CN101310020A - 用于在植物中遗传控制昆虫侵袭的方法和组合物 - Google Patents

用于在植物中遗传控制昆虫侵袭的方法和组合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及通过抑制一种或多种生物功能来控制害虫侵袭。本发明提供了用于所述控制的方法和组合物，这是通过将一种或多种本发明提供的重组双链RNA分子喂饲给害虫，通过对基因表达的阻抑获得害虫侵袭的减少来实现的。本发明还涉及制造表达双链RNA分子的转基因植物的方法，以及用于保护植物抵挡害虫侵袭的转基因杀虫剂的特定组合。

Description

用于在植物中遗传控制昆虫侵袭的方法和组合物
在光盘上提交的序列表通过引用结合到本文中
在一张光盘(拷贝1)以及其复制文件(拷贝2)上提交了序列表，每个文件都是在2006年9月15日建立的，均含有命名为“MNDE002.APP.TXT.”的一个669kb文件。在此将光盘上含有的内容通过引用结合到本文中。
优先权
本申请要求2005年9月16日提交的美国临时申请系列No.60/718,034的优先权，该申请通过整体引用结合到本文中。
发明背景
1.发明领域
一般而言，本发明涉及害虫侵袭的遗传控制。更具体地，本发明本发明涉及用于转录后阻抑或抑制靶编码序列在害虫细胞中的表达以提供害虫防护作用的重组DNA技术。
2.相关领域的描述
人类生存的环境充满了害虫侵袭。害虫包括：昆虫、蜘蛛、甲壳类动物、真菌、细菌、病毒、线虫、扁形虫、蛔虫、蛲虫、钩虫、绦虫、锥形虫、血吸虫、马蝇、跳蚤、扁虱、螨、虱等，它们是人类环境中普遍存在的，已应用了多种手段企图控制这些害虫的侵袭。用于控制微小害虫(例如细菌、真菌和病毒)侵袭的组合物已被提供为抗生素组合物、抗病毒组合物以及抗真菌组合物形式。用于控制较大害虫(例如，线虫、扁形虫、蛔虫、蛲虫、犬心虫、绦虫、锥形虫、血吸虫等)侵袭的组合物典型地已作为化学组合物的形式存在，它们可被应用到已知会出现害虫侵袭的物质表面，或者以药丸、粉末、药片、软膏或胶囊等形式被受侵袭的动物摄取。本发明涉及提供：较之本领域已知的组合物，用于控制害虫侵袭的改进方法。
商业农农作物通常是昆虫攻击的靶。在过去数十年中，关于开发用于控制植物中昆虫侵袭的更为有效的方法和组合物，已有了一些实质性的进展。化学杀虫剂对于根除害虫侵袭非常有效。但是，使用化学杀虫剂有多种缺点。化学杀虫剂是非选择性的。人们意欲应用化学杀虫剂来控制对多种农作物和其它植物来说有害的无脊椎害虫。但是，因为缺乏选择性，化学杀虫剂对于非靶动物也会施加其作用，并且，在化学杀虫剂应用过的一段时间，通常会使田野贫瘠。化学杀虫剂持续存在于环境中，通常很慢被代谢，如果完全不被代谢的话。它们会积累于食物链中，特别是高等食肉动物的食物链中。这些化学杀虫剂的积累导致对这些试剂抗性的发展以及导致进化梯高端的物种，所述杀虫剂作为诱变剂和/或致癌剂发生作用，通常导致不可逆的有害遗传修饰。因此人们强烈需要对环境友善的方法用于控制或根除植物中或植物上的昆虫侵袭，即，选择性的、环境惰性的、非持续保留的以及生物可降解的，并且能很好地是用于害虫抗性管理体系的方法。
包括苏云金芽孢杆菌(B.t.)的组合物是可通过商业途径获得的，其作为对环境安全并且可接受的杀昆虫剂已使用了在超过三十年。Bt细菌的杀昆虫作用是这些细菌专有产生的蛋白质的结果，所述蛋白质不会持续存在于环境中，并且，对于受影响的靶物种具有高度的选择性，仅通过被靶害虫摄取来施加其作用，它们已显示出了对环境和其它非靶生物(包括人类)的无害性。含有编码杀昆虫B.t.蛋白的一种或多种基因的转基因植物还可在本领域内获得，它们明显有效于控制有害昆虫的侵袭。使用表达Bt杀昆虫蛋白的重组植物的实质性结果是，在使用此类转基因农作物的地区，应用到环境以控制农作物田间害虫侵袭的化学杀虫剂的量明显减少。化学杀虫剂应用的减少使得土壤更为清洁，并且使得从土壤流向周围溪流、江河、池塘和湖泊的水也更为清洁。除这些环境好处之外，转基因抗昆虫农作物生长的农作物田间，有利昆虫的数量有显著增加，这是因为化学杀虫剂的使用减少的缘故。
本领域中已报道了反义方法和组合物，它们被相信能通过单链RNA分子(理论上，能在体内与高度互补的有义链RNA分子杂交)的合成施加其作用。反义技术难于在很多系统中使用，这有三个主要原因。首先，转化细胞中表达的反义序列不稳定。第二，转化细胞中表达的反义序列的不稳定性随之对将该序列送递到远离转基因细胞的宿主、细胞类型或生物系统造成困难。第三，随着不稳定性和反义序列的送递遇到的困难对于如下企图来说也制造了困难，所述企图是：在编码该反义序列的重组细胞内部提供能有效调节靶有义核苷酸序列表达水平的剂量。
用于在细胞、组织或生物内调节基因表达水平的技术鲜有改进，特别地，缺少用于通过使用重组DNA技术来延迟、抑制或减少特定基因表达的发展的技术。此外，作为这些手段的不可预见性的结果，没有用于在真核或原核生物中调节特定基因表达水平的、商业途径可获得的手段。
以前已展示了在多种害虫中对特定基因进行双链RNA介导的抑制。已在一种果蝇，即黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中对dsRNA介导的用于遗传控制的手段加以了检测(Kennerdell和Carthew，1998；Kennerdell和Carthew，2000)。Kennerdell和Carthew(1998)描述了一种方法，用于送递涉及产生转基因昆虫(其表达双链RNA分子)的dsRNA或将dsRNA溶液注射到昆虫体内或在胚胎发育之前注射到卵囊内。
研究人员之前已经展示，通过将含有双链或小干扰RNA分子的溶液喂饲给线虫或将线虫浸于该溶液中，以及通过注射dsRNA分子，可在线虫中获得双链RNA介导的基因抑制。Rajagopal等人(2002)描述了如下失败的尝试：通过喂饲含特异于靶基因的dsRNA的溶液，或通过将幼虫浸于该溶液中，来抑制有害昆虫斜纹夜蛾(Spodoptera litura)幼虫的内源基因，但是，在用微施用器(micro applicator)将dsRNA注射到第五龄幼虫的血淋巴之后，Rajagopal等人却成功地获得了抑制。最近，Yadav等人(2006)报道了在植物中产生的宿主制备的dsRNA可以防止植物感染线虫。类似地，美国专利申请公开No.2003/0150017预见性地描述了用于使用送递到幼虫的dsRNA抑制鳞翅目幼虫棉铃虫(Helicoverpaarmigera)的优选基因座，所述送递通过摄取了被转化为产生dsRNA的植物来实现。WO 2005/110068教导了在玉米根虫(CRW)的食物中提供针对关键CRW基因的CRW特异性dsRNA。在体外和植物中在CRW食物中提供dsRNA，结果是在摄入该食物后CRW幼虫的成长受阻碍或被杀死，并且对一些不同的基因证明了该作用。
因此，需要鉴定有效核苷酸序列，所述序列用于通过阻抑、延迟或其它方式减少特定鞘翅目害虫中的基因表达而调节基因表达的改进方法中，该方法的目的是控制害虫侵袭或诱导新的表型性状。
发明概述
一方面，本发明提供抑制鞘翅目害虫中靶基因表达的方法。在某些实施方案中，该方法包括调节或抑制鞘翅目害虫中一种或多种靶基因的表达，所述方法能导致摄食、生长、发育、繁殖和/或感染力停止，最终导致昆虫死亡。所述方法包括：将稳定化的双链RNA(dsRNA)，包括其修饰形式(例如，小干扰RNA(siRNA)序列)的部分或全部引入到鞘翅目昆虫体内细胞或细胞外环境(例如，中肠)中，其中dsRNA进入到细胞中，并且抑制至少一种或多种靶基因的表达，并且，其中该抑制在鞘翅目害虫上施加了有害的作用。本发明的方法和相关组合物可以用于通过在害虫的食物中提供本文描述的一种或多种包含dsRNA分子的组合物，在任何害虫宿主、害虫共生体或害虫存在的环境内部或表面上限制或消除鞘翅目害虫的侵袭。该方法对于防止昆虫攻击植物特别有益。在一种实施方案中，害虫限定为消化系统的pH为大约4.5至大约9.5，大约5至大约9，大约6至大约7以及大约pH 7.0。
另一方面，本发明提供了示例性核酸组合物，其与靶害虫中一种或多种天然核酸序列的至少一部分同源。在某些实施方案中，害虫选自叶甲物种(Diabrotica sp.)，包括西部玉米根虫(WCR，Diabrotica virgifera或Diabrotica virgifera virgifera)、南部玉米根虫(SCR，Diabroticaundecimpunctata howardi)、墨西哥玉米根虫(MCR，Diabrotica virgiferazea)、巴西玉米根虫(BZR，Diabrotica balteata，Diabrotica viridula，Diabrotica speciosa)、北部玉米根虫(NCR，Diabrotica barberi)、Diabroticaundecimpunctata；以及科罗拉多马铃薯甲虫(CPB，Leptinotarsadecemlineata)、赤拟谷盗(RFB，Tribolium castaneum)和墨西哥豆甲(Epilachna varivestis)。在其它实施方案中，害虫选自鳞翅目昆虫，包括欧洲玉米螟(ECB，Ostrinia nubilalis)、小地老虎(BCW，Agrotis ipsilon)、玉米粘虫(CEW，Helicoverpa zea)、秋夜蛾(FAW，Spodopterafrugiperda)、棉铃象鼻虫(BWV，Anthonomus grandis)、蚕(Bombyxmori)和烟草天蛾(Manduca sexta)，以及双翅目昆虫，包括黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、疟蚊(Anopheles gambiae)和埃及伊蚊(Aedes aegypti)。本发明提供的所述核酸的具体实例示于所附序列表中的SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906。
另一方面，本发明提供了用于抑制鞘翅目害虫如玉米根虫或相关物种的基因表达的方法，该方法包括在害虫的食物中提供基因抑制量的至少一种从上文描述的核苷酸序列转录的dsRNA分子，其至少一个片段与害虫细胞内的mRNA序列互补。该方法可以进一步包括观察害虫的死亡、摄食抑制、受阻或停止。根据本发明使害虫摄食的dsRNA分子，包括其修饰形式，如siRNA分子，可以与从选自SEQ ID NO：1-SEQ IDNO：906的核苷酸序列转录的RNA分子具有约80，81，82，83，84，85，86，87，88 89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99或约100％同一性。在特定实施方案中，核苷酸序列可以选自SEQ ID NO：697、SEQ IDNOs：813-819、SEQ ID NO：841和SEQ ID NO：874。
因此，在本发明的另一方面，提供了一组分离和纯化的核苷酸序列，如SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906所示。本发明提供了稳定化的dsRNA分子或一种或多种miRNA的表达，用于抑制鞘翅目害虫中从这些序列和片段表达靶基因。稳定化的dsRNA，包括miRNA或siRNA分子可以包含至少两个编码序列，它们相对于至少一个启动子是有义和反义方向排列的，其中包含有义链和反义链的核苷酸序列通过至少约5-约1000个核苷酸的间隔序列连接或相连，其中有义链和反义链可以是不同的长度，并且其中所述两个编码序列中的每一个序列与SEQ ID NO：1-SEQID NO：906所示的任何一个或多个核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，至少90％，至少95％，至少98％，或100％的序列同一性。
本发明进一步提供了选自SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的核酸序列的片段或串联体。在特定实施方案中，核苷酸序列可以包含选自SEQID NO：697、SEQ ID NOs：813-819、SEQ ID NO：841和SEQ ID NO：874的序列的片段或串联体。
当表达为dsRNA并且提供给害虫时，该片段可以定义为导致害虫死亡、摄食抑制、受阻或停止。该片段可以例如包含SEQ ID NO：1-SEQID NO：906中任何一个或多个序列或其互补序列的至少约19，21，23，25，40，60，80，100，125或更多个连续核苷酸。用于本发明中的一种有益的DNA片段的长度是约19-约23个核苷酸，或约23-约100个核苷酸，最多至约2000个核苷酸或更多。特别有用的将是包括约23-约300个与害虫靶序列同源的核苷酸的dsRNA序列。本发明也提供了从任何所述序列表达的核糖核酸，包括dsRNA。可以从来自一种或多种靶害虫的单个序列构建选择用于表达基因抑制剂的序列，并且用于表达抑制一种或多种靶害虫中的单个基因或基因家族的RNA，或该DNA序列可从多种DNA序列构建为嵌合体。
另一方面，本发明提供了重组DNA构建体，其包含编码本文描述的dsRNA分子的核酸分子。可以通过从与选自SEQ ID NO：1-SEQ IDNO：906的核苷酸序列具有至少约80％-约100％同一性的核苷酸序列转录dsRNA分子的一条链，形成dsRNA。所述重组DNA构建体可以定位为能够在摄入后在害虫中抑制内源靶基因表达的dsRNA分子。该构建体可以包含任选与在宿主细胞中起作用的启动子序列连接的本发明的核苷酸序列。所述启动子可以是组织特异性的，并且可以例如特异于受害虫攻击的组织类型。例如，在根虫的情况下，可能需要使用提供优选根表达的启动子。
本发明的核酸构建体可以包含至少一个非天然存在的核苷酸序列，其可以转录为能够在体内通过杂交形成dsRNA分子的单链RNA。所述dsRNA序列自身组装，并且可以提供在鞘翅目害虫的食物中，以达到需要的抑制。
重组DNA构建体可以包含两种不同的非天然序列，所述序列在体内表达为dsRNA序列并且提供在鞘翅目害虫的食物中时，抑制至少两种不同的靶基因在鞘翅目害虫细胞中的表达。在某些实施方案中，在包括具有害虫抑制作用的细胞的细胞或植物中产生至少3，4，5，6，8或10或更多种不同的dsRNAs。所述dsRNA可以从不同转化事件中引入的多个构建体表达，或可以引入单个核酸分子上。可以用单个启动子或多个启动子表达dsRNA。在本发明的一种实施方案中，产生单个dsRNA，其包含与害虫内的多个基因座同源的核酸。
另一方面，本发明提供重组宿主细胞，其基因组中具有至少一个重组DNA序列，该序列转录产生至少一个dsRNA分子，该分子在鞘翅目害虫摄入时起作用，抑制害虫中靶基因的表达。dsRNA分子可以由本文描述和序列表所示的任何核酸编码。本发明也提供了基因组中具有至少一个本文描述的重组DNA序列的转化植物细胞。也提供了包含所述转化植物细胞的转基因植物，包括任何代的后代植物、种子和植物产品，它们均包含重组DNA。
本发明的方法和组合物可应用于任何单子叶和双子叶植物，这取决于想要的鞘翅目害虫控制。特别地，植物包括但不限于：苜蓿、莳萝(aneth)、Apple、杏、朝鲜蓟、芝麻菜、芦笋、鳄梨、香蕉、大麦、菜豆、甜菜、黑莓、蓝莓、椰菜、抱子甘蓝、卷心菜、卡罗拉(canola)、香瓜、胡萝卜、木薯、花椰菜、芹菜、樱桃、芫荽、柑橘、克莱门氏小柑橘、咖啡、玉米、棉花、黄瓜、花旗松、茄子、苦苣、宽叶莴苣、桉树、茴香、无花果、葫芦、葡萄、柚子、哈密瓜、豆薯、奇异果、莴苣、韭菜、柠檬、酸橙、火炬松、芒果、瓜、蘑菇、坚果、燕麦、黄秋葵、洋葱、桔、装饰用植物、木瓜、欧芹、豌豆、桃、花生、梨、胡椒、柿、松树、菠萝、大蕉、李、石榴、白杨、马铃薯、南瓜、温柏、辐射松、菊苣、萝卜、覆盆子、水稻、裸麦、高粱、南方松、大豆、菠菜、倭瓜、草莓、糖甜菜、甘蔗、向日葵、红薯、苏合香、蜜柑、茶、烟草、番茄、草皮、蔓生植物、西瓜、小麦、薯蓣以及小胡瓜植物。因此，本发明也提供了SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906所示的重组DNA序列或其串联体、片段或互补序列转化的植物，所述序列转录产生至少一种当鞘翅目害虫摄取时抑制害虫中靶基因表达的dsRNA分子。在特定实施方案中，重组DNA序列可以选自SEQ ID NO：697、SEQ ID NOs：813-819、SEQ IDNO：841和SEQ ID NO：874或其片段、互补序列或串联体。
本发明还提供了用于控制鞘翅目害虫侵袭的方法和组合物的组合。一种手段提供了用于保护植物防止昆虫侵袭的、本文所述的dsRNA方法，以及一种或多种杀昆虫剂，所述杀昆虫剂展示出与dsRNA方法和组合物所展示出的特征不同的特征。例如，可以在昆虫害虫的食物中提供一种或多种Bt蛋白，其与本文描述一种或多种dsRNA组合。配制为局部应用的组合物，或使用转基因方法获得的将dsRNA方法和组合物与Bt方法和组合物组合起来的组合物，能产生协同效应，这是控制昆虫侵袭的领域中以前未知的。一种协同效应是dsRNA或Bt蛋白所需的表达水平降低。当组合到一起时，每种害虫控制剂都仅需要更低的有效剂量。认为Bt杀昆虫蛋白建立了进入孔，dsRNA分子通过所述的进入孔能更为有效地穿透进入远离昆虫肠道的空间，或者更为有效地进入Bt蛋白所建立的损伤附近的细胞，由此仅需要更少量的Bt或dsRNA就能获得想要的杀昆虫结果，或者想要的对靶害虫靶生物功能的抑制或遏制。
因此，本发明提供了一种组合物，其中含有两种或多种不同的杀虫剂，其中每种都对同样的害虫或昆虫物种有毒，其中的至少一种包含本文描述dsRNA。在某些实施方案中，第二种杀虫剂可以选自下组：马铃薯块茎储藏蛋白(patatin)、苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白、致病杆菌杀昆虫蛋白、光杆菌杀昆虫蛋白、侧孢芽孢杆菌杀昆虫蛋白、球形芽孢杆菌杀昆虫蛋白以及木质素。苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白可以是大量杀昆虫蛋白中的任何种类，所述杀昆虫蛋白包括但不限于：Cry1、Cry3、TIC851、CryET70、Cry22、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、二元杀昆虫蛋白CryET33和CryET34、二元杀昆虫蛋白CryET80和CryET76、二元杀昆虫蛋白TIC100和TIC101、二元杀昆虫蛋白PS149B1、VIP杀昆虫蛋白、TIC900或相关蛋白、或杀昆虫蛋白ET29或ET37与杀昆虫蛋白TIC810或TIC812的组合，以及任何前述杀昆虫蛋白的杀昆虫嵌合体。
在食物中提供的核糖核酸可以提供在人工食物中，该食物配制用于满足害虫保持所述食物的特殊营养要求。该食物中可以补充害虫控制量的RNA，该RNA从分开的表达系统中纯化，以确定害虫控制量的RNA组合物或确定害虫摄取经过补充的食物后的抑制活性程度。该食物也可以是用DNA序列转化的重组细胞，所述DNA序列构建用于表达试剂、RNA或基因抑制剂。害虫摄取一种或多种所述转化细胞后，观察到需要的表型结果，表明该试剂抑制害虫细胞内的靶核苷酸序列的表达。
被靶向进行抑制的基因可编码必须的蛋白，所述蛋白的预期功能选自：肌肉形成，保幼激素的形成，保幼激素的调节，离子调节和转运，蛋白合成和转运、消化酶合成，细胞膜电位保持，氨基酸生物合成，氨基酸降解，精子形成，信息素合成，信息素传感，触角形成，翅膀形成，腿形成、发育和分化，卵形成，幼虫成熟，消化酶形成，血淋巴合成，血淋巴的保持，神经传递，细胞分裂，能量代谢，呼吸，未知功能，以及凋亡。
本发明的另一方面也提供了用于改进受到昆虫害虫侵袭的农作物产生的农作物产量的方法，所述方法包括以下步骤：a)将包含选自SEQID NO：1-SEQ ID NO：906的序列的多核苷酸或其互补序列或串联体或片段引入所述农作物植物；和b)培养所述农作物植物以使所述多核苷酸表达，其中所述多核苷酸的表达抑制昆虫害虫的摄食和由于害虫侵袭导致的产量损失。
在某些实施方案中，多核苷酸的表达产生RNA分子，其抑制摄取了所述农作物植物的一部分的昆虫害虫中的至少第一靶基因，其中该靶基因行使选自下组的至少一种必须功能：害虫摄食，害虫存活力，害虫细胞凋亡，害虫或任何害虫细胞的分化和发育，害虫的有性繁殖，肌肉形成，肌肉颤搐，肌肉收缩、保幼激素的形成和/或减少，保幼激素的调节，离子调节和转运，细胞膜电位的保持，氨基酸生物合成，氨基酸降解，精子形成，信息素合成，信息素传感，触角形成，翅膀形成，腿形成，卵形成，幼虫成熟、消化酶形成，血淋巴合成，血淋巴保持，神经传递，幼虫阶段转变，化蛹，破蛹，细胞分裂，能量代谢，呼吸，细胞骨架结构合成和保持，核苷酸代谢，氮代谢，水利用，水保持，以及感觉感知。
在其它实施方案中，昆虫害虫是玉米根虫害虫，选自：Diabroticaundecimpunctata howardi(南部玉米根虫(SCR))，Diabrotica virgiferavirgifera(西部玉米根虫(WCR))，Diabrotica barberi(北部玉米根虫(NCR))，Diabrotica virgifera zea(墨西哥玉米根虫(MCR))，Diabroticabalteata(巴西玉米根虫(BZR))，Diabrotica viridula(巴西玉米根虫(BZR))，和Diabrotica speciosa(巴西玉米根虫(BZR))。
也提供了改进由受到昆虫害虫侵袭的农作物植物产生的农作物的干旱耐受力的方法，所述方法包括以下步骤：a)将选自SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的多核苷酸序列或其片段引入所述农作物植物；和b)培养所述农作物植物以使所述多核苷酸表达，其中所述多核苷酸的表达抑制昆虫害虫的摄食和由于害虫侵袭导致的干旱耐受力受损。
本发明的另一方面进一步提供了农业上和商业上重要的产品和/或组合物，包括但不限于，动物饲料、农产品和意欲用作人类消耗的食物或用于人类消耗的组合物和农产品中的产品和副产品，包括但不限于玉米面、玉米粗粉、玉米浆、玉米油、玉米淀粉、爆米花、玉米饼、谷物等。这些组合物可以含有可检测量的本文示出的核苷酸序列，因此也可以诊断含有此类核苷酸序列的任何转基因事件。这些产品是有用的，至少因为它们可能来源于在更少杀虫剂和有机磷酸酯的条件下繁殖的农作物，这是由于它们掺入了本发明的核苷酸用于控制鞘翅目害虫在植物中的侵袭的结果。此类农产品和农产品制品是从由转基因植物产生的种子来生产的，其中，所述转基因植物表达RNA，所述RNA来自本发明的一种或多种连续核苷酸，或一种或多种鞘翅目害虫的核苷酸及其互补序列。此类农产品和农产品制品还可用于控制此类农产品和农产品制品的鞘翅目害虫，例如，控制面粉象鼻虫，因为在农产品或农产品制品中存在有能抑制害虫基因的RNA，所述RNA是本发明所示的基因序列所表达的。
也提供了生产所述农产品制品的方法，包括获得用包含选自SEQ IDNO：1-SEQ ID NO：906的序列或其串联体或片段或互补序列的多核苷酸转化的植物，并且从所述植物或其部分制备农产品制品。此外，本发明的另一方面是生产食品或饲料的方法，包括获得用选自SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的多核苷酸或其片段或互补序列转化的植物，并且从所述植物或其部分制备食品或饲料。
本发明也提供了计算机可读的介质，在其上记录有SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906示出的核苷酸序列中的一种或多种或其互补序列，用于大量基于计算机的应用，包括但不限于，DNA同一性和相似性检索、蛋白质同一性和相似性检索、转录谱表征、基因组之间的比较以及人工杂交分析。
附图简述
图1：用pMON98503(SEQ ID NO：820)转化并且用西部玉米根虫(WCR)侵袭的F1玉米植物事件的生物测定。
图2：用包含串联体C1(SEQ ID NO：821)的pMON98504转化并且用西部玉米根虫(WCR)侵袭的F1玉米植物事件的生物测定。
图3：Dv49和Dv248片段的选择和Dv49-Dv248串联体C38的示意性设计。
图4：基于串联体C38合成的dsRNAs F1-F13。
图5：DV49-DV248串联体38剂量反应(片段F1-F6)。
图6：DV49-DV248串联体38剂量反应(片段F7-F10)。
图7：DV49-DV248串联体38剂量反应(片段F11-F13)。
发明详述
下文是对本发明的详细描述，其被提供来协助本领域技术人员实践本发明。本领域普通技术人员可不离开本发明宗旨或范围的情况下在本文所述的实施方式中做出改良和变化。
本发明提供了用于遗传控制害虫侵袭的方法和组合物。例如，本发明提供了重组DNA技术，用于转录后阻抑或抑制害虫细胞中靶编码序列的表达，从而提供害虫防护作用，该方法是通过使害虫摄食一种或多种从靶编码序列的全部或部分转录的双链或小干扰核糖核酸(RNA)分子，从而控制侵袭。因此，本发明涉及用双链RNA(dsRNA)，包括小干扰RNA(siRNA)对编码序列的表达进行序列特异性抑制，以达到预期的害虫控制水平。
提供了分离和基本纯化的核酸分子，包括但不限于非天然存在的核苷酸序列和重组DNA构建体，用于转录物发明的dsRNA分子，所述序列和构建体在引入时阻抑或抑制害虫中的内源编码序列或靶编码序列的表达。也提供了转基因植物，它们(a)包含编码用于转录dsRNA分子从而控制植物害虫侵袭的分离和基本纯化的核酸分子以及非天然存在的重组DNA构建体的核苷酸序列，并且(b)展示对昆虫侵袭的抗性和/或增强的耐受性。也描述了含有本发明的dsRNA核苷酸序列的组合物，用于表面施用到植物上或动物上或施用到动物的环境中，以实现害虫侵袭的消除或减少。
发明人发现，与现有技术的教导相反，使鞘翅目物种(由所述物种得到核苷酸序列)摄食含有由鞘翅目物种的一种或多种表达的核苷酸序列中存在的序列组成的双链RNA分子的组合物，导致鞘翅目物种中一种或多种生物功能的抑制。特别地，发明人发现使农作物害虫物种如玉米根虫摄食本文描述的双链RNA分子，导致摄入这些组合物的昆虫害虫的死亡或发育和分化抑制。
发明人鉴定了本文描述的核苷酸序列提供抗鞘翅目害虫物种的保护作用。推导了cDNA序列编码的氨基酸序列，并且与已知氨基酸序列进行比较。预测这些序列中的许多序列都编码具有与其相关的一些注释信息的蛋白。与特定核苷酸序列和由其编码的蛋白序列相关的注释信息是基于通过本文描述的编码序列的翻译推导的氨基酸序列与公共数据库中的本领域已知氨基酸序列之间的同源性或相似性。
选择编码存活所必须的蛋白或蛋白部分的cDNA序列，用于制备在鞘翅目害虫的食物中提供的双链RNA分子，所述蛋白例如参与多种代谢或分解代谢生化途径、细胞分裂、繁殖、能量代谢、消化、神经系统功能等的氨基酸。如本文的描述，靶害虫摄入含有一种或多种dsRNA(其至少一个片段相应于靶害虫细胞中产生的至少一个基本相同的RNA片段)的组合物，导致靶害虫的死亡、发育迟缓或其它抑制。这些结果表明，由鞘翅目害虫得到的核苷酸序列，即DNA或RNA，可以用于构建抗害虫侵袭的植物细胞。例如，可以转化害虫宿主，使其含有一种或多种来源于鞘翅目害虫的核苷酸序列。转化到害虫宿主或共生体中的核苷酸序列可以编码在转化的宿主或共生体中的细胞或生物流体中形成dsRNA的一种或多种RNA，从而如果/当害虫在转基因宿主或共生体上摄食时，害虫的食物中可以存在dsRNA，导致害虫细胞中的一种或多种基因的表达阻抑，并且最终导致害虫死亡、生长迟缓或其它抑制。
本发明一般涉及宿主生物中鞘翅目害虫侵袭的遗传控制。更具体地，本发明包括用于将害虫控制剂送递给鞘翅目害虫的方法。所述害虫控制剂直接或间接导致害虫保持自身生长或以其它方式侵袭靶宿主或共生体的能力受损。本发明提供了用于在害虫食物中采用稳定化的dsRNA分子作为阻抑害虫中靶基因的手段的方法，从而实现了害虫靶定的宿主或共生体中或关于所述宿主或共生体的所需害虫侵袭控制。
在实现前述目的的过程中，本发明提供了抑制鞘翅目害虫，包括例如玉米根虫或其它鞘翅目昆虫物种中靶基因表达的方法，导致害虫的摄食、生长、发育、繁殖、感染力的停止，最终可以导致害虫死亡。在一个实施方案中，该方法包括将部分或完全稳定化的双链RNA(dsRNA)核苷酸分子引入作为害虫食物来源的营养组合物，并且使害虫能够得到所述营养组合物用于摄食。摄入含有双链或siRNA分子的营养组合物导致害虫细胞摄取分子，导致害虫细胞中至少一种靶基因表达的抑制。靶基因的抑制对害虫施加有害作用。
在某些实施方案中，本发明提供的dsRNA分子包含与SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906中任意一个所示序列互补的核苷酸序列，害虫生物中SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906中任意一个所示序列的抑制导致害虫生长和发育或其它生物功能所必须的蛋白或核苷酸试剂的减少或去除。选择的核苷酸序列可以与序列表中SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906所示的核苷酸序列之一，包括其互补序列具有约80％-至少约100％的序列同一性。所述抑制可以描述为特异性的，因为靶基因的一部分的核苷酸序列选自抑制性dsRNA或siRNA转录的序列。该方法可以有效抑制至少一种靶基因的表达，并且可以用于抑制害虫中的很多不同类型的靶基因。在特定实施方案中，核苷酸序列可以选自SEQ ID NO：697，SEQ IDNOs：813-819，SEQ ID NO：841和SEQ ID NO：874。
通过建立合适的表达构建体，鉴定为具有害虫防护作用的序列可以容易地表达为dsRNA分子。例如，通过以下步骤，所述序列可以表达为发夹以及茎和环结构：取出相应于选自SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的序列或其片段的第一片段，将该序列连接于不与第一片段同源或互补的第二片段间隔区，并且将其与转录RNA的第三片段连接，其中第三片段的至少一部分与第一片段基本互补。所述构建体通过第一片段与第三片段的杂交形成茎和环结构，形成包含第二片段的环结构(WO94/01550，WO98/05770，US 2002/0048814A1，和US 2003/0018993A1)。
A.核酸组合物和构建体
本发明提供了用于实现特定宿主或共生体害虫靶的稳定转化的重组DNA构建体。转化的宿主或共生体害虫靶可以表达杀虫有效水平的来自所述重组DNA构建体的优选dsRNA或siRNA分子，并且在害虫的食物中提供所述分子。可以从cDNA文库和/或基因组文库信息提供成对的分离和纯化的核苷酸序列。核苷酸序列对可以来源于任何优选的鞘翅目害虫，用作热扩增对，以产生用于制备本发明的dsRNA和siRNA分子的DNA模板。
本文中使用的术语“核酸”指从5’至3’末端读码的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸碱基的单或双链聚合物。任选地，“核酸”还可含有非天然存在的或被改变的核苷酸碱基，其允许通过聚合酶的正确读码，不会减少该核酸编码的多肽的表达。术语“核苷酸序列”或“核酸序列”指作为单独的单链存在或存在于双链体中的核酸的有义和反义链。术语“核糖核酸”(RNA)包括RNAi(抑制性RNA)、dsRNA(双链RNA)、siRNA(小干扰RNA)、mRNA(信使RNA)、miRNA(微RNA)、tRNA(转运RNA、被或未被相应的酰化氨基酸加上电荷的)以及cRNA(互补RNA)，术语“脱氧核糖核酸”(DNA)包括cDNA和基因组DNA以及DNA-RNA杂交体。词汇“核酸片段”、“核酸序列片段”或更常见的“片段”将被本领域技术人员理解为：其包括基因组序列、核糖体RNA序列、转运RNA序列、信使RNA序列、操纵子序列和更小的工程化的核苷酸序列，所述序列表达或可适于表达蛋白质、多肽或肽。
根据本发明，提供了核苷酸序列，其表达得到与昆虫中的靶基因的RNA分子显著同源的RNA序列，所述昆虫包含由昆虫基因组中的核苷酸序列编码的RNA序列。因此，在摄入稳定化的RNA序列后，可以获得对昆虫细胞中靶基因的核苷酸序列的下调，导致对昆虫的维持、存活力、增殖、繁殖和侵袭的有害作用。
本文中使用的术语“显著同源”或者“显著同源性”，在提到核酸序列时，包括在严格条件下与序列表中SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906中任意一个所示的编码序列或其互补序列杂交的核苷酸序列。在严格条件下与序列表中SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的任意序列或其互补序列杂交的序列是允许两条序列间发生反向平行排列的序列，然后两条序列能在严格条件下与相反链上的对应碱基形成氢键，以形成双链体分子，其在严格条件下是足够稳定的，使用本领域公知方法能检测到。优选地，显著同源的序列与序列表中的SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906中任意一个所示的参照核苷酸序列或其互补序列具有大约70％-大约80％的序列同一性，或者更优选地，大约80％-大约85％的序列同一性，或者最优选地，大约90％-大约95％的序列同一性，至大约99％的序列同一性。
本文中使用的术语“序列同一性”、“序列相似性”或“同源性”被用于描述两条或多条核苷酸序列之间的关系。两条序列之间“序列同一性”的百分比是通过下述方法来测定的：在比较窗上比较两条最优比对的序列，其中，较之参照序列(不包含添加或缺失)，比较窗中序列的一部分可以包含添加或缺失(即，空位)，用于最优比对两条序列。通过下述方法来计算百分比：测定两条序列中存在相同核酸碱基或氨基酸残基的位置的数量，以产生匹配位置的数量，用匹配位置的数量除以比较窗中的位置总数，将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。与参照序列比较时每个位置都相同的序列被认为与对照序列相同，反之亦然。如果第一条核苷酸序列展示出与第二条或参照序列的完全互补性，以5’至3’方向来观察时，第一条核苷酸序列被认为是以3’至5’方向来观察的第二条或参照核苷酸序列的互补序列或与其互补。在本文中，以5’至3’方向读码的序列之一中的每个核苷酸与以3’至5’方向读码的其它序列的每个核苷酸都互补的时候，我们说核酸序列分子展示出“完全互补性”。与参照核苷酸序列互补的核苷酸序列将展示出与参照核苷酸序列的反向互补序列相同的序列。这些术语和描述在本领域中有明确的定义，是本领域普通技术人员易于理解的。
本文中使用的“比较窗”指，至少6个连续位置的概念上的片段，通常大约50至大约100，更常见地，大约100至大约150个连续位置，其中，两条序列被最优比对之后，将一条序列与具有同样数量连续位置的参照序列相比。较之参照序列(不包含添加或缺失)，比较窗可以包含大约20％或更少的添加或缺失(即，空位)，用于两条序列的最优比对。本领域技术人员将参考Wisconsin Genetics Software Package Release7.0，Genetics Computer Group，575 Science Drive Madison，Wis.，USA)中用于序列比对的详细方法或参考Ausubel等人(1998)中关于序列分析的详细讨论。
本发明还提供了DNA序列，其能在细胞或微生物中表达为RNA，以便抑制昆虫细胞、组织或器官中靶基因的表达，该序列包含编码一种或多种不同核苷酸序列的DNA分子，其中，不同核苷酸序列中的每一种都包含间隔序列所连接的有义核苷酸序列和反义核苷酸序列，所述序列编码本发明的dsRNA分子。间隔序列构成了有义核苷酸序列或反义核苷酸序列的部分，并且形成于有义和反义序列之间的dsRNA分子内。有义核苷酸序列和反义核苷酸序列与靶基因的核苷酸序列或其衍生物或其互补序列基本相同。dsDNA分子被可操作地置于启动子序列的控制下，所述启动子序列在宿主的细胞、组织或器官中发挥作用，表达dsDNA，产生dsRNA分子。在一种实施方案中，DNA序列可以来源于序列表中SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906所示的核苷酸序列。
本发明还提供了DNA序列，用于在植物细胞中表达，并且，随着DNA表达为RNA以及被靶害虫摄取，能获得对有害昆虫细胞、组织或器官中靶基因的表达的阻抑。dsRNA至少包含一种或多种结构基因序列，其中，每种结构基因序列都包含间隔序列所连接的有义核苷酸序列和反义核苷酸序列，所述序列在互补和反义序列中形成环。有义核苷酸序列和反义核苷酸序列与靶基因的核苷酸序列或其衍生物或其互补序列基本相同。一种或多种结构基因序列被可操作地置于一种或多种启动子序列的控制下，其中至少一种在原核或真核生物，特别是植物的细胞、组织或器官中是可操作的。
本发明的用于控制害虫的基因序列或片段可被克隆到在转基因植物细胞中可操作的两种组织特异性启动子，例如两种根特异性启动子之间，所述基因序列或其片段可在此处表达，在转基因植物细胞中产生mRNA，其形成dsRNA分子。植物组织中含有的dsRNA分子被昆虫摄取，从而获得对靶基因表达的预期阻抑。
本发明提供的核苷酸序列可以包含被“间隔序列”分离开的反向重复序列。间隔序列可以是包含下述任何核苷酸序列的区域，如果需要，所述核苷酸序列能促进每个重复序列之间二级结构形成。在本发明的一种实施方式中，间隔序列是mRNA的有义或反义编码序列的一部分。或者，间隔序列可以包含能与核酸分子共价连接的核苷酸或其同源物的任何组合。间隔序列可包含长度为至少大约10-100个核苷酸的核苷酸序列，或者长度为至少大约100-200个核苷酸，长度为至少大约200-400个核苷酸，或者长度为至少大约400-500个核苷酸。
序列表中的核酸分子或核酸分子的片段或其它核酸分子能在某些条件下特异性地与其它核酸分子杂交。本文中，如果两个分子能形成反向平行的双链核酸结构，就说两个核酸分子能互相特异性杂交。如果两个核酸分子展示出完全互补性，我们就说一个核酸分子是另一个核酸分子的互补序列。如果在至少传统的“低严格性”条件下，两个分子能以足够的稳定性互相杂交，允许它们保持为互相退火的状态，我们就说这两个分子是“最小互补的”。类似地，如果在传统的“高严格性”条件下，两个分子能以足够的稳定性互相杂交，允许它们保持为互相退火的状态，我们就说这两个分子是互补的。传统的严格条件在Sambrook等人和Haymes等人的文献中有所描述。
因此，与完全互补有背离是允许的，只要这种背离不会使分子形成双链结构的能力完全消失即可。因此，为使核酸分子或核酸分子的片段被用作为引物或探针，仅需要序列足够互补，能在所用的特定溶剂和盐浓度下形成稳定的双链结构即可。
能促进DNA杂交的合适的严格条件是，例如，大约45℃下，6.0x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)，接着在50℃用2.0xSSC洗涤，这是本领域技术人员已知的，或者可在Current Protocols in Molecular Biology(1989)中找到。例如，洗涤步骤中的盐浓度可选自：50℃下大约2.0xSSC的低严格性，至50℃下大约0.2xSSc的高严格性。此外，洗涤步骤的温度可以从室温，即约22℃下的低严格性条件至约65℃下的高严格性条件。温度和盐可都改变，或者，温度或者盐浓度可以保持恒定，其它变量改变。用于本发明的核酸可以在所述条件下可以与来自WCR的一种或多种核酸分子或其互补序列特异性杂交。优选地，用于本发明的核酸将与序列表中SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906所示的一种或多种核酸分子具有至少大约80％，或者至少大约90％，或者至少大约95％，或者至少大约98％，或者甚至大约100％的序列同一性。
本发明的核酸还可以是通过本领域已知的方法完全或部分合成的。因此本发明核酸的全部或部分可以是使用选则的宿主偏好的密码子来合成的。物种偏好的密码子可以通过，例如，从在特定宿主物种中表达的蛋白中使用最频繁的密码子来确定。对核苷酸序列的其它修饰可以得到具有轻微改变的活性的突变体。
dsRNA或siRNA核苷酸序列包含聚合的核糖核苷酸的双链，并且可以包含对磷酸-糖主链或核苷的修饰。RNA结构的修饰可以进行调整，以允许特异性遗传抑制。在一种实施方式中，可通过酶方法对dsRNA分子进行修饰，从而可以产生siRNA分子。siRNA可有效介导针对一些昆虫中的一些靶基因的下调作用。这种酶方法可通过在真核RNAi途径中利用昆虫、脊椎动物、真菌或植物细胞中存在的RNAse III酶或DICER酶来完成(Elbashir等人，2002；Hamilton和Baulcombe，1999)。该方法还可利用本领域技术人员容易了解的通过重组DNA技术引入到靶昆虫细胞中的重组DICER或RNAse III来进行。天然存在于昆虫中的或通过重组DNA技术制造的DICER酶和RNAse III能将较大的dsRNA链切割为较小的寡核苷酸。DICER酶能特异性地将dsRNA分子切割为siRNA片段，其中，每个siRNA片段的长度为大约19-25个核苷酸，而RNAseIII酶通常将dsRNA分子切割为12-15个碱基对的siRNA。通过上述任何酶产生的siRNA分子具有2至3个核苷酸的3’突出端和5’磷酸和3’羟基末端。通过RNAse III酶产生的siRNA与在真核RNAi途径中通过Dicer酶产生的那些相同，因此，然后可被靶定，并在随后松散之后被内在的细胞RNA降解机制降解，分离为单链RNA，并且与靶基因转录的RNA序列杂交。这种方法导致对昆虫中靶基因的核苷酸序列编码的RNA序列进行有效降解或除去。结果就是昆虫中被特别靶定的核苷酸序列的沉默。对酶方法的细节描述可在Hannon(2002)中找到。
本发明的核苷酸序列可被记录到计算机可读介质上。本文中使用的“计算机可读介质”指：可通过计算机直接阅读和存取的有形表达介质。此类介质包括但不限于：磁性存储介质，例如软盘，硬盘，存储介质和磁带；光学存储介质，例如CD-ROM；电子存储介质，例如RAM和ROM；光学字符识别格式的计算机文档，以及上述种类的杂合体，例如，磁性/光学存储介质。本领域技术人员可以容易地认识到，目前任何已知的计算机可读介质可被用于制造下述产品，所述产品包含记录本发明的核苷酸序列的计算机可读介质。
本文中使用的“记录”指，用于在计算机可读介质上存贮信息的方法。本领域技术人员可以容易地采用任何目前已知的方法来在计算机可读介质上记录信息，以产生包含本发明核苷酸序列信息的介质。对于本领域技术人员来说，多种不同的数据存储结构是可获得的，用于制造记录本发明核苷酸序列的计算机可读介质。对数据存储介质的选择通常将基于选用来存取被存储信息的手段。此外，多种不同的数据处理器程序和格式可用于将本发明核苷酸序列存储到计算机可读介质上。序列信息可展示于字处理文本文档中，以可通过商业途径获得的软件，例如WordPerfect和Microsoft Word的格式，或者其可展示为ASCII文本文档的形式，存储于数据库应用中，例如DB2、Sybase、Oracle等。本领域技术人员可以容易地改编任何数量的数据处理器结构化格式(例如，文本文档或数据库)，以获得记录有本发明核苷酸序列信息的计算机可读介质。
允许本领域技术人员存取计算机可读介质中提供的序列信息的计算机软件是公众可获得的。在Sybase系统上执行BLAST(Altschul等人，1990)和BLAZE(Brutlag等人，1993)检索算法的软件可被用于鉴定序列中的读码框(ORF)，例如，本文提供的、含有与来自其它生物的ORF或蛋白的同源性的Unigene和EST。此类ORF是本发明序列中编码蛋白质的片段，可用于生产商业上重要的蛋白，例如，用于氨基酸生物合成、代谢、转录、翻译、RNA加工、核酸和蛋白降解、蛋白质修饰和DNA复制、限制、修饰、重组和修复的酶。
本发明还提供了含有本文所述的序列信息的系统，特别是基于计算机的系统。此类系统被设计为：能鉴定出本发明的核酸分子中的商业上重要的片段。本文中使用的“基于计算机的系统”指用于分析本发明核苷酸信息的硬件设备、软件设备和数据存储设备。本发明的基于计算机的系统的最小硬件设备包含中央处理器单元(CPU)、输入设备、输出设备和数据存储设备。本领域技术人员可以容易地指导，目前可获得的基于计算机的系统中任何一种都适合用于本发明。
本文中使用的“靶结构基序”或“靶基序”指，合理选出的任何序列或序列组合，其中，基于靶基序折叠时形成的三维构型来选择一种或多种序列。本领域已知多种靶基序。蛋白靶基序包括但不限于，酶活性位点和信号序列。核酸靶基序包括但不限于，启动子序列、顺式作用元件、发夹结构以及诱导型表达元件(蛋白结合序列)。
B.重组载体和宿主细胞转化
重组DNA载体可以是例如线性的或封闭的环状质粒。载体系统可以是单一载体或质粒，或两种或多种载体或质粒，它们一起含有将被引入细菌宿主基因组中的总DNA。此外，细菌载体可以是表达载体。序列表中的SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906所示的核酸分子或其片段或其互补序列可以，例如，合适地插入到载体中，所述载体处于合适启动子的控制之下，所述启动子在一种或多种微生物宿主中发挥作用，以驱动所连接的编码序列或其它DNA序列的表达。为此目的，很多载体都是可获得的，对合适载体的选择将主要取决于要插入到载体中的核酸的大小以及将用载体转化的特定宿主细胞。每种载体都含有多种组分，这取决于其功能(扩增DNA或表达DNA)以及与其相容的特定宿主细胞。用于细菌转化的载体组分通常包括但不限于下述组分中的一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种选择标记基因以及允许外源DNA表达的诱导型启动子。
表达和克隆载体通常含有选择基因，其也被称为选择标记。该基因编码在选择性培养基上生长的转化的宿主细胞存活或生长所必需的蛋白。典型的选择基因编码下述蛋白，所述蛋白：(a)赋予对抗生素或其它毒素，例如，氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素的抗性，(b)补足营养缺陷，或(c)提供无法从复合培养基中获得的关键营养物，例如，编码芽孢杆菌D-丙氨酸消旋酶的基因。这些被异源蛋白或其片段成功转化的细胞能产生赋予对药物抗性的蛋白，由此能在选择方案中存活。
用于生产mRNA的表达载体还可含有下述诱导型启动子，所述启动子能被宿主细菌生物识别，并与下述核酸可操作地连接，所述核酸例如，编码D.v.virgifera mRNA或其感兴趣的片段的核酸。适合用于细菌宿主的诱导型启动子包括β-内酰胺酶启动子，大肠杆菌λ噬菌体PL和PR启动子，以及大肠杆菌半乳糖启动子、阿拉伯糖启动子、碱性磷酸酶启动子、色氨酸(trp)启动子以及乳糖操纵子启动子及其变体和杂交启动子，例如，tac启动子。但是，其它已知的细菌诱导型启动子也是合适的。
在提到调节序列和结构核苷酸序列时，术语“可操作地连接”指，调节序列导致相连的结构核苷酸序列的受调节的表达。“调节序列”或“控制元件”指位于结构核苷酸序列上游(5’非编码序列)、内部或下游(3’非翻译序列)的核苷酸序列，其能影响到相关结构核苷酸序列的转录、RNA加工或稳定性、或翻译的时机和水平或数量。调节序列可以包括启动子、翻译前导序列、内含子、增强子、茎-环结构、阻遏物结合序列以及聚腺苷化识别序列等。
或者，表达构建体可随整合载体被整合进细菌基因组。典型地，整合载体含有与允许载体整合的细菌染色体同源的至少一种序列。整合看起来是载体DNA和细菌染色体中同源DNA之间的重组导致的。例如，用来自多种芽孢杆菌菌株的DNA构建的整合载体能整合进芽孢杆菌染色体(EP 0,127,328)。整合载体还可包含噬菌体或转座子序列。自杀载体也是本领域已知的。
对含有一种或多种上面列出的组分的合适载体的构建利用标准的重组DNA技术来进行。对经过分离的质粒或DNA片段加以切割，剪切，并重新连接为产生所需质粒想要的形式。可获得的细菌表达载体的例子包括但不限于，多功能大肠杆菌克隆和表达载体，例如，BluescriptTM(Stratagene，La Jolla，CA)，其中，例如，D.v.virgifera蛋白或其片段能被连接进载体，所述连接是以符合用于β-半乳糖苷酶氨基末端Met和随后七个残基的读码框的方式进行的，由此产生杂合蛋白；pIN载体(Van Heeke和Schuster，1989)等。
典型地，酵母重组构建体包括下述组分中的一种或多种：启动子序列、融合配偶体序列、前导序列、转录终止序列、选择标记。这些元件可以组合进表达盒，表达盒可被保持于复制子中，例如染色体外元件(例如，质粒)，其能稳定保持于宿主(例如酵母或细菌)中。复制子可以具有两套复制系统，由此允许其被保持于例如，酵母中用于表达，以及保持于原核生物宿主中用于克隆和扩增。此类酵母-细菌穿梭载体的例子包括YEp24(Botstein等人，1979)、pCl/1(Brake等人，1984)和YRpl7(Stinchcomb等人，1982)。此外，复制子可以是高或低拷贝数的质粒。高拷贝数质粒将通常具有大约5至大约200范围内的拷贝数，典型地，大约10至大约150。含有高拷贝数质粒的宿主将优选具有至少大约10，更优选至少大约20个拷贝。
有用的酵母启动序列可从编码代谢途径中酶的基因获得。此类基因的例子包括醇脱氢酶(ADH)(EP 0 284044)、烯醇酶、葡萄糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAP或GAPDH)、己糖激酶、磷酸果糖激酶、3-磷酸甘油酸酯变位酶和丙酮酸激酶(PyK)(EP0 3215447)。编码酸性磷酸酶的酵母PHO5基因也提供了有用的启动子序列(Myanohara等人，1983)。此外，天然不存在的合成启动子也可作为酵母启动子发挥作用。此类杂交启动子的例子包括与GAP转录激活区域相连的ADH调节序列(美国专利号4,876,197和4,880,734)。转录终止子序列和其它酵母识别的终止序列，如编码编码糖酵解酶的那些的例子，是本领域技术人员已知的。
或者，表达构建体可随整合载体被整合进酵母基因组。典型地，整合载体含有与允许载体整合的酵母染色体同源的至少一种序列，并且优选含有侧翼于表构建体的两种同源序列。整合看起来是载体和酵母染色体中同源DNA之间的重组导致的(Orr-Weaver等人，1983)。整合载体可以针对酵母中的特定基因座，这是通过选择合适的同源序列包括进载体来实现的。见上文所述的Orr-Weaver等人的文献。一种或多种表达构建体可以整合，可能影响产生的重组蛋白的水平(Rine等人，1983)。
本发明还考虑将本发明的核苷酸序列转化进植物，使得一种或多种dsRNA分子能以害虫抑制水平表达。使用本领域可获得的方法，可以容易地制备转化载体。转化载体包含一种或多种下述核苷酸序列，所述序列能被转录为RNA分子，并且与昆虫基因组编码的一种或多种核苷酸序列显著同源和/或互补，使得摄取RNA时，会对昆虫基因组中各个核苷酸序列中的至少一种的表达进行下调。
转化载体还可称作dsDNA构建体，其还可被定义为重组分子、昆虫控制剂、遗传分子或嵌合遗传构建体。本发明的嵌合遗传构建体可包含，例如，编码一种或多种反义转录物、一种或多种有义转录物、上述一种或多种物质的核苷酸序列，其中，来自其的转录物的全部或部分与下述RNA分子的全部或部分同源，所述RNA分子包含昆虫基因组中核苷酸序列编码的RNA序列。
在一种实施方式中，植物转化载体包含分离和纯化的DNA分子，其中包含与本发明的一种或多种核苷酸序列可操作地相连的启动子。核苷酸序列选自序列表中的SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906。核苷酸序列包括下述片段，其编码靶害虫RNA转录物中存在的RNA的全部或部分，还包含靶害虫RNA全部或部分的反向重复序列。包含表达载体的DNA分子还可含有功能性内含子序列(其定位于编码序列的上游或者甚至在编码序列之中)，所述分子还可以含有五撇(5’)非翻译前导序列(即，UTR或5’-UTR)，其定位于启动子和翻译起始位点之间。
植物转化载体可以含有来自一种以上基因的序列，由此允许一种以上的dsRNA产生，用于抑制靶害虫细胞中两种或多种基因的表达。本领域技术人员容易理解，具有相应于不同基因中存在的序列的序列的DNA片段可组合成单一的复合DNA片段，用于在转基因植物中表达。或者，可对已含有至少一种DNA片段的本发明质粒加以修饰，这是通过将额外DNA片段顺序插入到增强子和启动子和终止子序列之间来进行的。在设计用来抑制多种基因的本发明昆虫控制剂中，待抑制基因可从同一昆虫物种中获得，以增强昆虫控制剂的效率。在某些实施方式中，基因可从不同的昆虫获得，以拓宽试剂的有效昆虫范围。当为了阻抑或针对表达和阻抑的组合而靶定多种基因时，可以按照Fillatti，申请公开号US 2004-0029283所阐述和公开的，来制造多顺反子DNA元件。
在不同植物物种中具有功能的启动子也是本领域公知的。可用于在植物中表达多肽的启动子包括，Odell等人(1985)所述的诱导型、病毒、合成或组成型启动子，和/或被从时间上调节、空间上调节以及空间-时间调节的启动子。优选的启动子包括增强的CaMV35S启动子以及FMV35S启动子。就本发明的目的而言，例如，对在根部摄食的物种的最优控制而言，优选在植物根部中获得这些基因的最高水平表达。大量的根部增强启动子已被鉴定出来，它们是本领域已知的(Lu等人，2000；美国专利号5,837,848和6,489,542)。
典型地，本发明的重组DNA载体或构建体将包含选择标记，其能在植物细胞上赋予选择表型。选择标记还可用于选出含有编码本发明多肽或蛋白的外源核酸的植物或植物细胞。标记可以编码杀生物剂抗性、抗生素抗性(例如，卡那霉素、G418博来霉素、潮霉素等)或除草剂抗性(例如，草甘膦等)。选择标记的例子包括但不限于，编码卡那霉素霉素抗性的neo基因，可使用卡那霉素、G418等进行选择；编码双丙氨膦抗性的bar基因；突变EPSP合酶基因，其编码草甘膦抗性；腈水解酶基因，其赋予对溴苯腈的抗性；突变乙酰乳酸合酶基因(ALS)，其赋予对咪唑啉酮或磺脲的抗性；以及抗甲氨喋呤的DHFR基因。所述选自标记的实例说明于美国专利5,550,318；5,633,435；5,780,708和6,118,047。
本发明的重组载体或构建体还可包括筛选标记。筛选标记可被用于监视表达。示例性的筛选标记包括，β-葡萄糖苷酸酶或uidA基因(GUS)，其编码已知有多种发色底物的酶(Jefferson，1987；Jefferson等人，1987)；R-基因座基因，其编码能对植物组织中花青素色素(红色)的产生进行调节的产物(Dellaporta等人，1988)；β-内酰胺酶基因(Sutcliffe等人，1978)，该基因编码已知有多种发色底物(例如，PADAC，发色头孢菌素)的酶；萤光素酶基因(Ow等人，1986)；xylE基因(Zukowsky等人，1983)，其编码儿茶酚加双氧酶，所述酶能转化发色的儿茶酚；α-淀粉酶基因(Ikatu等人，1990)；酪氨酸酶基因(Katz等人，1983)，其编码能将酪氨酸氧化为DOPA以及多巴醌的酶，多巴醌随后缩合为黑色素；α-半乳糖苷酶，其能催化发色的α-半乳糖底物。
优选的植物转化载体包括来自根癌土壤杆菌的Ti质粒(例如，美国专利号4,536,475、4,693,977、4,886,937、5,501,967和EP 0 122 791)。发根土壤杆菌质粒(或“Ri”)也可使用，它们是本领域已知的。其它优选的植物转化载体包括Herrera-Estrella(1983)、Bevan(1983)、Klee(1985)和EP 0 120516所公开的那些。
通常，优选在植物基因组中非特异性位置引入功能性重组DNA。在特殊情况下，可通过定点整合插入重组DNA构建体。存在一些已知能使植入具有功能的多种定点重组系统，其包括美国专利4,959,317公开的cre-lox和美国专利5,527,695公开的FLP-FRT。
用于本发明的转化宿主细胞的合适方法包括几乎任何可以将DNA引入细胞的方法，例如DNA的直接送递，例如通过PEG介导的原生质体转化(Omirulleh等人，1993)、干燥/抑制介导的DNA摄取(Potrykus等人，1985)、电穿孔(美国专利号5,384,253)、用碳化硅纤维搅拌(Kaeppler等人，1990；美国专利号5,302,523；和美国专利号5,464,765)、土壤杆菌介导的转化(美国专利号5,591,616和美国专利号5,563,055)和DNA包被的粒子加速(美国专利号5,550,318；美国专利号5,538,877；和美国专利号5,538,880)等。通过诸如上述的技术，可以稳定转化几乎任何物种的细胞。在多细胞物种的情况下，可以使转基因细胞再生为转基因生物。
建立转基因植物，特别是在植物中表达异源核酸的方法是已知的，并且可以用本文提供的核酸制备转基因植物，其对靶害虫生物，如玉米根虫的摄食的易感性降低。例如，可以通过将本文公开的产生dsRNA的核酸插入植物转化载体并且将其引入植物，可以制备植物转化载体。通过修饰根癌土壤杆菌的天然基因转移系统，得到了一种已知的载体系统。天然系统包含大Ti(肿瘤诱导)质粒，其含有称作T-DNA的大片段，其转移到转化的植物中。Ti质粒的另一个片段，即vir区，负责T-DNA转移。T-DNA区的边界是末端重复序列。在修饰的二元载体中，去除了肿瘤诱导基因，并且利用vir区的功能转移边界为T-DNA边界序列的外来DNA。T区也可以含有用于有效回收转基因植物和细胞的选择标记和多个克隆位点，所述位点用于插入一些序列，所述序列用于转移例如dsRNA编码核酸。
