JP2022543669A - 新規抗原結合分子フォーマット - Google Patents

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Abstract

非天然構成のＦａｂドメインを含む抗原結合分子（ＡＢＭ）、ＡＢＭおよび細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤を含むＡＢＭコンジュゲート、ＡＢＭおよびＡＢＭコンジュゲートを含有する薬学的組成物、ＡＢＭを使用する方法、がんを治療するためのＡＢＭコンジュゲートおよび薬学的組成物、ＡＢＭをコードする核酸、ＡＢＭを発現するように操作された細胞、ならびにＡＢＭを産生する方法。【選択図】図１Ｂ

Description

１．関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年８月８日に出願された、米国仮特許出願第６２／８８４，４９６号、および２０２０年７月１０日に出願された同第６３／０５０，４８３号の優先権を主張し、その各々の内容は、その参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
２．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年８月６日に作成された、当該ＡＳＣＩＩコピーは、ＲＧＮ－００１ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔという名前であり、サイズは２５，３５８バイトである。
３．背景技術
ほとんどの自然に発生する抗体分子は、一般に、２つのいわゆる軽鎖ポリペプチド（軽鎖）および２つのいわゆる重鎖ポリペプチド（重鎖）を含む。重鎖および軽鎖ポリペプチドの各々は、抗原と相互作用することができる結合領域を含む可変ドメイン（可変領域）（一般にポリペプチド鎖のアミノ末端部分）を含有する。重鎖および軽鎖ポリペプチドの各々は、定常領域（一般にカルボキシル末端部分）を含む。
細胞または細胞株の単一クローンによって産生される、組換えモノクローナル抗体は、過去２０年間に様々な異なる疾患の治療のための非常に成功したクラスの生物学的薬物として出現した。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、重要なクラスの生物療法製品であり、それらは、多くの生命を脅かす慢性疾患の治療において卓越した成功を収めている。
親和性および／または親和力の増加は、エピトープが抗体の抗原結合部分、例えば、Ｆａｂドメインによってアクセス可能である場合に発生する。しかしながら、従来の抗体フォーマットの形状は、特に標的のサイズが小さい場合、または望ましいエピトープ（複数の標的分子上のものを含む）が比較的に物理的近接にある場合、もしくは物理的に近接させることが望ましい場合、単一の標的分子上の複数のエピトープを認識する抗体の能力を限定する。よって、代替の抗体－抗原結合形状を通して、親和性、親和力、または抗体機能を改善し得る結合分子を生成のための効率的なプラットフォームが有用であろう。
４．概要
本開示は、非天然構成に少なくとも２つのＦａｂドメインを含有する抗原結合分子（「ＡＢＭ」）を提供する。ＡＢＭは、少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、各々は、Ｆｃドメインおよび少なくとも２つのＦａｂドメインの１つの成分を含む。本開示の例示的なＡＢＭは、図１Ｂ、２Ｂ、および３Ａ～３Ｄに示される。
Ｆｃドメインおよび任意の会合ポリペプチド鎖を含む各ポリペプチド鎖は、本明細書では「半抗体」と呼ばれる。本開示の典型的なＡＢＭは、それらのＦｃドメインを通して会合した２つの半抗体を含む。会合したＦｃドメインは、一緒にＦｃ領域を形成する。Ｆｃ領域に加えて、本開示の典型的なＡＢＭは、各半抗体において非天然構成に少なくとも１つのＦａｂドメインを含む。非天然構成におけるＦａｂドメインのうちの少なくとも１つまたは両方のそのようなＦａｂドメインは、標的分子に結合する。「天然構成」または「天然免疫グロブリン構成」とは、自然に発生するＩｇＧ抗体における抗体ドメインの構成を意味する。添付の概略図では、ＶＨドメインは、数字（１）で標識され、ＣＨ１ドメインは、数字（２）で標識され、ヒンジドメインは、数字（３）で標識され、ＣＨ２ドメインは、数字（４）で標識され、ＣＨ３ドメインは、数字（５）で標識され、ＶＬドメインは、数字（６）で標識され、ＣＬドメインは、数字（７）で標識され、ヒンジドメインではないリンカーは、数字（８）で標識される。よって、添付の図面における標識への参照によって、天然免疫グロブリン構成は、本質的に以下からなる：
・本質的に、ＮからＣ末端配向で、ＶＨドメイン（１）、ＣＨ１ドメイン（２）、ジスルフィド架橋を介して第２の（重鎖）ポリペプチドのヒンジ領域に連結されたヒンジ領域（３）、ＣＨ２ドメイン（４）、およびＣＨ３ドメイン（５）からなる、第１の（重鎖）ポリペプチド、
・本質的に、ＮからＣ末端配向で、ＶＨドメイン（１）、ＣＨ１ドメイン（２）、ジスルフィド架橋を介して第１の（重鎖）ポリペプチドのヒンジ領域に連結されたヒンジ領域（３）、ＣＨ２ドメイン（４）、およびＣＨ３ドメイン（５）からなる、第２の（重鎖）ポリペプチド、
・本質的に、ＮからＣ末端配向で、第１の（重鎖）ポリペプチドに会合した、ＶＬドメイン（６）およびＣＬドメイン（７）からなる、第３の（軽鎖）ポリペプチド、ならびに
・本質的に、ＮからＣ末端配向で、第２の（重鎖）ポリペプチドに会合した、ＶＬドメイン（６）およびＣＬドメイン（７）からなる、第４の（軽鎖）ポリペプチド。
「天然構成」または「天然免疫グロブリン構成」への参照は、用語を野生型抗体配列または単一特異性抗体のみに限定することを意図するものではない。むしろ、図１Ａおよび図２Ａに示されるように、フォーマットは、単一特異性抗体（図１Ａ）またはバリアント配列を有する従来の二重特異性抗体（図２Ｂ）の両方に適用することができる。図１Ａの単一特異性抗体フォーマットと図２Ａの二重特異性抗体フォーマットとの間の基本的な相違は、それらの構成ではなく、（例えば、セクション６．２．７．２に記載されるように）Ｆｃヘテロダイマーにおける使用であり、各Ｆｃ領域は、異なるＶＨドメインに連結し、異なるエピトープへの結合を可能にする。明瞭さのために、本明細書で使用される場合、「二重特異性」という用語は、同じ抗原もしくは標的分子上、または異なる抗原もしくは標的分子上にかかわらず、任意の２つの異なるエピトープへの結合を指す。
本開示のＡＢＭは、小可溶性標的分子、例えば、サイトカインまたはケモカインへの結合に特に有用であり、例えば、受容体などの結合パートナーへの標的分子の結合を遮断することによって、標的分子の活性のアンタゴナイズにおける用途を見出す。理論によって拘束されることなく、本開示の結合フォーマットは、同じ少なくとも２つのＦａｂドメインを含む天然免疫グロブリンよりも大きな親和性および／または親和力での標的分子への結合を可能にすると考えられる。
Figure 2022543669000002
これらのＡＢＭフォーマットは、以下により詳しく記載される。
第１の態様では、本開示のＡＢＭは、
・ＮからＣ末端配向で
－任意のヒンジドメイン、
－第１のＦｃドメイン、および
－第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）に会合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ）を含む第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインを含む、第１の半抗体と、
・ＮからＣ末端配向で
－任意のヒンジドメイン、
－第２のＦｃドメイン、および
－第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂドメイン（「Ｆａｂ２」）を含む、第２の半抗体と、を含み、
第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインは、互いに会合されてＦｃ領域を形成し、任意のヒンジドメインは、存在する場合、ジスルフィド架橋を通して互いに会合され得る。
一般に本明細書でＡＢＭフォーマット「Ａ」（「フォーマットＡ」）と呼ばれ、本明細書で「Ｆｃ－Ｆａｂ」フォーマットと呼ばれることがある、このタイプのＡＢＭの２つの実施形態は、図１Ｂおよび図２Ｂ、ならびに図１３Ａ、図１３Ｂ、および図１３Ｃに示されるそれらの変形において例示される。したがって、本開示は、
・ＮからＣ末端配向で
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含むＦｃドメイン、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－リンカー（８）、ならびに
－Ｆａｂ１ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ１ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ１ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ１ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ１ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ１ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分を含む、第１のポリペプチドと、
・ＮからＣ末端配向で
－ジスルフィド結合を介して第１のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第２のＦｃドメイン、
－ジスルフィド結合を介して第１のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－リンカー（８）、ならびに
－Ｆａｂ２ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ２ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ２ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ２ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ２ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ２ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分を含む、第２のポリペプチドと、を含み、
第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインが、互いに会合してＦｃ領域を形成する、図１Ｂおよび図２Ｂに示されるフォーマットＡ ＡＢＭを提供する。
図１Ｂの実施形態では、両方の半抗体は、同一であり、Ｆｃホモダイマーを形成するＦｃドメインを含み、得られるＡＢＭは、単一特異性である。図２Ｂの実施形態では、ＡＢＭは、Ｆｃヘテロダイマーを含み、異なるＦａｂ１およびＦａｂ２ ＶＨドメインの使用、ならびに多重特異性、例えば、二重特異性、分子の産生を可能にする。図１Ｂ、図２Ｂ、および１３Ａは、ＡＢＭがＦｃドメインのＮ末端にあるヒンジドメインで構成されるヒンジ領域を有する実施形態を示すが、フォーマットＡ ＡＢＭは、ヒンジ領域（図示せず）、Ｆｃ領域のＣ末端にあるヒンジ領域（図１３Ｃ）、またはＦｃ領域のＮ末端およびＣ末端にあるヒンジ領域（図１３Ｂ）を有することができない。Ｆｃ領域のＮ末端および／またはＣ末端にある使用することができる例示的なヒンジドメインは、図１３Ａ～１３Ｃに示されるように、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＣＰＰＣ（配列番号１）およびＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ（配列番号２）を含むが、フォーマットＡ ＡＢＭは、代替のヒンジ領域配列を有することができる。同様に、図１３Ａ～１３Ｃは、（Ｇ４Ｓ）ｎリンカーを示す（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）が、他のリンカー配列を使用することができる。
図１Ｂおよび図２Ｂは、２つの結合ドメイン（Ｆａｂ１およびＦａｂ２）のみを含有するフォーマットＡ ＡＢＭの実施形態を示すが、本開示のＡＢＭは、追加の結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂドメインを含有し得る。しかしながら、特定の態様では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、フォーマットＡ ＡＢＭの単独の結合ドメインである。
第２の態様では、本開示のＡＢＭは、
・ＮからＣ末端配向で
－第１のＶＬに会合した第１のＶＨを含む第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメイン、
－第１のスペーサードメイン、および
－第１のＦｃドメインを含む、第１の半抗体と、
・ＮからＣ末端配向で
－第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメイン、
－第２のスペーサードメイン、および
－第２のＦｃドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含み、
第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインは、互いに会合してＦｃ領域を形成する。
理論によって拘束されることなく、ＦｃドメインとＦａｂドメインとの間にスペーサードメインを含めることは、Ｆｃ領域とＦａｂの抗原結合部位との間のより大きな可撓性、ならびに結果として、ＡＢＭのその抗原または標的分子への結合のより高い親和性および／または親和力をもたらすと考えられる。「抗原」および「標的分子」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。
特定の実施形態では、スペーサードメインは、伸長リンカーである。本明細書では一般にフォーマット「Ｂ」（「フォーマットＢ」）と呼ばれ、本明細書では「リーチ」フォーマットと呼ばれることがある、このＡＢＭのフォーマットは、図３Ａに例示される。したがって、本開示は、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ１ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ１ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ１ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ１ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ１ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ１ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－伸長リンカーであるリンカードメイン（８）、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、ならびに
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第１のＦｃドメインを含む、第１のポリペプチドと、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ２ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ２ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ２ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ２ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ２ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ２ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－伸長リンカーであるリンカードメイン（８）、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、ならびに
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第２のＦｃドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含む、図３Ａに示される実施形態フォーマットＢ ＡＢＭを提供する。
図３Ａに示されるフォーマットＢ ＡＢＭの実施形態は、２つの結合ドメイン（Ｆａｂ１およびＦａｂ２）のみを含有するが、本開示のフォーマットＢ ＡＢＭは、追加の結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂドメインを含有し得る。しかしながら、特定の態様では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、本開示のフォーマットＢ ＡＢＭの単独の結合ドメインである。
他の実施形態では、スペーサードメインは、Ｆａｂドメインである。本明細書ではフォーマット「Ｃ」（「フォーマットＣ」）と呼ばれる、このフォーマットのＡＢＭの異なる変形は、図３Ｂ～３Ｄに例示される。フォーマットＣ ＡＢＭは、よって、次のように構成される、第３のＦａｂ（Ｆａｂ３）ドメインおよび第４のＦａｂ（Ｆａｂ４）ドメインを含む：
・ＮからＣ末端配向で
－第１のＶＬに会合した第１のＶＨを含む第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメイン、
－第３のＶＬに会合した第３のＶＨを含む第３のＦａｂ（Ｆａｂ３）ドメイン、および
－第１のＦｃドメインを含む、第１の半抗体、ならびに
・ＮからＣ末端配向で
－第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメイン、
－第４のＶＬに会合した第４のＶＨを含む第４のＦａｂ（Ｆａｂ４）ドメイン、および
－第２のＦｃドメインを含む、第２の半抗体。
したがって、本開示は、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ１ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ１ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ１ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ１ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ１ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ１ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－リンカードメイン（８）、
－Ｆａｂ３ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ３ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ３ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ３ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ３ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ３ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、ならびに
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第１のＦｃドメインを含む、第１のポリペプチドと、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ２ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ２ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ２ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ２ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ２ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ２ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－リンカードメイン（８）、
－Ｆａｂ４ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ４ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ４ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ４ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ４ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ４ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、ならびに
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第２のＦｃドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインが互いに会合してＦｃ領域を形成する、図３Ｂ～３Ｄに示される実施形態フォーマットＣ ＡＢＭを提供する。
図３Ｂ～３Ｄに示されるフォーマットＣ ＡＢＭの実施形態は、４つの結合ドメイン（Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４）を含有するが、本開示のフォーマットＣ ＡＢＭは、追加の結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂドメインを含有し得る。しかしながら、特定の態様では、Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４は、本開示のフォーマットＣ ＡＢＭの単独の結合ドメインである。
フォーマットＣ ＡＢＭのＦａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、非結合性（図３Ｂに示されるように）または結合性（図３Ｃおよび図３Ｄに示されるように）であり得る。Ｆａｂ３およびＦａｂ４が非結合性であるそれらの実施形態は、一般に、本明細書ではフォーマットＣ１ ＡＢＭと呼ばれ、このフォーマットは、本明細書では「クランプ」フォーマットと呼ばれることがある。Ｆａｂ３およびＦａｂ４が結合性であるそれらの実施形態は、一般に、本明細書ではフォーマットＣ２ ＡＢＭと呼ばれ、このフォーマットは、本明細書では「タンデムＦａｂ」フォーマットと呼ばれることがある。「２＋２タンデムＦａｂ」という用語は、図３Ｃおよび３Ｄに示される実施形態を指し、Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４は、タンデムＦａｂにおける単独の結合ドメインである。フォーマットＣ１およびフォーマットＣ２ ＡＢＭの各々は、ホモダイマーまたはヘテロダイマーであり得る。
フォーマットＣ１ ＡＢＭの特定の実施形態では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメインは、非同一であり（例えば、同じ標的分子上または異なる標的分子上にかかわらず、異なるエピトープに結合し）、Ｆａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、同一の非結合ドメインである。他の実施形態では、Ｆａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、異なる非結合ドメインである。
フォーマットＣ２ ＡＢＭの特定の実施形態では、図３Ｃに示されるように、Ｆａｂ１およびＦａｂ３ドメインは、同一のＶＨドメインを含み、Ｆａｂ２およびＦａｂ４ドメインは、同一のＶＨドメインを含む。この構成は、構成１、または１－１－２－２構成と呼ばれる。フォーマットＣ２ ＡＢＭの代替の実施形態では、図３Ｄに示されるように、Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメインは、同一のＶＨドメインを含み、Ｆａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、同一のＶＨドメインを含む。この構成は、構成２、または１－２－１－２構成と呼ばれる。
完全ＡＢＭは、Ｆｃ領域を形成する２つのＦｃドメインを通した２つの半抗体の会合によって形成される。２つの半抗体が非同一である場合、例えば、Ｆａｂ１およびＦａｂ２が異なるＶＨドメインを含む場合、例えば、セクション６．２．７．２に記載されるような、Ｆｃヘテロダイマー化アプローチを利用して、正しい半抗体対形成および／またはそれらの精製を促進することができる。ヘテロダイマー化アプローチの例は、星型変異（ｓｔａｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ）（セクション６．２．７．２に記載）またはノブインホール変異である。
図２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、および３Ｃは、Ｆｃヘテロダイマーによって対形成された各半抗体において非同一のＶＨドメインを含むＡＢＭを示すが、このフォーマットは、Ｆｃホモダイマーにも使用することができる。例えば、図２Ｂおよび図３Ａは、それぞれ、Ｆｃヘテロダイマーを含むフォーマットＡ ＡＢＭおよびフォーマットＢ ＡＢＭを示すが、Ｆａｂ１およびＦａｂ２における異なるＶＨドメインの組み込み、ならびに多重特異性、例えば、二重特異性の結合分子の産生を可能にし、このフォーマットは、Ｆｃホモダイマーおよび同一のＶＨドメインを有する単一特異性フォーマットＡおよびフォーマットＢ ＡＢＭにも使用することができる。同様に、Ｆｃホモダイマーを使用して、同一のＦａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４ ＶＨドメイン、または同一のＦａｂ１およびＦａｂ２ ＶＨドメイン、ならびに非結合Ｆａｂ３およびＦａｂ４ ＶＨドメインを有する、単一特異性フォーマットＣ ＡＢＭを産生することができる。
さらに、第１および第２のポリペプチドが、異なるＶＨドメインを含む場合、異なる戦略を使用して、多重特異性結合分子における正しいＶＨ－ＶＬ対形成を可能にすることができる。例えば、ＡＢＭにおける２つ以上のタイプのＶＨドメインと作動可能に対形成することができる共通の軽鎖を使用することができる。そのような実施形態では、軽鎖ポリペプチド（例えば、Ｆａｂ１およびＦａｂ２、ならびに存在する場合、Ｆａｂ３およびＦａｂ４に会合した軽鎖）は、同一であり得る。あるいは、重鎖成分（（１）および（２））が、軽鎖成分（（６）および（７））との融合体として発現され得る、単一ドメインＦａｂを使用することができる。
図１～３に示される本開示のＡＢＭの変形は、限定することを意図するものではなく、本開示のＡＢＭは、とりわけ、図１～３および以下のセクション６．２に示される修飾の任意の組み合わせを含むことができる。さらに、第１もしくは第２のポリペプチド鎖または左もしくは右半抗体を参照することは、便宜のためのみであり、ポリペプチド鎖または半抗体が任意の特定の順序で産生されるか、または組み立てられることを伝えることを意図するものではない。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭの第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインおよび第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメインは、各々同じ標的分子、例えば、小可溶性分子に結合することができる。第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインおよび第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメインは、同じエピトープに結合することができる（例えば、両方のＦａｂ１およびＦａｂ２が同一のＶＨドメイン（図示せず）を有する、図１Ｂおよび図３Ｄに示される実施形態、または図３Ａもしくは図３Ｂの変形）か、またはそれらは、同じ標的分子上または異なる標的分子上にかかわらず、異なるエピトープに結合することができる（例えば、図２Ｂ、図３Ａ、図３Ｂ、および図３Ｃに示される実施形態）。第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインおよび第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメインが、異なるエピトープ、例えば、同じ標的分子上または異なる標的分子上の２つの異なるエピトープに結合する場合、それらは、Ｆａｂがそれらのエピトープに同時に結合することができるように選択され得る。
いくつかの実施形態では、例えば、フォーマットＣ ＡＢＭについて、本開示のＡＢＭは、図３Ｂ、図３Ｃ、および図３Ｄに示されるように、第３のＦａｂ（Ｆａｂ３）ドメインおよび第４のＦａｂ（Ｆａｂ４）ドメインを含むことができる。第３および第４のＦａｂドメインは、図３Ｂに示されるように、非結合性であり得るか、または図３Ｃおよび図３Ｄに示されるように、結合性であり得る。Ｆａｂ３およびＦａｂ４が存在する場合、それらは、それぞれ、Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメインによって結合されるエピトープと同じまたは異なるエピトープに結合することができる。例えば、図３Ｃの実施形態に示されるように、Ｆａｂ１およびＦａｂ３は、エピトープを共有することができ、Ｆａｂ２およびＦａｂ４は、エピトープを共有することができる。あるいは、例えば、図３Ｄの実施形態に示されるように、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、エピトープを共有することができ、Ｆａｂ３およびＦａｂ４は、エピトープを共有することができる。本明細書で使用される場合、フォーマットＣ ＡＢＭに関して、「第１および第２のＦａｂドメイン」ならびに「Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメイン」という用語は、典型的には、最もＮ末端のＦａｂドメインを指し、「第３および第４のＦａｂドメイン」ならびに「Ｆａｂ３およびＦａｂ４ドメイン」への参照は、典型的には、内部Ｆａｂドメインを指す。
それらの成分および構成を含む、本開示の例示的な抗原結合分子、ならびにそれらの標的分子は、以下のセクション６．２および６．３、ならびに「Ａ」具体的な実施形態１～１３８および「Ｂ」具体的な実施形態１～７２に記載される。
本開示はさらに、本開示のＡＢＭを含むコンジュゲート、例えば、薬物コンジュゲート（便宜上、本明細書では「抗体－薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」と呼ばれる薬物コンジュゲート）を提供する。コンジュゲートの例示的な特徴は、以下の「Ａ」具体的な実施形態１３９および「Ｂ」具体的な実施形態７３と同様に、セクション６．４に記載される。
本開示はさらに、本開示のＡＢＭをコードする核酸を提供する。ＡＢＭをコードする核酸は、単一の核酸（例えば、ＡＢＭのすべてのポリペプチド鎖をコードするベクター）または複数の核酸（例えば、ＡＢＭの異なるポリペプチド鎖をコードする２つ以上のベクター）であり得る。本開示はさらに、本開示の核酸およびＡＢＭを発現するように操作された宿主細胞および細胞株を提供する。本開示はさらに、本開示のＡＢＭを産生する方法を提供する。例示的な核酸、宿主細胞、細胞株、およびＡＢＭを産生する方法は、以下のセクション６．５、「Ａ」具体的な実施形態１４４～１４５、および「Ｂ」具体的な実施形態７５～８１に記載される。
本開示はさらに、本開示のＡＢＭおよびＡＤＣを含む薬学的組成物を提供する。例示的な薬学的組成物は、以下のセクション６．６、「Ａ」具体的な実施形態１４０、および「Ｂ」具体的な実施形態７４に記載される。
例えば、それらが結合する標的分子の異常な発現または活性に関連した状態を治療するために、本開示のＡＢＭ、コンジュゲート、および薬学的組成物を使用する方法が、本明細書でさらに提供される。例示的な方法は、以下のセクション６．７、「Ａ」具体的な実施形態１４１～１４３および「Ｂ」具体的な実施形態８２～８５に記載される。
５．図面の簡単な説明
本開示の例示的なホモダイマー（単一特異性二価）フォーマットＡ ＡＢＭ（図１Ｂ）および対応する天然抗体フォーマット（図１Ａ）の概略図である。図凡例：（１）＝ＶＨ、（２）＝ＣＨ１、（３）＝ヒンジ、（４）＝ＣＨ２、（５）＝ＣＨ３、（６）＝ＶＬ、（７）＝ＣＬ、（８）＝リンカー。 同上。 本開示のヘテロダイマー二重特異性フォーマットＡ ＡＢＭ（図２Ｂ）および対応する従来の二重特異性抗体フォーマット（図２Ａ）の概略図である。低分子抗原（Ａｇ）は、二重特異性ＡＢＭが低分子抗原と相互作用し得る潜在的な方法を示すことが示される。図凡例：（１）＝ＶＨ、（２）＝ＣＨ１、（３）＝ヒンジ、（４）＝ＣＨ２、（５）＝ＣＨ３、（６）＝ＶＬ、（７）＝ＣＬ、（８）＝リンカー。ＣＨ３ドメインのうちの１つにあるアスタリスクは、２つのＣＨ３が同一ではなく、ヘテロダイマー化を可能にする１つ以上の変異（例えば、ノブインホール変異、星型変異など）を含有することを示す。 同上。 本開示の例示的なフォーマットＢ ＡＢＭ（図３Ａ）および本開示の例示的なフォーマットＣ ＡＢＭ（図３Ｂ～３Ｄ）の概略図である。示されるフォーマットＣ ＡＢＭの特定の実施形態は、例示的なヘテロダイマーフォーマットＣ１ ＡＢＭ（図３Ｂ）、例示的なヘテロダイマーフォーマットＣ２ ＡＢＭ（図３Ｃ）、および例示的なホモダイマーフォーマットＣ２ ＡＢＭ（図３Ｄ）である。いくつかの実施形態では、これらの二重特異性ＡＢＭは、共通の軽鎖ＶＬ－ＣＬを使用する。すべてのフォーマットのいくつかの実施形態では、ＶＨ１－ＣＨ１／ＶＬ－ＣＬおよびＶＨ２－ＣＨ１／ＶＬ－ＣＬは、非競合性ｍＡｂから抗原までのＦａｂフラグメントである。図３Ｂに示されるフォーマット（本明細書では「クランプ」フォーマットと呼ばれることがある）では、内部ＦａｂフラグメントＶＨ３－ＣＨ１／ＶＬ－ＣＬは、標的分子に結合しない。図３Ａに示されるフォーマット（本明細書では「リーチ」フォーマットと呼ばれることがある）では、内部Ｆａｂは、可撓性の長いリンカーで置き換えられる。図凡例：（１）＝ＶＨ、（２）＝ＣＨ１、（３）＝ヒンジ、（４）＝ＣＨ２、（５）＝ＣＨ３、（６）＝ＶＬ、（７）＝ＣＬ、（８）＝リンカー。ＣＨ３ドメインのうちの１つにあるアスタリスクは、２つのＣＨ３が同一ではなく、ヘテロダイマー化を可能にする１つ以上の変異（例えば、ノブインホール変異、星型変異など）を含有することを示す。 同上。 同上。 同上。 ＴＳＬＰ遮断バイオアッセイにおけるＴＳＬＰ親Ａｂの活性を示すグラフである。図４Ａ、ｈＩＬ７ＲおよびｈＴＳＬＰＲの両方を発現するＢａｆ３細胞を使用したＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーターアッセイにおけるｈＴＳＬＰの用量応答曲線。図４Ｂ、ＴＳＬＰ遮断バイオアッセイにおける選択されたＴＳＬＰ Ａｂの活性。ＴＳＬＰ Ａｂは、１００ｐＭの定常ｈＴＳＬＰの存在下で、Ｂａｆ３／ｈＩＬ７Ｒ／ｈＴＳＬＰＲ／ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、５．５時間のインキュベーション後に測定した。 同上。 抗ｈＴＳＬＰ二重特異性ＩｇＧ４ Ａｂが、対応する親Ａｂ組み合わせと同様のＴＳＬＰ遮断活性を示したことを示すグラフである。抗ｈＴＳＬＰ親Ａｂ組み合わせおよび二重特異性ＩｇＧ４ Ａｂを、ｈＴＳＬＰ遮断バイオアッセイにおいてそれらの活性について比較した。ＴＳＬＰ Ａｂは、１００ｐＭのｈＴＳＬＰの存在下で、Ｂａｆ３／ｈＩＬ７Ｒ／ｈＴＳＬＰＲ／ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、５．５時間のインキュベーション後に測定した。 ＴＳＬＰ遮断バイオアッセイにおいて異なるフォーマット二重特異性抗ｈＴＳＬＰ Ａｂを比較したグラフである。いくつかの親Ａｂ対形成を試験した：３０２０６ｘ３０２１７（図６Ａ）、３０２０６ｘ３０２３０（図６Ｂ）、３０２１７ｘ３０２３０（図６Ｃ）。ＴＳＬＰ Ａｂは、１００ｐＭのｈＴＳＬＰの存在下で、Ｂａｆ３／ｈＩＬ７Ｒ／ｈＴＳＬＰＲ／ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、５．５時間のインキュベーション後に測定した。図６Ａ～６Ｃに開示される「２ｘＧ４Ｓ」および「４ｘＧ４Ｓ」は、それぞれ、配列番号１８および配列番号１９である。 同上。 同上。 ｈＴＳＬＰ（ＲＥＧＮ４００９）の存在下での個々の親ｍＡｂのフラクトグラムを示すグラフである。抗ＴＳＬＰ ｍＡｂ：ｈＴＳＬＰ複合体（実線）は、多角度光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＳ）によって分析した。Ｈ４Ｈ３０２１７Ｐ２（灰色の破線）およびｈＴＳＬＰ（黒色の破線）の個々の試料からのフラクトグラムもオーバーレイされる。保持時間の関数としての２１５ｎｍでの相対ＵＶ吸光度が各試料について示され、分解されたピークの測定されたモル質量が示される。 ｈＴＳＬＰの存在下での親ｍＡｂ組み合わせのフラクトグラムを示すグラフである。抗ＴＳＬＰ ｍＡｂ組み合わせ：ｈＴＳＬＰ複合体（実線）は、多角度光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＳ）によって分析した。Ｈ４Ｈ３０２１７Ｐ２（灰色の破線）およびｈＴＳＬＰ（黒色の破線）、ならびにＨ４Ｈ３０２１７Ｐ２：ｈＴＳＬＰ複合体（黒色の点線）の個々の試料からのフラクトグラムもオーバーレイされる。保持時間の関数としての２１５ｎｍでの相対ＵＶ吸光度が各試料について示され、分解されたピークの測定されたモル質量が示される。 ｈＴＳＬＰの存在下でのＦｃ－Ｆａｂ二重特異性Ａｂのフラクトグラムを示すグラフである。抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂ：ｈＴＳＬＰ複合体（実線）は、多角度光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＳ）によって分析した。ＴＳ－ＦＣ１－ｅＬ１（黒色の点線）、ＴＳ－ＦＣ６－ｅＬ２（灰色の点線）、およびｈＴＳＬＰ（黒色の破線）の個々の試料からのフラクトグラムもオーバーレイされる。保持時間の関数としての２１５ｎｍでの相対ＵＶ吸光度が各試料について示され、分解されたピークの測定されたモル質量が示される。 ｈＴＳＬＰの存在下でのクランプ二重特異性Ａｂのフラクトグラムを示すグラフである。抗ＴＳＬＰクランプ：ｈＴＳＬＰ複合体（実線）は、多角度光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＳ）によって分析した。ＴＳ－ＣＬ４－ｅＬ１（黒色の点線）、ＴＳ－ＣＬ６－ｅＬ１（灰色の点線）、およびｈＴＳＬＰ（黒色の破線）の個々の試料からのフラクトグラムもオーバーレイされる。保持時間の関数としての２１５ｎｍでの相対ＵＶ吸光度が各試料について示され、分解されたピークの測定されたモル質量が示される。 ｈＴＳＬＰの存在下での２＋２タンデムＦａｂ二重特異性Ａｂのフラクトグラムを示すグラフである。抗ＴＳＬＰ ２＋２タンデムＦａｂ：ｈＴＳＬＰ複合体（実線）は、多角度光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＳ）によって分析した。ＴＳ－ＣＬ２－ｅＬ２（黒色の点線）、ＴＳ－ＣＬ３－ｅＬ２（灰色の点線）、およびｈＴＳＬＰ（黒色の破線）の個々の試料からのフラクトグラムもオーバーレイされる。保持時間の関数としての２１５ｎｍでの相対ＵＶ吸光度が各試料について示され、分解されたピークの測定されたモル質量が示される。 ＴＳＬＰ遮断バイオアッセイにおける異なるリンカー長を有する抗ｈＴＳＬＰ ３０２１７ｘ３０２３０二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの活性を比較したグラフである。ＴＳＬＰ Ａｂは、１２０ｐＭの定常ｈＴＳＬＰの存在下で、Ｂａｆ３／ｈＩＬ７Ｒ／ｈＴＳＬＰＲ／ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、５．５時間のインキュベーション後に測定した。すべての値は、ＴＳＬＰ遮断Ａｂの不在下でのＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼ活性に対して正規化され、ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ活性のパーセンテージとして表された。図１２に開示されるＧ４Ｓ、（Ｇ４Ｓ）２、（Ｇ４Ｓ）３、（Ｇ４Ｓ）４、（Ｇ４Ｓ）５、および（Ｇ４Ｓ）６リンカーは、それぞれ、配列番号３、１８、４、１９、３９、および３８である。 図１３Ａ～１３Ｃは、異なるヒンジフォーマットの概略図である。図１３Ａ：ヒンジ配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ（配列番号２）および（Ｇ４Ｓ）ｎリンカー（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）で示される、ヒンジフォーマット１、図１３Ｂ：ヒンジ配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ（配列番号２）および（Ｇ４Ｓ）ｎリンカー（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）で示される、ヒンジフォーマット２、図１３Ｃ：ヒンジ配列ＧＧＧＧＳＣＰＰＣ（配列番号１）および（Ｇ４Ｓ）ｎリンカー（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）で示される、ヒンジフォーマット３。図１３Ｄは、異なるヒンジフォーマット（Ｇ４Ｓリンカー（配列番号３）を有するヒンジフォーマット１、Ｇ４Ｓリンカー（配列番号３）を有するヒンジフォーマット２、Ｇ４Ｓリンカー（配列番号３）を有するヒンジフォーマット３、（Ｇ４Ｓ）４リンカー（配列番号１９）を有するヒンジフォーマット１、（Ｇ４Ｓ）４リンカー（配列番号１９）を有するヒンジフォーマット２、および（Ｇ４Ｓ）４リンカー（配列番号１９）を有するヒンジフォーマット３）を有する３０２１７ｘ３０２３０ Ｆｃ－Ｆａｂの活性を示すグラフである。ＴＳＬＰ Ａｂは、１２０ｐＭのｈＴＳＬＰの存在下で、Ｂａｆ３／ｈＩＬ７Ｒ／ｈＴＳＬＰＲ／ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、５．５時間のインキュベーション後に測定した。すべての値は、ＴＳＬＰ遮断Ａｂの不在下でのＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼ活性に対して正規化され、ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ活性のパーセンテージとして表された。 同上。 同上。 同上。 ＷＴマウスにおける抗ＴＳＬＰ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂ分子ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０、ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照ＲＥＧＮ１９４５、従来のｈＩｇＧ４二重特異性アイソタイプ対照Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびｈＦｃγホモダイマーＲＥＧＮ１６２７のモル当量の薬物動態プロファイルを示す。 ＷＴマウスにおける抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂ抗体ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０、ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照ＲＥＧＮ１９４５、従来のｈＩｇＧ４二重特異性アイソタイプ対照Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびｈＦｃγホモダイマーＲＥＧＮ１６２７のモル当量の薬物動態プロファイルを示す。 リガンドＸシグナル伝達バイオアッセイにおける抗リガンドＸ親ｍＡｂ ｍＡｂＸ１、ｍＡｂＸ２、および二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂ ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２の阻害活性を比較したグラフである。抗リガンドＸ Ａｂを、１０ｐＭ（図１６Ａ）、１００ｐＭ（図１６Ｂ）、または１ｎＭ（図１６Ｃ）の定常ヒトリガンドＸの存在下で受容体Ｘシグナル伝達のために操作されたルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を５．５時間のインキュベーション後に測定した。 同上。 同上。 リガンドＸシグナル伝達バイオアッセイにおける抗リガンドＸ親ｍＡｂ ｍＡｂＸ２、ｍＡｂＸ３、および二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂ ｍＡｂＸ２ ｘ ｍＡｂＸ３の阻害活性を比較したグラフである。抗リガンドＸ Ａｂを、１０ｐＭ（図１７Ａ）、１００ｐＭ（図１７Ｂ）、または１ｎＭ（図１７Ｃ）の定常ヒトリガンドＸの存在下で受容体Ｘシグナル伝達のために操作されたルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を５．５時間のインキュベーション後に測定した。 同上。 同上。 リガンドＸシグナル伝達バイオアッセイにおける抗リガンドＸ親ｍＡｂ ｍＡｂＸ１、ｍＡｂＸ３、および二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂ ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ３の阻害活性を比較したグラフである。抗リガンドＸ Ａｂを、１０ｐＭ（図１８Ａ）、１００ｐＭ（図１８Ｂ）、または１ｎＭ（図１８Ｃ）の定常ヒトリガンドＸの存在下で受容体Ｘシグナル伝達のために操作されたルシフェラーゼレポーター細胞株とインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を５．５時間のインキュベーション後に測定した。 同上。 同上。 リガンドＸおよび抗リガンドＸ抗体の複合体のフラクトグラムを示すグラフである。リガンドＸと組み合わせた抗リガンドＸ抗体は、多角度光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＳ）によって分析した。抗体およびリガンドＸの個々の試料からのフラクトグラムもオーバーレイされる。保持時間の関数としての２１５ｎｍでの相対ＵＶ吸光度が各試料について示され、分解されたピークの測定されたモル質量が示される。図１９Ａおよび１９Ｂは、親抗体ｍＡｂＸ１、ｍＡｂＸ２、およびリガンドＸのフラクトグラムを示し、図１９Ｃは、ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２ Ｆｃ－ＦａｂおよびリガンドＸのフラクトグラムを示し、図１９Ｄは、ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２クランプおよびリガンドＸのフラクトグラムを示し、図１９Ｅは、ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２ ２＋２タンデムＦａｂヘテロダイマーおよびリガンドＸのフラクトグラムを示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 ＦＡＣＳベースのアッセイにおいて測定される、抗原Ｙ発現細胞への抗原Ｙ Ｆｃ－Ｆａｂの結合を示すグラフである。図２０Ａ、抗抗原Ｙ ＩｇＧ１ ｍＡｂ ｍＡｂＹ１は、異なる長さのＧ４Ｓリンカーを有するＩｇＧ１ Ｆｃ－Ｆａｂとしてクローン化された（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）。Ｆｃ－Ｆａｂおよび親ＩｇＧ１ ｍＡｂは、細胞表面抗原Ｙへの同様の結合を示した。図２０Ｂ、２０Ｃ、２０Ｄ、抗抗原Ｙ ＩｇＧ４ ｍＡｂ ｍＡｂＹ２、ｍＡｂＹ３、およびｍＡｂＹ４は、異なるＧ４Ｓリンカーを有するＩｇＧ４ Ｆｃ－Ｆａｂとしてクローン化された（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）。すべてのＦｃ－Ｆａｂは、抗原Ｙ ＦＡＣＳ結合アッセイにおいて強い活性を示した。図２０Ａ～２０Ｄに開示される「１ｘＧ４Ｓ」、「２ｘＧ４Ｓ」、「３ｘＧ４Ｓ」、「４ｘＧ４Ｓ」、および「５ｘＧ４Ｓ」は、それぞれ、配列番号３、１８、４、１９、および３９である。 同上。 同上。 同上。 ＦＡＣＳベースのアッセイにおける抗ＣＤ３および抗抗原Ｚ Ｆｃ－Ｆａｂの細胞表面エピトープへの結合を示すグラフである。抗ＣＤ３（図２１Ａ）および抗抗原Ｚ（図２１Ｂ）Ａｂは、異なる長さのＧ４Ｓリンカー（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）を有するＩｇＧ１ Ｆｃ－Ｆａｂとしてクローン化された。これらのＦｃ－Ｆａｂは、細胞表面ＣＤ３（図２１Ａ）および抗原Ｚ（図２１Ｂ）への特異的結合を示した。図２１Ａ～２１Ｂに開示される「１ｘＧ４Ｓ」、「２ｘＧ４Ｓ」、「３ｘＧ４Ｓ」、「４ｘＧ４Ｓ」、および「５ｘＧ４Ｓ」は、それぞれ、配列番号３、１８、４、１９、および３９である。 同上。 ＣＤ３ｘ抗原Ｚ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂがバイオアッセイにおいて活性であったことを示すグラフである。図２２Ａ、ＣＤ３ｘ抗原Ｚ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂは、抗原Ｚ＋細胞の存在下で、Ｊｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーター細胞においてＴＣＲシグナル伝達を活性化した。図２２Ｂ、ＣＤ３ｘ抗原Ｚ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂは、３時間のカルセイン放出アッセイにおいて、予め活性化されたヒトドナーＴ細胞による抗原Ｚ＋細胞の殺滅を引き起こした。図２２Ａ～２２Ｂに開示される「１ｘＧ４Ｓ」、「２ｘＧ４Ｓ」、および「３ｘＧ４Ｓ」は、それぞれ、配列番号３、１８、および４である。 同上。
６．発明を実施するための形態
６．１．定義
本明細書で使用される場合、以下の用語は、以下の意味を有することを意図している。
