CN110452908A - 在昆虫害虫中下调基因表达 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用干扰核糖核酸(RNA)分子对昆虫害虫物种的侵扰进行的遗传控制,特别是对植物的害虫侵扰的预防和/或控制。本发明还涉及用于在供局部应用中使用的,例如呈杀虫剂形式的含有本发明的干扰RNA分子的组合物和组合。

Description

在昆虫害虫中下调基因表达
本申请是申请日为2012年4月20日、申请号为201280024260.1、发明名称为“在昆虫害虫中下调基因表达”的发明专利申请的分案申请。
发明领域
本发明总体上涉及对昆虫害虫物种的侵扰的遗传控制,特别是对植物的害虫侵扰的预防和/或控制。更具体地说,本发明涉及通过干扰核糖核酸(RNA)分子下调昆虫害虫物种中靶基因的表达。还提供了包含本发明的干扰RNA分子的组合物和组合,它们适用于局部应用,例如呈杀虫剂形式。
发明背景
存在大量能够侵染或侵扰多种环境和宿主生物体的昆虫害虫物种。昆虫害虫包括以下昆虫目中的多个物种:半翅目(Hemiptera)(蝽类昆虫)、鞘翅目(Coleoptera)(甲虫)、蚤目(Siphonaptera)(跳蚤)、网翅目(Dichyoptera)(蟑螂和螳螂)、鳞翅目(Lepidoptera)(蛾和蝴蝶)、直翅目(Orthoptera)(例如蚱蜢)以及双翅目(Diptera)(苍蝇)。害虫侵扰会导致严重的损害。侵扰植物物种的昆虫害虫在农业上特别成问题,因为它们会对作物造成严重损害并且显著降低植物产量。多种不同类型的植物都对害虫侵扰敏感,包括经济作物,如水稻、棉花、大豆、马铃薯以及玉米。
传统上,通过使用化学杀虫剂来预防或控制昆虫害虫的侵扰。然而,这些化学品不总是适用于处理作物,因为它们可能对其他物种有毒并且会造成显著的环境损害。在最近几十年中,研究者已经开发出控制害虫侵扰的更环境友好的方法。举例来说,已经使用了天然地表达对昆虫害虫有毒的蛋白质的微生物,如苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)细菌。科学家还分离出编码这些杀虫蛋白的基因并使用它们来产生对昆虫害虫具有抗性的转基因作物,例如基因工程化为产生Cry家族蛋白质的玉米和棉花植物。
虽然细菌毒素在控制某些类型的害虫方面一直非常成功,但是它们并非对所有的害虫物种都有效。因此,研究者们已经寻找到其他更有针对性的害虫控制方法,特别是将RNA干扰或‘基因沉默’作为在遗传水平上控制害虫的手段的方法。
RNA干扰或‘RNAi’是用以在细胞或整个生物体环境下以序列特异性方式下调基因表达的一种方法。RNAi是目前本领域中用于抑制或下调多种生物体(包括害虫生物体,如真菌、线虫以及昆虫)中的基因表达的一种成熟的技术。此外,之前的研究已经显示,下调昆虫害虫物种中的靶基因可以被用作控制害虫侵扰的一种手段。
WO 2007/074405描述了抑制无脊椎动物害虫(包括科罗拉多马铃薯甲虫)中靶基因的表达的方法。另外,WO 2009/091864描述了用于抑制昆虫害虫物种(包括来自草盲蝽(Lygus)属的害虫)中的靶基因的组合物和方法。
虽然使用RNAi来下调害虫物种中的基因表达在本领域中是已知的,但是将这种技术用作害虫控制措施的成功取决于选择最适当的靶基因,即功能缺失导致必需生物过程严重破坏和/或生物体死亡的那些基因。因此,本发明针对将下调害虫中的特定靶基因作为一种手段来实现昆虫害虫侵扰,特别是植物的昆虫害虫侵扰的更有效预防和/或控制。
发明内容
本发明人试图使用遗传方法来鉴定用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰的改良的手段。具体来说,他们研究了使用RNAi按以下方式来下调基因:削弱昆虫害虫存活、生长、定殖特定环境和/或侵扰宿主生物体的能力并且由此限制由该害虫造成的损害。
因此,根据本发明的一个方面,提供了一种干扰核糖核酸(RNA或双链RNA),它在被一种昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的一种靶基因的表达的作用,
其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ IDNO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个组成的一种核苷酸序列,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中任一个的一个至少21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中任一个的一个至少21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(vi)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少70%,优选至少75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%一致。
在本发明的一个特定方面,本发明的干扰RNA分子包含至少一个双链区,典型地是干扰RNA的沉默元件,它包含通过与一个反义RNA链互补碱基配对而退火的一个有义RNA链,其中dsRNA分子的有义链包含与位于该靶基因的RNA转录物内的一个核苷酸序列互补的一个核苷酸序列。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA或双链RNA),它在被一种昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
这些靶基因编码在肌钙蛋白/肌丝复合物内的蛋白质。
在又一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA或双链RNA),它在被一种昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
这些靶基因编码昆虫核糖体蛋白。
在某些实施例中,本发明涉及一种干扰RNA分子,该干扰RNA分子包含至少一个双链区,典型地是该干扰RNA分子的沉默元件,它包含通过与一个反义RNA链互补碱基配对而退火的一个有义RNA链,其中dsRNA分子的有义链包含一个至少17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的序列,该序列与位于来自肌钙蛋白/肌丝复合物的靶基因的RNA转录物内的一个核苷酸序列至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%互补。
在一个实施例中,该靶基因编码一种昆虫wings up A(肌钙蛋白I)蛋白(例如CG7178 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 1和2表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO79具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码一种支持蛋白(upheldprotein)(例如CG7107 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO121和130表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO330具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码原肌球蛋白1蛋白(例如CG4898 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)或原肌球蛋白2蛋白(例如CG4843 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 123和132表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 332具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码肌球蛋白重链(例如CG17927 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 122和131表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 331具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码肌球蛋白轻链细胞质蛋白(例如CG3201 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 124和133表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 333具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码鱼翅瓜蛋白(例如CG3595 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 125和134表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 334具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码拉链蛋白(例如CG15792 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO126和135表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO335具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码肌钙蛋白C(例如CG2981、CG7930、CG9073、CG6514、CG12408、CG9073、CG7930、CG2981、CG12408或CG6514 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQID NO127和136表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO336和337具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。
根据另一个实施例,本发明涉及一种干扰RNA分子,该干扰RNA分子包含至少一个双链区,典型地是该干扰RNA分子的沉默元件,它包含通过与一个反义RNA链互补碱基配对而退火的一个有义RNA链,其中dsRNA分子的有义链包含一个至少17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的序列,该序列与位于编码一种昆虫核糖体蛋白的一种靶基因的RNA转录物内的一个核苷酸序列至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%互补。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S3A(例如CG2168 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 11和12表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 84具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白LP1(例如CG4087 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 3和4表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO80具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S3(例如CG6779 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 7和8表示。在一个实施例中,由SEQ ID NO 9和10表示的靶基因编码核糖体蛋白L10Ab(例如CG7283 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 83具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S18(例如CG8900 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 13和14表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 85具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L4(例如CG5502 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 5和6表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ IDNO 81具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S27(例如CG10423 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 15和16表示。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L6(例如CG11522Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 17和18表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 87具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S13(例如CG13389 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 19和20表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 88具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L12(例如CG3195Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 21和22表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 89具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L26(例如CG6846 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 158和159表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 343具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L21(例如CG12775 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 165、166以及167表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 347和348具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S12(例如CG11271 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 156和157表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 342具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S28b(例如CG2998 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO160和161表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO344具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L13(例如CG4651 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 154和155表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQID NO 341具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L10(例如CG17521 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 163和164表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO345具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L5(例如CG17489 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 152和153表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 340具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S15Aa(例如CG2033 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQID NO 150和151表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 339具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L19(例如CG2746Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)或核糖体蛋白L27(例如CG4759Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。在一个实施例中,该靶基因编码线粒体细胞色素c氧化酶亚单位II蛋白(例如CG34069 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO25和26表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 91具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码ATP合酶-γ链(例如CG7610 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 129和138表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 338具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码泛素-5E(例如CG32744Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。在一个实施例中,该靶基因编码蛋白酶体β型亚单位(例如CG17331 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),该蛋白是CG13704 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物;和Rpn12蛋白(例如CG4157Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。
根据本发明的一个第二方面,提供了一种用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰的组合物,该组合物包含至少一种干扰核糖核酸(RNA)和至少一种合适的载体、赋形剂或稀释剂,其中该干扰RNA在被害虫摄入后起到下调所述害虫内靶基因的表达的作用,
其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ IDNO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389所表示的序列中的任一个至少75%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
本发明的组合物可以用于预防和/或控制害虫侵扰。在某些实施例中,该组合物可以用作一种用于植物或用于植物的繁殖或生殖材料的杀虫剂。在另一个方面,在此提供了一种用于预防和/或控制害虫侵扰的组合,该组合包含本发明的组合物和至少一种其他活性剂。
在又一个方面,在此提供了一种用于下调昆虫害虫物种中靶基因的表达以便预防和/或控制害虫侵扰的方法,该方法包括使所述害虫物种与一种有效量的至少一种干扰核糖核酸(RNA)接触,其中该干扰RNA在被害虫摄入后起到下调所述害虫中的一种靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ IDNO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
根据本发明的另一个方面,提供了一种分离的多核苷酸,该多核苷酸选自下组,该组由以下各项组成:
(i)包含如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的一种多核苷酸,或
(ii)由如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸组成的一种多核苷酸,或
(iii)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的一种多核苷酸,由此使得当最佳地比对并且比较两种序列时,所述多核苷酸与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸的一个至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列,当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)由如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸的一个至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段组成的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列,当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(vi)编码一种氨基酸序列的一种多核苷酸,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少70%,优选至少75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,并且
其中所述多核苷酸不长于10000、9000、8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000或1500个核苷酸。
由本发明的靶基因编码的氨基酸序列对应地是由SEQ ID NO 79、349、352、356、80、326、81、327、82、83、328、84、329、85、86、359、87到91、330、350、353、331、351、332到336、337、354、338到344、346、345、347、348、357、355、358、390到393所表示的。
在本发明的一个具体方面,该分离的多核苷酸是干扰RNA分子的一部分,典型地是沉默元件的一部分,它包含至少一个双链区,该双链区包含通过与一个反义RNA链互补碱基配对而退火的一个有义RNA链,其中dsRNA分子的有义链包含与位于该靶基因的RNA转录物内的一个核苷酸序列互补的一个核苷酸序列。更具体地说,该分离的多核苷酸是以有义和反义定向克隆到一种DNA构建体中使得有义和反义多核苷酸转录后形成一个dsRNA分子,该分子在被害虫摄入后起到抑制或下调所述害虫内靶基因的表达的作用。
在一个实施例中,本发明涉及一种分离的多核苷酸,该多核苷酸是以有义和反义定向克隆到一种DNA构建体中使得有义和反义多核苷酸转录后形成一个dsRNA分子,该分子在被昆虫摄入后起到抑制或下调肌钙蛋白/肌丝复合物内靶基因的表达的作用。在一个实施例中,该靶基因编码一种昆虫wings up A(肌钙蛋白I)蛋白(例如CG7178 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 1和2表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 79具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码一种支持蛋白(例如CG7107 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 121和130表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 330具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码原肌球蛋白1蛋白(例如CG4898 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)或原肌球蛋白2蛋白(例如CG4843 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQID NO123和132表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO332具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码肌球蛋白重链(例如CG17927 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO122和131表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 331具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码肌球蛋白轻链细胞质蛋白(例如CG3201 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ IDNO 124和133表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 333具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码鱼翅瓜蛋白(例如CG3595 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 125和134表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 334具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码拉链蛋白(例如CG15792 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 126和135表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 335具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码肌钙蛋白C(例如CG2981、CG7930、CG9073、CG6514、CG12408、CG9073、CG7930、CG2981、CG12408或CG6514 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 127和136表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 336和337具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。
根据其他实施例,本发明涉及一种分离的多核苷酸,该多核苷酸是以有义和反义定向克隆到一种DNA构建体中使得有义和反义多核苷酸转录后形成一个dsRNA分子,该分子在被昆虫摄入后起到抑制或下调一种编码昆虫核糖体蛋白的靶基因的表达的作用。
在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S3A(例如CG2168 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 11和12表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 84具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白LP1(例如CG4087 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 3和4表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQID NO 80具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S3(例如CG6779 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 7和8表示。在一个实施例中,由SEQ ID NO 9和10表示的靶基因编码核糖体蛋白L10Ab(例如CG7283 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 83具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S18(例如CG8900 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 13和14表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 85具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L4(例如CG5502 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 5和6表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO81具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S27(例如CG10423 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO15和16表示。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L6(例如CG11522 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO17和18表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 87具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S13(例如CG13389 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 19和20表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 88具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L12(例如CG3195 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 21和22表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 89具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L26(例如CG6846 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 158和159表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 343具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L21(例如CG12775 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO165、166以及167表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 347和348具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S12(例如CG11271 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO156和157表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO342具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S28b(例如CG2998 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 160和161表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ IDNO 344具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L13(例如CG4651 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 154和155表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO341具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L10(例如CG17521 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ ID NO 163和164表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 345具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L5(例如CG17489 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQID NO 152和153表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 340具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白S15Aa(例如CG2033 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物),所述靶基因是由SEQ IDNO 150和151表示。在一个优选实施例中,该昆虫直向同源物与SEQ ID NO 339具有至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%、100%的一致性。在一个实施例中,该靶基因编码核糖体蛋白L19(例如CG2746 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)或核糖体蛋白L27(例如CG4759 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。
优选地,本发明的方法可实际应用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰,特别是控制以下作物植物的害虫侵扰:例如(但不限于)棉花、马铃薯、水稻、草莓、苜蓿、大豆、番茄、卡诺拉、向日葵、高粱、珍珠粟、玉米、茄子、胡椒以及烟草。此外,可以通过常规遗传工程技术将本发明的干扰RNA引入到有待保护的植物中。
在本发明的所有方面,在优选实施例中,该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
这些靶基因编码在肌钙蛋白/肌丝复合物内的蛋白质。
在本发明的所有方面,在优选实施例中,该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
这些靶基因编码昆虫核糖体蛋白。
在本发明的所有方面,在优选实施例中,该靶基因(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
表格的简要说明
表1由第一次筛选鉴定的豆荚草盲蝽(Lygus hesperus)新颖靶。
表1B在Lh594途径中的豆荚草盲蝽新颖靶。
表1C由第二轮筛选鉴定的豆荚草盲蝽新颖靶。
表2在豆荚草盲蝽中鉴定的靶基因的多核苷酸序列。
表3在豆荚草盲蝽中鉴定的靶基因的氨基酸序列。
表4相应于豆荚草盲蝽靶基因的dsRNA(由等效DNA序列表示的有义链)和用于产生这些dsRNA的引物。
表5根据剂量反应曲线(DRC)并且与基准靶Lh423和Lh105相比较进行分级的豆荚草盲蝽靶。
表6来自第二轮筛选的豆荚草盲蝽靶-根据DRC并且与基准靶Lh423和Lh594相比较进行分级。
表7在科罗拉多马铃薯甲虫(CPB)中鉴定的靶基因的多核苷酸序列。
表8在CPB中鉴定的靶基因的氨基酸序列。
表9相应于CPB基因的dsRNA(由等效DNA序列表示的有义链)和用于产生这些dsRNA的引物。
表10在褐色飞虱(BPH)中鉴定的靶基因的多核苷酸序列。
表11在BPH中鉴定的靶基因的氨基酸序列。
表12相应于BPH基因的dsRNA(由等效DNA序列表示的有义链)和用于产生这些dsRNA的引物。
表13基于豌豆蚜虫基因组序列而用于扩增蚜虫cDNA的引物。
表14在蚜虫中鉴定的靶基因的多核苷酸序列。
表15在蚜虫中鉴定的靶基因的氨基酸序列。
表16相应于蚜虫靶基因的dsRNA(由等效DNA序列表示的有义链)和用于产生这些dsRNA的引物。
表17用于扩增CPB Ld594cDNA的简并引物
表18用于扩增BPH cDNA的简并引物
表19:来自该筛选的马铃薯叶甲(Leptinotarsa decemlineata)新颖靶。
表20:褐飞虱(Nilaparvata lugens)的新颖鉴定的靶。
表21:豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum)的新颖鉴定的靶。
发明详细说明
诸位发明人已经发现,通过RNAi下调昆虫害虫物种中特定靶基因的表达可以用于有效地预防和/或控制所述昆虫害虫侵扰。
如在此所使用,术语“控制”害虫侵扰是指对害虫产生的用来限制和/或减少害虫生物体的数目和/或由害虫引起的损害的任何作用。因此,优选的靶基因是控制或调控昆虫害虫内的一种或多种必需生物功能的必需基因,这些必需生物功能为例如细胞分裂、生殖、能量代谢、消化、神经功能等。通过RNAi技术下调这些必需基因可以导致昆虫的死亡,或者以另外的方式显著地延缓生长和发育或者削弱害虫在环境中定殖或侵扰宿主生物体的能力。
诸位发明人现已鉴定出属于草盲蝽属、马铃薯叶甲属、褐飞虱属以及豌豆蚜属的昆虫害虫物种的优良靶基因,这些靶被设想单独地或组合用作RNAi介导性控制例如农艺学上重要作物的昆虫侵扰的一种有效手段。这些新鉴定的靶基因的直向同源物可以用于其他昆虫物种中以控制相应的相关作物的害虫侵扰。
更具体来说,诸位发明人在此描述了编码肌钙蛋白/肌丝复合物的蛋白质的基因形成了供通过RNA抑制机构进行抑制的极佳靶基因。这些靶基因中的一种编码昆虫肌钙蛋白I蛋白(wings up A),它是果蝇CG7178蛋白的一种直向同源物。此蛋白质涉及于肌肉收缩中并且属于一种生理途径,该生理途径并未针对通过RNA抑制进行(昆虫)害虫控制而加以完全地探索。此外,因为这种蛋白质复合物具有动物特异性,并无已知的植物基因同源物或直向同源物,所以在植物中表达靶dsRNA时,降低了异型株(off-type plant)表型的风险。另外,在果蝇中,在果蝇中,肌钙蛋白I被描述为一种单倍不足的基因,在杂合子状态中呈现一种突变体表型。这类基因对mRNA表达水平的降低特别敏感并且因此可以被视为理想的RNAi靶。
以下列出了此肌钙蛋白/肌丝复合物中其他感兴趣的靶基因。
注释ID 细胞学 Dm标识符
up 支持蛋白 CG7107
Tm1 原肌球蛋白1 CG4898
Tm2 原肌球蛋白2 CG4843
Mhc 肌球蛋白重链 CG17927
Mlc-c 肌球蛋白轻链细胞质 CG3201
sqh 鱼翅瓜 CG3595
zip 拉链 CG15792
因而,根据一个实施例,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),它在被一种昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个优选实施例中,该靶基因编码一种选自肌钙蛋白/肌丝复合物的昆虫蛋白,该复合物选自下组,该组包括肌钙蛋白I(例如CG7178 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、支持蛋白(例如CG7107 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、原肌球蛋白1蛋白(例如CG4898 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、原肌球蛋白2蛋白(例如CG4843 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、肌球蛋白重链(例如CG17927 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、肌球蛋白轻链细胞质蛋白(例如CG3201 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、鱼翅瓜蛋白(例如CG3595 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、拉链蛋白(例如CG15792 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、肌钙蛋白C(例如CG2981、CG7930、CG9073、CG6514、CG12408、CG9073、CG7930、CG2981、CG12408或CG6514 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)
在其他实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个优选实施例中,靶基因编码一种昆虫核糖体蛋白,该昆虫核糖体蛋白选自下组,该组包括核糖体蛋白S3A(例如CG2168 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白LP1(例如CG4087 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S3(例如CG6779 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L10Ab(例如CG7283 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S18(例如CG8900 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L4(例如CG5502 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S27(例如CG10423 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L6(例如CG11522 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S13(例如CG13389 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)以及核糖体蛋白L12(例如CG3195 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L26(例如CG6846Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L21(例如CG12775 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S12(例如CG11271 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S28b(例如CG2998 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L13(例如CG4651 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L10(例如CG17521 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L5(例如CG17489 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S15Aa(例如CG2033 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L19(例如CG2746 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L27(例如CG4759 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 141、11、12或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 141、11、12或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 141、11、12或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 141、11、12中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 141、11、12或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 141、11、12或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 141、11、12中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 141、11、12或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 141、11、12或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQID NO 141、11、12所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 141、11、12中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 17、18或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 17、18或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 17、18或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO17、18中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO17、18或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 17、18或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 17、18中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 17、18或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 17、18或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO17、18所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 17、18中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 19、20或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 19、20或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 19、20或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO19、20中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO19、20或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 19、20或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 19、20中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 19、20或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 19、20或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO19、20所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 19、20中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 165、166、167或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 165、166、167或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 165、166、167或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 165、166、167中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 165、166、167或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 165、166、167或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 17、18中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 165、166、167或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 165、166、167或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与SEQID NO 165、166、167所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 165、166、167中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分地互补的核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ IDNO143、121、142、176、182、130、177、183或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO143、121、142、176、182、130、177、183中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与SEQ ID NO143、121、142、176、182、130、177、183所表示的这些序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分地互补的核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在一个实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分地互补的核苷酸序列或由其组成,并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 128、149、184、137或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 128、149、184、137或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 128、149、184、137或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 128、149、184、137中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 128、149、184、137或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 128、149、184、137或其互补序列中任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 128、149、184、137中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 128、149、184、137或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 128、149、184、137或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与SEQ ID NO 128、149、184、137所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 128、149、184、137中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%,优选至少90%、95%、98%或99%一致。
在又其他实施例中,本发明涉及一种干扰核糖核酸(RNA或双链RNA),它抑制或下调一种靶基因的表达,该靶基因编码一种线粒体细胞色素c氧化酶亚单位II蛋白(例如CG34069 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。
因此,在一个方面,本发明提供了一种干扰核糖核酸(RNA),它在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用。
如在此所使用的,“靶基因”包含意图在害虫中下调的任何基因。在一个优选实施例中,下调靶基因以例如通过破坏害虫中发生的必需生物过程,或者通过降低昆虫的致病性,来控制害虫侵扰。因此,优选的靶基因包括(但不限于)在调控摄食、存活、生长、发育、生殖、侵扰以及侵染方面发挥关键作用的那些基因。根据一个实施例,该靶基因使得当其表达被下调或受抑制时,昆虫害虫被杀死。根据另一个实施例,该靶基因使得当其表达被下调或受抑制时,阻止或延缓或妨碍或延迟或阻碍了害虫的生长,阻止了害虫生殖,或阻止了害虫通过生命周期转变。根据本发明的又一个实施例,该靶基因使得当其表达被下调或受抑制时,由害虫引起的损害和/或害虫侵染或侵扰环境、表面和/或植物或作物物种的能力降低;或者害虫停止从其天然食物资源(如植物和植物产物)中摄食。术语“侵扰(infest)”和“侵染(infect)”或“侵扰(infestation)”和“侵染(infection)”总体上在通篇是可互换地使用的。
这些靶基因可以在昆虫害虫细胞的全部或一些中表达。此外,这些靶基因可以仅在昆虫害虫的生命周期的特定阶段由其表达,例如成熟的成虫期、未成熟的若虫期或幼虫期或卵形期。
如在此所使用,“害虫”物种优选地是引起侵染或侵扰,优选引起植物的侵染或侵扰的昆虫物种。昆虫物种可以包括属于以下目的物种:鞘翅目、鳞翅目、双翅目、网翅目、直翅目、半翅目或蚤目。
