，８８６号；同第５，７１４，３５２号；同第６，２０４，０２３号；同第６，１８０，３７０号；同第５，６９３，７６２号；同第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，２２５，５３９号；同第４，８１６，５６７号；同第７，５５７，１８９号；同第７，５３８，１９５号；及び同第７，３４２，１１０号；ＰＣＴ／米国特許出願第９８／１６２８０号；ＰＣＴ／米国特許出願第９６／１８９７８号；ＰＣＴ／米国特許出願第９１／０９６３０号；ＰＣＴ／米国特許出願９１／０５９３９号；ＰＣＴ／米国特許出願９４／０１２３４号；ＰＣＴ／英国特許出願第８９／０１３３４号；ＰＣＴ／英国特許出願第９１／０１１３４号；ＰＣＴ／英国特許出願９２／０１７５５号；国際公開第９０／１４４４３号パンフレット；国際公開第９０／１４４２４号パンフレット；国際公開第９０／１４４３０号パンフレット；及び欧州特許第２２９２４６号に記載されるものなど、任意の公知の方法を用いて実施することができる。
Ｅ．組換え抗ＺＩＫＶ抗体の産生
抗体は、宿主細胞からの発現によって産生してもよく、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクター（複数可）は、標準的技術によって、宿主細胞にトランスフェクトされる。「トランスフェクション」という用語の種々の形態は、原核または真核宿主細胞内への外因性ＤＮＡの導入のために一般に使用されている多種多様の技術、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどを包含することを意図する。原核または真核宿主細胞のいずれかにおいて抗体を発現することは可能であるが、真核細胞における抗体の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が最も好ましい。なぜなら、このような真核細胞（特に、哺乳動物細胞）が、適切に折り畳まれ、免疫学的に活性な抗体を構築し、分泌する可能性が原核細胞より高いからである。
本明細書に開示する組換え抗体の発現にとって好ましい哺乳動物宿主細胞としては、２９３－６Ｅ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Ｒ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１～６２１に記載されているＤＨＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されているｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含む）（各々が参照により本明細書に組み込まれる）ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞、及びＳＰ２細胞が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞内に導入する場合、抗体は、宿主細胞内での抗体の発現、または、より好ましくは、宿主細胞が増殖する培養培地内での抗体の分泌を可能にするのに十分な時間、宿主細胞を培養することによって産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を用いて、培養培地から回収することができる。
標準的な分子生物技術は、組換え発現ベクターを調製するため、宿主細胞をトランスフェクトするため、形質転換体を選択するため、宿主細胞を培養するため、及び培養培地から抗体を回収するために使用される。抗体をコードする組換え発現ベクターは、本明細書に開示するアミノ酸配列、例えば、配列番号１～６０、８５～１１４、及び１２８～１３７に対応する核酸分子を用いて調製してもよい。
一実施形態では、単離された核酸分子は、重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含む。重鎖可変領域の核酸配列は、配列番号６２、６６、７０、７４、７８、８２、１１６、１２０、１２４及び１３９からなる群から選択される。あるいは、重鎖可変領域は、配列番号６２、６６、７０、７４、７８、８２、１１６、１２０、１２４または１３９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を有する。軽鎖可変領域の核酸配列は、配列番号６４、６８、７２、７６、８０、８４、１１８、１２２、１２６及び１４１からなる群から選択される。あるいは、軽鎖可変領域は、配列番号６４、６８、７２、７６、８０、８４、１１８、１２２、１２６または１４１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を有する。重鎖可変領域をコードする本明細書に開示する核酸を含む組換え発現ベクターは、軽鎖可変領域をコードする本明細書に開示する核酸を含む組換え発現ベクターと同時トランスフェクトして、単一特異性または二重特異性の抗ＺＩＫＶ抗体を産生することができる。あるいは、組換え発現ベクターは、重鎖可変領域をコードする本明細書に開示する核酸、及び軽鎖可変領域をコードする本明細書に開示する核酸を含む。
一実施形態では、単離された核酸分子は、重鎖及び／または軽鎖を含む。重鎖の核酸配列は、配列番号６１、６５、６９、７３、７７、８１、１１５、１１９、１２３、及び１３８からなる群から選択される。あるいは、重鎖は、配列番号６１、６５、６９、７３、７７、８１、１１５、１１９、１２３または１３８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を有する。軽鎖の核酸配列は、配列番号６３、６７、７１、７５、７９、８３、１１７、１２１、１２５及び１４０からなる群から選択される。あるいは、軽鎖は、配列番号６３、６７、７１、７５、７９、８３、１１７、１２１、１２５または１４０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を有する。重鎖をコードする本明細書に開示する核酸を含む組換え発現ベクターは、軽鎖をコードする本明細書に開示する核酸を含む組換え発現ベクターと同時トランスフェクトして、抗ＺＩＫＶ抗体を産生することができる。あるいは、組換え発現ベクターは、重鎖をコードする本明細書に開示する核酸、及び軽鎖をコードする本明細書に開示する核酸を含む。
宿主細胞をまた、Ｆａｂ断片またはｓｃＦｖ分子のような機能的抗体断片を産生するために使用することができる。上記の手順についてのバリエーションが本発明の範囲内であることは、理解される。例えば、宿主細胞に本発明の抗体の軽鎖及び／または重鎖のいずれかの機能的断片をコードするＤＮＡをトランスフェクトすることが望ましくてもよい。組換えＤＮＡ技術はまた、目的の抗原への結合に必要ではない軽鎖及び重鎖のいずれかまたは両方をコードするＤＮＡの一部または全てを取り除くために使用されてもよい。かかる切断されたＤＮＡ分子から発現された分子もまた、本開示の抗体によって包含される。加えて、標準的な化学架橋方法によって、本開示の抗体を第２の抗体に架橋することによって、１つの重鎖及び１つの軽鎖が本開示の抗体であり、他の重鎖及び軽鎖が目的の抗原以外の抗原に特異的である、二機能性抗体が産生されてもよい。
抗体またはその抗原結合部分の組換え発現に好ましい系では、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターの宿主細胞が、２９３－６Ｅ細胞に導入される。
さらに、本発明は、組換え抗体を培養培地から単離する方法を提供する。例えば、収穫した培養培地を遠心分離して、細胞破片を除去し、分泌されたモノクローナル抗体を含有する透明な上清を、ｍＡｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅタンパク質Ａカラムクロマトグラフィーを通じて精製する。溶出抗体をＰＢＳ緩衝液中で透析し、滅菌濾過し、ｐＨを７．４に調整した。精製抗体を連続希釈し、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及びＺＩＫＶエンベロープ組換えタンパク質に対して、ＥＬＩＳＡで試験した。濃度決定は、ヤギ抗ウサギＩｇＧを用いて、ＯＤ４０５ｎｍでのＥＬＩＳＡによって実施する。組換え抗体の純度及び完全性は、非還元及び還元条件下で、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって検証する。
ＩＶ．医薬組成物
本開示はまた、抗体またはその抗原結合部分、及び薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。抗体を含む医薬組成物は、これらに限定されないが、ＺＩＫＶ感染によって引き起こされる容態またはその１つ以上の症状の防止、治療、管理、または寛解において使用される。特定の実施形態では、医薬組成物は、本発明による１つ以上の抗体またはその抗原結合部分を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の本発明による抗体またはその抗原結合部分、及び有害なＺＩＫＶの感染を治療するための、抗体以外の１つ以上の予防または治療剤を含む。
本発明による医薬組成物は、製剤に組み入れられる適当な担体、賦形剤、希釈剤、及び他の薬剤で調製して、移動、送達、耐性などの寛解が提供されるであろう。
典型的には、医薬組成物は、抗体または抗体部分、及び薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」は、生理的に適合可能である、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などを含む。薬学的に許容される担体の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、油など、及びこれらの組み合わせの１つ以上が挙げられる。多くの場合では、組成物において、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールのような多価アルコール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。薬学的に許容される担体は、本発明による抗体またはその抗原結合部分の貯蔵寿命または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、保存剤または緩衝液のような、少量の補助物質をさらに含んでもよい。
様々な送達システムが公知であり、これらを使用して、１つ以上の本発明の抗体、または１つ以上の本発明の抗体、及びＺＩＫＶ感染または１つ以上のその症状を防止し、管理し、治療し、もしくは寛解するのに有用な予防剤または治療剤、例えば、リポソームにおけるカプセル封入、微粒子、マイクロカプセル、抗体または抗体断片を発現する能力がある組換え細胞、受容体により媒介されるエンドサイトーシス（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＷｕ ａｎｄ Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２（１９８７）を参照されたい）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などの組み合わせを投与することができる。
医薬組成物は、その意図される投与経路に適合可能であるように製剤化される。投与経路の例としては、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下）、経口、鼻腔内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜、及び直腸投与が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、投与経路には、ポンプも含む。特定の実施形態では、組成物は、対象への静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内、または局所投与に適合させた医薬組成物として、日常的な手法に従って製剤化される。
典型的には、注射可能な調製物は、例えば、注射のため通常用いられる無菌の水性媒体もしくは油性媒体において、上で記載された抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化することによって調製され得る。注射用水性媒体として、例えば、生理的生理食塩水、グルコースを含有する等調溶液、及び他の補助剤などが存在し、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ－５０（ＰＥＧ－５０水添ヒマシ油）］などのような適切な溶解剤と併用で用いられ得る。油性媒体として、例えば、ゴマ油、大豆油などが利用され、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような溶解剤と併用して用いられ得る。必要な場合、組成物は、注射部位における痛みを和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔薬も含むことができる。
注射のための製剤は、防腐剤が添加された単位剤形（例えば、アンプルまたは複数回用量容器）において提供され得る。医薬組成物は、油性もしくは水性媒体中の懸濁剤、液剤または乳剤などの形態をとることができ、懸濁化剤、安定化剤または分散剤などの製剤化剤を含有することができる。あるいは、医薬組成物は、使用前に適切な媒体（例えば、滅菌発熱性物質除去水）で構成するための粉末形態であってもよい。一般に、組成物の成分は、別々に、または単位剤形中に一緒に混合して、例えば、活性薬剤の量を示したアンプルまたはサシェなどの密閉容器に入れたドライ凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給される。投与方法が注入である場合、組成物は、滅菌した医薬品等級の水または生理食塩水を含有する注入ボトルで分配することができる。投与方法が注射である場合、投与前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。
特に、本開示はまた、予防または治療剤、または医薬組成物の１つ以上が、薬剤の量を示しているアンプルまたはサシェのような密閉容器に包装されることを提供する。一実施形態では、予防または治療剤、または医薬組成物の１つ以上は、密閉容器において乾燥無菌化凍結乾燥粉末または水を含まない濃縮物として供給され、対象への投与のため適当な濃度まで（例えば、水または生理食塩水で）再構成することができる。多くの治療適用について、好ましい投与経路／様式は、皮下注射、静脈内注射または注入であるが、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、当該技術分野で公知の様々な方法によって投与することができる。
当業者に理解される通り、投与経路及び／または様式は、所望の結果に依存して変動する。ある特定の実施形態では、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、及びマイクロカプセル封入された送達システムを含む制御放出製剤のような、迅速放出に対して化合物を保護する担体と共に調製されてもよい。エチレンビニルアセテート、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、及びポリ（乳酸グリコール酸共重合体）のような、生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤の多くの調製方法は、特許をとられているまたは当業者に一般に公知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳｕｓｔａｉｎｅｄ及びＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
本発明による抗体またはその抗原結合部分を送達するためのナノ粒子を含む製剤は、治療及び診断用途の両方に使用され得る。抗体結合ナノ粒子、並びにその調製方法及び使用方法は、参照により本明細書に組み込まれるＡｒｒｕｅｂｏ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．２００９（“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ“ｉｎ Ｊ．Ｎａｎｏｍａｔ．Ｖｏｌｕｍｅ ２００９，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ４３９３８９，２４ ｐａｇｅｓ，ｄｏｉ：１０．１１５５／２００９／４３９３８９）によって詳細に説明されている。ナノ粒子は、ウイルス感染細胞を標的とするために開発され得、医薬組成物中に含有される抗体と結合され得る。薬物送達のためのナノ粒子は、例えば、各々がその全体として本明細書に組み込まれるＵＳ８２５７７４０、またはＵＳ８２４６９９５にも説明されている。