抗体：本発明で使用される場合、「抗体」という用語は、特定の抗原に特異的に結合するか、またはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、任意の抗原結合分子または分子複合体を意味する。「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖、および２つの軽（Ｌ）鎖を含む、従来のフォーマットの免疫グロブリン分子、ならびにそれらのマルチマー（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分化され得、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在する。各ＶＨおよびＶＬは、以下、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順にアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲの並列分析に基づいて定義され得る。
本明細書で使用される「抗体」という用語はまた、完全抗体分子の抗原結合フラグメントを含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合フラグメント」および同様の用語は、本明細書で使用される場合、天然の、酵素処理で入手可能な、合成の、または遺伝子操作された、抗原を特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗体結合フラグメントは、例えば、抗体可変ドメインおよび任意に定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現に関連するタンパク質消化技法または組換え遺伝子操作技法などの任意の適切な標準的技法を使用して、完全抗体分子から誘導され得る。そのようなＤＮＡは既知であり、かつ／または例えば市販の供給源、ＤＮＡライブラリー（例えばファージ－抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡは、例えば、１つ以上の可変ドメインおよび／もしくは定常ドメインを好適な配置へと配置するか、またはコドンを導入し、システイン残基を作製し、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失などするために、化学的に、または分子生物学技法を使用することによって配列決定および操作され得る。
抗原結合フラグメントの非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント、（ｉｖ）Ｆｖフラグメント、（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント、および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、または拘束ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小型モジュール型免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子も、本明細書で使用する「抗原結合フラグメント」という表現に包含される。
抗体の抗原結合フラグメントは、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むであろう。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成物であり得、概して、１つ以上のフレームワーク配列に隣接しているかまたは１つ以上のフレームワーク配列とインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインに会合したＶＨドメインを有する抗体結合フラグメントにおいて、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の好適な配置で互いに対して配置され得る。例えば、可変領域は、ダイマーであり得、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬ、またはＶＬ－ＶＬダイマーを含有し得る。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、モノマーＶＨまたはＶＬドメインを含有し得る。
特定の実施形態では、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有連結された少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本開示の抗体の抗原結合フラグメント内に見られ得る可変および定常ドメインの非限定的、例示的な構成は、（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３、（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２、（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ、（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１、（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２、（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３、（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２、（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３、および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬを含む。上に列挙した例示的な構成のいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインの任意の構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結されていてもよく、または完全もしくは部分的ヒンジ領域もしくはリンカー領域によって連結されていてもよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子において隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間の可撓性または半可撓性連結をもたらす少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個以上）のアミノ酸からなり得る。さらに、本開示の抗体の抗原結合フラグメントは、互いとのおよび／または１つ以上のモノマーＶＨもしくはＶＬドメインとの（例えば、ジスルフィド結合による）非共有会合において、上に列挙した可変および定常ドメイン構成のいずれかのホモダイマーまたはヘテロダイマー（または他のマルチマー）を含み得る。
完全抗体分子と同様に、抗体結合フラグメントは、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。抗体の多重特異性抗原結合フラグメントは、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別個の抗原にまたは同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む、任意の多重特異性抗体フォーマットは、当該技術分野で利用可能な通例の技法を使用して、本発明の抗体の抗原結合フラグメントの文脈における使用に適合され得る。
抗原結合分子またはＡＢＭ：本明細書で使用される「抗原結合分子」または「ＡＢＭ」という用語は、２つの半抗体を含む分子（例えば、複数のポリペプチド鎖のアセンブリ）を指す。典型的には、各半抗体は、少なくとも１つの抗原結合部位を含む。本開示のＡＢＭは、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であり得る。単一特異性結合分子の抗原結合部位は、すべて同じエピトープに結合するが、多重特異性結合分子は、同じまたは異なる標的分子であり得る、異なるエピトープに結合する少なくとも２つの抗原結合部位を有する。
会合：ＡＢＭの文脈における「会合」という用語は、２つ以上のポリペプチド鎖間の機能的関係を指す。特に、「会合」という用語は、抗原結合部位がそれらのそれぞれの標的に結合することができる機能的ＡＢＭを産生するために、例えば、分子相互作用を通して非共有結合的に、または１つ以上のジスルフィド架橋もしくは化学的架橋を通して共有結合的に、２つ以上のポリペプチドが互いに会合していることを意味する。本開示のＡＢＭに存在し得る会合の例は、Ｆｃ領域におけるホモダイマーまたはヘテロダイマーＦｃドメイン間の会合、ＦａｂドメインにおけるＶＨおよびＶＬ領域間の会合、ＦａｂドメインにおけるＣＨ１とＣＬとの間の会合、ならびにドメイン置換ＦａｂにおけるＣＨ３とＣＨ３との間の会合を含む（がこれらに限定されない）。
二価：本明細書で使用される「二価」という用語は、２つの抗原結合部位を有するＡＢＭを指す。いくつかの実施形態では、２つの抗原結合部位は、同じ標的の同じエピトープに結合する。他の実施形態では、２つの抗原結合部位は、同じ標的分子または異なる標的分子にかかわらず、異なるエピトープに特異的に結合する。
相補性決定領域またはＣＤＲ：本明細書で使用される「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＨＣＤＲ－Ｈ３）があり、各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）がある。ＣＤＲの境界を特定するために使用することができる例示的な規則には、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡＢＳ定義、およびＩＭＧＴ定義が含まれる。例えば、Ｋａｂａｔ，１９９１，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム）、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８－９２７２（ＡＢＳ番号付けスキーム）、およびＬｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（ＩＭＧＴ番号付けスキーム）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を特定するために公開データベースも利用可能である。
サイトカイン：「サイトカイン」という用語は、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、および腫瘍壊死因子を含む、細胞シグナル伝達活性を有する低分子量細胞外ポリペプチド／糖タンパク質の群のメンバーを指す。サイトカインは、免疫応答（例えば、細胞および他のサイトカインの活性、分化、増殖、および産生）の調節に関与し、典型的には、免疫細胞によって、主にＴ細胞、好中球、およびマクロファージによって合成されるが、非免疫細胞によっても合成され得る。サイトカインは、モノマー、ダイマー（ホモダイマーおよびヘテロダイマー両方）、トリマー（ホモトリマーを含む）、およびテトラマー（ホモテトラマーを含む）として存在する。サイトカインは、約５～７０ ｋＤａの分子量の範囲であるが、大部分は、約５～約２０ ｋＤａの範囲である。多くのサイトカインは、４－α－ヘリックスバンドル構造を共有する。他のサイトカインは、システイン残基の対から形成された３つのジスルフィド架橋を含有する、システインノットによって特徴付けられる。さらなるサイトカインは、ホモダイマーピラミッド構造によって特徴付けられ、これは細胞表面タンパク質に時々存在する特徴である。
ＥＣ５０：「ＥＣ５０」という用語は、特定の曝露時間後にベースラインと最大値との間の中間で応答を誘導する、抗体またはＡＢＭの半最大有効濃度を指す。ＥＣ５０は本質的に、その最大効果の５０％が観察される抗体またはＡＢＭの濃度を表す。特定の実施形態では、ＥＣ５０値は、例えば、ＦＡＣＳ結合アッセイによって決定されるように、抗体またはＡＢＭによって特異的に結合され得る標的分子を発現する細胞への半最大結合を与える抗体またはＡＢＭの濃度に等しい。よって、低減したまたは弱い結合は、増加したＥＣ５０、または半最大有効濃度値で観察される。本開示のＡＢＭのＥＣ５０値は、いくつかの実施形態では、約１０－５Ｍ以下（例えば、１０－５Ｍ未満、１０－６Ｍ未満、１０－７Ｍ未満、１０－８Ｍ未満、または１０－９Ｍ未満）のＥＣ５０値によって特徴付けることができる。
エピトープ：「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体または抗原結合分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一抗原または標的分子は、２つ以上のエピトープを有してもよい。よって、異なる抗体または抗原結合分子は、抗原または標的分子上の異なる領域に結合し得、異なる生物学的効果を有し得る。エピトープは、立体配座または直鎖状のいずれかであり得る。立体配座エピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントから空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖における隣接するアミノ酸残基によって産生されるものである。特定の状況では、エピトープは、抗原または標的分子上の糖類、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含み得る。
Ｆａｂ：本開示のＡＢＭの文脈における「Ｆａｂ」という用語は、ポリペプチド鎖の対を指し、第１は、第１の定常ドメインのＮ末端にある抗体の可変重（ＶＨ）ドメイン（本明細書ではＣ１と呼ばれる）を含み、第２は、第１の定常ドメインと対形成することができる第２の定常ドメインのＮ末端にある抗体の可変軽（ＶＬ）ドメイン（本明細書ではＣ２と呼ばれる）を含む。天然免疫グロブリンでは、ＶＨは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）のＮ末端であり、ＶＬは、軽鎖（ＣＬ）の定常ドメインのＮ末端である。本開示のＦａｂは、特に本開示のＡＢＭが非同一のＦａｂを含む場合、天然配向に従って配置され得るか、または正しいＶＨおよびＶＬ対形成を促進するドメイン置換もしくは交換を含み得る。例えば、ＦａｂにおけるＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインの対をＣＨ３ドメインの対で置き換えて、ヘテロダイマーＡＢＭにおける正しい修飾Ｆａｂ鎖対形成を促進することができる。ＣＨ１およびＣＬを逆にして、ＣＨ１をＶＬに付着させ、ＣＬをＶＨに付着させることも可能であり、構成は、一般にＣｒｏｓｓｍａｂとして知られる。あるいは、または加えて、置換または交換された定常ドメインの使用、正しい鎖対形成は、本開示のヘテロダイマーＡＢＭの両方の可変領域と対形成することができる普遍的な軽鎖の使用によって達成することができる。本開示のＡＢＭを記載する際に、Ｃ１ドメインは、本明細書の他の箇所でＣＨ１ドメインと呼ばれ、Ｃ２ドメインは、本明細書では、記載の各々についてＣＬドメインと呼ばれるが、ドメイン交換フォーマットも含まれることが意図される。操作されたＦａｂの他の形態をセクション６．２．１に例示する。
Ｆｃ：「Ｆｃ」という用語は、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲ、すなわち、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、またはＦｃＲｎ、すなわち、新生児Ｆｃ受容体に典型的に結合する少なくともＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域の一部分を指す。「Ｆｃ」という用語はまた、天然免疫グロブリンのＦｃとは異なる操作されたＦｃを包含する。例えば、ＣＨ２およびＣＨ３領域は、欠失、置換、および／もしくは挿入、または任意のＦｃ受容体に結合することができなくなるような他の修飾を含むように操作することができ、次いで、ＣＨ２およびＣＨ３領域は、その典型的な生物学的機能に関して非機能的であるとみなされる。操作されたＦｃの他の形態をセクション６．２．７に例示する。
ＦｃドメインおよびＦｃ領域：「Ｆｃドメイン」という用語は、別の重鎖の対応する部分と対形成する重鎖の部分を指す。「Ｆｃ領域」という用語は、２つの重鎖Ｆｃドメインの会合によって形成される抗体ベースの結合分子の領域を指す。Ｆｃ領域内の２つのＦｃドメインは、互いに同じであるか、または異なり得る。天然抗体では、Ｆｃドメインは、典型的には、同一であるが、本開示のＡＢＭを産生する目的で、一方または両方のＦｃドメインは、ヘテロダイマー化を可能にするように有利に修飾され得る。
半抗体：「半抗体」という用語は、少なくともＦｃドメインを含み、例えば、ジスルフィド架橋または分子相互作用（例えば、Ｆｃヘテロダイマー間のノブインホール相互作用）を通して、Ｆｃドメインを含む別の分子と会合することができる分子を指す。半抗体は、１つのポリペプチド鎖または２つ以上のポリペプチド鎖（例えば、重鎖および軽鎖）から構成され得る。
重鎖：本明細書で使用される、「重鎖」または「免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖」という用語は、任意の生物からのＩｇ重鎖定常領域配列を含み、特に明記されない限り、重鎖可変ドメインを含む。重鎖可変ドメインは、特に明記されない限り、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および４つのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。重鎖可変ドメインのフラグメントには、ＣＤＲ、またはＣＤＲおよびＦＲの両方が含まれる。典型的な重鎖定常領域（ＣＨ）は、可変ドメインに続いて、Ｎ末端からＣ末端まで、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを有する（例えば、図１Ａおよび２Ａを参照されたい）。抗原結合分子および二重特異性重抗原結合分子に関して本明細書に開示されるような、非典型的な重鎖は、重鎖定常領域（ＣＨ）のいずれか２つの間の可変ドメイン（ＶＨ）、例えば、Ｎ末端からＣ末端まで、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＶＨドメイン、およびＣＨ２ドメインを有する（例えば、図１Ｂおよび図２Ｂを参照されたい）。一実施形態では、Ｆｃ部分は、少なくともＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
ヒンジ：本明細書で使用される「ヒンジ」という用語は、ＣＨ１のＣ末端を免疫グロブリンのＣＨ２ドメインのＮ末端に接続する連続したアミノ酸残基の領域を含むことを意図している。ＣＨ２エクソンによってコードされる、ＣＨ２ドメインのＮ末端のいくつかのアミノ酸も、「下部ヒンジ」の一部とみなされる。いずれの１つの理論によっても拘束されることなく、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４のヒンジ領域のアミノ酸は、異なるヒンジエクソンによってコードされる１２～１５個の連続したアミノ酸、および（ＣＨ２エクソンによってコードされる）ＣＨ２ドメインのいくつかのＮ末端アミノ酸を含むものとして特徴付けられている（Ｂｒｅｋｋｅ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ １６（２）：８５－９０）。一方、ＩｇＧ３は、４つのセグメント：ＩｇＧ１のヒンジ領域に似た１つの上部セグメント、およびＩｇＧ３に固有の同一のアミノ酸リピートである３つのセグメントからなるヒンジ領域を含む。
宿主細胞：本明細書で使用される「宿主細胞」という用語は、本開示の核酸が導入された細胞を指す。「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。そのような用語は、特定の対象細胞、およびそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指すことが理解される。特定の修飾が、変異または環境の影響のいずれかによって次世代で発生し得るため、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一ではない場合があるが、依然として本明細書で使用される用語の範囲内に含まれる。典型的な宿主細胞は、哺乳動物宿主細胞などの、真核生物宿主細胞である。例示的な真核生物宿主細胞には、酵母および哺乳動物細胞、例えば、マウス、ラット、サル、またはヒト細胞株などの脊椎動物細胞、例えば、ＨＫＢ１１細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ＨＥＫ細胞、またはＣＨＯ細胞が含まれる。
免疫グロブリン：「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、２対のポリペプチド鎖、１対の軽（Ｌ）鎖、および１対の重（Ｈ）鎖からなる構造的に関連する糖タンパク質のクラスを指し、これは４つすべてがジスルフィド結合によって相互接続され得る。免疫グロブリンの構造は、十分に特徴付けられている。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。各重鎖は、典型的には、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域（ＣＨまたはＣＨ）を含む。重鎖定常領域は、典型的には、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。ＣＨ１ドメインおよびＣＨ２ドメインは、ヒンジによって連結される。Ｆｃ部分は、少なくともＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
典型的には、免疫グロブリンのアミノ酸残基の番号付けは、ＩＭＧＴ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に従うか、または例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ ｅｄ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）に記載されるような、ＫａｂａｔのＥＵ番号付けシステム（「ＥＵ番号付け」または「ＥＵインデックス」としても知られる）による。
アイソタイプ：「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる免疫グロブリンクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ）を指す。
作動可能に連結：「作動可能に連結」という用語は、成分がそれらの意図された方法で機能することを可能にするように記載された成分の物理的または機能的並置を指す。ポリペプチドに関して、「作動可能に連結」という用語は、機能的ポリペプチドを産生するように２つ以上の領域が連結されているポリペプチド鎖の２つ以上の領域間の機能的関係を指すことができる。ＤＮＡ発現ベクター構築物の文脈などにおける核酸に関して、「作動可能に連結」という用語は、例えば、制御配列、例えば、プロモーターまたはオペレーターが、制御配列がコード配列によってコードされるポリペプチドの産生を指示するように、コード配列に対する位置に適切に配置されることを指す。
ポリペプチドおよびタンパク質：「タンパク質」という用語は、四次構造、三元構造、および少なくとも１つのポリペプチドから構成される他の複合体高分子を含むことを意味する。「タンパク質」という用語は、ポリペプチドを含む。
「ポリペプチド」という用語は、隣接するアミノ酸残基のカルボキシル基とアミノ基との間のペプチド結合によって一緒に結合されたアミノ酸の単一の直鎖状ポリマー鎖を指す。本開示のポリペプチドは、免疫グロブリンドメインに由来するアミノ酸配列を含む。指定されたタンパク質またはポリペプチドに「由来する」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、ポリペプチドの起源を指す。
「タンパク質」という用語はまた、１つまたは複数のポリペプチドから構成されるものなどの、大きなポリペプチドを説明するために使用され得る。
単鎖Ｆａｂ：本明細書で使用される「単鎖Ｆａｂ」または「ｓｃＦａｂ」という用語は、抗体のＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、およびＣＬドメインを含むポリペプチド鎖を指し、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。
単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ：本明細書で使用される「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含むポリペプチド鎖を指し、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。
特異的に（または選択的に）結合：本明細書で使用される「特異的に（または選択的に）結合」という用語は、そのＡＢＭまたは抗原結合部位（「ＡＢＳ」）が、生理学的条件下で比較的安定な標的分子と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、約５ｘ１０－２Ｍ以下（例えば、５ｘ１０－２Ｍ未満、１０－２Ｍ未満、５ｘ１０－３Ｍ未満、１０－３Ｍ未満、５ｘ１０－４Ｍ未満、１０－４Ｍ未満、５ｘ１０－５Ｍ未満、１０－５Ｍ未満、５ｘ１０－６Ｍ未満、１０－６Ｍ未満、５ｘ１０－７Ｍ未満、１０－７Ｍ未満、５ｘ１０－８Ｍ未満、１０－８Ｍ未満、５ｘ１０－９Ｍ未満、１０－９Ｍ未満、または１０－１０Ｍ未満）のＫＤによって特徴付けることができる。抗体または抗体フラグメント、例えば、ＡＢＭまたはＡＢＳの標的分子への結合親和性を決定するための方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）結合アッセイなどを含む。１つの種からの標的分子に特異的に結合するＡＢＭまたはそのＡＢＳ抗体は、しかしながら、１つ以上の他の種からの標的分子に対して交差反応性を有することができる。
標的分子：本明細書で使用される「標的分子」という用語は、ＡＢＭの抗原結合部位によって特異的に結合することができる任意の生体分子（例えば、タンパク質、炭水化物、脂質、またはそれらの組み合わせ）を指す。例示的な標的分子は、これらに限定されないが、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬＩ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグリカン、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣ１、ＡＲ、ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）、ＡＲＴ－４、Ｂ７、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧＩ、ＢＡＩｉ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲｌ（ＭＤＲｌＳ）、ＢｌｙＳ、ＢＭＰｌ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰＳ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｂａ－７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３－抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－Ｉ、ＣＡＳＰ－８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ８、ＣＤＩ－ＩＡ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ－ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＳ、ＣＳＲ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＳＰＩ、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬＩ（Ｉ－３０９）、ＣＣＬＩＩ（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬＩＳ（ＭＩＰ－１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬＩＳ（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）、ＳＬＣ、エクソダス－２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２Ｓ（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２Ｓ、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）、ＣＣＬＳ（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬＳ（ｍｃｐ－２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４Ｓ）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳＩ ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢ１）、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳ／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－ＬＩ）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬＩ（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤｌＣ、ＣＤ２００、ＣＤ－２２、ＣＤ２４、ＣＤ２Ｓ、ＣＤ３Ｓ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ４４、ＣＤ４ＳＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ４Ｓ、ＣＤＳ２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤＳＯ、ＣＤＳ１、ＣＤＳ３、ＣＤＳ６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３Ｓ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨｌＳ、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ７、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫＳ、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１ Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、キチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クローディン－７）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬＩＳＡ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａｌ、ＣＲ２、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬＡ－４、ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬＩ（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２Ｓ）、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬＩＯ（ＩＰ－１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬＳ（ＥＮＡ－７Ｓ／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢＳ、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＨＩＦ－１－ａ、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－ｍｅｔ、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４Ｓ１Ｊ０１１Ｓ、ＤＮＣＬＩ、ＤＰＰ４、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＥＬＦ２－Ｍ、Ｅｐ－ＣＡＭ、Ｅ２Ｆ１、ＥＣＧＦ１、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、ＥＮ０１、ＥＮ０２、ＥＮ０３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＥＧ、ＥＲＫＳ、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１Ｓ、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＩＬＩ（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２ＳＳ４、ＦＬＪ２ＳＳ３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＯＳ、ＦＯＳＬＩ（ＦＲＡ－１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、Ｆｌｔ－Ｉ、Ｆｌｔ－３、葉酸塩受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ＧＲＯＢ、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤＦＳ、ＧＦｉｌ、ＧＧＴｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲＳ１（ＦＫＳＧＳＯ）、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＧＳＴＰ１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣＳ、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＨＧＦ、ＨＩＰ１ヒスタミンおよびヒスタミン受容体、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭＩ ２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ－１）、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２または１ａ、ＩＧＦ－ＩＲ、
Figure 2022543669000003
ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ－１、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０ＲＡ、ＩＬ－１０ＲＢ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１１ＲＡ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ａ、ＩＬ－１２Ｂ、ＩＬ－１２ＲＢ１、ＩＬ－１２ＲＢ２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１３ＲＡ１、ＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ－１４、ＩＬ－１Ｓ、ＩＬ－１ＳＲＡ、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８ＢＰ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－１９、ＩＬ－ＩＡ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－１Ｆ１０、ＩＬ－１ＦＳ、ＩＬ－１Ｆ６、ＩＬ－１Ｆ７、ＩＬ－１Ｆ８、ＩＬ－１Ｆ９、ＩＬ－１ＨＹ１、ＩＬ－１Ｒ１、ＩＬ－１Ｒ２、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１ＲＡＰＬ１、ＩＬ－１ＲＡＰＬ２、ＩＬ－１ＲＬ１、ＩＬ－１ＲＬ２ ＩＬ－１ＲＮ、ＩＬ－２、ＩＬ－２０、ＩＬ－２０ＲＡ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２２ＲＡ２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２Ｓ、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８Ａ、ＩＬ－２８Ｂ、ＩＬ－２９、ＩＬ－２ＲＡ、ＩＬ－２ＲＢ、ＩＬ－２ＲＧ、ＩＬ－３、ＩＬ－３０、ＩＬ－３ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－５ＲＡ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＬ－７、ＩＬ－７Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－ＳＲＡ、ＩＬ－ＳＲＢ、ＩＬ－９、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－Ｋ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）インスリン様成長因子－Ｉ（ＩＧＦ－１）、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４ ＩＦＮＡＳ、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＷ１、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡｉ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦＳ（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１Ｓ、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫＳ、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプＩＩケラチン）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ－１－抗原、ＫＳ １－４、Ｌｅ－Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、ＬＡＭＡＳ、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ－ｐ７Ｓ、Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧまたはＯｍｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩＰ－２、ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン－ＩＩＩ）、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、ＮＹ－ＥＳ０－１、ＴＲＡＧ－３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＭ－１／２、ＭＵＭ－３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＮＣＫ２、ニューロカン、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇａ）、ＮｇＲｐ７Ｓ、ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＸＳ、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲＩＨ２、ＮＲＩＨ３、ＮＲＩＨ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲＳＡ１、ＮＲＳＡ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴＳＥ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＯＰＲＤ１、ＰＣＳＫ９、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＮＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、アルファ４ベータ７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、Ｌａｇ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＧＤＦＳ、ＣＧＲＰ、Ｌｉｎｇｏ－Ｉ、第ＩＸａ因子、第Ｘ因子、ＩＣＯＳ、ＧＡＲＰ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＲＯＲＩ、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、Ａ２ａＲ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣ１、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）、ＰＴＮ、膵臓がんムチン、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺性酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、１０ ＰＩＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ－ＩＲ、ＩＬ－６、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦｌ１０（ＺＮＦ１４４）、ＲＯＢ０２、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢＳ（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＳＨＢＧ、ＳＬＡ２、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＩＯＩ、ＳＡＧＥ、５１００、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ－α、Ｔｎ－抗原、ＴｈｏｍｓｏｎＦｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１０、ＴＤＧＦ１、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢｌｉｌ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ９、ＴＮＦ、ＴＮＦ－ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１Ｓ（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－ｌＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰＳ３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＰＳ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、ＷＴ－１、１７－ＩＡ抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、ＣＳ、血管新生マーカー、ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、ＣＤ１９／ＣＤ３、ＢＣＭＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＩＬ１７ＲＡ／ＩＬ７Ｒ、ＩＬ－６／ＩＬ－２３、ＩＬ１／ＩＬ－８、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ／ＩＬ－２１、ＩＬ－２１Ｒ、ＡＮＧ２／ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ／ＰＤＧＦＲ－ベータ、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）アクセプター２／ＣＤ３、ＰＳＭＡ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、バーシカン、ＶＨＬ ＣＳ、ＶＬＡ－４、ｃ－ＦＭＳ／ＣＳＦＩＲ、ＲＥＴ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＩＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃ－ＫＩＴ、ＢＣＲ、インテグリン、ＭＭＰ ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＨＧＦ、アンジオポエチン、ＥＲＢＢ－３／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＲＢＢ－２／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３、ＰＳＣＡ／ＣＤ３、Ｃ－ＭＥＴ／ＣＤ３、ＥＮＤＯＳＩＡＬＩＮ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＩＧＦ－１Ｒ／ＣＤ３、ＦＡＰＡＬＰＨＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＩＧＦ－ＩＲ、ＩＬ ２５ １７Ａ／Ｆ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、およびＣＤ１９／ＣＤ１６、ＫＨＩ、Ｔｎ－抗原、ＴＦ－抗原、ＣＤ４４、糖脂質、スフィンゴ糖脂質、例えば、３０ Ｇｇ３、Ｇｂ３、ＧＤ３、ＧＤ２、Ｇｂ５、Ｇｍ１、Ｇｍ２、シアリルテトラオシルセラミド、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲＳ／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹ１、ならびにＺＦＰＭ２を含む。いくつかの実施形態では、標的分子は、小可溶性（すなわち、膜結合されていない）分子である。
四価：本明細書で使用される「四価」という用語は、４つの抗原結合部位を有するＡＢＭを指す。いくつかの実施形態では、抗原結合部位のうちの２つは、同じエピトープに結合し、他の２つの結合部位は、同じ標的分子または異なる標的分子にかかわらず、異なるエピトープに結合する。
普遍的な重鎖：本明細書においてＡＢＭの文脈で使用される「普遍的な重鎖」という用語は、再配置された重鎖可変領域を有する重鎖、例えば、再配置されたＩｇ重鎖可変領域を有するヒト重鎖を指す。例示的な再配置Ｉｇ重鎖可変領域は、米国特許公開第２０１４／０２４５４６８号ならびに米国特許第９，２０４，６２４号および同第９，９３０，８７１号に提供され、これらの各々は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。普遍的な重鎖は、「共通の重鎖」としても知られる。
普遍的な軽鎖：本明細書においてＡＢＭの文脈で使用される「普遍的な重鎖」という用語は、再配置された軽鎖可変領域を有する軽鎖、例えば、再配置されたＩｇ軽鎖可変領域を有するヒト軽鎖を指す。普遍的な軽鎖は、「共通の重鎖」としても知られる。ＡＢＭの文脈において、同じＡＢＭにおける異なる可変領域を有する２つの異なるＦａｂドメインの重鎖領域と対形成することができる軽鎖ポリペプチドを指す。普遍的な軽鎖は、「共通の軽鎖」としても知られる。例示的な再配置Ｉｇ軽鎖可変領域は、例えば、米国特許第９，９６９，８１４号、同第１０，１３０，１８１号、および同第１０，１４３，１８６号、ならびに米国特許公開第２０１２／００２１４０９号、同第２０１２／０１９２３００号、同第２０１３／００４５４９２号、同第２０１３／０１８５８２１号、同第２０１３／０３０２８３６号、および同第２０１５／０３１３１９３号に提供され、これらの各々は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
ＶＨ：「ＶＨ」という用語は、Ｆａｂの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。
ＶＬ：「ＶＬ」という用語は、Ｆａｂの軽鎖を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
６．２．抗原結合分子（ＡＢＭ）
単一特異性および二重特異性抗原結合分子などの、抗原結合分子が本明細書に開示される。開示される抗原結合分子は、典型的な抗体構造とは異なる結合ドメイン配置を有する。開示される抗原結合分子は、単一の標的分子または抗原に二重特異的に結合することができ、これは、抗原または標的分子についての増加した親和性および／または親和力をもたらすことができる。例えば、両方のＦａｂが異なるエピトープで同じ抗原に結合する二重特異性抗原結合分子について、抗原についての親和性は、エピトープの一方のみに結合した抗体と比較して増加すると予想されるであろう。理論によって拘束されることなく、本明細書に開示されるＡＢＭは、Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメインの増加した近接性および／またはより大きな可撓性のいずれかに起因する、抗原または標的分子についての増加した親和力を有し、これは、Ｆａｂドメインの結合部位が離れて配置される、従来のフォーマットの抗体と比較して抗原結合部位の局所濃度を増加させると考えられる。
第１の態様では、本開示のＡＢＭは、
・ＮからＣ末端配向で
－任意のヒンジドメイン、
－第１のＦｃドメイン、および
－第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）に会合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ）を含む第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインを含む、第１の半抗体と、
・ＮからＣ末端配向で
－任意のヒンジドメイン、
－第２のＦｃドメイン、および
－第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂドメイン（「Ｆａｂ２」）を含む、第２の半抗体と、を含み、
第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインは、互いに会合されてＦｃ領域を形成し、任意のヒンジドメインは、存在する場合、ジスルフィド架橋を通して互いに会合され得る。
一般に本明細書でＡＢＭフォーマット「Ａ」（「フォーマットＡ」）と呼ばれ、本明細書で「Ｆｃ－Ｆａｂ」フォーマットと呼ばれることがある、このタイプのＡＢＭの２つの実施形態は、図１Ｂおよび図２Ｂ、ならびに図１３Ａ、図１３Ｂ、および図１３Ｃに示されるそれらの変形において例示される。したがって、本開示は、
