SK288060B6 - Process for preparing Dan Shen pill for use in treating chronic stable angina pectoris, Dan Shen pills and their use - Google Patents

Abstract

The invention describes a process for preparing a Dan Shen pill for use in treating chronic stable angina pectoris comprising the steps of: a) extracting Radix Salviae Miltorrhizae and Panax Notoginseng separately in hot water reflux and filtering separately; b) concentrating filtrates separately; c) refining the concentrates separately using resin columns and concentrating, and getting refined water-soluble extract of Radix Salviae Miltorrhizae and refined water-soluble extract of Panax Notoginseng; d) mixing the refined water-soluble extracts from step c) with appropriate amount of borneol. The Dan Shen pills comprising stable amount of extract of Panax Notoginseng, extract of Radix Salviae Miltorrhizae and borneol and are useful in treating coronary heart diseases.

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka rastlinnej zmesi vo forme Dan Shen piluliek na liečenie angíny pectoris, spôsobu jej prípravy a jej použitia.

Doterajší stav techniky

Chronická stabilná angína pectoris nepriaznivo pôsobí na myokardiálnu ischémiu. Aspirín, nitráty, liečivá blokujúce beta-adrenoceptor, a lieky zabraňujúce ukladaniu vápnika sa používajú buď samostatne, alebo kombinovane proti angíne pectoris.

Aspirín ako antitrombotické činidlo je symptomatickým liečivom pri chronickej stabilnej angíne pectoris.

Nitráty sa používajú ako liek pri angínových záchvatoch a môžu sa úspešne používať aj u pacientov s predpokladanými príznakmi. Všetky nitráty u niektorých citlivých jedincov môžu vyvolať bolesti hlavy.

Liečivá blokujúce beta-adrenoceptor sa používajú ako základný liek proti angíne, ale sú špecificky kontraindikované u pacientov s obštrukčnými chorobami dýchacích ciest a rôznymi dutinovými dysfúnkciami a relatívne sú kontraindikované aj pri cukrovke a pri periférnych vaskulámych chorobách, bradykardii a blokácii srdca.

Antagonisty vápnika sú určite účinné pri angíne, dosahujú pozitívne účinky pri uvoľnení hladkého svalu v koronárnej tepne a v periférnej cirkulácii, zvyšujú zásobovanie myokardu a znižujú prácu myokardu.

Hoci sa dosiahol pokrok v kombinovanej liečebnej terapii angíny, ktorá sa u väčšiny pacientov začína kombináciou nitrátov s beta-adrenoreceptorom alebo antagonistom vápnika, ktoré sú na chronickú stabilnú angínu pectoris veľmi účinné, je tu potreba liečiva na chronickú stabilnú angínu, ktoré je veľmi účinné, môže sa užívať počas dlhého obdobia aje veľmi málo toxické.

Pretože pri uvedených liečivách sa tieto problémy vyskytli, pozoruhodné úsilie sa venovalo herbálnej medicíne ako alternatíve ku štandardnej liečbe chronickej stabilnej angíny pectoris. Tradičná čínska medicína (TCM) v tomto smere veľmi prispela.

Americké patenty č. 5288485 a č. 5433957 sa odvolávajú na extrakt z hypericum erectum thumb pri liečení alebo prevencii chorôb, ktoré vyvolávajú v krvnom obehu také poruchy, ako je angína pectoris.

Navyše, hypericum erectum thumb, okvetné lístky horáka lekárskeho a veľa iných rastlín sa tiež používa pri liečení angíny pectoris. Takouto rastlinou je Valeriana officinalis latifolia. Yang Gy a kolektív (1994) oznámili, že 82 pacientov s angínou pectoris sa liečilo s Valeriana officinalis latifolia, u ktorých ST-T ischemické zmeny boli zistené na EKG v 50 prípadoch pred liečením. Celkový účinok pri jednoduchej angíne (bez detegovateľných ischemických nálezov) bol 87,80 %, pri angíne s ischemickými nálezmi 88,00 %. Navyše sa zistilo, že Valeriana officinalis latifolia môže znižovať lipidy v plazme. Nezistili sa žiadne toxické účinky na pečeň, obličky a hematopoietické tkanivo.

Wu Y (1990) oznámil, že 267 pacientov s angínou pectoris bolo s 93,3 % účinnosťou liečených s tabletkami xintongkang.

Ďalší rastlinný prípravok, ktorý bol používaný na liečenie angíny pectoris, sa volá Shensao tongguan pián. V roku 1990 Hu JX a kolektív oznámili, že Shensao tongguan pián pozostáva hlavne zo saponínu zo stopiek a listov ženšenu a koreňa Paoeniae Alba, atď. Celková účinnosť dosiahnutá pri liečení s týmto prípravkom bola 94,71 % a s EKG zmerané zlepšenie 63,38 %. Navyše laboratórnym odskúšaním sa tiež zistilo, že Shensao tongguan pián podporuje výkon ľavej komory, znižuje viskozitu krvi a zabraňuje zhlukovaniu krvných doštičiek. Oba testy na akútnu a chronickú toxicitu ukázali, že Shensao tongguan pián nemá žiadne toxické alebo vedľajšie účinky.

Kuo-guan granula je ďalším rastlinným prípravkom proti angíne pectoris. Li Y a kolektív (1990) oznámili, že zmeny zinku, medi a erytrocytovej glutaniónovej peroxidázy v plazme boli odmerané atómovou absorpčnou spektroskopiou a DTNB kolorimetrickým zariadením u 31 pacientov chorých na koronárnu srdcovú chorobu s angínou pectoris pred a po užívaní Kuo-guan granúl počas jedného mesiaca. Výsledky naznačujú, že pred liečením bol u pacientov zistený nízky obsah zinku a erytrocytovej glutaniónovej peroxidázy v plazme a meď bola vyššia u pacientov v porovnaní s kontrolnou skupinou pred liečením (P<0,01), po liečení sa zvýšil obsah zinku a erytrocytovej glutaniónovej peroxidázy v plazme a znížil sa obsah medi (P<0,01). Toto vyvoláva predstavu, že liečebný mechanizmus Ko-guan granúl môže regulovať srdcové koronárne ochorenia s angínou pectoris a poruchy prítomnosti stopových prvkov v tele.