根据本发明的优选的植物致病性昆虫是选自下组的植物害虫,该组由以下各项组成:马铃薯叶甲属(Leptinotarsa spp.)(例如马铃薯叶甲(L.decemlineata)(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(L.juncta)(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(L.texana)(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(Nilaparvata spp.)(例如褐飞虱(N.lugens)(褐色飞虱));灰飞虱属(Laodelphax spp.)(例如灰飞虱(L.striatellus)(褐色小飞虱));黑尾叶蝉属(Nephotettix spp.)(例如二点黑尾叶蝉(N.virescens)或黑尾叶蝉(N.cincticeps)(青叶蝉)或二条黑尾叶蝉(N.nigropictus)(稻叶蝉));白背飞虱属(Sogatella spp.)(例如白背飞虱(S.furcifera)(白背飞虱));禾草螟属(Chilo spp.)(例如二化螟(C.suppressalis)(水稻二化螟)、台湾稻螟(C.auricilius)(金线二化螟)或稻多丽螟(C.polychrysus)(黑头茎螟));蛀茎夜蛾属(Sesamia spp.)(例如大螟(S.inferens)(粉红色稻螟));蛀禾螟属(Tryporyza spp.)(例如稻白螟(T.innotata)(白稻螟)或三化螟(T.incertulas)(黄稻螟));花象属(Anthonomus spp.)(例如棉铃象甲(A.grandis)(棉铃象鼻虫));猿叶甲属(Phaedon spp.)(例如辣根猿叶甲(P.cochleariae)(芥菜叶甲虫));食植瓢虫属(Epilachna spp.)(例如墨西哥豆瓢虫(E.varivetis)(墨西哥豆甲虫));拟谷盗属(Tribolium spp.)(例如赤拟谷盗(T.castaneum)(红色地板甲虫));根萤叶甲属(Diabrotica spp.)(例如西方玉米根萤叶甲(D.virgifera virgifera)(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(D.barberi)(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(D.undecimpunctata howardi)(南方玉米根虫)、墨西哥玉米根萤叶甲(D.virgiferazeae)(墨西哥玉米根虫);秆野螟属(Ostrinia spp.)(例如欧洲玉米螟(O.nubilalis)(欧洲玉米螟(European corn borer)));呆蓟马属(Anaphothrips spp.)(例如玉米黄呆蓟马(A.obscrurus)(草蓟马));红铃麦蛾属(Pectinophora spp.)(例如棉红铃虫(P.gossypiella)(粉红色棉铃虫));实夜蛾属(Heliothis spp.)(例如烟芽夜蛾(H.virescens)(烟草蚜虫));粉虱属(Trialeurodes spp.)(例如纹翅粉虱(T.abutiloneus)(结翅粉虱)、温室白粉虱(T.vaporariorum)(温室粉虱));小粉虱属(Bemisia spp.)(例如银叶粉虱(B.argentifolii)(银叶白粉虱));蚜属(Aphis spp.)(例如棉蚜(A.gossypii)(棉花蚜虫));草盲蝽属(Lygus spp.)(例如牧草盲蝽(L.lineolaris)(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(L.hesperus)(西方无泽盲蝽));美洲蝽属(Euschistus spp.)(例如斑点美洲蝽(E.conspersus)(具散点的椿象));Chlorochroa(例如佐井氏蝽(C.sayi)(佐井氏椿象(Say stinkbug)));绿蝽属(Nezara spp.)(例如稻绿蝽(N.viridula)(南方绿椿象));蓟马属(Thrips spp.)(例如烟蓟马(T.tabaci)(葱蓟马));花蓟马属(Frankliniella spp.)(例如烟草褐蓟马(F.fusca)(烟蓟马)或西花蓟马(F.occidentalis)(西花蓟马));蟋蟀属(Acheta spp.)(例如家蟋蟀(A.domesticus)(室内蟋蟀));瘤蚜属(Myzus spp.)(例如桃蚜(M.persicae)(绿桃蚜));长管蚜属(Macrosiphumspp.)(例如马铃薯长管蚜(M.euphorbiae)(马铃薯蚜));土长蝽属(Blissus spp.)(例如麦长蝽(B.leucopterus leucopterus)(麦小蝽));拟缘蝽属(Acrosternum spp.)(例如拟绿蝽(A.hilare)(绿椿象));稻螟属(Chilotraea spp.)(例如稻多丽螟(C.polychrysa)(稻茎螟));稻水象属(Lissorhoptrus spp.)(例如稻水象甲(L.oryzophilus)(稻水象鼻虫));缢管蚜属(Rhopalosiphum spp.)(例如玉米蚜(R.maidis)(玉米叶蚜));以及圆尾蚜属(Anuraphis spp.)(例如玉米根蚜(A.maidiradicis)(玉米根蚜))。
根据更具体的实施例,本发明可适用于属于叶甲科或叶甲虫科的物种。金花虫科甲虫(如科罗拉多马铃薯甲虫、跳甲、玉米根虫)和象鼻虫科(如苜蓿象鼻虫)是特别重要的害虫。根据本发明进行控制的特定马铃薯叶甲属物种包括科罗拉多马铃薯甲虫(马铃薯叶甲)和伪马铃薯甲虫(伪马铃薯叶甲)。CPB是针对我们国产马铃薯、其他培养的和野生的带块茎和不带块茎的马铃薯物种以及其他茄属(茄属植物)植物物种的的一类(严重的)害虫,这些物种包括作物物种番茄、茄子、胡椒、烟草(烟草属物种,包括观赏植物)、地樱桃、水稻、玉米或棉花;以及杂草/药草物种,卡罗来纳茄、常见茄属植物、曼陀罗、天仙子以及刺萼茄。玉米根虫包括在根萤叶甲属中所发现的物种(例如黄瓜十一星叶甲(D.undecimpunctataundecimpunctata)、黄瓜十一星叶甲食根亚种、长角黄瓜甲虫(D.longicornis)、西方玉米食根虫(D.virgifera)以及黄瓜条叶甲(D.balteata))。玉米根虫对玉米和瓜类造成了重大损害。
根据一个更具体的实施例,本发明可适用于属于半翅目(蚜总科)的物种,如桃蚜(绿桃蚜、蚕豆蚜(Aphis fabae)(黑豆蚜虫)、豌豆蚜(Acyrthosiphum pisum)(豌豆蚜虫)、甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)(甘蓝蚜虫)、麦长管蚜(Sitobion avenae)(谷类蚜虫)、埃二尾蚜(Cavariella aegopodii)(胡萝卜蚜虫)、豆蚜(Aphis craccivora)(落花生蚜虫)、棉蚜(Aphis gossypii)(棉花蚜虫)、桔二叉蚜(Toxoptera aurantii)(黑色柑桔蚜虫)、二尾蚜属(Cavariella spp)(柳蚜)、毛蚜属(Chaitophorus spp)(柳叶蚜虫)、长足大蚜属(Cinara spp.)(黑色松蚜虫)、枫长镰管蚜(Drepanosiphum platanoides)(美国梧桐蚜虫)、高蚜属(Elatobium spp)(云杉蚜虫),它们对以下各植物造成损害:如李属树,特别是桃树、杏树以及李树;主要培养用于生产木材的树,如柳树和白杨;行栽作物,如玉米、棉花、黄豆、小麦以及水稻;茄科、藜科、菊科、十字花科以及葫芦科的蔬菜作物,包括(但不限于)朝鲜蓟、芦笋、菜豆、甜菜、椰菜、球芽甘蓝、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、香瓜、芹菜、玉米、黄瓜、小茴香、羽衣甘蓝、大头菜、芜菁、茄子、莴苣、芥菜、秋葵、欧芹、欧洲防风草、豌豆、胡椒、马铃薯、萝卜、菠菜、南瓜、番茄、芜菁、水田芥以及西瓜;或田地作物,如(但不限于)烟草、糖用甜菜以及向日葵;花卉作物或其他观赏植物,如松树和针叶树。其他半翅类昆虫属于褐飞虱属(例如褐飞虱、白背飞虱)并且对水稻植物造成损害。其他半翅类昆虫属于草盲蝽属(例如豆荚草盲蝽、长毛草盲蝽(Lygus rugulipennis)、牧草盲蝽、Lygus sully)以及盲蝽科的其他植食性昆虫物种,并且对以下植物造成损害:棉花、马铃薯植物、草莓、棉花、苜蓿、卡诺拉、桃树、李树、葡萄树、莴苣、茄子、洋葱、青豆。若干地中海树和若干观赏树也一样,如榆树(榆属(Ulmus spp.))、松仁(意大利伞松(Pinus Pinea))、英国梧桐(二球悬铃木(PlatanusAcerifolia))、白紫荆(Malus alba))。其他半翅类昆虫属于蝽科,它们通常被称作盾虫、查斯特臭虫(chust bug)以及椿象(例如棕色大理石纹椿象(茶翅蝽(Halyomorpha halys))、具散点的椿象(斑点美洲蝽)、南方绿椿象(稻绿蝽(Nezara viridula))、森林红蝽(红足真蝽(Pentatoma rufipes))、卷心菜斑色蝽(卷心菜斑色蝽(Murgantia histrionica))、稻椿象(美洲稻蝽(Oebalus pugnax)))并且对以下各项造成损害:水果,包括苹果、桃、无花果、槡椹、柑桔类水果以及柿子、黑莓;以及蔬菜,包括甜玉米、蕃茄、大豆、利马豆及青椒、甘蓝、花椰菜、芜箐、辣根、羽衣甘蓝(collard)、芥菜、球芽甘蓝、马铃薯、茄子、秋葵、菜豆、芦笋、甜菜,杂草、果树,以及田地作物,例如田地玉米和大豆。椿象也是草、高粱以及水稻的一种害虫。
有待用于本发明的方法中的植物或根据本发明的转基因植物涵盖任何植物,但优选地是对植物致病性昆虫的侵扰敏感的一种植物。
因此,本发明扩展到如在此所描述的植物和方法,其中该植物选自以下植物(或作物)的群组:苜蓿、苹果、杏子、朝鲜蓟、芦笋、鳄梨、香蕉、大麦、菜豆、甜菜、黑莓、蓝莓、西兰花、球芽甘蓝、甘蓝、卡诺拉、胡萝卜、木薯、花椰菜、谷物、芹菜、樱桃、柑桔、克莱门氏小柑橘(clementine)、咖啡、玉米、棉花、黄瓜、茄子、菊苣、桉树、无花果、葡萄、葡萄柚、落花生、地樱桃、奇异果、莴苣、韭葱、柠檬、酸橙、松树、玉蜀黍、芒果、甜瓜、粟、蘑菇、坚果燕麦、秋葵、洋葱、橙子、观赏植物或花卉或树、番木瓜、欧芹、豌豆、桃、花生、豌豆(peat)、胡椒、柿子、菠萝、车前草、李子、石榴、马铃薯、南瓜、菊苣、萝卜、油菜籽、覆盆子、水稻、黑麦、高粱、黄豆、大豆、菠菜、草莓、糖用甜菜、甘蔗、向日葵、甘薯、橘子、茶、烟草、番茄、藤本植物、西瓜、小麦、薯蓣以及小西葫芦。
在特定实施例中,本发明提供了靶基因,这些靶基因编码涉及wings up A(肌钙蛋白I)、线粒体细胞色素c氧化酶亚单位II蛋白或如表1中所指定的一种核糖体蛋白质的功能的蛋白质。
在优选实施例中,本发明提供了靶基因,这些靶基因选自以下基因的组,这些基因(i)具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(ii)具有由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个组成的一种核苷酸序列,或(iii)具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(iv)具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(v)具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少70%,优选至少75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(vi)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389所表示的序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致;
并且其中所述基因的核苷酸序列不长于10000、9000、8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000或1500个核苷酸。
由本发明的靶基因所编码的氨基酸序列是由SEQ ID NO 79、349、352、356、80、326、81、327、82、83、328、84、329、85、86、359、87到91、330、350、353、331、351、332到336、337、354、338到344、346、345、347、348、357、355、358、390到393所表示的。
如在此所使用,术语“具有”与“包含”具有相同含义。
如在此所使用的,术语“序列一致性”用于描述两种或更多种核苷酸或氨基酸序列之间的序列关系。两个序列之间的“序列一致性”百分比是通过在一个比较窗(限定数目的位置)中比较两个最佳比对的序列来测定,其中该比较窗中的序列的部分可以包含如与参照序列相比较的插入或缺失(即,缺口)以便实现最佳比对。序列一致性百分比是通过以下方式来计算:测定在两个序列中出现一致的核苷酸碱基或氨基酸残基的位置的数目以得到‘匹配’位置的数目,用匹配位置的数目除以比较窗中的位置总数并且结果乘以100。用于测定序列一致性的方法和软件在本领域中是可获得的并且包括Blast软件和GAP分析。对于核酸,优选通过BlastN比对工具来计算一致性百分比,凭借该比对工具来计算在询问的核苷酸序列的全长内的一致性百分比。
本领域的普通技术人员将认识到,可以鉴定出由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所表示的靶基因的同源物或直向同源物(存在于不同物种中的同源物)。这些害虫同源物和/或直向同源物也在本发明的范围内。优选的同源物和/或直向同源物是这样的一些基因,它们在核苷酸序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较两种基因时,该同源物和/或直向同源物所具有的序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%或85%,更优选至少90%或95%,并且最优选至少约99%一致。类似地,同样优选的同源物和/或直向同源物是这样的一些蛋白质,它们在氨基酸序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该同源物和/或直向同源物所具有的序列与SEQ ID NO 79、349、352、356、80、326、81、327、82、83、328、84、329、85、86、359、87到91、330、350、353、331、351、332到336、337、354、338到344、346、345、347、348、357、355、358、390到393中的任一个至少75%,优选至少80%或85%,更优选至少90%或95%,并且最优选至少约99%一致。
其他同源物是这样的一些基因,它们是包含如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所表示的序列的基因的等位基因。其他优选的同源物是相比于包含如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所表示的序列的基因,包含至少一种单核苷酸多态性(SNP)的基因。
本发明的‘干扰核糖核酸(RNA)’涵盖了能够使靶基因的表达下调或‘沉默’的任何类型的RNA分子,包括(但不限于)有义RNA、反义RNA、短干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、双链RNA(dsRNA)、发夹RNA(RNA)等。用于测定功能性干扰RNA分子的方法在本领域中是众所周知的并且被披露于在此的其他地方。
本发明的干扰RNA分子通过结合于靶基因内的靶核苷酸序列来实现靶基因表达的序列特异性下调。结合发生的原因是干扰RNA与靶核苷酸序列的互补区之间的碱基配对。如在此所使用的,术语‘沉默元件’是指包含与靶基因内的靶核苷酸序列互补或至少部分地互补的核苷酸序列或由其组成的干扰RNA的部分或区域,并且该部分或区域作为干扰RNA的活性部分起作用以指导所述靶基因表达的下调。在本发明的一个实施例中,该沉默元件包含与靶基因内的靶核苷酸序列互补的具有至少17个连续核苷酸,优选至少18或19个连续核苷酸,更优选至少21个连续核苷酸,甚至更优选至少22、23、24或25个连续核苷酸的序列或由其组成。
如在此所使用的,“靶基因表达”是指由靶基因编码的RNA转录物的转录和积累和/或mRNA翻译成蛋白质。术语‘下调’意图指干扰RNA分子借以降低由靶基因产生的初级RNA转录物、mRNA或蛋白质水平的本领域己知的方法中的任何一种。在某些实施例中,下调是指借以使由一种基因产生的RNA或蛋白质的水平降低至少10%,优选至少33%,更优选至少50%,又更优选至少80%的一种情况。在特别优选的实施例中,下调是指如与适当控制的昆虫害虫(例如尚未暴露于干扰RNA或已经暴露于对照的干扰RNA分子的昆虫害虫)相比,在昆虫害虫细胞内由一种基因产生的RNA或蛋白质的水平的至少80%,优选至少90%,更优选至少95%,并且最优选至少99%的降低。用于检测RNA或蛋白质水平的降低的方法在本领域中是众所周知的,并且包括RNA溶液杂交、Northern杂交、逆转录(例如定量RT-PCR分析)、微阵列分析、抗体结合、酶联免疫吸附测定(ELISA)以及Western印迹。在本发明的另一个实施例中,下调是指如与适当的害虫控制相比,RNA或蛋白质水平降低到足以导致害虫表型的可检测的变化,例如细胞死亡、生长停止等。因此,可以使用本领域中的常规技术,通过昆虫害虫的表型分析来测量下调。
在本发明的一个优选实施例中,干扰RNA通过RNA干扰或RNAi来下调基因表达。RNAi是典型地由双链RNA分子(如短干扰RNA(siRNA))所介导的一种序列特异性基因调控方法。siRNA包含通过与反义RNA链互补碱基配对而退火的一个有义RNA链。siRNA分子的有义链或‘引导链’包含与位于靶基因的RNA转录物内的核苷酸序列互补的核苷酸序列。因此,siRNA的有义链能够通过沃森-克里克型(Waston-Crick-type)碱基配对与RNA转录物退火,并且靶向该RNA以在称为RNAi诱导沉默复合物或RISC的细胞复合物内降解。因此,在本发明的优选的干扰RNA分子的情况下,如在此所提及的沉默元件可以是包含退火的互补链的双链区,其中至少一条链包含与靶基因内的靶核苷酸序列互补或至少部分地互补的核苷酸序列或者由其组成。在一个实施例中,该双链区具有至少21、22、23、24、25、30、35、40、50、55、60、70、80、90、100、125、150、175、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个碱基对的长度。
在本发明的范围内还考虑了更长的双链RNA(dsRNA)分子,这些分子包含一个或多个如在此的其他地方所描述的功能性双链沉默元件并且能够发生RNAi介导的基因沉默。这类更长的dsRNA分子包含至少80、200、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个碱基对。这些dsRNA分子可以充当活性siRNA分子的前体,这些活性siRNA分子引导RNA转录物至RISC复合物以进行随后的降解。存在于生物体或其细胞周围的环境中的dsRNA分子可以被生物体摄取并且被称为Dicer的酶加工以得到siRNA分子。可替代地,dsRNA可以在体内产生,即由存在于细胞(例如细菌细胞或植物细胞)内的编码该dsRNA的一种或多种多核苷酸转录,并且在摄入了更长的前体dsRNA后,然后通过宿主细胞内或优选在昆虫害虫细胞内的Dicer加工。该dsRNA可以由借助于互补碱基配对而退火的两条单独的(有义和反义)RNA链形成。可替代地,dsRNA可以是一条单链,它能够自身重新折叠以形成发夹RNA(RNA)或茎环结构。在一条RNA的情况中,双链区或‘茎’是由该RNA的两个区域或区段形成,这些区域或区段基本上是彼此的反向重复序列并且具有足够的互补性以允许形成一个双链区。在该分子的这个‘茎区域’中可以存在一个或多个功能性双链沉默元件。反向重复区域典型地被RNA中称为‘环’区的一个区域或区段隔开。这个区域可以包含任何赋予足够柔性以允许在RNA的侧翼互补区域之间发生自配对的核苷酸序列。总体而言,该环区实质上是单链的并且充当反向重复序列之间的间隔元件。
本发明的所有干扰RNA分子通过结合于靶基因内的靶核苷酸序列来实现靶基因表达的序列特异性下调。结合发生的原因是干扰RNA的沉默元件与靶核苷酸序列之间的互补碱基配对。本发明的干扰RNA分子包含至少一个或至少两个沉默元件。在本发明的一个实施例中,该靶核苷酸序列包含如由靶基因的RNA转录物所表示的核苷酸序列或其片段,其中该片段优选地是至少17个核苷酸,更优选至少18、19或20个核苷酸,或最优选至少21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个核苷酸。在本发明的一个优选实施例中,靶核苷酸序列包含等效于由选自下组的任一个多核苷酸所编码的RNA转录物的一种核苷酸序列,该组由以下各项组成:(i)包含如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100或1115个连续核苷酸的一种多核苷酸,或(ii)由如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸组成的一种多核苷酸;
或(iii)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的一种多核苷酸,由此使得当最佳地比对并且比较两种序列时,所述多核苷酸与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(iv)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸的一个至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列以使得当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,
或(v)由如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸的一个至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段组成的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列,当将所述片段与SEQ ID NO1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(vi)编码一种氨基酸序列的一种多核苷酸,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少70%,优选至少75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%一致。在以上的一个更优选的实施例中,所述多核苷酸不长于10000、9000、8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000或1500个核苷酸。
优选地,本发明的干扰RNA分子包含至少一个双链区,典型地是该干扰RNA的沉默元件,它包含通过与反义RNA链互补碱基配对而退火的有义RNA链,其中dsRNA分子的有义链包含与位于靶基因的RNA转录物内的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
沉默元件或其至少一条链(当沉默元件为双链时)可以与靶基因的靶核苷酸序列完全地互补或部分地互补。如在此所使用的,术语“完全地互补”意指沉默元件核苷酸序列的所有碱基都与靶核苷酸序列的碱基互补或‘匹配’。术语“至少部分地互补”意指沉默元件的碱基与靶核苷酸序列的碱基之间存在小于100%的匹配。本领域的技术人员将理解,为了介导靶基因表达的下调,沉默元件仅需要与靶核苷酸序列至少部分地互补。本领域已知,相对于靶序列而具有插入、缺失以及错配的RNA序列在RNAi方面仍然可以有效。根据本发明,优选的是,沉默元件与靶基因的靶核苷酸序列共有至少80%或85%的序列一致性,优选至少90%或95%的序列一致性,或更优选至少97%或98%的序列一致性并且再更优选至少99%的序列一致性。可替代地,在24个部分地互补的核苷酸的每个长度上,如与靶核苷酸序列相比,沉默元件可以包含1、2或3个错配。
本领域的普通技术人员将了解,沉默元件与靶核苷酸序列之间共有的互补性程度可以取决于有待下调的靶基因或者取决于基因表达有待控制的昆虫害虫物种而改变。
在本发明的另一个实施例中,沉默元件包含一种核苷酸序列,该核苷酸序列是选自下组的任一个多核苷酸的RNA等效物,该组由以下各项组成:包含如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100或1115个连续核苷酸的一种多核苷酸,或(ii)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的一种多核苷酸,由此使得当最佳地比对并且比较两种序列时,所述多核苷酸与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(iii)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸的一个至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列以使得当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,并且其中所述多核苷酸不长于10000、9000、8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000或1500个核苷酸。应了解,在这样的实施例中,沉默元件可以包含一个双链RNA区域或由其组成,该区域包含退火的互补链,其中一条链,即有义链,包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分地互补的核苷酸序列。
靶核苷酸序列可以选自靶基因或其RNA转录物的任何合适区域或核苷酸序列。举例来说,靶核苷酸序列可以位于靶基因或RNA转录物的5'UTR或3'UTR内,或者基因的外显子或内含子区域内。
本领域的技术人员熟知在全长靶基因背景下鉴定最合适的靶核苷酸序列的方法。举例来说,可以对靶向靶基因不同区域的多种沉默元件进行合成并测试。可替代地,用如RNAse H等酶消化RNA转录物可以被用来确定RNA上构象对基因沉默敏感的位点。靶位点也可以使用计算机模拟(in silico)方法,例如使用被设计成基于靶向全长基因内的不同位点来预测基因沉默效力的计算机算法进行鉴定。
本发明的干扰RNA可以包含一个沉默元件或多个沉默元件,其中每个沉默元件包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分地互补的核苷酸序列或由其组成,并且在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述靶基因的表达的作用。通过引用结合在此的WO 2006/046148中描述了这种类型的多联体RNA构建体。在本发明的上下文中,术语‘多个’意指至少两个,至少三个,至少四个等并且直到至少10、15、20个或至少30个。在一个实施例中,干扰RNA包含单一沉默元件的多个拷贝,即结合于一个特定靶基因内的一个特定靶核苷酸序列的沉默元件的重复。在另一个实施例中,干扰RNA内的沉默元件包含与不同靶核苷酸序列互补的不同核苷酸序列或由其组成。应该清楚的是,与结合于不同靶核苷酸序列的沉默元件组合的相同沉默元件的多个拷贝的组合是在本发明的范围内。
为了实现昆虫害虫物种中特定靶基因的下调的改善,不同靶核苷酸序列可以来源于一种昆虫害虫物种中的单一靶基因。在这种情况下,沉默元件在干扰RNA中可以按靶核苷酸序列在靶基因中存在的原始顺序组合,或者如与靶基因中靶核苷酸序列的顺序相比,沉默元件在干扰RNA的环境中可以打乱并按任何等级次序随机地组合。
可替代地,不同靶核苷酸序列代表着单一靶基因,但来源于不同昆虫害虫物种。
可替代地,不同靶核苷酸序列可以来源于不同靶基因。如果将干扰RNA用于预防和/或控制害虫侵扰,那么优选的是,不同靶基因是选自调控昆虫害虫物种的必需生物功能的基因的组,这些生物功能包括(但不限于)存活、生长、发育、生殖以及致病性。靶基因可以调控相同或不同的生物途径或过程。在一个实施例中,至少一个沉默元件包含与靶基因内的靶核苷酸序列至少部分地互补的核苷酸序列或由其组成,其中该靶基因选自如更早描述的基因的组。
在本发明的另一个实施例中,由不同沉默元件靶向的不同基因来源于相同的昆虫害虫物种。这种方法被设计用来实现针对单一昆虫害虫物种的增强的攻击。具体来说,不同靶基因可以在昆虫生命周期的不同阶段,例如成熟的成虫期、未成熟的幼虫期以及卵形期有差别地表达。因此,本发明的干扰RNA可以用于在昆虫生命周期的一个以上阶段中预防和/或控制昆虫害虫侵扰。
在本发明的一个替代性实施例中,由不同沉默元件靶向的不同基因来源于不同的昆虫害虫物种。因此,本发明的干扰RNA可以用于同时预防和/或控制一种以上昆虫害虫物种的侵扰。
沉默元件可以安排为干扰RNA的一个连续区域或者可以通过接头序列的存在加以隔开。接头序列可以包含不与任何靶核苷酸序列或靶基因互补的短的随机核苷酸序列。在一个实施例中,该接头是条件性自切割RNA序列,优选是pH敏感性接头或疏水敏感性接头。在一个实施例中,该接头包含与内含子序列等效的核苷酸序列。本发明的接头序列的长度可以在从约1个碱基对到约10000个碱基对的范围内,其条件是该接头不会削弱干扰RNA下调靶基因的表达的能力。
除了该一个或多个沉默元件和任何接头序列之外,本发明的干扰RNA还可以包含至少一种另外的多核苷酸序列。在本发明的不同实施例中,该另外的序列选自(i)能够保护干扰RNA免于RNA加工的序列,(ii)影响干扰RNA的稳定性的序列,(iii)允许蛋白质结合以例如促进干扰RNA被昆虫害虫物种的细胞摄入的序列,(iv)促进大规模产生干扰RNA的序列,(v)作为结合于受体或结合于昆虫害虫细胞表面上的分子以促进摄入的适体的序列,或(v)催化昆虫害虫细胞中干扰RNA的加工并由此增强干扰RNA的效力的序列。用于增强RNA分子的稳定性的结构在本领域中是众所周知的并且进一步描述在WO2006/046148中,该案通过引用结合在此。
本发明的干扰RNA的长度需要足以被昆虫害虫物种的细胞摄入并且使害虫内的靶基因下调,如在此的其他地方所描述的。然而,长度的上限可以取决于(i)干扰RNA被害虫细胞摄取的要求和(ii)干扰RNA在害虫细胞中被加工以通过RNAi途径介导基因沉默的要求。也可以通过生产方法和用于递送干扰RNA到细胞中的配制品来制定长度。优选地,本发明的干扰RNA的长度将在21与10000个核苷酸之间,优选在50与5000个核苷酸之间或在100与2500个核苷酸之间,更优选长度在80与2000个核苷酸之间。
该干扰RNA可以包含DNA碱基、非天然碱基或者糖-磷酸骨架的非天然骨架连接或修饰,例如以增强储存期间的稳定性或增强对核酸酶降解的抗性。此外,该干扰RNA可以由本领域的普通技术人员通过手动或自动反应化学地或酶促地产生。可替代地,该干扰RNA可以由编码其的多核苷酸转录。因此,在此提供了编码本发明的干扰RNA中的任一个的一种分离的多核苷酸。
在此还提供了一种分离的多核苷酸,该多核苷酸选自下组,该组由以下各项组成:(i)包含如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的一种多核苷酸,或(ii)由如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100或1115个连续核苷酸组成的一种多核苷酸,或(iii)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸序列的至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的一种多核苷酸,由此当最佳地比对并且比较两种序列时,所述多核苷酸与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(iv)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸的一个至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列以使得当将所述片段与SEQ ID NO1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(v)由如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸的一个至少21个,优选至少22、23或24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100、110、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、2000或3000个连续核苷酸的片段组成的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列以使得当将所述片段与SEQ ID NO1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%,优选至少80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,或(vi)编码一种氨基酸序列的一种多核苷酸,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少70%,优选至少75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%一致,并且其中所述多核苷酸不长于10000、9000、8000、7000、6000、5000、4000、3000、2000或1500个核苷酸。
在优选实施例中,该分离的多核苷酸是干扰RNA分子的一部分,典型地是沉默元件的一部分,它包含至少一个双链区,该双链区包含通过与反义RNA链互补碱基配对而退火的有义RNA链,其中dsRNA分子的有义链包含与位于靶基因的RNA转录物内的核苷酸序列互补的核苷酸序列。因此,dsRNA的有义链能够与RNA转录物退火并且靶向该RNA以在RNAi诱导沉默复合物或RISC内降解。
本发明的多核苷酸可以通过常规分子克隆技术插入到本领域中已知的DNA构建体或载体中。因此,根据一个实施例,提供了包含任一个本发明的多核苷酸的DNA构建体。优选地,在此提供了包含一种编码至少一个本发明的干扰RNA的多核苷酸的一种DNA构建体。该DNA构建体可以是重组DNA载体,例如细菌、病毒或酵母载体。在本发明的一个优选实施例中,DNA构建体是一种表达构建体并且该多核苷酸被可操作地连接到至少一个能够驱动多核苷酸序列的表达的调控序列。术语‘调控序列’应取广义并且旨在指能够影响所可操作地连接的多核苷酸的表达的任何核苷酸序列,包括(但不限于)启动子、增强子以及其他天然产生的或合成的转录激活元件。调控序列可以位于该多核苷酸序列的5'或3'端。术语‘可操作地连接’是指调控序列与多核苷酸序列之间的功能性连接,该连接使得该调控序列驱动该多核苷酸的表达。可操作地连接的元件可以是连续的或不连续的。
优选地,该调控序列是一种启动子,该启动子选自下组,该组包括(但不限于):组成型启动子、诱导型启动子、组织特异性启动子以及生长/发育阶段特异性启动子。在一个实施例中,多核苷酸被置于强组成型启动子的控制之下,该启动子是如选自下组的任何一种,该组包括:CaMV35S启动子、双CaMV35S启动子、泛素启动子、肌动蛋白启动子、核酮糖二磷酸羧化酶启动子、GOS2启动子、玄参花叶病毒34S启动子。
任选地,一种或多种转录终止序列可以被合并到本发明的表达构建体中。术语‘转录终止序列’涵盖在转录单元末端处的控制序列,它发送初级转录物的转录终止、3'加工以及多聚腺苷酸化的信号。另外的调控元件,包括(但不限于)转录或翻译增强子,可以被合并到表达构建体中,例如与双增强CaMV35S启动子一样。
本发明还涵盖了一种用于产生任一种本发明的干扰RNA的方法,包括以下步骤:(i)使编码所述干扰RNA的多核苷酸或包含该多核苷酸的DNA构建体与不含细胞的组分接触;或(ii)将编码所述干扰RNA的多核苷酸或包含该多核苷酸的DNA构建体引入(例如通过转化、转染或注射)到细胞中。
因此,本发明还涉及由在此描述的多核苷酸表达产生的任何双链核糖核苷酸。
因此,在此还提供了用在此描述的任一种多核苷酸转化的一种宿主细胞。本发明进一步涵盖了包含任一种本发明的干扰RNA、任一种本发明的多核苷酸或包含这些多核苷酸的DNA构建体的宿主细胞。该宿主细胞可以是一种原核细胞,包括(但不限于)革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌细胞;或一种真核细胞,包括(但不限于)酵母细胞或植物细胞。优选地,所述宿主细胞是一种细菌细胞或一种植物细胞。细菌细胞可以选自下组,该组包括(但不限于)革兰氏阳性和革兰氏阴性细胞,包含埃希氏菌属(Escherichia spp.)(例如大肠杆菌)、芽孢杆菌属(Bacillus spp.)(例如苏云金芽孢杆菌)、根瘤菌属(Rhizobium spp.)、乳杆菌属(Lactobacillus spp.)、乳球菌属(Lactococcus spp.)、假单胞菌属(Pseudomonasspp.)以及农杆菌属(Agrobacterium spp.)。本发明的多核苷酸或DNA构建体在宿主细胞中可以作为染色体外元件存在或维持,或者可以稳定地合并到宿主细胞基因组中。在选择为了本发明的目的的宿主细胞中的特别感兴趣的特征包括编码干扰RNA的多核苷酸或DNA构建体可以被引入到宿主中的容易性、相容的表达系统的可用性、表达的效率以及干扰RNA在宿主中的稳定性。
优选地,本发明的干扰RNA是在植物宿主细胞中表达的。优选的感兴趣的植物包括(但不限于)棉花、马铃薯、水稻、番茄、卡诺拉、黄豆、向日葵、高粱、珍珠粟、玉米、苜蓿、草莓、茄子、胡椒以及烟草。
在干扰RNA在宿主细胞中表达和/或被用于预防和/或控制宿主生物体的害虫侵扰的情况下,优选的是干扰RNA不展现出显著的‘脱靶’效应,即干扰RNA不影响宿主内的基因表达。优选地,沉默基因不展现与除靶基因的既定靶核苷酸序列之外的核苷酸序列的显著互补性。在本发明的一个实施例中,沉默元件显示出与宿主细胞或生物体的任何基因的小于30%,更优选小于20%,更优选小于10%并且甚至更优选小于5%的序列一致性。如果宿主生物体的基因组序列数据是可得到的,那么人们可以使用标准的生物信息学工具交叉检验与沉默元件的一致性。在一个实施例中,在有17个连续核苷酸的区域内,更优选在有18个或19个连续核苷酸的区域内,并且最优选在有20个或21个连续核苷酸的区域内,沉默元件与来自宿主细胞或宿主生物体的基因之间不存在序列一致性。
在本发明的切实可行的应用中,本发明的干扰RNA可以用于预防和/或控制属于鞘翅目、鳞翅目、双翅目、网翅目、直翅目、半翅目以及蚤目的任何昆虫害虫。
另外,根据本发明的另一个方面,在此提供了一种用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰的组合物,该组合物包含至少一种干扰核糖核酸(RNA)和任选地至少一种合适的载体、赋形剂或稀释剂,其中该干扰RNA在被害虫摄入后起到下调所述害虫内一种靶基因的表达的作用。该干扰RNA可以是在此的其他地方所披露的那些中的任何一种。优选地,该干扰RNA包含至少一个沉默元件或由其组成,并且所述沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链(有义链)包含与靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列。‘靶基因’可以是如在此的其他地方所披露的害虫靶基因中的任何一种,包括(但不限于)涉及于调控害虫存活、生长、发育、生殖以及致病性的基因。可替代地,该组合物包含至少一个宿主细胞,该宿主细胞包含至少一个干扰RNA分子或编码该干扰RNA分子的DNA构建体以及任选地至少一种合适的载体、赋形剂或稀释剂,其中在该宿主细胞被昆虫害虫摄入后,该干扰RNA起到下调所述害虫内一种靶基因的表达的作用。
在本发明的切实可行的应用中,该组合物可以用于预防和/或控制属于以下目的任何昆虫害虫:鞘翅目、鳞翅目、双翅目、网翅目、直翅目、半翅目以及蚤目。因此,该组合物可以呈施用给昆虫害虫或施用给对所述昆虫害虫的侵扰敏感的基质和/或生物体,尤其是植物的任何合适的形式。在一个实施例中,该组合物适用于预防和/或控制植物或者植物的繁殖或生殖材料的害虫侵扰,并且因此是针对侵扰植物的昆虫害虫物种。当昆虫害虫属于通过吃如根、叶、花、芽、嫩枝等植物组织而对植物造成相当大的损害的‘咀嚼式’昆虫的类别时,本发明的组合物特别有效。来自这个较大的昆虫类别的实例包括甲虫和其幼虫。
本发明的组合物可以用于控制处于昆虫害虫生命周期所有阶段,例如成熟的成虫期、幼虫期以及卵形期的昆虫害虫。
在本发明组合物的背景下,该干扰RNA可以由一种DNA构建体,尤其是如在此的其他地方所描述的一种表达构建体产生,该干扰RNA包含编码该干扰RNA的一种多核苷酸。在优选实施例中,该干扰RNA可以在被工程改造成由一种编码干扰RNA的多核苷酸表达所述干扰RNA的一种宿主细胞或生物体内产生。
用于本发明的组合物中的合适的宿主生物体包括(但不限于)已知定殖于关注的植物或作物,即对昆虫害虫物种的侵扰敏感的植物或作物之上和/或周围的环境中的微生物。这类微生物包括(但不限于)占据叶面(植物叶的表面)和/或根围(围绕植物根的土壤)的那些。这些微生物经过选择以使得能够成功地与植物环境中所存在的任何野生型生物体相竞争。适用作宿主的合适的微生物包括不同种类的细菌、藻类以及真菌。很明显,所选择的微生物必须为对植物不具有毒性的。施用到对昆虫害虫物种的侵扰敏感的植物的这类组合物将被以经过处理的植物为食的昆虫害虫摄取。
不是天然地定殖于植物和/或其环境的宿主生物体也在本发明的范围内。这类生物体可以仅充当产生该组合物的干扰RNA的一种手段。举例来说,在一个实施例中,在一个细菌宿主中发酵/产生干扰RNA并且接着将该细菌灭活/杀死。所得细菌可以经过加工并且以与已使用苏云金芽孢杆菌菌株作为喷雾剂应用的杀昆虫剂的相同方式而被用作一种杀昆虫喷雾剂。在某些实施例中,可以适当地纯化细菌提取物或溶菌液以留下一种含实质上纯的干扰RNA的提取物,接着把它配制成一种本发明的组合物。本领域的普通技术人员应该已知标准的提取/纯化技术。
本发明的组合物可以呈施用给昆虫的任何合适的物理形式。举例来说,该组合物可以呈固体形式(粉末、球粒或诱饵)、液体形式(包括作为一种喷雾剂杀昆虫剂给予的形式)或凝胶形式。在一个具体实施例中,该组合物可以是一种涂料、糊剂或粉末,它可以被施用到一种基质以便保护所述基质免遭昆虫的侵扰。在此实施例中,该组合物可以用来保护对昆虫侵扰或由昆虫引起的损害敏感的任何基质或材料。
赋形剂的性质和组合物的物理形式可以取决于所希望处理的基质的性质而变。举例来说,该组合物可以是一种液体,它被刷在或喷在有待处理的材料或基质之上或者印在有待处理的材料或基质中;或是一种涂料或粉末,它被施用到有待处理的材料或基质上。
在一个实施例中,该组合物是呈诱铒的形式。该诱铒被设计用来引诱昆虫与该组合物接触。在与之接触之后,该组合物随后被该昆虫通过例如摄取而内化并且介导RNAi,从而杀死昆虫。所述诱铒可以包含一种食物,如一种基于蛋白质的食物,例如鱼粉。硼酸也可以用作一种诱铒。该诱铒可以取决于所靶向的物种。还可以使用一种引诱剂。举例来说,该引诱剂可以是一种信息素,如一种雄性或雌性信息素。作为一个实例,可以在本发明中使用在《昆虫信息素和它们在害虫管理中的用途》(Insect Pheremones and their use inPest Management)(豪斯(Howse)等人,查普曼和霍尔公司(Chapman and Hall),1998)一书中所提到的信息素。引诱剂起到将昆虫引诱到诱铒的作用,并且可以被靶向一种特定的昆虫或可以吸引整个范围内的昆虫。诱铒可以呈任何合适的形式,如固体、糊剂、球粒或粉末化形式。
诱铒还可以被昆虫带回到群落。然后诱铒可以充当该群落其他成员的食物来源,从而提供了对大量昆虫和潜在地整个昆虫害虫群落的一种有效控制。这是与使用本发明的双链RNA相关的一个优点,因为RNAi介导的对害虫的作用的延迟行动使得诱铒被带回到群落,从而就暴露于昆虫来说递送了最大的影响。
另外,与昆虫接触的组合物可以保留在昆虫的表皮上。当清洁时,无论是一只单独的昆虫清洁自身或是昆虫彼此清洁,这些组合物都可以被摄取并且可以由此介导它们在昆虫中的作用。这需要该组合物足够地稳定以使得即使在暴露于外部环境条件一段时间(该段时间可以是例如数天的时间)时,干扰RNA仍保持完整并且能够介导RNAi。
诱饵可以被提供在一个合适的“壳体”或“捕获器”中。这类壳体和捕获器是可商购的并且现有捕获器可以被调适成包括本发明的组合物。可以吸引昆虫进入的任何壳体或捕获器都包括在本发明的范围内。壳体或捕获器可以是例如盒子状的,并且可以在预成型条件下提供或可以由可折叠纸板形成。用于壳体或捕获器的合适的材料包括塑料和纸板,尤其是瓦楞纸板。这种壳体或捕获器的合适的尺寸是例如7-15cm宽,15-20cm长以及1-5cm高。这些捕获器的内表面可以内衬有一种粘性物质,以便限制昆虫一旦在捕获器内时的移动。壳体或捕获器可以在内部包含一个合适的槽,它可以将诱铒保持在适当的位置。捕获器与壳体是有区别的,因为昆虫在进入之后不能轻易地离开捕获器,而壳体充当一个“摄食站”,它向昆虫提供一个优选的环境,在其中它们可以摄食并且感觉不会受到捕食者的危险。
因此,在另一个方面,本发明提供了一种用于昆虫的壳体或捕获器,它包含一种本发明的组合物,可以结合在此所描述的组合物的任何一种特征。
在另一个替代性实施例中,组合物可以呈一种喷雾剂形式提供。因此,人类使用者可以直接用该组合物喷害虫。该组合物然后被昆虫内化,在昆虫体内,它可以介导RNA干扰,从而控制昆虫。喷雾剂优选地是一种加压/雾化喷雾剂或一种泵式喷雾剂。这些颗粒可以具有合适的大小以使得它们粘附在昆虫上,例如粘附在外骨骼上,并且可以从那里被吸收。粒度可以通过已知手段,如通过使用一种可商购的装置马斯特赛(Mastersizer)粒度仪来测量。
在又一个实施例中,载体是一种带静电的粉末或颗粒,它粘附在昆虫上。能够粘附在昆虫上并且由此递送本发明的RNA构建体的合适的粉末和颗粒详细描述在WO 94/00980和WO 97/33472中,两者都通过引用结合在此。
可替代地,载体可以包含磁性颗粒,这些颗粒粘附在昆虫表皮上。能够粘附在昆虫上并且由此递送本发明的RNA构建体的合适的磁性颗粒详细描述在WO 00/01236中,该参考文献结合在此。
在又一个实施例中,组合物的载体包括金属颗粒,这些颗粒最初是未磁化的但能够在经历了由昆虫身体所提供的电场时变得磁性地极化。这种行为模式详细描述在WO2004/049807中并且通过引用结合在此。
优选地,组合物并入了一种载体,该载体增加了昆虫害虫中干扰RNA的摄入。这种载体可以是一种基于脂质的载体,优选地包含以下各项中的一种或多种:水包油型乳液、胶束、胆固醇、脂多胺以及脂质体。促进本发明的构建体的摄入的其他试剂是本领域的技术人员众所周知的并且包括聚阳离子、右旋糖酐以及(三)阳离子脂质,如CS096、CS102等。可商购的脂质体包括等。在WO 03/004644中的标题“转染促进剂(Transfection promoting agent)”下列出了许多合适的载体,并且所提供的实例各自通过引用结合在此。
在另一个优选实施例中,载体是一种核酸凝聚剂。优选地,核酸凝聚剂包含亚精胺或硫酸鱼精蛋白或其衍生物。
在本发明的组合物适用于预防和/或控制植物的害虫侵扰的情况下,该组合物可以包含一种农业上合适的载体。这种载体可以是有待处理的植物可以耐受的任何材料,这种材料不会对环境或其中的其他生物体造成不当的损害并且它允许干扰RNA针对昆虫害虫物种保持有效。具体来说,本发明的组合物可以根据生物杀虫剂行业中所用的常规农业实践进行配制以递送给植物。该组合物可以包含能够执行其他功能的另外的组分,这些功能包括(但不限于)(i)增强或促进害虫细胞对干扰RNA的摄入和(ii)使组合物的活性组分稳定。在包含干扰RNA的组合物中所含的这类另外的组分的具体实例是酵母tRNA或酵母总RNA。
该组合物可以被配制用于直接施用或配制为在使用之前需要稀释的初级组合物的浓缩形式。可替代地,该组合物可以按试剂盒形式供应,该试剂盒包含在一个容器中的干扰RNA或者包含或表达干扰RNA的宿主细胞以及在一个单独的容器中的用于该RNA或宿主细胞的合适的稀释剂或载体。在本发明的切实可行的应用中,该组合物可以被施用到处于植物发育的任何阶段的植物或植物的任何部分。在一个实施例中,例如在植物作物于田地中培养期间,将组合物施用给植物的地上部分。在又一个实施例中,当植物种子在储存时或在将其种植到土壤中之后,将组合物施用给植物种子。总体而言重要的是,在植物生长的早期获得对害虫的良好控制,因为这是植物可能受到害虫物种最严重地损坏的时间。
可以通过不同的技术将组合物施用到昆虫害虫的环境中,这些技术包括(但不限于)喷雾、雾化、撒粉、散布、倾注、涂布种子、种子处理、引入到土壤中以及引入到灌溉水中。在处理对害虫侵扰敏感的植物时,可以在出现害虫之前(出于预防的目的)或在害虫侵扰的迹象开始出现之后(出于害虫控制的目的),将组合物递送给植物或植物的一部分。
在本发明的又一个实施例中,本发明的组合物可以被配制成包含至少一种另外的活性剂。因此,该组合物可以按一种“分多部分的试剂盒”形式提供,试剂盒包括在一个容器中的含干扰RNA的组合物和在一个单独的容器中的一种或多种合适的活性成分,例如化学或生物杀虫剂。可替代地,该组合物可以按一种混合物形式提供,该混合物是稳定的并且彼此联合使用。
可以按一种互补方式作用于本发明的干扰RNA分子的合适的活性成分包括(但不限于)以下各项:毒死蜱、丙烯菊酯、苄呋菊脂、四溴乙基、二甲醇-环丙烷甲酸(总体上被包括在液体组合物中);以及氟蚁腙、阿维菌素、毒死蜱、氟虫胺、烯虫乙酯、氟虫腈(GABA受体)、氨基甲酸异丙基苯基甲酯、茚虫威(PARA)、多氟脲(几丁质合成抑制剂)、炔咪菊酯(PARA)、阿巴美丁(谷氨酸酯门控的氯离子通道)、吡虫啉(乙酰胆碱受体)(总体上被包括在诱铒组合物中)。
在一个优选实施例中,就健康和环境考虑来说,已知活性成分是一种优选的杀昆虫剂,如氟蚁腙和阿维菌素。
在本发明的又一个实施例中,组合物被配制成包含至少一种另外的农艺学试剂,例如一种除草剂或一种另外的杀虫剂。如在此所使用的,‘第二杀虫剂’或‘另外的杀虫剂’是指除了该组合物的第一或原始干扰RNA分子以外的一种杀虫剂。可替代地,本发明的组合物可以与至少一种其他农艺学试剂(例如一种除草剂或一种第二杀虫剂)组合递送。在一个实施例中,该组合物是与一种除草剂组合提供,该除草剂选自本领域中已知的任何除草剂,例如草甘膦、咪唑啉酮、磺脲以及溴苯腈。在又一个实施例中,该组合物是与至少一种另外的杀虫剂组合提供。该另外的杀虫剂可以选自本领域中已知的任何杀虫剂和/或可以包含一种干扰核糖核酸,该干扰核糖核酸在被一种害虫摄入后起到下调所述害虫物种中的一种靶基因的表达的作用。在一个实施例中,靶害虫是一种昆虫害虫物种并且干扰RNA是选自如在此所描述的干扰RNA中的任何一个。在又一个实施例中,该另外的杀虫剂包含一种干扰RNA,它起到下调任何靶害虫物种(不限于昆虫害虫)中一种已知基因的表达的作用。组合物的原始干扰RNA分子和第二或另外的杀虫剂可以靶向相同的昆虫害虫物种或可以打算靶向不同的昆虫害虫物种。举例来说,原始干扰RNA和第二杀虫剂可以靶向不同的昆虫害虫物种或可以靶向不同科或纲的害虫生物体,例如真菌或线虫或昆虫。本领域的普通技术人员应清楚如何关于协同效应测试干扰RNA分子与其他农艺学试剂的组合。在一个优选实施例中,组合物包含在此的其他地方所描述的一种第一干扰RNA分子和一种或多种另外的杀虫剂,每一种都对相同的昆虫害虫具有毒性,其中这一种或多种另外的杀虫剂选自一种马铃薯块茎特异蛋白、一种苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白、一种致病杆菌杀虫蛋白、一种光杆状菌杀虫蛋白、一种侧孢芽孢杆菌杀虫蛋白、一种球形芽孢杆菌杀虫蛋白以及一种木质素,并且其中所述苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白选自下组,该组由以下各项组成:Cry1Ab;Cry1C;Cry2Aa;Cry3;TIC851;CryET70;Cry22;VIP;TIC901;TIC1201;TIC407;TIC417;选自CryET33和CryET34、CryET80和CryET76、TIC100和TIC101以及PS149B1的二元杀虫蛋白;以及前述杀虫蛋白中的任何一种的杀昆虫嵌合体。
在此所描述的组合的不同组分可以例如向给予对任何目中的害虫的侵扰敏感的宿主生物体。这些组分可以同时或依次递送到有待处理的区域或生物体。
在此还提供了一种用于预防和/或控制害虫侵扰的方法,包括使昆虫害虫物种与有效量的至少一种干扰RNA接触,其中该RNA在被所述害虫摄入后起到下调必需的害虫靶基因的表达的作用。该必需的靶基因可以是涉及于调控害虫引发或维持侵扰所需的必需生物过程的任何害虫基因,该生物过程包括(但不限于)存活、生长、发育、生殖以及致病性。具体来说,该靶基因可以是如在此的其他地方所描述的任何一种害虫基因。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297或310到313或者其互补序列中的任一个的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297或310到313或者其互补序列中的任一个的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ ID NO 79、349、352或356中的任一个中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 141、11、12、47到50或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 141、11、12、47到50或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ IDNO 328或84中的任一个中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 17、18、59到62或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 17、18、59到62或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ IDNO 87中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 19、20、63到66或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 19、20、63到66或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ IDNO 88中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ ID NO 347或348中的任一个中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、北美玉米根叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ ID NO 330、350或353中的任一个中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179、210到213、290到293或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 145、122、144、178、131、179、210到213、290到293或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ ID NO 331或351中的任一个中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 128、149、184、137、185、234到237、302到305或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
在此描述的用以下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达的方法中,可以使用包含至少21bp的双链RNA分子(其中一条链包含与SEQ ID NO 128、149、184、137、185、234到237、302到305或其互补序列中的任一个中的至少21个连续核苷酸互补的核苷酸序列或由其组成)来下调鞘翅类昆虫、半翅类昆虫、鳞翅类昆虫或双翅类昆虫中的直向同源靶基因的表达,该昆虫选自下组,该组包括(但不限于)马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)或墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫),其中这些直向同源基因编码一种蛋白质,该蛋白质所具有的氨基酸序列与如SEQ ID NO 337或354中的任一个中所存在的氨基酸序列至少85%、90%、92%、94%、96%、98%、99%一致(当最佳地比对所述编码的蛋白质时)。
另外,在此提供了一种用于预防和/或控制作物植物田地中的昆虫害虫侵扰的方法,所述方法包括在所述植物中表达有效量的如在此所描述的干扰RNA。
在该方法用于控制害虫侵扰的情况下,短语‘有效量’扩展到对害虫产生一种表型作用以使得侵扰宿主生物体的害虫生物体的数目减少和/或由该害虫所引起的损害量降低所需的干扰RNA的量或浓度。在一个实施例中,表型作用是害虫的死亡并且使用干扰RNA实现了如与对照昆虫害虫相比,至少20%、30%、40%,优选至少50%、60%、70%,更优选至少80%或90%的害虫死亡率。在又一个实施例中,表型作用包括(但不限于)妨碍害虫生长,摄食停止以及减少产卵。因此,如与对照害虫相比,侵扰宿主生物体的害虫生物体的总数目可以减少至少20%、30%、40%,优选至少50%、60%、70%,更优选至少80%或90%。可替代地,如与对照昆虫害虫相比,由昆虫害虫引起的损害可以降低至少20%、30%、40%,优选至少50%、60%、70%,更优选至少80%或90%。因此,本发明的方法可以用于实现至少20%、30%、40%,优选至少50%、60%、70%,更优选至少80%或90%的害虫控制。
如在此所使用的,术语‘植物’可以包括一种植物的任何生殖或繁殖材料。提到植物还可以包括植物细胞、植物原生质体、植物组织培养物、植物愈伤组织、植物丛以及在植物或植物的部分中完好的植物细胞,这些植物部分如胚、花粉、胚珠、种子、叶、花、枝、果实、核、穗、穗轴、外壳、茎、根、根尖等。
在此还提供了如在此所描述的干扰核糖核酸(RNA)或如在此所描述的DNA构建体用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰,优选地植物昆虫害虫侵扰的用途。
参照以下非限制性实例将进一步理解本发明。
实例
实例1.鉴定昆虫害虫物种中的靶基因
1.1.豆荚草盲蝽归一化的cDNA文库和在多孔板中制备dsRNA用于筛选测定
从不同生命阶段的豆荚草盲蝽若虫中分离核酸,这些豆荚草盲蝽若虫包括刚孵出的若虫、2、4、6以及9日龄的若虫以及成虫。使用SMARTerTM PCR cDNA合成试剂盒,遵循制造商的说明书(Clontech目录号634925)来制备cDNA文库。使用Trimmer试剂盒(Evrogen目录号NK001)使cDNA文库归一化并且在PCR4-TOPO载体(英杰(Invitrogen))中进行克隆。将归一化的克隆引入M2适体(Trimmer试剂盒,Evrogen,SEQ ID NO92:AAGCAGTGGTATCAACGCAG)中,在这些克隆的每一端处相对地定向。将重组载体构建体转化至大肠杆菌菌株TOP10(英杰)的细胞中。随后将转化的细胞稀释并且铺板,由此获得单一群落或克隆。检查这些克隆以确保该库的克隆冗余不超过5%。在96孔深孔板中的液体LB(Luria肉汤(Luria-broth))培养基中挑选单个克隆,并且使其在37℃下生长过夜。这些板还包括阳性(Lh423)和阴性(FP)对照克隆。
为了产生dsRNA,通过PCR产生含有T7启动子序列的有义和反义DNA片段。简单来说,对于每个克隆,对应地基于M2和T7-M2序列,将1μl的细菌悬浮液分配到含有(西格玛(Sigma)目录号D4309)以及引物oGCC2738(SEQ ID NO 93:AAGCAGTGGTATCAACGCAG)和oGCC2739(SEQ ID NO 94:GCGTAATACGACTCACTATAGGAAGCAGTGGTATCAACGCAG)的多孔PCR板中。在PCR反应之后进行体外转录,其中对于每个克隆,将6μl的PCR产物添加到9μl的RiboMAXTM大规模RNA生产系统—T7(普洛麦格(Promega)目录号P1300)中并且在37℃下孵育过夜。在含有15%蔗糖和5μg/μl酵母tRNA(英杰目录号15401-029)的豆荚草盲蝽蔗糖饲料中将最终dsRNA溶液稀释2倍,并且用于筛选。相应于阳性Lh423对照克隆的dsRNA是SEQ IDNO 101并且相应于阴性FP对照克隆的dsRNA是SEQ ID NO 104(参见表4)。
1.2.使用dsRNA表达cDNA文库筛选新颖并且有效的豆荚草盲蝽靶基因
已经开发出一种针对有效豆荚草盲蝽靶的新的筛选测定。该测定设置如下:96孔板的每个孔容纳一只一日龄的豆荚草盲蝽若虫,使其在tRNA存在下暴露于含有蔗糖饲料的石蜡膜小袋中,该蔗糖饲料包括测试dsRNA或对照dsRNA。每个板含有来自90种不同克隆的dsRNA、3×Lh423(阳性对照)以及3×FP(荧光蛋白;阴性对照)。在三个板上重复每个克隆(测试dsRNA)。在暴露三天之后,记录若虫的存活数目并且用不存在dsRNA的新鲜饲养(复合)饲料替换该饲料。在第4天、第6天以及第8天评定死亡率。第一和第二轮确认测定使用相同的设置,并且对应地具有8只和20只昆虫,每孔一只若虫。
