BRPI0116589B1

BRPI0116589B1 - Composição herbal para angina pectoris, método para prepará-la e uso desta

Info

Publication number: BRPI0116589B1
Application number: BRPI0116589-5A
Authority: BR
Inventors: Xijun Yan; Naifeng Wu; Zhixin Guo; Zhengliang Ye; Yan Liu
Original assignee: Tasly Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Priority date: 2000-12-22
Filing date: 2001-12-18
Publication date: 2018-07-03
Also published as: BG66440B1; KR100577498B1; NO331678B1; DK1351698T3; NO20032893L; PL362562A1; HK1067072A1; PL209402B1; AU2002246730B2; BG108001A; MXPA03005666A; SK288060B6; CN1520307A; CN100475233C; HUP0303906A2; ES2403240T3; WO2002058625A3; CA2434050A1; BR0116589A; JP2004522952A

Abstract

"composição herbal para angina pectoris, método para prepará-la e uso desta". esta invenção fornece composições contendo extratos de radix salviae miltiorrhizae, radix notoginseng e borneol. as composições mencionadas contém notoginsenoside r~ 1~ e ginsenoside r~ g1~ que são componentes ativos para aplicações terapêuticas. esta invenção também fornece um método de preparação das composições mencionadas e um método de identificação e determinação da quantidade de componentes efetivos individuais das composições mencionadas. finalmente, esta invenção fornece vários usos das composições.

Description

(54) Título: COMPOSIÇÃO HERBAL PARA ANGINA PECTORIS, MÉTODO PARA PREPARÁ-LA E USO DESTA (51) Int.CI.: A61K 36/185; A61K 36/537; A61K 36/258; A61P 9/10; B01D 15/08; G01N 30/90 (30) Prioridade Unionista: 22/12/2000 US 60/258,057 (73) Titular(es): TASLY PHARMACEUTICAL GROUP CO., LTD.

(72) Inventor(es): YAN XIJUN; WU, NAIFENG; GUO, ZHIXIN; YE, ZHENGLIANG; LIU, YAN

1/81 “COMPOSIÇÃO HERBAL PARA ANGINA PECTORIS, MÉTODO PARA PREPARÁ-LA E USO DESTA” [1] Por todo este pedido de patente de invenção, muitas publicações são referenciadas e as citações completas para estas publicações podem ser encontradas nas referências no final do relatório descritivo, antes das reivindicações. As revelações destas publicações são incorporadas pelo presente pela referência dentro deste pedido a fim de descrever mais completamente o estado da arte, como conhecido pelo técnico desta área na data da invenção descrita e reivindicada neste pedido.

[2] O ESTADO DA ARTE DA INVENÇÃO [3] A angina pectoris estável crônica deve-se à isquemia miocárdica de trânsito. Aspirina, nitratos, medicamentos de bloqueio beta-adrenoceptores e medicamentos de bloqueio de canal de cálcio usados sozinhos ou em combinação um com outro são os medicamentos comumente usados para angina pectoris.

[4] A aspirina como um agente antitrombótico é um tratamento sintomático para angina pectoris estável crônica.

[5] Os nitratos são usados para tratar um episódio anginal e podem ser usados com sucesso nas profilaxias pelos pacientes com sintomas previsíveis. Com todos os nitratos, dores de cabeça importunas podem evitar seu uso em certos indivíduos suscetíveis.

[6] Os medicamentos de bloqueio beta-adrenoceptores, embora estabelecidos como uma base no tratamento da angina, são especificadamente contraindicados em pacientes com doenças de vias aéreas obstrutivas e disfunção ventricular severa, e relativamente contraindicados em caso de

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2/81 pacientes com diabetes e naqueles com doença vascular periférica, bradicardia ou bloqueio do coração.

[7] Antagonistas do cálcio são certamente eficazes na angina, alcançando seus efeitos pelo relaxamento do músculo liso nas artérias coronárias e na circulação periférica, aumentando o fornecimento miocardial e reduzindo o trabalho miocardial.

[8] Embora haja um progresso na terapia de combinação de medicamentos para angina, a maioria dos pacientes iniciam o tratamento com nitratos e um medicamento de bloqueio betaadrenoceptor ou um antagonista do cálcio, há uma necessidade de medicamentos para angina pectoris estável crônica que são muito eficazes, podem ser tomados por um longo período de tempo e tem uma toxicidade muito baixa.

[9] Em vista dos problemas relacionados aos medicamentos mencionados acima, tem sido feito um esforço notável para aplicar a Medicina herbal como uma alternativa para o tratamento padrão da angina pectoris estável crônica.

[10] A Medicina Chinesa Tradicional (TCM) tem contribuído muito com relação a este respeito. As Patentes Americanas n.5288485 e n.5433957 referem-se a um extrato de hypericum erectum thunb para curar ou prevenir doenças causadas pela doença na circulação do sangue tal como a angina pectoris.

[11] A Patente	Americana	n.5776463	refere-se	a uma
composição	farmacêutica	oral	contendo	pétalas	de	borragem
ou extrato	de	pétalas	de	borragem	para a	prevenção e
tratamento	do	stress	que	é associado com	doenças

circulatórias do coração incluindo a angina.

[12] Além da hypericum erectum thunb e das pétalas de borragem, muitas outras plantas medicinais também tem sido usadas para tratar a angina.

[13] Uma destas plantas é a Valeriana officinalis

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3/81 latifolia. Yang GY e outros (1994) relataram que 82 pacientes com angina pectoris foram tratados com Valeriana officinalis latifolia, entre os quais alterações isquêmicas ST-T apareceram no ECG em 50 casos antes do tratamento.

[14] Sua taxa efetiva total para angina simples (sem encontrar isquêmicos detectáveis) foi de 87,80%; a angina com a presença isquêmica, 88,00%. Além disto, foi descoberto que a Valeriana officinalis latifolia poderia abaixar também os lipídios do plasma. Não foram encontradas ações tóxicas no fígado, rins e tecido hemopoiético [1].

[15] Wu Y (1990) relatou que num grupo de 267 pacientes com angina pectoris, 93,3% dos pacientes tratados com cápsulas de xintongkang foi eficaz.

[16] Outra preparação herba1 chamada Shenshao tongguan pian foi usada no tratamento da angina pectoris. Em 1990, Hu JX e outros, relataram que o Shenshao tongguan pian é composto especialmente de saponinas do talo e das folhas do Ginseng e da Radix paeoniae A1ba, etc.

[17] A taxa efetiva total para o tratamento da angina pectoris foi de 94,71%. E a taxa de melhoramento do ECG foi de 63,38%. Além disto, exames de laboratório também revelaram que o Shenshao tongguan pian poderia promover o rendimento ventricular esquerdo, abaixar a viscosidade do sangue e inibir a agregação de plaquetas do sangue. Ambos testes de toxicidade crônica e aguda mostraram que o Shenshao tongguan pian não tem efeitos colaterais ou toxicidade.

[18] O grânulo Kuo-guan é outra preparação herba1 para angina pectoris. Li Y e outros (1990) relataram que as mudanças do zinco do plasma, cobre e peroxidase da glutationa de eritrócitos foram medidos pela espectrometria de absorção atômica e cor DTNB desenvolvidos em 31

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4/81 pacientes sofrendo de doenças coronárias do coração com angina pectoris antes e depois de tomar os grânulos de Kuoguan por um mês. Os resultados indicaram que o zinco do plasma e a peroxidase da glutationa de eritrócitos foram mais baixos e o cobre foi maior nos pacientes do que no grupo de controle normal antes do tratamento (p<0,0l), o zinco do plasma e a peroxidase da glutationa de eritrócitos aumentaram e o cobre diminuiu depois do tratamento (P<0,01). Isto sugere que o mecanismo terapêutico do grânulo Kuo-guan para doenças coronárias do coração com angina pectoris pode relacionar-se a sua regulação de traçar elementos de distúrbio no corpo.

[19] Saponina do Tribulus terrestris foi outra composição herba1 para o tratamento da angina pectoris.

[20] Fufang Danshen Pian é uma prescrição popular do Tablete Dan Shen que é indicado para o tratamento da angina pectoris estável crônica devido à isquemia da artéria coronária e tem sido listado oficialmente nas edições da Farmacopéia Chinesa desde 1977 e aplicado para uso clínico por décadas.

[21] Fufang Danshen Pian contém múltiplos extratos ativos de botânicos incluindo Danshen (Radix Salviae Miltiorrhizae), e Sanchi Ambos botânicos foram primeiramente (Radix Notoginseng) documentados em Shen Nong Ben Cao Jing (Farmacopéia Herbal de Shen-nong) completada em 200. Fufang Danshen Pian também contém borneol sintético, uma versão de um borneol natural (Bingpian). O borneol natural foi primeiramente documentado em Tang Ben Cao (Farmacopéia Herbal da Dinastia Tang) compilada em 659 DC.

[22] Li Cheng-zhu e outros (1979) relatou em (Acta Acad Med

Prim Shanghai) num estudo experimental do efeito de inibição trombótica da Radix Silvia e Mil tiorrhizae. Os

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5/81 efeitos na trombose in vitro, funções de plaqueta e coagulação, fibrinólise foram observados em coelhos. Após a injeção de Radix Silviae Miltiorrhizae, 3 ligações foram descobertas contendo um papel importante na inibição da trombose in vitro: (1) inibição da função de plaqueta; (2) inibição da função da coagulação; e (3) promoção da fibrinólise. Das quais, os dois mecanismos anteriores funcionam mais intensamente. Os resultados conformam-se a aqueles no tratamento de doenças trombóticas, especialmente doenças trombóticas arteriais.

[23] Chiang WT e outros (1982) relataram em {Acta Acad Med Prim Shanghai) os efeitos de Danshensu e de outros dois componentes solúveis em água da salvia miltiorrhiza no miocárdio isquêmico de cachorros e na artéria coronária de porcos isolados. O efeito de 3 novos componentes solúveis em água, isto é, Danshensu (DS-182, ácido lático D(+)-3,4dihidroxifenil), aldeído protocatéquico (PCAD) e um ácido diterpeno impuro (DS-187) isolado da Salvia miltiorrhiza Bunge, foram comparados com aqueles da dipiridamole.

[24] Os resultados revelaram: (1) em camundongos DS-182 protege significativamente contra hipoxia, enquanto que o PCAD foi ineficaz; (2) DS-182 poderia anular a elevação STT isquêmica eletrocardiográfica induzida pela pituitrina, mas não teve influência na taxa reduzida do coração. DS187, PCAD e dipiridamole somente mostraram uma proteção incompleta; (3) no modelo de cachorro infartado agudamente preparado pela ligação da ramificação descendente anterior da artéria coronária esquerda, os benefícios alcançados pela injeção intravenosa de DS-182 provaram ser superiores ao DS-187 e ao PCAD pressão sistólica do pico função ventricular esquerda, ventricular esquerdo (LVPSP) e pressão diastólica da ponta ventricular esquerda (LVEDP). PCAD, ao contrário, produziu efeitos colaterais na LVPSP e

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LVEDP. Dipiridamole administrada por via intravenosa, embora esta não tenha alterado LVEDP, LVPSP significativamente com efeito hipotenso suprimiu identificado. Todos estes componentes da Sálvia e dipiridamole reduziram significativamente o tamanho do infarto do miocárdio final (análise N-BT); DS-182 foi o mais efetivo, dipiridamole e DS-187 o próximo, enquanto PCAD o menor; (4) na preparação coberta isolada da artéria coronária do porco, DS 182 reduziu significativamente a resistência do vaso coronário, onde ou o sulfonato de sódio Tanshinone II-A DS-187, PCAD (DS-201), outro componente da Salvia, aumentou este. A ação constritória da morfina e propranolol na preparação da artéria coronária isolada foi antagonizada pela administração anterior do DS-182.

[25] Tudo isto sugeriu que Danshensu pode ser o principal princípio ativo da Salvia miltiorrhiza no tratamento da doença isquêmica do coração e que seu uso concomitante com propranolol ou morfina seria benéfico. Li Cheng-zhu e outros (1983), relataram em (Chin J Integr Med) o efeito anti-coagulação da Radix Silviae Miltior+rhizae. Danshensu é um monômero solúvel em água extraído da Radix Silviae Miltiorrhizae.

[26] Esse também é o ingrediente principal da injeção comercial vendida Radix Silviae Miltiorrhizae. O presente estudo provou que a trombose in vitro, Danshensu inibe a agregação de plaquetas (induzidas pela ADP), e os sistemas de coagulação interno e externo diminui o número de plaquetas e promove a degradação da fibrina ou do fibrinogênio. Os efeitos chegaram ao pico 30 minutos depois de uma única injeção de mg/kg nos coelhos, durou por 1 hora e recuperaram-se gradualmente, depois de 4 horas e meia da injeção, todos se recuperaram normalmente exceto o teste in vitro da trombose.

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7/81 [27] Chen Zhanghua (1987) relatou em Acta Acad Med Prim Shanghai Danshensu efeitos nos distúrbios sobre os do microcirculatórios experimentais e nas concentrações de ácido lático do plasma. Danshensu natural é um monômero solúvel em água Radix Salviae Miltiorrhizae(RSM). Extraído da Distúrbios microcirculatórios nos coelhos foram induzidos pela injeção intravenosa Dextran de alto peso molecular. O Danshensu natural (dosagem 4-6 mg/kg) aumentou de uma forma marcante o número de vasos capilares na conjuntiva bulbar, e também diminuiu a concentração de ácido lático do plasma nos coelhos. Desordens microcirculatórias mesentéricas foram produzidas pela noradrenalina local, gotas (4g) nos camundongos. A Danshensu natural dilatou as artérias e aceleraram a velocidade do fluxo de sangue, desta forma eliminando a estase de experimentos, sangue efeitos

Nos nossos microcirculatório. do Danshensu sintético foram observados concomitantemente. Os resultados mostraram que não houve diferença significante entre o Danshensu natural e o sintético ao aliviar o distúrbio microcirculatório. Sun Xi-ming e outros relatou uma nova ação (1991) farmacológica de um extrato de Danshen (Salvia miltiorrhiza).

[28] O documento relatou que um extrato de Danshen (Salvia miltiorrhiza) que contém os sais do sódio de ácido lático D(+)-(3,4-dihidróxi fenil) foi descoberto em possuir uma nova ação farmacológica de diminuição da biossíntese do colesterol nas células e na oxidação anti-lipoproteína, através de estudos culturais de células.