・ＮからＣ末端配向で
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含むＦｃドメイン、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－リンカー（８）、ならびに
－Ｆａｂ１ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ１ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ１ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ１ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ１ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ１ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分を含む、第１のポリペプチドと、
・ＮからＣ末端配向で
－ジスルフィド結合を介して第１のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第２のＦｃドメイン、
－ジスルフィド結合を介して第１のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結された任意のヒンジドメイン（３）、
－リンカー（８）、ならびに
－Ｆａｂ２ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ２ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ２ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ２ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ２ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ２ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分を含む、第２のポリペプチドと、を含み、
第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインが、互いに会合してＦｃ領域を形成する、図１Ｂおよび図２Ｂに示されるフォーマットＡ ＡＢＭを提供する。
図１Ｂの実施形態では、両方の半抗体は、同一であり、Ｆｃホモダイマーを形成するＦｃドメインを含み、得られるＡＢＭは、単一特異性である。図２Ｂの実施形態では、ＡＢＭは、Ｆｃヘテロダイマーを含み、異なるＦａｂ１およびＦａｂ２ ＶＨドメインの使用、ならびに多重特異性、例えば、二重特異性、分子の産生を可能にする。図１Ｂ、図２Ｂ、および１３Ａは、ＡＢＭがＦｃドメインのＮ末端にあるヒンジドメインで構成されるヒンジ領域を有する実施形態を示すが、フォーマットＡ ＡＢＭは、ヒンジ領域（図示せず）、Ｆｃ領域のＣ末端にあるヒンジ領域（図１３Ｃ）、またはＦｃ領域のＮ末端およびＣ末端にあるヒンジ領域（図１３Ｂ）を有することができない。Ｆｃ領域のＮ末端および／またはＣ末端にある使用することができる例示的なヒンジドメインは、図１３Ａ～１３Ｃに示されるように、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＣＰＰＣ（配列番号１）およびＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ（配列番号２）を含むが、フォーマットＡ ＡＢＭは、代替のヒンジ領域配列を有することができる。同様に、図１３Ａ～１３Ｃは、（Ｇ４Ｓ）ｎリンカーを示す（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）が、他のリンカー配列を使用することができる。
図１Ｂおよび図２Ｂは、２つの結合ドメイン（Ｆａｂ１およびＦａｂ２）のみを含有するフォーマットＡ ＡＢＭの実施形態を示すが、本開示のＡＢＭは、追加の結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂドメインを含有し得る。しかしながら、特定の態様では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、フォーマットＡ ＡＢＭの単独の結合ドメインである。
第２の態様では、本開示のＡＢＭは、
・ＮからＣ末端配向で
－第１のＶＬに会合した第１のＶＨを含む第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメイン、
－第１のスペーサードメイン、および
－第１のＦｃドメインを含む、第１の半抗体と、
・ＮからＣ末端配向で
－第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメイン、
－第２のスペーサードメイン、および
－第２のＦｃドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含み、
第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインは、互いに会合してＦｃ領域を形成する。
理論によって拘束されることなく、ＦｃドメインとＦａｂドメインとの間にスペーサードメインを含めることは、Ｆｃ領域とＦａｂの抗原結合部位との間のより大きな可撓性、ならびに結果として、ＡＢＭのその標的分子への結合のより高い親和性および／または親和力をもたらすと考えられる。
特定の実施形態では、スペーサードメインは、伸長リンカーである。本明細書では一般にフォーマット「Ｂ」（「フォーマットＢ」）と呼ばれ、本明細書では「リーチ」フォーマットと呼ばれることがある、このＡＢＭのフォーマットは、図３Ａに例示される。したがって、本開示は、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ１ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ１ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ１ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ１ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ１ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ１ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－伸長リンカーであるリンカードメイン（８）、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、および
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第１のＦｃドメインを含む、第１のポリペプチドと、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ２ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ２ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ２ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ２ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ２ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ２ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－伸長リンカーであるリンカードメイン（８）、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、および
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第２のＦｃドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含む、図３Ａに示される実施形態フォーマットＢ ＡＢＭを提供する。
図３Ａに示されるフォーマットＢ ＡＢＭの実施形態は、２つの結合ドメイン（Ｆａｂ１およびＦａｂ２）のみを含有するが、本開示のフォーマットＢ ＡＢＭは、追加の結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂドメインを含有し得る。しかしながら、特定の態様では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、本開示のフォーマットＢ ＡＢＭの単独の結合ドメインである。
他の実施形態では、スペーサードメインは、Ｆａｂドメインである。本明細書ではフォーマット「Ｃ」（「フォーマットＣ」）と呼ばれる、このフォーマットのＡＢＭの異なる変形は、図３Ｂ～３Ｄに例示される。フォーマットＣ ＡＢＭは、よって、次のように構成される、第３のＦａｂ（Ｆａｂ３）ドメインおよび第４のＦａｂ（Ｆａｂ４）ドメインを含む：
・ＮからＣ末端配向で
－第１のＶＬに会合した第１のＶＨを含む第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメイン、
－第３のＶＬに会合した第３のＶＨを含む第３のＦａｂ（Ｆａｂ３）ドメイン、および
－第１のＦｃドメインを含む、第１の半抗体と、
・ＮからＣ末端配向で
－第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメイン、
－第４のＶＬに会合した第４のＶＨを含む第４のＦａｂ（Ｆａｂ４）ドメイン、および
－第２のＦｃドメインを含む、第２の半抗体。
したがって、本開示は、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ１ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ１ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ１ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ１ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ１ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ１ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－リンカードメイン（８）、
－Ｆａｂ３ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ３ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ３ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ３ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ３ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ３ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、および
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第１のＦｃドメインを含む、第１のポリペプチドと、
・ＮからＣ末端配向で
－Ｆａｂ２ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ２ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ２ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ２ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ２ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ２ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－リンカードメイン（８）、
－Ｆａｂ４ドメインの軽鎖成分に会合したＦａｂ４ ＶＨドメイン（１）およびＦａｂ４ ＣＨ１ドメイン（２）を含むＦａｂ４ドメインの重鎖成分であって、ポリペプチドの形態の軽鎖成分が、ＮからＣ末端配向で、Ｆａｂ４ ＶＬドメイン（６）およびＦａｂ４ ＣＬドメイン（７）を含む、重鎖成分、
－ジスルフィド結合を介して第２のポリペプチドにおけるヒンジドメインに連結されたヒンジドメイン（３）、および
－ＣＨ２ドメイン（４）およびＣＨ３ドメイン（５）を含む第２のＦｃドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインが互いに会合してＦｃ領域を形成する、図３Ｂ～３Ｄに示される実施形態フォーマットＣ ＡＢＭを提供する。
図３Ｂ～３Ｄに示されるフォーマットＣ ＡＢＭの実施形態は、４つの結合ドメイン（Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４）を含有するが、本開示のフォーマットＣ ＡＢＭは、追加の結合ドメイン、例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂドメインを含有し得る。しかしながら、特定の態様では、Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４は、本開示のフォーマットＣ ＡＢＭの単独の結合ドメインである。
フォーマットＣ ＡＢＭのＦａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、非結合性（図３Ｂに示されるように）または結合性（図３Ｃおよび図３Ｄに示されるように）であり得る。Ｆａｂ３およびＦａｂ４が非結合性であるそれらの実施形態は、一般に、本明細書ではフォーマットＣ１ ＡＢＭと呼ばれ、このフォーマットは、本明細書では「クランプ」フォーマットと呼ばれることがある。Ｆａｂ３およびＦａｂ４が結合性であるそれらの実施形態は、一般に、本明細書ではフォーマットＣ２ ＡＢＭと呼ばれ、このフォーマットは、本明細書では「タンデムＦａｂ」フォーマットと呼ばれることがある。「２＋２タンデムＦａｂ」という用語は、図３Ｃおよび３Ｄに示される実施形態を指し、Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４は、タンデムＦａｂにおける単独の結合ドメインである。フォーマットＣ１およびフォーマットＣ２ ＡＢＭの各々は、ホモダイマーまたはヘテロダイマーであり得る。
フォーマットＣ１ ＡＢＭの特定の実施形態では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメインは、非同一であり（例えば、同じ標的分子上または異なる標的分子上にかかわらず、異なるエピトープに結合し）、Ｆａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、同一の非結合ドメインである。他の実施形態では、Ｆａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、異なる非結合ドメインである。
フォーマットＣ２ ＡＢＭの特定の実施形態では、図３Ｃに示されるように、Ｆａｂ１およびＦａｂ３ドメインは、同一のＶＨドメインを含み、Ｆａｂ２およびＦａｂ４ドメインは、同一のＶＨドメインを含む。この構成は、構成１、または１－１－２－２構成と呼ばれる。フォーマットＣ２ ＡＢＭの代替の実施形態では、図３Ｄに示されるように、Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメインは、同一のＶＨドメインを含み、Ｆａｂ３およびＦａｂ４ドメインは、同一のＶＨドメインを含む。この構成は、構成２、または１－２－１－２構成と呼ばれる。
完全ＡＢＭは、Ｆｃ領域を形成する２つのＦｃドメインを通した２つの半抗体の会合によって形成される。２つの半抗体が非同一である場合、例えば、Ｆａｂ１およびＦａｂ２が異なるＶＨドメインを含む場合、例えば、セクション６．２．７．２に記載されるような、Ｆｃヘテロダイマー化アプローチを利用して、正しい半抗体対形成またはそれらの精製を促進することができる。ヘテロダイマー化アプローチの例は、星型変異（セクション６．２．７．２に記載）またはノブインホール変異である。
図２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、および３Ｃは、Ｆｃヘテロダイマーによって対形成された各半抗体において非同一のＶＨドメインを含むＡＢＭを示すが、このフォーマットは、Ｆｃホモダイマーにも使用することができる。例えば、図２Ｂおよび図３Ａは、それぞれ、Ｆｃヘテロダイマーを含むフォーマットＡ ＡＢＭおよびフォーマットＢ ＡＢＭを示すが、Ｆａｂ１およびＦａｂ２における異なるＶＨドメインの組み込み、ならびに多重特異性、例えば、二重特異性の結合分子の産生を可能にし、このフォーマットは、Ｆｃホモダイマーおよび同一のＶＨドメインを有する単一特異性フォーマットＡおよびフォーマットＢ ＡＢＭにも使用することができる。同様に、Ｆｃホモダイマーを使用して、同一のＦａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４ ＶＨドメイン、または同一のＦａｂ１およびＦａｂ２ ＶＨドメイン、ならびに非結合Ｆａｂ３およびＦａｂ４ ＶＨドメインを有する、単一特異性フォーマットＣ ＡＢＭを産生することができる。
さらに、第１および第２のポリペプチドが、異なるＶＨドメインを含む場合、異なる戦略を使用して、多重特異性結合分子における正しいＶＨ－ＶＬ対形成を可能にすることができる。例えば、ＡＢＭにおける２つ以上のタイプのＶＨドメインと作動可能に対形成することができる共通の軽鎖を使用することができる。そのような実施形態では、軽鎖ポリペプチド（例えば、Ｆａｂ１およびＦａｂ２、ならびに存在する場合、Ｆａｂ３およびＦａｂ４に会合した軽鎖）は、同一であり得る。あるいは、重鎖成分（（１）および（２））が、軽鎖成分（（６）および（７））との融合体として発現され得る、単一ドメインＦａｂを使用することができる。
図１～３に示される本開示のＡＢＭの変形は、限定することを意図するものではなく、本開示のＡＢＭは、とりわけ、図１～３および以下のセクション６．２に示される修飾の任意の組み合わせを含むことができる。さらに、第１もしくは第２のポリペプチド鎖または左もしくは右半抗体を参照することは、便宜のためのみであり、ポリペプチド鎖または半抗体が任意の特定の順序で産生されるか、または組み立てられることを伝えることを意図するものではない。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭの第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインおよび第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメインは、各々同じ標的分子、例えば、小可溶性分子に結合することができる。第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインおよび第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメインは、同じエピトープに結合することができる（例えば、両方のＦａｂ１およびＦａｂ２が同一のＶＨドメイン（図示せず）を有する、図１Ｂおよび図３Ｄに示される実施形態、または図３Ａもしくは図３Ｂの変形）か、またはそれらは、同じ標的分子上または異なる標的分子上にかかわらず、異なるエピトープに結合することができる（例えば、図２Ｂ、図３Ａ、図３Ｂ、および図３Ｃに示される実施形態）。第１のＦａｂ（Ｆａｂ１）ドメインおよび第２のＦａｂ（Ｆａｂ２）ドメインが、異なるエピトープ、例えば、同じ標的分子上または異なる標的分子上の２つの異なるエピトープに結合する場合、それらは、Ｆａｂがそれらのエピトープに同時に結合することができるように選択され得る。
いくつかの実施形態では、例えば、フォーマットＣ ＡＢＭについて、本開示のＡＢＭは、図３Ｃ、図３Ａ、および図３Ｄに示されるように、第３のＦａｂ（Ｆａｂ３）ドメインおよび第４のＦａｂ（Ｆａｂ４）ドメインを含むことができる。第３および第４のＦａｂドメインは、図３Ｃに示されるように、非結合性であり得るか、またはそれらは、それぞれ、第１および第２のＦａｂ（Ｆａｂ１およびＦａｂ２）ドメインによって結合されるエピトープと同じもしくは異なるエピトープに結合することができる。本明細書で使用される場合、フォーマットＣ ＡＢＭに関して、「第１および第２のＦａｂドメイン」ならびに「Ｆａｂ１およびＦａｂ２ドメイン」という用語は、典型的には、最もＮ末端のＦａｂドメインを指す。
特定の標的分子、特に、リピートモチーフを有するポリペプチドまたはマルチマー構造を有するタンパク質（例えば、ホモダイマーまたはホモトリマー）に存在し得るような、繰り返されたエピトープを有するものは、２つ以上の抗体分子によって結合され、大きな複合体の形成をもたらし得る。大きく、不均一な抗体複合体の産生は、「ペーパードーリング」と呼ばれる。抗体の大きな複合体は、食作用によって急速に排除され、抗体の低減した有効性をもたらし得る。大きな複合体はまた、治療抗体の免疫原性を増加させることができる。例えば、ＷＯ２０２００４７０６７Ａ１を参照されたい。本開示のＡＢＭは、Ｆａｂドメインが得られた親抗体と比較して、例えば、インビボまたはエクスビボで凝集する傾向が少ない可能性がある。非限定的な例として、両方のＦａｂが異なるエピトープで同じ抗原に結合する二重特異性ＡＢＭについて、親ｍＡｂの組み合わせで得られた結果とは異なり、本開示のＡＢＭが主に、追加の高次複合体をほとんどまたはまったく有しないリガンドとの別個の１：１複合体を形成したことが観察された（以下の実施例４を参照されたい）。対照的に、親ｍＡｂの組み合わせは、複数の高次構造（マルチマー）を形成し、これらの親抗体が複数のリガンド間の架橋を形成したことを示し、例えば、折り畳まれていない「ペーパードール」構造を形成する。これらの結果は、Ｆａｂドメインの近接が高次構造に対して１：１Ｆｃ－Ｆａｂリガンド複合体の形成に有利であると考えられるため、本明細書に開示されるＡＢＭが凝集する傾向がないことを示す。実際には、これは、親抗体について予想されるよりも高い相対濃度の単一ＡＢＭ：標的分子複合体をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、少なくとも２つの異なるエピトープ（および場合によっては３つまたは４つの異なるエピトープ）に特異的に結合する。少なくとも２つの異なるエピトープは、同じ標的分子または異なる標的分子上にあり得る。
６．２．１．Ｆａｂドメイン
本開示のＡＢＭは、各半抗体に少なくとも１つのＦａｂドメインを含む。Ｆａｂドメインは、従来、パパインなどの酵素を使用した免疫グロブリン分子のタンパク質分解による切断によって産生された。本開示のＡＢＭでは、Ｆａｂドメインは、より大きな分子の一部として組換え的に発現される。
Ｆａｂドメインは、任意の好適な種からの定常および可変ドメイン配列を含むことができ、よって、マウス、キメラ、ヒト、またはヒト化であり得る。
Ｆａｂドメインは、典型的には、ＶＬドメインに付着したＣＬドメインと対形成するＶＨドメインに付着したＣＨ１ドメインを含む。野生型免疫グロブリンでは、ＶＨドメインは、ＶＬドメインと対形成されてＦｖ領域を構成し、ＣＨ１ドメインは、ＣＬドメインと対形成されて結合モジュールをさらに安定化する。２つの定常ドメイン間のジスルフィド結合は、Ｆａｂドメインをさらに安定化させることができる。
本開示のＡＢＭについて、特に軽鎖が共通のまたは普遍的な軽鎖ではない場合、Ｆａｂヘテロダイマー化戦略を使用して、同じＡＢＳに属するＦａｂドメインの正しい会合を可能にし、別のＡＢＳに属するＦａｂドメインの異常な対形成を最小限に抑えることが有利である。例えば、以下の表Ｂに示されるＦａｂヘテロダイマー化戦略を使用することができる。
Figure 2022543669000004
したがって、特定の実施形態では、Ｆａｂの２つのポリペプチド間の正しい会合は、例えば、ＷＯ２００９／０８０２５１に記載されるように、ＦａｂのＶＬおよびＶＨドメインを互いに交換するか、またはＣＨ１およびＣＬドメインを互いに交換することによって促進される。
正しいＦａｂ対形成はまた、ＣＨ１ドメインにおける１つ以上のアミノ酸修飾およびＦａｂのＣＬドメインにおける１つ以上のアミノ酸修飾、ならびに／またはＶＨドメインにおける１つ以上のアミノ酸修飾およびＶＬドメインにおける１つ以上のアミノ酸修飾を導入することによって促進され得る。修飾されるアミノ酸は、典型的には、Ｆａｂ成分が、他のＦａｂの成分ではなく、互いに優先的に対形成するように、ＶＨ：ＶＬおよびＣＨ１：ＣＬ界面の一部である。
一実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、残基のＫａｂａｔ番号付けによって示される可変（ＶＨ、ＶＬ）および定常（ＣＨ１、ＣＬ）ドメインの保存されたフレームワーク残基に限定される。Ａｌｍａｇｒｏ，２００８，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ Ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３：１６１９－１６３３は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、およびＩＭＧＴ番号付けスキームに基づいたフレームワーク残基の定義を提供する。
一実施形態では、ＶＨおよびＣＨ１ならびに／またはＶＬおよびＣＬドメインに導入された修飾は、互いに相補的である。重鎖および軽鎖の界面での相補性は、立体的および疎水性接触、静電／電荷相互作用、または様々な相互作用の組み合わせに基づいて達成することができる。タンパク質表面間の相補性は、ロックアンドキーフィット、ノブイントゥホール、突起および空洞、ドナーおよびアクセプターなどの観点で文献に広く記載されており、すべて２つの相互作用する表面間の構造的および化学的一致の性質を意味する。
一実施形態では、１つ以上の導入された修飾は、Ｆａｂ成分の界面にかけて新しい水素結合を導入する。一実施形態では、１つ以上の導入された修飾は、Ｆａｂ成分の界面にかけて新しい塩橋を導入する。例示的な置換は、ＷＯ２０１４／１５０９７３およびＷＯ２０１４／０８２１７９に記載されており、それらの内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメインにおける１９２Ｅ置換、ならびにＣＬドメインにおける１１４Ａおよび１３７Ｋ置換を含み、これは、ＣＨ１ドメインとＣＬドメインとの間に塩橋を導入する（例えば、Ｇｏｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９６：３１９９－２１１を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメインにおける１４３Ｑおよび１８８Ｖ置換、ならびにＣＬドメインにおける１１３Ｔおよび１７６Ｖ置換を含み、これは、ＣＨ１とＣＬドメインとの間の接触の疎水性および極性領域を交換するのに役立つ（例えば、Ｇｏｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９６：３１９９－２１１を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂドメインは、Ｆａｂドメインの正しいアセンブリを促進する直交Ｆａｂ界面を導入するために、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、ＣＬドメインのいくつかまたはすべてにおける修飾を含むことができる（Ｌｅｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３２：１９１－１９８）。一実施形態では、３９Ｋ、６２Ｅ修飾は、ＶＨドメインに導入され、Ｈ１７２Ａ、Ｆ１７４Ｇ修飾は、ＣＨ１ドメインに導入され、１Ｒ、３８Ｄ、（３６Ｆ）修飾は、ＶＬドメインに導入され、Ｌ１３５Ｙ、Ｓ１７６Ｗ修飾は、ＣＬドメインに導入される。別の実施形態では、３９Ｙ修飾は、ＶＨドメインに導入され、３８Ｒ修飾は、ＶＬドメインに導入される。
Ｆａｂドメインはまた、天然ＣＨ１：ＣＬジスルフィド結合を操作されたジスルフィド結合で置き換えるように修飾することができ、それによってＦａｂ成分対形成の効率を向上させる。例えば、操作されたジスルフィド結合は、ＣＨ１ドメインに１２６Ｃ、ＣＬドメインに１２１Ｃを導入することによって、導入することができる（例えば、Ｍａｚｏｒ ｅｔ ａｌ．，２０１５，ＭＡｂｓ ７：３７７－８９を参照されたい）。
Ｆａｂドメインはまた、ＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを、正しいアセンブリを促進する代替ドメインで置き換えることによって、修飾することができる。例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５，ＭＡｂｓ ７：３６４－７６は、ＣＨ１ドメインをＴ細胞受容体の定常ドメインで置換し、ＣＬドメインをＴ細胞受容体のｂドメインで置換し、これらのドメイン置換を、ＶＬドメインに３８Ｄ修飾を導入し、ＶＨドメインに３９Ｋ修飾を導入することによるＶＬドメインとＶＨドメインとの間の追加の電荷－電荷相互作用で対形成することを記載する。
正しいＶＨ－ＶＬ対形成を促進するためのＦａｂヘテロダイマー化戦略の使用の代わりに、またはそれに加えて、共通の軽鎖（普遍的な軽鎖とも呼ばれる）のＶＬは、本開示のＡＢＭの各Ｆａｂ ＶＬ領域に使用することができる。様々な実施形態では、本明細書に記載されるように共通の軽鎖を使用することは、元の同族ＶＬを使用することと比較して、ＡＢＭの不適切な種の数を低減する。様々な実施形態では、ＡＢＭのＶＬドメインは、共通の軽鎖を含む単一特異性抗体から特定される。様々な実施形態では、ＡＢＭのＶＨ領域は、限定されたヒト軽鎖レパートリーを発現するように予め操作されたマウスＢ細胞内にインビボで再配置されるヒト重鎖可変遺伝子セグメント、またはヒト重鎖と同族の単一ヒト軽鎖を含み、目的の抗原での曝露に応答して、１つの、または２つの可能なヒトＶＬのうちの１つと同族である複数のヒトＶＨを含有する抗体レパートリーを生成し、抗体レパートリーは、目的の抗原に特異的である。共通の軽鎖は、再配置されたヒトＶκ１－３９Ｊκ５配列または再配置されたヒトＶκ３－２０Ｊκ１配列に由来するものであり、体細胞変異（例えば、親和性成熟）バージョンを含む。例えば、米国特許第１０，４１２，９４０号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、典型的には、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、ＣＬ、およびリンカーを含む、単鎖Ｆａｂ（「ｓｃＦａｂ」）のフォーマットである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦａｂのドメインは、以下のＮ末端からＣ末端の順序で配置される：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１、またはｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬ。リンカーは、セクション６．２．３に記載されるリンカーであり得、好ましくは、少なくとも３０アミノ酸であり、特定の態様では、３２～５０アミノ酸である。単鎖Ｆａｂドメインは、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合を介して安定化される。
６．２．２．ｓｃＦｖ
単鎖Ｆｖまたは「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、単一のポリペプチド鎖に抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、単鎖ポリペプチドとして発現することができ、それらが由来する無傷の抗体の特異性を保持する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが標的結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦＶのＶＨ鎖およびＶＬ鎖を接続するのに適したリンカーの例は、セクション６．２．３において特定されるリンカーである。
特に明記されない限り、本明細書で使用される場合、ｓｃＦｖは、ＶＬおよびＶＨ可変領域をいずれかの順序で有し得、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に関して、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。
ｓｃＦｖは、マウス、ヒト、またはヒト化ＶＨおよびＶＬ配列などの、任意の好適な種からのＶＨおよびＶＬ配列を含むことができる。
ｓｃＦｖコード核酸を作製するために、ＶＨおよびＶＬコードＤＮＡフラグメントは、リンカーをコードする、例えば、セクション６．２．３に記載されるリンカー（典型的にはアミノ酸グリシンおよびセリン、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３（配列番号４）を含有する配列のリピート）のいずれかをコードする別のフラグメントに作動可能に連結され、ＶＨおよびＶＬ配列は、連続した単鎖タンパク質として発現され得、ＶＬおよびＶＨ領域は、可撓性リンカーによって接合される（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４を参照されたい）。
６．２．３．リンカー
特定の態様では、本開示は、２つ以上のドメイン（例えば、ＦａｂおよびＦｃ領域）がリンカー（または「スペーサー」）ペプチドによって互いに接続されるＡＢＭを提供する。そのようなリンカーは、例えば、セクション６．４に記載されるＡＢＭに薬物を付着させるために使用される抗体－薬物コンジュゲート（「ＡＤＣ」）リンカーとは対照的に、本明細書では「ＡＢＭリンカー」と呼ばれる。
ペプチドリンカー（例えば、ポリグリシン）は、当該技術分野で周知であり、典型的には、融合タンパク質の成分の一方または両方の適切な折り畳みを可能にする。リンカーは、融合タンパク質の成分の可撓性接合領域を提供し、分子の２つの末端が独立して動くことを可能にし、２つの部分の適切な機能の各々を保持するのに重要な役割を果たし得る。したがって、接合領域は、場合によっては、２つの部分を一緒に組み合わせるリンカーとして、２つの部分の各々がその独自の生物学的構造を形成し、他の部分と干渉しないことを可能にするスペーサーとして作用する。
ＡＢＭリンカーは、２アミノ酸～６０アミノ酸以上の範囲であり得、特定の態様では、ペプチドリンカーは、３アミノ酸～５０アミノ酸、４～３０アミノ酸、５～２５アミノ酸、１０～２５アミノ酸、１０アミノ酸～６０アミノ酸、１２アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～５０アミノ酸、または２５アミノ酸～３５アミノ酸の長さの範囲である。
本開示は、それぞれ、第１のリンカーおよび第２のリンカーを各々含む、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド（例えば、セクション６．２に記載される実施形態の第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド）を含むＡＢＭを提供する。第１のリンカーおよび第２のリンカーは、０～６０または０～５０アミノ酸、例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０アミノ酸、例えば、０－１０、５－１５、１０－２０、１５－２５、０－３０、５－３０、１０－３０、２０－３０、０－４０、５－４０、１０－４０、１５－４０、２０－４０、２５－４０、３０－４０、３５－４０、０－５０、５－５０、１０－５０、１５－５０、２０－５０、２５－５０、３０－５０、３５－５０、４０－５０、または４５－５０アミノ酸の長さを有することができる。Ｆｃ－Ｆａｂ、クランプ、およびタンデムＦａｂフォーマットＡＢＭについて、典型的なリンカー長は、５～３０、例えば、５～３０アミノ酸残基である。リーチフォーマットＡＢＭについて、典型的なリンカーの長さは、２５～４５、例えば、３０～４０アミノ酸残基である。
荷電（例えば、荷電親水性リンカー）および／または可撓性リンカーが特に好ましい。本開示のＡＢＭに使用することができる可撓性リンカーの例は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９およびＫｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２７（１０）：３２５－３３０に開示されるものを含む。特に有用な可撓性リンカーは、グリシンおよびセリンのリピート、例えば、ＧｎＳまたはＳＧｎのモノマーまたはマルチマーであり、ｎは、１～１８の整数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８である。ＧｎＳまたはＳＧｎのうちの最も一般的なものは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）（すなわち、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎまたは（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ）リンカーであり、ｎは、モチーフのリピートの数を示す。
Ｇ４Ｓ（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）の４、５、６個以上のリピート（例えば、６、７、８、９、または１０個以上のリピート）および／または別の可撓性リンカーモチーフを含有する伸長リンカーは、リーチフォーマットに特に有用であり、伸長リンカーは、小可溶性分子に対するより大きな親和性および／または親和力をもたらすより可撓性の結合を提供すると考えられるスペーサーとして作用する。
いくつかの実施形態では、ＡＢＭリンカーは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（３Ｇｌｙ）、４Ｇｌｙ（配列番号５）、５Ｇｌｙ（配列番号６）、６Ｇｌｙ（配列番号７）、７Ｇｌｙ（配列番号８）、８Ｇｌｙ（配列番号９）、および９Ｇｌｙ（配列番号１０）などの、ポリグリシンリンカーである。
他の実施形態では、ＡＢＭリンカーは、グリシン－セリンリンカーである。そのようなリンカーの例はまた、Ｓｅｒ－Ｇｌｙ、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ、Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１１）、Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１２）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号３）、Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１３）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１４）、Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１５）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１６）、Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１７）、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）、および（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）ｎ（ＳＧ４は配列番号１３として開示される）を含み、ｎ（モチーフのリピートの数）＝１～１０である。（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）および（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）ｎ（ＳＧ４は配列番号１３として開示される）はまた、それぞれ、（Ｇ４Ｓ）ｎおよび（ＳＧ４）ｎとして知られる。一実施形態では、ペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）１（配列番号３）、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）２（配列番号１８）、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）３（配列番号４）、または（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）４（配列番号１９）である。いくつかの実施形態では、第１のリンカーおよび第２のリンカーは、同一のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリグリシンおよびセリンアミノ酸配列は、２～６つのリピーティングＧＧＧＧＳ（配列番号３）アミノ酸配列、例えば、２、３、４、５、または６つのリピーティングＧＧＧＧＳ（配列番号３）アミノ酸配列を含む。前述のモチーフのいずれかの４、５、６個以上のリピート（例えば、６、７、８、９、または１０個以上のリピート）を含有する伸長リンカーは、リーチフォーマットについて企図される。
６．２．４．ヒンジ領域
他の実施形態では、本開示のＡＢＭは、ヒンジ領域、例えば、２つのヒンジドメインから構成されるヒンジ領域を含む。ヒンジを使用して、ＦａｂドメインをＦｃドメインに接続するか、またはＡＢＭ構成を安定させることができる。
ヒンジ領域は、天然または修飾ヒンジ領域であり得る。ヒンジ領域は、典型的には、Ｆｃ領域のＮ末端に見られるが、いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、追加的または代替的に、本開示のＡＢＭのＦｃ領域のＣ末端に、例えば、図１３Ｂおよび図１３Ｃに示されるＦｃ－Ｆａｂ構成において見られ得る。
天然ヒンジ領域は、自然に発生する抗体におけるＦａｂドメインとＦｃドメインとの間に通常見られるヒンジ領域である。修飾ヒンジ領域は、天然ヒンジ領域とは長さおよび／または組成が異なる任意のヒンジである。そのようなヒンジは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サメ、ブタ、ハムスター、ラクダ、ラマ、またはヤギヒンジ領域などの、他の種からのヒンジ領域を含むことができる。他の修飾ヒンジ領域は、重鎖Ｆｃ領域のものとは異なるクラスまたはサブクラスの抗体に由来する完全なヒンジ領域を含み得る。あるいは、修飾ヒンジ領域は、天然ヒンジまたはリピーティング単位の一部を含み得、リピート中の各単位は、天然ヒンジ領域に由来する。さらなる代替では、天然ヒンジ領域は、１つ以上のシステインもしくは他の残基を、セリンもしくはアラニンなどの中性残基に変換することによって、または好適に配置された残基をシステイン残基に変換することによって改変され得る。そのような手段によって、ヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、増加または減少され得る。他の修飾ヒンジ領域は、完全に合成であり得、長さ、システイン組成、および可撓性などの所望の特性を有するように設計され得る。
いくつかの修飾ヒンジ領域は、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号、ＷＯ９９／１５５４９、ＷＯ２００５／００３１７０、ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０、ＷＯ９８／２５９７１、およびＷＯ２００５／００３１７１にすでに記載されており、これらは参照によって本明細書に組み込まれる。
様々な実施形態では、ヒンジドメイン内の２３３～２３６位は、Ｇ、Ｇ、Ｇ、および未占有；Ｇ、Ｇ、未占有、および未占有；Ｇ、未占有、未占有、未占有、および未占有；またはすべて未占有であり得、位置は、ＥＵ番号付けによって番号付けされる。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、同じアイソタイプ（例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４）の野生型ヒンジドメインと比較して、Ｆｃγ受容体についての結合親和性を低減する修飾ヒンジドメインを含む。
一実施形態では、本開示のＡＢＭの一方または両方の鎖のＦｃ領域は、そのＮ末端に無傷のヒンジドメインを有する。
一実施形態では、本開示のＡＢＭのＦｃ領域およびヒンジ領域の両方は、ｌｇＧ４に由来し、ヒンジ領域は、修飾された配列ＣＰＰＣ（配列番号２０）を含む。ヒトｌｇＧ４のコアヒンジ領域は、配列ＣＰＰＣ（配列番号２０）を含有するｌｇＧ１と比較して、配列ＣＰＳＣ（配列番号２１）を含有する。ｌｇＧ４配列に存在するセリン残基は、この領域における増加した可撓性をもたらし、したがって分子の一部分は、ＩｇＧ分子における他の重鎖に架橋して鎖間ジスルフィドを形成するのではなく、同じタンパク質鎖（鎖内ジスルフィド）内でジスルフィド結合を形成する（Ａｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０（１）：１０５－１０８）。セリン残基をプロリンに変更して、ｌｇＧ１と同じコア配列を与えることは、ｌｇＧ４ヒンジ領域における鎖間ジスルフィドの完全な形成を可能にし、よって精製産物における不均一性を低減する。この改変されたアイソタイプは、ｌｇＧ４Ｐと呼ばれる。
６．２．５．キメラヒンジ配列
ヒンジ領域は、キメラヒンジ領域であり得る。
例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わせた、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列を含むことができる。
特定の実施形態では、キメラヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号２２）（参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号８として以前に開示された）またはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号２３）（ＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号９として以前に開示された）を含む。そのようなキメラヒンジ配列は、ＩｇＧ４ ＣＨ２領域に好適に連結することができる（例えば、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、例えば、ヒトまたはマウスＦｃドメインに組み込むことによって、これは例えば、セクション６．２．７．１に記載されるように、エフェクター機能を低減するようにＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインにおいてさらに修飾することができる）。
６．２．６．低減したエフェクター機能を有するヒンジ配列
さらなる実施形態では、ヒンジ領域は、例えば、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６／１６１０１０Ａ２に記載されるように、修飾してエフェクター機能を低減することができる。様々な実施形態では、修飾ヒンジ領域の２３３～２３６位は、Ｇ、Ｇ、Ｇ、および未占有；Ｇ、Ｇ、未占有、および未占有；Ｇ、未占有、未占有、未占有、および未占有；またはすべて未占有であり、位置は、ＥＵ番号付けによって番号付けされる（ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２の図１に示される）。これらのセグメントは、ＧＧＧ－、ＧＧ－、Ｇ－－－、または－－－－として表すことができ、「－」は、未占有の位置を表す。
２３６位は、標準的なヒトＩｇＧ２では未占有であるが、他の標準的なヒトＩｇＧアイソタイプでは占有されている。２３３～２３５位は、４つすべてのヒトアイソタイプでは（ＷＯ２０１６／１６１０１０Ａ２の図１に示されるように）Ｇ以外の残基によって占有されている。
２３３～２３６位内のヒンジ修飾は、２２８位がＰによって占有されることと組み合わせることができる。２２８位は、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ２ではＰによって自然に占有されるが、ヒトＩｇＧ４ではＳ、ヒトＩｇＧ３ではＲによって占有される。ＩｇＧ４抗体におけるＳ２２８Ｐ変異は、ＩｇＧ４抗体を安定化し、外因性抗体と内因性抗体との間の重鎖軽鎖対の交換を低減するのに有利である。好ましくは、２２６～２２９位は、それぞれ、Ｃ、Ｐ、ＰおよびＣによって占有される。
例示的なヒンジ領域は、残基２２６－２３６を有し、ＧＧＧ－（２３３－２３６）、ＧＧ－－（２３３－２３６）、Ｇ－－－（２３３－２３６）、およびＧなし（２３３－２３６）と呼ばれる修飾ヒンジ配列によって占有される、中間（またはコア）および下部ヒンジと呼ばれることがある。任意に、ヒンジドメインアミノ酸配列は、ＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ－ＧＰＳＶＦ（配列番号２４）（ＷＯ２０１６／１６１０１０Ａ２の配列番号１として以前に開示された）、ＣＰＰＣＰＡＰＧＧ－－ＧＰＳＶＦ（配列番号２５）（ＷＯ２０１６／１６１０１０Ａ２の配列番号２として以前に開示された）、ＣＰＰＣＰＡＰＧ－－－ＧＰＳＶＦ（配列番号２６）（ＷＯ２０１６／１６１０１０Ａ２の配列番号３として以前に開示された）、またはＣＰＰＣＰＡＰ－－－－ＧＰＳＶＦ（配列番号２７）（ＷＯ２０１６／１６１０１０Ａ２の配列番号４として以前に開示された）を含む。
上記の修飾ヒンジ領域は、典型的には、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み、指定された領域に隣接する追加のヒンジセグメント（例えば、上部ヒンジ）を有し得る、重鎖定常領域に組み込むことができる。存在するそのような追加の定常領域セグメントは、典型的には、同じアイソタイプ、好ましくはヒトアイソタイプであるが、異なるアイソタイプのハイブリッドであり得る。そのような追加のヒト定常領域セグメントのアイソタイプは、好ましくはヒトＩｇＧ４であるが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３、またはドメインが異なるアイソタイプであるそれらのハイブリッドでもあり得る。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の例示的な配列は、ＷＯ２０１６／１６１０１０Ａ２の図２～４に示される。
具体的な実施形態では、修飾ヒンジ配列は、ＩｇＧ４ ＣＨ２領域に連結することができる（例えば、ＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、例えば、ヒトまたはマウスＦｃドメインに組み込むことによって、これは例えば、セクション６．２．７．１に記載されるように、エフェクター機能を低減するようにＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインにおいてさらに修飾することができる）。