使用相应于Lh423靶的dsRNA作为阳性对照并且用荧光蛋白dsRNA作为阴性对照来验证该测定系统:对应地,在90%以上是真阳性并且在5%以下是假阳性。
已经测试了含有1800个单独的克隆的命名为Lh001到Lh020的二十个96孔板。在第一轮确认测定中鉴定并测试了205种候选物。设置临界值在显示≥50%的死亡率,鉴定出41个独立的克隆并且使其进展到第二轮确认。在该测定中,将这些克隆与阳性对照Lh423(RpL19)和Lh105.2(Sec23)以及阴性对照Pt(编码珊瑚荧光蛋白)相比较。相应于阳性(Lh423)对照克隆的dsRNA是SEQ ID NO 101,相应于阳性Lh105.2对照克隆的dsRNA是SEQID NO 102并且相应于阴性(Pt)对照克隆的dsRNA是SEQ ID NO 104(参见表4)。
针对第一次确认中显示≥50%的死亡率的所有测试dsRNA开始第二轮确认测定,每一测试dsRNA测试20只昆虫。用“Lhxxx数字”命名相应于确认的测试dsRNA的候选靶(参见表1)。使用≥50%的死亡率的相同截止值,在第一次筛选中确认了15个靶。
进行第二次筛选以鉴定更多的豆荚草盲蝽靶。第二轮确认测定的结果呈现在中。使用≥50%的死亡率的相同截止值,在第二次筛选中确认了若干靶(参见表1C)。
1.3.草盲蝽靶的鉴定
在确认昆虫测定的同时,给相应于阳性克隆的插入物测序并且使用针对果蝇和拟谷盗蛋白数据库的BlastX搜索来确认靶的一致性。表1提供了新颖鉴定的豆荚草盲蝽靶序列的生物信息分析和当前注释的概述。
在第一次筛选中鉴定出十五种新颖的豆荚草盲蝽靶并且在第二次筛选中鉴定出11种新颖的豆荚草盲蝽靶。所有靶都展现出针对豆荚草盲蝽若虫的高效能,表明包含在其中的编码双链RNA的cDNA对于害虫存活来说是必需的并且因此代表了为了害虫控制的感兴趣的靶基因。因此,对这些靶基因的DNA序列和推断的氨基酸序列进行测定并且对应地提供在表2和3中。
Lh594是果蝇肌钙蛋白I的豆荚草盲蝽直向同源物,涉及于肌肉收缩并且因此不存在于植物中,它代表了属于动物特异性生理途径但尚未针对GM-RNAi进行探索的一类新颖的靶。在果蝇中,肌钙蛋白I被描述为一种单倍不足基因,在杂合子状态中呈现一种突变体表型。这类基因对mRNA表达水平的降低会特别敏感并且因此可被视为理想的RNAi靶。
在此Lh594途径中,选择八个靶(参见表1B)。对于每个靶,基于不同昆虫(包括蜜蜂、拟谷盗属以及蚜虫)的序列比对,设计出多达4对简并PCR引物。这些引物被用来扩增来自豆荚草盲蝽靶的片段。对这些靶基因的DNA序列和推断的氨基酸序列进行测定并且对应地提供在表2和3中。
表1:根据第二次确认测定结果(第一次筛选)的按死亡率%分级的豆荚草盲蝽新颖靶
表1B:Lh594途径中的豆荚草盲蝽新颖靶
*不清楚:在根据e值分级的科中有多个命中
表1C:根据第二次确认测定结果(第二次筛选)的按死亡率%分级的豆荚草盲蝽新颖靶
1.4.通过RACE(cDNA末端快速扩增)进行的全长cDNA克隆
为了克隆全长cDNA,从来自最有效靶的内部片段的已知克隆开始,使用5'/3'RACE试剂盒(罗氏(Roche),目录号1 734 792;基于萨姆布鲁克,J.(Sambrook,J.)和拉塞尔,D.M(Russell,D.M))。然后进行在使用手册(Instruction Manual)中所描述的标准方案。简单地说,对于5'RACE,根据已知序列设计靶序列特异性反义引物并使用草盲蝽RNA作为模板,将其用于第一链cDNA的合成。向第一链cDNA中添加尾部并将其用作一种锚用于第二链合成和转录物未知末端部分的扩增。对于3'RACE,使用寡聚dT锚定引物进行第一链cDNA合成。对于5'和3'RACE,在第二次PCR反应中使用靶序列特异性的套式引物。在琼脂糖凝胶上分析PCR片段,纯化,克隆并测序以供确认。
在VectorNTi(一种用于DNA序列分析的完全整合的序列分析软件包(英杰))中组装相应于这些靶的全长cDNA序列。
实例2.用于基因沉默的双链RNA的体外产生
2.2.相应于豆荚草盲蝽靶基因的部分序列的dsRNA的产生
合成毫克量的双链RNA。首先,通过PCR产生两条单独的5'T7RNA聚合酶启动子模板(有义模板和反义模板)。设计并进行PCR以产生有义和反义模板多核苷酸,这些多核苷酸各自具有在相对于有待转录的靶序列的不同方向上的T7启动子。
对于每一种靶基因,使用靶特异性T7正向引物和靶特异性反向引物产生有义模板。使用靶特异性正向引物和靶特异性T7反向引物产生反义模板。用于通过PCR扩增每一种靶基因的有义和反义模板的对应引物的序列提供在表4中。通过琼脂糖凝胶电泳来分析PCR产物并且将其纯化。将所得T7有义与反义模板混合并且通过添加T7RNA聚合酶进行转录。使由这些模板转录产生的单链RNA退火,用DNA酶和RNA酶处理,并且通过沉淀加以纯化。由每一种靶基因产生的所得dsRNA的有义链提供在表4中。
2.2.新颖豆荚草盲蝽靶的存活分析测定
为了能够根据效能分级,合成了相应于新颖靶的体外dsRNA并且在10天存活分析生物测定中,将其施用于豆荚草盲蝽。简单来说,将一日龄的豆荚草盲蝽若虫放在具有蔗糖密封的96孔板中,这些密封含有0.5μg/μl的靶dsRNA,补充有5μg/μl的酵母tRNA。在标准草盲蝽饲养条件下将这些板孵育3天。在第3天、第6天以及第8天,用仅含有草盲蝽饲料的密封更新饲料密封。使用Lh423(RpL19)作为阳性对照并且使用GFP dsRNA和蔗糖饲料作为阴性对照。
来自这些存活分析的结果确认了来自第一次和第二次确认测定的数据。Lh594被确立为高度有效的靶,其中活性和杀灭速度比强对照Lh423更强。
到目前为止,针对新颖靶的草盲蝽筛选鉴定出活性比阳性对照Lh423更高或在其范围内的新靶,这些新靶包括Lh429、Lh594、Lh609、Lh610、Lh611、Lh617以及Lh618。由这些靶所诱导的死亡率示于中。
为了允许根据这些靶的活性将它们更精确地分级,进行了剂量反应浓度分析。在体外测定中测试新颖靶,其中浓度在从0.4到0.025μg/μl的范围内。对于每种条件,在96孔板设置中,在补充有dsRNA和tRNA载体的蔗糖饲料中对24只一日龄的若虫进行测试。结果呈现为在10日实验中的存活率%并且汇总在表5中。
基于浓度曲线分析,通过比较基准对照Lh423和Lh105将这些靶分级(表5)。
表5:根据DRC并且与基准靶Lh423和Lh105相比较进行分级的草盲蝽新颖靶
进一步确认Lh594的效能。在其他靶以及基准阳性对照Lh105和Lh423之前至少一天,清楚地观察到这种靶效应。因为Lh594是高度有效的,在标准DRC实验中未达到LD50,其中浓度在从0.4到0.025μg/μl dsRNA的范围内,因此重复Lh594实验,包括在从0.05到0.001μg/μl dsRNA范围内的更低的浓度。总之,在低到0.0025μg/μl的浓度下观察到Lh594活性并且用0.025μg的dsRNA在第6天获得了约90%的杀灭(相应于约10%的存活率)。
为了进一步探索在豆荚草盲蝽中的RNAi反应中Lh594的效能和tRNA载体的作用,设置了在不存在载体tRNA的情况下的另外的体外摄食测定。使用标准方法在体外产生Lh594、Lh423(基准对照)以及GFP(阴性对照)dsRNA。纯化这些dsRNA并且在不存在tRNA的情况下以5μg/μl进行测试。
在不存在tRNA的情况下,靶Lh594和Lh423在草盲蝽若虫中诱导了高致死率。后来已经重现了来自这个实验的结果。靶dsRNA能够在不存在tRNA的情况下在草盲蝽若虫中诱导经由摄食的RNAi效应(RNAi-by-feeding effect)。
为了研究在不存在载体tRNA的情况下在更低浓度的dsRNA的活性,使用递减量的dsRNA设置了另外的实验。
在第二次筛选中鉴定的草盲蝽靶遵循了相似的方法。为了允许根据这些靶的活性将这些靶进行分级,进行了剂量反应浓度分析。在体外测定中测试新颖靶,其中浓度在从0.5到0.05μg/μl的范围内。对于每种条件,在96孔板设置中,在补充有dsRNA和tRNA载体的蔗糖饲料中对24只一日龄的若虫进行测试。结果呈现为在9日实验中的存活率%。Lh594和Lh423已经被包括在该测定中作为参考靶。结果汇总在表6中。基于浓度曲线分析,通过与基准对照Lh423比较将这些靶分级。
表6:来自第二次筛选的草盲蝽新颖靶-根据DRC并且与基准靶Lh423和Lh594比较进行分级
实例3.肌钙蛋白途径筛选
为了能够测试肌钙蛋白途径靶,合成了相应于Lh619、Lh620、Lh621、Lh622、Lh622、Lh623、Lh624、Lh625以及Lh626的体外产生的dsRNA并且在10天存活分析生物测定中将其施用给豆荚草盲蝽。简单来说,将一日龄的豆荚草盲蝽若虫放在具有蔗糖密封的96孔板中,这些密封含有0.5μg/μl的靶dsRNA,补充有5μg/μl的酵母tRNA。在标准草盲蝽饲养条件下将这些板孵育3天。在第3天、第6天以及第8天,用仅含有草盲蝽饲料的密封更新饲料密封。使用Lh594(肌钙蛋白I)作为阳性对照并且使用GFP dsRNA和蔗糖饲料作为阴性对照。然后在体外测定中的剂量反应曲线分析中纳入四个靶,其中浓度在从0.4到0.025μg/μl的范围内。对于每种条件,在96孔板设置中,在补充有dsRNA和tRNA载体的蔗糖饲料中对24只一日龄的若虫进行测试。结果呈现为在10日实验中的存活率%。
实例4.马铃薯叶甲中的靶基因的鉴定
4.1.马铃薯叶甲归一化的cDNA文库和在多孔板中制备dsRNA用于筛选测定
从不同阶段的马铃薯叶甲幼虫中分离核酸。使用SMARTerTMPCR cDNA合成试剂盒,遵循制造商的说明书(Clontech目录号634925)来制备cDNA文库。使用Trimmer试剂盒(Evrogen目录号NK001)使cDNA文库归一化到载体(英杰)中。将归一化的克隆引入M2适体(Trimmer试剂盒,Evrogen,SEQ ID NO 92:AAGCAGTGGTATCAACGCAG)中,在这些克隆的每一端处相对地定向。将重组载体构建体转化至大肠杆菌菌株TOP10(英杰)的细胞中。随后将转化的细胞稀释并且铺板,从而获得单一群落或克隆。检查这些克隆以确保该库的克隆冗余不超过5%。将单一克隆接种到96孔板中的液体LB(Luria肉汤)培养基中,并且使其在37℃下生长过夜。这些板还包括阳性(Ld513)和阴性(FP)对照克隆。
为了产生dsRNA,通过PCR产生含有T7启动子序列的有义和反义DNA片段。简单来说,对于每个克隆,对应地基于M2和T7-M2序列,将1μl的细菌悬浮液分配到含有(西格玛目录号D4309)和引物oGCC2738(SEQ ID NO 93:AAGCAGTGGTATCAACGCAG)和oGCC2739(SEQ ID NO 94:GCGTAATACGACTCACTATAGGAAGCAGTGGTATCAACGCAG)的多孔PCR板中。在PCR反应之后进行体外转录,其中对于每个克隆,使用在含有由RiboMAXTM大规模RNA生产系统—T7试剂盒(普洛麦格目录号P1300)所提供的转录试剂的20μl反应体积中的6μl的PCR产物并且在37℃下孵育过夜。将最终dsRNA溶液稀释在无菌milli-Q水中并且用于筛选。相应于阳性Ld513对照克隆的dsRNA是SEQ ID NO 400(参见表9)并且相应于阴性FP对照克隆的dsRNA是SEQ ID NO 104(参见表4)。
4.2.使用dsRNA表达cDNA文库筛选新颖并且有效的马铃薯叶甲靶基因
48孔板的每个孔含有0.5mL的人工饲料,该饲料用25μl(或1μg)的测试或对照dsRNA的局部覆盖进行预处理。在每个孔中放一只L2幼虫并且每个克隆测试3只幼虫。在第4天、第7天以及第10天评估CPB存活数目。
在第二次生物测定中,CPB幼虫是以用局部施用的测试dsRNA处理的饲料为食,该测试dsRNA是由来源于归一化的cDNA文库的克隆产生的。在48孔多孔板的一个孔中放一只幼虫,该多孔板含有用25μL的40ng/μL dsRNA溶液的局部覆盖进行预处理的0.5mL的饲料。每次处理(克隆)测试总共二十四只幼虫。在第4天、第5天、第6天、第7天、第8天以及第11天评估存活的昆虫的数目。相对于第0天(测定开始)来计算幼虫死亡率百分比。
4.3.马铃薯叶甲甲虫靶的鉴定
已经在马铃薯叶甲中鉴定出由5.2.的筛选得到的新靶序列和相应于肌钙蛋白途径靶的靶序列,这些序列与草盲蝽Lh594、Lh619以及Lh620序列是直向同源的。提供Ld594的相关cDNA片段的引物列在表17中。确定这些靶基因的cDNA序列和推断的氨基酸序列并且分别提供在表7和9中。
4.4.相应于马铃薯叶甲靶基因的部分序列的dsRNA的产生
使用如表9中所提供的引物合成dsRNA。由这些靶基因产生的所得dsRNA的有义链提供在表9中。
4.5.新颖的马铃薯叶甲靶的存活分析测定
早期幼虫测定
产生了Ld594、Ld619以及Ld620这3个靶的合成dsRNA,并且在摄食测定中对CPB幼虫进行测试。在48孔板中,在补充有每孔1μg dsRNA的人工饲料(基于格尔曼(Gelman)等人,《昆虫科学杂志》(J Ins Sc),1:7,1-10:用于饲养科罗拉多马铃薯甲虫的人工饲料(Artificial diets for rearing the Colorado Potato Beetle))上进行10日测定,其中每种条件12只幼虫。
可以观察到对幼虫发育的明显作用。设置第二次测定以研究这些dsRNA在化蛹和变态过程期间的作用(参见下文的化蛹测定)。
化蛹测定
设置CPB化蛹测定以研究Ld594、Ld619以及Ld620在化蛹和变态期间的RNAi敲低(knock-down)作用。使四龄幼虫摄食1μg的分配在马铃薯叶盘上的体外合成的dsRNA,并且然后将其转移到含有未处理的新鲜马铃薯叶的盒子中。四天后,将存活的昆虫放在蛭石上允许其化蛹。Lh594处理的昆虫较慢、更小,而且大部分不能够经历化蛹。在实验结束时对蛹的孵化进行评估。对于未处理的对照,24只幼虫化蛹并且全部都孵化成了健康的成虫。对于Ld620,观察到进展至化蛹的幼虫的数目减少。对于所测试的三个靶,没有幼虫进展到健康的蛹并且没有出现成虫。从蛭石回收的死昆虫显示出不同程度的畸形。
在CPB幼虫测定中,Ld594、Ld619以及Ld620最初以不致死性靶形式出现,虽然在dsRNA处理的昆虫中清楚地观察到活力降低。另一方面,在化蛹测定中,所有3个靶都诱导强烈的作用并且抑制进入到化蛹和/或变态阶段。
成虫测定
为了评估Ld594、Ld619以及Ld620在CPB成虫中的活性,设置一项叶盘测定。用dsRNA或对照涂覆马铃薯叶盘(直径1.7cm)并且将其放在具有一只成年甲虫的3.5cm皮氏培养皿中。第二天,向这些昆虫提供新鲜处理的叶盘。在第三天,将成虫转移到含有足够的新鲜、未处理的马铃薯叶的盒子中以维持未处理的对照的存活。对于每次处理,测试6只成虫并且从第6天到第13天以有规律的间隔时间对存活者和垂死昆虫的数目进行计数。如果在将昆虫仰卧放置之后它们不能够恢复正常,那么将其视为是垂死的。
尽管在这个特定测定中的阴性对照中有相对较高的背景水平,但对于已经暴露于Ld594或Ld619dsRNA的昆虫观察到了明显的作用。
实例5.褐飞虱中的靶基因的鉴定
5.1.褐飞虱靶的鉴定
已经在褐色飞虱(褐飞虱)中鉴定出相应于肌钙蛋白途径靶并且命名为Nl594(肌钙蛋白I)、Nl619(肌钙蛋白T)以及Nl626(肌钙蛋白C)的新靶序列。使用BPH cDNA作为模板,通过简并引物PCR来克隆草盲蝽基因的直向同源序列,这些序列命名为Nl594(肌钙蛋白I)、Nl619(肌钙蛋白T)以及Nl625/626(肌钙蛋白C)。另外,使用RACE(参见以上方法),鉴定出Nl594的全长cDNA。遵循制造商的说明书并且在用于简并引物PCR反应的标准条件下,使用AmpliTaq Gold PCR系统(应用生物系统(Applied Biosystems)),这些标准条件典型地如下:在95℃下10分钟的1个循环,接着40个循环,其中在95℃下30秒,在50℃下1分钟并且在72℃下1分钟,接着在72℃下10分钟。为了增加成功率,基于在其他物种中的直向同源序列的比对,设计出多达10种不同的简并引物(正向和反向),并且以不同的组合加以使用。通过凝胶提取试剂盒(凯杰(Qiagen)目录号28706)从凝胶纯化出所获得的PCR片段并且克隆到TOPO TA载体(英杰)中。对这些克隆进行测序并且将共有序列用于针对不同的可用昆虫序列数据库进行的Blast搜索中,以确定插入物的关联性。导致成功扩增的简并引物列在表18中。
确定这些靶基因和另一个靶基因(Nl537)的DNA序列和推断的氨基酸序列并且分别提供在表10和11中。
5.2.相应于褐飞虱靶基因的部分序列的dsRNA的产生
使用如在表12中所提供的引物合成dsRNA。从这些靶基因中的每一种产生的所得dsRNA的有义链提供在表12中。
5.3.新颖的褐飞虱靶的存活分析测定
合成dsRNA并且在预先优化的BPH经由摄食的RNAi的测定中,在两性离子型洗涤剂CHAPSO存在下,以0.1%的最终浓度进行测试。以0.5μg/μl的最终浓度测试dsRNA。使用在BPH测定中的一种有效靶Nl537作为该测定中的基准靶。在9天的过程中对昆虫存活率进行评估。
生物测定的结果显示,在BPH中Nl594、Nl619以及Nl626也是BPH中的有效RNAi靶。
实例6.豌豆蚜中的靶基因的鉴定
6.1.豌豆蚜靶的鉴定
已经在蚜虫中鉴定出新靶序列并且遵循相同的命名法“Apxxx”(其中“Ap”相应于豌豆蚜并且“xxx”相应于该靶的ID),将其命名为Ap423、Ap537、Ap560以及Ap594。基于AphidBase(参考:http://www.aphidbase.com/)中的公共结构域基因预测来设计引物(表13)。
确定这些靶基因的DNA序列和推断的氨基酸序列并且分别提供在表14和15中。
6.2.相应于蚜虫靶基因的部分序列的dsRNA的产生
使用在如表16中所提供的引物合成dsRNA。由这些靶基因中的每一种产生的所得dsRNA的有义链提供在表16中。
6.3.新颖的蚜虫靶的存活分析测定
在具有Ap594、Ap423、Ap560、Ap537这4个靶的豌豆蚜(豌豆蚜虫)中测试经由摄食的RNAi。使用基于公共结构域序列信息(http://www.aphidbase.com)设计的引物以及从蚜虫制备的cDNA,通过PCR来扩增序列。制备合成性dsRNA并且在蔗糖饲料中以0.5μg/μl的最终浓度,在5μg/μl的酵母tRNA存在下进行测试。将十只新生的豌豆蚜虫若虫放在一个小的皮氏培养皿(32mm)中。将五十微升的饲料(具有tRNA和dsRNA)用移液管移取到第一层石蜡膜的顶部上。第二层石蜡膜覆盖了饲料并且产生一个摄食小袋,蚜虫可以在其中摄食。对于每个靶,设置了10只新生若虫的五次重复。使用GFP dsRNA作为阴性对照。在测定的第4天和第7天更新饲料并且评估存活率。
表2
表3
表4
表7
表8
靶ID 如表9中所呈现的cDNA克隆的相应氨基酸序列
Ld594 SEQ ID NO 349
Ld619 SEQ ID NO 350
Ld620 SEQ ID NO 351
Ld583 SEQ ID NO 390
Ld584 SEQ ID NO 391
Ld586 SEQ ID NO 392
Ld588 SEQ ID NO 393
Ld513 SEQ ID NO 395
表9
表10
靶ID cDNA序列(有义链)5'→3'
Nl594 SEQ ID NO 180
Nl619 SEQ ID NO 182
Nl626 SEQ ID NO 184
Nl537 SEQ ID NO 186
表11
靶ID 如表12中所呈现的cDNA克隆的相应氨基酸序列
Nl594 SEQ ID NO 352
Nl619 SEQ ID NO 353
Nl626 SEQ ID NO 354
Nl537 SEQ ID NO 355
表12
表13
正向引物序列 反向引物序列
Ap594 SEQ ID NO 369 SEQ ID NO 370
Ap423 SEQ ID NO 371 SEQ ID NO 372
Ap537 SEQ ID NO 373 SEQ ID NO 374
Ap560 SEQ ID NO 375 SEQ ID NO 376
表14
靶ID cDNA序列(有义链)5'→3'
Ap594 SEQ ID NO 188
Ap423 SEQ ID NO 200
Ap537 SEQ ID NO 202
Ap560 SEQ ID NO 204
表15
靶ID 如表16中所呈现的cDNA克隆的相应氨基酸序列
Ap594 SEQ ID NO 356
Ap423 SEQ ID NO 357
Ap537 SEQ ID NO 358
Ap560 SEQ ID NO 359
表16
表17
正向引物 反向引物
Ld594 SEQ ID NO 377 SEQ ID NO 378
表18
正向引物 反向引物
Nl594 seq id no 379 seq id no 380
Nl619 seq id no 381 seq id no 382
Nl626 seq id no 383 seq id no 384
表19
表20
*不清楚:在科中有多个命中
表21
本领域技术人员应当理解的是,在不偏离如一般地描述的这个测定的精神和范围的情况下,可以对上文提到的测定作出多种变化和/或修改。本领域技术人员将认识到或仅使用常规实验就能够确定这些具体实例的多个等效方案,并且这些等效方案预期被本发明涵盖。因此,本发明的实例在所有方面都被认为是说明性的而不是限制性的。
本发明的一些实施方案如下:
1.一种干扰核糖核酸(RNA),该干扰核糖核酸在被一种昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的一种靶基因的表达的作用,
其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且
其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ IDNO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389所表示的序列中的任一个至少75%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
2.如实施方案1所述的干扰RNA,其中该沉默元件包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列互补或至少部分地互补的一个至少21个连续核苷酸的序列或由其组成。
3.如实施方案1或实施方案2所述的干扰RNA,其中该RNA包含至少两个沉默元件,其中每一个沉默元件包含与一种靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成。
4.如实施方案3所述的干扰RNA,其中这些沉默元件各自包含与一个不同的靶核苷酸序列互补的一个不同的核苷酸序列或由其组成。
5.如实施方案4所述的干扰RNA,其中这些不同的靶核苷酸序列来源于单一靶基因或来源于不同的靶基因。
6.如实施方案5所述的干扰RNA,其中这些不同的靶基因来源于相同的昆虫害虫物种或不同的昆虫害虫物种。
7.如实施方案1到6中任一项所述的干扰RNA,其中该昆虫害虫物种是一种植物害虫。
8.如实施方案7所述的干扰RNA,其中该植物害虫是选自属于以下目的昆虫物种的一种昆虫害虫物种:鞘翅目、半翅目、鳞翅目、双翅目、网翅目、直翅目以及蚤目。
9.如实施方案8所述的干扰RNA,其中该昆虫植物害虫选自下组,该组由以下各项组成:马铃薯叶甲属(例如马铃薯叶甲(科罗拉多马铃薯甲虫)、伪马铃薯叶甲(伪马铃薯甲虫)或胡颓子叶茄叶甲(德克萨斯伪马铃薯甲虫));褐飞虱属(例如褐飞虱(褐色飞虱));草盲蝽属(例如牧草盲蝽(无泽盲蝽)或豆荚草盲蝽(西方无泽盲蝽));瘤蚜属(例如桃蚜(绿桃蚜));根萤叶甲属(例如西方玉米根萤叶甲(西方玉米根虫)、巴氏根萤叶甲(北方玉米根虫)、黄瓜十一星叶甲食根亚种(南方玉米根虫)、墨西哥玉米根萤叶甲(墨西哥玉米根虫)。
10.如实施方案1到10中任一项所述的干扰RNA,其中该靶基因编码选自下组的一种昆虫蛋白质,该组包括(i)来自肌钙蛋白/肌丝复合物的一种蛋白质,该复合物选自下组,该组包括肌钙蛋白I(例如CG7178 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、支持蛋白(例如CG7107Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、原肌球蛋白1蛋白(例如CG4898 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、原肌球蛋白2蛋白(例如CG4843 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、肌球蛋白重链(例如CG17927 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、肌球蛋白轻链细胞质蛋白(例如CG3201 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、鱼翅瓜蛋白(例如CG3595 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、拉链蛋白(例如CG15792 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、肌钙蛋白C(例如CG2981、CG7930、CG9073、CG6514、CG12408、CG9073、CG7930、CG2981、CG12408或CG6514 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物);(ii)选自下组的一种昆虫核糖体蛋白,该组包括核糖体蛋白S3A(例如CG2168Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白LP1(例如CG4087 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S3(例如CG6779 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L10Ab(例如CG7283 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S18(例如CG8900 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L4(例如CG5502 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S27(例如CG10423 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L6(例如CG11522 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S13(例如CG13389 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)以及核糖体蛋白L12(例如CG3195 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L26(例如CG6846Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L21(例如CG12775 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S12(例如CG11271 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S28b(例如CG2998 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L13(例如CG4651Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L10(例如CG17521 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L5(例如CG17489 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白S15Aa(例如CG2033 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L19(例如CG2746 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)、核糖体蛋白L27(例如CG4759 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物);(iii)线粒体细胞色素c氧化酶亚单位II蛋白(例如CG34069 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物);(iv)ATP合酶-γ链(例如CG7610 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物);(v)泛素-5E(例如CG32744 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物);(vi)蛋白酶体β型亚单位(例如CG17331 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物);(vii)作为CG13704 Dm蛋白的一种昆虫直向同源物的蛋白质;以及(viii)Rpn12蛋白(例如CG4157Dm蛋白的一种昆虫直向同源物)。
11.如实施方案1到10中任一项所述的干扰RNA,其中如与暴露于一种靶向非必需基因的干扰核糖核酸或一种不下调该害虫物种内的任何基因的干扰核糖核酸的害虫物种相比,下调该靶基因的表达引起该害虫的生长、发育、生殖或存活下降。
12.一种多核苷酸,包含编码如实施方案1到11中任一项所述的干扰RNA的一种核苷酸序列。
13.如实施方案12所述的多核苷酸,该多核苷酸被包含在一个DNA构建体中。
14.如实施方案13所述的DNA构建体,该DNA构建体是一种表达构建体,其中编码该干扰RNA的该多核苷酸序列被可操作地连接到至少一个能够驱动该多核苷酸序列的表达的调控序列。
15.一种宿主细胞,包含如实施方案1到11中任一项所述的干扰RNA、如实施方案12所述的多核苷酸或如实施方案13或14所述的DNA构建体。
16.如实施方案15所述的宿主细胞,其中该宿主细胞是一种原核细胞或一种真核细胞。
17.如实施方案16所述的宿主细胞,其中该宿主细胞是一种细菌细胞。
18.一种用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰的组合物,该组合物包含至少一种干扰核糖核酸(RNA)和至少一种合适的载体、赋形剂或稀释剂,其中该干扰RNA在被该害虫摄入后起到下调所述害虫内的一种靶基因的表达的作用,
其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,并且
其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ IDNO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389所表示的序列中的任一个至少75%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
19.如实施方案18所述的组合物,其中该干扰RNA是如实施方案1到11中任一项中所定义。
20.如实施方案18或实施方案19所述的组合物,其中该干扰RNA是由如实施方案13或实施方案14所述的DNA构建体所编码的。
21.如实施方案18到20中任一项所述的组合物,该组合物包含一种表达或能够表达该干扰RNA的宿主细胞。
22.如实施方案21所述的组合物,其中该宿主细胞是一种细菌细胞。
23.如实施方案18到22中任一项所述的组合物,其中该组合物是呈一种适合于被一种昆虫摄取的形式。
24.如实施方案18到23中任一项所述的组合物,其中该组合物是呈固体、液体或凝胶形式。
25.如实施方案18到24中任一项所述的组合物,其中该组合物被配制为一种杀昆虫喷雾剂。
26.如实施方案25所述的组合物,其中该喷雾剂是一种加压/雾化喷雾剂或一种泵式喷雾剂。
27.如实施方案18到26中任一项所述的组合物,其中该组合物另外包含至少一种杀虫剂,该杀虫剂选自下组,该组由以下各项组成:一种化学杀昆虫剂、一种马铃薯块茎特异蛋白、一种苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白、一种致病杆菌杀虫蛋白、一种光杆状菌杀虫蛋白、一种侧孢芽孢杆菌杀虫蛋白以及一种球形芽孢杆菌杀虫蛋白。
28.如实施方案27所述的组合物,其中所述苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白选自下组,该组由以下各项组成:Cry1、Cry3、TIC851、CryET170、Cry22、TIC901、TIC201、TIC407、TIC417、二元杀虫蛋白CryET80和CryET76、二元杀虫蛋白TIC100和TIC101、杀虫蛋白ET29或ET37与杀虫蛋白TIC810或TIC812的组合、以及二元杀虫蛋白PS149B1。
29.一种用于昆虫害虫的壳体或捕获器,该壳体或捕获器包含如在实施方案18到28中任一项所述的组合物。
30.一种根据实施方案18到28中任一项所述的组合物的用途,该组合物用于预防和/或控制害虫侵扰。
31.一种根据实施方案18到28中任一项所述的组合物的用途,该组合物被用作针对一种植物或针对一种植物的生殖材料的繁殖的一种杀虫剂。
32.一种用于预防和/或控制害虫侵扰的组合,该组合包含如实施方案18到28中任一项所述的组合物和至少一种其他活性剂。
33.如实施方案32所述的组合,其中该组合是用于预防和/或控制一种植物的害虫侵扰并且该其他活性剂是一种农艺学试剂。
34.如实施方案33所述的组合,其中该农艺学试剂包括一种除草剂。
35.如实施方案34所述的组合,其中该除草剂选自一种草甘膦不敏感型式的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS);能够分解麦草畏的一种分解代谢酶,如麦草畏单加氧酶;或能够使草铵膦分解代谢的一种草丁膦乙酰转移酶基因。
36.如实施方案33所述的组合,其中该农艺学试剂包含一种第二杀虫剂。
37.如实施方案36所述的组合,其中该第二杀虫剂选自下组,该组由以下各项组成:一种化学杀昆虫剂、一种马铃薯块茎特异蛋白、一种苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白、一种致病杆菌杀虫蛋白、一种光杆状菌杀虫蛋白、一种侧孢芽孢杆菌杀虫蛋白以及一种球形芽孢杆菌杀虫蛋白。
38.如实施方案37所述的组合,其中所述苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白选自下组,该组由以下各项组成:Cry1、Cry3、TIC851、CryET170、Cry22、TIC901、TIC201、TIC407、TIC417、二元杀虫蛋白CryET80和CryET76、二元杀虫蛋白TIC100和TIC101、杀虫蛋白ET29或ET37与杀虫蛋白TIC810或TIC812的组合、以及二元杀虫蛋白PS149B1。
39.一种用于下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达以便预防和/或控制害虫侵扰的方法,该方法包括使所述害虫物种与一种有效量的至少一种干扰核糖核酸(RNA)接触,其中该干扰RNA在被该害虫摄入后起到下调所述害虫内一种靶基因的表达的作用,
其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是包含退火的互补链的一个双链RNA区域,其中一条链包含与该靶基因内的一个靶核苷酸序列至少部分地互补的一个核苷酸序列或由其组成,
并且其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ IDNO 1-26、121-205、386-389、394、400或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1-26、121-205、386-389、394、400或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389所表示的序列中的任一个至少75%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
40.如实施方案39所述的方法,其中该干扰RNA是如实施方案1到11中任一项中所定义。
41.如实施方案39或实施方案40所述的方法,其中如与一种靶向非必需害虫基因的干扰核糖核酸(RNA)或一种不在所述害虫中表达的靶基因接触的对照昆虫害虫相比,在一种昆虫害虫物种中的一种靶基因的表达的下调被用来获得至少20%的害虫控制或至少20%的害虫死亡率。
42.如实施方案39到41中任一项所述的方法,其中该方法被用来预防和/或控制一种植物的害虫侵扰。
43.如实施方案42所述的方法,其中该植物选自下组,该组包括棉花、马铃薯、水稻、卡诺拉、向日葵、高粱、珍珠粟、玉米、草莓、黄豆、苜蓿、番茄、茄子、胡椒以及烟草。
44.一种如实施方案1到11中任一项所述的干扰核糖核酸(RNA)、如实施方案13或实施方案14所述的DNA构建体、或如实施方案18到28中任一项所述的组合物的用途,用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰。
45.一种用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰的试剂盒,该试剂盒包含如实施方案1到11中任一项所述的干扰核糖核酸(RNA)、如实施方案13或实施方案14所述的DNA构建体、或如实施方案18到28中任一项所述的组合物。
46.一种分离的多核苷酸,选自下组,该组由以下各项组成:
(i)包含如由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个所表示的一种核苷酸序列的至少21个连续核苷酸的一种多核苷酸,或
(ii)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸序列的至少21个连续核苷酸的一种多核苷酸,由此当最佳地比对并且比较两种序列时,所述多核苷酸与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)包含如在SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个中所表示的一种核苷酸序列的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种多核苷酸,并且其中所述片段或所述互补序列具有一种核苷酸序列,当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)编码一种氨基酸序列的一种多核苷酸,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、23、24、71到74、25、26、75到78、143、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233、128、149、184、137、185、234到237、302到305、129、138、238到241、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273、168、170、169、274到277、172、173、278到281、200、201、314到317、186、202、187、203、306到309、318到321、386、387、388、389中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致,并且其中所述多核苷酸不长于10000个核苷酸。
47.根据实施方案1到10中任一项所述的干扰RNA,如实施方案12或实施方案13所述的多核苷酸,如实施方案14所述的DNA构建体,如实施方案15到17中任一项所述的宿主细胞,如实施方案18到28中任一项所述的组合物,如实施方案29所述的壳体或捕获器,如实施方案30、31或44中任一项所述的用途,如实施方案32到38中任一项所述的组合,如实施方案39到43中任一项所述的方法,如实施方案45所述的试剂盒或如实施方案46所述的分离的多核苷酸,其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233所表示的序列中的任一个至少75%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313、121、142、176、182、130、177、183、206到209、286到289、298到301、145、122、144、178、131、179、210到213、290到293、123、132、214到217、124、133、218到221、146、125、134、222到225、147、126、135、226到229、127、148、136、230到233中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
48.根据实施方案1到10中任一项所述的干扰RNA,如实施方案12或实施方案13所述的多核苷酸,如实施方案14所述的DNA构建体,如实施方案15到17中任一项所述的宿主细胞,如实施方案18到28中任一项所述的组合物,如实施方案29所述的壳体或捕获器,如实施方案30、31或44中任一项所述的用途,如实施方案32到38中任一项所述的组合,如实施方案39到43中任一项所述的方法,如实施方案45所述的试剂盒或如实施方案46所述的分离的多核苷酸,其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273所表示的序列中的任一个至少75%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 3、4、31到34、139、5、6、35到38、140、7、8、39到42、9、10、43到46、141、11、12、47到50、13、14、51到54、15、204、16、205、55到58、322到325、17、18、59到62、19、20、63到66、21、22、67到70、150、151、242到245、152、153、246到249、154、155、250到253、156、157、254到257、158、159、258到261、160、161、262到265、163、162、164、266到269、165、167、166、270到273中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
49.根据实施方案1到10中任一项所述的干扰RNA,如实施方案12或实施方案13所述的多核苷酸,如实施方案14所述的DNA构建体,如实施方案15到17中任一项所述的宿主细胞,如实施方案18到28中任一项所述的组合物,如实施方案29所述的壳体或捕获器,如实施方案30、31或44中任一项所述的用途,如实施方案32到38中任一项所述的组合,如实施方案39到43中任一项所述的方法,如实施方案45所述的试剂盒或如实施方案46所述的分离的多核苷酸,其中该靶基因
(i)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当最佳地比对并且比较两种序列时,该核苷酸序列与SEQID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(ii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,或具有一种核苷酸序列以使得当将包含所述片段的所述基因与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个最佳地比对并且比较时,所述核苷酸序列与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个至少75%一致,或
(iii)选自以下基因的组,这些基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一个至少21个连续核苷酸的片段的一种核苷酸序列,并且其中当将所述片段与SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个中的相应片段最佳地比对并且比较时,所述片段的所述核苷酸序列与SEQ ID NO1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的所述相应片段至少75%一致,或
(iv)为一种基因的一种昆虫害虫直向同源物,该基因具有包含SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313或其互补序列中的任一个的一种核苷酸序列,其中两种直向同源基因在序列方面的相似程度使得当最佳地比对并且比较这两种基因时,该直向同源物所具有的序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313所表示的序列中的任一个至少75%一致,或
(v)选自以下基因的组,这些基因具有编码一种氨基酸序列的一种核苷酸序列,当最佳地比对并且比较两种氨基酸序列时,该氨基酸序列与由SEQ ID NO 1、174、180、188、2、175、181、189、27到30、282到285、294到297、310到313中的任一个所编码的氨基酸序列至少85%一致。
序列表
<110> DEVGEN NV
<120> 在昆虫害虫中下调基因表达
<130> NLW/P122274WO00
<160> 403
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1096
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 1
gcgatctaag gcaggtggca gacagctcga tgacggcagt gggccaagca ataatggata 60
gtcattcata gcaccccagc tttactaagc tctgccgtag tgttggattg ggagcggata 120
caattcacca cagaacagct atgacatgat acgcagtccg aataccctca taaaggacta 180
gtctgcaggt ttaacgatcg cgtagcagtg tatcacgcag agtacatggg gagtgactgt 240
gtgaacctgc tgggtacatc atcacccctc tccttcttca gttatataag acacagtccc 300
taaaggacac cagcaaaaat ggcggatgat gaggcgaaga aggccaaaca ggccgaaatc 360
gagaggaagc gcgctgaagt gcgcaagagg atggaggaag cctctaaggc gaagaaagcc 420
aagaagggtt tcatgacccc ggaaaggaag aagaaactcc gactcctgct gaggaaaaaa 480
gccgctgagg aactgaagaa ggagcaggaa cgcaaagcag ctgagaggag gcgaacgatt 540
gaggagcgct gcgggcaaat tgccgacgtc gacaacgcca atgaagcaac cttgaagaaa 600
ctctgcacag actaccataa gcgaattgac gctctggaga ggagtaaaat tgacatcgaa 660
ttcgaagtgg agagacgtga ccttgagatc gccgacctca acagccaggt caacgacctc 720
cgtggtaaat tcgtcaaacc taccttgaaa aaggtttcca agtacgaaaa caaattcgcc 780
aagctccaga agaaggctgc cgagttcaac ttcagaaacc aactcaaggt cgtcaaaaag 840
aaagaattca ccctggaaga agaagacaaa gagccgaaga aatcggaaaa ggcggagtgg 900
cagaagaaat gaagggaaaa caagcacacc atctcacaaa ataaaataaa cgaaaatctt 960
tcacacgttt accaatttta taacacggtc ctcacaaatt atgttcctta aataatttgt 1020
ataatccatc ctcgcactac aatcaatatt aatatttaaa tacaaaacca aaaaaaaaaa 1080
aaaaaaaaaa aaaaaa 1096
<210> 2
<211> 491
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 2
caaacaggcc gaaatcgaga ggaagcgcgc tgaagtgcgc aagaggatgg aggaagcctc 60
taaggcgaag aaagccaaga agggtttcat gaccccggaa aggaagaaga aactccgact 120
cctgctgagg aaaaaagccg ctgaggaact gaagaaggag caggaacgca aagcagctga 180
gaggaggcga acgattgagg agcgctgcgg gcaaattgcc gacgtcgaca acgccaatga 240
agcaaccttg aagaaactct gcacagacta ccataagcga attgacgctc tggagaggag 300
taaaattgac atcgaattcg aagtggagag acgtgacctt gagatcgccg acctcaacag 360
ccaggtcaac gacctccgtg gtaaattcgt caaacctacc ttgaaaaagg tttccaagta 420
cgaaaacaaa ttcgccaagc tccagaagaa ggctgccgag ttcaacttca gaaaccaact 480
caaggtcgtc a 491
<210> 3
<211> 431
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 3
atgggcatca tgtcgaaagc tgaactcgct tgtgtttact ccgctctcat cctcatcgac 60
gacgatgtcg ccgtgacggg tgagaagatt caaaccatcc tgaaggctgc cagtgtcgac 120
atcgagccgt actggcccgg tctgttcgcc aaggccctcg agggtatcaa ccccaaagac 180
ctcatctcct ccattggaag cggagttggt gctggagcgc cggctgtcgg tggagctgca 240
cctgccgccg ctgctgcccc tgccgctgag gctaagaagg aagagaagaa gaaggtcgaa 300
agcgatccag aatccgatga tgacatgggc ttcggtcttt tcgactaaga gcattccaca 360
gcgggttctc atttgttttt aagattttct tttaaaaaat aaaacttcca aaaaaaaaaa 420
aaaaaaaaaa g 431
<210> 4
<211> 332
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 4
gggcatcatg tcgaaagctg aactcgcttg tgtttactcc gctctcatcc tcatcgacga 60
cgatgtcgcc gtgacgggtg agaagattca aaccatcctg aaggctgcca gtgtcgacat 120
cgagccgtac tggcccggtc tgttcgccaa ggccctcgag ggtatcaacc ccaaagacct 180
catctcctcc attggaagcg gagttggtgc tggagcgccg gctgtcggtg gagctgcacc 240
tgccgccgct gctgcccctg ccgctgaggc taagaaggaa gagaagaaga aggtcgaaag 300
cgatccagaa tccgatgatg acatgggctt cg 332
<210> 5
<211> 468
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 5
atgggggcag gtcttctcca taaccataga ttatcttcgt gtatcgtgtc gggctttcgg 60
ctgaggtcct aattagtaaa taatgattcc gcctacgtcg cggcctcagg tcactgtcta 120
cagtgacaaa aatgaggcca ccgggactct cctcaacctc ccggctgtct tcaacgcccc 180
cattcgcccc gatgttgtga acttcgttca ccaaaatgtc gctaaaaacc acaggcagcc 240
ctactgtgtc tccgctcaag ctggtcatca gacttcagct gagtcctggg gtaccggtcg 300
tgctgtggct cgtatccccc gtgttcgcgg aggtggtact caccgctcag gtcagggtgc 360
ttttggcaac atgtgtcgcg gcggtaggat gttcgctccc actcgcccat ggcgtcgttg 420
gcaccgcaaa atcaacgtta accaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 468
<210> 6
<211> 429
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 6
gggcaggtct tctccataac catagattat cttcgtgtat cgtgtcgggc tttcggctga 60
ggtcctaatt agtaaataat gattccgcct acgtcgcggc ctcaggtcac tgtctacagt 120
gacaaaaatg aggccaccgg gactctcctc aacctcccgg ctgtcttcaa cgcccccatt 180
cgccccgatg ttgtgaactt cgttcaccaa aatgtcgcta aaaaccacag gcagccctac 240
tgtgtctccg ctcaagctgg tcatcagact tcagctgagt cctggggtac cggtcgtgct 300
gtggctcgta tcccccgtgt tcgcggaggt ggtactcacc gctcaggtca gggtgctttt 360
ggcaacatgt gtcgcggcgg taggatgttc gctcccactc gcccatggcg tcgttggcac 420
cgcaaaatc 429
<210> 7
<211> 523
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 7
atgggatctc tatgctgaaa aggtcgccac cagaggtttg tgtgctattg cacaagctga 60
atccctccgt tacaaactca ttggcggtct tgctgtccga ggggcttgct atggtgtcct 120
tcgcttcatc atggaaaatg gtgccaaggg ttgcgaagtc gtagtatctg gaaaactgcg 180
tggtcagaga gccaagtcaa tgaagttcgt ggatggtttg atgatccaca gtggggatcc 240
ctgtaacgaa tatgttgata ctgctacccg acatgtgctc cttagacaag gtgtcctggg 300
aataaaggtg aagattatgt tgccgtggga cgttaccggc aaaaatgggc cgaagaaccc 360
tcttcccgac cacgtcagcg ttctcttacc taaggaggag ctaccaaatt tggccgttag 420
tgtgcctgga tccgacatca aaccaaagcc tgaagtacca gcacccgctt tgtgaatata 480
aacttctttt ttgtaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 523
<210> 8
<211> 431
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 8
attgcacaag ctgaatccct ccgttacaaa ctcattggcg gtcttgctgt ccgaggggct 60
tgctatggtg tccttcgctt catcatggaa aatggtgcca agggttgcga agtcgtagta 120
tctggaaaac tgcgtggtca gagagccaag tcaatgaagt tcgtggatgg tttgatgatc 180
cacagtgggg atccctgtaa cgaatatgtt gatactgcta cccgacatgt gctccttaga 240
caaggtgtcc tgggaataaa ggtgaagatt atgttgccgt gggacgttac cggcaaaaat 300
gggccgaaga accctcttcc cgaccacgtc agcgttctct tacctaagga ggagctacca 360
aatttggccg ttagtgtgcc tggatccgac atcaaaccaa agcctgaagt accagcaccc 420
gctttgtgaa t 431
<210> 9
<211> 823
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 9
catggggaca ctctcttttt cttcatcgcg tggctcgctg ccgtgtggtt agggagtttc 60
ctactttaat tttttagtgt aattcatctt caaaatgacg tcgaaggttt ctcgtgagac 120
cctctacgag tgcatcaatg gagtcatcca gtcctcccag gagaagaaga ggaacttcgt 180
ggagactgtg gagatccaga tcggtctgaa gaactacgat ccccagaagg acaagcgttt 240
ctcgggaact gtcaagctga agcacattcc aaggcctaaa atgcaggttt gcatcctcgg 300
agatcaacag cattgcgacg aggccaaagc caacaacgtg ccctacatgg acgtcgaggc 360
tctgaagaag ctcaacaaaa acaagaagct cgtcaagaaa ttggccaaga aatacgacgc 420
tttcctcgcc tcagaagccc tcatcaagca gatccccagg ctcctcggac ccggtctcaa 480
caaggcgggc aagttccctg gtctcctctc tcaccaggag tccatgatga tgaagatcga 540
