BG66440B1 - Билков състав за лечение на ангина пекторис, метод за неговото получаване и използването му - Google Patents

Abstract

Изобретението се отнася до билков състав за ангина пекторис, метод за приготвяне на същия и използването му и намира приложение във фармацевтичната промишленост. Билковият състав съгласно изобретението съдържа екстракти от корен на салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), женшен (Panax Notoginseng) и борнеол. Съставът съдържа също нотожинсенозид R1 и жинсенозид Rg1, които са активни компоненти за терапевтично приложение. Изобретението се отнася и до метод за получаване на тези състави, както и до тяхното използване. 6 претенции, 3 фигури

Description

Област на техниката

Изобретението се отнася до билков състав за ангина пекторис, метод за приготвянето и използването му и намира приложение във фармацевтичната промишленост.

Предшестващо състояние на техниката

Хроничната стабилна ангина пекторис се дължи на транзиторна миокардна исхемия. Аспирин, бета блокери и калциеви антагонисти поотделно или в комбинация са най-използваните при лечение на ангина пекторис.

Аспиринът като антиагрегант се използва за симптоматично лечение на хронична стабилна ангина пекторис.

Нитратите се употребяват за лечение на ангинозните пристъпи и могат успешно да се използват при пациенти с предвидими симптоми. При всички нитрати проблемът главоболие може да наложи тяхното спиране у чувствителни индивиди.

Бета блокерите, въпреки и утвърдени като крайъгълен камък в лечението на ангината, са противопоказни при пациенти с обструктивни белодробни заболявания и тежка вентрикуларна дисфункция, и относително контраиндицирани при диабет и периферни вазопатии, брадикардия и проводни нарушения.

Калциевите антагонисти са ефективни при ангина, като техния ефект се дължи на гладкомускулна релаксация в коронарните артерии и периферната циркулация, повишават миокардното снабдяване и редуцират миокардната работа.

Въпреки прогреса в комбинираната антиангинозна терапия с нитрати и бета блокери или калциеви антагонисти, с които повечето пациенти започват лечение, има нужда от лекарство за хронична стабилна ангина пекторис, което да е много ефективно, може да бъде приемано продължително време и да има ниска токсичност.

Предвид проблемите относно гореспоменатите медикаменти, бяха направени забележителни усилия за приложение на билковата медицина като алтернатива на стандартното лечение на хронична стабилна ангина пекторис. Традиционната китайска медицина е допринесла много в това отношение.

US 5288485 и 5433957 се отнасят до екс5 тракт от жълт кантарион (Hypericum erectum) за лечение и превенция на заболявания с разстройство на кръвната циркулация като ангина пекторис [1, 2].

US 5776463 се отнася до една орална фармацевтична композиция, съдържаща венчелистчета на пореч (Borago officinalis) или екстракт от същите за предпазване и лечение на стрес, асоцииран с циркулаторни сърдечни заболявания, включително и ангина [3].

В допълнение към жълтия кантарион (Hypericum erectum) и венчелистчетата на пореч (Borago officinalis), много други билкови растения са били използвани също за лечение на ангина. Едно такова растение е широколистната лечебна дилянка (Valeriana officinalis latifolia). Yang GY и сътрудници (1994) докладват, че 82 пациенти с ангина пекторис са били лекувани с Valeriana officinalis latifolia, от които 50 случая са имали ST-T исхемични промени на ЕКГ преди лечението. Общият дял на ефекта при обикновена ангина (без доловими исхемични промени) е бил 87,80%, при ангина с исхемични промени 88,00%. Допълнително е установено, че Valeriana officinalis latifolia би могла да понижи така също и плазмените липиди. Не са били наблюдавани токсични ефекти върху черен дроб, бъбреци и хемопоетична тъкан.

Wu Y (1990) докладва, че в една група от 267 пациенти с ангина пекторис, 93,3%, лекувани с Xintongkang капсули, са имали ефект.

Друг билков препарат, наречен Shenshao tongguan pian е използван за лечение на ангина пекторис. През 1990, Hu JX и сътрудници докладват, че Shenshao tangguan pian се състои главно от сапонин от стеблото и листата на женшен (Ginseng) и корен на бял божур (Radix Paeoniae Alba). Общият дял на ефекта при лечение на ангина пекторис е бил 94,71 %, а делът на подобрение в ЕКГ - 63,38%. Допълнително, лабораторни изследвания показват също, че Shenshao tongguan pian би могъл да повиши дебита на лявата камера, да намали кръвния вискозитет и да инхибиратромбоцитната агрегация. Тестовете за остра и хронична токсичност показват, че Shenshao tongguan pian не е токси. и ι· ,ι ιι I |дмл..д.»кж·-?»

66440 Bl чен и няма странични ефекти.

Kuo-guan гранули е друг билков препарат за ангина пекторис. Li и сътрудници (1990) докладват, че промени в плазмените цинк, мед и еритроцитна глутатион-пероксидаза са отчетени посредством атомна абсорбционна спекгрометрия и DTNB цветно проявяване при 31 пациенти, страдащи от коронарна болест с ангина пекторис преди и след прием на Kuo-guan гранули в продължение на 1 месец. Резултатите показват, че плазмените нива на цинк и еритроцитна глутатионпероксидаза са по-ниски, а нивото на мед е по-високо при пациентите в сравнение с нормална контролна група преди лечение (р<0.01), докато плазмените нива на цинк и еритроцитна глутатионпероксидаза се повишава, а нивото на медта спада след лечението (р<0,01). Това показва, че терапевтичният механизъм на Kuo-guan гранули при коронарна болест с ангина пекторис се отнася до регулиращ ефект върху дисбаланса на микроелементите в организма.

Сапонин на Трибузан (Tribulus terrestris, известна още като Бабини зъби) е друга билкова композиция за лечение на ангина пекторис.

Fufang Danshen Pian е народна рецепта на Дан Шен таблета (Dan Shen Tablet), която е показана за лечение на хронична стабилна ангина пекторис при коронарна исхемия, била е официално записана в изданието на китайската фармакопея от 1977 г. и се е прилагала в клиничната практика в продължение на десетилетия.

Fufang Danshen Pian съдържа много активни растителни екстракти, включително корен от червенокоренна салвия (Danshen, известна още като: Salvia miltiorrhiza; червен градински чай; китайски чай и др.) и корен от женшен (Radix Notoginseng, още: Sanchi). Две от растенията са били документирани за първи път в Shen Nong Ben Cao Jing (Shen Nong билкова фармакопея), завършена през 200 година. Fufang Danshen Pian съдържа също синтетичен борнеол (Bingpian). Естествен борнеол първо е бил документиран в Tang Ben Cao (билкова фармакопея на династия Tang), съставена около година 659.

Li Cheng-zhu и сътрудници (1979) докладват (в Acta Acad Med Prim Shanhai) едно експериментално проучване върху инхибиращ тромбоцитен ефект на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae). Ефекти върху in vitro тромбоза, тромбоцитни функции и коагулация, фибринолиза, са наблюдавани при зайци. След инжектиране на корен от салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), са открити три ме5 ханизма с важна роля за инхибиране на in vitro тромбоза: (1)инхибиция на тромбоцитна функция; (2) инхибиция на коагулационна функция, и (3) повишена фибринолиза. От тях първите два механизма функционират по-интезивно. Резултатите съответстват на тези при лечение на тромбозни заболявания, по-специално артериална тромбоза.

Chiang WT и сътрудници (1982) докладват (в Acta Acad Med Prim Shanhai) ефектите на “Danshensu” и други два водно-разтворими компонента на червенокоренна салвия (Salvia Miltiorrhiza) върху кучешки исхемичен миокард и изолирана коронарна артерия на гълъби. Ефектът на три нови водноразтворими компоненти като Danshensu (DS-182, 0(+)-3,4-дихидроксифенил млечна киселина), протокату-алдехид (protocathu-aldehyde - PCAD) и непречистена дитерпенова киселина (DS-187), изолирани от червенокоренна салвия (Salvia Miltiorrhiza Bunge), е сравнен с този на дипиридамол. Резултатите разкриват: (1) при мишки, DS-182 дава сигнификантна протекция против хипоксия, докато PCAD е неефективен; (2) DS-182 би могла да негативира питуитрин-индуцирана ЕКГ исхемична ST-T елевация, но няма влияние върху редуцирането на сърдечната честота. DS-187, PCAD и дипиридамол показват само непълна протекция; (3) в остро инфарктен кучешки модел, подготвен чрез лигиране на предния десцендентен клон на лява коронарна артерия, постигнатият ефект чрез интравенозна инжекция на DS-182 се оказва по-висок от DS-187 и PCAD по отношение на ляво вентрикулната функция, ляво вентрикулното пиково систолно налягане (LVPSP) и ляво вентрикулното крайно диастолно налягане (LVEDP). PCAD дори предизвиква странични ефекти върху LVPSP и LVEDP. Интравенозно приложен дипиридамол въпреки, че не повлиява LVEDP, потиска LVPSP значимо с отчетлив хипотензивен ефект. Всички тези прояви на салвията (Savlia) и дипиридамола значимо редуцират размера на миокарден инфаркт (N-BT оценка); DS-182 е найефективен, дипиридамол и DS-187 са следващите, докато PCAD е последен; (4) в препарат с изолирана перфузия на коронарна артерия у гълъби, DS-182 редуцира значимо коро10

66440 Bl нарно-съдовото съпротивление, докато DS-187, PCAD или sodium Tanshinone II-A sulfonate (DS201), друг компонент на салвия (Savlia), го повишава. Констриктивното действие на морфин и пропранолол върху препарат на изолирана ко- 5 ронарна артерия е антагонизирано с предварително прилагане на DS-182. Всичко това показва, че Danshensu може би е главният активен компонент на червенокоренната салвия (Salvia miItiorrhiza) в лечението на исхемична болест на 10 сърцето (ИБС) и, че неговото съвместно приложение с пропранолол или морфин би било полезно.

Li Cheng-zhu и сътрудници (1983) докладват (в Chin J Integr Med) антикоагулантния е фект 15 на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae). Danshensu е един водно-разтворим мономер, екстрахиран от корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae). Той е също главният компонент на търговския препарат Radix 20 Salviae Miltiorrhizae инжекции. Настоящи проучвания показват, че Danshensu инхибира in vitro тромбозата, тромбоцитната агрегация (индуцирана с ADP) и вътрешната и външната коагулационни системи, намалява броят на тромбоцитите и 25 повишава деградацията на фибрина или фибриногена. Ефектите достигат връх 30 min след еднократна инжекция от 20 mg/kg у зайци, продължават 1 h и постепенно се възвръщат. 4,5 h след инжекцията всички са се възвърнали до 30 нормата, освен in vitro тромбозният тест.

Chen Zhanghua (1987) докладва в Acta Acad Med Prim Shanhai за ефектите на “Danshensu” върху експериментални микроциркулаторни разстройства и плазмените нива на млечна киселина. 35 Естественият Danshensu е водно-разтворим мономер от корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae - RSM). Микроциркулаторни разтройства у зайци са предизвикани чрез интравенозна инжекция на високомолекулен 40 декстран. Естественият Danshensu (доза 4-6 mg/ kg) отчетливо повишава броя на капилярните съдове в конюнктивита и понижава плазменото ниво на млечна киселина у зайци. Чрез локално капково приложение на норадреналин (4 g) у 45 мишки са предизвикани разстройства на мезентериалната микроциркулация. Естественият Danshensu разширява артериите и ускорява кръвния ток като по такъв начин елиминира микроциркулаторната стаза. В нашите експерименти са 50 наблюдавани едновременно ефекти и на синтетичен Danshensu. Резултатите показаха, че няма значима разлика между синтетичен и естествен Danshensu при повлияване на микроциркулаторните разстройства.

Sun Xi-ming и сътрудници (1991) докладват едно ново фармакологично действие на екстракт на корен от червенокоренна салвия (Danshen, още: Salvia Miltiorrhiza). В доклада се съобщава, че екстракт на Danshen (Salvia Miltiorrhiza), който съдържа натриеви соли на О(+)-(3,4-дихидрокси фенил) млечна киселина притежава едно ново фармакологично действие да понижава биосинтезата на холестерол в клетките и липопротеиновата оксидация, в проучване с клетъчни култури. Сравнени с контрола, тяхната скорост на електрофоретична миграция е отчетливо намалена, а съдържанието на MDA и цитотоксичността очевидно са понижени.

Тези резултати показаха, че солите на 0(+)-(3,4-дихидрокси фенил) млечна киселина могат да бъдат ефективни в превенцията и лечението на атеросклерозата.

Zheng Ruo-xuan и сътрудници (1992) докладват (в Chin J Integr Med) за предпазващ ефект на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) върху миокардна исхемия, предизвикана чрез коронарно лигиране у мишки. Очевиден предпазващ ефект при остра миокардна исхемия у мишки, предизвикана чрез коронарно лигиране, би могъл да се наблюдава след i.p. (интраперитонеално) въведен воден екстракт на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) (5 g необработена дрога / kg). Елевацията на ST сегмента на ЕКГ в резултат на миокардна исхемия в лечебната група е много по-малка, размерът на исхемията на левия вентрикул е по-малък, а делът на преживяемост по-висок в сравнение е контролата.

Wu Yao-zhong и сътрудници (1995) докладват (в Acta Nanjing Univ Trad Chin Mater Med) върху ефекти на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) за повишаване на кръвната циркулация чрез премахване на кръвната стаза. Фармакологичното проучване на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) е широко разпространено. Въпреки това, проучвания върху реологията при прилагане на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) посредством оценка на

66440 Bl

PG12 (простагландин И₂), ЕТ (ендотелин) и ТХА2 (тромбоксан А₂), продуцирани оттромбоцитите, са редки. Влиянието на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) върху тромбозата, промените в РТ (протромбиново време - ПТВ), КРТТ (кефалин-каолиново време ККВ), FG (фибриноген), ESR (скорост на утаяване на еритроцитите - СУЕ) и НСТ (хематокрит - Ht) и тромбоцитната агрегация при зайци е оценено в настоящото проучване. Изводите са, че корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) редуцира синтезата на ТХА2 и така намалява ефектите на усилване на тромбоцитната агрегация и тромбоза.

Shi Lin и сътрудници (1990) докладват (в Acta Pharmacol Sin) ефектите на тотални сапонини на женшен (Panax Notoginseng - PNS) за повишаване на PGI2 в каротидна артерия и понижаване на ТХА2 в тромбоцити. Тотални сапонини на женшен (Panax Notoginseng - PNS) са дадени на зайци през устата в доза 100 mg/kg дневно за 8 седмици. Наблюдава се потискане формирането на атеросклеротични плаки в аортата в сравнение с контролната група. Използван е радиоимунологичен анализ за изследване ефектите на PNS върху съдържанието на простациклин в каротидна артерия и тромбоксан А2 в тромбоцити на плъхове. Орално приложение на PNS 25, 50, 100 mg/kg/дневно за 10 дни предизвиква повишаване на простациклин в каротидна артерия и понижаване на тромбоксан А2 в тромбоцити, сравнено с контролната група. Тези резултати показват, че анти-атеросклеротичното действие на PNS може би е резултат от корекция на дисбаланса между простациклин и тромбоксан А2.