６．２．７．Ｆｃドメイン
本開示のＡＢＭは、任意の適切な種に由来するＦｃ領域を含むことができる。一実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃドメインに由来する。
Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスｌｇＡ１およびｌｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、およびｌｇＧ４を含む）、およびＩｇＭを含む、任意の適切なクラスの抗体に由来することができる。一実施形態では、Ｆｃドメインは、ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、またはｌｇＧ４に由来する。一実施形態では、Ｆｃドメインは、ｌｇＧ１に由来する。一実施形態では、Ｆｃドメインは、ｌｇＧ４に由来する。
Ｆｃ領域内の２つのＦｃドメインは、互いに同じであるか、または異なり得る。天然抗体では、Ｆｃドメインは、典型的には、同一であるが、抗原結合分子、例えば、本開示のＡＢＭを産生する目的で、Ｆｃドメインは、以下のセクション６．２．７．２に記載されるように、有利に異なり、ヘテロダイマー化を可能にし得る。
天然抗体では、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの重鎖Ｆｃドメインは、２つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）で構成され、ＩｇＥおよびＩｇＭの重鎖Ｆｃドメインは、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）で構成される。これらはダイマー化してＦｃ領域を作製する。
本開示のＡＢＭにおいて、Ｆｃ領域、および／またはその内のＦｃドメインは、１つ以上の異なるクラスの抗体、例えば、１つ、２つ、または３つの異なるクラスからの重鎖定常ドメインを含むことができる。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ１に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ２に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ３に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ４に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＭからのＣＨ４ドメインを含む。ＩｇＭ ＣＨ４ドメインは、典型的には、ＣＨ３ドメインのＣ末端に位置する。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧに由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、ならびにＩｇＭに由来するＣＨ４ドメインを含む。
本開示のＡＢＭのためのＦｃ領域の産生における使用のための重鎖定常ドメインは、上記の自然に発生する定常ドメインのバリアントを含み得ることが理解されるであろう。そのようなバリアントは、野生型定常ドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸バリエーションを含み得る。一例では、本開示のＦｃ領域は、野生型定常ドメインから配列が異なる少なくとも１つの定常ドメインを含む。バリアント定常ドメインは、野生型定常ドメインよりも長くても短くてもよいことが理解されるであろう。好ましくは、バリアント定常ドメインは、野生型定常ドメインと少なくとも６０％同一または類似である。別の例では、バリアント定数ドメインは、少なくとも７０％同一または類似である。別の例では、バリアント定数ドメインは、少なくとも８０％同一または類似である。別の例では、バリアント定数ドメインは、少なくとも９０％同一または類似である。別の例では、バリアント定数ドメインは、少なくとも９５％同一または類似である。
ＩｇＭおよびＩｇＡは、共通のＨ２Ｌ２抗体ユニットの共有結合マルチマーとしてヒトにおいて自然に発生する。ＩｇＭは、Ｊ鎖が組み込まれた場合はペンタマーとして、Ｊ鎖を欠く場合はヘキサマーとして発生する。ＩｇＡは、モノマーおよびダイマー形態として発生する。ＩｇＭおよびＩｇＡの重鎖は、テールピースとして知られる、Ｃ末端定常ドメインへの１８アミノ酸伸長を有する。テールピースは、ポリマーにおいて重鎖間にジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含み、重合において重要な役割を果たすと考えられる。テールピースは、グリコシル化部位も含有する。特定の実施形態では、本開示のＡＢＭは、テールピースを含まない。
本開示のＡＢＭに組み込まれるＦｃドメインは、タンパク質の機能的特性を改変する１つ以上の修飾、例えば、ＦｃＲｎもしくは白血球受容体などのＦｃ受容体への結合、補体への結合、修飾されたジスルフィド結合構造、または改変されたグリコシル化パターンを含み得る。エフェクター機能を改変する例示的なＦｃ修飾は、セクション６．２．７．１に記載される。
Ｆｃドメインはまた、例えば、同一のＦｃドメインに対する非同一のＦｃドメインの優先的な対形成である、ヘテロダイマー化を可能にすることによって、非対称ＡＢＭの製造可能性を改善する修飾を含むように改変することができる。ヘテロダイマー化は、配列が異なるＦｃドメインを含有するＦｃ領域によって異なるＡＢＳが互いに接続されるＡＢＭの産生を可能にする。ヘテロダイマー化戦略の例をセクション６．２．７．２に例示する。
上記の修飾のいずれかを任意の好適な方法で組み合わせて所望の機能的特性を達成するか、かつ／または他の修飾と組み合わせてＡＢＭの特性を改変することができることが理解されるであろう。
６．２．７．１．改変されたエフェクター機能を有するＦｃドメイン
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体および／またはエフェクター機能への結合を低減する１つ以上のアミノ酸置換を含む。
特定の実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体、より具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ、またはＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態では、エフェクター機能は、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌の群から選択される１つ以上である。特定の実施形態では、エフェクター機能は、ＡＤＣＣである。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１、およびＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｌ２３４、Ｌ２３５、およびＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含む。そのような一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｉｇｄ Ｆｃ領域、特にヒトＩｇｄ Ｆｃ領域である。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９ＡまたはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）である。一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｐ３２９位にアミノ酸置換、ならびにＥ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、およびＰ３３１（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｐ３２９、Ｌ２３４、およびＬ２３５（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）位にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、Ｆｃ領域は、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」、または「ＬＡＬＡＰＧ」）を含む。
典型的には、同じ１つ以上のアミノ酸置換は、Ｆｃ領域の２つのＦｃドメインの各々に存在する。よって、特定の実施形態では、Ｆｃ領域の各Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇを含み（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付け）、すなわち、Ｆｃ領域における第１および第２のＦｃドメインの各々において、２３４位のロイシン残基は、アラニン残基（Ｌ２３４Ａ）で置き換えられ、２３５位のロイシン残基は、アラニン残基（Ｌ２３５Ａ）で置き換えられ、３２９位のプロリン残基は、グリシン残基（Ｐ３２９Ｇ）によって置き換えられる（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、エフェクター機能を低減するＤ２６５Ａ、Ｎ２９７Ａ変異（ＥＵ番号付け）を含むバリアントＩｇＧ１である。
別の実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への低減した結合を有するＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。Ｆｃ受容体への低減した結合を有する例示的なＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、以下の表Ｃから選択されるアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、以下に示される配列の太字部分のみを含む：
Figure 2022543669000005
Figure 2022543669000006
Figure 2022543669000007
Figure 2022543669000008
特定の実施形態では、低減したエフェクター機能を有するＩｇＧ４は、ＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号３１のアミノ酸配列の太字部分（本出願の配列番号３１のアミノ酸９９～３２６に対応する）を含み、本明細書ではＩｇＧ４またはｈＩｇＧ４と呼ばれることがある。
ヘテロダイマーＡＢＭについて、上記に記載されるバリアントＩｇＧ４ Ｆｃ配列の組み合わせ、例えば、ＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号３０（または本出願の配列番号３０のアミノ酸９９～３２９に対応する、その太字部分）およびＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号３７（または本出願の配列番号３２のアミノ酸９９～３２９に対応する、その太字部分）の組み合わせを含むＦｃ領域、またはＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号３１（または本出願の配列番号３１のアミノ酸９９～３２６に対応する、その太字部分）およびＷＯ２０１４／１２１０８７の配列番号３８（または本出願の配列番号３３のアミノ酸９９～３２６に対応する、その太字部分）の組み合わせを含むＦｃ領域を組み込むことが可能である。
６．２．７．２．Ｆｃヘテロダイマー化バリアント
多くの多重特異性分子フォーマットは、天然免疫グロブリンとは異なり、非同一の抗原結合ドメイン（またはその一部分、例えば、ＦａｂのＶＨまたはＶＨ－ＣＨ１）に作動可能に連結された、２つのＦｃドメイン間のダイマー化を伴う。Ｆｃドメインを形成する２つのＦｃ領域の不適切なヘテロダイマー化は、所望の多重特異性分子の収率を増加させるための障害であり得、精製の課題を表す。例えば、ＥＰ１８７０４５９Ａ１、米国特許第５，５８２，９９６号、米国特許第５，７３１，１６８号、米国特許第５，９１０，５７３号、米国特許第５，９３２，４４８号、米国特許第６，８３３，４４１号、米国特許第７，１８３，０７６号、米国特許出願公開第２００６／２０４４９３Ａ１号、およびＰＣＴ公開第２００９／０８９００４Ａ１号に記載されるように、本開示のＡＢＭに存在し得るＦｃドメインのダイマー化の増強において、当該技術分野で利用可能な様々なアプローチを使用することができる。
本開示は、Ｆｃヘテロダイマーを含むＡＢＭ、すなわち、異種、非同一のＦｃドメインを含むＦｃ領域を提供する。ヘテロダイマー化戦略は、異なるＡＢＳ（またはその一部分、例えば、ＦａｂのＶＨまたはＶＨ－ＣＨ１）に作動可能に連結されたＦｃ領域のダイマー化を増強し、同一のＡＢＳに作動可能に連結されたＦｃドメインのダイマー化を低減するために使用される。典型的には、Ｆｃヘテロダイマーにおける各Ｆｃドメインは、抗体のＣＨ３ドメインを含む。ＣＨ３ドメインは、前のセクションに記載されるように、任意のアイソタイプ、クラス、またはサブクラス、好ましくはＩｇＧ（ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、およびｌｇＧ４）クラスの抗体の定常領域に由来する。
ＣＨ３ドメインでの２つの異なる重鎖のヘテロダイマー化は、所望のＡＢＭを生じさせるが、同一の重鎖のホモダイマー化は、所望のＡＢＭの収率を低減させるであろう。よって、好ましい実施形態では、本開示のＡＢＭを形成するために会合する２つの半抗体は、未修飾鎖と比較してヘテロダイマー会合に有利な修飾を有するＣＨ３ドメインを含有するであろう。
具体的な実施形態では、Ｆｃヘテロダイマーの形成を促進する当該修飾は、Ｆｃドメインの１つにおける「ノブ」修飾および他のＦｃドメインにおける「ホール」修飾を含む、いわゆる「ノブイントゥホール」または「ノブインホール」修飾である。ノブイントゥホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、同第７，６９５，９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９：６１７－６２１、およびＣａｒｔｅｒ，２００１，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８：７－１５に記載される。一般に、方法は、第１のポリペプチドの界面に突起（「ノブ」）、第２のポリペプチドの界面に対応する空洞（「ホール」）を導入することを含み、ヘテロダイマー形成を促進し、ホモダイマー形成を妨げるために、突起を空洞内に配置することができる。突起は、第１のポリペプチドの界面からの小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。突起と同一または類似のサイズの代償性空洞は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面に作製される。
したがって、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸残基は、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それによって、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に突起を生成し、これは第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の空洞内に配置可能であり、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸残基は、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それによって、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の突起が配置可能である第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に空洞を生成する。好ましくは、より大きな側鎖体積を有する当該アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、より小さな側鎖体積を有する当該アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、およびバリン（Ｖ）からなる群から選択される。突起および空洞は、例えば、部位特異的変異誘発によって、またはペプチド合成によって、ポリペプチドをコードする核酸を変更することによって作製することができる。例示的な置換は、Ｙ４７０Ｔである。
特定のそのような実施形態では、第１のＦｃドメインにおいて、３６６位のスレオニン残基は、トリプトファン残基（Ｔ３６６Ｗ）で置き換えられ、Ｆｃドメインにおいて、４０７位のチロシン残基は、バリン残基（Ｙ４０７Ｖ）で置き換えられ、任意に、３６６位のスレオニン残基は、セリン残基（Ｔ３６６Ｓ）で置き換えられ、３６８位のロイシン残基は、アラニン残基（Ｌ３６８Ａ）で置き換えられる（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる実施形態では、第１のＦｃドメインにおいて、加えて、３５４位のセリン残基は、システイン残基（Ｓ３５４Ｃ）で置き換えられるか、または３５６位のグルタミン酸残基は、システイン残基（Ｅ３５６Ｃ）で置き換えられ（特に、３５４位のセリン残基はシステイン残基で置き換えられ）、第２のＦｃドメインにおいて、加えて、３４９位のチロシン残基は、システイン残基（Ｙ３４９Ｃ）によって置き換えられる（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。特定の実施形態では、第１のＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｓ３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含み、第２のＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
いくつかの実施形態では、静電ステアリング（例えば、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８５（２５）：１９６３７－４６に記載される）を使用して、Ｆｃドメインの第１および第２のサブユニットの会合を促進することができる。
ヘテロダイマー化を促進するために修飾されたＦｃドメインの使用の代替として、またはそれに加えて、Ｆｃドメインを修飾して、Ｆｃヘテロダイマーの選択を可能にする精製戦略を可能にすることができる。そのような一実施形態では、１つの半抗体は、プロテインＡへのその結合を無効にする修飾Ｆｃドメインを含み、よって、ヘテロダイマータンパク質をもたらす精製方法を可能にする。例えば、米国特許第８，５８６，７１３号を参照されたい。そのようなものとして、ＡＢＭは、第１のＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ ＣＨ３ドメインを含み、第１および第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸ほど互いに異なっており、少なくとも１つのアミノ酸の相違は、アミノ酸の相違を欠失する対応するＡＢＭと比較して、プロテインＡへＡＢＭの結合を低減させる。一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴエクソン番号付けによる、ＥＵ番号付けではＨ４３５Ｒ）などのプロテインＡ結合を低減または消失する変異／修飾を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによるものであり、ＥＵではＹ４３６Ｆ）をさらに含み得る。よって、修飾のクラスは、本明細書では「星型」変異と呼ばれる。
６．３．標的分子
本開示のＡＢＭは、各々、標的分子、例えば、小可溶性分子に特異的に結合する、少なくとも２つのＦａｂドメイン、Ｆａｂ１およびＦａｂ２を含む。特定の実施形態では、本開示のＡＢＭは、結合性または非結合性であり得る、２つの追加のＦａｂドメイン、Ｆａｂ３およびＦａｂ４をさらに含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、ならびに存在する場合、Ｆａｂ３およびＦａｂ４の結合形態によって結合される標的分子は、タンパク質分子である。
好ましくは、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、各々が同時にそのそれぞれのエピトープに特異的に結合することができるように選択される。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、各々、異なる標的分子、例えば、互いに相互作用することができる一対の分子（腫瘍関連抗原およびＣＤ３など）に特異的に結合する。他の実施形態では、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、同じ標的分子に、異なるエピトープまたは同じエピトープのいずれかに結合する。
本開示のＡＢＭは、低分子量タンパク質、例えば、１００ ｋＤａ未満、７５ ｋＤａ未満、または６０ ｋＤａ未満（グリコシル化などの翻訳後修飾を含むか、または含まない）の分子を有するタンパク質に結合するために特に利点であると考えられる。特定の実施形態では、本開示のＡＢＭによって結合されるタンパク質は、５ ｋＤａ～７５ ｋＤａ、５ ｋＤａ～６０ ｋＤａ、５ ｋＤａ～４５ ｋＤａ、５ ｋＤａ～３０ ｋＤａ、１０ ｋＤａ～７５ ｋＤａ、１０ ｋＤａ～６０ ｋＤａ、１０ ｋＤａ～４５ ｋＤａ、または１０ ｋＤａ～３０ ｋＤａの範囲の分子量を有し、いずれの場合もグリコシル化などの翻訳後修飾を含むか、または含まない。
Ｆａｂ１および／またはＦａｂ２が結合することができる例示的な標的分子は、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬＩ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグリカン、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣ１、ＡＲ、ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）、ＡＲＴ－４、Ｂ７、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧＩ、ＢＡＩｉ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲｌ（ＭＤＲｌＳ）、ＢｌｙＳ、ＢＭＰｌ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰＳ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｂａ－７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３－抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－Ｉ、ＣＡＳＰ－８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ８、ＣＤＩ－ＩＡ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ－ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＳ、ＣＳＲ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＳＰＩ、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬＩ（Ｉ－３０９）、ＣＣＬＩＩ（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬＩＳ（ＭＩＰ－１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬＩＳ（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）、ＳＬＣ、エクソダス－２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２Ｓ（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２Ｓ、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）、ＣＣＬＳ（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬＳ（ｍｃｐ－２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４Ｓ）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳＩ ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢ１）、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳ／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－ＬＩ）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬＩ（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤｌＣ、ＣＤ２００、ＣＤ－２２、ＣＤ２４、ＣＤ２Ｓ、ＣＤ３Ｓ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ４４、ＣＤ４ＳＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ４Ｓ、ＣＤＳ２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤＳＯ、ＣＤＳ１、ＣＤＳ３、ＣＤＳ６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３Ｓ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨｌＳ、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ７、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫＳ、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１ Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、キチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クローディン－７）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬＩＳＡ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａｌ、ＣＲ２、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬＡ－４、ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬＩ（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２Ｓ）、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬＩＯ（ＩＰ－１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬＳ（ＥＮＡ－７Ｓ／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢＳ、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＨＩＦ－１－ａ、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－ｍｅｔ、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４Ｓ１Ｊ０１１Ｓ、ＤＮＣＬＩ、ＤＰＰ４、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＥＬＦ２－Ｍ、Ｅｐ－ＣＡＭ、Ｅ２Ｆ１、ＥＣＧＦ１、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、ＥＮ０１、ＥＮ０２、ＥＮ０３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＥＧ、ＥＲＫＳ、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１Ｓ、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＩＬＩ（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２ＳＳ４、ＦＬＪ２ＳＳ３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＯＳ、ＦＯＳＬＩ（ＦＲＡ－１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、Ｆｌｔ－Ｉ、Ｆｌｔ－３、葉酸塩受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ＧＲＯＢ、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤＦＳ、ＧＦｉｌ、ＧＧＴｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲＳ１（ＦＫＳＧＳＯ）、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＧＳＴＰ１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣＳ、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＨＧＦ、ＨＩＰ１ヒスタミンおよびヒスタミン受容体、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭＩ ２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ－１）、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２または１ａ、ＩＧＦ－ＩＲ、
Figure 2022543669000009
ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ－１、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０ＲＡ、ＩＬ－１０ＲＢ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１１ＲＡ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ａ、ＩＬ－１２Ｂ、ＩＬ－１２ＲＢ１、ＩＬ－１２ＲＢ２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１３ＲＡ１、ＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ－１４、ＩＬ－１Ｓ、ＩＬ－１ＳＲＡ、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８ＢＰ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－１９、ＩＬ－ＩＡ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－１Ｆ１０、ＩＬ－１ＦＳ、ＩＬ－１Ｆ６、ＩＬ－１Ｆ７、ＩＬ－１Ｆ８、ＩＬ－１Ｆ９、ＩＬ－１ＨＹ１、ＩＬ－１Ｒ１、ＩＬ－１Ｒ２、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１ＲＡＰＬ１、ＩＬ－１ＲＡＰＬ２、ＩＬ－１ＲＬ１、ＩＬ－１ＲＬ２ ＩＬ－１ＲＮ、ＩＬ－２、ＩＬ－２０、ＩＬ－２０ＲＡ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２２ＲＡ２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２Ｓ、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８Ａ、ＩＬ－２８Ｂ、ＩＬ－２９、ＩＬ－２ＲＡ、ＩＬ－２ＲＢ、ＩＬ－２ＲＧ、ＩＬ－３、ＩＬ－３０、ＩＬ－３ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－５ＲＡ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＬ－７、ＩＬ－７Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－ＳＲＡ、ＩＬ－ＳＲＢ、ＩＬ－９、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－Ｋ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）インスリン様成長因子－Ｉ（ＩＧＦ－１）、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４ ＩＦＮＡＳ、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＷ１、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡｉ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦＳ（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１Ｓ、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫＳ、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプＩＩケラチン）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ－１－抗原、ＫＳ １－４、Ｌｅ－Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、ＬＡＭＡＳ、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ－ｐ７Ｓ、Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧまたはＯｍｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩＰ－２、ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン－ＩＩＩ）、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、ＮＹ－ＥＳ０－１、ＴＲＡＧ－３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＭ－１／２、ＭＵＭ－３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＮＣＫ２、ニューロカン、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇａ）、ＮｇＲｐ７Ｓ、ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＸＳ、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲＩＨ２、ＮＲＩＨ３、ＮＲＩＨ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲＳＡ１、ＮＲＳＡ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴＳＥ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＯＰＲＤ１、ＰＣＳＫ９、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＮＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、アルファ４ベータ７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、Ｌａｇ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＧＤＦＳ、ＣＧＲＰ、Ｌｉｎｇｏ－Ｉ、第ＩＸａ因子、第Ｘ因子、ＩＣＯＳ、ＧＡＲＰ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＲＯＲＩ、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、Ａ２ａＲ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣ１、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）、ＰＴＮ、膵臓がんムチン、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺性酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、１０ ＰＩＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ－ＩＲ、ＩＬ－６、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦｌ１０（ＺＮＦ１４４）、ＲＯＢ０２、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢＳ（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＳＨＢＧ、ＳＬＡ２、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＩＯＩ、ＳＡＧＥ、５１００、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ－α、Ｔｎ－抗原、ＴｈｏｍｓｏｎＦｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１０、ＴＤＧＦ１、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢｌｉｌ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ９、ＴＮＦ、ＴＮＦ－ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１Ｓ（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－ｌＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰＳ３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＰＳ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、ＷＴ－１、１７－ＩＡ抗原補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、ＣＳ、血管新生マーカー、ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、ＣＤ１９／ＣＤ３、ＢＣＭＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＩＬ１７ＲＡ／ＩＬ７Ｒ、ＩＬ－６／ＩＬ－２３、ＩＬ１／ＩＬ－８、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ／ＩＬ－２１、ＩＬ－２１Ｒ、ＡＮＧ２／ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ／ＰＤＧＦＲ－ベータ、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）アクセプター２／ＣＤ３、ＰＳＭＡ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、バーシカン、ＶＨＬ ＣＳ、ＶＬＡ－４、ｃ－ＦＭＳ／ＣＳＦＩＲ、ＲＥＴ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＩＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃ－ＫＩＴ、ＢＣＲ、インテグリン、ＭＭＰ ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＨＧＦ、アンジオポエチン、ＥＲＢＢ－３／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＲＢＢ－２／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３、ＰＳＣＡ／ＣＤ３、Ｃ－ＭＥＴ／ＣＤ３、ＥＮＤＯＳＩＡＬＩＮ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＩＧＦ－１Ｒ／ＣＤ３、ＦＡＰＡＬＰＨＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＩＧＦ－ＩＲ、ＩＬ ２５ １７Ａ／Ｆ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、およびＣＤ１９／ＣＤ１６、ＫＨＩ、Ｔｎ－抗原、ＴＦ－抗原、ＣＤ４４、糖脂質、スフィンゴ糖脂質、例えば、３０ Ｇｇ３、Ｇｂ３、ＧＤ３、ＧＤ２、Ｇｂ５、Ｇｍ１、Ｇｍ２、シアリルテトラオシルセラミド、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲＳ／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹ１、ならびにＺＦＰＭ２を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、例えば、Ｆａｂ１およびＦａｂ２を介して、標的分子の対に結合することができる。例示的な標的分子の対は、ＣＤ１３７およびＣＤ２０、ＣＤ１３７およびＥＧＦＲ、ＣＤ１３７およびＨｅｒ－２、ＣＤ１３７およびＰＤ－１、ＣＤ１３７およびＰＤＬ－１、ＶＥＧＦおよびＰＤ－Ｌ１、Ｌａｇ－３およびＴＩＭ－３、ＯＸ４０およびＰＤ－１、ＴＩＭ－３およびＰＤ－１、ＴＩＭ－３およびＰＤＬ－１、ＥＧＦＲおよびＤＬＬ－４、ＣＤ１３８およびＣＤ２０、ＣＤＩ ３８およびＣＤ４０、ＣＤＩ ９およびＣＤ２０、ＣＤ２０およびＣＤ３、ＣＤ３およびＣＤ３３、ＣＤ３およびＣＤ１３３、ＣＤ４７およびＣＤ２０、ＣＤ３８およびＣＤ１３８、ＣＤ３８およびＣＤ２０、ＣＤ２０およびＣＤ２２、ＣＤ３８およびＣＤ４０、ＣＤ４０およびＣＤ２０、ＣＤ－８およびＩＬ－６、ＣＳＰＧｓおよびＲＧＭ Ａ、ＣＴＬＡ－４およびＢＴＮ０２、ＩＧＦ１およびＩＧＦ２、ＩＧＦ１／２およびＥｒｂ２Ｂ、ＩＧＦ－１ＲおよびＥＧＦＲ、ＥＧＦＲおよびＣＤ１３、ＩＧＦ－１ＲおよびＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ－２およびＩＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－２およびＭｅｔ、ＶＥＧＦ－Ａおよびアンジオポエチン－２（Ａｎｇ－２）、ＩＬ－１２およびＴＷＥＡＫ、ＩＬ－１３およびＩＬ－１ベータ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦ、ＥｐＣＡＭおよびＣＤ３、Ｈｅｒ２およびＣＤ３、ＣＤ１９およびＣＤ３、ＥＧＦＲおよびＨｅｒ３、ＣＤ１６ａおよびＣＤ３０、ＣＤ３０およびＰＳＭＡ、ＥＧＦＲおよびＣＤ３、ＣＥＡおよびＣＤ３、ＴＲＯＰ－２およびＨＳＧ、ＴＲＯＰ－２およびＣＤ３、ＭＡＧおよびＲＧＭ Ａ、ＮｇＲおよびＲＧＭ Ａ、ＮｏｇｏＡおよびＲＧＭ Ａ、ＯＭＧｐおよびＲＧＭ Ａ、ＰＤＬ－１およびＣＴＬＡ－４、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１、ＰＤ－１およびＴＩＭ－３、ＲＧＭＡおよびＲＧＭ Ｂ、Ｔｅ３８およびＴＮＦａ、ＴＮＦａおよびＢｌｙｓ、ＴＮＦａおよびＣＤ－２２、ＴＮＦａおよびＣＴＬＡ－４ドメイン、ＴＮＦａおよびＧＰ１３０、ＴＮＦａおよびＩＬ－１２ｐ４０、ならびにＴＮＦａおよびＲＡＮＫリガンドを含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、例えば、Ｆａｂ１およびＦａｂ２を介して、１つ以上のサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、および／またはサイトカイン受容体、例えば、１つもしくは対のサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、および／またはサイトカイン受容体に結合することができる。例示的なサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、および／またはサイトカイン受容体は、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷ１、ＦＩＬＩ、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＩＬＩ（ＺＥＴＡ）、ＩＬＩＡ、ＩＬＩＢ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬＩＯ、ＩＬｉ１、ＩＬＩ２Ａ、ＩＬＩ２Ｂ、ＩＬＩ３、ＩＬＩ４、ＩＬＩ５、ＩＬＩ６、ＩＬＩ７、ＩＬＩ７Ｂ、ＩＬＩ８、ＩＬＩ９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＦＧＥＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＥＧＦＲ、ＲＯＲＩ、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ａ２ａＲ、ＣＤ４８、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ－ａ）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬＩＲ１、ＩＬＩＲ２、ＩＬＩＲＬＩ、ＩＬＩＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬＩＯＲＢ、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬＩ２ＲＢ１、ＩＬＩ２ＲＢ２、ＩＬＩ３ＲＡ１、ＩＬＩ３ＲＡ２、ＩＬＩ５ＲＡ、ＩＬＩ７Ｒ、ＩＬＩ８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬＩＲＡＰ、ＩＬＩＲＡＰＬＩ、ＩＬＩＲＡＰＬ２、ＩＬＩＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬＩ８ＢＰ、ＩＬＩ８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＩＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ、およびＴＨＰＯを含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、例えば、Ｆａｂ１およびＦａｂ２を介して、１つ以上のケモカイン、ケモカイン関連タンパク質、および／またはケモカイン受容体、例えば、１つもしくは対のケモカイン、ケモカイン関連タンパク質、および／またはケモカイン受容体に結合することができる。例示的なケモカイン、ケモカイン関連タンパク質、およびケモカイン受容体は、ＣＣＬＩ（Ｉ－３０９）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１／ＭＣＡＦ）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）、ＣＣＬＩＩ（エオタキシン）、ＣＣＬＩ３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬＩ５（ＭＩＰ－１ ｄ）、ＣＣＬＩ ６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬＩ ７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬＩ ８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬＩ９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＳＬＣ／エクソダス－２）、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬＩＯ（ＩＰ １０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＳＣＹＥ１、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧＳＯ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＨＭ７４、ＩＬＳＲＡ（ＩＬ８Ｒａ）、ＩＬＳＲＢ（ＩＬ８Ｒｂ）、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＴＣＰ１０、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＢＤＮＦ、Ｃ５Ｒ１、ＣＳＦ３、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＥＰＯ、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＤＦ５、ＨＩＦ１Ａ、ＩＬＳ、ＰＲＬ、ＲＧＳ３、ＲＧＳ１３、ＳＤＦ２、ＳＬＩＴ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、およびＶＨＬを含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、サイトカインの対、サイトカイン受容体、および／またはサイトカイン関連タンパク質に結合することができる。例示的なサイトカインの対は、ＩＬ－１ａおよびＩＬ－Ιβ、ＩＬ－１２およびＩＬ－１８、ＴＮＦａおよびＩＬ－２３、ＴＮＦａおよびＩＬ－１３、ＴＮＦおよびＩＬ－１８、ＴＮＦおよびＩＬ－１２、ＴＮＦおよびＩＬ－１ベータ、ＴＮＦおよびＭＩＦ、ＴＮＦおよびＩＬ－６、ＴＮＦおよびＩＬ－６受容体、ＴＮＦおよびＩＬ－１７、ＩＬ－１７およびＩＬ－２０、ＩＬ－１７およびＩＬ－２３、ＴＮＦおよびＩＬ－１５、ＴＮＦおよびＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲおよびＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦ、ＩＬ－１３およびＩＬ－９、ＩＬ－１３およびＩＬ－４、ＩＬ－１３およびＩＬ－５、ＩＬ－１３およびＩＬ－２５、ＩＬ－１３およびＴＡＲＣ、ＩＬ－１３およびＭＤＣ、ＩＬ－１３およびＭＩＦ、ＩＬ－１３およびＴＧＦ－β、ＩＬ－１３およびＬＨＲアゴニスト、ＩＬ－１３およびＣＬ２５、ＩＬ－１３およびＳＰＲＲ２ａ、ＩＬ－１３およびＳＰＲＲ２ｂ、ＩＬ－１３およびＡＤＡＭ ８、ならびにＴＮＦａおよびＰＧＥ４、ＩＬ－１３およびＰＥＤ２、ならびにＴＮＦおよびＰＥＧ２を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、単一のサイトカイン、サイトカイン受容体、またはサイトカイン関連タンパク質上の少なくとも２つのエピトープに結合することができる。例示的なサイトカインは、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－Ιβ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＴＮＦａ、ＩＬ－２３、ＩＬ－１３、ＭＩＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－１７、ＩＬ－２０、ＩＬ－１５、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＩＬ－９、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－２５、ＴＡＲＣ、ＭＤＣ、ＴＧＦ－β、ＬＨＲアゴニスト、ＣＬ２５、ＳＰＲＲ２ａ、ＳＰＲＲ２ｂ、ＡＤＡＭ ８、ＰＧＥ４、ＰＥＤ２、およびＰＥＧ２を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、従来のフォーマットの抗体または抗体フラグメントと比較して、同様のまたはより大きな親和性でその抗原標的に結合することができる。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、その標的分子に対してアゴニスト機能を有する。他の実施形態では、本開示のＡＢＭは、その抗原または標的分子に対して遮断および／またはアンタゴニスト機能を有する。