cgaagtcaag gccaccatca agttccaaat gaagaaggtg ttgtgcctct cagtggctgt 600
cggtcacgtc ggcatgactg ctgatgagct cgtccagaac gtgcacttgt cggtcaactt 660
cctcgtttcg ctcctcaaga agcactggca gaacgtcagg tctctccacg tcaaatccac 720
gatgggacct ccccagaggc tttactaaac atcttgtttt ttacttttga cgaataaaat 780
tcgttttatt ctcgaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 823
<210> 10
<211> 607
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 10
ccctctacga gtgcatcaat ggagtcatcc agtcctccca ggagaagaag aggaacttcg 60
tggagactgt ggagatccag atcggtctga agaactacga tccccagaag gacaagcgtt 120
tctcgggaac tgtcaagctg aagcacattc caaggcctaa aatgcaggtt tgcatcctcg 180
gagatcaaca gcattgcgac gaggccaaag ccaacaacgt gccctacatg gacgtcgagg 240
ctctgaagaa gctcaacaaa aacaagaagc tcgtcaagaa attggccaag aaatacgacg 300
ctttcctcgc ctcagaagcc ctcatcaagc agatccccag gctcctcgga cccggtctca 360
acaaggcggg caagttccct ggtctcctct ctcaccagga gtccatgatg atgaagatcg 420
acgaagtcaa ggccaccatc aagttccaaa tgaagaaggt gttgtgcctc tcagtggctg 480
tcggtcacgt cggcatgact gctgatgagc tcgtccagaa cgtgcacttg tcggtcaact 540
tcctcgtttc gctcctcaag aagcactggc agaacgtcag gtctctccac gtcaaatcca 600
cgatggg 607
<210> 11
<211> 435
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 11
atgggaccaa taaagatcaa ctttcccaga gaaagacttg ctatgcccag cataatcagg 60
tccgagaaat ccgcaaaaag atggttaaaa acatcagtga cagcatttcc agctgtgatt 120
tgaggagtgt tgtgaacaag ctgatcccag actccatcgc taaagatata gaaaagaatt 180
gccaaggaat ctacccactc cacgatgtgt acattcggaa ggtgaaggtg ttgaagaagc 240
cgaggttcga gctcagcaag ctccttgagc ttcacgtcga tggcaaaggg atcgacgaac 300
ccggcgcgaa agtgacgagg actgacgctt acgagcctcc agttcaagag tctgtctaag 360
taaacatttt atataaagtt aacaaaaaat aaaggtgtct cgcctgacta aaaaaaaaaa 420
aaaaaaaaaa aaaaa 435
<210> 12
<211> 353
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 12
ccaataaaga tcaactttcc cagagaaaga cttgctatgc ccagcataat caggtccgag 60
aaatccgcaa aaagatggtt aaaaacatca gtgacagcat ttccagctgt gatttgagga 120
gtgttgtgaa caagctgatc ccagactcca tcgctaaaga tatagaaaag aattgccaag 180
gaatctaccc actccacgat gtgtacattc ggaaggtgaa ggtgttgaag aagccgaggt 240
tcgagctcag caagctcctt gagcttcacg tcgatggcaa agggatcgac gaacccggcg 300
cgaaagtgac gaggactgac gcttacgagc ctccagttca agagtctgtc taa 353
<210> 13
<211> 474
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 13
catgggtacg aatatcgacg gtaaaagaaa ggtgatgttc gccatgaccg ccatcaaagg 60
tgtcggcaga cggtacgcca acattgtcct caagaaggcc gatgtcaact tggacaagag 120
ggccggcgaa tgctccgaag aagaagttga aaagatcgtt accatcatgc aaaaccctag 180
gcaatacaaa attcccaact ggttcctcaa cagacaaaaa gacaccgtcg agggcaaata 240
ctctcagttg acttcctccc tgctggattc caagctccgt gacgaccttg agcgactcaa 300
gaagatcagg gcccacagag gcatgaggca ctactggggt ttgagggtgc gtggtcaaca 360
cacgaagacc accggaagga gaggacgaac tgttggtgtg tccaagaaga agtaatttta 420
atttcctaat aaattggttt tttcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 474
<210> 14
<211> 332
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 14
gaaaggtgat gttcgccatg accgccatca aaggtgtcgg cagacggtac gccaacattg 60
tcctcaagaa ggccgatgtc aacttggaca agagggccgg cgaatgctcc gaagaagaag 120
ttgaaaagat cgttaccatc atgcaaaacc ctaggcaata caaaattccc aactggttcc 180
tcaacagaca aaaagacacc gtcgagggca aatactctca gttgacttcc tccctgctgg 240
attccaagct ccgtgacgac cttgagcgac tcaagaagat cagggcccac agaggcatga 300
ggcactactg gggtttgagg gtgcgtggtc aa 332
<210> 15
<211> 440
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 15
gtgagttctt ctgttgatta gtttttcctt ccctgaaatt atttcgttga agttaatttg 60
gattaccctg aaagaatccg ctgctttttc tctcgctaaa aatcttttac acccgtcacc 120
acggccccct gtgggcaggc acaagctgaa gcacctgccc gtgcacccta actcgcactt 180
catggacgtc aactgccctg ggtgttataa aatcccaacg gtgttctccc ccgcccagaa 240
cgacttcggc tgctggacct gttccaccat cctctgcctg cccacagggg gccgtgccga 300
cctcaccaaa agatgctcgt ttaggagaaa tcaacattat tattcttggt gggaacactt 360
attttttttg taattaaatt tcaaactaca aaataacttt tccgaaaaac actacaaaaa 420
aaattaaaaa caaaaaaaaa 440
<210> 16
<211> 324
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 16
cttccctgaa attatttcgt tgaagttaat ttggattacc ctgaaagaat ccgctgcttt 60
ttctctcgct aaaaatcttt tacacccgtc accacggccc cctgtgggca ggcacaagct 120
gaagcacctg cccgtgcacc ctaactcgca cttcatggac gtcaactgcc ctgggtgtta 180
taaaatccca acggtgttct cccccgccca gaacgacttc ggctgctgga cctgttccac 240
catcctctgc ctgcccacag ggggccgtgc cgacctcacc aaaagatgct cgtttaggag 300
aaatcaacat tattattctt ggtg 324
<210> 17
<211> 357
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 17
atgggttcaa gagagttaaa gccaagaggg ccaagaagga cgacggtgag atatttgccg 60
ctaaaaagga agtctacaag ccctctgagc agaggaaagc agaccagaaa aacattgaca 120
aacagaccct gaaagccatc aagcgactca agggagacgc ttgcctcatg aggaaatacc 180
tttgcaccat gttcggattc aggagcagtc aatatcccca ccgtatgaag ttttaatatg 240
ttttcagcca ataaataagt gaaagtttct cttttttatt actacagact caaattttta 300
ttttctgaaa attattaaaa attcttaatg gcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 357
<210> 18
<211> 223
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 18
gttcaagaga gttaaagcca agagggccaa gaaggacgac ggtgagatat ttgccgctaa 60
aaaggaagtc tacaagccct ctgagcagag gaaagcagac cagaaaaaca ttgacaaaca 120
gaccctgaaa gccatcaagc gactcaaggg agacgcttgc ctcatgagga aatacctttg 180
caccatgttc ggattcagga gcagtcaata tccccaccgt atg 223
<210> 19
<211> 632
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 19
atgggacctt ttttccgtgt gtctggctta ggcctcgcgt gttcttgtat ttttacggga 60
aatttagtga aaaagtgtaa atttaacgcg taaaaatggg tcgtatgcac gcacctggta 120
agggtatttc ccagtcagct ctcccctatc gtcgtagcgt cccaacatgg ctgaagctca 180
ctcctgacga cgtcaaggat cagattttca aactcaccaa gaaaggactg actccatctc 240
agatcggtgt catcctcagg gattctcacg gtgtggctca agtcagattc gtcaccgggt 300
cgaagatcct caggatcatg aaagccatcg gcctcgctcc tgacctccca gaggacctct 360
acttcctcat caaaaaagcc gttgctatca ggaaacatct tgaaagaaat aggaaagaca 420
aagactctaa attcggactt atccccgtcg agtccaggat ccacaggttg gcaagatact 480
acaaaaccaa gggcaccctt ccacccacct ggaaatacga gtccagcacc gcctctgctc 540
tggtggcttg aatattcaac tttttatttg tctactgttt aattaatata atgtgattta 600
gcaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 632
<210> 20
<211> 457
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 20
gggtcgtatg cacgcacctg gtaagggtat ttcccagtca gctctcccct atcgtcgtag 60
cgtcccaaca tggctgaagc tcactcctga cgacgtcaag gatcagattt tcaaactcac 120
caagaaagga ctgactccat ctcagatcgg tgtcatcctc agggattctc acggtgtggc 180
tcaagtcaga ttcgtcaccg ggtcgaagat cctcaggatc atgaaagcca tcggcctcgc 240
tcctgacctc ccagaggacc tctacttcct catcaaaaaa gccgttgcta tcaggaaaca 300
tcttgaaaga aataggaaag acaaagactc taaattcgga cttatccccg tcgagtccag 360
gatccacagg ttggcaagat actacaaaac caagggcacc cttccaccca cctggaaata 420
cgagtccagc accgcctctg ctctggtggc ttgaata 457
<210> 21
<211> 407
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 21
atgggaccgt ttgcctcaca atccagaaca gacaggctgc catatccgtc gtcccctctg 60
cagcctccct cgtaatcaag gccctcaaag agcccccgag ggacaggaag aagaacaaga 120
acatcaaaca cgacggtaac ctgagtatgg atgacattct cggaattgcc aaaaccatga 180
ggccgaggtc gatgtccagg aaactggaag gaaccgtcaa ggaaatcctt gggacagctc 240
agtctgtcgg atgcacgatc gaaggccgag ctccccacga cgtcatcgac tccatcaaca 300
acggcgaaat ggaaatccct gacgaataaa ctgttcatga gtttatggat tttatataaa 360
aaataaaaag ttgaaaaatc caaaaaaaaa aaaaaaaaag aaaaaaa 407
<210> 22
<211> 302
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 22
accgtttgcc tcacaatcca gaacagacag gctgccatat ccgtcgtccc ctctgcagcc 60
tccctcgtaa tcaaggccct caaagagccc ccgagggaca ggaagaagaa caagaacatc 120
aaacacgacg gtaacctgag tatggatgac attctcggaa ttgccaaaac catgaggccg 180
aggtcgatgt ccaggaaact ggaaggaacc gtcaaggaaa tccttgggac agctcagtct 240
gtcggatgca cgatcgaagg ccgagctccc cacgacgtca tcgactccat caacaacggc 300
ga 302
<210> 23
<211> 794
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 23
catggggagt caatttggat ctatcgccag atgaagatgt ctcctgccgt gttcgctgtt 60
ctgctggtac tttcagcttc ccaggtcttg ggagatgatg catccaagtt ccaacacgag 120
gaaatcatgg aagtcctcag ctcggtcaac aaaaccgtca acaaattgta cgacttgatg 180
tccacgcaga aggaaagaga tattgacttt atcgagaaga aaatggatga gacgtaccag 240
caactcagga acaagaggga ggcgccggct gagaaccctg aagccattga caagatccaa 300
aacgcgttca aaagctttca agacggcgtc aaggacttcg tcaagtccgc ttcttcctcg 360
gacctctaca agaaggttca ggaaatcggc gaggacctgt agaacaaagg caaagagctc 420
ggagagaagc tgcaagaaac catcaataac gccagaacga aaaactcaga cgagaagaag 480
gactaaactg aggattttga ctctgcacaa acgcccgttg gtgtttaaac gtatttctta 540
cgtttattat catcggggtt catgaaatca aaaatacacc atcgcatacc acctcgaaaa 600
gaacataata tatgtgaaaa gacaagaaaa ggtgttcaat tgtgtcttta actggtggtt 660
atcacgattc acatgaaata ctactaagaa aacccaaaaa ccgtcatgaa acccgaagta 720
tgcttctgta ttacctaatt gtgctgataa ttcttaataa aatattatac tgagaaaaaa 780
aaaaaaaaaa aaaa 794
<210> 24
<211> 278
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 24
ttctgctggt actttcagct tcccaggtct tgggagatga tgcatccaag ttccaacacg 60
aggaaatcat ggaagtcctc agctcggtca acaaaaccgt caacaaattg tacgacttga 120
tgtccacgca gaaggaaaga gatattgact ttatcgagaa gaaaatggat gagacgtacc 180
agcaactcag gaacaagagg gaggcgccgg ctgagaaccc tgaagccatt gacaagatcc 240
aaaacgcgtt caaaagcttt caagacggcg tcaaggac 278
<210> 25
<211> 437
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 25
atgggatcca ataataacca ttaaggcaat tggacatcaa tgatactgaa catatgaata 60
ttcagatatc aaaaatatcg aaatagaatc atatataaaa ccaactaacg cattagaaaa 120
taacgaattc cgattacttg aagtagacaa tcgaatcgta ttacctataa aatcaactat 180
ccgaattcta gttacatcat ctgatgtaat tcattcatga accatcccaa gtttgggaat 240
caaaattgat ggcacaccag gacgattaaa tcaagggaga ataaacataa accgaccagg 300
actaatatat gggcaatgtt ctgaaatttg tggagcaaac cacagattta taccaatcgt 360
aattgaaaga gtttcaatta atcaatttat aaactgatta aattcaaaat aaaaaaaaaa 420
aaaaaaaaaa aaaaaaa 437
<210> 26
<211> 327
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 26
aacgcagagt acatgggatc caataataac cattaaggca attggacatc aatgatactg 60
aacatatgaa tattcagata tcaaaaatat cgaaatagaa tcatatataa aaccaactaa 120
cgcattagaa aataacgaat tccgattact tgaagtagac aatcgaatcg tattacctat 180
aaaatcaact atccgaattc tagttacatc atctgatgta attcattcat gaaccatccc 240
aagtttggga atcaaaattg atggcacacc aggacgatta aatcaaggga gaataaacat 300
aaaccgacca ggactaatat atgggca 327
<210> 27
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 27
gcgtaatacg actcactata ggcaaacagg ccgaaatcga ga 42
<210> 28
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 28
tgacgacctt gagttggttt ctg 23
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 29
caaacaggcc gaaatcgaga 20
<210> 30
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 30
gcgtaatacg actcactata ggtgacgacc ttgagttggt ttctg 45
<210> 31
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 31
gcgtaatacg actcactata gggggcatca tgtcgaaagc tg 42
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 32
cgaagcccat gtcatcatcg 20
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 33
gggcatcatg tcgaaagctg 20
<210> 34
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 34
gcgtaatacg actcactata ggcgaagccc atgtcatcat cg 42
<210> 35
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 35
gcgtaatacg actcactata gggggcaggt cttctccata acca 44
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 36
gattttgcgg tgccaacgac 20
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 37
gggcaggtct tctccataac ca 22
<210> 38
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 38
gcgtaatacg actcactata gggattttgc ggtgccaacg ac 42
<210> 39
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 39
gcgtaatacg actcactata ggattgcaca agctgaatcc ctcc 44
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 40
attcacaaag cgggtgctgg 20
<210> 41
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 41
attgcacaag ctgaatccct cc 22
<210> 42
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 42
gcgtaatacg actcactata ggattcacaa agcgggtgct gg 42
<210> 43
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 43
gcgtaatacg actcactata ggccctctac gagtgcatca atgg 44
<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 44
cccatcgtgg atttgacgtg 20
<210> 45
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 45
ccctctacga gtgcatcaat gg 22
<210> 46
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 46
gcgtaatacg actcactata ggcccatcgt ggatttgacg tg 42
<210> 47
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 47
gcgtaatacg actcactata ggccaataaa gatcaacttt cccagag 47
<210> 48
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 48
ttagacagac tcttgaactg gaggc 25
<210> 49
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 49
ccaataaaga tcaactttcc cagag 25
<210> 50
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 50
gcgtaatacg actcactata ggttagacag actcttgaac tggaggc 47
<210> 51
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 51
gcgtaatacg actcactata gggaaaggtg atgttcgcca tgac 44
<210> 52
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 52
ttgaccacgc accctcaaac 20
<210> 53
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 53
gaaaggtgat gttcgccatg ac 22
<210> 54
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 54
gcgtaatacg actcactata ggttgaccac gcaccctcaa ac 42
<210> 55
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 55
gcgtaatacg actcactata ggcttccctg aaattatttc gttgaag 47
<210> 56
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 56
caccaagaat aataatgttg atttctcc 28
<210> 57
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 57
cttccctgaa attatttcgt tgaag 25
<210> 58
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 58
gcgtaatacg actcactata ggcaccaaga ataataatgt tgatttctcc 50
<210> 59
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 59
gcgtaatacg actcactata gggttcaaga gagttaaagc caagagg 47
<210> 60
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 60
catacggtgg ggatattgac tg 22
<210> 61
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 61
gttcaagaga gttaaagcca agagg 25
<210> 62
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 62
gcgtaatacg actcactata ggcatacggt ggggatattg actg 44
<210> 63
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 63
gcgtaatacg actcactata gggggtcgta tgcacgcacc tg 42
<210> 64
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 64
tattcaagcc accagagcag agg 23
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 65
gggtcgtatg cacgcacctg 20
<210> 66
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 66
gcgtaatacg actcactata ggtattcaag ccaccagagc agagg 45
<210> 67
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 67
gcgtaatacg actcactata ggaccgtttg cctcacaatc ca 42
<210> 68
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 68
tcgccgttgt tgatggagtc 20
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 69
accgtttgcc tcacaatcca 20
<210> 70
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 70
gcgtaatacg actcactata ggtcgccgtt gttgatggag tc 42
<210> 71
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 71
gcgtaatacg actcactata ggggtatcaa cgcagagtac atggg 45
<210> 72
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 72
gtccttgacg ccgtcttgaa 20
<210> 73
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 73
ggtatcaacg cagagtacat ggg 23
<210> 74
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 74
gcgtaatacg actcactata gggtccttga cgccgtcttg aa 42
<210> 75
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 75
gcgtaatacg actcactata ggtgcccata tattagtcct ggtc 44
<210> 76
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 76
aacgcagagt acatgggatc 20
<210> 77
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 77
tgcccatata ttagtcctgg tc 22
<210> 78
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 78
gcgtaatacg actcactata ggaacgcaga gtacatggga tc 42
<210> 79
<211> 197
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 79
Met Ala Asp Asp Glu Ala Lys Lys Ala Lys Gln Ala Glu Ile Glu Arg
1 5 10 15
Lys Arg Ala Glu Val Arg Lys Arg Met Glu Glu Ala Ser Lys Ala Lys
20 25 30
Lys Ala Lys Lys Gly Phe Met Thr Pro Glu Arg Lys Lys Lys Leu Arg
35 40 45
Leu Leu Leu Arg Lys Lys Ala Ala Glu Glu Leu Lys Lys Glu Gln Glu
50 55 60
Arg Lys Ala Ala Glu Arg Arg Arg Thr Ile Glu Glu Arg Cys Gly Gln
65 70 75 80
Ile Ala Asp Val Asp Asn Ala Asn Glu Ala Thr Leu Lys Lys Leu Cys
85 90 95
Thr Asp Tyr His Lys Arg Ile Asp Ala Leu Glu Arg Ser Lys Ile Asp
100 105 110
Ile Glu Phe Glu Val Glu Arg Arg Asp Leu Glu Ile Ala Asp Leu Asn
115 120 125
Ser Gln Val Asn Asp Leu Arg Gly Lys Phe Val Lys Pro Thr Leu Lys
130 135 140
Lys Val Ser Lys Tyr Glu Asn Lys Phe Ala Lys Leu Gln Lys Lys Ala
145 150 155 160
Ala Glu Phe Asn Phe Arg Asn Gln Leu Lys Val Val Lys Lys Lys Glu
165 170 175
Phe Thr Leu Glu Glu Glu Asp Lys Glu Pro Lys Lys Ser Glu Lys Ala
180 185 190
Glu Trp Gln Lys Lys
195
<210> 80
<211> 115
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 80
Met Gly Ile Met Ser Lys Ala Glu Leu Ala Cys Val Tyr Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ile Leu Ile Asp Asp Asp Val Ala Val Thr Gly Glu Lys Ile Gln Thr
20 25 30
Ile Leu Lys Ala Ala Ser Val Asp Ile Glu Pro Tyr Trp Pro Gly Leu
35 40 45
Phe Ala Lys Ala Leu Glu Gly Ile Asn Pro Lys Asp Leu Ile Ser Ser
50 55 60
Ile Gly Ser Gly Val Gly Ala Gly Ala Pro Ala Val Gly Gly Ala Ala
65 70 75 80
Pro Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ala Ala Glu Ala Lys Lys Glu Glu Lys
85 90 95
Lys Lys Val Glu Ser Asp Pro Glu Ser Asp Asp Asp Met Gly Phe Gly
100 105 110
Leu Phe Asp
115
<210> 81
<211> 121
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 81
Met Ile Pro Pro Thr Ser Arg Pro Gln Val Thr Val Tyr Ser Asp Lys
1 5 10 15
Asn Glu Ala Thr Gly Thr Leu Leu Asn Leu Pro Ala Val Phe Asn Ala
20 25 30
Pro Ile Arg Pro Asp Val Val Asn Phe Val His Gln Asn Val Ala Lys
35 40 45
Asn His Arg Gln Pro Tyr Cys Val Ser Ala Gln Ala Gly His Gln Thr
50 55 60
Ser Ala Glu Ser Trp Gly Thr Gly Arg Ala Val Ala Arg Ile Pro Arg
65 70 75 80
Val Arg Gly Gly Gly Thr His Arg Ser Gly Gln Gly Ala Phe Gly Asn
85 90 95
Met Cys Arg Gly Gly Arg Met Phe Ala Pro Thr Arg Pro Trp Arg Arg
100 105 110
Trp His Arg Lys Ile Asn Val Asn Gln
115 120
<210> 82
<211> 133
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 82
Trp Asp Leu Tyr Ala Glu Lys Val Ala Thr Arg Gly Leu Cys Ala Ile
1 5 10 15
Ala Gln Ala Glu Ser Leu Arg Tyr Lys Leu Ile Gly Gly Leu Ala Val
20 25 30
Arg Gly Ala Cys Tyr Gly Val Leu Arg Phe Ile Met Glu Asn Gly Ala
35 40 45
Lys Gly Cys Glu Val Val Val Ser Gly Lys Leu Arg Gly Gln Arg Ala
50 55 60
Lys Ser Met Lys Phe Val Asp Gly Leu Met Ile His Ser Gly Asp Pro
65 70 75 80
Cys Asn Glu Tyr Val Asp Thr Ala Thr Arg His Val Leu Leu Arg Gln
85 90 95
Gly Val Leu Gly Ile Lys Val Lys Ile Met Leu Pro Trp Asp Val Thr
100 105 110
Gly Lys Asn Gly Pro Lys Asn Pro Leu Pro Asp His Val Ser Val Leu
115 120 125
Leu Pro Lys Glu Glu
130
<210> 83
<211> 217
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 83
Met Thr Ser Lys Val Ser Arg Glu Thr Leu Tyr Glu Cys Ile Asn Gly
1 5 10 15
Val Ile Gln Ser Ser Gln Glu Lys Lys Arg Asn Phe Val Glu Thr Val
20 25 30
Glu Ile Gln Ile Gly Leu Lys Asn Tyr Asp Pro Gln Lys Asp Lys Arg
35 40 45
Phe Ser Gly Thr Val Lys Leu Lys His Ile Pro Arg Pro Lys Met Gln
50 55 60
Val Cys Ile Leu Gly Asp Gln Gln His Cys Asp Glu Ala Lys Ala Asn
65 70 75 80
Asn Val Pro Tyr Met Asp Val Glu Ala Leu Lys Lys Leu Asn Lys Asn
85 90 95
Lys Lys Leu Val Lys Lys Leu Ala Lys Lys Tyr Asp Ala Phe Leu Ala
100 105 110
Ser Glu Ala Leu Ile Lys Gln Ile Pro Arg Leu Leu Gly Pro Gly Leu
115 120 125
Asn Lys Ala Gly Lys Phe Pro Gly Leu Leu Ser His Gln Glu Ser Met
130 135 140
Met Met Lys Ile Asp Glu Val Lys Ala Thr Ile Lys Phe Gln Met Lys
145 150 155 160
Lys Val Leu Cys Leu Ser Val Ala Val Gly His Val Gly Met Thr Ala
165 170 175
Asp Glu Leu Val Gln Asn Val His Leu Ser Val Asn Phe Leu Val Ser
180 185 190
Leu Leu Lys Lys His Trp Gln Asn Val Arg Ser Leu His Val Lys Ser
195 200 205
Thr Met Gly Pro Pro Gln Arg Leu Tyr
210 215
<210> 84
<211> 118
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 84
Gly Thr Asn Lys Asp Gln Leu Ser Gln Arg Lys Thr Cys Tyr Ala Gln
1 5 10 15
His Asn Gln Val Arg Glu Ile Arg Lys Lys Met Val Lys Asn Ile Ser
20 25 30
Asp Ser Ile Ser Ser Cys Asp Leu Arg Ser Val Val Asn Lys Leu Ile
35 40 45
Pro Asp Ser Ile Ala Lys Asp Ile Glu Lys Asn Cys Gln Gly Ile Tyr
50 55 60
Pro Leu His Asp Val Tyr Ile Arg Lys Val Lys Val Leu Lys Lys Pro
65 70 75 80
Arg Phe Glu Leu Ser Lys Leu Leu Glu Leu His Val Asp Gly Lys Gly
85 90 95
Ile Asp Glu Pro Gly Ala Lys Val Thr Arg Thr Asp Ala Tyr Glu Pro
100 105 110
Pro Val Gln Glu Ser Val
115
<210> 85
<211> 128
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 85
Lys Val Met Phe Ala Met Thr Ala Ile Lys Gly Val Gly Arg Arg Tyr
1 5 10 15
Ala Asn Ile Val Leu Lys Lys Ala Asp Val Asn Leu Asp Lys Arg Ala
20 25 30
Gly Glu Cys Ser Glu Glu Glu Val Glu Lys Ile Val Thr Ile Met Gln
35 40 45
Asn Pro Arg Gln Tyr Lys Ile Pro Asn Trp Phe Leu Asn Arg Gln Lys
50 55 60
Asp Thr Val Glu Gly Lys Tyr Ser Gln Leu Thr Ser Ser Leu Leu Asp
65 70 75 80
Ser Lys Leu Arg Asp Asp Leu Glu Arg Leu Lys Lys Ile Arg Ala His
85 90 95
Arg Gly Met Arg His Tyr Trp Gly Leu Arg Val Arg Gly Gln His Thr
100 105 110
Lys Thr Thr Gly Arg Arg Gly Arg Thr Val Gly Val Ser Lys Lys Lys
115 120 125
<210> 86
<211> 122
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 86
Val Leu Leu Leu Ile Ser Phe Ser Phe Pro Glu Ile Ile Ser Leu Lys
1 5 10 15
Leu Ile Trp Ile Thr Leu Lys Glu Ser Ala Ala Phe Ser Leu Ala Lys
20 25 30
Asn Leu Leu His Pro Ser Pro Arg Pro Pro Val Gly Arg His Lys Leu
35 40 45
Lys His Leu Pro Val His Pro Asn Ser His Phe Met Asp Val Asn Cys
50 55 60
Pro Gly Cys Tyr Lys Ile Pro Thr Val Phe Ser Pro Ala Gln Asn Asp
65 70 75 80
Phe Gly Cys Trp Thr Cys Ser Thr Ile Leu Cys Leu Pro Thr Gly Gly
85 90 95
Arg Ala Asp Leu Thr Lys Arg Cys Ser Phe Arg Arg Asn Gln His Tyr
100 105 110
Tyr Ser Trp Trp Glu His Leu Phe Phe Leu
115 120
<210> 87
<211> 77
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 87
Gly Phe Lys Arg Val Lys Ala Lys Arg Ala Lys Lys Asp Asp Gly Glu
1 5 10 15
Ile Phe Ala Ala Lys Lys Glu Val Tyr Lys Pro Ser Glu Gln Arg Lys
20 25 30
Ala Asp Gln Lys Asn Ile Asp Lys Gln Thr Leu Lys Ala Ile Lys Arg
35 40 45
Leu Lys Gly Asp Ala Cys Leu Met Arg Lys Tyr Leu Cys Thr Met Phe
50 55 60
Gly Phe Arg Ser Ser Gln Tyr Pro His Arg Met Lys Phe
65 70 75
<210> 88
<211> 151
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 88
Met Gly Arg Met His Ala Pro Gly Lys Gly Ile Ser Gln Ser Ala Leu
1 5 10 15
Pro Tyr Arg Arg Ser Val Pro Thr Trp Leu Lys Leu Thr Pro Asp Asp
20 25 30
Val Lys Asp Gln Ile Phe Lys Leu Thr Lys Lys Gly Leu Thr Pro Ser
35 40 45
Gln Ile Gly Val Ile Leu Arg Asp Ser His Gly Val Ala Gln Val Arg
50 55 60
Phe Val Thr Gly Ser Lys Ile Leu Arg Ile Met Lys Ala Ile Gly Leu
65 70 75 80
Ala Pro Asp Leu Pro Glu Asp Leu Tyr Phe Leu Ile Lys Lys Ala Val
85 90 95
Ala Ile Arg Lys His Leu Glu Arg Asn Arg Lys Asp Lys Asp Ser Lys
100 105 110
Phe Gly Leu Ile Pro Val Glu Ser Arg Ile His Arg Leu Ala Arg Tyr
115 120 125
Tyr Lys Thr Lys Gly Thr Leu Pro Pro Thr Trp Lys Tyr Glu Ser Ser
130 135 140
Thr Ala Ser Ala Leu Val Ala
145 150
<210> 89
<211> 108
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 89
Gly Thr Val Cys Leu Thr Ile Gln Asn Arg Gln Ala Ala Ile Ser Val
1 5 10 15
Val Pro Ser Ala Ala Ser Leu Val Ile Lys Ala Leu Lys Glu Pro Pro
20 25 30
Arg Asp Arg Lys Lys Asn Lys Asn Ile Lys His Asp Gly Asn Leu Ser
35 40 45
Met Asp Asp Ile Leu Gly Ile Ala Lys Thr Met Arg Pro Arg Ser Met
50 55 60
Ser Arg Lys Leu Glu Gly Thr Val Lys Glu Ile Leu Gly Thr Ala Gln
65 70 75 80
Ser Val Gly Cys Thr Ile Glu Gly Arg Ala Pro His Asp Val Ile Asp
85 90 95
Ser Ile Asn Asn Gly Glu Met Glu Ile Pro Asp Glu
100 105
<210> 90
<211> 133
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 90
His Gly Glu Ser Ile Trp Ile Tyr Arg Gln Met Lys Met Ser Pro Ala
1 5 10 15
Val Phe Ala Val Leu Leu Val Leu Ser Ala Ser Gln Val Leu Gly Asp
20 25 30
Asp Ala Ser Lys Phe Gln His Glu Glu Ile Met Glu Val Leu Ser Ser
35 40 45
Val Asn Lys Thr Val Asn Lys Leu Tyr Asp Leu Met Ser Thr Gln Lys
50 55 60
Glu Arg Asp Ile Asp Phe Ile Glu Lys Lys Met Asp Glu Thr Tyr Gln
65 70 75 80
Gln Leu Arg Asn Lys Arg Glu Ala Pro Ala Glu Asn Pro Glu Ala Ile
85 90 95
Asp Lys Ile Gln Asn Ala Phe Lys Ser Phe Gln Asp Gly Val Lys Asp
100 105 110
Phe Val Lys Ser Ala Ser Ser Ser Asp Leu Tyr Lys Lys Val Gln Glu
115 120 125
Ile Gly Glu Asp Leu
130
<210> 91
<211> 118
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 91
Thr Tyr Glu Tyr Ser Asp Ile Lys Asn Ile Glu Ile Glu Ser Tyr Ile
1 5 10 15
Lys Pro Thr Asn Ala Leu Glu Asn Asn Glu Phe Arg Leu Leu Glu Val
20 25 30
Asp Asn Arg Ile Val Leu Pro Ile Lys Ser Thr Ile Arg Ile Leu Val
35 40 45
Thr Ser Ser Asp Val Ile His Ser Thr Ile Pro Ser Leu Gly Ile Lys
50 55 60
Ile Asp Gly Thr Pro Gly Arg Leu Asn Gln Gly Arg Ile Asn Ile Asn
65 70 75 80
Arg Pro Gly Leu Ile Tyr Gly Gln Cys Ser Glu Ile Cys Gly Ala Asn
85 90 95
His Arg Phe Ile Pro Ile Val Ile Glu Arg Val Ser Ile Asn Gln Phe
100 105 110
Ile Asn Leu Asn Ser Lys
115
<210> 92
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 适体
<400> 92
aagcagtggt atcaacgcag 20
<210> 93
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 93
aagcagtggt atcaacgcag 20
<210> 94
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 94
gcgtaatacg actcactata ggaagcagtg gtatcaacgc ag 42
<210> 95
<211> 717
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 95
aaagtgtggt tctcttcgtc cgaccatgag ttcgctcaaa ctgcagaaga ggctcgccgc 60
ctcggtgatg agatgcggca agaagaaagt gtggttggac cctaatgaaa tcaacgaaat 120
cgccaacacc aactctaggc aaaacatccg taagctgatc aaggatggtt tgatcatcaa 180
aaagcctgtg gctgtccact ccagagcccg cgtccgtaaa aacacagaag ccagacggaa 240
gggtcgtcat tgtggcttcg gtaagaggaa gggtaccgcc aacgccagaa tgcctgtgaa 300
ggtcctgtgg gtcaacagaa tgagagtcct gcgacggctc cttaaaaaat acagagaagc 360
caagaagatc gataggcaaa tgtaccacga cctttacatg aaagccaaag gtaacgtctt 420
caaaaacaag agggtactga tggacttcat tcacaagaag aaggctgaaa aggcgagatc 480
aaagatgttg aaggaccagg cagaggcgag acgtttcaag gtcaaggagg cgaagaagag 540
gcgcgaggag aggatcgcca ccaagaagca agagatcatg caggcgtacg cccgagaaga 600
cgaggctgcc gtcaaaaagt gatctcgccc cctccgtttt taaattttaa acaaaaaacg 660
tattttgtac aaaaatttac aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 717
<210> 96
<211> 2304
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 96
atgacgacct acgaggagtt cattcaacag agcgaggagc gcgacggtat caggttcact 60
tggaacgtct ggccatcaag tcgcatcgaa gccaccaggt tggtcgtacc cgtaggatgt 120
ctctatcaac cactaaaaga acgcacggat cttccagcta ttcaatacga tcccgttcta 180
tgcactagga atacctgtag agccatactc aacccgatgt gccaagtaaa ctatagggca 240
aagttgtggg tgtgtaactt ctgtttccag aggaatccgt tcccaccaca atacgccgca 300
atttccgagc agcatcagcc tgctgagttg attccatcat tctcaactat agagtatact 360