Saponín z Tribulus terrestris je ďalšou rastlinnou kompozíciou, ktorá sa používa na liečenie angíny pectoris.

Fufang Danshen Pián je národným receptom Dan Shen tabliet, ktoré sa používajú pri liečení chronickej stabilnej angíny pectoris vyvolanej koronárnou arteriálnou ischémiou a od roku 1977 je oficiálne uvedená v čínskom liekopise a klinicky sa desaťročia používa. Fufang Danshen Pián obsahuje viacnásobné účinné botanické výťažky vrátane Danshen (Radix Salviae Miltiorrhizaé) a Sanchi (Radix Notoginseng). Obe rastliny bo2

SK 288060 Β6 li prvýkrát opísané v Shen Nong Ben Cao Jing (Shen-nong Herbal Pharmacopoeia) hotovej v roku 200. Fufang Danshen Pián obsahuje aj syntetický bomeol, obdobu prírodného bomeolu. Prírodný bomeol bol prvýkrát dokumentovaný v Táng Ben Cao (Herbal Pharmacopoeia Táng Dynasty) okolo roku 659.

Li Cheng-zhu a kolektív v roku (1979) napísali (Acta Acad Med Prím Shanghai) experimentálnu štúdiu o tromboticko inhibičnom účinku Radix Salviae Miltiorrhizae. Pôsobí in vitro pri trombóze, funkciách krvných doštičiek a zrážaní, ako aj fibrinolýza bola pozorovaná pri králikoch. Po injekcii z Radix Salviae Miltiorrhizae sa zistili 3 súvislosti, ktoré zohrali dôležitú úlohu pri inhibícii in vitro trombózy: (1) inhibícia činnosti krvných doštičiek, (2) inhibícia funkcie zrážania a (3) podpora fibrinolýzy. Z týchto funkcií sú prvé dve najdôležitejšie. Výsledky potvrdzujú, že uvedené liečivo je účinné pri liečení trombotických chorôb, najmä trombotických chorôb tepien.

Chiang WT a kolektív (1982) opísali (Acta Acad Med Prím Shanghai) účinky „Danshensu a iných vodorozpustných zložiek Šalvia miltiorrhiza na ischemický myokard psa a na izolovanú koronárnu artériu prasaťa. Tento účinok 3 nových vodorozpustných zložiek, t. j. Danshensu (DS-182, D(+)-3,4-dihydroxyfenyl kyseliny mliečnej), aldehyd protokatechidu (PCAD) a znečistenej kyseliny diterpénovej (DS-187) izolovanej zo Šalvia milthiorrhiza Bunge bol porovnaný s dipyridamolom. Výsledky zistené (1) na myšiach preukázali, že DS-182 poskytuje významnú ochranu proti hypoxii, zatiaľ čo PCAD bol neúčinný; (2) DS-182 anuluje pituitrínom indukované elektrokardiografické ischemické zvýšenie ST-T, ale nemá žiaden vplyv na zníženie rýchlosti srdca. DS-187, PCAD adipyridamol majú len neúplnú ochranu; (3) pri akútnom infarkte na modeli psa, ktorý bol vyvolaný podviazaním prednej zostupujúcej vetvy ľavej koronárnej tepny, sa úspech dosahuje vnútrožilovou injekciou DS-182, ktorý bol preukázaný ako lepší v porovnaní s DS-187 a PCAD vzhľadom na ľavú ventikulámu funkciu, ľavý ventrikulámy horný systolický tlak (LVPSP) a ľavý ventrikulámy spodný diastolický tlak (LVEDP). Naopak, PCAD má nepriaznivé účinky na LVPSP a LVEDP. Intravenózne podaný dipyridamol, aj keď nemení LVEDP, významne potláča LVPSP s výrazným hypotenzívnym účinkom. Všetky tieto komponenty zo Šalvia a dipyridamol významne znižujú konečný rozmer myokardiálneho infarktu (N-BT hodnotenie); DS-182 bol najúčinnejší, nasledovaný dipyridamolom a DS-187, zatiaľ čo PCAD bol najmenej účinný, (4) vo vypreparovanej izolovanej prefúndovanej koronárnej tepne prasaťa DS-182 významne znižoval odpor koronárnej cievy, zatiaľ čo oba DS-187 a PCAD alebo sódium Tanshinone II-A sulfonát sodný (DS-201), iné zložky Šalvia, ho zvyšujú. Zvierajúci účinok morfia a propranololu na vypreparovanú izolovanú koronárnu tepnu bol antagonizovaný predchádzajúcou aplikáciou DS-182. Toto všetko naznačuje, že Danshensu môže mať aktívny účinok pri metóde liečenia ischemickej srdcovej choroby so Šalvia miltiorrhiza a v súčinnosti s propranololom alebo morfiom môže byť prospešné.

Li Chen-zhu a kolektív (1983) opísali (Chin J Integr Med) antikoagulačný účinok Radix Silviae Miltiorrhizae. Danshensu je vodorozpustný monomér extrahovaný z Radix Silviae Miltiorrhizae. Je tiež hlavnou zložkou komerčne predávanej injekcie Radix Silviae Miltiorrhizae. Uvedená štúdia dokazuje, že Danshensu zabraňuje trombóze in vitro, zhlukovaniu krvných doštičiek (indukovaný s ADP) a internému a externému zrážaciemu systému; zmenšuje počet krvných doštičiek a podporuje rozklad fibrínu a fibrinogénu. Účinky vrcholia 30 minút po aplikácii jednej injekcii 20 mg/kg u králika, trvajú 1 hodinu a postupne klesajú. 4,5-hodiny po injekcii bolo všetko zregenerované do normálu okrem testu na trombózu in vitro.