ある特定の実施形態では、ナノ粒子を含む製剤は、制御放出系で使用することができる。ある特定の実施形態では、制御放出系は、組成物の標的の近くに置くことができ、したがって、全身用量のごく一部を必要とする。別の実施形態では、生分解性の生体適合性ポリマーをナノ粒子を含む製剤中に使用することができる。
本開示の方法が、経口投与を含む場合、組成物は、錠剤、カプセル、カシェ剤、ジェルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で経口製剤化することができる。錠剤またはカプセル剤は、結合剤（例えばアルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）のような、薬学的に許容される賦形剤と共に従来の手段により調製することができる。錠剤は、当該技術分野で周知の方法によってコーティングされてもよい。経口投与のための液体調製物は、これらに限定されないが、溶液、シロップもしくは懸濁液の形態をとってもよく、またはこれらは、使用前に水もしくは他の適当なビヒクルとの構成のための乾燥製品として提示されてもよい。かかる液体調製物は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、または硬化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンドオイル、油性エステル、エチルアルコール、または分別植物油）；及び保存剤（例えば、メチルまたはプロピル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸塩またはソルビン酸）のような、薬学的に許容される添加剤と共に、従来の手段により調製されてもよい。調製物はまた、必要に応じて、緩衝塩、香味剤、着色剤及び甘味剤を含んでもよい。経口投与のための調製物は、予防または治療剤（複数可）の低速放出、制御放出または持続放出のために適当に製剤化されてもよい。
本発明は、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分が、本明細書に記載される１つ以上の追加の治療的に活性な成分（複数可）と共に製剤化される、医薬組成物を含む。
Ｖ．抗ＺＩＫＶ抗体の治療上の使用
本明細書に記載される単離された抗体及び抗原結合部分は、インビボ及びインビトロの両方でＺＩＫＶを中和することができるのが好ましい。したがって、そのような抗体及び抗原結合部分を使用して、例えば、ＺＩＫＶに暴露された細胞培養において、ＺＩＫＶに感染したヒト対象または他の哺乳動物対象において、ＺＩＫＶの感染を阻害することができる。
本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶ感染と関連する疾患または障害または容態の治療、及び／またはそのような疾患、障害または容態と関連する少なくとも１つの症状の寛解に有用である。症状としては、発熱、頭痛、関節痛、筋肉痛、及び斑状丘疹性発疹が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、宿主における、ウイルス力価の減少、またはウイルス量の低下に有用である。一実施形態では、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶ感染を有する対象に治療用量で投与され得る。
いくつかの実施形態では、抗ＺＩＫＶ抗体は、ＺＩＫＶ感染を受けるリスクがある対象（例えば、ＺＩＫＶが大流行している国に住んでいる、またはＺＩＫＶが大流行している国を訪れている妊婦）に治療に有用であり得る。抗体は、それを必要とする対象に投与する場合、対象におけるＺＩＫＶ感染を減少させ得る。抗体を使用して、対象におけるウイルス量を減少させ得る。抗体は、単独で使用してもよく、または、ウイルス感染の治療のための当該技術分野で公知の治療部分またはモダリティとの併用療法として使用してもよい。同定された抗体は、哺乳動物を感染から保護するために予防的に（感染前に）使用することができ、または、以前に確立された感染を寛解させるため、または感染と関連する少なくとも１つの症状を寛解させるために治療的に（感染が確立された後に）使用することができる。
免疫不全容態の個人、ＺＩＫＶを保有していると疑われる蚊に刺された人、ＺＩＫＶが大流行している国に住んでいる、またはＺＩＫＶが大流行している国を訪れている妊婦、またはＺＩＫＶが大流行している地域に住んでいる、またはＺＩＫＶが大流行している地域を訪れており、妊娠中とみなされている女性、ＺＩＫＶを保有していることが疑われる蚊を有していることが知られている地域を訪れているかまたはそこに住んでいる個人、ＺＩＫＶが大流行していることが知られているもしくは大流行していると疑われる地域もしくは国を訪れたもしくは訪れることを計画している個人などのＺＩＫＶ感染を発症するリスクがある対象に、本発明の１つ以上の抗ＺＩＫＶ抗体を予防的に使用することも本明細書で企図される。
「投与すること」という用語は、本明細書で使用する場合、治療目的（例えば、ＺＩＫＶ感染の治療）を達成するための物質（例えば、抗ＺＩＫＶ抗体）の送達を指すことを意味する。投与の方法は、非経口、経腸、及び局所であってもよい。非経口投与は、通常注射によるものであり、これには、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、頭蓋内及び胸骨内注射並びに注入が挙げられる。局所投与には、上皮の内層または皮膚粘膜の内層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通じた経皮及び鼻腔内経路が含まれる。投与は、全身性または局所性であり得る。
加えて、肺投与は、例えば、吸入器または噴霧吸入器の使用、及びエアロゾル剤との製剤化によって採用することができる。例えば、それぞれをそれらの全体として参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、及び同第４，８８０，０７８号；並びにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号、同第ＷＯ９７／３２５７２号、同第ＷＯ９７／４４０１３号、同第ＷＯ９８／３１３４６号、及び同第ＷＯ９９／６６９０３号を参照されたい。一実施形態では、抗体、併用療法または組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（登録商標）肺薬物送達テクノロジー（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。特定の実施形態では、予防または治療剤は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻腔内、肺または皮下投与される。予防または治療剤は、任意の便利な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜層（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を介した吸収によって投与されてもよく、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与されてもよい。投与は、全身性または局所性であり得る。
一実施形態では、本発明の医薬組成物は、標準的な針及び注射器を用いて皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン送達装置は、本発明の医薬組成物を送達する上での適用を容易に有する。このようなペン送達装置は、再利用可能または使い捨て可能であり得る。再利用可能なペン送達装置は、概して、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを使用する。いったん、カートリッジ内の医薬組成物が全て投与され、カートリッジが空になると、この空のカートリッジは容易に廃棄することができ、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと容易に交換することができる。次に、ペン送達装置は、再利用することができる。使い捨てのペン送達装置において、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン送達装置は、この装置内の貯蔵器の中に保持された医薬組成物が事前に充填されている。いったん、貯蔵器が医薬組成物に関して空になると、装置全体が廃棄される。
数多くの再利用可能なペン送達装置及び自動注射送達装置は、本発明の医薬組成物の皮下送達における応用を有する。例としては、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ，ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、及びＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ，Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられるが、確かにこれらに限定されず、ほんの数種類しか挙げていない。本発明の医薬組成物の皮下送達における用途を有する使い捨てペン送達装置の例としては、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及びＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注射装置（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）及びＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ，Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）が挙げられるが、ほんの数種類しか挙げていない。
本明細書で使用する場合、「有効量」または「治療有効量」という用語は、そのために投与される所望の効果を生じる量を指す。正確な量は、治療の目的に依存し、当業者によって公知の技術を使用して確認可能である（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。例えば、抗体の量は、ＺＩＫＶ感染の悪化を阻害する、ＺＩＫＶ力価を低下させる、またはＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状または徴候の重症度を寛解するのに十分である。
本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、ＺＩＫＶ感染のような疾患または障害の寛解、予防、及び／または治療を必要とする動物、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒトを指す。対象は、ＺＩＫＶ感染を有し得るかまたはＺＩＫＶ感染を発症する素因がある。「ＺＩＫＶ感染を発症する素因がある」対象、または「ＺＩＫＶ感染にかかる高まったリスクがあり得る」対象は、自己免疫性疾患に起因する易感染性免疫系を有する対象、免疫抑制剤療法を受けている人（例えば、臓器移植後）、ヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ）または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に罹患している人、ＺＩＫＶが大流行していることが知られている地域に住んでいる、またはＺＩＫＶが大流行していることが知られている地域を訪れており、妊娠中とみなされている女性に加えて、ＺＩＫＶが大流行している地域に住んでいる場合には、ＺＩＫＶに暴露したかまたはＺＩＫＶに暴露したかもしれない、またはＺＩＫＶが大流行している地域に訪れている妊婦、白血球を枯渇させるかまたは破壊する特定の形態の貧血、放射線療法または化学療法を受けている人、または炎症性障害にかかっている人である。
さらに、非常に若年のまたは高齢の対象はリスクが高まっている。感染した動物もしくはヒト患者との物理的な接触もしくは密接な物理的緊密性がある、または感染した動物もしくはヒト患者に由来する体液もしくは組織へ曝露された何らかの人は、ＺＩＫＶ感染を発症するリスクが高まっている。そのうえ、対象は、この疾患の爆発的流行に近いためにＺＩＫＶ感染にかかるリスクがあり、例えば、対象は、人口密度の高い都市に、またはＺＩＫＶの感染が確認されもしくは疑われた対象に緊密に居住しており、あるいは雇用の選択、例えば、病院勤務者、医薬研究者、またはＺＩＫＶの爆発的流行を有していることがわかっているかもしくは疑われる地域もしくは国を訪れたもしくは訪れることを計画中である個人である。対象がＺＩＫＶ感染症に罹患した場合、対象において重度の転帰のリスクも高まる。妊婦がＺＩＫＶに感染すると、小頭症または他の発達異常を伴って生まれるかもしれないリスクが高まる。したがって、女性が妊娠しているか、または子供を妊娠しているとみなされていて、ＺＩＫＶの爆発的流行がある地域に住んでいるか、ＺＩＫＶの爆発的流行がある地域を訪れているか、ＺＩＫＶを保有している蚊を有していることがわかっている地域にいる場合、彼女はＺＩＫＶ感染にかかるリスクがある。対象をＺＩＫＶへ曝露した後ではギラン・バレー症候群を発症するリスクも高まる。
本明細書で使用する場合、「治療する」、「治療すること」、または「治療」という用語は、本発明の抗体などの治療剤を必要とする対象へのこの治療剤の投与による、ＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状または徴候の重症度の軽減または寛解を指す。この用語には、疾患の進行の抑制または感染の悪化の抑制が含まれる。この用語には、疾患の正の予後も含まれ、すなわち、本発明の抗体などの治療剤の投与の際に対象は感染がなくてもよく、またはウイルス力価が低下しているか、もしくは全くなくてもよい。治療剤は、対象へ治療量で投与され得る。
「予防する」、「予防すること」または「予防」という用語は、本発明による抗体または抗原結合部分の投与の際の、ＺＩＫＶ感染の症状発現の抑制またはＺＩＫＶ感染の何らかの症状もしくは徴候の抑制を指す。この用語には、ウイルスへ曝露されたまたはＺＩＫＶ感染を有するリスクがある対象における感染の広がりの予防が含まれる。
抗体の用量は、投与されることになっている対象の年齢及びサイズ、投与経路、及びこれらに類するものによって変わり得る。本発明による抗体またはその抗原結合部分を、成人患者におけるＺＩＫＶ感染を治療するために、またはこのようなＺＩＫＶ感染を予防するために使用する場合、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、通常、約０．００１～約６０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは、約０．００１～約１、約１～約５、約５～約１０、約１０～約２０、または約２０～約６０ｍｇ／ｋｇ体重の単回用量で投与することが有利である。
容態の重症度に応じて、治療の頻度及び期間を調整することができる。ある特定の実施形態では、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、約０．０５ｍｇ～約４５００ｍｇ、約０．１ｍｇ～約３５００ｍｇ、約０．５ｍｇ～約２５００ｍｇ、約１ｍｇ～約１５００ｍｇ、約２．５ｍｇ～約７５０ｍｇ、約５ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約３００ｍｇ、または約２０ｍｇ～約２００ｍｇの初回用量として投与することができる。例えば、初回用量は、２００、１６０、８０、４０及び２０ｍｇからなる群から選択される。一実施形態では、その後の用量は、初回用量と同じである。別の実施形態では、その後の用量は、初回用量と異なり得る。例えば、抗ＺＩＫＶ抗体は、１日目に最初に１６０ｍｇの用量、その後、２週間後（１５日目）に８０ｍｇの第２用量、及びさらにその後、４週間後（２９日目）に開始して、かつ、その後隔週継続で４０ｍｇのその後の維持用量で投与される。投与のその後の用量は、臨床検査に従った対象の必要性に応じて、医師による治療期間中に調整することもできる。