Li Xing и сътрудници (1990) докладват (в Acta Pharmacol Sin) за протективните ефекти на сапонин от женшен (Panax Notoginseng) върху експериментално миокардно увреждане, предизвикано с исхемия и реперфузия при плъхове. Ефекти на тотален сапонин на женшен (Рапах Notoginseng - PNS) и пречистени сапонини R_b| и R_gl от PNS (ginsenosides R_b| и R_gl) върху миокардно увреждане чрез исхемия и реперфузия, са проучени при сърце на плъхове in situ и in vitro. У пентобарбитал-анестезирани плъхове, предварително приложение на 100 и 200 mg/kg PNS показва значима редукция в големината на инфарктната зона след лигиране на лявата десцен дентна коронарна артерия (40 min) и реперфузия (120 min) в сравнение с контролата. PNS 12,5 и 25 mg/1, R_bl 10 mg/1 и R_gl 10 mg/1 значимо понижават освобождаването на миокардна СРК (креатинфосфокиназа - КФК), потискат калциевото натрупване в миокарда, редуцират продукцията на малондиалдехид (MDA) и предотвратяват спадането на активността на супероксидната дисмутаза (SOD) в сравнение с контролата при перфузирани изолирани сърца на плъхове с тотална исхемия (40 min) и реперфузия (15 min). Резултатите показват, че PNS, R_bl и R_g| предотвратяват сърдечна исхемия и това действие е разглеждано като свързано с инхибицията на липидната пероксидация.

Huang Cong и сътрудници (1991) докладват (в Chin Bull Pharmacol) ефектите на сапонин от женшен (Рапах Notoginseng) върху исхемично-реперфузионно миокардно увреждане при зайци в съзнание. Ефектите на сапонин от женшен (Рапах Notoginseng saponin - PNGS) върху исхемично-реперфузионно миокардно увреждане при зайци в съзнание е проучено при наблюдение на промените в ЕКГ, активността на СРК и LD (лактатдехидрогеназа - ЛДХ) и размерът на исхемията. PNGS в доза 50 mg/kg и 100 mg/kg значително намалява размера на миокардната исхемична област. Тези резултати показват, че PNGS има протективен ефект при исхемичнореперфузионно миокардно увреждане.

Mo Qi-xian и сътрудници (1987) докладват (в Propriet Trad Chin Med Res) динамиката на ЗН борнеол. За да бъде осветлен механизмът на индуциране възобновяването на ароматните свойства на борнеол, динамиката на ЗН борнеол е дирижирана чрез интравенозно инжектиране и орален прием. Резултатите показват, че времето на полуживот на 3 борнеол след единична венозна инжекция е 2,8 min. Това подсказва, че лекарството се разпределя бързо до съответните органи и тъкани след прилагането му и предизвиква незабавен ефект. In vivo дистрибуцията се концентрира в органи и тъкани, които са богато васкуларизирани като сърце, бял дроб, чер дроб, бъбреци, мозък и т.н. Това поставя клиничното приложение на сигурна теоретична основа. Тъй като след орално приложение на лекарството скъсеното време на полуживот е 5,3 h, това показва, че оралният борнеол не би довел до акумулация, освен една слаба

66440 Bl бионаличност. Трябвала се направят по-нататъшни проучвания, за да се дискутира взаимовръзката на лекарствената доза и форма.

Chen Tie-feng и сътрудници (1990) докладват (в Acta Pharmacol Sin) повишаването на абсорбцията на тетраметил-пиразин със синтетичен борнеол. На Sprague-Dawley плъхове е даден ig (интраглутеално) тетраметилпиразин фосфат (ТМР) 5 mg/kg със или без предшестващ борнеол 5 mg/kg. Плазмените концентрации ТМР са анализирани с GC метод и данните са обработени чрез програма NONLIN. Стах беше 931 и 562 ng/ml съответно (р<0.01). Това показва, че борнеол повишава абсорбцията на ТМР, но не и елиминацията.

Xu Wei и сътрудници (1995) докладват (в Pharmacol Chin Med Clin) ефекта на ментол и борнеол върху разпределението на натриев сулфадиазин и Евансово синьо в мозъка на плъхове и мишки. Ментол (1.5 g/kg, ig) и борнеол (1.5 g/ kg) удължават времето на полуживот при разпределението на натриев сулфадиазин у плъхове. Горните дози на ментол и борнеол, дадени през устата също повишават концентрацията на натриев сулфадиазин в мозъка на плъхове. Ментол (ig 0.5 g/kg, за 3 дни) и борнеол (ig 0.5 g/kg за 3 дни) повишават концентрацията на Евансовото синьо в мозъка на плъхове, но стойността на концентрацията е значително по-ниска от тази на мишките, страдащи от увреждане с исхемияреперфузия. Резултатите показват, че ментол и борнеол могат да повишат трансфера на натриев сулфадиазин през кръвно-мозъчната бариера без да я увредят.

В САЩ атеросклеротичната коронарна болест е най-честата причина за сърдечносъдова недостатъчност и смърт.

Атеросклерозата е съдово разстройство, характеризиращо се с отлагане на жълтеникави холестеролови плаки, липиди и клетъчен детрит по вътрешната обвивка на клетъчните стени (ендотела) на големите и средно големите артерии. Състоянието започва като една мастна фисура и постепенно се стига до фиброзна плака или атероматозна лезия. Стените на кръвоносните съдове задебеляват, фиброзират и се отлагат калциеви соли. Артериалният лумен се стеснява.

Много атеросклеротични плаки остават стабилни или постепенно прогресират. Други мо гат да руптурират, предизвиквайки хеморагия, тромбоцитна активация и така се стига до интраваскуларна тромбоза. Коронарната тромбоза предизвиква частична или пълна съдова оклузия, недостатъчност на кръвния поток, което води до нестабилна ангина пекторис или миокард ен инфаркт. Руптурираните плаки се рестабилизират периодично и често водят до потежки стенози.

Физическо натоварване и стрес повишават кислородните нужди на миокарда. При нормални физиологични условия повишените кислородни нужди на миокарда се посрещат чрез артериолна дилатация и увеличаване на кръвния ток. При наличие на атеросклероза артериолите може да са дилатирани максимално, за да посрещнат основни нужди. Такива дилатирани артериоли може да не са в състояние да посрещнат повишените кислородни изисквания на миокарда. Когато кислородните изисквания надхвърлят кислородната доставка, се проявява миокардна исхемия. Периодично тежките съдови оклузии може да лимитират кръвния ток и така да причиняват миокардна исхемия. Клиничната проява на транзиторна миокардна исхемия е ангина пекторис, която е пароксизмална гръдна болка, често с разпространение към раменете, в частност към лявото рамо със или без придружаващо чувство на задушаване и неизбежна смърт.

Ангина пекторис се подразделя на две разновидности: стабилна и нестабилна. Стабилната ангина пекторис се причинява в повечето случаи от повишени кислородни изисквания на миокарда. Така, че пристъпите от стабилна ангина са с предвидима честота и продължителност след провокиращи моменти, повишаващи кислородните нужди, като физическо усилие, стрес (психичен) и т.н. Обратно при нестабилна ангина пристъпите са без специфична провокация и причината е обикновено намалено кислородно снабдяване на миокарда. Руптура на плаката, тромбоцитна агрегация и коронарна тромбоза намаляват кислородното снабдяване на миокарда.

Ангина пекторис се лекува с разнообразни лекарства, хирургични процедури, коронарен байпас, балонна ангиопластика, поставяне на стент и др. В лечението на стабилна ангина пекторис на първо място е намаляване на кис66440 Bl лородните нужди на миокарда като превантивна мярка. В терапията на острия синдром на нестабилна ангина на първо място е инхибиране тромбоцитната активация и тромболизиране.

Терапевтични средства за лечение на хронична стабилна ангина пекторис понастоящем са нитроглицерин, другите нитрати, калциеви антагонисти, бета блокери. Тези лекарства, приложени поотделно или в комбинация с други, по-скоро облекчават и предпазват, отколкото лекуват.

При пристъпи от ангина се прилага нитроглицерин сублингвално за облекчаване на симптомите. Нитроглицерин се прилага също за превенция на ангинозни пристъпи при физически усилия и стрес. Нитратите се прилагат за предотвратяване на ангинозни атаки. Нитроглицеринът и нитратите упражняват своя ефект преди всичко чрез релаксация на съдовата гладка мускулатура, редуциране миокардната активност и така намаляване на кислородните нужди. Страничните ефекти са пулсиращо главоболие, световъртеж, слабост, ортостатична хипотония, тахикардия и т.н.

Бета блокерите, като пропранолол, се прилагат за предотвратяване на ангина пекторис чрез намаляване на кислородните нужди на миокарда при физическо усилие и стрес. Главната контраиндикация са бронхоспастични състояния, брадиаритмии и изявена сърдечна недостатъчност. При индивиди с астма и други форми на обструкция на дихателните пътища бета блокерите могат да влошат тяхното състояние.

Калциевите антагонисти се прилагат със същите показания. Миокардът е зависим от калциевия инфлукс за нормалната си функция. Калциевите антагонисти отпускат гладката мускулатура на съдовете, потискат миокардната активност, редуцират кислородните нужди и така предотвратяват ангина пекторис. Калциевите антагонисти имат странични ефекти. Леки странични ефекти са зачервяване, оток, световъртеж, гадене и др. Ексцисивна инхибиция на калциевия инфлукс в миокарда може да причини тежки странични ефекти като сърдечен арест, брадикардия, атриовентрикуларен блок, конгестивна сърдечна недостатъчност и др. В комбинация с бета блокери страничните ефекти на калциевите антагонисти често се усилват.

В Китай, женшен (Panax Notoginseng) и корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) са били използвани за лечение на сърдечносъдови заболявания от 200 година от н.е. (Билкова фармакопея на Shen Nong). 5 Женшен (Panax Notoginseng) е бил използван за лечение на ангина пекторис, а корен от салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) за подобряване кръвната циркулация и разнасяне на кръвната стаза. Многобройни предклинични и клинични проуч10 вания демонстрират ефективността и безопасността на женшена (Panax Notoginseng) и корена от салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae).

Традиционната китайска терапевтика е комбинация от неголям брой задължителни бил15 кови екстракти. Една модифицирана форма на китайско лекарство за лечение на коронарна болест на сърцето е Дан Шен таблета. Това е голямо гладко топче, често с големина до 1 cm в диаметър. Дан Шен таблетите са съставени от ек20 стракт на корен от салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), стрит на прах женшен (Рапах Notoginseng) и синтетичен борнеол. Били са записани в китайската фармакопея от 1977 и използвани за лечение сърдечносъдови заболява25 ния от десетилетия.

Разкритата Дан Шен таблетка (Danshen pill - DSP) или наречена още кардиотонична таблетка (СР) е нова генерация китайски медикамент за коронарна болест на сърцето. Китайската те30 рапевтика съдържа разнообразни билки, които са различни за различните прескрипции по отношение на техния вид и пропорция. За контрол на качеството DSP се произвежда по стандартизирана формула. Терапевтичните компоненти на 35 DSP са водноразтворими екстракти на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) 10-30% и понякога приблизително 20%, водноразтворими екстракти на женшен (Рапах Notoginseng) (2-6%) и борнеол (1-3%). 40 Нещо повече, за бързо купиране на ангина, DSP е произведен като малка таблетка, която може да се разтваря незабавно при сублингвално приложение и да достига бързо до миокарда и така да облекчава бързо ангината.

В предклинични и клинични проучвания бе доказано, че DSP е нетоксичен и ефективен при профилактика и лечение на сърдечносъдови заболявания с коронарна исхемия. Нещо повече, демонстрирана бе по-висока ефективност на DSP 50 в сравнение с Дан Шен таблета за лечение на

ПИЛИЯ»

66440 Bl коронарна болест.

DSP е записано в допълнителното издание на китайската фармакопея от 1998 г., одобрена от Министерството на здравеопазването на Китай, пуснато на пазара като лекарство в Китай от 1993 5 г. и употребявано от над 5 милиона човека.

Техническа същност на изобретението

Разкриваната Дан Шен таблетка (Dan Shen pill - DSP) е нова генерация китайски медикамент за лечение на коронарна болест на сърцето, произведено по стандартизирана формула. DSP съдържа стандартизирано количество екстракти на женшен (Panax Notoginseng), екстракти на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) и борнеол.

Женшен (Panax Notoginseng) е включен за облекчаване и профилактика на ангина. Корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) е включен за инхибиране тромбо- 20 цитната агрегация, профилактика на коронарната тромбоза и по такъв начин за увеличаване на кръвната циркулация. Борнеол е включен за ефективното достигане на терапевтичните компоненти до миокарда. 25

DSP е произведен като малка таблетка, приблизително 25 mg, която се разтваря незабавно при сублингвално приложение и по такъв начин проявява бързо своя терапевтичен ефект. В пред30 клинични и клинични проучвания е доказана ефективността на DSP да облекчава и профилактира ангина пекторис.

Настоящото изобретение разкрива метод за получаване на Дан Шен таблетка (Dan Shen pill DSP) за лечение на хронична стабилна ангина $5 пекторис и Дан Шен (DS) таблетка получена по този метод, както е изложено в приложените претенции.

Подробно пояснение на фигурите

Фигура 1 - Партиден №: 19990806 40

Фигура 2 - Партиден №: 19990815

Фигура 3 - Партиден №: 19990823

Позиция на хроматографските пикове:

Група 1 съдържа пикове 1 и 2 (време на задържане от 7-15 min); Група II съдържа пико- 4$ ве 3 и 4 (време на задържане от 15-20 min); Група III съдържа пикове 5, 6, 7 и 8 (време на задържане от 20-40 min).

Общо погледнато, разпространението на пиковете от група I е с най-голяма височина, като височината на пик 1 е близо до тази на пик 2. Пиковете в група II стоят един до друг с почти еднакви височини и много ниски. Група III е съставена от 4 пика с постепенно нарастваща височина. Тези три групи съставят представителната хроматограма на комбинирани Дан Шен таблетки.

Подробно описание на същността на изобретението

Това изобретение разкрива състав на медикамента Дан Шен (DSP), включващ:

а) (водноразтворими) екстракти корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), (водноразтворими) екстракти на женшен (Panax Notoginseng) и (синтетичен) борнеол;

Ь) корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), женшен (Notoginseng), борнеол и носители;

с) корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), женшен (Panax Notoginseng), борнеол и фармацевтични носители.

В състава на горепосочения медикамент корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) и женшен (Panax Notoginseng) се използват така, както са били използвани в Китай за лечение на коронарна болест на сърцето от година 200 на нашата ера. Женшен (Рапах Notoginseng) се е използвал за лечение на ангина, а корен от салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) е използван за подобряване на кръвообращението. Борнеол се употребява за улесняване бързото разпределение на терапевтичните компоненти до прицелните органи. Естествен борнеол е бил използван в Китай от година 600 от н.е. Тъй като борнеолът е почти излязъл от употреба, DSP съдържа синтетичен борнеол.

Това изобретение предвижда използване на DSP за:

а) лечение на коронарна болест на сърцето;

Ь) лечение на коронарна болест на сърцето в съчетание с други лекарства;

с) първична профилактика на коронарна болест на сърцето;

d) първична профилактика на коронарна

66440 Bl болест на сърцето в съчетание с други лекарства;

е) вторична профилактика на коронарна болест на сърцето;

f) вторична профилактика на коронарна болест на сърцето в съчетание с други лекарства; и

h) редукция на нивото на серумния холестерол.