Chen Zhanghua (1987) opísal v Acta Acad Med Prím Shanghai experimentálne zistené účinky „Danshensu“ na mikrocirkuláme poruchy a koncentráciu kyseliny mliečnej v plazme. Prírodný Danshensu je vo vode rozpustný monomér extrahovaný z Radix Salviae Milthiorrhizae (RSM). Mikrocirkuláme poruchy v králikoch boli vyvolané vnútrožilovou injekciou dextránu s vysokou molekulovou hmotnosťou. Prírodný Danshensu (dávka 4 - 6 mg/kg) zjavne zvýšil počet ciev vlásočníc v očnej spojovke a tiež znížil koncentráciu kyseliny mliečnej v plazme králikov. Mezenterické mikrocirkuláme poruchy boli vyvolané lokálnou infúziou noradrenalínu (4 g) myšiam. Prírodný Danshensu rozširuje tepny a zrýchľuje krvný obeh, takže odstraňuje mikrocirkulárnu stagnáciu krvi. V našich experimentoch účinky syntetického Danshensu boli podobné. Výsledky ukázali, že nebol žiadny významný rozdiel medzi prírodným a syntetickým Danshensu pri odstránení porúch mikrocirkulácie.

Sun Xi-ming a kolektív (1991) publikovali správu o novom farmakologickom účinku extraktu z Danshen {Šalvia milttiorrhiza). V článku uvádzajú, že pri štúdiu buniek zistili, že výťažok z Danshens {Šalvia miltiorrhiza), ktorý obsahuje sodné soli D(+)-(3,4-dihydroxyfenyl) kyseliny mliečnej, má nové farmakologické účinky na zníženie biosyntézy cholesterolu v bunkách a na oxidáciu anti-lipoproteínov. Pri kontrolných porovnaniach zistili, že rýchlosť elektroforetickej migrácie bola značne znížená a zjavne sa znížil aj obsah MDA a cytotoxicita. Tieto výsledky ukazujú, že soli D(+)-(3,4-dihydroxyfenyl) kyseliny mliečnej môžu byť účinné pri prevencii a liečení aterosklerózy.

Zhen Ruo-xuan a kolektív (1992) opísali (Chin J Integr Med) ochranný účinok Radix Silviae Milttiorrhizae na ischémiu myokardu indukovanú podviazaním koronárnych ciev pri myšiach. Zjavný ochranný účinok na akútnu ischémiu myokardu myší s podviazanými koronárnymi cievami sa získal po i. p. vodného extraktu z Radix Silviae Miltiorrhizae (5 g surového liečiva/kg). Zvýšenie S-T segmentu na EKG spôsobené ischémiou myokardu v liečebnej skupine bolo omnoho nižšie, veľkosť ischémie v ľavej komore bola menšia a miera prežitia bola vyššia v porovnaní s kontrolou.

Wu Yao-zhong a kolektív (1995) opísali (Acta Nanjing Univ Trad Chin Mater Med) účinky Radix Silviae Miltiorrhizae na zvyšovanie cirkulácie krvi odstraňovaním nahromadenej krvi. Farmakologický výskum Radix Silviae Miltiorrhizae je všeobecne známy. Ale reologické štúdie Radix Silviae Miltiorrhizae posudzovaním PGI2, ET a TXA2, ktoré sú produkované krvnými doštičkami, sú zriedkavé. Vplyv Radix Silviae Miltiorrhizae na trombózu, zmeny PT, KPTT, FG, ESR a HCT a na zhlukovanie krvných doštičiek pri králikoch je rozvinutý v tejto štúdii. Zhrnutím je, že Radix Silviae Miltiorrhizae znižuje syntézu TXA2 a tým sa znižuje zhlukovanie krvných doštičiek a trombóza.

Shin Lin a kolektív (1990) opísal (Aktá Pharmcol Sin) účinky celkového saponínu z Panax Notoginseng na zvýšenie PGI_Z v krčnej tepne a znižovanie TXA2 v krvných doštičkách. Celkové množstvo saponínov v Panax Notoginseng (PNS) 100 mg/(kg-deň) bolo podané orálne králikom v priebehu 8 týždňov. Vznik aortického aterosklerotického plaku bol obmedzený v porovnaní s kontrolnou skupinou. Rádioimunotest bol použitý na skúmanie efektov PNS na obsah prostacyklínu v karotickej tepne a zníženie tromboxánu A2 v krvných doštičkách potkana. Orálne podanie PNS 25, 50, 100 mg/(kg za deň) počas 10 dní vyvolalo zvýšenie prostacyklínu v karotickej tepne a zníženie tromboxánu A2 v krvných doštičkách v porovnaní s kontrolnou skupinou. Výsledky ukázali, že vplyvom anti-aterosklerotického PNS môže nastať korekcia porušenia rovnováhy medzi prostacyklínom a tromboxánom A2.