[29] Quando comparado com o controle, sua taxa de migração eletroforética foi abaixada de forma marcante e o conteúdo de MDA e citotoxicidade diminuiu obviamente. Estes resultados indicaram que os sais de ácido lático D(+)-(3,4dihidróxi fenil) pode ser efetivo na prevenção e tratamento

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8/81 da arteriosclerose. Zheng Ruo-xuan e outros (1992), relataram em (Chin J Integr Med) o efeito da preservação da Radix Silviae Miltiorrhizae na Med) isquemia miocardial induzida pela ligação coronária nos camundongos. Efeito de preservação óbvia na isquemia miocardial aguda nos camundongos pela ligação coronária pode ser obtida depois da extração da água (i.p.) da Radix Silviae Miltiorrhizae (5g quantidade aproximada de medicamento/kg). Elevação devido à segmento S-T no ECG isquemia miocardial no grupo de tratamento foi muito inferior, o tamanho isquêmico do ventrículo esquerdo foi menor e a taxa de sobrevivência foi maior quando comparada com o controle. Wu Yao-zhong e outros (1995) relatou em (Acta Nanjing Univ Radix Silviae Trad Chin Mater Med) sobre os efeitos da Miltiorrhizae na promoção da circulação sangüínea pela remoção da estase do sangue. A pesquisa farmacológica da Radix Silviae Miltiorrhizae é comum. Contudo, estudos reológicos sobre a Radix Sil viae Mil tiorrhizae pela análise do PGI2, ET, e TXA2 produzidos Radix Silviae pelas plaquetas são raros. A influência da Miltiorrhizae na trombose, alterações de PT, KPTT, FG, ESR e HCT, e a agregação da plaqueta nos coelhos são avaliadas no presente estudo. As conclusões são que a Radix Silviae Miltiorrhizae reduz a síntese do TXA2 e diminui os efeitos do aumento da agregação de plaquetas e trombose. Shi Lin e outros (1990), relataram em (Acta Pharmcol Sin) sobre os efeitos da saponinas total Panax Notoginseng no aumento de PGI2 na artéria carótida e diminuição de TXA2 na plaqueta de sangue. O total de Saponinas de Panax notoginseng (PNS) foram administrados oralmente 100 mg/ (kg dia) nos coelhos por 8 semanas.

[30] A formação de placas arteriosclerose aórtica foi reprimida conforme comparado ao grupo de controle.

Radioimunoensaio foi usado para investigar os efeitos do

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PNS no conteúdo da prostaciclina na artéria carótida e tromboxano A2 nas plaquetas de sangue dos camundongos. A administração oral de PNS 25, 50, 100 mg/ (kg dia) por 10 dias causou um aumento de prostaciclina na artéria carótida e uma diminuição de tromboxano A2 nas plaquetas de sangue quando comparado com o grupo de controle.

[31] Estes resultados mostraram que a ação antiarteriosclerose de PNS pode ser um resultado da correção do desequilíbrio entre a prostaciclina e o tromboxano A2. Li Xing e outros (1990), relataram na (Acta Pharmacol Sin) os efeitos defensivos da Panax Notoginseng saponin na lesão miocardial experimental induzida pela isquemia e reperfusão nos camundongos. Os efeitos da saponina total da Panax Notoginseng (PNS) e ginsenóides purificados Rb e Rg do PNS na lesão miocardial induzida pela isquemia cardíaca e reperfusão foram estudados usando corações de camundongos in situ e in vitro. Nos camundongos anestesiados com pentobarbital, o pré-tratamento com PNS (100 e 200 mg/kg) proporcionou uma redução significativa no tamanho miocardial infartado depois da ligação da artéria coronária descendente esquerda (40 min) e reperfusão (120 min) na comparação com o controle. PNS 12,5 e 25 mg/L, Rb 10 mg/L e Rg 10 mg/L diminuiu significativamente a liberação CPK cardíaca, acúmulo de ca++ miocardial atenuado, produção reduzida de malondialdeído (MDA) e redução evitada da atividade de superóxido dismutase (SOD) em comparação com o controle nos corações de ratos isolados perfusados com isquemia global (40 min) e reperfusão (15 min). Os resultados mostraram que PNS, Rb e Rg evitaram a isquemia cardíaca e a ação foi considerada estar relacionada à inibição da peroxidação do lipídio. Huang Cong e outros (1991) relatou na (Chin Bull Pharmacol) os efeitos da Panax Notoginseng Saponin na isquemia miocardial e lesão da

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10/81 reperfusão nos coelhos conscientes. Os efeitos da Panax Notoginseng saponin {PNGS) na isquemia miocardial e lesão da foram estudados com reperfusão nos coelhos conscientes observação das alterações no eletrocardiograma {ECG), as atividades da creatina fosfoquinase CPK) e lactato desidrogenase na dose de 50 (LD) e o tamanho da área isquêmica. PNGS mg/kg e 100 mg/kg reduziram significativamente o tamanho da área isquêmica miocardial. Estes resultados sugeriram que PNGS possui os efeitos protetores na isquemia miocardial e lesão de reperfusão.

[32] Mo Qi-xian e outros (1987), relataram em (Propriet Trad Chin Med Res) as dinâmicas do H-Borneol. A fim de ressaltar o mecanismo de induzir a ressuscitação de aromaticidade do Borneol, dinâmicas de H-Borneol foram conduzidas pela injeção intravenosa e administração via oral. Os resultados revelaram que o tempo de meia-vida foi de 2.8 minutos depois de uma única injeção intravenosa de 3H-Borneol. Isto sugeriu que o medicamento distribuído rapidamente aos órgãos e tecidos relevantes depois da administração e produziram um efeito rápido. A distribuição In vivo concentrada nos órgãos e tecidos que são abundantes no fluxo de sangue, tal como no coração, pulmões, fígado, rins e cérebro, etc. Isto forneceu aplicação clínica com certa base teórica. Desde que a diminuição do tempo de meia-vida foi de cinco horas e trinta minutos depois da administração via oral do medicamento, isto sugeriu que o Borneol oral não poderia levar à acumulação, mas a uma pobre bioaviabilidade. Outros estudos deveriam ser feitos para discutir a relação com a dosagem do medicamento e forma da dosagem.

[33] Chen Tie-feng e outros (1990), relataram em (Acta Pharmacol Sin) o melhoramento da absorção da tetrametilpirazina pelo borneol sintético.

Camundongos

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Sprague-Dawley foram administrados 5mg/kg de imunoglobulina fosfato de tetrametilpirazina (TMP) com ou sem 5mg/kg borneol anterior. As concentrações de plasma TMP foram analisadas pelo método GC, e os dados foram tratados pelo programa NONLIN. O Cmax foi de 931 e 562mg/ml, respectivamente, (p<0,0l); enquanto o AUC foi de 68849 e 37174, respectivamente, (P<0,05). É sugerido que o borneol melhora a absorção do TMP mas não na eliminação.

[34] Xu Wei e outros (1995), relataram em (Pharmacol Chin Med Clin) o efeito do mentol e borneol na distribuição do sulfadiazina de sódio e azul de Evan no rato e cérebro de camundongo. Mentol (1,5 g/kg, imunoglobulina) e Borneol (1,5 g/kg) prolongou a meia-vida t1/2 da distribuição de sódio de sulfadiazina nos ratos. A dosagem acima de mentol e borneol administrada via oral também aumentou a concentração de sódio de sulfadiazina no cérebro do rato. Mentol (ig 0.5g/kg por 3 dias) e borneol (imunoglobulina 0,5g/kg por 3 dias) promoveu a concentração do azul de Evan no cérebro do camundongo, mas o valor da concentração foi significativamente inferior daquele do camundongo sofrendo de lesão de reperfusão de isquemia. Os resultados sugeriram que o mentol e borneol poderiam melhorar a transferência de sódio de sulfadiazina na à barreira hemato-encefálica sem danos barreira hemato-encefálica.

[35] Nos Estados Unidos, doenças do coração como arteriosclerose coronária é a causa mais comum de morte e invalidez cardiovascular. Arteriosclerose é uma desordem arterial caracterizada pelas placas amareladas de colesterol, lipídios e fragmentos celulares nas camadas inferiores das paredes das artérias de tamanho médio e grandes. A condição inicia como uma estria gordurosa e forma gradualmente uma placa fibrosa ou lesão arteromatosa. As paredes dos vasos sangüíneos ficam grossas, fibrótica e

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12/81 calcificadas. O lúmen da artéria se estreita. Muitas placas arterioscleróticas permanecem estáveis ou progridem gradualmente. Outras podem se romper resultando numa hemorragia, ativação das plaquetas e, assim formar uma trombose intravascular. A trombose coronária causa oclusão parcial ou completa dos vasos, prejudica o fluxo do sangue, desta forma leva a uma angina instável ou infarto do miocárdio. Alternativamente, as placas com rupturas podem tornar-se restabilizadas, geralmente estenose mais severa. Exercícios e stress mental aumentam a demanda por oxigênio miocardial. Sob condições fisiológicas normais, a demanda aumentada do oxigênio miocardial é satisfeita pela dilatação das arteríolas, aumentando assim o fluxo de sangue. Na presença da arteriosclerose, as arteríolas podem dilatar na forma máxima para satisfazer a demanda básica. Tais arteríolas dilatadas podem ser incapazes de satisfazer o aumento da demanda do oxigênio miocardial. Quando a demanda do oxigênio excede o fornecimento de oxigênio, ocorre a isquemia do miocárdio. Alternativamente, oclusões severas dos vasos podem limitar o fluxo de sangue e assim causar a isquemia miocardial.

[36] Manifestações clínicas da isquemia do miocárdio transiente é a angina pectoris que é uma dor torácica paroxismal, freqüentemente espalhado pelos braços, particularmente no braço esquerdo, acompanhado ou não por um sentimento de sufocamento e morte iminente.

[37] Angina pectoris é subdividida em duas: estável e instável. A angina pectoris estável é causada pela demanda do oxigênio miocardial aumentado na maioria dos casos. Desta forma a angina estável ataca na freqüência e duração previsível sob a provocação que aumenta as exigências do oxigênio miocardial tal como os exercícios, stress mental, etc.

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13/81 [38] Em contraste, a angina pectoris instável ataca sem provocação e é geralmente causada pelo fornecimento diminuído do oxigênio para o miocárdio.

[39] A ruptura da placa, a agregação plaquetária e a trombose coronária diminui o fornecimento do oxigênio para o miocárdio.

[40] A Angina pectoris é tratada com vários medicamentos, procedimentos cirúrgicos, transplante de desvio da artéria coronária, angioplastia com balão, procedimento Stents Endovasculares stent placement, etc.

[41] A terapia para a angina pectoris estável é primariamente minimizar a demanda do oxigênio miocardial, bem como uma medida preventiva. A terapia para a angina pectoris instável de síndrome aguda é primariamente para inibir a ativação das plaquetas e trombólise. Os atuais agentes terapêuticos para angina pectoris estável crônica são nitroglicerina, outros nitratos, bloqueadores de canais de cálcio e bloqueadores dos receptores beta-adrenérgicos.

[42] Estes medicamentos, administrados sozinho ou em combinação com outros medicamentos, aliviam ou previnem ao invés de curar a angina. Quando a angina ataca, a nitroglicerina é administrada embaixo da língua para aliviar os sintomas. A nitroglicerina também é aplicada para prevenir os ataques de angina causados pelo esforço e stress. Os nitratos são aplicados para prevenir os ataques da angina. A nitroglicerina e os nitratos mediam seu efeito primariamente pelo relaxamento do músculo liso vascular, reduzindo a atividade miocardial, e desta forma reduzindo a demanda por oxigênio miocardial. Os efeitos colaterais são dores de cabeça palpitante, tontura, fraqueza, hipotensão ortostática, taquicardia, etc. Bloqueadores dos receptores beta-adrenérgicos tais como propranolol são aplicados para

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14/81 prevenir a angina pectoris pela redução das exigências por oxigênio miocardial durante o esforço e stress. As principais contra-indicações são broncopastias, bradiaarritmias e falha do coração pública. Nos indivíduos com asma e outras formas de obstrução aéreas, bloqueadores beta podem piorar sua condição. Antagonistas do cálcio são aplicados para prevenir a angina pectoris pela redução da demanda de oxigênio do miocárdio. O miocárdio é dependente do influxo de cálcio para as funções normais. Ao inibir o influxo de cálcio, antagonistas do cálcio podem relaxar o músculo liso dos vasos sangüíneos, diminuir a atividade do miocárdio, reduzir a demanda por oxigênio pelo miocárdio e desta forma, prevenir a angina pectoris. Antagonistas do cálcio possuem efeitos colaterais. O lado suave dos efeitos são: rubor, edema, tontura, náusea, etc. Inibição excessiva de influxo de cálcio para o miocárdio pode causar efeitos colaterais severos, tal como parada cardíaca, bradicardia, bloqueio artrioventricular, falha congestiva do coração, etc. Combinado com medicamentos beta-adrenérgicos, os efeitos colaterais dos antagonistas de cálcio são geralmente aumentados. Na China, Panax Notoginseng e Radix Salviae Miltorrhizae tem sido usados para tratar doenças cardiovasculares desde 200 DC (Farmacopéia Herbal de Shennong). Panax Notoginseng tem sido usado para tratar a angina pectoris. Radix Salviae Mil tiorrhizae tem sido usado para promover a circulação de sangue e dispersar a estase do sangue. Diversos estudos pré-clínicos e clínicos demonstraram a eficácia e segurança do Panax Notoginseng e da Radix Salviae Miltiorrhizae. A medicina tradicional Chinesa é a mistura de diversas ervas necessitando de decocção uma forma modificada da medicina Chinesa para o tratamento da doença coronária do coração é o tablete de Dan Shen. O tablete de Dan Shen é uma grande esfera

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15/81 untuosa, geralmente chega a 1 cm de diâmetro. Os tabletes de Dan Shen são feitos do extrato da Radix Salviae Miltiorrhizae, pó de Panax Notoginseng e borneol sintético, foram listados na Farmacopéia Chinesa desde 1977, e tem sido usados para tratar doenças cardiovasculares por décadas. (DSP) A pílula Danshen revelada ou chamada pílula cardiotônica nesta invenção é uma nova geração da medicina Chinesa para doenças coronárias do coração. A medicina Chinesa consiste de várias ervas que variam de prescrição para prescrição com relação ao tipo de ervas, bem como a proporção de ervas. Para controlar a qualidade, DSP é fabricado com a fórmula padronizada. Os componentes terapêuticos da DSP são os extratos solúveis em Notoginseng (2-6 %), e borneol (1-3%). Além disso, para aliviar rapidamente a angina, DSP foi fabricado como uma pequena pílula, que pode ser dissolvida imediatamente através da administração embaixo da língua, fornecida rapidamente ao miocárdio, e desta forma para aliviar de uma forma rápida a angina.

[43] DSP provou ser não-tóxico e efetivo para a prevenção e tratamento de doenças cardiovasculares causadas pela isquemia da artéria coronária nos estudos pré-clínicos e clínicos. Além disso, a eficácia superior da DSP para os tabletes Dan Shen, para o tratamento da doença arterial coronária, foi demonstrada nos estudos pré-clínicos, bem como nos estudos clínicos. DSP foi listada na Edição Suplementar da Farmacopéia Chinesa desde 1998, aprovada pelo Ministério da Saúde Chinês, identificado como um medicamento na China desde 1993, e usado por mais de cinco milhões de pessoas.

[44] SUMÁRIO DA INVENÇÃO

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16/81 [45] A Pílula Dan Shen (DSP) revelada nesta invenção é uma nova geração da medicina Chinesa para tratamento da doença arterial coronária fabricada com a fórmula padronizada.

[46] A DSP compreende a quantidade padronizada de extratos da Panax Notoginseng/ os extratos da Radix Salviae Miltorrhizae e Borneol.