ある特定の実施形態では、初回用量に続いて、初回用量とおよそ同じまたはそれ未満であり得る量で、第２のまたは複数のその後の用量の抗体またはその抗原結合部分が投与され得、その後の用量は、１～２４時間（例えば、１、１と１／２、２、２と１／２、３、３と１／２、４、４と１／２、５、５と１／２、６、６と１／２、７、７と１／２、８、８と１／２、９、９と１／２、１０、１０と１／２、１１、１１と１／２、１２、１２と１／２、１３、１３と１／２、１４、１４と１／２、１５、１５と１／２、１６、１６と１／２、１７、１７と１／２、１８、１８と１／２、１９、１９と１／２、２０、２０と１／２、２１、２１と１／２、２２、２２と１／２、２３、２３と１／２、２４）、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、または少なくとも１４週間離れている。一実施形態では、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上）のその後の用量を、それを必要とする対象に投与する。本発明のある特定の実施形態では、その後の用量をそれを必要とする対象に投与する頻度は、治療計画の期間にわたって変化し得る。投与の頻度は、臨床検査に従った対象の必要性に応じて、医師による治療期間中に調整することもできる。
「併用療法」という用語は、本明細書で使用する場合、２つ以上の治療物質、例えば、抗ＺＩＫＶ本発明の抗体及び追加の治療剤の投与を指す。追加の治療剤は、抗ＺＩＫＶ抗体の投与と同時に、前に、または後に投与し得る。
本明細書で使用する場合、「追加の治療剤」または「第２の治療剤」という用語は、化学部分であり得る任意の抗感染薬または抗感染療法、または、対象におけるＺＩＫＶ感染の治療、予防、または寛解に使用される生物学的療法を指す。例えば、本発明では、第２の治療剤には、ＺＩＫＶに対する抗体（一実施形態では、ＺＩＫＶに対する抗体は、本明細書に記載のものとは異なり得る）、ＺＩＫＶ用のワクチン、直接作用型抗ウイルス薬、免疫調節薬（例えば、インターフェロン）、及び抗炎症薬（例えば、コルチコステロイド、及び抗ＴＮＦなどの非ステロイド系抗炎症薬）が含まれ得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、ＺＩＫＶ感染を有する患者におけるウイルス量を低減させるために、または感染の１つ以上の症状及び／または胎児もしくは男性生殖器官への伝播を寛解するために、第２の治療剤と組み合わされ得る。
ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、ＺＩＫＶ Ｅに特異的な別の異なる抗体または抗体カクテルであり、カクテル内の１つのまたは複数の異なる抗体は、本発明の抗体として、同じエピトープまたは重複エピトープへ結合してもよく、または結合しなくてもよい。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、異なるＺＩＫＶタンパク質に対する抗ＺＩＫＶ抗体である。第２の抗体は、ウイルスの異なる株に由来する１つ以上の異なるＺＩＫＶタンパク質に特異的であり得る。ＺＩＫＶに対する中和活性または阻害活性を有する本発明の抗体の組み合わせ（「カクテル」）を使用することは、本明細書で熟慮されている。いくつかの実施形態では、非競合抗体を組み合わせて、それを必要とする対象へ投与して、突然変異によりＺＩＫＶの回避能力を低減させ得る。いくつかの実施形態では、この組み合わせで使用される抗ＺＩＫＶ抗体は、Ｅタンパク質上の異なる重複しないエピトープに結合する。この組み合わせで使用される抗ＺＩＫＶ抗体は、細胞へのウイルス付着を遮断し得、及び／またはウイルスと細胞膜との融合を阻害し得、そうすることにより、宿主細胞へのＺＩＫＶ侵入を遮断し得る。抗体は、ＭＲ７６６（ウガンダ１９４７）、ＰＲＶＡＢＣ５９（プエルトリコ２０１５）、ＦＬＲ（コロンビア２０１５）、ＳＶ０１２７－１４（タイ、２０１４）、ＣＰＣ－０７４０（フィリピン２０１２）、及びフォルタレザ（ブラジル２０１５）株から選択されるＺＩＫＶ株由来のＥタンパク質と相互作用し得、単独で、または先に記載のいずれか１つ以上の薬剤と併用される場合、記載したＺＩＫＶ株のいずれか１つ以上、またはその変異体を中和し得る。
本明細書では、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分の組み合わせを使用することも熟慮され、この組み合わせは、交差競合しない１つ以上の抗体を含む。ある特定の実施形態では、この組み合わせには、本発明の少なくとも２つまたは少なくとも３つの抗体の混合物を含むカクテルが含まれる。カクテル内の抗ＺＩＫＶ抗体は、ウイルスまたはウイルス感染細胞を中和する能力、または細胞へのウイルス付着を遮断する能力、もしくは細胞膜へのウイルスの融合を遮断する能力、またはＺＩＫＶ Ｅタンパク質を結合する能力が異なり得る。
追加の治療活性成分（複数可）は、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体または抗原結合部分の投与の前に対象に投与され得る。例えば、第１の成分は、第１の成分が第２の成分の投与の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分未満前に投与される場合に、第２の成分「の前に」投与されるとみなされ得る。他の実施形態では、追加の治療活性成分は、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分の投与の後に対象に投与され得る。例えば、第１の成分は、第１の成分が第２の成分の投与の１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与される場合に、第２の成分「の後に」投与されるとみなされ得る。さらに他の実施形態では、追加の治療活性成分（複数可）は、本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分の投与と同時に対象に投与され得る。本発明の目的のための「同時」投与は、例えば、抗ＺＩＫＶ抗体及び追加の治療活性成分は、単一の投薬形態で、または互いに約３０分もしくはそれ以下以内に対象に投与される別々の投薬形態での対象への投与を含む。別々の投薬形態で投与される場合、各投薬形態は、同じ経路を介して投与され得（例えば、抗ＺＩＫＶ抗体及び追加の治療活性成分の両方が静脈内投与などされ得る）；あるいは、各投薬形態は、異なる経路で投与され得る（例えば、抗ＺＩＫＶ抗体が静脈内投与され得、追加の治療活性成分は経口投与され得る）。いずれにしても、単一投薬形態、同じ経路による別々の投薬形態、または異なる経路による別々の投薬形態は、本開示の目的のために全て「同時投与」とみなされる。本開示の目的のために、追加の治療活性成分の投与の「前」、「同時」または「後」（本明細書の上で定義される用語と同様）の抗ＺＩＫＶ抗体の投与は、追加の治療活性成分「と組み合わせた」抗ＺＩＫＶ抗体の投与とみなされる。
本明細書で使用する場合、「との組み合わせにおける」という用語は、追加の治療活性成分（複数可）が、本発明の少なくとも１つの抗ＺＩＫＶ抗体、または本発明の抗体の２つ以上を含むカクテルの投与の前に、投与と同時に、または投与の後に投与され得ることを意味する。「との組み合わせにおける」という用語は、抗ＺＩＫＶ抗体及び第２の治療剤の連続投与または同時投与も含む。
ＶＩ．抗ＺＩＫＶ抗体の非治療的使用
本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分はまた、ＺＩＫＶ感染の診断または検出などの非薬学的目的、または分析目的に使用することもできる。
一実施形態では、ワクチンに対する抗体反応を試験して、抗体がある特定の免疫原性エピトープに対して誘発されているかどうか確認することができる競合ＥＬＩＳＡにおいて、抗体を使用することができる。
一実施形態では、抗体は、ウイルス感染力がモノクローナル抗体を用いて中和される試験に対して有利に使用することができる。
一実施形態では、抗体は、ＺＩＫＶ感染の診断のためのイムノアッセイにおいて使用することができる。イムノアッセイの好ましい例としては、ＥＬＩＳＡ、免疫蛍光、免疫組織化学及びフローサイトメトリーが挙げられる。より好ましくは、診断には、ＥＬＩＳＡが含まれる。例えば、標準ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、または結合遮断アッセイを使用してもよい。抗体を使用することができる他のアッセイには、ウェスタンブロット、ＰＲＮＴ、ＭＮＴ、ＴＣＩＤ５０に基づく中和アッセイが含まれる。
ＺＩＫＶ感染の標準的なＥＬＩＳＡ診断アッセイには、例えば、対象から得られた試料を本発明による抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分と接触させることを含み得、ここで、抗ＺＩＫＶ抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識されるか、または試料からＺＩＫＶを選択的に単離するための捕捉リガンドとして使用される。あるいは、非標識抗ＺＩＫＶ抗体は、それ自体検出可能に標識された二次抗体と組み合わせて診断適用において使用され得る。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉのような放射性同位体；フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネートもしくはローダミンのような蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼのような酵素であり得る。試料中のＺＩＫＶを検出または測定するために使用することができる具体的な例となるアッセイとしては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）が挙げられる。試料は、感染したＺＩＫＶで負わされ得る組織または体液から選択される。体液には、血液（例えば、全血、血漿、血清）、唾液及び尿が含まれる。血液、特に、血漿または血清が最も好ましい。一般に、健常対象（例えば、ＺＩＫＶに関連する疾患に罹患していない対象）から得られる特定の試料中のＺＩＫＶのレベルは、陰性対照としてベースラインを陰性対照として最初に確立するために測定される。次いで、ＺＩＫＶのこのベースラインレベルは、ＺＩＫＶに関連する容態またはこのような容態に関連する症状を有することが疑われる個体から得られた試料において測定されたＺＩＫＶレベルに対して比較され得る。
ＺＩＫＶ感染の結合遮断アッセイは、少なくとも３つの工程を含む。具体的には、診断される対象からの単離試料（例えば、血液（例えば、全血、血漿、血清）、唾液、及び尿などの体液の試料）を、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに添加し、結合のためインキュベートした（例えば、少なくとも約３０分間または少なくとも約１時間）。その後、本発明による抗体またはその抗原結合部分を添加する（「プローブ抗体」として）。ここで、本発明による抗体またはその抗原結合部分は、標識されていることが好ましく、例えば、ビオチン化または西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートされている。さらなるインキュベーション時間（例えば、少なくとも約１分間、好ましくは少なくとも約３分間、より好ましくは少なくとも約５分間、さらにより好ましくは少なくとも約１０分間、最も好ましくは少なくとも約１５分間）の後、本発明による抗体またはその抗原結合部分の結合の阻害を決定することができる。一般に、結合の阻害は、対象の試料中の抗ＺＩＫＶ Ｅタンパク質が存在することを示し、したがって対象のＺＩＫＶ感染を示す。対照的に、非感染対象の試料では、典型的には、結合の阻害が想定されない。重要なことに、本発明の抗ＺＩＫＶ抗体を用いたこのようなアッセイは、既に他のフラビウイルスに感染している対象においては陽性を示さない。フラビウイルスは、典型的には、ＺＩＫＶと交差反応する多数の抗体を誘導する。換言すれば、このアッセイは非常に特異的であり、交差反応性抗体によって影響されない。
診断アッセイでは、抗ＺＩＫＶ抗体またはその抗原結合部分は、直接使用するための溶液中に可溶化させる。液体（ビヒクル）は、目的に応じて、例えば、アッセイに応じて選択することができる。好ましくは、溶液は、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）または他の緩衝液を含む。そのような緩衝液は、好ましくは生物学的緩衝液であり、緩衝液は、ＭＥＳ、ＢＩＳ－ＴＲＩＳ、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＩＳ－ＴＲＩＳプロパン、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、Ｔｒｉｚｍａ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳ、ＴＲＩＣＩＮＥ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、ＢＩＣＩＮＥ、ＨＥＰＢＳ、ＴＡＰＳ、ＡＭＰＤ、ＡＭＰＳＯ、ＣＨＥＳ、ＣＡＰＳＯ、ＡＭＰ、ＣＡＰＳ、及びＣＡＢＳのいずれかであり得る。溶液がリンゲル液を含むことも好ましい。加えて、溶液は、Ｔｒｉｓ、例えば、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌを含んでもよい。
上述の溶液はまた、Ｔｗｅｅｎ２０またはＴｗｅｅｎ８０などのＴｗｅｅｎ（ポリソルベート）などの洗浄剤を含むことができる。洗浄剤は、好ましくは、例えば、０．０１％未満の低濃度で存在する。溶液はまた、張性を与えるためにナトリウム塩（例えば、塩化ナトリウム）を含むことができる。例えば、１０±２ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌの濃度が典型的である。
加えて、上述の溶液は、任意にＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）またはＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）などのタンパク質安定化剤を含んでいてもよい。必要に応じて溶液に含有させることができるタンパク質安定剤のさらなる例としては、例えば、上述の緩衝液；塩化ナトリウムなどの塩；ヒスチジン、グリシン、及びアルギニンなどのアミノ酸；トレハロース及びスクロース（二糖類）、マンニトール、及びソルビトール（糖アルコール）などのポリオール／二糖類／多糖類；ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などの界面活性剤、及びＨＳＡまたはＢＳＡのようなタンパク質；デキストラン及びポリエチレングリコールなどのポリマー；抗酸化剤が挙げられる。
さらに、溶液は、任意に、アジ化ナトリウムなどの防腐剤を含んでもよい。防腐剤は、典型的には、微生物汚染を防ぐために使用される。
ＶＩＩ．使用のキット
本開示はまた、感染性ＺＩＫＶの中和、ＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状の予防、治療、または寛解、及び妊婦の胎児にＺＩＫＶ感染を伝播させる尤度の低下、及び／または男性生殖器官への伝播の予防に使用されるキットを提供する。加えて、本開示はまた、ＺＩＫＶ感染の診断にインビトロで使用されるキットを提供する。
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかに従って使用される説明書を含み得る。含まれる説明書は、感染性ＺＩＫＶの中和、ＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状の予防、治療、または寛解、及び妊婦の胎児にＺＩＫＶ感染を伝播させる尤度の低下、及び／または男性生殖器官への伝播の予防のために抗ＺＩＫＶ抗体の投与の記述を含み得る。
抗ＺＩＫＶ抗体の使用に関する説明書は、一般に、目的とする治療の用量、投与スケジュール、及び投与経路についての情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数用量包装）、またはサブユニット用量であり得る。本開示のキットに封入して提供される説明書は、典型的に、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる紙のシート）上に書かれた説明書であるが、機械可読説明書（例えば、磁気または光学記憶ディスク上に保存された説明書）も許容される。