atatctagag ctcaattttt gcctcctata ttcctattgg tggtggatac gtgtttggat 420
gatgacgagc taggagctct gaaagattcg ttacaaacgt ctctatcttt gctaccaacc 480
aactccctag ttggtctgat cacgtttggt aaaatggtcc aagttcacga acttgggtgt 540
gaaggttgtt cccggagcta cgtgttcaga ggcaccaagg atttgacgtc caagcaagta 600
caggacatgc ttgggatcgg aaaggtttcc gcttctcctc agcaacagca gcaaagggca 660
atgggcggtc agcagccatt ccccaccaat cggttcattc agccgattca aagttgtgac 720
atgagcctca ccgacttgtt gggcgaaatg cagcgtgatc catggccagt gggtcagggt 780
aagcgacctc ttagatcaac gggtgctgct ctagctattg ccattgggtt gttggagtgc 840
tcctacccca acacgggagc aaaagtcatg ttgttccttg gtggcccttg ttcccaaggg 900
cctggtcaag ttgtcaatga tgacctgagg gaacctatcc gctctcatca tgacatccag 960
aaagataatg cccgctacat gaaaaaagcc attaaacatt acgattcttt ggcattgaga 1020
gcagccacta atgggcattc agtagacatt tattcctgtg ctttagatca gacaggtttg 1080
gcggaaatga agcaatgttg caattctact gggggtcata tggtgatggg tgacaccttc 1140
aactccactt tgttcaaaca gacgttccag agggtgctct cccgtgatca aaaaggcgaa 1200
ttcaaaatgg ctttcaatgg cgtagttgaa gtcaaaacct cccgagagct aaaagttatg 1260
ggagccattg ggccttgcgt ttcattgaat acgaaaggtc cgtgtgttag tgaaactgac 1320
atagggcttg gaggaacttg ccagtggaag ttctgcacat ttaaccaaaa taccactgct 1380
gccatgttct ttgaggtagt aaaccaacac gctgctccta tccctcaagg tggaagagga 1440
tgtatacagt tcataactca ataccagcat gcgtcgggcc aaaggcgcat ccgagtaacc 1500
actgtagcca ggaattgggc tgatgcgact accaacatgc accatgttag tgcaggattt 1560
gatcaggaag ctggagcggt actcatggcc aggatggtcg ttcacagagc tgaaactgat 1620
gatggacctg atgtcatgag atgggctgat cgcatgttga ttcgtctttg ccagaaattc 1680
ggcgagtaca acaaggatga tccaaatagt ttccgcctcc cagaaaactt ctcgctttac 1740
ccacagttca tgtatcactt gagaaggtcc caattcttgc aggtattcaa caacagccca 1800
gacgaaacgt cgtactatcg tcacatcttg atgcgggaag atttgtcgca gagcttgatc 1860
atgattcagc cgatcctgta cagttacagt ttcaacggtc cagaaccagt ccttttggac 1920
acttccagca ttcaacctga tcggatcctg ctgatggaca ccttcttcca aatcctcatc 1980
ttccacggcg agaccatcgc ccagtggcgt gcccaaaggt accaggacct acctgaatat 2040
gagaacttca agcagctcct acaggctcct gtagacgatg ctaaggaaat cctgcacact 2100
cggttcccca tgccgaggta cattgacacc gaacagggcg gatcacaagc tagattcctt 2160
ctctccaaag tcaacccatc ccaaactcac aacaacatgt acggctatgg aggggaattt 2220
ggagcccctg tgctcactga tgatgtttcc ctccaagtct tcatggaaca ccttaaaaag 2280
ctagccgttt catttactgc ctag 2304
<210> 97
<211> 311
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GUS
<400> 97
ccagcgtatc gtgctgcgtt tcgatgcggt cactcattac ggcaaagtgt gatggagcat 60
cagggcggct atacgccatt tgaagccgat gtcacgccgt atgttattgc cgggaaaagt 120
gtacgtatct gaaatcaaaa aactcgacgg cctgtgggca ttcagtctgg atcgcgaaaa 180
ctgtggaatt gatccagcgc cgtcgtcggt gaacaggtat ggaatttcgc cgattttgcg 240
acctcgcaag gcatattcgg gtgaaggtta tctctatgaa ctgtgcgtca cagccaaaag 300
ccagacagag t 311
<210> 98
<211> 170
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 内含子
<400> 98
ctcgagcctg agagaaaagc atgaagtata cccataacta acccattagt tatgcattta 60
tgttatatct attcatgctt ctactttaga taatcaatca ccaaacaatg agaatctcaa 120
cggtcgcaat aatgttcatg aaaatgtagt gtgtacactt accttctaga 170
<210> 99
<211> 198
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 99
Met Ser Ser Leu Lys Leu Gln Lys Arg Leu Ala Ala Ser Val Met Arg
1 5 10 15
Cys Gly Lys Lys Lys Val Trp Leu Asp Pro Asn Glu Ile Asn Glu Ile
20 25 30
Ala Asn Thr Asn Ser Arg Gln Asn Ile Arg Lys Leu Ile Lys Asp Gly
35 40 45
Leu Ile Ile Lys Lys Pro Val Ala Val His Ser Arg Ala Arg Val Arg
50 55 60
Lys Asn Thr Glu Ala Arg Arg Lys Gly Arg His Cys Gly Phe Gly Lys
65 70 75 80
Arg Lys Gly Thr Ala Asn Ala Arg Met Pro Val Lys Val Leu Trp Val
85 90 95
Asn Arg Met Arg Val Leu Arg Arg Leu Leu Lys Lys Tyr Arg Glu Ala
100 105 110
Lys Lys Ile Asp Arg Gln Met Tyr His Asp Leu Tyr Met Lys Ala Lys
115 120 125
Gly Asn Val Phe Lys Asn Lys Arg Val Leu Met Asp Phe Ile His Lys
130 135 140
Lys Lys Ala Glu Lys Ala Arg Ser Lys Met Leu Lys Asp Gln Ala Glu
145 150 155 160
Ala Arg Arg Phe Lys Val Lys Glu Ala Lys Lys Arg Arg Glu Glu Arg
165 170 175
Ile Ala Thr Lys Lys Gln Glu Ile Met Gln Ala Tyr Ala Arg Glu Asp
180 185 190
Glu Ala Ala Val Lys Lys
195
<210> 100
<211> 767
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 100
Met Thr Thr Tyr Glu Glu Phe Ile Gln Gln Ser Glu Glu Arg Asp Gly
1 5 10 15
Ile Arg Phe Thr Trp Asn Val Trp Pro Ser Ser Arg Ile Glu Ala Thr
20 25 30
Arg Leu Val Val Pro Val Gly Cys Leu Tyr Gln Pro Leu Lys Glu Arg
35 40 45
Thr Asp Leu Pro Ala Ile Gln Tyr Asp Pro Val Leu Cys Thr Arg Asn
50 55 60
Thr Cys Arg Ala Ile Leu Asn Pro Met Cys Gln Val Asn Tyr Arg Ala
65 70 75 80
Lys Leu Trp Val Cys Asn Phe Cys Phe Gln Arg Asn Pro Phe Pro Pro
85 90 95
Gln Tyr Ala Ala Ile Ser Glu Gln His Gln Pro Ala Glu Leu Ile Pro
100 105 110
Ser Phe Ser Thr Ile Glu Tyr Thr Ile Ser Arg Ala Gln Phe Leu Pro
115 120 125
Pro Ile Phe Leu Leu Val Val Asp Thr Cys Leu Asp Asp Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Ala Leu Lys Asp Ser Leu Gln Thr Ser Leu Ser Leu Leu Pro Thr
145 150 155 160
Asn Ser Leu Val Gly Leu Ile Thr Phe Gly Lys Met Val Gln Val His
165 170 175
Glu Leu Gly Cys Glu Gly Cys Ser Arg Ser Tyr Val Phe Arg Gly Thr
180 185 190
Lys Asp Leu Thr Ser Lys Gln Val Gln Asp Met Leu Gly Ile Gly Lys
195 200 205
Val Ser Ala Ser Pro Gln Gln Gln Gln Gln Arg Ala Met Gly Gly Gln
210 215 220
Gln Pro Phe Pro Thr Asn Arg Phe Ile Gln Pro Ile Gln Ser Cys Asp
225 230 235 240
Met Ser Leu Thr Asp Leu Leu Gly Glu Met Gln Arg Asp Pro Trp Pro
245 250 255
Val Gly Gln Gly Lys Arg Pro Leu Arg Ser Thr Gly Ala Ala Leu Ala
260 265 270
Ile Ala Ile Gly Leu Leu Glu Cys Ser Tyr Pro Asn Thr Gly Ala Lys
275 280 285
Val Met Leu Phe Leu Gly Gly Pro Cys Ser Gln Gly Pro Gly Gln Val
290 295 300
Val Asn Asp Asp Leu Arg Glu Pro Ile Arg Ser His His Asp Ile Gln
305 310 315 320
Lys Asp Asn Ala Arg Tyr Met Lys Lys Ala Ile Lys His Tyr Asp Ser
325 330 335
Leu Ala Leu Arg Ala Ala Thr Asn Gly His Ser Val Asp Ile Tyr Ser
340 345 350
Cys Ala Leu Asp Gln Thr Gly Leu Ala Glu Met Lys Gln Cys Cys Asn
355 360 365
Ser Thr Gly Gly His Met Val Met Gly Asp Thr Phe Asn Ser Thr Leu
370 375 380
Phe Lys Gln Thr Phe Gln Arg Val Leu Ser Arg Asp Gln Lys Gly Glu
385 390 395 400
Phe Lys Met Ala Phe Asn Gly Val Val Glu Val Lys Thr Ser Arg Glu
405 410 415
Leu Lys Val Met Gly Ala Ile Gly Pro Cys Val Ser Leu Asn Thr Lys
420 425 430
Gly Pro Cys Val Ser Glu Thr Asp Ile Gly Leu Gly Gly Thr Cys Gln
435 440 445
Trp Lys Phe Cys Thr Phe Asn Gln Asn Thr Thr Ala Ala Met Phe Phe
450 455 460
Glu Val Val Asn Gln His Ala Ala Pro Ile Pro Gln Gly Gly Arg Gly
465 470 475 480
Cys Ile Gln Phe Ile Thr Gln Tyr Gln His Ala Ser Gly Gln Arg Arg
485 490 495
Ile Arg Val Thr Thr Val Ala Arg Asn Trp Ala Asp Ala Thr Thr Asn
500 505 510
Met His His Val Ser Ala Gly Phe Asp Gln Glu Ala Gly Ala Val Leu
515 520 525
Met Ala Arg Met Val Val His Arg Ala Glu Thr Asp Asp Gly Pro Asp
530 535 540
Val Met Arg Trp Ala Asp Arg Met Leu Ile Arg Leu Cys Gln Lys Phe
545 550 555 560
Gly Glu Tyr Asn Lys Asp Asp Pro Asn Ser Phe Arg Leu Pro Glu Asn
565 570 575
Phe Ser Leu Tyr Pro Gln Phe Met Tyr His Leu Arg Arg Ser Gln Phe
580 585 590
Leu Gln Val Phe Asn Asn Ser Pro Asp Glu Thr Ser Tyr Tyr Arg His
595 600 605
Ile Leu Met Arg Glu Asp Leu Ser Gln Ser Leu Ile Met Ile Gln Pro
610 615 620
Ile Leu Tyr Ser Tyr Ser Phe Asn Gly Pro Glu Pro Val Leu Leu Asp
625 630 635 640
Thr Ser Ser Ile Gln Pro Asp Arg Ile Leu Leu Met Asp Thr Phe Phe
645 650 655
Gln Ile Leu Ile Phe His Gly Glu Thr Ile Ala Gln Trp Arg Ala Gln
660 665 670
Arg Tyr Gln Asp Leu Pro Glu Tyr Glu Asn Phe Lys Gln Leu Leu Gln
675 680 685
Ala Pro Val Asp Asp Ala Lys Glu Ile Leu His Thr Arg Phe Pro Met
690 695 700
Pro Arg Tyr Ile Asp Thr Glu Gln Gly Gly Ser Gln Ala Arg Phe Leu
705 710 715 720
Leu Ser Lys Val Asn Pro Ser Gln Thr His Asn Asn Met Tyr Gly Tyr
725 730 735
Gly Gly Glu Phe Gly Ala Pro Val Leu Thr Asp Asp Val Ser Leu Gln
740 745 750
Val Phe Met Glu His Leu Lys Lys Leu Ala Val Ser Phe Thr Ala
755 760 765
<210> 101
<211> 511
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 101
ggtgatgaga tgcggcaaga agaaagtgtg gttggaccct aatgaaatca acgaaatcgc 60
caacaccaac tctaggcaaa acatccgtaa gctgatcaag gatggtttga tcatcaaaaa 120
gcctgtggct gtccactcca gagcccgcgt ccgtaaaaac acagaagcca gacggaaggg 180
tcgtcactgt ggcttcggta agaggaaggg taccgccaac gccagaatgc ctgtgaaggt 240
cctgtgggtc aacagaatga gagtcctgcg acggctcctt aaaaaataca gagaagccaa 300
gaagatcgat aggcaaatgt accacgacct ttacatgaaa gccaaaggta acgtcttcaa 360
aaacaagagg gtactgatgg acttcattca caagaagaag gctgaaaagg cgagatcaaa 420
gatgttgaag gaccaggcag aggcgagacg tctcaaggtc aaggaggcga agaagaggcg 480
cgaggagagg atcgccacca agaagcaaga g 511
<210> 102
<211> 1145
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 102
tgggttgttg gagtgctcct accccaacac gggagcaaaa gtcatgttgt tccttggtgg 60
cccttgttcc caagggcctg gtcaagttgt caatgatgac ctgagggaac ctatccgctc 120
tcatcatgac atccagaaag ataatgcccg ctacatgaaa aaagccatta aacattacga 180
ttctttggca ttgagagcag ccactaatgg gcattcagta gacatttatt cctgtgcttt 240
agatcagaca ggtttggcgg aaatgaagca atgttgcaat tctactgggg gtcatatggt 300
gatgggtgac accttcaact ccactttgtt caaacagacg ttccagaggg tgctctcccg 360
tgatcaaaaa ggcgaattca aaatggcttt caatggcgta gttgaagtca aaacctcccg 420
agagctaaaa gttatgggag ccattgggcc ttgcgtttca ttgaatacga aaggtccgtg 480
tgttagtgaa actgacatag ggcttggagg aacttgccag tggaagttct gcacatttaa 540
ccaaaatacc actgctgcca tgttctttga ggtagtaaac caacacgctg ctcctatccc 600
tcaaggtgga agaggatgta tacagttcat aactcaatac cagcatgcgt cgggccaaag 660
gcgcatccga gtaaccactg tagccaggaa ttgggctgat gcgactacca acatgcacca 720
tgttagtgca ggatttgatc aggaagctgg agcggtactc atggccagga tggtcgttca 780
cagagctgaa actgatgatg gacctgatgt catgagatgg gctgatcgca tgttgattcg 840
tctttgccag aaattcggcg agtacaacaa ggatgatcca aatagtttcc gcctcccaga 900
aaacttctcg ctttacccac agttcatgta tcacttgaga aggtcccaat tcttgcaggt 960
attcaacaac agcccagacg aaacgtcgta ctatcgtcac atcttgatgc gggaagattt 1020
gtcgcagagc ttgatcatga ttcagccgat cctgtacagt tacagtttca acggtccaga 1080
accagtcctt ttggacactt ccagcattca acctgatcgg atcctgctga tggacacctt 1140
cttcc 1145
<210> 103
<211> 258
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GFP
<400> 103
agatacccag atcatatgaa acggcatgac tttttcaaga gtgccatgcc cgaaggttat 60
gtacaggaaa gaactatatt tttcaaagat gacgggaact acaagacacg taagtttaaa 120
cagttcggta ctaactaacc atacatattt aaattttcag gtgctgaagt caagtttgaa 180
ggtgataccc ttgttaatag aatcgagtta aaaggtattg attttaaaga agatggaaac 240
attcttggac acaaattg 258
<210> 104
<211> 745
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Pt珊瑚荧光蛋白
<400> 104
agtgtaataa cttactttga gtctaccgtc atgagtgcaa ttaaaccagt catgaagatt 60
gaattggtca tggaaggaga ggtgaacggg cacaagttca cgatcacggg agagggacaa 120
ggcaagcctt acgagggaac acagactcta aaccttacag tcactaaagg cgtgcccctt 180
cctttcgctt tcgatatctt gtcaacagca ttccagtatg gcaacagggt atttaccaaa 240
tacccagatg atataccgga ctatttcaag cagacctttc cggaaggata ttcgtgggaa 300
agaactttca aatatgaaga gggcgtttgc accacaaaga gtgacataag cctcaagaaa 360
ggccaaccag actgctttca atataaaatt aactttaaag gggagaagct tgaccccaac 420
ggcccaatta tgcagaagaa gaccctgaaa tgggagccat ccactgagag gatgtacatg 480
gacgtggata aagacggtgc aaaggtgctg aagggcgatg ttaatgcggc cctgttgctt 540
gaaggaggtg gccattatcg ttgtgacttt aacagtactt acaaggcgaa gaaaactgtg 600
tccttcccag catatcactt tgtggaccac cgcattgaga ttttgagcca caatacggat 660
tacagcaagg ttacactgta tgaagttgcc gtggctcgca attctcctct tcagattatg 720
gcgccccagt aaaggcttaa cgaaa 745
<210> 105
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 105
gcgtaatacg actcactata ggtgatgaga tgcggcaaga ag 42
<210> 106
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 106
ctcttgcttc ttggtggcga tc 22
<210> 107
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 107
ggtgatgaga tgcggcaaga ag 22
<210> 108
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 108
gcgtaatacg actcactata ggctcttgct tcttggtggc gatc 44
<210> 109
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 109
gcgtaatacg actcactata ggtgggttgt tggagtgctc ctac 44
<210> 110
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 110
ggaagaaggt gtccatcagc ag 22
<210> 111
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 111
tgggttgttg gagtgctcct ac 22
<210> 112
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 112
gcgtaatacg actcactata ggggaagaag gtgtccatca gcag 44
<210> 113
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 113
gcgtaatacg actcactata ggagataccc agatcatatg aaacgg 46
<210> 114
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 114
caatttgtgt ccaagaatgt ttcc 24
<210> 115
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 115
agatacccag atcatatgaa acgg 24
<210> 116
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 116
gcgtaatacg actcactata ggcaatttgt gtccaagaat gtttcc 46
<210> 117
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 117
gcgtaatacg actcactata ggagtgtaat aacttacttt gag 43
<210> 118
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 118
tttcgttaag cctttactgg 20
<210> 119
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 119
agtgtaataa cttactttga g 21
<210> 120
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 120
gcgtaatacg actcactata ggtttcgtta agcctttact gg 42
<210> 121
<211> 473
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 121
tgccgggccg ctcgccgaac catctgggaa gcttggaatg ggctcgactg ccgaactgat 60
caactttttc ggtccacacc ttttctatca actccttata ccgctccagg atgccgcctt 120
caaacagttt tttcttgtcg tcataagatc tggtgtcaac tcttcgttca tatttggagg 180
cgacttggat tttgggtggg tacttgccgg tgagggcctc agggtccaag ccttttttca 240
aggctttgtg ccgaagttgt tgcttctgtc tttccttcag ttctttaaga tcgtagtctt 300
gcctcttttg cctttcctca agatcgtatt tctcggtctc aagtttgaca atggcttccc 360
agagttcctg agctttgatg cgtagcctgt ctatgctcat attttctatc gccaggggct 420
tgagcctaat gctgagggag atacgtttct cttcctccag ctgctccttg gtc 473
<210> 122
<211> 773
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 122
gctgctcgcc gtccagttcg ttttcgagtt ccctgacacg ttgttccagc ttggcgatgg 60
ccttcttgcc tcccttgagg gcgttgtttt cggcttcgtc caacctgact tggagttcct 120
tgatttgcgt ttccagagcc ttgcggagct tctcctgggt ctgagcgtgg tcctgttctg 180
ccctgagttc atcagctaac ctagcggcat caaccattgc cttcttggcc ttctcttcgg 240
agttcttggc ttcgttgaga agttcgtcga ggtcagcatg aagtgtctgc aactctccct 300
caagcttgcg tttggcggct gaggcgctgg tagcttgggc agccaactcg ttgatctgtt 360
cgtgggcatc tccaagttct tgttcggctt ggcgcctgcc cctgtcggcc tgttcgagga 420
gagtgcgcga ctcctcgagc tcgtttccga gagcgttggc cctcctttcg gcgattccga 480
gttgttcacg agcatcgtcg cgtgcccttt gttcttcctc aagagcggtc tgtacgtcct 540
tgagttgttg ttggtatttc ttgatggtct tctgggcttc ggcgttagcc ttgttggcgt 600
ggtcgagagc gatttcgagt tcgttgatgt cggcttcaag cttcttcttc atgcgaagag 660
cctcagcctt acccttggct tcagcctcca agctggcttg catggagtcg agtgcccgtt 720
ggtggttctt cctggtgttc tcgaactcct cctccttttc ctggatccgc cgg 773
<210> 123
<211> 771
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 123
tggacgccat caagaagaaa atgcaggcga tgaagatgga gaaggacacg gccatggaca 60
aggccgacac ctgcgagggg caggccaagg acgctaacac ccgcgccgac aaaatccttg 120
aagatgtgag ggacctccaa aagaaactca accaggtaga aagtgatctc gaaaggacca 180
agagggaact cgagacgaaa accaccgaac tcgaagagaa ggagaaggcc aacaccaacg 240
ctgagagcga ggtcgcctcc ctcaacagga aagtccagat ggttgaagag gacttggaaa 300
gatctgaaga aaggtccggc accgcacaac aaaaactgtc cgaagcctcc cacgccgctg 360
atgaagcctc tcgtatgtgc aaagtattgg agaacaggtc acaacaggat gaggagagga 420
tggaccagct caccaaccag ctgaaagaag cccgactcct cgctgaagac gccgacggca 480
aatcggatga ggtatcaagg aagctggcct tcgttgaaga cgaactggaa gtagctgaag 540
atcgtgtcaa atctggagac tcgaagatca tggagcttga ggaggagttg aaagttgtcg 600
gtaacagctt gaaatctctc gaagtttcag aggagaaggc caaccagcga gtcgaagagt 660
acaaacgtca aatcaagcaa ctgactgtca agttgaagga ggctgaagct cgcgctgagt 720
tcgccgaaaa gacagtcaag aagttgcaga aagaggtgga ccggctggag g 771
<210> 124
<211> 257
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 124
tgcgggccct ggggcagaat cccacagaat ctgacgtgaa gaagttcacc caccagcaca 60
aaccagatga aagaatcagc ttcgaggtgt ttctcccgat ataccaagcc atatcgaagg 120
gtaggacgtc agacacagct gaagacttca tcgagggtct cagacacttt gacaaagatg 180
gaaatggctt catttcaaca gctgagcttc gccacttgct cacaactttg ggcgaaaaac 240
tgaccgacga cgaggtg 257
<210> 125
<211> 410
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 125
gccacctcca acgtgtttgc catgttcgat caggctcaga ttcaagaatt caaggaggca 60
ttcaacatga tcgaccagaa cagggacggc ttcgtggata aggaagacct ccatgacatg 120
ctcgcttccc taggtaagaa cccctcagac gagtatctcg aggggatgat gaacgaggcg 180
cctggtccca tcaacttcac aatgttcctc accctcttcg gtgagcggct tcagggaact 240
gatccggagg aggttatcaa gaacgcattt gggtgttttg acgaagacaa caacggattc 300
atcaacgagg aaagactgcg cgagctgctc acctccatgg gggacaggtt cactgatgaa 360
gacgtggacg aaatgtaccg agaggccccc atcaagaacg gcatgttcga 410
<210> 126
<211> 1021
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 126
tgttcatcct ggagcaggag gagtatcaga gagaaggtat tgaatggaag ttcatcgact 60
tcggacttga tcttcagccg accattgatc tcattgataa gccaatggga gtcatggctc 120
tcctggatga agaatgttgg ttccccaaag ccactgacaa gaccttcgtt gagaagctgg 180
tcggtgctca cagcgttcac cccaaattca tcaaaactga tttccgtgga gtcgccgact 240
ttgctgtcgt ccattatgcc ggaaaagtcg attattcggc ggcgcagtgg ctgatgaaga 300
acatggaccc tctgaacgaa aacgtcgtgc agctcctcca gaactcgcaa gatccgttcg 360
tcatccacat ctggaaggac gcagagatcg tcggcatggc tcaccaagct ctcagcgaca 420
ctcagtttgg agctcgtacc aggaagggta tgttccgaac cgtgtctcaa ctctacaaag 480
accagctgtc caaactcatg atcacacttc gcaacacgaa ccccaacttc gtccgttgca 540
tcctccccaa ccacgagaag agagctggca agatcgatgc tcctttggtg ctggatcagc 600
tcagatgcaa cggtgtgttg gaaggcatca gaatttgcag acaaggtttc ccgaatagaa 660
tcccattcca ggaattccgg caaagatacg agctcttaac tcccaatgtc atccccaaag 720
ggttcatgga cggtaaaaag gcttgcgaga agatgatcaa cgctctcgaa ctggacccta 780
atctctacag agttggtcag tccaagatat tcttcagagc tggagtctta gctcatctag 840
aagaagagcg cgactataag attactgatc tgatagccaa tttccgggct ttctgtaggg 900
gatatcttgc ccgaaggaac taccaaaagc gtcttcagca gctcaacgcc attcgtatta 960
tccagcgaaa ttgctcagct tacttgaagt tgaggaactg gcaatggtgg cggctgtaca 1020
c 1021
<210> 127
<211> 325
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 127
cggtcatcat ctccatgaac tcgtcgaagt caacagttcc ggaaccgtca gaatcaattt 60
cagcaatcat catgtcaagt tcttgggagg tgattttgtc gtcgagttcc ttcaggattt 120
ccctcaagac gtcagtggta atgtaaccgt tcccttcctt gtcgtagagc ctgaaggcct 180
ccctcagttc ttgctgcatg gcctcagcat cttgtgtctc atcttctgtc aggaaaccgg 240
cagccaaggc tacgaactcc tcaaattcaa gttgtccaga gccatcagcg tcgacctccg 300
caatgatctc ctccaggatc ttctt 325
<210> 128
<211> 463
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 128
cggtcatcat ctccatgaac tcgtcgaagt cgacagttcc ggatccgtca gagtcgatct 60
cctcgatgat catgtccagc tcctcgttgg tcagctgctc gtccaattca tgaaggattt 120
ctttgaggca ggaggtcggg atgtagccat taccttcttt gtcgtagaga cggaaggctt 180
ctcgcagctc tttctgcatg gcttcatcgt cttcctcaac aatgaacttg gctgccaacg 240
tgatgaactc ttcaaactcc agccttcccg atttgtcagc gtcaacttct tcgatgagtt 300
catcgagaat cttcttgttg aagggttgac ccatgagtct gaggatgtcg gccaccatgt 360
ccgtcgggat ggaacccgag tgatcccggt cgaaagcgtt caacgcgatg gtcatgatgg 420
ggataattcg gttaattctg ttagaccagt ccgattagtg acg 463
<210> 129
<211> 413
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 129
atgggtgaag gagggtgcct gctcagagca gtcctccagg atgacggcta tggacaacgc 60
ctcgaagaac gccgctgaga tgatcgacaa gctgaccttg acgttcaaca ggactcggca 120
agccgtcatc accagggagc tcatcgaaat catctccggt gcctctgctt tggagtaacg 180
tctcagctca cccagccacc tcccgtagat ccactagtgc tgcgagagac cgagtacctc 240
gttctattca ccctgtacat ttcttaatca atattattgg aattcgattc gatagtcgta 300
tgctgggaaa tatcttgttc atattcatga tacttgttca acattgttct ggtaaataat 360
ttatgtaata caggttgagt taccaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 413
<210> 130
<211> 449
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 130
gcagctggag gaagagaaac gtatctccct cagcattagg ctcaagcccc tggcgataga 60
aaatatgagc atagacaggc tacgcatcaa agctcaggaa ctctgggaag ccattgtcaa 120
acttgagacc gagaaatacg atcttgagga aaggcaaaag aggcaagact acgatcttaa 180
agaactgaag gaaagacaga agcaacaact tcggcacaaa gccttgaaaa aaggcttgga 240
ccctgaggcc ctcaccggca agtacccacc caaaatccaa gtcgcctcca aatatgaacg 300
aagagttgac accagatctt atgacgacaa gaaaaaactg tttgaaggcg gcatcctgga 360
gcggtataag gagttgatag aaaaggtgtg gaccgaaaaa gttgatcagt tcggcagtcg 420
agcccattcc aagcttccca gatggttcg 449
<210> 131
<211> 719
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 131
aggagttcga gaacaccagg aagaaccacc aacgggcact cgactccatg caagccagct 60
tggaggctga agccaagggt aaggctgagg ctcttcgcat gaagaagaag cttgaagccg 120
acatcaacga actcgaaatc gctctcgacc acgccaacaa ggctaacgcc gaagcccaga 180
agaccatcaa gaaataccaa caacaactca aggacgtaca gaccgctctt gaggaagaac 240
aaagggcacg cgacgatgct cgtgaacaac tcggaatcgc cgaaaggagg gccaacgctc 300
tcggaaacga gctcgaggag tcgcgcactc tcctcgaaca ggccgacagg ggcaggcgcc 360
aagccgaaca agaacttgga gatgcccacg aacagatcaa cgagttggct gcccaagcta 420
ccagcgcctc agccgccaaa cgcaagcttg agggagagtt gcagacactt catgctgacc 480
tcgacgaact tctcaacgaa gccaagaact ccgaagagaa ggccaagaag gcaatggttg 540
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agctccgcaa ggctctggaa acgcaaatca aggaactcca agtcaggttg gacgaagccg 660
aaaacaacgc cctcaaggga ggcaagaagg ccatcgccaa gctggaacaa cgtgtcagg 719
<210> 132
<211> 737
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 132
gcaggcgatg aagatggaga aggacacggc catggacaag gccgacacct gcgaggggca 60
ggccaaggac gctaacaccc gcgccgacaa aatccttgaa gatgtgaggg acctccaaaa 120
gaaactcaac caggtagaaa gtgatctcga aaggaccaag agggaactcg agacgaaaac 180
caccgaactc gaagagaagg agaaggccaa caccaacgct gagagcgagg tcgcctccct 240
caacaggaaa gtccagatgg ttgaagagga cttggaaaga tctgaagaaa ggtccggcac 300
cgcacaacaa aaactgtccg aagcctccca cgccgctgat gaagcctctc gtatgtgcaa 360
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gctggccttc gttgaagacg aactggaagt agctgaagat cgtgtcaaat ctggagactc 540
gaagatcatg gagcttgagg aggagttgaa agttgtcggt aacagcttga aatctctcga 600
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gactgtcaag ttgaaggagg ctgaagctcg cgctgagttc gccgaaaaga cagtcaagaa 720
gttgcagaaa gaggtgg 737
<210> 133
<211> 205
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 133
cagaatccca cagaatctga cgtgaagaag ttcacccacc agcacaaacc agatgaaaga 60
atcagcttcg aggtgtttct cccgatatac caagccatat cgaagggtag gacgtcagac 120
acagctgaag acttcatcga gggtctcaga cactttgaca aagatggaaa tggcttcatt 180
tcaacagctg agcttcgcca cttgc 205
<210> 134
<211> 326
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 134
ggaggcattc aacatgatcg accagaacag ggacggcttc gtggataagg aagacctcca 60
tgacatgctc gcttccctag gtaagaaccc ctcagacgag tatctcgagg ggatgatgaa 120
cgaggcgcct ggtcccatca acttcacaat gttcctcacc ctcttcggtg agcggcttca 180
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cggattcatc aacgaggaaa gactgcgcga gctgctcacc tccatggggg acaggttcac 300
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<210> 135
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 135
gacttgatct tcagccgacc attgatctca ttgataagcc aatgggagtc atggctctcc 60
tggatgaaga atgttggttc cccaaagcca ctgacaagac cttcgttgag aagctggtcg 120
gtgctcacag cgttcacccc aaattcatca aaactgattt ccgtggagtc gccgactttg 180
ctgtcgtcca ttatgccgga aaagtcgatt attcggcggc gcagtggctg atgaagaaca 240
tggaccctct gaacgaaaac gtcgtgcagc tcctccagaa ctcgcaagat ccgttcgtca 300
tccacatctg gaaggacgca gagatcgtcg gcatggctca ccaagctctc agcgacactc 360
agtttggagc tcgtaccagg aagggtatgt tccgaaccgt gtctcaactc tacaaagacc 420
agctgtccaa actcatgatc acacttcgca acacgaaccc caacttcgtc cgttgcatcc 480
tccccaacca cgagaagaga gctggcaaga tcgatgctcc tttggtgctg gatcagctca 540
gatgcaacgg tgtgttggaa ggcatcagaa tttgcagaca aggtttcccg aatagaatcc 600
cattccagga attccggcaa agatacgagc tcttaactcc caatgtcatc cccaaagggt 660
tcatggacgg taaaaaggct tgcgagaaga tgatcaacgc tctcgaactg gaccctaatc 720
tctacagagt tggtcagtcc aagatattct tcagagctgg agtcttagct catctagaag 780
aagagcgcga ctataagatt actgatctga tagccaattt ccgggctttc tgtaggggat 840
atcttgcccg aaggaactac caaaagcgtc ttcagcagct caacgccatt cgtattatcc 900
agcgaaattg ctcagcttac ttgaagttga ggaactggca atgg 944
<210> 136
<211> 318
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 136
atcctggagg agatcattgc ggaggtcgac gctgatggct ctggacaact tgaatttgag 60
gagttcgtag ccttggctgc cggtttcctg acagaagatg agacacaaga tgctgaggcc 120
atgcagcaag aactgaggga ggccttcagg ctctacgaca aggaagggaa cggttacatt 180
accactgacg tcttgaggga aatcctgaag gaactcgacg acaaaatcac ctcccaagaa 240
cttgacatga tgattgctga aattgattct gacggttccg gaactgttga cttcgacgag 300
ttcatggaga tgatgacc 318
<210> 137
<211> 423
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 137
atccccatca tgaccatcgc gttgaacgct ttcgaccggg atcactcggg ttccatcccg 60
acggacatgg tggccgacat cctcagactc atgggtcaac ccttcaacaa gaagattctc 120
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gaggagatcg actctgacgg atccggaact gtcgacttcg acgagttcat ggagatgatg 420
acc 423
<210> 138
<211> 252
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 138
ggtgaaggag ggtgcctgct cagagcagtc ctccaggatg acggctatgg acaacgcctc 60
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ctattcaccc tg 252
<210> 139
<211> 1110
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 139
gtctccgctc aagctggtca tcagacttca gctgagtcct ggggtaccgg tcgtgctgtg 60
gctcgtatcc cccgtgttcg cggaggtggt actcaccgct caggtcaggg tgcttttggc 120
aacatgtgtc gcggcggtag gatgttcgct cccactcgcc catggcgtcg ttggcaccgc 180
aagatcaacg ttaaccaaaa acgttatgcc gtcgtgtccg ccatcgctgc atccggcgtc 240
ccagccctcg tcatgtccaa aggacacatg gtgcaaagcg tccctgaatt cccccttgtt 300
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atcaaagcct ggcaagacat ccagaaagtg tacaagtcga agaggttccg tgctggtaag 420
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gatcagggtc tgaacagggc tttccgtaac attcccggcg tcgatttgat cgaagtgagc 540
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cagtcggcct tcgagaagtt ggacgccctc tacggcacct ggaagaagaa gtccaccctc 660
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aaggccccgg agatcaaggc tgtcctcagg aatcccaaga agaccatcgt acgacgagtg 780
cgcaaactga accctctccg caacaccagg gctatgctgc gtctcaaccc atacgctgct 840
gtcctcaaga ggaaggccat ccttgatcaa aggaagttga aactccagaa gctcgtagaa 900
gctgccaaga agggagatac caagctgtcg ccccgcgtcg agcgtcacct gaagatgatc 960
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<210> 140
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 140
atggccaatg ctaagcctat ttctaagaag aagaagtttg tgtctgacgg tgtcttcaaa 60
gccgaattga acgaatttct taccagagaa ctcgctgaag aggggtactc aggtgttgag 120
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<210> 141
<211> 789
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 141
atggctgttg gtaaaaataa gggtctatcg aaaggaggaa agaagggagt taaaaaaaag 60
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gggttgaaag gacgagtttt cgaagtttcg ctcgctgata tccaggagga cactgatgcc 240