[47] Panax Notoginseng é incluída para aliviar e prevenir a angina. Radix Salviae Miltorrhizae é incluída para inibir a ativação de plaquetas, para prevenir a trombose coronária e desta forma promover a circulação de sangue. Borneol é

incluído para o	fornecimento	efetivo	de	componentes
terapêuticos para o	miocárdio.
[48] DSP é	fabricada	como	uma	pílula
pequena/aproximadamente 25 mg	que pode	ser	dissolvido
imediatamente sob	a administração embaixo	da	língua e,

desta forma, para mediar rapidamente seus efeitos terapêuticos. A eficácia da DSP aliviando e prevenindo a angina tem sido provada nos estudos pré-clínicos e clínicos.Esta invenção revela uma máquina de gotejamento pela qual a DSP ou outras pequenas pílulas podem ser fabricadas. Esta invenção revela um método de controlar a qualidade dos medicamentos pela identificação e quantificação dos componentes terapêuticos nos medicamentos, aplicando técnicas analíticas, tal como cromatografia em camada delgada, cromatografia líquida de alta performance, etc.

[49] DESCRIÇÃO DETALHADA DAS FIGURAS

[50]	Figura	1.	Lote	Número:	19990806;
[51]	Figura	2 .	Lote	Número:	19990815; e
[52]	Figura	3 .	Lote	Número:	19990823 .
[53]	A posição	dos	picos	da impressão digital: Grupo I

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17/81 consistindo dos picos 1 e 2 (tempo de retenção variando de 7 a 15 minutos}; Grupo II consistindo dos picos 3 e 4 (tempo de retenção variando de 15 a 20 minutos); Grupo III consistindo dos picos 5, 6, 7 e 8 (tempo de retenção variando de 20 a 40 minutos).

[54] De toda visão, a abundância de picos no grupo I é o maior, e que a altura do pico 1 está perto do pico 2.

[55] Os picos no grupo II ficam lado a lado, possuem quase a mesma altura e a abundância é muito pequena. o grupo III é composto de 4 picos, e sua altura aumenta passo-a-passo.

[56] Estes três grupos formam a impressão digital representativa do Composto das pílulas de gotejamento Danshen.

[57] DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [58] Esta invenção revela uma composição do medicamento Pílula de Dan Shen (DSP) compreendendo: (a) Extratos [solúveis em água] da Radix Salviae Miltorrhizae, extratos [solúveis em água] da Panax Notoginseng, e Borneol [sintético]; (b) Radix Salviae Miltorrhizae, Notoginseng, borneol e portadores; e (c) Radix Sa1viae Mi1torrhizae, Panax Notoginseng, borneol, e portadores farmacêuticos.

[59] Numa forma do medicamento acima, Radix Salviae Mi1torrhizae e Panax Notoginseng são empregados como eles são usados na China para tratar de doenças coronárias do coração desde 200 DC. Panax Notoginseng tem sido usado para tratar a angina e Radix Salviae Mil torrhizae tem sido usado para promover a circulação de sangue.

[60] Borneol é empregado para facilitar o fornecimento rápido dos componentes terapêuticos para os órgãos específicos.

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18/81 [61] O Borneol natural tem sido usado na China desde 600 DC. Como o Borneol está quase extinto, DSP contém borneol sintético.

[62] A presente invenção fornece o uso da DSP para:

[63] (a) tratamento da doença coronária do coração;

[64] (b) tratamento da doença coronária do coração em da associação com outros medicamentos;

[65] (c) prevenção primária da doença coronária do coração;

[66] (d) prevenção primária da doença coronária do coração em associação com outros medicamentos;

[67] (e)	prevenção	secundária	da doença coronária	do
coração;
[68] (f)	prevenção	secundária	da doença coronária	do
coração	em associação com outros	medicamentos;
[69] (g)redução da	ingestão de nitratos pelos pacientes	de
angina;	e
[70] (h)	redução do	nível de colesterol do soro.

[71] Numa forma da DSP, a indicação é para a doença arteriosclerose coronária tal como, mas não limitada, para aliviar a angina pectoris, para prevenir a angina pectoris causada pelo esforço e stress e para promover a circulação do sangue pela inibição da agregação de plaquetas, desta forma para prevenir a formação da trombose coronária.

[72] A DSP pode ser aplicada para reduzir a ingestão de nitroglicerina que é frequentemente usada para aliviar e para prevenir a angina.

[73] A DSP também pode ser aplicada para reduzir o nível de colesterol do plasma, desta forma para prevenir a formação de novas lesões da arteriosclerose.

[74] A arteriosclerose geralmente é iniciada pelo surgimento do colesterol depositado nas paredes dos vasos.

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19/81 [75] A presente invenção revela um método para controlar a qualidade de medicamentos pela padronização da composição e da concentração das substâncias terapêuticas num medicamento pela análise e identificação de componentes terapêuticos usando técnicas analíticas compreendendo os seguintes passos:

[76] (a) fracionando um medicamento usando técnicas analíticas; e [77] (b) identificando quantificando substâncias e terapêuticas contidas num medicamento pela comparação com o perfil analítico das substâncias purificadas relevantes como o padrão.

[78] Numa forma da invenção acima, exemplos de técnicas analíticas são cromatografia em camada delgada, cromatografia, líquida de alta performance e outras.

[79] O padrão purificado dos componentes terapêuticos são os principais componentes ativos identificados nos medicamentos. Por exemplo, os padrões purificados dos componentes ativos para a DSP são, mas não limitados a, saponinas, ácido fenólico tal como Danshensu, borneol, etc.

[80] Componentes ativos na DSP são identificados pela comparação da posição das frações da DSP, tal como tempo de retenção em cromatografia líquida de alta performance ou a posição e a cor das frações da DSP numa cromatografia em camada delgada, etc., com as características dos padrões purificados.

[81] Os componentes áticos da DSP são quantificados pela comparação do tamanho das frações ativas da DSP com o tamanho da quantidade conhecida dos padrões.

[82] Por exemplo, a quantidade de saponina contida na DSP é determinada pela comparação com a curva padrão da

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20/81 quantidade conhecida de saponina purificada. Numa outra forma, a DSP compreende 5-40% de ácido fenólico solúvel em água da Radix Salviae Miltorrhizae, 1-10% de saponina solúvel em água da Panax Notoginseng, e 1-5% de borneol. Numa outra forma, a DSP compreende 10-30%.

[83] A presente invenção revela uma máquina de gotejamento para fabricar um medicamento de tamanho pequeno, que pode ser prontamente dissolvido, desta forma prontamente fornecido para os órgãos, compreendendo as partes de:

[84] (a) [um pote de gotejamento] [potes de gotejamento] dos quais a temperatura varia de [mais [60-100] preferencialmente 89-93 °C];

[85] (b) solução de resfriamento de parafina líquida de cuja temperatura é menor que 8°C;

[86] (c) uma cabeça de gotejamento com 1,8 mm de diâmetro interno e 2,35 de diâmetro externo;

[87] (d) [uma cabeça de gotejamento] distanciada da superfície da solução de resfriamento por aproximadamente [15m]; e [88] Numa forma de uso da máquina acima é fabricar pílulas de tamanho pequeno que podem ser dissolvidas imediatamente na administração.

[89] Numa outra forma, o tamanho das pílulas pequenas são:

[90] (a) 0,33-0,34 em de diâmetro;

[91] (b) 21,25-28,75 mg de peso; e [92] (c) 1,13-1,40 mg/mm de densidade.

[93] DETALHES EXPERIMENTAIS [94] Fabricação da Pílula Dan Shen (DSP) [95] DSP é uma pequena pílula, aproximadamente 25mg, da qual os componentes terapêuticos compreendem extratos solúveis em água de Notoginseng, extratos solúveis em água

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21/81 de Salviae e borneol sintético.

[96] Para fabricar a DSP, Notoginseng e Salviae sao extraídos separadamente com água quente nos sistemas circulantes e filtrados. filtrados são condensados sob condições descompressadas, filtrados e precipitados. Os concentrados são refinados usando colunas de resina e concentrados sob condições descompressadas. Assim, os extratos solúveis em água refinados obtidos foram misturados com Borneol sintético e portadores farmacêuticos. A mistura é feita para uma pílula pequena usando uma máquina de gotejamento especial. A qualidade da DSP é controlada pela padronização da quantidade, bem como da proporção de seus principais componentes terapêuticos Saponon, ácido fenólico tal como Danshensu e Borneol. Cromatografia em camada delgada, cromatografia líquida de alta performance, impressão digital e outras técnicas analíticas são usadas para identificar e quantificar os componentes terapêuticos na DSP.

[97] Fabricação da DSP [98] 1. Extração dos componentes solúveis em água da Panax Notoginseng:

[99] (a) Diluição das ervas com 5-7 vezes de água.

[100] (b) Extração dos componentes solúveis em água da Panax Notoginseng pela cocção num tanque com a pressão do ar entre 0,04-0,06 mPa durante 2 horas.

[101] (c) Repetir a extração sob as mesmas condições por uma hora e meia.

[102] (d) Filtragem da extração com rede de malha 100.

[103] (e) Refinar o filtrado usando resina de adsorção macropóros diluindo com etanol.

[104] (f) Concentração dos extratos dissolvido sob condições descompressadas com a entrada de ar em 0,04-0,06 mPa e o

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22/81 vácuo em -0, 076--0, 088 mPa, até que a densidade seja de 1,33-1,35.

[105] 2. Extração dos componentes solúveis em água da Radix Salviae Miltorrhizae:

[106] (a) Diluição das ervas com 5-7 vezes de água.

[107] (b) Extração dos componentes solúveis em água da Radix Sal viae Mil torrhizae pela cocção num tanque com a pressão do ar entre 0,04-0,06 mPa durante 2 horas.

[108] (c) Repetir a extração sob as mesmas condições por uma hora e meia.

[109] (d) Filtragem da extração com rede de malha 100.

[110] (e) Concentração dos filtrados sob condições descompressadas com a pressão a vácuo de -0,076~-0,088 mPa até que um Kg inicial da erva torne-se um litro.

[111] (f) Precipitação dos concentrados com etanol.

[112] (g) Filtragem da solução precipitada de etanol através da rede de malha 100.

[113] (h) Concentração dos filtrados sob condições descompressadas com pressão de ar de entrada é de 0,04-0,06 mPa e a pressão de vácuo é de -0,076~-0,088 mPa.

[114] (i) Refinar os concentrados pela cromatografia de poliamida dissolvendo com etanol.

[115] (j) Concentrar os extratos refinados para a densidade de 1.33-1,35.

[116] 3. Produção da DSP [117] (a) Misture os extratos da Panax Notoginsengf os extratos da Radix Salviae Miltorrhizaef borneol sintético e po1ietilenoglicóis numa proporção de 4.0:20.6:1.9:79.5.

[118] (b) Derretimento da mistura.

[119] (c) Fabricação da mistura derretida para DSP usando a máquina gotejamento com as seguintes de características: a

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23/81 temperatura do pote de gotejamento é constantemente de 8993°C a solução de resfriamento é parafina líquida da qual a temperatura é inferior a 8°C, o diâmetro interno da cabeça de gotejamento é de 1,8 mm o diâmetro externo da cabeça de gotejamento é de 2,4 mm a distância entre a cabeça de gotejamento e superfície da solução de resfriamento é de 15 cm.

[120] (d) Centrifugação das pílulas a 800-1.100 rpm por 15 minutos para remover os óleos.

[121] Controle de qualidade da DSP [122] DSP contém os componentes terapêuticos identificados, protocatéquico de aldeído e saponinas, bem como vários outros componentes. O conteúdo destes componentes nas ervas variam de lote para lote de ervas. Para padronizar o conteúdo dos componentes terapêuticos na DSP e, assim controlar a qualidade da DSP, foi desenvolvido um método para identificar e quantificar os agentes terapêuticos nos medicamentos. Um exemplo dos procedimentos compreendem:

[123] (a) Dissolver 30 DSPs em 3 ml de metanol e ultrasonificar por 10 minutos.

[124] (b) Centrifugação por 5 minutos.

[125] (c) Fracionar o sobrenadante usando técnicas analíticas padrões usando cromatografia em camada delgada, cromatografia líquida de alta performance, etc.

[126] (d) Identificação dos componentes terapêuticos da DSP, tal como Sódio Danshensu, protocatéquico de aldeído, saponinas, etc., pela comparação das frações da DSP com os padrões purificados relevantes com relação à posição, tamanho e cor.

[127] (e) Identificar e quantificar os componentes terapêuticos na DSP pela comparação da posição, tamanho e cor das frações da DSP com a posição, tamanho e cor dos

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24/81 padrões purificados relevantes.

[128] (f) Identificar os componentes terapêuticos na DSP pela comparação do tempo de retenção relativo e a área relativa—dos picos na impressão digital com o tempo de retenção relativo e a área relativa dos picos na impressão digital padrão.

[129] Identificação TLC da DSP [130] Um método para identificar o Sódio Danshensu o protocatéquico de aldeído de urna composição herbal capaz de tratar a angina pectoris estável crônica pela cromatografia em camada delgada compreendendo os passos de:

[131] a) preparar a prova compreendendo os passos de:

[132] i. colo car 30 pílulas da dita composição em 3 ml de J.. metanal e dissolver pela ultrasonificação por 10 minutos para formar uma solução;

[133] ii. centrifugar a solução por 5 minutos e coletar o sobrenadante;

[134] iii. contatando 10 ul da solução sobre uma placa de gel G de silício contendo 0,5% CMC-Na;

[135] iv. desenvolvimento da placa com uma solução J.V. reveladora consistindo de Clorofórmio, acetona e ácido de metano na taxa de 10:4:1.6;

[136] v. secar e fumigar a placa com amônia e assentar a 15 placa por 15 minutos;

[137] vi. verificar a placa sob luz ultravioleta, a marca representando a composição mencionada deve estar na posição correspondente dos padrões e mostrar a mesma cor.

[138] b) usando Sódio Danshensu e protocatéquico de aldeído como o padrão.

[139] Um método para identificar gipenoside de uma composição herbal capaz de tratar a angina pectoris estável crônica pela cromatografia em camada delgada compreendendo

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25/81 os passos de:

[140] a) preparar a prova compreendendo os passos de:

[141] i. Colocar 30 pílulas da dita composição em 5 ml de e solvente de amônia dissolver por ultrasonificação para formar uma solução;

[142] ii. Colocar dita solução dentro da coluna de resina de adsorção macroporosa; a velocidade é de 30 0,5/minuto;

[143] iii. Depois de lavar a coluna de resina de adsorção macroporosa com 20 ml de água destilada, a coluna de resina de absorção macro porosa é dissolvida em 2 ml de solução de etanol;

[144] iv. Coletar o eluente;

[145] v. Contatar 10 ml de tal eluente sobre uma placa de gel G de silício contendo 0,5% CMC-Na;

[146] vi. Desenvolver a placa com 10 ml de uma solução reveladora que é um clarificante de camada inferior da solução de Clorofórmio, acetona e água na taxa 6:3:1 depois de 2 horas a 10°C;

[147] vii. Depois de ser seca e pulverizada com 10% de sulfato de etanol, a placa é levada ao forno a 105°C por diversos minutos;

[148] viii. Verificar a placa sob a luz normal, as manchas representando a composição mencionada deve estar na posição correspondente dos padrões e mostrar a mesma cor;

[149] b)Usando gypenoside total, Sapomina R1e ginsenoside Rg1 como os padrões;

[150] Impressão digital da Pílula Cardiotônica [151] 1. Preparação da impressão digital [152] (1) Sistema cromatográfico e conformidade do sistema Aquil silan-unindo silico-18 foi usado como a fase estacionária e a mistura A e B como fase móvel. “A era metanol e “B era a mistura de água - “H,N-dimetilPetição 870170100559, de 21/12/2017, pág. 40/103

26/81 formamida - acido acéticoglacial(100:45:4). A concentração de A altera de 5% a 30% quando o tempo da diluição do gradiente passa de 0 a 25 minutos. O comprimento da onda detectada foi ajustado em 281nm.O número de placas ideal da coluna não foi menos que 2000 quando calculado com o pico de Danshensu.