Типично за DSP е, че индикациите не са само за коронарна атеросклеротична болест, но така също и за облекчаване на ангина пекторис, за профилактика на ангина пекторис при физическо усилие и стрес, и за повишаване на кръвната циркулация посредством инхибиране тромбоцитната агрегация и по такъв начин предотвратяване коронарното тромбообразуване. DSP може да се прилага за редуциране приема на нитроглицерин, който се употребява често за облекчаване и профилактика на ангина пекторис. DSP може да се прилага за редуциране на плазменото ниво на холестерола и по този начин за предотвратяване формирането на нови атеросклеротични лезии. Атеросклерозата често започва с холестеролови жилки, депозирани в съдовите стени.

Един типичен пример: DSP съдържа 540% водноразтворима фенолова киселина на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), 1-10% водноразтворим сапонин на женшен (Panax Notoginseng) и 1-5% борнеол.

Друг типичен пример: DSP съдържа 1030% водноразтворима фенолова киселина на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), 2-6% водно разтворим сапонин на женшен (Panax Notoginseng) и 1-3% борнеол.

Друг характерен пример е, че големината на малките таблетки е:

(а) 0,33-0,34 cm в диаметър;

(Ь) 21,25-28,75 mg тегло;

(с) 1,13-1,40 mg/mm³ плътност.

Експериментални подробности

Производство на Дан Шен таблетки (DSP).

DSP е малка таблетка, приблизително 25 mg, съдържаща терапевтичните компоненти водноразтворими екстракти на женшен (Рапах Notoginseng), водноразтворими екстракти на салвия (Salviae) и синтетичен борнеол.

За производството на DSP, женшен (Notoginseng) и салвия (Salviae) се екстрахират разделно с гореща вода в циркулиращи систе ми и се филтрират. Филтратите се кондензират в условия на ниско налягане, филтрират се и се преципитират. Концентратите се пречистват чрез използване на колонки от смола и се концентрират при условия на ниско налягане. Така добитите пречистени водноразтворими екстракти се смесват със синтетичен борнеол и фармацевтични носители. Сместа се оформя в малка таблетка посредством специална таблетираща машина. Качеството на DSP се контролира чрез стандартизиране на количеството и пропорцията на главните терапевтични компоненти сапонин, фенолна киселина като Danshensu и борнеол. Тънкослойна хроматография, високоефективна течна хроматография, хроматограма и други аналитични техники се използват за идентифициране и количествено определяне на терапевтичните компоненти в DSP.

Производство на DSP

1. Екстракция на водноразтворими компоненти на женшен (Рапах Notoginseng):

а) Разреждане на билките с вода 5-7кратно;

Ь) Екстракция водноразтворими компоненти на женшен (Рапах Notoginseng) чрез варене в съд с налягане между 0,04-0,06 mPa за 2 h;

с) Повтаряне на екстракцията при същите условия за 1,5 h;

d) Филтрация на екстракта със 100-клетъчно сито;

е) Пречистване на филтрата посредством използване на едропореста адсорбционна смола чрез елуиране с етанол;

f) Концентриране на елуираните екстракти при условия на понижено налягане с подаване на въздух до 0,04-0,06 mPa и вакуум до 0,076-0,088 mPa до достигане на плътност 1,331,35.

2. Екстракция на водноразтворими компоненти на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae).

а) Разреждане на билките с вода 5-7кратно;

Ь) Екстракция на водноразтворими компоненти на корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae) чрез варене в съд с налягане между 0,04-0,06 mPa за 2 h;

с) Повтаряне на екстракцията при същите условия за 1,5 h;

d) Филтрация на екстрактите със 100-кле-

66440 Bl тъчно сито;

е) Концентрация на филтратите при понижено налягане с вакуум -0,076-0,088 mPa докато 1 kg от билката в началото, стане 1 1.

f) Преципитация на концентрата с етанол; 5 g) Филтрация на етаноловия разтвор на преципитата през 100-клетъчносито;

h) Концентрация на филтрата при понижено налягане с подаване на въздух с налягане 0,040,06 mPa и вакуум -0,076-0,088 mPa;

i) Пречистване на концентратите посредством полиамидна хроматография и елуиране с етанол;

j) Концентрация на пречистените екстракти до плътност от 1,33-1,35.

3. DSP производство.

а) Смесване на екстрактите от женшен (Panax Notoginseng), екстрактите от корен от червенокоренна салвия (Radix Salviae Miltiorrhizae), синтетичен борнеол и полиетилен гликол 6000 в съотношение 4,0:20,6:1,9:79,5;

Ь) Разтапяне на сместа;

с) Произвеждане на DSP от стопената смес чрез използване на таблетираща машина със следните характеристики:

Температурата на таблетиращия тигел е постоянно 89-93°С, охлаждащия разтвор е течен парафин с температура по-ниска от 8°С, вътрешният диаметър на таблетиращата глава е 1,8 mm, външният диаметър на таблетиращата глава е 2,4 mm, разстоянието между таблетиращата глава и повърхността на охлаждащия разтвор е 15 cm;

d) Центрофугиране на таблетките при 8001100 об/min за 15 min за отстраняване на мазнините.

Качествен контрол на DSP

DSP съдържа идентифицируемите терапевтични компоненти протокатехинов алдехид и сапонин, а също така и различни други компоненти. Съдържанието на тези химични съединения в билките варира в партидите. За да се стандартизира съдържанието на терапевтичните компоненти в DSP, и така да се контролира качеството на DSP, е разработен метод за идентифициране и количествено определяне на терапевтичните агенти в медикаментите. Един пример на процедурите включва:

а) Разтваряне на 30 DS таблетки в 3 ml метанол и ултразвукова обработка за 10 min;

b) Центрофугиране за 5 min;

с) Фракциониране на супернатанта чрез използване на стандартни аналитични техники като тънкослойна хроматография, високоефективна течна хроматография и др.;

d) Идентификация на терапевтичните компоненти на DSP като Sodium Danshensu, протокатехинов алдехид, сапонин и др. посредством сравняване на DSP фракциите със съответните пречистени стандарти по отношение на позиция, размер и цвят;

е) Идентификация и количествено определяне терапевтичните компоненти в DSP чрез сравняване с позицията, размера и цвета на съответните пречистени стандарти;

f) Идентифициране терапевтичните компоненти в DSP чрез сравняване релативното време на задържане и релативната пикова площ на хроматограмата с релативното време на задържане и релативната пикова площ на стандартна хроматограма.

TLC идентификация на DSP

Един метод за идентифициране Sodium Danshensu и протокатехинов алдехид на билков състав за лечение на хронична стабилна ангина пекторис посредством тънкослойна хроматография включва следните етапи:

а) Подготовка на анализа, включваща:

i. Поставяне 30 таблетки на споменатия състав в 3 ml метанол и разтваряне с ултразвукова обработка за 10 min до образуване на разтвор;

п. Центрофугиране на разтвора за 5 min и събиране на супернатанта;

iii. Поставяне в контакт на 10 microl от разтвора върху силиконова G гел тарелка, съдържаща 0,5 % CMC-Na;

iv. Натапяне на тарелката в промивен разтвор, съдържащ хлороформ, ацетон и метанова киселина в съотношение 10:4:1,6;

V. Сушене и напръскваме на тарелката с амоняк и оставяне настрана за 15 min;

vi. При проверка на тарелката под ултравиолетова светлина, петното представящо споменатия състав трябва да бъде в съответната позиция на стандартите и да показва същия цвят;

б) Използване на Sodium Dashensu и протокатехинов алдехид като стандарти.

Един метод за идентифициране на gypenoside (сапонин от билката Gynostemma pentaphyllum) в билков състав за лечение на хро50

66440 Bl нична стабилна ангина пекторис чрез тънкослойна хроматография включва следните етапи:

а) Подготовка на анализа, включваща следните етапи:

i. Поставяне на 30 таблетки на споменатия състав в 5 ml амонячен разтвор и разтваряне чрез ултразвуково въздействие до образуване на разтвор;

И. Филтриране на споменатия разтвор в колонка с едропореста адсорбционна смола със скорост 0,5 / min;

iii. След промиване с 20 ml дестилирана вода, колонката от едропореста адсорбционна смола се промива (елуира) с 2 ml разтвор на метанол;

iv. Полученият елуент се събира;

v. Поставяне в контакт 10 microl от споменатия елуент върху силиконова G гел тарелка, съдържаща 0,5% CMC-Na;

vi. Промиване натарелката с 10 ml от разтвора на хлороформ, ацетон и вода в съотношение 6:3:1 след 2 h при 10°С;

vii. След като бъде изсушена и напръскана с 10% етанол сулфат, тарелката се суши при 105°С за няколко минути;

viii. Проверка натарелката под нормална светлина - петното представящо споменатите вещества трябва да бъде на съответната позиция за стандартите и да е със същия цвят;

б) Използване на тотален gypenoside, сапонин R1 и ginsenoside Rgl (сапонин от женшен) като стандарти.

Хроматограми на кардиотонична таблетка

1. Подготовка на хроматограмите.

1) Хроматографска система и пригодност на системата.

Алкил силаново свързване siliko-18 е използвано като стационарна фаза, а смесите А и В като мобилна фаза. А е метанол, а В е смес на: вода - “Ν,Ν-диметилформамид” - оцетна киселина на кристали (100:45:4). Концентрацията на А варира от 5 до 30%, като времето на промяна на елуцията е от 0 до 25 min. Детекторната дължина на вълната е 281 nm. Броят на теоретичните тарелки в колоната е не по-малък от 2000, когато се пресмята с пика на Danshensu.

2)Апаратура и реактиви

Хроматограф: HP 1100 течен хроматограф Детектор: HP VWD - тип ултравиолетов детектор

Колона: Alltech Company 5u, 250 х 4,6 mm ODS колона

Пред-колона: Alltech Company, Alltima C18 5 5u пред-колона

Температура на колоната: 30°С

3) Подготовка на контролната проба

Salvianic acid В, Danshensu и протокатехинов алдехид се разтварят поотделно в мета10 нол до получаване на три контролни разтвора, всеки ml от които е със съдържание съответно 50 microg, 40 microg и 10 microg.

4) Подготовка на тест-пробата

Поставят се 10 броя от кардиотоничната 15 таблетка в 25 ml мерителна колба, добавят се 20 ml метанол; следва ултразвуково въздействие за 20 min, оставя се да се охлади, разтвора се разрежда до горната граница на скалата с метанол, центрофугира се и се взема супернатанта като 20 тест-разтвор.

5) Процедура

Внимателно се впръскват по 10 microl от всеки контролен разтвор и тестовият разтвор поотделно в колоната на хроматографа, отчита се 25 хроматограмата и се изчислява съдържанието.

2. Хроматограми на различни партиди кардиотонична таблетка.

Двадесет партиди проби-мостри кардиотонична таблетка се тестват с гореописания метод 30 и статистическите данни са показани като таблица 1, таблица 2 и таблица 3. Тези данни показват, че кардиотоничната таблетка има специфична за нея хроматограма. съдържаща общо 8 пика така, че тези пикове трябва да същес35 твуват едновременно във всяка партида на DSP. Приемайки пика на протокатехинов алдехид за референтен, чието релативно време на задържане е 1, средната стойност на релативното време на задържане на осемте пика е: 0,672; 1,000;

1,417; 1,512; 2,016; 2,235; 2,407; 2,757.

Стойностите на релативното време на задържане и релативната площ на осемте пика са много стабилни и сред осемте обичайни пика, пик № 1 е Danshensu, пик № 2 - протокатехинов 45 алдехид и пик № 7 - салвианова киселина В, а отношението на стойностите на релативната площ е 0,476-0,668:1:0,391-0,641 респективно.

Хроматограмите на три партиди кардиотонична таблетка са също представени като фиг, 50 1, 2 и 3.

66440 В1

Таблица I. Пиково време па задържане и релативно време на задържане при 20 партиди па DSP

| 8SX *·

Релагивно време на

задържане

2.767 j

2.771 |

2.771 |

2.766 j

2.758 |

2.756 |

2.757 1

ri

1..., 2·7_ΞΙ

1 997.7

X ri

2758 1

2.763 1

wrz I

ri

I 2,749 1

1 2.747

Γ 2.746 I

j 2.749 j

[ 2.748 1

ri

0.273

я

с. I

2 л X

34.146 |

34.092 |

34.186 |

34.155 1

34.070 |

34.019 1

.34.017 |

34.014 |

34.026

34.007 I

1 34.026 I

Γ 34.066

34.067 |

34.012

1 S£6’tf 1

| 3.3.944

X

|33.925

| 34.001

1 33.941

34.030

ri

Пик Ж7 J

| 0НЯИ.1.С1Г9<|

време на

задържане

ξ:

η 5 ri

СГ Г1 ri

ri

ri

ri

ri

ri

ri

I ri

o o ri

o ri

s ri

X ri

ri

ri

O' r)

X ri

ri

© ri

ri

£

| зумойя

X

«5 ?б

30.047 1

30.046 1

I 29.8971

1 S£8'6Z

29.804 1

|Cfr£'6z|

29.747 I

1 cZZ/6Z

29.737 |

X n

29.72 Π

29.730 ;

: W62

29.613 '

29.572 ί

1 29.553

29.524

t'is”6Z I

^29.573

6c |

29.714

1 Пик №6 |

Релагивно 1

време па

задържане

cQ Г1

о (Q н

С4 С4

ri

ri ri

ri ri

Γ4 ri

ri ri

ci ri

ri ri

ri

ri ri

ri ri

c ri ri

ri ri ri

ri Cl ri

ri ri

ri n ri

ri СЧ

ri n ri ri

£ ri ri

ί

[owodji

я

с.

1> X я *

27.805 I

27.79.3 I

27.742 I

27.715 I

27.661

27.604 1

27.600 I

27.571 1

27.594 J

27.569 1

1 9Z.S7ZJ

27.590 1

27.561 I

27.5.34

27.493 I

[bLVLc J

27.451

lowzz |

27.500 J

Γ 27.441

g.

Г Пик №5 I

Релагивно 1

време па

задържане

S ri

X © ri

O' Г1 ri

ri c ri

Г4 ri

© ri

© ri

ri

§

3

ri

ri

ri

ri Ξ ri

X ri

1 ri

3 ri

ri

o © ri

X ri

ri

о Σ С.

я

1) X я

1 25.090 I

1 25.072 I

1 25.034

I 25.005 I

24.968

cn © ri

1 24.889 1

24.852 I

24.882

Cl X ri

Γ24.867

1 24.887 I

24.869

VVH'VZ

1 24.799 I

Γ24.791 Ί

24.755

I m’K |

24.807 ]

9V£'VZ

X X Г)

£

| Релагивно

време па

задържане 1

гч

ri

i7

17

Cr

2

ri

ri

Cl

i?.