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cagactctca tcgaagccaa cgttgacgtc aagaccaccg acggctacct cctgcgcgtc 420
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<210> 142
<211> 473
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 142
gaccaaggag cagctggagg aagagaaacg tatctccctc agcattaggc tcaagcccct 60
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 143
gggtctcagc tgaggcacat tccatctcgt cgcaaatctt tcctgcatct ctcctgggtg 60
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gccaagcgca aggtcgctcg ggcagaagaa gaaaagagat tggcggaaaa gaagaagcag 360
gaagaagaac gacgtgtgag ggaagcagaa gagaagaaac agagggaaat cgaagagaag 420
aggcgaaggc ttgaagaggc cgagaagaag agacaagcca tgatggctgc tctcaaggac 480
cagagcaaaa cgaagggacc caattttgtc gttaataaga aagccgaaac ccttggcatg 540
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gaggaaaggc aaaagaggca agactacgat cttaaagaac tgaaggaaag acagaagcaa 780
caacttcggc acaaagcctt gaaaaaaggc ttggaccctg aggccctcac cggcaagtac 840
ccacccaaaa tccaagtcgc ctccaaatat gaacgaagag ttgacaccag atcttatgac 900
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aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1463
<210> 144
<211> 773
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 144
ccggcggatc caggaaaagg aggaggagtt cgagaacacc aggaagaacc accaacgggc 60
actcgactcc atgcaagcca gcttggaggc tgaagccaag ggtaaggctg aggctcttcg 120
catgaagaag aagcttgaag ccgacatcaa cgaactcgaa atcgctctcg accacgccaa 180
caaggctaac gccgaagccc agaagaccat caagaaatac caacaacaac tcaaggacgt 240
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caacgagttg gctgcccaag ctaccagcgc ctcagccgcc aaacgcaagc ttgagggaga 480
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<210> 145
<211> 5446
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 145
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aagggcgtca aggaaatgtg cttgctggtc gacgatatct atacgtacaa cttcatatcc 180
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tcaccactag tggagggatc atggatcacg aagaagccag gcgaa 405
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<211> 470
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 152
tgtcgatggc ggtcttaaca tcccccattc caccaagagg ttccctgggt acgacagtga 60
gtctaaggaa ttcaacgctg aggtccacag gaagcacatt ttcggcattc acgtcgctga 120
ctacatgcgt cagctggctg aagaggatga cgatgcttac aagaagcagt tctcgcagta 180
tgtcaagaac ggagtcactg ctgacagcat tgaaagtatc tacaagaagg ctcacgaagc 240
aatccgagct gatccaactc gcaaaccact tgagaagaag gaagtcaaga agaagaggtg 300
gaaccgcgcc aagctttcct tgtctgaaag gaagaacacc atcaaccaaa agaaggcaac 360
ttatctcaag aaagtggaag ctggagaaat cgaataagtt tttatattcc tgacattacc 420
cattaaaggt ttcgttttaa cctaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 470
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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tgtcgatggc ggtcttaaca tcccccattc caccaagagg ttccctgggt acgacagtga 60
gtctaaggaa ttcaacgctg aggtccacag gaagcacatt ttcggcattc acgtcgctga 120
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aatccgagct gatccaactc gcaaaccact tgagaagaag gaagtcaaga agaagaggtg 300
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 154
gtcctacgtg tttccggaaa aacgtgcatt tcgcgtaccc ctcgtggtga tccgttttca 60
tagaaataat ccaaaatggc tcccaagggg aataatatga ttcccaatgg ccatttccac 120
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aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 745
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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aacgtgcatt tcgcgtaccc ctcgtggtga tccgttttca tagaaataat ccaaaatggc 60
tcccaagggg aataatatga ttcccaatgg ccatttccac aaggattggc agaggttcat 120
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agccggtctg tgcaaaggat tcgcgatgtc catcggaatc gctgtcgacc ccagaagaag 360
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 156
gccttattga acgtggtcga cagaaaactc ggtttctgag ctcatctcaa catggatatc 60
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aaaactgtaa aaaaaaagaa gaaaaaaaaa aaaaaa 576
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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ccttattgaa cgtggtcgac agaaaactcg gtttctgagc tcatctcaac atggatatcg 60
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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ctttcatttg tatagtacgg acgggtagtt tagttgtgtc ggttcatcgt aattcatcgg 60
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a 601
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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ggctgttgtc ggctggtcat atcccgtttt ccacgtggtg tgtcgagtta tttttcttgt 60
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<213> 豆荚草盲蝽
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 162
aatcccggat tcatcgtttt attgaattgt ttttcgaagt ttctggtatt atcgttaaat 60
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aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 865
<210> 163
<211> 792
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 163
ggttcctttc tcagattttg actttgccgt gttgtctctc ccaattttcc aaaatgggga 60
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aaaaaaaaaa aa 792
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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<211> 619
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 165
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aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 619
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 166
acgtttctct gctcattcgt gcagatttta aaacatgacc aactccaaag gttatcgtcg 60
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 167
caacgtacat gaaagtatac cgagtaggag acatcgtatc tatcaaaggt aatggagcag 60
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<220>
<221> misc_feature
<222> (662)..(665)
<223> n是a、c、g或t
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
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<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<220>
<221> misc_feature
<222> (662)..(665)
<223> n是a、c、g或t
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<400> 172
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gagtgcggaa aggggaacgg cgttccgtat cggtcaaggt gcaagcttcg gaaccggagg 120
acgaccgttg caaggtgcaa ggggcaggta tcttgtattt tcattgtgcg tgtcgacatc 180
taccaaactg agacttggag ttcgatattt tgacgatggg gccgggggcc ggaggcaaaa 240
cgacaaacac aggcaccgtg accgtgttcc ggtccctggc ctgcgttgcc ttacgttcac 300
atcttgttct tgcgctttct ctggttttac gataacccta ctacgagttt agtagagccg 360
atcccgtagc cgaagccaaa gcccaagcgc tccgtatccg agaacgcgga agagcacgaa 420
ctccccaaac ccctccgccc ctcccccgcg cgtatccgaa acacaaatgc agcgggcagt 480
acaggttttg gaaggggacg cgggcagtga gcgcaatgca agtaaatgtg attagctcat 540
ggctacgcag ccctgctttt tcagtttcgg ttcggatcgt tagggggtgt gggattggga 600
gcggattcaa tctggacagg aaacagctat gaccaaggtc acgccaagct ctgaattaac 660
cctcaggaaa gggactagtc cggcaggttg aaacgaactc gcccctaagc agtggtatca 720
gagcacagtg gttttttttt tttgtttttt ttcgtagaaa aaaatatgta ttaagtcaat 780
taattaaatc attggttttc tggcttcaca acaggtggca cgtgctgtgc tcggagaaat 840
ttatgaacta tgttctgttc ttcaatgagg aaagatgaga tgatccattc tcagacacat 900
tcagacagag gacaccaccg taagccctat ccacagtctg tccacgtaag gggatcgtgt 960
ccccttccat gggcagagca gggagagggc cgtaagcttg ttcttgcgtc atcaacatgt 1020
gggggtaatg ttggtcatag cgatgttcgg tacacaagag aaccacctgg tgtaatcatt 1080
acagcacagc aatactctgt gttttgtaag ataacaaaaa aggtacttaa gacgctgaac 1140
cattttctac gatcggaaaa caaaaaaaaa gaaaa 1175
<210> 173
<211> 1023
<212> DNA
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 173
tcagcgagat ccctaagaca acgcctgcca cgtgggagaa tatcggacac gcctccccag 60
agtgcggaaa ggggaacggc gttccgtatc ggtcaaggtg caagcttcgg aaccggagga 120
cgaccgttgc aaggtgcaag gggcaggtat cttgtatttt cattgtgcgt gtcgacatct 180
accaaactga gacttggagt tcgatatttt gacgatgggg ccgggggccg gaggcaaaac 240
gacaaacaca ggcaccgtga ccgtgttccg gtccctggcc tgcgttgcct tacgttcaca 300
tcttgttctt gcgctttctc tggttttacg ataaccctac tacgagttta gtagagccga 360
tcccgtagcc gaagccaaag cccaagcgct ccgtatccga gaacgcggaa gagcacgaac 420
tccccaaacc cctccgcccc tcccccgcgc gtatccgaaa cacaaatgca gcgggcagta 480
caggttttgg aaggggacgc gggcagtgag cgcaatgcaa gtaaatgtga ttagctcatg 540
gctacgcagc cctgcttttt cagtttcggt tcggatcgtt agggggtgtg ggattgggag 600
cggattcaat ctggacagga aacagctatg accaaggtca cgccaagctc tgaattaacc 660
ctcaggaaag ggactagtcc ggcaggttga aacgaactcg cccctaagca gtggtatcag 720
agcacagtgg tttttttttt ttgttttttt tcgtagaaaa aaatatgtat taagtcaatt 780
aattaaatca ttggttttct ggcttcacaa caggtggcac gtgctgtgct cggagaaatt 840
tatgaactat gttctgttct tcaatgagga aagatgagat gatccattct cagacacatt 900
cagacagagg acaccaccgt aagccctatc cacagtctgt ccacgtaagg ggatcgtgtc 960
cccttccatg ggcagagcag ggagagggcc gtaagcttgt tcttgcgtca tcaacatgtg 1020
ggg 1023
<210> 174
<211> 454
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 174
ccaagaaggc caagaagggg tttatgaccc ctgagaggaa gaagaaactt aggttattgc 60
tgagaaagaa agcagcagaa gaactgaaaa aagaacaaga acgcaaagct gccgaaagga 120
gacgtattat tgaagagaga tgcggaaaac caaaactcat tgatgaggca aatgaagagc 180
aggtgaggaa ctattgcaag ttatatcacg gtagaatagc taaactggag gaccagaaat 240
ttgatttgga ataccttgtc aaaaagaaag acatggagat cgccgaattg aacagtcaag 300
tcaacgacct caggggtaaa ttcgtcaaac ccactctcaa gaaagtatcc aaatacgaga 360
acaaatttgc taaactccaa aagaaagcag cagaattcaa tttccgtaat caactgaaag 420
ttgtaaagaa gaaggagttc accctggagg agga 454
<210> 175
<211> 431
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 175
ggtttatgac ccctgagagg aagaagaaac ttaggttatt gctgagaaag aaagcagcag 60
aagaactgaa aaaagaacaa gaacgcaaag ctgccgaaag gagacgtatt attgaagaga 120
gatgcggaaa accaaaactc attgatgagg caaatgaaga gcaggtgagg aactattgca 180
agttatatca cggtagaata gctaaactgg aggaccagaa atttgatttg gaataccttg 240
tcaaaaagaa agacatggag atcgccgaat tgaacagtca agtcaacgac ctcaggggta 300
aattcgtcaa acccactctc aagaaagtat ccaaatacga gaacaaattt gctaaactcc 360
aaaagaaagc agcagaattc aatttccgta atcaactgaa agttgtaaag aagaaggagt 420
tcaccctgga g 431
<210> 176
<211> 888
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 176
agcagtggta tcaacgcaga gtacgcgggg acatcgagga gaagaggcaa cgcctcgaag 60
aggctgaaaa gaaacgccag gccatgatgc aggccctcaa ggaccagaac aagaacaagg 120
ggcccaactt caccatcacc aagagggatg cttcatctaa cctttctgcc gctcagttgg 180
aacgcaacaa gaccaaggag caactcgagg aagagaagaa aatttccctt tccatccgca 240
tcaagccctt ggtcgttgat ggtctgggcg tagataaact ccgtctgaaa gcacaagaac 300
tttgggaatg catcgtcaag ttggagactg aaaagtacga cttggaagag aggcagaaac 360
gtcaagacta cgatctcaaa gagctgaaag aaagacagaa acaacagctg agacacaaag 420
ccttgaagaa gggtctagac ccagaagccc taaccggcaa atacccgcct aaaatccaag 480
tagcctccaa atatgaacgt cgtgttgaca cgaggtcgta tggagacaaa aagaagctat 540
tcgaaggggg attagaagaa atcattaaag agaccaatga aaagagctgg aaagagaaat 600
ttggacagtt cgattccaga caaaaggcaa gacttcccaa gtggttcggt gaacgtcctg 660
gcaaaaaacc tggagatccc gaaactccag aaggcgagga ggagggcaaa caagtcattg 720
atgaggatga cgacctcaag gagcctgtaa tcgaagctga aattgaagaa gaggaggaag 780
aagaggaagt cgaggtcgat gaagaagaag aggatgacga agaagaagaa gaagaagagt 840
gaatgccaaa ggcagaagat aatcatgaaa tcaacattag ataacgtc 888
<210> 177
<211> 404
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 177
caaggaccag aacaagaaca aggggcccaa cttcaccatc accaagaggg atgcttcatc 60
taacctttct gccgctcagt tggaacgcaa caagaccaag gagcaactcg aggaagagaa 120
gaaaatttcc ctttccatcc gcatcaagcc cttggtcgtt gatggtctgg gcgtagataa 180
actccgtctg aaagcacaag aactttggga atgcatcgtc aagttggaga ctgaaaagta 240
cgacttggaa gagaggcaga aacgtcaaga ctacgatctc aaagagctga aagaaagaca 300
gaaacaacag ctgagacaca aagccttgaa gaagggtcta gacccagaag ccctaaccgg 360
caaatacccg cctaaaatcc aagtagcctc caaatatgaa cgtc 404
<210> 178
<211> 1155
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 178
gctcttcaga atgaacttga agaatctcgt acactgttgg aacaagctga ccgtgcccgt 60
cgccaagcag aacaagaatt gggagatgct cacgaacaat tgaatgatct tggtgcacag 120
aatggttctc tgtctgccgc caagaggaaa ctggaaactg aactccaaac tctccattcc 180
gatcttgatg aacttctcaa tgaagccaag aactctgagg agaaggctaa gaaagccatg 240
gtcgatgcag ctcgtcttgc agatgaactg agagcagaac aagatcatgc acaaactcag 300
gagaaacttc gtaaagcctt agaatcacaa atcaaggacc ttcaagttcg tctcgacgag 360
gctgaagcta acgccctcaa aggaggtaag aaagcaatcg ctaaacttga acaacgcgtc 420
agggaattgg agaatgagtt agatggtgaa caaagacgac acgccgatgc tcaaaagaat 480
ttgagaaagt ccgaacgtcg catcaaggag ctcagcctcc aagctgaaga agaccgtaag 540
aaccacgaaa aaatgcaaga cttagtcgac aaacttcaac agaaaatcaa gacccacaag 600
aggcaaatag aagaagctga agaaatagcg gctctcaatt tggccaaatt ccgtaaagca 660
caacaggaat tggaagaagc agaagagcgt gcagaccttg ctgaacaagc aattgtcaaa 720
ttccgtacca agggacgttc tggatcagca gctaggggag ccagccctgc gcctcagcga 780
cagcgtccca cattcggaat gggagattca cttggaggtg ccttccctcc aaggttcgat 840
cttgcacccg actttgaatg aatctgacat tgtgttataa gtgtaaggtg aacattctat 900
cgcagtgtaa atatcatccc aatgcgaatc aattctacat tcagtttaag tcattctatc 960
tctcaaaata ataatagtgt catccattct cactatcaaa tcaagacaag agatgatgat 1020
cagagaacac gtatcacatc tacagcaaac cctcagtcct cggcatctct gataatattt 1080
tcaattatcg agattgatga tatcgggtgt tgaatgctga tgaatagaag gcgccctatg 1140
gaaataagag agaag 1155
<210> 179
<211> 523
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 179
gaatctcgta cactgttgga acaagctgac cgtgcccgtc gccaagcaga acaagaattg 60
ggagatgctc acgaacaatt gaatgatctt ggtgcacaga atggttctct gtctgccgcc 120
aagaggaaac tggaaactga actccaaact ctccattccg atcttgatga acttctcaat 180
gaagccaaga actctgagga gaaggctaag aaagccatgg tcgatgcagc tcgtcttgca 240
gatgaactga gagcagaaca agatcatgca caaactcagg agaaacttcg taaagcctta 300
gaatcacaaa tcaaggacct tcaagttcgt ctcgacgagg ctgaagctaa cgccctcaaa 360
ggaggtaaga aagcaatcgc taaacttgaa caacgcgtca gggaattgga gaatgagtta 420
gatggtgaac aaagacgaca cgccgatgct caaaagaatt tgagaaagtc cgaacgtcgc 480
atcaaggagc tcagcctcca agctgaagaa gaccgtaaga acc 523
<210> 180
<211> 865
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 180
ctaggagtat ctcctacgta attcggtgct tgagccaact gcagctactc acttttttcc 60
aggttcagtg gtagggacgc aaacacagct aaaatggcgg acgatgaggc aaagaaggca 120
aagcaggcgg aaatcgaccg caagagagcc gaggtccgca agcggatgga ggaagcctcc 180
aaggccaaga aggccaagaa aggtttcatg acgcctgaca gaaagaagaa gctcaggttg 240
ttgctgagga aaaaggctgc tgaggaattg aagaaggaac aggagaggaa agccgcggaa 300
aggagaagga tcatcgagga gaggtgtggc aaggctgttg atctcgatga cggaagtgaa 360
gagaaagtca aggcaacttt aaaaacctat cacgacagaa ttggaaaatt ggaggatgaa 420
aaatttgacc tggaatatat tgtaaaaaag aaagacttcg agatcgctga cctcaacagc 480
caggtgaatg acctccgtgg taaatttgtc aagccaacct tgaaaaaagt ctccaaatat 540
gagaacaaat tcgccaagct ccagaagaaa gcagctgaat tcaatttcag aaatcagctc 600
aaagttgtca agaagaagga attcaccttg gaagaagaag acaaggagcc gaagaaatcg 660
gagaaagccg aatggcagaa gaaatgaact cacatcacct cttcataata ttgtcccaca 720
cttctacaac cttcatcaaa taacttttat tcgagtaaac ttactgttac taacaaaatt 780
acaaaaccaa actcttatca tcaacgtagg caatgtgctc aacttatttc ttaaacatat 840
tgtccagcta tttattgaaa ttaaa 865
<210> 181
<211> 269
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 181
aagaagaagc tcaggttgtt gctgaggaaa aaggctgctg aggaattgaa gaaggaacag 60
gagaggaaag ccgcggaaag gagaaggatc atcgaggaga ggtgtggcaa ggctgttgat 120
ctcgatgacg gaagtgaaga gaaagtcaag gcaactttaa aaacctatca cgacagaatt 180
ggaaaattgg aggatgaaaa atttgacctg gaatatattg taaaaaagaa agacttcgag 240
atcgctgacc tcaacagcca ggtgaatga 269
<210> 182
<211> 553
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 182
aatgatggcg gctctcaagg accagagcaa atcgaaagga cccaacttca ccgtaaacaa 60
gaaaacagac ttgaacatga cgtcagctca aatggaaagg aacaagacta aggagcagct 120
ggaggaggag aagaagatct ctctgtcgtt ccgcatcaag ccgttggcca tcgagaacat 180
gagcatcaac gcactgcgcg ccaaggccca ggaactgtgg gactgcatcg tcaagctcga 240
aactgagaag tacgatctgg aggaacgcca gaagaggcag gactacgatc tcaaagaatt 300
gaaagaaaga caaaagcaac agctgaggca taaagccctc aaaaaaggtc tagaccctga 360
ggctctcaca ggaaagtacc caccaaaaat ccaagttgcc tccaaatatg aaagacgtgt 420
agatacaagg tcatacgacg acaagaagaa gctcttcgaa ggtggctggg acacattaac 480
atcagaaacc aatgagaaaa tatggaagag cagaaacgat cagttttcaa atcgtagcaa 540
ggctaaactg cca 553
<210> 183
<211> 470
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 183
atgatggcgg ctctcaagga ccagagcaaa tcgaaaggac ccaacttcac cgtaaacaag 60
aaaacagact tgaacatgac gtcagctcaa atggaaagga acaagactaa ggagcagctg 120
gaggaggaga agaagatctc tctgtcgttc cgcatcaagc cgttggccat cgagaacatg 180
agcatcaacg cactgcgcgc caaggcccag gaactgtggg actgcatcgt caagctcgaa 240
actgagaagt acgatctgga ggaacgccag aagaggcagg actacgatct caaagaattg 300
aaagaaagac aaaagcaaca gctgaggcat aaagccctca aaaaaggtct agaccctgag 360
gctctcacag gaaagtaccc accaaaaatc caagttgcct ccaaatatga aagacgtgta 420
gatacaaggt catacgacga caagaagaag ctcttcgaag gtggctggga 470
<210> 184
<211> 367
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 184
tgccttcgac cgtgaaaggt ctggaagtat cccaacagac atggtcgccg acatcctcag 60
gctcatggga cagcctttca acaagaagat cctcgacgaa ctcattgagg aagttgatgc 120
tgacaaatct ggccgtcttg agtttgacga attcgtgact ctggccgcca aattcattgt 180
tgaggaagac gatgaggcaa tgcagaagga attgaaggaa gctttcagat tatacgacaa 240
ggaaggtaac ggctacatcc ccacatcatg tctgaaggaa atcttaaggg aacttgacga 300
tcagctgaca aacgaggaac tcaacatgat gattgatgag atcgactctg acggatcagg 360
aactgtt 367
<210> 185
<211> 204
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 185
acatcctcag gctcatggga cagcctttca acaagaagat cctcgacgaa cttattgagg 60
aggttgatgc tgacaagtct ggccgtctag agtttgacga attcgtgact ctggccgcca 120
aattcattgt tgaggaagac gatgaggcaa tgcagaagga attgaaggaa gctttcagat 180
tatacgacaa ggaaggtaac ggct 204
<210> 186
<211> 221
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 186
cgtaaaaact ctgaccggca agaccatcac cttggaagtg gagccttccg ataccattga 60
aaacgtgaag gccaagatcc aagacaagga gggaattcct cccgaccagc agagacttat 120
cttcgctgga aagcaactgg aggatggcag aaccctgtcc gactacaaca tccaaaaaga 180
atctacactc cacttggttc tcagacttcg tggtggaact a 221
<210> 187
<211> 221
<212> DNA
<213> 褐飞虱
<400> 187
cgtaaaaact ctgaccggca agaccatcac cttggaagtg gagccttccg ataccattga 60
aaacgtgaag gccaagatcc aagacaagga gggaattcct cccgaccagc agagacttat 120
cttcgctgga aagcaactgg aggatggcag aaccctgtcc gactacaaca tccaaaaaga 180
atctacactc cacttggttc tcagacttcg tggtggaact a 221
<210> 188
<211> 759
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 188
atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
ggagaagacg gcgacggtac cgaagacgaa aagaccgacg acggtttgac caccgaaggc 660
gaatcggtcg cgggcgatct aacggacgcg acggaagacg cgcagagcga caacgagata 720
ctcgaaccag aacccgtggt tgaacccgaa ccagaacca 759
<210> 189
<211> 759
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 189
atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
ggagaagacg gcgacggtac cgaagacgaa aagaccgacg acggtttgac caccgaaggc 660
gaatcggtcg cgggcgatct aacggacgcg acggaagacg cgcagagcga caacgagata 720
ctcgaaccag aacccgtggt tgaacccgaa ccagaacca 759
<210> 190
<211> 759
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 190
atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
ggagaagacg gcgacggtac cgaagacgaa aagaccgacg acggtttgac caccgaaggc 660
gaatcggtcg cgggcgatct aacggacgcg acggaagacg cgcagagcga caacgagata 720
ctcgaaccag aacccgtggt tgaacccgaa ccagaacca 759
<210> 191
<211> 759
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 191
atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
ggagaagacg gcgacggtac cgaagacgaa aagaccgacg acggtttgac caccgaaggc 660
gaatcggtcg cgggcgatct aacggacgcg acggaagacg cgcagagcga caacgagata 720
ctcgaaccag aacccgtggt tgaacccgaa ccagaacca 759
<210> 192
<211> 759
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 192
atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
ggagaagacg gcgacggtac cgaagacgaa aagaccgacg acggtttgac caccgaaggc 660
gaatcggtcg cgggcgatct aacggacgcg acggaagacg cgcagagcga caacgagata 720
ctcgaaccag aacccgtggt tgaacccgaa ccagaacca 759
<210> 193
<211> 759
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 193
atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
ggagaagacg gcgacggtac cgaagacgaa aagaccgacg acggtttgac caccgaaggc 660
gaatcggtcg cgggcgatct aacggacgcg acggaagacg cgcagagcga caacgagata 720
ctcgaaccag aacccgtggt tgaacccgaa ccagaacca 759
<210> 194
<211> 759
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 194
atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
ggagaagacg gcgacggtac cgaagacgaa aagaccgacg acggtttgac caccgaaggc 660
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<210> 195
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<212> DNA
<213> 豌豆蚜
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atggccgacg atgaagctaa gaaagcaaaa caggcggaaa tcgaccgcaa gagggccgaa 60
gtgcgcaagc gtatggaaga ggcgtccaag gccaagaagg ccaagaaggg tttcatgacc 120
ccagacagaa agaagaaact ccgtctgttg ttgaaaaaaa aggcggccga agagttgaag 180
aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
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<212> DNA
<213> 豌豆蚜
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<212> DNA
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<212> DNA
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<211> 759
<212> DNA
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<400> 199
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aaagaacaag aacgcaaagc tgccgaacga aggcggatca tcgaagagcg gtgcggacaa 240
ccgaagaaca tcgacgacgc cggcgaagag gagcttgcgg aaatctgcga agaactatgg 300
aaacgggttt acaccgtaga gggcataaaa tttgacttgg aaagggatat caggatgaaa 360
gttttcgaga tcagcgaatt gaacagccaa gtcaatgact tacgaggaaa attcgtcaaa 420
ccaacattga agaaggtttc caaatacgaa aacaaattcg caaaactcca aaagaaagcg 480
gcggagttca acttcagaaa ccaactgaaa gtagtgaaga aaaaggagtt caccttggaa 540
gaagaagaca aagagaaaaa acccgattgg tccaaaaagg gagacgaaaa gaagggcgaa 600
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gaatcggtcg cgggcgatct aacggacgcg acggaagacg cgcagagcga caacgagata 720
ctcgaaccag aacccgtggt tgaacccgaa ccagaacca 759
<210> 200
<211> 541
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 200
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acctttgggt gaaaagaatg cgagtattaa ggcggttgct taaaaaatac cgtgaagcaa 300
agaaaattga caaccatctt taccatcagt tatacatgaa ggctaagggt aatgttttca 360
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a 541
<210> 201
<211> 541
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 201
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agccagtagc tgtacactct agggctcgtg cacgtaaaaa tgcagatgcc agaagaaaag 180
gtcgtcattg tggttttggt aaaaggaagg gtactgctaa tgctcgaaca cctcaaaaag 240
acctttgggt gaaaagaatg cgagtattaa ggcggttgct taaaaaatac cgtgaagcaa 300
agaaaattga caaccatctt taccatcagt tatacatgaa ggctaagggt aatgttttca 360
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a 541
<210> 202
<211> 823
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 202
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<210> 203
<211> 823
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 203
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ctttccagca aagatcaaac gttgctggtc tggtgggata ccttccttgt cttggatctt 780
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<210> 204
<211> 172
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 204
aagacttgct tcatcctact gcaattgaag aacgcaggaa acacaaatta aagcgccttg 60
ttcaacaccc aaactctttt ttcatggatg tcaaatgccc tggatgttat aaaattacaa 120
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<210> 205
<211> 172
<212> DNA
<213> 豌豆蚜
<400> 205
aagacttgct tcatcctact gcaattgaag aacgcaggaa acacaaatta aagcgccttg 60
ttcaacaccc aaactctttt ttcatggatg tcaaatgccc tggatgttat aaaattacaa 120
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<210> 206
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 206
cgaaccatct gggaagcttg gaatg 25
<210> 207
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 207
gcagctggag gaagagaaac gtatc 25
<210> 208
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 208
gcgtaatacg actcactata ggcgaaccat ctgggaagct tggaatg 47
<210> 209
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 209
gcgtaatacg actcactata ggcagctgga ggaagagaaa cgtatc 46
<210> 210
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 210
agttcgagaa caccaggaag 20
<210> 211
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 211
cctgacacgt tgttccagct tg 22
<210> 212
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 212
gcgtaatacg actcactata ggaggagttc gagaacacca ggaag 45
<210> 213
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 213
gcgtaatacg actcactata ggcctgacac gttgttccag cttg 44
<210> 214
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 214
gcaggcgatg aagatggaga 20
<210> 215
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 215
ccacctcttt ctgcaacttc ttga 24
<210> 216
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 216
gcgtaatacg actcactata gggcaggcga tgaagatgga ga 42
<210> 217
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 217
gcgtaatacg actcactata ggccacctct ttctgcaact tcttga 46
<210> 218
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 218
cagaatccca cagaatctga cgtga 25
<210> 219
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 219
gcaagtggcg aagctcagct 20
<210> 220
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 220
gcgtaatacg actcactata ggcagaatcc cacagaatct gacgtga 47
<210> 221
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 221
gcgtaatacg actcactata ggcaagtggc gaagctcagc t 41
<210> 222
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 222
cgtgtttgcc atgttcgatc a 21
<210> 223
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 223
ggtacatttc gtccacgtct tca 23
<210> 224
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 224
gcgtaatacg actcactata ggcgtgtttg ccatgttcga tca 43
<210> 225
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 225
gcgtaatacg actcactata ggtacatttc gtccacgtct tca 43
<210> 226
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 226
gacttgatct tcagccgacc att 23
<210> 227
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 227
ccattgccag ttcctcaact tca 23
<210> 228
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 228
gcgtaatacg actcactata ggacttgatc ttcagccgac catt 44
<210> 229
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 229
gcgtaatacg actcactata ggccattgcc agttcctcaa cttca 45
<210> 230
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 230
cgcaatgatc tcctccagga t 21
<210> 231
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 231
ggtcatcatc tccatgaact cgtc 24
<210> 232
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 232
gcgtaatacg actcactata ggcgcaatga tctcctccag gat 43
<210> 233
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 233
gcgtaatacg actcactata gggtcatcat ctccatgaac tcgtc 45
<210> 234
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 234
cgtcactaat cggactggtc taacag 26
<210> 235