Li Xing a kolektív (1990) opísal (Acta Pharmacol Sin) ochranné účinky saponínov Panax Notoginseng pri experimentálnom poškodení myokardu, ktoré bolo indukované ischémiou a reperfuziou pri potkanoch. Študované boli celkové účinky saponínu Panax Notoginseng (PNS) a čistených ginsenoidov R_bi a R_gi z PNS na poškodenie myokardu vyvolané srdcovou ischémiou a reperfuziou na srdci potkana in situ a in vitro. Pentobarbitalom anestezované potkany, preliečené PNS (100 a 200 mg/kg) majú významne znížený počet infarktu myokardu po podviazaní ľavej zostupnej koronárnej tepny (40 min.) a reperfuzii (120 min.) v porovnaní s kontrolovanou skupinou. PNS 12,5 a 25 mg/1, R_bl 10 mg/1 a R_gi 10 mg/1 významne znižuje uvoľňovanie srdcového CPK, zmierňuje nahromadenie myokardiálneho Ca^Ť+, znižuje tvorbu malóndialdehydu (MDA) a zabraňuje zníženiu aktivity superoxid dismutázy (SOD) v porovnaní s kontrolovanými v perfimdovaných izolovaných srdciach potkanov s celkovou ischémiou (40 minút) a reperfuziou (15 minút). Výsledky ukázali, že PNS, R_bl a R_gl zabraňujú ischémii srdca a účinok je vztiahnutý na inhibíciu peroxidácie lipidu.

Huang Cong a kolektív (1991) opísali v (Chin Bull Pharmacol) účinky Panax Notoginseng na ischémiu myokardu a reperfuzne poškodenie králika pri vedomí. Študované boli účinky saponínu Panax Notoginsengu (PNGS) na ischémiu myokardu a reperfuzne poškodenie králika pri vedomí pozorovaním zmien v elektrokardiograme (EKG), aktivity kreatín fosfokinázy (CPK) a laktát dehydrogenázy (LD) a veľkosť oblasti ischémie. Pri dávkach PNGS 50 mg/kg a 100 mg/kg sa významne znižuje veľkosť oblasti ischémie. Tieto výsledky naznačujú, že PNGS má ochranný účinok na ischémiu myokardu a poškodenia reperfuziou.

Mo Qi.xian a kolektív (1987) opísali (Propriet Trad Chin Med Res) dynamiku ³H-Bomeolu. Na znázornenie mechanizmu indukovania resuscitácie aromatickosti Bomeolu, aktívny ³H-Bomeol sa aplikoval intravenózne injekciou a orálne. Výsledky ukazujú, že polčas účinnosti bol 2,8 minúty po jednoduchej intravenóznej injekcii 3HBomolu. Zistilo sa, že liečivo bolo rýchlo distribuované k príslušným orgánom a tkanivám po podaní a malo okamžitý účinok. Distribúcia v živom organizme sa sústreďuje na orgány a tkanivá, ktoré sú výdatné na krvné toky, ako je srdce, pľúca, pečeň, obličky, mozog atď., čo poskytuje klinickej aplikácii určitý teoretický základ. Aj keď polčas sa znížil na 5,3 hodiny po orálnej aplikácii lieku, naznačuje to, že orálna aplikácia Bomeolu nevedie ku akumulácii, ale k slabej biovailabilite. V ďalších štúdiách bol diskutovaný vzťah medzi dávkovaním lieku a formou dávky.

Chen Tie-feng a kolektív (1990) opísali (ActaPharmacol Sin) zlepšenie absorpcie tetrametylpyrazínu syntetickým bomeolom. Potkanom Sprague-Dawley bol podávaný ig tetrametylpyrazínfosfát (TMP) 5 mg/kg s alebo bez bomea 5 mg/kg. Koncentrácia TMP v plazme bola analyzovaná GC metódou a údaje boli spracované NONLIN programom. Cmax boli 931 a 562 ng/ml. (p<0,01), zatiaľ čo AUC bolo 68849 a 37174, (P<0,05). Toto naznačuje, že bomeol zlepšuje absorpciu TMP a neeliminuje ho.

Xu Wei a kolektív (1995) opísali (Pharmacol Chin Med Clin) účinok mentolu a bomeolu na distribúciu sulfadiazínu sodného a Evanovej modrej v potkanoch a myšacom mozgu. Mentol (1,5 g/kg, ig) a Bomeol (1,5 g/kg) predlžujú polčas distribúcie sulfadiazínu sodného t_1/2 pri potkanoch. Táto dávka mentolu a bomeolu podávaná orálne zvyšuje aj koncentráciu sulfadiazínu sodného v mozgu potkana. Mentol (ig 0,5 g/kg počas troch dní) a bomeol (ig 0,5 g/kg počas troch dní) podporujú koncentrovanie Evanovej modrej v mozgu myší, ale hodnota koncentrácie bola značne nižšia ako pri chorých myšiach trpiacich poškodením ischémiou a reperfuziou. Výsledky naznačujú, že mentol a bomeol môžu zvyšovať prenos sulfadiazínu sodného cez krvné bariéry v mozgu bez poškodenia týchto bariér.

V Spojených štátoch je koronárna aterosklerotická srdcová choroba najbežnejšou príčinou kardiovaskulárneho postihnutia a smrti.

Ateroskleróza je arteriálnou poruchou charakterizovanou žltkastým povlakom z cholesterolu, tukov a bunkového odpadu na vnútorných vrstvách stien veľkých a stredných tepien. V začiatočnom stave sa preja4

SK 288060 Β6 vuje ako pruh tuku, ktorý sa postupne prebudováva na vláknitý povlak alebo ateromatóznu léziu. Stena cievy začne hrubnúť, zvlákňuje sa a vápenatie. Lumen tepny sa zužuje.

Mnohé aterosklerotické povlaky sú stabilné, pri niektorých rast pokračuje. Pretrhnutie má za následok krvácanie, aktiváciu krvných doštičiek, a potom intravaskulámu trombózu. Koronárna trombóza spôsobuje čiastočné alebo úplné upchatie cievy, narušenie krvného obehu a tak smeruje do nestabilnej angíny alebo infarktu myokardu. Alternatívne, prasknutý povlak môže restabilizovať, čo často vedie k stenóze.