X

0=·,

©

£

£

X

s

ri *

I

ГВреме

гг X

X *

(N X X

18.769 1

1 εζ.9'81

18.739 I

Γ18.727

18.677

18.673 I

18.642 Ί

18.660

OC

2 -

18.687

18.606 Ί

18.628 Ί

18.609

X

18.597 I

| 86S~'81

18.653 |

X

18.664

s

| OllHM.I.Pir^J 1

време на 1

задържане

5

5

X

ri

CM

Tf-

r)

X

X

il

ri

n

-5

q-

n

rr

Таблица 2. Стойност на пиковата площ и съотношение по площ при 20 партиди DSP

66440 В1

66440 Bl

Таблица №3. Статистически данни за осем пика, получени от хроматограмите на 20 партиди DSP

Пик №	Време на задържане	Релативно време на задържане	Вероятност на появяване	Площ	Съотношение по площ	Диапазон ί на съотношението 1 1 по площ I
1	8,289	0,672	100%	1034,276	0,572	0,572 ± 0,096 1
2	12,343	1,000	100%	1817,065	1,000	1,000 ± 0,000 !
3	17,493	1,417	100%	376,547	0,208	0,208 + 0,040 ,
4	18,664	1,512	100%	328,011	0,181	0,181 + 0,059 '
5	24,883	2,016	100%	486,626	0,267	0,267 ± 0,097 ;
6	27,586	2,235	100%	525,432	0,289	0,289 ± 0,052 |
7	29,714	2,407	100%	940,963	0,516	0,516 + 0,125 j
8	34,030	2,757	100%	1547,495	0,850	0,850 ±0,163 i

Количествен анализ на Danshensu в DSP.

Хроматография и системни условия за адаптиране,апаратура и реактиви:

1. Подготовка на хроматограми.

Параметри на хроматограмата и настройване на системата.

Алкил силаново свързване силико-18 се използва като пълнител, а кристална хидро-ацетонитрил оцетна киселина (87:12:1) като мобилна фаза. Детекторната дължина на вълната се установява на 281 nm. Броят на теоретичните тарелки не трябва да бъде по-малък от 2500, когато се пресмятат с пика на Danshensu и степента на изолация трябва да отговаря на изискванията.

2. Апаратура и реактиви.

Хроматограф: HP 1100 течен хроматограф Детектор: HP VWD-тип ултравиолетов детектор

Колона: Alltech Company 5u, 250 х 4,6 mm, ODS колона

Пред-колона: Alltech Company, Alltima C18 5u пред-колона

Температура на колоната: 30°С

Ацетонитрил: хроматографски чист, Tianjin Siyou Biomedical & Technical Co. Ltd.

Кристална оцетна киселина: аналитично чиста; Tianjin Tianhe Reagent Company.

3. Подготовка на контролната проба

Използват се 25,0 mg натриево салвианова киселина и 5.0 mg протокатехинов алдехид като контролни проби. Претеглят се двете проби прецизно и се поставят в 50-милилитрови мерителни колби. Добавя се мобилна фаза за разтва20 ряне и разтворите им се разреждат до горната граница на скалата на мерителните колби, разклащат се добре и се съхраняват като налични разтвори. Претегля се прецизно малко количество от парааминобензоена киселина, разтваря се като разтвор 0,2 mg/ml с мобилната фаза и се използва като наличен вътрешен стандартен разтвор. Отпипетират се подходящи количества от натриево салвианова киселина А, протокатехинов алдехид и вътрешни стандартни разтвори с прецизно отчетени обеми, разтварят се с мобилната фаза до приготвяне на разтвор, който съдържа 50 microg натриево салвианова киселина А, 10 microg протокатехинов алдехид и 80 microg парааминобензоена киселина. Приготвеният разтвор се използва като контролен.

4. Приготвяне на тест-проба.

Вземат се 10 броя кардиотонична таблетка и 1 ml наличен вътрешен стандартен разтвор, поставят се в 25 ml мерителна колба, разтварят се с мобилна фаза и се разреждат до горната граница на скалата.

Вземат се 10 ml от разтворите на контролата и тест-пробата съответно, впръскват се и се записва хроматографската крива.

Приготвяне на контролния разтвор:

Взема се и се претегля прецизно 25,0 mg таншинол натрий и се поставя в мерителна колба. Добавя се мобилната фаза, разтваря се и се разрежда до скалата. Разклаща се разтворът и се запазва като наличен контролен разтвор. Претегля се парааминобензоена киселина пре50 л

66440 Bl

I'lHiiniUJiUiyii'iiJii'i i|ii ι.'.ίι~;·~-4ιί; -.rr.nltCT ί'άΐ'Κύνΐ- rj:it'c ·Ί. i''. i'n-.'—Tt'·'.*?.'— цизно и се разтваря до 0,2 mg/ml разтвор с мобилната фаза. Разтворът се запазва като наличен вътрешен стандартен разтвор. Вземат се подходящи дози от наличните контролен разтвор и вътрешният стандартен разтвор, и се превръщат в контролен разтвор, съдържащ 50 microg таншинол натрий и 80 microg парааминобензоена киселина на милилитър.

Приготвяне на тест - разтвора:

Вземат се 10 броя кардиотонична таблетка и 1 ml от вътрешния наличен разтвор. Поставят се в 25 ml мерителна колба, разтварят се до скалата и се превръщат в тест-разтвор.

Вземат се 10 microl от контролния разтвор и 10 microl от тест-разтвора съответно, записва се хроматограма и се отчитат резултатите.

Билковият състав, включващ се в DSP, трябва да съдържа 0,14-0,18 mg Danshensu в таблетка.

Количествен анализ на Ginsenoside Rgl и Sanchinoside R1 в DSP.

1) Хроматографска система и системна пригодност.

Алкил силаново свързване силико-18 е използвано като стационарна фаза и сместа от вода и ацетонитрил като мобилна фаза. Концентрацията на ацетонитрил е 25% от 0 до 15 min и 35% след 15-та минута. Потокът на изпарения газ е 2,5 1/min, а температурата на дюзата е установена на 93,8°С. Броят на теоретичните тарелки в колоната е не по-малък от 5000, когато се пресмятат с пика на Ginsenoside Rgl.

2) Апаратура и реактиви.

Хроматограф: Agilent 1100 течен хроматограф

Детектор: Alltech EL SD 2000 детектор

Колона: Alltech Company 5u, 250 x 4,6 mm ODS-C18 колона

Пред-колона: Alltech Company, Alltima C18 5u пред-колона

Температура на колоната: 30°С

3) Приготвяне на контролната проба.

Ginsenoside Rgl и Sanchinoside R1 се разтварят съответно в метанол до получаване на два контролни разтвора, всеки от които съдържа съ10 ответно 0,98 mg и 0,25 mg,

4) Приготвяне на тест-пробата.

Поставят се 50 броя кардиотонични таблетки в 5 ml мерителна колба, добавя се 4% амоняк до скалата, следва 20 min ултразвуково въз15 действие и разтворът се прилага към предварително приготвена малка С18 колона (Strata С18Е column на Phenomenex Company, 500 mg and Зсс tube), елуция c 10 ml вода, изоставя се отмитото, следва елуция с 2 ml метанол, съби20 ране на елуента (отмитото) в мерителна колба и се разтваря до скалата с метанол, разтворът се приема за тест-разтвор.

5) Процедура.

Впръсква се прецизно 10 microl от всеки 25 от контролните разтвори и тест-разтвора, съответно, в колоната, записва се хроматографски запис и се калкулира съдържанието.

6) Резултат партиди от мостри кардиотонична таб30 летка са тествани с гореописания метод и статистическите данни са показани като таблица 4. Описано в горната таблица, билковият състав, включен в DSP съдържа 0,401 %-0,712%, средно 0,550% Sanchinoside R1 и 2,069%-4,044%, 35 средно 2,847% Ginsenoside Rgl.

66440 Bl

Таблица 4. Количество на Ginsenoside Rgl и Sanchinoside RI в DSP

Партиден №	Sanchinoside R1 pg /таблетка	Ginsenoside Rgl pg / таблетка
20000106	17,22	80,93 1
20000216	16,92	80,78 1
20000323	15,16	70,76
20000406	13,65	62,51
20000422	14,24	68,72
20000513	15,27	71,16
20000606	14,86	68,21
20000726	14,59	72,35
20000728	14,25	57.37
20000804	15,30	70,55
средна стойност	15,15	70,33
RSD % (стандартно отклонение)	7,53	1 1 9,67
не по-малко от	12,12	56,26

Характеристиките на DSP, така определени са както следва:

a) DSP съдържа Ь-3,4-дихидроксифениг млечна киселина, sodium danshensu, сапонин и борнеол;

Ь) Отрицателен за бактерии: съдържа помалко от 1,000 бактерии;

с) Отрицателен за гъбички: съдържа помалко от 100 гъбички;

d) Отрицателен за тежки метали: съдържа по-малко от допустимото количество, определено от Китайското правителство;

е) Трайността на DSP е 4 години на стайна температура.

Клинични проучвания на DSP

Ангина пекторис се оценява посредством анамнезата за ангина, серумното ниво на липидите, електрокардиография (ЕКГ), ЕКГ при физическо натоварване, сцинтиграфска оценка на исхемията, коронарна ангиография и др. Оценявайки терапевтичния ефект, чрез посочените методи, е било показано, че DSP е ефективен медикамент за лечение на ангина пекторис.

DSP е ефективен за лечение на ангина пекторис.

157 пациента с коронарна сърдечна болест са лекувани с три пъти дневно по 10 DSP, през устата, за 4 седмици. При оценка на честотата, интензитета и продължителността на ангинозната болка, на чувството на опресия в гърдите и палпитациите, симптомите изчезват или отслабват в 95,3% от пациентите.

DSP е по-ефективен медикамент от Дан Шен таблета при облекчаване на ангината.

Дан Шен таблета е друг китайски медикамент за лечение на ангина пекторис, използван понастоящем в Китай. Бе сравнена ефикасността на DSP и Дан Шен таблета. Коронарно болните пациенти се разделят произволно в две групи. 107 пациенти се лекуват с DSP и 50 пациенти се лекуват с Дан Шен таблети. Сравнени по отношение честотата на ангинозните атаки и приема на нитрати, DSP бе по-ефективен от Дан Шен таблета за лечение на ангина пекторис. Виж таблица 5 по-долу.

Таблица 5. Сравнение на DSP и Дан Шен таблета

	Брой пациенти общо	Повлияни с ефект
DSP	107	102 (95,3%)
Дан Шен таблета	50	38 (76% )

66440 Bl

След като бе доказано, че DSP е по-ефективен от Дан Шен таблета, ефективността на DSP бе сравнена с различни лекарства, които се използват понастоящем за лечение на хронична стабилна ангина пекторис в САЩ 5

Сравнение между DSP и нитроглицерин.

Нитроглицеринът се използва често за облекчаване на ангина. Бе сравнена ефикасността на DSP и нитроглицерин да облекчават ангина. При ангинозна атака пациентите се лекуват с DSP или нитроглицерин и се сравнява времето, необходимо за повлияване на ангината. И DSP, и нитроглицеринът облекчават ангината при всички пациенти за 15 min. Ефикасността на DSP бе незначително по-ниска от тази на нитроглицерина. Виж таблица 6 по-долу:

Таблица 6. Сравнение между DSP и нитроглицерин

		Повлияни пациенти	1 .............
	в 1-5 минута	в 6-14 минута	в 11-15 минута ' ,--ί--1
DSP	11	14	5 '
нитроглицерин	17	12	1

DSP не повлиява сърдечната честота.

Данните демонстрират, че DSP ефективно облекчава ангината. Бе проучено дали DSP облекчава ангината посредством увеличаване на сърдечната честота. Последната, след лечение с DSP бе еквивалентна на тази преди лечението, което показва, че DSP облекчава ангината без да повлиява сърдечната честота (таблица 7).

Таблица 7. DSP не повлиява съдечната честота

Сърдечна честота

	Преди лечение	След лечение
DSP	84,3 ± 23,1	82,8 ± 22,8

Сравнение ефикасността на DSP с нитрата изосорбид динитрат.

След като бе доказано, че DSP облекчава ангина толкова ефективно, колкото и нитроглицерина, бе изпитано дали DSP профилактира ангина. Сравнен бе ефекта на DSP и нитрата изосорбид динитрат. Последният е дългодействащ нитрат, често употребяван за профилактика на хронична стабилна ангина пекторис в САЩ. Пациентите бяха лекувани с DSP през устата в доза три пъти дневно по 10 таблетки на прием или изосорбид динитрат три пъти дневно по 10 mg на прием. Отчитани бяха сърдечната функция и ЕКГ.

Сърдечна функция

Ефектът на DSP и нитратите върху сърдечната функция бе оценяван чрез измерване на сърдечния ударен обем (CO); минутен обем (SV); фракция на изтласкване (EF); фракция на скъсяване (FS).

DSP подобрява сърдечната функция поефективно от нитратите. Виж таблица 8 по-долу.

Таблица 8. Ефект на DSP и нитрати върху сърдечната функция

j	DSP	изосорбид динитрат faftsorhide dinitrate)
i	Преди лечение	След лечение	Преди лечение	След лечение
1 SV	75,38 ± 8,32	83,45 ±9,11	74,96 ± 8,44	79,47 ± 8,72
! co	5,61 ± 1,34	6,94 ±	6,54 ± 1,36	6,12 ± 1,41

66440 Bl

1 EF	0,57 ± 0,02	0,79 ± 0,02	0,59 ± 0,03	0,70 ± 0,03 '
j FS	17,14 ± 3,4	16,69 ± 3,6	17,32 ± 3,1	18,46 + 4,2 |

DSP подобрява ΕΚΓ.

Ефективният дял на ST-T е оценен посредством запис на честотата на промяната в ST-T сегмента. И DSP и изосорбид динитрат намаляват значимо честотата на промените в ST-T сегмента. DSP обаче е по-ефективен. Виж таблица 9 по-долу.

Таблеца 9.Сравнение на ефекта на DSP и нитрат върху ЕКГ

	Честота на ST-T промени
	Преди лечение	След лечение
DSP	131	35
изосорбид динитрат	129	42

Сравнение на DSP и аспирин за редуциране на кръвната стаза

Хеморагия в атеросклеротичната лезия индуциратромбоцитна активност, коронарна тромбоза и кръвен застой, в резултат на което влошава кръвния поток. Ето защо се препоръчва продължителен прием на инхибитора на тромбоцит ната агрегация аспирин, при пациенти с ангина. Ефекта на DSP и аспирин да подобряват кръвния поток бе сравнен чрез оценка на Hb; Lb; Р и въздушния поток.

DSP подобрява кръвния поток толкова ефективно, колкото и аспирин. Виж таблица 10 по-долу.

Таблица 10. DSP и аспирин подобряват кръвния поток

	DSP	аспирин
	Преди лечение	След лечение	Преди лечение	— След лечение
НЬ	6.23 ± 1.67	4.35 ± 1.02	6.12 ± 1.56	4.28 ± 1.07
LB	10.92 ± 2.21	8.30+1.14	10.38 ± 1.96	8.21 ± 0.3
Р	1.95 ± 0.08	1.77 ±0.08	1.89 ±0.12	1.67 ±0.7
Въздушен поток	1.79 ±0.13	1.39 ±0.11	1.82 ±0.17	1.40 ±0.10
Общ брой пациенти	25 _	28 ..... . . .