典型地，使用土壤杆菌转化方法形成的转基因植物含有插入到一条染色体中的单个简单重组DNA序列，其被称为转基因事件。此类转基因植物可被称为对于插入的外源序列是杂合的。对于转基因体来说纯合的转基因植物可以通过使独立分离的转基因植物自交产生F1种子而获得。产生的F1种子中的四分之一将是对于转基因体来说纯合的。使F1种子发芽，就产生了可被测试杂合性或纯合性的植物，典型地，使用SNP测定或热扩增测定来进行，所述测定允许杂合体和纯合体之间的区别(即，接合性测定)。
C.核酸表达和靶基因阻抑
作为转化的宿主或或共生体害虫靶生物的例子，本发明还提供了转化的植物细胞以及转化的植物和它们的后代。转化的植物细胞和转化的植物可以工程化，以表达本文公开的一种或多种dsRNA或siRNA序列，以提供害虫防护作用。这些序列可以用于害虫生物中的基因阻抑，从而减少受保护的转化宿主或共生体生物上害虫的侵袭。本文中使用的词汇“基因阻抑”用来表示用于降低基因转录成mRNA和/或随后mRNA翻译的水平的任何公知方法。
基因阻抑还用来指来自基因或编码序列的蛋白表达的降低，包括转录后基因阻抑和转录阻抑。转录后基因阻抑是从阻抑所靶定的基因或编码序列转录来的mRNA的全部或一部分与用于阻抑的对应双链RNA之间的同源性介导的，其指在细胞中可获得的用于与核糖体结合的mRNA的量显著的或可测量到的降低。经过转录的RNA可以是有义方向的，发挥所谓的共阻抑作用，或者可以是反义方向的，发挥所谓反义阻抑作用，或者以两种方向产生dsRNA，发挥所谓的RNA干扰作用(RNAi)。
转录阻抑是细胞中dsRNA基因阻抑剂的存在所介导的，所述dsRNA基因阻抑剂展示出与启动子DNA序列或其互补序列的显著序列同一性，发挥被称为启动子反向抑制的作用。基因阻抑可以针对与性状相关的天然植物基因发挥作用，例如，给植物提供具有降低水平的、由天然基因编码的蛋白，或者具有增加或降低水平的受影响的代谢物。基因阻抑还可针对下述植物害虫的靶基因发挥作用，所述害虫能摄取或接触含有基因阻抑剂的植物材料，所述基因阻抑剂被特别设计为能抑制或阻抑害虫细胞中一种或多种同源序列或互补序列的表达。美国专利号5,107,065、5,759,829、5,283,184和5,231,020中公开了反义或有义定向的RNA进行转录后基因阻抑，以调节植物细胞中的基因表达。dsRNA用于阻抑植物中基因的用途被公开于WO 99/53050、WO 99/49029、美国专利申请公开号2003/0175965和2003/0061626、美国专利申请号10/465,800和美国专利号6,506,559以及6,326,193中。
在植物中进行转录后基因阻抑的有益方法使用有义定向和反义定向的、稳定化的转录的RNA，例如，作为发夹和茎环结构。用于进行转录后基因阻抑的优选DNA构建体是下述这样的，其中，第一段片段编码展示出反义方向的RNA(其展示出与待阻抑的靶基因片段之间的显著同一性)，所述第一段片段与第二段片段相连，第二段片段编码展示出与第一段片段具有高度互补性的RNA。此类构建体被预计会形成茎环结构(这是通过第一段片段与第二段片段杂交形成的)和来自连接两者段片段的核苷酸序列的环结构(见WO94/01550、WO98/05770、US2002/0048814和US 2003/0018993)。
根据本发明的另一种实施方式，提供了一种核苷酸序列，其体外表达导致稳定化RNA序列的转录，所述RNA序列与昆虫中靶基因的RNA分子显著同源，所述RNA分子包含昆虫基因组中的核苷酸序列编码的RNA序列。因此，昆虫摄取食物中掺入的或植物表面喷洒的稳定化RNA序列之后，将导致靶昆虫细胞中对应于靶基因的核苷酸序列被下调。
利用本发明的稳定化dsRNA技术来抑制靶基因是序列特异性的，因为，与RNA的双链体区域对应的核苷酸序列是为了遗传抑制而被靶定。含有与靶基因的一部分相同的核苷酸序列的RNA被优选用于抑制。相对靶序列具有插入、缺失和单点突变的RNA序列也被发现能够有效抑制。在本发明的性能方面，优选地，抑制性dsRNA和靶基因的一部分共享至少大约80％以上的序列同一性，或者大约90％以上的序列同一性，或者大约95％以上的序列同一性，或者大约99％以上的序列同一性，或者甚至大约100％的序列同一性。或者，RNA的双链体区域可被功能性地定义为：能与靶基因转录物的一部分杂交的核苷酸序列。展示出更高的同源性的小于全长的序列可补偿较长却仅有较少同源性的序列。相同核苷酸序列的长度可以为至少大约25、50、100、200、300、400、500或者至少大约1000个碱基。通常，应当使用超过20-100个核苷酸的序列，但超过大约200-300个核苷酸的序列是优选的，超过大约500-1000个核苷酸的序列是尤其优选的，这取决于靶基因的大小。本发明具有如下优点：其能耐受序列变异，所述变异可能是由于遗传突变、菌株多态性或进化趋异造成的。相对于靶基因的初级转录产物或经过完全加工的mRNA，引入的核酸分子可能不需要绝对同源，可能不需要是全长的。因此，本领域技术人员需要认识到，如本文所公开的，RNA和靶基因之间的100％序列同一性对于实施本发明来说并非必须。
对靶基因表达的抑制可被定量，这是通过测量内源靶RNA或靶RNA翻译所产生的蛋白来进行的，抑制的结果可以通过对细胞或生物外在性质的检查来验证。用于对RNA和蛋白定量的方法是本领域技术人员公知的。赋予对氨苄青霉素、博来霉素、氯霉素、庆大霉素、潮霉素、卡那霉素、林可霉素、甲氨蝶呤、草丁膦、嘌呤霉素、壮观霉素、利福平和四环素等的抗性的多种选择标记是可获得的。
在某些实施方式中，基因表达被抑制了至少10％，优选地，至少33％，更优选地，至少50％，进一步更优选地，至少80％。在本发明的特别优选的实施方式中，昆虫细胞内的基因表达被抑制了至少80％，更优选地，至少90％，更优选地，至少95％，或者至少99％，使得显著的抑制发生。显著的抑制被用来指足够的抑制，其导致可被检测到的表型(例如，幼虫生长停止、麻痹或死亡等)或被抑制的靶基因所对应的RNA和/或蛋白质的可检测到的减少。虽然在本发明的某些实施方式中，抑制在昆虫的基本所有的细胞中发生，但是在其它优选的实施方式中，抑制仅在表达该基因的细胞亚组中发生。例如，如果将要抑制的基因在昆虫消化道的细胞中发挥重要作用，对这些细胞内基因的抑制就足以对昆虫施加有害的作用。
dsRNA分子可以体内或体外合成。dsRNA可以由单条自身互补的RNA链形成，或者可以由两条互补的RNA链形成。细胞的内源RNA聚合酶可以介导体内转录，或者克隆的RNA聚合物可被用于体内或体外转录。可以通过下述方法来靶定抑制：在器官、组织或细胞类型中的特异性转录；环境条件(例如，感染、胁迫、温度、化学诱导剂)的刺激；和/或在发育阶段或年龄进行的工程化转录。RNA链可以是或不是聚腺苷化的；RNA链可以能或不能被细胞的翻译装置翻译为多肽。
本发明的RNA、dsRNA、siRNA或miRNA由本领域技术人员通过化学方法或酶方法来生产，这是通过人工或自动的反应或在另一生物体内来进行的。还可通过部分或完全的有机合成来制造RNA；可通过体外酶合成或有机合成引入任何经过修饰的核糖核苷酸。可以通过细胞内RNA聚合酶或噬菌体RNA聚合酶(例如，T3、T7、SP6)来合成RNA。表达构建体的使用和制造是本领域已知的(见，例如，WO 97/32016、美国专利号5,593,874、5,698,425、5,712,135、5,789,214和5,804,693)。如果通过化学合成或通过体外酶合成，可在引入细胞之前对RNA进行纯化。例如，可以通过用溶剂或树脂提取、沉淀、电泳、色谱或其组合，从混合物中纯化出RNA。或者，可以在不纯化或仅进行最小限度的纯化的情况下来使用RNA，以避免由于样品加工导致的损失。RNA可被干燥以储存，或者溶解于水溶液中。溶液可以含有缓冲剂和盐，以促进双链体链的退火和/或稳定。
为在体内从转基因体或表达构建体进行转录，可使用调节区域(例如，启动子、增强子、沉默子和聚腺苷化)来转录一条(或多条)RNA链。因此，在一种实施方式中，用于制造RNA分子的核苷酸序列可与在微生物、真菌或植物宿主细胞中具有功能的一个或多个启动子序列可操作地相连。理想地，核苷酸序列被置于内源启动子的控制之下，所述内源启动子通常处于宿主基因组中。处于可操作地连接的启动子序列控制下的本发明核苷酸序列，侧翼还可以有额外的序列，所述额外的序列能有利地影响其转录和/或得到的转录物的稳定性。此类序列通常位于可操作地连接的启动子的上游，和/或表达构建体3’末端的下游，可以同时存在于启动子上游和表达构建体3’末端的下游，但也考虑仅仅有所述上游序列。
本文中使用的“昆虫控制剂”或“基因阻抑剂”指特定的RNA分子，其包含第一个RNA片段和第二个RNA片段，其中第一个和第二个RNA片段之间的互补性导致两个片段在体内或体外杂交形成双链分子的能力。可能通常优选包括第三个RNA片段，其连接并且稳定第一个和第二个序列，使得整个结构形成茎环结构，或甚至更紧密杂交的结构可以形成茎环打结(knotted)结构。或者，可以在没有第三个片段的条件下形成对称发夹，其中没有设计的环，但是出于空间排列的原因，当茎的长度足够稳定其自身，发夹将建立其自身的环。第一和第二个RNA片段通常位于RNA分子的长度内，并且彼此呈显著反向重复，并且由第三个RNA片段连接在一起。第一和第二个片段总是、并且并非分别地对应于靶RNA的有义和反义序列，所述靶RNA是靶昆虫害虫的靶基因转录来的，所述靶基因能被dsRNA分子的摄取所阻抑。昆虫控制剂还可以是高度纯化(或分离)的核酸分子，更特别地，来自基因组DNA(gDNA)或cDNA文库的核酸分子或其核酸片段分子。或者，所述片段可以包含更小的寡核苷酸，其具有大约15至大约250个核苷酸残基，更优选地，大约15至大约30个核苷酸残基。
本文中使用的术语“基因组”在用于昆虫或宿主细胞的时候，不仅包含核内发现的染色体DNA，其还包含在细胞的亚细胞组分中发现的细胞器DNA。因此，本发明的DNA被引入到植物细胞中的过程可以通过染色体整合或者通过细胞器定位来进行。术语“基因组”应用到细菌的时候包括细菌宿主细胞中的染色体和质粒。因此，本发明的DNA被引入到细菌宿主细胞中的过程可以通过染色体整合或者通过质粒定位来进行。
本文中使用的术语“害虫”指昆虫、蜘蛛、甲壳类动物、真菌、细菌、病毒、线虫、扁形虫、蛔虫、蛲虫、钩虫、绦虫、锥形虫、血吸虫、马蝇、跳蚤、扁虱、螨、虱等，它们是自然界普遍存在的，可以摄取或接触一种或多种由害虫宿主或共生体(被转化为能表达或包被双链基因阻抑剂)产生的细胞、组织或流体，或者可以摄取含有基因阻抑剂的植物材料。本文中使用的“害虫抗性”是转基因植物、转基因动物、转基因宿主或转基因共生体的特征，其使得所述植物、动物、宿主或共生体对于害虫的攻击具有抗性，所述攻击典型地能对所述植物、动物、宿主或共生体造成损害或损失。此类害虫抗性可能产生自天然突变，或者更为典型地，产生自赋予害虫抗性的重组DNA的掺入。为使转基因植物具有昆虫抗性，重组DNA可以例如转录为RNA分子，在重组植物的组织或流体中形成dsRNA分子。dsRNA分子部分包含：与偏好在重组植物上摄食的有害昆虫中DNA序列编码的相应RNA片段相同的RNA片段。靶昆虫害虫中基因的表达受dsRNA阻抑，对靶昆虫害虫中基因表达的阻抑导致植物具有昆虫抗性。Fire等人(美国专利号6,506,599)一般性地描述了对害虫侵袭的抑制，仅针对在线虫种秀丽新杆线虫中具有抑制基因功能作用的若干中核苷酸序列提供了细节。类似地，Plaetinck等人(US 2003/0061626)描述了dsRNA用于在多种线虫害虫种抑制基因功能的用途。Mesa等人(US 2003/0150017)描述了：使用dsRNA序列转化宿主细胞，以表达与特定病原体中靶序列基本相同的相应dsRNA序列，并且特别描述了：构建重组植物，其表达这些dsRNA序列(被多种植物害虫摄取)，促进对害虫基因组中基因的下调，并且提高植物对害虫侵袭的抗性。
本发明提供了使用稳定化的dsRNA抑制靶害虫中一种或多种靶基因的基因表达的方法。本发明特别有用于调节真核基因表达，特别是调节害虫中存在的基因的表达，所述害虫展示出大约4.5至大约9.5、更优选地大约5.0至大约8.0、进一步更优选地大约6.5至大约7.5的消化系统pH。对于具有这些范围之外的pH水平的消化系统的植物害虫，可能需要采用不要求摄取dsRNA分子的送递方法。
dsRNA的调节作用适用于在害虫中表达的多种基因，例如，负责细胞代谢或细胞转化的内源基因，包括管家基因、转录因子和编码细胞代谢涉及到的多肽的其它基因。
本文中使用的短语“基因表达的抑制”或“抑制昆虫细胞中靶基因的表达”指，靶基因的蛋白和/或mRNA产物水平不存在(或可观察到的降低)。特异性指：抑制靶基因而对细胞其它基因无作用并且对产生dsRNA分子的细胞内任何基因没有影响的能力。对昆虫害虫中靶基因的基因表达的抑制可能导致昆虫害虫中的新表型性状。
本发明的一部分提供了一种送递系统，用于将昆虫控制剂送递到昆虫中，这是通过将它们暴露于含有本发明昆虫控制剂的食物来实现的。根据实施方式之一，稳定化的dsRNA或siRNA分子可被掺入昆虫食物，或者可被覆盖在昆虫消耗的食物的顶部。本发明的一部分还提供了用于将昆虫控制剂送递到昆虫中的送递系统，这是通过：将它们暴露于含有本发明昆虫控制剂的微生物或宿主，例如，植物，这是通过摄取微生物或宿主细胞或细胞内容物来实现的。根据另一种实施方式中，本发明涉及制备转基因植物细胞或植物，其中含有能转录本发明的稳定化dsRNA分子的重组DNA构建体。本文中使用的短语“制备转基因植物细胞或植物”指下述方法，其包括使用本领域中易于获得的重组DNA技术(例如，见Sambrook，等人)，构建能转录本发明的稳定化dsRNA分子的植物转化载体，转化植物细胞或植物，以及制备含有经过转录的、稳定化dsRNA分子的转基因植物细胞或转基因植物。
在又一种实施方式中，微生物的非致病性的减毒株可被用作为昆虫控制剂的载体，在这种情况下，携带此类试剂的微生物也被称为昆虫控制剂。可对微生物加以工程改造，使其表达靶基因的核苷酸序列，以产生下述RNA分子，所述RNA分子包含与昆虫细胞内典型存在的RNA序列同源或互补的RNA序列。将昆虫暴露于所述微生物，使得微生物被摄取，以及由RNA分子或其片段或衍生物直接或间接介导对靶基因表达的下调。
或者，本发明提供了：将昆虫暴露于本发明的昆虫控制剂，所述控制剂被掺入喷雾混合器中，应用到宿主，例如，宿主植物的表面。在一种示例性的实施方式中，昆虫对昆虫控制剂的摄取，将昆虫控制剂送递到昆虫消化道，随后送递到昆虫体内的细胞中。在另一种实施方式中，昆虫控制剂通过其它方式(例如注射或其它物理方法)对昆虫的感染也能允许昆虫控制剂的送递。在又一种实施方式中，RNA分子自身被封装进合成的基质，例如聚合物，并被应用到宿主，例如植物的表面。昆虫对宿主细胞的摄取允许昆虫控制剂被送递到昆虫，导致对宿主中靶基因的下调。
还可预见，本发明的组合物可被掺入植物物种的种子，其可以作为被掺入植物细胞基因组的重组基因的表达产物，或者被掺入在种植前施用到种子上的涂层或种子处理中。含有重组基因的植物细胞在本文中被看作转基因事件。
认为当与提供用于抵抗鞘翅目害虫的侵袭的保护作用的转基因事件组合时，杀虫种子处理可以提供显著的优点，所述事件在针对靶害虫的优选有效性范围内。此外，我们相信，本领域技术人员公知，存在有下述情况，其中，具有在优选的有效性范围内的此类转基因事件是有利的。
本发明一部分提供了一种送递系统，用于向昆虫送递昆虫控制剂。本发明的稳定化dsRNA或siRNA分子可被直接引入昆虫的细胞，或者引入到细胞外的腔、间质间隙、淋巴系统、消化系统、昆虫的循环系统，这是通过口服摄取或本领域技术人员可以利用的其它手段来进行的。用于通过口服引入的方法包括：将RNA与昆虫的食物直接混合，以及下述工程方法，其中，被用作为食物的物种经过了工程改造，得以表达dsRNA或siRNA，然后将其喂饲给待影响的昆虫。在一种实施方式中，例如，dsRNA或siRNA分子可掺入昆虫食物中，或覆盖在其表面。在另一实施方案中，RNA可以喷雾在植物表面。在又一种实施方式中，可以由微生物表达dsRNA或siRNA，并且可以将微生物施用到植物表面，或者通过物理手段如注射引入根、茎。在另一实施方案中，可对植物进行遗传工程改造，使其表达足以杀死已知会感染植物的昆虫的量的dsRNA或siRNA。
特别地，在WCR中实践本发明时，可将稳定化dsRNA或siRNA引入到昆虫体内的中肠，获得理想的对靶基因的抑制。如上文所述，dsRNA或siRNA分子可被包括进食物或覆盖于食物上，可被昆虫摄取。在任何情况下，本发明的dsRNA都被提供于靶害虫的食物中。本发明的靶害虫将展示出大约4.5至大约9.5、或大约5至大约8.5、或大约6至大约8、或大约6.5至大约7.7、或大约7.0的消化道pH。靶害虫的消化道在本文中被定义为害虫中的下述位置，在该位置，害虫所摄取的食物被暴露于能有利于吸收本发明的dsRNA分子的环境，而不会遭遇极端到使得dsRNA双链之间的氢键解离从而形成单链分子的pH。
还可预见到，可用与常规农业实践一致的方式来配制通过化学或酶合成生产的dsRNA，将其用作为喷雾产品，以控制昆虫侵袭。所述配方可以包括：有效叶片覆盖所需的合适的胶粘剂和润湿剂，以及用于保护dsRNA免受UV损害的UV防护剂。此类添加剂是生物杀昆虫剂工业中常用的，也是本领域技术人员公知的。此类应用可与其它喷雾杀昆虫剂(是或不是基于生物的)应用组合，以增强植物保护，免收昆虫摄食。
本发明的发明人考虑，生产杀昆虫蛋白的细菌菌株可被用于生产用于昆虫控制目的的dsRNA。这些菌株可以展示出提高的昆虫控制性质。多种不同的细菌宿主可被用于生产昆虫控制dsRNA。示例性的细菌可以包括大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌、假单孢菌种、光杆菌种、致病杆菌种、嗜虫沙雷氏菌和相关的沙雷氏菌种、球形芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、日本甲虫芽孢杆菌、双酶梭菌和其它梭菌种，或其它形成孢子的革兰氏阳性细菌。在某些实施方案中，细菌可以工程改造，用于控制害虫，如蚊子。
本发明还涉及用于在微生物中表达的重组DNA构建体。可使用本领域已知的方法，将可以转录得到感兴趣的RNA的外源核酸引入微生物宿主细胞，例如，细菌细胞或真菌细胞。
本发明的核苷酸序列可被引入到广范围的原核和真核宿主中，产生稳定化dsRNA或siRNA分子。术语“微生物”包括原核和真核微生物物种，例如细菌、真菌和藻类。真菌包括酵母和丝状真菌等。示例性的原核生物，既有革兰氏阴性也有革兰氏阳性的，包括肠杆菌科，例如埃希氏菌属、欧文氏菌属、志贺氏菌属、沙门氏菌属和变形菌属；芽孢杆菌科；根瘤菌科，例如根瘤菌属；螺菌科，例如光细菌属、发酵单孢菌属、沙雷氏菌属、气单孢菌属、弧菌属、脱硫弧菌属、螺菌属；乳杆菌科；假单胞菌科，例如假单胞菌属和醋杆菌属；固氮菌科，放线菌科和硝化杆菌科。真核生物包括真菌，例如须霉属，和子囊菌，其包括酵母，例如，糖酵母属和裂殖酵母属；以及担子菌，例如，红酵母属、短柄霉属、掷孢酵母属等。
就保护植物抗昆虫的目的而言，已知栖息于多种不同重要农作物的叶面(植物叶子的表面)和/或根围(植物根部周围的土壤)的大量微生物也可以是用于对本文公开的重组构建体进行操纵、繁殖、贮藏、送递和/或诱变的理想宿主细胞。这些微生物包括细菌，藻类和真菌。特别感兴趣的是微生物，例如，细菌，例如下述的属：芽孢杆菌属(包括下述种和亚种：苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克HD-I亚种、苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克HD-73亚种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、苏云金芽孢杆菌柏林那亚种、苏云金芽孢杆菌苏云金亚种、苏云金芽孢杆菌多窝亚种、苏云金芽孢杆菌松蜀亚种、苏云金芽孢杆菌阿莱亚种、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种、苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种、苏云金芽孢杆菌亚毒亚种、苏云金芽孢杆菌杀虫亚种、苏云金芽孢杆菌tenebrionis亚种和苏云金芽孢杆菌圣地亚哥亚种)；假单胞菌属，欧文氏菌属，沙雷氏菌属，克雷白氏菌属，黄单胞菌属，链霉菌属，根瘤菌属，红假单胞菌属，嗜甲基菌属，土壤杆菌属，醋杆菌属，乳杆菌属，节杆菌属，固氮菌属，明串珠菌属和产碱菌属；真菌，特别是酵母，例如，下述的属：糖酵母属，隐球酵母属，克鲁维氏酵母属，掷孢酵母属，红酵母属和短柄霉属。特别感兴趣的是此类植物周围的细菌物种，例如丁香假单胞菌，荧光假单胞菌，粘质沙雷氏菌，木醋杆菌，根癌土壤杆菌，类球红细菌，野油菜黄单胞菌，苜蓿根瘤菌，真养产碱菌和维涅兰德固氮菌；以及植物周围的酵母物种，例如，深红酵母，胶粘红酵母，海滨红酵母，橙黄红酵母，浅白色隐球酵母，流散隐球酵母，罗仑氏隐球酵母，罗茜糖酵母，善地糖酵母，啤酒糖酵母，红色掷孢酵母，香气掷孢酵母，佛地克鲁维氏酵母和出芽短柄霉。
D.转基因植物
本发明提供具有超过一种或多种转基因事件的种子和植物。所述事件的组合被称为“堆叠的”转基因事件。所述堆叠的转基因事件可以是针对同样的靶害虫的事件，或者它们可以针对不同的靶害虫。在一种实施方式中，具有表达本文提供的核酸的能力的种子还具有表达至少一种其它杀昆虫剂的能力，其包括但不限于下述RNA分子，所述RNA分子的序列来自在靶害虫中表达的RNA的序列，当其在种子或从种子长出的植物细胞中表达时形成双链RNA结构，其中，靶害虫对植物的一个或多个细胞的摄取导致了对靶害虫细胞中RNA表达的阻抑。
在某些实施方案中，具有表达下述dsRNA能力的种子还具有提供除草剂耐受性的转基因事件，所述dsRNA的序列来自靶害虫。除草剂耐受性基因的一个有益的实例是提供对草甘膦，即N-(膦酰甲基)甘氨酸(包括此类除草剂的异丙胺盐形式)的抗性。
在本发明的方法中，转基因种子或从种子生长的植物中杀昆虫量的dsRNA的表达与用某些化学或蛋白杀虫剂处理种子或植物的组合，可以用于提供出乎意料的协同优点，包括保护得到的转基因植物免受靶害虫损害的出乎意料优越的效力。在特定实施方案中，用每100kg种子大约100gm至大约400gm的杀虫剂，对能表达某些会形成dsRNA分子(其序列是从玉米根虫中表达的一种或多种序列获得的)的构建体的转基因种子进行处理，提供了抗玉米根虫的意想不到的出众保护。此外，认为此类组合还有效保护紧急状态的植物抗其它害虫的损害。本发明的种子还用于降低杀虫剂使用成本，因为较之没有使用所述方法的情况，为获得需要量的保护，可以使用更少的杀虫剂。此外，因为使用了更少的杀虫剂，并且因为其是在种植之前应用的，没有单独的大田应用，我们相信，本发明的方法因此对于操作者和环境来说都更为安全，并且潜在地较之传统方法更为便宜。
“协同”表示包括转基因事件和杀虫剂的组合对于杀虫活性(或效力)的组合协同作用。但是，这并不表示将此类协同作用限制为杀虫活性，它们还应当包括下述意想不到的优点，例如，增加的活性范围、有利的活性谱(相关于损害减少的类型和数量)、杀虫剂和应用成本的降低、杀虫剂环境分布减少、杀虫剂向生产操作以及种植玉米种子的人员的暴露减少，以及本领域技术人员已知的其它优点。
可用于与本发明的方法和组合物组合的组合物中的杀虫剂和杀昆虫剂(包括作为种子处理和涂布)以及使用此类组合物的方法可在例如美国专利号6,551,962中找到，其全文通过引用并入本文。
虽然认为种子处理可施用于处于任何生理状态的转基因种子，但是优选地，种子处于足够持久稳定的状态，不会在处理过程中招致损害。典型地，种子可以是已从大田收获的、从转基因植物上除下的、以及与任何其它非种子植物材料分离的。优选地，种子还将是在生物学上稳定到下述程度的，即使得处理不会导致对种子的生物学损害。在一种实施方式中，例如，处理可应用到下述玉米种子上，所述种子已被收获、清洁并被干燥至水份含量按重量计小于大约15％。在另一种实施方式中，种子可以是下述种子：其已被干燥，然后再涂上水和/或另外的材料，然后在用杀虫剂处理前或处理期间再进行干燥。在描述的限制中，认为可在收获种子和播种种子之间的任何时间，将处理施用到种子上。本文所用的术语“未播种的种子”用于包括：处于种子收获和在地面播种种子(为了植物发芽和生长的目的)之间的任何时期。当提到未播种的种子被杀虫剂“处理”的时候，此类处理不用于包括下述操作：其中，杀虫剂被施用到土壤，而非施用到种子。例如，在与种子播种的同时，在土地带、“T”带或犁沟中应用此类处理，不认为是本发明所包括的。
杀虫剂或杀虫剂的组合可以“纯粹地”施用，即，没有任何稀释或存在其它组分。但是，典型地，杀虫剂以杀虫剂配方的形式施用到种子上。该配方可以含有一种或多种想要的其它组分，其包括但不限于，液体稀释剂，用作为杀虫剂基质的粘合剂，用于在胁迫条件下保护种子的填料以及用于提高涂层弹性、粘附和/或延展性的增塑剂。
本发明的杀虫剂可以作为种子涂层的组分施用到种子上。通过加入本发明杀虫剂组合的实施方式之一进行改良之后，可以使用本领域已知的种子涂布方法和组合物。为其应用的这类涂布方法和设备被公开于，例如，美国专利号5,918,413、5,891,246、5,554,445、5,389,399,5,107,787、5,080,925、4,759,945和4,465,017中。种子涂层组合物被公开于，例如美国专利号5,939,356、5,882,713、5,876,739、5,849,320、5,834,447、5,791,084、5,661,103、5,622,003、5,580,544、5,328,942、5,300,127、4,735,015、4,634,587、4,383,391、4,372,080、4,339,456、4,272,417和4,245,432等中。
在涂层中使用的杀虫剂是本文所述的那些杀虫剂。在对种子的处理中使用的杀虫剂的量将取决于种子类型和活性成分的类型而变化，但是所述处理将包含，将种子与杀虫有效的量的杀虫剂组合相接触。当昆虫是靶害虫时，所述的量将是杀虫有效的杀昆虫剂的量。本文中使用的杀虫有效量表示，杀昆虫剂的量将能杀死处于生长的幼虫或蛹阶段的害虫，或者将持续减少或延迟昆虫害虫产生的损害的量。
通常，处理中向种子施用的杀虫剂的量在下述范围内变动：对每100kg种子重量而言，大约100gm至大约2000gm的杀虫剂活性成分。优选地，杀虫剂的量在下述范围内：对每100kg种子而言大约50gm至大约1000gm的活性成分；更优选地，在下述范围内：对每100kg种子而言大约100gm至大约600gm的活性成分；进一步更优选地，在下述范围内：对每100kg种子而言大约200gm至大约500gm的活性成分。或者，已经发现，对于每100kg种子而言超过大约60gm的杀虫剂活性成分的杀虫剂的量是优选的，更优选地，超过大约80gm(每100kg种子)。
用于处理中的杀虫剂必须不能抑制种子发芽，并且应当能在靶昆虫生命周期中能导致对种子或植物损害的时期，有效保护种子和/或植物。通常，播种后，涂层将有效大约0至120天。本发明的杀虫剂可以以涂层的形式施用到种子上。
本发明的优点可以包括但不限于：易于将dsRNA引入昆虫细胞，可使用低浓度的dsRNA，dsRNA的稳定性以及抑制的有效性。使用低浓度的、稳定化dsRNA的能力避免了反义干扰的很多缺点。本发明并不被限制为体外使用，或被限制为特殊的序列组合物，特定的靶基因的组，靶基因核苷酸序列的特定部分，或特定的转基因或特定的送递方法，这是与本领域已知的可获得的方法中的一些，例如，反义和共抑制相反。此外，遗传操纵在并非经典遗传模型的生物中也是可行的。
在对本发明的实践中，可以进行选择，以确保从重组构建体转录的核苷酸序列的存在对于非害虫细胞无害。这可以通过靶定与植物或脊椎动物中相应基因具有低程度序列同一性的基因而实现。优选地，序列同一性程度小于大约80％。更优选地，序列同一性程度小于大约70％。最优选地，序列同一性程度小于大约60％。
除了用重组DNA构建体对植物进行直接转化之外，可通过将具有重组DNA构建体的第一种植物与缺乏该构建体的第二种植物杂交来制备转基因植物。例如，用于基因阻抑的重组DNA可被引入到第一种植物品系中，所述品系容易转化，产生可与第二种植物品系杂交的转基因植物，以将用于基因阻抑的重组DNA渐渗到第二种植物品系中。
在实践中，本发明可与植物中的其它昆虫控制性状组合，以获得想要的用于增加对昆虫侵袭的控制的性状。将利用不同作用模式的昆虫控制性状组合，可以提供针对昆虫进行保护的转基因植物，其较之使用单一昆虫控制性状的植物具有出众的耐力，因为在田间发展出抗性的概率降低。
过去数十年中，已对苏云金芽孢杆菌晶体蛋白的杀昆虫机制进行了广泛的研究。已经显示，仅在摄取蛋白之后，晶体蛋白才会对昆虫的幼虫形式有毒。在鞘翅目幼虫中，昆虫中肠中的碱性pH和蛋白水解酶会溶解蛋白，由此使得对昆虫有毒的组分释放。这些毒性组分破坏中肠细胞，导致昆虫停止摄食，并且最终，致使昆虫死亡。就此原因而言，已经证实了苏云金芽孢杆菌毒素自身在处理多种昆虫害虫的过程中是有效的，并且是对环境安全的杀昆虫剂。鞘翅目和半翅目昆虫，以及很可能地，双翅目、草盲蝽和其它钻孔式和吸吮式昆虫展示出了微酸的肠道pH，所以有效抵挡鞘翅目幼虫的Bt毒素对上述害虫不起作用。这些昆虫微酸的肠道pH也被相信是对本发明的组合物更为有益，在不欲限制到特定理论的情况下，看起来，鞘翅目幼虫肠道的碱性pH是之前企图展示dsRNA效果的尝试失败的原因(Fire等人美国专利号6,506,559；Mesa等人专利公开号US2003/0150017；Rajagopal等人，2002；Tabara等人，1998)。因此我们相信，本文公开的dsRNA方法应当优先用于控制鞘翅目、双翅目、半翅目、草盲蝽、钻孔式和吸吮式昆虫的植物和组合物中。本文示出的方法和组合物特别有用于靶定下述昆虫中的基因来进行阻抑，所述昆虫展示出大约4.5至大约9.5、大约5.0至大约9.0、大约5.5至大约8.5、大约6.0至大约8.0、大约6.5至大约7.7、或大约6.8至大约7.6、或大约7.0的肠道pH。但是，展示出大约7.5至大约11.5，或大约8.0至大约11.0，或大约9.0至大约10.0的肠道pH的昆虫和其它害虫物种，例如鞘翅目昆虫幼虫，也落入本发明的范围内。当在幼虫食物中与一种或多种Bt蛋白一起提供特异于抑制鞘翅目幼虫基因的dsRNA时，这尤其正确，当以阈值或高于阈值的水平提供时，Bt蛋白会按照常规途径对该鞘翅目幼虫产生毒性。对于同种昆虫物种具有毒性的一种或多种Bt毒素的存在，将有效降低肠道pH，提供针对双链RNA分子的稳定环境，以施加它们对昆虫害虫靶基因的抑制作用。
可以预见到，某些稳定化dsRNA构建体与一种或多种昆虫控制蛋白基因的组合将产生协同作用，能增强转基因植物的昆虫控制表型。利用人工食物或整个植物组织进行的昆虫生物测定可用于确定使用dsRNA和昆虫控制蛋白时对于幼虫死亡率或生长抑制的剂量反应。本领域技术人员可在生物测定中对dsRNA分子和昆虫蛋白的混合物加以检验，以鉴定出活性组合，所述组合是针对昆虫保护植物中的应用有协同性的并且是人们想要的(Tabashnik，1992)。已经报道了不同的昆虫控制蛋白之间杀死昆虫害虫的协同性(综述参见Schnepf等人，1998)。可以预见到，在某些dsRNA之间和某些dsRNA和某些昆虫控制蛋白之间存在有协同性。
本发明还涉及含有一种或多种本发明序列的农产品制品，以及从含有一种或多种本发明核苷酸序列的重组植物或种子制造的农产品制品，它们作为本发明的实施方式被特别包括。含有一种或多种本发明序列的农产品制品包括但不限于，植物的粗粉、油、碾碎的或整个的谷粒或种子，或者包含重组植物或种子的任何粗粉、油、碾碎的或整个的谷粒的任何食品，所述重组植物或种子含有一种或多种本发明的序列。在本文包括的一种或多种农产品或农产品制品中对本发明的一种或多种序列的检测用事实证明，农产品或农产品制品由转基因植物构成，所述转基因植物被设计为能表达本发明的一种或多种核苷酸序列，用于通过使用dsRNA介导的基因阻抑方法来控制昆虫侵袭的目的。
D.获得核酸
本发明还提供了一种方法，用于获得包含生产dsRNA或siRNA的核苷酸序列的核酸。在一种实施方式中，所述方法包括：(a)用杂交探针探测cDNA或gDNA文库，所述探针包含来自靶定的昆虫的核苷酸序列或其同源物的全部或部分；(b)鉴定出能与杂交探针杂交的DNA克隆；(c)分离步骤(b)中鉴定的DNA克隆；以及(d)对包含在步骤(c)中分离的克隆的cDNA或gDNA片段进行测序，其中，测序的核酸分子能转录RNA核苷酸序列或其同源物的全部或主要部分。
在另一种实施方式中，本发明的用于获得核酸片段(其中包含用于生产本发明dsRNA或siRNA的主要部分的核苷酸序列)的方法包括如下步骤：(a)合成第一和第二寡核苷酸引物，它们与来自靶定的昆虫的核苷酸序列之一的一部分对应；以及(b)使用步骤(a)的第一和第二寡核苷酸引物，扩增克隆载体中存在的cDNA或gDNA插入，其中，扩增的核酸分子能转录本发明的dsRNA或siRNA的主要部分。
在对本发明的实践中，靶基因可从玉米根虫(CRW)，例如WCR或SCR获得，或者从能导致农作物植物被损害以及随后的减产的任何昆虫物种获得。本发明认为，若干种标准可被用于选择优选的靶基因。所述基因是这样的基因：其蛋白产物具有快速的更新速率，使得dsRNA抑制可导致蛋白水平的快速降低。在某些实施方式中，选用表达水平少量下降即可导致对昆虫的有害作用的基因是有利的。如果想靶定广谱昆虫物种，那么要选择在这些物种间高度保守的基因。相反，为了带来特异性，在本发明的某些实施方式中，选择含有在各种昆虫物种间或在昆虫与其它生物间保守程度低的区域的基因。在某些实施方式中，选择没有其它生物的已知同源物的基因是人们想要的。
本文中使用的术语“来源于”指，可从特定的特别来源或物种获得的特别的核苷酸序列，虽然无须直接来自该特别来源或物种。
在一种实施方式中，选用在昆虫消化道中表达的基因。靶定在消化道中表达的基因避免了在昆虫内部散布dsRNA的需要。用于本发明的靶基因可以包括，例如，与编码液泡和质膜质子V-ATP酶的蛋白组分的已知消化道表达基因的核苷酸序列显著同源的那些(Dow等人，1997；Dow，1999)。该蛋白复合体是上皮细胞离子转运的唯一能量提供者，负责中肠腔的碱化。V-ATP酶还在马尔皮基(Malpighian)管中表达，所述马尔皮基管是昆虫后肠的向外生长物(outgrowth)，其以与哺乳动物肾器官类似的方式，在流体平衡以及对外源化合物的解毒中发挥作用。在另一实施方案中，V-ATP酶可以是Vha68-2或其同源物或直向同源物(例如，SEQ ID NO：821)。
在另一种实施方式中，选用主要参与昆虫生长、发育和繁殖的基因。示例性的基因包括但不限于，CHD3基因、β-微管蛋白基因和编码预测参与转运的蛋白的基因。黑腹果蝇中的CHD3基因编码具有ATP依赖型DNA螺旋酶活性的蛋白，其参与细胞核中的染色质组装/解组装。类似的序列还发现于多种生物中，例如拟南芥、秀丽新杆线虫和啤酒糖酵母。β-微管蛋白基因家族编码与微管相关的蛋白，所述蛋白是细胞骨架的构成部分。相关序列也发现于多种生物中，例如秀丽新杆线虫和烟草天蛾。预测作为转运(ESCRT)-III所需的内体分选复合物的亚基的蛋白(Babst et al.，2002)，例如Dv49，存在于多种生物中，包括哺乳动物、酵母和昆虫，如D.virgifera。另一种转运相关蛋白是β-外被体蛋白，缩写为β′Cop，其编码参与逆行(高尔基体到内质网)转运的产物。在秀丽新杆线虫和D.virgifera中都鉴别了相似或预测的序列，如Dv248(SEQID NO：。
用于本发明的其它靶基因可以包括，例如，在存活、生长、发育、繁殖和感染力中起重要作用的那些。这些靶基因可以是下述之一：管家基因、转录因子和昆虫特异性基因或果蝇中的致死性敲除突变。在本发明中使用的靶基因还可以是来自其它生物的那些，例如，来自线虫(例如秀丽新杆线虫)。此外，用于本发明的核苷酸序列还可来自植物、病毒、细菌或真菌基因，所述基因的功能已被建立于文献中，其核苷酸序列与昆虫基因组中靶基因具有显著相似性。根据本发明的一方面，为了WCR控制，靶序列可以基本从靶WCR昆虫获得。编码与已知蛋白同源的D.v.virgifera蛋白或其片段的、来自WCR cDNA文库的一些示例性靶序列可从序列表中找到。编码已知蛋白的同源物的来自D.virgifera的核酸分子是已知的(Andersen等人，美国专利申请系列号10/205,189)。
就本发明的目的而言，dsRNA或siRNA分子可以从CRW获得，这是通过对来源于玉米根虫gDNA或cDNA文库的靶CRW基因序列或其部分进行聚合酶链式(PCRTM)扩增来实现的。可以用本领域普通技术人员已知的方法来制备WCR幼虫，可以提取DNA/RNA。可将不同大小的幼虫，从第1龄至完全长成的CRW用于本发明的目的，进行DNA/RNA提取。从WCR产生的基因组DNA或cDNA文库可被用于PCRTM扩增，以生产dsRNA或siRNA。
然后可使用本领域中容易获得的方法，对靶基因进行PCRTM扩增和测序。本领域技术人员可对PCRTM条件加以改动，以确保最优的PCRTM产物形成。经过验证的PCRTM产物可被用作为模板，用于体内转录，以产生具有被包括进来的最小启动子的有义和反义RNA。
本发明的发明人考虑，从昆虫界的任何昆虫物种鉴定和分离的核酸序列可用于本发明，以控制WCR和其它靶昆虫。在本发明的一个方面，核酸可以来源于鞘翅目物种。特别地，核酸可以来源于属于叶甲属(鞘翅目，叶甲科)的叶甲，更特别地，本发明的核酸分子可以来源于virgifera组。最特别地，本发明的核酸来源于Diabrotica virgifera virgiferaLeConte，其通常被称为WCR。经过分离的核酸可用于，例如鉴定靶基因，以及构建重组载体，所述载体能生产本发明的稳定化dsRNA或siRNA，用于保护植物抵挡WCR昆虫侵袭。
因此，在一种实施方式中，本发明包含来自WCR或草盲蝽的分离和纯化的核苷酸序列，其可被用作为昆虫控制剂。经过分离和纯化的核苷酸序列可以包含序列表中列出的那些。
来自WCR或其它昆虫的、可用于本发明的核酸还可包含经过分离和高度纯化的Unigenes和EST核酸分子或其核酸片段分子。EST核酸分子可以编码多肽的显著区域，或者事实上，多肽的大部分。或者，所述片段可以包含更小的寡核苷酸，所述寡核苷酸具有大约15至大约250个核苷酸残基，更优选地，大约15至大约30个核苷酸残基。或者，用于本发明的核酸分子可以来自WCR、草盲蝽或任何其它鞘翅目害虫物种的cDNA文库。
来自WCR或其它鞘翅目害虫物种的核酸分子和其片段可被用于获得来自其它物种的其它核酸分子，用于本发明中，以产生想要的dsRNA和siRNA分子。此类核酸分子包括下述核酸分子，所述核酸分子编码蛋白质的完整编码序列，以及此类分子的启动子和侧翼序列。此外，此类核酸分子包含：编码基因家族成员的核酸分子。使用上述核酸分子或其片段去筛选例如从D.v.virgifera或其它鞘翅目物种如从Lygus hesperus获得的cDNA或gDNA文库，可以容易得获得此类分子。用于制成此类文库的方法是本领域公知的。
本文中使用的短语“编码序列”、“结构核苷酸序列”或“结构核酸分子”指，置于合适的调节序列控制下时，能被翻译为多肽的核苷酸序列，通常这是通过mRNA进行的。编码序列的边界是由5’末端的翻译起始密码子和3’末端的翻译终止密码子来确定的。编码序列可以包括但不限于，基因组DNA、cDNA、EST和重组核苷酸序列。
术语“重组DNA”或“重组核苷酸序列”指，含有遗传工程修饰的DNA，所述修饰是通过诱变、限制酶等的操纵来进行的。
对于是通过本发明加以控制的潜在靶的昆虫中的很多而言，关于大多数基因的序列和从对特定基因的突变得到的表型的信息可能是有限的。因此，本发明人考虑，从昆虫害虫选出合适的基因用于本发明的过程，可以通过使用可从对模式生物(例如果蝇)，一些其它昆虫物种，或者甚至线虫物种、真菌物种、植物物种(这些物种中的相应基因已被表征)中相应基因的研究获得的信息来进行。在一些情况下，将可能通过使用来自，例如果蝇、另外的昆虫、线虫、真菌或植物(其中已经克隆了基因)的序列或基因名，检索数据库，例如GenBank，来获得靶昆虫相应基因的序列。一旦获得了序列，可以使用PCRTM来扩增合适地选出的昆虫中的基因片段，用于本发明。
为了获得来自昆虫物种中相应基因的DNA片段，基于在WCR或基因已克隆的其它昆虫中发现的序列来设计PCRTM引物。引物被设计为：能扩增足够长度的DNA片段，用于本发明。DNA(基因组DNA或cDNA)制备自昆虫物种，用PCRTM引物来扩增DNA片段。扩增条件被选用为：即使在引物不能精确匹配靶序列的情况下，扩增也能得以进行。或者，可以使用WCR基因或其它已知的昆虫基因作为探针，从制备自昆虫害虫物种的gDNA或cDNA文库，克隆出基因(或其一部分)。用于实施PCRTM和从文库中克隆的技术是已知的。基于以前从WCR或其它昆虫物种中克隆出的基因序列，从靶昆虫害虫中分离DNA片段的方法的进一步细节，在实施例中有所提供。本领域普通技术人员将认识到，多种不同的技术可用于从昆虫害虫物种中分离出与以前从其它物种种分离的基因相对应的基因片段。
当昆虫是本发明的靶害虫时，此类害虫包括但不限于，来自鳞翅目(Lepidoptera)，例如，
长翅卷蛾(Acleris spp.)，褐带卷蛾(Adoxophyes spp.)，透翅蛾(Aegeria spp.)，夜蛾(Agrotis spp.)，棉叶波纹夜蛾(Alabamaargillaceae)，Amylois spp.，黎豆夜蛾(Anticarsia gemmatalis)，黄卷蛾(Archips spp)，带卷蛾(Argyrotaenia spp.)，纹夜蛾(Autographa spp.)，玉米蛀茎褐夜蛾(Busseola fusca)，干果斑螟(Cadra cautella)，Carposinanipponensis，二化螟(Chilo spp.)，色卷蛾(Choristoneura spp.)，Clysiaambiguella，纵卷叶野螟(Cnaphalocrocis spp.)，卷蛾(Cnephasia spp.)，细卷蛾(Cochylis spp.)，鞘蛾(Coleophora spp.)，Crocidolomia binotalis，Apple异形小卷蛾(Cryptophlebia leucotreta)，小卷蛾(Cydia spp.)，灰杆草螟(Diatraea spp.)，展叶松夜蛾(Diparopsis castanea)，实蛾(Eariasspp.)，干果斑螟(Ephestia spp.)，白小卷蛾(Eucosma spp.)，Eupoeciliaambiguella，茶黄毒蛾(Euproctis spp.)，切根虫(Euxoa spp.)，小食心虫(Grapholita spp.)，Hedya nubiferana，夜蛾(Heliothis spp.)，菜心野螟(Hellula undalis)，美国白蛾(Hyphantria cunea)，茄茎麦蛾(Keiferialycopersicella)，旋纹潜蛾(Leucoptera scitella)，细蛾(Lithocollethis spp.)，Lobesia botrana，毒蛾(Lymantria spp.)，潜蛾(Lyonetia spp.)，天幕毛虫(Malacosoma spp.)，甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)，烟草天蛾(Manducasexta)，尺蠖蛾(Operophtera spp.)，玉米螟(Ostrinia Nubilalis)，超小卷蛾(Pammene spp.)，褐卷蛾(Pandemis spp.)，小眼夜蛾(Panolis flammea)，红铃麦蛾(Pectinophora gossypiella)，马铃薯麦蛾(Phthorimaeaoperculella)，小菜粉蝶日本亚种(Pieris rapae)，毛连菜(Pieris spp.)，菜蛾(Plutella xylostella)，巢蛾(Prays spp.)，白螟(Scirpophaga spp.)，大螟(Sesamia spp.)，长须卷蛾(Sparganothis spp.)，夜蛾(Spodoptera spp.)，猛透翅蛾(Synanthedon spp.)，带蛾(Thaumetopoea spp.)，卷叶蛾(Tortrixspp.)，粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)和巢蛾(Yponomeuta spp.)；
来自鞘翅目(Coleoptera)，例如，
金针虫(Agriotes spp.)，花象甲(Anthonomus spp.)，甜菜隐食甲(Atomaria linearis)，甜菜茎跳甲(Chaetocnema tibialis)，象甲(Cosmopolites spp.)，果象(Curculio spp.)，皮蠹(Dermestes spp.)，叶甲(Diabrotica spp.)，豆瓢虫(Epilachna spp.)，Eremnus spp.，马铃薯叶甲(Leptinotarsa decemlineata)，稻象(Lissorhoptrus spp.)，鳃角金龟(Melolontha spp.)，Orycaephilus spp.，草莓根象甲(Otiorhynchus spp.)，Phlyctinus spp.，弧丽拔(Popillia spp.)，跳甲(Psylliodes spp.)，谷蠹(Rhizopertha spp.)，金龟甲科(Scarabeidae)，米象(Sitophilus spp.)，麦蛾(Sitotroga spp.)，粉虫(Tenebrio spp.)，拟古盗(Tribolium spp.)和皮蠹(Trogoderma spp.)；
来自直翅目(Orthoptera)，例如，
蠊(Blatta spp.)，小蠊(Blattella spp.)，蝼蛄(Gryllotalpa spp.)，马德拉蜚蠊(Leucophaea maderae)，飞蝗(Locusta spp.)，大蠊(Periplaneta ssp.)，和蚱蜢(Schistocerca spp.)；
来自等翅目(Isoptera)，例如，
犀白蚁(Reticulitemes spp)；
来自啮虫目(Psocoptera)，例如，
书虱(Liposcelis spp.)；
来自虱目(Anoplura)，例如，
血虱(Haematopinus spp.)，长颚虱(Linognathus spp.)，虱(Pediculusspp.)，天疱疮(Pemphigus spp.)和根瘤蚜(Phylloxera spp.)；
来自食毛目(Mallophaga)，例如
Damalinea spp.和啮毛虱(Trichodectes spp.)；
来自缨翅目(Thysanoptera)，例如，
花蓟马(Franklinella spp.)，条蓟马(Hercinothrips spp.)，带蓟马(Taeniothrips spp.)，蓟马(Thrips palmi)，烟蓟马(Thrips tabaci)和非洲桔硬蓟马(Scirtothrips aurantii)；
来自异翅目(Heteroptera)，例如，
臭虫(Cimex spp.)，可可瘤盲蝽(Distantiella theobroma)，蛇莓(Dysdercus spp.)，Euchistus spp.，扁盾蝽(Eurygaster spp.)，稻缘蝽(Leptocorisa spp.)，绿蝽(Nezara spp.)，网蝽(Piesma spp.)，长红猎蝽(Rhodnius spp.)，可可褐盲蝽(Sahlbergella singularis)，黑蝽(Scotinophara spp.)，锥蝽(Triatoma spp.)，盲蝽科物种，例如豆荚草盲蝽和美洲牧草盲蝽，长蝽科物种，例如美洲毛谷杆长蝽，和蝽科物种；
来自同翅目(Homoptera)，例如，
绵粉虱(Aleurothrixus floccosus)，Aleyrodes brassicae，圆盾蚧(Aonidiella spp.)，蚜科(Aphididae)，蚜(Aphis spp.)，圆盾蚧(Aspidiotus spp.)，团扇荠(Bemisia tabaci)，蜡蚧(Ceroplaster spp.)，茶褐圆蚧(Chrysomphalus aonidium)，蔷薇软蚧(Chrysomphalusdictyospermi)，褐软蚧(Coccus hesperidum)，微叶蝉(Empoasca spp.)，Apple绵蚜(Eriosoma larigerum)，斑叶蝉(Erythroneura spp.)，Gascardiaspp.，飞虱(Laodelphax spp.)，Lacanium comi，牡蛎盾蚧(Lepidosaphesspp.)，长管蚜(Macrosiphus spp.)，瘤蚜(Myzus spp.)，Nehoteftix spp.，飞虱(Nilaparvata spp.)，Paratoria spp.，瘦绵蚜(Pemphigus spp.)，粉蚧(Planococcus spp.)，白蚧(Pseudaulacaspis spp.)，粉蚧(Pseudococcusspp.)，木虱(Psylla ssp.)，Pulvinaria aethiopica，圆盾蚧(Quadraspidiotusspp.)，缢管蚜(Rhopalosiphum spp.)，盔蚧(Saissetia spp.)，叶蝉(Scaphoideus spp.)，二叉蚜(Schizaphis spp.)，Sitobion spp.，温室粉虱(Trialeurodes vaporariorum)，Trioza erytreae和桔盾蚧(Unaspis citri)；
来自膜翅目(Hymenoptera)，例如，
Acromyrmex，切叶蚁(Atta spp.)，茎锯蜂(Cephus spp.)，叶蜂(Diprion spp.)，锯节叶蜂科(Diprionidae)，云杉叶蜂(Gilpiniapolytoma)，实蜂(Hoplocampa spp.)，黑蚁(Lasius spp.)，Monomoriumpharaonis，锯角叶蜂(Neodiprion spp)，水蚁(Solenopsis spp.)和胡蜂(Vespa ssp.)；
来自双翅目(Diptera)，例如，
伊蚊(Aedes spp.)，Antherigona soccata，Bibio hortulanus，红头丽蝇(Calliphora erythrocephala)，蜡实蝇(Ceratitis spp.)，金蝇(Chrysomyiaspp.)，库蚊(Culex spp.)，黄蝇(Cuterebra spp.)，大实蝇(Dacus spp.)，果蝇(Drosophila melanogaster)，厕蝇(Fannia spp.)，胃蝇(Gastrophilusspp.)，舌蝇(Glossina spp.)，皮蝇(Hypoderma spp.)，Hyppobosca spp.，潜叶蝇(Liriomysa spp.)，绿蝇(Lucilia spp.)，潜蝇(Melanagromyza spp.)，舍蝇(Musca ssp.)，狂蝇(Oestrus spp.)，Orseolia spp.，瑞典麦秆蝇(Oscinella frit)，黎泉蝇(Pegomyia hyoscyami)，麦蝇(Phorbia spp.)，Apple实蝇(Rhagoletis pomonella)，潭蝇(Sciara spp.)，螯蝇(Stomoxysspp.)，虻(Tabanus spp.)，Tannia spp.和稻大蚊(Tipula spp.)，
来自蚤目(Siphonaptera)，例如，
角叶蚤(Ceratophyllus spp.)和东方鼠蚤(Xenopsylla cheopis)，以及
来自婴尾目(Thysanura)，例如，
西洋衣鱼(Lepisma saccharina)。
已经发现当昆虫害虫是叶甲物种，特别是当害虫是Diabroticavirgifera virgifera(西部玉米根虫，WCR)，Diabrotica barberi(北部玉米根虫，NCR)，Diabrotica virgifera zea(墨西哥玉米根虫，MCR)，Diabroticabalteata (巴西玉米根虫(BZR)或由Diabrotica viridula和Diabroticaspeciosa组成的巴西玉米根虫复合体(BCR))，或Diabroticaundecimpunctata howardi(南部玉米根虫，SCR)时，本发明特别有效。
实施例
发明人在本文中鉴定了用于控制鞘翅目害虫侵袭的方法，这是通过在害虫食物中提供双链核糖核酸分子来进行的。令人吃惊地，发明人已经揭示，在被害虫摄取时，双链核糖核酸分子会发挥作用，抑制害虫的生物功能，导致下述特征中的一种或多种：害虫进食减少，害虫存活率降低，害虫死亡，害虫的分化和发育被抑制，害虫的有性繁殖能力的降低或消失，肌肉形成，保幼激素的形成，保幼激素的调节，离子调节和转运，细胞膜电位的保持，氨基酸生物合成，氨基酸降解，精子形成，信息素合成，信息素传感，触角形成，翅膀形成，腿形成、发育和分化，卵形成，幼虫成熟，消化酶形成，血淋巴合成，血淋巴的保持，神经传递，细胞分裂，能量代谢，呼吸，凋亡，以及真核细胞细胞骨架结构的任何组分，例如，肌动蛋白和微管蛋白。这些特性中任何一种或任何组合可以导致对害虫侵袭的有效抑制，在植物害虫的情况下，导致对植物侵袭的抑制。例如，当用作为以局部方式提供给植物的、含有足以抑制害虫的量的一种或多种双链核糖核酸分子的食物组合物时，用作为种子处理，作为植物周围的土壤施用，或者从植物细胞内存在的重组DNA分子来通过植物生产时，对植物害虫侵袭会出人意料地显著地降低。当应用于单种害虫时，本文示出的实施例用于阐述本发明。但是，本领域技术人员将认识到，实施例中的方法、配方和想法不作限制之用，其可用于可以消耗下述食物来源的所有鳞翅目害虫物种，以抑制与害虫相关或在其内部发挥作用的一些重要特征，所述食物来源是可被配制为含有足够量的害虫抑制剂，其由至少一种或多种双链RNA分子构成。
实施例1
用于控制玉米根虫的dsRNA的制备中用到的靶核苷酸的鉴定
从整个幼虫、蛹以及从切开的中肠切段来构建玉米根虫cDNA文库(LIB 149，LIB 150，LD33027，LIB3373)，获得核苷酸序列信息(见，Andersen等人，提交于2002年7月24日的美国专利申请序列号10/205,189，其整体通过引用被特别并入本文)。此外，从处于不同发育阶段以及每个发育阶段中不同时间的整个幼虫，来构建cDNA文库，以最大化来自叶甲物种的不同EST序列的数量。分别由从第一龄(1克)和第三龄(2.9克)的西部玉米根虫幼虫获得的mRNA集合构建出文库LIB5444和LIB5462。通过插入到液氮中，将得到的昆虫迅速冷冻。在保持于-20℃的研钵和碾槌中磨碎昆虫，温度保持是通过在干冰上冷藏和/或向研钵中加入液氮直到组织被磨碎为细粉来实现的。使用TRIzol
Figure A20068004288100511
试剂(Invitrogen)，按照厂商说明书，提取RNA。使用Dynabeads Oligo dT(Dynal Inc.，NY)，按照厂商说明书，从总RNA制剂中分离出Poly A+RNA。使用SuperScriptTM质粒系统(Invitrogen)从Poly A+RNA来构建cDNA文库。使用色谱对cDNA进行大小分级分离。第四级分和第五级分片段被收集，并被连接进pSPORT1载体(Life Technologies Ind.，Gaithersburg MD)的Sal1和Not1限制性内切酶识别位点之间，通过电穿孔转化进大肠杆菌DH10B电感受态细胞。第一龄幼虫文库产生了大约420,000个菌落形成单位。第三龄幼虫文库产生了大约2.78×106个菌落形成单位。从平板上洗下来自LIB 149、LIB150的菌落，通过短暂振荡均匀混合，再倒进Tris-EDTA缓冲液。洗下来的物质中的一半被装入10％的甘油，分装进冷冻小管，贮存于-70℃。另一半被用于用Quiagen微量纯化柱或其等同物来产生质粒DNA。将经过纯化的质粒DNA分装进微离心管，贮存于-20℃。
在高粘度培养基中分别扩增来自Diabrotica virgifera cDNA文库LIB5444和LIB5462的菌落。37℃下，分别在搅拌平板的500ml LB培养基(含有0.3％SeaPrep agarose
Figure A20068004288100521
和50mg/l羧苄青霉素)中，混合来自LIB5444的大约200,000个菌落形成单位和来自LIB5462的600,000个菌落形成单位，然后在水/冰浴中迅速冷却1小时，使得细菌菌落均匀悬浮。然后在30℃使经过接种的文库生长42小时。温育之后，在搅拌平板上对细胞进行5分钟的混合。然后将培养基转移到两个250ml的离心瓶中。在10,000xg沉淀细菌细胞10分钟。从瓶中移出培养基，将细胞重新悬浮于总共20ml的LB培养基中，其中含有50mg/l的羧苄青霉素。加入二甲亚砜至10％，以将细胞保持为冷冻状态。对两种文库进行扩增，至每毫升108个菌落形成单位的最终滴度。组合Diabroticavirgifera cDNA文库LIB5444和LIB5462的样品，在经过灭菌蒸馏和去离子的水中，将其调节为每微升大约1.25微克的DNA浓度，分装进25个冷冻小管，每个冷冻小管含有大约8.75微克的DNA。申请人/发明人于2004年6月10日将这些样品保藏到位于10801 University Boulevard，Manassas，Virginia USA ZIP 20110-2209的美国典型培养物保藏中心(ATCC)，其被称为LIB5444/62。ATCC向申请人提供了保藏证明，其指定ATCC保藏号为PTA-6072。