Cvičenie a duševné stresy zvyšujú potrebu kyslíka v myokarde. V normálnych fyziologických podmienkach zvýšená potreba kyslíka v myokarde rozťahuje arterioly a tým zvyšuje krvný obeh. V prítomnosti aterosklerózy sa arterioly môžu maximálne roztiahnuť len do rozsahu základnej spotreby. Takto roztiahnuté arterioly nemusia byť schopné vyhovieť zvýšeným nárokom myokardu na kyslík. Ak potreba kyslíka presiahne množstvo privádzaného kyslíka, tak sa to prejaví ischémiou myokardu. Alternatívne, vážne oklúzie v cievach môžu obmedziť množstvo pretekajúcej krvi, čo vyvoláva ischémiu myokardu. Klinickým prejavom dočasnej ischémie myokardu je angína pectoris, ktorá sa prejavuje záchvatmi bolesti v hrudi, rozširujúcou sa do ramien, hlavne do ľavého ramena s alebo bez sprievodného pocitu dusenia alebo hroziacou smrťou.

Angína pectoris sa delí na dva druhy: stabilnú a nestabilnú. Stabilná angína pectoris je vo väčšine prípadov spôsobená zvýšenou potrebou kyslíka v myokarde. Z toho dôvodu je stabilná angína pectoris závislá od frekvencie a trvania zvýšenej potreby kyslíka v myokarde, napr. pri cvičení, duševných stresoch a podobne. Na rozdiel od toho, nestabilná angína pectoris útočí bez vyvolania a obyčajne je spôsobená znížením zásobovania myokardu kyslíkom. Roztrhnutie povlaku, upchatie krvnými doštičkami a koronárna trombóza znižuje zásobovanie myokardu kyslíkom.

Angína pectoris sa lieči rôznymi liekmi, operačným postupom, by-passovou transplantáciou koronárnej artérie, nafukovacou angioplastikou, umiestnením stentu a podobne. Liečenie stabilnej angíny pectoris spočíva v preventívnom znižovaní dopytu po kyslíku ako aj v preventívnych opatreniach. Liečenie akútneho nestabilného syndrómu angíny pectoris spočíva hlavne v zamedzení primárnej aktivácie krvných doštičiek a trombózy.

Bežným liečebným prostriedkom na chronicky stabilnú angínu pectoris je nitroglycerín a iné nitráty, blokátory kalciového kanála a blokátory beta-adrenergického receptora. Tieto liečivá sa podávajú samostatne alebo v kombinácii s iným liekmi a zmierňujú alebo skôr zabraňujú angíne, ako ju liečia.

Keď angína zaútočí, je vhodné dať pod jazyk nitroglycerín, ktorý zmierňuje príznaky. Nitroglycerín sa tiež používa na predchádzanie záchvatom angíny spôsobeným námahou a stresom. Podávaním nitroglycerínu sa predchádza záchvatom angíny. Nitroglycerín a nitráty sprostredkovávajú uvoľnenie hladkého svalu cievy, znižujú aktivitu myokardu, čím znižujú potrebu kyslíka. Vedľajšími účinkami je bolesť hlavy, závrat, zoslabnutie, ortostatické zníženie krvného tlaku, tachykardia a podobne.

Blokátor beta-adrenergického receptora, ako napr. propranolol, sa aplikuje pri predchádzaní angíny pectoris znižovaním potreby kyslíka v myokarde počas námahy a stresu. Dôležitými kontraindikáciami je bronchospazmus priedušiek, bradyarytmia a zjavné zlyhanie srdca. U jednotlivcov s astmou a inými formami upchatých dýchacích ciest beta-blokátory môžu zhoršiť ich stav.

Antagonisty vápnika sa aplikujú pri predchádzaní angíny pectoris redukovaním množstva kyslíka, ktoré vyžaduje srdcový sval. Srdcový sval je závislý pri normálnej funkcii od prísunu vápnika. Tým, že sa bráni prísunu vápnika, antagonisty vápnika môžu uvoľniť hladké svalstvo cievy, znížiť aktivitu myokardu, zmenšiť potrebu kyslíka v srdcovom svale, a tak predchádzať angíne pectoris. Antagonisty vápnika majú nepriaznivé vedľajšie účinky. Miernymi vedľajšími účinkami sú sčervenenie, opuch, závrat, nevoľnosť a podobne. Neúmerne vysoké zabránenie prísunu vápnika do myokardu môže spôsobiť vážne vedľajšie účinky ako srdcovú zástavu, bradykardiu, artrioventrikulámu blokádu, kongestívne zlyhanie srdca a pod. Pri kombinovaní s betaadregnergickými liečivami sa vedľajšie účinky antagonistov vápnika často zhoršujú.

V Číne Panax Notoginseng a Radix Salviae Miltorrhizae sa používali na liečenie kardiovaskulárnych chorôb od roku 200 nášho letopočtu (Shen.nong's Herbal Pharmacopoeia). Panax Notoginseng bol používaný na liečenie angíny pectoris. Radix Salviae Miltiorrhizae sa používal na podporu krvného obehu a na rozptyl nahromadenej krvi. Mnohé predklinické a klinické štúdie dokazujú účinnosť a bezpečnosť Panax Notoginseng a Radix Salviae Miltiorrhizae.

Tradičným čínskym liekom je koncentrovaná zmes výťažku z rôznych byliniek. Modifikovanou formou čínského lieku na liečenie koronárnych srdcových ochorení je Dan Shen tableta. Dan Shen tableta je veľká mastná guľa, ktorej priemer je často okolo jedného centimetra. Dan Shen tablety sú zhotovené z extraktu Radix Salviae Miltorrhizae, z prášku Panax Notoginseng a syntetického bomeolu, ktoré sú uvedené v čínskom liekopise od roku 1977 a desaťročia sa používali na liečenie kardiovaskulárnych chorôb.