特定の態様では、本開示のＡＢＭは、ＡＢＭのＦａｂが由来し、例えば、従来のＩｇＧフォーマットと比較して同様またはより低いＩＣ５０を有する、親ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体などの親抗体（または親抗体の対）と比較して、その抗原または標的分子に対して同様またはより低いＩＣ５０を有する。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭは、単一のリガンドについて二重特異性であり、親抗体（複数可）と比較してより高いレベルで１：１リガンド複合体を形成する。
Ｆａｂ１およびＦａｂ２が同じ標的分子上の異なるエピトープに結合する場合、標的分子への結合は、好ましくは非競合性であり、すなわち、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、標的分子への結合（例えば、エピトープが重複していた場合、発生し得る）について競合しない。抗体と抗体フラグメントとの間の結合競合を測定するためのアッセイは、当該技術分野で知られており、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイ、および表面プラズモン共鳴アッセイを含む。
標的分子への結合についての競合は、例えば、Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸバイオセンサープラットフォーム（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．）でのリアルタイム、ラベルフリーバイオレイヤー干渉アッセイを使用して決定することができる。アッセイの具体的な実施形態では、アッセイ全体は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．４の緩衝液（ＨＢＳ－ＥＢＴ緩衝液）中で２５℃で、プレートを１０００ｒｐｍの速度で振盪しながら行われる。２つの抗体またはその抗原結合フラグメントが、それらの特定の標的抗原上のそれぞれのエピトープへの結合について互いに競合することができるかを評価するために、ペンタ－Ｈｉｓタグ付き標的抗原（「ペンタ－Ｈｉｓ」は配列番号３４として開示される）は、まず抗ペンタ－Ｈｉｓ抗体（「ペンタ－Ｈｉｓ」は配列番号３４として開示される）でコーティングされたＯｃｔｅｔバイオセンサーチップ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ、＃１８－５１２２）上に、バイオセンサーチップをペンタ－Ｈｉｓタグ付き標的抗原（「ペンタ－Ｈｉｓ」は配列番号３４として開示される）を含有するウェルに浸漬することによって捕捉される。抗原捕捉バイオセンサーチップは、次いで、Ａｂ－１の溶液（例えば、５０μｇ／ｍＬ溶液）を含有するウェルに浸漬することによって、第１の抗体またはその抗原結合フラグメント（その後Ａｂ－１と呼ばれる）で飽和させる。バイオセンサーチップは、次いでその後、第２の抗体またはその抗原結合フラグメント（その後Ａｂ－２と呼ばれる）の溶液（例えば、５０μｇ／ｍＬ溶液）を含有するウェルに浸漬される。バイオセンサーチップは、アッセイのすべてのステップ間にＨＢＳ－ＥＢＴ緩衝液で洗浄される。リアルタイム結合応答をアッセイの経過全体の間モニターすることができ、すべてのステップの終了時の結合応答を記録することができる。Ａｂ－１と予め複合体形成された標的抗原へのＡｂ－２結合の応答を比較することができ、同じ標的抗原に対する異なる抗体／抗原結合フラグメントの競合性／非競合性挙動を決定することができる。
様々な実施形態では、
・ＡＢＭ（例えば、フォーマットＡ ＡＢＭまたはフォーマットＢ ＡＢＭ）は、Ｆａｂ３およびＦａｂ４を含まず、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、同じ標的分子上の同じまたは異なるエピトープに結合し、
・ＡＢＭ（例えば、フォーマットＡ ＡＢＭまたはフォーマットＢ ＡＢＭ）は、Ｆａｂ３およびＦａｂ４を含まず、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、異なる標的分子に結合し、
・ＡＢＭ（例えば、フォーマットＣ ＡＢＭ）は、非結合Ｆａｂ３および非結合Ｆａｂ４を含み、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、同じ標的分子上の同じまたは異なるエピトープに結合し、
・ＡＢＭ（例えば、フォーマットＣ ＡＢＭ）は、非結合Ｆａｂ３および非結合Ｆａｂ４を含み、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、異なる標的分子に結合し、
・ＡＢＭ（例えば、フォーマットＣ ＡＢＭ）は、結合Ｆａｂ３および結合Ｆａｂ４を含み、Ｆａｂ１およびＦａｂ２は、同じエピトープに結合し、Ｆａｂ３およびＦａｂ４は、Ｆａｂ１およびＦａｂ２によって結合される標的分子と同じ、または異なる標的分子上のいずれかで、Ｆａｂ１およびＦａｂ２によって結合されるエピトープとは異なる同じエピトープに結合し、
・ＡＢＭ（例えば、フォーマットＣ ＡＢＭ）は、結合Ｆａｂ３および結合Ｆａｂ４を含み、Ｆａｂ１およびＦａｂ３は、同じエピトープに結合し、Ｆａｂ２およびＦａｂ４は、Ｆａｂ１およびＦａｂ３によって結合される標的分子と同じ、または異なる標的分子上のいずれかで、Ｆａｂ１およびＦａｂ３によって結合されるエピトープとは異なる同じエピトープに結合する。
Ｆａｂ１、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、およびＦａｂ４のうちの２つ以上が、標的分子上の同じエピトープに結合する場合、そのようなＦａｂドメインは、同じもしくは異なる重鎖ＣＤＲ配列および／または同じもしくは異なるＶＨ配列を有することができる。任意に、それらは、同じまたは異なるＶＬ配列を有することができる。
理論によって拘束されることなく、本開示のＡＢＭは、天然構成を有する親単一特異性抗体または二重特異性抗体よりも大きな親和性で標的分子に結合する利点を有すると考えられている。したがって、本開示のＡＢＭは、いくつかの実施形態では、天然構成を有する親単一特異性抗体または二重特異性抗体よりも大きな親和性で１つ以上の標的分子に結合することができる。例えば、ＡＢＭは、いくつかの実施形態では、細胞ベースの結合アッセイにおいて対応する親単一特異性抗体または二重特異性抗体よりも（例えば、セクション７に記載されるように）標的分子への結合についてより低いＫＤを有し、かつ／またはより強力なＥＣ５０値を有することができる。
所与の抗体またはＡＢＭのアゴニストまたはアンタゴニスト活性は、標的選択、エピトープカバレージ、およびフォーマットの選択に依存する。アゴニストおよびアンタゴニスト抗体の特定は、例えば、機能に基づくスクリーニングを通して、達成することができる。本開示のＡＢＭフォーマットは、小可溶性分子に対するアンタゴニスト活性にとって特に有利である。
６．４．抗体薬物コンジュゲート
本開示のＡＢＭは、特に、ＡＢＭががん治療剤としての使用を意図した場合、例えば、リンカーを介して、薬物部分にコンジュゲートすることができる。そのようなコンジュゲートは、便宜上、本明細書では抗体－薬物コンジュゲート（または「ＡＤＣ」）と呼ばれる。
特定の態様では、薬物部分は、細胞毒性または細胞増殖抑制活性を発揮する。一実施形態では、薬物部分は、メイタンシノイド、キネシン様タンパク質ＫＩＦ１１阻害剤、Ｖ－ＡＴＰアーゼ（液胞型Ｈ＋－ＡＴＰアーゼ）阻害剤、アポトーシス促進剤、Ｂｃｌ２（Ｂ細胞リンパ腫２）阻害剤、ＭＣＬ１（骨髄細胞白血病１）阻害剤、ＨＳＰ９０（熱ショックタンパク質９０）阻害剤、ＩＡＰ（アポトーシスの阻害剤）阻害剤、ｍＴＯＲ（ラパマイシンの機械的標的）阻害剤、微小管安定剤、微小管不安定剤、オーリスタチン、ドラスタチン、ＭｅｔＡＰ（メチオニンアミノペプチダーゼ）、ＣＲＭ１（染色体維持１）阻害剤、ＤＰＰＩＶ（ジペプチジルペプチダーゼＩＶ）阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ミトコンドリアにおけるホスホリル転移反応の阻害剤、タンパク質合成阻害剤、キナーゼ阻害剤、ＣＤＫ２（サイクリン依存性キナーゼ２）阻害剤、ＣＤＫ９（サイクリン依存性キナーゼ９）阻害剤、キネシン阻害剤、ＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、またはＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）阻害剤から選択される。
いくつかの実施形態では、細胞毒性剤は、以下の構造を有するメイタンシノイドである。
Figure 2022543669000010
いくつかの実施形態では、細胞毒性剤は、以下の構造を有するメイタンシノイドである。
Figure 2022543669000011
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、本開示のＡＢＭを含み、
Figure 2022543669000012
Figure 2022543669000013
は、ＡＢＭへの結合である。
いくつかの実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、本開示のＡＢＭを含み、
Figure 2022543669000014
Figure 2022543669000015
は、ＡＢＭへの結合である。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、本開示のＡＢＭおよび
Figure 2022543669000016
、または
Figure 2022543669000017
、または
それらの混合物を含み、
Figure 2022543669000018
は、本開示のＡＢＭへの結合である。
いくつかの実施形態では、結合は、システイン残基の硫黄成分を介してＡＢＭに連結される。
いくつかの実施形態では、結合は、リジン残基の窒素成分を介してＡＢＭに連結される。
本開示のＡＤＣでは、細胞毒性剤および／または細胞増殖抑制剤は、ＡＤＣリンカーによってＡＢＭに連結される。細胞毒性剤および／または細胞増殖抑制剤をＡＤＣのＡＢＭに連結するＡＤＣリンカーは、短、長、疎水性、親水性、可撓性、もしくは剛性であり得るか、またはリンカーが異なる特性を有するセグメントを含み得るように、各々独立して上記の特性のうちの１つ以上を有するセグメントで構成され得る。リンカーは、２つ以上の薬剤をＡＢＭ上の単一の部位に共有的に連結するように多価であり得るか、または共有的にそれらが単一の薬剤をＡＢＭ上の単一の部位に連結するように一価であり得る。
特定の態様では、リンカーは、切断可能なリンカー、切断不可能なリンカー、親水性リンカー、プロ荷電リンカー、またはジカルボン酸ベースのリンカーから選択される。
当業者によって理解されるように、ＡＤＣリンカーは、１つ場所で細胞毒性剤および／または細胞増殖抑制剤への共有連結、ならびに別の場所でＡＢＭへの共有連結を形成することによって、細胞毒性剤および／または細胞増殖抑制剤をＡＢＭに連結する。共有連結は、ＡＤＣリンカー上の官能基と薬剤およびＡＢＭ上の官能基との間の反応によって形成される。
ＡＤＣリンカーは、好ましくは、細胞外で条件に対して化学的に安定であるが、そうである必要はなく、細胞内で切断、破壊、および／または他の方法で特異的に分解するように設計され得る。あるいは、細胞内で特異的に切断または分解するように設計されないＡＤＣリンカーが使用され得る。安定対不安定ＡＤＣリンカーの選択は、細胞毒性剤および／または細胞増殖抑制剤の毒性に依存し得る。正常細胞に毒性である薬剤について、安定リンカーが好ましい。選択的であるか、または標的化され、正常細胞に対してより低い毒性を有する薬剤が利用され得、細胞外環境に対するＡＤＣリンカーの化学的安定性はあまり重要ではない。ＡＤＣの文脈で薬物をＡＢＭに連結するために有用な多種多様なＡＤＣリンカーは、当該技術分野で知られている。これらのＡＤＣリンカー、および他のＡＤＣリンカーのいずれかは、細胞毒性剤および／または細胞増殖抑制剤を本開示のＡＤＣのＡＢＭに連結するために使用され得る。
多くの細胞毒性剤および／または細胞増殖抑制剤を単一のＡＢＭ分子に連結するために使用され得る例示的な多価ＡＤＣリンカーは、例えば、ＷＯ２００９／０７３４４５、ＷＯ２０１０／０６８７９５、ＷＯ２０１０／１３８７１９、ＷＯ２０１１／１２００５３、ＷＯ２０１１／１７１０２０、ＷＯ２０１３／０９６９０１、ＷＯ２０１４／００８３７５、ＷＯ２０１４／０９３３７９、ＷＯ２０１４／０９３３９４、ＷＯ２０１４／０９３６４０に記載され、その内容は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、Ｍｅｒｓａｎａらによって開発されたＦｌｅｘｉｍｅｒリンカー技術は、良好な物理化学的特性を有する高ＤＡＲ ＡＤＣを可能にする潜在性を有する。Ｍｅｒｓａｎａ技術は、一連のエステル結合を介して、薬物分子を可溶化ポリアセタール骨格に組み込むことに基づく。方法論は、良好な物理化学的特性を維持しながら、高負荷ＡＤＣ（最大２０のＤＡＲ）を与える。
使用され得る例示的な一価ＡＤＣリンカーは、例えば、Ｎｏｌｔｉｎｇ，２０１３，Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １０４５：７１－１００、Ｄｕｃｒｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２１：５－１３、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５４：３６０６－３６２３、米国特許第７，２２３，８３７号、米国特許第８，５６８，７２８号、米国特許第８，５３５，６７８号、およびＷ０２００４／０１０９５７に記載され、これらの各々は、参照によって本明細書に組み込まれる。
限定ではなく例として、本開示のＡＤＣに含まれ得るいくつかの切断可能および切断不可能なＡＤＣリンカーを以下に記載する。
特定の実施形態では、選択されたＡＤＣリンカーは、インビボで切断可能である。切断可能なＡＤＣリンカーは、化学的または酵素的に不安定なまたは分解可能な連結を含み得る。切断可能なＡＤＣリンカーは、一般に、細胞質における還元、リソソームにおける酸性条件への曝露、細胞内の特定のプロテアーゼまたは他の酵素による切断などの、薬物を遊離させる細胞内部のプロセスに依存する。切断可能なＡＤＣリンカーは、一般に、化学的または酵素的のいずれかで切断可能な１つ以上の化学結合を組み込むが、ＡＤＣリンカーの残部は切断不可能である。特定の実施形態では、ＡＤＣリンカーは、ヒドラゾンおよび／またはジスルフィド基などの化学的に不安定な基を含む。化学的に不安定な基を含むリンカーは、血漿といくつかの細胞質コンパートメントとの間の異なる特性を利用する。ヒドラゾン含有ＡＤＣリンカーの薬物放出を促進する細胞内条件は、エンドソームおよびリソソームの酸性環境であるが、ジスルフィド含有ＡＤＣリンカーは、高チオール濃度、例えば、グルタチオンを含有する、サイトゾルにおいて還元される。特定の実施形態では、化学的に不安定な基を含むＡＤＣリンカーの形質安定性は、化学的に不安定な基の近くの置換基を使用して立体障害を導入することによって増加され得る。
切断可能なＡＤＣリンカーは、切断不可能な部分もしくはセグメントを含み得、かつ／または切断可能なセグメントもしくは部分は、そうでなければ切断不可能なＡＤＣリンカーに含まれ、それを切断可能にし得る。ほんの一例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および関連ポリマーは、ポリマー骨格に切断可能な基を含み得る。例えば、ポリエチレングリコールまたはポリマーＡＤＣリンカーは、ジスルフィド、ヒドラゾン、またはジペプチドなどの１つ以上の切断可能な基を含み得る。
ＡＤＣリンカーに含まれ得る他の分解可能な連結は、ＰＥＧカルボン酸または活性化ＰＥＧカルボン酸の、生物学的活性剤上のアルコール基との反応によって形成されるエステル連結を含み、そのようなエステル基は、一般に、生理学的条件下で加水分解して、生物学的活性剤を放出する。加水分解的に分解可能な連結は、これらに限定されないが、炭酸塩連結；アミンおよびアルデヒドの反応から生じるイミン連結；アルコールをリン酸塩基と反応させることによって形成されるリン酸エステル連結；アルデヒドおよびアルコールの反応産物であるアセタール連結；ギ酸塩およびアルコールの反応産物であるオルトエステル連結；ならびにポリマーの末端、およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基を含むが、これらに限定されない、ホスホラミダイト基によって形成されるオリゴヌクレオチド連結を含む。
特定の実施形態では、ＡＤＣリンカーは、酵素的に切断可能なペプチド部分、例えば、トリペプチドまたはジペプチドを含む。特定の実施形態では、ジペプチドは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｃｉｔ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｃｉｔ、Ｃｉｔ－Ａｌａ、Ａｓｎ－Ｃｉｔ、Ｃｉｔ－Ａｓｎ、Ｃｉｔ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｇｌｕ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ、Ｓｅｒ－Ｃｉｔ、Ｃｉｔ－Ｓｅｒ、Ｌｙｓ－Ｃｉｔ、Ｃｉｔ－Ｌｙｓ、Ａｓｐ－Ｃｉｔ、Ｃｉｔ－Ａｓｐ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、ｌｌｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、およびＴｒｐ－Ｃｉｔから選択される。特定の実施形態では、ジペプチドは、Ｃｉｔ－Ｖａｌ、およびＡｌａ－Ｖａｌから選択される。
上記または本明細書で論じられるＡＤＣの様々な実施形態のいずれにおいても、ＡＤＣは、１～２０、より典型的には２～１０の範囲の薬物：抗体比（または、この場合、薬物：ＡＢＭ比）を有することができる。
６．５．核酸および宿主細胞
別の態様では、本開示は、本開示のＡＢＭをコードする核酸を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＢＭは、単一の核酸によってコードされる。他の実施形態では、ＡＢＭは、複数の（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の）核酸によってコードされる。
単一の核酸は、単一のポリペプチド鎖を含むＡＢＭ、２つ以上のポリペプチド鎖を含むＡＢＭ、または３つ以上のポリペプチド鎖を含むＡＢＭの一部をコードすることができる（例えば、単一の核酸は、３つ、４つ以上のポリペプチド鎖を含むＡＢＭの２つのポリペプチド鎖、または４つ以上のポリペプチド鎖を含むＡＢＭの３つのポリペプチド鎖をコードすることができる）。別個の発現の制御のために、２つ以上のポリペプチド鎖をコードするオープンリーディングフレームを、別個の転写調節要素（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）の制御下に置くことができる。２つ以上のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームはまた、同じ転写調節要素によって制御され、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、別個のポリペプチドへの翻訳を可能にし得る。
いくつかの実施形態では、２つ以上のポリペプチド鎖を含むＡＢＭは、２つ以上の核酸によってコードされる。ＡＢＭをコードする核酸の数は、ＡＢＭ中のポリペプチド鎖の数以下（例えば、２つ以上のポリペプチド鎖が単一の核酸によってコードされる場合）であり得る。
本開示の核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり得る。
別の態様では、本開示は、本開示の核酸を含有する宿主細胞およびベクターを提供する。核酸は、本明細書に以下でより詳細に記載されるように、単一のベクターまたは同じ宿主細胞もしくは別個の宿主細胞に存在する別個のベクターに存在し得る。
６．５．１．ベクター
本開示は、本明細書に記載されるＡＢＭまたはＡＢＭ成分をコードするヌクレオチド配列、例えば、半抗体のポリペプチド鎖のうちの１つまたは２つを含むベクターを提供する。ベクターには、これらに限定されないが、ウイルス、プラスミド、コスミド、ラムダファージ、または酵母人工染色体（ＹＡＣ）が含まれる。
多数のベクターシステムを使用することができる。例えば、１つのクラスのベクターは、例えば、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶ、またはＭＯＭＬＶ）、またはＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡ要素を利用する。別のクラスのベクターは、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、およびフラビウイルスなどのＲＮＡウイルスに由来するＲＮＡ要素を利用する。
加えて、ＤＮＡをそれらの染色体に安定して組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することによって選択することができる。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主への原栄養性、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または銅などの重金属に対する耐性などを提供し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列に直接連結するか、または同時形質転換によって同じ細胞に導入することができる。ｍＲＮＡの最適な合成には、追加の要素が必要な場合もある。これらの要素は、スプライスシグナル、ならびに転写プロモーター、エンハンサー、および終結シグナルを含み得る。
構築物を含有する発現ベクターまたはＤＮＡ配列が発現のために調製されると、発現ベクターは、トランスフェクトするか、または適切な宿主細胞に導入することができる。これを達成するために、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、レトロウイルス形質導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質ベースのトランスフェクション、または他の従来の技法などの、様々な技法が使用され得る。得られるトランスフェクトされた細胞を培養し、発現されたポリペプチドを回収するための方法および条件は、当業者に知られており、本記載に基づいて、使用される特定の発現ベクターおよび哺乳動物宿主細胞に応じて変更または最適化され得る。
６．５．２．細胞
本開示はまた、本開示の核酸を含む宿主細胞を提供する。
一実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載される１つ以上の核酸を含むように遺伝子操作される。
一実施形態では、宿主細胞は、発現カセットを使用することによって遺伝子操作される。「発現カセット」という句は、そのような配列と適合性の宿主における遺伝子の発現に影響を与えることができる、ヌクレオチド配列を指す。そのようなカセットは、プロモーター、イントロンを伴うまたは伴わないオープンリーディングフレーム、および終結シグナルを含み得る。例えば、誘導性プロモーターなどの、発現をもたらすのに必要または有用な追加の因子も使用され得る。
本開示はまた、本明細書に記載されるベクターを含む宿主細胞を提供する。
細胞は、これらに限定されないが、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞、またはヒト細胞であり得る。好適な真核細胞には、Ｖｅｒｏ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞、およびＭＤＣＫＩＩ細胞が含まれるが、これらに限定されない。好適な昆虫細胞には、Ｓｆ９細胞が含まれるが、これに限定されない。
６．６．薬学的組成物
本開示のＡＢＭおよび／またはＡＤＣは、ＡＢＭおよび／またはＡＤＣならびに１つ以上の担体、賦形剤、および／または希釈剤を、任意に、改善された移動、送達、耐性などを提供する１つ以上の他の薬剤とともに含む、組成物の形態であり得る。組成物は、ヒトにおける薬学的使用または獣医使用などの特定の使用のために製剤化され得る。組成物の形態（例えば、乾燥粉末、液体製剤など）、ならびに使用される賦形剤、希釈剤、および／または担体は、ＡＢＭおよび／またはＡＤＣの意図される使用、ならびに治療上の使用について、投与様式に依存する。
患者に投与される、単一特異性抗原結合分子または二重特異性抗原結合分子などの抗原結合分子の用量は、患者の年齢および大きさ、標的疾患、状態、投与経路などに応じて変動し得る。好ましい用量は、典型的には、体重または体表面積に従って計算される。本開示の二重特異性抗原結合分子が成人患者において治療目的に使用される場合、本開示の抗原結合分子を、通常約０．０１～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の単一用量で、より好ましくは約０．０２～約７、約０．０３～約５、または約０．０５～約３ｍｇ／ｋｇ体重の単一用量で静脈内投与することが有利であり得る。状態の重症度に応じて、治療の頻度および期間を調整することができる。抗原結合分子を投与するための有効投与量およびスケジュールは、経験的に決定され、例えば、患者の経過は、定期的な評価によってモニターし、それに応じて用量を調整することができる。さらに、投与量の種間スケーリングは、当該技術分野において周知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１）。
治療使用について、組成物は、薬学的に許容される担体を含む無菌薬学的組成物の一部として供給され得る。この組成物は、（それを患者に投与する所望の方法に応じて）任意の好適な形態であり得る。薬学的組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、髄腔内、局所（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）、または局所（ｌｏｃａｌｌｙ）などの様々な経路によって患者に投与することができる。任意の所与の場合における投与に最も適した経路は、特定の抗体および／またはＡＤＣ、対象、ならびに疾患の性質および重症度ならびに対象の体調に依存するであろう。典型的には、薬学的組成物は、静脈内または皮下に投与されるであろう。
薬学的組成物は、用量当たりの本開示の所定量のＡＢＭおよび／またはＡＤＣを含有する単位剤形で便利に提示することができる。単位用量に含まれるＡＢＭおよび／またはＡＤＣの量は、治療される疾患、および当該技術分野で周知の他の因子に依存するであろう。そのような単位投与量は、単回投与に適した量のＡＢＭおよび／もしくはＡＤＣを含有する凍結乾燥された乾燥粉末の形態、または液体の形態であり得る。乾燥粉末単位剤形は、シリンジ、好適な量の希釈剤、および／または投与に有用な他の成分を備えたキットに包装され得る。液体形態の単位投与量は、単回投与に適した量のＡＢＭおよび／またはＡＤＣが予め充填されたシリンジの形態で便利に供給され得る。
薬学的組成物はまた、複数回の投与に適した量のＡＤＣを含有することから大量に供給され得る。
薬学的組成物は、所望の純度を有するＡＢＭおよび／またはＡＤＣを、当該技術分野で典型的に使用される任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤（これらのすべては本明細書で「担体」として参照される）、すなわち、緩衝剤、安定剤、防腐剤、等張剤、非イオン性洗浄剤、抗酸化剤、および他の種々の添加剤と混合することによって、凍結乾燥された製剤または水溶液としての保存のために調製され得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｏｓｏｌ，ｅｄ．１９８０）を参照されたい。そのような添加剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒であるべきである。
緩衝剤は、生理学的条件に近い範囲のｐＨを維持するのに役立つ。それらは、多種多様な濃度で存在し得るが、典型的には、約２ｍＭ～約５０ｍＭの範囲の濃度で存在するであろう。本開示での使用に適した緩衝剤には、有機および無機酸の両方、ならびにそれらの塩、例えば、クエン酸塩緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸塩緩衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸塩緩衝液（例えば、酒石酸－酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸酸－水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸塩緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸－フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸塩緩衝液（例えば、グルコン酸－グリコン酸ナトリウム混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グリコン酸カリウム混合物など）、シュウ酸塩緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸塩緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）、および酢酸塩緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）が含まれる。加えて、リン酸塩緩衝液、ヒスチジン緩衝液、およびトリスなどのトリメチルアミン塩を使用することができる。
防腐剤は、微生物成長を遅らせるために添加され得、約０．２％～１％（ｗ／ｖ）の範囲の量で添加することができる。本開示での使用に適した防腐剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、塩化ヘキサメトニウム、およびアルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、ならびに３－ペンタノールが含まれる。「安定剤」として知られる等張化剤は、本開示の液体組成物の等張性を確保するために添加することができ、多価糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールなどの三価または高級糖アルコールを含む。安定剤とは、増量剤から、治療剤を可溶化するか、または変性もしくは容器壁への接着を防止するのを助ける添加剤まで、機能の範囲が及び得る幅広いカテゴリーの賦形剤を指す。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記に列挙される）；アミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなど、有機糖または糖アルコール、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール、ガラクチトール、グリセロールなど（シクリトール、例えば、イノシトールを含む）；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基以下のペプチド）；タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン単糖類、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖類、例えば、ラクトース、マルトース、スクロース、およびトレハロース；ならびに三糖類、例えば、ラフィノース；ならびに多糖類、例えば、デキストランであり得る。安定剤は、ＡＤＣの重量当たり０．５～１０重量％の範囲の量で存在し得る。
非イオン性界面活性剤または洗浄剤（「湿潤剤」としても知られる）は、糖タンパク質を可溶化するのを助け、糖タンパク質を撹拌によって誘導される凝集に対して保護するために添加され得、これはまた、製剤が、タンパク質の変性を引き起こすことなく応力を印加されたせん断表面に曝露されることを可能にする。好適な非イオン性界面活性剤には、ポリソルベート（２０、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、およびプルロニックポリオールが含まれる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．０７ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在し得る。
追加の種々の賦形剤には、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が含まれる。
６．７．治療適応症
本開示のＡＢＭ、ＡＤＣ、および薬学的組成物は、本開示のＡＢＭによって結合される抗原または標的分子に関連する状態、例えば、抗原もしくは標的分子の異常な発現もしくは活性または抗原もしくは標的分子を発現する異常な細胞もしくは組織に関連する状態を治療するために使用することができる。本開示のＡＢＭ、ＡＤＣ、および薬学的組成物は、それを必要とする対象、例えば、ＡＢＭが結合する抗原または標的分子の異常な発現または活性に関連する状態の１つ以上の症状または兆候を示すヒトまたは非ヒト動物に投与することができる。
いくつかの実施形態では、本開示のＡＢＭ、ＡＤＣ、または薬学的組成物は、抗原または標的分子の刺激、活性化、および／または標的化が望まれる任意の疾患または障害を治療するために投与される。特定の実施形態では、本発明のＡＢＭは、抗原または標的分子の発現または活性に関連するか、またはそれによって媒介される任意の疾患または障害の治療、予防、および／または改善に使用され得る。
本開示のＡＢＭは、胸腺間質性リンホポイエチン（「ＴＳＬＰ」）、例えば、ヒトＴＳＬＰに結合する１つ以上のＦａｂドメイン（例えば、Ｆａｂ１および／またはＦａｂ２）を含有するＡＢＭによって例示することができる。ＴＳＬＰは、プロアロジェニック表現型で樹状細胞媒介性ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘導する免疫サイトカインである（Ｇｉｌｌｉｅｔ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９７（８）：１０５９－１０６３）。ＴＳＬＰは、アレルギー性炎症の開始に関与している（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：４２６－４３４）。ＴＳＬＰは、広範囲の細胞型（例えば、樹状細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、好酸球、好塩基球、肥満細胞、および２型自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ２）（Ｍｊｏｓｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３７（４）：６４９－５９）に作用して、炎症、および特に、２型炎症（サイトカインＩＬ－５、ＩＬ－１３、およびＩＬ－４の産生を特徴とする）を駆動する。２型炎症は、喘息ならびにアトピー性皮膚炎およびネザートン症候群などの他のアレルギー性疾患の特徴である。ＴＳＬＰは、線維性障害の促進における追加の役割を示す動物における線維芽細胞蓄積およびコラーゲン沈着を誘導することがわかっている。
したがって、ＴＳＬＰアンタゴニストであるＡＢＭは、炎症性、および特にアレルギー性炎症性、ならびに線維性障害の治療に有用である。ＴＳＬＰに（単一特異的または二重特異的のいずれかで）結合するＡＢＭは、治療を必要とする対象、例えば、ヒト対象においてＴＳＬＰシグナル伝達に関連した状態を治療するために使用することができる。ＴＳＬＰシグナル伝達に関連した例示的な状態には、喘息、特発性肺線維症、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、ネザートン症候群、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、食物アレルギー、アレルギー性下痢、好酸球性胃腸炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、アレルギー性真菌性副鼻腔炎、がん、リウマチ性関節炎、ＣＯＰＤ、全身性硬化症、ケロイド、潰瘍性大腸炎、慢性鼻副鼻腔炎（ＣＲＳ）、鼻ポリポーシス、慢性好酸球性肺炎、好酸球性気管支炎、セリアック病、チャーグ－ストラウス症候群、好酸球性筋痛症候群、高好酸球性症候群、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、および炎症性腸疾患が含まれる。
７．実施例
７．１．実施例１：代替フォーマット抗原結合分子の構築
サイトカインファミリーに属し、約１５～１８ ｋＤａ（グリコシル化の状態に応じて）の分子量を有するタンパク質である、ヒトＴＳＬＰの代替フォーマット二重特異性ＡＢＭの構築のために、非競合性親ｍＡｂを選択した。これらの親ｍＡｂは、共通の軽鎖を共有する。すべてのヘテロダイマー二重特異性ＡＢＭを、Ｆｃヘテロダイマー形成を促進するために、Ｆｃ領域に「ノブイントゥホール」変異で構築した（Ｍｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：６７７－６８１）。Ｆｃ－Ｆａｂフォーマット（図１Ｂおよび図２Ｂ）について、（Ｇ４Ｓ）ｎリンカー（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）、ｎ＝１～６を使用してＶＨ－ＣＨ１フラグメントをＦｃのＣ末端に接続することによって、重鎖を構築した。クランプフォーマット（図３Ｂ）では、内部Ｆａｂフラグメントは、不活性であり、ＴＳＬＰに結合しない。この不活性Ｆａｂフラグメントは、リーチフォーマット（図３Ａ）において、可撓性の長い（Ｇ４Ｓ）ｎリンカー（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）、ｎ＝６～８で置き換えられる。２＋２タンデムＦａｂフォーマットでは、すべての４つのＦａｂフラグメントは、機能的であり、抗原に結合することができる（図３Ｃ～３Ｄ）。クランプにおけるＦａｂフラグメントと２＋２タンデムＦａｂフォーマットとの間の短いリンカーは、２ｘＧ４Ｓ（配列番号１８）または３ｘＧ４Ｓ（配列番号４）である。
同様に、非競合性親ｍＡｂを、ヒトリガンドＸの二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの構築のために選択した。これらの親抗リガンドＸ ｍＡｂは、共通の軽鎖を共有する。
細胞表面標的について、Ｆｃ－Ｆａｂを、二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂに共通の軽鎖を共有するＦａｂフラグメントを使用し、低減したエフェクター機能を有するｈＩｇＧ４（ｈＩｇＧ４ｓとして示される）（ＵＳ９３５９４３７Ｂ２）またはｈＩｇＧ１のいずれかの定常領域を使用して、同様の方法で構築した。
ヒトＩｇＧ４定常領域を使用するすべての抗体は、半抗体形成を最小限に抑えるために、ヒンジ領域にＳ２２８Ｐ（ＥＵ）置換を含有する（Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２７：７６７－７７１）。
７．２．実施例２：抗原結合分子の発現
すべての代替フォーマット二重特異性ＡＢＭを、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）における一過性トランスフェクションによって発現した。Ｅｘｐｉ２９３Ｆ上清中のＡＢＭを、ＨｉＴｒａｐ ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ ＦＦカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を備えるＰｒｏｔｅｉｎＭａｋｅｒシステム（Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用して精製した。単一ステップ溶出後、ＡＢＭを中和し、５％グリセロールを含むリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の最終緩衝液に透析し、アリコートし、－８０℃で保存した。
７．３．実施例３：バイオアッセイにおける抗ｈＴＳＬＰ二重特異性ＡＢＭの活性
精製された抗ｈＴＳＬＰ二重特異性ＡＢＭを、ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいてｈＴＳＬＰ活性を阻害するそれらの能力について評価した。ｈＩＬ－７Ｒ、ｈＴＳＬＰＲ、およびＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーターを安定して発現するＢａｆ３細胞を、ＩＬ－３を含まない培地に４０，０００細胞／ウェルで播種し、一晩インキュベートした。ｈＴＳＬＰ用量応答曲線について、１：３段階希釈ｈＴＳＬＰを、１０ｎＭで開始するｈＴＳＬＰの最終濃度で、各ウェルに添加した（図４Ａ）。抗ｈＴＳＬＰ ＡＢＭの遮断活性を決定するために、ＡＢＭおよびｈＴＳＬＰがレポーター細胞に同時に添加された「レースフォーマット」遮断アッセイを使用した。抗ｈＴＳＬＰ ＡＢＭを、１００ｎＭで開始する各抗体の最終濃度で、１：３で段階希釈した。ヒトＴＳＬＰを、ＴＳＬＰ用量応答曲線の約ＥＣ５０で一定濃度まで添加した。５．５時間のインキュベーション後、プレートを室温で１５分間平衡化した。１００μｌのＯｎｅ－Ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに加えた。室温で５分のインキュベーション後、発光をＥｎｖｉｓｉｏｎで測定した。ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーターアッセイにおける３つの非競合性抗ｈＴＳＬＰ親抗体、３０２０６、３０２１７、および３０２３０の活性を図４Ｂに示す。これらの親ｍＡｂを使用した３つの二重特異性対形成を試験した。従来のｈＩｇＧ４二重特異性抗体は、対応する親抗体組み合わせと同様の遮断活性を示した（図５）。各二重特異性対形成について、すべての代替フォーマット二重特異性ＡＢＭは、従来のｈＩｇＧ４二重特異性抗体よりも良好な遮断活性を示した（図６Ａ～６Ｃ）。全体として、最良のフォーマットは、Ｆｃ－Ｆａｂ（図１３Ａに示されるヒンジ構成を有する）および試験されたすべての二重特異性対形成の２＋２タンデムＦａｂ＿ヘテロダイマーである。これらのＡＢＭのＩＣ５０値を、表５－１にまとめる。
Figure 2022543669000019
７．４．実施例４：多角度レーザー光散乱）と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳ）による抗ｈＴＳＬＰ二重特異性抗体と組換えｈＴＳＬＰとの間で形成されたインビトロ複合体のサイズ分析
７．４．１．概要
以下の表５－２に特定される抗ＴＳＬＰ ＡＢＭと組換えｈＴＳＬＰ（ＲＥＧＮ４００９）との間で形成されたインビボ複合体のサイズ分析を、多角度レーザー光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳ）を使用して行った：抗ＴＳＬＰ親Ａｂ ３０２０６ ｈＩｇＧ４、抗ＴＳＬＰ親Ａｂ ３０２１７ ｈＩｇＧ４、抗ＴＳＬＰ親Ａｂ ３０２３０ ｈＩｇＧ４、Ｆｃ－Ｆａｂ＿３０２０６ｘ３０２１７－２ｘＧ４Ｓ（「２ｘＧ４Ｓ」は配列番号１８として開示される）、Ｆｃ－Ｆａｂ＿３０２１７ｘ３０２３０－２ｘＧ４Ｓ（「２ｘＧ４Ｓ」は配列番号１８として開示される）、Ｃｌａｍｐ＿３０２０６ｘ３０２１７、Ｃｌａｍｐ＿３０２１７ｘ３０２３０、２＋２タンデムＦａｂ＿ｈｅｔ＿３０２０６ｘ３０２１７、および２＋２タンデムＦａｂ＿ｈｅｔ＿３０２１７ｘ３０２３０。この研究では、Ｆｃ－Ｆａｂ ＡＢＭは、図１３Ａに示されるヒンジフォーマットを有した。
７．４．２．材料および方法
７．４．２．１．分子
以下の表５－２は、Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳによって分析された分子およびそれらの代替指定を列挙する。
Figure 2022543669000020
７．４．２．２．Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳ移動相緩衝液
移動相緩衝液（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０±０．１）を、１．４ｇのリン酸ナトリウム一塩基性一水和物、１０．７ｇのリン酸ナトリウム二塩基性七水和物、および５００ｍＬの５Ｍ塩化ナトリウムを組み合わせることによって調製し、次いで、溶液をＨＰＬＣグレード水で５．０Ｌの体積にした。緩衝液の最終的な測定されたｐＨは、７．０であった。移動相緩衝液を、使用前に濾過（０．２μｍ）した。
７．４．２．３．ＡＦ－ＭＡＬＬＳ
Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳシステムは、紫外線（ＵＶ）ダイオードアレイ検出器、Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄａｗｎ ＨＥＬＥＯＳ（登録商標）ＩＩレーザー光散乱装置（ＬＳ）、およびＯｐｔｉｌａｂ（登録商標）Ｔ－ｒＥＸ示差屈折計（ＲＩ）検出器を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズＨＰＬＣシステムと組み合わされたＥｃｌｉｐｓｅ（商標）３＋Ａ４Ｆ分離システムで構成した。検出器は、次の順序：ＵＶ－ＬＳ－ＲＩで直列に接続した。ＬＳおよびＲＩ検出器は、Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって提供される指示に従って較正した。
定義された量の抗ＴＳＬＰ ｍＡｂを、各々ＲＥＧＮ４００９（組換えＴＳＬＰ）と組み合わせ、１Ｘ ＤＰＢＳ、ｐＨ７．４で希釈して、等モル比：１μＭ抗ＴＳＬＰ ｍＡｂ：１μＭ ｈＴＳＬＰを得た。各親ｍＡｂの等モルの組み合わせを、組み合わせストック溶液として調製し、次いで各組み合わせストック溶液を等モル量のｈＴＳＬＰと混合して、０．５μＭのｍＡｂ１＋０．５μＭのｍＡｂ２＋１μＭのｈＴＳＬＰの最終溶液濃度をもたらした。すべての試料を、周囲温度で２時間インキュベートし、４℃で濾過せずに維持した後、Ｗ３５０スペーサーホイル（スペーサーの厚さ３５０μｍ、スペーサーの幅２．２ｃｍ）を備えたＥｃｌｉｐｓｅ（商標）短チャネルに、１０ ｋＤａのＭＷＣＯ再生セルロース膜を使用して注入した。各試料の注入前に、チャネルを、移動相緩衝液（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０±０．１）で予め平衡化した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、２ｍｇ／ｍＬ、１０μｇ試料負荷）を別個に注入し、システム好適性対照として含めた。
分画方法は、４つのステップ：注入、集束、溶出、およびチャネル「ウォッシュアウト」ステップで構成された。Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳ移動相緩衝液（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、５００ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０±０．１）を、分画方法全体を通して使用した。各試料（７μｇ）を、０．２ｍＬ／分の流量で１分間注入し、その後１．０ｍＬ／分の集束流量で３分間集束した。試料を、１．０ｍＬ／分のチャネル流量、一定のクロスフロー３．０ｍＬ／分で１５分間溶出し、続いて３．０ｍＬ／分から０ｍＬ／分まで線形勾配クロスフローを５分かけて行った。最後に、クロスフローを０ｍＬ／分でさらに５分間保持して、チャネルをウォッシュアウトした。ＢＳＡを、同じパラメータ設定を使用して分画した。
７．４．２．４．ＭＡＬＬＳデータ分析
ＡＳＴＲＡ Ｖソフトウェア（バージョン５．３．４．１４、Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を使用してデータを分析した。データを、過剰散乱光を溶質濃度および重量平均モル質量、Ｍｗに関連付ける方程式に当てはめた（Ｋｅｎｄｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９９（２）：１３６－４６、Ｗｙａｔｔ，１９９３，Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ２７２（１）：１－４０）：
Figure 2022543669000021
（式中、ｃは、溶質濃度であり、Ｒ（θ、ｃ）は、散乱角および濃度の関数としての溶質からの過剰ラレー比であり、Ｍｗは、モル質量であり、Ｐ（θ）は、散乱光の角度依存性を表し（回転半径＜５０ｎｍを有する粒子について約１）、Ａ２は、浸透圧の膨張における第２のビリアル係数である（測定は希薄溶液で行われるため無視できる））および
Figure 2022543669000022
（式中、ｎ０は、溶媒屈折率を表し、ＮＡは、アボガドロの数であり、λ０は、真空での入射光の波長であり、ｄｎ／ｄｃは、溶質の比屈折率増分を表す。
ＢＳＡモノマーのモル質量は、データ収集（システム好適性チェック）中に光散乱および示差屈折率検出器の較正定数を評価するのに役立った。ＵＶおよびＲＩ検出器から決定されたＢＳＡの平均モル質量の相対標準偏差（ＲＳＤ％）は、≦５．０％であった。
光散乱検出器の正規化係数、検出器間遅延量、および広帯域化項は、使用されたＡ４Ｆ－ＭＡＬＬＳ条件について収集されたＢＳＡクロマトグラムから計算した。これらの値を、これらの観点について補正するために、すべての他の試料について収集されたデータファイルに適用した。