基本按照上文所述的用于产生玉米根虫cDNA文库的方法，制备玉米根虫高分子量cDNA文库，即LIB5496和LIB5498。分别从由第一龄(1克)和第二以及第三龄(1克)西部玉米根虫幼虫获得的mRNA库来构建文库LIB5496和LIB5498。简言之，在液氮中迅速冷冻昆虫，通过在研钵和碾槌中进行碾磨，将冷冻的昆虫变为细粉。使用TRIzol
Figure A20068004288100522
试剂(Invitrogen)，按照厂商说明书，提取RNA。使用Dynabeads Oligo dT(Dynal Inc.，NY)，按照厂商说明书，从总RNA制剂中分离出Poly A+RNA。使用SuperScriptTM Plasmid System(Invitrogen)从20微克的PolyA+RNA来构建高分子量cDNA文库。在TAE中的1％琼脂糖凝胶上，对cDNA进行大小分级分离。收集1Kb至10Kb范围内的cDNA，将其连接进pSPORT1载体的Sal1和Not1限制性位点之间，通过电穿孔转化进大肠杆菌DH10B电感受态细胞。LIB5496产生了大约3.5×106个菌落形成单位。LIB5498产生了大约1.0×106个菌落形成单位。在高粘度培养基中单个扩增来自玉米根虫高分子量cDNA文库LIB5496和LIB5498的菌落。37℃下，分别在搅拌平板的500ml LB培养基(含有0.3％SeaPrepagarose
Figure A20068004288100523
和50mg/l羧苄青霉素)中，混合来自LIB5496和LIB5498的大约600,000个菌落形成单位，然后在水/冰浴中迅速冷却1小时，使得细菌菌落均匀悬浮。然后在30℃使接种的文库生长42小时。温育之后，在搅拌平板上对细胞进行5分钟的混合。然后将培养基转移到两个250ml的离心瓶中。在10,000xg处理10分钟，沉淀细菌细胞。从瓶中移出培养基，将细胞重新悬浮于总共20ml的LB培养基中，其中含有50mg/l的羧苄青霉素。加入二甲亚砜至10％，以将细胞保持为冷冻状态。对两种文库进行扩增，至每毫升108个菌落形成单位的最终滴度。从玉米根虫物种特异性质粒文库获得插入的cDNA序列信息。
Andersen等人的玉米根虫文库以及来自LIB5444和LIB5462文库的额外序列最初产生来大约18,415个单独的EST序列，其由大约1.0×107个核苷酸残基构成。EST序列的平均长度为大约586个核苷酸残基。这些EST序列被用于生物信息学算法，得到了重叠群(contig)序列的组装，这在本文中被称为UNIGENE序列，不能通过重叠同一性与其它EST序列组装的各个EST序列在本文中被称为单态(singleton)。然后对LIB5444和LIB5462文库进行更为深度的测序，得到额外的个体EST序列。将从文库，即LIB149、LIB150、LIB3027、LIB3373、LIB5444、LIB5462、LIB5496和LIB5503获得的EST序列选用于下文所述的摄食生物测定的进一步研究，并且相应的序列示于序列表中。
如果可能，将从CRW cDNA文库分离得到的EST序列组装为UNIGENE组，这些装备的Unigene序列被包括于序列表中。UNIGENE是基因定向的簇，其形成自单个EST序列在序列同一性区域内的重叠，以形成更大的序列。Pontius等人(2003)。对序列表中示出的每条核苷酸序列加以分析，鉴定出读码框的存在。将从读码框推断出的氨基酸序列信息与可从公共数据库获得的已知氨基酸序列信息比较，以推断出氨基酸序列与这些已知氨基酸序列同一性或相似性的程度。如果存在，用与公共数据库中已知氨基酸序列相关的生物功能，给从cDNA文库核苷酸序列信息推断出的氨基酸序列加上下述注释。注释提供了暗示性的蛋白质(可能从给出特定cDNA序列的特定基因表达的)功能信息，但是这并非决定性的结果。基于暗示性的注释信息，某些cDNA序列被鉴定为：编码可能涉及玉米根虫细胞中一些生物学功能的蛋白，所述功能对生命来说是很重要的，或者对确保细胞的健康和存活来说是必要的，或者可能涉及细胞完整、细胞保持、繁殖能力等。
将选择用于进一步研究的序列用于构建双链RNA分子，掺入CRW食物。基于cDNA和EST起始序列来设计热扩增引物对，获得用于摄食测定的序列。引物对或者被构建为一对核苷酸序列，引物对的每个成员都展示出与有义或反义序列的完全互补性。构建一些引物对序列，使得该对中的每个成员展示出在5’端含有T7噬菌体RNA聚合酶启动子的序列。优选地，使用CRW基因组DNA作为模板，用缺少T7启动子的第一引物对进行高保真第一次扩增，产生第一扩增子。优选地，cDNA或mRNA序列被用作为模板，用于合成本发明中使用的dsRNA分子，因为本领域中真核生物基因组序列被认为含有成熟RNA分子中不存在的序列。然后将从高保真第一次扩增反应产生的第一扩增子样品在第二次热扩增反应中用作为模板，用含有T7启动子序列的第二对引物对来生产第二扩增子，其中，在第二扩增子的每条链的5’末端处含有或其中嵌有T7启动子。以两个方向获得第二扩增子的完整核苷酸序列，将其与针对cDNA报道的核苷酸序列进行比较，并且，如果存在，指出两条序列之间的差异。通常，使用基因组DNA作为模板制备的序列与用于获得显著水平阻抑的、作为dsRNA分子的进一步使用并不一致，因为有在mRNA或cDNA序列中不存在的基因组序列的变异。
典型地，体外转录反应含有大约1至大约2微克的线性化DNA模板，来自10X浓缩液的T7聚合酶反应缓冲液，核糖核苷酸ATP、CTP、GTP和UTP(其中浓度为各50至100mM)以及1个单位的T7 RNA聚合酶。按照厂商说明书，在大约37℃将RNA聚合酶反应温育一段时间(数分钟至数小时)，这取决于所用的RNA聚合酶的最佳温度。通常，反应进行大约2至大约6小时，用于转录最长长达大约400个核苷酸的模板序列，以及进行最长达20小时，用于转录长度大于大约400个核苷酸的模板序列。将反应加热至65℃，持续15分钟，以终止RNA转录。在乙醇中沉淀RNA转录产物，洗涤，在空气中干燥，将其重新悬浮于不含RNA酶的水中，至浓度为每毫升大约1微克。利用反向T7启动子策略(如上文所概述的)的大部分转录物在体内转录反应中产生了双链RNA，但是，通过将经过纯化的RNA加热至65℃，然后缓慢冷却至室温以确保有义和反义RNA片段的正确退火，获得了高产量的双链RNA。然后用DNA酶I和RNA酶在37℃对双链RNA产物进行一小时的温育，以去除混合物中存在的任何DNA或单链RNA。按照厂商说明书(AMBION MEGAscript
Figure A20068004288100551
RNAi KIT)，在柱子上纯化双链RNA产物，将其重新悬浮于10mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)或不含RNA酶的水中，至每微升0.1至1.0微克的浓度。
下述核苷酸序列最初作为在玉米根虫中肠cDNA文库中鉴定出的cDNA序列被获得(Andersen等人，同上)，将其用于构建双链RNA分子，用于检验通过在害虫食物中摄食双链RNA分子对害虫生物功能的抑制效果。
A.Chd3同源序列
在多种真核生物中鉴定了CHD基因，其对应的蛋白被认为作为染色质重构因子发挥作用。术语CHD来自CHD蛋白中发现的三种序列同源性结构域：chromo(染色质组构修饰物)结构域、SNF2-相关螺旋酶/ATP酶结构域以及DNA结合结构域，每种都被相信能赋予不同的染色质相关活性。基于另一种序列同源性结构域(PHD锌指结构域，典型地，与染色体相关活性相关)的是否存在，CHD蛋白被分为两类。CHD3相关蛋白具有PHD锌指结构域，但是CHD1相关蛋白则并非如此。实验观察暗示了CHD3蛋白在抑制转录中的作用，其在一些物种中已显示为含有组蛋白去乙酰酶作为亚基的复合体的成分。组蛋白的去乙酰化与转录灭活相关，所以CHD3蛋白已被暗示为：利用作为组氨酸去乙酰酶复合体的成分的性质，能作为转录抑制剂发挥作用(Ogas等人，1999)。因此，对CHD3蛋白合成的阻抑可以作为有用的靶，用于双链RNA介导的对鞘翅目害虫的抑制。
B.β-微管蛋白同源序列
微管蛋白是所有真核细胞中多种细胞结构的重要结构性组分，主要用于形成微管。对细胞中微管形成的抑制会导致严重后果，包括，对有丝分裂纺锤体形成的干扰，对细胞分裂的阻断等。因此，对微管蛋白形成的抑制可以是双链RNA介导的抑制的有用靶。
C.40kDa V-AT酶同源序列
真核生物系统中亚细胞器内的能量代谢是非常重要的功能。液泡ATP合酶参与在液泡内保持足够水平的ATP。因此，液泡ATP合酶可以是双链RNA介导的抑制的有用靶。
D.EF1α同源序列
转录延伸和转录终止因子对于代谢来说很重要，它们可以是用于双链RNA介导的抑制的有利靶。
E.26S蛋白体亚基p28同源序列
26S蛋白体是大的、依赖ATP的、多亚基蛋白酶，其在所有真核生物中高度保守。其在选择性除去多种短寿命蛋白的过程中具有通用的功能，所述蛋白先是与泛素共价连接，然后被26S蛋白酶复合体降解。泛素途径在对细胞周期的控制中有着重要的作用，所述控制通过对多种调节蛋白的特异性降解来实现的，所述蛋白包括有丝分裂细胞周期蛋白和对依赖细胞周期蛋白的激酶的抑制剂，例如，哺乳动物细胞的p27。因此，对26S蛋白体合成的阻抑以及对其组成亚基合成的抑制可以是双链RNA介导的抑制的优选靶(Smith等人，1997)。
F.保幼激素环氧化物水解酶同源序列
昆虫保幼激素对昆虫生命周期中多种必要的生物学过程加以控制和调节，所述过程包括但不一定限于变态、繁殖和滞育。在合适的时候，保幼激素(JH)浓度需要在昆虫害虫幼虫(特别是鳞翅目和鞘翅目幼虫)形式的血淋巴中达到峰值，然后其必须被降解，以终止激素应答作用。降低保幼激素浓度的过程中涉及的酶通过代谢降解的两条主要途径发挥作用。一条途径涉及保幼激素酯酶(JHE)，其能水解甲酯，提供相应的酸。第二种途径利用保幼激素环氧化物水解酶(JHEH)，以获得对环氧化物的水解，导致二醇形成。JHE在JH降解中的贡献已被很好地了解，已发现，其在鳞翅目和鞘翅目物种之间是不变的。对JH酯酶的抑制与严重的外形变化相关，包括但不限于，幼虫游走(larvalwandering)、化蛹推迟以及畸形中间态的发育。相反，人们对JHEH在JH代谢中的作用了解不够，并且，其已经显示出在物种之间会有变化，但是近来的研究指出了暗示JHEH可能是JH代谢的主要途径的证据(Brandon J.Fetterolf，Doctoral Dissertation，North Carolina StateUniversity(Feb.10，2002)Synthesis and Analysis of Mechanism BasedInhibitors of Juvenile Hormone Epoxide Hydrolase from InsectTrichoplusia ni)。在任何时间中，用基因阻抑技术对任意JH降解途径的干扰可以是用于双链RNA介导的害虫抑制的有效靶。
G.依赖溶胀(swelling dependent)的氯通道蛋白同源序列
依赖溶胀的氯通道蛋白被假设为：在真核动物细胞系统的渗透调节中扮演关键角色。因此，展示出能表达下述氨基酸序列的能力的核苷酸序列可以是用于在害虫中进行RNA抑制的有用靶，所述氨基酸序列展示出与以前鉴定出的依赖溶胀的氯通道蛋白的同源性。
H.葡萄糖-6-磷酸1-脱氢酶蛋白同源序列
葡萄糖-6-磷酸1-脱氢酶蛋白(G6PD)催化葡萄糖-6-磷酸氧化为6-磷酸葡萄糖酸酯，同时伴随将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)的氧化形式还原为NADPH。NADPH本领域中已知作为很多种真核生物合成反应中的必需辅助因子，已知其能保持谷胱甘肽为其还原形式。被还原的谷胱甘肽在真核生物中作为危险氧化代谢产物的清除剂发挥作用，并且，在谷胱甘肽过氧化物酶的协助下，将有害的过氧化氢转化为水(Beutler等人，1991)。因此，G6PD可以是双链RNA介导的在鞘翅目害虫中的抑制的优选靶。
I.Act42A蛋白同源序列
肌动蛋白是普遍存在的、高度保守的真核生物蛋白，其是细胞运动和定位所需要的(Lovato等人，2001)。鉴定出了大量的CRW cDNA序列，它们被预测为可能编码肌动蛋白或者展示出与肌动蛋白相关的氨基酸序列结构的蛋白。因此，害虫细胞中编码肌动蛋白同源物的基因可以是双链RNA介导的抑制的有用靶。
J.ADP-核糖基化因子1同源序列
ADP核糖基化因子1已被展示为在细胞功能中很重要的，因为，它们在DNA损伤修复、致癌、细胞死亡和基因组稳定性的过程中体现完整的作用。因此，用双链RNA介导的抑制，在鞘翅目害虫物种中选择性地破坏ADP-核糖基化因子的转录，将是有用的。
K.转录因子IIB蛋白同源序列
如前文所述，转录延伸和翻译终止因子对于代谢来说非常重要，可以是双链RNA介导的抑制的有利靶，用于控制或消除鞘翅目害虫的侵袭。
L.几丁质酶蛋白
几丁质是N-乙酰氨基葡萄糖的β(1→4)同聚物，其被发现在昆虫外骨骼中。几丁质在几丁质合酶催化的反应中从UDP-N-乙酰氨基葡萄糖形成。几丁质是结构性的同聚多糖，在对这种高度分支和交联的结构的构建中，涉及很多酶促步骤。几丁质给予昆虫形状、硬度和支持，提供内部器官，例如肌肉得以附着的支架。几丁质还被降解至一定程度，以介导昆虫蜕皮过程中涉及的步骤。因此，人们相信，双链RNA介导的、对这些途径中蛋白的抑制，将可以作为控制鞘翅目害虫侵袭的手段。
M.泛素缀合酶同源序列
泛素途径在对细胞周期的控制中有着重要的作用，这是通过对大量调节蛋白的特异性降解来实现的，所述蛋白包括有丝分裂细胞周期蛋白，和依赖细胞周期蛋白的激酶的抑制剂，例如，哺乳动物细胞的p27。因此，编码泛素和相关组分的基因可以是双链RNA介导的抑制的优选靶(Smith等人，1997)。依赖泛素的蛋白水解途径是真核生物中对细胞内蛋白选择性破坏的主要途径之一。泛素与底物蛋白的缀合受明显呈多样性的酶阵列调节。蛋白水解靶定还可在底物的泛素化和其被多亚基26S蛋白酶降解为肽之间的步骤受到调节。泛素系统的复杂性暗示了其对于真核细胞调节中蛋白更新的中心作用，并且牵涉到途径中的其它蛋白，包括泛素激活酶、泛素结合酶、泛素缀合酶以及26S蛋白体亚基组分。因此，人们相信，双链RNA介导的对该途径蛋白的抑制将可作为控制鞘翅目害虫侵袭的手段使用。
N.甘油醛-3-磷酸脱氢酶同源序列
糖酵解途径在大多数生物中是很重要的途径，其涉及从葡萄糖的降解来产生代谢能量。在糖酵解途径的第二阶段中，一个重要的酶是甘油醛-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)，在存在NAD+和无机磷酸的情况下，其能催化3-磷酸甘油醛氧化为3-磷酸甘油-磷酸，随之形成NADH。该反应的重要组分是，能量通过NADH的形成而储存。编码与糖酵解途径相关的酶的基因，以及特别地，编码参与用于形成能量储存的步骤中的酶的基因，可以成为在鞘翅目害虫物中进行双链RNA介导的抑制的特别有用的靶。
O.泛素B同源序列
如上所述，泛素蛋白降解途径在对细胞周期的控制中有着重要的作用，这是通过对大量调节蛋白的特异性降解来实现的，所述蛋白包括有丝分裂细胞周期蛋白，或依赖细胞周期蛋白的激酶的抑制剂，例如，哺乳动物细胞的p27。因此，编码泛素和相关组分的基因可以是用于双链RNA介导的抑制的优选靶(Smith等人，1997)。
P.保幼激素酯酶同源物
如上文所述，昆虫保幼激素对昆虫生命周期中多种必要的生物学过程加以控制和调节，其包括但不限于，变态、繁殖和滞育。使用基因抑制技术对JH合成或降解途径的干扰可能是双链RNA介导的害虫控制的有效靶。
Q.α微管蛋白同源序列
真核生物细胞通常利用细胞骨架结构元件，它们是重要的，不仅作为机械支架，还保持细胞形状。半柔性的微丝使得细胞能够移动，帮助它们在有丝分裂(胞质分裂)中分裂，以及，在脊椎动物和无脊椎动物中，用于肌肉收缩。相对较硬的微管由α和β微管蛋白构成，它们在下述过程中有着重要的作用：作为送递液泡和细胞器的一套高速公路发挥作用，以及用于在有丝分裂(核分裂)期间使染色体分开。柔性的中间丝提供了对于整个细胞结构的至少额外的强度。还已知，细胞骨架参与跨细胞质的信号传递过程。考虑到这些功能，我们相信，对细胞骨架的任何破坏或者甚至对其完整性的微小改变都可能导致对细胞的病理结果。
R.转运相关序列
如上文所述，在细胞内分选和转运多种分子，包括分选和转运到合适的细胞器，以及它们的分泌，是一种重要的生理功能。所述分选途径可以包括依赖于转运所需的内体分选复合物(ESCRT)，即复合物I-III的那些。因此，与多肽和其它分子的转运相关的功能也可以是dsRNA介导的抑制的优选靶。
实施例2
昆虫喂饲生物测定
对双链RNA(dsRNA)样品进行测定，该测定采用选定数目的靶害虫。从根据实施例1鉴定的序列制备dsRNA，其中使用完整重叠群序列(在SEQ ID Nos：1-6的情况下)，或用序列表所示引物对从组装的重叠群扩增的序列。根据下述程序，将不同剂量的dsRNA作为覆盖层施用到玉米根虫人工食物上。从Crop Characteristics，Inc.，Farmington，Minnesota获得Diabrotica virgifera virgifera(WCR)的卵。在土壤中，于24℃，60％的相对湿度，完全黑暗下，对非滞育期的WCR卵进行大约13天的培养。在第13天，将含有WCR卵的土壤放置到#30-#60目的筛中，使用高压花园水管洗去土壤。通过在LYSOL中泡三分钟对卵的表面进行消毒，用灭菌水洗三次，用10％的福尔马林溶液洗一次，再用灭菌水洗额外的三次。将用这种方法处理的卵分散到灭菌咖啡过滤器中，在27℃，60％的相对湿度，完全黑暗下，孵化过夜。
为了制备dsRNA，将选择的序列的扩增子克隆到能够在大肠杆菌中复制的质粒载体中，回收足够量的质粒DNA，以允许从克隆片段任意末端的包埋的趋同T7启动子进行体外的T7 RNA聚合酶转录。产生双链RNA，进行生物测定；一条RNA片段包含序列表中所示的序列，另一RNA片段基本是该核苷酸序列的反向互补序列，其中，鸟苷适当地取代胸苷。用DICER或RNA酶III处理双链RNA(dsRNA)的样品，以产生足够量的小干扰RNA(siRNA)。将含有siRNA或dsRNA的样品覆盖在上文描述的CRW食物测定上，按照下文使幼虫摄食。
将双链RNA样品直接加入到含有上文指出的昆虫食物的每个孔中，或者在加入到昆虫食物之前对其进行修饰。对双链RNA的修饰按照厂商提供的针对RNA酶III(AMBION CORPORATION，Austin，Texas)或DICER(STRATAGENE，La Jolla，California)的说明书来进行。RNA酶III对双链RNA的消化产生了二十一和二十二个核苷酸的双链体，其含有5’磷酸化的末端和具有2-3个碱基突出端的3’羟基末端，类似于大约21-26个碱基对的双链短干扰RNA(siRNA)片段，这是Hamilton等人(1999)和Elbashir等人(2001a)鉴定的、真核途径中的dicer酶产生的。对这种收集到的短干扰RNA双链体进行进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳对样品进行分析，以测定双链体形成的完整性和效率。然后在250纳米的波长下通过分光光度法来测定样品的纯度和数量，未使用的样品贮存于-20℃，用于进一步使用。
基本按照Pleau等人(2002)所述来制造昆虫食物，其中做出了如下改动。将9.4克的SERVA琼脂分散到540毫升纯净水，搅拌直至琼脂完全分散。将水/琼脂混合加热至沸腾，以完全溶解琼脂，然后倾倒进WARING搅拌机。将搅拌机保持为低速，此时将62.7克BIO-SERV DIET混合物(F9757)、3.75克冻干的玉米根部、1.25毫升绿色食用颜料以及0.6毫升福尔马林加入到热的琼脂混合物中。然后通过加入10％的氢氧化钾贮液将混合物pH调节为9.0。在磁力搅拌热板上，使用灭菌NALGENE涂布的磁力搅棒，以高速对大约600毫升体积的液体食物连续混合，并且将其保持为大约48℃至大约60℃，并将其分散为FALCOM96孔圆底微滴定板每个孔中的200微升等份。在灭菌的生物抽风橱(biohood)中使平板中的食物凝固及空气干燥大约10分钟。
使用连发型微量移液器，取三十(30)微升体积的试验样品，其中含有不同数量的对照试剂或者双链RNA，将其覆盖到每个孔中的昆虫食物表面。在应用试验样品之后，昆虫食物被允许在灭菌的生物抽风橱中保持长达一个半小时，以使试剂扩散进食物，以及允许食物表面干燥。用画刷向每个孔中放入一只WCR新生幼虫。然后用MYLAR密封平板，用昆虫针来通风。针对每种剂量，对12-72只昆虫幼虫进行试验，数量取决于试验设计。在27℃，60％的相对湿度和完全黑暗下对生物测定平板进行12-14天的温育。在12-14天的时间点，对每种剂量下存活幼虫的数量加以记录。使用合适的微量天平，针对每只存活的幼虫，测定幼虫质量。使用JMP
Figure A20068004288100611
4统计软件(SAS Institue，1995)来分析数据，用Dunnet检验来进行完全阶乘ANOVA，以较之未处理对照来寻找处理的效果(P＜0.05)。进行Tukey-Kramer事后(post hoc)检验，来比较所有的处理对(P＜0.05)。CRW幼虫喂饲测定的结果显示了相对于对照的显著的生长抑制和死亡，如下文的解释。
实施例3
昆虫喂饲生物测定的结果
通过施用采用实施例2描述的生物测定，按照实施例1的描述鉴定的双链RNA序列的样品，制备足以饲养玉米根虫幼虫的人工食物。典型地，使玉米根虫幼虫摄食上述食物12天，监测相对于仅仅喂饲阴性和阳性对照食物的根虫的死亡和发育迟缓。研究结果证明用含与多种不同基因类型同源的序列部分的dsRNA，产生显著水平(p＜0.05)的幼虫发育迟缓和/或死亡。下表1-5显示了产生显著发育迟缓和/或死亡的序列和载体，以及表达为dsRNA的序列的相应序列编号。
表1：用南部玉米根虫或西部玉米根虫进行的昆虫喂饲生物测定中证实了显著发育迟缓和/或死亡的dsRNA构建体
  载体   表达为dsRNA的序列  SEQ ID NO
  RNAi-pIC17553：001   Apple   697
  RNAi-pIC17504：049   EST全长V-ATP酶   695
  RNAi-pIC17554：001   Rpl 9   698
  RNAi-pIC17555：001   Rpl 19   699
  RNAi-pIC17504：050   6.0部分V-ATP酶   711
  RNAi-pIC19514：001   WCR mRNA  加帽酶LIB5496-028-A1-M1-A7   696
RNAi-pIC17552：003   LIB5462-042-A1-M1-H10Dv.6_CG9355表皮的暗黑结构组分   700
RNAi-pIC17546：003   LIB5462-091-A1-M1-G3Dv.1_CG6217KNICKKOPF UNK   701
  RNAi-pIC17546：001   Dv.1_CG6217   1
  RNAi-pIC17549：001   Dv.4_CG1435   4
RNAi-pIC17550：001   LIB5444-065-A1-M1-D5Dv.5_cg1915_1   5
RNAi-pIC17551：001   LIB5462-012-A1-M2-B2Dv.5_cg1915_2   703
  RNAi-pIC17552：001   Dv.6_CG9355   6
RNAi-pMON78412：002   Dv.7_CG3416；推定的Mov34：CG3416直向同源物   10
RNAi-pMON96172：002   Dv.8_CG1088；推定的液泡H+ATP酶E亚基：CG1088直向同源物   14
RNAi-pMON96168：002   Dv.9_CG2331；推定的ATP酶活性：CG2331直向同源物   18
RNAi-pMON78424：002   Dv.10_CG6141；推定的核糖体蛋白L9：CG6141直向同源物   22
  RNAi-pMON78425：001   Dv.11_CG2746   26
RNAi-pMON78444：002   Dv.12_CG1341；推定的蛋白酶体调节颗粒，rpt1：CG1341直向同源物   30
RNAi-pMON78416：002   Dv.13_CG11276；推定的核糖体蛋白S4：CG11276直向同源物   34
RNAi-pMON78434：001   Dv.14_CG179272；推定的肌球蛋白重链：CG17927直向同源物   38
RNAi-pMON78439：001   Dv.16_CG5394；推定的谷氨酰-丙氨酰-tRNA合成酶：CG5394直向同源物   46
RNAi-pMON78438：001   Dv.17_CG10149；推定的蛋白酶体p44.5亚基，rpn6：CG10149直向同源物   50
RNAi-pMON78435：002   Dv.18_CG1404；推定的RAN小单体GTP酶：CG1404直向同源物   54
RNAi-pMON78449：002   Dv.19_CG18174；推定的蛋白酶体调节颗粒，盖亚复合物，rpn11：CG18174直向同源物   58
RNAi-pMON78419：001   Dv.20_CG3180_1；推定的定向于DNA的RNA聚合酶II：CG3180直向同源物   62
RNAi-pMON78440：002   Dv20_CG3180_2；推定的定向于DNA的RNA聚合酶II：CG3180直向同源物   706
RNAi-pMON78420：001   Dv.21_CG3320；推定的Rab1：CG3320直向同源物   70
RNAi-pMON78410：002   Dv.22_CG3395；推定的核糖体蛋白S9：CG3395直向同源物   74
RNAi-pMON78422：001   Dv.23_CG7269；推定的解旋酶：CG7269直向同源物   78
RNAi-pMON78423：001   Dv.25_CG9012；推定的网格蛋白重链：CG9012直向同源物   86
  RNAi-pMON78414：006   DV.26sec1约EST的5′部分   710
RNAi-pMON78414：001   Dv.26_CG9261；推定的钠/钾交换ATP酶：CG9261直向同源物   90
RNAi-pMON78413：001   Dv.27_CG12052；推定的RNA聚合酶II转录因子：CG12052直向同源物.   94
RNAi-pMON78427：001   Dv.35_CG3762；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物.   126
RNAi-pMON97122：001   C1_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体   713
  RNAi-pMON97127：001   C2_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体   714
  RNAi-pMON97125：001   C3_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体   715
RNAi-pMON78441：001   Dv.39_CG9078；推定的鞘脂δ-4去饱和酶；硬脂酰-CoA 9-去饱和酶：CG9078直向同源物   142
RNAi-pMON97114：001   Dv.41_CG2637；雌性不育Ketel；参与蛋白-细胞核进入：CG2637直向同源物   150
RNAi-pMON97140：001   Dv.44_CG1244；推定的核酸结合活性：CG1244直向同源物   162
RNAi-pMON78429：001   Dv.46_CG10689；推定的RNA解旋酶：CG10689直向同源物   170
RNAi-pMON78432：001   Dv.48_CG33196；推定的跨膜受体蛋白酪氨酸激酶：CG33196直向同源物   178
RNAi-pMON78428：001   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物   182
RNAi-pMON78428：003   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物选自DV.49的游离区   704
RNAi-pMON78426：001   Dv.50_CG10110_1；推定的切割和聚腺苷酸化特异性因子：CG10110_1直向同源物   186
RNAi-pMON96185：001   Dv.55_CG5931；推定的剪接因子活性，RNA解旋酶活性：CG5931直向同源物   202
RNAi-pMON78442：001   Dv.57_CG2968；推定的氢输出ATP酶：CG2968直向同源物   206
RNAi-pMON78431：001   Dv.58_CG1751；推定的信号肽酶：CG1751直向同源物   210
RNAi-pMON96177：001   Dv.61_CG3725_1；推定的钙ATP酶：CG3725直向同源物   222
RNAi-pMON96183：001   Dv.62_CG3612；推定的前导物：CG3612直向同源物   230
RNAi-pMON96180：002   Dv.65_CG7033；推定的蛋白伴侣活性：CG7033直向同源物   242
RNAi-pMON96176：001   Dv.66_CG32019；推定的bent：CG32019直向同源物   246
RNAi-pMON96170：002   Dv.67_CG16916；推定的内肽酶活性：CG16916直向同源物   250
RNAi-pMON96166：001   Dv.70_CG5771；推定的Rab-蛋白11：CG5771直向同源物   258
RNAi-pMON96179：001   Dv.72_CG6831；推定的rhea：CG6831直向同源物   266
RNAi-pMON96186：001   Dv.73_CG10119；推定的核纤层蛋白C：CG10119直向同源物   270
RNAi-pMON96160：002   Dv.74_CG6375；推定的pitchoune：CG6375直向同源物   274
RNAi-pMON97137：001   Dv.77_CG4214；推定的突触融合蛋白5；参与细胞内蛋白转运：CG4214直向同源物   286
RNAi-pMON96167：001   Dv.82_CG8264；推定的Bx42：CG8264直向同源物   302
RNAi-pMON96171：001   Dv.83_CG11397；推定的gluon：CG11397直向同源物   306
RNAi-pMON96187：003   Dv.85_CG4494；推定的蛋白结合活性：CG4494直向同源物   314
RNAi-pMON96174：001   Dv.86_CG5055；推定的bazooka：CG5055直向同源物   318
RNAi-pMON97126：001   Dv.88_CG8756；功能未知；含有几丁质结合结构域：CG8756直向同源物   326
RNAi-pMON97130：001   Dv.93_CG8515；推定的表皮结构组分；含有几丁质结合结构域：CG8515直向同源物   342
RNAi-pMON97109：001   Dv.99_CG2446；未知的；在果蝇中致死并且与人具有低同源性：CG2446直向同源物   366
RNAi-pMON97111：001   Dv.105_CG1250_1；GTP酶激活剂，参与细胞内蛋白转运：CG1250直向同源物   390
RNAi-pMON97112：001   Dv.105_CG1250_2；GTP酶激活剂，参与细胞内蛋白转运：CG1250直向同源物   394
RNAi-pMON97107：001   Dv.107_CG14813；COPI液泡被膜；参与高尔基体到内质网的细胞内蛋白转运：CG14813直向同源物   398
RNAi-pMON97115：001   Dv.108_CG17248；n-synaptobrevin；参与细胞内蛋白转运：CG17248直向同源物   402
  RNAi-pMON97133：001   Dv.113；功能未知；WCR独特序列   422
RNAi-pMON97121：001   Dv.122_CG3164；推定的ATP-结合盒转运蛋白活性：CG3164直向同源物   454
  RNAi-pMON97134：001   Dv.127；功能未知；与人不具有同源性   470
  RNAi-pMON97171：001   Dv.146；功能未知，WCR独特序列   514
  RNAi-pMON97166：001   Dv.147；功能未知，WCR独特序列   518
  RNAi-pMON97167：001   Dv.149；功能未知，WCR独特序列   526
  RNAi-pMON97169：001   Dv.155；功能未知，WCR独特序列   550
  RNAi-pMON97173：001   Dv.162；功能未知，WCR独特序列   578
  RNAi-pMON97170：001   Dv.170；功能未知，WCR独特序列   610
表2：在采用西部玉米根虫(WCR)幼虫的喂饲生物测定中导致显著发育迟缓水平的dsRNA构建体
  载体   表达为dsRNA的序列
  RNAi-pIC17553：001   Apple
  RNAi-pIC17504：049   EST全长V-ATP酶
  RNAi-pIC17554：001   Rpl 9
  RNAi-pIC17555：001   Rpl 19
  RNAi-pIC17504：050   6.0部分V-ATP酶
  RNAi-pIC16005：001   V-ATP酶D亚基1
  RNAi-pIC19514：001   WCR mRNA加帽酶LIB5496-028-A1-M1-A7
  RNAi-pIC17546：001   Dv.1_CG6217
  RNAi-pIC17549：001   Dv.4_CG1435
  RNAi-pIC17551：001   LIB5462-012-A1-M2-B2Dv.5_cg1915_2
  RNAi-pIC17552：001   Dv.6_CG9355
  RNAi-pMON78412：001   Dv.7_CG3416
  RNAi-pMON78412：002   Dv.7_CG3416；推定的Mov34：CG3416直向同源物
  RNAi-pMON96172：002   Dv.8_CG1088；推定的液泡H+ATP酶E亚基：CG1088直向同源物
  RNAi-pMON96168：002   Dv.9_CG2331；推定的ATP酶活性：CG2331直向同源物
  RNAi-pMON78424：002   Dv.10_CG6141；推定的核糖体蛋白L9：CG6141直向同源物
  RNAi-pMON78425：001   Dv.11_CG2746
  RNAi-pMON78444：002   Dv.12_CG1341；推定的蛋白酶体调节颗粒，rpt1：CG1341直向同源物
  RNAi-pMON78416：002   Dv.13_CG11276；推定的核糖体蛋白S4：CG11276直向同源物
  RNAi-pMON78434：001   Dv.14_CG179272；推定的肌球蛋白重链：CG17927直向同源物
  RNAi-pMON78439：001   Dv.16_CG5394；推定的谷氨酰-丙氨酰-tRNA合成酶：CG5394直向同源物
  RNAi-pMON78435：002   Dv.18_CG1404；推定的RAN小单体GTP酶：CG1404直向同源物
  RNAi-pMON78449：002   Dv.19_CG18174；推定的蛋白酶体调节颗粒，盖亚复合物，rpn11：CG18174直向同源物
  RNAi-pMON78440：002   Dv.20_CG3180_2；推定的定向于DNA的RNA聚合酶II：CG3180直向同源物
  RNAi-pMON78420：002   Dv.21_CG3320；推定的Rab1：CG3320直向同源物
  RNAi-pMON78410：001   Dv.22_CG3395；推定的核糖体蛋白S9：CG3395直向同源物
  RNAi-pMON78422：001   Dv.23_CG7269；推定的解旋酶：CG7269直向同源物
  RNAi-pMON78423：001   Dv.25_CG9012；推定的网格蛋白重链：CG9012直向同源物
  RNAi-pMON78414：001   Dv.26_CG9261；推定的钠/钾交换ATP酶：CG9261直向同源物
  RNAi-pMON78413：001   Dv.27_CG12052；推定的RNA聚合酶II转录因子：CG12052直向同源物.
  RNAi-pMON97122：001   C1_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON97127：001   C2_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON97125：001   C3_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON78427：007   Dv.35_CG3762；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物.
  RNAi-pMON78441：001   Dv.39_CG9078；推定的鞘脂δ-4去饱和酶；硬脂酰-CoA 9-去饱和酶：CG9078直向同源物
  RNAi-pMON97114：001   Dv.41_CG2637；雌性不育Ketel；参与蛋白-细胞核进入：CG2637直向同源物
  RNAi-pMON78429：001   Dv.46_CG10689；推定的RNA解旋酶：CG10689直向同源物.
  RNAi-pMON78432：001   Dv.48_CG33196；推定的跨膜受体蛋白酪氨酸激酶：CG33196直向同源物
  RNAi-pMON78428：001   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物
  RNAi-pMON78428：003   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物选自DV.49的游离区
  RNAi-pMON78426：001   Dv.50_CG10110_1；推定的切割和聚腺苷酸化特异性因子：CG10110_1直向同源物
  RNAi-pMON96185：001   Dv.55_CG5931；推定的剪接因子活性，RNA解旋酶活性：CG5931直向同源物
  RNAi-pMON78442：001   Dv.57_CG2968；推定的氢输出ATP酶：CG2968直向同源物
  RNAi-pMON78431：001   Dv.58_CG1751；推定的信号肽酶：CG1751直向同源物
  RNAi-pMON96177：001   Dv.61_CG3725_1；推定的钙ATP酶：CG3725直向同源物
  RNAi-pMON96182：001   Dv.61_CG3725_2；推定的钙ATP酶：CG3725直向同源物
  RNAi-pMON96183：001   Dv.62_CG3612；推定的前导物：CG3612直向同源物
  RNAi-pMON96180：002   Dv.65_CG7033；推定的蛋白伴侣活性：CG7033直向同源物
  RNAi-pMON96180：001   Dv.65_CG7033；推定的蛋白伴侣活性：CG7033直向同源物
  RNAi-pMON96176：001   Dv.66_CG32019；推定的倾向：CG32019直向同源物
  RNAi-pMON96170：002   Dv.67_CG16916；推定的内肽酶活性：CG16916直向同源物
  RNAi-pMON96166：001   Dv.70_CG5771；推定的Rab-蛋白11：CG5771直向同源物
  RNAi-pMON96179：001   Dv.72_CG6831；推定的rhea：CG6831直向同源物
  RNAi-pMON96186：001   Dv.73_CG10119；推定的核纤层蛋白C：CG10119直向同源物
  RNAi-pMON96160：002   Dv.74_CG6375；推定的pitchoune：CG6375直向同源物
  RNAi-pMON96160：001   Dv.74_CG6375；推定的pitchoune：CG6375直向同源物
  RNAi-pMON97137：002   Dv.77_CG4214；推定的突触融合蛋白5；参与细胞内蛋白转运：CG4214直向同源物
  RNAi-pMON96167：001   Dv.82_CG8264；推定的Bx42：CG8264直向同源物
  RNAi-pMON96171：001   Dv.83_CG11397；推定的gluon：CG11397直向同源物
  RNAi-pMON96187：003   Dv.85_CG4494；推定的蛋白结合活性：CG4494直向同源物
  RNAi-pMON97126：001   Dv.88_CG8756；功能未知；含有几丁质结合结构域：CG8756直向同源物
  RNAi-pMON97109：001   Dv.99_CG2446；未知的；在果蝇中致死并且与人具有低同源性：CG2446直向同源物
  RNAi-pMON97111：001   Dv.105_CG1250_1；GTP酶激活剂，参与细胞内蛋白转运：CG1250直向同源物
  RNAi-pMON97107：001   Dv.107_CG14813；COPI液泡被膜；参与高尔基体到内质网的细胞内蛋白转运：CG14813直向同源物
  RNAi-pMON97115：001   Dv.108_CG17248；n-synaptobrevin；参与细胞内蛋白转运：CG17248直向同源物
  RNAi-pMON97121：001   Dv.122_CG3164；推定的ATP-结合盒转运蛋白活性：CG3164直向同源物
  RNAi-pMON97171：001   Dv.146；功能未知，WCR独特序列
  RNAi-pMON97166：001   Dv.147；功能未知，WCR独特序列
  RNAi-pMON97167：001   Dv.149；功能未知，WCR独特序列
  RNAi-pMON97169：001   Dv.155；功能未知，WCR独特序列
  RNAi-pMON97173：001   Dv.162；功能未知，WCR独特序列
  RNAi-pMON97170：001   Dv.170；功能未知，WCR独特序列
表3：在采用西部玉米根虫(WCR)幼虫的喂饲生物测定中导致显著死亡水平的dsRNA构建体
  载体   表达为dsRNA的序列
  RNAi-pIC17553：001   Apple
  RNAi-pIC17504：049   EST全长V-ATP酶
  RNAi-pIC17555：001   Rpl 19
  RNAi-pIC17554：001   Rpl 9
  RNAi-pIC17504：050   6.0部分V-ATP酶
  RNAi-pIC17504：054  来自Diabrotica virgifera virgifera的V-ATP酶亚基2序列作为阳性对照的全长EST序列
  RNAi-pIC19514：001   WCR mRNA加帽酶LIB5496-028-A1-M1-A7
  RNAi-pIC17546：001   Dv.1_CG6217
  RNAi-pIC17549：001   Dv.4_CG1435
  RNAi-pIC17550：001   LIB5444-065-A1-M1-D5Dv.5_cg1915_1
  RNAi-pMON78412：002   Dv.7_CG3416；推定的Mov34：CG3416直向同源物
  RNAi-pMON96172：001   Dv.8_CG1088；推定的液泡H+ATP酶E亚基：CG1088直向同源物
  RNAi-pMON96168：001   Dv.9_CG2331；推定的ATP酶活性：CG2331直向同源物
  RNAi-pMON78424：002   Dv.10_CG6141；推定的核糖体蛋白L9：CG6141直向同源物
  RNAi-pMON78425：001   Dv.11_CG2746
  RNAi-pMON78444：001   Dv.12_CG1341；推定的蛋白酶体调节颗粒，rpt1：CG1341直向同源物
  RNAi-pMON78416：002   Dv.13_CG11276；推定的核糖体蛋白S4：CG11276直向同源物
  RNAi-pMON78434：001   Dv.14_CG17927_2；推定的肌球蛋白重链：CG17927直向同源物
  RNAi-pMON78435：001   Dv.18_CG1404；推定的RAN小单体GTP酶：CG1404直向同源物
  RNAi-pMON78449：001   Dv.19_CG18174；推定的蛋白酶体调节颗粒，盖亚复合物，rpn11：CG18174直向同源物
  RNAi-pMON78440：001   Dv.20_CG3180；推定的定向于DNA的RNA聚合酶II：CG3180直向同源物
  RNAi-pMON78420：001   Dv.21_CG3320；推定的Rab1：CG3320直向同源物
  RNAi-pMON78410：001   Dv.22_CG3395；推定的核糖体蛋白S9：CG3395直向同源物
  RNAi-pMON78422：001   Dv.23_CG7269；推定的解旋酶：CG7269直向同源物
  RNAi-pMON78414：006   DV.26sec1约EST的5′部分
  RNAi-pMON78414：001   Dv.26_CG9261；推定的钠/钾交换ATP酶：CG9261直向同源物
  RNAi-pMON97122：001   C1_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON97127：001   C2_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON97125：001   C3_Dv.35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON78427：001   Dv.35_CG3762；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物.
  RNAi-pMON97114：001   Dv.41_CG2637；雌性不育Ketel；参与蛋白-细胞核进入：CG2637直向同源物
  RNAi-pMON97140：001   Dv.44_CG1244；推定的核酸结合活性：CG1244直向同源物
  RNAi-pMON78429：001   Dv.46_CG10689；推定的RNA解旋酶：CG10689直向同源物.
  RNAi-pMON78428：001   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物
  RNAi-pMON78428：003   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物选自DV.49的游离区
  RNAi-pMON78426：001   Dv.50_CG10110_1；推定的切割和聚腺苷酸化特异性因子：CG10110_1直向同源物
  RNAi-pMON96185：001   Dv.55_CG5931；推定的剪接因子活性，RNA解旋酶活性：CG5931直向同源物
  RNAi-pMON78431：001   Dv.58_CG1751；推定的信号肽酶：CG1751直向同源物
  RNAi-pMON96177：001   Dv.61_CG3725_1；推定的钙ATP酶：CG3725直向同源物
  RNAi-pMON96182：001   Dv.61_CG3725_2；推定的钙ATP酶：CG3725直向同源物
  RNAi-pMON96180：001   Dv.65_CG7033；推定的蛋白伴侣活性：CG7033直向同源物
  RNAi-pMON96176：001   Dv.66_CG32019；推定的倾向：CG32019直向同源物
  RNAi-pMON96170：001   Dv.67_CG16916；推定的内肽酶活性：CG16916直向同源物
  RNAi-pMON96166：001   Dv.70_CG5771；推定的Rab-蛋白11：CG5771直向同源物
  RNAi-pMON96160：001   Dv.74_CG6375；推定的pitchoune：CG6375直向同源物
  RNAi-pMON97137：001   Dv.77_CG4214；推定的突触融合蛋白5；参与细胞内蛋白转运：CG4214直向同源物
  RNAi-pMON96167：001   Dv.82_CG8264；推定的Bx42：CG8264直向同源物
  RNAi-pMON96187：002   Dv.85_CG4494；推定的蛋白结合活性：CG4494直向同源物
  RNAi-pMON97126：001   Dv.88_CG8756；功能未知；含有几丁质结合结构域：CG8756直向同源物
  RNAi-pMON97130：001   Dv.93_CG8515；推定的表皮结构组分；含有几丁质结合结构域：CG8515直向同源物
  RNAi-pMON97111：001   Dv.105_CG1250_1；GTP酶激活剂，参与细胞内蛋白转运：CG1250直向同源物
  RNAi-pMON97107：001   Dv.107_CG14813；COPI液泡被膜；参与高尔基体到内质网细胞内蛋白转运：CG14813直向同源物
  RNAi-pMON97115：001   Dv.108_CG17248；n-synaptobrevin；参与细胞内蛋白转运：CG17248直向同源物
  RNAi-pMON97133：001   Dv.113；功能未知；WCR独特序列
  RNAi-pMON97121：001   Dv.122_CG3164；推定的ATP-结合盒转运蛋白活性：CG3164直向同源物
  RNAi-pMON97134：001   Dv.127；功能未知；与人无同源性
表4：在采用南部玉米根虫(SCR)幼虫的喂饲生物测定中导致显著发育迟缓水平的dsRNA构建体
  载体   表达为dsRNA的序列
  RNAi-pMON96172：001   Dv8_CG1088；推定的液泡H+ATP酶E亚基：CG1088直向同源物
  RNAi-pMON96168：001   Dv9_CG2331；推定的ATP酶活性：CG2331直向同源物
  RNAi-pMON78424：001   Dv.10_CG6141
  RNAi-pMON96155：002   Dv.10_CG6141；推定的核糖体蛋白L9：CG6141直向同源物.
  RNAi-pMON78425：001   Dv.11_CG2746
  RNAi-pMON96158：002   Dv.11_CG2746；推定的核糖体蛋白L19：CG2746直向同源物.
  RNAi-pMON78416：001   Dv.13_CG11276
  RNAi-pMON78434：001   Dv.14_CG17927_2；推定的肌球蛋白重链：CG17927直向同源物
  RNAi-pMON78435：001   Dv.18_CG1404；推定的RAN小单体GTP酶：CG1404直向同源物
  RNAi-pMON78449：001   Dv.19_CG18174；推定的蛋白酶体调节颗粒，盖亚复合物，rpn11：CG18174直向同源物
  RNAi-pMON78419：001   Dv.20_CG3180
  RNAi-pMON78420：001   Dv.21_CG3320；推定的Rab1：CG3320直向同源物
  RNAi-pMON78414：001   Dv.26_CG9261；推定的钠/钾交换ATP酶：CG9261直向同源物
  RNAi-pMON97122：001   C1_Dv35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON97125：001   C3_Dv35；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；串联体
  RNAi-pMON78427：008   Dv.35_CG3762；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物.
  RNAi-pMON78428：001   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物
  RNAi-pMON78442：001   Dv.57_CG2968；推定的氢输出ATP酶：CG2968直向同源物
  RNAi-pMON96177：001   Dv61_CG37251；推定的钙ATP酶：CG3725直向同源物
  RNAi-pMON96166：001   Dv70_CG5771；推定的Rab-蛋白11：CG5771直向同源物
  RNAi-pMON97126：001   Dv88_CG8756；功能未知；含有几丁质结合结构域：CG8756直向同源物
  RNAi-pMON97111：001   Dv105_CG1250_1；GTP酶激活剂，参与细胞内蛋白转运：CG1250直向同源物
  RNAi-pMON97112：001   Dv105_CG1250_2；GTP酶激活剂，参与细胞内蛋白转运：CG1250直向同源物
  RNAi-pMON97107：001   Dv107_CG14813；COPI液泡被膜；参与高尔基体到内质网的细胞内蛋白转运：CG14813直向同源物
  RNAi-pMON97121：001   Dv122_CG3164；推定的ATP-结合盒转运蛋白活性：CG3164直向同源物
表5：在采用南部玉米根虫(SCR)幼虫的喂饲生物测定中导致显著死亡水平的dsRNA构建体
  载体   表达为dsRNA的序列
  RNAi-pIC17546：003   LIB5462-091-A1-M1-G3   Dv1_CG6217KNICKKOPF UNK
  RNAi-pIC17504：055   来自Diabrotica virgifera virgifera的V-ATP酶亚基2序列作为阳性对照的全长EST序列
  RNAi-pMON96155：001   Dv.10_CG6141；推定的核糖体蛋白L9：CG6141直向同源物
  RNAi-pMON96158：001   Dv.11_CG2746；推定的核糖体蛋白L19：CG2746直向同源物
  RNAi-pMON78416：001   Dv.13_CG11276
  RNAi-pMON96154：003   Dv.14_CG17927；推定的肌球蛋白重链：CG17927直向同源物；在S完全培养基中生长的细胞
  RNAi-pMON78438：001   Dv.17_CG10149；推定的蛋白酶体p44.5亚基，rpn6：CG10149直向同源物
  RNAi-pMON78449：001   Dv.19_CG18174；推定的蛋白酶体调节颗粒，盖亚复合物，rpn11：CG18174直向同源物
  RNAi-pMON78440：001   Dv.20_CG3180；推定的定向于DNA的RNA聚合酶II：CG3180直向同源物
  RNAi-pMON96156：001   Dv.20_CG3180；推定的RNA聚合酶II 140kD亚基：CG3180直向同源物
  RNAi-pMON78420：001   Dv.21_CG3320；推定的Rab1：CG3320直向同源物
  RNAi-pMON78427：006   Dv.35_CG3762；推定的Vha68-2：CG3762直向同源物.