ラベルまたは添付文書は、組成物が感染性ＺＩＫＶの中和、ＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状の予防、治療、または寛解、及び妊婦の胎児にＺＩＫＶ感染を伝播させる尤度の低下、及び／または男性生殖器官への伝播の予防に使用されることを示す。説明書は、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するために提供することができる。
本開示のキットは、適切に包装される。適切な包装は、バイアル、ビン、ジャー、柔軟材包装（例えば、密封したマイラー（Ｍｙｌａｒ）またはプラスチックのバッグ）などを含むが、これらに限定されない。吸入器、鼻腔投与装置（例えば、噴霧器）またはミニポンプなどの注入装置のような、特定の装置と組み合わせた使用のための包装もまた検討される。キットは、無菌アクセスポート（例えば、容器が静注用溶液のバッグまたは皮下注射針により穴を開けることが可能な栓を有するバイアルであり得る）を有し得る。容器はまた、無菌アクセスポート（例えば、容器が静注用溶液のバッグまたは皮下注射針により穴を開けることが可能な栓を有するバイアルであり得る）を有し得る。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書に記載される抗ＺＩＫＶ抗体である。
さらに他の実施形態では、説明書は、ＺＩＫＶ感染のインビトロ診断のために抗ＺＩＫＶ抗体を使用する記述を含む。キットは、緩衝剤及び解釈情報などのさらなる成分を任意に提供できる。通常、キットは、容器、及び容器上のまたはそれと関連するラベルまたは包装挿入物（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、上記のキットの内容物を含む製造品を提供する。
当業者にとって当然のことながら、本明細書中に記載される本発明の方法の他の適切な変更及び適応は明らかであり、本発明の範囲及び本明細書中で開示される実施形態から逸脱することなく、適切な同等物を用いて為し得る。本発明を詳細に説明してきたが、以下の実施例（単なる説明のために含まれるものであり、本発明を限定するものではない）を参照することにより本発明がより明確に理解されよう。
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物の作製及び使用について完全な開示及び説明を当業者にもたらすために記載したものであって、本発明者らが本発明とみなすものの範囲を限定するものではない。
実施例１：ＺＩＫＶ特異的抗体の単離、及び抗ＺＩＫＶ抗体の産生
動物及び免疫付与
合計２匹の（２）Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ Ｗｈｉｔｅ（ＮＺＷ）雌ウサギ（ＴＡＫ ４６６及びＴＡＫ ４７２）（Ｃｏｖａｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｄｅｎｖｅｒ，ＰＡ）から全て入手した）は、それらの高い抗ＺＩＫＶ ＥＬＩＳＡ抗体力価により選択した。動物の登録及び治療群の割り当ての詳細を表１に列挙する。
Figure 0007463366000001
Figure 0007463366000002
Ｌｏ－ジカＶａｘワクチンは、ミョウバンで製剤化したＰＩＺＶであり、バイオセーフティキャビネットで無菌的に取り扱った。ワクチンをすぐに使用できるように、ワクチンは、調製または製剤化せずに動物に投与した。アジュバント（フロイント不完全アジュバント、０．２５ｍｌ）を有するＺＩＫＶ－ＶＬＰ（１０９日目）、及びアジュバントを有さないＺＩＫＶ－ＶＬＰ（１３０日目）を動物に投与した。
ハイブリドーマの生成
リンパ球単離
ウサギＴＡＫ４６６及びＴＡＫ４７２由来の脾臓をＡｂｃａｍに送達し、Ａｂｃａｍのプロトコルに従って、最後の免疫付与の４日後に脾細胞を単離した。簡潔に言えば、脾臓を培養皿に移して、鉗子及びハサミを用いて過剰な脂肪をトリミングした。その後、脾臓に穿刺し、滅菌針及び注射器を用いて、培養培地（１：１００希釈）（ペニシリン／ストレプトマイシン／ファンギゾンを有するＲＰＭＩ培地、フィッシャーカタログ番号ＢＷ１７７４５Ｅ）でフラッシュし、次いで、それを注射器の端で粉々に砕いた。その後、懸濁液を数回ピペットし、セルストレーナーを通過させて、濾液をファルコンチューブに収集した。細胞破片を同じ方法で３～５回処理し、ストレーナーを通過させて、全ての濾液を同じファルコンチューブに収集した。次いで、細胞懸濁液を１６００ｒｐｍで１５分間スピンし、上清を廃棄した。次に、赤血球溶血緩衝液を細胞ペレットに加え、４分間インキュベートした。培養培地をさらに加え、細胞を１６００ｒｐｍでスピンした。最終的に、細胞ペレットを培地中に再懸濁し、細胞計数を行った。細胞を凍結用培地（９０％ＦＢＳ及び１０％ＤＭＳＯ）にアリコートし、－８０℃で一晩凍結した後、液体窒素保存に移した。脾臓及び単離された脾細胞の詳細を表３に記載する。
Figure 0007463366000003
融合
モノクローナル融合ごとに、２億個の脾細胞を１億個の融合パートナー細胞（２４０Ｅ－Ｗ２細胞、Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ／Ａｂｃａｍによって開発され、特許化された）と融合し、２０枚の９６ウェルプレートに播種した。ＴＡＫ４６６及びＴＡＫ４７２脾細胞を用いて、４回の融合を翌日行い、得られたハイブリドーマを、合計で８０枚の９６ウェルプレートに播種した。
融合後、ハイブリドーマを、標準条件下で、組織培養インキュベーター中で培養した。細胞増殖を融合の２～３週間後に調べ、融合効率を分析した。融合効率は、ハイブリドーマコロニーを含有するウェルの総数を、調べたウェルの総数で除して計算した。最低でも２枚のプレートを融合ごとに調べた。融合情報を表４に列挙する。
Figure 0007463366000004
スクリーニング
融合後、マルチクローン上清を、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ（Ｎａｔｉｖｅ Ａｎｔｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．）及びＺＩＫＶ Ｅタンパク質（Ｎａｔｉｖｅ Ａｎｔｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．）との反応性について標準ＥＬＩＳＡによって、Ａｂｃａｍでスクリーニングした。ＥＬＩＳＡスクリーニングごとに、抗原を５０ｎｇ／ウェルでコーティングした。ＴＡＫ４６６及びＴＡＫ４７２ウサギ出血（表１に示すように、ＰＩＺＶで３回免疫付与した後にプールした過免疫血清）を、表５の対応するプレートについて、１：１００希釈で陽性対照として使用した。細胞で調節されていない新鮮な培地を、８０枚全てのプレートについて陰性対照として使用した。
９６ウェルプレートの１枚（プレート番号５）を融合の９日後にプレスクリーニングした後、融合の１４日後に、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ抗原で、８０枚全てのプレートを一次ＥＬＩＳＡスクリーニングした。一次抗原ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及び二次抗原Ｅタンパク質を含んだ確認ＥＬＩＳＡスクリーニングを、融合の２０日後に行った。スクリーニングプロセス及びＥＬＩＳＡ結果を表５に示す。
Figure 0007463366000005
３１５個の陽性マルチクローン由来の上清を試験に提供した。
マルチクローンを選択すると、サブクローンを「限界希釈」によって生成し、ほとんどのウェルが単一のクローンのみを含むことを保証した。
ハイブリドーマクローンの分析
ＺＩＫＶ Ｅタンパク質及びＺＩＫＶ－ＶＬＰへのハイブリドーマ結合の確認：
Ａｂｃａｍから受け取った全てのクローンを再試験し、間接ＥＬＩＳＡによって、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質及びＺＩＫＶ－ＶＬＰへの結合を確認した。
合計で４０枚の９６ウェルプレートを使用して、３４８０個のクローン（データ不図示）の総標的をスクリーニングした。３１１個のクローンは、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ結合について陽性であった一方、２６個のクローンは、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質結合について陽性であった。ここで使用したＺＩＫＶ－ＶＬＰ（Ｎａｔｉｖｅ Ａｎｔｉｇｅｎ）は、ＰｒＭ、Ｍ及びＥタンパク質を表す。
実施例２：抗ＺＩＫＶ抗体１０２－１、２４２－３、２８９－３、３０６－２、１１－３、７８－２、２７０－１２、１８１－４／３２９－２、及び２６０－３の配列
クローン１０２－１、２４２－３、２８９－３、３０６－２、１１－３、７８－２、２７０－１２、１８１－４及び２６０－３に遺伝子シーケンシングを施した。アミノ酸及び核酸配列の両方を決定した。表６は、６つのクローンの抗ＺＩＫＶ抗体の重鎖及び軽鎖、可変領域及びＣＤＲのアミノ酸を記載する。抗ＺＩＫＶ抗体の重鎖及び軽鎖及び可変領域に対応する核酸配列を表７に記載する。
Figure 0007463366000006
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・クローン１８１－４及び３２９－２は、同じタンパク質及び核酸配列を有する。
・表７の各核酸配列の下線付きセグメントは、シグナルペプチドをコードするリーダー配列である。
実施例３：抗ＺｉＫＶ抗体クローン１０２－１、２４２－３、２８９－３、３０６－２、１１－３、７８－２、２７０－１２、１８１－４、２６０－３、及び２７８－１１の特徴付け
デングとの交差反応性のためのハイブリドーマ上清のスクリーニング：
ハイブリドーマ上清に存在する抗体がＺＩＫＶに特異的であるかどうか決定するため、全てのマルチクローン及び／またはサブクローンを、不活化デングウイルス１（ＤＥＮＶ１）［Ｗｅｓｔ Ｐａｃｉｆｉｃ ７４（Ｍｉｃｒｏｂｉｘ）］；デングウイルス２（ＤＥＮＶ２）［１６６８１（Ｍｉｃｒｏｂｉｘ）］；デングウイルス３（ＤＥＮＶ３）［ＣＨ５３４８９（Ｍｉｃｒｏｂｉｘ）］；及びデングウイルス４（ＤＥＮＶ４）［ＴＶＰ－３６０（Ｍｉｃｒｏｂｉｘ）］に対して、間接ＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。生産プロセスの一部として、製造者によって、ＤＥＮＶ－１、３及び４は、ガンマ線照射で不活化し、ＤＥＮＶ２は、ホルマリンで不活化した。ＺＩＫＶ－ＶＬＰ（天然抗原）及び組換えＺＩＫＶ Ｅタンパク質（天然抗原）の両方は、陽性対照抗原として使用した。
簡潔に言えば、抗原は、使用前に、４℃で一晩、炭酸塩コーティング緩衝液（ｐＨ９．４）中の１μｇ／ｍＬ濃度で、Ｎｕｎｃ Ｐｏｌｙｓｏｒｐ ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした。貯蔵から除去した後、プレートをリン酸緩衝生理食塩水＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）で洗浄した。５％の無脂肪粉乳の遮断溶液を、室温で最低でも１時間、プレートに加え、非特異的結合を低下させた。プレートを洗浄し、未希釈ハイブリドーマ上清を、所定のレイアウトに従ってプレートに加えた。その後、プレートを３７℃で１～２時間インキュベートした。市販のウサギ抗ＺＩＫＶ Ｅタンパク質ｐＡｂ（ＩＢＴ）及びインハウス由来ウサギ抗デングｐＡｂは、陽性対照として使用した。インハウス陰性プールウサギ血清及びＰＢＳのみは、陰性対照として使用した。これらの対照は、同じプレート上で同時に行った。プレートをＰＢＳＴで再洗浄した。ヤギ由来ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗ウサギ西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，ロット番号Ｌ２４１６－Ｘ３２６Ｆ）を、５％のミルクブロック中で１：５，０００に希釈し、プレートに加えた。プレートを３７℃で１．５時間インキュベートした後、示したように再洗浄した。３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を加え、室温で１０分間インキュベートした。反応を１Ｎ塩酸で停止し、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＥｎＳｐｉｒｅを用いて、プレートを、４５０ｎｍ及び６３０ｎｍの吸光度でスキャンした。陽性結合カットオフスコアは、０．５Ａ ＯＤ読み取りで設定した。
最初に、３１１個のクローンを全てＤＥＮＶ－２に対して試験した。１００個を超えるクローンがＤＥＮＶ－２に交差反応性であった一方、残りは、いずれの交差反応性を示さなかった。最終的に、クローンのサブセットは、全てのデング血清型及びＺＩＫＶ Ｅタンパク質及びＺＩＫＶ－ＶＬＰに対して試験した（表８）。Ａｂｃａｍデータを参照として使用した。
Figure 0007463366000042
ハイブリドーマクローン１１－３、２７０－１２、２７８－１１、１０２－１、２４２－３、２８９－３、及び３０６－２は、ＺＩＫＶ－ＶＬＰに高特異的であり、デング血清型に交差反応しなかった。
中和活性に対するハイブリドーマ上清のスクリーニング：
ＴＣＩＤ５０に基づくマイクロ中和力価（ＭＮＴ）アッセイを使用して、９６ウェルプレート中のハイブリドーマ上清のウイルス中和抗体力価を検査した。ＴＣＩＤ５０は、５０％組織培養感染量を表す。簡潔に言えば、連続希釈したハイブリドーマ上清を１００ ＴＣＩＤ５０／ウェルのＰＲＶＡＢＣ５９ジカ生ウイルスと混合した後、ベロ細胞の単層に加え、エンドポイント力価の細胞変性効果（ＣＰＥ）の存在または不在について、プレートを感染５日後に観察した。
中和のため、ＴＣＩＤ５０ベースアッセイ及びＰＲＶＡＢＣ－５９ ＺＩＫＶを用いて、クローンのサブセットにＭＮＴを施した。３つのクローン、すなわち、１０２－１、２４２－３、及び２８９－３は、強い中和活性を示した（表９及び図１を参照されたい）。さらに３つのクローン、すなわち、２７０－１２、１８１－４／３２９－２、及び２６０－３もまた、強い中和活性を示した（図１を参照されたい）。
Figure 0007463366000043
要約すると、クローン１０２－１、２４２－３、２８９－３、２７０－１２、１８１－４／３２９－２、及び２６０－２は、強い中和活性を示した。クローン３０６－２及びＣ１０は、最も低い中和活性を示した（それぞれ、４３３．１０ｎｇ／ｍＬ及び３０５．８０ｎｇ／ｍＬ）。クローン１１－３、７８－２、及び４Ｇ２は、１０，０００ｎｇ／ｍＬの開始時に、中和活性を示さなかった。
抗原結合に対するハイブリドーマ上清のスクリーニング：
ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及びＺＩＫＶ Ｅタンパク質への結合について、上清を間接ＥＬＩＳＡによって試験した。全てのクローンは、ＺＩＫＶ－ＶＬＰへの良好な結合を示した（表１０）。
Figure 0007463366000044
クローン１０２－１、２４２－３、２８９－３、３０６－２、１１－３、７８～２、２７０－１２、１８１－４／３２９－２、及び２６０－３を、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及びＰＩＺＶへの結合に対して、商業的に入手可能な抗体４Ｇ２及びＣ１０（市販の抗デング抗体）と比較した。表１１及び／または図２を参照されたい。
Figure 0007463366000045
１０μｇ／ｍｌの各精製抗体を連続希釈し、抗原としてＺＩＫＶ－ＶＬＰまたはＰＩＺＶのいずれかによる間接ＥＬＩＳＡに使用した。吸光度を記録し、希釈に対してプロットし、シグモイド曲線を生成した。シグモイド曲線を使用して、ＩＣ５０値を記載されるように計算した（Ｋ．Ｓｔｅｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｆ８５０５（２０１６）。
クローン１０２－１、２４２－３、２８９－３、３０６－２、１１－３及び７８－２の結合活性は、商業的に入手可能な抗体４Ｇ２及びＣ１０を超えていた。これらの６つのクローンは、ＺＩＫＶ－ＶＬＰにより、ＰＩＺＶに高い親和性を有した。
親和性に対するハイブリドーマのスクリーニング：