DSP редуцира кръвния застой чрез инхибиране натромбоцитната агрегация. Тромбоксан В2 активира тромбоцитите. Активираните тромбоцити освобождават различни субстанции, включително тромбоцитен бета микроглобулин, който причинява кръвен застой и така влошава кръвния поток.

Бе изпитана ефективността на DSP да ин хибира тромбоцитната агрегация. DSP ефективно понижава концентрацията на тромбоксан В2 и инхибира тромбоцитната агрегация. Изосорбид динитрат, за който се знае, че не инхибира тромбоцитната агрегация, използван като контрола, не редуцира тромбоксан В2 и не инхибира тромбоцитната агрегация. Виж таблица 11 по-долу.

66440 Bl

Таблица 11. DSP инхибира тромбоцитната агрегация

	— . ,— ·Ί	Преди лечение	След лечение j
βΡΜ	DSP	62.44 ± 14.37	45.65 ± 12.25 ί
нитрати	59.89 ± 15.42	54.36 ±13.18 i I
тромбоксан В 2	DSP	1312 ±535	738 ± 384 ί
нитрати	1315 ±507	1218 ± 445 '

DSP понижава нивото на плазмения холестерол.

Повишеният плазмен холестерол е свързан с началото на атеросклерозата. За профилактика формирането на нови атеросклеротични лезии се препоръчва понижаването на плазмения холестерол посредством диета или лекарства. Изпитано бе дали DSP понижава плазмения холестерол. DSP понижава холестероловото ниво с 0,3 mmol/1, което е статистически значимо при стойност на Р - 0,05. Виж таблица 12 подолу.

Таблица 12. DSP понижава плазмения холестерол

	Плазмен холеснерол j
	Преди лечение	След лечение j
DSP	5,15 ±0,16	4,84 ± 0,2 |

Ефект на кардиотоничната таблетка върху LPO (липидна пероксидаза) и SOD (супероксиддисмутаза) в кръвния серум на пациенти с коронарна болест.

Метод: В подложената на лечение група, 24 пациенти в съгласие с китайските препоръчителни диагностични стандарти за коронарна болест, коригирани през 1979 г., бяха подложени на лечение с кардиотонична таблетка, по 10 таблетки 3 пъти дневно, В нормалната група 20 здрави не получаваха никакво медикаментозно лечение.

Резултати: Нивото на LPO при пациенти с коронарна болест е несъмнено по-високо от това на здрави индивиди, докато нивото на SOD е ниско (р < 0.01). След лечение с кардиотонична таблетка нивото на LPO убедително спада (р < 0,01), а това на SOD се повишава (р < 0,01). Виж таблица 13 по-долу.

Таблица 13. Сравнение съдържанието на SOD и LPO между нормалната група и групата, подложена на лечение (xts)

I	Пациенти	SOD , ng/ml	LPO , mmol/ml _
j Нормална група	20	348 ±106	4.64+1.52
j Лечебна група	24	Преди лечение	267 ±76*	7.16 + 1.48*
След лечение	309 ± 87#	4.68 ± 1.72##

Брой пациенти: 80

Забележка: При сравнение с нормалната група, *р<0.05. В сравнение с тези преди лечение, #р<0.05, ##р<0.01.

66440 Bl

Заключение: Хроничната исхемия на сърдечния мускул при пациенти с коронарна болест и тъканната аноксия водят до редукция на активността на SOD, особено на екстрацелуларната, и нарастване на свободни О₂ радикали, което е при- 5 чина за нарастване на LPO и последваща консумация на SOD. След лечение на пациентите с кардиотонична таблетка, нивото на LPO спада убедително, докато нивото на SOD нараства очевидно. Това доказва неоспоримо, че кардиотоничната таблетка действа за очистване на свободните кислородни радикали, което е също и един от механизмите за лечение на коронарната болест.

Ефект на кардиотоничната таблетка върху 15 активността на LPO и антиоксидази в лечението на белодробно сърце.

Метод: 48 пациенти, страдащи от белодробно сърце, бяха случайно разделени в 3 групи. В нормалната група 16 пациенти са лекувани комплексно с противовъзпалителни средства, антиастматични средства, кислородни инхалации и т.н. В групата, лекувана с кардиотонична таблетка, 14 пациенти са лекувани с доза - 3 пъти по 10 таблетки дневно.

В Gantangzhi групата 18 пациенти са лекувани интравенозно капково---200 mg

Gantangzhi разтворен в 250 ml 5% глюкоза, 1 път дневно за 10-дневен период.

Резултати: След лечение с кардиотонична таблетка GSH-Px (глутатион пероксидаза) нараства, LPO спада и GSH-Px / LPO нараства. В сравнение с нормалната лечебна група има значима разлика. Виж таблица 14 по-долу.

Таблица 14. Показатели преди и след лечение.

	GSH-Px (U/mgHb)	CAT (U/gHb)	SOD (U/gHb)	LPO (nmol/ml)	GSH-Px / LPO
Гpvna на здравите ' . . _____	140.6 ± 35.2	312.7 ± 58.1	5799.8 ± 948	4.2 ± 1.2	34.2 ± 8·7
Нормална група	Преди лечение	101.3 ± 23.6	300.4 ± 107.7	5740.5 ± 939.0	5.6 ±1.9	20.4 ± 8.8
След лечение	120.6 ± 20.6*	390 ± 184.3*	6076.8 ± 1091	4.3 ± 1.2##	31.3 ± 15.1##
Група на кардиотонична таблетка	Преди лечение	108.8 ± 28.3	233.1 ± 70.2	5863.3 ± 1072.7	5.9 ±2.0	18.5 ± 7.6
След лечение	158.2 ± 40.7##**	328.4 ± 78.5##*	5582.8 ± 1094.7#*	4.1 ± 1.6##**	36.4 ± 6.7##**

Забележка: В сравнение на тези преди с тези след лечение, #р>0.05, ##р<0.05; *р>0.05; **р<0.05

Заключение: Кардиотоничната таблетка действа като антиоксидант, намалява липидната пероксидация и повишава антиоксидационните възможности на организма.

Лечение на есенциална хипертония с кардиотонична таблетка

Метод:

1) Избор на пациенти: подбират се пациенти с 1 и II степен есенциална хипертония, но без вторична хипертония или сърдечна, белодробна и бъбречна недостатъчност.

2) Провеждане: спира се приема от пациентите на всякакви западни и традиционни китайски медикаменти (с изключение на хипотензивни) за 4 седмици, като на 3-та седмица се измерва кръвното налягане и реологични кръвни показатели и се записват клиничните прояви. Възприема се двойно слепия метод. В групата на кардиотонична таблетка пациентите приемат таблетката през устата в доза 3 пъти по 10 таблетки дневно. В групата на комбинирана Дан Шен таблета пациентите приемат комбинирана Дан Шен таблета 3 пъти по 5 таблети дневно. Пациентите в контролната група приемат плацебо и периодът на лечение е 6 седмици.

Резултати: 1) Ефект върху вискозитета на цялостната кръв. След лечение, вискозитета на цялостната кръв при пациенти от двете групи,

66440 Bl тази c кардиотонична таблетка и комбинирана Дан Шен таблета, спада значително, но кривите на вискозитета на цялостната кръв при групата на кардиотонична таблетка при всяка една отделна скорост спадат по-стръмно, отколкото тези на комбинирана Дан Шен таблета групата. Виж таблица 15.

Таблица 15. Ефект на кардиотонична таблетка върху вискозитета на цялостната кръв (mPas; xts)

Групи	3.83 s-1	28.3 s-1	192 S-1 I
Г рупа на кардиотонична таблетка (30 пациента)	Преди лечение	18.27 ± 2.85	5.82 ± 0.93	4.54 ± 0.78 1
След лечение	11.79 ± 3.75**##&&	4.78 ± 0.84**##&&	3.98 ± | 0.65 **##&& j
Г рупа на комбинирана Дан Шен таблета (30 пациента)	Преди лечение	17.69 ± 1.96	5.86 ± 0.79	4.69 ± 0.54
След лечение	14.68 ± 3.41**&&	5.69 ± 0.81 *&	4.42 ± | 0.59**&& । j
Контролна група (15 пациента)	Преди лечение	17.65 ± 2.07	5.69 ±0.79	4.75 ± 0.58 ;
След лечение	18.02 ±2.32	5.71 ± 2.76	4.86 ± 0.65 I

Забележка: В сравнение с тези от същата група преди лечение, *р<0.05; **р<0.01. Сравнение с тези от групата на кардиотонична таблетка след лечение, #р<0.05, ##р<0.01. Сравнение с тези от контролната група след лечение, &р<0.05; &&р<0.01.

2) Ефект върху деформацията и агрегацията на еритроцитите. След лечение, деформаци ята на еритроцитите в групата на кардиотонична таблетка, е отчетливо по-изразена, отколкото преди лечението и площта и индекса на агрегация са забележимо по-малки от тези преди лечение. В сравнение с групата на комбинирана Дан Шен таблета, понижението на изследваните величини в групата на кардиотонична таблетка е много побързо (р<0.01). Виж таблица 16.

Таблица 16. Ефект на кардиотонична таблетка върху деформацията и агрегацията на еритроцитите (xts).

Г руни	Индекс на деформация	Индекс на агрегация	Площ на | агрегация ( (цялостно) 1
Г рупа на кардиотонична таблетка (30 пациента)	Преди лечение	0.4115 ±0.0360	4.06 ±0.39	841.12 ±67.68
След лечение	0.4274 ±0.034*&	3.41 ± 0.36* *#&&	683.52 ± ' 69.09* *#&& ;
Група на комбинирана Дан Шен таблета (30 пациента)	Преди лечение	0.4066 ± 0.0290	3.98 ± 0.34	806.90 ± 66.30 ।
След лечение	0.4180 ± 0.0281 *&	3.64±0.39**&&	716.12 ± । 84.29**& '
Контролна група (15пациента)	Преди лечение	0.4091 ± 0.0376	4.02 ± 0.41	812.52 ± 65.64 ί
След лечение	0.4001 ±0.0381	4.01 ± 0.39	804.44 ± 68.06 '

66440 Bl

Забележка: В сравнение с тези на контролната група преди лечението, *р<0.05, **р<0.01. Сравнение с тези от групата на кардиотонична таблетка след лечение, #р<0.05, ##р<0.01. Сравнение с тези от контролната група след ле- 5 чение &р<0.05, &&р<0.01.

3) Ефект върху кръвното налягане. След лечение систоличното и диастоличното налягате на пациентите от двете групи (Кардиотонична таблетка и Дан Шен таблета) спада отчетливо 10 (р<0.01), като не е отчетена значима разлика. Виж таблица 17.

4) Ефект върху симптомите на хипертонията. Пациентите от двете групи (Кардиотонична таблетка и Дан Шен таблета) получават значително подобрение по отношение на такива симптоми като главоболие, световъртеж и изтръпване на крайници (р<0.01), но не и по отношение на безсъние. Виж таблица 18.

Таблица 17. Ефект на кардиотоничната таблетка върху кръвното налягане (mmHg; x+s)

Групи	Систолично налягане	Диастолично налягане
Група на кардиотонична таблетка(30 пациента)	Преди лечение	155.00±8.08	90.70+7.93
След лечение	149.20±8.89**&&	86.59+8.30* *&&
Група на Дан Шен таблета (30 пациента)	Преди лечение	152.93+9.59	92.59+8.30
След лечение	146.02±10.20**&&	88.55±7.22**&&
Контролна група (15пациента)	Преди лечение	154.06+7.05	90.90+9.10
След лечение	152.08±9.25	91.10+8.70

Забележка: В сравнение с тези от същата група преди лечение, **р<0.01. Сравнение с тези от контролната група, &&р<0.01.

Таблица 18. Ефект на кардиотоничната таблетка върху клиничните симптоми на хипертонията(пациенти)

Групи	Главоболие	Световъртеж	Изтръпване на крайници	Безсъние
Да	Не	Да	Не	Да	Не	Да	Не
Груна на кардиотонична таблетка (30 пациента)	Преди лечение	20	10	16	14	12	18	8	22
След лечение	7	23	2	28	3	27	4	26
Група на Дан Шен таблета (30 пациента)	Преди лечение	22	8	17	13	10	20	6	24
След лечение	15	15	8	22	3	27	6	248
Контролна група (15 пациента)	Преди лечение	8	7	6	9	4	11	4	11
След лечение	7	8	5	10	3	12	2	13

Забележка: В сравнение с тези на контролната група преди лечението, *р<0.01.

66440 Bl

Извод: Реологичните свойства на еритроцитите при пациенти с есенциална хипертония са очевидно абнормални. Деформацията на еритроцитите несъмнено намалява, докато агрегационната способност нараства чувствително. 5 Експериментът показва, че кардиотоничната таблетка действа като отчетливо редуцира вискозитета на цялостна кръв и индекса и площта на агрегация на еритроцитите, и значително повишава способността за промяна във формата на еритроцитите. Кардиотоничната таблетка може също да намали кръвното налягане и да подобри клиничните симптоми при пациентите. И така, кардиотоничната таблетка е много полезно при профилактика или отлагане проявите на есенциална хипертония и кардиоцеребралния синдром.

Токсичност

DSP е безопасен и нетоксичен. В Китай над 5 млн. пациенти са били лекувани с DSP без тежки странични ефекти. Слаби странични ефекти като главоболие и световъртеж са били съобщени в малка група пациенти.

Резюме на клиничното проучване

DSP е нова генерация китайски медикамент за лечение на коронарна болест на сърцето. Клиничните проучвания демонстрират, че DSP облекчава, а също така профилактира ангина чрез подобряване на сърдечната функция, редуциране на миокардната исхемия, инхибиране на тромбоцитната агрегация с редукция на кръвната стаза и понижаване на плазмения холестерол.

Терапевтичният ефект на DSP е по-висок в сравнение с другия китайски медикамент Дан Шен таблета. DSP е толкова ефективен, колкото и лекарствата, употребявани в САЩ. DSP облекчава ангината толкова ефикасно, колкото и нитроглицерина, профилактира ангината също така ефективно, както и дългодействащия нитрат изосорбид динитрат и инхибира тромбоцитната агрегация толкова ефективно, колкото аспирин. DSP не е токсичен: над 5 милиона хора са лекувани без забележими странични ефекти в повечето случаи.

Предклинични проучвания

Предклиничните проучвания разкриват механизма, чрез който DSP предпазва и облекчава ангината.

DSP облекчава ангина посредством повишаване на кръвния поток.

Плъхове Wister, приблизително 260 g, бяха анестезирани с уретан, отвори се гръдния кош, ексцезира се сърцето и се перфузира по метода на Лангендорф при температура 37°С и се установи коронарно перфузионно налягане от 65 cm Н₂О. След стабилизиране на сърдечната честота, бяха въведени различни количества от DSP и Дан Шен таблета през латералния клон на аортата. Впоследствие бяха измерени коронарния поток и сърдечната честота. DSP повиши коронарния поток при високо дозиране. От друга страна. Дан Шен таблета повишиха коронарния поток при ниско дозиране. Виж таблица 19 по-долу.