[153] (2) Aparelhos e reagentes [154] Cromatografia: Cromatógrafo liquido HP 1100 [155] Detector: Detector de Ultravioleta estilo HP VWD [156] Coluna: Alltech Company 5μ 250 4.6mm, coluna ODS ,

Pré-coluna: Alltech company, Alltima C18 Su pré-coluna

Temperatura da coluna: 30°C.

[157] (3) Preparação da amostra de controle [158] Ácido Salviânico B, Danshensu e protocatéquico de aldeído foram 5 dissolvidos respectivamente no metanol para produzir três soluções de controle cada ml contendo 50μg, 40μg e 10 μg correspondentemente.

[159] (4) Preparação da amostra do teste [160] Colocar 10 pílulas de Pílulas Cardiotônicas dentro de um frasco com medição de 25 ml, adicionar 20ml de metanol, ultrasonificar por 20 minutos, permitir que resfrie, diluir a solução para a linha de escala com metanol, centrifugar e pegar o sobrenadante como a solução de teste.

[161] (5) Procedimentos [162] Injetar precisamente 10 μg em cada uma das soluções de controle e a solução de teste, respectivamente, dentro da coluna, registrar o gráfico do cromatógrafo e calcular o conteúdo.

[163] 2. Impressões digitais de lotes diferentes de Pílula Cardiotônica [164] Vinte lotes de amostras de Pílulas Cardiotônicas foram testados com o método descrito acima e os dados

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27/81 estatísticos estão mostrados como Tabela 1, Tabela 2 e Tabela 3. Estes dados revelaram que a Pílula Cardiotônica teve impressões digitais específicas próprias e as impressões digitais continham oito picos comuns, o que significa, estes picos devem existir simultaneamente em cada lote da DSP.

[165] Tomando o pico do protocatéquico de aldeído como pico de referência, cujo tempo de retenção relativo era 1, o valor médio do tempo de retenção relativo dos oito picos foi de 0.672, 1.000, 1.417, 1.512, 2.016, 2.235, 2.407,

2.757. Os valores do tempo de retenção relativo e a área relativa dos oito picos foram muito estáveis, e entre os oito picos comuns, pico n.l foi Danshensu, pico n.2 protocatéquico de aldeído e o pico n.7 ácido Salviânico B, e a taxa do valor da área relativa foi 0.476-0.668: 1:

0.391-0.641, respectivamente. Impressões digitais dos três lotes da Pílula Cardiotônica também são fornecidos como Figuras 1 a 3 .

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Tabela 1. O tampo de retenção do pico t tempo de retenção relativo doa 20 lotes de DSP r» fc o

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29/81

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Tabela 2. O valor da área do pico & taxa área de 20 lotes de oo o

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30/81

Tabela 3. Os dados estatísticos dos oito picos derivados da impressão digital de 20 lotes da DSP

Pico N°.	Tempo de Retenção	Tempo de Retenção Relativo	Probabili-	Taxa da Faixa da Razão dí
dade de Aparência	Área
Área	Área
1	8. 289	0. 672	100%	1034.276	0. 572	0. 572 ±0.096
2	12. 343	1.000	100%	1817.065	1. 000	1. 000 ±0.000
3	17.493	1.417	100%	376. 547	0. 208	0. 208 ±0.040
4	18.664	1.512	100%	328. 011	0. 181	0. 181 ±0.059
5	24.883	2.016	100%	486.626	0. 267	0. 267 ±0.097
6	27.586	2. 235	100%	525.432	0. 289	0. 289 ±0.052
7	29.714	2. 407	100%	940. 963	0. 516	0. 516±0.125
8	34. 030	2. 757	100%	1547. 495	0. 850	0. 850 ±0.163

[166] Análise quantitativa da Danshensu na DSP [167] Cromatografia e condições adaptativas sistêmica, aparelho e reagentes:

[168] 1. Preparaçao das impressões digitais [169] (1) Os parâmetros de ajuste do sistema & Cromatograma: Alquil silan-unindo silico-18 foi usado como material de preenchimento e ácido acético água-acetonitrilo-glacial (87:12:1) como fase móvel. Comprimento de onda detectivo foi ajustado a 281 nm. 0 número de placas ideais não deveríam ser menos que 2500 quando calculado com o pico de Danshensu, e o grau de separação deve satisfazer as exigências.

[170] (2) Aparelho & reagentes Cromatógrafo:

[171] C romatógrafo Liquido HP 1100 [172] Detetor: Detetor de ultravioleta estilo HP VWD [173] Coluna: Alltech Company 5u, 250 x 4.6 mm, coluna ODS [174] Pré-coluna: Alltech Company, Alltima C18 5u pré-coluna

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31/81 [175] Temperatura da coluna: 30°C [176] Acetonitrilo: cromatograficamente Tianjin Siyou Biomedical & Technical Co. Ltd. Ácido acético Glacial: analiticamente puro, Tianj in Tianhe Reagent Company.

[177] (3) Preparação da amostra de controle.

[178] Usar 25,0mg de ácido salviânico de sódio e 5,0mg de protocatéquico de aldeído como as amostras de controle: Pesar ambas as amostras precisamente e colocá-las dentro dos frascos de medição de 50 ml. Adicionar fase móvel para dissolvê-las e diluir as soluções até a linha de escala dos frascos, sacudi-las completamente e guarde-as como soluções de estoque. Pesar precisamente uma pequena quantidade de ácido para-aminobenzóico, dissolvê-lo como uma solução de 0,2 mg/ml com a fase móvel e levá-la como a solução de estoque padrão interno. Pipetar quantidades apropriadas de ácido salviânico de sódio A, protocatéquico de aldeído e soluções padrões internas com seus volumes lidos precisamente, diluí-los com a fase móvel para preparar uma solução que continham 50ug de ácido salviânico de sódio A, 10ug de protocatéquico de aldeído e 80 ug de ácido paraaminobenzóico. A solução preparada foi tomada como a solução de controle.

[179] (4) Preparação das amostras de teste.

[180] Pegue 10 pílulas de Pílula Cardiotônica e 1 ml da solução de estoque padrão interno, colocá-las dentro de um frasco de medição de 25 ml, dissolva-as com a fase móvel, e dilua a solução para a linha escala.

[181] Pegue 10 ml das soluções da amostra de teste e de controle, respectivamente, faça a injeção e registre o gráfico do cromatógrafo.

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32/81 [182] Preparação da solução de controle: Pegue e pese precisamente 25,0 mg de sódio tanshinol, e coloque-o dentro de um frasco de medição. Adicione a fase móvel e dissolva e dilua esta em escala.

[183] Agite a solução e mantenha-a como a solução de estoque de controle.

[184] Pese precisamente o ácido para-aminobenzóico e dilua-o dentro de uma solução de 0,2mg/ml com a fase móvel.

[185] Mantenha a solução como a solução de estoque padrão interna.

[186] Pegue doses apropriadas da solução de estoque de controle e da solução de estoque padrão interna, e faça-as dentro da solução de controle compreendendo 50 pg de sódio de tanshinol e 80 pg de ácido para-aminobenzóico por mililitro.

[187] Preparação da solução de teste:

[188] Pegue 10 pílulas deste artigo e 1 ml da solução de estoque interno. Coloque-a num frasco de medição de 25ml, dissolva-as para a escala e faça dentro da solução de teste. Pegue 101 da solução de controle e 101 da solução de teste respectivamente, obtenha as impressões digitais e calcule os resultados. A composição herbal compreendendo DSP deve conter 0,14-0,18 mg de Danshensu por pílula.

[189] Análise quantitativa Ginsenoside Rgl/Sanchinoside Rl na DSP [190] (1) Sistema cromatográfico e viabilidade do sistema [191] Alquil silan-unindo silico-18 foi usado como a fase estacionária e a mistura de água e acetonitrilo como fase móvel. A concentração de acetonitrilo foi de 25% de 0 a 15 minutos, e 35% após o 2 minuto. A taxa de fluxo do gás nebulizador foi de 2,5 litros por minuto e a temperatura do tubo de deriva foi ajustada em 93,8°C. O número de placas

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33/81 ideais da coluna nao foi menor que 5.000 quando calculado com o pico da Ginsenoside Rg1.

[192] (2) Aparelho e reagentes [193] Cromatógrafo: Cromatógrafo Líquido Agilent 1100 [194] Detetor: Detetor Alltech ELSD 2000 (detetor de dispersao de luz evaporativa) [195] C oluna: A1ltech Company 5u, 250X4,6mm, coluna ODS-C 18 [196] Pré-coluna: Alltech Company, Alltima C 5u pré-coluna 18 [197] Temperatura da coluna: 30°C [198] (3) Preparaçao da amostra de controle [199] Ginsenoside Rg1 Sanchinoside R1 foram dissolvidos e respectivamente em metanol para produzir duas soluções de controle, cada ml contendo 0,98mg e 0,25mg correspondente.

[200] (4) Preparaçao da amostra de teste [201] Colocar 50 pílulas de Pílula Cardiotônica dentro de um frasco de mediçao de 5 ml, adicionar 4% de amônia para a linha de escala, ultrasonificar por 20 minutos, e aplicar a soluçao numa coluna pequena previamente preparada C (STRATA C18-E coluna da 18 Phenomenex Company, 500mg e tubo de 3cc), diluir 10ml de água, descartar o diluído, entao diluir 2ml de metanol, coletar o diluído num frasco de mediçao e diluí-lo para a linha de escala com metanol, pegue a soluçao como a soluçao de teste.

[202] (5) Procedimento [203] Injetar precisamente 10 pl em cada uma das soluções de controle e a soluçao de teste, respectivamente, dentro da coluna, registre o gráfico da cromatografia e calcule o conteúdo.

[204] (6) Resultados

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34/81 [205] Vinte lotes de amostras de Pílulas de Cardiotônico foram testados com o método descrito acima e os dados estatísticos estão mostrados conforme a Tabela 4. Extraído da tabela a composição herbal compreendendo DSP contém 0,401%-0,712%, média de 0,550% Sanchinoside Rl e 2,069%4,044%, média de 2,847% de Ginsenoside Rgl.

Tabela 4. Quantidades Ginsenoside Rgl /Sanchinoside Rl na DSP

Lote N°.	Sanchinoside Rl	Ginsenoside Rgl
	(gg/pílula)	(gg/pilula)
20000106	17.22	80.93
20000216	16. 92	80. 78
20000323	15. 16	70. 76
20000406	13. 65	62.51
20000422	14.24	68. 72
20000513	15. 27	71. 16
20000606	14.86	68.21
20000726	14. 59	72. 35
20000728	14. 25	57.37
20000804	15.30	70.55
Valor Médio	15. 15	70. 33
RSD%	7. 53	9. 67
não menor que	12. 12	56. 26

[206] As características da DSP assim fabricadas sao as seguintes:

[207] (a) DSP contém ácido lático b-3,4 dihidroxifenil, sódio Danshensu, saponina e borneol, [208] (b) negativo para bactéria: 1.000 contém menos que bactérias, [209] (c) negativo para fungos: contém menos que 100 fungos,

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35/81 [210] {d) negativo para metais pesados: contém menos que a quantidade segura definida pelo governo Chinês,e [211] (e) O tempo de prateleira da DSP é de quatro anos numa temperatura ambiente.

[212] ESTUDOS CLÍNICOS DA DSP [213] Angina pectoris é avaliada pelo histórico da angina, nível de lipídios do soro, eletrocardiografia (ECG), exercício ECG, avaliação cintiográfico da isquemia, angiografia coronária, etc. Avaliando a eficácia terapêutica usando estes pontos finais, DSP tem mostrado ser efetivo para o tratamento da angina pectoris.

[214] DSP é efetiva para angina pectoris.

[215] 157 pacientes com doenças coronárias do coração foram 5 tratados com 10 DSPs por t.i.d., administração via oral por 4 semanas.

[216] Avaliando a freqüência, intensidade e duração da angina, sentimento oprimido no peito e palpitação, os sintomas desapareceram ou abrandaram em 95,3% dos pacientes.

[217] DSP é mais eficiente que os tabletes Dan Shen no alívio da angina.

[218] Tablete Dan Shen é outro medicamento Chinês para tratar da angina pectoris atualmente usado na China.

[219] A eficácia da DSP e dos tabletes Dan Shen foram comparados. Pacientes com doenças coronárias do coração foram divididos aleatoriamente em dois grupos.

[220] 107 pacientes foram tratados com DSP e 50 pacientes foram tratados com tablete Dan Shen.

[221] Comparando a freqüência dos ataques da angina e o consumo dos nitratos, DSP foi mais efetivo que os Tabletes

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Dan Shen para o tratamento da angina pectoris, ver Tabela 5 abaixo.

Tabela 5. Comparação da DSP e do tablete Dan Shen Número de pacientes

Total_Responsivo

DSP 107 102 (95,3%)

Tablete Dan Shen 50 38 (76%) [222] Tendo provado que a DSP é mais efetiva que os tabletes Dan Shen, a eficácia da DSP foi comparada com vários medicamentos que são atualmente usados para o tratamento da angina pectoris crônica estável nos EUA.

[223] Comparaçao da DSP e a nitroglicerina Nitroglicerina é usada freqüentemente para aliviar a angina. Foi comparada a eficácia da DSP e da nitroglicerina no alivio da angina.

[224] No inicio da angina, pacientes foram tratados ou com DSP ou nitroglicerina, e o tempo necessário para aliviar a angina foi comparado.

[225] Ambos, o DSP e a nitroglicerina aliviaram a angina em todos pacientes dentro de 15 minutos.

[226] A eficácia da DSP foi pouco menor que a nitroglicerina. Ver Tabela 6.

Tabela 6. Comparação DSP e nitroglicerina # pacientes que responderam dentro de 1-5 minutos 6-10 minutos 11-15 minutos

DSP 11 14 5

Nitroglicerina 17 12 1

Total: 30 pacientes por grupo

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37/81 [227] DSP nao altera a taxa do coraçao [228] Os dados demonstraram que a DSP aliviaram efetivamente a angina. Foi examinado se a DSP alivia a angina pelo aumento da taxa do coração. A taxa do coração depois do tratamento da DSP foi equivalente à taxa de prétratamento, o que indica que a DSP alivia a angina sem afetar a taxa do coração (Tabela 7).

Tabela 7. DSP não afeta a taxa do coração

Taxa do Coração

Pré-tratamento_Pós-tratamento

DSP 84,3 4 23,1 82,8 4 22,8 [229] Comparaçao da eficácia da DSP com o dinitrato de isossorbida de nitrato.

[230] Tendo provado que a DSP alivia a angina tao eficientemente corno a nitroglicerina, foi examinado se a DSP pode prevenir a angina.