ハイブリドーマ上清による精製ＺＩＫＶ－ＶＬＰ（天然抗原）の解離速度定数（ｋｏｆｆ）は、Ｏｃｔｅｔ ９６デバイス（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によってモニタリングした。簡潔に言えば、ランニング緩衝液（（０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０（ＰＢＳ－Ｔ））及びウサギＩｇＧで５倍に希釈したハイブリドーマ上清を、プロテインＡバイオセンサー（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）によって捕捉した。バイオセンサーを、３．３μｇ／ｍＬの会合用のＺＩＫＶ－ＶＬＰ溶液（１０分）に移した後、解離用のランニング緩衝液に移した。各ｍＡｂのｋｏｆｆは、Ｏｃｔｅｔ分析ソフトウェア（バージョン９．０ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて、１：１結合モデルによって計算した。
ｍＡｂの親和性を推定するため、ＺＩＫＶ－ＶＬＰとの結合に従う解離値（ｋｏｆｆ）を測定した。このアッセイを行うため、ＩｇＧ濃度は、ほとんどのハイブリドーマ試料において、ＩｇＧの低濃度により調整しなかった。ｋｏｆｆランニングで成功するために、ハイブリドーマ上清に存在する抗体は、より良いシグナルを得るために、プロテインＡバイオセンサーを飽和すべきである。さらに、ｋｏｆｆは、ＫＤ値（Ｍ）とは異なり、抗体濃度に依存しない。このアッセイでは、ＺＩＫＶ－ＶＬＰの濃度を一定に保った。興味深いことに、２６０個のクローンのうちの１９０個のクローンが、１×１０ｅ－７ｓ－１未満の低ｋｏｆｆを示した。クローン番号１０２－１、２４２－３、３０６－２、１１－３、及び７８－２は、１９０個のクローンのうちであった。
Figure 0007463366000046
エピトープビニングに対するハイブリドーマクローンのスクリーニング：
ＢＬＩ技術によって、抗体ライブラリーを特徴付けて、抗体ライブラリーを、特異的抗原上の異なるエピトープに結合するビンに分類することができる。この実験では、競合アッセイを適用して、ｍＡｂをエピトープビンに分類した（図３）。簡潔に言えば、ＺＩＫＶ－ＶＬＰをアミノプロピルシラン（ＡＰＳ）バイオセンサーにコーティングして、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡで遮断した。ビニング実行ごとに、表１２から選択された一次抗体を結合させて、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ結合部位を１０分間飽和させた（水平矢印）後、二次抗体に１０分間交差結合させた（垂直矢印）。各一次抗体に対する二次抗体の反応シグナル読み出しは、ＳＡＳ ＪＭＰ １３．１．０（ＳＡＳ，Ｃａｙ，ＮＣ，ＵＳＡ）を用いて、階層的クラスタリング（Ｗａｒｄ Ｍｅｔｈｏｄ）によってクラスタリングした。
サンドイッチＥＬＩＳＡ対のクローンを検査するため、競合アッセイを、Ｏｃｔｅｔを用いて行った（図４及び６）。クローン２４２－３及び２７０－１２は、クローン３０６－２と競合しなかった。
上記の観察に基づいて、クローン２４２－３または２７０－１２を３０６－２と組み合させて、捕捉及び検出に使用することができると決定した（図５）。
５つのハイブリドーマクローン、１０２－１、２４２－３、２７０－１２、２８９－３、３０６－２、及び１つの市販の抗デング抗体Ｃ１０を、エピトープビニングのために選択した（図６及び７）。１０２－１／２４２－３を含む１つのクラスター、及び２７０－１２及び２８９－３を含む別のクラスターを観察した（太線ボックスで囲まれる、図６）。３０６－２は、星座プロットで見られるように、他の抗体とは大きく異なった（図７）。
２つの透明なビンは、低中和クローン３０６－２と高中和クローンの間に観察することができる（図８）。中和クローンとＣ１０の間には微妙な違いがあった。ＪＭＰによるクラスタリング分析から、２つのサブビン１０２－１／２４２－３及び２８９－３／Ｃ１０が得られた。これらのエピトープビンは、その中和活性と相関していた。
加えて、１０２－１、１８１～４／３２９－２、２４２－３、２６０－３、２７０－１２、２８９－３、３０６－２、１１～３、及び７８～２、及び２つの市販の抗デング抗体Ｃ１０及び４Ｇ２を、エピトープビニングのために選択した（図９及び１０）。１０２－１／１８１～４／３２９－２／２４２－３／２６０－３／２７０－１２／２８９－３を含む１つのクラスターを観察した（太線ボックスで囲まれる、図９）。３０６－２、１１～３、及び７８～３は各々、星座プロットで見られるように、他の抗体とは大きく異なった（図１０）。
レポーターウイルス粒子（ＲＶＰ）アッセイによるハイブリドーマクローンのスクリーニング
選択されたトップハイブリドーマクローンは、ジカレポーターウイルス粒子（ＲＶＰ）アッセイによって、それらの中和活性について試験した。このアッセイでは、ジカＲＶＰを生ジカウイルスの代わりに使用して、中和抗体力価を決定した。ジカＲＶＰは、カプシド、エンベロープ、プレ膜及び膜タンパク質ＣｐｒＭＥを含む、野生型ビリオンの抗原決定基を保持する（Ｉｎｔｅｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）。ジカＲＶＰは、許容細胞が感染する際に、ウミシイタケルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する。抗体の最大半量有効濃度ＥＣ５０力価は、ウミシイタケルシフェラーゼとセレンテラジン基質の相互作用によってグロータイプの発光シグナルを生成する生物発光反応を用いて決定した。発光シグナルは、発光対応プレートリーダーを用いて測定した。血清の存在下における発光シグナルの低下は、中和を示す。
選択された４つのクローン１０２－１、２４２－３、２８９－３及び３０６－２にＲＶＰアッセイを施した。所定のＬＬＯＤは、Ｌｏｇ１０ＥＣ５０ ２．０６である。ＭＮＴアッセイによって決定された中和クローンは、ＲＶＰアッセイによって良好なＥＣ５０値を示した。低中和クローン（クローン３０６－２）は、ＭＮＴデータが予想した通り、ＲＶＰアッセイによっていずれのＥＣ５０値を示さなかった。陽性及び陰性対照は、予想した通りに行った（表１４を参照されたい）。クローン１０２－１、２４２－３及び２８９－３は、陰性対照を上回る中和活性を示した一方、クローン３０６－２は、いずれの中和活性を示さなかった。
Figure 0007463366000048
ＭＮＴ及びＲＶＰアッセイに両方により、モノクローナル抗体の中和ポテンシャルが確認された。
タンパク質特異的結合に対するハイブリドーマクローンのスクリーニング：
ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ Ｗｅｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）は、目的の抗体を用いて、プロセスサンプルから特定のタンパク質を検出することができるキャピラリーに基づく技術である。ハイブリドーマ上清のＺＩＫＶ－ＶＬＰへの結合特異性を決定するため、選択された上清に、Ｗｅｓシステムの製造者の指示を用いたＷｅｓ分析を施した。
クローン２８９－３を除く全てのサブクローンは、ＺＩＫＶ－ＶＬＰに結合する（図１１）。ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及び抗体の追加のＷｅｓ条件（還元及び変性、非還元及び変性）及び滴定は、ＺＩＫＶ－ＶＬＰに対して、サブクローン２８９－３に実行し（データ不図示）；それでも、それら追加の実行のどれも、ＺＩＫＶ－ＶＬＰへのいずれの結合を示さなかった。しかしながら、間接ＥＬＩＳＡによるサブクローン２８９－３は、表１０に示すように、ＺＩＫＶ－ＶＬＰへの結合を示すが、組換えＥタンパク質への結合を示さない。これは、サブクローン２８９－３が、ウイルス表面の立体配座構造に結合することが示唆され得る。
実施例４：組換えモノクローナル抗体の産生及び特徴付け
組換え抗体クローニング
選択されたサブクローン由来のハイブリドーマ細胞を収集し、溶解し、商業的に入手可能なポリ（Ａ）＋ＲＮＡ単離キットを用いて、ポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡを単離した。その後、ｃＤＮＡを、ＲＮＡ産物からＲＴ－ＰＣＲによって合成した。重鎖及び完全長カッパ軽鎖のウサギＩｇＧ可変領域は、遺伝子特異的プライマーを用いて、個々にＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ産物のゲル精製後、完全長カッパ軽鎖断片を哺乳動物軽鎖発現ベクターにクローニングした。重鎖では、可変断片を、標準的な分子生物学法を用いて、重鎖ベクターのウサギ重鎖定常領域にインフレーム融合した。重鎖及び軽鎖ＤＮＡ哺乳動物発現プラスミドの両方を、サンガーシーケンシング及び抗体発現のために調製した。
組換え抗体発現
組換えウサギモノクローナル抗体（ＲａｂＭＡｂ（登録商標））を発現するため、脂質仲介トランスフェクション試薬を用いて、軽鎖及び重鎖哺乳動物発現プラスミドを、指数関数的に増殖する２９３－６Ｅ細胞に同時トランスフェクトした。無血清培養上清は、遠心分離によって、トランスフェクションの５日後に収穫した。
抗体検証のため、小規模の２ｍｌトランスフェクションを行った。上清の抗原結合活性をＥＬＩＳＡによって確認し、さらなる試験をスケールアップ前に行った。抗体産生のため、選択されたクローンごとの重鎖及び軽鎖の組み合わせを、一過性発現及び精製のためにスケールアップした。
組換えクローンからモノクローナル抗体の産生及び精製：
収穫した培養培地を遠心分離して、細胞破片を除去し、分泌モノクローナル抗体を含有する透明な上清を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅタンパク質Ａカラムクロマトグラフィーを通じて精製した。溶出抗体をＰＢＳ緩衝液中で透析し、滅菌濾過し、ｐＨを７．４に調整した。精製抗体を連続希釈し、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及び組換えＺＩＫＶ Ｅタンパク質に対して、ＥＬＩＳＡで試験した。また、濃度決定は、ヤギ抗ウサギＩｇＧを用いて、ＯＤ４０５ｎｍでのＥＬＩＳＡによって行った。組換え抗体の純度及び完全性は、非還元及び還元条件下で、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって検証した（図１２）。２００μｌ及び約１ｍｇ／ｍＬ濃度のアリコートを調製した。組換えウサギモノクローナル抗体生成は、全てのクローンについておよそ３ヵ月で達成された。ＲａｂＭＡｂ（登録商標）開発の組換え段階には、クローニング、発現、並びにスケールアップ及び精製前の検証を含んだ。
Figure 0007463366000049
５つの組換えクローン：２４２－３、３０６－２、１０２－１、２７０－１２及び２８９－３を生成し、精製した。合計で１００ｍＬの培養を生成した。また、組換えクローン１１－３（１０ｍｌ）及び７８－２（２１ｍｌ）を生成し、精製した。モノクローナル抗体は、親和性クロマトグラフィーによって精製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって純度を試験し（図１２及び１３）、ＥＬＩＳＡによって定量化した。５～１５ｍｇの抗体が得られた。これらの抗体を中和活性及び交差反応性について試験した（表１６）。
Figure 0007463366000050
Ｗｅｓを用いた精製ｍＡｂのウェスタンブロット分析：
ウェスタンブロット分析（Ｗｅｓシステムを用いて）は、精製ｍＡｂに対して、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及びジカＰＲＶＡＢＣ５９生ウイルスを用いて行った（図１３）。２８９－３を除く全てのｍＡｂは、ＺＩＫＶ－ＶＬＰ及び生ＺＩＫＶの両方のＺＩＫＶ Ｅタンパク質に結合した。したがって、ＥＬＩＳＡデータ（表１６）に基づいて、２８９－３ ｍＡｂは、立体配座的にＺＩＫＶ－ＶＬＰにのみ結合し、非常に強いＭＮＴ力価が得られることで、２８９－３ ｍＡｂは、ウェスタンブロット試薬または条件に感受性があり得るＥタンパク質の２つ以上のドメインを伴う複合体エピトープに結合することが考えられる。この仮説を真に確認するため、本文書において以下に述べるように、このｍＡｂ上でエピトープマッピングを行った。
クローンのエピトープマッピング
クローンのエピトープマッピングは、それらのアラニンスキャニング変異誘発ライブラリーを用いて、Ｉｎｔｅｇｒａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｉｎｃ．で実施した。抗体結合を担う重要なアミノ酸残基は、アラニンスキャニング変異誘発ライブラリーを用いて決定した。
簡潔に言えば、アラニンスキャニングライブラリーにおける、Ｍａｂの各試験Ｆａｂの、標的タンパク質、すなわち、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質の各変異誘発クローンへの結合は、ハイスループットフローサイトメトリーによって二重に決定した。１点ごとに、バックグラウンド蛍光を生データから差し引いた後、ＷＴ標的タンパク質とのＦａｂ反応性に正規化した。変異誘発クローンごとに、平均結合値を（対照反応性によって表される）発現の関数としてプロットした。予備の一次必須クローンを同定するため、対照ＭＡｂまたはＦａｂへのＷＴ結合の＞７０～８０％、及び、試験ＦａｂへのＷＴ結合の＜２０～３０％の閾値を適用した。一次必須クローンと比較して、Ｆａｂに僅かにより高い結合を有する二次クローンを同定したが、設定閾値を満たさなかった。これらの二次クローンは、必須残基への結合活性及び近接が低下しており、変異残基が抗体エピトープの一部であり得ることを示唆している。
結合特異性の概要を表１７に詳述する。結果は、ほとんどの抗体がＺＩＫＶ Ｅタンパク質のドメインＩＩＩに結合したことを示した。
その突然変異が特定の抗体への反応性（１０％未満のＷＴ）が最も低くなった必須残基を太字かつ下線を引いて強調する。
これらは、側鎖が、抗体エピトープ相互作用へのエネルギー寄与が最も高いアミノ酸を表す。
図１４では、必須残基（緑色球体）は、標的タンパク質の結晶構造で視覚化した（ＰＤＢ ＩＤ：５ＩＲＥ，Ｓｉｒｏｈｉ ｅｔ ａｌ，２０１６）。結合に寄与し得る二次残基（灰色球体）も示す。赤色：ドメインＩ、黄色：ドメインＩＩ、青色：ドメインＩＩ。
参照による組み込み
本願の全体を通して引用された全ての引用文献、特許、係属特許出願及び公開特許、配列表、及び受託番号の内容は、それら全体を参照により明示的に本明細書に組み込まれる。
等価物
当業者は、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態と等価な多数の等価物を認識するか、またはルーチンに過ぎない実験作業を用いて確認することができる。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されるように意図される。
本発明の実施態様
（項目１）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目４または５に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目７に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目７または８に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１０）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１１）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目１０に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１２）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目１０または１１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１３）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１４）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目１３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１５）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目１３または１４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１６）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１７）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目１６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１８）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目１６または１７に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目１９）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２０）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目１９に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２１）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目１９または２０に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２２）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含