Tu opísané Dan Shen pilulky (ďalej označované ako DSP), ktoré sú nazývané aj kardiotonickými pilulkami, sú novou generáciou čínskych liekov na koronárne srdcové choroby. Čínske liečivo sa skladá z rôznych byliniek, ktoré sa líšia od predpisu k predpisu v závislosti od druhu byliniek ako aj ich pomeru. Riadením kvality sa DSP dá vyrábať štandardným postupom. Liečebnými zložkami DSP je 10 - 30 % vo vode rozpustných extraktov z Radix Salviae Miltorrhizae, niekedy približne 20 %, 2 - 6 % vo vode rozpustných ex5

SK 288060 Β6 traktov z Panax Notoginseng a 1 - 3 % bomeolu. Ďalej, angínu rýchlo zmierňuje DSP vyrobený ako malá tabletka, ktorá sa rýchlo rozpúšťa pod jazykom, dodá sa rýchlo srdcovému svalu a silná angína sa zmierni.

Pri DSP sa predklinickými a klinickými štúdiami dokázalo, že je netoxický a účinný na prevenciu a liečenie kardiovaskulárnych chorôb spôsobených ischémiou koronárnej artérie. Predbežnými lekárskymi a klinickými skúškami sa zistila aj vyššia účinnosť DSP proti Dan Shen tabletám pri liečení koronárnych tepnových porúch.

DSP bol uvedený v dodatkovom vydaní čínskeho liekopisu v roku 1998, povolený je čínskym ministerstvom zdravotníctva, v Číne sa predáva od roku 1993 a užíva ho viac ako päť miliónov ľudí.

Použitá literatúra

1. Americký patent č. 5288485 „vazodilatačné činidlo“.

2. Americký patent č. 5433957 „vazodilatačné činidlo“

3. Americký patent č. 5776463 „Spôsob znižovania stresu a chorôb v cirkulácii srdca s výťažkom z extraktov zo zmrazených okvetných lístkov horáka“

4. Yang Gy a kolektív „Klinické štúdie na liečenie koronárnych srdcových chorôb s Valeriana officinalis varlatifolia“ Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14 (9): 540-2, 1994.

5. Wu Y, „Klinické štúdie Xintongkang tabliet na liečenie angíny pectoris pri koronárnej srdcovej chorobe“ Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10 (7):395-8, 1990.

6. Liu Ky a kolektív, „Klinické pozorovanie liečenia 45 pacientov s angínou pectoris pri koronárnej srdcovej chorobe s taponínom“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 15(11):649-51, 1995.

7. Hu Jx a kolektív, „Klinické a experimentálne štúdium shensao tongguan pián pri liečení angíny pectoris pri koronárnej srdcovej chorobe“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(10):596- 9, 1990.

8. Li Y a kolektív, „Vplyvy Kuon-guan granúl na zinok, meď a erytrocyty GSH-Px (glutation peroxidáza) v plazme pacientov s angínou pectoris“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(6):348-50,1990.

9. Wang B a kolektív, „406 prípadov angíny pectoris pri koronárnej srdcovej chorobe liečenej so saponínom Tribulus terrestris“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(2):85-7, 1990.

10. Jing C a kolektív, „Účinky Astragalus membranaceus na obsah sodíka v erytrocytoch a transport sodíka pri koronárnej srdcovej chorobe“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 11(11):651-3,1991.

11. Jiang Hw a kolektív, „Klinické štúdie liečenia qi-nedostatku a syndrómu zhlukovania krvi pri angíne pectoris s qi xue granulami“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 12(11):663-5,1992.

12. Wang XF a kolektív „Klinické pozorovanie výťažku wenxínu pri liečení 82 pacientov so spontánnou angínou pectoris“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(4):201-3, 1996.

13. Lei ZY a kolektív, „Vplyv Astragalus membranaceus na funkciu ľavej dutiny pri angíne pectoris“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(4): 199-202, 1994.

14. He W a kolektív, „Vplyv Kuo guán prášku na imunologické funkcie u pacientov s ben-xu biao-shi syndrómom pri ischemickej chorobe srdca“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(4):213-5, 1989.

15. Chen K a kolektív, „Klinické štúdium účinku shuxuening tabliet pri liečení koronárnej srdcovej choroby“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(1):24-6, 1996.

16. Zhang H a kolektív, „Klinické štúdie účinkov výťažku buyang huanwu na koronárnu srdcovú chorobu“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 15(4):213-5, 1995.

17. Zhang XL a kolektív, „Predbežné štúdie orálneho podávania kvapaliny z mže shu-χίη pri liečení angíny pectoris pri koronárnej srdcovej chorobe“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 12(7):414-6,1992.

18. Hu JX a kolektív, „Klinické a experimentálne štúdie shenshao tongguan pián na liečenie angíny pectoris koronárnej srdcovej chorobe“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih.

19. Zhun W a kolektív, „Štúdium ochranných účinkov danshenu v priebehu ischémie myokardu a reperfúzie: štúdia na izolovanom srdci potkana“, American Journal of Clinical Medicíne, 18(1-2): 19-24, 1990.

20. Li YY, „Klinické a experimentálne štúdium vplyvu xue mai tong na koronárnu srdcovú chorobu“ Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(2):79-81, 1989.

21. Cai PY a kolektív, „Klinické štúdium hehuantang pri liečení koronárnej srdcovej choroby“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 16(4):204-6,1996.

22. Lin QC, „Klinické štúdium guán mai le pri liečení koronárnej srdcovej choroby“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 9(5):280-2, 1989.

23. Li SQ a kolektív, „Klinické pozorovanie pri liečení ischemickej srdcovej choroby s Astragalus membranaceus“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 15(2):77-80, 1995.