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 235
ggtcatcatc tccatgaact cgtc 24
<210> 236
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 236
gcgtaatacg actcactata ggcgtcacta atcggactgg tctaacag 48
<210> 237
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 237
gcgtaatacg actcactata gggtcatcat ctccatgaac tcgtc 45
<210> 238
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 238
ggtgaaggag ggtgcctgct cag 23
<210> 239
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 239
cagggtgaat agaacgaggt actcg 25
<210> 240
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 240
aatacgactc actatagggc gctatgaaat tccaagcaca 40
<210> 241
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 241
gcgtaatacg actcactata ggcagggtga atagaacgag gtactcg 47
<210> 242
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 242
ctcaacgaag gtcttgtcag tggctttgg 29
<210> 243
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 243
ttcgcctggc ttcttcgtga 20
<210> 244
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 244
gcgtaatacg actcactata ggccacgccg acttaattca ttcc 44
<210> 245
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 245
gcgtaatacg actcactata ggttcgcctg gcttcttcgt ga 42
<210> 246
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 246
tgtcgatggc ggtcttaaca tc 22
<210> 247
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 247
tctccagctt ccactttctt gaga 24
<210> 248
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 248
gcgtaatacg actcactata ggtgtcgatg gcggtcttaa catc 44
<210> 249
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 249
gcgtaatacg actcactata ggtctccagc ttccactttc ttgaga 46
<210> 250
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 250
aacgtgcatt tcgcgtaccc 20
<210> 251
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 251
tgatgggcat aactggcagg 20
<210> 252
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 252
gcgtaatacg actcactata ggaacgtgca tttcgcgtac cc 42
<210> 253
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 253
gcgtaatacg actcactata ggtgatgggc ataactggca gg 42
<210> 254
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 254
ccttattgaa cgtggtcgac ag 22
<210> 255
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 255
ctgatgtagt ccttgaggag 20
<210> 256
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 256
gcgtaatacg actcactata ggccttattg aacgtggtcg acag 44
<210> 257
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 257
gcgtaatacg actcactata ggctgatgta gtccttgagg ag 42
<210> 258
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 258
gtacggacgg gtagtttagt tgtgtc 26
<210> 259
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 259
ttgccaagtg ccaagtcacg 20
<210> 260
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 260
gcgtaatacg actcactata gggtacggac gggtagttta gttgtgtc 48
<210> 261
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 261
gcgtaatacg actcactata ggttgccaag tgccaagtca cg 42
<210> 262
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 262
ctgttgtcgg ctggtcatat cc 22
<210> 263
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 263
taacgtaacg catcgccacc 20
<210> 264
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 264
gcgtaatacg actcactata ggctgttgtc ggctggtcat atcc 44
<210> 265
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 265
gcgtaatacg actcactata ggtaacgtaa cgcatcgcca cc 42
<210> 266
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 266
agccctcatc cgtgatttgg 20
<210> 267
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 267
gatccggcct caatttgacg 20
<210> 268
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 268
gcgtaatacg actcactata ggagccctca tccgtgattt gg 42
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<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 269
gcgtaatacg actcactata gggatccggc ctcaatttga cg 42
<210> 270
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 270
acgtttctct gctcattcgt gc 22
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 271
cttgtacaaa gtgtgcaggg 20
<210> 272
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 272
gcgtaatacg actcactata ggacgtttct ctgctcattc gtgc 44
<210> 273
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 273
gcgtaatacg actcactata ggcttgtaca aagtgtgcag gg 42
<210> 274
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 274
ggttttcttc ttgcccgaat cg 22
<210> 275
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 275
tttggggttc ggcttggttg 20
<210> 276
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 276
gcgtaatacg actcactata ggggttttct tcttgcccga atcg 44
<210> 277
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 277
gcgtaatacg actcactata ggtttggggt tcggcttggt tg 42
<210> 278
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 278
tcagcgagat ccctaagaca acg 23
<210> 279
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 279
ccccacatgt tgatgacgca 20
<210> 280
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 280
gcgtaatacg actcactata ggtcagcgag atccctaaga caacg 45
<210> 281
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 281
gcgtaatacg actcactata ggccccacat gttgatgacg ca 42
<210> 282
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 282
ggtttatgac ccctgagagg aag 23
<210> 283
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 283
ctccagggtg aactccttct tc 22
<210> 284
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 284
gcgtaatacg actcactata ggtttatgac ccctgagagg aag 43
<210> 285
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 285
gcgtaatacg actcactata ggctccaggg tgaactcctt cttc 44
<210> 286
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 286
caaggaccag aacaagaaca aggg 24
<210> 287
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 287
gacgttcata tttggaggct acttgg 26
<210> 288
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 288
gcgtaatacg actcactata ggcaaggacc agaacaagaa caaggg 46
<210> 289
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 289
gcgtaatacg actcactata ggacgttcat atttggaggc tacttgg 47
<210> 290
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 290
aatctcgtac actgttggaa caagc 25
<210> 291
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 291
ggttcttacg gtcttcttca gcttg 25
<210> 292
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 292
gcgtaatacg actcactata ggaatctcgt acactgttgg aacaagc 47
<210> 293
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 293
gcgtaatacg actcactata ggttcttacg gtcttcttca gcttg 45
<210> 294
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 294
aagaagaagc tcaggttgtt gc 22
<210> 295
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 295
tcattcacct ggctgttgag 20
<210> 296
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 296
gcgtaatacg actcactata ggaagaagaa gctcaggttg ttgc 44
<210> 297
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 297
gcgtaatacg actcactata ggtcattcac ctggctgttg ag 42
<210> 298
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 298
acatcctcag gctcatggga 20
<210> 299
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 299
agccgttacc ttccttgtcg 20
<210> 300
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 300
gcgtaatacg actcactata ggacatcctc aggctcatgg ga 42
<210> 301
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 301
gcgtaatacg actcactata ggagccgtta ccttccttgt cg 42
<210> 302
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 302
acatcctcag gctcatggga 20
<210> 303
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 303
agccgttacc ttccttgtcg 20
<210> 304
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 304
gcgtaatacg actcactata ggacatcctc aggctcatgg ga 42
<210> 305
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 305
gcgtaatacg actcactata ggagccgtta ccttccttgt cg 42
<210> 306
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 306
cgtaaaaact ctgaccggca agac 24
<210> 307
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 307
tagttccacc acgaagtctg agaacc 26
<210> 308
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 308
gcgtaatacg actcactata ggcgtaaaaa ctctgaccgg caagac 46
<210> 309
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 309
gcgtaatacg actcactata ggtagttcca ccacgaagtc tgagaacc 48
<210> 310
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 310
atggccgacg atgaagctaa g 21
<210> 311
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 311
tggttgtggt tctggttcgg 20
<210> 312
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 312
gcgtaatacg actcactata ggatggccga cgatgaagct aag 43
<210> 313
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 313
gcgtaatacg actcactata ggtggttctg gttcgggttc aa 42
<210> 314
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 314
cggtaatgcg atgcggtaag 20
<210> 315
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 315
tcatcttctc gggcgtatgc 20
<210> 316
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 316
gcgtaatacg actcactata ggcggtaatg cgatgcggta ag 42
<210> 317
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 317
gcgtaatacg actcactata ggtcatcttc tcgggcgtat gc 42
<210> 318
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 318
tttggaagtt gagtcatcag attcc 25
<210> 319
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 319
gttgtagtcg gaaagggtac gtcc 24
<210> 320
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 320
gcgtaatacg actcactata ggtttggaag ttgagtcatc agattcc 47
<210> 321
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 321
gcgtaatacg actcactata gggttgtagt cggaaagggt acgtcc 46
<210> 322
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 322
aagacttgct tcatcctact gca 23
<210> 323
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 323
attgtggaac atccggtaca 20
<210> 324
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 324
gcgtaatacg actcactata ggaagacttg cttcatccta ctgca 45
<210> 325
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 325
gcgtaatacg actcactata ggattgtgga acatccggta ca 42
<210> 326
<211> 424
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 326
Met Ile Pro Pro Thr Ser Arg Pro Gln Val Thr Val Tyr Ser Asp Lys
1 5 10 15
Asn Glu Ala Thr Gly Thr Leu Leu Asn Leu Pro Ala Val Phe Asn Ala
20 25 30
Pro Ile Arg Pro Asp Val Val Asn Phe Val His Gln Asn Val Ala Lys
35 40 45
Asn His Arg Gln Pro Tyr Cys Val Ser Ala Gln Ala Gly His Gln Thr
50 55 60
Ser Ala Glu Ser Trp Gly Thr Gly Arg Ala Val Ala Arg Ile Pro Arg
65 70 75 80
Val Arg Gly Gly Gly Thr His Arg Ser Gly Gln Gly Ala Phe Gly Asn
85 90 95
Met Cys Arg Gly Gly Arg Met Phe Ala Pro Thr Arg Pro Trp Arg Arg
100 105 110
Trp His Arg Lys Ile Asn Val Asn Gln Lys Arg Tyr Ala Val Val Ser
115 120 125
Ala Ile Ala Ala Ser Gly Val Pro Ala Leu Val Met Ser Lys Gly His
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Pro Leu Ile Ile Tyr Asp Gln Asp Gln Gly Leu Asn Arg Ala Phe Arg
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Asn Ile Pro Gly Val Asp Leu Ile Glu Val Ser Arg Leu Asn Leu Leu
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Pro Phe Leu Ser Ser Gly Met Val Ser Val Pro Gly Val Asp Asp Gly
225 230 235 240
Val Asp Phe Gln Ala Thr Ile Ala Ser Met Ser Ile Met Gly Met Thr
245 250 255
Asn Asp Asp Leu Ser Ala Leu Phe Arg Ile Val Ser Ala Val Met Leu
260 265 270
Phe Gly Ser Met Gln Phe Lys Gln Glu Arg Asn Ser Asp Gln Ala Thr
275 280 285
Leu Pro Asp Asn Thr Val Ala Gln Lys Ile Ala His Leu Leu Gly Leu
290 295 300
Ser Ile Thr Glu Met Thr Lys Ala Phe Leu Arg Pro Arg Ile Lys Val
305 310 315 320
Gly Arg Asp Phe Val Thr Lys Ala Gln Thr Lys Glu Gln Val Glu Phe
325 330 335
Ala Val Glu Ala Ile Ser Lys Ala Cys Tyr Glu Arg Met Phe Arg Trp
340 345 350
Leu Val Asn Arg Ile Asn Arg Ser Leu Asp Arg Thr Lys Arg Gln Gly
355 360 365
Ala Ser Phe Ile Gly Ile Leu Asp Met Ala Gly Phe Glu Ile Phe Glu
370 375 380
Ile Asn Ser Phe Glu Gln Leu Cys Ile Asn Tyr Thr Asn Glu Lys Leu
385 390 395 400
Gln Gln Leu Phe Asn His Thr Met Phe Ile Leu Glu Gln Glu Glu Tyr
405 410 415
Gln Arg Glu Gly Ile Glu Trp Lys Phe Ile Asp Phe Gly Leu Asp Leu
420 425 430
Gln Pro Thr Ile Asp Leu Ile Asp Lys Pro Met Gly Val Met Ala Leu
435 440 445
Leu Asp Glu Glu Cys Trp Phe Pro Lys Ala Thr Asp Lys Thr Phe Val
450 455 460
Glu Lys Leu Val Gly Ala His Ser Val His Pro Lys Phe Ile Lys Thr
465 470 475 480
Asp Phe Arg Gly Val Ala Asp Phe Ala Val Val His Tyr Ala Gly Lys
485 490 495
Val Asp Tyr Ser Ala Ala Gln Trp Leu Met Lys Asn Met Asp Pro Leu
500 505 510
Asn Glu Asn Val Val Gln Leu Leu Gln Asn Ser Gln Asp Pro Phe Val
515 520 525
Ile His Ile Trp Lys Asp Ala Glu Ile Val Gly Met Ala His Gln Ala
530 535 540
Leu Ser Asp Thr Gln Phe Gly Ala Arg Thr Arg Lys Gly Met Phe Arg
545 550 555 560
Thr Val Ser Gln Leu Tyr Lys Asp Gln Leu Ser Lys Leu Met Ile Thr
565 570 575
Leu Arg Asn Thr Asn Pro Asn Phe Val Arg Cys Ile Leu Pro Asn His
580 585 590
Glu Lys Arg Ala Gly Lys Ile Asp Ala Pro Leu Val Leu Asp Gln Leu
595 600 605
Arg Cys Asn Gly Val Leu Glu Gly Ile Arg Ile Cys Arg Gln Gly Phe
610 615 620
Pro Asn Arg Ile Pro Phe Gln Glu Phe Arg Gln Arg Tyr Glu Leu Leu
625 630 635 640
Thr Pro Asn Val Ile Pro Lys Gly Phe Met Asp Gly Lys Lys Ala Cys
645 650 655
Glu Lys Met Ile Asn Ala Leu Glu Leu Asp Pro Asn Leu Tyr Arg Val
660 665 670
Gly Gln Ser Lys Ile Phe Phe Arg Ala Gly Val Leu Ala His Leu Glu
675 680 685
Glu Glu Arg Asp Tyr Lys Ile Thr Asp Leu Ile Ala Asn Phe Arg Ala
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Phe Cys Arg Gly Tyr Leu Ala Arg Arg Asn Tyr Gln Lys Arg Leu Gln
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Gln Leu Asn Ala Ile Arg Ile Ile Gln Arg Asn Cys Ser Ala Tyr Leu
725 730 735
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740 745 750
Leu Leu Glu Val Thr Lys Gln Glu Glu Lys Leu Thr Gln Lys Glu Asp
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770 775 780
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Leu Ala Glu Gln Leu Gln Ala Glu Val Glu Leu Cys Ala Glu Ala Glu
805 810 815
Glu Met Arg Ala Arg Leu Ala Val Arg Lys Gln Glu Leu Glu Glu Ile
820 825 830
Leu His Asp Leu Glu Ala Arg Ile Glu Glu Glu Glu Gln Arg Asn Thr
835 840 845
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850 855 860
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885 890 895
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1010 1015 1020
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Glu Lys Ala Ala Arg Ala Lys Ala Glu Lys Gln Lys Arg Asp Leu
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Ser Glu Arg Lys Arg Lys Gln Ala Glu Ser Ser Leu Gln Glu Leu
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Ser Ser Arg Leu Leu Glu Met Glu Arg Thr Lys Ala Glu Leu Gln
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Glu Arg Val Gln Lys Leu Ser Ala Glu Ala Asp Ser Val Asn Gln
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Gln Leu Glu Ala Ala Glu Leu Lys Ala Ser Ala Ala Leu Lys Ala
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Ser Gly Thr Leu Glu Thr Gln Leu Gln Glu Ala Gln Val Leu Leu
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Glu Glu Glu Thr Arg Gln Lys Leu Ser Leu Thr Thr Lys Leu Lys
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Gly Leu Glu Ser Glu Arg Asp Ala Leu Lys Glu Gln Leu Tyr Glu
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Glu Asp Glu Gly Arg Lys Asn Leu Glu Lys Gln Met Ala Ile Leu
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Asn Gln Gln Val Ala Glu Ser Lys Lys Lys Ser Glu Glu Glu Thr
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Asn Asp Lys Leu Glu Lys Gly Lys Lys Lys Leu Gln Ser Glu Leu
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Glu Leu Glu Lys Lys Gln Arg Asn Phe Asp Lys Val Leu Ala Glu
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Glu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Ile Thr His Glu Arg Asp Ala Ala
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Glu Leu Gln Ala Ala Ala Lys Glu Ala Glu Arg Lys Trp Lys Gly
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Glu Lys Lys Arg Leu Glu Ala Gln Cys Ser Gly Leu Glu Glu Glu
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Leu Glu Glu Glu Leu Ser Asn Asn Glu Ala Leu Gln Asp Lys Ala
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Arg Lys Ala Gln Leu Ser Val Glu Gln Leu Asn Ala Glu Leu Ala
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Glu Lys Leu Leu Leu Gln Lys Gly Asn Arg Lys Leu Asp Lys Lys
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Asp Gln Tyr Lys Glu Gln Val Glu Lys Ile Asn Val Arg Val Lys
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Glu Lys Thr Gln Lys Arg Lys Ala Leu Arg Glu Leu Glu Asp Leu
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1820 1825 1830
Asn Lys Leu Arg Arg Gly Gly Gly Ile Ser Gly Ile Ser Ser Arg
1835 1840 1845
Leu Gly Gly Ser Lys Arg Gly Ser Ile Pro Gly Glu Asp Ser Gln
1850 1855 1860
Gly Leu Asn Asn Thr Thr Asp Glu Ser Val Asp Gly Asp Asp Ile
1865 1870 1875
Ser Asn Pro
1880
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<211> 108
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 336
Lys Lys Ile Leu Glu Glu Ile Ile Ala Glu Val Asp Ala Asp Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gln Leu Glu Phe Glu Glu Phe Val Ala Leu Ala Ala Gly Phe Leu
20 25 30
Thr Glu Asp Glu Thr Gln Asp Ala Glu Ala Met Gln Gln Glu Leu Arg
35 40 45
Glu Ala Phe Arg Leu Tyr Asp Lys Glu Gly Asn Gly Tyr Ile Thr Thr
50 55 60
Asp Val Leu Arg Glu Ile Leu Lys Glu Leu Asp Asp Lys Ile Thr Ser
65 70 75 80
Gln Glu Leu Asp Met Met Ile Ala Glu Ile Asp Ser Asp Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Val Asp Phe Asp Glu Phe Met Glu Met Met Thr
100 105
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<211> 141
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 337
Ile Pro Ile Met Thr Ile Ala Leu Asn Ala Phe Asp Arg Asp His Ser
1 5 10 15
Gly Ser Ile Pro Thr Asp Met Val Ala Asp Ile Leu Arg Leu Met Gly
20 25 30
Gln Pro Phe Asn Lys Lys Ile Leu Asp Glu Leu Ile Glu Glu Val Asp
35 40 45
Ala Asp Lys Ser Gly Arg Leu Glu Phe Glu Glu Phe Ile Thr Leu Ala
50 55 60
Ala Lys Phe Ile Val Glu Glu Asp Asp Glu Ala Met Gln Lys Glu Leu
65 70 75 80
Arg Glu Ala Phe Arg Leu Tyr Asp Lys Glu Gly Asn Gly Tyr Ile Pro
85 90 95
Thr Ser Cys Leu Lys Glu Ile Leu His Glu Leu Asp Glu Gln Leu Thr
100 105 110
Asn Glu Glu Leu Asp Met Ile Ile Glu Glu Ile Asp Ser Asp Gly Ser
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Gly Thr Val Asp Phe Asp Glu Phe Met Glu Met Met Thr
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 338
Trp Val Lys Glu Gly Ala Cys Ser Glu Gln Ser Ser Arg Met Thr Ala
1 5 10 15
Met Asp Asn Ala Ser Lys Asn Ala Ala Glu Met Ile Asp Lys Leu Thr
20 25 30
Leu Thr Phe Asn Arg Thr Arg Gln Ala Val Ile Thr Arg Glu Leu Ile
35 40 45
Glu Ile Ile Ser Gly Ala Ser Ala Leu Glu
50 55
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 339
Met Val Arg Met Asn Val Leu Ser Asp Ala Leu Lys Ser Ile Asn Asn
1 5 10 15
Ala Glu Lys Arg Gly Lys Arg Gln Val Leu Leu Arg Pro Cys Ser Lys
20 25 30
Val Ile Ile Lys Phe Leu Thr Val Met Met Lys Lys Gly Tyr Ile Gly
35 40 45
Glu Phe Glu Ile Val Asp Asp His Arg Ser Gly Lys Ile Val Val Asn
50 55 60
Leu Asn Gly Arg Leu Asn Lys Cys Gly Val Ile Ser Pro Arg Phe Asp
65 70 75 80
Val Pro Ile Thr Gln Ile Glu Lys Trp Thr Asn Asn Leu Leu Pro Ser
85 90 95
Arg Gln Phe Gly Tyr Val Val Leu Thr Thr Ser Gly Gly Ile Met Asp
100 105 110
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Phe Phe
130
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 340
Val Asp Gly Gly Leu Asn Ile Pro His Ser Thr Lys Arg Phe Pro Gly
1 5 10 15
Tyr Asp Ser Glu Ser Lys Glu Phe Asn Ala Glu Val His Arg Lys His
20 25 30
Ile Phe Gly Ile His Val Ala Asp Tyr Met Arg Gln Leu Ala Glu Glu
35 40 45
Asp Asp Asp Ala Tyr Lys Lys Gln Phe Ser Gln Tyr Val Lys Asn Gly
50 55 60
Val Thr Ala Asp Ser Ile Glu Ser Ile Tyr Lys Lys Ala His Glu Ala
65 70 75 80
Ile Arg Ala Asp Pro Thr Arg Lys Pro Leu Glu Lys Lys Glu Val Lys
85 90 95
Lys Lys Arg Trp Asn Arg Ala Lys Leu Ser Leu Ser Glu Arg Lys Asn
100 105 110
Thr Ile Asn Gln Lys Lys Ala Thr Tyr Leu Lys Lys Val Glu Ala Gly
115 120 125
Glu Ile Glu
130
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 341
Met Ala Pro Lys Gly Asn Asn Met Ile Pro Asn Gly His Phe His Lys
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20 25 30
Leu Arg Arg Arg Asn Lys Arg Leu Glu Lys Ala Gln Arg Leu Ala Pro
35 40 45
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50 55 60
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Lys Arg Ala Gly Leu Cys Lys Gly Phe Ala Met Ser Ile Gly Ile Ala
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100 105 110
Val Gln Arg Leu Lys Glu Tyr Arg Ala Lys Leu Ile Leu Phe Pro His
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Lys Val Ala Thr Gln Gln Pro Leu Pro Val Met Pro Ile Lys Gln Pro
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Val Ile Lys Phe Lys Ala Arg Val Ile Thr Asp Asp Glu Lys Lys Tyr
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Ser Ala Phe Thr Ala Leu Arg Lys Gly Arg Ala Asp Gln Arg Leu Val
180 185 190
Gly Ile Arg Ala Lys Arg Ala Lys Glu Ala Ala Glu Asn Ala Glu Asp
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Pro Ser Lys Ala Pro Lys
210
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<213> 豆荚草盲蝽
<400> 342
Met Asp Ile Glu Glu Pro Ala Ala Ala Pro Thr Glu Pro Ser Asp Val
1 5 10 15
Asn Thr Ala Leu Gln Glu Val Leu Lys Ala Ala Leu Gln His Gly Val
20 25 30
Val Val His Gly Ile His Glu Ser Ala Lys Ala Leu Asp Lys Arg Gln
35 40 45
Ala Leu Leu Cys Val Leu Ala Glu Asn Cys Asp Glu Pro Met Tyr Lys
50 55 60
Lys Leu Val Gln Ala Leu Cys Ser Glu His His Ile Pro Leu Val Lys
65 70 75 80
Val Asp Ser Asn Lys Lys Leu Gly Glu Trp Thr Gly Leu Cys Lys Ile
85 90 95
Asp Lys Thr Gly Lys Ser Arg Lys Ile Val Gly Cys Ser Cys Val Val
100 105 110
Ile Lys Asp Trp Gly Glu Asp Thr Pro His Leu Asp Leu Leu Lys Asp
115 120 125
Tyr Ile Arg Asp Val Phe
130
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 343
Met Lys Met Asn Lys Leu Val Thr Ser Ser Arg Arg Lys Asn Arg Lys
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20 25 30
Pro Leu Ser Lys Glu Leu Arg Gln Lys Tyr Asn Val Arg Thr Met Pro
35 40 45
Val Arg Lys Asp Asp Glu Val Gln Val Val Arg Gly His Tyr Lys Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Tyr Ile Glu Arg Ile Gln Arg Glu Lys Ala Asn Gly Ala Ser Val Tyr
85 90 95
Val Gly Ile His Pro Ser Lys Cys Val Ile Val Lys Leu Lys Val Asp
100 105 110
Lys Asp Arg Lys Glu Ile Leu Asp Arg Arg Ser Lys Gly Arg Asp Leu
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Ala Leu Gly Lys Asp Lys Gly Lys Tyr Thr Glu Asp Ser Thr Thr Ala
130 135 140
Met Asp Thr Ser
145
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 344
Met Glu Lys Pro Val Val Leu Ala Arg Val Ile Lys Ile Leu Gly Arg
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Arg
65
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<211> 229
<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 345
Leu Phe Tyr Phe Pro Phe Ser Arg Lys Trp Gly Asp Val Gln Arg Gly
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Val Ile Gly Thr Val Lys Thr Ser His Thr Pro Lys Ser Arg Phe Cys
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Arg Gly Val Pro Asp Pro Lys Ile Arg Ile Phe Asp Leu Gly Lys Lys
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50 55 60
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225
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 346
Met Gly Arg Arg Pro Ala Arg Cys Tyr Arg Tyr Cys Lys Asn Lys Pro
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100 105 110
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Gly Arg Gln Lys Ile Tyr Val Ser Lys Lys Trp Gly Phe Thr Lys Phe
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Gly Gly Cys Asn Val Lys Leu Arg Pro Asp His Gly Pro Leu Gln Ala
195 200 205
Trp Arg Lys Ala Gln Leu Asp Ile Ala Ala Gly Leu
210 215 220
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 347
Met Thr Asn Ser Lys Gly Tyr Arg Arg Gly Thr Arg Asp Leu Phe Ser
1 5 10 15
Arg Pro Phe Arg His His Gly Val Ile Pro Leu Ser Thr Tyr Met Lys
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<212> PRT
<213> 豆荚草盲蝽
<400> 348
Thr Tyr Met Lys Val Tyr Arg Val Gly Asp Ile Val Ser Ile Lys Gly
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Asn Gly Ala Val Gln Lys Gly Met Pro His Lys Val Tyr His Gly Lys
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Thr Gly Arg Val Tyr Asn Val Thr Pro Arg Ala Leu Gly Val Ile Val
35 40 45
Asn Lys Arg Val Arg Gly Lys Ile Leu Pro Lys Arg Ile Asn Ile Arg
50 55 60
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Arg Val Glu Leu Lys Arg Gln Pro Ala Gln Pro Arg Pro Ala His Phe
100 105 110
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115 120 125
Phe Ile Ala
130
<210> 349
<211> 150
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 349
Lys Lys Ala Lys Lys Gly Phe Met Thr Pro Glu Arg Lys Lys Lys Leu
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Arg Leu Leu Leu Arg Lys Lys Ala Ala Glu Glu Leu Lys Lys Glu Gln
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35 40 45
Lys Pro Lys Leu Ile Asp Glu Ala Asn Glu Glu Gln Val Arg Asn Tyr
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85 90 95
Asn Ser Gln Val Asn Asp Leu Arg Gly Lys Phe Val Lys Pro Thr Leu
100 105 110
Lys Lys Val Ser Lys Tyr Glu Asn Lys Phe Ala Lys Leu Gln Lys Lys
115 120 125
Ala Ala Glu Phe Asn Phe Arg Asn Gln Leu Lys Val Val Lys Lys Lys
130 135 140
Glu Phe Thr Leu Glu Glu
145 150
<210> 350
<211> 279
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 350
Gln Trp Tyr Gln Arg Arg Val Arg Gly Asp Ile Glu Glu Lys Arg Gln
1 5 10 15
Arg Leu Glu Glu Ala Glu Lys Lys Arg Gln Ala Met Met Gln Ala Leu
20 25 30
Lys Asp Gln Asn Lys Asn Lys Gly Pro Asn Phe Thr Ile Thr Lys Arg
35 40 45
Asp Ala Ser Ser Asn Leu Ser Ala Ala Gln Leu Glu Arg Asn Lys Thr
50 55 60
Lys Glu Gln Leu Glu Glu Glu Lys Lys Ile Ser Leu Ser Ile Arg Ile
65 70 75 80
Lys Pro Leu Val Val Asp Gly Leu Gly Val Asp Lys Leu Arg Leu Lys
85 90 95
Ala Gln Glu Leu Trp Glu Cys Ile Val Lys Leu Glu Thr Glu Lys Tyr
100 105 110
Asp Leu Glu Glu Arg Gln Lys Arg Gln Asp Tyr Asp Leu Lys Glu Leu
115 120 125
Lys Glu Arg Gln Lys Gln Gln Leu Arg His Lys Ala Leu Lys Lys Gly
130 135 140
Leu Asp Pro Glu Ala Leu Thr Gly Lys Tyr Pro Pro Lys Ile Gln Val
145 150 155 160
Ala Ser Lys Tyr Glu Arg Arg Val Asp Thr Arg Ser Tyr Gly Asp Lys
165 170 175
Lys Lys Leu Phe Glu Gly Gly Leu Glu Glu Ile Ile Lys Glu Thr Asn
180 185 190
Glu Lys Ser Trp Lys Glu Lys Phe Gly Gln Phe Asp Ser Arg Gln Lys
195 200 205
Ala Arg Leu Pro Lys Trp Phe Gly Glu Arg Pro Gly Lys Lys Pro Gly
210 215 220
Asp Pro Glu Thr Pro Glu Gly Glu Glu Glu Gly Lys Gln Val Ile Asp
225 230 235 240
Glu Asp Asp Asp Leu Lys Glu Pro Val Ile Glu Ala Glu Ile Glu Glu
245 250 255
Glu Glu Glu Glu Glu Glu Val Glu Val Asp Glu Glu Glu Glu Asp Asp
260 265 270
Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu
275
<210> 351
<211> 286
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 351
Ala Leu Gln Asn Glu Leu Glu Glu Ser Arg Thr Leu Leu Glu Gln Ala
1 5 10 15
Asp Arg Ala Arg Arg Gln Ala Glu Gln Glu Leu Gly Asp Ala His Glu
20 25 30
Gln Leu Asn Asp Leu Gly Ala Gln Asn Gly Ser Leu Ser Ala Ala Lys
35 40 45
Arg Lys Leu Glu Thr Glu Leu Gln Thr Leu His Ser Asp Leu Asp Glu
50 55 60
Leu Leu Asn Glu Ala Lys Asn Ser Glu Glu Lys Ala Lys Lys Ala Met
65 70 75 80
Val Asp Ala Ala Arg Leu Ala Asp Glu Leu Arg Ala Glu Gln Asp His
85 90 95
Ala Gln Thr Gln Glu Lys Leu Arg Lys Ala Leu Glu Ser Gln Ile Lys
100 105 110
Asp Leu Gln Val Arg Leu Asp Glu Ala Glu Ala Asn Ala Leu Lys Gly
115 120 125
Gly Lys Lys Ala Ile Ala Lys Leu Glu Gln Arg Val Arg Glu Leu Glu
130 135 140
Asn Glu Leu Asp Gly Glu Gln Arg Arg His Ala Asp Ala Gln Lys Asn
145 150 155 160
Leu Arg Lys Ser Glu Arg Arg Ile Lys Glu Leu Ser Leu Gln Ala Glu
165 170 175
Glu Asp Arg Lys Asn His Glu Lys Met Gln Asp Leu Val Asp Lys Leu
180 185 190
Gln Gln Lys Ile Lys Thr His Lys Arg Gln Ile Glu Glu Ala Glu Glu
195 200 205
Ile Ala Ala Leu Asn Leu Ala Lys Phe Arg Lys Ala Gln Gln Glu Leu
210 215 220
Glu Glu Ala Glu Glu Arg Ala Asp Leu Ala Glu Gln Ala Ile Val Lys
225 230 235 240
Phe Arg Thr Lys Gly Arg Ser Gly Ser Ala Ala Arg Gly Ala Ser Pro
245 250 255
Ala Pro Gln Arg Gln Arg Pro Thr Phe Gly Met Gly Asp Ser Leu Gly
260 265 270
Gly Ala Phe Pro Pro Arg Phe Asp Leu Ala Pro Asp Phe Glu
275 280 285
<210> 352
<211> 197
<212> PRT
<213> 褐飞虱
<400> 352
Met Ala Asp Asp Glu Ala Lys Lys Ala Lys Gln Ala Glu Ile Asp Arg
1 5 10 15
Lys Arg Ala Glu Val Arg Lys Arg Met Glu Glu Ala Ser Lys Ala Lys
20 25 30
Lys Ala Lys Lys Gly Phe Met Thr Pro Asp Arg Lys Lys Lys Leu Arg
35 40 45
Leu Leu Leu Arg Lys Lys Ala Ala Glu Glu Leu Lys Lys Glu Gln Glu
50 55 60
Arg Lys Ala Ala Glu Arg Arg Arg Ile Ile Glu Glu Arg Cys Gly Lys
65 70 75 80
Ala Val Asp Leu Asp Asp Gly Ser Glu Glu Lys Val Lys Ala Thr Leu
85 90 95
Lys Thr Tyr His Asp Arg Ile Gly Lys Leu Glu Asp Glu Lys Phe Asp
100 105 110
Leu Glu Tyr Ile Val Lys Lys Lys Asp Phe Glu Ile Ala Asp Leu Asn
115 120 125
Ser Gln Val Asn Asp Leu Arg Gly Lys Phe Val Lys Pro Thr Leu Lys
130 135 140
Lys Val Ser Lys Tyr Glu Asn Lys Phe Ala Lys Leu Gln Lys Lys Ala
145 150 155 160
Ala Glu Phe Asn Phe Arg Asn Gln Leu Lys Val Val Lys Lys Lys Glu
165 170 175
Phe Thr Leu Glu Glu Glu Asp Lys Glu Pro Lys Lys Ser Glu Lys Ala
180 185 190
Glu Trp Gln Lys Lys
195
<210> 353
<211> 184
<212> PRT
<213> 褐飞虱
<400> 353
Met Met Ala Ala Leu Lys Asp Gln Ser Lys Ser Lys Gly Pro Asn Phe
1 5 10 15
Thr Val Asn Lys Lys Thr Asp Leu Asn Met Thr Ser Ala Gln Met Glu
20 25 30
Arg Asn Lys Thr Lys Glu Gln Leu Glu Glu Glu Lys Lys Ile Ser Leu
35 40 45
Ser Phe Arg Ile Lys Pro Leu Ala Ile Glu Asn Met Ser Ile Asn Ala
50 55 60
Leu Arg Ala Lys Ala Gln Glu Leu Trp Asp Cys Ile Val Lys Leu Glu
65 70 75 80
Thr Glu Lys Tyr Asp Leu Glu Glu Arg Gln Lys Arg Gln Asp Tyr Asp
85 90 95
Leu Lys Glu Leu Lys Glu Arg Gln Lys Gln Gln Leu Arg His Lys Ala
100 105 110
Leu Lys Lys Gly Leu Asp Pro Glu Ala Leu Thr Gly Lys Tyr Pro Pro
115 120 125
Lys Ile Gln Val Ala Ser Lys Tyr Glu Arg Arg Val Asp Thr Arg Ser
130 135 140
Tyr Asp Asp Lys Lys Lys Leu Phe Glu Gly Gly Trp Asp Thr Leu Thr
145 150 155 160
Ser Glu Thr Asn Glu Lys Ile Trp Lys Ser Arg Asn Asp Gln Phe Ser
165 170 175
Asn Arg Ser Lys Ala Lys Leu Pro
180
<210> 354
<211> 122
<212> PRT
<213> 褐飞虱
<400> 354
Ala Phe Asp Arg Glu Arg Ser Gly Ser Ile Pro Thr Asp Met Val Ala
1 5 10 15
Asp Ile Leu Arg Leu Met Gly Gln Pro Phe Asn Lys Lys Ile Leu Asp
20 25 30
Glu Leu Ile Glu Glu Val Asp Ala Asp Lys Ser Gly Arg Leu Glu Phe
35 40 45
Asp Glu Phe Val Thr Leu Ala Ala Lys Phe Ile Val Glu Glu Asp Asp
50 55 60
Glu Ala Met Gln Lys Glu Leu Lys Glu Ala Phe Arg Leu Tyr Asp Lys
65 70 75 80
Glu Gly Asn Gly Tyr Ile Pro Thr Ser Cys Leu Lys Glu Ile Leu Arg
85 90 95
Glu Leu Asp Asp Gln Leu Thr Asn Glu Glu Leu Asn Met Met Ile Asp
100 105 110
Glu Ile Asp Ser Asp Gly Ser Gly Thr Val
115 120
<210> 355
<211> 73
<212> PRT
<213> 褐飞虱
<400> 355
Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Thr Ile Thr Leu Glu Val Glu Pro Ser
1 5 10 15
Asp Thr Ile Glu Asn Val Lys Ala Lys Ile Gln Asp Lys Glu Gly Ile
20 25 30
Pro Pro Asp Gln Gln Arg Leu Ile Phe Ala Gly Lys Gln Leu Glu Asp
35 40 45
Gly Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn Ile Gln Lys Glu Ser Thr Leu His
50 55 60
Leu Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Thr
65 70
<210> 356
<211> 253
<212> PRT
<213> 豌豆蚜
<400> 356
Met Ala Asp Asp Glu Ala Lys Lys Ala Lys Gln Ala Glu Ile Asp Arg
1 5 10 15
Lys Arg Ala Glu Val Arg Lys Arg Met Glu Glu Ala Ser Lys Ala Lys
20 25 30
Lys Ala Lys Lys Gly Phe Met Thr Pro Asp Arg Lys Lys Lys Leu Arg
35 40 45
Leu Leu Leu Lys Lys Lys Ala Ala Glu Glu Leu Lys Lys Glu Gln Glu
50 55 60
Arg Lys Ala Ala Glu Arg Arg Arg Ile Ile Glu Glu Arg Cys Gly Gln
65 70 75 80
Pro Lys Asn Ile Asp Asp Ala Gly Glu Glu Glu Leu Ala Glu Ile Cys
85 90 95
Glu Glu Leu Trp Lys Arg Val Tyr Thr Val Glu Gly Ile Lys Phe Asp
100 105 110
Leu Glu Arg Asp Ile Arg Met Lys Val Phe Glu Ile Ser Glu Leu Asn
115 120 125
Ser Gln Val Asn Asp Leu Arg Gly Lys Phe Val Lys Pro Thr Leu Lys
130 135 140
Lys Val Ser Lys Tyr Glu Asn Lys Phe Ala Lys Leu Gln Lys Lys Ala
145 150 155 160
Ala Glu Phe Asn Phe Arg Asn Gln Leu Lys Val Val Lys Lys Lys Glu
165 170 175
Phe Thr Leu Glu Glu Glu Asp Lys Glu Lys Lys Pro Asp Trp Ser Lys
180 185 190
Lys Gly Asp Glu Lys Lys Gly Glu Gly Glu Asp Gly Asp Gly Thr Glu
195 200 205
Asp Glu Lys Thr Asp Asp Gly Leu Thr Thr Glu Gly Glu Ser Val Ala
210 215 220
Gly Asp Leu Thr Asp Ala Thr Glu Asp Ala Gln Ser Asp Asn Glu Ile
225 230 235 240
Leu Glu Pro Glu Pro Val Val Glu Pro Glu Pro Glu Pro
245 250
<210> 357
<211> 179
<212> PRT
<213> 豌豆蚜
<400> 357
Val Met Arg Cys Gly Lys Lys Lys Val Trp Leu Asp Pro Asn Glu Ile
1 5 10 15
Asn Glu Ile Ala Asn Thr Asn Ser Arg Gln Asn Ile Arg Lys Leu Ile
20 25 30
Lys Asp Gly Leu Ile Ile Lys Lys Pro Val Ala Val His Ser Arg Ala
35 40 45
Arg Ala Arg Lys Asn Ala Asp Ala Arg Arg Lys Gly Arg His Cys Gly
50 55 60
Phe Gly Lys Arg Lys Gly Thr Ala Asn Ala Arg Thr Pro Gln Lys Asp
65 70 75 80
Leu Trp Val Lys Arg Met Arg Val Leu Arg Arg Leu Leu Lys Lys Tyr
85 90 95
Arg Glu Ala Lys Lys Ile Asp Asn His Leu Tyr His Gln Leu Tyr Met
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Asn Val Phe Lys Asn Lys Arg Val Leu Met Glu Phe
115 120 125
Ile His Lys Lys Lys Ala Glu Lys Ala Arg Ala Lys Met Leu Ser Asp
130 135 140
Gln Ala Glu Ala Arg Arg Gln Lys Val Lys Glu Ala Arg Lys Arg Lys
145 150 155 160
Glu Ala Arg Phe Leu Gln Asn Arg Lys Glu Leu Leu Ala Ala Tyr Ala
165 170 175
Arg Glu Asp
<210> 358
<211> 275
<212> PRT
<213> 豌豆蚜
<400> 358
Gly Leu Glu Val Glu Ser Ser Asp Ser Ile Glu Asn Val Lys Ala Lys
1 5 10 15
Ile Gln Asp Lys Glu Gly Ile Pro Pro Asp Gln Gln Arg Leu Ile Phe
20 25 30
Ala Gly Lys Gln Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn Ile
35 40 45
Gln Lys Glu Ser Thr Leu His Leu Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Met
50 55 60
Gln Ile Phe Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Thr Ile Thr Leu Glu Val
65 70 75 80
Glu Ser Ser Asp Ser Ile Glu Asn Val Lys Ala Lys Ile Gln Asp Lys
85 90 95
Glu Gly Ile Pro Pro Asp Gln Gln Arg Leu Ile Phe Ala Gly Lys Gln
100 105 110
Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn Ile Gln Lys Glu Ser
115 120 125
Thr Leu His Leu Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Met Gln Ile Phe Val
130 135 140
Lys Thr Leu Thr Gly Lys Thr Ile Thr Leu Glu Val Glu Ser Ser Asp
145 150 155 160
Ser Ile Glu Asn Val Lys Ala Lys Ile Gln Asp Lys Glu Gly Ile Pro
165 170 175
Pro Asp Gln Gln Arg Leu Ile Phe Ala Gly Lys Gln Leu Glu Asp Gly
180 185 190
Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn Ile Gln Lys Glu Ser Thr Leu His Leu
195 200 205
Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Met Gln Ile Phe Val Lys Thr Leu Thr
210 215 220
Gly Lys Thr Ile Thr Leu Glu Val Glu Ser Ser Asp Ser Ile Glu Asn
225 230 235 240
Val Lys Ala Lys Ile Gln Asp Lys Glu Gly Ile Pro Pro Asp Gln Gln
245 250 255
Arg Leu Ile Phe Ala Gly Lys Gln Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser
260 265 270
Asp Tyr Asn
275
<210> 359
<211> 56
<212> PRT
<213> 豌豆蚜
<400> 359
Asp Leu Leu His Pro Thr Ala Ile Glu Glu Arg Arg Lys His Lys Leu
1 5 10 15
Lys Arg Leu Val Gln His Pro Asn Ser Phe Phe Met Asp Val Lys Cys
20 25 30
Pro Gly Cys Tyr Lys Ile Thr Thr Val Phe Ser His Ala Gln Ser Val
35 40 45
Val Ile Cys Thr Gly Cys Ser Thr
50 55
<210> 360
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 360
atcatgcagg cgtacgcccg 20
<210> 361
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 361
cggagggggc gagatcact 19
<210> 362
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 扩增子
<400> 362
atcatgcagg cgtacgcccg agaagacgag gctgccgtca aaaagtgatc tcgccccctc 60
cg 62
<210> 363
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 363
tgtgttggct actggtggct ac 22
<210> 364
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 364
tcggatggaa ctggacaaat tcaag 25
<210> 365
<211> 137
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 扩增子
<400> 365
tgtgttggct actggtggct acggcagagc ttacttttca tgcacttcag ctcacacttg 60
cacgggagat ggccaagcaa tggtttcacg agctgggctt cccaacgaag atcttgaatt 120
tgtccagttc catccga 137
<210> 366
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 366
gcaacccgtg ttctccaaag c 21
<210> 367
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 367
tcaactcgta ttctcgtact ttcaaacc 28
<210> 368
<211> 146
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 扩增子
<400> 368
gcaacccgtg ttctccaaag ccagatacac tgtgcgatcc ttcggtatca ggcgtaacga 60
aaaaatcgcc gttcactgca ctgtcagggg cgccaaagca gaggaaattc tggagcgtgg 120
tttgaaagta cgagaatacg agttga 146
<210> 369
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 369
atggccgacg atgaagctaa g 21
<210> 370
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 370
tggttctggt tcgggttcaa 20
<210> 371
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 371
cggtaatgcg atgcggtaag 20
<210> 372
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 372
tcatcttctc gggcgtatgc 20
<210> 373
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 373
tttggaagtt gagtcatcag attcc 25
<210> 374
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 374
gttgtagtcg gaaagggtac gtcc 24
<210> 375
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 375
attgtggaac atccggtaca 20
<210> 376
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 376
aagacttgct tcatcctact gca 23
<210> 377
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> n是a、c、g或t
<400> 377
ccaagaaggc caagaagggn ttyatgac 28
<210> 378
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 378
tcctcctcca gggtgaactc yttyttytt 29
<210> 379
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> n是a、c、g或t
<400> 379
gccaagaagg gcttcatgac nccnga 26
<210> 380
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 380
gaagttgaac tcggcggcyt tyttytg 27
<210> 381
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<220>
<221> misc_feature
<222> (24)..(24)
<223> n是a、c、g或t
<400> 381
ctggaggagg ccgagaaraa rmgnca 26
<210> 382
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> n是a、c、g或t
<400> 382
tgccgggccg ctcnccraac ca 22
<210> 383
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<220>
<221> misc_feature
<222> (20)..(20)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(23)
<223> n是a、c、g或t
<400> 383
agatcgccat cctgaggaan gcnttyra 28
<210> 384
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 384
cggtcatcat ctccatgaac tcrtcraart c 31
<210> 385
<211> 170
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 内含子
<400> 385
tctagaaggt aagtgtacac actacatttt catgaacatt attgcgaccg ttgagattct 60
cattgtttgg tgattgatta tctaaagtag aagcatgaat agatataaca taaactagta 120
actaatgggt tagttatggg tatacttcat gcttttctct caggctcgag 170
<210> 386
<211> 521
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 386
tcgatttttc atttttcttt tattatttgg agtgggcctg ttgtggtcgt tatcaaaatg 60
ggtaaaataa tgaaatctgg taaagtcgta ttggtccttg gaggccgata cgctggaaga 120
aaggcagtag tcataaaaaa ttacgatgat gggacgtcag ataaacaata tggacatgcc 180
gtggtggctg gaatcgatag gtaccctaga aaaatccaca aacgtatggg caaaggaaaa 240
atgcacaaga ggtccaaaat caagcccttc cttaaggtgc tcaactataa ccatttgatg 300
cctacaagat attcagtgga tttgacttcg gacttgaaag tggcgcccaa agacctcaag 360
gatccagtga agaggaagaa gattaggttc caaaccagag ttaaattcga agagagatac 420
aagcaaggaa aacacaaatg gtttttccag aaattgaggt tctagattct ataaatttaa 480
ccattttgta atccacccac ctttttgttc aaataaattg t 521
<210> 387
<211> 475
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 387
tatcgcgaaa aatatacaac ttacaaaatg aggaacacgt atgagttgag ccctaaagaa 60
gcagcaaatt tcactcgtcg aaatttagca gatactcttc gaagcaggag tccatatcat 120
gttaatcttc tcttggctgg atatgacaag aaagacgggg ctcagttgta ttacatggat 180
tatctagcgt ctgttgctag tgttgattac gctgcccatg gatacggagg atatttctcc 240
ctttccataa tggatcgcaa ttatttgaaa accctgtcga aagatcaagg atacgaactt 300
ctgaaggaat gtgttaaaga agttcaaaag agacttgcta taaatttacc aaatttcaaa 360
gttcaggtta ttgataaaga tggtattaag gatatgccta atataacttc aaaaggtttg 420
aattgattaa gcaacttcag tttcagattt ttttctaaat aaacatttaa agtgt 475
<210> 388
<211> 467
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 388
gcggggactg gatacatctc taaaacacag aaaaatgaaa ttcttcaagt caggaatata 60
ttctgttgta tttttggcaa ttatattttc tttggtcact gaggaagtgg aaggtcgaag 120
gactatttta agagggcgta aaacactgac gagaacctat tttcgtgaca atgcagtccc 180
agcatacgtc atagtgatac tcgttggaat aggagaaatc attttgggag ctatcctgta 240
tgttataatg aggaaaacga taatagattt tcctttatca gggagttacg cagtggcccc 300
tactcaagaa gcataaatcc cattgaaatt gtgactgttt actttctttg gaaaaatgtg 360
tataataaat acaattcatt tataatattt atatttggaa cttaaaatac ttacaaaatt 420
accatttaca tgatcaaata actaataaag ttctgtctca attataa 467
<210> 389
<211> 906
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 389
ggattggaag taaaaatata caattcatgc tgtagctgta gtgtaaaaac tgaactgaaa 60
gccataaaat aaagaccttg caagaaacat gtccaagatt aatgaggtgt ctaatttgta 120
caaacaactg aaatcagaat ggaacacatc caatccaaat ttaagcaaat gtgaaaagct 180
tttgtcagat ttgaagcttg agctaacaca cttaatgttc cttccaactt caaacgccac 240
tgcttcaaaa caagaacttc ttctggcaag agatgttctg gaaattgggg tacaatggag 300
tatagctgca aatgatatac ctgcctttga aagatacatg gcacagttga aatgttatta 360
tttcgattat aagaatcaac ttcccgaatc ttctttcaaa tatcagttac tgggtctgaa 420
tttactattt ttgttatcac aaaatagagt ggcagagttc cacacagaat tagaattgtt 480
gcctgctgac cacattcaga atgatgtata catcaggcac cctccatcta ttgaacagta 540
ccttatggaa ggaagttata ataagatatt tctggcaaag ggaaatgtcc cagcaacaaa 600
ttacaatttt tttatggata tacttctaga tactatcaga ggggagattg cagattgtct 660
agagaaagca tatgaaaaaa tatcaattaa agatgttgct aggatgctat acttgggcag 720
tgaagaatcg gccaaggcct ttgtaacaaa gagtaagaca tggaaattag aaaaggacaa 780
cttctttcac ttcacgcccg aggttaaaaa gacacatgag ccaattctat ccaaagaatt 840
ggcacaacaa gctattgaat atgcaaaaga actggaaatg attgtttaaa gtaataaagt 900
ttttca 906
<210> 390
<211> 135
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 390
Met Gly Lys Ile Met Lys Ser Gly Lys Val Val Leu Val Leu Gly Gly
1 5 10 15
Arg Tyr Ala Gly Arg Lys Ala Val Val Ile Lys Asn Tyr Asp Asp Gly
20 25 30
Thr Ser Asp Lys Gln Tyr Gly His Ala Val Val Ala Gly Ile Asp Arg
35 40 45
Tyr Pro Arg Lys Ile His Lys Arg Met Gly Lys Gly Lys Met His Lys
50 55 60
Arg Ser Lys Ile Lys Pro Phe Leu Lys Val Leu Asn Tyr Asn His Leu
65 70 75 80
Met Pro Thr Arg Tyr Ser Val Asp Leu Thr Ser Asp Leu Lys Val Ala
85 90 95
Pro Lys Asp Leu Lys Asp Pro Val Lys Arg Lys Lys Ile Arg Phe Gln
100 105 110
Thr Arg Val Lys Phe Glu Glu Arg Tyr Lys Gln Gly Lys His Lys Trp
115 120 125
Phe Phe Gln Lys Leu Arg Phe
130 135
<210> 391
<211> 141
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 391
Tyr Arg Glu Lys Tyr Thr Thr Tyr Lys Met Arg Asn Thr Tyr Glu Leu
1 5 10 15
Ser Pro Lys Glu Ala Ala Asn Phe Thr Arg Arg Asn Leu Ala Asp Thr
20 25 30
Leu Arg Ser Arg Ser Pro Tyr His Val Asn Leu Leu Leu Ala Gly Tyr
35 40 45
Asp Lys Lys Asp Gly Ala Gln Leu Tyr Tyr Met Asp Tyr Leu Ala Ser
50 55 60
Val Ala Ser Val Asp Tyr Ala Ala His Gly Tyr Gly Gly Tyr Phe Ser
65 70 75 80
Leu Ser Ile Met Asp Arg Asn Tyr Leu Lys Thr Leu Ser Lys Asp Gln
85 90 95
Gly Tyr Glu Leu Leu Lys Glu Cys Val Lys Glu Val Gln Lys Arg Leu
100 105 110
Ala Ile Asn Leu Pro Asn Phe Lys Val Gln Val Ile Asp Lys Asp Gly
115 120 125
Ile Lys Asp Met Pro Asn Ile Thr Ser Lys Gly Leu Asn
130 135 140
<210> 392
<211> 104
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 392
Arg Gly Leu Asp Thr Ser Leu Lys His Arg Lys Met Lys Phe Phe Lys
1 5 10 15
Ser Gly Ile Tyr Ser Val Val Phe Leu Ala Ile Ile Phe Ser Leu Val
20 25 30
Thr Glu Glu Val Glu Gly Arg Arg Thr Ile Leu Arg Gly Arg Lys Thr
35 40 45
Leu Thr Arg Thr Tyr Phe Arg Asp Asn Ala Val Pro Ala Tyr Val Ile
50 55 60
Val Ile Leu Val Gly Ile Gly Glu Ile Ile Leu Gly Ala Ile Leu Tyr
65 70 75 80
Val Ile Met Arg Lys Thr Ile Ile Asp Phe Pro Leu Ser Gly Ser Tyr
85 90 95
Ala Val Ala Pro Thr Gln Glu Ala
100
<210> 393
<211> 266
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 393
Met Ser Lys Ile Asn Glu Val Ser Asn Leu Tyr Lys Gln Leu Lys Ser
1 5 10 15
Glu Trp Asn Thr Ser Asn Pro Asn Leu Ser Lys Cys Glu Lys Leu Leu
20 25 30
Ser Asp Leu Lys Leu Glu Leu Thr His Leu Met Phe Leu Pro Thr Ser
35 40 45
Asn Ala Thr Ala Ser Lys Gln Glu Leu Leu Leu Ala Arg Asp Val Leu
50 55 60
Glu Ile Gly Val Gln Trp Ser Ile Ala Ala Asn Asp Ile Pro Ala Phe
65 70 75 80
Glu Arg Tyr Met Ala Gln Leu Lys Cys Tyr Tyr Phe Asp Tyr Lys Asn
85 90 95
Gln Leu Pro Glu Ser Ser Phe Lys Tyr Gln Leu Leu Gly Leu Asn Leu
100 105 110
Leu Phe Leu Leu Ser Gln Asn Arg Val Ala Glu Phe His Thr Glu Leu
115 120 125
Glu Leu Leu Pro Ala Asp His Ile Gln Asn Asp Val Tyr Ile Arg His
130 135 140
Pro Pro Ser Ile Glu Gln Tyr Leu Met Glu Gly Ser Tyr Asn Lys Ile
145 150 155 160
Phe Leu Ala Lys Gly Asn Val Pro Ala Thr Asn Tyr Asn Phe Phe Met
165 170 175
Asp Ile Leu Leu Asp Thr Ile Arg Gly Glu Ile Ala Asp Cys Leu Glu
180 185 190
Lys Ala Tyr Glu Lys Ile Ser Ile Lys Asp Val Ala Arg Met Leu Tyr
195 200 205
Leu Gly Ser Glu Glu Ser Ala Lys Ala Phe Val Thr Lys Ser Lys Thr
210 215 220
Trp Lys Leu Glu Lys Asp Asn Phe Phe His Phe Thr Pro Glu Val Lys
225 230 235 240
Lys Thr His Glu Pro Ile Leu Ser Lys Glu Leu Ala Gln Gln Ala Ile
245 250 255
Glu Tyr Ala Lys Glu Leu Glu Met Ile Val
260 265
<210> 394
<211> 750
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 394
cgcccagcag tggtatcaac gcagagtacg cgggagacat tcaagtcttg tgatagtgca 60
ggcacggcag ttcaaataaa ctggtgcctt caatttattt atatatttat acttttttac 120
tagaaaccaa atactaacca atcaacatgt gtgacgaaga ggttgccgca ttagtcgtag 180
acaatggatc tggtatgtgc aaagctggat ttgctgggga tgatgccccc cgtgcagttt 240
tcccatccat tgttggtcgt ccaagacatc aaggagttat ggtaggaatg ggccaaaagg 300
actcgtatgt aggagatgaa gcccaaagca aaagaggtat ccttaccttg aaatacccca 360
ttgaacacgg tattgtcaca aactgggatg atatggagaa aatctggcac cataccttct 420
acaatgaact tcgagttgcc cccgaagagc accctgtttt gttgacagag gcaccattga 480
accccaaagc caacagggag aagatgaccc agatcatgtt tgaaaccttc aatacccccg 540
ccatgtacgt cgccatccaa gctgtattgt ctctgtatgc ttctggtcgt acaactggta 600
ttgtgctgga ttctggagat ggtgtttctc acacagtacc aatctatgaa ggttatgccc 660
ttcctcatgc catccttcgt ttggacttgg ctggtagaga cttgactgat taccttatga 720
aaattctgac tgaacgtggt tactctttca 750
<210> 395
<211> 204
<212> PRT
<213> 马铃薯叶甲
<400> 395
Pro Ile Asn Met Cys Asp Glu Glu Val Ala Ala Leu Val Val Asp Asn
1 5 10 15
Gly Ser Gly Met Cys Lys Ala Gly Phe Ala Gly Asp Asp Ala Pro Arg
20 25 30
Ala Val Phe Pro Ser Ile Val Gly Arg Pro Arg His Gln Gly Val Met
35 40 45
Val Gly Met Gly Gln Lys Asp Ser Tyr Val Gly Asp Glu Ala Gln Ser
50 55 60
Lys Arg Gly Ile Leu Thr Leu Lys Tyr Pro Ile Glu His Gly Ile Val
65 70 75 80
Thr Asn Trp Asp Asp Met Glu Lys Ile Trp His His Thr Phe Tyr Asn
85 90 95
Glu Leu Arg Val Ala Pro Glu Glu His Pro Val Leu Leu Thr Glu Ala
100 105 110
Pro Leu Asn Pro Lys Ala Asn Arg Glu Lys Met Thr Gln Ile Met Phe
115 120 125
Glu Thr Phe Asn Thr Pro Ala Met Tyr Val Ala Ile Gln Ala Val Leu
130 135 140
Ser Leu Tyr Ala Ser Gly Arg Thr Thr Gly Ile Val Leu Asp Ser Gly
145 150 155 160
Asp Gly Val Ser His Thr Val Pro Ile Tyr Glu Gly Tyr Ala Leu Pro
165 170 175
His Ala Ile Leu Arg Leu Asp Leu Ala Gly Arg Asp Leu Thr Asp Tyr
180 185 190
Leu Met Lys Ile Leu Thr Glu Arg Gly Tyr Ser Phe
195 200
<210> 396
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 396
gcgtaatacg actcactata ggatgtgtga cgaagaggtt gccg 44
<210> 397
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 397
gtcaacaaaa cagggtgctc ttcg 24
<210> 398
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 398
atgtgtgacg aagaggttgc cg 22
<210> 399
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 399
gcgtaatacg actcactata gggtcaacaa aacagggtgc tcttcg 46
<210> 400
<211> 320
<212> DNA
<213> 马铃薯叶甲
<400> 400
atgtgtgacg aagaggttgc cgcattagtc gtagacaatg gatctggtat gtgcaaagct 60
ggatttgctg gggatgatgc cccccgtgca gttttcccat ccattgttgg tcgtccaaga 120
catcaaggag ttatggtagg aatgggccaa aaggactcgt atgtaggaga tgaagcccaa 180
agcaaaagag gtatccttac cttgaaatac cccattgaac acggtattgt cacaaactgg 240
gatgatatgg agaaaatctg gcaccatacc ttctacaatg aacttcgagt tgcccccgaa 300
gagcaccctg ttttgttgac 320
<210> 401
<211> 1152
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 发夹
<400> 401
tgacgacctt gagttggttt ctgaagttga actcggcagc cttcttctgg agcttggcga 60
atttgttttc gtacttggaa acctttttca aggtaggttt gacgaattta ccacggaggt 120
cgttgacctg gctgttgagg tcggcgatct caaggtcacg tctctccact tcgaattcga 180
tgtcaatttt actcctctcc agagcgtcaa ttcgcttatg gtagtctgtg cagagtttct 240
tcaaggttgc ttcattggcg ttgtcgacgt cggcaatttg cccgcagcgc tcctcaatcg 300
ttcgcctcct ctcagctgct ttgcgttcct gctccttctt cagttcctca gcggcttttt 360
tcctcagcag gagtcggagt ttcttcttcc tttccggggt catgaaaccc ttcttggctt 420
tcttcgcctt agaggcttcc tccatcctct tgcgcacttc agcgcgcttc ctctcgattt 480
cggcctgttt gtctagaagg taagtgtaca cactacattt tcatgaacat tattgcgacc 540
gttgagattc tcattgtttg gtgattgatt atctaaagta gaagcatgaa tagatataac 600
ataaactagt aactaatggg ttagttatgg gtatacttca tgcttttctc tcaggctcga 660
gcaaacaggc cgaaatcgag aggaagcgcg ctgaagtgcg caagaggatg gaggaagcct 720
ctaaggcgaa gaaagccaag aagggtttca tgaccccgga aaggaagaag aaactccgac 780
tcctgctgag gaaaaaagcc gctgaggaac tgaagaagga gcaggaacgc aaagcagctg 840
agaggaggcg aacgattgag gagcgctgcg ggcaaattgc cgacgtcgac aacgccaatg 900
aagcaacctt gaagaaactc tgcacagact accataagcg aattgacgct ctggagagga 960
gtaaaattga catcgaattc gaagtggaga gacgtgacct tgagatcgcc gacctcaaca 1020
gccaggtcaa cgacctccgt ggtaaattcg tcaaacctac cttgaaaaag gtttccaagt 1080
acgaaaacaa attcgccaag ctccagaaga aggctgccga gttcaacttc agaaaccaac 1140
tcaaggtcgt ca 1152
<210> 402
<211> 1192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 发夹
<400> 402
ctcttgcttc ttggtggcga tcctctcctc gcgcctcttc ttcgcctcct tgaccttgag 60
acgtctcgcc tctgcctggt ccttcaacat ctttgatctc gccttttcag ccttcttctt 120
gtgaatgaag tccatcagta ccctcttgtt tttgaagacg ttacctttgg ctttcatgta 180
aaggtcgtgg tacatttgcc tatcgatctt cttggcttct ctgtattttt taaggagccg 240
tcgcaggact ctcattctgt tgacccacag gaccttcaca ggcattctgg cgttggcggt 300
acccttcctc ttaccgaagc cacagtgacg acccttccgt ctggcttctg tgtttttacg 360
gacgcgggct ctggagtgga cagccacagg ctttttgatg atcaaaccat ccttgatcag 420
cttacggatg ttttgcctag agttggtgtt ggcgatttcg ttgatttcat tagggtccaa 480
ccacactttc ttcttgccgc atctcatcac ctctagaagg taagtgtaca cactacattt 540
tcatgaacat tattgcgacc gttgagattc tcattgtttg gtgattgatt atctaaagta 600
gaagcatgaa tagatataac ataaactagt aactaatggg ttagttatgg gtatacttca 660
tgcttttctc tcaggctcga gggtgatgag atgcggcaag aagaaagtgt ggttggaccc 720
taatgaaatc aacgaaatcg ccaacaccaa ctctaggcaa aacatccgta agctgatcaa 780
ggatggtttg atcatcaaaa agcctgtggc tgtccactcc agagcccgcg tccgtaaaaa 840
cacagaagcc agacggaagg gtcgtcactg tggcttcggt aagaggaagg gtaccgccaa 900
cgccagaatg cctgtgaagg tcctgtgggt caacagaatg agagtcctgc gacggctcct 960
taaaaaatac agagaagcca agaagatcga taggcaaatg taccacgacc tttacatgaa 1020
agccaaaggt aacgtcttca aaaacaagag ggtactgatg gacttcattc acaagaagaa 1080
ggctgaaaag gcgagatcaa agatgttgaa ggaccaggca gaggcgagac gtctcaaggt 1140
caaggaggcg aagaagaggc gcgaggagag gatcgccacc aagaagcaag ag 1192
<210> 403
<211> 792
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 发夹
<400> 403
actctgtctg gcttttggct gtgacgcaca gttcatagag ataaccttca cccgaatatg 60
ccttgcgagg tcgcaaaatc ggcgaaattc catacctgtt caccgacgac ggcgctggat 120
caattccaca gttttcgcga tccagactga atgcccacag gccgtcgagt tttttgattt 180
cagatacgta cacttttccc ggcaataaca tacggcgtga catcggcttc aaatggcgta 240
tagccgccct gatgctccat cacactttgc cgtaatgagt gaccgcatcg aaacgcagca 300
cgatacgctg gtctagaagg taagtgtaca cactacattt tcatgaacat tattgcgacc 360
gttgagattc tcattgtttg gtgattgatt atctaaagta gaagcatgaa tagatataac 420
ataaactagt aactaatggg ttagttatgg gtatacttca tgcttttctc tcaggctcga 480
gccagcgtat cgtgctgcgt ttcgatgcgg tcactcatta cggcaaagtg tgatggagca 540
tcagggcggc tatacgccat ttgaagccga tgtcacgccg tatgttattg ccgggaaaag 600
tgtacgtatc tgaaatcaaa aaactcgacg gcctgtgggc attcagtctg gatcgcgaaa 660
actgtggaat tgatccagcg ccgtcgtcgg tgaacaggta tggaatttcg ccgattttgc 720
gacctcgcaa ggcatattcg ggtgaaggtt atctctatga actgtgcgtc acagccaaaa 780
gccagacaga gt 792

Claims (17)

1.一种干扰核糖核酸,即干扰RNA,该干扰核糖核酸在被昆虫害虫物种摄入后起到下调所述昆虫害虫中的靶基因的表达的作用,
其中该RNA包含至少一个沉默元件,其中该沉默元件是由退火的互补链组成的双链RNA区域,其中一条链由与该靶基因内的靶核苷酸序列完全地互补的至少18个连续核苷酸的序列组成,并且
其中该靶基因选自以下基因的组,这些基因的核苷酸序列由SEQ ID NO 15、204或其互补序列组成。
2.如权利要求1所述的干扰RNA,其中所述双链RNA的所述一条链由SEQ ID NO 16、205或其互补序列组成。
3.如权利要求1或2所述的干扰RNA,其中与暴露于靶向非必需基因的干扰核糖核酸或不下调该害虫物种内的任何基因的干扰核糖核酸的害虫物种相比,下调该靶基因的表达引起该害虫的生长、发育、生殖或存活下降。
4.一种多核苷酸,其包含编码如权利要求1-3中任一项所述的干扰RNA的核苷酸序列。
5.一种宿主细胞,其包含如权利要求1-3中任一项所述的干扰RNA,所述宿主细胞为原核细胞。
6.如权利要求5所述的宿主细胞,所述宿主细胞为细菌细胞。
7.一种宿主细胞,其包含如权利要求1-3中任一项所述的干扰RNA,所述宿主细胞为酵母细胞。
8.一种用于预防和/或控制昆虫害虫侵扰的组合物,该组合物包含至少一种如权利要求1-3中任一项所述的干扰核糖核酸即干扰RNA,和至少一种合适的载体、赋形剂或稀释剂。
9.一种组合物,其包含如权利要求1-3中任一项所述的干扰RNA。
10.如权利要求9所述的组合物,其被配制为杀昆虫喷雾剂。
11.如权利要求10所述的组合物,其中该组合物另外包含至少一种杀虫剂,该杀虫剂选自由以下各项组成的组:化学杀昆虫剂、马铃薯块茎特异蛋白、苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白、致病杆菌杀虫蛋白、光杆状菌杀虫蛋白、侧孢芽孢杆菌杀虫蛋白和球形芽孢杆菌杀虫蛋白。
12.如权利要求11所述的组合物,其中所述苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白选自由以下各项组成的组:Cry1、Cry3、TIC851、CryET170、Cry22、TIC901、TIC201、TIC407、TIC417、二元杀虫蛋白CryET80和CryET76、二元杀虫蛋白TIC100和TIC101、杀虫蛋白ET29或ET37与杀虫蛋白TIC810或TIC812的组合、以及二元杀虫蛋白PS149B1。
13.一种用于预防和/或控制害虫侵扰的组合,该组合包含如权利要求9所述的组合物和至少一种其他活性剂。
14.如权利要求13所述的组合,其中该组合是用于预防和/或控制植物的害虫侵扰,并且该其他活性剂是农艺学试剂。
15.如权利要求14所述的组合,其中该农艺学试剂包括除草剂。
16.如权利要求15所述的组合,其中该除草剂选自草甘膦不敏感型式的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶,即EPSPS;能够分解麦草畏的分解代谢酶,如麦草畏单加氧酶;或能够使草铵膦分解代谢的草丁膦乙酰转移酶基因。
17.一种用于下调昆虫害虫物种中的靶基因的表达以便预防和/或控制害虫侵扰的方法,该方法包括使所述害虫物种与有效量的至少一种如权利要求1-3中任一项所述的干扰核糖核酸即干扰RNA接触。
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