む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２３）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２を含む軽鎖可変領域を含む、項目２２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２４）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変領域を含む、項目２２または２３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２５）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２６）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２７）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２８）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目２９）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３０）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号５９のアミノ酸配列を
含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３１）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３２）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、及び配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３３）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２に記載のアミノ酸配列または配列番号２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号７に記載のアミノ酸配列または配列番号７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３４）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３５）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１に記載のアミノ酸配列または配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列または配列番号６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３６）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３７）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２に記載のアミノ酸配列または配列番号１２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７に記載のアミノ酸配列または配列番号１７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３８）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２の
アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目３９）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１１に記載のアミノ酸配列または配列番号１１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列または配列番号１６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４０）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４１）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２２に記載のアミノ酸配列または配列番号２２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２７に記載のアミノ酸配列または配列番号２７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４２）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４３）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２１に記載のアミノ酸配列または配列番号２１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列または配列番号２６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４４）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４５）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３２に記載のアミノ酸配列または配列番号３２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３７に記載のアミノ酸配列または配列番号３７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４６）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４７）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３１に記載のアミノ酸配列または配列番号３１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号３６に記載のアミノ酸配列または配列番号３６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４８）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目４９）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４２に記載のアミノ酸配列または配列番号４２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４７に記載のアミノ酸配列または配列番号４７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５０）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５１）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４１に記載のアミノ酸配列または配列番号４１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号４６に記載のアミノ酸配列または配列番号４６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５２）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５３）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５２に記載のアミノ酸配列または配列番号５２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５７に記載のアミノ酸配列または配列番号５７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５４）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５５）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５１に
記載のアミノ酸配列または配列番号５１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号５６に記載のアミノ酸配列または配列番号５６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５６）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５７）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８６に記載のアミノ酸配列または配列番号８６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号９１に記載のアミノ酸配列または配列番号９１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５８）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号９１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目５９）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８５に記載のアミノ酸配列または配列番号８５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号９０に記載のアミノ酸配列または配列番号９０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６０）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６１）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９６に記載のアミノ酸配列または配列番号９６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０１に記載のアミノ酸配列または配列番号１０１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６２）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６３）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９５に記載のアミノ酸配列または配列番号９５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性
を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１００に記載のアミノ酸配列または配列番号１００に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６４）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号９５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１００に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６５）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列または配列番号１０６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１１に記載のアミノ酸配列または配列番号１１１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６６）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６７）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０５に記載のアミノ酸配列または配列番号１０５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１１０に記載のアミノ酸配列または配列番号１１０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６８）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１０５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１１０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目６９）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２９に記載のアミノ酸配列または配列番号１２９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３４に記載のアミノ酸配列または配列番号１３４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７０）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２９に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、及び配列番号１３４に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７１）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列または配列番号１２８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列または配列番号１３３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、
９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７２）
ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１３３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７３）
先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分として、ＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７４）