[231] A eficácia da DSP e o dinitrato de isossorbida de nitrato foram comparados. 0 dinitrato de isossorbida é um nitrato de longa duração freqüentemente usado para prevenir a angina pectoris estável crônica nos EUA.

[232] Pacientes foram tratados ou com DSP três vezes por dia oralmente, 10 pílulas por tratamento ou dinitrato de isossorbida três vezes por dia oralmente, 10 mg por tratamento. Foram examinados a função cardíaca e o Eletrocardiograma.

[233] Função Cardíaca.

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38/81 [234] A eficácia da DSP e dos nitratos na função cardíaca foram 5 avaliados pela medição do rendimento cardíaco por batida {CO), volume de batidas por minuto {SV), fração de sangue ejetado {EF), fração da taxa abreviada do eixo curto ventricular esquerdo {FS).

[235] DSP melhora a função cardíaca mais eficientemente do que o nitrato. Ver Tabela .8 abaixo.

Tabela 8. Efeito da DSP e dos nitratos na função cardíaca DSP Dinitrato de Isossorbida

	Pré-	Pós-	Pré-	Pós
SV	75.38 + 8.32	83.45 + 9.11	74.96 + 8.44	79.47 + 8.72
CO	5.61 + 1.34	6.94 + 1.36	6.54 + 1.36	6.12 + 1.41
EF	0.57 + 0.02	0.79 + 0.02	0.59 + 0.03	0.70 + 0.03
FS	17.14 + 3.4	16.69 + 3.6	17.32 + 3.1	18.46 + 4.2

Pré- : pré-tratamento

Pós-: pós-tratamento [236] DSP melhora ECG [237] A taxa efetiva de ST-T foi avaliada pelo registro da freqüência da mudança no segmento ST-T.

[238] Ambos DSP e dinitrato de isossorbida diminuiríam a freqüência de alterações no ST-T significativamente. DSP, contudo, foi mais eficiente. Ver Tabela. 9

Tabela 9. Comparação do efeito da DSP e do nitrato no ECG

A freqüência da alteração da ST-T Pré-tratamento Pós-tratamento

DSP 131 35 dinitrato de isossorbida 129 42

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39/81 [239] Comparaçao da DSP e da aspirina na redução da estase do sangue [240] Hemorragia nas lesões arteroscleróticas induz à ativação de plaquetas, trombose coronária e estase do sangue resultando num fluxo de sangue debilitado. Desta forma para melhorar o fluxo de sangue, administração crônica da aspirina inibidora da ativação de plaquetas é recomendada para pacientes com angina.

[241] A eficácia da DSP e da aspirina melhorando o fluxo de sangue foi comparada pela avaliação [Hb, Lb, P e fluxo de ar] . DSP melhora o fluxo de sangue tão eficientemente quanto a aspirina. Ver Tabela 10 abaixo.

Tabela 10. DSP e aspirina melhoram o fluxo de sangue

DSP aspirina

Pré- Pós- Pré- Pós-

Hb	6.23 + 1.67	4.35 + 1
LB	10.92 + 2.21	8.30 + 1
P	1.95 + 0.08	1.77 + 0

Fluxo de sanguel.79 +0.13 1.39+0

02	6.12 + 1.56	4.28	+	1.07
14	10.38 + 1.96	8.21	+	0.3
08	1.89 + 0.12	1.67	+	0.7

11	1.82 + 0.17	1.40	+	0.10

Número total de pacientes: 25 para DSP e 28 para aspirina [242] DSP reduz estase do sangue pela inibição da ativaçao das plaquetas Tromboxano B2 ativa plaquetas.

[243] Plaquetas ativadas liberam várias substâncias incluindo microglobulina com placas 8, que causa a estase do sangue, assim debilitando o fluxo de sangue.

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40/81 [244] A eficácia da DSP inibindo a ativaçao das plaquetas foi examinada. DSP abaixa a concentração de tromboxano B2 e inibe eficientemente a agregação de plaquetas.

[245] O dinitrato de isossorbida, que é conhecido por ser incapaz de inibir a ativação de plaquetas, desta forma foi usado como controle/não reduziu o tromboxano B2 ou inibiu a ativação de plaquetas. Ver Tabela 11.

Tabela 11. DSP inibe a ativação de plaquetas

		Pré-tratamento	Pós-tratamento
β PM	DSP	62.44 * 14.37	45.65 + 12.25
	nitratos	59.89 + 15.42	54.36 + 13.18
TxE2	DSP	1312 + 535	738 + 384
	nitratos	1315 + 507	1218 + 445

[246] DSP abaixa o nível de colesterol do plasma [247] 0 colesterol do plasma aumentado foi implicado na iniciação da arteriosclerose.

[248] Para prevenir a formaçao de novas lesões arterioscleróticas a diminuição do colesterol do plasma ou pela I modificação das dietas ou dos medicamentos foram recomendados.

[249] Foi examinado se a DSP diminui o colesterol do plasma. DSP abaixou que é o nível de colesterol em 0,3 mmol/L que é estatisticamente significante no valor P 0,05. Ver Tabela 12 .

Tabela 12. DSP diminui o colesterol de plasma

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41/81

Colesterol de Plasma (ranol/L)

Número de pacientes: 80 [250] Efeito da Pílula Cardiotônica no LPO e SOD no Soro Sangüíneo de Pacientes Sofrendo de Doenças Coronárias do Coração [251] O método:

[252] No grupo de tratamento, 24 pacientes, de acordo com as Normas de Diagnóstico de Referência da China para Doenças Coronárias do Coração emendadas em 1979, são administradas com Pílula Cardiotônica, 10 pílulas/vez, e 3 vezes/dia.

[253] No grupo normal, 20 pessoas saudáveis nao recebem qualquer tratamento médico.

[254] Os resultados:

[255] o nível de LPO dos pacientes sofrendo de doença coronária do coração é claramente maior que o das pessoas saudáveis, enquanto o conteúdo de SOD é claramente inferior (p<0,01) .

[256] Depois que os pacientes sao tratados com a Pílula

Cardiotônica, seu LPO evidentemente diminuiu (p<0, 01) , e seu SOD evidentemente aumenta (p<0,01). Ver Tabela 13.

Tabela 13. Uma Comparação do Conteúdo de SOD e LPO nos Grupos

Normais e de Tratamento (x±s)

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Grupos	Pacientes	SOD (ng/ml)	LPO (nmol/ml)
Grupo normal	20	3481106	4.6411.52
Grupo de Tratamento	24	Antes do tratamento	267176*	7.1611.48*
Depois do tratamento	309187#.	4.6811.72##

observação: Em comparação com o grupo normal, *p<0,05. Na comparação com aqueles de pré-tratamento, #p<0,05, ##p<0,01.

[257] A conclusão:

[258] Isquemia crônica dos músculos cardíacos dos pacientes sofrendo de doença coronária do coração e anoxia tecidual levam à redução da atividade de SOD, especialmente aquela do SOD extra celular, e o aumento dos radicais livres de oxiqênio, que causam a elevação de LPO e o consumo de SOD posteriormente.

[259] Depois que os pacientes sao tratados com Pílula Cardiotônica, o nível de LPO diminui evidentemente, enquanto o conteúdo de SOD aumenta obviamente. Isto prova que a Pílula Cardiotônica tem uma forte ação de aprovação nos radicais livres de oxiqênio, que é também um dos mecanismos para tratar a doença coronária do coração.

[260] O Efeito da Pílula Cardiotônica nas Atividades do LPO e Antioxidases no Tratamento da Doença do Coração Pulmonar [261] 0 método:

[262] 4 8 pacientes sofrendo de doença do coraçao pulmonar são aleatoriamente divididos em 3 qrupos. No qrupo normal, 16 pacientes são tratados com um complexo de terapias, tal como terapia anti-inflamatória, antiasma, inalação de

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43/81 oxigênio, e Cardiotônica, assim por diante. No grupo de Pílula 14 pacientes são tratados com Pílula Cardiotônica, 10 pilulas/vez, e 3 vezes/dia. No grupo Gantangzhi 18 pacientes são 20 tratados com o gotejamento intravenoso - 200 mg de Gantangzhi dissolvido em 250 ml de 5% de injeção de glicose, 1 vez/dia, e 10 dias/periodo.

[263] Os resultados:

[264] Após o tratamento com a Pílula Cardiotônica, o valor de GSH-Px subiu, o valor de LPO abaixou e, desta forma, GSH-Px/LPO subiu. Em comparação com o grupo de tratamento normal, há uma diferença significante. Ver Tabela 14

Tabela 14. índices antes e após Tratamentos

	GSH-P_X (U/mgHb)	CAT (U/gHb)	SOD (U/gHb)	LPO (nmol/ml)	GSH-P_X/LPO
Grupo Pessoas Sadias	140.6+35.2	312.71 58.1	5799.81948	4.2+1.2	34.2+8.7
Grupo Normal	Antes do tratamento	101.3+23.6	300.41 107.7	5740.51 939.0	5.6+1.9	20.4+8.8
Depois tratamento	120.6+ 20.6*	390+ 184.3*	6076.81 1091	4.3+1.2**	31.3115.1**
Grupo da Pílula Cardiotô- nica	Antes do tratamento	108.8+28.3	233.11 70.2	5863.31 1072.7	5.9+2.0	18.517.6
Depois do tratamento	158.21 40.7**”	328.41 78.5***	5582.81 1094.7**	4.1 + 1.6**”	36.41 6.7**”

Observação: Comparando aqueles antes do tratamento com aqueles depois do tratamento, #p>0.05, ##p<0.05, *p>0.05, **p<0.05.

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44/81 [265] Conclusão: a Pílula Cardiotônica possui a função de antioxidação, e pode aliviar a reação de peroxidação do lipídio e aumentar a habilidade de antioxidação do corpo humano.

[266] Tratamento com Pílula cardiotônica para Hipertensão Essencial [267] O método:

[268] (1) A escolha dos pacientes: Selecionar aqueles pacientes sofrendo da Fase I ou II da hipertensão essencial, mas sem hipertensão secundária ou cardíaca, insuficiências renais e hepáticas.

[269] (2) A administração: Impedir os pacientes de tomar qualquer medicina Chinesa tradicional ou ocidental {exceto para hipotensos) por duas semanas e então, na terceira semana, medir sua pressão sangüínea e índices reológicos de sangue e anotar suas manifestações clínicas. O método cego duplo é adotado. No grupo de Pílulas Cardiotônicas, os sujeitos tomam por via oral a Pílula Cardiotônica, 10 pílulas/vez, e 3 vezes/dia. No grupo de Tabletes do Composto Danshen, os sujeitos tomam por via oral o Tablete do Composto Danshen, 5 tabletes/vez, e 3 vezes/dia. os sujeitos no grupo de controle tomam placebos, e o período de tratamento é de seis semanas.

[270] Os resultados:

[271] (1) Efeito na viscosidade de todo sangue.

[272] Depois do tratamento, as viscosidades de todo sangue dos pacientes em ambos, no grupo de Pílulas Cardiotônicas e no grupo de Tabletes do Composto Danshen caíram de forma marcante, mas as curvas das viscosidades de todo sangue no grupo de Pílulas Cardiotônicas em qualquer taxa de corte abaixam mais abruptamente do que aquelas no grupo de Tabletes do Composto Danshen. Ver Tabela 15.

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Tabela 15. Efeito da Pílula Cardiotônica na Viscosidade de Todo Sangue (mPas, x±s)

Grupos	3.83S'¹	28.3 s’	192 s'
Grupo Cardiotônico (30 sujeitos)	Antes tratamento	18.27 ±2.85	5.82±0.93	4.54 ±0.78
Após tratamento	11.79 + 3.75’^w&&	4.78± 084··«*αα	3.98 ± 0.65****^&&
Grupo do Composto do Tablete Danshen (30 sujeitos)	Antes tratamento	17.69 ±1.96	5.86 ±0.79	4.69±0.54
Após tratamento	I4.68± - i ·*<&£ 3.41	5.69 ± 0.8 f*	4.42±0.59*^,&A
Grupo de Controle (15 sujeitos)	Antes tratamento	17.65 ±2.07	5.69 ±0.79	4.75 ±0.58
Após tratamento	18.02 ±2.32	5.71 ±2.76	4.86 ±0.65

Obs.: Em comparação com aqueles do mesmo grupo antes do tratamento, *p<0.05, **P<( Comparando com aqueles do Grupo dc Pílulas Cardiotônicas após tratamento, #p<0.05, ##p<( Comparando com aqueles do grupo de controle após tratamento, &p<0.05, &&p<0.01.

[273] (2) Efeito na deformação e a agregaçao dos eritrócitos.

[274] Depois do tratamento, a deformação dos eritrócitos no grupo de Pílulas Cardiotônicas é muito maior do aquele antes do tratamento, e a área e o índice da agregação são notadamente menores do que aqueles antes do tratamento. E comparando com o grupo de Tabletes do Composto Danshen, o grupo de Pílulas Cardiotônicas declina muito mais rápido (p<0,01). Ver Tabela 16.

Tabela 16. Efeito da Pílula Cardiotônica na Deformação e na

Agregação dos Eritrócitos (x±s)

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Grupos	índice de Deformação	índice de Agregação	Área de Agrcgação(integral)
Grupo Cardiotônico	Antes tratamento	0.4115± 0.0360	4.06±0.39	841.12±67.68
(30 sujeitos)	Após tratamento	0.4274± 0.034*⁴	3.41 + 0.36“⁴ⁱ	683.52 ± 69.09°#⁴⁴
Grupo Table-tes	Antes tratamento	0.4066 ± 0.0290	3.98 ±0.34	806.90 ±66.30
Composto Danshen (30 sujeitos)	Após tratamento	0.4180± 0.0281*⁴	3.64± 0.39⁴⁴	716.12 ± 84.29°⁴
Grupo de controle	Antes tratamento	0.4091 ± 0.0376	4.02±0.41	812.52 ±65.64
(15 sujeitos)	Após tratamento	0.4001 ± 0.0381	4.01 ±0.39	804.44 ±68.06

Obs.: Em comparação com aqueles do mesmo grupo antes do tratamento, *p<0.05, ♦*P<0.01. Comparando com aqueles do Grupo dc Pílulas Cardiotônicas após tratamento, #p<0.05, ##p<0.01. Comparando com aaueles do empo de controle após tratamento. &p<0.05, &&p<0.01.

[275] (3) Efeito na Pressão Sangüínea.

[276] Após tratamento, as pressões sistólicas e as pressões diastólicas dos pacientes em ambos no grupo de Pílulas Cardiotônicas e no grupo de Tabletes do Composto Danshen caíram notadamente {p<0.01), e não há uma diferença evidente entre os dois grupos, ver Tabela 17.

Tabela 17. Efeito da Pílula Cardiotônica na Pressão

Sangüínea (mmHg, x±s)

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Grupos	Pressào Sistólica	Pressào Diastólica
Grupo Cardiotônico (30 sujeitos)	Antes tratamento	155.00t8.08	90.7017.93
Após tratamento	149.20±8.89**&&	86.5918.30**&&
Grupo de Tabletes do Composto Danshen (30 sujeitos)	Antes tratamento	152.9319.59	92.5918.30
Após tratamento	146.02±10.20**&&	88.5517.22**&&
Grupo de Controle (15 sujeitos)	Antes tratamento	154.0617.05	90.9019.10
Após tratamento	152.0819.25	91.1018.70

Obs.: Em comparação com aqueles do mesmo grupo antes do tratamento, **P<0.01. Comparando aqueles do Grupo de controle após tratamento, &&p<0.01 [277] (4) Efeito nos sintomas de hipertensão.