  RNAi-pMON78428：001   Dv.49_CG8055_1；推定的结合，载体活性：CG8055_1直向同源物
  RNAi-pMON96177：001   Dv61_CG3725_1；推定的钙ATP酶：CG3725直向同源物
  RNAi-pMON96166：001   Dv70_CG5771；推定的Rab-蛋白11：CG5771直向同源物
  RNAi-pMON96174：001   Dv86_CG5055；推定的bazooka：CG5055直向同源物
  RNAi-pMON97111：001   Dv105_CG1250_1；GTP酶激活剂，参与细胞内蛋白转运：CG1250直向同源物
  RNAi-pMON97107：001   Dv107_CG14813；COPI液泡被膜；参与高尔基体到内质网的细胞内蛋白转运：CG14813直向同源物
实施例4
转基因植物转化和生物测定
简言之，将上述编码dsRNA构建体的序列在5’端与由可操作连接于玉米hsp70内含子的35S启动子构成的序列相连，在3’端与NOS3’转录终止和聚腺苷化序列相连。将该表达盒置于草苷膦选择盒的下游。然后将这些相连的盒置于根癌土壤杆菌植物转化功能载体，用于转化玉米组织，使其具有草苷膦耐受性，选择事件，转移进土壤。R0植株的根被喂饲给西部玉米根虫幼虫(WCR，Diabrotica virifera)。将转基因玉米根转移到培养皿上，其上具有含抗生素和草苷膦的MS0D培养基，进行体外选择。用细头画笔使每个皿中每个根受到两只WCR幼虫的感染。用石蜡膜(Parafilm)密封这些皿，防止幼虫逃逸。试验在27℃，60％的RH Percival培养箱中于完全黑暗下进行。对污染和幼虫质量加以监测。在喂饲根部组织六天之后，将幼虫转移到96孔板中的WCR食物中。幼虫被允许摄食该食物八天，使得总的测定为十四天长。对幼虫质量和存活加以记录，用于分析。对幼虫总体数据进行单因素ANOVA分析和Dunnett检验，寻找与未转化的阴性对照相比的统计学显著性。在两种事件上喂饲后测量幼虫发育迟缓，并且与喂饲阴性对照植物的幼虫的生长进行比较。
将转基因玉米植株(R0)种植到含有Metromix土壤的10英寸罐中。当植株达到V4生长阶段，使大约1000个西部玉米根虫(WCR，Diabrotica virifera)卵侵袭进根部区域。同样基因型的非转基因玉米在相似的生长阶段被侵袭，以用作为阴性对照。对卵进行预孵育，使得能在侵袭的24小时内发生孵化。幼虫被允许在根系摄食3周。从土壤移开植株，对其进行清洗，使得可针对幼虫进食评估根部。使用结节损伤评分(NIS)对根部损伤加以分级，其中0表示没有损伤，1表示根的一节短了1.5英寸以内，2表示两节短了，3表示3节短了。因为用于评测的植株是转化之后直接来自组织培养物的，还因为转化事件是独特的，所以此时针对每种事件仅评测单株植株，不能获得统计结果。测定中的所有植株都展示出了幼虫摄食的征兆和症状，这表明获得了成功的侵袭。阴性对照植株平均是中度至严重损伤，而转基因植物的根提供了对幼虫摄食的显著控制，结节损伤评分为大约0.2或更小。
实施例5
用ta-siRNA介导的沉默方法实现昆虫害虫基因阻抑
使植物害虫中的基因沉默的一种替代方法采用最近发现的一类反式作用小干扰RNA(ta-siRNA)(Dalmay等人，2000；Mourrain等人，2000；Peragine等人，2004；Vazquez等人，2004)。ta-siRNA是从细胞中天然存在的miRNA靶向的单链RNA转录物获得的。使用微RNA以诱发ta-siRNA用于在植物中进行基因沉默的方法被描述于美国临时专利申请序列号60/643,136(Carrington等人2004)中，其通过引用整体并入本文。鉴定出了至少一种在玉米根虫幼虫肠道上皮细胞中表达的害虫特异性miRNA。然后用该害虫特异性miRNA鉴定至少一种靶RNA转录物序列，所述序列与细胞中表达的miRNA互补。对应的靶序列是不超过21个相邻核苷酸的短序列，当在具有功能性RNAi途径的细胞类型中作为RNA转录物的一部分并且与其对应的miRNA接触时，所述短序列导致切割物介导的对所述转录物的切割。一旦鉴定出了miRNA靶序列，将至少一种miRNA靶序列与第二条序列融合，所述第二条序列对应于将使用该方法进行沉默的害虫基因的一部分。例如，将miRNA靶序列与SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906中的任意序列或其部分，例如玉米根虫液泡ATP酶(V-ATP酶)基因的序列融合。miRNA靶序列可置于V-ATP酶基因的5’端，3’端或嵌入到该基因中间。使用对应于多种miRNA基因的多种miRNA靶序列，或者在miRNA靶序列和靶基因序列的嵌合体中多次使用同一种miRNA靶序列，可能是优选的。靶基因序列可以是任意长度的，但最小为21bp。
使用任何大量合适的启动子或其它转录调节元件，将miRNA靶序列靶基因序列的嵌合体表达于植物细胞中，只要在将被提供于害虫食物的细胞类型(例如，用于控制玉米根虫的玉米根部)中能发生转录即可。
该方法可以具有额外优点：能将较长的RNA分子送递至靶害虫。典型地，在植物中产生的dsRNA会被Dicer容易地加工为短RNA，当以外源方式喂饲给一些害虫时，这可能无效。在该方法中，在植物细胞中产生单链转录物，其被害虫摄取，在害虫细胞中转化为dsRNA，在细胞中，其再被加工为能对一种或多种靶害虫中的一种或多种基因造成转录后沉默的ta-siRNA。
实施例6
提供用于dsRNA介导的基因沉默的DNA序列的方法
本实施例说明了提供用于dsRNA介导的基因沉默的DNA序列的方法。更具体地，本实施例描述了对可用于dsRNA介导的基因沉默中的改进的DNA的选择，这是通过下述步骤来实现的：(a)从靶基因选择最初的DNA序列，其包括多于21个相邻的核苷酸；(b)鉴定出至少一个更短的DNA序列，其来源于最初DNA序列的区域，由被预测为不产生不想要的多肽并且与诸如同源物/直向同源物的已知序列不具有同一性的区域构成；以及(c)选择用于dsRNA介导的基因沉默的DNA序列，其包括至少一个更短的DNA序列。不想要的多肽包括但不限于，与致敏性多肽同源的多肽以及与已知的多肽毒素同源的多肽。
WCR V-ATP酶已证明能在玉米根虫喂饲测定中发挥作用，以检验dsRNA介导的沉默(作为控制幼虫生长的手段)。来自西部玉米根虫(WCR)(Diabrotica cirgifera virgifera LeConte)的液泡ATP酶基因(V-ATP酶)的cDNA序列被选出，用作为最初的DNA序列。筛选最初的DNA序列，用于鉴定以下区域：在所述区域中，每一个包含至少21个核苷酸的相邻片段仅与已知脊椎动物序列中21个相邻的核苷酸中的小于21个匹配。鉴定了超过大约100个相邻核苷酸的序列片段，其中不含所述21/21命中。因此，可以用包括片段长度、GC含量、序列、基于模型生物中的相应基因的序列或功能而预测的功能和预测的二级结构的标准(例如Elbashir等人，2001b)可以用于选择和设计使用的序列。组合了这些序列片段的不同组合，用于构建表达为dsRNA并且用于上文描述的昆虫喂饲生物测定中的嵌合DNA序列。
实施例7
用选自EST数据库的序列进行的昆虫喂饲生物测定的其它结果
本实施例说明了发现作为双链RNA序列在根虫幼虫侵袭时能够有效导致幼虫发育迟缓和/或死亡的其它序列。饲养玉米根虫幼虫的方法、dsRNA的施用和昆虫生物测定如实施例1-3的描述。研究结果证实了用含有与多种不同基因类型同源的序列的部分导致的显著水平(p＜0.05)的幼虫发育迟缓和/或死亡。产生显著发育迟缓和/或死亡的序列和载体，以及表达为dsRNA的序列的相应序列编号示于下表6。用于玉米转化中的示例性二元载体pMON98503含有用于转移到植物细胞中的右侧和左侧T-DNA边缘之间的以下元件：e35S-HSP70-DV49(反义方向)-通用间隔基DV49(有义方向)-hsp17；ACT(启动子和内含子)-CTP2运输信号-CP4-NOS。用于玉米转化中的另一种示例性二元载体pMON98504含有位于右侧和左侧边缘之间的以下元件：e35S-HSP70-C1(反义方向)-通用间隔基C1(有义方向)-hsp17；ACT(启动子和内含子)-CTP2运输信号-CP4-NOS。
表6：用南部玉米根虫或西部玉米根虫进行的昆虫喂饲生物测定中证实了显著发育迟缓和/或死亡的其它dsRNA构建体
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON98356   Dv164；功能未知，WCR独特序列   726
  pMON98354   Dv172；功能未知，WCR独特序列   727
  pMON97191   Dv189；功能未知，WCR独特序列   728
  pMON98359   Dv200；功能未知，WCR独特序列   729
  pMON38880   Dv207_F39H11.5；推定的pbs-7，内肽酶：F39H11.5直向同源物   730
  pMON101054   Dv208_F58F12_1；推定的线粒体F1F0-ATP合酶，亚基delta/ATP16：F58F12_1直向同源物   731
  pMON98437   Dv210_K11H12_2；推定的rpl-15，核糖体的结构组分：K11H12_2直向同源物   732
  pMON98435   Dv211_R12E2_3；推定的rpn-8，翻译起始因子，26S蛋白酶体调节复合物，亚基RPN8：R12E2_3直向同源物   733
  pMON98447   Dv212_C17H12_14；推定的vha-8，氢输出ATP酶：C17H12_14直向同源物   734
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON98448   Dv213_B0464_1；推定的drs-1，tRNA连接酶：B0464_1直向同源物   735
  pMON101059   Dv214_F53G12_10；推定的rpl-7，核糖体的结构组分：F53G12_10直向同源物   736
  pMON98442   Dv216_C52E4_4；推定的rpt-1，蛋白酶体的19S调节复合物的ATP酶亚基C52E4_4直向同源物   737
  pMON98441   Dv218_K01G5_4；推定的ran-1，小单体GTP酶：K01G5_4直向同源物   738
  pMON98440   Dv219_C15H11_7；推定的pas-1，内肽酶：C15H11_7直向同源物   739
  pMON101081   Dv223_R10E11.1；推定的cbp-1，转录辅因子CBP和p300的同源物：R10E11.1直向同源物   740
  pMON101050   Dv224_F11C3_3；推定的unc-54，ATP结合；运动神经活性：F11C3_3直向同源物   741
  pMON101051   Dv225_C37H5_8；推定的hsp-6，热激蛋白6：C37H5_8直向同源物   742
  pMON38888   Dv226_C47E12.5；推定的uba-1，泛素激活：C47E12.5直向同源物   743
  pMON38887   Dv227_F54A3.3；推定的蛋白伴侣复合物组分，TCP-1γ亚基：F54A3.3直向同源物   744
  pMON101110   Dv229_D1081.8；推定的Myb-样DNA结合：D1081.8直向同源物   745
  pMON101052   Dv230_F55A11_2；推定的syn-3，蛋白转运蛋白；突触融合蛋白：F55A11_2直向同源物   746
  pMON101107   Dv231_C30C11.1；推定的线粒体核糖体蛋白L32：C30C11.1直向同源物   747
  pMON101055   Dv232_B0250_1；推定的rpl-2，核糖体的结构组分：B0250_1直向同源物   748
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON98446   Dv233_F54C9_5；推定的rpl-5，5SrRNA结合，核糖体的结构组分：F54C9_5直向同源物   749
  pMON101138   Dv235_C04F12.4；推定的rpl-14，大核糖体亚基L14蛋白：C04F12.4直向同源物   750
  pMON98449   Dv236_C01G8_5；推定的erm-1，埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)细胞骨架连接体家族：C01G8_5直向同源物   751
  pMON98439   Dv237_F57B9_10；推定的rpn-6，蛋白酶体调节颗粒，非-ATP酶-样：F57B9_10直向同源物   752
  pMON98436   Dv240_F53A3_3；推定的rps-22，核糖体的结构组分：F53A3_3直向同源物   753
  pMON101078   Dv241_F32H2.5；推定的醇脱氢酶，锌依赖性的：F32H2.5直向同源物   754
  pMON101058   Dv242_B0336_2；推定的arf-1，小单体GTP酶：B0336_2直向同源物   755
  pMON101057   Dv244_C14B9_7；推定的rpl-21，核糖体的结构组分：C14B9_7直向同源物   756
  pMON98444   Dv245_C26F1_4；推定的rps-30，核糖体蛋白，小亚基：C26F1_4直向同源物   757
  pMON98434   Dv247_C13B9_3；推定的外被体(COPI)复合物的δ亚基：C13B9_3直向同源物   758
  pMON101053   Dv248_F38E11_5；推定的液泡外被复合物COPI，β′亚基：F38E11_5直向同源物   759
  pMON98445   Dv249_F37C12_9；推定的rps-14，核糖体的结构组分：F37C12_9直向同源物   760
  pMON101056   Dv250_CD4_6；推定的pas-6，内肽酶：CD4_6直向同源物   761
  pMON101104   Dv251_D1007.12；推定的rpl-24.1，核糖体的结构组分：D1007.12直向同源物   762
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON101088   Dv252_C49H3.11；推定的rps-2，核糖体的结构组分：C49H3.11直向同源物   763
  pMON101079   Dv253_C26D10.2；推定的hel-1，ATP-依赖性RNA解旋酶：C26D10.2直向同源物   764
  pMON101085   Dv254_B0336.10；推定的rpl-23，核糖体的结构组分：B0336.10直向同源物   765
  pMON38879   Dv255_C36A4.2；推定的细胞色素P450家族成员：C36A4.2直向同源物   766
  pMON101087   Dv256_K05C4.1；推定的pbs-5，蛋白酶体β亚基：K05C4.1直向同源物   767
  pMON101082   Dv257_F29G9.5；推定的rpt-2，26S蛋白酶体调节复合物：F29G9.5直向同源物   768
  pMON101084   Dv258_F40F8.10；推定的rps-9，核糖体的结构组分：F40F8.10直向同源物   769
  pMON101083   Dv259_K07D4.3；推定的rpn-11，26S蛋白酶体调节复合物，亚基RPNI1：K07D4.3直向同源物   770
  pMON101080   Dv260_F49C12.8；推定的rpn-7，蛋白酶体调节颗粒，非-ATP酶-样：F49C12.8直向同源物   771
  pMON101115   Dv261_D1054.2；推定的pas-2，内肽酶：D1054.2直向同源物   772
  pMON101141   Dv263_F55A3.3；推定的金属外肽酶：F55A3.3直向同源物   773
  pMON101126   Dv264_F56F3.5；推定的rps-1，核糖体的结构组分：F56F3.5直向同源物   774
  pMON101133   Dv266_C09D4.5；推定的rpl-19，核糖体的结构组分：C09D4.5直向同源物   775
  pMON38881   Dv268_R06A4.9；推定的聚腺苷酸化因子I复合物，亚基PFS2：R06A4.9直向同源物   776
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON101135   Dv271_F37C12.4；推定的rpl-36，核糖体的结构组分：F37C12.4直向同源物   777
  pMON101132   Dv273_F54E7.2；推定的rps-12，核糖体的结构组分：F54E7.2直向同源物   778
  pMON101139   Dv274_C23G10.4；推定的rpn-2，蛋白酶体调节颗粒，非-ATP酶-like：C23G10.4直向同源物   779
  pMON101130   Dv275_C03D6.8；推定的rpl-24.2，核糖体的结构组分：C03D6.8直向同源物   780
  pMON101119   Dv276_C26E6.4；推定的定向于DNA的RNA聚合酶：C26E6.4直向同源物   781
  pMON101134   Dv277_R13A5.8；推定的rpl-9，核糖体的结构组分：R13A5.8直向同源物   782
  pMON101127   Dv279_F42C5.8；推定的rps-8，核糖体的结构组分：F42C5.8直向同源物   783
  pMON101122   Dv280_F13B10.2；推定的rpl-3，大核糖体亚基L3：F13B10.2直向同源物   784
  pMON101116   Dv281_T05C12.7；推定的cct-1，蛋白伴侣复合物组分，TCP-1alpha亚基：T05C12.7直向同源物   785
  pMON101125   Dv282_F07D10.1；推定的rpl-11.2，核糖体的结构组分：F07D10.1直向同源物   786
  pMON38883   Dv283_T05H4.6；推定的肽链释放因子1(eRF1)：Dv283_T05H4.6直向同源物   787
  pMON101124   Dv284_C47E8.5；推定的daf-21，热激90蛋白，蛋白伴侣活性：C47E8.5直向同源物   788
  pMON101120   Dv285_M03F4.2；推定的act-4，肌动蛋白：M03F4.2直向同源物   789
  pMON101137   Dv286_F25H5.4；推定的eft-2，翻译延伸因子：F25H5.4直向同源物   790
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON101140   Dv287_F26D10.3；推定的hsp-1，热激蛋白：F26D10.3直向同源物   791
  pMON101117   Dv288_F28D1.7；推定的rps-23，核糖体的结构组分：F28D1.7直向同源物   792
  pMON38886   Dv290_CG11979；推定的H-输出ATP酶：CG11979直向同源物   793
  pMON38885   Dv291_CG13628；推定的H-输出ATP酶：CG13628直向同源物   794
  pMON101103   Dv293_CG31237；推定的定向于DNA的RNA聚合酶II：CG31237直向同源物   795
  pMON101096   Dv294_CG8669；推定的cryptocephal；转录因子，参与蜕皮周期，蛹化和变态：CG8669直向同源物   796
  pMON101095   Dv295_CG8048；推定的液泡H+ATP酶44kD C亚基：CG8048直向同源物   797
  pMON101100   Dv298_CG9032；推定的H-输出ATP酶：CG9032直向同源物   798
  pMON101111   Dv299_CG17369；推定的H-输出ATP酶：CG17369直向同源物   799
  pMON101129   Dv303_CG4152；推定的ATP-依赖性RNA解旋酶：CG4152直向同源物   800
  pMON101136   Dv305_CG4916；推定的ATP-依赖性RNA解旋酶：CG4919直向同源物   801
  pMON101131   Dv315_CG9160；推定的NADH脱氢酶：CG9160直向同源物   802
  pMON101123   Dv316_CG8764；推定的泛醇-细胞色素-c还原酶：CG8764直向同源物   803
  pMON98364   C4_Dv49_CG8055串联体；推定的结合，载体活性：CG8055直向同源物   804
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON98365   C5_Dv49_CG8055串联体；推定的结合，载体活性：CG8055直向同源物   805
  pMON98368   高度有效的WCR靶的C6串联体，约50％GC标准，由按照5′-3′为Dv26，Dv49，Dv23，Dv20，Dv13，Dv22，Dv18的顺序的片段组成   806
  pMON98369   昆虫特异性靶的C7串联体，约50％GC标准，由按照5′-3′为Dv6，Dv1，Dv88，Dv93，Dv4，Dv113，Dv127，Dv99的顺序的片段组成   807
  pMON98372   C8串联体；推定的钠/钾交换ATP酶：CG9261直向同源物   808
  pMON98373   C9串联体；推定的钠/钾交换ATP酶：CG9261直向同源物   809
  pMON98366   具有推定的相同/不同作用模式的基因的C10串联体，约50％GC标准   810
  pMON98367   高度有效的WCR靶的C12串联体，约50％GC标准，由按照5′-3′为Dv23-Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20的顺序的片段组成   811
  pMON98371   在不同生物中有活性的基因靶的C14串联体，约50％GC标准   812
  pMON98503   包含来自Diabrotica virgifera的DV49推定ESCRT-III(转运III所需的内体分选复合物)复合物亚基   820
  pMON98504   包含推定的Vha68-2：CG3762直向同源物；250bp串联体C1；   821
  pMON102862   Dv319_CG14750；推定的ESCRTII，Vps25：CG14750直向同源物   835
  pMON102863   Dv320_CG9712；推定的ESCRTI，Vps23：CG9712直向同源物   836
  pMON102861   Dv321_CG12770；推定的ESCRTI，Vps28：CG12770直向同源物   837
载体 表达为dsRNA的序列   SEQ IDNO
  pMON102865   Dv322_CG14542；推定的ESCRT III，Vps2：CG14542直向同源物   838
  pMON102866   Dv323_CG4071；推定的ESCRT III，Vsp20：CG4071直向同源物   839
  pMON102871   Dv326_CG3564；推定的蛋白载体，COPI液泡被膜的组分：CG3564直向同源物   840
  pMON102873   Dv327_CG6223；推定的外被体，COPI液泡被膜的组分：CG6223直向同源物   841
  pMON102877   Dv328_CG6948；推定的网格蛋白轻链，包被的凹陷的外被：CG6948直向同源物   842
  pMON102872   Dv330_CG9543；推定的COPI液泡被膜：CG9543直向同源物   843
  pMON102879   Dv331_CG5183；推定的KDEL序列结合：CG5183直向同源物   844
  pMON102867   Dv335_F11C1.6；推定的nhr-25，DNA结合：F11C1.6直向同源物   845
  pMON102870   Dv337_CG18734；推定的氟林蛋白酶2，丝氨酸型内肽酶：CG18734直向同源物   846
  pMON102875   Dv329_CG7961；推定的外被体，COPI液泡被膜的组分：CG7961直向同源物   874
如下进行效力测试，其中利用玉米植物的后代，所述玉米植物是用选定的昆虫控制构建体转化的：
1.种植后7天：25℃，60％RH下在完全黑暗的条件下针对每个事件温育10,000个WCR卵(每个事件10个植株)，温育7天。
2.侵袭后14天：将植株从4”泥罐移植到8”罐中；可以取v4根尖样品进行基因表达研究。
3.种植后14天：将WCR卵从土壤中洗出。将卵和土壤置于60目的筛子中，并且将一个30目的筛子放置在60目的筛子上面，以保护卵防止水流。采用喷嘴用温水彻底冲洗，直到除去土壤。
4.将卵悬浮于2％(w/v)Difco琼脂溶液中，每1ml卵25mL溶液。采用例如Eppendorf连发型微量移液器，以约3或4等分，将卵侵袭到土壤中，每个植株约1000个卵。在侵袭前用压舌板在土壤中挖洞，侵袭后盖上。
5.种植后28天，可以取出v8根尖样品进行基因表达研究。
6.种植后35天，评估该测定。用修枝剪切断植株，留下约6”茎。在含有事件信息的植株桩上打洞，打结(zip tied)到茎。从根系除去尽可能多的土壤。用喷水管洗去其余的土壤。
7.检查根，用WCR幼虫损害的Olsen(0-3)NIS标准对根损害分级。
图1和图2说明用WCR侵袭F1玉米植物(来源于用pMON98503或pMON98504转化的植物)后获得的昆虫控制结果。在基本按上文所述进行的生长室效力测试中，在用pMON98503或pMON98504转化得到的事件的后代中观察到了等于或低于经济损害阈值的NIS评分。
对实施例3和7描述的展示显著抗西部玉米根虫活性的选定基因组装全长EST DNA序列。这些EST序列列于表7：
表7：针对WCR靶组装的EST序列
  组装的序列   SEQ ID NO
  Dv9全长(aka Apple)；推定的CG2331直向同源物   813
  Dv10全长(Rp19)；推定的CG6141直向同源物   814
  Dv11全长(Rpl19)；推定的CG2746直向同源物   815
  Dv13全长(Rps4)；推定的CG11276直向同源物   816
  Dv35全长v-ATP酶A；CG3762直向同源物   817
  CG8055的Dv49全长直向同源物   818
  CG6699的Dv248全长推定直向同源物   819
实施例8
Dv49和Dv248序列的制备和效力结果
基于包括预测的功能、其它生物中相应编码区的敲除突变体的表型、片段长度、GC含量、与已知序列的相似性和预测的二级结构(例如Elbashir等人，2001b)的标准，选择组装的EST以及Dv49(SEQ IDNO：818)和Dv248(SEQ ID NO：819)的相邻序列的部分进行进一步生物活性测定。基于单独抗WCR的预测活性，体外合成各个Dv49和Dv248序列，并且按照图3-4和表8所示分组，并且施用于WCR幼虫。
表8：针对抗WCR效力组装的Dv49和Dv248片段
  片段   SEQ ID NO
  F1   822
  F2   823
  F3   824
  F4   825
  F5   826
  F6   827
  F7   828
  F8   829
  F9   830
  F10   831
  F11   832
  F12   833
  F13   834
片段F1-F3相应于全长Dv49转录物的部分。片段F4-F6相应于Dv248转录物的部分或侧翼区。片段F7-F13是片段F1-F6中的两个或更多个片段的串联体，如图4所示。片段F13(SEQ ID NO：834)代表C38(Dv49-Dv248)串联体。
F1-F13的剂量反应数据如图5-7所示。如图5所示，当以0.1ppm喂饲给WCR幼虫时，片段F4-F6，包括来源于Dv248的序列(图4)的活性(幼虫死亡％)，显著高于对照。当以0.02ppm喂饲时，片段F6也展示显著活性。在最低剂量下的片段F5的活性可能是伪迹，因为存活的幼虫没有展示发育迟缓。
如图6所示，当以0.1ppm喂饲WCR幼虫时，F7-F10的每个片段都展示了统计学显著的活性。当以0.02ppm喂饲WCR幼虫时，片段F9和F10也展示了统计学显著的活性，当以0.01ppm喂饲WCR幼虫时，片段F10也展示统计学显著的活性。0.01ppm时的F8活性可能是伪迹。
如图7所示，当以0.02ppm或更高浓度喂饲WCR幼虫时，片段F11-F13展示统计学显著的活性。此外，最大的片段(F12和F13)在0.005ppm和更高的浓度显示活性。
实施例9
来源于串联体C6的其它活性串联体序列
如表9所示，在食物覆盖生物测定中(按照例如实施例2进行)鉴定了来源于pMON98368的活性串联体C6(SEQ ID NO：806)的部分能够抑制玉米根虫(WCR)生长和/或存活。C6全长串联体含有7个靶亚片段，每个长度是70bp，如表6和表9所示。
表9全长C6串联体和选定的亚部分(SEQ ID NOs：806，847-873)在根虫食物生物测定中的效力
串联体 序列   1ppm时的死亡％   SEQ IDNO
C6全长   Dv26-Dv49-Dv23-Dv20-Dv13-Dv22-Dv18 100 806
  C6.1   Dv26-Dv49   35.3   847
  C6.2   Dv26-Dv49-Dv23   57.1   848
  C6.3   Dv26-Dv49-Dv23-Dv20   84.7   849
  C6.4   Dv26-Dv49-Dv23-Dv20-Dv13   51   850
  C6.5   Dv26-Dv49-Dv23-Dv20-Dv13-Dv22   41.3   851
  C6.6   Dv49-Dv23   94.6   852
  C6.7   Dv49-Dv23-Dv20   75.6   853
  C6.8   Dv49-Dv23-Dv20-Dv13   50   854
  C6.9   Dv49-Dv23-Dv20-Dv13-Dv22   56.4   855
  C6.10   Dv49-Dv23-Dv20-Dv13-Dv22-Dv18   52.5   856
  C6.11   Dv23-Dv20   74.6   857
  C6.12   Dv23-Dv20-Dv13   63.4   858
  C6.13   Dv23-Dv20-Dv13-Dv22   58.5   859
  C6.14   Dv23-Dv20-Dv13-Dv22-Dv18   60.8   860
  C6.15   Dv20-Dv13   57.5   861
串联体 序列   1ppm时的死亡％   SEQ IDNO
  C6.16   Dv20-Dv13-Dv22   20   862
  C6.17   Dv20-Dv13-Dv22-Dv18   44.8   863
  C6.18   Dv13-Dv22   71.1   864
  C6.19   Dv13-Dv22-Dv18   52.5   865
  C6.20   Dv22-Dv18   44.6   866
  C6.28   Dv26   58.9   867
  C6.29   Dv49   72.3   868
  C6.30   Dv23   71.9   869
  C6.31   Dv20   62.6   870
  C6.32   Dv13   54.2   871
  C6.33   Dv22   56.7   872
  C6.34   Dv18   44.6   873
全长串联体C7含有8个靶亚片段，每个亚片段长度是70bp，如表6所示。类似地，全长串联体C12含有从Dv23-Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20的7个靶亚片段，长度是53-80bp，如表6和表10所示。表10全长C12串联体和选定的亚片段(SEQ ID NOs：811，887-892)的组成
串联体 片段   以5’-3’方向包括的序列(SEQ ID NO)
C12_full length   Dv23-Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20 811
  C12.1   Dv23-Dv13   887
  C12.2   Dv23-Dv13-Dv26   888
  C12.3   Dv23-Dv13-Dv26-Dv18   889
  C12.4   Dv23-Dv13-Dv26-Dv18-Dv49   890
串联体 片段   以5’-3’方向包括的序列(SEQ ID NO)
  C12.5   Dv23-Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22   891
  C12.6   Dv13-Dv26   892
  C12.7   Dv13-Dv26-Dv18   893
  C12.8   Dv13-Dv26-Dv18-Dv49   894
  C12.9   Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22   895
  C12.10   Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20   896
  C12.11   Dv26-Dv18   897
  C12.12   Dv26-Dv18-Dv49   898
  C12.13   Dv26-Dv18-Dv49-Dv22   899
  C12.14   Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20   900
  C12.15   Dv18-Dv49   901
  C12.16   Dv18-Dv49-Dv22   902
  C12.17   Dv18-Dv49-Dv22-Dv20   903
  C12.18   Dv49-Dv22   904
  C12.19   Dv49-Dv22-Dv20   905
  C12.20   Dv22-Dv20   906
表11列出了用于靶定其它鞘翅目害虫，包括叶甲物种和其它瓢虫科和叶甲科害虫的其它序列。
表11：其它鞘翅目靶序列
  序列和来源   SEQ ID NO
  Dbar248_CG6699(D.barberi)   875
  Dbal248_CG6699(D.balteata)   876
  Du248_CG6699(D.undecimpunctata howardi)   877
  Dz248_CG6699(D.virgifera zea)   878
  Dv248_CG6699(D.virgifera virgifera)   879
  Ev248_CG6699(Epilachna varivestis)   880
  Ld248_CG6699(Leptinotarsa decemlineata)   881
  Dbal49_CG8055_2(D.balteata)   882
  Db49_CG8055_2(D.barberi)   883
  Du49_CG8055_2(D.undecimpunctata howardi)   884
  Dz49_CG8055_2(D.virgifera zea)   885
  Dv49_CG8055_2(D.virgifera virgifera)   886
***
根据本公开内容，可以制备和实施本文公开和要求保护的所有组合物和方法，而不需要过度实验。尽管已经根据上述示例性实施方案描述了本发明的组合物和方法，本领域技术人员可以明确，在不背离本发明的真实概念、精神和范围的前提下，可以对本文描述的组合物、方法和步骤或方法的步骤的顺序进行变化、改变、修饰和变更。更具体地，可以明确，某些化学和生理相关的试剂可以取代本文描述的试剂，而能够获得相同或相似的结果。本领域技术人员可以明确的所有这些相似的取代和修饰都认为包含在所附权利要求所限定的本发明的精神、范围和概念内。
参考文献
以下文献，只要它们提供了补充本文所述内容的示例性程序或其它细节，就特别通过引用结合到本文中。
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序列表
<110>BAUM，JAMES A.
CAJACOB，CLAIRE A.
FELDMANN，PESCALE
HECK，GREGORY R.
NOOREN，IRENE
PLAETINCK，GEERT
MADDELEIN，WENDY
VAUGHN，TY T.
<120>用于在植物中遗传控制昆虫侵袭的方法和组合物
<130>MNDE：002US
<140>未知
<141>2006-09-15
<150>60/718,034
<151>2005-09-16
<160>906
<170>PatentIn Ver.2.1
<210>1
<211>888
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(775)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>1
cccacgcgtc cggcggctga taaaagccta atgattggag ctgatgtagc agttgcttac  60
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aaccaaatga atacggcagc gagggaaaat ggtattagca taataactta cagaagatcc 240
ttaatttcac ctgatcctgg agataaagag tttccagcag agggttccat atacgccgta 300
tggggggtag gaaaactaga cgaaatgaaa gaacctgctt ttcatgatct ctactcaaag 360
actgatataa aaatggagat gacaccgaaa gaacctcaga ataactgtgt ctcttttacg 420
agatcgaaac ctgaacccaa agaaccttgg aagaaaggtc aaatattcga taaaactata 480
aggatattta agtcttatat tggtccatca ggggccaaaa ggggatacca agccattacc 540
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<210>2
<211>381
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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aactactcgt ccgcatgggg tacccgcgag gtcactgtcg cagccaaagc gcacgatgca  60
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>3
tggcgtttta caatgtcaca agtaactgca gattttgaac aatatttgga gagatactta  60
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<210>4
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(745)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>4
gagagagaca acagataaca gttgtgtagt aaactgttca agtgtaaaca gtaaaccatc  60
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ttgccttact tattcaaggc agttgataaa gacagatccg gagaaatctc cgtggaagaa 720
tttaaattat ttttcaatgt attgngcctc aaagaacaag acgccatctt agctttccgg 780
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<210>5
<211>1384
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>5
ctattgtttc gtaaacttct ttcagttctt tagtaaattt gacagtatct acctcaatag   60
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cttc                                                              1384
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<211>735
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>6
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<210>7
<211>888
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>7
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<210>8
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>8
ccgaaaatgc cgagtcaaga attaacaac                                    29
<210>9
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>9
gcatcctgat ttatatcggg caaaag                                       26
<210>10
<211>746
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>10
ccgaaaatgc cgagtcaaga attaacaact aataaagtaa tagtccaccc tttggttctt  60
ctaagtgtgg tggaccattt taatcgcatg ggcaaaatcg gcaatcaaaa gcgtgttgtt 120
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cacaccggcc ccaaacttca tcaaaatgat attgccatta atgagttaat cagaaggtat 360
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<210>12
<211>26
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<213>Diabrotica virgifera
<400>12
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<210>13
<211>26
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gttcagaaag ttgctgggcg tagtcg                                      26
<210>14
<211>743
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<213>Diabrotica virgifera
<400>14
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<210>15
<211>2325
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(107)..(185)
<223>n＝a，c，g或t/u
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gtccatttct gttagaattt gattaataac tctgtcggct gcaccaccgg catcacctac  420
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cgcagatcga gccttgtcga agatatctct gacatttgct tctgattcac caaaccacat  540
agtaagcaac tctggtcctt taactgagat aaagttggct tggcattcat tcgcaatagc  600
cttagctaat aacgttttac cgcaaccagg cggcccatag aacaacactc ctctggacgg  660
ttgcataccg aacttaagga acttatctgg atgttcgact gggtattgca ccaattcttg  720
caattctttc ttgacattag ccaagccacc gatatcgtcc caagtgacgt ttggtacttc  780
tactatggtc tcacgtaaag cacttgggct gctcttcgtc atggcgtaac ggaagttctc  840
catggtaact gccagtgagt ttaggacttc tgcgtcaatt tggtcgtctt cgaggtcgat  900
gaggtccatt ttttctctga tttgttgaag ggctgcttcc gaacacaatg aagctaaatc  960
agcacctacg tgaccatgag tttccgcagc gatctgttcc aagtcgacat catcggccaa 1020
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gatatcgatt tccctgtcga atcttccgaa tctacgtaaa gctggatcga ttgagtttgg 1140
tctgttagta gcggccataa cgataacgtg ggaactcttc ttcataccgt ccatcaaagt 1200
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aatcaagaag aagaacgctc cagtttcgtt agctacggca cgtgcaatga gtgtcttacc 1440
agtacccggt ggaccgtaaa gtaagatacc tcttggtggt ttaactccaa tagccttgaa 1500
aagactagga tgtctcagtg gtaactccac catttctttg atttgagcga gctgttttct 1560
acaacctccg atgtcgtcgt atccaactgc gttaagagct tcttcctcct cttcgcgctt 1620
gattggatct ccatcacaat gaatgacggt atctggagcc actatacagt acggagcggg 1680
atcggtctcg acgactttga attcaacagc tctcattcct ccacgtacaa cgaatacgtc 1740
atctttgtgt attggtcgat aggcctccag gaagtagggt ttcaggtata cttcgaagag 1800
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ttttacatca gggcaagctt ggatagaaac tacatctgaa agcctaactc ttaaattatt 1920
tctaacattt ctattcatac gaattttttc atcgctacat gtatcatcag ataatactat 1980
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<213>Diabrotica virgifera
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tcgtcatcgt ccaaatccat agcaac                                     26
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<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>17
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<210>18
<211>978
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>18
tcgtcatcgt ccaaatccat agcaacattg ggattcaaag ccctctctct ttctctccta  60
atttcggttt cgatgctctg cctgatggcc agtttgcaag ctctctggca gatttcagtc 120
aaatcggcac cagaaaatcc atgagttact ttagcaatgt atacaagatc tacgtcttta 180
gctacaggcg atttcctcaa gttggctttg aagatggctt ccctagattt ctcgtcgggt 240
agagggatgt agatcaactg atcgagacga cctggacgca atattgcagg atcgatgata 300
tctggtctgt ttgtagcacc gataataaac acgttctttt tggctcccat accgtccatt 360
tctgttagaa tttgattaat aactctgtcg gctgcaccac cggcatcacc tacatttcca 420
ccacgcgatt tggcaattga atctaattcg tcaaagaata gaacacaagg tgccgcagat 480
cgagtcttgt cgaagatatc tctgacattt gcttctgatt caccaaacca catagtaagc 540
aactctggtc ctttaactga gataaagttg gcttggcatt cattcgcaat agccttagct 600
aataacgttt taccgcaacc aggcggccca tagaacaaca ctcctctgga cggttgcata 660
ccgaacttaa ggaacttatc tggatgttcg actgggtatt gcaccaattc ttgcaattct 720
ttcttgacat tagccaagcc accgatatcg tcccaagtga catttggtac ttctactatg 780
gtctcacgta aagcacttgg gctgctcttc gtcatggcgt aacggaagtt ctccatggta 840
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attttttctc tgatttgttg aagggctgct tccgaacaca gtgaagctaa atcagcacct 960
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<213>Diabrotica virgifera
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cccacgcgtc cgcccacgcg tccgcggact aaaatgaagc aaattgtaac aaaccaaacg  60
gtaaaaattc ctgagggaat tacagtaacc actaagtcaa gggtagtaac tgtaaaagga 120
ccccgaggta atctgaagag atccttcaaa catcttaccc tggacattcg aatgatcaac 180
cccaggttac tgaaagtaga gaaatggttc ggtaccaaga aggaattagc tgctgtcaga 240
acagtatgct ctcatgttga aaacatgtta aagggtgtta caaaaggata ccaatacaag 300
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atcgaaatta gaaatttctt gggagaaaaa tacatcagaa gagtaaagat ggccccaggt 420
gttacagtag taaactccac caaacaaaag gatgaactta tcattgaagg aaactcattg 480
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taacttgtat ttttgaaata aatttaagtt tatattt                          637
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ggaattacag taaccactaa gtcaagggta gtaactgtaa aaggaccccg aggtaatctg  60
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aaattctttt acggaagaca cgttgagagg tgcatttgca ggatgagttc cttaaaactt  60
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ctagcagcct ctgttatgcg atgtggtaaa aagaaagtat ggttggaccc taatgaaatc  60
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<213>Diabrotica virgifera
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tatgataatg ttgtatgata taaggcacca ataaacataa aagttatatt gtt        3173
<210>36
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>36
ggtttggatg ctgaattata ccgtctaggt c                31
<210>37
<211>25
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>37
ggtgatcctt ggtggctttg tcttg                      25
<210>38
<211>672
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>38
ggtttggatg ctgaattata cgtctaggtc acactaaggt cttcttccgt gctggtgtct  60
tgggtcagat ggaagaactt cgtgacgacc gtcttggcaa gatcgtcacc tggatgcaat 120
cttgggtccg tggttatctc tcaagaaagg aattcaagaa actgcaagaa caacgtttgg 180
ccctccaagt gtgccaacgc aacttgcgca aatacctcaa attgcgcaca tggccatggt 240
acaaattgtg gcagaaggtc agacctctcc tcaacgtcac ccgtatcgag gatgagattg 300
ccaaacttga agagaaagcc caaaaagccc aagaagcctt cgagcgtgaa gaaaaggcca 360
agaaggaatt agaagctctc tatgccaagc tcttagctga gaagaccgag ttgttatcta 420
acttggaagg agaaaaggga tccctttccg aaactcaaga aagggccaac aaactccaag 480
cccaaaagaa cgacctcgag tctcaacttt ctgaaaccca agatcgtttg agccaagagg 540
aagatgctcg caaccagttg atgcaacaaa agaagaaact cgaacaagaa atgtccggtt 600
tcaagaaaga catcgaagat ttggaactca acctccaaaa gtctgaacaa gacaaagcca 660
ccaaggatca cc                                                     672
<210>39
<211>1222
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>39
tgagctgttg aactcagtga ctagaatcaa aaagtagttg gagcaagcgt tctatcgcac   60
cctttcaacc gaacggcttg gtcgagtact tttctgtacc tacgaaccca gaagaaaatt  120
cagtttgtgt gaaaagttca ataagttaca agcattatag tttaaagcgt taggttgatt  180
aataatattt aagtatattt ttcttcctta tctatacaca cacgacatta agattaaagt  240
ataaagaaca actatatcgt atctttttct ttttgttttt tataaaatat ttagtaacag  300
gaaagcacaa aacatgcata tgagctcttt agatttatac agtgaaatgg acttaaagct  360
ataaactgcg ctaccaactc gaccacctga tttgctatgt ggtgatttta aaagccgtga  420
agtcgataca taggagtaaa tatagagaag ccgcctctac aaacaaaaca ccgcctccca  480
aacggacaga cgtctcacag actcctgtcg atttggacgg cgatgtttca gcgacaggaa  540
acaaaaatgt cttgctgttc taagattttt ttgtaaatcg cgtatttcta aaagaccagg  600
tgtcgagttg aagtagggtg gtggtgacgc ctagacgtca acgaccattt tcttgtggat  660
atcggtgttg ccgaccacgt tgcaaaattc ctcgaaggaa attttgccgt cttcatcttt  720
gtcggcgaac aggatggtct tgtcgacgat ctgctggagc tgagtgtcct tcagattgtt  780
tccgaccatc attttgagaa cctgaaatag ttctccatta gagatgtatc cgtcattatc  840
catatcgtag atccggaaag caaatctaag cttggagagc ttgtcaccct ttacgctgaa  900
ttgagacaca ccctgaatga attctttgaa atcgacttct ccgttaccat cggcatcgaa  960
gatgtcaatc acacgttgaa cgagcggatt ctgctgcagc tccggcagag acatgaactc 1020
gtcgatgctg agggcccccg agttgtccag atctaatttt ctgaatcttt taccgagacg 1080
tcgaatttcg tcggcgtcaa agttagagca tagctccatg ggcagagagc tctcgttacc 1140
catggtctgc tccaagtact ctaacttcta attgatttat gattcttttt aatgatcgac 1200
aaactgagga taaataattt ac                                          1222
<210>40
<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>40
cgtctcacag actcctgtcg atttgg                   26
<210>41
<211>34
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>41
caattagaag ttagagtact tggagcagac catg          34
<210>42
<211>684
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>42
cgtctcacag actcctgtcg atttggacgg cgatgtttca gcgacaggaa acaaaaatgt  60
cttgctgttc taagattttt ttgtaaatcg cgtatttcta aaagaccagg tgtcgagttg 120
aagtagggtg gtggtgacgc ctagacgtca acgaccattt tcttgtggat atcggtgttg 180
ccgaccacgt tgcaaaattc ctcgaaggaa attttgccgt cttcatcttt gtcggcgaac 240
aggatggtct tgtcgacgat ctgctggagc tgagtgtcct tcagattgtt tccgaccatc 300
attttgagaa cctgaaatag ttctccatta gagatgtatc cgtcattatc catatcgtag 360
atccggaaag caaatctaag cttggagagc ttgtcaccct ttacgctgaa ttgagacaca 420
ccctgaatga attctttgaa atcgacttct ccgttaccat cggcatcgaa gatgtcaatc 480
acacgttgaa cgagcggatt ctgctgcagc tccggcagag acatgaactc gtcgatgctg 540
agggcccccg agttgtccag atctaatttt ctgaatcttt taccgagacg tcgaatttcg 600
tcggcgtcaa agttagagca tagctccatg ggcagagagc tctcgttacc catggtctgc 660
tccaagtact ctaacttcta attg                                        684
<210>43
<211>864
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(842)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>43
gtagcaagga ctattgccag atcattttgt ccagagctgt atggatcttc agctcttgaa  60
acaacagaag tagataactg gttaacgctt tcccttggtc cacttaataa tagaagcgaa 120
gttaccggtg tcttagaaac cctaaataaa gttttaggtt cagttactta cttggttgct 180
aaaagaatta ctgttgctga tttcattgtt tttggtagct tatatacaaa caaacactgg 240
aatgatttaa ccaaatctaa atcggcacca gttaatgttg ttcgttggta cgactttcta 300
catgcacaag aagctgttat gaacatttta aataacctac cccaagatgt agcagcttcg 360
ttgacacaag cagaaaaaca agttagtcaa gagaaaaata ctaatattgg taatcgaaat 420
caagagggaa aatttgtcga tttgcctttt gcacagatgg gtaaagttat tgtcaggttt 480
ccaccagaag catcaggtta tttgcacatc ggccacgcca aagctgccct tctcaaccaa 540
cactatcagg aagctttcca ggggaaactt attttacgtt tcgatgatac taatcctgcc 600
aaagaaaatg tgcattttga aaacgttatt ctggaagatg tagcaatgtt acagattaaa 660
cccgacatat tcacatatac ctcagattac tttgaactta tgttagagtt atgtgaaaaa 720
atgatgaaag aaggaaatgc ctatgtagat gatactgaac cagaggaaat gaaaactcaa 780
agagaacaaa aaatcgagtc agtcaacagg aataatgatg ttcagaagaa tttgctatgt 840
gngaagaatg aaaaaggtac cgag                                        864
<210>44
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>44
caaggactat tgccagatca ttttgtcc                       28
<210>45
<211>33
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>45
gattttttgt tctctttgag ttttcatttc ctc                 33
<210>46
<211>790
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>46
caaggactat tgccagatct tttgtccaga gctgtatgga tcttcagctc ttgaaacaac  60
agaagtagat aactggttaa cgctttccct tggtctactt aataatagaa gcgaagttac 120
cggtgtctta gaaaccctaa ataaagtttt aggttcagtt acttacttgg ttgctaaaag 180
aattactgtt gctgatttcg ttgtttttgg tagcttatat acaaacaaac actggaatga 240
tttaaccaaa tctaaatcgg caccagttaa tgttgttcgt tggtacgact ttctacatgc 300
acaagaagct gttatgaaca ttttaaataa cctaccccaa gatgtagcag cttcgttgac 360
acaagcagaa aaacaagtta gtcaagagaa aaatactaat attggtaatc gaaatcaaga 420
gggaaaattt gtcgatttgc cttttgcaca ggtgggtaaa gttattgtca ggtttccacc 480
agaagcatca ggttatttgc acatcggcca cgccaaagct gcccttctca accaacacta 540
tcaggaagct ttccagggga aacttatttt acgtttcgat gatactaatc ctgccaaaga 600
aaatgtgcat tttgaaaacg ttattctgga agatgtagca atgttacaga ttaaacccga 660
catattcaca tatacctcag attactttga acttatgtta gagttatgtg aaaaaatgat 720
gaaagaagga aatgcctatg tagatgatac tgaaccagag gaaatgaaaa ctcaaagaga 780
acaaaaaatc                                                        790
<210>47
<211>1491
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>47
gtgagtagtg aaaaaatatg gccggagcaa tgttatttga aagagccccg tctgtttctt   60
ctcaacacga gaagctttta aaattatcca gggattcaga tgatgaagat caaaatattg  120
tcaataaaga acaagacatc cttaatcttg gtgagaaata taaaaaggag ggcaaggcaa  180
aggaactcgc agagcttata aaggccacca ggcctttttt tgagtttaat aagcaaagca  240
aaagctgcta aattggtaag gtctctagtt gactacttcc tagatttaga agctggtatt  300
ggtatcgaag tacaactctg caaagaatgt atagaatggg caaaggaaga gagaagaact  360
tttctacgtc agtcccttga agccaggctg attgctcttt attttgacac tggaatgtac  420
agcgaagcgc tacaactgga atcgacctta ctgaaagagt taaaaaagtt ggatgacaaa  480
aatttgttgg tggaagtaca actacttgaa agcaaaacat atcatgcttt aagtaattta  540
ccgaaggcta gagctgcact aacttcagca cgaaccacag ctaacgctat ctattgccct  600
ccaaagatgc aggcagcttt agatttacaa tccggagtat tacacgctgc agatgagaag  660
gatttcaaaa cagcttattc ttatttttat gaagcttttg aaggttttga tagtgttgaa  720
tccccaaaag ccctcacagc ccttaaatac atgcttttgt caaaaatcat gataaacagt  780
ccggaagacg tccaacaaat cgttagtggt aaattggcct ttaaatacgc tggtcaagat  840
atagaggcta tgaaatcagt tgcacaggct gcacacaaaa gatcactagc agatttccaa  900
caagctgtaa aacagtttaa acatgaatta gaagatgatg ttattgttag agcacattta  960
ggaacgttgt atgacaatat gttggagcag aacctttgca gaattattga accatattct 1020
agggtacaag tagagtatgt agcaaaaacc ataaaactcc cagtactaca agtagagaag 1080
aaattgtcac agatgatttt agatgccaag tttcatggaa ttttggacca aggcgaaggt 1140
gtcctcatag tattcgaaga aagtgcagta gacaaaacat atgaaatggc cctagaaacg 1200
atccagagta tgagcaaagt agtagatact ctttatcaaa aagcaaagaa attgtcatag 1260
gtataatgta gccgagaatg ttatgaaaat aataaaatga ctgtaaattt ttcagaacta 1320
gattttttgt agacactgtg tttatataac ctatttaatt tgcttttgtt aattcttgtc 1380
tttttaagga ttcttataac tcatagtttt cggagcttga gggttttgga tgtgatggag 1440
tttttttgtt aatacagtat agatattttt taagatactt aaagcttatc t          1491
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>48
gcaaagaatg tatagaatgg gcaaaggaag agag                 34
<210>49
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>49
ggttctgctc caacatattg tcatacaacg                      30
<210>50
<211>675
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>50
gcaaagaatg tatagaatgg gcaaaggaag agagaagaac ttttctacgt cagtcccttg  60
aagccaggct gattgctctt tattttgaca ctggaatgta cagcgaagcg ctacaactgg 120
aatcgacctt actgaaagag ttaaaaaagt tggatgacaa aaatttgttg gtggaagtac 180
aactacttga aagcaaaaca tatcatgctt taagtaattt accgaaggct agagctgcac 240
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cttattttta tgaagctttt gaaggttttg atagtgttga atccccaaaa gccctcacag 420
cccttaaata catgcttttg tcaaaaatca tgataaacag tccggaagac gtccaacaaa 480
tcgttagtgg taaattggcc tttaaatacg ctggtcaaga tatagaggct atgaaatcag 540
ttgcacaggc tgcacacaaa agatcactag cagatttcca acaagctgta aaacagttta 600
aacatgaatt agaagatgat gttattgtta gagcacattt aggaacgttg tatgacaata 660
tgttggagca gaacc                                                  675
<210>51
<211>942
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>51
gaagaacata cgtccagact ccagacaaac ctttcaacaa atttagaaaa catttatata  60
aaaatatcaa cagttctgct tcagaaatac ataaaatgta atttaactta agtcttgtaa 120
gatatcaatt gttacacacg cgctttggaa cgatgacaga gttttagtaa ttggttaatg 180
agtttataaa tcttcgtcat catcgggcag tgcagtttct gaggcttctt taagatcctt 240
ttcgatttgt tgctgccatt ggggatccat ctggacttct ggaggaagca aggcaggtgc 300
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ttcaaagttg tagttggatt ttgcagagat gtcatagtat tgtaaattct tcttcctatg 420
gaagacaatg ctctttgcct taactttcct atctttgatg tcaactttgt taccacacaa 480
tacaattggg atattttcac aaactctaac aagatctctg tgccagtttg gaacattttt 540
gtaagtgact ctagatgtaa catcaaacat aattatggca cattgtcctt ggatgtagta 600
tccatcacgc agaccaccaa acttttcttg gcctgctgtg tcccatacgt taaaacgaat 660
ttgtcctcta tttgtgtgga aaactaaagg gtgaacttct actcctaagg ttgctacata 720
tttcttttcg aattcaccag tcatgtgtct ttttacaaag gtagttttgc cagtacctcc 780
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aatttaaact tgtgaataaa aagtactagg aaacaccgat ggcacaaaaa atcacggatt 900
acttcagctt ggttccaaag tcgttagagt tcacaatggc gt                    942
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<213>Diabrotica virgifera
<400>52
cttcgtcatc atcgggcagt gc                            22
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<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>53
cgtcttggtc ggagatggag gtactg                        26
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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ttgtgtggaa aactaaaggg tgaacttcta ctcctaaggt tgctacatat ttcttttcga 540
attcaccagt catgtgtctt tttacaaagg tagttttgcc agtacctcca tctccgacca 600
agacg                                                             605
<210>55
<211>763
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>55
gtcatactca cggttgtttt tgtaaaactt gtaggtaacg aattttcgtt tttagtgaat  60
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<210>56
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<212>DNA
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<400>56
cgactaggag gtggaatgcc agg                        23
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<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>57
caaagcctgg actgatggtt tctgtag                    27
<210>58
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>58
cgactaggag gtggaatgcc aggtttaact caggcaccgc cgccttctga tgctcctgtt  60
gtggatactg ccgaacaagt atacatatcc tccttagcac tattaaaaat gttgaagcac 120
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ccagaaatgg ttgtggggtg gtatcattcc catccaggtt tcggatgttg gttgtctgga 360
gtggatatca acacccagca aagttttgag gctctctcgg aaagagctgt agcagtagta 420
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ccgaatatga tggtattggg ccaagaaccg cgccaaacta catccaactt aggacatcta 540
cagaaaccat cagtccaggc tttg                                        564
<210>59
<211>1156
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>59
cacaaattgg agacaagttc gcgtctaggc acggacaaaa gggaacgtgc ggtatacaat   60
accgtcaaga ggatatgatt tttagtgctg aaggtattac gccagacatt atcattaatc  120
ctcacgctat cccctcccgt atgacgattg gtcacttgat cgagtgcatc caaggtaagg  180
tatcatccaa taaaggagaa atcggtgatg ctacaccttt caacgatgcc gtcaacgtac  240
agaaaatctc cactttgtta caagaatatg gttatcaact cagaggcaac gaagtaatgt  300
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<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(750)..(835)
<223>n＝a， c，g或t/u
<400>83
cagatgtgtg gtatgcacat cgtcgtacac gctgatgagt tgcaagattt gattaattat  60
tatcaagata gaggatactt tgaagaatta atcggcctat tggaagcagc attgggcttg 120
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gcacatcgtc gtacacgctg atgag                         25
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agaagacttc cagggtctga gaacgtccat cgacgccttc gataacttcg acaacatcgg 660
cttgtctcag aaattggaga agcacg                                      686
<210>87
<211>999
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(753)..(827)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>87
aaaaacgaag aaagtacgtt aatatggttc cagggctcca acaagacgag ctattcttac  60
tgggtcgaga acattttaaa atttttggat aagtactacg ttcccagcaa aatagctaaa 120
ggaaatggcc aaattaaaac atgctctcat cacgactatc ctactagtgg agaagtatgc 180
gaagtcgatg tcagagattg ggaagaatgc aacagggatc aattctttaa ttatcacaag 240
aattctccat gtatttttat taaattgaac aaaatatata actgggagcc aatgtattac 300
gatgatccat acgatttacc tgaggaaatg ccggataatc tgaagcaaca tataaggggt 360
atcaacaata ctagagagtt gagaaacgtt tgggtctcat gtcaaggaga aaatcctgct 420
gatgtagaat acttgggccc cattacatac tatccccgaa gcgtacaggg cttccctggt 480
tactattttc cgtacttgaa ctctgaaggt tacctaagtc ctttagtagc agttaaattt 540
gaaagaccag tggctggtat cgttattaac gtagagtgca gagcctgggc aaggaacata 600
ctttacaaca gagccgatag aacgggctct gtgcatttcg agctgctaat tgattaaata 660
ttattttacc caattggaca atagaagaat ccttcaggac tttttaattc aaatattata 720
tagtaataga aatgttgcct tanaatangg ggcttttata aaatagccga tcgatcacat 780
anagtaagct ataagaagta cattccaata tgaaccaccc ataccanata tttttataca 840
ttttataaat ttatataact tttttaatct tactgaaata tccttttggc atccattgtt 900
gcaatttttg tttctagatt aaaatatatt gggttccata ttatttttaa agggatgaat 960
aatttttgga aaagaaaaaa atttttgttt tggtggggg                        999
<210>88
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>88
gaagaaagta cgttaatatg gttccagggc tc                         32
<210>89
<211>24
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>89
gtatgttcct tgcccaggct ctgc                                  24
<210>90
<211>595
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>90
gaagaaagta cgttaatatg gttccagggc tccaacaaga cgagctattc ttactgggtc  60
gagaacattt taaaattttt ggataagtac tacgttccca gcaaaatagc taaaggaaat 120
ggccaaatta aaacatgctc tcatcacgac tatcctacta gtggagaagt atgcgaagtc 180
gatgtcagag attgggaaga atgcaacagg gatcaattct ttaattatca caagaattct 240
ccatgtattt ttattaaatt gaacaaaata tataactggg agccaatgta ttacgatgat 300
ccatacgatt tacctgagga aatgccggat aatctgaagc aacatataag gggtatcaac 360
aatactagag agttgagaaa cgtttgggtc tcatgtcaag gagaaaatcc tgctgatgta 420
gaatacttgg gccccattac atactatccc cgaagcgtac agggcttccc tggttactat 480
tttccgtact tgaactctga aggttaccta agtcctttag tagcagttaa atttgaaaga 540
ccagtggctg gtatcgttat taacgtagag tgcagagcct gggcaaggaa catac      595
<210>91
<211>1560
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>91
cggacgcgtg ggaaacacat ggatttcgtc gtctcgtcat aagttgaaat acaagtgaaa   60
atatttgtga tatttagttt tagtgtgcca aaataaaaat ggatgacgac caacaatttt  120
gtttacggtg gaacaaccat caatcgacat tggtagccgt ttttgacacg ttattggaga  180
acggcacatt agtagactgt actttggcag cagaaggaaa atgcctaaac gcacacaaag  240
tagttttgtc tgcatgtagt ccatacttcg aggcgctgct gtcaaagcac tttgacaagc  300
atcccattct tattcttaag gacgttaagt tccaagaact aaaagccatg atggactata  360
tgtacagggg ggaagtgaac atatctcaag atcaattagg cgcgctttta aaagccgctg  420
aatctttgca aattaagggt ttatcagaca ataggaaagg ggaaactgaa cgaaaaccca  480
ctcctgctcc tccaccaaag agcccacagc caacgaccct gccgaaggtc cagggtttga  540
caattgagca aagagctcgg gaggattcca gggagggaag catgtcacca gggcctcgaa  600
aaaagaaaag gttaaggcgg aaaagtgagg aattagacaa ccacgatgcc tctaattctt  660
cagaatctca cagtctaccc gcccaaagca ttcctacgtt acctgctatt tcaaaaatga  720
acatgaacgc cgatgtgcct gaacaaatag aaactaaatc agagatactc acaaggcata  780
aacagacaga tgacatgccc caagttccta ttataaaaga aaagattgaa acccacacag  840
aactgatgtt ggaaccaaag tctgaatatg tagaagaaat gaatgaagat agtattgagg  900
atttgacact ggatgatgac gatttaagta atatggaaca ggtagatgat caagcaggac  960
ctagtcatgg agcaggagaa ggatcaagtc aaggttttgg aggttggcat atgggtaacc 1020
aaagtcaaga tgaagtattt ctggccgcgc aagaggccgt aggtgcacat cgagactcac 1080
aaggtaagat ttttgttttc aattgtaaag gcttgtctac tgttctgcaa ctgacttgtt 1140
aaaggagtgt atacttcaac cactcctttg gtcatgagac ctgttagtac ttacaaacta 1200
caatggtagt tgttgaagtt ctttacagta gacaagtttc attcacttgc aagtggtatg 1260
gcaaaattta acaccctgac ttccagtctc tggtttaaca ttttatttta ttttacctaa 1320
cgggtagtcc ttggtttctc ctgttgctta acacttagct ttttatttta ctagatgtag 1380
tagtagttat ttttggtttt acccatcacc tttctccctc cctcaagatt gacagcactc 1440
cttcatcaat ttttcatttg gaggtaccag ccagccctac aggtcaaccc aaaaccacta 1500
gtattttaaa tctaaattgt tttgagagaa gtttcataga tgatacctta ctattaataa 1560
<210>92
<211>24
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>92
cgtgggaaac acatggattt cgtc                         24
<210>93
<211>24
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>93
ggaacttggg gcatgtcatc tgtc                         24
<210>94
<211>802
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>94
cgtgggaaac acatggattt cgtcgtctcg tcataagttg aaatacaagt gaaaatattt  60
gtgatattta gttttagtgt gccaaaataa aaatggatga cgaccaacaa ttttgtttac 120
ggtggaacaa ccatcaatcg acattggtag ccgtttttga cacgttattg gagaacggca 180
cattagtaga ctgtactttg gcagcagaag gaaaatgcct aaacgcacac aaagtagttt 240
tgtctgcatg tagtccatac ttcgaggcgc tgctgtcaaa gcactttgac aagcatccca 300
ttcttattct taaggacgtt aagttccaag aactaaaagc catgatggac tatatgtaca 360
ggggggaagt gaacatatct caagatcaat taggcgcgct tttaaaagcc gctgaatctt 420
tgcaaattaa gggtttatca gacaatagga aaggggaaac tgaacgaaaa cccactcctg 480
ctcctccacc aaagagccca cagccaacga ccctgccgaa ggtccagggt ttgacaattg 540
agcaaagagc tcgggaggat tccagggagg gaagcatgtc accagggcct cgaaaaaaga 600
aaaggttaag gcggaaaagt gaggaattag acaaccacga tgcctctaat tcttcagaat 660
ctcacagtct acccgcccaa agcattccta cgttacctgc tatttcaaaa atgaacatga 720
acgccgatgt gcctgaacaa atagaaacta aatcagagat actcacaagg cataaacaga 780
cagatgacat gccccaagtt ca                                          802
<210>95
<211>1412
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>95
gaagtgactt ctggcccgtc ttgtgcaggt tgttcagatt cgcttcgagg agaagaatcg   60
tcgctggcgg ttggattgtc gtttgcagtc gagtttgttt ttgggttctt gctctgtgaa  120
ttgtttttgt tcctcacgaa ttttggcctc cgaccatacg gataacgttg ggggctaggt  180
ttaggttttg gctgaattgc tttcttttca ggatcaaaga aatgatctaa gatatccaac  240
agctcttcca gatctttatc cttcgcattt gctacctcac tcttaataac tttttccaaa  300
ccatccttgg cgtcagaatc ataagcgatt ttaagtttgt cataattaat gttgttctct  360
gccaaaagtc tccttaaatg gctcgcgtgc tgcctctcag ttcgactggc ccgtaacagt  420
gctccaaaca ctggccggaa tgtattttgt ctttctaata ataccttaaa aagagctatt  480
tcctcttcct cagcatctat aggattgaca tatggacata ccacttccat gagatgactt  540
tctgttccag tacaatcttt actggctgcc tctcccttta attcctctct ttccccttga  600
gctaaatgag cagcaatatc aaatgaagcc cttgctctat ctactgcact gttgaagtgc  660
tctgcacccc tgtttaacaa taccttagac attatatgga gattgaaaga tttcgtggtg  720
ttgccacatt ttgcttgggc tatattgaag ccattagcaa agccttttac caccttttgg  780
aacctttcaa tcatattatg tcttcttaat gattctaaca gcatccccgg tgaggctttg  840
cgaagttcat aataaatcaa tataattcca tcaacgtcat ttcctttaac agtctccaac  900
catttcaaga agtcttggag agcagaaatt tcactcttgg tcttcaagaa ttcctgggtg  960
ttgacatctt tcaaccttct gtagcggatt gtgtttacta ctctgatacc atgtcttctg 1020
ctgtaggtag gattcaaatc tccaaatggc atgacatact gtgaaaactg tgattcaggt 1080
gtaaacgcag ctatttgaat gatttcatca attagtctgc ggccagtagt atctataccc 1140
catcctacaa gcttgtattt tccagtagga ataccctttg ctggattttc aggaacaact 1200
ggcactgaac tctccctctc atcaccagag tttgcactct ccttctgcac catcataaat 1260
tatttattat cacaaaaggc tggccaaaat aaattttata ccatcacttt tccaaaactt 1320
ataatgacaa tacaaaatta attattcata aaaaataaca attgcaatcg gaatttataa 1380
ataaaaattc aaagaaaatt ccgaaacaca cg                               1412
<210>96
<211>23
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>96
gcaggttgtt cagattcgct tcg                         23
<210>97
<211>25
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>97
ggtggtaaaa ggctttgcta atggc                         25
<210>98
<211>750
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>98
gcaggttgtt cagattcgct tcgaggagaa gaatcgtcgc tggcggttgg attgtcgttt  60
gcagtcgagt ttgtttttgg gttcttgctc tgtgaattgt ttttgttcct cacgaatttt 120
ggcctccgac catacggata acgttggggg ctaggtttag gttttggctg aattgctttc 180
ttttcaggat caaagaaatg atctaagata tccaacagct cttccagatc tttatccttc 240
gcatttgcta cctcactctt aataactttt tccaaaccat ccttggcgtc agaatcataa 300
gcgattttaa gtttgtcata attaatgttg ttctctgcca aaagtctcct taaatggctc 360
gcgtgctgcc tctcagttcg actggcccgt aacagtgctc caaacactgg ccggaatgta 420
ttttgtcttt ctaataatac cttaaaaaga gctatttcct cttcctcagc atctatagga 480
ttgacatatg gacataccac ttccatgaga tgactttctg ttccagtaca atctttactg 540
gctgcctctc cctttaattc ctctctttcc ccttgagcta aatgagcagc aatatcaaat 600
gaagcccttg ctctatctac tgcactgttg aagtgctctg cacccctgtt taacaatacc 660
ttagacatta tatggagatt gaaagattta gtggtgttgc cacattttgc ttgggctata 720
ttgaagccat tagcaaagcc ttttaccacc                                  750
<210>99
<211>441
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>99
ggaaaagaag atcaaagtat atttaaaata gctaaaaggg attcgccgac gaagacaata  60
gtctcggatt tgaagcctgg tacaaggtat agattgtggt tggaggttta cttgactaat 120
ggaaaaatta agactagtaa cgtacaagat tttatcacca agcccagaac tgcaccgtcg 180
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gactactatg gtcctctagt cattgtagca atattagcag cgattgccat attgagtact 300
ttggtactat tactgatttt gattcgacga cataatcaaa acaaggctgc catcacacca 360
ccatctcgaa tcaatcagtc tgcttatgat aatccttcat ataaggttga aatacaacag 420
gaaacaatgg gtaaaggttt t                                           441
<210>100
<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>100
gattcgccga cgaagacaat agtctc                               26
<210>101
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>101
ctttacccat tgtttcctgt tgtatttcaa cc                         32
<210>102
<211>396
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>102
gattcgccga cgaagacaaa gtctcggatt tgaagcctgg tacaaggtat agattgtggt  60
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cgattgccat attgagtact ttggtactat tactgatttt gattcgacga cataatcaaa 300
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<210>103
<211>2859
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>103
cgaagtgatt cagtagtacc tttaagtgat taagttttgt tagttaggga ttgtaaatta   60
agatacctac atgaaattgg ttctaatgct tgtggccgtc caggccgcgg cggtattaac  120
gtcaccgccg tcgacaccat ccacaccgtc ggcgccaccg tcgcttccaa ccaattcgaa  180
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cgggttcaag aatcttgacg atgtcatcat taccaacacg agaattgcga ctatagatgt  420
gaaagccttc gagaatgtga cgcgcctaaa gttctccaaa tgtgcctttg aagacagtcc  480
tgacctcttc tctacaaagt tggaggaggt gcattttggt gaatgcaaat tagaagaaat  540
tcccaatcta aatggactga tcaatctaac gtttttaaat ttatcgggaa attacattaa  600
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catagatagg tactgtcgaa aaatgttttg tgtattttta aaataagaca atttgaaaat 2460
tgatttttac catacccttt aaccgtttcc taacaattgc actaggtaaa gatccatttt 2520
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actggtatac cggtgcaatc gaactaagag ctgaatatta atgactctca tagtttgatt 2640
gcagaactat attgtcatgt cttagttcta cgtaatttaa ctgtctataa atgttattgc 2700
gcttatagta tagaaaaata ttgttaagcc acagattaag caggtattgt ttgccatatg 2760
tacctaatat cagcagcatt cagctcttct taatatctgt aaactatcta atttctagtt 2820
gtaatcaaaa tgttttcaat aaatttttta tcggaaaaa                        2859
<210>104
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>104
catcttctta gagatattga cgccagaaat gc                         32
<210>105
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>105
cagacccact gtgtttcttt tgacctg                               27
<210>106
<211>736
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>106
catcttctta gagatattga cgccagaaat gctactctaa caaaattgtg gtccaactac  60
aacaaacctg ttaaatcttt gcataaactg cttctaagtg gaaacttctt aggaactcta 120
accaacgatg atttcaacat catgcccaaa ttagaggcaa tagaattgga agacaatcct 180
ttagtgtttg atgagaagtt atgtatgtta ttatactttt tagatcttca aggcattact 240
cctatcgatt atagcaagaa tatatatacc ggagctgata aggcttttag ggaagacatt 300
gatgattttg taaccattga atggaaagat gttcataaag gtaaatgtcc tgaacatatt 360
actgagtctg ctttacctga actaactcgc atagataaca aaactacgta taaaactatt 420
gacaaaattg agaaagaaga ttatgaggaa gacgatgacg acgacgatag cgattctgat 480
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<210>107
<211>2859
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<213>Diabrotica virgifera
<400>107
cgaagtgatt cagtagtacc tttaagtgat taagttttgt tagttaggga ttgtaaatta   60
agatacctac atgaaattgg ttctaatgct tgtggccgtc caggccgcgg cggtattaac  120
gtcaccgccg tcgacaccat ccacaccgtc ggcgccaccg tcgcttccaa ccaattcgaa  180
gacttgcatt gaccactgca cgtgcagctt tggaatgctg accaataggc tgcaggtaac  240
caaatgcgat aggcctctag tacttaacga cgccactttt aagtacatta gcaagacctc  300
aacgaacgtc atcacccttg acaatttgat catcaaccag atccaagtta gtgcattcgc  360
cgggttcaag aatcttgacg atgtcatcat taccaacacg agaattgcga ctatagatgt  420
gaaagccttc gagaatgtga cgcgcctaaa gttctccaaa tgtgcctttg aagacagtcc  480
tgacctcttc tctacaaagt tggaggaggt gcattttggt gaatgcaaat tagaagaaat  540
tcccaatcta aatggactga tcaatctaac gtttttaaat ttatcgggaa attacattaa  600
aaacattgaa gttgaagctt tcgctgaact gtttgatcta ggagagcttc atctttccga  660
caataacatc cacaaactcc cacctactgc gtttattaat aaccaagaat taatcaccct  720
taacctcgac aacaaccccc ttaaacattt taacattaat acatccgaca gtttagagat  780
attgtcactt aagaattgcc aattagagac atttgacgaa gaatcaacaa aaaaattaac  840
ttctcttaat gaattaaacc taagtcacaa caatcttaca gacatattca gtaaagcatt  900
gtcccacatg caggatcttt cagtaattga cctttcttac aataagttga ctaaacttca  960
agataatatt ttctctggaa acggtaaact catcaaagtt atcttagatg gaaacaattt 1020
cgacacctta ccatctttct accgccaaaa ccatgaaagt ttctctactt acacgttctc 1080
ttgtaaatct tgtaacttac gaattctttc agccaacgtc ttccagaata tggatggttt 1140
gattaatctg gaactgtcac acaataagtt aatgaatgtg gataatgtct tcgacaaaat 1200
taccagcttg aaacaattag atatttctta taatgaaatt tcatacttgt cgccagcagc 1260
ttttgtacat aacggcaatt tagaaatttt aaacattgct ggtaatcctt tactggttct 1320
taatccagaa gtgtttgccg caaatcatct tcttagagat attgacgcca gaaatgctac 1380
tctaacaaaa ttgtggtcca actacaacaa acctgttaaa tctttgcata aactgcttct 1440
aagtggaaac ttcttaggaa ctctaaccaa cgatgatttc aacatcatgc ccaaattaga 1500
ggcaatagaa ttggaagaca atcctttagt gtttgatgag aagttatgta tgttattata 1560
ctttttagat cttcaaggca ttactcctat cgattatagc aagaatatat accggagctg 1620
ataaggcttt tagggaagac attgatgatt ttgtaaccat tgaatggaaa gatgttcata 1680
aaggtaaatg tcctgaacat attactgagt ctgctttacc tgaactaact cgcatagata 1740
acaaaactac gtataaaact attgacaaaa ttgagaaaga agattatgag gaagacgatg 1800
acgacgacga tagcgattct gatgaatacg acgatgaata ctacgacgaa gaaacgacta 1860
ctaagttcca agacacatct cttgctagag ccacttacat cttgtcagta acttcagtat 1920
ttgtattaag tgctttagta gtactgacca tagctgttac cttaactcta tgcattctgc 1980
gcagaaacaa ccgctttgac atgcaacgag ctaacttacc aaggctgaaa attcctcttt 2040
ggaatacaac tccaggtcaa aagaaacaca gtgggtctgt atacagacct ctttccgaag 2100
acctctcggg tcccaagact cctaaattga gtcgctatga atttaataca accccagtag 2160
tgcatactgc ttaaagttac ttaaaattct gtggttcata gataaataag actattttgt 2220
ttaatatgta tataatcaaa ttattgtctc ttatgaaata agattagcga taaagtattc 2280
ggctgactgc agtacggcag ataacctagg gaccaaattt ccattacttc tgtgaaccaa 2340
aaccattttt aagctttaat cgtcctgggg actggagagt tcgcattttg tgcactccgc 2400
catagatagg tactgtcgaa aaatgttttg tgtattttta aaataagaca atttgaaaat 2460
tgatttttac catacccttt aaccgtttcc taacaattgc actaggtaaa gatccatttt 2520
catgtactga atttagacta ttgatttaaa atctacttaa ttttcaaatt agaagcatgc 2580
actggtatac cggtgcaatc gaactaagag ctgaatatta atgactctca tagtttgatt 2640
gcagaactat attgtcatgt cttagttcta cgtaatttaa ctgtctataa atgttattgc 2700
gcttatagta tagaaaaata ttgttaagcc acagattaag caggtattgt ttgccatatg 2760
tacctaatat cagcagcatt cagctcttct taatatctgt aaactatcta atttctagtt 2820
gtaatcaaaa tgttttcaat aaatttttta tcggaaaaa                        2859
<210>108
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>108
cgacgccact tttaagtaca ttagcaagac                         30
<210>109
<211>33
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>109
ctaagataac tttgatgagt ttaccgtttc cag                         33
<210>110
<211>740
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>110
cgacgccact tttaagtaca ttagcaagac ctcaacgaac gtcatcaccc ttgacaattt  60
gatcatcaac cagatccaag ttagtgcatt cgccgggttc aagaatcttg acgatgtcat 120
cattaccaac acgagaattg cgactataga tgtgaaagcc ttcgagaatg tgacgcgcct 180
aaagttctcc aaaagtgcct ttgaagacag tcctgacctc ttctctacaa agttggagga 240
ggtgcatttt ggtgaatgca aattagaaga aattcccaat ctaaatggac tgatcaatct 300