配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記エピトープが、配列番号１２７に存在するＴ３０９、Ｔ３３５、Ｇ３３７、及びＳ３６８のアミノ酸を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７５）
配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記エピトープが、配列番号１２７に存在するＴ３６９及びＥ３７０のアミノ酸を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７６）
配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記エピトープが、配列番号１２７に存在するＥ１６２、Ｇ１８１、Ｇ１８２、Ｋ３０１、及びＧ３０２のアミノ酸を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７７）
配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記エピトープが、配列番号１２７に存在するＩ３１７、Ｔ３９７、Ｈ３９８、及びＨ３９９のアミノ酸を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７８）
配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＺＩＫＶのＥタンパク質上のエピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記エピトープが、配列番号１２７に存在するＴ３３５、Ｓ３６８、Ｔ３６９、及びＥ３７０のアミノ酸を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目７９）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、１つ以上のＺＩＫＶ株によって引き起こされるウイルス感染を中和する、項目１～９、１９～２１、２５～２７、３１、３３～４４、５７～６８、７３～７６及び７８のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８０）
前記１つ以上のＺＩＫＶ株が、ジカＳＰＨ（ブラジル２０１５、ＫＵ３２１６３９．１）、ブラジル－ＺＫＶ（ブラジル２０１５、ＫＵ４９７５５５．１）、ＰＲＶＡＢＣ５９（プエルトリコ２０１５、ＫＵ５０１２１５．１）、ハイチ１２２５（ハイチ２０１４、ＫＵ５０９９９８．１）、ナタールＲＧＮ（ブラジル、ＫＵ５２７０６８．１）、ＳＶ０１２７～１４（タイ２０１４、ＫＵ６８１０８１．３）、ＣＰＣ－０７４０（フィリピン２０１２、ＫＵ６８１０８２．３）、ＳＳＡＢＲ１（ブラジル、ＫＵ７０７８２６．１）、ＶＥ＿Ｇａｎｘｉａｎ（中国、ＫＵ７４４６９３．１）、ＭＲ７６６－ＮＩＩＤ（ウガンダ、ＬＣ００２５２０．１）、ＭＲ７６６（ウガンダ１９４７、ＡＹ６３２５３５．２）、及びＨ／ＰＦ（フランス領ポリネシア２０１３、ＫＪ７７６７９１．１）からなる群
から選択される、項目７９に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８１）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、約１０ －９ Ｍ以下のＩＣ ５０ でＺＩＫＶをインビトロで中和する、項目７９または８０に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８２）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ＺＩＫＶ感染動物においてインビボでの防御作用を有する、項目７９～８１のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８３）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ＺＩＫＶ感染の抗体依存性増強（ＡＤＥ）に寄与しない、項目７９～８２のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８４）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、デングウイルスに結合しない、項目１～１５、１９～２９、３１～５２及び５７～８３のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８５）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分である、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８６）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合部分である、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８７）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ヒト抗体またはその抗原結合部分である、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８８）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ヒト化抗体またはその抗原結合部分である、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目８９）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ＩｇＧアイソタイプ分子のものである、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９０）
前記ＩｇＧアイソタイプが、ＩｇＧ １ 、ＩｇＧ ２ 、ＩｇＧ ３ 、またはＩｇＧ ４ である、項目８９に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９１）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、１００ｎＭ以下の解離定数（Ｋ Ｄ ）でＺＩＫＶに結合する、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９２）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、精製抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’） ２ 、ＦｖまたはｓｃＦｖである、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９３）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ラベルで標識される、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９４）
前記標識が、ビオチン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、Ａｌｅｘａ色素、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ、ＤｙＬｉｇｈｔ ｆｌｕｏｒ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、及びＲ－フィコエリトリンからなる群から選択される、項目９３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９５）
前記標識が、ビオチンまたは西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）である、項目９４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９６）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、多重特異性抗体である、先行項目のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９７）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、二重特異性抗体である、項目９６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分。
（項目９８）
項目１～９、１９～２１、２５～２７、３１、３３～４４、５７～６８、７３～７６及び７８～９７のいずれか１項に記載の少なくとも１つの単離された抗体またはその抗原結合部分、及び薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
（項目９９）
前記組成物が、凍結乾燥組成物である、項目９８に記載の医薬組成物。
（項目１００）
前記組成物が、液体組成物である、項目９８に記載の医薬組成物。
（項目１０１）
前記組成物が、凍結される、項目９８に記載の医薬組成物。
（項目１０２）
前記組成物が、－６５℃以下の温度で凍結される、項目１０１に記載の医薬組成物。
（項目１０３）
前記医薬組成物が、単回用量製品として提供される、項目９８～１０２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
（項目１０４）
項目１００または１０３に記載の医薬組成物を含む、注射器。
（項目１０５）
項目１～９２のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子。
（項目１０６）
配列番号６２の核酸配列または配列番号６２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６４の核酸配列または配列番号６４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１０７）
配列番号６１の核酸配列または配列番号６１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号６３の核酸配列または配列番号６３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１０８）
配列番号６６の核酸配列または配列番号６６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号６８の核酸配列または配列番号６８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１０９）
配列番号６５の核酸配列または配列番号６５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号６７の核酸配列または配列番号６７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１０）
配列番号７０の核酸配列または配列番号７０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７２の核酸配列または配列番号７２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１１）
配列番号６９の核酸配列または配列番号６９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号７１の核酸配列または配列番号７１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１２）
配列番号７４の核酸配列または配列番号７４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７６の核酸配列または配列番号７６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１３）
配列番号７３の核酸配列または配列番号７３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号７５の核酸配列または配列番号７５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１４）
配列番号７８の核酸配列または配列番号７８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８０の核酸配列または配列番号８０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１５）
配列番号７７の核酸配列または配列番号７７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号７９の核酸配列または配列番号７９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１６）
配列番号８２の核酸配列または配列番号８２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号８４の核酸配列または配列番号８４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１７）
配列番号８１の核酸配列または配列番号８１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号８３の核酸配列または配列番号８３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１８）
配列番号１１６の核酸配列または配列番号１１６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１１８の核酸配列または配列番号１１８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１１９）
配列番号１１５の核酸配列または配列番号１１５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１１７の核酸配列または配列番号１１７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１２０）
配列番号１２０の核酸配列または配列番号１２０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２２の核酸配列または配列番号１２２に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１２１）
配列番号１１９の核酸配列または配列番号１１９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１２１の核酸配列または配列番号１２１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１２２）
配列番号１２４の核酸配列または配列番号１２４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６の核酸配列または配列番号１２６に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１２３）
配列番号１２３の核酸配列または配列番号１２３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１２５の核酸配列または配列番号１２５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１２４）
配列番号１３９の核酸配列または配列番号１３９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１４１の核酸配列または配列番号１４１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１２５）
配列番号１３８の核酸配列または配列番号１３８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む重鎖、及び配列番号１４０の核酸配列または配列番号１４０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む抗体をコードする、単離された核酸分子。