[278] Os pacientes de ambos, no grupo de Pílulas Cardiotônicas e no grupo de Tabletes do Composto Danshen melhoraram muito em termos de tais sintomas como dor de cabeça, tonturas, extremidades entorpecidas (p<0.01), mas não melhoraram na insônia. Ver Tabela 18

Tabela 18. Efeito da Pílula cardiotônica nos Sintomas Clínicos de Hipertensão (pacientes)

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Grupos	Dor de cabeça	Tontura	Extremidades entorpecidas	Insônia
Sim	Não	Sim	Não	Sim	Não	Sim	Não
Grupo Car-diotôni	Antes tratamento	20	10	16	14	12	18	8	22
CO (30 sujeitos)	Após tratamento	7	23’	2	28’	3	27’	4	26
Grupo de Tabletes do	Antes tratamento	22	8	17	13	10	20	6	24
Composto Danshen(30 sujeitos)	Após tratamento	15	15’	8	22’	3	27’	6	248
Grupo de Controle (15	Antes tratamento	8	7	6	9	4	11	4	11
sujeitos)	Após tratamento	7	8	5	10	3	12	2	13

Obs.: Em comparação com aqueles do mesmo grupo antes do tratamento, *P<0.01.

A conclusão: A propriedade reológica dos eritrócitos do pacientes sofrendo de hipertensão essencial é clarament [279] A conclusão:

[280] A propriedade reológica dos eritrócitos dos pacientes sofrendo de hipertensão essencial claramente anormal. A deformação dos eritrócitos rebaixou claramente, enquanto a agregação aumentou distintamente.

[281] 0 experimento mostra que a Pílula Cardiotônica possui as funções de reduzir notadamente a viscosidade de todo o sangue e o índice e a área de agregação dos eritrócitos, e aumentando grandemente a habilidade de deformação dos eritrócitos.

[282] A Pílula Cardiotônica também pode abaixar a pressão sangüínea e melhorar os sintomas clínicos dos pacientes. E desta forma, a Pílula Cardiotônica é de grande benefício

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49/81 para prevenir ou retardar a ocorrência de hipertensão essencial e síndrome cárdio-cerebral.

[283] Toxicidade [284] DSP é seguro e não-tóxico. Na China, mais de 5 milhões de pacientes tem sido tratados com DSP sem efeitos

colaterais	severos. Efeitos colaterais	suaves,	dor	de
cabeça ou tontura, foram relatados numa	porção menor	de
pacientes.
[285] Resumo	dos estudos clínicos.
[286] DSP é	uma nova geração da medicina Chinesa	para	o
tratamento	de doenças coronárias do	coração.	Estudos

clínicos demonstram que DSP alivia, bem como previne a angina pelo melhoramento da função cardíaca, reduzindo a isquemia miocardial, inibindo a ativação de plaquetas, desta forma reduzindo o estase do sangue, e diminuindo o colesterol do plasma.

[287] A eficácia terapêutica da DSP foi superior a outra forma do medicamento Chinês, os Tabletes Dan Shen. DSP é tão eficiente quanto os medicamentos usados nos a angina DSP alivia a tão eficientemente como a nitroglicerina, previne a angina tão eficientemente quanto o dinitrato de isossorbida de nitrato de longa duração, e inibe a agregação de plaquetas tão efetivamente quanto a aspirina.

[288] DSP é não-tóxico: mais de 5 milhões de pessoas tem sido tratadas sem efeitos colaterais perceptíveis na maioria dos casos.

[289] ESTUDOS PRÉ-CLÍNICOS [290] Estudos pré-clínicos revelam o mecanismo pelo qual a DSP previne, bem como alivia a angina. DSP alivia a angina pelo aumento de fluxo de sangue. Camundongos Wistar, aproximadamente com 260g, foram anestesiados por uretana abertos o peito excisados o coração, submetidos ao modo

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Langendorff a 37°C. E pressão de perfusao coronária constante de 65 cm H2O.

[291] Depois de estabilizada a taxa do coraçao várias quantidades de DSP ou tablete Danshen foram aplicados cada vez através do ramo lateral da aorta cânula.

[292] Subseqüentemente o fluxo da coronária e a taxa do coração foram medidas. DSP aumentou o fluxo da coronária numa grande dosagem. Tablete Danshen, por outro lado, aumentou o fluxo da coronária numa dosagem estreita. Ver Tabela 19

Tabela 19. DSP aumenta o fluxo da coronária

Fluxo da Coronária

Dose (mg/ml) Pré-tratamento pós-tratamento

Nenhuma	7.0
DSP 5.8	7.2
290	6.7
580	6.7
Tablete DS 5.8	6.7
290	7.3
580	6.8

+ 1.1 7.1 + 0.97 + 1.1 7.0+1.4 +1.6 8.7+1.4 +1.5 9.3+2.9 +1.4 7.1+1.5 +1.7 9.1+2.1 +1.4 7.1+1.5 tabletes Danshen na taxa do [293] O efeito do DSP e dos coração foram examinados.

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51/81 [294] Nem o DSP tampouco os tabletes Danshen alteraram a taxa do coração. Ver Tabela 20 abaixo.

Tabela 20. DSP não aumenta a taxa do coração

Taxa do coração

Dose (mg/ml) Pré-tratamento pós-tratamento

	Nenhuma	194	+	17	193	+	12
DSP	5.8	180	+	11	189	+	9
	290	188	+	7	184	+	8
	580	173	+	14	167	+	13
Tablete	DS 5.8	180	+	11	189	+	9
	290	189	+	16	183	+	14
	580	186	+	23	171	+	8

[295] DSP aumenta o fluxo da coronária pelo relaxamento do músculo liso vascular, desta forma dilatando os vasos.

[296] O efeito da DSP na vasocontraçao induzida por potássio do corte da aórtica do coelho foi examinada.

[297] DSP relaxou o músculo liso, desta forma dilatando os vasos significativamente.

[298] Efeitos similares foram observados nos experimentos usando anéis da artéria coronária de porcos.

[299] DSP inibe a agregaçao de plaquetas [300] 0 efeito da DSP na agregaçao de plaquetas foi examinado. Plaquetas de coelhos foram tratadas com DSP e agregação foi examinada.

[301] DSP inibiu a agregaçao de plaquetas significativamente. Ver Tabela 21.

Tabela 21. DSP inibe a agregação de plaquetas

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DSP(mg/ml)	Hanimais	Taxa de Agregação(%)	inibição(%)
0	6	6.7±4.4	0
1.8	6	42.7±2.5	8.314.5
3.5	6	33.4+3.4	23.6±6.7*
7	6	25.312.1	37.615.9*
14	6	15.8+3.0	69.0±6.9*

[302] Tabela 22 mostra taxas dos micronúcleos nos camundongos em tempos diferentes depois do tratamento com a composição herbal desta invenção {8400 mg/kg)

Tabela 22.

Hora(h)	RBCs Policromático	Células do Micronúcleo	Micro-taxas(%) (x±SD)
12	6.000	9	1.5i0.8
24	6.000	11	1.8±0.7
36	6.000	11	1.8il.2
48	6.000	11	1.811.5
72	6.000	13	2.210.7
Solvente 24	6.000	9	1.5H.4

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53/81 [303] Tabela 23 mostra as taxas do micronúcleo nos Camundongos nas 24 horas depois da Administração do DSP & CP.

Tabela 23.

Dose(mg/kg)	RBCs Policromático	Células do Micronúcleo	Micro-taxas(%) (x±SD)
8,400	6.000	12	2.0±0.6
840	6.000	9	1.5±1.0
84	6.000	11	1.8±1.0
Solvente	6.000	9	1.5±1.4
CP (80mg/kg)	6.000	138	23.0±4.0*

* Compare com o solvente P<0.01.

[304] Tabela 24 mostra critério de avaliaçao para a efetividade graduada dos medicamentos testados.

Tabela 24.

Parâmetros\ Efeitos	Efeito Muito Alto	Efeito Alto	Efeito	Sem efeito
Estado da agregação do RBC	Sem	Um pouco	Identifi- cado	Severo
Tempo no início	<90	90-180	180-300	>300
Micro-estado do fluxo sangue	Melhor que normal	Ficou normal	Melhorado	Deteriorado
Duração(min)	>15	15-10	10-5	<5

[305] DSP melhora a microcirculaçao o efeito da DSP na microcirculação em hamsters Chineses foi examinado. DSP

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54/81 melhorou a microcirculação por 23 minutos dentro dos 111 minutos de administração bucal em todos os animais. Ver Tabela 25.

Tabela 25. DSP melhora a microcirculação

Tempo de Início(min) Duração (min)Taxa Efeito (¾)

DSP 111 23 100 [306] Tabela 26 mostra o efeito protetor da DSP no miocárdio induzida pela pituitrina nos ratos (segundo período).

Tabela 26. (n=8)

Grupo	Dosa-g em (g/kg)	Antes medicação	Depois medicação
Antes pitui-tri na	Depois pituitrina(40s-15 minutos) Número de ratos com ECG anormal
Controle		Normal	Normal	7
DSP	0.4	Normal	Normal	3*
0.8	Normal	Normal	1**
1.2	Normal	Normal	2**
DST	0.4	Normal	Normal	4
0.8	Normal	Normal	1 ★ *

Comparado com o controle. *p<0.05; **p<0.01.

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55/81 [307] Tabela 27 mostra o efeito inibi tório da DSP na isquemia miocardial induzida pela pituitrina nos ratos.

Tabela 27.

Grupo	Dosagem(g/kg)	Inibição(%)
DSP	0.4	71.4*
0.8	85.7*
1.2	71.4*
DST	0.4	42.8*
0.8	85.7*

Conforme comparado com o controle. *p<0.05.

[308] Tabela 28 mostra o efeito protetivo da DSP na isquemia miocardial induzida pela pituitrina nos ratos (primeiro período).

Tabela 28 (n=8)

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Gru po	Dosa-g em (g/kg)	Alterações no T-ST do ECG-(lead II) no primeiro período
Antes da medicação	Após medicação
Antes pitui tri- na	Após pituitrina (0-40s.) Número de rato com ECG anormal
T elevado	T invertido	Total
Con tro le		Normal	Normal	4	3	7
DSP	0.4	Normal	Normal	3	0	3*
0.8	Normal	Normal	1	1	2*
1.2	Normal	Normal	2	1	3*
DST	0.4	Normal	Normal	3	2	5
0.8	Normal	Normal	1	1	2*

Conforme comparado com controle. *p<0.05.

[309] Ação de Esclarecimento da Pílula Cardiotônica nos Radicais Livres de Oxigênio [310] 0 estudo da açao de esclarecimento da Pílula Cardiotônica nos radicais livres de oxigênio é executada pelo uso da ressonância paramagnética eletrônica (EPR) e retenção de giro, com ânions de superóxido e radicais de hidróxido produzidos através do uso do sistema de oxidase xantina- xantina e o sistema H202-Fe⁺² respectivamente.

[311] 0 método:

[312] (1) Produção de radicais de hidróxido.

[313] Ajustar um modelo de teste conforme o Principio de Fenton. Misturar H2O2, ferrisulfas e DMPO (5,5-dimetilpirrolina-l-óxido) , e, então executar o teste EPR. Os sinais resultantes servem como o controle.

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57/81 [314] Adicionar a Pílula Cardiotônica no grupo de tratamento.

[315] (2) Produção de ânions de superóxido.

[316] Ajustar um modelo de teste baseado na reação xantina xantina oxidase. Misturar a xantina, Dietrileno triamino ácido Pentacético, DMPO e xantina oxidase, e então, executar o teste EPR.

[317] Os sinais resultantes servem como controle.

[318] Adicionar a Pílula Cardiotônica no grupo de tratamento. Dez amostras para cada um dos quatro grupos são testadas e os resultados são expressos em termos de média.

[319] O teste T é aplicado na análise estatística.

[320] Os Resultados:

[321] (1) A ação da Pílula Cardiotônica da liberação nos radicais de hidróxi produzidos pelo sistema H202-Fe²+.

[322] Uma DMPO-OH de adução será gerada quando um radical de hidróxi é capturado por um DMPO. O valor de pico de adução no grupo de controle é de 11, 8± 0,6 de unidades relativas, enquanto que no grupo da Pílula Cardiotônica é de 4,1± 0,5 de unidades relativas.

[323] Há uma diferença significativa entre eles (p<0,0l), e a taxa de liberação da Pílula Cardiotônica é de mais de 65%.

[324] (2) A ação da Pílula Cardiotônica de liberação nos ânions de superóxido produzidos pelo sistema xantina xantina oxidase.

[325] Uma adução de DMPO-OOH será gerada quando um ânion de superóxido é capturado por um DMPO.

[326] O valor de pico da adução no grupo de controle é de

10,6 ± 0,67 de unidades relativas, enquanto os sinais espectrais no grupo da Pílula Cardiotônica desaparecem completamente.

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58/81 [327] Em comparaçao com o grupo de controle, há uma diferença significante (p<0,01), e a taxa de liberação da Pílula cardiotônica é de 100%.

[328] Os experimentos acima mostram que a Pílula Cardiotônica tem uma ação efetiva de liberação nos ânions de superóxido produzidos pelo sistema xantina - xantina oxidase e os radicais de hidróxi produzidos pelo sistema H202 Fe²+.

[329] Efeito da Pílula cardiotônica nos Radicais Livres do Tecido Lesionado da Reinfusão de Isquemia Cerebral dos Ratos [330] O método:

[331] Pegue 30 ratos SD, e divida-os aleatoriamente em 3 grupos, que são o grupo de operação imaginado (Uma operação é realizada, mas os vasos sangüíneos e nervos não são ligados), o grupo modelo da reinfusão de isquemia cerebral e o grupo da Pílula Cardiotônia (4g/kg).

[332] Depois da administração por 3 dias de intraperitoneal {Ip) contínua, e duas horas depois da administração no terceiro dia, os ratos são anestesiados com 20% de Etiluretano e suas artérias condutoras em ambos os lados de seus pescoços e os nervos vagos são separados e ligados.

[333] Depois de uma refusão de 30 minutos, cortar as suas cabeças e coletar seus cérebros.

[334] Pegue aproximadamente 500 mg de tecido cortical de seus cérebros, lado esquerdo e os tecidos do hipocampo em ambos os lados, e coloque-os dentro do nitrogênio líquido para homogeneização.

[335] Depois eles são feitos num homogêneo com salina fisiológica congelada, centrifugar o homogêneo.

[336] Pegue o sobrenadante e determine as atividades do CAT e SOD, e o conteúdo de MAD e GSH.

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59/81 [337] Os resultados:

[338] Ver tabela 29.

[339] (1) Efeito da Pílula Cardiotônica na atividade de CAT e o conteúdo do GSH dos tecidos do cérebro.

[340] As atividades do CAT do córtex cerebral e tecidos do hipocampo e o conteúdo do GSH do córtex cerebral no grupo modelo da reinfusão de isquemia cerebral são muito inferiores do que daqueles no grupo de operação imaginado.