24. Lu BJ a kolektív, „Vplyv sheng mai san na peroxidáciu tukov pri akútnych infarktoch myokardov pacientov“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(12):712-4,1994.

25. Wang S a kolektív, „Účinky Codonopsis pilosulae na syntézu tromboxánu A2 a prostacyklínu“, Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 10(7):391 -4,1990.

26. Guán M a kolektív, „Pozorovanie pri liečení koronárneho srdcového ochorenia s kuo guán qu yu ling“, Journal of Traditional Chinese Medicíne, 10(1):29-53,1990.

27. „Fufang Danshen Pián“ Pharmacopeia of the People's Republic of China. Anglické vydanie 1997. Zväzok 1,280.

28. Zhu HG, „Klinické štúdie xinkening pri liečení bezpríznakovej ischémie myokardu pri koronárnom srdcovom ochorení“, Chung Kuo Chung Hsi I Chieh Ho Tsa Chih, 14(4):213-5, 1994.

29. Chiang WT a kolektív, „Účinky „Danshensu“ a iných dvoch vo vode rozpustných zložiek šalvia miltiorrhiza na ischemickú chorobu srdca psa a na izolovanú koronárnu artériu prasaťa“, Acta Acad Med Prim Shanghai 1982;9:13-19.

30. Sun Xi-ming a kolektív, „Štúdie nových farmatologických vplyvov na anextrakt Danshen (Šalvia miltiorrhiza)“ Chin Med Herb 1991; 22:20-23.

31. Chen ZH a kolektív, „Štúdie účinkov „Danshen“ na experimentálne mikroobežné poruchy a koncentrácie plazmovej kyseliny mliečnej“, Acta Acad Med Prim Shanghai 1987; 14:25-29.

32. Huang C a kolektív, „Vplyv Panax Notoginseng Saponínov na ischémiu myokardu a na reperfuzne poškodenie pri králikoch pri vedomí“, Chin Bull Pharmacol 1991; 7:190-3.

33. Shi Let a kolektív, „Účinky celkových saponínov Panaxu Notoginseng na zvyšovanie PGI2 v karotickej tepne a zmenšovanie TXA2 v krvných doštičkách“ Acta Pharmol Sin 1990; 11:29-32.

34. Xu W a kolektív, „Účinky mentolu a bomeolu na distribúciu sulfadiazínu sodíka a Evansovej modrej v mozgu potkana a myši“, Pharmacol Chin Med Clin 1995; (6)31-33.

35. Chen TF a kolektív, „Zlepšenie absorpcie tetrametylpyrazínu syntetickým bomeolom“, Acta Pharmacol Sin 1990; 11:42-44.

36. Li X a kolektív, „Experimentálne ochranné účinky Panax Notoginseng saponínov na experimentálne poškodenie myokardu vyvolané ischémiou a reperfuziou v potkanoch“, Acta Pharmacol Sin 1990, 11:26-29.

37. Pan JG a kolektív, „Chemické štúdie esenciálnych olejov zo šiestich druhov Artemisia“, Chin J Chin Mater Med 1992; 17:741-6.

38. Wu YZ a kolektív „Vyhodnotenie Radix Silviae Miltiorrhizae pri podpore krvného obehu odstraňovaním zhlukovania krvi“ Aktá Nanjing Univ Trad Chin Mater Med 1995; 11:35-6.

39. Wang NS a kolektív, „Experimentálne štúdie „Benifits of Bomeol as an Assistant or guide“, J Trad Chin Med 1994; 35:46-7.

40. Li CZ a kolektív, „Anti-koagulačný účinok Radix Silviae Miltiorrhizae“ Chin J lntegr Med 1983; 3:297-9.

41. Li CZ a kolektív, „Experimentálne štúdie trombotického inhibičného účinku Radix Salviae Miltiorrhizae“ Aktá Acad Med Prim Shanghai 1979; 6:145-9.

42. Mo QX a kolektív, „Dynamika 3H-Bomeolu“ Propriet Trad Chin Med Res 1982; 8:5-7.

43. Zheng RX a kolektív „Ochranný účinok Radix Silviae Miltiorrhizae na ischémiu myokardu indukovanú podviazaním koronárnej tepny u myší“ Chin J Intergr Med 1992; 12:424-6.

Podstata vynálezu

Predkladaný vynález sa týka spôsobu prípravy Dan Shen piluliek na liečenie chronickej stabilnej angíny pectoris, ktorý zahŕňa kroky:

(a) oddelenej extrakcie Radix Salviae Miltorrhizae, Panax Notoginseng refluxom v horúcej vode a oddelenej filtrácie;

(b) oddelenej koncentrácie filtrátov;

(c) oddeleného prečistenia koncentrátov s použitím živicových kolón a koncentrácie, a získania prečisteného vo vode rozpustného extraktu Radix Salviae Miltorrhizae a prečisteného vo vode rozpustného extraktu Panax Notoginseng, zmiešania prečistených vo vode rozpustných extraktov z kroku c) s príslušným množstvom bomeolu.

Opísaná Dan Shen pilulka (DSP) je novou generáciou čínskej medicíny na liečenie koronárnych srdcových chorôb, ktorá je vyrábaná ako štandardizovaná formulácia. DSP obsahuje štandardné množstvo extraktu Panax Notoginseng, extraktu Radix Salviae Miltorrhizae a bomeolu.

Panax Notoginseng zmierňuje a predchádza angíne. Radix Salviae Miltorrhizae zabraňuje aktivácii krvných doštičiek, predchádza koronárnej trombóze a tak zvyšuje cirkuláciu krvi. Bomeol sa pridáva na účinný prenos terapeutických zložiek do myokardu.