（項目１２６）
項目１０５～１２５のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、ベクター。
（項目１２７）
項目１０５～１２５のいずれか１項に記載の核酸分子または項目１２６に記載のベクターを発現する、単離された細胞。
（項目１２８）
項目の１～９７いずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合部分、及び使用説明書を含む、キット。
（項目１２９）
感染性ＺＩＫＶの中和方法であって、
感染性ＺＩＫＶに感染した細胞を、項目１～９、１９～２１、２５～２７、３１、３３～４４、５７～６８、７３～７６及び７８～９７のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分に暴露することを含み、
前記暴露することが、ウイルス感染または細胞死から前記細胞の防御強化をもたらす、前記方法。
（項目１３０）
前記防御強化が、前記単離された抗体またはその抗原結合部分を単独で使用する場合、または少なくとも１つの追加の治療剤または抗ＺＩＫＶ治療モダリティと組み合わせて使用する場合に観察される、項目１２９に記載の方法。
（項目１３１）
前記追加の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬、前記感染性ＺＩＫＶに対する異なる抗体、前記感染性ＺＩＫＶ用のワクチン、免疫調節薬、及びインターフェロンからなる群から選択される、項目１３０に記載の方法。
（項目１３２）
前記追加の治療剤が、コルチコステロイド及び非ステロイド系抗炎症薬からなる群から選択される、項目１３１に記載の方法。
（項目１３３）
ＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状を予防、治療もしくは寛解させるか、またはＺＩＫＶ感染の少なくとも１つの症状の頻度もしくは重症度を低下させる方法であって、それを必要とする対象に、有効量の項目１～９、１９～２１、２５～２７、３１、３３～４４、５７～６８、７３～７６及び７８～９７のいずれか１項に記載の少なくとも１つの単離された抗体またはその抗原結合部分、または項目９８～１０３のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
（項目１３４）
前記少なくとも１つの症状が、発熱、頭痛、関節痛、筋肉痛及び斑状丘疹性発疹からなる群から選択される、項目１３３に記載の方法。
（項目１３５）
前記それを必要とする対象が、ＺＩＫＶ感染の曝露についてのリスク、またはＺＩＫＶ感染を受けるリスクにあり、前記対象が、ＺＩＫＶへ曝露された、またはＺＩＫＶを保有していると疑われる蚊に刺された妊婦、ＺＩＫＶが大流行している地域に住んでいる、またはＺＩＫＶが大流行している地域を訪れており、妊娠中とみなされている女性、免疫不全容態の個人、ＺＩＫＶを保有している人へ曝露されたと疑われる人、ＺＩＫＶ感染した個人と物理的に接触しているもしくは物理的に緊密な人、病院職員、医薬研究者、ＺＩＫＶ感染した患者が治療された病院施設もしくは研究所を清掃する責任のあるメンテナンス業者、ＺＩＫＶが大流行していることが知られているもしくは大流行していると疑われる地域もしくは国を訪れたもしくは訪れることを計画している個人、またはＺＩＫＶを保有している蚊を有していることが知られている国からなる群から選択される、項目１３３または１３４に記載の方法。
（項目１３６）
妊婦の胎児にＺＩＫＶ感染を伝播させる尤度を低下させる方法、及び／または男性生殖器官への伝播の予防方法であって、
それを必要とする対象に、有効量の項目１～９、１９～２１、２５～２７、３１、３３～４４、５７～６８、７３～７６及び７８～９７のいずれか１項に記載の少なくとも１つの単離された抗体または抗原結合部分、または項目９８～１０３のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
（項目１３７）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分、または前記医薬組成物が、前記それを必要とする対象へ予防的または治療的に投与される、項目１３６に記載の方法。
（項目１３８）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分、または前記医薬組成物が、第２の治療剤との組み合わせで投与され、前記第２の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬、ＺＩＫＶに対する異なる抗体、ＺＩＫＶ用のワクチン、インターフェロン及び他の免疫調節薬からなる群から選択される、項目１２９～１３７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３９）
前記抗炎症薬が、コルチコステロイド及び非ステロイド系抗炎症薬から選択される、項目１３８に記載の方法。
（項目１４０）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分、または前記医薬組成物が、皮下に、静脈内に、皮内に、筋肉内に、鼻腔内に、または経口で投与される、項目１２９～１３９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４１）
前記有効量の前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、７５０ｍｇを超えない、好ましくは、５００ｍｇを超えない、より好ましくは、２５０ｍｇを超えない、及びさらにより好ましくは、１００ｍｇを超えない、項目１２９～１４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４２）
前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、約０．００１～約６０ｍｇ／ｋｇ体重の（単回）用量で投与される、項目１２９～１４０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４３）
前記（単回）用量が、約０．００１～約１、約１～約５、約５～約１０、約１０～約２０、または約２０～約６０ｍｇ／ｋｇ体重である、項目１４２に記載の方法。
（項目１４４）
対象におけるＺＩＫＶ感染のインビトロ診断方法であって、
（ｉ）対象から単離試料を、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質、ＺＩＫＶ Ｅタンパク質、ＶＬＰ、ウイルスまたは不活化ウイルスでコーティングしたプレートと接触させて、前記プレート上の前記試料を一定期間インキュベートすること；
（ｉｉ）工程（ｉ）において前記プレート上でインキュベートされた前記試料を、項目１～９２のいずれか１項に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分と接触させて、一定期間さらにインキュベートすること；及び
（ｉｉｉ）前記単離された抗体またはその抗原結合部分の前記プレートへの結合の阻害を決定することであって、前記単離された抗体またはその抗原結合部分の前記プレートへの結合の阻害は、前記試料における抗ＺＩＫＶ抗体の存在を反映し、前記試料における前記抗ＺＩＫＶ抗体の存在は、前記対象におけるＺＩＫＶ感染を示すことによって、前記対象におけるＺＩＫＶ感染を診断する、前記決定すること、
を含む、前記方法。
（項目１４５）
前記試料が、血液、唾液及び尿からなる群から選択される、項目１４４に記載の方法。
（項目１４６）
前記試料は、血液である、項目１４５に記載の方法。
（項目１４７）
前記試料は、血漿または血清である、項目１４６に記載の方法。
（項目１４８）
工程（ｉｉ）で加えた前記単離された抗体またはその抗原結合部分が、ラベルで標識される、項目１４４～１４７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４９）
前記標識が、ビオチン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、Ａｌｅｘａ色素、ＦＩＴＣ、ＴＲＩＴＣ、ＤｙＬｉｇｈｔ ｆｌｕｏｒ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、及びＲ－フィコエリトリンからなる群から選択される、項目１４８に記載の方法。
（項目１５０）
前記標識が、ビオチンまたは西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）である、項目１４９に記載の方法。
（項目１５１）
前記対象から単離された前記試料が、例えば、１：５～１：５０、好ましくは、１：５～１：２５、より好ましくは、１：１０に希釈される、項目１４４～１５０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５２）
工程（ｉ）におけるインキュベーションの前記一定期間が、少なくとも５分、好ましくは、少なくとも１５分、より好ましくは、少なくとも３０分、さらにより好ましくは、少なくとも４５分、及び最も好ましくは、少なくとも６０分である、項目１４４～１５１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５３）
工程（ｉｉｉ）におけるさらなるインキュベーションの前記一定期間が、少なくとも１分、好ましくは、少なくとも３分、より好ましくは、少なくとも５分、さらにより好ましくは、少なくとも１０分及び最も好ましくは、少なくとも１５分である、項目１４４～１５２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５４）
試験抗ＺＩＫＶ抗体の効力／濃度の決定方法であって、
（ａ）プレートのウェルをＰＩＺＶで被覆すること；
（ｂ）前記ウェル上にコーティングした前記ＰＩＺＶを、試験抗体の複数の溶液のうちの１つでインキュベートすることであって、前記試験抗体の前記複数の溶液は、前記試験抗体の濃縮溶液の連続希釈によって調製される、前記インキュベートすること、
（ｃ）前記ＰＩＺＶに結合する前記試験抗体を、二次抗体でインキュベートすることであって、前記二次抗体の前記単離された抗体への結合は、シグナルを生成する、前記インキュベートすること、
（ｄ）前記シグナルを検出すること、
（ｅ）工程（ｂ）で調製された前記複数の溶液の残りで工程（ａ）～（ｄ）を繰り返すこと；及び
（ｆ）前記二次抗体のシグナルによる希釈曲線を、工程（ｂ）で調製された前記複数の溶液の各々の濃度に対してプロットすることであって、前記希釈曲線のＩＣ ５０ は、前記試験抗体の効力を示す、前記プロットすること、
を含む、前記方法。
（項目１５５）
試験ＰＩＺＶの効力／濃度の決定方法であって、
（ａ）プレートのウェルを、試験ＰＩＺＶ上の第１のエピトープに結合して、前記試験ＰＩＺＶを捕捉する第１の抗ＺＩＫＶ抗体で被覆すること；
（ｂ）前記被覆ウェルを前記試験ＰＩＺＶでインキュベートすること；
（ｃ）前記被覆ウェルを、前記試験ＰＩＶＺ上の第２のエピトープに結合する第２の抗ＺＩＫＶ抗体の複数の溶液のうちの１つでさらにインキュベートすることであって、前記第２の抗ＺＩＫＶ抗体の前記複数の溶液は、前記第２の抗ＺＩＫＶ抗体の濃縮溶液の連続希釈によって調製される、前記インキュベートすること、
（ｄ）前記被覆ウェルを、酵素またはレポーターにコンジュゲートした二次抗体でさらにインキュベートすることであって、前記二次抗体の前記第２の抗ＺＩＫＶ抗体への結合は、シグナルを生成する、前記インキュベートすること、
（ｅ）前記シグナルを検出すること、
（ｆ）工程（ｃ）で調製された前記第２の抗ＺＩＫＶ抗体の前記複数の溶液の残りで工程（ａ）～（ｅ）を繰り返すこと、及び
（ｇ）前記二次抗ＺＩＫＶ抗体のシグナルによる希釈曲線を、工程（ｃ）で調製された前記第２の抗ＺＩＫＶ抗体の前記複数の溶液の各々の濃度に対してプロットすることであって、前記希釈曲線のＩＣ ５０ は、前記試験ＰＩＺＶの効力を示し、
前記第１の抗ＺＩＫＶ抗体及び前記第２の抗ＺＩＫＶ抗体のうちの少なくとも１つは、項目１～９、１９～２１、２５～２７、３１、３３～４４、５７～６８、７３～７６及び７８のいずれか１項に記載の単離された抗体であり、前記第１のエピトープは、前記第２のエピトープと重複しない、前記プロットすること
を含む、前記方法。

Claims (18)

  1. ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  2. ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  3. ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  4. ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  5. ＺＩＫＶに結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変領域、並びに配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  6. 請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  7. 請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  8. 請求項２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  9. 請求項８に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  10. 請求項３に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  11. 請求項１０に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  12. 請求項４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  13. 請求項１２に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４６に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  14. 請求項５に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８６に記載のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号９１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  15. 請求項１４に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号８５に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９０に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離された抗体またはその抗原結合部分。
  16. 抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をコードする単離された核酸分子であって、
    配列番号６２の核酸配列及び配列番号６４の核酸配列、または
    配列番号６６の核酸配列及び配列番号６８の核酸配列、または
    配列番号７４の核酸配列及び配列番号７６の核酸配列、または
    配列番号７８の核酸配列及び配列番号８０の核酸配列、または
    配列番号１１６の核酸配列及び配列番号１１８の核酸配列
    を含む、前記単離された核酸分子。
  17. 抗体の重鎖及び軽鎖をコードする単離された核酸分子であって、
    配列番号６１の核酸配列及び配列番号６３の核酸配列、または
    配列番号６５の核酸配列及び配列番号６７の核酸配列、または
    配列番号７３の核酸配列及び配列番号７５の核酸配列、または
    配列番号７７の核酸配列及び配列番号７９の核酸配列、または
    配列番号１１５の核酸配列及び配列番号１１７の核酸配列
    を含む、前記単離された核酸分子。
  18. 請求項１６または１７に記載の核酸分子または
    請求項１６または１７に記載の核酸分子を含むベクター
    を発現する、単離された細胞。

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