aacgttttta aatttatcgg gaaattacat taaaaacatt gaagttgaag ctttcgctga 360
actgtttgat ctaggagagc ttcatctttc cgacaataac atccacaaac tcccacctac 420
tgcgtttatt aataaccaag aattaatcac ccttaacctc gacaacaacc cccttaaaca 480
ttttaacatt aatacatccg acagtttaga gatattgtca cttaagaatt gccaattaga 540
gacatttgac gaagaatcaa caaaaaaatt aacttctctt aatgaattaa acctaagtca 600
caacaatctt acagacatat tcagtaaagc attgtcccac atgcaggatc tttcagtaat 660
tgacctttct tacaataagt tgactaaact tcaagataat attttctctg gaaacggtaa 720
actcatcaaa gttatcttag                                             740
<210>111
<211>464
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(313)..(407)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>111
caagctaaag atagatttct ttcacaatta attagtgaaa atccatttgt agatataaat  60
atatttttga aattcaataa aattagaaaa ttaaactgta ctctggatga tttacgaaaa 120
gcaattagca agtcggatat gatagaacta tcagaatgca aagaaagaat aaagagaaag 180
atgcctataa aaattaatga aaatgtagac aattgtacaa tatatgttga aaatattaaa 240
gccgatgcta accatgagtg ggtttcacag atattttcag aatttggaaa tgtggtttat 300
gtttccatac canaatacag acataatana acaaacaaag gttttgcttt tgttgagttc 360
gaagatgaag ctggtgctaa aaatgctctt acatactttg agagtantgg gtgtaaaatg 420
ccatcagaaa caaacccgga gaaattaaag agtatcagac attc                  464
<210>112
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>112
ctctggatga tttacgaaaa gcaattagca                         30
<210>113
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>113
ggtttgtttc tgatggcatt ttacacc                            27
<210>114
<211>336
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>114
ctctggatga tttacgaaaa gcaattagca agtcggatat gatagaacta tcagaatgca  60
aagaaagaat aaagagaaag atgcctataa aaattaatga aaatgtagac aattgtacaa 120
tatatgttga aaatattaaa gccgatgcta accatgagtg ggtttcacag atattttcag 180
aatttggaaa tgtggtttat gtttccatac caaaatacag acataataaa acaaacaaag 240
gttttgcttt tgttgagttc gaagatgaag ctggtgctaa aaatgctctt acatactttg 300
agagtattgg gtgtaaaatg ccatcagaaa caaacc                           336
<210>115
<211>968
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(922)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>115
cttttaaact tgtttagtga tctcttcatt tttaaatcgg ctgttaatga aagactgtga  60
tttttgtagt tgttgtgata tcaaaatgag gcgtactttt ggattactgc tagtttttct 120
aggattgtgg acattgtgta tagcacaaac ggaatattgt atgaccccaa ggcaggaagg 180
aggagattgc aaaataatta cacaatgtcc aagtttattt aaaattttaa aaaatcgtcc 240
tattagatct gaggacgcgg attatttaag aaaatcacaa tgtggtttcg aggggacgtt 300
accaaaagtg tgctgtgctc tgcaagaaac tgttcaaact accacgcagc gtcaagtaga 360
atatgacacc cctaaacctg cagatagtcc cctgttacca tcaaaagaag actgcggtat 420
tggaagtata ccagacaaaa tttatggagg taatacaacg gatctcgatg aatttccatg 480
gatggccctc cttgattacg aaaaagataa tggtaatcac ggattttatt gtggaggagt 540
actaattaac tcacggtata tacttacagc agctcattgt gtcaaaggaa aagatttacc 600
aagaaattgg aaactagttg gcgttaggct tggagaatat aatttagaaa cagacacaga 660
ctgtgtacaa acagtaagtg gtcaaaaatg tgcacctcct ccagttaatg ttgctgtaga 720
agaacaaatt gcccatgagc agtacaagcc ctacgatcaa aaccaatacc atgacattgc 780
cttacttaga cttgcaagaa atgtaaaaat taccggattt gttagaccca tctgtcttcc 840
aaaaactgct gatgatcaat ctagaaacta cacagggcaa aaactaacag ttgctggatg 900
gggtaaaacg gaacacgatc gnaaagtaac ataaaactca aactagatgt accaagtaaa 960
gctaatac                                                          968
<210>116
<211>23
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>116
caaggcagga aggaggagat tgc                         23
<210>117
<211>29
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>117
gatcatcagc agtttttgga agacagatg                   29
<210>118
<211>690
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>118
caaggcagga aggaggagat tgcaaaataa ttacacaatg tccaagttta tttaaaattt  60
taaaaaatcg tcctattaga tctgaggacg cggattattt aagaaaatca caatgtggtt 120
tcgaggggac gttaccaaaa gtgtgctgtg ctctgcaaga aactgttcaa actaccacgc 180
agcgtcaagt agaatatgac acccctaaac ctgcagatag tcccctgtta ccatcaaaag 240
aagactgcgg tattggaagt ataccagaca aaatttatgg aggtaataca acggatctcg 300
atgaatttcc atggatggcc ctccttgatt acgaaaaaga taatggtaat cacggatttt 360
attgtggagg agtactaatt aactcacggt atatacttac agcagctcat tgtgtcaaag 420
gaaaagattt accaagaaat tggaaactag ttggcgttag gcttggagaa tataatttag 480
aaacagacac agactgtgta caaacagtaa gtggtcaaaa atgtgcacct cctccagtta 540
atgttgctgt agaagaacaa attgcccatg agcagtacaa gccctacgat caaaaccaat 600
accatgacat tgccttactt agacttgcaa gaaatgtaaa aattaccgga tttgttagac 660
ccatctgtct tccaaaaact gctgatgatc                                  690
<210>119
<211>542
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>119
cacaaaggaa acgaaagact ggaacttcat ggagaaacta ttcaaattcc aaacgtaact  60
cccgaaaatg gaggtatata cagatgcttg gccgacaatg gcttaaagga acccagtcac 120
aaacacatcg ccataaacat tgaacatgca ccaaagatct caatttccaa gtacctagta 180
acatctaaca aagaaagaga tgccgaatta gtgtgtactg tagatgccta cccagatgca 240
atggtttttt ggaaaaaagg tgaccaaatc atgaaaaacg acgagaccag gaaagttatg 300
actaagagaa gacagcacac cattgaaagc atttttgtca tcaccaatct gactgacgat 360
gacttcggta cctatacttg tgtgggcaag aatagaaatg gtaagaaaga agagaaagtg 420
agcttagtga aaactcctgc agttagggat ttcatcaaac ctgtaaatgt cagcaaagac 480
gtacttttgt cgtggaaagt tgaatcgaaa tcgcccatat cagcacatga aattcagtac 540
ag                                                                542
<210>120
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>120
cacaaaggaa acgaaagact ggaacttc                         28
<210>121
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>121
cacaaaggaa acgaaagact ggaacttc                         28
<210>122
<211>542
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>122
cacaaaggaa acgaaagact ggaacttcat ggagaaacta ttcaaattcc aaacgtaact  60
cccgaaaatg gaggtatata cagatgcttg gccgacaatg gcttaaagga acccagtcac 120
aaacacatcg ccataaacat tgaacatgca ccaaagatct caatttccaa gtacctagta 180
acatctaaca aagaaagaga tgccgaatta gtgtgtactg tagatgccta cccagatgca 240
atggtttttt ggaaaaaagg tgaccaaatc atgaaaaacg acgagaccag gaaagttatg 300
actaagagaa gacagcacac cattgaaagc atttttgtca tcaccaatct gactgacgat 360
gacttcggta cctatacttg tgtgggcaag aatagaaatg gtaaggaaga agagaaagtg 420
agcttagtga aaactcctgc agttagggat ttcatcaaac ctgtaaatgt cagcaaagac 480
gtacttttgt cgtggaaagt tgaatcgaaa tcgcccatat cagcacatga aattcagtac 540
ag                                                                542
<210>123
<211>2449
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>123
aaactcgtcc ataatcgcga tagttgagtg ggtgaggttc caagagaaac ataacatcca   60
tccacaaata tgtcgaaagt aaggatcgga gatgaagaga aggaagggca gtatggttat  120
gtccatgctg tctcaggtcc agtcgttact gctgagaaaa tgtctggttc tgctatgtac  180
gaactggtac gtgtcggata ctatgagctg gtaggagaaa tcattagatt ggaaggtgac  240
atggctacta ttcaggtata cgaagaaaca tcaggtgtaa ctgttggtga tccagtatta  300
agaactggta aaccactttc agtagaactt ggacctggta ttatgggttc catttttgat  360
ggtatccaac gtccattgaa agacatttgt gacgctactg atagtattta catccccaag  420
ggtattaacg taccttcttt atcgagaaca gcaaaatggg acttcaaccc aatcaacatc  480
aagttgggat ctcacttaac tggaggtgat atatatggtc tagttcatga aaacaccctt  540
gtcaaacaca aaatgattct gcctcctaga gctaagggta ctgtaaccta cattgcagaa  600
ccaggaaact acactgttga tgaagtagta ttggaaactg aatttgatgg tgatcgtacc  660
aaatatacta tgttgcaagt atggcctgta cgtcaagcaa ggccagtcag tgaaaaatta  720
cctgccaacc atcctctgct tacaggacag cgtgtacttg atgctctttt cccatgtgta  780
cagggtggta ctactgccat tcccggagct ttcggttgtg gaaaaactgt aatttcacaa  840
tctctttcca aatattccaa ctctgatgtc attatctacg tcggttgcgg agaaagaggt  900
aacgaaatgt ctgaagtatt gagagatttc cctgaattga ctgttgaaat tgacgggcac  960
actgaatcta ttatgaaacg taccgcattg gtcgccaaca catctaacat gcctgtagct 1020
gctcgtgaag cttctatcta tactggtatt actctttctg aatacttccg tgatatgggt 1080
tacaacgtat ctatgatggc tgactcgaca tcacgttggg ccgaagcttt gagagaaatt 1140
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ttggcttcct tctacgaacg tgctggtcgc gttaaatgtt taggtaatcc agacagagaa 1260
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cgtaagcact tcccttcagt agactggctt ggatcatatt ccaaatattt aagagcattg 1440
gacgactttt atgacaaaaa cttccaagag tttattcctc ttagaaccaa agttaaggaa 1500
attcttcagg aagaagatga tctagccgaa attgtgcagc tggtaggtaa agcatctctg 1560
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agcagtatga aatttaagga tcccgtaaaa gatggtgaag ctaaaatcaa ggcagatttt 1860
gatcaattat atgaagatat tcagcaggcc ttcagaaact tagaagatta aatcttttta 1920
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aagaataata aggcctctat ccctcacttc tgtgaatatt aatatggccg tactaaagat 2040
agtaactaaa gataggtttt ctcttttttg atattatcct gtacaaaata aattatgtaa 2100
attgttgaat atgtgtatag tttttttggg tgagggtaca gtgcttatta aatacttttt 2160
aaacattttt cccgccattc caattactat taagtttttt cgttttaata cttttttaaa 2220
tatacaggtg cttaatatcg tttatatttt cagtattact tggttttctt catgtaaatt 2280
gttttaaatt tttcttttac ccttttaatc ttgtatatta cattacccaa ttaaagttaa 2340
ttgtacagat taagataaac gagtatctta taacatctat tagattgtta gaatcaataa 2400
atgtagtgta attgttctgt tttgaacaaa taaatgcatc attattgtt             2449
<210>124
<211>28
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<213>Diabrotica virgifera
<400>124
gatagttgag tgggtgaggt tccaagag                         28
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<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>125
caagtacacg ctgtcctgta agcagagg                         28
<210>126
<211>742
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>126
gatagttgag tgggtgaggt tccaagagaa acataacatc catccacaaa tatgtcgaaa  60
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ccagtcgtta ctgctgagaa aatgtctggt tctgctatgt acgaactggt acgtgtcgga 180
tactatgagc tggtaggaga aatcattaga ttggaaggtg acatggctac tattcaggta 240
tacgaagaaa catcaggtgt aactgttggt gatccagtat taagaactgg taaaccactt 300
tcagtagaac ttggacctgg tattatgggt tccatttttg atggtatcca acgtccattg 360
aaagacattt gtgacgctac tgatagtatt tacatcccca agggtattaa cgtaccttct 420
ttatcgagaa cagcaaaatg ggacttcaac ccaatcaaca tcaagttggg atctcactta 480
actggaggtg atatatatgg tctagttcat gaaaacaccc ttgtcaaaca caaaatgatt 540
ctgcctccta gagctaaggg tactgtaacc tacattgcag aaccaggaaa ctacactgtt 600
gatgaagtag tattggaaac tgaatttgat ggtgatcgta ccaaatatac tatgttgcaa 660
gtatggcctg tacgtcaagc aaggccagtc agtgaaaaat tacctgccaa ccatcctctg 720
cttacaggac agcgtgtact tg                                          742
<210>127
<211>2014
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(1772)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>127
aggtattgca ggtacaccag gaaggagtat tgtcggtgct aaaggtgata aaggtgacca   60
aggaccttct ggtttagatg gtttagcagg aatacaagga gaaaagggtg atgccggaac  120
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agtcgtctgt gaagccacgc agtctccaga ttcacagatc agagtggccg ctttgcagtg 720
tctagttaag attatgtctt tgtattatca acacatggaa ccttatatgg ctcctgctct 780
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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<220>
<221>修饰的碱基
<222>(805)
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aaaatgc                                                           247
<210>179
<211>870
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>179
acgcgtgggt tcgtattttt ttcttaacaa aagggcaaaa tgagcttttt tggaaaattg  60
ttcgggggga aaaaggaaga gatagcccct agtcctgggg aggctattca aaaactcaga 120
gagactgaag aaatgttaat aaaaaaacag gattttttag aaaagaagat agaagaattt 180
accatggtag caaagaaaaa tgcgtcgaaa aataaaagag ttgcactcca agccctcaaa 240
aagaagaaac gattggaaaa gacccaacta caaatagatg gaacccttac aactattgaa 300
atgcagaggg aagccctcga aggagctagc acaaatactg ctgtattaga ttctatgaaa 360
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<212>DNA
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<400>181
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<211>601
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>182
gtcctgggga ggctattcaa aaactcagag agactgaaga aatgttaata aaaaaacagg  60
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g                                                                 601
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<221>修饰的碱基
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<400>187
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<400>189
ctcgtaggac aggaggcatg gct                           23
<210>190
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<210>191
<211>826
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(752)
<223>n＝a，c，g或t/u
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ctggagatga cagtcaagca tttacagaac cttcaaagac agcaagtcgc tatgtcagcg 360
gcagcagatc ccttagtagt taataaattc agagcagggt ttagcgagtg cgcttcagaa 420
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ccaaacactc aaaaaccttt agaacagcaa gtaccccaaa gcagtggcat tattcttagt 600
aacggtaacg gtactggagt tcaactagta ccaacaagac taccgaatgg agatttagct 660
ctggtacttc ctacgacctt acaaacacag ccccagtatt caccggcggc agtaccatta 720
ttagtgccga tagtaccgga aagaaccgct tncaccacat cagcgaccag cagttactcg 780
aattatttct ccagtcatag tccagagcct atggagtcta tgtaca                826
<210>192
<211>31
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<213>Diabrotica virgifera
<400>192
gcagttttgt gatttaagaa gattacgatg g                         31
<210>193
<211>30
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<400>193
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aggcggaggg cgaggataaa taactgtctc aatgagttga aaacgctcat atcggacgcc 240
atgaaaaaag atcctgccag acattcaaag ctggaaaaag ctgacatcct ggagatgaca 300
gtcaagcatt tacagaacct tcaaagacag caagtcgcta tgtcagcggc agcagatccc 360
ttagtagtta ataacttcag agcagggttt agcgagtgcg cttcagaagt cggcagattt 420
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acgaccttac aaacacagc                                              679
<210>195
<211>873
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(709)..(772)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>195
cgacgaagtc accgtgggta aattctacgc gactttcctc attcaggatt acttcaggcg  60
gttcaagaag agaaaagagc aggagatgag ggacggagat aaagatattc agaataccgt 120
tacacttcaa gctgggttgc gtacgttaca tgaggctggt ccagaactga aacgcgccat 180
ctcaggcaat ctagatgaat taattgatga caatcccgaa ccaatgcatc gtagaaatca 240
ttcactcttc ggaagtgtat ggtcttcaat gagacgaggt catactttca atagagcgaa 300
atctctgaag ttaaattcaa cccaaatcaa aattacaccg gcttccagcg tcgactatct 360
tccatacaat tctattaaga atgccgtcac agaagggatg aatcacatta cttccatgac 420
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<213>Diabrotica virgifera
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>197
cgaaggaagc aagtctacgg tcgg                         24
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>198
cgacgaagtc accgtgggta aattctacgc gactttcctc attcaggatt acttcaggcg  60
gttcaagaag agaaaagagc aggagatgag ggacggagat aaagatattc agaataccgt 120
tacacttcaa gctgggttgc gtacgttaca tgatgctggt ccagaactga aacgcgccat 180
ctcaggcaat ctagatgaat taattgatga caatcccgaa ccaatgcatc gtagaaatca 240
ttcactcttc ggaagtgtat ggtcttcaat gagacgaggt catactttca atagagcgaa 300
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tccatacaat tctattaaga atgccgtcac agaagggatg aatcacatta cttccatgac 420
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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ggacaggcct tggcaaagaa agtggtattg ctgactggag aaactggtac tgatctaa   418
<210>200
<211>29
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>200
cacagttacc tgtatcgttc cgacatttg                         29
<210>201
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>201
gatcagtacc agtttctcca gtcagcaata c                         31
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>202
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ccttggcaaa gaaagtggta ttgctgactg gagaaactgg tactgatc              408
<210>203
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>203
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agttaaacaa gtagatgtac catctttctc tggtagcttt ggtatccttc ccgcccatgt 300
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taagaaaatc tttgtttcca gtggtactgt caccatcaat gatgattcat cagttcagat 420
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taccaaagcc cagagccagt tatcatctgc aagtacagat gaggcgaaag ctgaagcctc 540
cattgctgtt gaagtgggag aagcgttagt caaagcggct gaataataat ttaatttttg 600
taattttatg taaatttaat aaattagtgt ctcaatggta ctgttcattt taaaacaaca 660
acatattaga tctatacctc tatgagttga caatttttac aaaaacgaga atcaatccaa 720
atacataatt tttgt                                                  735
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<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>204
ggtactttgg gttgtacttg ggataaaaga c                         31
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<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>205
gctttgacta acgcttctcc cacttca                              27
<210>206
<211>542
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>206
ggtactttgg gttgtacttg ggataaaaga cctttttgta tttccaaata cattgtcata  60
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aatcaggttt actatactgc aacttcagtt aaacaagtag atgtgccatc tttctctggt 240
agctttggta tcctccccgc ccatgtaccc acactggctg tgctaaaacc tggagtagtc 300
actgtttacg aagatggtgg taatgttaag aaaatctttg tttccagtgg tactgtcacc 360
atcaatgatg attcatcagt tcagattctt gctgaagaag cccacccagt agaaaacatt 420
gatgtcaatg cagcaagaga catccttacc aaagcccaga gccagttatc atctgcaagt 480
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<213>Diabrotica virgifera
<400>207
tatatttaat aattaataca gatttttaag tatggcacca aaggaaaaag atgatgaaat  60
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agaggtactt acaaagaaat acaattatgc tgaaaatttt gctctcatgg atggtaggtt 180
agttatatgt ggcatagctg taggtgttgc aatgtttgcc ttgatttggg attatttgta 240
cccattccca caatctaagc ctattttaat attttctgtt actacatatt tttttatgat 300
gggaatttta actttatata ctacatacaa agagaaagga atctttgctg tttgtattca 360
gaaagatagt tctaagaagg aaaatacttg ggaagctagc tcttatattc aaaagtatga 420
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<210>208
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>208
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<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>209
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<210>210
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>210
gtatggcacc aaaggaaaaa gatgatgaaa tcgtatcaat aaataaatgg gatggagtgg  60
ccgtcaaaaa tgcattagat gatgcagtta aagaggtact tacaaagaaa tacaattatg 120
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caatgtttgc cttgatttgg gattatttgt acccattccc acaatctaag cctattttaa 240
tattttctgt tactacatat ttttttatga tgggaatttt aactttatat actacataca 300
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(707)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>211
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t                                                                 901
<210>212
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<212>DNA
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<210>215
<211>916
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(870)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>215
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agaatagcag gaaagcaaga caaatcctaa agatcaagcg tcatcgggtt tagaccggca 120
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<400>218
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aatgagacc                                                         789
<210>219
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<212>DNA
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<400>219
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<213>Diabrotica virgifera
<400>220
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<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>221
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>222
gctctaaact tctgtgacaa ttttgtgcta ctcttaaatg ggggcctaaa caataccgtg  60
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tctcaacaac actccgtatc gatcagtcta tcctgactgg tgaatccgtt tctgtgatca 720
aacacaccga tgccattccc gacccaagag ctgtcaacca agacaagaaa aacattcttt 780
tctcaggtac caatgttgct gctggtaaag cacgtggtat tgttattgga actggtctta 840
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ttcaacaaaa attggacgaa ttcggtgaac aactctccaa agtcatttca gtcatctgtg 960
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<400>223
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ccacaaccat attgagcggt aagatcagtg attctctttt taagagtgct ggtaagtggt  420
actttttgag atccaacacg agcgtgtgta cacctttcca aaacaccttc tggagctcct  480
ttaacgaaga gtttaggtcc attaccaata cgagatggtt tgaggggtgt gcagtaggaa  540
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cacacgctcg tgttggatct caaaaagtac cacttaccag cactcttaaa aagagaatca  780
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aaccaatacc ctcatcaaat cctcaccctc tacaaccgaa atctaacaat cctagcacaa 300
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ag                                                                722
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atttagaagg tgaaaacaac agattaacga gggaaacaca aagtacccag gaaacagtaa 120
caagggaagt ttcaaacatt aaatctatgt atgaccatga attatcagat gctagaaaac 180
tattagacga gacccaccgt gaaaaagcac gtttagagat agatgttaaa cgtcttttag 240
aagagaatga cgaactcaag tctgagttag caaagaagaa caaggatttg gctctagctg 300
agaattctgc caggatatac gagaccagat gtaacgagtt acagctcaaa gcaaatcaag 360
cggctgctga tgctaagaaa gctattgcag atgctaagga acttgagaaa gaacgtgata 420
agctacgcaa acttcttgat aatcatcgta aacagttaga agaagaatca ttggcgagag 480
tggaagtcga aaatgccaac caaagtcttc gagaagagct gtcctttaag gatcagatcc 540
atcaacaaca gttgacagaa actcgtactc gtcgtcaagt agaaatcagc gaatc      595
<210>271
<211>901
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>271
tcaacacgtg tgaattaaaa caaattcaaa aacaaaaatg tccatccaag aaaaagtttt  60
aatgaaaaaa ataaaaaaga gggaaaagca gaaattaaaa tttgttcaaa agaaagagtc 120
tgaaaagagc aaagaagttt tagaaacaga tctaccagag aaggcaaaag tgggaaatgg 180
cttgaaacgc ttgcagagca acgatgaagg accttctaaa aaaaaaaaga agaaaaataa 240
aaagaagaaa gagaaaatag tcgaagagga agatacagac gaagaacaac cagaggaaga 300
tgaaattgag tctgacattg aagatcaaga gattgacaat ggtgaagaag atacagatga 360
aaaatctgat ttaggaaaca aattaccagg atccagtgct acattagaaa ttctcagtaa 420
aagtacattt gactcattga cggataaagt atgtgaaaat actttgaaag ccattgcaga 480
tatgggtttt actactatga ctgaaattca agcaaaatct atacctccac ttctggaagg 540
tagagatttg gttggggctg caaaaacagg atctggaaaa actcttgctt ttctcattcc 600
cgctgttgaa cttatttata agttaaagtt tatgccaaga aatggtactg gtatcattat 660
catttccccc acacgagaat tatcaatgca gacttttgga gtattaaaag aactaatgaa 720
atatcatcac catacatacg gtttggttat gggtggaact gcaagacaaa cagaagcaca 780
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c                                                                 901
<210>272
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>272
ggaaatggct tgaaacgctt gc                               22
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<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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ctgaagatga tccagaagcc taccagg                          27
<210>274
<211>672
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>274
ggaaatggct tgaaacgctt gcagagcaac gatgaaggac cttctaaaaa aaaaaagaag  60
aaaaataaaa agaagaaaga gaaaatagtc gaagaggaag atacagacga agaacaacca 120
gaggaagatg aaattgagtc tgacattgaa gatcaagaga ttgacaatgg tgaagaagat 180
acagatgaaa aatctgattt aggaaacaaa ttaccaggat ccagtgctac attagaaatt 240
ctcagtaaaa gtacatttga ctcattgacg gataaagtat gtgaaaatac tttgaaagcc 300
attgcagata tgggttttac tactatgact gaaattcaag caaaatctat acctccactt 360
ctggaaggta gagatttggt tggggctgca aaaacaggat ctggaaaaac tcttgctttt 420
ctcattcccg ctgttgaact tatttataag ttaaagttta tgccaagaaa tggtactggt 480
atcattatca tttcccccac acgagaatta tcaatgcaga cttttggagt attaaaagaa 540
ctaatgaaat atcatcacca tacatacggt ttggttatgg gtggaactgc aagacaaaca 600
gaagcacaaa agctttccaa aggtattaat atcttagtag caacgcctgg taggcttctg 660
gatcatcttc ag                                                     672
<210>275
<211>512
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(370)..(452)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>275
atttagtcca ctgtacaaat gaaccaaatg tttcaattcc acagctagca aatttgttaa  60
tagaaagatc acagaataca aactgggtag tagtttacaa ggcattagtt acagttcacc 120
acatgatgtg ttatggaaat gagagattta ctcagtacct agcatccagt aacagtacat 180
ttcaacttag caacttctta gataaagggg gacttcaagg atatgacatg tctccattta 240
ttagaaaata ttcacgatat ctcaatgaga aggccttatc atacagaact acagccttcg 300
acttttgcaa agttaaaaga gggaaggatt gatggcatgt taaggacaat gaacgcagat 360
aaattattan aaactcttcc cactttacaa natcaactgg atatcctatt ggaantttga 420
tgttccgcan atgatttnna caacggagtg antaatatgt gtttcatgtt gctttttagg 480
gatttatacg cttatttttg ctgtataatg at                               512
<210>276
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>276
caaatgaacc aaatgtttca attccaca                             28
<210>277
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>277
cgtataaatc cctaaaaagc aacatgaaac ac                        32
<210>278
<211>470
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>278
tgaaccaaat gtttcaattc cacagctagc aaatttgtta atagaaagat cacagaatac  60
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tgagagattt actcagtacc tagcatccag taacagtaca tttcaactta gcaacttctt 180
agataaaggg ggacttcaag gatatgacat gtctccattt attagaaaat attcacgata 240
tctcaatgag aaggccttat catacagaac tacagccttc gacttttgca aagttaaaag 300
agggaaggat gatggcatgt taaggacaat gaacgcagat aaattattaa aaactcttcc 360
cactttacaa aatcaactgg atatcctatt ggaatttgat tgttccgcaa atgatttaac 420
aaacggagtg ataaatatgt gtttcatgtt gctttttagg gatttatacg            470
<210>279
<211>978
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(918)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>279
cgcgtgggcg cgaacaggcg agaaaagacc tcaaaggact cgaagacact gtcgccaaag  60
aactacagac tctgcacaac ctgagaaaat tgttcgtgca agatttgcag gcacgtatga 120
agaaaaatct ttcgtcggaa gacaatgagg aagacggcgg ctctctggct caaaaacaga 180
agatatcgtt cctcgaaaac aatctcgatc aattgacaaa agtccacaag cagttggtac 240
gagacaacgc ggatctgcgc tgtgaacttc ccaaactcga aaagagacta cgagctacga 300
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accggaaaag ataccaatac gaggttgacc gcattaaaga ggctgtgagg cagaagaacc 420
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tttacggcga ttttttga                                               978
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<212>DNA
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<400>280
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<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>281
cacattgaag agcgagtctg gaggag                             26
<210>282
<211>741
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>282
gaacaggcga gaaaagacct caaaggactc gaagacactg tcgccaaaga actacagact  60
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tcgtcggaag acaatgagga agacggcggc tctctggctc aaaaacagaa gatatcgttc 180
ctcgaaaaca atctcgatca attgacaaaa gtccacaagc agttggtacg agacaacgcg 240
gatctgcgct gtgaacttcc caaactcgaa aagagactac gagctacgat ggaaagagtc 300
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cagaaacgta ggtctgttat tggtggagat aaagattgag tcgccagcca tcttgtcagg 600
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tacttcgcgc gagtctgtcg ccagcagttt ttggaacaga caagaaaaaa aattgctcct 720
ccagactcgc tcttcaatgt g                                           741
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<211>876
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>283
ggaaaactgg tcccttctgt ttttctgatg tctcaaattt tctgtcctaa cttctaacac  60
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tggatttctg atgttttgtc gtcaaataaa gattttcgtt ttgccaacaa tgtcaacttt 300
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caataattat cgttacctac tataacttgg ggctcagttt cagagccagc tcgacgacgt 660
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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<212>DNA
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>286
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tagcattgtc ttagcactcc atccaaatta gcaagtatgt caacg                 645
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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cccgttacat cattttatca tatataaaat gattttaatt tgtttataat gtttattaag  60
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ccgaagacca ttttatagcc gccgatgtaa tagtgatgac aataatcaga tgtcttgcca 300
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tcctccaaat cgaagtagcg gacctaaaag atgctctgtt ctttttcttg ttgctaatag 480
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<211>28
<212>DNA
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taccataacg ctagatacta tcgtagaaac cttagtaata ggagtgggaa ctttgtcagg 540
agttcagcgt ctagaaatgc tatcgtattt tgcgtgtctg tcagtc                586
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<213>Diabrotica virgifera
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gaggaaggtg taaaattatt gagggaagat cttaaagaaa aggtcaagga agtcggcaaa  840
attgaagtaa aattcgttga ttttaatcaa ggtgatttgg agggatacct acgtttcgca  900
gaagaaaacg aagctgtcga gttctttaag acagttgata atgacacact tgaaattaaa  960
gatcaaaaag tcaaattgag agtgttagaa ggagacgaag aggaggaata tctgaagaaa 1020
acttcagatt ctattctaaa catgagaaaa cataagaaac aaaattctaa taacagaaaa 1080
cgaaagggca actttggtgg cggaagaaga gatgctaaag ttagtaaaag ggactaataa 1140
acaaaatatg ttatcatctt tatctaattg tttagatatt gtaaaaatta ggttaaaaat 1200
aaaggttttt tttac                                                  1215
<210>296
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>296
caagagaaaa tcaaagaaga tgaagggtgg                                    30
<210>297
<211>34
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>297
ccaaagttgc cctttcgttt tctgttatta gaat                               34
<210>298
<211>895
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>298
caagagaaaa tcaaagaaga tgaagggtgg atcactctgg atgtcttatt aacgttcaaa  60
cgtctttcgt cgttatctac tgaccaagaa ttaatcgcaa aagcagttga aaagtctgaa 120
aatggcctag tgatggtaag cgaagaccgt aagaaactta gacgcaatcc agagaaaccg 180
agtccagaat tgaatgagga aagacgcaaa gagatcatgg ggaggacagc ctacgcaaaa 240
ggatttccat tggatgaaga atttaacaac attatcactt tcctagatgc atatggacca 300
gtcgaatcat gcagtcgtag atccaccaaa gaccataaat ttaagggttc ctgttttatt 360
attttcaaag atgtcgaaac ctgcaagaaa ttcgtagaag cggaaagtat caaatatgga 420
gaaacagaac taatcaggaa attccaacaa gtatattttg acgacaaaaa aaaagagata 480
caggacagaa aaaacgagaa agctgctagc aaggtagctg caaaatcggg cacaccgctt 540
cagtttccca aaggagccat tattcatttc tctggaatcg aggaaggtgt aaaattattg 600
agggaagatc ttaaagaaaa ggtcaaggaa gtcggcaaaa ttgaagtaaa attcgttgat 660
tttaatcaag gtgatttgga gggataccta cgtttcgcag aagaaaacga agctgtcgag 720
ttctttaaga cagttgataa tgacacactt gaaattaaag atcaaaaagt caaattgaga 780
gtgttagaag gagacgaaga ggaggaatat ctgaaaaaaa cttcagattc tattctaaac 840
atgagaaaac ataagaaaca aaattctaat aacagaaaac gaaagggcaa cttgg      895
<210>299
<211>822
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(807)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>299
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gagcgagctc gagatcgtaa tttagcgcgt gcagctcccg ataagcgcag taaacttcag 180
cgagagcgcg aaagagacat ctcagaacaa attgctctcg gtatgccagc gaaaggtgca 240
ccatccaacg acactcagtt tgatcaaaga ttatttggtc aggctcaagg tcttggtcac 300
ggctatgggg atgatgaagc ttataatgtc tatgataaac cttggagaga tggaggatcc 360
atggcaaatc acatttatcg accaagtaaa aatattgata aagatatgta tggtggagaa 420
gacattgaaa aagctattag aactaatagg tttgtaccag ataaagaatt tgggggtact 480
gatcgttctg gagcaggccg atcaggtcct gtgcaattcg aaaaagaaga agatccgttc 540
ggattggatc agttcttgtc gcaagctaag agagccagta aaagaaaaga acctgaaaag 600
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gacctttata aaataaatat aggtatactg gtatacataa ttctgatgta tttttaaaaa 720
agttatattt gatattatgt aactaattgt aataggtaaa ctcaacaata catttttcag 780
ataatttttg tgaattattg taattanata tctataacac ac                    822
<210>300
<211>23
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>300
caagggaggc gtggacgagg aag                                          23
<210>301
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>301
ctctcttctt ttcctcttat ccctgtcgtc tc                                32
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<211>573
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>302
cagggaggcg tggacgagga agaacacgaa agagacttgc ttcgtcaaga tcgtcataaa  60
gagcgagctc gagatcgtaa tttagcgcgt gcagctcccg ataagcgcag taaacttcag 120
cgagagcgcg aaagagacat ctcagaacaa attgctctcg gtatgccagc gaaaggtgca 180
ccatccaacg acactcagtt tgatcaaaga ttatttggtc aggctcaggg tcttggtcac 240
ggctatgggg atgatgaagc ttataatgtc tatgataaac cttggagaga tggagggtcc 300
atggcaaatc acatttatcg accaagtaaa aatattgata aagatatgta tggtggagaa 360
aacattgaaa aagctattag aactaatagg tttgtaccag ataaagaatt tgggggtact 420
gatcgttctg gagcaggccg atcaggtcct gtgcaattcg aaaaagaaga agatccgttc 480
ggattggatc agttcttgtc gcaagctaag agagccagta aaagaaaaga acctgaaaag 540
agagacgaca gggataagag gaaaagaaga gag                              573
<210>303
<211>755
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>303
aatgataact ttgggtgggg atgctgattt tgaaatggtt gatacgtatg atccattttc  60
agagggaatt cagtttaatg tgaggcctcc gaaaaaatct tggaagaaaa tttctaactt 120
atctggagga gaaaaaacgt tatcatcttt ggcccttgtc tttgctctgc attattacaa 180
accttcgcca ctttatgtaa tggacgaaat tgacgcagcc ttagatttca aaaatgtgtc 240
aattgttgga aattatatta agcaacgtac caaaaacgct caattcatta taatctccct 300
tcgatccaac atgttcgaac tgtgcgataa tctcatagga atttacaaaa cgtacgattg 360
cacgaagtct ataacgatag atccaagagt atatgacgag caaacaaaac ataacgaaaa 420
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tactggagat tctggagata aaaatccaga aagaaatgtt agcaatgaag ttgtagacga 540
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ttcatctggt ctgtctagta gcatgagtga aaatgaaaat agtttacaag aatcccaagt 660
gcctgaaata tgaaggggtc agtttcgtga tttagttact acttcttgat ataaatgtag 720
catttttagt tactttaata catttacata tttgt                            755
<210>304
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>304
ggatgctgat tttgaaatgg ttgatacg                                     28
<210>305
<211>29
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>305
cttcatattt caggcacttg ggattcttg                                    29
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<211>656
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>306
ggatgctgat tttgaaatgg ttgatacgta tgatccattt tcagagggaa ttcagtttaa  60
tgtgaggcct ccgaaaaaat cttggaagaa aatttctaac ttatctggag gagaaaaaac 120
gttatcatct ttggcccttg tctttgctct gcattattac aaaccttcgc cactttatgt 180
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taagcaacgt accaaaaacg ctcaattcat tataatctcc cttcgatcca acatgttcga 300
actgtgcgat aatctcatag gaatttacaa aacgtacgat tgcacgaagt ctataacgat 360
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taaaaatcca gaaagaaatg ttagcaatga agttgtagac gaacaacgtt cgaacttgat 540
ggaggttgat aatgtcatcc agagtacaaa taatgccagg gattcatctg gtctgtctag 600
tagcatgagt gaaaatgaaa atagtttaca agaatcccaa gtgcctgaaa tagaag     656
<210>307
<211>428
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>307
cggacgcgtg ggctgaaatc caaatttttt ataaatataa ccttaaagaa gtctgtaaag  60
atttaagcat gatttaacga aatattaaat ttttaacttt aaaatgccga actcagatat 120
tgatgataac gaaaaagtaa ctgggcccgt cgacaatgca tgggaactga aaattccaga 180
attcaaacca gaagataatc cacatggatt attagaggaa agtagtttcg ccacattatt 240
tccacaatac agagaacaat atttaagaca agtatggcct ttagttaaga aaactctggg 300
tgaatataat ataaaagcag aactagatgt tgtagaaggt agtatgactg ttaaaaccac 360
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tagaagtg                                                          428
<210>308
<211>36
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>308
cgaactcaga tattgatgat aacgaaaaag taactg                            36
<210>309
<211>34
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>309
catgtttgcc ttgtggtttt aacagtcata ctac                              34
<210>310
<211>265
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>310
cgaactcaga tattgatgat aacgaaaaag taactgggcc cgtcgacaat gcatgggaac  60
tgaaaattcc agaattcaaa ccagaagata atccacatgg attattagag gaaagtagtt 120
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<211>657
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>311
acgcgtccgc ccacgcgtcc gcgactgccg gccattattt gtaagcggcg aaagattcgg  60
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caattcaaaa tcaaaaaaca caccccatta aaaaaattga tgaccgccta ttgtgaacgt 300
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acaggtggtt tcttctatcg gtttctattc atttaaataa tcacactgta ttgttcttgt 480
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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<210>315
<211>822
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>315
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<220>
<221>修饰的碱基
<222>(1641)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>323
tgaaagtcaa cattggtgaa gagtagtact gtccaacgga gcatgcgcag tgcgaaaaaa   60
gcacttgtat aaataaaacg aaagtctgcg atcacttctt ggctagtgct tgaaatttca  120
gcatggctga caaaagacta tggctgtgtt gttttttatt attgacaatt gcttacgctc  180
aagatgaaga tgatgacgat tcaggggaac cacagatcga ccagctgtgt gaaaacaggc  240
ctgctgatga atattttagg ttaagcactg atggagactg cagagaagtt gtaaggtgtg  300
atctcaattc agatcttaag ggcggtactc gattggcagc ggtaaaatgt ccgacaggac  360
ttgcttttga tcttttccga caaacttgcg attggaaagt caatgtcaaa aattgtgata  420
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aaggaaagct gatgtgtggt aatgaagaat gtatcgacaa agatcttttc tgtaatggaa  540
agccagactg taaagatgaa tcagacgaga atgcatgcga tgttgatagt gatcccaacc  600
gtgcacctga ctgtgaccca actcaatgtg taattccgga ctgtttctgc tcagcggacg  660
gaactagaat tcctggcgcg ctagaaccag caaatgtacc acaaatgata accatttcgt  720
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gacttaatcc aaatggttgc caaattaaag gaaatttctt cgtttctcac aaatacacaa  840
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aattctttat ttatgattca tcaattacag cctctcttgg acgtgtccca atctggcctt 1140
atactttata cttcaggatg ccacataagt gcaacggaaa tgcccacaac tgtcccagca 1200
gaagccatcc cgtttgggaa atagtcatga acgaattgga cagacgtgat gatcctactt 1260
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ttattaaatt cattgaagat atgttggccc gaaatgatgt ttatttcgta acaaacagtc 1500
aagtcatcca atgggttcag aatcccacag aactcagtgg attaagagac ttccaagaat 1560
ggaaagaaaa gtgtgacatt aaaggtcaac cttactgttc attgcccaat tcatgtccat 1620
tacataccag agaactgcca nggtgaactc tacgattgtt tacctgtatg gaatgtccca 1680
acaattatcc atggattttg gat                                         1703
<210>324
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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<210>325
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>325
gttgggacat tccatacagg taaacaatcg                                    30
<210>326
<211>1221
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(271)..(358)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>326
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acagacgtga tgatcctact tttgacgaat cactacctgg ttgccacatg gtagactcct  840
gttctaatgt tcaaactgga gatcaatttg caagactact cagacacaat ttcaacagac  900
atttgaattc aaaccgagct ccgttgggtc tcaacttcca tgcctcatgg ttaaagagta  960
agaaagaatt caaagaagaa cttattaaat tcattgaaga tatgttggcc cgaaatgatg 1020
tttatttcgt aacaaacagt caagtcatcc aatgggttca gaatcccaca gaactcagtg 1080
gattaagaga cttccaagaa tggaaagaaa agtgtgacat taaaggtcaa ccttactgtt 1140
cattgcccaa ttcatgtcca ttacatacca gagaactgcc aggtgaaact ctacgattgt 1200
ttacctgtat ggaatgtccc a                                           1221
<210>327
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(658)..(684)
<223>n＝a， c，g或t/u
<400>327
caaattgttt attacaagtt tattaccatg agagtgtata taatattatt tagcgtcttt  60
tgcttgagcc attgcgctcc acaggaaaac aaaaataaat ttccagaaca ataccaaggt 120
caacacatac caattgtaag gcaagaacaa gaagtgaatt atgatggcac ctacgaatac 180
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acaaaggaag aagctcaagt cgctcaaggt ttttcctcat atacttcccc cgaaggagta 300
aaaatagaac tccggtacat cgcagacgaa aacggtttcc agccaatcgg agaccaccta 360
ccgactccgc caccaatccc tgaggctatt ttacgagcgc taagtgtact gaaacagttg 420
ggtaatttga atgaagacca agaagaaaat aacaacatta gatgaagaga gagtgtgatc 480
aaatcgttat tttggataag tcccttcata tttcaaaatg gtaccatact aactatgaaa 540
tacttcaaag aattaagatc tttttaaaat acgtcaacac tttagagtag gaaacagcgg 600
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gcttataatg aaactaacat tttnctaaaa aatttcgccc ctgaaccccc ctttttatcc 720
ctttgaaggg gggtatttgt ggtttttgcg aaacgaagcc cttcctgtat acgttttaca 780
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<213>Diabrotica virgifera
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<213>Diabrotica virgifera
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<212>DNA
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aatcggagac cacctaccga ctccgccacc aatccctgag gctattttac gagcgctaag 300
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<210>331
<211>731
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>331
ttggtaaagt ttgttgtagt ttcagtgatc ttcattttga actctttttt tttttcaata   60
tgcgaactac gtactttaca ttagttgtaa tattagctgt agctgtacaa gaacatgcat  120
ctcaacaatt accagtaacg caagcttgct tgggatgtat atgtgaagct atttccaact  180
gtaatgtaac tagcggttgt tctggtgagg tttgtggacc atttcggatc acctgggcat 240
attgggcaga tgctggaaag cccaccgtga aaggagtatc accagaagac aataatgcat 300
atggatcttg tgctactgat acgtattgtt ctgcattagc tgttcaagga tatatgaata 360
aatttcaaca ggattgcaat ggtgatggta aaatagactg tgacgattat gcaagtattc 420
acacgcatgg tggatatggc tgcaaaggaa ctaatctacc acaacctttt ggaaatcgat 480
attatcaatg taaagagata gttggacgta gaccagagta atgttggagt aaccccagga 540
ttgagaacag gaagattgat agaaacgcat ttactactct atgaattttg ttggatgatt 600
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>333
gtttctatca atcttcctgt tctcaatcct gg                                32
<210>334
<211>450
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>334
gcatctcaac aattaccagt aacgcaagct tgcttgggat gtatatgtga agctatttcc  60
aactgtaatg taactagcgg ttgttctggt gaggtttgtg gaccatttcg gatcacctgg 120
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aataaatttc aacaggattg caatggtgat ggtaaaatag actgtgacga ttatgcaagt 300
attcacacgc atggtggata tggctgcaaa ggaactaatc taccacaacc ttttggaaat 360
cgatattatc aatgtaaaga gatagttgga cgtagaccag agtaatgttg gagtaacccc 420
aggattgaga acaggaagat tgatagaaac                                  450
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<212>DNA
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<400>335
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ttgcacaaag aggaacacat cgattattac gcaccagcca agtattcctt caaatatgga 300
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gtgttatatt aagtttaagg acgtaatggt ttgtaaataa gcgaactcaa agattaaagt 720
agtatctttt aaaattattg gagaaaataa gaatttttgt ttgtaagaaa aagtatcatc 780
atcaactata tttttttata acacttttaa cattttggga acgtaatatt cgaatttata 840
cactcacaga caaaaatctt gcatattttg aaattatg                         878
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<400>336
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<210>337
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>337
ggtgttccag ttgatactgc ggtaaaac                                    28
<210>338
<211>560
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>338
ggtgttaaga caggatgggt ttcggtcaaa aaattctagt ccctctagtc cttatagaaa 60
tgtccctact ggttacatcc agaataatat atgaccatca gcaagaagat aatcacgaag 120
ggcaacaagt tcaatacacc aattactatg gtcacgaaga gtctgccaca acagcacatt 180
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tcgattatta cgcaccagcc aagtattcct tcaaatatgg agtcaacgac taccacactg 300
gcgatataaa aagccaacac gaatccagag acggagatac tgtcaaaggc caatacacac 360
ttgtagaacc cgacggatct atcagaactg tagactacac tgctgacaaa cacagtggat 420
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cgcagtatca act gaacacc                                            560
<210>339
<211>831
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(807)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>339
ctcagttttg tcgacggtgt tgatcgaaga cgagtcatga aatttttgat tgttgccgca 60
ttggtgtttg gagcctgttc ggcagaacca cagaggcggc ctcattccta ctatgacaac 120
caggctgaac aagacacaaa cgtcccacaa aactaccaag ataactcaga tcaataccaa 180
cagaattctg tccaacaaaa cccaccgcaa catcaggaaa aatcgcaata tgaaccacga 240
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caataccgac cggcacaaca ggagtaattt tactctttat ttatagttta gcaccatcat 720
tctgtgattt tgtcgtcatt tctatagaat atcttctgta cagactgaat aagattgata 780
atacactgtg gaaaaaaaat tgataanaat caataaaaat ctttttacac a          831
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<213>Diabrotica virgifera
<400>341
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>342
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agatcaatac caacagaatt ctgtccaaca aaacccaccg caacatcagg aaaaatcgca 180
atatgaacca cgagtaaaag aaactatcaa attcatacca attatcagat tcgataaaga 240
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ttagcaccat cattctgtga ttttgtcgtc                                  690
<210>343
<211>633
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>343
caacactatg ttctctaaaa ttttgtcagt gttagccttc acagctttag cacaagctgg 60
cgttttagac tacagtcacg gccatgctac ctcatatgct tcctcaaacc taggtggttc 120
agaacatgga catggatatt cagctccagt tttaagtcac gcatatgctg cacctgttgc 180
tcacggatat tctgctcctg ttctcgccca cggacattcc gcacatcacg atgtagatta 240
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tgcatgttga ttattgttac tgtatttatt gactttgttg attgaattac tatgtaatta 600
atttttgtac ataaaataaa tttaattgaa tat                              633
<210>344
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>344
ctaggtggtt cagaacatgg acatgga                                     27
<210>345
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>345
caggttttaa tgatggtaca atggagcgtg                                  30
<210>346
<211>421
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>346
ctaggtggtt cagaacatgg acatggatat tcagctccag ttttaagtca cgcatatgct 60
gcacctgttg ctcacggata ttctgctcct gttctcgccc acggacattc cgcacatcac 120
gatgtagatt acaacgctta tcccaaatac gaattcaact acggagttca agatggccac 180
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acagtagctg aacctgacgg tactcttcgt actgtccact acactgctga tgaccacaac 300
ggtttcaatg ctgttgttga aaaatctgga cacccagttc acccagctcc agctcatgga 360
cacggaaaag tactcctagc tgctcccgct gtccaccacg ctccattgta ccatcaaaac 420
c                                                                 421
<210>347
<211>698
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(14)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>347
aacatggcat tcanattagt tgctttcgcc gcattggtag cagtagctcg tgctggtgtc 60
atcggagaag cctactctgc accacttgcc tatgcagctc cagcagtagc taaggtagcc 120
tactcagccg ctccagctgt atcatactca agtgtgtcat cacctgtagc ttacgcagca 180
ccagctgttg ctaaattagc tgcacctgta tcttatgctg caccagcttt atcttacgct 240
gcaccagtcg ctaaagttgc ctactcatca gctccagctg tctcttactc cagtgtatcc 300
gcaccagtag cctacgccgc tgccccagcc tacgccaaag tagctgctcc agtatcgtac 360
gcagctccag ctgtttccta cgccgctcca gctctctcct atgccgcccc agcccttaaa 420
gtagctgccc cagtagctta tgccgctcct gttgccaaag cagtttacgc cgaaccatca 480
gcaccagcta actacgattt tggatatgcc gtaaacgacc cccacaccgg agatagcaaa 540
agccaacaag aatctcgcca cggtgatgtt gtacatggaa gctattccct tattgaagcc 600
gatggcagca aacgtaccgt agaatacacc gctgatgaac acaatggttt taatgcagtt 660
gtacacaagg aaccagccac agttgcggtt aaagcagt                         698
<210>348
<211>25
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>348
gctcgtgctg gtgtcatcgg agaag                                       25
<210>349
<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>349
gcaactgtgg ctggttcctt gtgtac                                      26
<210>350
<211>641
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>350
gctcgtgctg gtgtcatcgg agaagcctac tctgcaccac ttgcctatgc agctccagca 60
gtagctaagg tagcctactc agccgctcca gctgtatcat actcaagtgt gtcatcacct 120
gtagcttacg cagcaccagc tgttgctaaa ttagctgcac ctgtatctta tgctgcacca 180
gctttatctt acgctgcacc agtcgctaaa gttgcctact catcagctcc agctgtctct 240
tactccagtg tatccgcacc agtagcctac gccgctgccc cagcctacgc caaagtagct 300
gctccagtat cgtacgcagc tccagctgtt tcctacgccg ctccagctct ctcctatgcc 360
gccccagccc ttaaagtagc tgccccagta gcttatgccg ctcctgttgc caaagcagtt 420
tacgccgaac catcagcacc agctaactac gattttggat atgccgtaaa cgacccccac 480
accggagata gcaaaagcca acaagaatct cgccacggtg atgttgtaca tggaagctat 540
tcccttattg aagccgatgg catcaaacgt accgtagaat acaccgctga tgaacacaat 600
ggttttaatg cagttgtaca caaggaacca gccacagttg c                     641
<210>351
<211>977
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>351
attggaaata tagcaacatg gccgtcaaga ttaccttcag catccttata gcagttctat 60
tagccagaaa cagggtcgat gcctcaggag ttgcaccttt atttgctcca gcaccagtat 120
tagccccagc accagttcta gctccagctc cagttttggc caaagtttct gatgccacaa 180
ttgaccccaa tcctgcatat tcatttgcgt atgacgtgca ggatgcccta acaggagatt 240
caaaaggaca agttgaaagc agagccaacg gcgttgtaag aggacaatat caagtagcag 300
atccagacgg taccagaaga attgtagatt attacgccga tcctgtgcat ggattcaatg 360
ctgtggtcag aagagttcct ctaggtgttg cagttgctcc tgtcgtagcc aaagctgtag 420
ctcctgttgc tccaatcgct cccgtcgcta gatcattagt ccttcctgct ccagggcttc 480
cagttgctgc cgctcctgta ccagtagctc cagcattacc tttcgccgca ccagcagtag 540
caccagctct tccatttgcc gctgctccag ctgtagcacc agctcttcca ttcgcagctc 600
cagctgtagc accagcattg ccgtatgctg cagctccagc tatttctcca tacttaacca 660
gagctggatt cttcccagct ccagctccag ccgtagttcc tgctgctcca ggtcctgcat 720
acttgcctgc tgctccatca agattggttt caccctattc ggtagccgca cccttgcctt 780
caggtttgag gagtttagtg acccccttct cagcgggtcc tgctccacta gccgttggat 840
caggggtagc ggcgccgtat tggtaaaccc cggccgtgta ctaaatattg actgactata 900
tattttttaa gtagtttaca tttgttttat tgtttctagt atttttattg taaataaata 960
tcctatattt ttatctt                                                977
<210>352
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>352
caagattacc ttcagcatcc ttatagcagt tc                                32
<210>353
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>353
gtcactaaac tcctcaaacc tgaaggcaag                                   30
<210>354
<211>777
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>354
caagattacc ttcagcatcc ttatagcagt tctattagcc agaaacaggg tcgatgcctc 60
aggagttgca cctttatttg ctccagcacc agtattagcc ccagcaccag ttctagctcc 120
agctccagtt ttggccaaag tttctgatgc cacaattgac cccaatcctg catattcatt 180
tgcgtatgac gtgcaggatg ccctaacagg agattcaaaa ggacaagttg aaagcagagc 240
caacggcgtt gtaagaggac aatatcaagt agcagatcca gacggtacca gaagaattgt 300
agattattac gccgatcctg tgcatggatt caatgctgtg gtcagaagag ttcctctagg 360
tgttgcagtt gctcctgtcg tagccaaagc tgtagctcct gttgctccaa tcgctcccgt 420
cgctagatca ttagtccttc ctgctccagg gcttccagtt gctgccgctc ctgtaccagt 480
agctccagca ttacctttcg ccgcaccagc agtagcacca gctcttccat ttgccgctgc 540
tccagctgta gcaccagctc ttccattcgc agctccagct gtagcaccag cattgccgta 600
tgctgcagct ccagctattt ctccatactt aaccagagct ggattcttcc cagctccagc 660
tccagccgta gttcctgctg ctccaggtcc tgcatacttg cctgctgctc catcaagatt 720
ggtttcaccc tattcggtag ccgcaccctt gccttcaggt ttgaggagtt tagtgac    777
<210>355
<211>1176
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>355
aaatctatca aacttttatt tatttagatt caaaatacga ttatttatac attaacgtta 60
ttaatccatg ggtattcgtc tggacaagga acacacgcgt ccatgtttct atcctctgtt 120
ccttttttaa gtctgcaggt gtaaggctca caactggctc catcgggcgc gtcagcagtt 180
ttaaaatcgc taattttaac gggatttttt ataaaatcta ggacctgttt ttgtgagacg 240
aagaaggtat cttttgcttc acgtgcaact gtgttttcca agaattttcg aagcccatcg 300
aagctggtgt cagtttgttc aaaccagtat gagttgatca tcaaatttat gggagttcta 360
gatttacttc taattccttc aatttgatca tccaaatatt tggcgatttc atcaacacta 420
ccttctattc cacaagtagc cagtgaattg cattctgtac catttggtga agttaaatcg 480
tttattggca gaatccaata acctgggaaa gcttcgttag gacattctgc gcccaaaaga 540
cattgttctg ttgattgata atccaatgta tagggaaata atcttcttga tggcaaagag 600
ggccatgaac tatcatatgc caattctgat gctatatagg cctcaatgga agtgtttcct 660
gcaagttgta gttggggagt tctgactcca ataatagctt cagctggtat gttggcataa 720
gtacttataa tttgcttttg gcctttaaat tcttttgtta gtgtgtctag agttgcatat 780
ctccagtaat tttgtctaaa atccttcgta attgagtgca caccaatttc aaatccaaag 840
ttgtacaaat cattaactct ttgatagctc gtatactcat gtggtacaaa gaatgttcca 900
ctaattggct tatcatctgg attatatata tttccgagca atgtaatcca actgttgtcg 960
tagatgtgtt gtgtaacagc ttcatcaaat gttaaactaa tcagctgagg atactctgtg 1020
agatctccac ctagaggtga cacttgacta gaacatctac aattgttgcc gatcgtacaa 1080
gaatcagact cacacggttt tgctacatca tttgcaatcg cactatcgaa tgctaaagta 1140
gctacgagaa ctaaaatcaa gcactggaac gttgcc                           1176
<210>356
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>356
gcaaatgatg tagcaaaacc gtgtgag                                     27
<210>357
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>357
ggtattcgtc tggacaagga acacacg                                     27
<210>358
<211>1043
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>358
ggatcgtctg gacaaggaac acacgcgtcc atgtttctat cctctgttcc ttttttaagt 60
ctgcaggtgt aaggctcaca actggctcca tcgggcgcgt cagcagtttt aaaatcgcta 120
attttaacgg gattttttat aaaatctagg acctgttttt gtgagacgaa gaaggtatct 180
tttgcttcac gtgcaactgt gttttccaag aattttcgaa gcccatcgaa gctggtgtca 240
gtttgttcaa accagtatga gttgatcatc aaatttatgg gagttctaga tttacttcta 300
attccttcaa tttgatcatc caaatatttg gcgatttcat caacactacc ttctattcca 360
caagtagcca gtgaattgca ttctgtacca tttggtgaag ttaaatcatt tattggcaga 420
atccaataac ctgggaaagc ttcgttagga cattctgcgc ccaaaagaca ttgttctgtt 480
gattgataat ccaatgtata gggaaataat cttcttgatg gcaaagaggg ccatgaacta 540
tcatatgcca attctgatgc tatataggcc tcaatggaag tgtttcctgc aagttgtagt 600
tggggagttc tgactccaat aatagcttca gctggtatgt tggcataagt acttataatt 660
tgcttttggc ctttaaattc ttttgttagt gtgtctagag ttgcatatct ccagtaattt 720
tgtctaaaat ccttcgtaat tgagtgcaca ccaatttcaa atccaaagtt gtacaaatca 780