Таблица 19. DSP повишава коронарния поток

Доза (mg/ml)	Коронарен поток
Преди лечение	След лечение
Без медикамент	7.0 ± 1.1	7.1±0.97
DSP	5.8	7.2 + 1.1	7.0 + 1.4
	290	6.7 ± 1.6	8.7 ± 1.4
	580	6.7 ± 1.5	9.3 ± 2.9
DS таблета	5.8	6.7 ± 1.4	7.1 + 1.5
. .......	290	7.3 + 1.7	9.1 ± 2.1
	580	6.8 ± 1.4	7.1 + 1.5

Беше изпитан ефекта на DSP и DS таблета върху сърдечната честота. Нито DSP, нито DS таблетата променят сърдечната честота. Виж таблица 20 по-долу.

66440 Bl

Таблица 20. DSP не повишава сърдечната честота

Доза (mg/ml)	Сърдечна честота
Преди лечение	След лечение
Без .медикамент	194 ± 17	193 + 12
DSP	5.8	180 ± 11	189 ±9
290	188 ±7	184 + 8
580	173 ± 14	167 ± 13 5.8
DS таблета	5.8	180 ± 11	189 ±9
290	189 ± 16	183 ± 14
580	186 + 23	171 ±8

DSP повишава коронарния поток посредством релаксация на гладката мускулатура и дилатация на съдовете.

Беше изпитан ефекта на DSP върху калийиндуцирана вазоконстрикция на участък от аорта на заек. DSP отпуска гладката мускулатура и така значимо дилатира съдовете. Подобен ефект беше наблюдаван при експерименти с рингове от коронарни артерии на гълъби.

DSP инхибиратромбоцитната агрегация.

Беше изпитан ефекта на DSP върху тромбоцитната агрегация на заешки тромбоцити. DSP инхибира тромбоцитната агрегация сигнификантно. Виж таблица 21 по-долу.

Таблица 21. DSP инхибира тромбоцитната агрегация

DSP (mg/ml)	# животни	Агрегационно съотношение (%)	Инхибиция (%)
о	6	6.7 ± 4.4	0
1.8	6	42.7 ± 2.5	8.3 ± 4.5
3.5	6	33.4 ± 3.4	23.6 ± 6.7
7	6	25.3 + 2.1	37.6 ± 5.9
14	6	15.8 ±3.0	69.0 ± 6.9

Таблица 22. Показва дела на микронуклеарните клетки при мишки в различни интервали от време след лечение с билковия състав съгласно изобретението (8400 mg/kg).

Време (h)	Полихроматични RBCs	Микронуклеарни клетки	Дял микронук- ί леари (%)(x±SD) |
12	6,000	9	1.5 ± 0.8 i
24	6,000	11	1.8+ 0.7 ;
36	6,000	11	1.8 ± 1.2 |
48	6,000	11	1.8+ 1.5 !
72	6,000	13	2.2 ± 0.7 !
Разтвор 24	6,000	9	1.5 ±1.4 !

0/1

66440 Bl

Таблица 23. Показва дяла на микронуклеарните клетки при мишки на 24-я час след прилагане на DSP и СР.

Таблица 23.

Доза (mg/kg) !	Полихроматични RBCs	Микронуклеарни клетки	Дял микронуклеари (%)(x±SD)
: 8,400	6,000	12	2,0 ± 0,6
, 840	6,000	9	1,5 ± 1,0
| 84	6,000	11	1,8 ± 1,0
ί Разтвор	6,000	9	1,5 ± 1,4
| СР (80 mg/kg)	6,000	138	23,0 ± 4,0*

*Сравнение с разтвора р<0.01.

Таблица 24.

Параметри / ефекти	Много висок ефект	Висок ефект	Ефект	Без ефект '
RBC агрегационен статус	Нулев	Нисък	Подчертан	Висок :
Начало на ефекта	<90	90-180	180-300	>300 ί
Микронуклеарен статус на кръвния поток	По-добър от нормален	Нормализира се	Подобрен	Влошен * 1
Времетраене (min)	>15	15-10	10-5	<5 '

DSP подобрява микроциркулацията.

Беше изпитан ефекта на DSP върху микроциркулацията на китайски хаметери. DSP подобрява микроциркулацията в продължение на 23 min след 111-минутно приложение в устната лигавица при всички животни. Виж таблица 25 по-долу.

Таблица 25. DSP подобрява микроциркулацията.

	Начало на действие (min)	Времетраене (min)	Честота на ефекта %
DSP	111	23	100 i

Таблица 26 показва протективния ефект на DSP върху миокарда, възбуден с питуитрин, при плъхове (втори период).

66440 Bl

Таблица 26. (n=8)

Група	Доза (g/kg)	Преди медикация	След медикация
Преди питуитрин	След питуитрин (40s-15 min). Брой плъхове с абнормална ЕКГ
контрола		Норма	Норма	7
	0.4	Норма	Норма	3*
DSP	0.8	Норма	Норма
	1.2	Норма	Норма	р*
DST	0.4	Норма	Норма	4
0.8	Норма	Норма	1**

Сравнен c контролата *p<0.05; **p<0.01.

Таблица 27 показва инхибиращия ефект на DSP върху миокардната исхемия. индуцирана от питуитрин, при плъхове.

Таблица 27.

Група	Доза (g/kg)	Инхибиция(%)
DSP	0,4	71.4*
0,8	85.7*
1,2	71.4*
DST ......	0,4 i 42.8*
0,8	85.7* _

Като сравнение с контролата. *р<0.05

Таблица 28 показва протективния ефект на DSP върху миокардната исхемия, индуцирана от питуитрин, при плъхове (първи период).

Таблица 28 (п=8)

Група	Доза (g/kg)	Промени в T-ST на ЕКГ(П отвеждане) през първия период
Преди медикация	След медикация
Преди питуитрин	След питуитрин (0-40s) брой плъхове с абнормна ЕКГ
Т-елевация	Обърната dT	Общо
Контрола	-	Норма	Норма	4	3	7
DSP	0,4	Норма	Норма	3	0	3*
0,8	Норма	Норма	1	1	2*
	1,2	Норма	Норма	2	1	3*
DST	0,4	Норма	Норма	3	2	5
0,8	Норма	Норма		1	2’

Сравнен с контролата. *р<0.05

7А

66440 Bl

Действие на кардиотоничната таблетка за очистване на свободни кислородни радикали.

Проучването за очистващото действие на кардиотоничната таблетка върху свободните радикали е проведена посредством използване на електронен парамагнитен резонанс (EPR) и въртеливо улавяне (spin traping), със супероксидни аниони и хидроксилни радикали, получени чрез системите ксантин-ксантиноксидаза и H₂O₂-Fe²⁺, съответно.

Метод:

1) Получаване на хидрокси радикали.

Създава се тест-модел, съгласно принципите на Фентон. Смесва се Н₂О₂; железен сулфат и DMPO (5,5-диметил-пиролин-1-оксид), след което се провежда EPR тестуване. Получените сигнали служат за контрола. Добавя се кардиотонична таблетка в лекуваната група.

2) Получаване на супероксидни аниони. Създава се тест-модел, базиран на реакцията ксантин-ксантиноксидаза. Смесва се ксантин, диетилентриаминпентаоцетна киселина, DMPO и ксантиноксидаза, след което се провежда ERP тестуване. Получените сигнали служат като контрола. Добавя се кардиотонична таблетка в лекуваната група.

Тестват се по десет проби от всяка от четирите групи и резултатите се изразяват по отношение на средното. Прилага се Т-тест в статистическия анализ.

Резултати:

1) Действие на кардиотонична таблетка върху очистването на хидрокси радикали, получени чрез H₂O₂-Fe²⁺ система.

Един адукт DMPO-OH ще бъде генериран, когато един хидрокси радикал се захване към един DMPO. Пиковата стойност на адуктите в контролната група е 11,8±0,6 релативни единици. Има значима разлика между тях (р<0.01) и очистващият дял на СР е над 65%.

2) Действие на СР върху очистването на супероксидни аниони, получени чрез системата хапthine-xanthine oxidase.

Един адукт DMPO-OH ще бъде генериран, когато един супероксиден анион се захване от един DMPO. Пиковата стойност на адуктите в контролната група е 10,6±0,67 релативни единици, докато спектралния сигнал в СР групата изчезва напълно. В сравнение с контролната група има значима разлика (р<0.01), и очистващият дял на СР е 100%.

Горните експерименти показват, че СР е ефективен при очистване на супероксидни аниони, получени посредством системата ксантин-ксантиноксидаза, и хидрокси радикали, получени със системата H₂O₂-Fe²⁺.

Ефект на СР върху свободни радикали при мозъчна исхемично реинфузионна тьканна увреда при плъхове.

Метод:

Вземат се 30 SD плъха и случайно се разделят в 3 групи, които са: симулирана оперативна група (операцията е проведена, но кръвоносните съдове и нерви не са лигирани); групата на мозъчния исхемично реинфузионен модел и групата на кардиотонична таблетка (4 g/kg). След 3-дневно продължително интраперитонеално (1р) приложение и 2 h след приложението на третия ден плъховете се анестезират с 20% Етилуретан и техните главни шийни артерии двустранно с вагусовите нерви се сепарират и лигират. След 30-минутна реинфузия се отрязват главите и се вземат мозъците. Взема се около 500 mg кортикална тъкан от левите хемисфери и хипокампусна тъкан от двете страни и се поставят в течен азот за хомогенизация. След като се превърнат в хомогенат, със замразен физиологичен разтвор се центрофугират. Взема се и супернатанта и се определя активността на CAT (хлорамфеникол ацетил трансфераза) и SOD и съдържанието на MDA и GSH (глутатион).

Резултати:

Виж таблица 29.

(1) Ефект на СР върху активността на CAT и съдържанието на GSH в мозъчна тъкан. Активността на CAT в мозъчния кортекс и хипокампусната тъкан, и съдържанието на GSH в мозъчния кортекс при групата на мозъчния исхемично-реинфузионен модел са много по-ниски от тези на симулирано оперираната група. Активността на CAT в хипокампусната тъкан и съдържанието HaGSH в мозъчната тъкан при СР групата бяха значимо по-високи от тези в групата модел.

66440 Bl

Таблица 29.

Активност на CAT и SOD и съдържание на MDA и SOD в мозъчни тъкани на плъхове (mPas; xts) (n=10)

Г рупи	CAT активност (U/mg белтък)	GSH (pmol/mg белтък)	SOD активност (U/mg белтък)	MDA ! (nmol'mg белтък) ;
мозъчна кора	Хипо- кампус	мозъчна кора	Хипо- кампус	мозъчна кора	Хипокампус	мозъчна кора	хи по- ; кампус ί
Симулирано	2.94+	2.78+	18.49±	16.87±	14.24+	20.34+	0.502+	1,084± ί 1
оперирана група	0.17	0.14	0.70	0.92	0.90	0.74	0.054	0.117 ;
Група модел	2.17+	1.97+	14.76±	13.80+	10.44+	18.18+	0.718+	1,449+ :
0.243	0.233	1.123	0.74	0.793	0.623	0.0703	0.1403 '
	2.55+	2.79+	17.14+	15.76+	13.31+	20.59+	0.483+	1.069+ !
СР група	0.35	0.2Р	0.76	1.183	0.773	0.593	0.0653	0.13Р

Забележка: В сравнение със симулирано оперираната група, *р<0.05; В сравнение с групата модел, #р<0.05;

2) Ефект на СР върху активността на SOD и съдържанието на MDA в мозъчна тъкан.

Активността на SOD в мозъчната тъкан в групата модел е значимо по-ниска от тази в групата на симулирана операция, докато съдържанието на MDA е значимо по-високо. Активността на SOD в мозъчната кора и хипокампусната тъкан при СР групата нараства, докато съдържанието на MDA спада значимо.

Извод: След мозъчна исхемично-реинфузионна увреда съдържанието на MDA в мозъчната тъкан нараства, докато съдържанието на GSH спада. Активността на CAT и SOD, два важни ензима за очистване на свободни кислородни радикали в тъканите, спада значимо, което показва, че по време на курса с мозъчна исхемично-реинфузионна увреда се натрупва голямо количество свободни радикали, което се дължи на недостатъчност на функцията на системата, очистваща свободните радикали. Това води до липидна пероксидация и по такъв начин до мозъчно увреждане. СР може да намали съдържанието на MDA в мозъчната кора и хипокампусната тъкан на реинфузирани плъхове и да повиши съдържа20 нието на GSH и активността на CAT и SOD значително, което показва, че СР отчетливо задържа реакциите на свободните кислородни радикали, контролира липидната пероксидация и предпазва увредените от исхемичната реинфузия мозъчни клетки.

Антиоксидационни възможности на СР при хронично чернодробно увреждане.

Метод: Възприема се модел на ССЬ4-високо съдържание на мазнини, ниско съдържание на протеини индуцирано леко хронично чернодробно увреждане на Wister плъхове.

В групата на СР се перфузира СР в стомаха на плъховете в доза 4 g/kg, докато в нормалната група и групата модел се перфузира същото количество физиологичен разтвор. Активността на SOD се определя чрез използване ксантиноксидазния метод, а съдържанието на MDA се определя посредством подобрен метод с тиобарбитурова киселина.

Резултати: Виж таблица 30. В сравнение с нормалната група, активността на SOD в групата модел се понижава, а тази на MDA нараства. В СР групата обаче, активността на SOD нараства, докато тази на MDA се понижава като се възвръщат към нормата.

ПО

66440 Bl

Таблица 30. Активност на SOD и съдържание на MDA при хронично чернодробно увреждане.

Групи	плъхове	SOD (NU/mg белтък)	---- - ------ ------ ·· η MDA j (nM/mg белтък) ί
Нормална група	12	1,717 ±0,521	15,21 ± 4,35 : 1
Г рупа модел	12	1,326 ±0,3218	19,39 ± 4,62* I
СР група	11	1,710 ±0,415#	15,1.6 ± 4,29# : _________i

Забележка: В сравнение с нормалната група, *р<0.05; В сравнение с групата модел, #р<0.05.

Извод: MDA е главен деградационен продукт на липидната пероксидация. MDA може силно да увреди структурата на клетъчната мембрана и по такъв начин чернодробните клетки. SOD е чистач на супероксидните анионни свободни радикали и може да ограничи липидната пероксидация. Кардиотоничната таблетка може значимо да повиши активността на SOD и да понижи съдържанието на MDA, което ще понижи нивото на липидната пероксидация и ще намали чернодробното увреждане.

DSP не е мутагенен.

Беше изпитано дали DSP е мутагенен в Ames образец. DSP не показа мутагенност. Виж таблица 31 по-долу.

Таблица 31. Мутагенност на DSP (Ames test)

---——----		Брой колонии на петри__
	S9	ТА97	ТА98	ТА100	ТА102
DSP	-
0.0	-	141±13	36±3	161±21	303±44
0.5___________	-	140+17	35+2	148±21	288±15
'5	-	136±14	34±4	154±26	280±16
50	-	133±20	33±5	142±25	292±37
500	-	109±15	34±3	154±16	311+32
5000	-	67±8*	30±4	149±27	298±32
0.0	+	141±13	44±6	176±19	296±39
0.5	+	148±13	42±9	1б1±27	296±37
5.0	+	152±11	44±7	161±16	292+38
50.0	+	140±18	37±6	166±9	307±55
500.0	+	135±21	42±7	152+22	287±16
5000.0	+	119±17	38±7	162±17	363±57
Dexon
50	-	2155±814	952±187	831±114	1510±2П
2-AF
40	-	125±18	38+3*	161±16
	+	14О4±644*	1598± 124	1222± 309	ί
Dan					1
100	-	364±50			ί
	+	934±102*			'i 1

66440 Bl

Продукция на сурова дрога

1, Дан Шен (1) Качествен контрол

Сурова дрога Дан Шен бе изпробвана от различни производителни райони на Китай. 5 Проведен бе химичен анализ на главните компоненти на пробите, базиран на различни принципи. Резултатите показаха, че качеството на Дан Шен от района на Shangluo е най-добро от всички и се оказа, че климатът в Shangluo е най-подхо- 10 дящ за отглеждане на Дан Шен. Активните инградиенти на Дан Шен, таншинон и салвианова киселина А бяха оценени като най-добри по съдържание.