２１５ｎｍまたは２８０ｎｍでのｄｎ／ｄｃ値および消散係数（グリコシル化について補正）を、Ａｓｔｒａソフトウェアで提供されるタンパク質コンジュゲート分析を使用して実験的に決定した。補正された消散係数およびｄｎ／ｄｃ値を使用して、すべてのタンパク質－タンパク質複合体試料を分析した。
７．４．３．結果
Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳを使用して、いくつかの抗ｈＴＳＬＰ ＡＢＭおよびｈＴＳＬＰの間で形成された複合体の相対的なサイズ分布を評価した。ｈＴＳＬＰとの潜在的なＡＢＭ複合体の理論的モル質量および予測された化学量論を表５－３および５－４に示す。
Figure 2022543669000023
Figure 2022543669000024
予想通り、各個々の親抗ＴＳＬＰ ｍＡｂ（Ｈ４Ｈ３０２０６Ｐ２、Ｈ４Ｈ３０２１７Ｐ２、Ｈ４Ｈ３０２３０Ｐ２）は、等モル比で組み合わされる場合、ｈＴＳＬＰとの標準的な１：１および１：２複合体を形成した（ピーク３、約１７９ ｋＤａ、図７、表５－５）。
Figure 2022543669000025
しかしながら、２つの親ｍＡｂ（Ｈ４Ｈ３０２０６Ｐ２＋Ｈ４Ｈ３０２１７Ｐ２およびＨ４Ｈ３０２１７Ｐ２＋Ｈ４Ｈ３０２３０Ｐ２）の異なる組み合わせを、等モル量のｈＴＳＬＰと混合した場合、ヘテロマー複合体の不均一な分布が観察され、各親ｍＡｂがｈＴＳＬＰの同じ分子と結合して、「ペーパードーリング」と呼ばれるプロセスにおいて伸長抗体－抗原格子を形成することができることを示した（図８）。これらの試料では、約３４２ ｋＤａのモル質量を有する異なるピーク（ピーク４）、続いて約６５０～５０００ ｋＤａの範囲の幅広いモル質量分布を有する一連の広範な低分解能種（ピーク５）が観察された。個々の成分の計算されたモル質量に基づき、ピーク４は、２：２のｍＡｂ：ｈＴＬＳＰ複合体を表す可能性が高く、ピーク５は、≧３分子のｈＴＳＬＰを配位する≧４分子のｍＡｂからなる高次ヘテロマー複合体の不均一な分布に対応する（表５－６）。
Figure 2022543669000026
加えて、ｈＴＳＬＰと、上記で試験された同じ親ｍＡｂの組み合わせに由来し、ヒトＦｃドメイン（Ｆｃ－Ｆａｂ）のＣ末端に付着した、２つの固有のＦａｂドメインを有する新規二重特異性抗体のセット（ＴＳ－ＦＣ１－ｅＬ１、ＴＳ－ＦＣ６－ｅＬ２）との間に形成される複合体も調査した。親ｍＡｂの組み合わせで得られた結果とは異なり、各Ｆｃ－Ｆａｂ二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）は、主に、ｈＴＬＳＰとの別個の１：１複合体を形成し（ピーク３、約１７８ ｋＤａ、図９、表５－７）、追加の高次複合体（「ペーパードーリング」）はほとんど～まったく観察されなかった。
Figure 2022543669000027
これは、Ｆｃ－Ｆａｂ ｂｓＡｂの各々の上の両方のＦａｂドメインが、一雌一雄の二価相互作用を形成するｈＴＳＬＰの同じ分子と関与することを好み、よって「ペーパードーリング」のプロセスを排除することを示す。
各結合アーム上に追加の外部Ｆａｂドメイン（２＋２タンデムＦａｂ、ＴＳ－ＣＬ２－ｅＬ２、ＴＳ－ＣＬ３－ｅＬ２）または各アーム上に追加の内部非結合Ｆａｂ（クランプ、ＴＳ－ＣＬ４－ｅＬ１、ＴＳ－ＣＬ６－ｅＬ１）のいずれかを有する、本開示のＡＢＭフォーマットの２つの追加セットも、同様の方法でｈＴＳＬＰとの複合体形成について評価した。一般に、各クランプＡＢＭは、ある程度のｈＴＳＬＰとの１：１複合体を形成するように見えた（ピーク３、約２７２ ｋＤａ、図１０、表５－８）が、これらの試料では、変動するレベルの「ペーパードーリング」を示す、高次複合体の広く、不均一な分布（ピーク５、約６５０～７０００ ｋＤａ、図１０、表５－８）も検出することができた。
Figure 2022543669000028
最後に、等モル量のｈＴＬＳＰと混合した場合、各２＋２タンデムＦａｂ ｂｓＡｂは、試験されたすべての新規二重特異性フォーマットの「ペーパードーリング」について最も高い傾向を示した。これらの試料では、遊離２＋２タンデムＦａｂ ｂｓＡｂと一貫した異なるピーク（ピーク２、約２５５ ｋＤａ）、続いて、１０メガダルトンを超えるモル質量を有する非常に大きな複合体において終結するますます大きな種の不均一な分布を表す一連の広範な低分解能ピーク（ピーク４－５、約５００～１４，０００ ｋＤａ、図１１、表５－９）を観察することができた。
Figure 2022543669000029
７．５．実施例５：抗ｈＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂにおけるリンカーの最適化
一連の抗ｈＴＳＬＰ ３０２１７ｘ３０２３０二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂを、２アミノ酸ＧＳリンカーから、３０アミノ酸６ｘＧ４Ｓリンカー（配列番号３８）まで、異なるリンカーを使用して構築した。これらのＦｃ－Ｆａｂの活性を、ｈＴＳＬＰ ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて評価した（図１２）。最良の遮断活性は、２～５ｘＧ４Ｓのリンカー長を有するＦｃ－Ｆａｂで見られた（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）。異なるヒンジフォーマットも、例として３０２１７ｘ３０２３０二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂを使用して評価した（図１３）。フォーマット＃１では、ヒンジ配列は、天然ｈＩｇＧ４配列で発生するように、Ｆｃ－ＦａｂのＮ末端にあり、Ｓ２２８Ｐ（ＥＵ）置換を有する（図１３Ａ）。フォーマット＃２では、同じヒンジ配列は、Ｆｃ－ＦａｂのＮ末端から除去され、Ｆｃ ＣＨ３ドメインのＣ末端と（Ｇ４Ｓ）ｎリンカーとの間に挿入される（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）（図１３Ｂ）。フォーマット＃３では、ヒンジはまた、ＣＨ３ドメインと（Ｇ４Ｓ）ｎリンカーとの間に位置している（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）。しかしながら、上部ヒンジ配列は、Ｇ４Ｓ配列で置き換えられる（Ｇ４Ｓは配列番号３として開示される）（図１３Ｃ）。すべての３つのヒンジフォーマットは、１ｘＧ４Ｓ（配列番号３）または４ｘＧ４Ｓリンカー（配列番号１９）と組み合わせて、抗ｈＴＳＬＰ ３０２１７ｘ３０２３０二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂを構築した。これらのＦｃ－Ｆａｂの活性は、ｈＴＳＬＰ ＳＴＡＴ３－ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて評価した（図１３Ｄ）。４ｘＧ４Ｓリンカー（配列番号１９）を有するＦｃ－Ｆａｂについて、異なるヒンジフォーマットは、それらのＴＳＬＰ遮断活性にわずかな影響を及ぼし、ヒンジフォーマット＃１が最良の活性を示した。１ｘＧ４Ｓリンカー（配列番号３）を有するＦｃ－Ｆａｂについて、ヒンジフォーマット＃１は、他の２つのヒンジフォーマットよりも５～１０倍良好なＩＣ５０を有した。
７．６．実施例６：Ｆｃ受容体へのＦｃ－Ｆａｂ結合のＢｉａｃｏｒｅ分析
精製された組換えヒトＦｃγＲおよびヒト由来のＦｃＲｎ受容体サブタイプに結合する異なる抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂ抗体の平衡解離定数（ＫＤ値）は、リアルタイム表面プラズモン共鳴ベースのＭＡＳＳ－２（Ｂｒｕｋｅｒ）／Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）バイオセンサーを使用して決定した。アッセイされたＦｃ－Ｆａｂ構築物は、抗ＦｅｌＤ１（－）－ＩｇＧ１およびＩｇＧ４アイソタイプ対照（それぞれ、ＲＥＧＮ１９３２およびＲＥＧＮ１９４５と呼ばれる）とともに、ＴＳＬＰ ３０２０６ｘ３０２１７ Ｆｃ＿Ｆａｂ ２ｘＧ４Ｓ（「２ｘＧ４Ｓ」は配列番号１８として開示される）（ＲＥＧＮ８７５９とも呼ばれる）およびＴＳＬＰ ３０２３０ｘ３０２１７ Ｆｃ＿Ｆａｂ ２ｘＧ４Ｓ（「２ｘＧ４Ｓ」は配列番号１８として開示される）（ＲＥＧＮ７８６０とも呼ばれる）であった。アッセイされたＦｃ受容体は、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）－ｍｙｃ．６ｘＨｉｓ、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１６７）－１０ｘＨｉｓ、ヒトＦｃγＲＩＩＢ－ｍｙｃ．６ｘＨｉｓ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１７６）－ｍｙｃ．６ｘＨｉｓ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＢ－ｍｍｈ、ヒトＦｃＲｎ－ｍｍｈ、およびヒトＦｃγＲＩ－６ｘＨｉｓであった。
７．６．１．材料および方法
すべての結合研究は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．４（ＨＢＳ－ＥＴ）またはＰＢＳ、０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０（ＰＢＳ－Ｔ－ｐＨ６．０）泳動緩衝液中、２５℃で実施した。ＭＡＳＳ－２／Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００ ＣＭ５センサー表面は、マウス抗ペンタ－ヒスチジンモノクローナル抗体（「ペンタ－ヒスチジン」は配列番号３４として開示される）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）または抗ｍｙｃモノクローナル抗体（ＲＥＧＮ６４２）のいずれかとのアミンカップリングによって誘導体化され、Ｃ末端ｍｙｃ－ｍｙｃ－ヘキサヒスチジン（「ヘキサヒスチジン」は配列番号３５として開示される）またはヒスチジン領域で発現されるＦｃγＲおよびＦｃＲｎ受容体細胞外ドメインを捕捉した。結合研究は、異なる抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂおよび野生型Ｆｃアイソタイプ対照で実施した。ＨＢＳ－ＥＴまたはＰＢＳ－Ｔ ｐＨ７．４およびｐＨ６．０泳動緩衝液で調製された異なる濃度の抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂ（５μＭ～０．３１２５μＭの範囲、２倍希釈液）を、ＦｃγＲおよびＦｃＲｎ受容体捕捉表面に５０μＬ／分の流速で注入した。捕捉ＦｃγＲおよびＦｃＲｎ受容体の各々へのすべての抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂの会合を１．５～２分間モニターし、ＨＢＳＴ泳動緩衝液中でのそれらの解離を１０分間モニターした。各サイクルの終わりに、ＦｃγＲおよびＦｃＲｎ受容体捕捉表面は、マウス抗ペンタ－ヒスチジンモノクローナル抗体（「ペンタ－ヒスチジン」は配列番号３４として開示される）または抗ｍｙｃモノクローナル抗体について１０ｍＭのグリシン－ＨＣｌ ｐＨ１．５の２０～３０秒の注入を使用して再生した。すべての結合速度実験を、２５℃で実施した。
７．６．２．データ分析
結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、動的速度から以下のように計算した：
ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２（分）＝ｌｎ２／（６０ｘｋｄ）
７．６．３．結果
２５℃での本開示の異なるＦｃγＲおよびＦｃＲｎ受容体への異なる抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂおよび対照抗体結合の結合速度パラメータを、それぞれ、表５－１０および５－１１に示す。表５－１０では、ＮＴは、未試験を意味し、ＩＣは、不確定を意味する。表５－１１では、ＮＢは、結合なしを意味し、ＩＣは、不確定を意味する。
Figure 2022543669000030
Figure 2022543669000031
７．７．実施例７：野生型マウスにおける抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂ二重特異性抗体の薬物動態評価
７．７．１．概要
抗ｆｅｌ ｄ １ ＩｇＧ４アイソタイプ対照、ＲＥＧＮ１９４５、無関係な従来の二重特異性ＩｇＧ４対照、Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびｈＦｃγホモダイマー、ＲＥＧＮ１６２７と比較した、２つの抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂ二重特異性結合分子、（１）ＲＥＧＮ８７５９とも呼ばれる２ｘＧ４Ｓリンカー（配列番号１８）を有する３０２０６ ｘ ３０２１７ ＩｇＧ４ Ｆｃ－Ｆａｂ二重特異性、および（２）ＲＥＧＮ ８７６０とも呼ばれる２ｘＧ４Ｓリンカー（配列番号１８）を有する３０２３０ ｘ ３０２１７ ＩｇＧ４ Ｆｃ－Ｆａｂ二重特異性の薬物動態プロファイルの評価は、Ｃ５７ＢＬ／６野生型（ＷＴ）マウスで実施した。
７．７．２．材料および方法
コホートは、試験された抗体当たり５匹のマウスを含有した。ＲＥＧＮ８７５９、ＲＥＧＮ８７６０、ＲＥＧＮ１９４５、およびＨ４Ｈ２１２３７Ｄが投与されたマウスは、単一の皮下（ＳＣ）１ｍｇ／ｋｇ用量を受けた。ｈＦｃγホモダイマー、ＲＥＧＮ１６２７が投与されたマウスは、研究において他の抗体に対してモル当量（０．３５ｍｇ／ｋｇ）に基づいて正規化されたＳＣ用量を受けた。血液試料は、投与後６時間、ならびに１、２、３、４、７、１０、１４、および２１日で収集した。血液は、血清に加工し、分析されるまで－８０℃で凍結した。ＧｙｒｏＬａｂ ｘＰｌｏｒｅプラットフォーム（Ｇｙｒｏｓ）を使用して、ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０の総および機能的血清濃度、ならびにＲＥＧＮ１９４５、Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびＲＥＧＮ１６２７の総血清濃度を測定した。
Ｇｙｒｏｓ技術は、レーザー誘導性蛍光検出での自動イムノアッセイに親和性フロースルーフォーマットを使用する。試料は、複数の放射状に配置されたナノリットルスケールの親和性捕捉カラムを含有するコンパクトディスク（ＣＤ）に装填される。液体流は、遠心力および毛管力によって制御される。
総および機能的ＲＥＧＮ８７５９、ＲＥＧＮ８７６０の測定、ならびに血清中の総ＲＥＧＮ１９４５、Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびＲＥＧＮ１６２７の測定について、１００μｇ／ｍＬの試験物品または対照物品特異的ビオチン化捕捉試薬（表５－１１）を、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズ（Ｄｙｎｏｓｐｈｅｒｅｓ）が予め装填された親和性カラムを含有するＧｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ ２００ＣＤに添加した。較正に使用された標準物（表５－１１）を、０．４８８～２０００ｎｇ／ｍＬの範囲の濃度で分析した。血清試料の段階希釈液は、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で調製した。標準の段階希釈液は、２％正常マウス血清（ＮＭＳ）を含有するＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡで調製した。１：５０で希釈された血清試料の一重項および標準物の複製を、室温で捕捉試薬でコーティングされた親和性カラムに添加した。捕捉されたヒトＩｇＧは、Ｒｅｘｘｉｐ Ｆ緩衝液（Ｇｙｒｏｓ）で希釈されたＡｌｅｘａ－６４７コンジュゲート化マウス抗ヒトＩｇＧ１／ｈＩｇＧ４モノクローナル抗体（ＲＥＧＮ２５６７、０．５μｇ／ｍＬ）を使用して検出し、得られた蛍光シグナルは、ＧｙｒｏＬａｂ ｘＰｌｏｒｅ機器によって応答ユニット（ＲＵ）に記録した。それぞれのアッセイの定量下限（ＬＬＯＱ）は、品質管理（ＱＣ）試料が予想濃度から一貫して２５％未満で逸脱すると決定された標準曲線上の最低濃度として定義した（表５－１２）。試料濃度は、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｅｖａｌｕａｔｏｒ Ｓｏｆｔｗａｒｅにおいて４パラメータロジスティック曲線当てはめを使用して構築された標準曲線からの補間によって決定した。２つの反復実験からの平均濃度を使用して、最終濃度を計算した。
Figure 2022543669000032
ＰＫパラメータは、Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）ソフトウェアバージョン６．３（Ｃｅｒｔａｒａ、Ｌ．Ｐ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）および血管外投与モデルを使用した非コンパートメント分析（ＮＣＡ）によって決定した。各抗体についてそれぞれの平均濃度値（総薬物）を使用して、観察された血清中の最大濃度（Ｃｍａｘ）、観察された推定半減期（ｔ１／２）、最後の測定可能な濃度までの時間に対する濃度曲線下の面積（ＡＵＣｌａｓｔ）、および抗体クリアランス率（Ｃｌ）を含むすべてのＰＫパラメータを、線形補間および均一重み付けとともに線形台形公式を使用して決定した。
７．７．３．結果
ＷＴマウスにおける抗ＴＳＬＰ Ｆｃ－Ｆａｂ二重特異性抗体および対照の１ｍｇ／ｋｇ ＳＣ投与後、ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０は、同様の血清中の薬物の最大総濃度（それぞれ、Ｃｍａｘ＝１１．７および１０．７μｇ／ｍＬ）を示し、ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照、ＲＥＧＮ１９４５、無関係な従来の二重特異性ＩｇＧ４対照、Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびｈＦｃγホモダイマー、ＲＥＧＮ１６２７（Ｃｍａｘ用量正規化）は、約１．５～２倍低い濃度（それぞれ、Ｃｍａｘ＝８．２、７．８、および６．４μｇ／ｍＬ）を有した。
加えて、ＲＥＧＮ８７５９、ＲＥＧＮ８７６０、ＲＥＧＮ１９４５、およびＨ４Ｈ２１２３７Ｄは、すべて同様の半減期値（それぞれ、Ｔ１／２＝１２．１、１２．２、１０．９、および１１．２日）を示し、ＲＥＧＮ１６２７は、すべての他の試験された薬物と比較してより速い半減期（６．４日）を有した。追加的に、ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０は、ＲＥＧＮ１９４５、Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびＲＥＧＮ１６２７と比較される場合（それぞれ、ＡＵＣｌａｓｔ＝８８．０、８４．１、および１９．７、それぞれ、ＡＵＣｌａｓｔ／Ｄ＝５６．２（ｄ＊μｇ／ｍＬ）／（ｍｇ／ｋｇ）、それぞれ、Ｃｌ＝９．５、８．２、および４５．２ｍＬ／日／ｋｇ）と比較される場合、より良好な薬物曝露（それぞれ、ＡＵＣｌａｓｔ＝１３１、および１２２（ｄ＊μｇ／ｍＬ）／（ｍｇ／ｋｇ））およびより遅いクリアランス率（それぞれ、Ｃｌ＝５．２、５．５ｍＬ／日／ｋｇ）を示した。
さらに、ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０の総および機能的ＴＳＬＰ結合濃度は、試験されたすべての時点で同等であり、これらのＦｃ－Ｆａｂ分子が２１日で依然として無傷であることを示した。全体として、ＰＫプロファイルは、ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照、無関係な従来の二重特異性ＩｇＧ４対照、またはｈＦｃγホモダイマーと比較して、ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０について同様またはより良好である。
総および機能的ＲＥＧＮ８７５９およびＲＥＧＮ８７６０薬物濃度、ならびに総ＲＥＧＮ１９４５、Ｈ４Ｈ２１２３７Ｄ、およびＲＥＧＮ１６２７薬物濃度のデータの要約を表５－１３に要約し、平均ＰＫパラメータを表５－１４に示し、平均総抗体濃度対時間を図１４および図１５に示す。
Figure 2022543669000033
Figure 2022543669000034
Figure 2022543669000035
ＰＫパラメータは、総薬物濃度の平均濃度対時間プロファイルから導き出した。Ｔ１／２およびＡＵＣｌａｓｔは、２１日目までの濃度に基づく。各ＰＫパラメータについての平均±ＳＥＭ値は、すべての用量群について示される。
略語：ＡＵＣｌａｓｔ＝投与時から最後の測定可能な濃度までの曲線下面積、ＡＵＣｌａｓｔ／Ｄ＝１ｍｇ／ｋｇ投与に正規化されたＡＵＣ最終用量、ｔ１／２＝終末相消失半減期、Ｃｍａｘ＝ピーク濃度、Ｃｍａｘ／ｄ＝１ｍｇ／ｋｇ投与に正規化されたＣｍａｘ用量、ｔｍａｘ＝Ｃｍａｘが観察される時間、Ｃｌ＝経時的な抗体のクリアランス率、ＳＥＭ＝平均の標準誤差。
７．８．実施例８：リガンドＸへの抗リガンドＸ Ｆｃ－Ｆａｂ結合のＢｉａｃｏｒｅ分析
ヒトリガンドＸに対する３つの非競合性ｍＡｂ、ｍＡｂＸ１、ｍＡｂＸ２、およびｍＡｂＸ３からのＦａｂフラグメントを使用して、リンカーがＧ４Ｓ２（すなわち、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８））である、１５～２０ ｋＤａの範囲の分子量を有するヒトリガンドＸの二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂ、可溶性モノマータンパク質を作製した。Ｆｃ－Ｆａｂは、図１３Ａに示されるヒンジフォーマットを有した。
精製された抗リガンドＸ抗体に結合するリガンドＸの平衡解離定数（ＫＤ値）を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器でリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して決定した。Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面を、モノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＲＥＧＮ２５６７）とのアミンカップリングによって誘導体化して、ヒトＦｃ定常領域で発現された抗リガンドＸ抗体を捕捉した。Ｂｉａｃｏｒｅ結合研究を、ＨＢＳＴ泳動緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）で実施した。ヒトリガンドＸは、インハウス供給源（ＲＥＧＮ１３８）から入手した。ＨＢＳＴ泳動緩衝液中で調製された異なる濃度のヒトリガンドＸ（９０ｎＭ～０．１２ｎＭの範囲、３倍希釈液）を、５０μＬ／分の流速で抗リガンドＸ抗体捕捉表面に注入した。捕捉されたモノクローナル抗体の各々へのすべてのリガンドＸ試薬の会合を４分間モニターし、ＨＢＳＴ泳動緩衝液でのそれらの解離を１０分間モニターした。すべての結合速度実験を、３７℃で実施した。Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ曲線適合ソフトウェアを使用してリアルタイムセンサーグラムを１：１結合モデルへあてはめることによって、動的会合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度定数を決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を、動的速度定数から以下のように計算した：
ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａおよびｔ１／２（分）＝ｌｎ２／（６０ｘｋｄ）
３７℃での抗リガンドＸ抗体へのヒトリガンドＸ結合の結合速度パラメータを表５－１５に示す。３７℃で、本開示の抗リガンドＸ Ｆｃ－Ｆａｂは、０．２５ｐＭ～１８．４ｐＭの範囲のＫＤ値でヒトリガンドＸに結合し、親ｍＡｂは、表５－１５に示されるように、０．５６ｐＭおよび５５７ｐＭのそれぞれのＫＤ値でヒトリガンドＸに結合した。
Figure 2022543669000036
７．９．実施例９：バイオアッセイにおける抗ヒトリガンドＸ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの活性
精製された抗ヒトリガンドＸ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂを、受容体Ｘシグナル伝達バイオアッセイにおいてヒトリガンドＸを阻害するそれらの能力について評価した。受容体Ｘを通したリガンドＸシグナル伝達についてのバイオアッセイを、操作されたルシフェラーゼレポーター細胞株を使用して実施した。レポーター細胞を、０．１％ウシ胎児血清（Ｓｅｒａｄｉｇｍ）を含むＯｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）に１０，０００細胞／ウェルで播種し、一晩インキュベートした。リガンドＸ用量応答曲線について、１：３段階希釈リガンドＸを、２ｎＭで開始するリガンドＸの最終濃度で、各ウェルに添加した。抗リガンドＸ親ｍＡｂおよび二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの遮断活性を決定するために、抗体およびリガンドＸを同時にレポーター細胞に添加された「レースフォーマット」遮断アッセイを使用した。抗リガンドＸ抗体を、１００ｎＭで開始する最終濃度で、１：３で段階希釈した。ヒトリガンドＸを、１０ｐＭ、１００ｐＭ、または１ｎＭの一定濃度まで添加した。５．５時間のインキュベーション後、アッセイプレートを室温で１５分間平衡化した。１００μｌのＯｎｅ－Ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに加えた。室温で５分のインキュベーション後、発光をＥｎｖｉｓｉｏｎで測定した。
受容体Ｘバイオアッセイにおける３つの抗ヒトリガンドＸ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの活性を、図１６Ａ～１６Ｃ（ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２）、図１７Ａ～１７Ｃ（ｍＡｂＸ２ ｘ ｍＡｂＸ３）、および図１８Ａ～１８Ｃ（ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ３）に示す。それらの活性を、同じアッセイにおいて対応する抗ヒトリガンドＸ親ｍＡｂと比較した。ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２ Ｆｃ－Ｆａｂは、最良の遮断活性を有し、親抗リガンドＸ ｍＡｂよりも大幅に改善されたＩＣ５０値を示す。親ｍＡｂのうちの１つ、ｍＡｂＸ３は、ｍＡｂがヒトリガンドＸに対して１００～１０００倍モル過剰である場合も、バイオアッセイにおいてベースラインに対してリガンドＸ活性を遮断しない。興味深いことに、ｍＡｂＸ３ Ｆａｂを使用する２つのＦｃ－Ｆａｂは、ベースラインに対してリガンドＸ活性を遮断することができる（図１７Ａ～１７Ｃおよび図１８Ａ～１８Ｃ）。これらの結果は、それらの親抗リガンドＸ ｍＡｂと比較される場合、二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの優れた活性を示す。これらの抗リガンドＸ抗体のＩＣ５０値を、表５－１６にまとめる。
Figure 2022543669000037
７．１０．実施例１０：多角度レーザー光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳ）による抗リガンドＸヘテロダイマーと組換えリガンドＸとの間で形成されたインビトロ複合体のサイズ分析
親ｍＡｂとの複合体と比較した、Ｆｃ－Ｆａｂ、クランプ、および２＋２タンデムＦａｂヘテロダイマーフォーマットにおける組換えリガンドＸと二重特異性ｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２との間で形成されたインビトロ複合体のサイズ分析は、セクション７．４に記載される多角度レーザー光散乱と組み合わされた非対称流場流分画（Ａ４Ｆ－ＭＡＬＬＳ）を使用して実施した。この分析の結果を、図１９Ａ～１９Ｅに示す。図１９Ａおよび１９Ｂは、リガンドＸと親ｍＡｂ（単独または組み合わせ）との複合体のインビトロ分析の結果を示し、図１９Ｃは、リガンドＸとｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２ Ｆｃ－Ｆａｂとの複合体のインビトロ分析の結果を示し、図１９Ｄは、リガンドＸとｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２クランプとの複合体のインビトロ分析の結果を示し、図１９Ｅは、リガンドＸとｍＡｂＸ１ ｘ ｍＡｂＸ２ ２＋２タンデムＦａｂヘテロダイマーとの複合体のインビトロ分析の結果を示す。図１９Ｃに示されるように、Ｆｃ－Ｆａｂフォーマットは、最小量のペーパードーリングまたは凝集を示す。
７．１１．実施例１１：Ｆｃ－Ｆａｂは細胞表面標的への結合を維持する
低分子可溶性抗原に加えて、細胞表面タンパク質をＦｃ－Ｆａｂの標的として試験した。抗原Ｙ、細胞表面抗原に対するＩｇＧ抗体は、低減したエフェクター機能を有するｈＩｇＧ１定常領域（図２０Ａ）またはｈＩｇＧ４定常領域（ＵＳ９３５９４３７Ｂ２）（ｈＩｇＧ４として示される、図２０Ｂ、２０Ｃ、２０Ｄ）のいずれかを使用して、単一特異性Ｆｃ－Ｆａｂに再フォーマット化した（図１Ｂに示され、ヒンジフォーマットは図１３Ａに示される）。３つの異なるリンカー、１ｘＧ４Ｓ（配列番号３）、２ｘＧ４Ｓ（配列番号１８）、および３ｘＧ４Ｓ（配列番号４）を、各抗抗原Ｙ Ｆｃ－Ｆａｂについて試験した。これらのＦｃ－Ｆａｂは、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）結合アッセイにおいて細胞表面抗原Ｙへの結合について評価した。抗原Ｙ発現細胞を収集し、冷ＦＡＣＳ洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ）に再懸濁した。各結合アッセイについて、５０，０００～１００，０００個の細胞をＦＡＣＳ洗浄緩衝液中の一次抗体と４℃で３０分間インキュベートした。細胞を冷ＦＡＣＳ洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＡＰＣ－Ｆ（ａｂ）’２抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγフラグメント（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の１：２００希釈液と４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーションの終わりに、細胞を冷ＦＡＣＳ洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。
すべてのＦｃ－Ｆａｂは、細胞表面抗原Ｙへの強い結合を維持した。２セットのＦｃ－Ｆａｂは、それらの親ｍＡｂと同様の結合活性を有した（図２０Ａおよび２０Ｂ）。他の２セットのＦｃ－Ｆａｂは、それらの親ｍＡｂと比較される場合、抗原Ｙへの中程度に低減した結合を示した（図２０Ｃおよび２０Ｄ）。１ｘＧ４Ｓ（配列番号３）と３ｘＧ４Ｓ（配列番号４）との間のリンカー長の変動は、抗抗原Ｙ Ｆｃ－Ｆａｂの標的結合に最小限の影響を有した。
ＣＤ３および細胞表面腫瘍関連抗原、抗原Ｚを含む、追加の細胞表面タンパク質をＦｃ－Ｆａｂの標的として試験した。Ｆｃ－Ｆａｂは、図１３Ａに示されるヒンジフォーマットを有した。ＦＡＣＳ結合アッセイでは、抗ＣＤ３ ｈＩｇＧ１ Ｆｃ－Ｆａｂは、ＣＤ３＋Ｊｕｒｋａｔ細胞への特異的結合を示し（図２１Ａ）、抗抗原Ｚ ｈＩｇＧ１ Ｆｃ－Ｆａｂは、抗原Ｚ＋細胞株への特異的結合を示した（図２１Ｂ）。１ｘＧ４Ｓ（配列番号３）と５ｘＧ４Ｓ（配列番号３９）との間のリンカー長の変動は、これらのＦｃ－Ｆａｂの標的結合にわずかな影響を及ぼし、最短のリンカーは、ＣＤ３および抗原Ｚの両方への適度により弱い結合活性をもたらした。
７．１２．実施例１２：二重特異性ＣＤ３ｘ抗原Ｚ Ｆｃ－Ｆａｂはエフェクター細胞としてＴ細胞を使用するバイオアッセイにおいて活性である
ＣＤ３および抗原Ｚ（細胞表面腫瘍関連抗原）に対する二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂを、ｈＩｇＧ１の定常領域を使用して、実施例１に記載されるように生成した。３つの異なるリンカー、１ｘＧ４Ｓ（配列番号３）、２ｘＧ４Ｓ（配列番号１８）、および３ｘＧ４Ｓ（配列番号４）を、図１３Ａに示されるヒンジフォーマットを有するこれらの二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂについて試験した。二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの活性を、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターアッセイ（図２２Ａ）およびインビトロ細胞毒性アッセイ（図２２Ｂ）において評価した。Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターアッセイでは、Ｊｕｒｋａｔ／ＮＦＡＴ－Ｌｕｃレポーター細胞株を９６ウェルプレートにおいて抗原Ｚ＋細胞株（各５０，０００細胞）と１：１比で混合した。ＣＤ３ｘ抗原Ｚ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂを各ウェルに１００μｌの最終体積まで添加した。反応物を３７℃で５時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを、１００μｌのＯｎｅ－Ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ）の各ウェルへの添加前に室温で１０分間平衡化した。発光をＶｉｃｔｏｒで測定した。細胞毒性アッセイでは、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズおよびＩＬ－２で７日間活性化されたヒトドナーＰＢＭＣを使用して、予め活性化されたヒトＴ細胞を調製した。細胞毒性アッセイの日に、抗原Ｚ＋細胞を採取し、８μＭのカルセイン－ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で３０分間標識した。標識された標的細胞を２回洗浄し、予め活性化されたヒトＴ細胞と１：１０比で、約１０，０００個の標的細胞／ウェルで混合した。ＣＤ３ｘ抗原Ｚ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂの段階希釈液を、２００μｌの最終体積まで添加した。反応物を３７℃で３時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを遠心分離し、１００μｌの上清を蛍光読み取りのために半透明の黒い透明な底のプレートに移した。ＣＤ３ｘ抗原Ｚ二重特異性Ｆｃ－Ｆａｂは、Ｊｕｒｋａｔレポーターアッセイ（図２２Ａ）および細胞毒性アッセイ（図２２Ｂ）の両方において活性であった。両方のアッセイにおいて、より長いリンカーを有するＦｃ－Ｆａｂは、より強い活性を示した。
８．具体的な実施形態
本開示は、以下の群Ａおよび群Ｂ具体的な実施形態によって例示される。
以下の具体的な実施形態および以下の特許請求の範囲の好ましい態様では、抗原結合ドメイン（例えば、Ｆａｂ）は、ヒト化またはヒトＶＨおよびＶＬ配列を含有し、Ｆｃドメインは、ヒトＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインならびにそのバリアント、例えば、そのようなヒト配列に対して少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列同一性を有するバリアントを含む。さらに、Ｆａｂドメインは、２つのポリペプチド鎖、本明細書に記載されるＶＨポリペプチド鎖およびＶＬポリペプチド鎖、またはＶＨおよびＶＬが単一のポリペプチド鎖に存在する単鎖Ｆａｂ（「ｓｃＦａｂ」）から構成されるＦａｂドメインであり得る。特に明記されない限り、Ｆａｂドメインはまた、ドメイン交換、例えば、Ｃｒｏｓｓｍａｂフォーマットに存在するドメイン交換を含むことができる。
８．１．群Ａ具体的な実施形態
１．第１の標的分子に結合し、
（ａ）
（ｉ）２つのＦｃドメインを含むＦｃ領域、
（ｉｉ）第１のＦａｂドメインおよび第２のＦａｂドメインを含み、
Ｆｃ領域、第１のＦａｂドメインおよび第２のＦａｂドメインが、非天然免疫グロブリン構成であり
第１のＦａｂドメインおよび／または第２のＦａｂドメインが、第１の標的分子に結合することができ、
（ｂ）少なくとも２つのＦａｂドメインを含む天然免疫グロブリンよりも大きな親和性および／または親和力で第１の標的分子に結合する、抗原結合分子。
２．第１の標的分子に結合し、
（ａ）ＮからＣ末端配向で
（ｉ）第１のＦｃドメイン、および
（ｉｉ）第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）に会合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ）を含む第１のＦａｂドメインを含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）ＮからＣ末端配向で
（ｉ）第２のＦｃドメイン、および
（ｉｉ）第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含み、
第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインが、互いに会合してＦｃ領域を形成し、任意に、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドが、同一である、任意に、実施形態１による抗原結合分子である、抗原結合分子。
３．第１のＦｃドメインと第１のＶＨとの間に第１のリンカーを含む、実施形態２の抗原結合分子。
４．第１のリンカーが、５アミノ酸～６０アミノ酸の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
５．第１のリンカーが、１０アミノ酸～６０アミノ酸残基の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
６．第１のリンカーが、５アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
７．第１のリンカーが、５アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
８．第１のリンカーが、１０アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
９．第１のリンカーが、１０アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
１０．第１のリンカーが、２０アミノ酸～５０アミノ酸の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
１１．第１のリンカーが、２５～３５アミノ酸の長さである、実施形態３の抗原結合分子。
１２．第１のリンカーが、ＧｎＳまたはＳＧｎのマルチマーを含み、任意に、ｎが、１～７の整数である、実施形態３～１１のいずれか１つの抗原結合分子。
１３．第１のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）のマルチマーを含む、実施形態１２の抗原結合分子。
１４．第１のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）の２～６つのリピートを含む、実施形態１３の抗原結合分子。
１５．第１のリンカーが、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号１８）、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号４）、または（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１９）を含む、実施形態１４の抗原結合分子。
１６．第２のＦｃドメインと第２のＶＨとの間に第２のリンカーを含む、実施形態３～１５のいずれか１つの抗原結合分子。
１７．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態１６の抗原結合分子。
１８．第２のリンカーが、５アミノ酸～６０アミノ酸の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
１９．第２のリンカーが、１０アミノ酸～６０アミノ酸の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
２０．第１のリンカーが、５アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
２１．第１のリンカーが、５アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
２２．第１のリンカーが、１０アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
２３．第１のリンカーが、１０アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
２４．第２のリンカーが、２０アミノ酸～５０アミノ酸の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
２５．第２のリンカーが、２５～３５アミノ酸の長さである、実施形態１６または実施形態１７の抗原結合分子。
２６．第２のリンカーが、ＧｎＳまたはＳＧｎのマルチマーを含み、任意に、ｎが、１～７の整数である、実施形態１６～２５のいずれか１つの抗原結合分子。
２７．第２のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）のマルチマーを含む、実施形態２６の抗原結合分子。
２８．第２のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）の２～６つのリピートを含む、実施形態２７の抗原結合分子。
２９．第２のリンカーが、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号１８）、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号４）、または（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１９）を含む、実施形態２８の抗原結合分子。
３０．第１のポリペプチドが、第１のＦｃドメインのＮ末端にある第１のヒンジドメインを含み、第２のポリペプチドが、第２のＦｃドメインのＮ末端にある第２のヒンジドメインを含む、実施形態２～２９のいずれか１つの抗原結合分子。
３１．第１のヒンジドメインおよび第２のヒンジドメインが、ジスルフィド結合を介して連結される、実施形態３０の抗原結合分子。
３２．第１のヒンジドメインおよび第２のヒンジドメインが、ジスルフィド結合を介して連結されない、実施形態３０の抗原結合分子。
３３．第１のポリペプチドが、第１のＦｃドメインのＮ末端にあるＶＨを含まない、実施形態２～３２のいずれか１つの抗原結合分子。
３４．第２のポリペプチドが、第２のＦｃドメインのＮ末端にあるＶＨを含まない、実施形態２～３３のいずれか１つの抗原結合分子。
３５．１つのヒンジ領域を有する、実施形態２～２９のいずれか１つの抗原結合分子。
３６．図１３Ａに示されるヒンジフォーマットを有する、実施形態３５の抗原結合分子。
３７．図１３Ｃに示されるヒンジフォーマットを有する、実施形態３５の抗原結合分子。
３８．２つのヒンジ領域を有する、実施形態２～２９のいずれか１つの抗原結合分子。
３９．図１３Ｂに示されるヒンジフォーマットを有する、実施形態３８の抗原結合分子。
４０．第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドが、非同一である、実施形態２～３９のいずれか１つの抗原結合分子。
４１．第１のＶＬおよび第２のＶＬが、普遍的な軽鎖である、実施形態２～４０のいずれか１つの抗原結合分子。
４２．第１のＦａｂドメインまたは第２のＦａｂドメインの軽鎖定常領域および第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、Ｃｒｏｓｓｍａｂ配置にある、実施形態２～４０のいずれか１つの抗原結合分子。
４３．二価である、実施形態１～４２のいずれか１つの抗原結合分子。
４４．
（ａ）ＮからＣ末端配向で
（ｉ）第１のＶＬに会合した第１のＶＨを含む第１のＦａｂドメイン、
（ｉｉ）第１のスペーサードメイン、
（ｉｉｉ）第１のＦｃドメインを含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）ＮからＣ末端配向で
（ｉ）第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂドメイン、
（ｉｉ）第２のスペーサードメイン、
（ｉｉｉ）第２のＦｃドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含む、任意に、実施形態１による抗原結合分子であり、
第１のＦａｂドメインおよび／または第２のＦａｂドメインが、第１の標的分子に結合することができ、第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインが、互いに会合してＦｃ領域を形成し、任意に第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドが、同一である、抗原結合分子。
４５．第１のスペーサードメインと第１のＦｃドメインとの間、および第２のスペーサードメインと第２のＦｃドメインとの間にヒンジドメインを含む、実施形態４４の抗原結合分子。
４６．ヒンジドメインが、ジスルフィド結合を介して連結される、実施形態４４または実施形態４５の抗原結合分子。
４７．第１のＶＬおよび第２のＶＬが、普遍的な軽鎖である、実施形態４４～４６のいずれか１つの抗原結合分子。
４８．第１のＦａｂドメインまたは第２のＦａｂドメインの軽鎖定常領域および第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、Ｃｒｏｓｓｍａｂ配置にある、実施形態４４～４６のいずれか１つの抗原結合分子。
４９．第１のスペーサードメインおよび第２のスペーサードメインが、各々伸長リンカーを含む、実施形態４４～４８のいずれか１つの抗原結合分子。
５０．各伸長リンカーが、少なくとも３０アミノ酸の長さである、実施形態４９の抗原結合分子。
５１．各伸長リンカーが、３０酸残基～７０アミノ酸の長さである、実施形態４９または実施形態５０の抗原結合分子。
５２．各伸長リンカーが、３０酸残基～５５アミノ酸の長さである、実施形態４９または実施形態５０の抗原結合分子。
５３．各伸長リンカーが、３０酸残基～４０アミノ酸の長さである、実施形態４９または実施形態５０の抗原結合分子。
５４．各伸長リンカーが、ＧｎＳまたはＳＧｎのマルチマーを含み、任意に、ｎが、１～７の整数である、実施形態４９～５３のいずれか１つの抗原結合分子。
５５．各伸長リンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）のマルチマーを含む、実施形態５４の抗原結合分子。
５６．各伸長リンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）の５～１２個のリピートを含む、実施形態５５の抗原結合分子。
５７．各伸長リンカーが、（Ｇ４Ｓ）６（配列番号３８）、（Ｇ４Ｓ）７（配列番号３６）、または（Ｇ４Ｓ）８（配列番号３７）を含む、実施形態５６の抗原結合分子。
５８．第１および第２のスペーサードメインが、同一である、実施形態４４～５７のいずれか１つの抗原結合分子。
５９．二価である、実施形態４４～５８のいずれか１つの抗原結合分子。
６０．第１のスペーサードメインが、第３のＶＬに会合した第３のＶＨを含む第３のＦａｂドメインを含み、第２のスペーサードメインが、第４のＶＬに会合した第４のＶＨを含む第４のＦａｂドメインを含む、実施形態４４の抗原結合分子。
６１．第３のＶＬおよび第４のＶＬが、Ｆｃ領域を有する普遍的な軽鎖である、実施形態６０の抗原結合分子。
６２．第１のポリペプチドが、第１のＶＨと第３のＶＨとの間に第１のリンカーを含み、第２のポリペプチドが、第２のＶＨと第４のＶＨとの間に第２のリンカーを含む、実施形態６０または実施形態６１の抗原結合分子。
６３．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々１０アミノ酸～６０アミノ酸の長さである、実施形態６２の抗原結合分子。
６４．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々２０アミノ酸～５０アミノ酸の長さである、実施形態６２または実施形態６３の抗原結合分子。
６５．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々２５～３５アミノ酸の長さである、実施形態６２または実施形態６３の抗原結合分子。
６６．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々ＧｎＳまたはＳＧｎのマルチマーを含み、任意に、ｎが、１～７の整数である、実施形態６２または実施形態６３の抗原結合分子。
６７．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々Ｇ４Ｓ（配列番号３）のマルチマーを含む、実施形態６６の抗原結合分子。
６８．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々Ｇ４Ｓ（配列番号３）の２～６つのリピートを含む、実施形態６７の抗原結合分子。
６９．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々（Ｇ４Ｓ）２（配列番号１８）、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号４）、または（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１９）を含む、実施形態６８の抗原結合分子。
７０．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態６２～６９のいずれか１つの抗原結合分子。
７１．第３のＦａｂドメインおよび第４のＦａｂドメインが、非結合性である、実施形態６０～７０のいずれか１つの抗原結合分子。
７２．第３のＶＨおよび第４のＶＨが、普遍的な重鎖である、実施形態７１の抗原結合分子。
７３．第１のＦａｂドメインおよび第２のＦａｂドメインが、各々第１の標的分子上の同じまたは異なるエピトープに結合することができる、実施形態７１または実施形態７２の抗原結合分子。
７４．二価である、実施形態６０～７３のいずれか１つの抗原結合分子。
７５．第３のＦａｂドメインおよび第４のＦａｂドメインが、各々同じまたは異なるエピトープに結合することができる、実施形態６０～７０のいずれか１つの抗原結合分子。
７６．第３のＦａｂドメインおよび第４のＦａｂドメインが、各々同じ標的分子に結合することができる、実施形態７５の抗原結合分子。
７７．第３のＦａｂドメインおよび第４のＦａｂドメインが、各々第１の標的分子に結合することができる、実施形態７６の抗原結合分子。