ttaactcttt gatagctcgt atactcatgt ggtacaaaga atgttccact aattggctta 840
tcatctggat tatatatatt tccgagcaat gtaatccaac tgttgtcgta gatgtgttgt 900
gtaacagctt catcaaatgt taaactaatc agctgaggat actctgtgag atctccacct 960
agaggtgaca cttgactaga acatctacaa ttgttgccga tcgtacaaga atcagactca 1020
cacggttttg ctacatcatt tgc                                         1043
<210>359
<211>649
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>359
ctattattca gatgtgccac aggtgaaaat tggcctagca taatgttatc gtgtgtgaaa 60
ggcaagatgt gtgacgaaaa ttcgggaaaa gacggacacc agtgtggtca caatatagct 120
tatgcctatt ttgtgtcatt tatattcttc tgttcgttct tgatgttaaa cttgttcgta 180
gccgtcatta tggacaattt tgattattta acacgtgatc cttccatatt gggtgctcat 240
catttagacg aattcgttag aatttgggca gaatacgatc caaatgccac aggaaaaatc 300
cactacagcg aaatgtacga catgttgaaa aatatggatc cgccactagg ctttggaaac 360
aagtgtccta atcgattagc gtataagaaa ttaattagga tgaacatgcc agtagacgac 420
gatgggaaag ttaattttac tacgacattc tttgctctcg tcagagaaaa tcttagcatt 480
aaaatgcgaa cagctgatga aatggaccag gccgatgacg aactcaaaga gacaatcaaa 540
aacatctggc cgatccaagc caagaacatg gtggagctgt tggttccacc gaccaaccag 600
ctcaccaccg gaaaatgtcc gtcggcaagt tatacgccgg tcttctgat             649
<210>360
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>360
ctattattca gatgtgccac aggtgaaaat tg                               32
<210>361
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>361
cagatgtttt tgattgtctc tttgagttcg                                  30
<210>362
<211>547
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>362
ctattattca gatgtgccac aggtgaaaat tggcctagca taatgttatc gtgtgtgaaa 60
ggcaagatgt gtgacgaaaa ttcgggaaaa gacggacacc agtgtggtca caatatagct 120
tatgcctatt ttgtgtcatt tatattcttc tgttcgttct tgatgttaaa cttgttcgta 180
gccgtcatta tggacaattt tgattattta acacgtgatc cttccatatt gggtgctcat 240
catttagacg aattcgttag aatttgggca gaatacgatc caaatgccac aggaaaaatc 300
cactacagcg aaatgtacga catgttgaaa atatggatcc gccactaggc tttggaaaca 360
agtgtcctaa tcgattagcg tataagaaat taattaggat gaacatgcca gtagacgacg 420
atgggaaagt taattttact acgacattct ttgctctcgt cagagaaaat cttagcatta 480
aaatgcgaac agctgatgaa atggaccagg ccgatgacga actcaaagag acaatcaaaa 540
acatctg                                                           547
<210>363
<211>677
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>363
caataggtat ggcctctgcg aaagatacgg ctacgttctt tactcacggc acctgtcaac 60
atttcgagca ggtcctcaag ttatatccac aagcccttcg attgaaagct gatagaaaag 120
ccaaaaagcc cgaggaactg attaaattag acaattggta tcagaatgaa ctaccgaaaa 180
ggatcaaaag tcgtggcaaa gatgcccact tagtacacga ggagttggta caatgcatga 240
aatggaaaca gaccaggggg aagttcttcc cccaattatc gtatttggta aaggttaaca 300
ctcctagagc tgttatggca gaaacgaaga gagcctttag aaaattgccc aatcttgagt 360
tggcgatgtc agcgctctca aatttgaaag gagtcggtac cacaatggcc tcagcattac 420
tggcggctgc ttgtccagac agcgccccct ttatggcaga tgaatgtctg atggccatac 480
cagacatcga aggtattgat tacaccacca aggagtacct gaaattcgcc aaccacatca 540
aatccgtcgt cgagagatta aacaaggccg cagaagaaag gtcagaggct gtacgttggt 600
cgccacacaa ggacgagtta gctctttgga cacctacgtt gtctccgaac acaaaccaga 660
gttgctctct agtattt                                                677
<210>364
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>364
gttctttact cacggcacct gtcaaca                                     27
<210>365
<211>24
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>365
ctaactcgtc cttgtgtggc gacc                                        24
<210>366
<211>587
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>366
gttctttact cacggcacct gtcaacattt cgagcaggtc ctcaagttat atccacaagc 60
ccttcgattg aaagctgata gaaaagccaa aaagcccgag gaactgatta aattagacaa 120
ttggtatcag aatgaactac cgaaaaggat caaaagtcgt ggcaaagatg cccacttagt 180
acacgaggag ttggtacaat gcatgaaatg gaaacagacc agggggaagt tcttccccca 240
attatcgtat ttggtaaagg ttaacactcc tagagctgtt atggcagaaa cgaagagagc 300
ctttagaaaa ttgcccaatc ttgagttggc gatgtcagcg ctctcaaatt tgaaaggagt 360
cggtaccaca atggcctcag cattactggc ggctgcttgt ccagacagcg ccccctttat 420
ggcagatgaa tgtctgatgg ccataccaga catcgaaggt attgattaca ccaccaagga 480
gtacctgaaa ttcgccaacc acatcaaatc cgtcgccgag agattaaaca aggccgcaga 540
agaaaggtca gaggctgtac gttggtcgcc acacaaggac gagttag               587
<210>367
<211>882
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(792)..853)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>367
ggagaaacta acatcgttga caaccatggc ggataaagaa aagaaggtca agaagaagaa 60
gaaggaagag ggcgaagcac ctgctgccgc tcctgccccc gccgaaacca ggtcctcctc 120
aaagagttcc tccaagaaag ccaaaaggtc tggttccaat gtcttctcca tgttttcgca 180
atctcaagta gctgaattca aagaagcttt ccaacttatg gaccacgaca aagatggcat 240
catctctaag agcgatttga gggccacctt cgatgctgtt ggtaaactcg ccagtgagaa 300
agagctcgac gagatgatca acgaagcacc cggaccaatc aacttcactc aattgttggg 360
attgttcggt acccgtatgg ctgattccgg cggtactgac gatgatgaag ttgtcgtcaa 420
ggctttcaga tcctttgacg aaaacggcac cattgacgga gacagattcc gtcatgccct 480
catgacctgg ggagaaaaat tcaccggcaa agaatgcgac gacgccttcg atgccatgga 540
catcgacgac aacaacagga tcgataccca ggcacttatc accctcttaa cagcagccga 600
gaaggaagaa ggtgaagaag gcgaagcagc ataaacacca tcataactta taacagaaag 660
tcaatgtaaa tcttcacggc taccgtgtgg ttccactaag acgaaaacat caattcggat 720
acatctaagt gtggtgtgtt tcttatataa ttccaatgaa cacataagaa aaggtgtact 780
tatatgtgta tnttattatg tatttgtttt taagtttatt tttattcagt tgctttacca 840
tcacgcgact canaagaaat aatatattat tttttgtttc at                    882
<210>368
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>368
ggcggataaa gaaaagaagg tcaagaag                                    28
<210>369
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>369
cacaccacac ttagatgtat ccgaattgat g                                31
<210>370
<211>711
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(631)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>370
ggcggataaa gaaaagaagg tcaagaagaa gaagaaggaa gagggcgaag caccagctgc 60
cgctcctgcc cccgccgaaa ccaggtcctc ctcaaagagt tcctccaaga aagccaaaag 120
gtctggttcc aatgacttct ccatgttttc gcaatctcaa gtagctgaat tcaaagaagc 180
tttccaactt atggaccacg acaaagatgg catcatctct aagagcgatt tgagggccac 240
cttcgatgct gttggtaaac tcgccagtga gaaagagctc gacgagatga tcaacgaagc 300
acccggacca atcaacttca ctcaattgtt gggattgttc ggtacccgta tggctgattc 360
cggcggtact gacgatgatg aagtcgtcgt caaggctttc agatcctttg acgaaaacgg 420
caccattgac ggagacagat tccgccatgc cctcatgacc tggggagaaa aattcaccgg 480
caaagaatgc gacgacgctt tcgatgccat ggacatcgac gacaacaaca ggatcgacac 540
ccaggcactt atcaccctct taacagcagc cgagaaggaa gaaggtgaag aaggcgaagc 600
agcataaaca ccatcataac ttacaactga nagtcaatgt aaatcttcac ggctaccgtg 660
tggttccact aagacgaaaa catcaattcg gatacatcta agtgtggtgt g          711
<210>371
<211>2918
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>371
gtagagttga ggaagatgtg caaagtgttg aaaagtttat gtacatgaat tgtagaaact 60
aattgtttat tgtgtatcat tcgaattcag tttcaaaatt aaaagtgtgc tagtggagaa 120
aactaaacga taacttctgt ttatactgtt gtttttatcg tttaacaatg gctctctttc 180
ttctaggttt gttgttctgc ctatctagtc ggatctctgc cagtggtttc tacgaaatca 240
gtaacattga cttctataat tctgttttta cagattctct tgattggaga ttgttacagg 300
agctatcaaa ccagtataaa aacgtagtga tatctcccat cagcctaaaa atcatattat 360
ccctattata tcaaggatct accggacaga cagaaaggga attccaaaca cttttaaatt 420
atcaaaataa agaatatgtc aggaacaatt acagccaaat tgtcgctgcc ctttataatg 480
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ctaactttga caaacaggaa aaggctagta aagatattaa ttcgtgggtg gaacagctta 660
ctcatggtaa agtgaagaaa atagtcaatg ctgatgatct gtcgcaagca ctaatgataa 720
ttaccaatgc catttacttc aaaggaacat ggactcgtaa atttgataaa aatagatcaa 780
cgcttggaaa cttctataca tctcctgata atataagatc tagcagaaac ttaaaattag 840
ttcaatacat gactaccact gacgaatttc tttattacga ggacagatct ttggatgcga 900
aaattgtcag gttggaatac aagggaagtg actatgccat gtatatagtc ctaccgaaca 960
ctttgggagg attaagcagc cttatcaaaa atgtggacat aaacaaaata ggaactataa 1020
agttccaaat gacacaacaa gttgttgagg ttactattcc aaagtttaag ttcaattttg 1080
acatcaagtt gggaaagatt cttcaaaagt ttggactacg cgaagcattc caaaacacgg 1140
ccagttttac aggcatcgtg caaaccaaca ggaccttaag aaggagtcta tacgtatctg 1200
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gttttaaatc atcattaact acctgaccag gtccttgtga gcaaggtcct ccaacaaata 1140
gcataactcg ggcgccagta ttggaatatg tacattctaa caaaccaatg gcaatcgata 1200
aagctacacc tgtagatctt aaataccttt taccctgatg aacaggccaa ggatctttct 1260
gttgttctcc tattaggtct gttagattca tatcgcattt ggatacaggt tgtagaaacc 1320
tgcttcctgg tgcaacaaca gtaggttgca tttgcccagg tcttagaggc tgccctggct 1380
gttgaggggc ttgctgacct aaagccactt tgcctattcc cagcatttct tgaacctgtt 1440
tagcactaag atcttttgta cctctgaaca catatgactt actacaacct tcagtgccaa 1500
gttcatgaac ttgaaccatt ttcccaaatg ttattagtcc tattaacgca ttaggtggca 1560
acaaactaag ggacatttgc aatgagtctt tcagggaacc cagttcttca tcatccatgc 1620
aggtgtcaac aacatacaaa aatattggtg gtaaacattg agctctagtt attgtgtatt 1680
caatggtgga aaacataggc atcaattccg ctggttgatg ttgttctgaa atagcagcat 1740
attgaggtgg aaatggattt ctctggaaac aaaagttgca tacccagagt tttgctcgat 1800
aatctacctg acacagtggg tttaatattg ctctacaagt atttctagta cataaaacag 1860
ggtcatattg tattggtgga agatccagac gttcctttat aggctggtac agacaagcta 1920
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taatcccatc tcgatcttca ttttgttgta tatactcttc atatgtgctc atttttgaag 2040
attacaagtc ggaattccct aaggaaattc ctcaatatat attattagga ttctatcatg 2100
taaataacac tattattgag ctcctaaaaa ttacacctaa ttgtttcaga atttgaac   2158
<210>392
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>392
ccgacttgta atcttcaaaa atgagcac                                    28
<210>393
<211>33
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>393
gctaacgcat cataatgttt aatacctttc ttc                              33
<210>394
<211>1054
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(234)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>394
ccgacttgta atcttcaaaa atgagcacat atgaagagta tatacaacaa aatgaagatc 60
gagatgggat tagatttacc tggaatgtat ggccttcaag cagaattgaa gctacccgtc 120
tcgtagtacc cttagcttgt ctgtaccagc ctataaagga acgtctggat cttccaccaa 180
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tgtcaggtag attatcgagc aaaactctgg gtatgcaact tttgtttcca gagaaatcca 300
tttccacctc aatatgctgc tatttcagaa caacatcaac cagcggaatt gatgcctatg 360
ttttccacca ttgaatacac aataactaga gctcaatgtt taccaccaat atttttgtat 420
gttgttgaca cctgcatgga tgatgaagaa ctgggttccc tgaaagactc attgcaaatg 480
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caccaggaag caggtttcta caacctgtat ccaaatgcga tatgaatcta acagacctaa 780
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<210>395
<211>910
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(833)..(893)
<223>n＝a，c，g或t/u
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catacatttg tggaaacaga ttcagtacgg tatgtttatc aacccctaga gaaactgtat 300
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<212>DNA
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<400>398
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>399
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ttacaatcct ggaaaaaatc tttgtaagtt tcgataaaaa aggcttgttc aaatccaccg 1020
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<400>400
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<212>DNA
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<400>401
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<212>DNA
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<400>402
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taaagatgat gataataatg ggtgttattg gtcttgtaat cttaataatc atagtcatga 360
acttcatgta actcatgggc caaaaattcg ttcgaataat tggcatatac agaaaatcta 420
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gttggattga aataacgatt aggcaagttg g                                511
<210>403
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(818)
<223>n＝a， c，g或t/u
<400>403
gttcataaca gttaatcatt tattgtttga cttaacaaaa agtagaccta gagtgaccac 60
cattaaatgt aatggtcagt taacaaatgt agtgttcaca aattatgaaa aaaacctatt 120
actccttatg ttgccagaca acagagtctc aaaacaagaa atattgttgt taaataatga 180
aataattaga ttattaaaat tctgctatga aactattgac aaatgcttca taactgaaaa 240
atacctccca caagtagacc acttcttttc gaaatttttt gcaagaactc ttagtagtgg 300
tttgtggagc acagctcaac aatctctggc tttggaaaac ctagaatcaa aagcaaaaga 360
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tcctgaagga agaaggtatt tgctaatagt ggaaagtgga aaagatctgt tagcggtaat 780
aatggaagct gggggttgta cagaaccatc tgaagaanac atgggtcctg atgcattcta 840
cgtagaagaa gcgcaagcta ctttagccca catccaagaa tt                    882
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<211>32
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<400>404
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cctctttcat tcaggatacc tgttggcttc acattttatt cacgaagatt tgatagatgt 480
cttttgtttc tgtaaacaac aaggattgtt tcatttatca aggacagaac ctataaaatc 540
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<213>Diabrotica virgifera
<400>407
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<213>Diabrotica virgifera
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tgagtctgct cggtatggta aacaaaggca ttagaagctg ttacaacaat aatgggcaac 60
atttttcttt tattataact gtctataaaa atgtttatta tttacttgtt gtggaactgt 120
agtttcctgg aatcagtcgg agtatgatat tatattttga aaggttggca acgttatgga 180
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cattttttta tacgatcgta ctaaaattgg tgctactata gtatgcggtc tacctgtgca 540
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aagagattat ggtgttgttc tgtagaccgc aagctatagc agaaacgcga cggtagaccg 660
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ttacttttgt ttcttccggg atgctcaaaa accatcaaca cagtttgtat aggaactaag 180
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<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
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<213>Diabrotica virgifera
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gtacttgaag ctgatgctta caaaggccct caatatcaac ttacccattt tagaaattgg 660
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<400>425
ctccgtttct tatccgctgg taatct                                      26
<210>426
<211>453
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>426
ctccttggca agttcattgg tgccctaatc aatcacaata gggaacttgc acttttttgt 60
tttattatat aatattgttt agtttccttt aaaaataaga tttccaaaat ttcacgcctc 120
aaaatctcat aataacttag aagtacaaat ttaaaatctt ctatgtattt aaatcatttc 180
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ttctaacgtc tcatttaaat tacatacaat tttgtttact ttggagttca aaaacacagt 300
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atttattaga ttaccagcgg ataagaaacg gag                              453
<210>427
<211>1529
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(874)
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<400>427
gagatatttg tagtatagtt ttgctttgaa gattcattat aggtttttaa ttatgattaa 60
tgaaatgatg gaactatcga acaattagaa tctgtatatc tttaggcaaa tctgtaaata 120
atcattgtag ttattcttgg aactagtttg caactaagaa atataattta agactttttg 180
aacacagtca aaagaccatg actatcacag atgtggatta gtaccacttt aaatttgtta 240
ataaaacata gaatttatag aatagtttcc ccgttttata ccgcatatgc gactttagga 300
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gagtcgacct ggggcctatt taaaaatgtc tagttgttct tgccggcgct gggtctcgaa 480
cccaggtcta ccagcaagcg agtcagacat cctaccgctg aactacgccg gcccatacgt 540
agagtttata attatcttat atataataaa ggaatttgat taaaaaaggt aaaaatacat 600
tgtattgggt tgcttaggcc taaatacata tctcttccta ttagtaagtt acaaaatggt 660
gagattcgat catttttgtg ggatatgtag ttgatgaatt aagtagtaag tagtagttga 720
atacacgtta cattttctca acattgatta atacatttat ttttttccaa aataagaaaa 780
atttagctac taaaaaaata tatgctaaat attgtttatc atcagctaaa agttaggaga 840
tctgttaaat cctataaaat atgaaaacaa tganaatgtg ttgtttcggt aagtacatag 900
tttgcagaca actggacgat acaagggatc taataacttt tagcaattga taaattgaac 960
gaaaaaatca caatgtttaa tcaaaagctc aaacacaaga acacaaagtt tttatgatgt 1020
taaataaatg aagactttct accgttcaca cgaaaggcgc ttatcctgat ctggttacat 1080
tttcttaaga taaaaccgtg ggtacataat atacacaatc aaacttatat ggaatcacca 1140
tgtatttcaa accaatattt atttcttttg aaaaaaactt gttaccaggc gcggatacag 1200
gggagggtca aggggtctat agacccccct attgtattta gtctataaga atttttttat 1260
tatttattat ttttttctgt caactctaaa ctttaagcca ccagtagaac actaaaatta 1320
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ttttctgaaa aataaattga agccgcattt gtttgggtac cgatggagcc gtaaacaact 1440
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<210>428
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>428
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>429
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<210>430
<211>731
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>430
gtcaaaagac catgactatc acagatgtgg attagtacca cttcaaattt gttaataaaa 60
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<210>431
<211>1208
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>431
atattatttg ttctgtgaag cagctttgtt aggaaaaatc aaaatgtttt cagctacgtt 60
taaactgtta tttttgataa cagtaatatt ggtatccctt tcgccatcca gtgcagacaa 120
ttataacaaa tgtcctgaaa ccagccatat acgatcccta atttaccaga atacattgaa 180
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cattactgat tgtaagttaa tcatttcaga ccttcacgta aactatgttg ttacaaaaac 540
gcatattagg acaataatcc aaattattag acaataaata ttaggcaaga gaaattaaac 600
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<212>DNA
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<400>432
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<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>433
ctccaaaaca ctgaacatat taggtggctc                                  30
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<211>752
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>434
cctttcgcca tccagtgcag acaattataa caaatgtcct gaaaccagcc atatacgatc 60
cctaatttac cagaatacat tgaaggggag agttatacat gtacgcattc caggcacagg 120
tttctttgaa gctccaatca cttgtcttca ggttaccgat ataaatgaaa gtttcagtac 180
accagttgta gaagaaggtg gatatggaag ggagtacgta gttttacgta ttgacccagt 240
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ctatcctcaa taaatgttcg gtataaatgt ttaagaaatt cgagtagccc ctttaaagat 360
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cgtaaactat gttgttacaa aaacgcatat taggacaata atccaaatta ttagacaata 480
aatattaggc aagagaaatt aaacgagttt ctagttttaa gtacaaacaa gtgaagttca 540
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<210>435
<211>1290
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>435
gttccagagg agtgcagaat gttttattag tgaagccttt aaacaggttt ttgtgtgaat 60
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<212>DNA
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tac                                                               1023
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<212>DNA
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<400>440
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<221>修饰的碱基
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
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<223>n＝a，c，g或t/u
<400>447
ccaaattcag atttggttgg aggagataat tttgaagcct ctaaatattt aaggatactt 60
caacaggcaa tgaatgaaga tgaagaagga ttagtagaaa gacatagagg aatctatgga 120
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tattattaat aatatgaaac cttgatgtct gtaggtaaat ggtcttaatg atttaatggt 840
ttttcataat ncatagtccn aagtcacaaa atagcatata                       880
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<211>30
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<213>Diabrotica virgifera
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ggcaat gaat gaagat gaag aaggattagt                               30
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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<213>Diabrotica virgifera
<400>450
ggcaatgaat gaagatgaag aaggattagt agaaagacat agaggaatct atggattgaa 60
agtagtgaaa aaatcaggtg aaactggata ttgggtgatc aatactaagg taggcaatgg 120
acagatagtg tttaatggaa aagacaagcc agatgttact ttcattgtta aggaagagga 180
tgttttagaa ttattgtctg gcaaaattcc accacagaag gcatttttcc aaggcaaagt 240
aaaaattcaa gggaatatgg gtgtagccat gcgattaata gaattacaga aaacagccgc 300
tgccaaaatt gaggtactta gggctaagtt ataaattacg tttataggta attttcttta 360
tctttctgta ttgtgtacac taaggttttg ttttatcttt ttgggagtat atattatata 420
agtgacaaaa catactttct tgttttacac atcacttcct gtaaaaatat tgtacacgct 480
gtacaatgag tcctttatgt aaacaaatat gtaagtataa atacttgctc tgttatctcc 540
tttttattac atatttttgt tgataacttc ggaatctatt gaccttttgt gaaatacttt 600
caatattttg ttaacagttg aagaccagtg taatttttcc tgagatacta aattcaaata 660
tttttgtttc aaacaagttt gttccgtaaa taaactagac atgtatatca ttgtatatta 720
ttaataatat gcaaccttga tgtctgtagg taaatggtct taatgattta atgg       774
<210>451
<211>576
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>451
aaattatcgg catatattat gcaggataac caactacatg ctaatctaag agtggatgaa 60
gctatggctg tcgcagctgc acttaaaatt ggcgccaaaa gtccaaaaga tcgagaagat 120
atcattaacg aaatcctaga cacacttgga ctgctggatc ataagaaaac aatgacaagc 180
gggttgtcgg ggggccaaaa gaagagattg tcaatcgcct tagaattagt tagtaatcct 240
ccagttatgt ttttcgatga acctactagt ggattggatt cttcatcatg ttttcaatgt 300
atatcactgt tgaaaacctt agctaaaggt ggaagaacta taatatgtac tattcaccaa 360
ccttcagcta gactgtttga aatgttcgac caactttata cactcgctga tggtcaatgt 420
gtttaccaag gttctacgac attcttggtg ccctttttgg caagtctgca gttacagtgt 480
ccttcatacc acaatccagc ctcctatatt atagaagtag catgtgggga atatggagat 540
cacacgagaa cgttagttaa cgctatagaa aatggt                           576
<210>452
<211>34
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>452
ggataaccaa ctacatgcta atctaagagt ggat                             34
<210>453
<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>453
ggaggctgga ttgtggtatg aaggac                                      26
<210>454
<211>482
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>454
ggataaccaa ctacatgcta atctaagagt ggatgaagct atggctgtcg cagctgcact 60
taaaattggc gccaaaagtc caaaaagatc gagaagatat cattaacgaa atcctagaca 120
cacttggact gctggatcat aagaaaacaa tgacaagcgg gttgtcgggg ggccaaaaga 180
agagattgtc aatcgcctta gaattagtta gtaatcctcc agttatgttt ttcgatgaac 240
ctactagtgg attggattct tcatcatgtt ttcaatgtat atcactgttg aaaaccttag 300
ctaaaggtgg aagaactata atatgtacta ttcaccaacc ttcagctaga ctgtttgaaa 360
tgttcgacca actttataca ctcgctgatg gtcaatgtgt ttaccaaggt tctacgacat 420
tcttggtgcc ctttttggca agtctgcagt tacagtgtcc ttcataccac aatccagcct 480
cc                                                                482
<210>455
<211>759
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>455
cccacgcgtc cggtactaca tgtatggtac tgctttagtt gtgttttgac agattcgttc 60
aataatatca tttcttttat ttatttatat attaatcttt gaagatgttg tctggtggct 120
atatattgga attgtgcaat gttttttatt ctggacaggt aaaaaagcgc tctgttcttc 180
aaagaatggt tggcaacatt aaaactgcag taatcttaaa agatgtgtcc atgttggtac 240
attctggtga ggtcctagca gtgctgggat caaaaggtag tgggaagaaa gccttacttg 300
atgttatttc aagacgagca caaggcccta taagaggaca gatatatctg aacaaccatc 360
cagtcagtat gggtttattc cagcagaaat gtgcatatgt tacacataaa tgtgatttta 420
taccaggact aaatgttgaa cagacgttgt attatactcc gactaagttc actggctatt 480
taaaaatgtc taaagtaaag caagtgatag cagatttagc attgtcacaa gtcgctaaaa 540
aatgcgttga agatttgaca aaaagtgaat acagaagact gatgattggt gtccaactaa 600
tcaaaaaccc agtggtacta ttactagacg aacccacctg ggatctggac ccactaaaca 660
catacctaat aatttcaata ctttcaaatg cagctaaaaa gtatggaact gctataatct 720
tgacgatgga gaagcctaga tctgatgttt tcccgttct                        759
<210>456
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>456
ggtactgctt tagttgtgtt ttgacagatt cg                               32
<210>457
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>457
gcttctccat cgtcaagatt atagcagttc c                                31
<210>458
<211>710
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>458
ggtactgctt tagttgtgtt ttgacagatt cgttcaataa tatcatttct tttatttatt 60
tatatattaa tctttgaaga tgttgtctgg tggctatata ttggaattgt gcaatgtttt 120
ttattctgga caggtagaaa agcgctctgt tcttcaaaga atggttggca acattaaaac 180
tgcagtaatc ttaaaagatg tgtccatgtt ggtacattct ggtgaggtcc tagcagtgct 240
gggatcaaaa ggtagtggga agaaagcctt acttgatgtt atttcaagac gagcacaagg 300
ccctataaga ggacagatat atctgaacaa ccatccagtc agtatgtgtt tattccagca 360
gaaatgtgca tatgttacac ataaatgtga ttttatacca ggactaaatg ttgaacagac 420
gttgtattat actccgacta agttcactgg ctatttaaaa atgtctaaag taaagcaagt 480
gatagcagat ttagcattgt cacaagtcgc taaaaaatgc gttgaagatt tgacaaaaag 540
tgaatacaga agactgatga ttggtgtcca actaatcaaa aacccagtgg tactattact 600
agacgaaccc acctgggatc tggacccact aaacacatac ctaataattt caatactttc 660
aaatgcagct aaaaagtatg gaactgctat aatcttgacg atggagaagc            710
<210>459
<211>837
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>459
cttaaaaggg agagatctct tcgaggaaaa aaaagtaggt ctctattccg acgaaacgaa 60
agcagtgccc gcagcaatca ttatgcagtt tttgttattg tataagagga atctgctgat 120
aataaagaga tgttacggtc catcgctgaa cagagtattg gcccacattg ttattggtct 180
gatctttggc tatttgtata gaaacgttgg aagtgccgcg gatacagttt tagcaaatta 240
tgtatatttg tatggtactc ttttactcac agtatatact ggtaaaatgc ccgtaacttt 300
atcatttcct ctagaaatga agatactctc tagagagcat tttaaccgtt ggtataagct 360
aactccatat ttattgtctg tgatattagt tgaaattcct ttccaagtta tatgtacatg 420
gatgtacata gcagtatctt attcgttaac gaaccagcca ttagacttta ggttattctt 480
gtttgtcatt tttgtaacag cgtgttctct ctgtggccaa tccatgggat attttatagg 540
agccacaaca ccagtaaagg tagctgtatt catcgcccca gtgttagcct gcttcttatc 600
agtcttcggt ttttgcatca gagcaataga cacctctacc atgttcaaac cgatcttctt 660
catcagttac tttagagcag cattccaaag cgtcgtttat agtatttacg gctttaaccg 720
agagatattg gtttgcccaa tagaggagga atactgtcat tataaagatc ctcacaagtt 780
cctctcggaa atgaaatttt agatgtagat tttagttcaa attttatatt gattggt    837
<210>460
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>460
ggtctctatt ccgacgaaac gaaagcag                                    28
<210>461
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>461
cgtaaatact ataaacgacg ctttggaatg c                                31
<210>462
<211>673
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>462
ggtctctatt ccgacgaaac gaaagcagtg cccgcagcaa tcattatgca gtttttgtta 60
ttgtataaga ggaatctgct gataataaag agatgttacg gtccatcgct gaacagagta 120
ttggcccaca ttgttattgg tctgatcttt ggctatttgt atagaaacgt tggaagtgcc 180
gcggatacag ttttagcaaa ttatgtatat ttgtatggta ctcttttact cacagtatat 240
actggtaaaa tgcccgtaac tttatcattt cctctagaaa tgaagatact ctctagagag 300
cattttaacc gttggtataa gctaactcca tatttattgt ctgtgatatt agttgaaatt 360
cctttccaag ttatatgtac atggatgtac atagcagtat cttattggtt aacgaaccag 420
ccattagact ttaggttatt cttgtttgtc atttttgtaa cagcgtgttc tctctgtggc 480
caatccatgg gatattttat aggagccaca acaccagtaa aggtagctgt attcatcgcc 540
ccagtgttag cctgcttctt atcagtcttc ggtttttgca tcagagcaat agacacctct 600
accatgttca aaccgatctt cttcatcagt tactttagag cagcattcca aagcgtcgtt 660
tatagtattt acg                                                    673
<210>463
<211>660
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>463
ttcgtccgaa atcatctagt gtggttcgac tacgcgttta tactaagtaa tctgaagtgg 60
ctggacattc acggtaactt tattgaacat ctcgctaatt attacaagat tcaagacgta 120
atcagagtca aaactttaga tgctagtcat aatcgtatta ccgaaatttc tcctatgtct 180
attcctaata gtatagaact tttatttatt aataacaatt ttatcaaatc ggtgcaacca 240
aatactttcc tcgataaatc aaacttagct cgtgtcgata tgtatgctaa cgacatgaca 300
aatttagatt taaattctct gagaatcgct ccagttcatt cgaaccgttc cttaccagaa 360
atatatcttg gtggcaatac ctttcattgt gactgtacta tggagtggct acagcttatc 420
aacaacatgt cagcatccag gcagtatcct cgtgtaatgg acatggacaa cattgtatgc 480
aaaatgacac attctagagg tatgacacat atgccattaa atcaggcaaa acaaagtgac 540
tttctttgta actacgaaac acattggttt gctctttgcc attgctggga ttttgatgca 600
tgtgattgtg aaatgacttg tcctaataat tggacttgtt accacgatca gacgtggaat 660
<210>464
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>464
ctaagtaatc tgaagtggct ggacattcac g                                31
<210>465
<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>465
gcaatggcaa agagcaaacc aatgtg                                      26
<210>466
<211>543
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>466
ctaagtaatc tgaagtggct ggacattcac ggtaacttta ttgaacatct cgctaattat 60
tacaagattc aagacgaaat cagagtcaaa actttagatg ctagtcataa tcgtattacc 120
gaaatttctc ctatgtctat tcctaatagt atagaacttt tatttattaa taacaatttt 180
atcaaatcgg tgcaaccaaa tactttcctc gataaatcaa acttagctcg tgtcgatatg 240
tatgctaacg acatgacaaa tttagattta aattctctga gaatcgctcc agttcattcg 300
aaccgttcct taccagaaat atatcttggt ggcaatacct ttcattgtga ctgtactatg 360
gagtggctac agcttatcaa caacatgtca gcatccaggc agtatcctcg tgtaatggac 420
atggacaaca ttgtatgcaa aatgacacat tctagaggta tgacacatat gccattaaat 480
caggcaaaac aaagtgactt tctttgtaac tacgaaacac attggtttgc tctttgccat 540
tgc                                                               543
<210>467
<211>894
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(745)..(784)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>467
cgtaaataag attcttgtgt tattatttct tcctttttgc ttcggcaaaa gtgtagaagt 60
gacttttaaa gatgtcacgt tcaaaggctt tagtgttttt acagaaaagt tcaagaaaaa 120
gatcccatct ggaaacaaac tagcagattt tttgcccccg aaaactgttt atgatgccat 180
tgaaatgaag gaacaacata tacctgtact tgccaaaggc tcgttggcag atctagacca 240
gttggacgaa ttggttattg agtactgtgg tgttgaagaa gttgaatctg gagctatcag 300
taatgtacct aacctaagaa aactgtcact taaaggtaat gccatcaagt cgattgcaaa 360
ggacgtattt tcccatttag gaatatctac actagacctt agcctcaatc agatatcaac 420
aatccatcca caggcctttg acaacatgcc ggatctctta aacattcaac ttgctgacaa 480
ttttataacg caatggaatc cagaatggct caagaataca ccgctattga ccaggatctc 540
gcttcagaat aattccatag aaaagctacc agcccatgca tttaaaaaca tggtaggaga 600
taaaaagtat ggaaaaatag acctcactat taatctggta tttagtcata ataaaataag 660
tgagatagat cctgaagctt tcgcggatct cagcagaatt aacaacttgt ggttagataa 720
caatgttcta gaaagtttcg atganaacct tttatcggga ataaaagtta atgatttgag 780
actncacaaa aataatatca aatgtttaga tggtaatcta gataaaatac taaaagcaga 840
aacgaacaca tagattcgaa tccgtcgact gtaattgctt gagaagatca agga       894
<210>468
<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>468
gatgccattg aaatgaagga acaaca                                      26
<210>469
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>469
ctaaccacaa gttgttaatt ctgctgagat cc                               32
<210>470
<211>544
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>470
gatgccattg aaatgaagga acaacatata cctgtactta ccaaaggctc gttggcagat 60
ctagaccagt tggacgaatt ggttattgag tactgtggtg ttgaagaagt tgaatctgga 120
gctatcagta atgtacctaa cctaagaaaa ctgtcactta aaggtaatgc catcaagtcg 180
attgcaaagg atgtattttc ccatttagga atatctacac tagaccttag cctcaatcag 240
atatcaacaa tccatccaca ggcctttgac aacatgccgg atctcttaaa cattcaactt 300
gctgacaatt tcataacgca atggaatcca gaatggctca agaatacacc gctattgacc 360
aggatctcgc ttcagaataa ttccatagaa aagctaccag cccatgcatt taaaaacatg 420
gtaggtgata aaaagtatgg aaaaatagac ctcactatta atctggtatt tagtcataat 480
aaaataagtg agatagatcc tgaagctttc gcggatctca gcagaattaa caacttgtgg 540
ttag                                                              544
<210>471
<211>210
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>471
gagcgctgac ataaccaaaa agcgcaagcg ccaccacaca aaaaaccgtc ttcattttcc 60
tgagtcgaac gaacctttca caactcaccg tactaatggt actatggtac tagctagcga 120
atgccaaata caaacacggg ctctttgccg gcaaaagact tcttcctcac tgaagatatc 180
ttgtaagttc ttcctctttt caaacgggcg                                  210
<210>472
<211>25
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>472
gctgacataa ccaaaaagcg caagc                                       25
<210>473
<211>33
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>473
ccgtttgaaa agaggaagaa cttacaagat atc                              33
<210>474
<211>203
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>474
gctgacataa ccaaaaagcg caagcgccac cacacaaaaa accgtcttca ttttcctgag 60
tcgaacgaac ctttcacaac tcaccgtact aatggtacta tggtactagc tagcgaatgc 120
caaatacaaa cacgggctct ttgccggcaa aagacttctt cctcactgaa gatatcttgt 180
aagttcttcc tcttttcaaa cgg                                         203
<210>475
<211>1139
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>475
tatttttttt attcttaagt tactgaaaaa attttggcgt gaatacttat gatctttttg 60
tgaaaaagat cttactgtat attttaaata tgtaatttac ttaactcatt cgctgcctgt 120
caagaaaatg gaactcggct agggccgttc tgttaaaagg cgcctgactg attggcgcgt 180
gaatggcacc tgactgaagt aaccatatca cgcgctggag tgtgatcgtc agcgaatggg 240
ttaaatgaca agtggttata gatgtttata cagtctaaat atatacagtg agttaaatat 300
tgggtcgagc tctccgtggg taataataat tattggttca aaaggatcca aacttgtcac 360
gggttagctc tgccggacaa tagattcagt aaaacacagg tttaatttaa ataaaaatat 420
atttttgtaa tccaatacaa taaaataaca acaaaatagt attcaattct ccgactattg 480
tctccctttt ggcacccata tcgagccgct gttgatgaaa tcgggtctca agatatcgtt 540
ggtaagttct ctgcatagtc gaatgattca cattcaattg tcttgccaca tacctttggt 600
ttgctccatt ttccgggaat gtaaccatct gaacacactt tctatacttt ttcatcgtta 660
taaaaataga cttcactgtc aggaggccag tgtaccacga agatatctca gaaactcttt 720
agaagactac aacagttcac acagttctta aaaccatcaa ttctgcgaag cttcgttgat 780
tcgtaaataa cgattggcac ccatatcgag ccgctgttga tgaaatcggg tctcaagata 840
tcgttggtaa gttctctgca tagtcgaatg attcacattc aattgtcttg ccacatacct 900
ttggcttgct ccattttccg ggaatgtaac catctgaaca cactttctat actttttcat 960
cgttataaaa atagacttca ctgtcaggag gccagtgtac cacgaagata tctcagaaac 1020
tctttagaag actacaacag ttcacacagt tcttaaaacc atcaattctg cgaagcttcg 1080
ttgattcgta aataacgatt ggcacccata tcgagccgct gttgatgaaa tcgggtctc  1139
<210>476
<211>26
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>476
ctcattcgct gcctgtcaag aaaatg                                      26
<210>477
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrot ica virgifera
<400>477
gcagagaact taccaacgat atcttgagac c                                31
<210>478
<211>444
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>478
cgctgcctgt caagaaaatg gaactcgcct agggccgttc tgttaaaagg cgcctgactg 60
attggcgcgt gaatggcacc tgactgaagt aaccatatca cgcgctggag tgtgatcgtc 120
agcgaatggg ttaaatgaca agtggttata gatgtttata cagtctaaat aaatacagtg 180
agttaaatat tgggtcgagc tctccgtggg taataataat tattggttca aaaggatcca 240
aacttgtcac gggttagctc tgccggacaa tagattcagt aaaacacagg tttaatttaa 300
ataaaaatat atttttgtaa tccaatacaa taaaataaca acaaaatagt attcaattct 360
ccgactattg tctccctttt ggcacccata tcgagccgct gttgatgaaa tcgggtctca 420
agatatcgtt ggtaagttct ctgc                                        444
<210>479
<211>851
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>479
actttaacgc ctagtgtcga gtctcgtgtg gcatatttca acagatactc aaatattgtc 60
atctaagaag ctggaacagg gatagtcact acgggcataa ctgcacaagc ttgagaaggc 120
taaagaaacc taactggtgt cgcctgatac caggaattgg gtatactctc catctatatt 180
tgtttgcgcc tttcaagtag acttgcacct agtctcgttt ggcttctttc aatagatact 240
caaacctttt cgtctaagca ccacaaatgc acaccctttg gacatttttc ggccaatgtt 300
gagctctacc acggttttct gttctgttcc tattctattc ttgccccaca agaagctggg 360
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aaatatttta gtgttgggct tagatgctat ttcaagatta aattttcata gacaaatgcc 300
aaagacatta agttatttag aacaaattgg agccgtagaa atgatgggat ataataaggt 360
tggtgacaat acatttccca atctaattcc agcattaaca ggaaaaactg taaaggaaat 420
cgagaacgat tgctggccaa ctaaaacaca ccattttgat aaatgtccgt tcatatggaa 480
gagctacaaa caaaaaggat atgtaacagc tttcgacgaa gactcttctt gggtgggaac 540
atttaatcat ataaaaaacg gtttcaaaaa acaaccaacg gactatgctt tcaactattt 600
tgattttgag gctataagat tactgggaaa tactgggttg gaaactgttg aaatttgtca 660
aggagcaagg tgggtatata aagttcattt gaactactta tccaatttcg ttcgaacgat 720
ggaagataac ttactaaagt attttggctt tttctggcag aacagtatat ctcatgatga 780
tctaaattta cctagaatag gtgatgatca ttactactct atgtttaaat attttgggaa 840
aaatggttat ttcaatatta catttctctt cgttttgagc gaacattgga ataaaaaact 900
ggtaaaaata agaaagacat tcccagggca tggtgggaaa aaaagattac cgttaccttt 960
ttgtatattt ttcccaaatt ggtaataaaa aaacgatacc catcccggaa aattaaaaaa 1020
tttaaaaaaa aaaatttttt ttggcgttta acaacacccc tttttgtatt ttttattgga 1080
aaattttttt tttcttttgg ttt                                         1103
<210>504
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>504
ggagagaaga tcctgatgat gatgttgc                                    28
<210>505
<211>30
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>505
cgaacgaaat tggataagta gttcaaatga                                  30
<210>506
<211>691
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>506
ggagagaaga tcctgatgat gatgttgcag accataaagt aagatacagt gaagattgtc 60
aagcatttgt taatacgact gaagtaaaag aagagtttat aaaagttaca tgcagctaca 120
acaatcgtga tatttatact gatttatttg cttttgtccc tgtaaaaaac ctatcggaaa 180
atgtgaaaaa cgatctgatc caagacgagt cctctttaaa tattttagtg ttgggcttag 240
atgctatttc aagattaaat tttcatagac aaatgccaaa gacattaagt tatttagaac 300
aaattggagc cgtagaaatg atgggatata ataaggttgg tgacaataca tttcccaatc 360
taattccagc attaacagga aaaactgtaa aggaaatcga gaacgattgc tggccaacta 420
aaacacacca ttttgataaa tgtccgttca tatggaagag ctacaaacaa aaaggatatg 480
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tcaaaaaaca accaacggac tatgctttca actattttga ttttgaggct ataagattac 600
tgggaaatac tgggttggaa actgttgaaa tttgtcaagg agcaaggtgg gtatataaag 660
ttcatttgaa ctacttatcc aatttcgttc g                                691
<210>507
<211>813
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>507
tgaagtgaaa gattgctaag gtgaaattga atcggttacg ggggactgta caattgtcgg 60
ttttagtgtt aaacattttt gagaaaaaat ggccagtttt tgggccgttt ttgtttttgg 120
agttgcattc acacttacag agcactgcca cggagctcag tacttcggaa aactcatagg 180
aaaactttcg gaattacacc acggcgtctc cggagaagtt tacgcagtag atgcgaggac 240
tttgtacatc aaggatttca cttatgacgg acaaggaccc gccgcttatt tttacgccag 300
cgtccacaaa gcggctgaca aacacggttt ccggttgaga gatgagacgg gaagcggaga 360
agtaatcagg aggtacagga aggagggaat cactctcacg ctgccagaag gaaagaccat 420
acacagcatc aagatatttt atctttggtg cgaggaattt gacgttaact ttggtgatgt 480
taaagttcct cgtggttttg actatccacg accacaaaaa attgaatctc tcaaaggtgt 540
ccacgcaatt tcgtcagaca acatcgtcat cgtggatgcc cagacgctgt tgattccaaa 600
cttgtcttat gatggcgaag caccagatgc caaattctcg ggttggtcgt ggcagcaaac 660
ctactccaca aggtatccga gtccctgacg agaatggcaa agaagtgccc cttagaagat 720
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attttggaat ctggtgcgag atgtttactg ttg                              813
<210>508
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>508
tgctaaggtg aaattgaatc ggttacg                                     27
<210>509
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>509
caacagtaaa catctcgcac cagattc                                     27
<210>510
<211>799
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>510
tgctaaggtg aaattgaatc ggttacgggg gactgtacaa ttgtcggttt tagtgttaaa 60
catttttgag aaaaaatggc cagtttttgg gccgtttttg tttttggagt tgcattcaca 120
cttacagagc actgccacgg agctcagtac ttcggaaaac tcataggaaa actttcggaa 180
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gatttcactt atgacggaca aggacccgcc gcctattttt acgccagcgt ccacaaagcg 300
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tacaggaagg agggaatcac tctcacgctg ccagaaggaa agaccataca cagcatcaag 420
atattttatc tttggtgcga ggaatttgac gttaactttg gtgatgttaa agttcctcgt 480
ggttttgact atccacgacc acaaaaaatt gaatctctca aaggtgtcca cgcaatttcg 540
tcagacaaca tcgtcatcgt ggatgcccag acgctgttga ttccaaactt gtcttatgat 600
ggcgaagcac cagatgccaa attctgggtt ggtcgtggca gcaaacctac tccacaaggt 660
atccgagtcc ctgacgagaa tggcaaagaa gtgcccctta gaagatatga cagaaagaca 720
gtggtactta cacttccagg cgatttgaca gtttttgaca ttggacattt tggaatctgg 780
tgcgagatgt ttactgttg                                              799
<210>511
<211>1550
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>511
aaagactcgt tttaagtagg tgtgtaaaaa tttttatgaa ataatataaa aaaaacgtgt 60
cgattcctgt gtatattaaa aattggggtt agattgtatt aacttattat ctgcacacaa 120
tttctgagga agttaacaaa taatatttcc tgagccgaaa ctgaaagaat acagcatgca 180
tcacagtaat taaaaaaaat ctattatctg tatctgttat tataatagtc tcccgtttta 240
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ttaacaataa ttttatatat cttaaggtct aggttatagc gtatttttaa tcgactaata 600
aattatttaa catatccatt atttgaatca aaaataaaga agccattcta aaatttacat 660
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aaatctgatc gtttcgccgg acgggcctta ggtaactctt agcgaaaatc gccattttgc 780
gcacgttatt cgcactatac gttatacatt gtaacgctag acatacccag actagtagat 840
acttagccca aacctaataa tgttaaaaat caatcgttat ctaccaccaa ttttatcgga 900
tcaggaatat agtacaaatt taataactaa aggcagctat aaagcaaata tagattgtct 960
tgaaatttga tttaaatgaa attttgaaac cgcaaaaaga cattcatgga atattgaaaa 1020
ttgtaaaaga tttatgaaat ttctaatcat ttctttttcc taacaagtag aatccagttc 1080
aataggacta gctttgaaat gcaaaactat attacgcaat aatgacatgt aatcctaaaa 1140
attttaatat taaatgacta atgaacatta caaatttatt aatacattga tagtttcgat 1200
gtgactcgat aaatcaaacg tattttggta gcgtaaaaac caaggaaaca gtattgaaga 1260
cattttaaat ttttccacat atattgactt ttttcataga aatcgaatta aaagtggttt 1320
tatttcactt taccttctaa ttgtttatta ataactttaa atagttaatt aacttattac 1380
ttctaagaat tttaacaaac aaaagatttg gttatttttt tataacttta ccatgcttaa 1440
taattttaca cttaatttaa tagcaccaaa atttacatgt ttataattta tataaacata 1500
aatcaagttt tgcataatgc agaacgaaat tttggaattt tagtttaatc            1550
<210>512
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>512
cagggtagtc tgctatatct agtgcctacg g                                31
<210>513
<211>34
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>513
gctagtccta ttgaactgga ttctacttgt tagg                             34
<210>514
<211>824
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>514
cagggtagtc tgctatatct agtgcttacg gtatacaaga aaggtaacag ggtcagtgct 60
acgcttcaac cgcctattat tacccctggt tttacccaaa gtactaattt tattcaggct 120
gagtcgacct ggggcctata gacattttta aaaatgtcta gatgttctcg ccggcgcggg 180
tttcgaaccc cggcctacca gcatgcgagt cagatatcct acagcctgag ctacggcggc 240
ccttattaaa tagcaaaatg ttaacggaca aattaacaat aattttatat atcttaaggt 300
ctaggttata gcgtattttt aatcgactaa taaattattt aacatatcca ttatttgaat 360
caaaaataaa gaagccattc taaaatttac ataaagacac ataataatat attaactaac 420
ttcttgaaaa tacgccactg aatgaatgca gaaaatctga tcgtttcgcc ggacgggcct 480
taggtaactc ttagcgaaaa tcgccatttt gcgcacgtta ttcgcagtat acgttataca 540
ttgtaacgct agacataccc agactagtag atacttagcc caaacctaat aatgttaaaa 600
atcaatcttt atctaccacc aattttatcg gatcaggaat atagtacaaa tttaataact 660
aaaggcagct ataaagcaaa tatagattgt cttgaaattt gatttaaatg aaattttgaa 720
acagcaaaaa gacattcatg gaatattgaa aattgtaaaa gatttatgaa atttctaatc 780
atttcttttt tcctaacaag tagaatccag ttcaatggat aagg                  824
<210>515
<211>1452
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(1400)..(1420)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>515
aataaataaa ccaatttaat atattagaac atttttaata atacttttat tttaaatcaa 60
tgtattcata aataatcttg tcactggcat actagcaaaa accatgtaac ttaaaactca 120
tttcataaag tttataagtt atgctgatga gttttgttat cagaagatta cgtacctatc 180
agcttttaat cattcgcata ctttggtgtg tttttatcaa ataaggctaa taagaaaatt 240
catgataaaa cattcggaaa tgtttaaata caacacgcaa ttaaaaaaaa gcagcataaa 300
atttagacga attagtacaa agtgtaccta cttaaaattt acctttttga gtaatttttt 360
atgctgagaa tttaaaaaaa aatccgataa ttttgtctaa aagtacagaa aatatttttt 420
ttaggttata ctttaataag ttacatggtt ttgaatagca tttgaaatgt tttctaagta 480
ctagctagga tttttttatt tattatctaa tcaatcacat tttacactaa tattctcaaa 540
atcacattta gattttaata aaaaaattct ccatttgtaa aatttaaatt gttctccata 600
gtaaatgcaa atttataaag taaaaaaaca ctaaactatc tatcattaat ataggtccca 660
tagataataa taaatagaaa gaatattata atagttattt tcctaagaag tgcagatagt 720
cattattttc cgcacgcgac tgcagtttgc cgaacgacgc gaagcgggag ttcggcaacc 780
agtcgagtgc ggaaaagaga ctttctgtaa gagttaggaa caatattttt tacgagtctt 840
taaaaaatta ccaaatctta atcaattaat ttaattaata tgaaaataca tacacaaatt 900
aattctttga gaaggttgtc aaaaccaaac tttcaatata attagttagc atgacgacga 960
tcttggtttc catgacgatg attcaaaacg actgttattg tctaccgatt tgactttcga 1020
atattatgtc aaaataatta tatttcatcg aattgtcgcg ttaatttcag gaacacaata 1080
caagatatat ttgaaataaa ttagtaaata atatctaaat attagtttat tgcatgtatt 1140
ataattactt taaggccata ttaacatatc taaattaaca cgcgtgcgga aaagtaacac 1200
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ctgctctgct ga                                                     1452
<210>516
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>516
tgctgatgag ttttgttatc agaagattac g                                31
<210>517
<211>27
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>517
 ggaaaccaag atcgtcgtca tgctaac                                    27
<210>518
<211>828
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>518
tgctgatgag ttttgttatc agaagattac gtacctatca gcttttaatc attcgcatac 60
tttggtgtgt ttttatcaaa taaggctaat aagaaaattc atgataaaac attcggaaat 120
gtttaaatac aacacgcaat taaaaaaaag cagcataaaa tttagacgaa ttagtgcaaa 180
gtgtacctac ttaaaattta cctttttgag taatttttta tgctgagaat ttaaaaaaaa 240
atccgataat tttgtctaaa agtacagaaa atattttttt taggttatac tttaataagt 300
tacatggttt tgaatagcat ttgaaatgtt ttctaagtac tagctaggat ttttttattt 360
attatctaat caatcacatt ttacactaat attctcaaaa tcacatttag attttaataa 420
aaaattctcc atttgtaaaa tttaaattgt tctccatagt aaatgcaaat ttataaagta 480
aaaaaacact aaactatcta tcattaatat aggtcccata gataataata aatagaaaga 540
atattataat agttattttc ttaacaagtg cagaaagtca ttcttttccg cacgcgactg 600
cagtttgccg aacgacgcga agcgggagtt cggcaagcag tcgagtgcgg aaaagagact 660
ttctgcaagc gttaggaaca atattttttc tacgagtctt taaaaaatga ccaaatctta 720
atcaattaat ttaattaata tgaaaataca tacacaaatt aattctttga caaggttgtc 780
aaaattaaac ttcagcataa ttggttagca ttacgacgat cttggtcc              828
<210>519
<211>1380
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>519
gagtttcttc ttgcgtaaat aatttggtat ttttttatgt ttattgattc cgtttatccc 60
ttccattttt ttcgattatt attcctgtgg aatagattcg cgttttctag tgtcttctcg 120
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cggacaccta cgatatgtgt taagcactgt taaaatgcta tagttctatt ataaggaaca 1260
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aactgtactt catagagtct agattatcct aataatactt agataataat cagttttaag 1380
<210>520
<211>32
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<213>Diabrotica virgifera
<400>520
cttgcctaca atagagttga taacaggttt tg                               32
<210>521
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>521
gcttaacaca tatcgtaggt gtccgtaagt g                                31
<210>522
<211>993
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>522
cttgcctaca atagagttga taacaggttt tgtttcacat ctctatactt atgcctgtaa 60
actgtagaat ctgttccgaa tgtcagcatt aagttacaca ttaactgccg atatctgttc 120
tttcttaaat aattgccaga aaatttcgtc taatcttcaa cgccataaat gcaatgtaaa 180
aattaatctt agtatacttg tgagtgcaga aggtgtgcta ttgccttttt aaacacatgg 240
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cacatcttat tgctaaatat tattttccag ttatttgatt ataaagatca gtgcaacgta 480
gtagcctata taaatattct aaatctactc acagccaaga agaaacaggc taaacccgct 540
accttattcg gaaagttggt cacgtgatga ttatgaattt gactcttttt attagctgtg 600
aatatgtatt tagtaataaa atatacttta tatcaaaacg gtaactttgc ttcacaatag 660
ggctatttat tgcatcattg ccaccatttt tctcgcacac ttgacatatg acgtgcaata 720
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<211>1253
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>523
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tggagaaagt attctaactt attaggccta gccctggatt ggttaggatc tttgtctgta 120
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cgacaggcat gtgacaatca ggtg                                        24
<210>546
<211>508
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>546
catacatacc acagcgaagc gtttcctgaa cctcgatgtg cgaggtttgt gtttaattta 60
tcctttggcg ctgtagaagt ttattacacg catgcattaa gaaaagtacc tccaattaag 120
attaagaatt taagcaagtt ttaagaattt agggccagtt ttgtcaagtt tagaaacaag 180
atttgggcaa gaggttcgta agagggaaga atagaagaaa gcaactaata cagtttgtag 240
cattttagaa aaaaaaatta gaagataact tgaaaacgga gactaaactt taatggaaga 300
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tattatttat ggagtagaaa aaataatgtt tgttccactt ctgtcaagaa gacagaatga 420
aattcaagcc ggttaaatta aataaaagat tctcttgtct aatgaattgc attgaagata 480
tcttcacctg attgtcacat gcctgtcg                                    508
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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ttgactacaa atgaaaaaaa actcttatta actactttac tttcagattg gaaaatactg 60
acaaaataca attaaaacat tgtattcttt caaaatggtt accaatctag aggtaaaaaa 120
gtgcataata atagtttatt ttaaaatttg cagtttattt tcaagagatt ttcaaaaaat 180
gattttttct ttactgtaca ctcctgtatt agaagtagaa atcagcgagt gttaattact 240
tcgttctaaa taattatttt tgttgaagat ttaattctta ctgattctat tgtctatctc 300
aaataatatc tgtttaatga agtattatga atagttgtac ttttttagtt aatatttaat 360
aacttcacta tccaatcaac tatataattc aagaacctta atgtgtccct aatatgtatg 420
tccatgaatc aaatgtgatt caaggataga agctattcta aaattaaaat agtattggac 480
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cacatttaga aaaaaactaa aggtaattag ttttcaaatc gtacaattat tgttctcaaa 600
acataaaaca gcattctaat attctttacc tattaatact ctattctgtt ttcaattgtt 660
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>548
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<210>549
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>549
gatgtcattg atactagaaa ccatcaaata taaatgc                          37
<210>550
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>550
gtacactcct gtattagaag tagaaatcag cgagtgttaa ttacttcgtt ctaaataatt 60
atttttgttg aagatttaat tcttactgat tctattgtct atctcaaata atatctgttt 120
aatgaagtat tatgaatagt tgtacttttt tagttaatat ttaataactt cactatccaa 180
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tgattcaagg atagaagcta ttctaaaatt aaaatagtat tggacataga ctcctgatta 300
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actaaaggta attagttttc aaatcgtaca attattgttc tcaaaacata agacagcatt 420
ctaatattct ttacctatta atactctatt ctgttttcaa ttgttttaaa tccataaata 480
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attaatattg aaacaaattt tttggtttat gttacaacaa acagtcattt tagtatatta 600
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atttatattt gatggtttct agtatcatga catc                             754
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<212>DNA
<213>Diabrofica virgifera
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gtaagatata agagaataac acaatttgat aatatatttc ttcggttacc attcgtactt 60
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attatcgtaa ataccagtaa atgattcatt taggattaaa attacttgct aaagtaagct 300
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atcactttca tgtatgtact tgataaggct cgaatgcctg gagtcaaatc ttgcttaatc 540
cagggcctta caaattgacc aaatttccaa gacttttcgg ttctacaaat ttaatctaca 600
caattaagtg tatggataca ttgtattctg cgtaatattt ctttattaca gttcttattg 660
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gttataatca aatcaataat tttataagct aaatcagggt agttctcgga agttggctgt 840
ataccattta gttaaaaaac tttcaacatc aaagtaaaaa aacttctgtt gtaatttgtg 900
aagtattaaa ttaaaaatcc aaacgg                                      926
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<211>34
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>552
cttcggttac cattcgtact taaatataca ctcg                             34
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<211>28
<212>DNA
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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cttcggttac cattcgtact taaatataca ctgttctaat attatttttc acctaacctt 60
tactaacttc tatatctaga tccttatctg tcaaatatgg caacttaacc ttttcgtgga 120
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gttctcggaa gttggctgta tacc                                        804
<210>555
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>555
gcaaaagtta aacttttgaa ctattttgat ctatcgtcaa tgtttgcaga aaatatttga 60
ttaaatacaa ttgaaaaaac aatggaacat catagaaact tgatgaagac ttacaagaac 120
aacaagtact cggtcaaata aacattttgg aaagtttacc tttttaaaat agttggactt 180
tttttctgaa ctcctgccag gctctcgata atcttagaat aatgggttgt tttatgtata 240
cttgtttatt ggctgaggta tttaatatct agattaagat tccaatcaaa gtttttggcc 300
taggtgaact gtagttttat agaaaaatct caaacgcatt tagttgcgtt tataaatgtc 360
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tgttaaggtg ctttgagttc gaaagttagc tgtcttttcg aagcattaat ttgtcaaaaa 540
catagttata gtataaacca ataagcgctt acctcaggaa tatttgtctt gtagaggtaa 600
aatgaagagt tatattttta ttgttcgtca gagataaaag attttgtttt gtgagaatat 660
cgctaaatat tatatttttg atacattaat aaatatacag attgggcaag ctagtttttg 720
aataacatat tgacatttat ttatcggatt cactgtgttc agaagagcct ttggaaattt 780
agattagggt gcaagtatat taaagatgat aagagattga tacatatcat actatacata 840
tcatattaac tatatcgatg ttattctata ttataaaatt aatatttaat aaatgtctac 900
cagc                                                              904
<210>556
<211>36
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<213>Diabrotica virgifera
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catagaaact tgatgaagac ttacaagaac aacaag                           36
<210>557
<211>36
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>557
tctcttatca tctttaatat acttgcaccc taatct                           36
<210>558
<211>725
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>558
catagaaact tgatgaagac ttacaagaac aacaagtgct ggtcaaataa acattttgga 60
aagtttacct ttttaaaata gttggacttt ttttctgaac tcctgccagg ctctcgataa 120
tcttagaata atgggttgtt ttatgtatac ttgtttattg gctgaggtat ttaatatcta 180
gattaagatt ccaatcaaag tttttggcct aggtgaactg tagttttata gaaaaatctc 240
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tattttacag atttctcgac tttttgactt ctatctgtga tgatttgacg tgagaggcgt 360
ccaaagtctc ttttgaaaat ttgtaaatgt gttaaggtgc tttgagttcg aaagttagct 420
gtcttttcga agcattaatt tgtcaaaaac atagttatag tataaaccaa taagcgctta 480
cctcaggaat atttgtcttg tagaggtaaa atgaagagtt atatttttat tgttcgtcag 540
agataaaaga ttttgttttg tgagaatatc gctaaatatt atatttttga tacattaata 600
aatatacaga ttgggcaagc tagtttttga ataacatatt gacatttatt tatcggattc 660
actgtgttca gaagagcctt tggaaattta gattagggtg caagtatatt aaagatgata 720
agaga                                                             725
<210>559
<211>874
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>559