[341] Ambas a atividade do CAT dos tecidos do hipocampo e o conteúdo do GSH do córtex cerebral no grupo da Pílula Cardiotônia são significativamente maiores do que aqueles no grupo modelo.

Tabela 29. As Atividades do CATe SOD e o Conteúdo do MDA e GSH dos Tecidos do Cérebro dos Ratos (mPas, x+s) (n=10)

Grupos	Atividade CAT (Proteína U/mg)	GSH (Proteína μ mol/mg)	Atividade SOD (Proteína U/mg)	MDA (Proteína nmol/mg)
Córtex Cereb.	Hipo-c ampo	Córtex Cereb.	Hipo-cam po	Córtex Cereb.	Hipo-cam po	Córtex Cereb.	Hipo-c ampo
Grupo	2.94±	2.78±	18.49	16.87±	14.24±	20.34±	0.502±	1.084
Opera- ção Imagi- nado	0.17	0.14	±0.70	0.92	0.90	0.74	0.054	+ 0.117
Grupo	2.17±	1.97±	14.76	13.80±	10.44±	18.18±	0.718±	1.449
Modelo	0.24’	0.23’	±1.12’	0.74	0.79’	0.62’	0.070’	± 0.140’
Grupo	2.55±	2.79 +	17.14	15.76±	13.31±	20.59±	0.483±	1.069
Píl. Cario- tônica	0.35	0.2l’	±0.76	1.18’	0.77’	0.59’	0.065’	+ 0.131’

Observação: Em comparação com o grupo de operação imaginado, *p<0.05; Em comparação com o grupo modelo, #p<0.05

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60/81 [342] (2) Efeito da Pílula Cardiotônica na atividade de SOD e o conteúdo de MDA dos tecidos do cérebro.

[343] A atividade de SOD dos tecidos do cérebro no grupo modelo é significativamente inferior do que aquela no grupo de operação imaginado enquanto o conteúdo de MDA é significativamente maior. As atividades de SOD do córtex do cérebro e tecidos do hipocampo no grupo da Pílula Cardiotônica aumenta significativamente, enquanto o conteúdo de MDA diminui significativamente.

[344] A conclusão:

[345] Depois da reinfusão da isquemia cerebral, o conteúdo de MDA nos tecidos do cérebro aumenta enquanto o conteúdo de GSH diminui. As atividades de CAT e SOD, duas enzimas importantes para limpar os radicais livres de oxigênio nos tecidos, diminui significativamente, o que mostra que durante o curso da reinfusão da isquemia cerebral, uma grande quantidade de radicais livre de oxigênio ocorre devido à falha da função do sistema de liberação radical livre. Isto leva à peroxidação de lipídio, e então leva à lesão do cérebro. A Pílula Cardiotônica pode diminuir o conteúdo de MDA no córtex cerebral e tecidos do hipocampo dos ratos reinfusados e aumentar o conteúdo de GSH e as atividades de CAT e SOD grandemente, o que mostra que a Pílula Cardiotônica possui as funções de restringir, de uma forma marcante, as reações dos radicais livres de oxigênio, controlando 10 a peroxidação de lipídio e proteger as células danificadas do cérebro causada pela reinfusão da isquemia.

[346] A Antioxidação da Pílula Cardiotônica na Lesão Hepática Crônica [347] O método:

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61/81 [348] CCL4 de alta gordura e baixa proteína induziu modelo de lesão hepática crônica suave do rato Wister é adotado. No grupo da Pílula Cardiotônica, perfusar a Pílula Cardiotônica dentro do estômago dos ratos numa dose de 4g/kg, enquanto que no grupo normal e no grupo modelo, perfusar a mesma quantidade de salina fisiológica. A atividade de SOD é determinada pelo uso do método da xantina oxidase, enquanto o conteúdo de MDA é determinado pelo uso do método de ácido tiobarbitúrico.

[349] Os resultados:

[350] Ver Tabela 30.

[351] Comparando o grupo modelo com o grupo normal, a atividade do SOD degrada, enquanto que a da MDA aumenta.

[352] No grupo da Pílula Cardiotônica, contudo, a atividade de SOD aumenta, enquanto que da MDA degrada, fazendo com que o grupo da Pílula Cardiotônica volte ao normal.

Tabela 30. As Atividades de SOD e o Conteúdo de MDA na Lesão Hepática Crônica

Grupos	Ratos	SOD (NU/mg.pr)	MDA (nM/mg.pr)
Grupo Normal	12	1.71710.521	15.2114.35
Grupo Modelo	12	1.32610.3218	19.3914.62*
Grupo Pílula Cardiotônica	11	1.71010.415#	15.1614.29#

[353] A conclusão:

Observação: Em comparação com o grupo normal, *p<0. 05; Em comparação com o grupo modelo, #p<0.05

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62/81 [354] MDA é um produto de degradação principal da peroxidação de lipídios. MDA pode danificar severamente a estrutura da membrana da célula, e então as células hepáticas. SOD é um expurgador de radicais livres de ânions de superóxido, e este pode restringir a peroxidação de lipídios causada pelos radicais livres. A Pílula Cardiotônica pode aumentar significativamente a atividade de SOD e diminuir o conteúdo de MDA, o que irá degradar o nível de peroxidação de lipídios e suavizar a lesão hepática. DSP não é mutagênico [355] Foi examinado se a DSP é mutagênica no ensaio Ames. DSP não era mutagênica. Ver Tabela 31.

Tabela 31. A mutagenicidade do DSP (Ensaio Ames)

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		Núiero de	colônias	por prato
	S9	TA97	Ta98	Γταιοο	TA 102
DSP
0. 0	-	141 ± 13	36±3	161 ±21	303 ±44
0. 5	-	140±17	35±2	148±21	288±15
5	-	136+14	31 ±4	154 ±26	280±16
50		133±20	33±5	142±25	292 ±37
500	-	109±15	34 ±3	154±16	311 ±32
5000	-	67 ±8*	30±4	149±27	298 ±32
0.0	♦	141 ± 13	44±6	176± 19	296 ±39
0. 5	+	148± 13	42±9	161 ±27	296 ±37
5.0	4	152± 11	44±7	161 ± 16	292 ±38
50.0	4	140± 18	37±6	166±9	307 ±55
500. 0	+	135±21	42±7	152±22	287±16
5000. 0	+	119±17	38 + 7	162 ± 17	363 ±57
Dexon
50	-	2155±814	952±187	831±114	151O± 211
2-AF
40	-	125±18	38±3*	161 ± 16
		1404 ±644»	1598 ± 124	1222 ± 309
DAN
100		364 ±50
		943 ±102*	1

[356] Produção de medicamentos brutos [357] 1. Dan Shen [358] (1) Controle de Qualidade [359] Foram coletadas amostras do medicamento bruto Dan Shen das áreas de produção por toda China. Foram conduzidas

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64/81 análises químicas naquelas amostras de bases diferentes para seus componentes principais. Os resultados mostraram que a qualidade do Dan Shen, de urna área chamada Shangluo, foi o melhor de todos provou que o clima de Shang1uo é o melhor para o crescimento do Dan Shen. Os ingredientes ativos do Dan Shen, tal corno tanshinone e ácido sal viânico A foram aprovados corno os melhores na quantidade.

[360] (2) Topografia [361] Shangluo está geograficamente localizado na Longitude Leste 108°34'20' '-111°1'25'' e Altitude Norte 33°2'30''~

34°24'40'' com um nível do mar médio de 900 metros. A região é uma área com montanhas baixas e médias e está livre de poluição. A circunstância de ar limpo não poluído torna ideal para o crescimento das plantas do medicamento.

[362] (3) Clima [363] O clima é quente e semi-úmido, típico para as áreas montanhosas de zona de transição de regiões subtropicais a temperadas.

[364] Afetado pelas monções do sudeste, ela tem divisões óbvias para as estações e urna grande quantidade de chuva. A precipitação atmosférica do ano nesta área está estimada em 733.9-899 mm. O período de sol é de aproximadamente 1874.1-2185 horas por ano, com uma irradiação solar anual de 119.57-124.36 quilocalorias/cm². A temperatura varia de 18°C- 40.8 °C. Um período livre de geada dura 198-218 dias por ano.

[365] (4) Solo [366] 80% do solo em Shangluo é arenoso, a maior parte da terra 30 arável contém solo neutro e alcalescente com urna valor de pH de 6,5-8. Dentro dos 0-20 cm de camada cultivada, os nutrientes do solo consistem do seguinte: 1,36% de matéria orgânica; 0,085% de nitrogênio; 18 ppm de

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65/81 fosforescência efetiva rápida; 136 ppm de potássio efetivo rápido e 60 ppm de nitrogênio de alcalino-hidrolizado. Metais pesados e outras matérias tóxicas contidas no solo não excedem os padrões da agricultura normatizados pelo país. A região é rica em plantas e animais.

[367] Fazendeiros locais usam fertilizantes orgânicos.

[368] (5) Metais Pesados:

[369] Os oito metais, incluindo chumbo, cádmio, mercúrio, arsênico, etc., os resíduos de pesticida, ar e água todos satisfazem as exigências do meio-ambiente do país.

[370] (6) Normalização [371] O plantio e arrasam do Dan Shen seguem a norma de Boas (GAP). Práticas de Agricultura Conhecimento tecnológico relevante ao crescimento do Dan Shen está compilado dentro dos folhetos e distribuídos entre os cultivadores de Dan Shen na base. Durante as épocas de plantio, são enviados técnicos aos campos para dar treinamento aos cultivadores no local e oferecem suporte técnico, para assim normalizar o plantio do Dan Shen numa grande escala de plantio.

[372] (7) A base de produção de Shangluo [373] Produziu e cultivou 20 diferentes espécies de Dan Shen. Diferentes Dan Shen foram observados e comparados nas suas situações de crescimento, produção, aparência e componentes químicos por três anos. As melhores produções em qualidade forma escolhidas para a plantação em grande escala.

[374] (8) Cultivação de tecido e tecnologia de clonagem são adotadas na cultivação do Dan Shen para acelerar o procedimento e encurtar 30 o círculo de crescimento.

[375] (9) Procedimento de reprodução

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66/81 [376] Depois de um período de teste de 30 dias do plantio testado em tubo, é feito um grande procedimento de reprodução. Este dura 40 dias antes do período de enraizamento. O período de enraizamento levará outros 10 dias para que as plantas gerem e enriqueçam suas raízes. A taxa de enraizamento geralmente alcança 90% ou superior. A planta pode, então ser transferida ao viveiro, onde as condições e equipamentos de irrigação por pulverização avançados são controladas pela tecnologia de computador. As plantas podem ser transplantadas ao campo externo depois de um mês de cultivação no viveiro.

[377] (10) De acordo com especialistas, [378] O Dan Shen cultivado da nossa base de produção não está somente na alta qualidade, mas também produtiva para suas raízes produtivas (50% mais de peso em raiz do que aquelas de outras áreas) e alta composição química (70% superior nos ingredientes do medicamento ativo do que nas 15 amostras de outros lugares).

[379] 2. Borneol Natural [380] (1) Condições de crescimento [381] As áreas de crescimento do Borneol Natural são o município de Xinhuang da província Hunan, China, uma região com montanhas de altura média no nível do mar de 300-600 m. 60% da área é coberta por florestas. A terra consiste de solo arenoso vermelho e amarelo com pH 5-6. Não são encontradas poluições no ar ou água dentro da região.

[382] (2) Características Biológicas da árvore [383] Possui capacidade de crescimento extremamente forte, ela cresce no mato, 300-400 árvores por mu (igual a 666.7 m ); Partes acima das folhas do ramo são coletadas; ganho líquido é de 1000 kg por mu.

[384] (3) Reprodução e transplante

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67/81 [385] Usar tecnologia de enxerto e de corte para reprodução. A planta cresce no viveiro durante o primeiro ano e é transplantada ao campo na primavera do segundo ano. O depositado deve ser fertilizado e escarificado periodicamente.

[386] (4) A planta [387] Pode crescer até 30 cm de altura e 80-100 cm para o maior diâmetro. Ela contém a cânfora natural nas diferentes partes da planta: folhas, ramos, tronco e raízes. Entre todas, as folhas contém o maior conteúdo de cânfora.

[388] (5) A cânfora do tipo Borneol de Xinghuang [389] É uma das variações naturais de Cirnamonium glandullferm (parede) Noes. As árvores de Cânfora variam no conteúdo de Cânfora e Borneol. Algumas são em Borneol e baixa em Cânfora. Através de um ensaio com uma grande quantidade de amostras e muitas análises de HPLC, finalmente escolhemos um tipo de árvores de Cânfora que contém acima de 80% de Borneol com menos impureza.

[390] 3. Radix Notoginseng [391] a. Sementes da planta [392] (1) Determinação da Radix Notoginseng Com a reação PCR para a identificação da massa molecular, Radix Notoginseng pode ser observada com manchas, Radix Notoginseng possui suas características de impressões digitais de DNA.

[393] (2) Forma e propriedades [394] A semente da Radix Notoginseng possui um corpo circular, arredondado. Para as sementes de períodos de crescimento diferentes, a Radix Notoginseng possuí sementes de 2 ou 3 anos.

[395] A semente de 2 anos possui de 0,45-0,55 cm de diâmetro e 95-103 gramas de peso para seu grão seco.

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68/81 [396] As sementes de 3 anos possuem de 0,54-0,65 cm de diâmetro e 98-109 gramas de peso para seu grão seco.

[397] (3) Temperatura [398] Temperatura apropriada para a germinação da semente A temperatura apropriada para a germinação da semente é de 10-30°C, a temperatura ideal é de 15-20 °C.

[399] (4) Conteúdo da Água [400] A quantidade de água contida deve ser de 60-70%, se o conteúdo da água for abaixo de 20% por um longo período de tempo, as sementes perderão a vivacidade.

[401] (5) Dormência [402] As sementes possuem uma tendência de passar por uma dormência por 45-60 dias depois da colheita.

[403] (6) Tempo de Vida [404] As sementes possuem um tempo de vida de 15 dias no estado natural depois que elas são colhidas.

[405] (7) Exigências para armazenamento da Semente [406] As sementes para armazenamento devem ser coletadas das plantas que crescem mais que dois anos e a árvore deve estar com crescimento favorável para as partes acima da terra e livres de pestes. Recomenda-se que as sementes sejam colhidas das plantas com três anos.

[407] (8) Gerenciamento para o campo de reserva da semente [408] O campo de reserva da semente deve ser melhor gerenciado do que os campos de produção regular, plantas contaminadas devem ser descartadas por todo o tempo, as pestes não devem entrar em contato com a brotação sob nenhuma circunstância.

[409] Durante o período de germinação dos brotos e folhas, 3000 ppm de solução YunDa-120 e 400 vezes de fertilizador biológico Yang Kang devem ser pulverizados duas vezes.

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69/81 [410] E durante o período de florescência e frutífero, Phytokinin é pulverizado.

[411] (9) Período de Colheita da semente [412] O período de colheita da semente Radix Notoginseng é do final de outubro ao início de dezembro.

[413] (10) Métodos para Colheita das Sementes [414] A colheita das sementes é decidida dependendo dos níveis de maturidade das sementes. As sementes das árvores que crescem mais fortes serão coletadas e armazenadas separadamente.