７８．第１および第２のＦａｂドメインが、同じエピトープに結合する、実施形態７５～７７のいずれか１つの抗原結合分子。
７９．第１および第２のＦａｂドメインが、同一の配列を有する、実施形態７８の抗原結合分子。
８０．第３および第４のＦａｂドメインが、同じエピトープに結合する、実施形態７５～７９のいずれか１つの抗原結合分子。
８１．第３および第４のＦａｂドメインが、同一の配列を有する、実施形態８０の抗原結合分子。
８２．第１および第３のＦａｂドメインが、同じエピトープに結合する、実施形態７５～７７のいずれか１つの抗原結合分子。
８３．第１および第３のＦａｂドメインが、同一の配列を有する、実施形態８２の抗原結合分子。
８４．第２および第４のＦａｂドメインが、同じエピトープに結合する、実施形態７５～７７、８２、および８３のいずれか１つの抗原結合分子。
８５．第２および第４のＦａｂドメインが、同一の配列を有する、実施形態８４の抗原結合分子。
８６．四価である、実施形態６０～７０および７５～８５のいずれか１つの抗原結合分子。
８７．第１の標的分子のアンタゴニストである、実施形態１～８６のいずれか１つの抗原結合分子。
８８．結合パートナーへの第１の標的分子の結合を阻害し、任意に、結合パートナーが、第１の標的分子の受容体である、実施形態１～８７のいずれか１つの抗原結合分子。
８９．Ｆｃ領域が、ヒトＦｃ配列を含む、実施形態１～８８のいずれか１つの抗原結合分子。
９０．Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４ Ｆｃ配列を含む、実施形態１～８９のいずれか１つの抗原結合分子。
９１．Ｆｃ領域が、Ｆｃヘテロダイマーを含む、実施形態１～９０のいずれか１つの抗原結合分子。
９２．ＦｃヘテロダイマーにおけるＦｃドメインが、野生型Ｆｃドメインと比較してノブインホール変異を含む、実施形態８９の抗原結合分子。
９３．第１のポリペプチドにおけるＦｃドメインが、ノブ変異を含み、第２のポリペプチドにおけるＦｃドメインが、ホール変異を含む、実施形態９２の抗原結合分子。
９４．第２のポリペプチドにおけるＦｃドメインが、ノブ変異を含み、第１のポリペプチドにおけるＦｃドメインが、ホール変異を含む、実施形態９２の抗原結合分子。
９５．Ｆｃ領域が、野生型Ｆｃ領域と比較して星型変異を含む、実施形態８９の抗原結合分子。
９６．第１のポリペプチドにおけるＦｃドメインが、Ｈ４３５Ｒ変異およびＹ４３６Ｆ変異を含む、実施形態８９の抗原結合分子。
９７．第２のポリペプチドにおけるＦｃドメインが、Ｈ４３５Ｒ変異およびＹ４３６Ｆ変異を含む、実施形態８９の抗原結合分子。
９８．第１のＦａｂドメインにおけるＣＬおよびＣＨ１が、ジスルフィド結合によって連結される、実施形態１～９７のいずれか１つの抗原結合分子。
９９．第２のＦａｂドメインにおけるＣＬおよびＣＨ１が、ジスルフィド結合によって連結される、実施形態１～９８のいずれか１つの抗原結合分子。
１００．第１のＦａｂドメインおよび第２のＦａｂドメインが、第１の標的分子に結合する、実施形態１～９９のいずれか１つの抗原結合分子。
１０１．第１の標的分子が、低分子可溶性リガンドである、実施形態１～１００のいずれか１つの抗原結合分子。
１０２．第１の標的分子が、サイトカインまたはケモカインである、実施形態１～１０１のいずれか１つの抗原結合分子。
１０３．第１の標的分子が、細胞表面タンパク質である、実施形態１～１００のいずれか１つの抗原結合分子。
１０４．第１の標的分子が、腫瘍関連抗原である、実施形態１～１００および１０３のいずれか１つの抗原結合分子。
１０５．第１の標的分子が、翻訳後修飾を除いて１００ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１０６．第１の標的分子が、翻訳後修飾を含めて１００ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１０７．第１の標的分子が、翻訳後修飾を除いて７５ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１０８．第１の標的分子が、翻訳後修飾を含めて７５ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１０９．第１の標的分子が、翻訳後修飾を除いて６０ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１１０．第１の標的分子が、翻訳後修飾を含めて６０ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１１１．第１の標的分子が、翻訳後修飾を除いて４５ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１１２．第１の標的分子が、翻訳後修飾を含めて４５ ｋＤａ未満の分子量を有する分子を有する、実施形態１～１０４のいずれか１つの抗原結合分子。
１１３．第１の標的分子が、翻訳後修飾を除いて少なくとも５ ｋＤａの分子量を有する分子を有する、実施形態１～１１２のいずれか１つの抗原結合分子。
１１４．第１の標的分子が、翻訳後修飾を含めて少なくとも５ ｋＤａの分子量を有する分子を有する、実施形態１～１１２のいずれか１つの抗原結合分子。
１１５．第１の標的分子が、翻訳後修飾を除いて少なくとも５ ｋＤａの分子量を有する分子を有する、実施形態１～１１２のいずれか１つの抗原結合分子。
１１６．第１の標的分子が、翻訳後修飾を含めて少なくとも５ ｋＤａの分子量を有する分子を有する、実施形態１～１１２のいずれか１つの抗原結合分子。
１１７．第１の標的分子が、翻訳後修飾を除いて少なくとも１０ ｋＤａの分子量を有する分子を有する、実施形態１～１１２のいずれか１つの抗原結合分子。
１１８．第１の標的分子が、翻訳後修飾を含めて少なくとも１０ ｋＤａの分子量を有する分子を有する、実施形態１～１１２のいずれか１つの抗原結合分子。
１１９．第１の標的分子が、グリコシル化される、実施形態１～１１８のいずれか１つの抗原結合分子。
１２０．第１の標的分子が、グリコシル化されない、実施形態１～１１８のいずれか１つの抗原結合分子。
１２１．第１の標的分子が、モノマーである、実施形態１～１２０のいずれか１つの抗原結合分子。
１２２．第１の標的分子が、ダイマーである、実施形態１～１２０のいずれか１つの抗原結合分子。
１２３．第１の標的分子が、ホモダイマーである、実施形態１２２の抗原結合分子。
１２４．第１の標的分子が、ヘテロダイマーである、実施形態１２２の抗原結合分子。
１２５．第１の標的分子が、トリマーである、実施形態１～１２０のいずれか１つの抗原結合分子。
１２６．第１の標的分子が、ホモトリマーである、実施形態１２５の抗原結合分子。
１２７．第１の標的分子が、テトラマーである、実施形態１～１２０のいずれか１つの抗原結合分子。
１２８．第１の標的分子が、ホモテトラマーである、実施形態１２７の抗原結合分子。
１２９．単一特異性である、実施形態１～１２８のいずれか１つの抗原結合分子。
１３０．二重特異性である、実施形態１～１２８のいずれか１つの抗原結合分子。
１３１．第１の標的分子上の第１のエピトープおよび第２のエピトープに結合することができる、実施形態１３０の抗原結合分子。
１３２．第１の標的分子上の第１のエピトープに結合する少なくとも１つのＦａｂドメインおよび第２のエピトープに結合する少なくとも１つのＦａｂドメインを含む、実施形態１３１の抗原結合分子。
１３３．第１の標的分子上の異なるエピトープに同時に結合することができる、実施形態１３２の抗原結合分子。
１３４．第１の標的分子および第２の標的分子に結合することができる、実施形態１３０の抗原結合分子。
１３５．第１の標的分子に結合する少なくとも１つのＦａｂドメインおよび第２の標的分子に結合する少なくとも１つのＦａｂドメインを含む、実施形態１３４の抗原結合分子。
１３６．第１の標的分子および第２の標的分子に同時に結合することができる、実施形態１３５の抗原結合分子。
１３７．第１のＦａｂおよび第２のＦａｂを含むヒトＩｇＧ抗体と比較してより低いＩＣ５０でその受容体への標的分子の結合を遮断する、実施形態１～１３６のいずれか１つの抗原結合分子。
１３８．第１のＦａｂおよび第２のＦａｂを含むヒトＩｇＧ抗体よりも大きな親和性で標的分子に結合する、実施形態１～１３７のいずれか１つの抗原結合分子。
１３９．実施形態１～１３８のいずれか１つの抗原結合分子および細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤を含むコンジュゲート。
１４０．実施形態１～１３８のいずれか１つの抗原結合分子または実施形態１３９のコンジュゲートおよび賦形剤を含む薬学的組成物。
１４１．対象に有効量の実施形態１～１３８のいずれか１つによる抗原結合分子、実施形態１３９のコンジュゲート、または実施形態１４０の薬学的組成物を投与することを含む、標的分子の異常な発現または活性に関連した状態を有する対象を治療する方法。
１４２．対象に有効量の実施形態１～１３８のいずれか１つによる抗原結合分子、実施形態１３９のコンジュゲート、または実施形態１４０の薬学的組成物を投与することを含む、対象における標的分子に関連した分子経路を阻害する方法。
１４３．抗原結合分子、コンジュゲート、または薬学的組成物にそれぞれ存在する抗原結合分子もしくはコンジュゲートによって結合した標的分子に関連した状態の治療のための医薬品の製造における、実施形態１～１３８のいずれか１つによる抗原結合分子、実施形態１３９のコンジュゲート、または実施形態１４０の薬学的組成物の使用。
１４４．実施形態１～１３８のいずれか１つの抗原結合分子をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む核酸分子または複数の核酸分子。
１４５．１つ以上のヌクレオチド配列が、各々発現制御配列に作動可能に連結されている、実施形態１４４の核酸分子または複数の核酸分子。
１４６．実施形態１～１３８のいずれか１つの抗原結合分子を発現するように操作された細胞。
１４７．実施形態１～１３８のいずれか１つの抗原結合分子を１つ以上のプロモーターの制御下でコードする１つ以上の核酸配列を含む１つ以上の発現ベクターでトランスフェクトされた細胞。
１４８．（ａ）実施形態１４６または実施形態１４７の細胞を抗原結合分子が発現される条件下で培養することと、
（ｂ）細胞培養から抗原結合分子を回収することと、を含む、実施形態１～１３８のいずれか１つの抗原結合分子を産生する方法。
１４９．抗原結合分子を濃縮することをさらに含む、実施形態１４８の方法。
１５０．抗原結合分子を精製することをさらに含む、実施形態１４８または実施形態１４９の方法。
８．２．群Ｂ具体的な実施形態
１．（ａ）第１の重鎖ポリペプチドであって、第１の重鎖ポリペプチドが、第１のＣＨアミノ酸配列、第１のＶＨアミノ酸配列、および第２のＣＨアミノ酸配列を含み、第１のＶＨアミノ酸配列が、第１のＣＨアミノ酸配列と第２のＣＨアミノ酸配列との間にある、第１の重鎖ポリペプチドと、
（ｂ）第２の重鎖ポリペプチドであって、第２の重鎖ポリペプチドが、第３のＣＨアミノ酸配列、第２のＶＨアミノ酸配列、および第４のＣＨアミノ酸配列を含み、第２のＶＨアミノ酸配列が、第３のＣＨアミノ酸配列と第４のＣＨアミノ酸配列との間にある、第２の重鎖ポリペプチドと、を含む、抗原結合分子。
２．第１のＣＨアミノ酸配列が、第１のＶＨアミノ酸配列のＮ末端に位置する第１のＣＨ３アミノ酸配列を含む、実施形態１の抗原結合分子。
３．第１のＣＨ３が、Ｈ４３５Ｒ変異およびＹ４３６Ｆ変異を含む、実施形態２の抗原結合分子。
４．第１のＶＨアミノ酸配列のＮ末端を第１のＣＨ３アミノ酸配列のＣ末端に連結する第１のリンカーをさらに含む、実施形態２または実施形態３の抗原結合分子。
５．第３のＣＨアミノ酸配列が、第２のＶＨアミノ酸配列のＮ末端に位置する第２のＣＨ３アミノ酸配列を含む、実施形態１～４のいずれか１つの抗原結合分子。
６．第２のＶＨアミノ酸配列のＮ末端を第２のＣＨ３アミノ酸配列のＣ末端に連結する第２のリンカーをさらに含む、実施形態５の抗原結合分子。
７．第２のＣＨアミノ酸配列が、第１のＶＨアミノ酸配列のＣ末端に位置する第１のＣＨ１アミノ酸配列を含む、実施形態１～６のいずれか１つの抗原結合分子。
８．第４のＣＨアミノ酸配列が、第２のＶＨアミノ酸配列のＣ末端に位置する第２のＣＨ２アミノ酸配列を含む、実施形態１～７のいずれか１つの抗原結合分子。
９．第１のＣＨ３アミノ酸配列のＮ末端に位置する第１のＣＨ２アミノ酸配列をさらに含む、実施形態１～８のいずれか１つの抗原結合分子。
１０．第２のＣＨ３アミノ酸配列のＮ末端に位置する第２のＣＨ２アミノ酸配列をさらに含む、実施形態１～９のいずれか１つの抗原結合分子。
１１．抗原結合分子が、ヒンジ領域ジスルフィド結合を含まない、実施形態１～１０のいずれか１つの抗原結合分子。
１２．第１の軽鎖ポリペプチドをさらに含み、第１の軽鎖ポリペプチドが、第１のＶＬアミノ酸配列、および第１のＣＬアミノ酸配列を含む、実施形態１～１１のいずれか１つの抗原結合分子。
１３．第１のＣＬを第１のＣＨ１に連結するジスルフィド結合をさらに含む、実施形態１２の抗原結合分子。
１４．第２の軽鎖ポリペプチドをさらに含み、第２の軽鎖ポリペプチドが、第２のＶＬアミノ酸配列、および第２のＣＬアミノ酸配列を含む、実施形態１～１３のいずれか１つの抗原結合分子。
１５．第２のＣＬを第２のＣＨ１に連結するジスルフィド結合をさらに含む、実施形態１４の抗原結合分子。
１６．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々ポリペプチドを含む、実施形態６～１５のいずれか１つの抗原結合分子。
１７．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、０～５０アミノ酸の長さを有する、実施形態１６の抗原結合分子。
１８．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態１６～１７のいずれか１つの抗原結合分子。
１９．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々ポリグリシンおよびセリンアミノ酸配列を含む、実施形態１６～１８のいずれか１つの抗原結合分子。
２０．ポリグリシンおよびセリンアミノ酸配列が、２～６つのリピーティングＧＧＧＧＳ（配列番号３）アミノ酸配列を含む、実施形態１９の抗原結合分子。
２１．ポリグリシンおよびセリンアミノ酸配列が、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号１８）、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号４）、または（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１９）を含む、実施形態２０の抗原結合分子。
２２．第１の軽鎖ポリペプチドおよび第２の軽鎖ポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態１４～２１のいずれか１つの抗原結合分子。
２３．第１の重鎖ポリペプチド、第２の重鎖ポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態１～２２のいずれか１つの抗原結合分子。
２４．第１の重鎖ポリペプチド、第２の重鎖ポリペプチドが、非同一のアミノ酸配列を有する、実施形態１～２２のいずれか１つの抗原結合分子。
２５．抗原結合分子が、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬＩ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグリカン、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣ１、ＡＲ、ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）、ＡＲＴ－４、Ｂ７、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧＩ、ＢＡＩｉ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲｌ（ＭＤＲｌＳ）、ＢｌｙＳ、ＢＭＰｌ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰＳ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｂａ－７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３－抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－Ｉ、ＣＡＳＰ－８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ８、ＣＤＩ－ＩＡ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ－ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＳ、ＣＳＲ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＳＰＩ、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬＩ（Ｉ－３０９）、ＣＣＬＩＩ（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬＩＳ（ＭＩＰ－１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬＩＳ（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）、ＳＬＣ、エクソダス－２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２Ｓ（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２Ｓ、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）、ＣＣＬＳ（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬＳ（ｍｃｐ－２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４Ｓ）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳＩ ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢ１）、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳ／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－ＬＩ）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬＩ（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤｌＣ、ＣＤ２００、ＣＤ－２２、ＣＤ２４、ＣＤ２Ｓ、ＣＤ３Ｓ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ４４、ＣＤ４ＳＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ４Ｓ、ＣＤＳ２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤＳＯ、ＣＤＳ１、ＣＤＳ３、ＣＤＳ６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３Ｓ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨｌＳ、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ７、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫＳ、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１ Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、キチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クローディン－７）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬＩＳＡ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａｌ、ＣＲ２、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬＡ－４、ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬＩ（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２Ｓ）、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬＩＯ（ＩＰ－１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬＳ（ＥＮＡ－７Ｓ／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢＳ、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＨＩＦ－１－ａ、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－ｍｅｔ、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４Ｓ１Ｊ０１１Ｓ、ＤＮＣＬＩ、ＤＰＰ４、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＥＬＦ２－Ｍ、Ｅｐ－ＣＡＭ、Ｅ２Ｆ１、ＥＣＧＦ１、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、ＥＮ０１、ＥＮ０２、ＥＮ０３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＥＧ、ＥＲＫＳ、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１Ｓ、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＩＬＩ（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２ＳＳ４、ＦＬＪ２ＳＳ３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＯＳ、ＦＯＳＬＩ（ＦＲＡ－１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、Ｆｌｔ－Ｉ、Ｆｌｔ－３、葉酸塩受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ＧＲＯＢ、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤＦＳ、ＧＦｉｌ、ＧＧＴｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲＳ１（ＦＫＳＧＳＯ）、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＧＳＴＰ１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣＳ、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＨＧＦ、ＨＩＰ１ヒスタミンおよびヒスタミン受容体、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭＩ ２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ－１）、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２または１ａ、ＩＧＦ－ＩＲ、
Figure 2022543669000038
ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ－１、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０ＲＡ、ＩＬ－１０ＲＢ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１１ＲＡ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ａ、ＩＬ－１２Ｂ、ＩＬ－１２ＲＢ１、ＩＬ－１２ＲＢ２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１３ＲＡ１、ＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ－１４、ＩＬ－１Ｓ、ＩＬ－１ＳＲＡ、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８ＢＰ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－１９、ＩＬ－ＩＡ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－１Ｆ１０、ＩＬ－１ＦＳ、ＩＬ－１Ｆ６、ＩＬ－１Ｆ７、ＩＬ－１Ｆ８、ＩＬ－１Ｆ９、ＩＬ－１ＨＹ１、ＩＬ－１Ｒ１、ＩＬ－１Ｒ２、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１ＲＡＰＬ１、ＩＬ－１ＲＡＰＬ２、ＩＬ－１ＲＬ１、ＩＬ－１ＲＬ２ ＩＬ－１ＲＮ、ＩＬ－２、ＩＬ－２０、ＩＬ－２０ＲＡ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２２ＲＡ２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２Ｓ、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８Ａ、ＩＬ－２８Ｂ、ＩＬ－２９、ＩＬ－２ＲＡ、ＩＬ－２ＲＢ、ＩＬ－２ＲＧ、ＩＬ－３、ＩＬ－３０、ＩＬ－３ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－５ＲＡ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＬ－７、ＩＬ－７Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－ＳＲＡ、ＩＬ－ＳＲＢ、ＩＬ－９、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－Ｋ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）インスリン様成長因子－Ｉ（ＩＧＦ－１）、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４ ＩＦＮＡＳ、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＷ１、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡｉ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦＳ（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１Ｓ、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫＳ、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプＩＩケラチン）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ－１－抗原、ＫＳ １－４、Ｌｅ－Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、ＬＡＭＡＳ、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ－ｐ７Ｓ、Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧまたはＯｍｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩＰ－２、ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン－ＩＩＩ）、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、ＮＹ－ＥＳ０－１、ＴＲＡＧ－３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＭ－１／２、ＭＵＭ－３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＮＣＫ２、ニューロカン、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇａ）、ＮｇＲｐ７Ｓ、ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＸＳ、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲＩＨ２、ＮＲＩＨ３、ＮＲＩＨ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲＳＡ１、ＮＲＳＡ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴＳＥ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＯＰＲＤ１、ＰＣＳＫ９、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＮＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、アルファ４ベータ７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、Ｌａｇ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＧＤＦＳ、ＣＧＲＰ、Ｌｉｎｇｏ－Ｉ、第ＩＸａ因子、第Ｘ因子、ＩＣＯＳ、ＧＡＲＰ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＲＯＲＩ、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、Ａ２ａＲ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣ１、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）、ＰＴＮ、膵臓がんムチン、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺性酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、１０ ＰＩＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ－ＩＲ、ＩＬ－６、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦｌ１０（ＺＮＦ１４４）、ＲＯＢ０２、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢＳ（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＳＨＢＧ、ＳＬＡ２、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＩＯＩ、ＳＡＧＥ、５１００、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ－α、Ｔｎ－抗原、ＴｈｏｍｓｏｎＦｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１０、ＴＤＧＦ１、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢｌｉｌ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ９、ＴＮＦ、ＴＮＦ－ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１Ｓ（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－ｌＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰＳ３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＰＳ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、ＷＴ－１、１７－ＩＡ抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、ＣＳ、血管新生マーカー、ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、ＣＤ１９／ＣＤ３、ＢＣＭＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＩＬ１７ＲＡ／ＩＬ７Ｒ、ＩＬ－６／ＩＬ－２３、ＩＬ１／ＩＬ－８、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ／ＩＬ－２１、ＩＬ－２１Ｒ、ＡＮＧ２／ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ／ＰＤＧＦＲ－ベータ、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）アクセプター２／ＣＤ３、ＰＳＭＡ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、バーシカン、ＶＨＬ ＣＳ、ＶＬＡ－４、ｃ－ＦＭＳ／ＣＳＦＩＲ、ＲＥＴ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＩＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃ－ＫＩＴ、ＢＣＲ、インテグリン、ＭＭＰ ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＨＧＦ、アンジオポエチン、ＥＲＢＢ－３／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＲＢＢ－２／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３、ＰＳＣＡ／ＣＤ３、Ｃ－ＭＥＴ／ＣＤ３、ＥＮＤＯＳＩＡＬＩＮ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＩＧＦ－１Ｒ／ＣＤ３、ＦＡＰＡＬＰＨＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＩＧＦ－ＩＲ、ＩＬ ２５ １７Ａ／Ｆ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、およびＣＤ１９／ＣＤ１６、ＫＨＩ、Ｔｎ－抗原、ＴＦ－抗原、ＣＤ４４、糖脂質、スフィンゴ糖脂質、例えば、３０ Ｇｇ３、Ｇｂ３、ＧＤ３、ＧＤ２、Ｇｂ５、Ｇｍ１、Ｇｍ２、シアリルテトラオシルセラミド、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲＳ／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹ１、ならびにＺＦＰＭ２からなる群から選択される１つ以上の抗原に結合することができる、実施形態１～２４のいずれか１つの抗原結合分子。
２６．抗原結合分子が、ＣＤ１３７およびＣＤ２０、ＣＤ１３７およびＥＧＦＲ、ＣＤ１３７およびＨｅｒ－２、ＣＤ１３７およびＰＤ－１、ＣＤ１３７およびＰＤＬ－１、ＶＥＧＦおよびＰＤ－Ｌ１、Ｌａｇ－３およびＴＩＭ－３、ＯＸ４０およびＰＤ－１、ＴＩＭ－３およびＰＤ－１、ＴＩＭ－３およびＰＤＬ－１、ＥＧＦＲおよびＤＬＬ－４、ＣＤ１３８およびＣＤ２０、ＣＤＩ ３８およびＣＤ４０、ＣＤＩ ９およびＣＤ２０、ＣＤ２０およびＣＤ３、ＣＤ３およびＣＤ３３、ＣＤ３およびＣＤ１３３、ＣＤ４７およびＣＤ２０、ＣＤ３８およびＣＤ１３８、ＣＤ３８およびＣＤ２０、ＣＤ２０およびＣＤ２２、ＣＤ３８およびＣＤ４０、ＣＤ４０およびＣＤ２０、ＣＤ－８およびＩＬ－６、ＣＳＰＧｓおよびＲＧＭ Ａ、ＣＴＬＡ－４およびＢＴＮ０２、ＩＧＦ１およびＩＧＦ２、ＩＧＦ１／２およびＥｒｂ２Ｂ、ＩＧＦ－１ＲおよびＥＧＦＲ、ＥＧＦＲおよびＣＤ１３、ＩＧＦ－１ＲおよびＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ－２およびＩＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－２およびＭｅｔ、ＶＥＧＦ－Ａおよびアンジオポエチン－２（Ａｎｇ－２）、ＩＬ－１２およびＴＷＥＡＫ、ＩＬ－１３およびＩＬ－１ベータ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦ、ＥｐＣＡＭおよびＣＤ３、Ｈｅｒ２およびＣＤ３、ＣＤ１９およびＣＤ３、ＥＧＦＲおよびＨｅｒ３、ＣＤ１６ａおよびＣＤ３０、ＣＤ３０およびＰＳＭＡ、ＥＧＦＲおよびＣＤ３、ＣＥＡおよびＣＤ３、ＴＲＯＰ－２およびＨＳＧ、ＴＲＯＰ－２およびＣＤ３、ＭＡＧおよびＲＧＭ Ａ、ＮｇＲおよびＲＧＭ Ａ、ＮｏｇｏＡおよびＲＧＭ Ａ、ＯＭＧｐおよびＲＧＭ Ａ、ＰＤＬ－１およびＣＴＬＡ－４、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１、ＰＤ－１およびＴＩＭ－３、ＲＧＭＡおよびＲＧＭ Ｂ、Ｔｅ３８およびＴＮＦａ、ＴＮＦａおよびＢｌｙｓ、ＴＮＦａおよびＣＤ－２２、ＴＮＦａおよびＣＴＬＡ－４ドメイン、ＴＮＦａおよびＧＰ１３０、ＴＮＦａおよびＩＬ－１２ｐ４０、ならびにＴＮＦａおよびＲＡＮＫリガンドからなる群から選択される標的抗原の対に結合することができる、実施形態１～２４のいずれか１つの抗原結合分子。
２７．抗原結合分子が、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷ１、ＦＩＬＩ、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＩＬＩ（ＺＥＴＡ）、ＩＬＩＡ、ＩＬＩＢ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬＩＯ、ＩＬｉ１、ＩＬＩ２Ａ、ＩＬＩ２Ｂ、ＩＬＩ３、ＩＬＩ４、ＩＬＩ５、ＩＬＩ６、ＩＬＩ７、ＩＬＩ７Ｂ、ＩＬＩ８、ＩＬＩ９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＦＧＥＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＥＧＦＲ、ＲＯＲＩ、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ａ２ａＲ、ＣＤ４８、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ－ａ）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬＩＲ１、ＩＬＩＲ２、ＩＬＩＲＬＩ、ＩＬＩＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬＩＯＲＢ、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬＩ２ＲＢ１、ＩＬＩ２ＲＢ２、ＩＬＩ３ＲＡ１、ＩＬＩ３ＲＡ２、ＩＬＩ５ＲＡ、ＩＬＩ７Ｒ、ＩＬＩ８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬＩＲＡＰ、ＩＬＩＲＡＰＬＩ、ＩＬＩＲＡＰＬ２、ＩＬＩＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬＩ８ＢＰ、ＩＬＩ８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＩＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ、およびＴＨＰＯからなる群から選択される１つまたは２つのサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、およびサイトカイン受容体に結合することができる、実施形態１～２４のいずれか１つの抗原結合分子。
２８．抗原結合分子が、ＣＣＬＩ（Ｉ－３０９）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１／ＭＣＡＦ）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）、ＣＣＬＩＩ（エオタキシン）、ＣＣＬＩ３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬＩ５（ＭＩＰ－１ ｄ）、ＣＣＬＩ ６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬＩ ７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬＩ ８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬＩ９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＳＬＣ／エクソダス－２）、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬＩＯ（ＩＰ １０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＳＣＹＥ１、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧＳＯ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＨＭ７４、ＩＬＳＲＡ（ＩＬ８Ｒａ）、ＩＬＳＲＢ（ＩＬ８Ｒｂ）、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＴＣＰ１０、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＢＤＮＦ、Ｃ５Ｒ１、ＣＳＦ３、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＥＰＯ、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＤＦ５、ＨＩＦ１Ａ、ＩＬＳ、ＰＲＬ、ＲＧＳ３、ＲＧＳ１３、ＳＤＦ２、ＳＬＩＴ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、およびＶＨＬからなる群から選択される１つ以上のケモカイン、ケモカイン受容体、およびケモカイン関連タンパク質に結合することができる、実施形態１～２４のいずれか１つの抗原結合分子。
２９．二重特異性抗原結合分子が、サイトカインの対に結合することができる、実施形態１～２４のいずれか１つの抗原結合分子。
３０．二重特異性抗原結合分子が、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１ａおよびＩＬ－Ιβ、ＩＬ－１２およびＩＬ－１８、ＴＮＦａおよびＩＬ－２３、ＴＮＦａおよびＩＬ－１３、ＴＮＦおよびＩＬ－１８、ＴＮＦおよびＩＬ－１２、ＴＮＦおよびＩＬ－１ベータ、ＴＮＦおよびＭＩＦ、ＴＮＦおよびＩＬ－６、ＴＮＦおよびＩＬ－６受容体、ＴＮＦおよびＩＬ－１７、ＩＬ－１７およびＩＬ－２０、ＩＬ－１７およびＩＬ－２３、ＴＮＦおよびＩＬ－１５、ＴＮＦおよびＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲおよびＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦ、ＩＬ－１３およびＩＬ－９、ＩＬ－１３およびＩＬ－４、ＩＬ－１３およびＩＬ－５、ＩＬ－１３およびＩＬ－２５、ＩＬ－１３およびＴＡＲＣ、ＩＬ－１３およびＭＤＣ、ＩＬ－１３およびＭＩＦ、ＩＬ－１３およびＴＧＦ－β、ＩＬ－１３およびＬＨＲアゴニスト、ＩＬ－１３およびＣＬ２５、ＩＬ－１３およびＳＰＲＲ２ａ、ＩＬ－１３およびＳＰＲＲ２ｂ、ＩＬ－１３およびＡＤＡＭ ８、ならびにＴＮＦａおよびＰＧＥ４、ＩＬ－１３およびＰＥＤ２、ならびにＴＮＦおよびＰＥＧ２からなる群から選択されるサイトカインの対に結合することができる、実施形態２９の抗原結合分子。
３１．二重特異性抗原結合分子が、単一特異性抗体または各エピトープに特異的な抗体フラグメントと比較して同様のまたはより高い親和性で各エピトープに結合することができる、実施形態１～３０のいずれか１つの抗原結合分子。
３２．抗原結合分子が、アゴニスト機能を有する、実施形態１～３１のいずれか１つの抗原結合分子。
３３．抗原結合分子が、遮断機能を有し、親抗体と比較して同様のまたはより低いＩＣ５０を有し、任意に親抗体が、ＩｇＧアイソタイプのヒト抗体である、実施形態１～３１のいずれか１つの抗原結合分子。
３４．抗原結合分子が、単一のリガンドについて二重特異性であり、親抗体（複数可）と比較してより高いレベルで１：１リガンド複合体を形成する、実施形態１～３３のいずれか１つの抗原結合分子。
３５．第１のエピトープに特異的に結合する第１の抗原結合Ｆａｂドメインと、
第１のエピトープとは異なる第２のエピトープに特異的に結合する第２の抗原結合Ｆａｂドメインと、
第１の重鎖ポリペプチドおよび第２の重鎖ポリペプチドを含むＦｃドメインと、
第１の抗原結合Ｆａｂドメインの重鎖のＮ末端を第１の重鎖ポリペプチドのＣ末端に連結する第１のリンカーと、
第２の抗原結合Ｆａｂドメインの重鎖のＮ末端を第２の重鎖ポリペプチドのＣ末端に連結する第２のリンカーと、を含む、抗原結合分子。
３６．第１の重鎖ポリペプチドが、
第１のＣＨアミノ酸配列と、
第１のＶＨアミノ酸配列と、
第２のＣＨアミノ酸配列と、を含み、第１のＶＨアミノ酸配列が、第１のＣＨアミノ酸配列と第２のＣＨアミノ酸配列との間にある、実施形態３５の抗原結合分子。
３７．第１のＣＨアミノ酸配列が、第１のＶＨアミノ酸配列のＮ末端に位置する第１のＣＨ３アミノ酸配列を含む、実施形態３６の抗原結合分子。
３８．第１のＣＨ３が、Ｈ４３５Ｒ変異およびＹ４３６Ｆ変異を含む、実施形態３６の抗原結合分子。
３９．第２の重鎖ポリペプチドが、
第３のＣＨアミノ酸配列と、
第２のＶＨアミノ酸配列と、
第４のＣＨアミノ酸配列と、を含み、第２のＶＨアミノ酸配列が、第３のＣＨアミノ酸配列と第４のＣＨアミノ酸配列との間にある、実施形態３５～３８のいずれか１つの抗原結合分子。
４０．第１のＣＨアミノ酸配列が、第１のＶＨアミノ酸配列のＮ末端に位置する第１のＣＨ３アミノ酸配列を含む、実施形態３９の抗原結合分子。
４１．第１のＣＨ３が、Ｈ４３５Ｒ変異およびＹ４３６Ｆ変異を含む、実施形態４０の抗原結合分子。
４２．第１のＶＨアミノ酸配列のＮ末端を第１のＣＨ３アミノ酸配列のＣ末端に連結する第１のリンカーをさらに含む、実施形態４０または実施形態４１の抗原結合分子。
４３．第３のＣＨアミノ酸配列が、第２のＶＨアミノ酸配列のＮ末端に位置する第２のＣＨ３アミノ酸配列を含む、実施形態３５～４２のいずれか１つの抗原結合分子。
４４．第２のＶＨアミノ酸配列のＮ末端を第２のＣＨ３アミノ酸配列のＣ末端に連結する第２のリンカーをさらに含む、実施形態４３の抗原結合分子。
４５．第２のＣＨアミノ酸配列が、第１のＶＨアミノ酸配列のＣ末端に位置する第１のＣＨ１アミノ酸配列を含む、実施形態３５～４４のいずれか１つの抗原結合分子。
４６．第４のＣＨアミノ酸配列が、第２のＶＨアミノ酸配列のＣ末端に位置する第２のＣＨ１アミノ酸配列を含む、実施形態３５～４５のいずれか１つの抗原結合分子。
４７．第１のＣＨ３アミノ酸配列のＮ末端に位置する第１のＣＨ２アミノ酸配列をさらに含む、実施形態３５～４６のいずれか１つの抗原結合分子。
４８．第２のＣＨ３アミノ酸配列のＮ末端に位置する第２のＣＨ２アミノ酸配列をさらに含む、実施形態３５～４７のいずれか１つの抗原結合分子。
４９．抗原結合分子が、ヒンジ領域ジスルフィド結合を含まない、実施形態３５～４８のいずれか１つの抗原結合分子。
５０．第１の軽鎖ポリペプチドをさらに含み、第１の軽鎖ポリペプチドが、第１のＶＬアミノ酸配列、および第１のＣＬアミノ酸配列を含む、実施形態３５～４９のいずれか１つの抗原結合分子。
５１．第１のＣＬを第１のＣＨ１に連結するジスルフィド結合をさらに含む、実施形態５０の抗原結合分子。
５２．第２の軽鎖ポリペプチドをさらに含み、第２の軽鎖ポリペプチドが、第２のＶＬアミノ酸配列、および第２のＣＬアミノ酸配列を含む、実施形態３５～５１のいずれか１つの抗原結合分子。
５３．第２のＣＬを第２のＣＨ１に連結するジスルフィド結合をさらに含む、実施形態５２１の抗原結合分子。
５４．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々ポリペプチドを含む、実施形態４４～５３のいずれか１つの抗原結合分子。
５５．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、０～５０アミノ酸の長さを有する、実施形態５４の抗原結合分子。
５６．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態５４～５５のいずれか１つの抗原結合分子。
５７．第１のリンカーおよび第２のリンカーが、各々ポリグリシンおよびセリンアミノ酸配列を含む、実施形態５４～５６のいずれか１つの抗原結合分子。
５８．ポリグリシンおよびセリンアミノ酸配列が、２～６つのリピーティングＧＧＧＧＳ（配列番号３）アミノ酸配列を含む、実施形態５７の抗原結合分子。
５９．ポリグリシンおよびセリンアミノ酸配列が、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号１８）、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号４）、または（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１９）を含む、実施形態５８の抗原結合分子。
６０．第１の軽鎖ポリペプチドおよび第２の軽鎖ポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態５２～５９のいずれか１つの抗原結合分子。
６１．第１の重鎖ポリペプチド、第２の重鎖ポリペプチドが、同一のアミノ酸配列を有する、実施形態３５～６０のいずれか１つの抗原結合分子。
６２．第１の重鎖ポリペプチド、第２の重鎖ポリペプチドが、非同一のアミノ酸配列を有する、実施形態３５～６０のいずれか１つの抗原結合分子。