taataaataa atctacttta aaatgtacat ataatatatt atatctgaat tgtcaatatg 60
aatgagtgag ataaaattaa attattagag aaaaattttt taccaagcat caaaaacaaa 120
atttgattaa attattaaag ttttgtattt tgataatgat ttccaagttg gaaattgaaa 180
cgtcaaataa atttaattta aaacttaaac tgtggcttga tcccctgtca caagaaaaaa 240
aaacacacca cgtctacgtc tatgcagata aggacacctg ttaacgagta aaatatttct 300
tggattctca ccctgccttg gacgtaaata tatagaccag cgaagtattg ataaggttac 360
caatgattca cagtgttcaa ggaatttgtt caacttagcc gcccgtaaat atgacccata 420
gaccggaggt atattgttac cgaggcaaat tttatgaaat catcttcctt tttcccttat 480
gcacattggc aaggcatacc caataaaaat gaccccggta taaatttagt tttaaaattt 540
aacattgttg ctgttctcag ttcaatttgt agatgagtcg ccttcaatta aaaatggttg 600
gagagagaac aaatgattga gtaaattagt aaaaaaacat taattagtag tcatcttaat 660
tataaatcaa attaataata aaaatatccc aactaaaata ttttactaaa cgtcataccg 720
ttggtcatac taaacgtcat acatatttat acctaattat gacagaagtc aacaagcact 780
taagataacg tctaaatgtg agaaactact atgtaatgta aatgtatagg tgtctaacga 840
caattttcca cctctacaag tttgatctct tttt                             874
<210>560
<211>24
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>560
tgtggcttga tcccctgtca caag                                        24
<210>561
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>561
gagatcaaac ttgtagaggt ggaaaattgt cg                               32
<210>562
<211>658
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>562
tgtggcttga tcccctgtca caagaaaaaa aaacacacca cgtctacgtc tatgcagata 60
aggacacctg ttaacgagta aaatatttct tggattctca ccctgccttg gacgtaaata 120
tatagaccag cgaagtattg ataaggttac caatgattca cagtgttcaa ggaatttgtt 180
caacttagcc gcccgtaaat atgacccata gaccggaggt atattgttac cgaggcaaat 240
tttatgaaat catcttcctc tttcccttat gcacattggc aaggcatacc caataaaaat 300
gaccccggta taaatttagt tttaaaattt aacattgttg ctgttctcag ttcaatttgt 360
agatgagtcg ccttcattaa aaatggttgg agagagaaca aatgattgag taaattagta 420
aaaaaacatt aattagtagt catcttaatt ataaatcaaa ctaataataa aaatatccca 480
actaaaatat tttactaaac gtcataccgt tggtcatact aaacgtcata catatttata 540
cctaattatg acagaagtca acaagcactt aagataacgt ctaaatgtga gaaactacta 600
tgtaatgtaa atttataggt gtctaacgac aattttccac ctctacaagt ttgatctc   658
<210>563
<211>849
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(765)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>563
cttaaaatgt ataaatttac ctgattataa aacctttttt tatttcttaa caaataaaca 60
ttcagtggac caaaggatac atatcgatac ctcagagcaa cagtgagata agtggaaaat 120
ttcagttttt ttaagtctgc ttatttacat agaatgtgtt gccagtgtgg agtgcagtgc 180
attctatgta aatggcgtac ttaaacaagg ttgaggtttt ggacttctca ctgttgcttt 240
gatgtatcga tataagctac atagtagata catagaggaa atcttgtgct ttattctttt 300
ttagaatttc aatggttaat atattagata ttaaaataat gacccaaaaa atctatatag 360
tgctatctaa atattgctgc tgcaagaatt tttttattag ttctttaacc cagttttatg 420
accttcatgt acatatatcc aaatctatat tgccagggta ttggaaataa taccctggat 480
ttttagcctg aagtatatta ccaatgatgt acacaaacta ctagtctaaa gaaacaccga 540
ctattgaaga atattaagaa gctacaggtt acttttcatt tttccaaaat atcatttgta 600
tttttcagtt ctattctgtc acaactaaat tttattccac tttaccacga gagtaatctg 660
ttttttcgta actaaaagag gatcgatggg tagccaagaa gttgagaaac agtaagattt 720
caaatattgc aaaacgttgc aaatattttt aagaatgtat tttanaatgt taaatggata 780
catgaactaa tcagaaagca gtcttcaaaa aagaaaaagc agtgttaaga cacagtattc 840
gaaaacatc                                                         849
<210>564
<211>28
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>564
cattcagtgg accaaaggat acatatcg                                    28
<210>565
<211>35
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>565
gactgctttc tgattagttc atgtatccat ttaac                            35
<210>566
<211>655
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>566
cattcagtgg accaaggata catatcgata cattctatgt aaatagcgta cttaaacaaa 60
attgaaattt tggacttctc actgttgctt tgatgtatcg atataagcta catagtagat 120
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gtacacaaac tactagtcta aagaaacacc gactattgaa gaatattaag aagctacagg 420
ttacttttca tttttccaaa atatcatttg tatttttcag ttctattctg tcacaactaa 480
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ggtagccaag aagttaagaa acagtaagat ttcaaatatt gcaaaacgct gcaaatattt 600
ttaagaatgt attttaaaat gttaaatgga tacatgaact aatcagaaag cagtc      655
<210>567
<211>848
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>567
cggacgcgtg ggtaatgatc ttaacgttta tagtactata tagagaattg aataaccttt 60
caaatgagcc ggcacacgac atccgttctc atttataaag aaaaaatcga ttacgtcatc 120
acgcccagat ggatcgccgt caccggtgcg atatatgtgt caagggtcat aattggaaag 180
tcgaactttt gtattttaca ttttttttct agttctgtaa ataaggcagt ttgcaggggg 240
gtcaaaatat ggtgaatagc cctgtacatt cattggggcc gaccgatcgg ctctgtcccg 300
tcatgcagct gaccgactgt aataactttt atttatattc aatttggaat gtgtgtactg 360
attttcaacc ttagtaaatg gatttaatta ccttcgtagg aaagcaactt tgataccctc 420
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aatcacagtg atcaattatg aaaagtttag cttttgtgaa ttcacagatt ttttagcgct 540
ttatattgga aaattaacat ttttcaatat aaaccgtcca ctatattaat agatacaaaa 600
ttaggagctg tagcagaaaa gtatctcaac tgactcaatt tattttatta ataagtcctg 660
gtatttatta cgtttgaaaa cggacatttt ggatgctttc tatcttcgat ctttgtaaag 720
aaaccgtgga ataaagtaaa acaatgttaa atattaccta ggtattttaa tgcataaaat 780
tatatactca atgcttgaag gataatataa agaagcattt gttttttttt taatattttt 840
tctcttcg                                                          848
<210>568
<211>24
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>568
cgattacgtc atcacgccca gatg                                        24
<210>569
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>569
ctttacaaag atcgaagata gaaagcatcc a                                31
<210>570
<211>610
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>570
cgattacgtc atcacgccca gatggatgcc gtcaccagta cgatatatat gtcagggatc 60
ataattggaa aatcgaacct ttgtattttg catttttttt ctgattctgt aaataaagcg 120
gtttacaagg gggtcaaaat atggtgaatg gccctgtaca ttcattgggg ccgaccgatc 180
ggctctgtcc cgtcatacag ctgaccgact gtaataactt ttatttatat tcgatttaga 240
atgtgtgtac tgattttcaa ccttagtaaa tggatttaat taccttcgta ggaaagcaac 300
tttgttaccc tcttagtaac cactgttcta cgtttcgttt gaccgaccgc agtatgtttc 360
tctacctgca cagtcacagt aatcaattgt gaaaagttta gcttttgtaa attcacagat 420
tttttagcgc tttatattgg aaaattaaca tttttcaata taaaccgtcc actatattaa 480
tagatacaaa attaggagct gtagcagaaa agtatctcaa ctgactcaat ttattttatt 540
aataagtcct ggtatttatt acgtttgaaa acggacattt tggatgcttt ctatcttcga 600
tcttgtaaag                                                        610
<210>571
<211>828
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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gacaataatc gtgtagatgg cgctaagatt ataatagatt atttataatt agatattacg 60
gaacattaaa aaaaacttaa attcagtatt taaaacgtaa gtatatttaa ggtaaaaata 120
tataccacag ctttgaccaa ctaatattgt ttataattaa tgtttttaat tttaatttta 180
aattaatcac tttgacattt atgtcaaatt tccgataaac gtttacaaac ttgtcactac 240
tgcgttcgcg aatttgtaaa tatcccctct acgtacgagc tcacagcgta tacgctgtgt 300
gcttcgctgg tgtcgttcct agcggactac tattcaactt tcaccggtaa tttttaaatt 360
tattatttaa ttgttatcgc ttaatattta caacgcaaaa aagtaattaa attgtaatgg 420
attttttaag attttgctaa tcattttgac gttctattga caaaatatga atttcttact 480
tcggatactt tcacaattat cgtgtagatg gcgctaagat taatggatta atagattaat 540
agaacattaa aaaaacttaa attcagtatt taaaacgtaa gcatatttaa ggtaaaaata 600
tataccacag ctttgactaa ctaatatttt ttataattaa tgtttttaat tttaatttta 660
aattaatcac tttgacattt atgtcaaatt tccggtaaag gtttacagac ttgtcactaa 720
tggcgttcgc gaatttgtaa atatcccctc tacgtacgag ctcacagcgt ataactgaac 780
gacaacgaac gaacgaacac gaacactgaa cacagattca cagatagc              828
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<212>DNA
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<400>572
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<211>29
<212>DNA
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<400>573
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<211>609
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>574
cgtttacaaa cttgtcacta ctgcgttcgc gaatttgtaa atatcccctc tacgtacgag 60
ctcacagcgt atacgctgtg tgcttcgctg gtgtcgttcc tagcggacta ctattcaact 120
ttcaccggta atttttaaat ttattattta attgttatcg cttaatattt acaacgcaaa 180
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acaaaatatg aatttcttac ttcggatact ttcacaatta tcgtgtagat ggcgctaaga 300
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<220>
<221>修饰的碱基
<222>(785)
<223>n＝a，c，g或t/u
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cacaatatgg agaagatcta ctacttcttc atttgtgacg agatctacca gcgaaatttc 300
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taaacctttg taaaacatgt accattaatg ttgcccttct actcctttat aaaaataatt 600
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gaagnttgtc gttgcttgaa acttgtgaaa attttgatag tttt                  824
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<210>578
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(27)..(165)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>578
cgatgcgata ccgacaaagc tcccttngac tcggacgcgc cagaccgaca gagaacggaa 60
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cctcgatcga cttcggcgag agtgtggagc tcacataaca ttttntcata gagagtaata 180
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acaatatgga gaagatctac tacttcttca tttgtgacga gatctaccag cgaaatttca 300
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<400>582
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gaattaccct ttaaagtttt tcatacttgt ttgctaacac cccgtatgtg tcgacaacac 120
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ggagtgaccc tactgattat ttagcattat actaatctca aatacattag gtttgttcta 180
gcatcagttt caagcggttt gaaatcatca gaagcatgcg catttgtttg atggcgttta 240
agcacacaaa ttactagttt gaaactacta gtccagcgtt ctaactttga tttggaaact 300
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gtggaattat tgtttgaggt ttataaattt taaatgaaaa tgatatgttt tgactgtttg 420
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actcgaaaaa catgaatgcg tttaaaaata attcgatcga aattttgcgc ctacgctctc 120
aaaaaggtta aagtattata catttttgta atcagtattt caattgcttt taaatcagct 180
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gcgagcagtg agtgatccac agttgcgctt taatattttt tctgcggtga atacactgtt 600
ctcataaaaa atggaactag tgcaattact ggagatggat atgagctatt acctccgatt 660
tc                                                                662
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<220>
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aaaacaaaga acgtcttttc ctcttagttc ataaaggagc aaaattagga aagaaaaccc 180
tatcccacca acacctcttg taaaaatata aacggttaag acaagcagtg gatcttatgt 240
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<400>601
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<400>602
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<212>DNA
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<220>
<221>修饰的碱基
<222>(943)
<223>n＝a，c，g或t/u
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<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(771)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>614
gcagtttgag aggaaagttt caacaccccg tatcttggaa acgaagcatt tgcggacata 60
cgtttataga gcaaactgtc attatttaac accctgtata ggcccacaca aaagattatt 120
acctccttca tgagactttt ttttttattg agttattcat gtcgagttgg acgtttctga 180
tatgaaaaat tttcaggagg gagacggttc gtaaatatgg gggtttataa actttggtgc 240
atctatggtg gttcctgttt atctgaacca tctcagatag ttaaggggtg gttaccccct 300
actatagggg ttgatgaagt aacactactc acagtatatt catttattta taagttgaag 360
taactacggt aaagagttgg tggctaaata tttatccgct gtgatgttta cccgctggga 420
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ctgtttatgt tttggtatat ataaaaagtg aaagtgtttg tattataaat gctgaatcaa 540
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<210>615
<211>967
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(784)..(895)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>615
aatgtgatat ttaactagtg atttattttg tatttatcat atgttttata atttaacgaa 60
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gacgtatagc aggttttaca aagcttcggt aattggacac atatttgaca ttaatcagtc 180
aactgtcata caacatactc atttttattt caaggaaata atcttagaat aagtattttt 240
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tttaatttat tgtttatgtg gtttgtgtga caaaataaga cttttcattt gggtatttag 720
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<400>616
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>617
gtgcggcaaa ataagactcc atttaggt                                    28
<210>618
<211>846
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>618
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agttttgagg ttatgtttat tttccatcac taaggaataa aaaccacctg agcaggaacg 780
aataaaaaat ctcttagttg acacgtttct ttgacggaat acctaaatgg agtcttattt 840
tgccgc                                                            846
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<213>Diabrotica virgifera
<400>619
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cactaaacac aaaaaaaatt agcagccatc gccaaaaaaa gttatacgta cctattaaaa 540
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tctgtaaaag cctcagctgt gcgtgtgaat tttttgtaat ttataattta ataattacta 660
actgttctaa atacgaaatg agccacagtt tggctaaaaa atgatttttt ctacaaccgt 720
gttaaaaatg caatttttag cactccatac gtgcgttaaa aatgctactt taagacacta 780
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taatgtcaaa aaaatataaa aatggaatgt cagtcacgtt caaagtaaaa gttttgtaga 900
tattgtcctg taatttacgt tgtaaacaaa tattgtatga gatgttaaag gtacattttt 960
aggcact                                                           967
<210>620
<211>31
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>620
gctcagcttg atccagaaaa tctaaaacaa g                                31
<210>621
<211>32
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>621
ctgtggctca tttcgtattt agaacagtta gt                               32
<210>622
<211>458
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>622
gctcagcttg atccagaaaa tctaaaacaa gtttgtccga agtgaaaaaa ttgatttttt 60
gaattcgttt aagaaaatgg ttaaaacaac tttccgaccg cggtactgaa tggcaccttg 120
tgaatttgtt ataaggacct gtttttgagt aagtttgtgc aaaaaaatta atcggacaag 180
cggattaacg ggacaagcat acagcgtgga ctatttgcat tatgagccaa acgtagatgg 240
tttgtaaaat acactaaaca caaaaaaatt agcagccatc gccaaaaaag ttatacgtac 300
ctattaaaaa acaaaaaaaa atgaggttat aatatgtaca ctcgaccctc gggtccacaa 360
aaatagatgt tctgtaaaag cctcagctgt gcgtgtgaat tttttgtaat ttataattta 420
ataattacta actgttctaa atacgaaatg agccacag                         458
<210>623
<211>1376
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>623
cggacgcgtg ggttcaagca actgttagcc ttgatcctgg ggataacagt catggcgttc 60
gtcaccaacg ctttcgagtg atggcgacca caaaacatta tcacaaatgt acttgaagca 120
atagtttatt tgaaataatc agaaatttcc ataattagtg gttagtatta ttagttgcgg 180
ttttattaat aagtgtcaac tgtcatttgt caaaatgtca actgtcattt gtcaaaatgt 240
catctgttat ttgtcaaaat gacagatgac aataactcaa ctgtcagttg tcaaaaagat 300
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ttcaaataaa ctcttgcact gacaaattaa atgtaatttt gacagtttct gaaaggtttg 420
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tatcgatcag agacacaaac tgtgttagaa aaggtccatg gaatgtatca atatgatttt 720
attttttata tcaccttcat ttgtgcattc cggtctcaat aattaatgta aaacgtcaaa 780
ttttcgtttc aggcgacaat tactgatact gcctacaaat agtggtataa ggcttttcat 840
cgattgtcat ttgtttcgag cttcttctgt catctagcag gcaagaccgc ctaaatgcgg 900
tataatttct agctatttca gctatgttta ggtatgcagc atgcaaacct gcctttggtc 960
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>626
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gttgtgagat aaggggaaaa gagactggta gggatgctaa atttagtgat aaaaacctat 60
aaacttgcat tctacttaat gtttcccacc tttagacata tcagagctat atgtcaacta 120
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<220>
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ct                                                                962
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tgacttggtc aatataagcg acaccgtatt aggaaattat atttattaac tacggtctgt 60
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cggaataatt ttatttctac gcaaggaggc tgtttttatt ttgctctggt atagacaaaa 240
gttttttgta taacattgga atgttcttag gaataacagc tggtctgacc ttgccacata 300
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gttcaaaaca gaacaattac actacattta ttgattctaa caatctaata gatgttataa 60
gatactcgtt tatcttaatc tgtacaatta actttaattg ggtaatgtaa tatacaagat 120
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gcttgagtaa aaactgaaat catataaaag agataatttc tattgtgaac taatttttca 60
aaagtttcta cattaagtac atattcatta ctaaataatg gccgaaaaca aaaatccaga 120
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agtattatct gatgatacat gtagcgatga aaaaattcgt atgaatagaa ataatttaag 360
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gccctttttt tctgtccatt ttatgtcaca agtagggcta aaatgaagca aattgtaaca 60
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<210>702
<211>953
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(840)..(878)
<223>n＝a，c，g或t/u
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catgtagtta ttgttangta tgacagcttn cagctggnta tttaacacag tataaataag 900
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<210>703
<211>905
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(849)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>703
ccttacgcgt ccgccaggaa cagggaagga gaagcctcag tcacatttac tctgaaaatc 60
aagaaaatca agaagactca ggaaggcaag tttaagatag tcgccaggaa cagggaagga 120
gaagcctcag taacatttac tctgaaagta attacttcag agaaagaagc acctgaggtc 180
ttatcacctc tagaatctat taccgtaagg aaaggagaac cagttacact ttccactact 240
atatttggaa acccggaacc tactatcgaa tggttgaagg atggtaaacc tttaaccaga 300
ccaaaattca aaaaagacgg aaacacatac actttaacta ttcccaagac atctacagat 360
gacactgcta catatacagt tcgagctacc aattctatgg gtacaataga aacaagtgca 420
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gaagagcaaa ctgtaccaca aaagtctcct ctcaccctca aagccaaagt ggttggcaat 540
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gactctggag actacaaatg tattgctgtg aatccagcag gcaaagcctc gcatggtgcc 720
aaggtatcta ttgaggtaga tactgtcaaa tttactaaag aactgaaaga agtttacgaa 780
acaatagaaa gaaagaccat cgaattagaa tgtgaaacat cccactcagt tagaacaaaa 840
tggtggtanc acacacggaa attagtggta tggaccatcg cgttgtagta caagatggac 900
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<213>Diabrotica virgifera
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<213>Diabrotica virgifera
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gataaatgct cagattttct taggacctac ctattatcaa agattgaagc acacggtgga 360
cgataagatt cattcaagag ctagaggacc gttgcagatt ctcgtcagac agcctatgga 420
gggtcgtgca agagacggcg gtctacgttt cggtgagatg gaacgagatt gtc        473
<210>706
<211>677
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>706
gtctaggcac ggacaaaagg gaacgtgcgg tatacaatac cgtcaagagg atatgatttt 60
tagtgctgaa ggtattactc cagacattat catcaatcct cacgctatcc cctcccgtat 120
gacgattggt cacttgatcg agtgcatcca aggtaaggta tcatccaata aaggagaaat 180
cggtgatgct acacctttca acgatgccgt caacgtacag aaaatctcca ctttgttaca 240
agaatatggt tatcaactca gaggcaacga agtaatgtac aacggccaca ctggacgtaa 300
gataaatgct cagattttct taggacctac ttactatcaa agattgaagc acatggtgga 360
cgataagatc cattcaagag ctagaggacc gttgcagatt ctcgtcagac agcctatgga 420
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ccatatttgc aacttctgtg gtttgatagc tatcgccaat ttgcgtaaca acacctttga 600
atgtaagggt tgcaaaaata agacacagat atcgcaagtt agactgcctt atgctgcgaa 660
attactgttt caagagc                                                677
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<213>Diabrotica virgifera
<400>707
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atgaagatat                                                        250
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<211>250
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>708
attgtgcagc tggtaggtaa agcatctctg gcagaaacgg acaaaatcac gaaattgacg 60
ggcacactga atctattatg aaacgtaccg cattggtcgc atggcctgta cgtcaagcaa 120
ggccagtcag tgaaaaatta cctgccaacc gatggtgaag ctaaaatcaa ggcagatttt 180
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tttaggtaat                                                        250
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<211>250
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<213>Diabrotica virgifera
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<211>273
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>710
gaagaaagta cgttaatatg gttccagggc tccaacaaga cgagctattc ttactgggtc 60
gagaacattt taaaattttt ggataagtac tacgttccca gcaaaatagc taaaggaaat 120
ggccaaatta aaacatgctc tcatcacgac tatcctacta gtggagaagt atgcgaagtc 180
gatgtcagag attgggaaga atgcaacagg gatcaattct ttaattatca caagaattct 240
ccatgtattt ttattaaatt gaacaaaata tat                              273
<210>711
<211>278
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>711
acatttttcc cgccattcca attactatta agttttttcg ttttaatact tttttaaata 60
tacaggtgct taatatcgtt tatattttca gtattacttg gttttcttca tgtaaattgt 120
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gtagtgtaat tgttctgttt tgaacaaata aatgcatc                         278
<210>712
<211>287
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>712
aacggttatt tggaaggcct gtgtcgtggc tttaaatgtg ggatcctgaa acaatccgat 60
tatttgaatt tggtccagtg tgaaactctt gaagatttaa aactgcactt gcaaggcact 120
gactatggaa cttttttggc caatgaacct tcacctttgt cagtatccgt catcgattca 180
agacttcgag aaaaactcgt gattgagttc cagcacatgc gtaaccaagc agtagagcct 240
ctctcgacat ttatggactt cattacctac agttacatga tcgacaa               287
<210>713
<211>250
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>713
atggcctgta cgtcaagcaa ggccagtcag tgaaaaatta cctgccaacc gaaattgacg 60
ggcacactga atctattatg aaacgtaccg cattggtcgc gtttggcttc cttctacgaa 120
cgtgctggtc gcgttaaatg tttaggtaat attgtgcagc tggtaggtaa agcatctctg 180
gcagaaacgg acaaaatcac gatggtgaag ctaaaatcaa ggcagatttt gatcaattat 240
atgaagatat                                                        250
<210>714
<211>250
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>714
attgtgcagc tggtaggtaa agcatctctg gcagaaacgg acaaaatcac gaaattgacg 60
ggcacactga atctattatg aaacgtaccg cattggtcgc atggcctgta cgtcaagcaa 120
ggccagtcag tgaaaaatta cctgccaacc gatggtgaag ctaaaatcaa ggcagatttt 180
gatcaattat atgaagatat gtttggcttc cttctacgaa cgtgctggtc gcgttaaatg 240
tttaggtaat                                                        250
<210>715
<211>250
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>715
gaatacttcc gtgatatggg ttacaacgta tctatgatgg ctgactcgac gaatacttcc 60
gtgatatggg ttacaacgta tctatgatgg ctgactcgac gaatacttcc gtgatatggg 120
ttacaacgta tctatgatgg ctgactcgac gaatacttcc gtgatatggg ttacaacgta 180
tctatgatgg ctgactcgac gaatacttcc gtgatatggg ttacaacgta tctatgatgg 240
ctgactcgac                                                        250
<210>716
<211>372
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>716
cccgggttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 60
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 120
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 180
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 240
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 300
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 360
gccctctcta ga                                                     372
<210>717
<211>372
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>717
cccgggcaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 60
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 120
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 180
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 240
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 300
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 360
gctagctcta ga                                                     372
<210>718
<211>490
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>718
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt 120
tgctactaaa ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa 180
ctacagaggt acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca 240
cacggtgctg cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat 300
ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg 360
tttggattca caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc 420
gatccttttc gatttgttgc tgccattggg gatccatctg gacttctgga ggaagcaagg 480
caggt gcagc                                                       490
<210>719
<211>560
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>719
ggcgcaagcg cttcagtgtt atcatatgcc cacttccagg catttaaatt ccctgactcc 60
atggaagttc tccatcaggg gccaaaaggg gataccaagc cattaccggc cactcatcca 120
cagctttagc atggtacata tagtgatccc aaccgtgcac ctgactgtga cccaactcaa 180
tgtgtaattc cggactgttt ctgctcagcg cccgccacca gttagcgccg aagtacaaaa 240
gggattggac cttatttttg ctggtatcag agctcaacag gcaccacgtg ctcaacgata 300
aaagactggt caggaaggca cattcctttt tgccttactt attcaaggca gggtgcatac 360
agagtagcca cgtaacaaat agcacatagc gaagtgttgt accagcataa tgtataagct 420
cctgtactta ccaaaggctc gttggcagat ctagaccagt tggacgaatt ggttattgag 480
tactgtggtg cagcgccccc tttatggcag atgaatgtct gatggccata ccagacatcg 540
aaggtattga ttacaccacc                                             560
<210>720
<211>372
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>720
cccggggcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 60
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 120
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 180
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 240
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 300
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 360
ggagaatcta ga                                                     372
<210>721
<211>372
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>721
cccgggctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 60
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 120
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 180
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 240
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 300
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 360
acgatgtcta ga                                                     372
<210>722
<211>1000
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>722
caagcccgcc aaaatgcgcg aacatctgga actcttctgg tctcgagtga atatccccaa 60
agttcttagg aatgcaatgc ttcctagacg tcgtcgagct ggctctgaaa ctgagcccca 120
agttatagta ggtaacgata attattggac gtggcattag gttataggga aagtgtcaat 180
ctgtctcaaa ttcgcacatt tgtggaaatg gactcgcacg cgcggcccaa cgacggcttc 240
aacaaacaca ggcgcaagtc gacgaagtcg tggatatcat gaaaacgaat gtagaaaaag 300
gtatggcagg aaagaaatgc tgaatccgcc attgaagctc ttaaagaata tgaaccagaa 360
atgggcaaag ttgtccgaca agacaaatcc ggtattcaga aaatccgggc atagcaaaca 420
tgccaaacac acacacgcag aaaggaaata tcagtcagac tcagaatcag atagtgatct 480
ggaatggatt ggacacagag gtgaatcaga ccagaggacg ttcgggggta tattaaaaat 540
aacgttgtgt gcgcacttgg aaccgaaaca agcagaccat catccgcagc tcagtgcgta 600
gccgaatgtg gccgtgcaca ctgtgcattt gtaggacagg tgtgcgggtt tcaacgtcat 660
gttatgatcc cttgcatata ttgatggaaa aacacgccaa agaagagagc agagtattaa 720
aaggagtatt gccaggtaca tagaccagca aggaactgta atcaaaatgg gcgatgaaaa 780
gaaggccagc gatagcgaac acattaatct caaagtactt ggtcaggata atgcagtggt 840
gcagaaggtc agacctctcc tcaacgtcac ccgtatcgag gatgagattg ccaaacttga 900
agagaaagcc caaaaagccc aacgaacacg gcgtagacga aacatcttgt gtagttattg 960
tagaaggaca aaccagcaca ccagaacaac aagaactagc                       1000
<210>723
<211>478
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>723
cctcaagctg tcattggcat ggatattctg tgccaagcta aatccggtat gggaaaaacg 60
gctgtttttg caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc 120
aaatttcttc ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct 180
gaagcaacat ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca 240
cattgtcctt ggatgtagta tccatcacgc agaccgccga acaacacgac atagccaacg 300
aaatcacaaa cgctattagc aatcctgtcg gattcaccgt aatgcactcc tacgtcgttt 360
ggttcgtatt ggagtactag acgagaacag aatgaagctc gattacgtat tgggtctccg 420
aagtaatgta caacggccac actggacgta agataaatgc tcagattttc ttaggacc   478
<210>724
<211>584
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>724
cacttgacga aaacagcaat agcacaactc cacccactat ggtctttccc gccaaggagg 60
aaattaacat aaagaacaag gagaagccgg taattacaaa gctgcatatg aaaccggaaa 120
caacattatc gctgaagaag gaggttactt gaaggcaagg atgaaatggt aggaggacag 180
gatagcaacc aaatgaatac ggcagcgagg gaaaatggta ttgttgccac atggtagact 240
cctgttctaa tgttcaaact ggagatcaat ttgcaagact actcagacac aatttcaaca 300
gacatttgaa ttcaaaccga gctccgttgg gtccagccac ataggactaa gtgtggaggg 360
ttcattcatc aaaattcgct ttatgtgcac acatagcaca taagcataca tggcaaatat 420
gcctatccat ccagttgtca gctaacagaa gtgcccttat ggagggtgtt ttgaagaaca 480
cgctggcgaa tgtgagttgc agatgggctc aagaatacac cgctattgac caggatctcg 540
cttcagaata attccataga aaagctacca gcccatgcat ttaa                  584
<210>725
<211>869
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>725
ccgaagtgag atcggagcca aaaagcattg gttgcttgac ggtccaatgg aaaacgaacg 60
agaagtggat ggcttcagca atgctcggcc aggctgattg ctctttattt tgacactgga 120
atgtacagcg aagcgctaca actggaatcg accttactga ctactcgtct acgatatcgc 180
caaacatctg acatacgaaa acgttgaacg ttggttgcgc gaattgcgcc attcttttct 240
caggtaccaa tgttgctgct ggtaaagcac gtggtattgt tattggaact ggtcttaaca 300
ccgccattgg taaaatcaga actgaaatgt ccaacgaaat tgccaacact aactcaagac 360
agaacatccg taagttgata aaggatggtc ttattattaa gaagcccgta gctgtacatt 420
cccgtgccga tacctacaca gaaagctata ttagtaccat tggcgtagat tttaaaatca 480
ggacaatcga tttagatggg ttacaaaagg ataccaatac aagatgagag cagcatatgc 540
tcactttccc attaactgtg tcaccactga aggaaacaca gttatccagt ttgcaagctc 600
tctggcagat ttcagtcaaa tcggcaccag aaaatccatg agttacttta gcaatgtata 660
caagatctac gtctttagct acaggcgatt tccgatgaaa tagtggcatt aggttatagg 720
gaaagtgtca atctgtctca aattcgcaca tttgtggaaa tggactcgca cgaagaaaaa 780
gtttatcagg ccgtgagaga attaaaagtt caaggaggta tcggttcgtg tgtatcactt 840
aacgtgaaga gccccttggt ttccgacac                                   869
<210>726
<211>737
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>726
gtggcgtttt tctatttaca gtatgtgaat gtgtcaaagt aactgtgttt ttcaaaaatt 60
aacaaaagaa attcaaaatg tacaagtgga caaaaaatat taaacaaatg tatatagtgt 120
atctatttct aatcgaatca acaaaatatg atcttactga acagaatatg atgcaagcta 180
atattaaatg caactcgtat gttttattat atcctaaacc aaagacttat tcatcttgaa 240
ggtgactgtg tgccgtcatc tcttttattg agacaattag gacgtttttc gttctcagcg 300
gcttctcgga aatccctggc ttacagaaac ggatggtgac tatagtcacg gaactgtcaa 360
aattaatttt gtatcttata tgaagcctca aacgttttgg aaatatttct tctctttatc 420
aggaactgga aagaagtata tgccctcagt ttgttatctt tctctagatg atgggaggaa 480
aaatttttaa aatacctgtt tgtcagagtt ttattactat taagaagaat tcttcatctt 540
aaaggtaacc gggtgtcgtc atcactttta ttgacacaat taggacgttt tttgatctca 600
atggcttttg gtgtggacaa tagttataga actttcaaaa ccaattttgt gtcctgtcta 660
gatcatcaaa cggttttgag aagatttctt cccttcatat ggagctggaa agaagtattt 720
gacacctgtt agttatc                                                737
<210>727
<211>867
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(771)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>727
gcagtttgag aggaaagttt caacaccccg tatcttggaa acgaagcatt tgcggacata 60
cgtttataga gcaaactgtc attatttaac accctgtata ggcccacaca aaagattatt 120
acctccttca tgagactttt ttttttattg agttattcat gtcgagttgg acgtttctga 180
tatgaaaaat tttcaggagg gagacggttc gtaaatatgg gggtttataa actttggtgc 240
atctatggtg gttcctgttt atctgaacca tctcagatag ttaaggggtg gttaccccct 300
actatagggg ttgatgaagt aacactactc acagtatatt catttattta taagttgaag 360
taactacggt aaagagttgg tggctaaata tttatccgct gtgatgttta cccgctggga 420
tctcaaatac ccatgattaa tctttacgca atgaatttag aacgtcgaat gtggaatccc 480
ctgtttatgt tttggtatat ataaaaagtg aaagtgtttg tattataaat gctgaatcaa 540
cttgattata aataaagaat aatatttgct actacagctg accttgcatt atcgataact 600
gatacacttg tatagtaata taggtcaatc atgtttatga taaacaacgc gtattcgttt 660
accaaggaca tttaaatatt aaaagaatta gtcttgccct taataagatg gttactaaga 720
gatgctgtga atcccaatac acatccgaca actggagtaa gtatccttga naatttgtcg 780
gaaaatatta ccagtgaatt gtatttttat caaaatatac tgcaaaaaaa cccatcattt 840
atgactctat agtggacgca catatcc                                     867
<210>728
<211>802
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>728
cgtccgtgat aacaaaatca atcaaagagt tgtttattaa atagtattga tagtgtattt 60
gaaaaataat aatttattta aggcgtacaa ttaataaaaa gttatttatt gtttatatat 120
tatttatgga aaatccaagt atttcaagtc attaaaattc aaataaaagt attattttat 180
aagagtttgt tccgataacc gtaaataggt atgagtttag ttataaagta aagtgcccat 240
ggtgtcataa aatgtagtaa atgctaatgc ttcaagtacg tactacattt ttgaagattt 300
cactgcactt aaaaagcatt tgcctttctc cgcagtattt gctactattt accagcctac 360
atagaagaat gtactacgct tttgaagtat atgcttgttt agtagtattt tgcttcagtt 420
taagtgaagt tggtgggtgg tcgtcttcgg cgtaggtatt tttttgttac aatatggcag 480
catttatgaa tgtgtgtcat agaaaaattt acaaactaag aagaagattc ttaatttttg 540
gggtcattct tttatcaaat aaaatttaat aattgttaag aagattaaca aataacaata 600
attgttcatt tttatcctcg cgtaactctt tgtcgcttcg gatctgagtc actcattttt 660
actcatgtac aattctaata atttggtacg taaaaatgtg aatttacaaa tcacaagcac 720
atggaaaact aattccatca cgattggtgt aatgcagaca cggctggcac tacgctttgt 780
agtagatact tctggtcagt ag                                          802
<210>729
<211>862
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>729
ggaccatttt gagtgggagg atagctcaag tgttgttgtt tgagttattt tcgggcaatt 60
tctgcaggga agtttgggtc acctctcaac gtccacctca aaacagatgc gccctggact 120
aaaacaattt taagtactct cattgttaaa aagttgattc accacatttt cataacgatt 180
tttagggcgg ctgtacacgg actgctgagg tcgtttatca ctgagcgaca tacacggact 240
gctcgagcga tcgttgtaga cttctggagc ggtccattgt tgactacctg agttgtccct 300
tgtcgcattg caaccgctct cgatctgtcg atagcacgat ggaatttcat tatgctattg 360
acagcttgaa gcggtcttga ctgctcgagc tgtcgtgtgt atggcaacga atatacaatt 420
ataattcacc gcgcaaacgc tgcttcaaaa agtcgacctc aactgcttga agatgtccgt 480
gtacggccga tcttggggta tcttttttac tcttatcggg aatatttaag aaccgaaatc 540
cctaatgttt tccctatttg ttccagaatg atatacgtgt taatttccaa ctgagacttg 600
acggccagca cgaccgtacg acaagacatt ttcgaacagt aaaatcatta gttttagtaa 660
caaatacaaa gacagatggg aattcggttc tcgatattat gcagagtatt tacctgatga 720
tgaacactta ttggaggata gaaacgcata atttgcagaa ctgacttacc catgtaatgg 780
acaggtatga tggaaacgta tgtactttaa tgttttgtta gtatttttac gagagaagct 840
aagtaagttt gtgaagaatt ag                                          862
<210>730
<211>603
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>730
gctgctcctg tggcataacg gccccgtacc tggagaattt tacaattttc ccggcaaaca 60
gaccagctat tccaacccta taacacatac acagtctccc gttacaacat caacttctgt 120
attagctatt acttacgata aaggagtatt gataaccgga gatctggttg cttcatacgg 180
atctttagct aggtacagaa attgcccgag ggttattaaa gtcaatcaga atatcatctt 240
gggagccgga ggagactatg ctgatttcca atacgtcaag agtttcattg agcaaaaaat 300
aattgatgaa gaatgcattg atgatggact aaaaatgaaa ccaaaatcat tgtactgctg 360
gcttactaga gtaatgtacc aacgcaggag taaattagac cctttttgga ataatctggt 420
tataggagga atccaggatg gagtcccctt tcttggaacc gtagataaat tgggaactgc 480
atatacagac aaagttatat gtacaggtta tggagcccac atagccttgc ctcttctgag 540
agactcttta gataaaaatg gagctcttaa cttggccgat gccaagactc tgattcacaa 600
atg                                                               603
<210>731
<211>545
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>731
ggtactttgg gttgtacttg ggataaaaga cctttttgtg tttccaaata cattgtcata 60
taaattaaaa aagaaatggc tgccatcaga tctatgtctc gccttcttat taatagatca 120
cttcaaacca ctgcaaagag gacctatgcc gaccaaatga acttcacatt tgcagctgga 180
aatcaggttt actatactgc aacttcagtt aaacaagtag atgtgccatc tttctctggt 240
agctttggta tcctccccgc ccatgtaccc acactggctg tgctaaaacc tggagtagtc 300
actgtttacg aagatggtgg taatgttaag aaaatctttg tttccagtgg tactgtcacc 360
atcaatgatg attcatcagt tcagattctt gctgaagaag cccacccagt agaaaacatt 420
gatgtcaatg cagcaagaga catccttacc aaagcccaga gccagttatc atctgcaagt 480
acagatgagg cgaaagctga agcctccatt gccgttgaag tgggagaagc gtatcaaagc 540
ggctg                                                             545
<210>732
<211>496
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>732
gactaaactc cacagaactc ccagacccag tcggcctgac aaggctcgca gaatgggtta 60
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cgtataacct aatcctcttt cttggcatca actttgcctc ccctaatcct accagttctc 60
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<213>Diabrotica virgifera
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<213>Diabrotica virgifera
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cagtgacagg acggtgattc ttagccaagt agtcagcaaa ctcttggtat ggtgtcttag 60
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<400>796
acgccaaacc tcctaagcct aataaaatct  ttcctaagac aactacctac aatacgatca 60
tcattgatac ccaagttgac gagaacacaa caataaggcg tratatcaag gaatctcaag 120
catctctctc aaatgagcaa gcattttgat gattctccct ccaggcgtcc aatttaaatg 180
caacatataa aaacaattgt gccgtcaaaa acacgctata aattgccaaa actatataag 240
agaatcaaca aaatcctcga agttgtatgt ttatccctat ttactgtaaa aaagatataa 300
aaaatccaaa attaattatc ttctgtgttt gttagttgat gagacccttg gccttgaaga 360
gatcacgcat gagcccctta aggtacttaa tttcgcgatt tagatcagct atttgacttc 420
ccaaatcaac gttcttgtcc agaagaccct tttcttcact aagaattacc tcaatctcgg 480
ccttcttctt ttggcgatac ctggtagcag cgttcttgtt ttgctccttc ttgcgaacct 540
tcttgtcctc ggtaccgctt ttagagtaag gtctggtcct tttgcgggat gacttaacag 600
gaagttcgtc gttgtactgt tcaattggct ctggcatcca ttccggatca gaagagcagt 660
cgccaaagtt gctgctactg ctactactgc tcggggatcc aggactgctg cttccgctac 720
tgctccattg catgtcttcc acacgagttc tgactagctc gtccacgacg gccagctcca 780
tagcaatatc gggctgagga gtattaacgg gcaaggaata gttgatctcg tagttctctg 840
gcagaaattg cttctccggt tggacgtaaa cacgcttggt ttccactgga tactgtagaa 900
gtggctcgag attggtgagc attggttggc tcgggggaga ctgaggtgga gtgagcgtgc 960
catgggagaa ttccacgact tcgtacacgt tctggaattc cttgaggaaa tattgggtgt 1020
cattggagtt gacaaactca ttcttcaagt tttgaacagg tactggaatg gcacgcggag 1080
gttccacttc gtccaggatt ggtagtattt tttcatcgag aaggaagggt tcgtaacaga 1140
tagacatcat tc                                                     1152
<210>797
<211>988
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>797
ctcttggatt gatgcgtgag tttagatctt cgattctaac atgtcgacgt tcagcttgta 60
gtaaacgtat gggtaatact ctgattggcc gaatccgagg cctggaatgt caacgctatc 120
aacgttaggt cctgaaaggg cagcactact atcgaggtgg ccgtaaagtt ggttcaagac 180
atctcttaaa cgttttaatt gtttcttatt ggggtggatt aaaatagctt ggaaattgac 240
ggggaggcca tatcttaaaa cagattcaac aaataccctc aacgctttaa cgtgaatcca 300
ggcgcagaaa cactcgctga agttgacttt aagccatcta actaatggac caaattgctt 360
ctttttatcg gtgacgagtt tggttatctc gttctttcca gctgccagtt cctcttcgtt 420
atatatgaaa tcacgaacga tgaacttctt ttctctagcg tgtaacttga attcttcgac 480
gacctttttg aatagggata cagtatatag accgtgttcg ttatcctgtt taatcagttg 540
tgaagaacga gggactatca tgtcggtaat cttttcgtat gtcgcattcc attcgttgaa 600
ttgggctttt ggaactataa ccaacaatgt ctgcaaatat tcagaatcca aaataaaatg 660
ttcctttttc accaaatctg ccaagtttct tgttagtaaa cttcctgtct gtttcttctc 720
caaattctga agacttcctt tcaagttatt gtacgcagac gatttggtct tcagatcagc 780
gtcaatttgg ccaacttgtt tgctgattat atcggcgatg ttacggagcg attgcttgat 840
gggatatttg gcgatgtccc aagtaaatcg ggttaaataa gtgggcaaat cgctgttatt 900
ggcctgcagg ttttctgacc acttgtctct ctgttcttca agtacttctc caaggtactg 960
agctaccttt ctggtgacct gctccacg                                    988
<210>798
<211>208
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>798
gagtgcctgg agagctgctg gattaaacta cattaactat tccaacattg ctgccaaact 60
tctgaggcag gcacttaaac ctgaacttag aacagaagca atgagaagaa atgaaaccca 120
tattaaagta accaaatggc aagatggaaa gccaataagg gagtccacat tttaaatcca 180
taatttaagt ccaagtctat gtagtgtt                                    208
<210>799
<211>1326
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>799
ctgtatctgg tgtcaacggt ccactagtaa tcctcgaaga tgtcaaattt cctaagttca 60
acgaaattgt ccaactcaga ttatctgacg gaagtttaag atcaggtcaa gtacttgaag 120
tcagcggttc caaggctgta gtacaagtat tcgaaggtac atcaggtatc gatgccaaac 180
acactgtctg tgagttcaca ggagatattc tcagaactcc agtctctgag gatatgttgg 240
gaagagtatt caacggctct ggaaaaccta ttgacaaagg tcccccaatt ctggctgaag 300
actacctaga tattcaagga caacccatca acccatggtc ccgtatctac ccagaggaaa 360
tgatccaaac tggtatcact gccatcgatg tgatgaactc gattgcccgt ggtcagaaga 420
ttcccatttt ctcagctgct ggtctgccac ataacgatat tgctgcccaa atttgtaggc 480
aagccggtct tgtcaaaatc ccaggcaaat cagttttgga tgaccacgaa gacaactttg 540
ccatcgtgtt cgctgctatg ggtgttaaca tggagactgc tagattcttc aaacaagatt 600
tcgaagaaaa tggttctatg gaaaacgtat gtttgttctt gaacttggct aacgatccaa 660
ccatcgaaag aatcatcacc ccacgtcttg ctctaacagc cgctgaattc ttggcttacc 720
agtgcgaaaa acacgtgtta gtcattttaa ctgacatgtc ttcatacgct gaagctttgc 780
gtgaggtatc tgccgccaga gaggaagtac ccggtcgtcg tggtttcccc ggttacatgt 840
acaccgattt ggccaccatc tacgaacgtg ccggtcgtgt cgaaggccgt aacggttcca 900
tcactcaaat ccccatcttg actatgccta acgacgatat tactcaccct attcccgatt 960
tgacaggtta tattaccgaa ggacagatct acgtcgaccg tcaattgcac aacaggcaga 1020
tctacccacc aattaacgta ctgccatctc tctcacgttt gatgaagtct gctatcggcg 1080
aaggtatgac caggaaggac cactctgacg tttctaacca attgtatgct tgttatgcta 1140
tcggtaagga cgtccaggcc atgaaagccg tagtaggtga agaagctcta acacccgacg 1200
atcttctcta cctcgagttc ctaacgaaat tcgaaaagaa cttcatcacc caaggaaact 1260
acgaaaaccg caccgtcttc gagtctttgg acatcggctg gcaactactc cgtatcttcc 1320
ctaagg                                                            1326
<210>800
<211>1034
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>800
ccgggattta gtaggggcgg tccttccgga aagcgtttct tcacttcctt aatagctttg 60
tgcattcctt ttcgactatc tttcgacctt agatcgttgg gacagaacag ccgcacggac 120
gataaatgag ttatcagcgt cgaatctaca gtcactacct cgatttcgcc tttctggtct 180
tccaaacacg gtttcggtat catcgtttca tcgctatttt ctggtaatac gtgtaacaaa 240
atatccactt tgactttagt ttgggttttg ctttgtcctt gtttattttt gcgccccgga 300
ataatctctt ggaccttttt gaagttaacc acagcgcccc aatcgtattc atcttcagtc 360
gattttatct ttaaaagtct accaggttga agaaacggca acaaatattg cgagcttgtg 420
agatatgtcc taaacttgac acccaacagg tctaactctg ttctaattac gtgataagac 480
tgtattcgct cttcatcttt gatttcaagc gaattgaaaa gttctaattt ttcgttataa 540
tcatcataat atccgggtat tgcagcttga ttctgaaact ggaagaacga tcgctccaac 600
atatactcag gattgatttc ttcgaccctt agcaagttca gtaccatatt gtaagtcaaa 660
tggaaggcgg agttgatggg gtccggcaaa cctttaacta tgttcctacc ggctgccgga 720
ggcactttct cgtccaccat caatattacg atacctttat cgtccaggcc tcttcttcct 780
gcccttccag acatttggat gtattctcca gaagtaatcc atctgtactc actgccatca 840
aatttcctca ttccagtaaa caacacagtt cttgcaggca tatttaaacc catagcgaac 900
gtttctgtgg caaatagcgc ttttatgagc ccctcgccga ataaaatctc gatggtttcc 960
ttcaaaatcg gcaacaaacc accgtgatgg atgcctattc ctcttcttaa caacggcaga 1020
aggttctcga cttg                                                   1034
<210>801
<211>721
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>801
ggagaaacca tcccctatac aggaagcctc tatccctata gcactgtctg gaaaagatgt 60
acttgctaga gcaaaaaatg gaacaggtaa gactggtgct tacagtattc ctgtgttaga 120
gcaaatcgac cctaaaaaag actgtattca agcactaatt atagtaccaa cgagagaatt 180
agcattacaa acttcacaaa tatgcataga actagccaaa tacctagagg tacgtgttat 240
ggtgacaaca ggtggaacaa acttacgaga tgacattatg cgtatatacc aaaaagtgca 300
agttatcata gcaactccag ggcgtatact tgacttaatg gaaaaaggag tagcagttat 360
ggaccaatgt aaaattcttg tattagatga agctgacaaa ttactgtctc aagattttaa 420
gggaatgctt gacactgtga ttaaaaattt accacaagag aggcaaattt tactattttc 480
tgcaactttc cctttgacag ttgaacaatt tatgagaaag catttacgag atccgtacga 540
gataaatctc atggaagaac ttacattaaa aggtgttaca cagtattatg catttgtcca 600
ggaaagacag aaagtgcact gtttaaatac tctattttcc aagttacaaa ttaatcaaag 660
tattattttt tgcaattcta cacaacgagt agaattgctg gcgaagaaat aacagaactg 720
g                                                                 721
<210>802
<211>361
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>802
gctttagggc agtgtgtaga aactcctcgt ctttacgatc tttcagtaca aggcctttgg 60
cagtcacatt agtaaataga tgcagtgata ttttacaaaa tagctcacaa agtaaacctg 120
gttctttgat cgatatacag acaagattct attcaccaga ggtaataaaa cctaaacctt 180
ctgaagaaga aatcaaacaa agggtgctga aagtgtgttc ttcatatgat aaagtaactg 240
cagaaaagct gactttgaac tcccacttca tcaatgatct tggattagat tccctagacc 300
atgtcgaagt catcatggcg atggaagatg aattcggctt tgaaatccca gatgctgatg 360
c                                                                 361
<210>803
<211>183
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>803
ggtctttcta gcacaattta caattccatt tttaaaagaa cctcaacaat ggctttagct 60
gttgttgttt ctgcattttt cttcgagaga actttcgatt tagcaacaga cacctttttt 120
gaaagatata atgaagggaa attatggaaa cacatcaagg acaaatatga gcaggaataa 180
gtg                                                               183
<210>804
<211>372
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：
C4_Dv49_CG8055串联体；推定的结合，
载体活性：CG8055直向同源物
<400>804
cccgggttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 60
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 120
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 180
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 240
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 300
gccctcttta ccatggtagc aaagaaaaat gcgtcgaaaa ataaaagagt tgcactccaa 360
gccctctcta ga                                                     372
<210>805
<211>372
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：合成的
引物
<400>805
cccgggcaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 60
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 120
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 180
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 240
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 300
gctagccaaa tagatggaac ccttacaact attgaaatgc agagggaagc cctcgaagga 360
gctagctcta ga                                                     372
<210>806
<211>490
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>人工序列说明：  高度有效的WCR靶的C6串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26，Dv49，Dv23，Dv20，Dv13，Dv22，Dv18顺序的片段组成
<220>
<221>综合特征
<222>(1)..(70)
<223>串联体C6 Dv26片段
<220>
<221>综合特征
<222>  (71)..(140)
<223>串联体C6 Dv49片段
<220>
<221>综合特征
<222>  (141)..(210)
<223>串联体C6 Dv423片段
<220>
<221>综合特征
<222>(211)..(280)
<223>串联体C6 Dv20片段
<220>
<221>综合特征
<222>(281)..(350)
<223>串联体C6 Dv13片段
<220>
<221>综合特征
<222>(351)..(420)
<223>串联体C6 Dv22片段
<220>
<221>综合特征
<222>(421)..(490)
<223>串联体C6 Dv18片段
<400>806
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt 120
tgctactaaa ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa 180
ctacagaggt acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca 240
cacggtgctg cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat 300
ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg 360
tttggattca caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc 420
gatccttttc gatttgttgc tgccattggg gatccatctg gacttctgga ggaagcaagg 480
caggtgcagc                                                        490
<210>807
<211>560
<212>DNA
<213>人工的
<220>
<223>由5’-3’为Dv6，Dv1，
Dv88，Dv93，Dv4，Dv113，Dv127和Dv99顺序的片段组成的串联体
<220>
<221>综合特征
<222>(1)..(70)
<223>串联体C7 Dv6片段
<220>
<221>综合特征
<222>(71)..(140)
<223>串联体C7 Dv1片段
<220>
<221>综合特征
<222>(141)..(210)
<223>串联体C7 Dv88片段
<220>
<221>综合特征
<222>(211)..(280)
<223>串联体C7 Dv93片段
<220>
<221>综合特征
<222>(281)..(350)
<223>串联体C7 Dv4片段
<220>
<221>综合特征
<222>(351)..(420)
<223>串联体C7 Dv113片段
<220>
<221>综合特征
<222>(421)..(490)
<223>串联体C7 Dv127片段
<220>
<221>综合特征
<222>(491)..(550)
<223>串联体C7 Dv99片段
<400>807
ggcgcaagcg cttcagtgtt atcatatgcc cacttccagg catttaaatt ccctgactcc 60
atggaagttc tccatcaggg gccaaaaggg gataccaagc cattaccggc cactcatcca 120
cagctttagc atggtacata tagtgatccc aaccgtgcac ctgactgtga cccaactcaa 180
tgtgtaattc cggactgttt ctgctcagcg cccgccacca gttagcgccg aagtacaaaa 240
gggattggac cttatttttg ctggtatcag agctcaacag gcaccacgtg ctcaacgata 300
aaagactggt caggaaggca cattcctttt tgccttactt attcaaggca gggtgcatac 360
agagtagcca cgtaacaaat agcacatagc gaagtgttgt accagcataa tgtataagct 420
cctgtactta ccaaaggctc gttggcagat ctagaccagt tggacgaatt ggttattgag 480
tactgtggtg cagcgccccc tttatggcag atgaatgtct gatggccata ccagacatcg 540
aaggtattga ttacaccacc                                             560
<210>808
<211>372
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：  C8串联体；推定的钠/钾交换
ATP酶：CG9261直向同源物
<400>808
cccggggcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 60
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 120
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 180
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 240
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 300
ggagaagcta aaggaaatgg ccaaattaaa acatgctctc atcacgacta tcctactagt 360
ggagaatcta ga                                                     372
<210>809
<211>372
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：C9串联体；推定的钠/钾交换
ATP酶：CG9261直向同源物
<400>809
cccgggctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 60
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 120
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 180
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 240
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 300
acgatgctcc atgtattttt attaaattga acaaaatata taactgggag ccaatgtatt 360
acgatgtcta ga                                                     372
<210>810
<211>1000
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：具有推定的相同/不同作用模式的基因的C10串联体
约50％GC标准
<400>810
caagcccgcc aaaatgcgcg aacatctgga actcttctgg tctcgagtga atatccccaa 60
agttcttagg aatgcaatgc ttcctagacg tcgtcgagct ggctctgaaa ctgagcccca 120
agttatagta ggtaacgata attattggac gtggcattag gttataggga aagtgtcaat 180
ctgtctcaaa ttcgcacatt tgtggaaatg gactcgcacg cgcggcccaa cgacggcttc 240
aacaaacaca ggcgcaagtc gacgaagtcg tggatatcat gaaaacgaat gtagaaaaag 300
gtatggcagg aaagaaatgc tgaatccgcc attgaagctc ttaaagaata tgaaccagaa 360
atgggcaaag ttgtccgaca agacaaatcc ggtattcaga aaatccgggc atagcaaaca 420
tgccaaacac acacacgcag aaaggaaata tcagtcagac tcagaatcag atagtgatct 480
ggaatggatt ggacacagag gtgaatcaga ccagaggacg ttcgggggta tattaaaaat 540
aacgttgtgt gcgcacttgg aaccgaaaca agcagaccat catccgcagc tcagtgcgta 600
gccgaatgtg gccgtgcaca ctgtgcattt gtaggacagg tgtgcgggtt tcaacgtcat 660
gttatgatcc cttgcatata ttgatggaaa aacacgccaa agaagagagc agagtattaa 720
aaggagtatt gccaggtaca tagaccagca aggaactgta atcaaaatgg gcgatgaaaa 780
gaaggccagc gatagcgaac acattaatct caaagtactt ggtcaggata atgcagtggt 840
gcagaaggtc agacctctcc tcaacgtcac ccgtatcgag gatgagattg ccaaacttga 900
agagaaagcc caaaaagccc aacgaacacg gcgtagacga aacatcttgt gtagttattg 960
tagaaggaca aaccagcaca ccagaacaac aagaactagc                       1000
<210>811
<211>478
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：
高度有效的WCR靶的C12串联体，约50％GC标准，
由5’-3’为Dv23-Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20顺序的片段组成
<220>
<221>综合特征
<222>(1)..(70)
<223>串联体C12 Dv24片段
<220>
<221>综合特征
<222>(71)..(145)
<223>串联体C12 Dv13片段
<220>
<221>综合特征
<222>(146)..(222)
<223>串联体C12 Dv26片段
<220>
<221>综合特征
<222>(223)..(275)
<223>串联体C12 Dv18片段
<220>
<221>综合特征
<222>(276)..(338)
<223>串联体C12 Dv49片段
<220>
<221>综合特征
<222>(339)..(418)
<223>串联体C12 Dv22片段
<220>
<221>综合特征
<222>(419)..(478)
<223>串联体C12 Dv20片段
<400>811
cctcaagctg tcattggcat ggatattctg tgccaagcta aatccggtat gggaaaaacg 60
gctgtttttg caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc 120
aaatttcttc ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct 180
gaagcaacat ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca 240
cattgtcctt ggatgtagta tccatcacgc agaccgccga acaacacgac atagccaacg 300
aaatcacaaa cgctattagc aatcctgtcg gattcaccgt aatgcactcc tacgtcgttt 360
ggttcgtatt ggagtactag acgagaacag aatgaagctc gattacgtat tgggtctccg 420
aagtaatgta caacggccac actggacgta agataaatgc tcagattttc ttaggacc   478
<210>812
<211>869
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：人工序列说明：
在一些不同生物中有活性的基因靶的C14串联体，约50％GC标准
<400>812
ccgaagtgag atcggagcca aaaagcattg gttgcttgac ggtccaatgg aaaacgaacg 60
agaagtggat ggcttcagca atgctcggcc aggctgattg ctctttattt tgacactgga 120
atgtacagcg aagcgctaca actggaatcg accttactga ctactcgtct acgatatcgc 180
caaacatctg acatacgaaa acgttgaacg ttggttgcgc gaattgcgcc attcttttct 240
caggtaccaa tgttgctgct ggtaaagcac gtggtattgt tattggaact ggtcttaaca 300
ccgccattgg taaaatcaga actgaaatgt ccaacgaaat tgccaacact aactcaagac 360
agaacatccg taagttgata aaggatggtc ttattattaa gaagcccgta gctgtacatt 420
cccgtgccga tacctacaca gaaagctata ttagtaccat tggcgtagat tttaaaatca 480
ggacaatcga tttagatggg ttacaaaagg ataccaatac aagatgagag cagcatatgc 540
tcactttccc attaactgtg tcaccactga aggaaacaca gttatccagt ttgcaagctc 600
tctggcagat ttcagtcaaa tcggcaccag aaaatccatg agttacttta gcaatgtata 660
caagatctac gtctttagct acaggcgatt tccgatgaaa tagtggcatt aggttatagg 720
gaaagtgtca atctgtctca aattcgcaca tttgtggaaa tggactcgca cgaagaaaaa 780
gtttatcagg ccgtgagaga attaaaagtt caaggaggta tcggttcgtg tgtatcactt 840
aacgtgaaga gccccttggt ttccgacac                                   869
<210>813
<211>2694
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>813
ggtcgaccca cgcgtccggc ttgagtaaaa actgaaatca tataaaagag ataatttcta 60
ttgtgaacta atttttcaaa agtttctaca ttaagtacat attcattact aaataatggc 120
cgaaaacaaa aatccagagg atttggccac cgcaattctc cgtaagaaag atcgtccaaa 180
tagacttttg gtagaagaag cagttaacga tgataactcc gtggttgctt tgtcacaagc 240
aaaaatggat gaactacaac ttttcagagg agacacagtc ctactgaagg gcaagcgaag 300
gaaagaaact gtttgtatag tattatctga tgatacatgt agcgatgaaa aaattcgtat 360
gaatagaaat aatttaagag ttaggctttc agatgtagtt tctatccaag cttgccctga 420
tgtaaagtat ggcaagagaa tacatgtact tcccatagat gatacagtgg aaggactcac 480
aggaaatctc ttcgaagtat acctgaaacc ctacttcctg gaggcctatc gaccaataca 540
caaagatgac gtattcgttg tacgtggagg aatgagagct gttgaattca aagtcgtcga 600
gaccgatccc gctccgtact gtatcgtggc tccagacacc gtcattcatt gtgatggaga 660
tccaatcaag cgcgaagagg aagaggaagc tcttaacgca gttggatacg acgacatcgg 720
aggttgtaga aaacagcttg ctcaaatcaa agaaatggta gagttaccac tgagacatcc 780
tagtcttttc aaggctattg gagttaaacc accaagaggt attttacttt acggtccacc 840
gggtactggt aaaacactca ttgcacgtgc agtagctaac gaaactggag cgttcttctt 900
cttgattaac ggtcctgaga ttatgagcaa attggccggt gaatccgaaa gcaatcttcg 960