[415] A base proíbe estritamente a colheita das plantas imaturas.

[416] (11) Processamento [417] As plantas são lavadas imediatamente após a colheita enquanto a polpa e as sementes com pragas são colhidas. Secar as plantas no sol depois da lavagem.

[418] (12) Armazenamento [419] Usar solução de 300 vezes de 58% de zinco metalazil manganosol líquido dissolúvel para tratar as sementes da Radix Notoginseng armazene as sementes com areia úmida contendo 20% de água. Este é um passo crucial para o processo.

[420] (13) Empacotamento em containers [421] Os produtos finais são empacotados descontaminados. Deve haver sinais que indiquem a data da colheita, processamento e o número de lote do produto.

[422] (14) Transporte [423] Veículos de transporte limpos à prova d'água e ventilados devem ser usados para o transporte a fim de prevenir que o produto seja contaminado com matérias

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70/81 tóxicas. Se levar mais de 8 horas para o transporte, a semente do produto deve estar com areia úmida.

[424] (15) Teste de vitalidade das sementes [425] Usar os métodos TTC: pesar precisamente 1 g de pó de tetrazólio e dissolva-o em 1000 mL de água destilada para fazer a solução de 0,1% TTC. Imergir a amostra dentro de urna solução e mantenha por 24 horas, retire e corte-a pela metade e posicione metade dentro de um disco de cultura. Usar a preparação de 0,1% 1 TTC para corar a amostra por 30 minutos. A vitalidade das sementes pode ser determinada pela cor das sementes.

[426] (16) Inspeção das Pestes [427] i. Observe a semente com olhar atento enquanto coloca 500-1000 de amostras numa folha branca de papel ou vidro. Se aparecerem pontos incomuns ou pestes na superfície da amostra, a contaminação pode ser decidida. As amostras contaminadas devem ser separadas e identificadas quanto ao seu nível de contaminação.

[428] ii. Corte e Inspeção: use um bisturi para cortar e abrir 2 conjuntos de amostras, cada um contendo 100 sementes. Calcular o número de sementes contaminadas para determinar o nível de contaminação.

[429] iii. Cheire para inspecionar as amostras: coloque-as na palma da mão e detecte-as pelo cheiro a procura de qualquer odor de bolor. Ou simplesmente deixe a amostra num copo contendo água aquecida { 60-70 °C), e cubra por 2-3 minutos, derrame a água e cheire as sementes. As sementes devem ter uma fragrância delicada, se não, provavelmente está contaminada.

[430] (17) Inspeção da Cor [431] Uma semente não contaminada deve ter uma cor branca e amarela clara.

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71/81 [432] (18) Inspeção por Microscópico [433] Colha aleatoriamente conjuntos de amostras de teste (cada amostra não deve conter menos que 50 sementes), coloque as amostras num disco de cultura por 24 horas. Observe-os sob um microscópio para detectar por qualquer bactéria patogênica, se houver, calcular o nível de contaminação.

[434] b. Semeadura da planta [435] (1) Temperatura para germinação [436] A temperatura para a germinação da Radix Notoginseng é de 1-20°C, a temperatura ideal é de l5°C.

[437] (2) Conteúdo da Água [438] O conteúdo da água do solo usado para a germinação da planta é de 20 25%.

[439] (3) Armazenamento [440] O desenvolvimento da Radix Notoginseng do descanso do broto à germinação necessita de 90 dias de período de dormência. 100 ppm de gibberelina podem ajudar a encurtar o período de dormência da Radix Notoginseng.

[441] (4) Refinamento [442] O período de refinamento da Radix Notoginseng é do início de dezembro ao final de janeiro. Durante o refinamento, as raízes devem ser tratadas com cuidado. Plantar imediatamente depois do refinamento.

[443] (5) Transporte [444] A Radix Notoginseng não pode ser transportada por longas distâncias, do contrário ela será danificada. Se for inevitável, a Radix Notoginseng deve ser colocada num container ventilado com solo, sem exposição direta ao sol.

[445] (6) Inspeção da Qualidade

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72/81 [446] i. Para pesar cada unidade, escolha 300-500 plantas brotadas de sementes como amostras, colocar cada 100 plantas brotadas de sementes num grupo, pese-as na balança e calcule o peso unitário.

[447] ii. Para inspeção de pesticidas: ajuste quatro grupos de amostras, cada um contendo 100 plantas brotadas de sementes. Posicione as amostras num disco de vidro e observe atentamente as amostras com os olhos humanos ou com lentes de aumento de 5-10 vezes para verificar a presença de pesticidas.

[448] iii. Ajustar quatro grupos de amostras, cada uma contendo 100 plantas, fatie as amostras para uma observação sob o microscópio.

[449] c. Cultura da semeadura [450] (l) Condição do campo [451] A semeadura das plantas da Radix Notoginseng são cultivadas nas com melhor condições. A base usa cultura centralizadas e método de cultura de grande escala.

[452] (2) Meio-Ambiente [453] A área é totalmente livre de poluição. A qualidade do ar está acima do nível 2 da norma GB 3059-96.

[454] (3) Recursos de Água [455] Os recursos de água consistem de água da chuva, água do subsolo e água que corre naturalmente. A qualidade da água na área é monitorada com a norma GB 5084-92.

[456] (4) Solo [457] A Radix Notoginseng não pode ser plantada em solo lodoso, a quantidade de metais pesados no solo escolhido para a Radix Notoginseng deve estar dentro da norma evante do país.

[458] (5) Solo Ideal

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73/81 [459] Para um bom resultado esperado, escolhemos solo acídico (pH 5,5-7,0) com uma inclinação de não mais que 15°. Um nível de não mais que 1600m acima do mar, com 8-12% de luz solar, e o nível maior que 1600m acima do mar deve ter de 10-20% de luz solar.

[460] (6) Temperatura [461] Durante o período de germinação a temperatura atmosférica deve ser de 20-25°C, e a temperatura da terra deve ser de 10-l5°C. Durante o período de postura a melhor temperatura atmosférica é de 20-25°C, e a melhor temperatura de solo é de 15-20°C.

[462] (7) Conteúdo da Água [463] O conteúdo da água do solo deve ser de 30%.

[464] (8) Preparação do Solo [465] A preparação do solo deve ser repetida 3 vezes antes do plantio, e o solo ser exposto sob a luz solar, isto ajuda a exterminar substâncias de bactéria no solo.

[466] (9) Tratamento com o Solo [467] Para prevenir danos às raízes, 75-lOOg de cal é usado para cada metro quadrado antes do transplante.

[468] (10) Construção e gerenciamento da Sombra [469] A sombra é de 1,80 metros acima do chão com uma trincheira de 2 metros de profundidade abaixo do chão. A penetração da luz solar é melhor a 8-10% se uma área de não mais que 1600 metros acima do nível do mar, ou 10-15% se for maior que 1600 metros. O chão deve ser nivelado; uma camada profunda da terra deve estar solta; enquanto o nível da superfície da terra deve ser rígida. O melhor período de plantio é do final de dezembro ao final de janeiro. Antes do plantio, as sementes devem ser imersas em 58% de zinco de metalaxílico (500-800x) ou 1,5% de antimicina (200 15 ppm) por 30-50 minutos e retire para deixar secar. Isto é

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74/81 para proteger a planta de doenças {Sementes revestidas não tem que passar pelos procedimentos acima). A densidade do plantio deve ser de 4 x 5 em ou 5 cm terra com 100 200 mil sementes por mu da. Use ferramentas especiais para criar uma vala e use máquina 20 ou as de forma manual para semear e plantar. As sementes são cobertas com solo fino completamente. Depois de tudo, devem ser realizadas as tarefas de fertilização, lavagem e capinagem. As ervas daninhas devem ser eliminadas todo o tempo. Se a sombra for quebrada, esta deve ser reparada imediatamente e deve ser assegurada a penetração correta da luz solar. Os fertilizantes naturais incluindo desejos das aves domésticas, cinzas de fogão e farinha de ossos (dejetos humanos não devem ser usados).

[470] d. Cultivo da Radix Notoginseng [471] (1) Topologia [472] O terreno deve ter uma inclinação moderada abaixo de 15° euma boa exposição solar.

[473] (2) Textura do solo [474] É melhor que o terreno esteja profundamente assentado com solo solto arenoso e solto.

[475] (3) pH do solo [476] deve estar em 5,5 7.

[477] (4) Colheitas [478] Pré-plantadas Milho, trigo e feijão são pré-plantados em novos campos para evitar a destruição do solo.

[479] (5) Nível do mar [480] 140 0-1800 metros acima do nível do mar perto de uma altitude 10 de 23,5° é a localização da área mais adequada para o cultivo da Radix Notoginseng. ( [481] (6) Luz solar [482] Radix Notoginseng é um tipo de planta que necessita

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75/81 de apenas 8-20% de luz solar. A quantidade de luz solar deve se aumentada variamente em relação aos diferentes períodos de seu crescimento. Muita exposição à Contudo, luz solar resultará em plantas estagnadas.

[483] (7) Conteúdo da água [484] O conteúdo da água dentro do solo deve estar em 2530%.

[485] (8) Fertilizante [486] Fertilizantes orgânicos são usados juntamente com fertilizantes misturados, fertilizantes de micronutrientes ou elementos indicadores de fertilizantes.

[487] (9) Temperatura [488] A temperatura média é estimada em 15-18 °C durante o ano na área da Radix Notoginseng. Durante o período de germinação, a temperatura atmosférica deve ser, a mais adequável, em 25°C, e a temperatura do solo em 15°C. Durante o desenvolvimento do nutriente e período de florescência, a temperatura deve ser mantida em 25°C. Se a temperatura estiver abaixo de 15°C, a florescência será afetada.

[489] (10) Divisão preenchida [490] Antes da cultivação, o campo deve ser arado e mexido 3 vezes até que sua estrutura torne-se pó.

[491] (11) Gerenciamento do Solo [492] Antes da semeadura e do transplante, aplicar 75-l00g de cal virgem no solo para fins de esterilização.

[493] (12) Padrões da cama [494] Cama de solo de terreno liso de 20-25 cm de altura, na área de inclinação esta deve ter de 15-20 cm. O comprimento da cama deve ser entre 120 e 140 cm numa forma de uma telha. O solo no fundo da base deve estar solto e que no topo deve ser sólido, que é para uma melhor penetração.

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76/81 [495] (13) Saturamento da Semente [496] Durante o transplante, saturar a semente por 30-50 minutos em 58% de metalaxil (500-800x) e, então deixar secar, isto previne a planta de doenças e eliminará pestes.

[497] (14) Densidade do plantio [498] Mantenha uma distância de 10x12.5 cm - 10x15 cm na densidade da planta. O que significa 26-32 mil plantas a cada mu.

[499] (15) Métodos para Transplante [500] As semeaduras são plantadas voltadas para a mesma direção para fins de gerenciamento. No caso de terrenos com declive, as semeaduras são plantadas do lado mais baixo para o terreno mais alto do terreno. A primeira fileira da semeadura está voltada para cima enquanto a segunda fileira está voltada para baixo. Os brotos também devem estar voltados para a parte de cima, e a parte de baixo deve estar voltada par dentro.

[501] (16) Cobertura do Solo [502] Usar solo úmido, solto e em forma de pó para cobrir as semeaduras completamente, sem expor as raízes ou os brotos.

[503] (17) Fertilização [504] Usar desejos de aves domésticas, cinzas de fogão e Fosfato de Magnésio de Cálcio, etc., corno fertilizante especializado.

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1/3

Claims

REIVINDICAÇÕES

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(1) Extrair os componentes solúveis em água da Panax Notoginseng:

(a) Diluição das ervas com 5-7 vezes de água;

(b) Extração dos componentes solúveis em água da Panax Notoginseng pela fervura num tanque com a pressão do ar entre 0,04-0,06 mPa por 2 horas;

(c) Repetir a extração sob a mesma condição por uma hora e meia;

(d) Filtragem do extrato com rede de malha 100;

(e) Refinar o filtrado usando resina de adsorção macropóros diluindo com etanol;

(f) Concentração dos extratos dissolvidos sob condições descompressadas com a entrada de ar em 0,04-0,06 mPa e o vácuo em -0, 076~-0, 088 mPa até que a densidade seja de 1,33-1,35;

1. COMPOSIÇÃO capaz de tratar a angina pectoris crônica compreendendo extratos de Radix Salviae Miltorrhizael, Panax Notoginseng e Borneol caracterizada por conter 5-40% de ácido fenólico solúvel em água da Radix Salviae Miltorrhizae, 1-10% de saponina solúvel em água da Panax Notoginseng e 1-5% de Borneol e ser produzida pelos passos:

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2. “COMPOSIÇÃO” de acordo com a reivindicação 1 caracterizada pelo fato de conter 10-30% de ácido fenólico

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solúvel em água da Radix Salviae Miltorrhizae, 2-6% de saponina solúvel em água da Panax Notoginseng e 1-3% de Borneol. 3. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, onde uma composição capaz de tratar a angina pectoris crônica estável caracterizada pelo fato de conter 0,14 a 0 , 18 mg de

Danshensu por pílula, mais que 12,12 pg de sanchinoside R1 por pílula e mais que 56,26 pg de ginsenoside Rg1 por pílula.

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2/3 (e) Concentração dos filtrados sob condições descompressadas com a pressão à vácuo de -0,076~-0,088 mPa até que um Kg inicial da erva torne-se um litro;

(f) Precipitação dos concentrados com etanol;

(g) Filtragem da solução precipitada de etanol através da rede de malha 100;

(h) Concentração dos filtrados sob condições descompressadas com pressão de ar de entrada é de 0,04-0,06 mPa e a pressão de vácuo é de -0,076~-0,088 mPa;

(i) Refinar os concentrados pela cromatografia de poliamida dissolvendo com etanol;

(j) Concentrar os extratos refinados para a densidade de 1,33-1,35;

(3) Produção da pílula:

(a) Misturar os extratos da Panax Notoginseng, os extratos da Radix Salviae Miltorrhizae, borneol sintético e polietilenoglicóis 6000 numa proporção de 4,0:20; 6:1 e

9:79,5;

(b) Derretimento da mistura;

(c) Fabricação da mistura derretida para pílulas usando a máquina de gotejamento com as seguintes características: a temperatura do pote de gotejamento é constantemente de 8993°C, a solução de resfriamento é parafina líquida da qual a temperatura é inferior a 8°C, o diâmetro interno da cabeça de gotejamento é de 1,8 mm, o diâmetro externo da cabeça de gotejamento é de 2,4 mm, a distância entre a cabeça de gotejamento e a superfície da solução de resfriamento é de 15 cm;

(d) Centrifugação das pílulas a 800-1100 rpm por 15 minutos para remover os óleos.

(2) Extração dos componentes solúveis em água da Radix Salviae Miltorrhizae:

(a) Diluição das ervas com 5-7 vezes de água;

(b) Extração dos componentes solúveis em água da Radix Salviae Miltorrhizae pela fervura num tanque com a pressão de ar entre 0,04-0,06 mPa por 2 horas;

(c) Repetir a extração sob as mesmas condições por uma hora e meia;

(d) Filtragem do extrato com rede de malha 100;

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