(2) Топография 15

Shangluo е разположен географски в източната част, със средна надморска височина от 900 т. Регионът е ниско и средно планински и е екологично чист. Условията на незамърсен, чист въздух са идеални за растеж на лекарствени 20 растения.

(3) Климат

Климатът е топъл, със средна влажност, типичен за планинските райони в преходната зона от субтропическия към умерения пояс. Под 25 влияние на югоизточните мусони има явно разделяне на сезоните и голямо количество дъждове. Количеството валежи в тази област годишно се изчисляват на 733,9-899 mm. Периодът на слънцегреене е около 1874,1-2185 h годишно, с го- 30 дишно слънчево лъчение от 119,57-124,36 килокалории / cm³. Температурата е между 18°С 40,8°С. Свободният от слани период трае 198218 дни годишно.

(4) Почва 35

80% от почвата в Shangluo е песъчлива, по-голяма част от орната земя се състои от неутрална и алкална почва с pH от 6,5-8. На дълбочина 0-20 cm от обработваемия пласт хранителните вещества в почвата съдържат: 1,36% орга- 40 нични субстанции; 0,085% азот: 18 ppm бързодействащ фосфор; 136 ppm бързодействащ калий; 60 ppm алкално-хидролизиран азот. Тежки метали и други токсични субстанции, съдържащи се в почвата не надхвърлят селскостопанските стан- 45 дарти за страната. Регионът е богат на растения и животни. Местните фермери използват органични торове.

(5) Тежки метали

8-те метала, включително: олово, кадмий, 50 живак, арсений и др., пестицидните остатъци, въздухът и водата, всички са в рамките на екологичните стандарти за страната.

(6) Стандартизация

Разсаждането и обработването на Дан Шен следва стандарта на добра земеделска практика (GAP). Технологичните умения, относно отглеждането на Дан Шен, са събрани в наръчници и се разпространяват основно сред отглеждащите Дан Шен фермери. По време на разсадния сезон се изпращат техници, които подготвят растениевъдите на място и предлагат техническа подкрепа така, че да се стандартизира разсаждането на Дан Шен в широк мащаб.

(7) В плодородното подножие на Shangluo са се отглеждали и култивирали 20 различни сорта Дан Шен.

В продължение на 3 години бяха наблюдавани и сравнявани различни сортове Дан Шен по техните условия на развитие, реколта, външен изглед и химични компоненти. Подбрани са най-качествените сортове за насаждения в широк мащаб.

(8) Бяха усвоени тъканно култивиране и технология за клониране при Дан Шен за ускоряване на процедурата и скъсяване на растежния цикъл.

(9) След 30-дневен период на пробно закрито разсаждане се предприема една разширена репродуктивна процедура. Тя продължава 40 дни преди коренчевия период. За последния са необходими още 10 дни, през които растенията генерират и обогатяват коренната си система. Делът на последната обикновено достига над 90 %. След това растенията се преместват в разсадник, където се поливат с модерни устройства и условията на растеж се поддържат с компютър. След едномесечно култивиране в разсадник, растенията могат да бъдат пресадени на открито.

(10) Според експертите, култивираният от нашата производствена база Дан Шен е не само висококачествен, но и продуктивен на корени (50% по-високо кореново тегло в сравнение с други региони) и висок химичен състав (70% по-висок по отношение на активните лекарствени съставки в сравнение с проби от други места).

2. Естествен борнеол.

(1) Условия за растеж

ΊΛ

66440 Bl

Растежните области на естествен борнеол са в окръг Xinhuang на провинция Hunan - Китай, регион със средно високи хълмове и надморско равнище 300-600 т. 60% от площите са покрити с гори. Земята съдържа жълти и червени песъчливи почви с pH 5-6. Не са открити замърсявания на въздуха и водата в региона.

(2) Биологични характеристики на дървото

Изключителна издръжливост при растеж - расте в обрасли с храсталак полета 300-400 дървета на mu (равно на 666,7 т²), събират се частите на клоните над листата, нетният добив възлиза на 1000 kg/mu.

(3) Репродукция и разсаждане

За репродукция се използват ашладисване и рязане. Дървото расте в разсадник през първата година и се разсажда през пролетта на втората година. Полето, върху което се разсажда дървото, трябва да се наторява и разорава периодично.

(4) Дървото може да расте до 30 cm на височина и 80-100 cm в диаметър. Съдържа естествен камфор в различни части: листа, клони, стебло и корени. Най-високо съдържание на камфор има в листата.

(5) Борнеоловияттип камфор от Xinhuang е един от естествените разновидности на Cirnamonium glandullferm (wall) Noes. Камфоровите дървета имат различно съдържание на камфор и борнеол, едни с високо съдържание на камфор и ниско на борнеол, а други обратно. Чрез проучване на голямо количество проби и множество анализи с високоефективна течна хроматография бе открит вид камфорово дърво, което съдържа над 80% борнеол, с повисока чистота.

3. Корен от женшен (Radix Notoginseng).

а. Семена на растението.

(1) Установяване на корен от женшен (Radix Notoginseng).

С PCR реакция за маркиране на молекулярна маса може да бъде наблюдаван корен от женшен (Radix Notoginseng), който има характерен ДНК отпечатък.

(2) Форма и свойства

Семената на женшен имат заоблена кръгла форма. По отношение на различния растежен период, женшен има дву- и тригодишни семена. Двугодишните семена са 0.45-0.55 cm в диаме тър и 95-103 g тегло, изсушени. Тригодишните семена са 0,54-0,65 cm в диаметър и 98-109 g, изсушени.

(3) Подходяща температура за поникване 5 на семената.

Подходяща е температурата от 10-30°С, а идеалната температура е 15-20°С.

(4) Водно съдържание.

Водното съдържание трябва да бъде 6070%, ако то спадне под 20% за дълъг период, семената губят жизнеспособността си.

(5) Латентност.

Семената са с тенденция да преминат латентен период за 45-60 дни след събиране.

(6) Продължителност на живот.

Семената имат продължителност на живот 15 дни в естествено състояние след събирането им.

(7) Изисквания за съхраняване на семената.

Семената за съхранение трябва да бъдат събирани от растенията, които са расли повече от 2 години и дърветата трябва да се отглеждат при подходящи за надземните им части условия и свободни от вредители. Препоръчва се събиране на семена от тригодишни растения.

(8) Обработване на полетата за добиване на семена.

Резервираните за добив на семена полета трябва да бъдат по-добре обработвани от полетата за обикновена продукция, заразените растения трябва да се ликвидират по всяко време, вредителите не трябва да влизат в контакт с пъпките при никакви обстоятелства. През периода на поникване на пъпки и листа трябва да се напръскват двукратно с биологична тор YunDa-1203000 ppm и разтвор на YangKang (400-кратно разреждане). През периода на цъфтеж и образуване на плод се напръсква с Фитокинин (Phytokinin).

(9) Период на събиране на семената.

Периодът на събиране на семената на женшен е от края на октомври до началото на декември.

(10) Методи за събиране на семената.

Смята се, че събирането на семената зависи от степента на тяхната зрелост. Семената от дървета, които растат по-бързо, трябва да бъдат събирани и съхранявани отделно. Принципът стриктно забранява събиране на незрели

66440 Bl растения.

(11)Технология.

Растенията се измиват незабавно след събирането, а безформената маса и повредените семена се изчистват. След измиване се изсушават на слънце.

(12) Съхранение.

Използва се 58% разтвор на металаксил манганов цинк в разреждане 300:1 за обработка на семената на женшен в продължение на 30 min. Оставят се до изсушаване на повърхността им и се съхраняват в пясък с влажност 20%. Това е критичен етап на процеса.

(13) Опаковка

Крайните продукти се опаковат в обеззаразени контейнери. Те трябва да имат обозначения, които да показват датата на събиране, технологията и партидния номер.

(14) Транспортиране.

Трябва да бъдат използвани чисти, водоустойчиви и вентилирани транспортни средства с оглед предпазване на продукта от замърсяване с токсични вещества. Ако е необходимо транспортиране над 8 h, семената трябва да са във влажен пясък.

(15) Изпитване за жизненост на семената.

Използва се ТТС метод: претегля се точно 1 g прах тетразолий и се разтваря в 1000 ml дестилирана вода до получаване на 0,1 % разтвор на ТТС. Пробата се потапя в разтвора и се оставя 24 h, след което се изважда, разделя се на две, и половината се поставя в културален диск. Използва се приготвеният 0,1% ТТС за умъртвяване на пробата за 30 min. Жизнеността на семената може да се определи по оцветяването им.

(16) Проверка за вредители.

i. Семената се оглеждат на око при поставяне на 500-1000 зърна върху бял лист хартия или чаша. Ако се появят необикновени петна или вредители върху повърхността им, се приемат за заразени. Заразените проби трябва да се отделят и да се изследва нивото на заразяване.

й. Разрязване и оглед: използва се скалпел за разрязване и отваряне на 2 пробни набора от по 100 семена. Изчислява се броят на заразените семена за определяне нивото на заразяване iii. Проверка на пробите по мирис.

Поставя се пробата върху дланта и се проверява обонятелно за всякакви миризми на пръст. Или просто се поставя проба в съд с гореща во да (60-70°С), покрива се за 2-3 min, отстранява се водата и се помирисват семената. Семената трябва да излъчват нежен аромат, ако не - те вероятно са заразени.

(17) Проверка по цвят.

Незаразените семена трябва да имат светложълт и бял цвят.

(18) Микроскопска проверка.

Избират се произволно 5 тест пробни набора (всеки набор съдържа не по-малко от 50 семена), поставят се в културален диск за 24 h. Наблюдават се под микроскоп за наличие на патогенни бактерии и при наличие на такива се изчислява нивото на заразяване.

Ь. Разсаждане на растението.

(1) Температура на поникване.

Температурата на никнене на женшен е 1 20°С, или идеалната температура е 15°С.

(2) Водно съдържание.

Водното съдържание на почвата, използвана за младите растения е 20-25%.

(3) Съхранение.

Латентният период, необходим за развитие на женшен, от пъпка до растение за засаждане, е 90 дни. 100 ppm гиберелин (фитохормон) може да помогне за скъсяване на латентния период.

(4) Пречистване.

Периодът за пречистване на женшен е от началото на декември до края на януари. През този период с корените трябва да се борави грижливо. Засаждат се веднага след пречистването.

(5) Транспортиране.

Женшенът не може да бъде транспортиран надълго разстояние, в противен случай може да бъде увреден. Ако е неизбежен по-продължителен транспорт, женшен трябва да бъде поставен в добре вентилиран контейнер с почва без директна слънчева експозиция.

(6) Проверка за качество

i. За определяне теглото на всяка единица се избират 300-500 млади растения, разделят се на групи по 100, претеглят се на теглилки и се изчислява единичното тегло.

и. Проверка за пестициди: поставят се 4 групи проби, всяка от които съдържа по 100 млади растения. Пробите се поставят върху стъклен диск и се наблюдават с просто око или с лупи с 5-10-кратно увеличение за откриване на

66440 Bl заслоните.

Заслонът е на 1,8 m над земята с 2 m дълбок ров под земята. Добро проникване на слънчевите лъчи до 8-10% има в райони с надморс5 ка височина до 1600 m или до 10-15% при надморска височина над 1600 т. Местността трябва да бъде равна, да липсва дълбок земен пласт, а повърхностният земен пласт да бъде плътен. Най-добър сезон за засаждане е от края на де10 кември до края на януари. Преди засаждане семената трябва да се потопят в 58% металаксил цинк (500-800х) или 1,5% антимицин (200 ppm) за 30-50 min, след което се изгребват, за да изсъхнат. Това се извършва за предпазване на 15 растенията от заболявания (Покритите семена не трябва да се подлагат на споменатата по-горе процедура). Гъстотата на засяване трябвала бъде 4x5 cm или 5x5 cm при 100-200 хиляди семена на mu земна повърхност. Използват се спе20 циални инструменти за създаване на плитки бразди, и специални машини или ръчно - за засаждане. Семената се покриват напълно със ситна пръст.

Следва наторяване, поливане и почиства25 не от плевели. Последните трябва да бъдат премахвани по всяко време. Ако навесът се счупи, трябва да се поправи своевременно, за да се осигури необходимото проникване на слънчева светлина. Могат да се прилагат естествени то30 рове като птича тор, прах от изгаряне, костен прах (човешки отпадъци не трябва да се прилагат).

d. Култивиране на женшен (Radix Notoginseng).

(1) Топология.

Най-добрата местност трябва да бъде с умерен наклон от 15° и добра слънчева експозиция.

(2) Структура на почвата.

Най-добре е, ако земята съдържа в дълбочина ронлива и песъчлива почва.

(3) pH на почвата трябва да е 5,5-7.

(4) Посеви, предхождащи засаждането.

Предхождащи посеви в нови полета за избягване на почвена деструкция могат да бъдат царевица, пшеница и бобови култури.

(5) Морско равнище.

Най-подходяща област за отглеждане на женшен е с надморска височина 1400-1800 m близо до меридиан 23,5°.

(6) Слънчева светлина пестициди.

iii. Поставят се 4 групи проби, всяка съдържаща по 100 растения и се нарязват за наблюдение под микроскоп.

с. Отглеждане на младите растения.

(1) Полеви условия.

Младите растения женшен се отглеждат в райони с най-добри условия. Принципно се използва централизирано отглеждане и широко мащабен метод.

(2) Околна среда

Регионът е изцяло свободен от полютанти. Качеството на въздуха е над ниво 2 по стандарта GB 3059-96.

(3) Водни ресурси.

Водните ресурси се състоят от дъждовна вода, подземна вода и естествено течаща вода. Качеството на водата в областта се следи съобразно стандарта GB 5084-92.

(4) Почва.

Женшен не може да се отглежда върху мочурлива почва, количеството на тежки метали в почвата трябва да бъде в границите на съответните за страната стандарти.

(5) Идеална почва.

За да очакваме добри резултати, ние избираме почва с киселинност (pH 5,5-7,0) и наклон не повече от 15°. При надморско равнище до 1600 m е необходимо слънцегреене 8-12%, а над 1600 m слънцегреенето трябва да бъде 1020%.

(6) Температура.

През периода на засаждане и никнене атмосферната температура трябва да бъде 20-25°С, а температурата на земята 10-15°С. През периода на добиване на плод най-добрата атмосферна температура е 20-25°С и най-добрата почвена температура е 15-20°С.

(7) Водно съдържание.

Водното съдържание на почвата трябва да 40 бъде 25-30%.