６３．抗原結合分子が、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬＩ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグリカン、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣ１、ＡＲ、ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）、ＡＲＴ－４、Ｂ７、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧＩ、ＢＡＩｉ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲｌ（ＭＤＲｌＳ）、ＢｌｙＳ、ＢＭＰｌ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰＳ、ＢＭＰＲ１Ａ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｂａ－７３３、ＢＡＧＥ、ＢｒＥ３－抗原、ＣＡ１２５、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＰ－Ｉ、ＣＡＳＰ－８／ｍ、ＣＣＣＬ１９、ＣＣＣＬ２１、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤＳ、ＣＤ８、ＣＤＩ－ＩＡ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５９、ＣＤ６４、ＣＤ６６ａ－ｅ、ＣＤ６７、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ９５、ＣＤ１２６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５４、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＣＸＣＬ１２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＳ、ＣＳＲ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＳＰＩ、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬＩ（Ｉ－３０９）、ＣＣＬＩＩ（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬＩＳ（ＭＩＰ－１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬＩＳ（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ－２）、ＳＬＣ、エクソダス－２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２Ｓ（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２Ｓ、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）、ＣＣＬＳ（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬＳ（ｍｃｐ－２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４Ｓ）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳＩ ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢ１）、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲＳ／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－ＬＩ）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬＩ（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤｌＣ、ＣＤ２００、ＣＤ－２２、ＣＤ２４、ＣＤ２Ｓ、ＣＤ３Ｓ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ４４、ＣＤ４ＳＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ４Ｓ、ＣＤＳ２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤＳＯ、ＣＤＳ１、ＣＤＳ３、ＣＤＳ６、ＣＤ１３７、ＣＤ１３Ｓ、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤＨ１（Ｅ－カドヘリン）、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨｌＳ、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ７、ＣＤＨＳ、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫＳ、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１ Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、キチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クローディン－７）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬＩＳＡ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａｌ、ＣＲ２、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬＡ－４、ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬＩ（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２Ｓ）、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬＩＯ（ＩＰ－１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ／ＩＰ－９）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬＳ（ＥＮＡ－７Ｓ／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢＳ、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＨＩＦ－１－ａ、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－ｍｅｔ、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４Ｓ１Ｊ０１１Ｓ、ＤＮＣＬＩ、ＤＰＰ４、ＤＡＭ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＥＬＦ２－Ｍ、Ｅｐ－ＣＡＭ、Ｅ２Ｆ１、ＥＣＧＦ１、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、ＥＮ０１、ＥＮ０２、ＥＮ０３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＯ、ＥＲＥＧ、ＥＲＫＳ、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１Ｓ、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦＳ、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＩＬＩ（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２ＳＳ４、ＦＬＪ２ＳＳ３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＯＳ、ＦＯＳＬＩ（ＦＲＡ－１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、Ｆｌｔ－Ｉ、Ｆｌｔ－３、葉酸塩受容体、Ｇ２５０抗原、ＧＡＧＥ、ＧＲＯＢ、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤＦＳ、ＧＦｉｌ、ＧＧＴｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲＳ１（ＦＫＳＧＳＯ）、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＧＳＴＰ１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣＳ、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＨＧＦ、ＨＩＰ１ヒスタミンおよびヒスタミン受容体、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭＩ ２４、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）およびそのサブユニット、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＭＧＢ－１、低酸素誘導因子（ＨＩＦ－１）、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２または１ａ、ＩＧＦ－ＩＲ、
Figure 2022543669000039
ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２５、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ－１、ＩＬ－１０、ＩＬ－１０ＲＡ、ＩＬ－１０ＲＢ、ＩＬ－１１、ＩＬ－１１ＲＡ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ａ、ＩＬ－１２Ｂ、ＩＬ－１２ＲＢ１、ＩＬ－１２ＲＢ２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１３ＲＡ１、ＩＬ－１３ＲＡ２、ＩＬ－１４、ＩＬ－１Ｓ、ＩＬ－１ＳＲＡ、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１７Ｂ、ＩＬ－１７Ｃ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１８ＢＰ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－１９、ＩＬ－ＩＡ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－１Ｆ１０、ＩＬ－１ＦＳ、ＩＬ－１Ｆ６、ＩＬ－１Ｆ７、ＩＬ－１Ｆ８、ＩＬ－１Ｆ９、ＩＬ－１ＨＹ１、ＩＬ－１Ｒ１、ＩＬ－１Ｒ２、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１ＲＡＰＬ１、ＩＬ－１ＲＡＰＬ２、ＩＬ－１ＲＬ１、ＩＬ－１ＲＬ２ ＩＬ－１ＲＮ、ＩＬ－２、ＩＬ－２０、ＩＬ－２０ＲＡ、ＩＬ－２１Ｒ、ＩＬ－２２、ＩＬ－２２Ｒ、ＩＬ－２２ＲＡ２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２Ｓ、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８Ａ、ＩＬ－２８Ｂ、ＩＬ－２９、ＩＬ－２ＲＡ、ＩＬ－２ＲＢ、ＩＬ－２ＲＧ、ＩＬ－３、ＩＬ－３０、ＩＬ－３ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－５ＲＡ、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＬ－７、ＩＬ－７Ｒ、ＩＬ－Ｓ、ＩＬ－ＳＲＡ、ＩＬ－ＳＲＢ、ＩＬ－９、ＩＬ－９Ｒ、ＩＬ－Ｋ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）インスリン様成長因子－Ｉ（ＩＧＦ－１）、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４ ＩＦＮＡＳ、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＷ１、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡｉ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦＳ（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１Ｓ、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫＳ、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプＩＩケラチン）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ－１－抗原、ＫＳ １－４、Ｌｅ－Ｙ、ＬＤＲ／ＦＵＴ、ＬＡＭＡＳ、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ－ｐ７Ｓ、Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧまたはＯｍｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩＰ－２、ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン－ＩＩＩ）、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＲＴ－２、ＮＹ－ＥＳ０－１、ＴＲＡＧ－３、ｍＣＲＰ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１Ａ、ＭＩＰ－１Ｂ、ＭＩＦ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５、ＭＵＭ－１／２、ＭＵＭ－３、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＮＣＫ２、ニューロカン、ＮＦＫＢ１、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲ－Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇａ）、ＮｇＲｐ７Ｓ、ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＸＳ、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲＩＨ２、ＮＲＩＨ３、ＮＲＩＨ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲＳＡ１、ＮＲＳＡ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴＳＥ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＯＰＲＤ１、ＰＣＳＫ９、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＮＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、アルファ４ベータ７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、Ｌａｇ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＧＤＦＳ、ＣＧＲＰ、Ｌｉｎｇｏ－Ｉ、第ＩＸａ因子、第Ｘ因子、ＩＣＯＳ、ＧＡＲＰ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＲＯＲＩ、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、Ａ２ａＲ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣ１、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）、ＰＴＮ、膵臓がんムチン、胎盤成長因子、ｐ５３、ＰＬＡＧＬ２、前立腺性酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＭＡ、１０ ＰＩＧＦ、ＩＬＧＦ、ＩＬＧＦ－ＩＲ、ＩＬ－６、ＲＳ５、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦｌ１０（ＺＮＦ１４４）、ＲＯＢ０２、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢＳ（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ－１）、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＳＨＢＧ、ＳＬＡ２、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒｌ）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＩＯＩ、ＳＡＧＥ、５１００、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＴＡＣ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、ＴＮＦ－α、Ｔｎ－抗原、ＴｈｏｍｓｏｎＦｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１０、ＴＤＧＦ１、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢｌｉｌ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲＳ、ＴＬＲ９、ＴＮＦ、ＴＮＦ－ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦＳ、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１Ｓ（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦＳ（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－ｌＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰＳ３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＰＳ、ＴＲＡＦ６、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、ＶＥＧＦＲ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、ＷＴ－１、１７－ＩＡ抗原、補体因子Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、ＣＳ、血管新生マーカー、ｂｃｌ－２、ｂｃｌ－６、Ｋｒａｓ、ｃＭＥＴ、ＣＤ１９／ＣＤ３、ＢＣＭＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＩＬ１７ＲＡ／ＩＬ７Ｒ、ＩＬ－６／ＩＬ－２３、ＩＬ１／ＩＬ－８、ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ／ＩＬ－２１、ＩＬ－２１Ｒ、ＡＮＧ２／ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ／ＰＤＧＦＲ－ベータ、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）アクセプター２／ＣＤ３、ＰＳＭＡ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、バーシカン、ＶＨＬ ＣＳ、ＶＬＡ－４、ｃ－ＦＭＳ／ＣＳＦＩＲ、ＲＥＴ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＩＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃ－ＫＩＴ、ＢＣＲ、インテグリン、ＭＭＰ ＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＰＩＧＦ、ＰＤＧＦ、ＨＧＦ、アンジオポエチン、ＥＲＢＢ－３／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＲＢＢ－２／Ｃ－ＭＥＴ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ３、ＰＳＣＡ／ＣＤ３、Ｃ－ＭＥＴ／ＣＤ３、ＥＮＤＯＳＩＡＬＩＮ／ＣＤ３、ＥＰＣＡＭ／ＣＤ３、ＩＧＦ－１Ｒ／ＣＤ３、ＦＡＰＡＬＰＨＡ／ＣＤ３、ＥＧＦＲ／ＩＧＦ－ＩＲ、ＩＬ ２５ １７Ａ／Ｆ、ＥＧＦ受容体ｌ／ＣＤ３、およびＣＤ１９／ＣＤ１６、ＫＨＩ、Ｔｎ－抗原、ＴＦ－抗原、ＣＤ４４、糖脂質、スフィンゴ糖脂質、例えば、３０ Ｇｇ３、Ｇｂ３、ＧＤ３、ＧＤ２、Ｇｂ５、Ｇｍ１、Ｇｍ２、シアリルテトラオシルセラミド、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲＳ／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹ１、ならびにＺＦＰＭ２からなる群から選択される１つ以上の抗原に結合することができる、実施形態３５～６１のいずれか１つの抗原結合分子。
６４．抗原結合分子が、ＣＤ１３７およびＣＤ２０、ＣＤ１３７およびＥＧＦＲ、ＣＤ１３７およびＨｅｒ－２、ＣＤ１３７およびＰＤ－１、ＣＤ１３７およびＰＤＬ－１、ＶＥＧＦおよびＰＤ－Ｌ１、Ｌａｇ－３およびＴＩＭ－３、ＯＸ４０およびＰＤ－１、ＴＩＭ－３およびＰＤ－１、ＴＩＭ－３およびＰＤＬ－１、ＥＧＦＲおよびＤＬＬ－４、ＣＤ１３８およびＣＤ２０、ＣＤＩ ３８およびＣＤ４０、ＣＤＩ ９およびＣＤ２０、ＣＤ２０およびＣＤ３、ＣＤ３およびＣＤ３３、ＣＤ３およびＣＤ１３３、ＣＤ４７およびＣＤ２０、ＣＤ３８およびＣＤ１３８、ＣＤ３８およびＣＤ２０、ＣＤ２０およびＣＤ２２、ＣＤ３８およびＣＤ４０、ＣＤ４０およびＣＤ２０、ＣＤ－８およびＩＬ－６、ＣＳＰＧｓおよびＲＧＭ Ａ、ＣＴＬＡ－４およびＢＴＮ０２、ＩＧＦ１およびＩＧＦ２、ＩＧＦ１／２およびＥｒｂ２Ｂ、ＩＧＦ－１ＲおよびＥＧＦＲ、ＥＧＦＲおよびＣＤ１３、ＩＧＦ－１ＲおよびＥｒｂＢ３、ＥＧＦＲ－２およびＩＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ－２およびＭｅｔ、ＶＥＧＦ－Ａおよびアンジオポエチン－２（Ａｎｇ－２）、ＩＬ－１２およびＴＷＥＡＫ、ＩＬ－１３およびＩＬ－１ベータ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦ、ＥｐＣＡＭおよびＣＤ３、Ｈｅｒ２およびＣＤ３、ＣＤ１９およびＣＤ３、ＥＧＦＲおよびＨｅｒ３、ＣＤ１６ａおよびＣＤ３０、ＣＤ３０およびＰＳＭＡ、ＥＧＦＲおよびＣＤ３、ＣＥＡおよびＣＤ３、ＴＲＯＰ－２およびＨＳＧ、ＴＲＯＰ－２およびＣＤ３、ＭＡＧおよびＲＧＭ Ａ、ＮｇＲおよびＲＧＭ Ａ、ＮｏｇｏＡおよびＲＧＭ Ａ、ＯＭＧｐおよびＲＧＭ Ａ、ＰＤＬ－１およびＣＴＬＡ－４、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１、ＰＤ－１およびＴＩＭ－３、ＲＧＭＡおよびＲＧＭ Ｂ、Ｔｅ３８およびＴＮＦａ、ＴＮＦａおよびＢｌｙｓ、ＴＮＦａおよびＣＤ－２２、ＴＮＦａおよびＣＴＬＡ－４ドメイン、ＴＮＦａおよびＧＰ１３０、ＴＮＦａおよびＩＬ－１２ｐ４０、ならびにＴＮＦａおよびＲＡＮＫリガンドからなる群から選択される標的抗原の対に結合することができる、実施形態３５～６１のいずれか１つの抗原結合分子。
６５．抗原結合分子が、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ－ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷ１、ＦＩＬＩ、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＩＬＩ（ＺＥＴＡ）、ＩＬＩＡ、ＩＬＩＢ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬＩＯ、ＩＬｉ１、ＩＬＩ２Ａ、ＩＬＩ２Ｂ、ＩＬＩ３、ＩＬＩ４、ＩＬＩ５、ＩＬＩ６、ＩＬＩ７、ＩＬＩ７Ｂ、ＩＬＩ８、ＩＬＩ９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＦＧＥＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＥＧＦＲ、ＲＯＲＩ、２Ｂ４、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＣＤ４０Ｌ、Ａ２ａＲ、ＣＤ４８、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＩＣＯＳＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ１３７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ４０、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ－ａ）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰ０３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬＩＲ１、ＩＬＩＲ２、ＩＬＩＲＬＩ、ＩＬＩＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬＩＯＲＢ、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬＩ２ＲＢ１、ＩＬＩ２ＲＢ２、ＩＬＩ３ＲＡ１、ＩＬＩ３ＲＡ２、ＩＬＩ５ＲＡ、ＩＬＩ７Ｒ、ＩＬＩ８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬＩＲＡＰ、ＩＬＩＲＡＰＬＩ、ＩＬＩＲＡＰＬ２、ＩＬＩＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬＩ８ＢＰ、ＩＬＩ８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＩＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ、およびＴＨＰＯからなる群から選択される１つまたは２つのサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質、およびサイトカイン受容体に結合することができる、実施形態３５～６１のいずれか１つの抗原結合分子。
６６．抗原結合分子が、ＣＣＬＩ（Ｉ－３０９）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１／ＭＣＡＦ）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ－１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）、ＣＣＬＩＩ（エオタキシン）、ＣＣＬＩ３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬＩ５（ＭＩＰ－１ ｄ）、ＣＣＬＩ ６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬＩ ７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬＩ ８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬＩ９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＳＬＣ／エクソダス－２）、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬＩ（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ２（ＧＲ０２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲ０３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬＩＯ（ＩＰ １０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ－ＴＡＣ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＳＣＹＥ１、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－１ｂ）、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲＳ（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ－Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧＳＯ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＨＭ７４、ＩＬＳＲＡ（ＩＬ８Ｒａ）、ＩＬＳＲＢ（ＩＬ８Ｒｂ）、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＴＣＰ１０、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦＳ、ＢＤＮＦ、Ｃ５Ｒ１、ＣＳＦ３、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＥＰＯ、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＤＦ５、ＨＩＦ１Ａ、ＩＬＳ、ＰＲＬ、ＲＧＳ３、ＲＧＳ１３、ＳＤＦ２、ＳＬＩＴ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、およびＶＨＬからなる群から選択される１つ以上のケモカイン、ケモカイン受容体、およびケモカイン関連タンパク質に結合することができる、実施形態３５～６１のいずれか１つの抗原結合分子。
６７．抗原結合分子が、サイトカインの対に結合することができる、実施形態３５～６１のいずれか１つの抗原結合分子。
６８．抗原結合分子が、ＴＳＬＰ、ＩＬ－１ａおよびＩＬ－Ιβ、ＩＬ－１２およびＩＬ－１８、ＴＮＦａおよびＩＬ－２３、ＴＮＦａおよびＩＬ－１３、ＴＮＦおよびＩＬ－１８、ＴＮＦおよびＩＬ－１２、ＴＮＦおよびＩＬ－１ベータ、ＴＮＦおよびＭＩＦ、ＴＮＦおよびＩＬ－６、ＴＮＦおよびＩＬ－６受容体、ＴＮＦおよびＩＬ－１７、ＩＬ－１７およびＩＬ－２０、ＩＬ－１７およびＩＬ－２３、ＴＮＦおよびＩＬ－１５、ＴＮＦおよびＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲおよびＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦ、ＩＬ－１３およびＩＬ－９、ＩＬ－１３およびＩＬ－４、ＩＬ－１３およびＩＬ－５、ＩＬ－１３およびＩＬ－２５、ＩＬ－１３およびＴＡＲＣ、ＩＬ－１３およびＭＤＣ、ＩＬ－１３およびＭＩＦ、ＩＬ－１３およびＴＧＦ－β、ＩＬ－１３およびＬＨＲアゴニスト、ＩＬ－１３およびＣＬ２５、ＩＬ－１３およびＳＰＲＲ２ａ、ＩＬ－１３およびＳＰＲＲ２ｂ、ＩＬ－１３およびＡＤＡＭ ８、ならびにＴＮＦａおよびＰＧＥ４、ＩＬ－１３およびＰＥＤ２、ならびにＴＮＦおよびＰＥＧ２からなる群から選択されるサイトカインの対に結合することができる、実施形態６７の抗原結合分子。
６９．抗原結合分子が、単一特異性抗体または各エピトープに特異的な抗体フラグメントと比較して同様のまたはより高い親和性で各エピトープに結合することができる、実施形態３５～６８のいずれか１つの抗原結合分子。
７０．抗原結合分子が、アゴニスト機能を有する、実施形態３５～６９のいずれか１つの抗原結合分子。
７１．抗原結合分子が、遮断機能を有し、親抗体と比較して同様のまたはより低いＩＣ５０を有し、任意に親抗体が、ＩｇＧアイソタイプのヒト抗体である、実施形態３５～７０のいずれか１つの抗原結合分子。
７２．抗原結合分子が、単一のリガンドについて二重特異性であり、親抗体（複数可）と比較してより高いレベルで１：１リガンド複合体を形成する、実施形態３５～７１のいずれか１つの抗原結合分子。
７３．抗原結合分子が、免疫アドヘシン（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｎ）分子、造影剤、治療剤、および細胞毒性剤からなる群から選択される薬剤にコンジュゲートされる、実施形態３５～７２のいずれか１つの抗原結合分子。
７４．実施形態１～７３のいずれか１つの抗原結合、および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
７５．実施形態１～７３のいずれか１つの抗原結合分子をコードする、核酸分子。
７６．核酸分子が、発現制御配列に作動可能に連結される、実施形態７４の核酸分子。
７７．実施形態７５または７６の核酸分子を含む、発現ベクター。
７８．実施形態７５もしくは７６の核酸分子または実施形態７７のベクターを含む、宿主細胞。
７９．細胞が、真核細胞である、実施形態７８の宿主細胞。
８０．細胞が、動物細胞である、実施形態７８または７９の宿主細胞。
８１．細胞が、哺乳動物細胞、任意にＣＨＯ細胞である、実施形態７８～７９のいずれか１つの宿主細胞。
８２．対象に、有効量の、実施形態１～７３のうちのいずれか１つの抗原結合分子を投与することを含む、実施形態６３に列挙される抗原のうちのいずれか１つ以上に関連した状態を有する対象を治療する方法。
８３．対象に、有効量の、分子経路を阻害する実施形態１～７３のいずれか１つの抗原結合分子を投与することを含む、対象における分子経路を阻害する方法。
８４．対象に、有効量の、分子経路を活性化する実施形態１～７３のいずれか１つの抗原結合分子を投与することを含む、対象における分子経路を活性化する方法。
８５．実施形態６３に列挙される抗原のうちのいずれか１つ以上に関連した状態の治療のための医薬品の製造における、実施形態１～７３のいずれか１つの抗原結合分子の、使用。
９．参考文献の引用
本出願で引用されるすべての刊行物、特許、特許出願、および他の文書は、各個々の刊行物、特許、特許出願、または他の文書がすべての目的のために参照によって組み込まれることが個別に示された場合と同程度に、すべての目的のためにその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。本明細書および本開示に組み込まれる参考文献のうちの１つ以上の教示間に矛盾がある場合、本明細書の教示が意図される。

Claims (61)

  1. 第１の標的分子に結合し、
    （ａ）ＮからＣ末端配向で
    （ｉ）第１のＦｃドメイン、および
    （ｉｉ）第１の軽鎖可変領域（ＶＬ）に会合した第１の重鎖可変領域（ＶＨ）を含む第１のＦａｂドメインを含む、第１のポリペプチドと、
    （ｂ）ＮからＣ末端配向で
    （ｉ）第２のＦｃドメイン、および
    （ｉｉ）第２のＶＬに会合した第２のＶＨを含む第２のＦａｂドメインを含む、第２のポリペプチドと、を含み、
    前記第１のＦｃドメインおよび第２のＦｃドメインが、互いに会合してＦｃ領域を形成する、抗原結合分子。
  2. 前記第１のＦｃドメインと前記第１のＶＨとの間に第１のリンカーを含む、請求項１に記載の抗原結合分子。
  3. 前記第１のリンカーが、５アミノ酸～６０アミノ酸の長さ、１０アミノ酸～６０アミノ酸残基の長さ、５アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さ、５アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さ、１０アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さ、１０アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さ、２０アミノ酸～５０アミノ酸の長さ、または２５アミノ酸～３５アミノ酸の長さである、請求項２に記載の抗原結合分子。
  4. 前記第１のリンカーが、ＧｎＳまたはＳＧｎのマルチマーを含み、任意に、ｎが、１～７の整数である、請求項２または３に記載の抗原結合分子。
  5. 前記第１のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）のマルチマーを含み、任意に、前記第１のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）の２～６つのリピートを含み、任意に、前記第１のリンカーが、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号１８）、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号４）、または（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１９）を含む、請求項４に記載の抗原結合分子。
  6. 前記第２のＦｃドメインと前記第２のＶＨとの間に第２のリンカーを含み、任意に、前記第１のリンカーおよび前記第２のリンカーが、同一のアミノ酸配列を有する、請求項２～５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  7. 前記第２のリンカーが、５アミノ酸～６０アミノ酸の長さ、１０アミノ酸～６０アミノ酸の長さ、５アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さ、５アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さ、１０アミノ酸～３０アミノ酸残基の長さ、１０アミノ酸～２０アミノ酸残基の長さ、２０アミノ酸～５０アミノ酸の長さ、または２５アミノ酸～３５アミノ酸の長さである、請求項６に記載の抗原結合分子。
  8. 前記第２のリンカーが、ＧｎＳまたはＳＧｎのマルチマーを含み、任意に、ｎが、１～７の整数である、請求項６または７に記載の抗原結合分子。
  9. 前記第２のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）のマルチマーを含み、任意に、前記第２のリンカーが、Ｇ４Ｓ（配列番号３）の２～６つのリピートを含み、任意に、前記第２のリンカーが、（Ｇ４Ｓ）２（配列番号１８）、（Ｇ４Ｓ）３（配列番号４）、または（Ｇ４Ｓ）４（配列番号１９）を含む、請求項８に記載の抗原結合分子。
  10. 前記第１のポリペプチドが、前記第１のＦｃドメインのＮ末端にある第１のヒンジドメインを含み、前記第２のポリペプチドが、前記第２のＦｃドメインのＮ末端にある第２のヒンジドメインを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  11. 前記第１のヒンジドメインおよび前記第２のヒンジドメインが、ジスルフィド結合を介して連結される、請求項１０に記載の抗原結合分子。
  12. 前記第１のヒンジドメインおよび前記第２のヒンジドメインが、ジスルフィド結合を介して連結されない、請求項１０に記載の抗原結合分子。
  13. 前記第１のポリペプチドが、前記第１のＦｃドメインのＮ末端にあるＶＨを含まない、かつ／または前記第２のポリペプチドが、前記第２のＦｃドメインのＮ末端にあるＶＨを含まない、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  14. １つのヒンジ領域を有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  15. 図１３Ａまたは図１３Ｃに示されるヒンジフォーマットを有する、請求項１４に記載の抗原結合分子。
  16. ２つのヒンジ領域を有する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  17. 図１３Ｂに示されるヒンジフォーマットを有する、請求項１６に記載の抗原結合分子。
  18. 前記第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドが、同一である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  19. 前記第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドが、非同一である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  20. 前記第１のＶＬおよび第２のＶＬが、普遍的な軽鎖であるか、または前記第１のＦａｂドメインもしくは前記第２のＦａｂドメインの前記軽鎖定常領域および前記第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が、Ｃｒｏｓｓｍａｂ配置にある、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  21. 前記第１のＦａｂドメインおよび前記第２のＦａｂドメインが、単鎖Ｆａｂの形態にない、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  22. 前記第１のＦａｂドメインおよび前記第２のＦａｂドメインを含む天然免疫グロブリンよりも大きな親和性および／または親和力で前記第１の標的分子に結合する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  23. 二価である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  24. 前記第１の標的分子のアンタゴニストである、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  25. 結合パートナーへの前記第１の標的分子の結合を阻害し、任意に、前記結合パートナーが、前記第１の標的分子の受容体である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  26. 前記Ｆｃ領域が、ヒトＦｃ配列を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  27. 前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４ Ｆｃ配列を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  28. 前記Ｆｃ領域が、Ｆｃヘテロダイマーを含み、任意に、前記Ｆｃヘテロダイマーにおける前記Ｆｃドメインが、野生型Ｆｃドメインと比較してノブインホール変異を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  29. 前記第１のポリペプチドにおける前記Ｆｃドメインが、ノブ変異を含み、前記第２のポリペプチドにおける前記Ｆｃドメインが、ホール変異を含む、請求項２８に記載の抗原結合分子。
  30. 前記第２のポリペプチドにおける前記Ｆｃドメインが、ノブ変異を含み、前記第１のポリペプチドにおける前記Ｆｃドメインが、ホール変異を含む、請求項２８に記載の抗原結合分子。
  31. 前記Ｆｃ領域が、野生型Ｆｃ領域と比較して星型変異（ｓｔａｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を含む、請求項２６に記載の抗原結合分子。
  32. 前記第１のポリペプチドにおける前記Ｆｃドメインが、Ｈ４３５Ｒ変異およびＹ４３６Ｆ変異を含む、請求項２６に記載の抗原結合分子。
  33. 前記第２のポリペプチドにおける前記Ｆｃドメインが、Ｈ４３５Ｒ変異およびＹ４３６Ｆ変異を含む、請求項２６に記載の抗原結合分子。
  34. 前記第１のＦａｂドメインにおける前記ＣＬおよび前記ＣＨ１が、ジスルフィド結合によって連結され、かつ／または前記第２のＦａｂドメインにおける前記ＣＬおよび前記ＣＨ１が、ジスルフィド結合によって連結される、請求項１～３３のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  35. 前記第１のＦａｂドメインおよび前記第２のＦａｂドメインが、前記第１の標的分子に結合する、請求項１～３４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  36. 前記第１の標的分子が、低分子可溶性リガンドであり、任意に、前記第１の標的分子が、サイトカインまたはケモカインである、請求項１～３５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  37. 前記第１の標的分子が、細胞表面タンパク質であり、任意に、前記第１の標的分子が、腫瘍関連抗原である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  38. 前記第１の標的分子が、（ｉ）翻訳後修飾を除いて１００ ｋＤａ未満、翻訳後修飾を含めて１００ ｋＤａ未満、翻訳後修飾を除いて７５ ｋＤａ未満、翻訳後修飾を含めて７５ ｋＤａ未満、翻訳後修飾を除いて６０ ｋＤａ未満、翻訳後修飾を含めて６０ ｋＤａ未満、翻訳後修飾を除いて４５ ｋＤａ未満、もしくは翻訳後修飾を含めて４５ ｋＤａ未満の分子量を有し、かつ／または（ｉｉ）翻訳後修飾を除いて少なくとも５ ｋＤａ、翻訳後修飾を含めて少なくとも５ ｋＤａ、翻訳後修飾を除いて少なくとも１０ ｋＤａ、もしくは翻訳後修飾を含めて少なくとも１０ ｋＤａの分子量を有する、分子を有する、請求項１～３７のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  39. 前記第１の標的分子が、グリコシル化される、請求項１～３８のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  40. 前記第１の標的分子が、グリコシル化されない、請求項１～３８のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  41. 前記第１の標的分子が、モノマーである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  42. 前記第１の標的分子が、ダイマーであり、任意に、ホモダイマーまたはヘテロダイマーである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  43. 前記第１の標的分子が、トリマーであり、任意に、ホモトリマーである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  44. 前記第１の標的分子が、テトラマーであり、任意に、ホモテトラマーである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  45. 単一特異性である、請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  46. 二重特異性である、請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  47. 前記第１の標的分子上の第１のエピトープおよび第２のエピトープに結合することができ、任意に、前記第１の標的分子上の前記第１のエピトープに結合する少なくとも１つのＦａｂドメインおよび前記第２のエピトープに結合する少なくとも１つのＦａｂドメインを含み、任意に、前記第１の標的分子上の異なるエピトープに同時に結合することができる、請求項４６に記載の抗原結合分子。
  48. 前記第１の標的分子および第２の標的分子に結合することができる、請求項４６に記載の抗原結合分子。
  49. 前記第１の標的分子に結合する少なくとも１つのＦａｂドメインおよび前記第２の標的分子に結合する少なくとも１つのＦａｂドメインを含み、任意に前記第１の標的分子および前記第２の標的分子に同時に結合することができる、請求項４８に記載の抗原結合分子。
  50. 前記第１のＦａｂおよび前記第２のＦａｂを含むヒトＩｇＧ抗体と比較してより低いＩＣ５０でその受容体への前記標的分子の前記結合を遮断する、請求項１～４９のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  51. 前記第１のＦａｂおよび前記第２のＦａｂを含むヒトＩｇＧ抗体よりも大きな親和性で前記標的分子に結合する、請求項１～５０のいずれか一項に記載の抗原結合分子。
  52. 請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子および細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤を含む、コンジュゲート。
  53. 請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子または請求項５２に記載のコンジュゲートおよび賦形剤を含む、薬学的組成物。
  54. 標的分子の異常な発現または活性に関連した状態を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、有効量の、請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項５２に記載のコンジュゲート、または請求項５３に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  55. 対象における標的分子に関連した分子経路を阻害する方法であって、前記対象に、有効量の、請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項５２に記載のコンジュゲート、または請求項５３に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
  56. 標的分子の異常な発現または活性に関連した状態の治療方法における使用のための、請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項５２に記載のコンジュゲート、または請求項５３に記載の薬学的組成物。
  57. 標的分子に関連した分子経路の阻害における使用のための、請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子、請求項５２に記載のコンジュゲート、または請求項５３に記載の薬学的組成物。
  58. 請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含み、任意に、前記１つ以上のヌクレオチド配列が、各々発現制御配列に作動可能に連結される、核酸分子または複数の核酸分子。
  59. 請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子を発現するように操作された、細胞。
  60. 請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子を１つ以上のプロモーターの制御下でコードする１つ以上の核酸配列を含む１つ以上の発現ベクターでトランスフェクトされた、細胞。
  61. 請求項１～５１のいずれか一項に記載の抗原結合分子を産生する方法であって、
    （ａ）請求項５９または６０に記載の細胞を、前記抗原結合分子が発現される条件下で培養することと、
    （ｂ）細胞培養から前記抗原結合分子を回収することと、を含み、任意に、前記抗原結合分子を濃縮すること、および／または前記抗原結合分子を精製することをさらに含む、方法。
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