taaagctttc gaggaagccg acaagaattc cccagctatt attttcattg atgaattgga 1020
tgccatcgct cccaagagag agaaaacaca cggagaggtg gaacgccgta tagtatccca 1080
acttctaact ttgatggacg gtatgaagaa gagttcccac gttatcgtta tggccgctac 1140
taacagacca aactcaatcg atccagcttt acgtagattc ggaagattcg acagggaaat 1200
cgatatcgga atacctgatg caactggcag acttgaagtt ttacgtattc acaccaagaa 1260
catgaaattg gccgatgatg tcgacttgga acagatcgct gcggaaactc atggtcacgt 1320
aggtgccgat ttagcttcac tatgttcgga agcagccctt caacaaatca gagaaaaaat 1380
ggacctcatc gacctcgaag acgaccaaat tgacgcagaa gtcctaaact cactggcagt 1440
taccatggag aacttccgtt acgccatgac gaagagcagc ccaagtgctt tacgtgagac 1500
catagtagaa gtaccaaacg tcacttggga cgatatcggt ggcttggcta atgtcaagaa 1560
agagttgcaa gaattggtgc aatatccagt cgaacatcca gataagttcc ttaagttcgg 1620
tatgcaaccg tccagaggag tgttgttcta tgggccgcct ggttgcggta aaacgttatt 1680
agctaaggct attgcgaatg aatgccaagc caactttatc tcagttaaag gaccagagtt 1740
gcttactatg tggtttggtg aatcagaagc aaatgtccga gatatcttcg acaaggctcg 1800
atctgcggca ccttgtgttc tattctttga cgaattagat tcaattgcca aatcgcgtgg 1860
tggaaatgta ggtgatgccg gtggtgcagc cgacagagtt attaatcaaa ttctaacaga 1920
aatggacggt atgggagcca aaaagaacgt gtttattatc ggtgctacaa acagaccaga 1980
tatcatcgat cctgcaatat tgcgtccagg tcgtctcgat cagttgatct acatccctct 2040
gcccgacgag aaatctaggg aagccatctt caaagccaac ttgaggaaat cgcctgtagc 2100
taaagacgta gatcttgtat acatcgctaa agtaacccat ggattttctg gtgccgattt 2160
gactgaaatc tgccagagag cttgcaaact tgccatcagg caaagcatcg aaacagaaat 2220
taggagagaa agagaaaggg ctttgaaccc caatgttgct atggatttgg acgatgacga 2280
tccagtccca gaaatcacca gggcccmctt cgaagaggcc atgcgtttcg ccagacgttc 2340
cgtttcagac aacgacatca gaaaatacga gatgttcgcc cagaccttac agcaatctcg 2400
cggattcggt accaacttcc gtttcccgac agcagctggt ggacctgctg ctccaggagg 2460
taccggagga gaccaggcca acttccagga cgatcctgaa gacgatctgt atagttaaat 2520
gtttcaggtg ggctcaataa gcaccaactt tcaattttat ttttcatttt tgtatttatt 2580
tacagtaact cctcagtttg ctaacaatat tacattgtta acgcattcat atgttgttta 2640
atataatagt tttggaatat aattacaagt ttgtctaaaa aaaaaaaaaa aggg       2694
<210>814
<211>622
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>814
gtcacaagta gggctaaaat gaagcaaatt gtaacaaacc aaacggtaaa aattcctgag 60
ggaattacag taaccactaa gtcaagggta gtaactgtaa aaggaccccg aggtaatctg 120
aagagatcct tcaaacatct taccctggac attcgaatga tcaaccccag gttactgaaa 180
gtagagaaat ggttcggtac caagaaggaa ttagctgctg tcagaacagt atgctctcat 240
gttgaaaaca tgttaaaggg tgttacaaaa ggataccaat acaagatgag agcagcatat 300
gctcactttc ccattaactg tgtcaccact gaaggaaaca cagttatcga aattagaaat 360
ttcttgggag aaaaatacat cagaagagta aagatggccc caggtgttac agtagtaaac 420
tccaccaaac aaaaggatga acttatcatt gaaggaaact cattggagga tgtttcaaag 480
tcagctgccc ttattcaaca atctacaaca gttaaaaata aggatatccg taaattctta 540
gatgggcttt atgtatctga aaaaacaact gttgtacaag aagaataact tgtatttttg 600
aaataaattt aagtttatat tt                                          622
<210>815
<211>670
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>815
aaattctttt acggaagaca cgttgagagg tgcatttgca cgatgagttc cttaaaactt 60
cagaagaggc tagcagcctc tgttatgcga tgtggtaaaa agaaagtatg gttggaccct 120
aatgaaatca acgaaattgc caacactaac tcaagacaga acatccgtaa gttgataaag 180
gatggtctta ttattaagaa gcccgtagct gtacattccc gtgcccgtgt tcgcaaaaac 240
actgaagccc gcaggaaagg aaggcactgc ggttttggta aaaggaaggg tactgctaat 300
gcccgtaccc crcaaaagga attatggatt caacgcatga gagttttgcg tcgtctcctt 360
aaaaaataca gggaagctaa aaaaattgac agacatctat accactcact ctacatgaag 420
gccaagggta acgtattcaa gaacaagcgt gtccttatgg aatacatcca caagaagaag 480
gcagagaaag cccgtgccaa gatgttggca gaccaggcca atgccagaag gatgaaggta 540
aaacaggcta gagaaagacg tgaggaacgt atcgccacaa agaaacaaga agttttgcag 600
aactacatga gggaggatga agctgcggcc actaagaaat aagttaattg ttttataaga 660
tgactatatt                                                        670
<210>816
<211>871
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>816
gttcgcctga tctgtctttc atatttttaa agtcaagatg gctcgaggac ctaaaaagca 60
tttgaagcgt ttaaacgcac ccaaagcatg gatgttggac aaattgggag gtgtatttgc 120
cccccgtcca tccaccggtc ctcacaagtt gagagaatct ttaccattag taattttctt 180
aagaaacaga ctaaagtatg ccctcaccaa cagtgaagtc acaaaaattg ttatgcaaag 240
attaattaaa gtcgatggaa aagtcagaac agacagtaac tatcctgcag gatttatgga 300
tgttattact attgagaaga ctggtgaatt cttccgtctt atctatgatg ttaaaggtag 360
atttgccatt caccgtatta cagctgaaga agcaaaatac aaactctgca aagtacgaag 420
agtccaaact ggaccaaaag gaattccatt cttggtgaca catgatggcc gtaccatcag 480
ataccctgac ccaaacatca aagtcaatga caccatccaa ttggaaattg ccacatctaa 540
aattttagac tacattaagt tcgaatctgg aaacttatgt atgatcactg gaggaagaaa 600
tttgggtcgt gtaggtacag ttatcaatag ggaacgtcat cctggatcct ttgatattgt 660
gcatgttaaa gatgctaatg gtcatgtatt tgctactagg ttaaataacg ttttcattat 720
tggtaaggga gctaaggcct tcgtttccct cccaagagga aagggagtca aattgtctat 780
tgctgaagag agagacaaga ggttagcagc caaaacacat taaatgtaat ggttgattac 840
attattttca ataaaactta aaaaatctga a                                871
<210>817
<211>2410
<212>DNA
<213>Diabrot ica virgifera
<400>817
cggacgcgtg ggggagaaac ataacatcca tccacaaata tgtcgaaagt aaggatcgga 60
gatgaagaga aggaagggca gtatggttat gtccatgctg tctcaggtcc agtcgttact 120
gctgagaaaa tgtctggttc tgctatgtac gaactggtac gtgtcggata ctatgagctg 180
gtaggagaaa tcattagatt ggaaggtgac atggctacta ttcaggtata cgaagaaaca 240
tcaggtgtaa ctgttggtga tccagtatta agaactggta aaccactttc agtagaactt 300
ggacctggta ttatgggttc catttttgat ggtatccaac gtccattgaa agacatttgt 360
gacgctactg atagtattta catccccaag ggtattaacg taccttcttt atcgagaaca 420
gcaaaatggg acttcaaccc aatcaacatc aagttgggat ctcacttaac tggaggtgat 480
atatatggtc tagttcatga aaacaccctt gtcaaacaca aaatgattct gcctcctaga 540
gctaagggta ctgtaaccta cattgcagaa ccaggaaact acactgttga tgaagtagta 600
ttggaaactg aatttgatgg tgatcgtacc aaatatacta tgttgcaagt atggcctgta 660
cgtcaagcaa ggccagtcag tgaaaaatta cctgccaacc atcctctgct tacaggacag 720
cgtgtacttg atgctctttt cccatgtgta cagggtggta ctactgccat tcccggagct 780
ttcggttgtg gaaaaactgt aatttcacaa tctctttcca aatattccaa ctctgatgtc 840
attatctacg tcggttgcgg agaaagaggt aacgaaatgt ctgaagtatt gagagatttc 900
cctgaattga ctgttgaaat tgacgggcac actgaatcta ttatgaaacg taccgcattg 960
gtcgccaaca catctaacat gcctgtagct gctcgtgaag cttctatcta tactggtatt 1020
actctttctg aatacttccg tgatatgggt tacaacgtat ctatgatggc tgactcgaca 1080
tcacgttggg ccgaagcttt gagagaaatt tcaggtcgtt tggctgaaat gcctgccgat 1140
tccggttatc cggcttactt aggtgcccgt ttggcttcct tctacgaacg tgctggtcgc 1200
gttaaatgtt taggtaatcc agacagagaa ggatccgttt caattgtagg agccgtatca 1260
cctcctggtg gtgatttctc agatcctgtt accactgcta ctcttggtat tgtacaggtg 1320
ttctggggtt tggacaagaa acttgcccaa cgtaagcact tcccttcagt agactggctt 1380
ggatcatatt ccaaatattt aagagcattg gacgactttt atgacaaaaa cttccaagag 1440
tttattcctc ttagaaccaa agttaaggaa attcttcagg aagaagatga tctagccgaa 1500
attgtgcagc tggtaggtaa agcatctctg gcagaaacgg acaaaatcac cttggaaatt 1560
gccaggcttc ttaaagaaga tttcttgcaa caaaactcat actcttctta tgacagattc 1620
tgtccattct ataaaactgt cggtatgttg agaaacatga tcggtttgta cgacatggcg 1680
agacacgctg tagaatcaac cgcacaatca gaaaataaga tcacttggaa cgtaataaga 1740
gattcaatga gtggaatttt atatcaactt agcagtatga aatttaagga tcccgtaaaa 1800
gatggtgaag ctaaaatcaa ggcagatttt gatcaattat atgaagatat tcagcaggcc 1860
ttcagaaact tagaagatta aatcttttta aggaaatttt cctattttgt tcatcagtgt 1920
aagtttaaaa atatagcgat atttatcaaa aagaataata aggcctctat ccctcacttc 1980
tgtgaatatt aatatggccg tactaaagat agtaactaaa gataggtttt ctcttttttg 2040
atattatcct gtacaaaata aattatgtaa attgttgaat atgtgtatag tttttttggg 2100
tgagggtaca gtgcttatta aatacttttt aaacattttt cccgccattc caattactat 2160
taagtttttt cgttttaata cttttttaaa tatacaggtg cttaatatcg tttatatttt 2220
cagtattact tggttttctt catgtaaatt gttttaaatt tttcttttac ccttttaatc 2280
ttgtatatta cattacccaa ttaaagttaa ttgtacagat taagataaac gagtatctta 2340
taacatctat tagattgtta gaatcaataa atgtagtgta attgttctgt tttgaacaaa 2400
taaatgcatc                                                        2410
<210>818
<211>988
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<220>
<221>修饰的碱基
<222>(884)..(965)
<223>n＝a，c，g或t/u
<400>818
aggacgcgtg ggttcgtatt tttttcttaa caaaagggca aaatgagctt ttttggaaaa 60
ttgttcgggg ggaaaaagga agagatagcc cctagtcctg gggaggctat tcaaaaactc 120
agagagactg aagaaatgtt aataaaaaaa caggattttt tagaaaagaa gatagaagaa 180
tttaccatgg tagcaaagaa aaatgcgtcg aaaaataaaa gagttgcact ccaagccctc 240
aaaaagaaga aacgattgga aaagacccaa ctacaaatag atggaaccct tacaactatt 300
gaaatgcaga gggaagccct cgaaggagct agcacaaata ctgctgtatt agattctatg 360
aaaaatgctg cagatgccct taagaaagct cataagaatt tgaatgtaga tgatgttcac 420
gatatcatgg atgacatagc cgaacaacac gacatagcca acgaaatcac aaacgctatt 480
agcaatcctg tcggattcac cgacgatctg gatgacgatg aattagaaaa agaattagaa 540
gagctcgaac aagaaggatt ggaagaagac ctgctccaag tgccaggtcc aactcaactg 600
ccggctgtgc ctgctgatgc agttgctact aaaccaatca aaccagcagc taaaaaagtt 660
gaagatgatg acgatatgaa agaattggaa gcctgggcct cgtaaaattc ctgaaatctg 720
gatatttgta aacgaaatca cccatctaag atgaaaacat tataaatata taggtaataa 780
cagctaaaaa cgtttcaatg tagaacaagc ttttgctgaa aaggcgtctt gcaaaaaatg 840
ttgataattt agaattctct atatattata tatttgccct ttangaaaga tttcttttat 900
agtcatagtt caaccanacg tttcataaat agaattacag gggtgtcaga attctacngt 960
gattnattga aaaaaaaaga cttttcct                                    988
<210>819
<211>3001
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>819
aagcagtggt aacaacgcag agtacttttt tttttttttt ttttttttga cagttcgaaa 60
atggtgatgt gtttataatt cgtgtcaatt tagtgaaata gcattcaatt ttttgtataa 120
gatctcttca aaatgccact tcgattagat ataaaaagaa agctaacagc tcgctcagac 180
cgggtaaaat gtgtggatct tcaccctaca gaaccttgga tgctgtgttc tctttacagc 240
ggaaatataa acgtttggaa caccgaaaat cagcaactgg ttaagacttt tgaagtatgt 300
gatgtacctg ttcggacagc taagtttttg cccaggaaga actggatagt cagtgggtct 360
gatgatatgc agattcgagt tttcaattac aataccttag atcgggtaca ttcttttgag 420
gctcattcgg attatgtgag atgtattgtc gtacacccta cacaacctta tatattaaca 480
agtagtgatg atatgcttat caagctttgg aattgggaaa aagcatgggc ttgtcagcaa 540
gttttcgaag gacacactca ttatattatg caaatcgcca taaatccaaa agacaacaac 600
acatttgcca gtgcatccct agatagaaca ttgaaagtat ggcaattggg agcgtccaca 660
gcgaatttca cactagaagg tcatgagaaa ggcgttaact gtgtggacta ttatcacggt 720
ggagataaac cttatttaat ctcaggcgct gatgatagat tagtaaaaat ctgggattat 780
caaaacaaaa cttgtgttca aactttggaa ggacatgctc aaaatgtaac cgctgcatgt 840
ttccatccag aacttcctgt agctcttact ggaagtgaag atggtactgt cagagtgtgg 900
catgccaaca cccataggtt agaaagtagc ttaaattatg gctttgaaag agtatggact 960
attttctgcc taaagggatc caataacgtg gcattgggtt atgatgaagg tagcattttg 1020
gttaaagttg gtagagaaga accagctgtt agtatggatg ccagtggagg caaaattatt 1080
tgggccagac actctgaact tcaacaggca aatctcaagg cgttagctga aggtgcggaa 1140
ataagagatg gagaacgcct tccagtttct gtaaaagata tgggtgcttg cgagatatac 1200
cctcagacaa ttcaacacaa tcccaatggc cgttttgttg ttgtctgtgg ggatggagaa 1260
tacataatct acacagcaat ggctttaaga aacaaagcgt ttggtagcgc acaagaattt 1320
gtgtgggctc aagattccag cgaatatgcc atcagagaat ccggatctac tatcagaatt 1380
tttaagaatt tcaaagagaa gaagaatttt aagtccgatt ttggagctga aggtatatac 1440
ggtggatacc ttttgggagt caaatcggtt tctggtttga ctttctatga ttgggaaact 1500
ctcgatttag tcagaagaat cgagatacaa ccaaaagcag tttactggtc agatagtggt 1560
aaattagtat gtttggccac agaagatagc tactttattc tttcttatga ttctgatgaa 1620
gttcaaaaag ccagagataa caatcaggtt gcggatgatg gagtagaatc ggctttcaat 1680
cttctaggtg aaataaacga atcagtgcga actggtctct gggtaggcga ctgttttatc 1740
tacacgaatt ctgttaatcg tatcaactac ttcgttggag gtgaactggt tacaattgct 1800
catttggacc ggcctttgta tgtcttggga tatgtgccta aagacgatag attatacctc 1860
gtagataaag agttgcgcgt agtaagctac caattacttc tttctgttct tgaatatcaa 1920
actgccgtca tgagaagaga ctttccaaca gcagacagag tacttccgtc cattcctaag 1980
gagcacagaa cgagagtggc acatttctta gaaaagcaag gcttcaaaca gcaagctttg 2040
gccgtaagta cagatccaga gcacagattc gagctggcag tagcattaga ggatcttaat 2100
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a                                                                 3001
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<223>人工序列说明：合成的
引物
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引物
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引物
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引物
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<220>
<223>人工序列说明：合成的
引物
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<223>人工序列说明：合成的
引物
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<220>
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引物
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<220>
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agataggcca atcactatca aagacgacaa aggcaacact agtcgatgca ttgctgatat 360
cgtatcgcta ttcatcacta taatggacaa actgcggttg gacattcgtt cgatggataa 420
cttacatcct gacgtgaggg acttagtaga tactatgaac agacttagca ttctgccatc 480
ggatttcgat ggaaaggtaa aagtggctga atggttaaat actttaaatg aaatgcaggc 540
ctctgatgaa ttatccgaag ctcaagtgag gcaactgttg tttgatcttg aaagtgcgta 600
tgcgtccttt aataaagtcc ttcataattc tgcctaaatg tacgagatag ttgttatgat 660
tgttacacg                                                         669
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>838
gatggtaggg tgacgagcag tgtgactcat ttttaatttt atattgtcaa atatttaggt 60
gttttgctgg ttattattat tatattattt aaaaatggag tggttatttg gaaaaaaagt 120
aacccccgaa gaaatgcttc gtaaaaacca acgagcatta aataaagcca tgagagattt 180
agatagagaa aagcaaaaga tggaacagca ggagaaaaaa gtaataaacg atattaaaaa 240
attagccaag gaaggtcaaa tggacgctgt caaaataatg gctaaagatc tggtcagaac 300
tagaaggtat gtgaagaaat tcatgttgat gaaggctaac attcaagcag tatcattgaa 360
aattcagact cttagatccc aaaatacaat ggcacaagct atgaaaggtg tcactaaagc 420
tatgcaaagt atgaataggc agctaaattt accacagata caaaggatat tacaagaatt 480
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cgatgcggat ttg                                                    793
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<211>767
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>839
gctacctcct cttcatcctc tgattcttcc tcattgactt ccactttagg ttcttctgaa 60
ggcacggaag gcatctcttg ctcaatcata ccagccaatt cttcttctac agctgcttca 120
tcttcatctg tcaattgacc actaagaagt tcgttaatct cattctgttt gtcaacccct 180
tctcttgttt catccaatat acgttcaata tcttcaattt tgagggaatc attaatttgt 240
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tctatatcac tagccatttt atcgagatta tcaagttgta catctagctt ggacaacagc 360
tgttcttgat acctcttctt cttaagtaaa agttttgctc tgtctctttg gccattgtta 420
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tgtctcaatt tatctctttg ctgtttgagc tgtaacactg ctttatcgtg ttctgttact 540
ctggagggag gctttttttt actaaaaaag atacccattt tattacttta gtaaaatata 600
aaatttctct tgatttgtgt tattcaaaaa attgatacca tccttatatt atagttttcc 660
tattatcaca cgttttatgc tgttttctta tatcttttag gactaatttt taatcagggt 720
tgccagatga aatttcagaa tatccctaga cgggagcttc aatttcc               767
<210>840
<211>588
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>840
ctgcttcaaa gaaggaccac atgactaccc tagaatttgt gctttcattg atgcttctat 60
gaattctgtc tctaacctgc atatattctt gttcttgttt tacaccagac aatgaatttg 120
taagttctct gatcatttcc tccaacttat tagcattttc accttcttgt tgttctgcct 180
ttggagattc cccaacagcc atattaaaca taacaacttt aggtgtcata gttgacatct 240
tgtttgagaa acaatatgta tatataccag atgtgtgggc tgcaaatgtg tattttccgg 300
cagtttccct ttcaccctgg tataagttct ggccgtttgg atctataata cgcacatcta 360
tgtcaaggaa tcctccttct gctatttcaa aagtgagacc catttttgtg ccagcttcca 420
ctttgtcaaa gaaacattct tctgcatgtg catctactgt gataaaatag gccaaacttt 480
gatttatgcc caaacaaacc agtgaaataa ggaagccgaa aagatacatg tttactttaa 540
attaaaatta gaaaacttcg gccacgtaac ctctcacact tgacgttc              588
<210>841
<211>1098
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>841
cctgtacttt cctgtatcct catgttcact gtctaccgtt ttactcactt cctttgttaa 60
tactaatacc atttcttcta tgttccgtga agagactaat tcaagggcta gacttaaagt 120
cttcttgcgg acttctaagt caggagcaga gagtactctc agtatgtcca taactaaatc 180
ctgcagaatt ctttcgtgat taggaagctc cttaagtgct atcagcctgt ccaaaacgat 240
gagttttaca ttgttgtcac tttctttgat aattaactca atgtaacagc tagcagcagc 300
tttaacggca gtcggggcac tggagagggt gactaaagtt cctgcagctt cgtacctgac 360
agcaggactg cttgagttca acaagttata tatacatcta ataaatctag atctttccgc 420
aggattggaa tgacacacct tatatatcaa ctcaacgatg accagttgta gaatatctcc 480
aaatgaattt acttgatcta aacatgatgc caaatacgac aacgcccttt cttggtcagc 540
atgaagaagc attaaaaacg catttctttt acaagacatg tcttgctcac catccaaata 600
attggagatc agttcaggag catctggaat gagggcttca aaatttttgt aaatggtaaa 660
aattgccagt acagcattcc tcctcacata gctgtgccta tgatccaaac aagctctaat 720
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agaacctctc aaaaattcat ttgggtgttg cagatctttt ctataggcat cacataccaa 840
aatcatctct tgtagtagtt taccttctgg atttgttttt ggaactattt cccagaaaat 900
caataatagt ttttttgcca aatgatcttg tagaggtaaa acgtttctta taatggtcat 960
taggaatcca ttcggcaacc tttctcctgc cagaatcatg tgaattattt tttctaatgc 1020
tcttattttt actttaacct cacccttttc taaatccatt tttagttgca tttcattgta 1080
gggctccgaa tctgttgg                                               1098
<210>842
<211>718
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>842
ccttgttctt gattggaact gggttttgtt tcatttgcag aacgatggaa cgcattcgag 60
aaacgtcttt gctgccttgt tttgctttag gattgaaatc acacaatttt gctattcttt 120
cccattcggt tcccggttct agttcgtcat cttcggctac gaactgcttt tcagcgttcc 180
tattagcagc ttttgtcttg gctatagctt cttcgtgatt cttgtaccaa tcttctaatt 240
ctttctttgc tacttccctc aattcttgct tctttttctc ttcttcctga tctttttcct 300
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cttgtcttat tgtaagtggg gacactcttt ccctgtattc tttatctgga tcaaaatcgg 420
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ttgttaatct taaggataag aaaagctgct attttcccac tgacactgac agcaaagc   718
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<211>842
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>843
caatcaagct ggaatggtag aaactgaagg ggaatattgc tggcaaatcc tgtgaaaatc 60
attttctttt atcttcagat cacgaatgta tggatgatca ggatttgcat ccttcaactg 120
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gttaacaagt gtatcaggat agttggcatc cttatcaagt gcttcttgaa gagctgcttc 240
ggcttcctca tatttggctt ggccaatgaa agtcactgct tgtccgttta gcaacaatgg 300
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tccaccagtg gatacattaa tccaagcttg agccagttgt gttaaagttg catcatcgtc 420
cttatcttgc atctctttca gcttcttcct tgccaaatct actctatcca atttcaaaag 480
tatatctata ataaaggcca ttgcttcgag gctttctgta gcgtgcaaaa ctttatacgc 540
agcatcaaga ttgccttcgt taacataaat agtagctgct accaaaatta gagtatcatt 600
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gatttcgtct aatactacta ggaatttatt ttgggccata taggaccggt aggtgtagaa 780
gtctctttgg actgctactt cgggcgttga cggctttctg agtttttgtg cctcgtttat 840
gc                                                                842
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>844
cttctgcaaa agatttggca tacgagatca tgtgcaggta tatcaggaaa aagtcagatc 60
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ttgtggactt tcagtattta tttggaatca gtggctatat tgccgcaatt gttcatggtc 360
agtaaaacag gagaagcaga aagtattact tcgcactact tattcgcatt gggatcttat 420
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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gacga                                                             725
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<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
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gcgtgggcgt ggcttataat gctagtatag gaggtgtacg tatgttagat ggtgtagtaa 60
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gagcttttat atacggagta actagtggga gaaaaggaaa aggatctatt ttcgtttggg 240
cttcgggaaa tggaggccga catacggatt cctgcaattg tgatggatac accaacagta 300
tctttacctt gagtatatct agtgctacac aaggaggtta caaaccttgg tatttggaag 360
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ctggaacttc agcttcagca cctttagctg ctggaatatg cgccctagct cttgaagcca 540
accccacgtt gacgtggcgt gacatgcaat atttagtagt actaacttca agagctcctc 600
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<210>847
<211>140
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.1串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv49顺序的片段组成
<400>847
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt 120
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<210>848
<211>210
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.2串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv49-Dv2 3顺序的片段组成
<400>848
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt 120
tgctactaaa ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa 180
ctacagaggt acagaaaaag ggtgtcaagg                                  210
<210>849
<211>280
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.3串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv49-Dv23-Dv20顺序的片段组成
<400>849
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt 120
tgctactaaa ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa 180
ctacagaggt acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca 240
cacggtgctg cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag                       280
<210>850
<211>350
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.4串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv49-Dv23-Dv20-Dv13顺序的片段组成
<400>850
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt 120
tgctactaaa ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa 180
ctacagaggt acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca 240
cacggtgctg cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat 300
ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc            350
<210>851
<211>420
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.5串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv49-Dv23-Dv20-Dv13-Dv22顺序的片段组成
<400>851
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt 120
tgctactaaa ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa 180
ctacagaggt acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca 240
cacggtgctg cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat 300
ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg 360
tttggattca caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc 420
<210>852
<211>140
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.6串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv49-Dv23顺序的片段组成
<400>852
ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt tgctactaaa 60
ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt 120
acagaaaaag ggtgtcaagg                                             140
<210>853
<211>210
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.7串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv49-Dv23-Dv20顺序的片段组成
<400>853
ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt tgctactaaa 60
ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt 120
acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg 180
cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag                                  210
<210>854
<211>280
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.8串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv49-Dv23-Dv20-Dv13顺序的片段组成
<400>854
ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt tgctactaaa 60
ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt 120
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cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct 240
ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc                       280
<210>855
<211>350
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.9串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv49-Dv23-Dv20-Dv13-Dv22顺序的片段组成
<400>855
ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt tgctactaaa 60
ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt 120
acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg 180
cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct 240
ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca 300
caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc            350
<210>856
<211>420
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.10串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv49-Dv23-Dv20-Dv13-Dv22-Dv18顺序的片段组成
<400>856
ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt tgctactaaa 60
ccaatcaaac gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt 120
acagaaaaag ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg 180
cacaattctt aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct 240
ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca 300
caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc gatccttttc 360
gatttgttgc tgccattggg gatccatctg gacttctgga ggaagcaagg caggtgcagc 420
<210>857
<211>140
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.11串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv23-Dv20顺序的片段组成
<400>857
gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt acagaaaaag 60
ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt 120
aagagagagg ctgtttgaag                                             140
<210>858
<211>210
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.12串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv23-Dv20-Dv13顺序的片段组成
<400>858
gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt acagaaaaag 60
ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt 120
aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg 180
gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc                                  210
<210>859
<211>280
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.13串联体，约50％GC标准，由5_3’
为Dv23-Dv20-Dv13-Dv22顺序的片段组成
<400>859
gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt acagaaaaag 60
ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt 120
aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg 180
gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca 240
tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc                       280
<210>860
<211>350
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.14串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv23-Dv20-Dv13-Dv22-Dv18顺序的片段组成
<400>860
gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt acagaaaaag 60
ggtgtcaagg ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt 120
aagagagagg ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg 180
gagggaaacg aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca 240
tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc gatccttttc gatttgttgc 300
tgccattggg gatccatctg gacttctgga ggaagcaagg caggtgcagc            350
<210>861
<211>140
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.15串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv20-Dv13顺序的片段组成
<400>861
ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt aagagagagg 60
ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg 120
aaggccttag ctcccttacc                                             140
<210>862
<211>210
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.16串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv20-Dv13-Dv22顺序的片段组成
<400>862
ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt aagagagagg 60
ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg 120
aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca tcgacttctc 180
tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc                                  210
<210>863
<211>280
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.17串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv20-Dv13-Dv22-Dv18顺序的片段组成
<400>863
ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt aagagagagg 60
ctgtttgaag tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg 120
aaggccttag ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca tcgacttctc 180
tctgaaatca cctttgggag gcggtcgtcc gatccttttc gatttgttgc tgccattggg 240
gatccatctg gacttctgga ggaagcaagg caggtgcagc    280
<210>864
<211>140
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.18串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv13-Dv22顺序的片段组成
<400>864
tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag 60
ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca 120
cctttgggag gcggtcgtcc                                             140
    <210>865
<211>210
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.19串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv13-Dv22-Dv18顺序的片段组成
<400>865
tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag 60
ctcccttacc tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca 120
cctttgggag gcggtcgtcc gatccttttc gatttgttgc tgccattggg gatccatctg 180
gacttctgga ggaagcaagg caggtgcagc                                  210
<210>866
<211>140
<212>DNA
<213>人工的
<220>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C6.20串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv22-Dv18顺序的片段组成
<400>866
tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag 60
gcggtcgtcc gatccttttc gatttgttgc tgccattggg gatccatctg gacttctgga 120
ggaagcaagg caggtgcagc                                             140
<210>867
<211>70
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>867
catcacgact atcctactag tggagaagta tgcgaagtcg atgtcagaga ttgggaagaa 60
tgcaacaggg                                                        70
<210>868
<211>70
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>  868
ctccaagtgc caggtccaac tcaactgccg gctgtgtctg ctgatgcagt tgctactaaa 60
ccaatcaaac                                                        70
<210>869
<211>70
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>869
gatgaggaac agacagaaca aaccgcaact gaaacggcaa ctacagaggt acagaaaaag 60
ggtgt caagg                                                       70
<210>870
<211>70
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>870
ggtgagatgg aacgagattg tcaaatttca cacggtgctg cacaattctt aagagagagg 60
ctgtttgaag                                                        70
<210>871
<211>70
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>871
tctcttcagc aatagacaat ttgactccct ttcctcttgg gagggaaacg aaggccttag 60
ctcccttacc                                                        70
<210>872
<211>70
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>872
tcatcgtccg tttggattca caaaaacaca tcgacttctc tctgaaatca cctttgggag 60
gcggtcgtcc                                                        70
<210>873
<211>70
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>873
gatccttttc gatttgttgc tgccattggg gatccatctg gacttctgga ggaagcaagg 60
caggtgcagc                                                        70
<210>874
<211>1358
<212>DNA
<213>Diabrotica virgifera
<400>874
cttgttgaat tggaggaggt ggcttcaaaa attttgcatt tggatctaca tctggaaaac 60
ctttcttttc tccaatttgt tccttcagct gttcagcttc atctaccatt ccgtgagtag 120
cagctgtcaa gtaggccaaa gaaagttgat tggaagcctt caaaatttta acacgctctt 180
caagatcacc aagcaaaagt gcagcatgat attgagatga tttagctttt ctaatttccg 240
caattttcat catttttctc aatttgtcca ggttgccggt aatcagatat aggaatgata 300
atttttcgaa actcttggtc ctttgataac acatctcaac tacttgatgg tttccttgcc 360
atagagcagc atgtgctagt tgatcccaac aagctttgtc attcaaagat ttcgcagcat 420
ctagagcaat ctcaatattt ccacattcca gagccaaagt aaatcgagtt ttgtcgtctt 480
ttacaaaatg taaggctact tcaggataac ctttttgttg taagtaagaa atcatagatt 540
gtcccaccaa ttttgaattt ctaaccatat acaaaacttc ttcatatttg tgattaatta 600
atgcaagttt gaatttgtat tccattgaat ccactgtcaa tacccgtggt ttgcattcac 660
gatcaaggca aaagatctgg tttcctctta ctctggtgat gtatattgga agatcgaggg 720
ttctaataat tccttggtca ccgtttttaa gtgtatattt caaaatggtt gcttgtagta 780
taaataaaaa ctcctgtatc atcccaagct ccagatttca ctctagtatt ttcgtgtaaa 840
caacataaaa catccaattt cctattacaa atagtcacgt tgtgtttgga aaggagagcc 900
aagtgggaca tatcagacga ccagacaacg tatctgcatt tgttaatttt cacttgtgct 960
aaagttctct tctgttgaac gtcaaacaga gtaacatgtt cagaatctct taataacagc 1020
attccagtac cagcataaaa tacttcatca catgtaggag tttgtacctt cttggtgact 1080
tcgtttttca agttcttgat aattagttga tgagtcctgt ccaaaacggc aaatctgttt 1140
cttgcaaccc ataatgccgt aagtccagaa gaccttttgc tttcagcttc tggtacttga 1200
tcatctctct cctgctcttt tggaatcaca tataaatcgt atgtgctatt atccaagttt 1260
gaagttcttg tagaaagaag aacagcattt tcagctggat taaaggacat cttataaact 1320
ggtatttttc ctccaccacg aatctgaatg actggaac                         1358
<210>875
<211>2714
<212>DNA
<213>Diabrotica barberi
<400>875
atgccacttc gattagatat aaaaagaaag ctaacagctc gctcagaccg ggtaaaatgt 60
gtggatcttc accctacaga accttggatg ctatgttctc tttacagcgg aaatataaac 120
gtttggaaca ccgaaaatca gcaactggtt aagacttttg aagtatgtga tgtacccgtt 180
cggacagcta agtttttgcc caggaagaac tggatagtca gtgggtctga tgatatgcag 240
attcgagttt tcaattacaa taccttagat cgggtacatt cttttgaggc tcattcggat 300
tatgtgagat gtattgtcgt acaccctaca caaccttata tattaacaag tagtgatgat 360
atgcttatca agctttggaa ttgggaaaaa gcatgggcct gtcagcaagt tttcgaagga 420
cacactcact atattatgca aatcgccata aatccaaaag acaacaacac atttgccagt 480
gcatccctag acagaacatt gaaagtatgg caattgggag cgtccacagc caatttcaca 540
ctagaaggtc acgagaaagg cgttaactgt gtggactatt atcatggtgg agataagcct 600
tatttaatct caggtgctga tgatagatta gtaaaaatct gggattatca aaacaaaact 660
tgtgttcaaa ctttagaagg acatgctcaa aatgtaactg ctgcatgttt ccatccagaa 720
cttcctgtag ctcttactgg aagtgaagat ggtactgtca gagtgtggca tgccaacacc 780
catagattag aaagtagctt aaattatggt tttgaaagag tgtggactat tttctgccta 840
aagggatcca ataacgtggc attgggttat gatgaaggta gcattttggt taaagttggt 900
agagaagaac cagctgttag tatggatgcc agtggaggca aaattatttg ggccagacac 960
tctgaacttc aacaggcaaa tctcaaggcg ttagctgaag gtgcggaaat aagagatgga 1020
gaacgccttc cagtttctgt aaaagacatg ggtgcttgcg agatataccc tcagacaatt 1080
caacacaatc ccaatggccg ttttgtcgtt gtctgtggag atggagaata cataatctac 1140
acagcaatgg ctttaagaaa caaagccttt ggtagtgcac aagaattcgt gtgggctcaa 1200
gattccagcg aatatgccat cagagaatcc ggatctacta tcagaatttt taagaatttc 1260
aaagagaaga agaattttaa gtccgacttt ggagctgaag gtatatacgg tggatacctt 1320
ttgggagtca aatcagtttc tggtttgact ttctacgatt gggaaactct tgatttagta 1380
agaagaatcg agatacaacc aaaagcagtt tactggtcag atagtggtaa attagtatgt 1440
ttggctacag aagatagcta ctttattctt tcttatgatt ccgatgaagt tcaaaaagcc 1500
agagataaca atcaggttgc ggatgatgga gtagaatcgg ctttcaatct tctaggtgaa 1560
ataaacgaat cagtgcgaac tggtctctgg gtaggcgact gttttattta cacgaattct 1620
gttaatcgta tcaactactt cgttggaggt gaactggtta caattgccca tttggatcgg 1680
cctttatatg tcttgggata tgtgcctaaa gacgatagat tatacctcgt agataaagag 1740
ttgcgcgtag taagctacca attacttctc tccgttcttg aataccaaac tgccgtcatg 1800
agaagagact ttccaacagc cgatagagta cttccgtcca ttcctaagga gcacagaacg 1860
agagtcgcac atttcttaga aaagcaaggc ttcaaacagc aagctttggc cgtaagtaca 1920
gatccagagc acagattcga gctggcagta gcattagagg atcttaacac agccaaaatt 1980
ctagctcaag aagcaaacag tcctcaaaag tggaatcaac tagcagaatt ggctgccgct 2040
actaataatg taagcttagc caaggaatgt atgcaaaaag cgcaagatta tggaggctta 2100
ttgcttcttg ctactagttc aggggatgaa aatttagtcc gtactctagg agaaacgaca 2160
caagcagaaa gcaaacataa cttagcattt ttatcacact tgttagtagg tgatttaaac 2220
aaatgtctag acattcttat taataccggt agattgccag aagctgcatt tttcgccagg 2280
tcttaccttc ctgataagat tacggaagtc gtagaacttt ggaagactca gttgtcttca 2340
gtcaatcaaa aagctggaca gagccttgcc gatcctaaaa actacgaaaa tctgttccct 2400
ggtttacaag aggcggtggt agctcagaaa tttttggaac agcagaataa aggtttagca 2460
cctgcgagaa ttgccaccac cattcctcct aatcacgaca ggaatgttgt agcagaagtt 2520
caagcacaat cgaaactcga cataccatca tttagttctt catttatttc atcagaaata 2580
gaagcacaaa caaggagttc tgctaaacct gaagagtctt caaacattat acagctggac 2640
caagatgacg acgatatcga tttagatttg gacggtgtaa atatcgatga aaacattgac 2700
acgacggata tcaa                                                   2714
<210>876
<211>2669
<212>DNA
<213>Diabrotica balteata
<400>876
taacagctcg ctcagaccgg gtaaaatgtg tggatcttca ccctacagaa ccttggatgc 60
tatgttccct gtacagtgga aatatcaatg tttggaatac cgaaaatcaa caactggtta 120
aaacttttga agtatgtgat gtacctgtac gaacagctaa gtttttaccc agaaagaact 180
ggatagtcag tggatctgat gatatgcaga ttcgagtttt caattacaat accttagatc 240
gggtacattc ttttgaagct cattcagatt atgtgagatg tattgtcgtt catcctacac 300
aaccttatat attaacaagt agtgatgata tgcttatcaa gctttggaat tgggaaaaag 360
catgggcttg tcagcaagtt tttgaaggac acactcatta tattatgcaa atcgccataa 420
atccaaaaga caacaacaca tttgccagtg catctttaga tagaacattg aaagtatggc 480
agttgggagc atcaacagcg aatttcacac tagaaggtca cgagaaaggt gtaaactgtg 540
tggattatta tcatggtgga gataagcctt atttaatctc aggtgctgat gatagattag 600
taaaaatctg ggattatcaa aataaaactt gtgttcaaac tttggaagga catgctcaaa 660
atgtaacggc tgcttgtttc catccagaac ttcctgtagc ccttactgga agtgaggatg 720
gtactgtcag agtgtggcat gccaacaccc atagattaga gagtagctta aattatggtt 780
ttgaaagagt atggactatt ttctgcctaa agggatcaaa taatgtggca ttgggttatg 840
atgaaggtag cattttggtt aaagttggta gagaagaacc agctgttagt atggatgcca 900
gtggaggtaa aattatttgg gctagacact ctgaacttca acaggcaaat ctcaaggcat 960
tagctgaagg tgcagaaata agagacggag aacgccttcc agtttctgta aaagatatgg 1020
gagcttgcga gatataccct cagacaattc aacacaatcc taacggccgt tttgtcgttg 1080
tatgtgggga tggagaatac ataatctaca cagcaatggc tttaagaaac aaagcttttg 1140
gtagtgcaca agaatttgtg tgggctcaag attccagcga atatgccatc agagaatccg 1200
gatccacaat cagaattttt aagaatttca aagagaagaa gaattttaag tccgactttg 1260
gagctgaagg tatatatggt ggttaccttt tgggagtcaa atctgtttct ggtttgactt 1320
tctatgattg ggaaactctc gatttggtaa gaagaatcga gatacagcca aaagcagttt 1380
actggtcgga tagtggcaaa ctagtatgtt tggctacaga agacagctac tttattcttt 1440
cttatgattc cgatgaagtt caaaaagcca gagataacaa tcaggttgcc gatgatggag 1500
tagaatcagc tttcaatctt ctaggtgaaa taaacgaatc agttcgaact ggtctgtggg 1560
taggcgactg ttttatctac acaaattctg ttaatcgtat caactatttt gttggaggtg 1620
aactagttac aattgcccat ttggatcggc ctttgtatgt cttaggatat gtgcccaaag 1680
atgatagatt atacctggta gataaagagt tgcgcgtagt aagctaccaa ttacttctct 1740
ctgttcttga atatcaaacc gctgtcatga gaagagactt tccaacagca gatagagtac 1800
ttccgtctat tcctaaggag cacagaacga gagtcgcaca tttcttagaa aagcaaggct 1860
tcaaacaaca agctttggcc gtaagtacag atccagagca cagattcgag ctggcagtag 1920
cattagagga tcttaacaca gccaagattc tagctcaaga agcaaacagt ccgcaaaagt 1980
ggaatcaact agcagaattg gctgccgcta ctaataacgt aagcctagcc aaggaatgta 2040
tgcagaaagc gcaagattat ggcggcttat tacttcttgc tacaagttcc ggggatgaaa 2100
gtttagtccg tactctagga gaaacgacac aagcagaaag caaacataac ttagcatttt 2160
tgtcacactt gttagtaggt gatttaaaca aatgcctaga cattcttatt aataccggta 2220
gattaccaga agctgcattt ttcgccagat cttatcttcc tgataagata acggaagtgg 2280
tagaactttg gaagactcag ttatcttcag tcaatcaaaa agccggacag agccttgccg 2340
atccgaaaaa ttacgaaaat ctgttccctg gtttacaaga ggcagtggta gctcagaaat 2400
ttttggaaca gcagaataaa ggtttagcac ccgcgcgaat tgccaccacc attcctccta 2460
atcatgacag gaatgttgta gccgaagttc aagcacaatc gaaacatgat ggaccatcat 2520
ttagttcgag gagtatttca tcagaaatag aagcacaaac aaggagttct gctaaacctg 2580
aagaatcttc aaacattata cagctggatc aagatgacga cgatatcgat ttagatttgg 2640
acggtgtaaa tatcgatgag aacattgac                                   2669
<210>877
<211>2701
<212>DNA
<213>Diabrotica undecimpunctata howardii
<400>877
atgccacttc gattagatat aaaaagaaag ctaacagctc gctcagaccg ggtaaaatgt 60
gtggatcttc accctacaga accttggatg ctatgttctc tttacagtgg aaatatcaac 120
gtttggaata ccgaaaatca acaactggtt aaaacttttg aagtatgtga tgtacctgta 180
cggacagcta agtttttgcc caggaagaac tggatagtca gtggatctga tgatatgcag 240
attcgagttt tcaattacaa taccttagat cgggtacatt cttttgaagc tcattcagat 300
tatgtgagat gtattgtcgt acatcctaca caaccttata tattaacaag tagtgatgat 360
atgcttatca agctttggaa ttgggaaaaa gcatgggctt gtcagcaagt ttttgaagga 420
cacactcatt atattatgca aatcgccata aatccgaaag acaacaacac atttgccagt 480
gcatctttag atagaacatt gaaagtatgg cagttgggag catcaacagc taatttcaca 540
ctagaaggtc acgagaaagg tgttaactgt gtggattatt atcatggtgg agacaagcct 600
tatttaatct caggtgctga tgatagatta gtaaaaatct gggattatca aaataaaact 660
tgtgttcaaa ctttggaagg acatgctcaa aatgtaacag ctgcatgttt ccatccggaa 720
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aaatagatgg aacccttaca actattgaaa tgcagaggga agccctcgaa ggagctagca 240
caaatactgc tgtattagat tctatgaaaa atgctgcaga tgcccttaag aaagctcata 300
agaatttgaa tgtagatgat gttcacgata tcatggatga catagccgaa caacacgaca 360
tagccaacga aatcacaaac gctattagca atcctgtcgg attcaccgac gatctggatg 420
acgatgaatt agaaaaagaa ttagaagagc tcgaacaaga aggattggaa gaagacctgc 480
tccaagtgcc aggtccaact caactgccgg ctgtgcctgc tgatgcagtt gctactaaac 540
caatcaaacc agcagctaaa aaagttgaag atgatgacga tatgaaagaa ttggaagcct 600
g                                                                 601
<210>887
<211>145
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.1串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv23-Dv13顺序的片段组成
<400>887
cctcaagctg tcattggcat ggatattctg tgccaagcta aatccggtat gggaaaaacg 60
gctgtttttg caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc 120
aaatttcttc ctccagtgat catac                                       145
<210>888
<211>222
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.2串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为23-Dv13-Dv26顺序的片段组成
<400>888
cctcaagctg tcattggcat ggatattctg tgccaagcta aatccggtat gggaaaaacg 60
gctgtttttg caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc 120
aaatttcttc ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct 180
gaagcaacat ataaggggta tcaacaatac tagagagttg ag                    222
<210>889
<211>275
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.3串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv23-Dv13-Dv26-Dv18顺序的片段组成
<400>889
cctcaagctg tcattggcat ggatattctg tgccaagcta aatccggtat gggaaaaacg 60
gctgtttttg caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc 120
aaatttcttc ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct 180
gaagcaacat ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca 240
cattgtcctt ggatgtagta tccatcacgc agacc                            275
<210>890
<211>338
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.4串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv23-Dv13-Dv26-Dv18-Dv49顺序的片段组成
<400>890
cctcaagctg tcattggcat ggatattctg tgccaagcta aatccggtat gggaaaaacg 60
gctgtttttg caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc 120
aaatttcttc ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct 180
gaagcaacat ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca 240
cattgtcctt ggatgtagta tccatcacgc agaccgccga acaacacgac atagccaacg 300
aaatcacaaa cgctattagc aatcctgtcg gattcacc                         338
<210>891
<211>418
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.5串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv23-Dv1 3-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22顺序的片段组成
<400>891
cctcaagctg tcattggcat ggatattctg tgccaagcta aatccggtat gggaaaaacg 60
gctgtttttg caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc 120
aaatttcttc ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct 180
gaagcaacat ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca 240
cattgtcctt ggatgtagta tccatcacgc agaccgccga acaacacgac atagccaacg 300
aaatcacaaa cgctattagc aatcctgtcg gattcaccgt aatgcactcc tacgtcgttt 360
ggttcgtatt ggagtactag acgagaacag aatgaagctc gattacgtat tgggtctc   418
<210>892
<211>152
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.6串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv13-Dv26顺序的片段组成
<400>892
caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc aaatttcttc 60
ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct gaagcaacat 120
ataaggggta tcaacaatac tagagagttg ag                               152
<210>893
<211>205
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.7串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv13-Dv26-Dv18顺序的片段组成
<400>893
caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc aaatttcttc 60
ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct gaagcaacat 120
ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca cattgtcctt 180
ggatgtagta tccatcacgc agacc                                       205
<210>894
<211>268
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.8串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv13-Dv26-Dv18-Dv49顺序的片段组成
<400>894
caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc aaatttcttc 60
ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct gaagcaacat 120
ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca cattgtcctt 180
ggatgtagta tccatcacgc agaccgccga acaacacgac atagccaacg aaatcacaaa 240
cgctattagc aatcctgtcg gattcacc                                    268
<210>895
<211>348
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.9串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22顺序的片段组成
<400>895
caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc aaatttcttc 60
ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct gaagcaacat 120
ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca cattgtcctt 180
ggatgtagta tccatcacgc agaccgccga acaacacgac atagccaacg aaatcacaaa 240
cgctattagc aatcctgtcg gattcaccgt aatgcactcc tacgtcgttt ggttcgtatt 300
 ggagtactag acgagaacag aatgaagctc gattacgtat tgggtctc             348
<210>896
<211>408
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.10串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv13-Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20顺序的片段组成
<400>896
caaaggatcc aggatgacgt tccctattga taactgtacc tacacgaccc aaatttcttc 60
ctccagtgat catacccata cgatttacct gaggaaatgc cggataatct gaagcaacat 120
ataaggggta tcaacaatac tagagagttg agtcaaacat aattatggca cattgtcctt 180
ggatgtagta tccatcacgc agaccgccga acaacacgac atagccaacg aaatcacaaa 240
cgctattagc aatcctgtcg gattcaccgt aatgcactcc tacgtcgttt ggttcgtatt 300
ggagtactag acgagaacag aatgaagctc gattacgtat tgggtctccg aagtaatgta 360
caacggccac actggacgta agataaatgc tcagattttc ttaggacc              408
<210>897
<211>130
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.11串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv18顺序的片段组成
<400>897
ccatacgatt tacctgagga aatgccggat aatctgaagc aacatataag gggtatcaac 60
aatactagag agttgagtca aacataatta tggcacattg tccttggatg tagtatccat 120
cacgcagacc                                                        130
<210>898
<211>193
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.12串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv18-Dv49顺序的片段组成
<400>898
ccatacgatt tacctgagga aatgccggat aatctgaagc aacatataag gggtatcaac 60
aatactagag agttgagtca aacataatta tggcacattg tccttggatg tagtatccat 120
cacgcagacc gccgaacaac acgacatagc caacgaaatc acaaacgcta ttagcaatcc 180
tgtcggattc acc                                                    193
<210>899
<211>273
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.13串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv18-Dv49-Dv22顺序的片段组成
<400>899
ccatacgatt tacctgagga aatgccggat aatctgaagc aacatataag gggtatcaac 60
aatactagag agttgagtca aacataatta tggcacattg tccttggatg tagtatccat 120
cacgcagacc gccgaacaac acgacatagc caacgaaatc acaaacgcta ttagcaatcc 180
tgtcggattc accgtaatgc actcctacgt cgtttggttc gtattggagt actagacgag 240
aacagaatga agctcgatta cgtattgggt ctc                              273
<210>900
<211>333
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.14串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv26-Dv18-Dv49-Dv22-Dv20顺序的片段组成
<400>900
ccatacgatt tacctgagga aatgccggat aatctgaagc aacatataag gggtatcaac 60
aatactagag agttgagtca aacataatta tggcacattg tccttggatg tagtatccat 120
cacgcagacc gccgaacaac acgacatagc caacgaaatc acaaacgcta ttagcaatcc 180
tgtcggattc accgtaatgc actcctacgt cgtttggttc gtattggagt actagacgag 240
aacagaatga agctcgatta cgtattgggt ctccgaagta atgtacaacg gccacactgg 300
acgtaagata aatgctcaga ttttcttagg acc                              333
<210>901
<211>116
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.15串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv18-Dv49顺序的片段组成
<400>901
tcaaacataa ttatggcaca ttgtccttgg atgtagtatc catcacgcag accgccgaac 60
aacacgacat agccaacgaa atcacaaacg ctattagcaa tcctgtcgga ttcacc     116
<210>902
<211>196
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.16串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv18-Dv49-Dv22顺序的片段组成
<400>902
tcaaacataa ttatggcaca ttgtccttgg atgtagtatc catcacgcag accgccgaac 60
aacacgacat agccaacgaa atcacaaacg ctattagcaa tcctgtcgga ttcaccgtaa 120
tgcactccta cgtcgtttgg ttcgtattgg agtactagac gagaacagaa tgaagctcga 180
ttacgtattg ggtctc                                                 196
<210> 903
<211>256
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.17串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv18-Dv49-Dv22-Dv20顺序的片段组成
<400>903
tcaaacataa ttatggcaca ttgtccttgg atgtagtatc catcacgcag accgccgaac 60
aacacgacat agccaacgaa atcacaaacg ctattagcaa tcctgtcgga ttcaccgtaa 120
tgcactccta cgtcgtttgg ttcgtattgg agtactagac gagaacagaa tgaagctcga 180
ttacgtattg ggtctccgaa gtaatgtaca acggccacac tggacgtaag ataaatgctc 240
agattttctt aggacc                                                 256
<210>904
<211>143
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.18串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv49-Dv22顺序的片段组成
<400>904
gccgaacaac acgacatagc caacgaaatc acaaacgcta ttagcaatcc tgtcggattc 60
accgtaatgc actcctacgt cgtttggttc gtattggagt actagacgag aacagaatga 120
agctcgatta cgtattgggt ctc                                         143
<210>905
<211>203
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.19串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv49-Dv22-Dv20顺序的片段组成
<400>905
gccgaacaac acgacatagc caacgaaatc acaaacgcta ttagcaatcc tgtcggattc 60
accgtaatgc actcctacgt cgtttggttc gtattggagt actagacgag aacagaatga 120
agctcgatta cgtattgggt ctccgaagta atgtacaacg gccacactgg acgtaagata 180
aatgctcaga ttttcttagg acc                                         203
<210>906
<211>140
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列说明：高度有效的WCR靶的C12.20串联体，约50％GC标准，由5’-3’
为Dv22-Dv20顺序的片段组成
<400>906
gtaatgcact cctacgtcgt ttggttcgta ttggagtact agacgagaac agaatgaagc 60
tcgattacgt attgggtctc cgaagtaatg tacaacggcc acactggacg taagataaat 120
gctcagattt tcttaggacc                                             140

Claims (34)

1.一种分离的多核苷酸，选自下组：
(a)包含SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的核酸序列的多核苷酸；
(b)在5X SSC，50％甲酰胺和42℃下10分钟的洗涤条件下与SEQ IDNO：1-SEQ ID NO：906的核酸序列杂交的多核苷酸；
(c)包含与SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的核酸序列的至少70％序列同一性的多核苷酸；
(d)SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906的核酸序列的至少21个相邻核苷酸的片段，其中鞘翅目植物害虫摄入包含与所述片段互补的至少一条链的双链核糖核苷酸序列，抑制所述害虫的生长；和
(e)上述(a)、(b)、(c)或(d)的序列的互补序列。
2.权利要求1的分离的多核苷酸，选自SEQ ID NO：697、SEQ IDNOs：813-819、SEQ ID NO：841和SEQ ID NO：874。
3.权利要求1的分离的多核苷酸，其与异源启动子可操作地连接。
4.权利要求1的分离的多核苷酸，其包含在植物转化载体上。
5.由权利要求1的多核苷酸的表达产生的双链核糖核苷酸序列，其中鞘翅目植物害虫摄入所述核糖核苷酸序列，抑制所述害虫的生长。
6.权利要求5的双链核糖核苷酸序列，通过制备包含第一、第二和第三多核苷酸序列的重组多核苷酸序列产生，其中所述第一多核苷酸序列包含权利要求1的分离的多核苷酸，其中第三多核苷酸序列通过第二多核苷酸序列与第一多核苷酸序列连接，并且其中第三多核苷酸序列基本是第一多核苷酸序列的反向互补序列，使得当转录为核糖核酸时，所述第一和第三多核苷酸序列杂交，形成由连接的第二核糖核苷酸序列稳定化的双链核糖核苷酸序列。
7.权利要求5的双链核糖核苷酸序列，其中害虫摄入多核苷酸序列，抑制与所述多核苷酸序列基本互补的核苷酸序列的表达。
8.用权利要求1的多核苷酸转化的细胞。
9.权利要求8的细胞，其是原核细胞。
10.权利要求8的细胞，其是真核细胞。
11.权利要求8的细胞，其是植物或细菌细胞。
12.用权利要求1的多核苷酸转化的植物。
13.权利要求12的植物的种子，其中所述种子包含多核苷酸。
14.用权利要求2的多核苷酸转化的植物。
15.权利要求12的植物，其中所述多核苷酸在植物细胞中表达为双链核糖核苷酸序列，并且，摄入存在于食物中的昆虫害虫抑制量的所述双链核糖核苷酸序列，抑制害虫进一步摄食所述食物。
16.权利要求15的植物，其中所述昆虫害虫选自Diabrotica virgifera、Diabrotica virgifera virgifera、Diabrotica virgifera zea、Diabroticabalteata、Diabrotica barberi、Diabrotica viridula、Diabrotica speciosa和Diabrotica undecimpunctata。
17.权利要求15的植物，其中摄入昆虫害虫抑制量的双链核糖核苷酸序列，使害虫生长停止。
18.从权利要求12的植物生产的农产品制品，其中所述农产品制品包含可检测量的权利要求1的多核苷酸或由其表达的核糖核苷酸。
19.控制鞘翅目害虫侵袭的方法，包括在鞘翅目害虫的食物中提供一种试剂，该试剂包含第一多核苷酸序列，所述多核苷酸序列在害虫摄入后起作用，抑制所述害虫内的生物功能，其中所述多核苷酸序列沿至少约19-约25个相邻核苷酸与来源于所述害虫的编码序列具有约95％-约100％的核苷酸序列同一性，并且杂交于与所述第一多核苷酸序列互补的第二多核苷酸序列，并且其中来源于所述害虫的所述编码序列选自SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：906及其互补序列。
20.权利要求19的方法，其中所述鞘翅目害虫是叶甲物种，选自Diabrotica virgifera、Diabrotica virgifera virgifera、Diabrotica virgiferazea、Diabrotica balteata、Diabrotica barberi、Diabrotica viridula、Diabrotica speciosa和Diabrotica undecimpunctata。
21.控制鞘翅目害虫侵袭的方法，包括在鞘翅目害虫的食物中提供表达权利要求1的多核苷酸序列的植物细胞，其中表达所述多核苷酸，产生双链核糖核苷酸，其在害虫摄入后起作用，抑制靶序列在所述害虫中表达，并且导致相对于缺乏所述植物细胞的食物，害虫对所述食物的摄食减少。
22.权利要求21的方法，其中所述害虫在摄入细胞后生长减少。
23.权利要求21的方法，其中所述植物细胞进一步包含编码选自下组的杀虫剂的多核苷酸序列：马铃薯块茎储藏蛋白、苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白、致病杆菌杀昆虫蛋白、光杆菌杀昆虫蛋白、侧孢芽孢杆菌杀昆虫蛋白和球形芽孢杆菌杀昆虫蛋白。
24.权利要求23的方法，其中所述苏云金芽孢杆菌杀昆虫蛋白选自：Cry1、Cry3、TIC851、CryET70、Cry22、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、二元杀昆虫蛋白CryET33和CryET34、二元杀昆虫蛋白CryET80和CryET76、二元杀昆虫蛋白TIC100和TIC101、杀昆虫蛋白ET29或ET37与杀昆虫蛋白TIC810或TIC812的组合，以及二元杀昆虫蛋白PS149B1。
25.权利要求21的方法，其中所述靶序列编码蛋白，所述蛋白的预测功能选自：肌肉形成、保幼激素的形成、保幼激素的调节、离子调节和转运、消化酶合成、细胞膜电位保持、氨基酸生物合成、氨基酸降解、精子形成、信息素合成、信息素传感、触角形成、翅膀形成、腿形成、发育和分化、卵形成、幼虫成熟、消化酶形成、血淋巴合成、血淋巴的保持、神经传递、细胞分裂、能量代谢、呼吸，以及凋亡。
26.权利要求21的方法，其中所述鞘翅目害虫是叶甲物种，选自Diabrotica virgifera、Diabrotica virgifera virgifera、Diabrotica virgiferazea、Diabrotica balteata、Diabrotica barberi、Diabrotica viridula、Diabrotica speciosa和Diabrotica undecimpunctata。
27.权利要求21的方法，其中害虫摄入后所述多核苷酸起作用，阻抑行使昆虫存活所必须的功能的基因，所述功能选自：害虫摄食、害虫细胞凋亡、细胞分化和发育、有性繁殖能力或需要、肌肉形成、肌肉颤搐、肌肉收缩、保幼激素的形成、保幼激素的调节、离子调节和转运、细胞膜电位的保持、氨基酸生物合成、氨基酸降解、精子形成、信息素合成、信息素传感、触角形成、翅膀形成、腿形成、卵形成、幼虫成熟、消化酶形成、血淋巴合成、血淋巴的保持、神经传递、幼虫阶段转变、化蛹、破蛹、细胞分裂、能量代谢、呼吸和细胞骨架结构的形成。
28.改进昆虫害虫侵袭的农作物植物产生的农作物产量的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将权利要求1的多核苷酸引入所述农作物植物，
b)培养所述农作物植物，使所述多核苷酸表达，其中所述多核苷酸的表达抑制昆虫害虫摄食和由于害虫侵袭导致的产量损失。
29.权利要求28的方法，其中所述多核苷酸的表达产生RNA分子，所述RNA分子至少阻抑摄入所述农作物植物的部分的昆虫害虫中的第一靶基因，其中所述靶基因行使选自下组的至少一种必须功能：害虫摄食、害虫存活力、害虫细胞凋亡、害虫或任何害虫细胞的分化和发育、害虫的有性繁殖、肌肉形成、肌肉颤搐、肌肉收缩、保幼激素的形成和/或减少、保幼激素的调节、离子调节和转运、细胞膜电位的保持、氨基酸生物合成、氨基酸降解、精子形成、信息素合成、信息素传感、触角形成、翅膀形成、腿形成、卵形成、幼虫成熟、消化酶形成、血淋巴合成、血淋巴保持、神经传递、幼虫阶段转变、化蛹、破蛹、细胞分裂、能量代谢、呼吸、细胞骨架结构合成和保持、核苷酸代谢、氮代谢、水利用、水保持，以及感觉感知。
30.权利要求28的方法，其中所述昆虫害虫是选自下组的玉米根虫害虫：Diabrotica undecimpunctata howardi(南部玉米根虫(SCR))、Diabrotica virgifera virgifera(西部玉米根虫(WCR))、Diabrotica barberi(北部玉米根虫(NCR))、Diabrotica virgifera zea(墨西哥玉米根虫(MCR))、Diabrotica balteata(巴西玉米根虫(BZR))、Diabrotica viridula(巴西玉米根虫(BZR))和Diabrotica spectosa(巴西玉米根虫(BZR))。
31.改进由昆虫害虫侵袭的农作物植物产生的农作物的干旱耐受性的方法，所述方法包括以下步骤：
a)将权利要求1的多核苷酸引入所述农作物植物，
b)培养所述农作物植物，使所述多核苷酸表达，其中所述多核苷酸的表达抑制昆虫害虫摄食以及由于害虫侵袭导致的干旱耐受性降低。
32.生产农产品制品的方法，包括获得权利要求12的植物或其部分，并且从所述植物或其部分制备农产品制品。
33.生产食品或饲料的方法，包括获得权利要求12的植物或其部分，并且从所述植物或其部分制备食品或饲料。
34.权利要求33的方法，其中所述食品或饲料是油、粗粉、蛋白、淀粉、细粉或青贮饲料。
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