(8) Подготовка на почвата.

Почвата се разорава 3 пъти преди засаждането, за да бъде изложена на слънчева светлина, което помага за очистване от бактери- 45 алнитесубстанции.

(9) Третиране на почвата.

За предпазване корените от увреждане се използват вар 75-100 g/m² преди присаждане.

(10) Конструкция и поддържане на

--------·- —

66440 Bl

Женшен е вид растение, което изисква само 8-20% слънчева светлина. Интензитетът на слънчевата светлина трябва да бъде различно повишаван в зависимост от периода на растеж. Твърде голяма светлинна експозиция обаче ще доведе до забавено развитие на растенията.

(7) Водно съдържание.

Водното съдържание в почвата трябва да бъде 25-30%.

(8) Торове.

Използват се органични торове заедно с комбинирани торове и такива, съдържащи микронутриенти и микроелементи.

(9) Температура.

Средногодишната температура за област с женшен се определя на 15-18°С. По време на периода на никнене, атмосферната температура трябва да бъде най-подходяща: 20-25°С и почвена температура 15°С. По време на нутриентното развитие и цъфтежа е най-добре да се поддържа 25°С. Ако температурата е под 15°С, цъфтежът ще бъде увреден.

(10) Полева обработка.

Преди култивация полето трябва да се разоре и почвата да се бранува 3-кратно докато стане ситно натрошена.

(11) Поддържане на почвата.

Преди сеитба и разсаждане се прилагат 75100 g негасена вар върху почвата със стерилизационна цел.

(12) Стандарти за лехите.

Лехите върху хоризонтална местност са с височина 20-25 cm, а в наклонен район височината трябва да бъде 15-20 cm. Ширината на лехите е между 120 и 140 cm с форма на улей. Пръстта на дъното трябва да бъде фино натрошена, а тази на повърхността трябва да е плътна с оглед по-добрата пенетрация.

(13) Киснене на семената.

По време на пресаждането семената се накисват за 30-50 min в 58% металаксил (500800х), след което се подсушават, това предпазва растенията от заболявания и унищожава вредителите.

(14) Гъстота на засяване.

Спазва се дистанция от 10x12,5 cm - 10x15 cm гъстота на растенията. Това означава 26-32 хиляди растения на mu.

(15) Методи на пресаждане.

Младите растения се засяват в една и съ10 ща посока за целите на поддържане. В случай на наклонени местности, младите растения се засяват от по-ниските към по-високите места. Първата редица млади растения е с лице нагоре, 5 докато втората - с лице надолу. Пъпките са също с лице нагоре, а долната част трябва да е с лице навътре.

(16) Почвено покритие.

Използва се ситна, ронлива и влажна почва за покриване на младите растения напълно, без да се показват корените и пъпките.

(17) Торене.

Използват се птича тор, прах от изгаряне, калциево-магнезиев фосфат и други специални торове.

Claims (3)

1. Патентни претенции

   1. Метод за получаване на Дан Шен таблетка за лечение на хронична стабилна ангина пекторис, състоящ се от етапите:

   а) екстракция на Radix Salviae Miltiorrhizae и Panax Notoginsen поотделно в рефлукс с гореща вода и разделно филтриране;

   б) концентриране на филтратите поотделно;

   в) разделно пречистване на концентратите посредством използване на колонки смола и концентриране до получаване на пречистени водноразтворими екстракти на Radix Salviae Miltiorrhizae и Panax Notoginsen;

   г) смесване на пречистените водноразтворими екстракти от етап в) със синтетичен борнеол и фармацевтични носители.

   2. Метод съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че:

   (1) Екстракцията на водноразтворими компоненти на Panax Notoginsen се състои от следните етапи:

   (а) Разреждане на билките с вода 5-7кратно;

   (б) Екстракция на водноразтворими компоненти на Panax Notoginsen чрез варене в съд с налягане между 0,04-0,06 mPa в продължение на 2 h;

   (в) Повтаряне на екстракцията при същите условия за 1,5 h;

   (г) Филтриране на екстракта чрез 100-клетъчно сито;

   (д) Пречистване на филтрата посредством едропореста адсорбционна смола и елуция с

   3/1

   66440 Bl етанол;

   (е) Концентрация на елуираните екстракти при условия на понижено налягане с подаване на въздух до 0,04-0,06 mPa и вакуум до -0,0760,088 mPa до постигане на плътност 1,33-1,35;
2. (2) Екстракцията на водноразтворими компоненти на Radix Salviae Miltiorrhizae се състои от следните етапи:

   (а) Разреждане на билките с вода 5-7кратно;

   (б) Екстракция на водноразтворими компоненти на Radix Salviae Miltiorrhizae чрез варене в съд с налягане между 0,04-0,06 mPa за 2 h;

   (в) Повтаряне на екстракцията при същите условия за 1,5 h;

   (г) Филтриране на екстракта чрез 100-клетъчно сито;

   (д) Концентрация на филтратите при условия на понижено налягане при вакуум -0,0760,088 mPa, докато 1 kg начално количество от билката стане 11;

   (е) Преципитация на концентрата с етанол;

   (ж) Филтрация на разтвора на етаноловия преципитат през 100-клетьчно сито;

   (з) Концентрация на филтрата при условия на понижено налягане с подаване на въздух с налягане 0,04-0,06 mPa и вакуум -0,076-0,088 mPa;

   (и) Пречистване на концентрата с полиамидна хроматография и елуция с етанол;

   (й) Концентриране на пречистените екстракти до плътност 1,33-1,35;
3. (3) А по-нататъшното производство на таблетката се състои от следните етапи:

   (а) Смесване екстрактите на Рапах Notoginsen, екстрактите на Radix Salviae Miltiorrhizae, синтетичен борнеол и полиетилен гликол 6000 в съотношение 4,0:20,6:1,9:79,5;

   (б) Разтопяване на сместа;

   (в) Производство на таблетки от стопената смес посредством таблетираща машина със следните характеристики: температура на таблетиращия тигел - постоянна 89-93°С, охлаждащ разтвор - течен парафин с температура под 8°С, вътрешен диаметър на таблетиращата глава -1,8 mm, външен диаметър - 2,4 mm, разстояние между таблетиращата глава и повърхността на охлаждащия разтвор - 15 cm;

   (г) Центрофугиране на таблетките при 8001100 об./min в продължение на 15 min за отст- раняване на мазнините.

   3. Дан Шен таблетка за лечение на хронична стабилна ангина пекторис, получена чрез метод съгласно някоя от претенциите 1 и 2.

   5 4. Дан Шен таблетка съгласно претенция

   3, характеризираща се с това, че съдържа от 540% водноразтворима фенолна киселина от корен от салвия, 1-10% водноразтворим сапонин от женшен и 1-5% борнеол.

   5. Дан Шен таблетка съгласно претенция 3, характеризираща се с това, че съдържа от 1030% водноразтворима фенолна киселина от Radix Salviae Miltiorrhizae, 2-6% водноразтворим сапонин от женшен и 1-3% борнеол.

   6. Дан Шен таблетка съгласно претенция 3, характеризираща се с това, че съдържа от 0,14 до 0,18 mg Danshensu на таблетка, поне 12,12 microg санхинозид R1 на таблетка и поне 56,26 microg жинсенозид Rgl на таблетка.

   Приложение: 3 фигури

   Литература

   1. US Pat. № 5288485 “Вазодилатиращ агент”.

   2. US Pat № 5433957 “Вазадилатиращ агент”.

   3. US Pat № 5776463 “Метод за редуциране на стреса и сърдечносъдовите заболявания (циркулаторните сърдечни заболявания) с екстракти замразено-изсушени венчелистчета на Borago officinalis (пореч)”.

   4. Yang GY и сътр., “Клинични проучвания върху лечението на коронарната сърдечна болест с Valeriana officinalis varlatifolia, Chung Kuo Chung Hei I Chieh Ho Tse Chinq 14(9):540-2,1994.

   5. Wu Y, “Клинично проучване върху лечение на ангина пекторис при коронарна болест на сърцето с Xintongkang капсули “Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(7):395-8, 1990.

   6. Liu KY и сътр., “Клинично наблюдение върху лечение с taponin на 45 пациенти с ангина пекторис при коронарна болест.” Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih 15 (11): 649-51, 1995.

   7. Hu JX и сътр. “Клинично и експериментално проучване на Shenshao tongguan-pian при лечение на ангина пекторис” Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(10):596-9, 1990.

   8. Li Y и сътр. “Ефекти на Kuo-guan гранули върху плазмения цинк, мед и еритроцитна глутатион пероксидаза (GSH-Px) при пациенти с

   66440 Bl ангина пекторис” Chung His I Chieh Ho Tsa Chih, 10(6):348-50, 1990.

   9. Wang В и сътр. “406 случая на ангина пекторис, лекувани със saponin на Tribulus terrestris” Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(2):85- 5 7, 1990.

   10. Jin C и сътр., “Ефект на Astragalus membranaceus върху съдържанието на Na+ в еритроцитите и Na транспорт при коронарна болест на сърцето”, 11(11 ):651-3, 1991. 10

   11. Yiang HW и сътр., “Клинично проучване при лечение на qi-дефицит и синдром на кръвен застой при ангина пекторис с qi xue гранули”. Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 12(11):663-5, 1992. 15

   12. Wang XF и сътр., “Клинично наблюдение на Wenxin декокт при лечение на 82 пациенти със спонтанна ангина пекторис”, Chung Kuo Chung Hsi 1 Chieh Но Tsa Chih, 16(4):201-3,1996.

   13. Lei ZY и сътр., “Действие HaAstragalus 20 membranaceus върху ляво-вентрикулната функция при ангина пекторис”, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(4):199-202, 1994.

   14. HeW и сътр., “Ефекти на Kuo guan прах върху имунологичните функции при пациенти с 25 ben-xu biao-shi синдром при исхемична болест на сърцето” Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(4):213-5, 1989.

   15. Chen K и сътр., “Клинично проучване върху ефекта на shuxuening таблети при лечение 30 на коронарна болест на сърцето”. Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(1):24-6, 1996.

   16. Zang H и сътр., “Клинично проучване върху ефектите на buying huanwu декокт при коронарна болест на сърцето” Chung Kuo Chung Hsi 35 1 Chieh Ho Tsa Chih, 15(4):213-5, 1995.

   17. Zhang XL и сътр., “Предварително проучване на shu-xin розова вода в лечението на ангина пекторис при коронарна болест на сърцето”. Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 40 12 (7):414-6, 1992.

   18. Hu JX и сътр., “Клинично и експериментално проучване на shenshao tongguan pian при лечение на ангина пекторис” Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih. 45

   19. Zhu W и сътр., “Протективен ефект на danshen при миокардна исхемия и реперфузия: едно изолирано проучване върху сърце на плъх” Американски журнал по клинична медицина, 18(1-2):19-24, 1990. 50

   20. Li YY, “Клинично и експериментално проучване на ефекта на xue mai tong върху коронарна сърдечна болест” Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(2):79-81, 1989.

   21. Cai PY и сътр., “Клинично проучване на hehuantang при лечение на коронарна сърдечна болест” Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(4):204-6, 1996.

   22. Lin QC, “Клинично проучване на guan mai le при лечението на коронарна сърдечна болест” Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(5):280-2, 1989.

   23. Li SQ и сътр., “Клинично наблюдение върху лечението на исхемична болест на сърцето с Astragalus membranaceus”. Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 15(2):77-80,1995.

   24. Lu BY и сътр., “Ефект на sheng mai san върху липидната пероксидация при пациенти с остър миокарден инфаркт” Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(12):712-4, 1994.

   25. Wang S и сътр., “Ефекти на Codo nopsis pilosulae върху синтезата на tromboxane А2 и prostacyclin /тромбоксан А2 и простациклин/ Chung Hsi 1 Chieh Но Tsa Chih, 10(7):391-4, 1990.

   26. Guan M и сътр., “Наблюдение върху лечението на коронарна сърдечна болест чрез kuo guan qu yu ling” Журнал на традиционната китайска медицина 10(1):49-53, 1990.

   27. “Fufang Danshen Pian” Фармакопея на Китайската народна република, английско издание 1997. Volume 1, 280.

   28. Zhu HG, “Клинично проучване на xinkening за лечение на асимптомна миокардна исхемия при коронарна болест на сърцето.” Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(4):213-5, 1994.

   29. Chiang WT и сътр., “Ефекти на Danshensu и други два водноразтворими компонента на Savia miltiorrhiza върху исхемичен миокард на куче и изолирана, коронарна артерия на гълъб” Acta Acad Med Prim Shanghai 1982; 9:13-19.

   30. Sun Xi-ming и сътр., “Проучвания върху едно ново фармакологично действие на екстракт от Danshen (салвия)” Clin Med Herb 1991; 22:30-23.

   31. Chen ZH и сътр., “Проучвания на ефекти на Danshensu върху експериментални мик- роциркулаторни разстройства и плазмени концентрации на млечна киселина” Acta Acad Med Prim Shanghai 1987; 14:25-29.

   32. Huang C и сътр., “Ефекти на сапонини от женшен върху миокардна исхемия и реперфузионно увреждане при зайци в съзнание”. Clin Bull Pharmacol 1991; 7:190-3.

   33. Shi L и сътр., “Ефекти на тотални сапонини от женшен за повишаване PGI2 в каротидната артерия и понижаване на ТХА2 в тромбоцитите”АСТа Pharmacol Sin 1990; 11:29-32.

   34. Xu W и сътр., “Ефект на ментол и борнеол върху разпределението на сулфадиазин натрий и Евансово синьо в мозъка на плъхове и мишки” Pharmacol Chin Med Clin 1995;(6):31-33.

   35. Chen TF и сътр., “Повишаване абсорбцията натетраметилпиразин със синтетичен борнеол” Acta Pharmacol Sin 1990; 11:42-44.

   36. Li X и сътр., “Протективни ефекти на сапонини от женшен върху експериментално ми- 20 окардно увреждане посредством исхемия и реперфузия при плъхове” Acta Pharmacol Sin 1990; 11:26-29.

   Bl

   37. Pan JG и сътр., “Химични проучвания върху есенциални масти от шест разновидности на Artemisia”. Chin J Chin Mater Med 1992; 17:741-6.

   5 38. Wu YZ и сътр., “Оценка на корен от салвия при повишаване кръвната циркулация чрез премахване на кръвната стаза” Acta Manjing Univ Trad Chin Mater Med 1995; 11:35-6.

   39. Wang NS и сътр., “Експериментални

   10 проучвания на “Предимствата на борнеол като един помощник или водач” J Trad Chin Med 1994; 35:46-7.

   40. Li СЕ и сътр., “Антикоагулантен ефект на корен от салвия” Chin J Integr Med 1983; 15 3:297-9.

   41. Li CZ и сътр., “Експериментално проучване върху инхибиращ тромбоцитите ефект на корен от салвия” Acta Acad Med Prim Shanghai 1979; 6:145-9.

   42. Mo QX и сътр., “Динамика на ЗН-борнеол” Prophet Trad Chin Med 1982; 8:5-7.

   43. Zheng RX и сътр., “Предпазващ ефект на корен от салвия върху миокардна исхемия, предизвикана чрез коронарно лигиране у миш25 ки” Chin J Integr Med 1992; 12:424-6.