DSP sa vyrába ako malá tabletka, približne 25 mg, ktorá sa hneď rozpustí pri sublingválnom podaní, čím sa dosahuje rýchlo liečebný efekt. V predklinických a klinických štúdiách sa dokázalo, že DSP účinne zmierňuje a predchádza angíne.

Vynález opisuje aj kvapkacie zariadenie, ktorým sa vyrába DSP alebo iné malé tabletky.

Vynález ďalej opisuje aj metódu kontrolovania kvality liečiv identifikáciou a kvantifikáciou liečebných zložiek v lieku použitím analytických techník, takých ako je chromatografia na tenkej vrstve, vysoko účinná kvapalinová chromatografia atď.

Podrobný opis vynálezu

Spôsob podľa vynálezu je bližšie charakterizovaný nasledovne:

(1) extrakcia vo vode rozpustných zložiek Panax Notoginseng zahŕňa nasledujúce kroky:

(a) rozdrobenie rastlín s 5 až 7-násobným množstvom vody, (b) extrakciu vo vode rozpustných zložiek Panax Notoginseng varením v nádobe pri tlaku vzduchu medzi 0,04 až 0,06 mPa počas 2 hodín, (c) opakovanie extrakcie za tých istých podmienok počas 1,5-hodiny, (d) filtráciu extraktu na site s veľkosťou ôk 150 pm, (e) prečistenie filtrátu s použitím makropórovitej adsorpčnej živice elúciou s etanolom, (f) koncentrácie eluovaných extraktov za zníženého tlaku od 0,04 do 0,06 mPa a za vákua od - 0,076 do - 0,088 mPa na hustotu 1,33 až 1,35.

(2) Extrakcia vo vode rozpustných zložiek Radix Salviae Miltorrhizae zahŕňa nasledujúce kroky:

(a) rozdrobenie rastlín s 5 až 7-násobným množstvom vody, (b) extrakciu vo vode rozpustných zložiek Radix Salviae Miltorrhizae varením v nádobe pri tlaku medzi 0,04 až 0,06 mPa počas 2 hodín, (c) opakovanie extrakcie za tých istých podmienok počas 1,5-hodiny, (d) filtráciu extraktu na site s veľkosťou ôk 150 pm, (e) koncentráciu filtrátov za zníženého tlaku s tlakom vo vákuu -0,076 až -0,088 mPa, kým sa z 1 kg rastliny nezíska 1 liter, (f) precipitáciu koncentrátov s etanolom, (g) filtráciu etanolového roztoku precipitátov cez sito s veľkosťou ôk 150 pm, (h) koncentráciu filtrátov za zníženého tlaku od 0,04 do 0,06 mPa a za tlaku vo vákuu - 0,076 až -0,088 mPa, (i) prečistenie koncentrátov polyamidovou chromatografiou elúciou s etanolom, (j) koncentráciu prečistených extraktov na hustotu 1,33 až 1,35, (3) a ďalej zahŕňa výrobu piluliek pozostávajúcu z nasledujúcich krokov:

(a) zmiešanie extraktov Panax Notoginseng, extraktov Radix Salviae Miltorrhizae, syntetického bomeolu a polyetylénglykolu 6000 v pomere 4,0 : 20,6 : 1,9 : 79,5, (b) roztopenie zmesi, (c) spracovanie roztopenej zmesi na pilulky s použitím odkvapkávacieho zariadenia s nasledujúcimi charakteristikami: konštantná teplota odkvapkávacieho hrnca 89 až 93 °C, chladiaci roztok je tekutý parafín s teplotou nižšou než 8 °C, vnútorný priemer odkvapkávacej hlavice je 1,8 mm, vonkajší priemer odkvapkávacej hlavice je 2,4 mm, vzdialenosť medzi odkvapkávacou hlavicou a povrchom chladiaceho roztoku je 15 cm, centrifugácia piluliek pri 800 až 1100 ot./min. na odstránenie olejov.

Vynález opisuje zloženie Dan Shen piluliek (DSP) obsahujúcich:

(a) [vodorozpustné] extrakty z Radix Salviae Miltorrhizae, [vodorozpustné] extrakty z Panax Notoginsengu a [syntetický] bomeol, (b) Radix Salviae Miltorrhizae, Notoginseng, bomeol a nosiče a (c) Radix Salviae Miltorrhizae, Panax Notoginseng, bomeol a farmaceutické nosiče.

V uvedenej podobe sa používal v Číne liek z Radix Salviae Miltorrhizae a Panax Notoginseng na liečenie koronárnych srdcových chorôb od roku 200 nášho letopočtu. Panax Notoginseng bol používaný na liečenie angíny a Radix Salviae Miltorrhizae sa používal na podpora cirkulácie krvi. Bomeol zabezpečuje rýchly prísun terapeutického komponentu k cieľovému orgánu. Keďže prírodný bomeol sa v Číne používal od roku 600 nášho letopočtu. Prírodný bomeol už takmer neexisuje, DSP obsahuje syntetický bomeol.

DSP sa podľa vynálezu používa na:

(a) liečenie koronárnych srdcových chorôb, (b) liečenie koronárnych srdcových chorôb spoločne s inými liekmi, (c) na primárnu prevenciu koronárnych srdcových chorôb, (d) na primárnu prevenciu koronárnych srdcových chorôb spoločne s inými liekmi, (e) sekundárnu prevenciu koronárnych srdcových chorôb, (f) sekundárnu prevenciu koronárnych srdcových chorôb spoločne s inými liekmi, (g) znižovanie dávok nitrátov u pacientov s angínou, (h) redukovanie hladiny cholesterolu.

Uvedený DSP je indikovaný na koronárne aterosklerotické ochorenie, ako je, nie je to však limitované, na zmiernenie angíny pectoris, zabránenie angíne pectoris vyvolanej námahou a stresom a zvýšenie cirkulácie krvi znižovaním zhlukovania krvných doštičiek, čím zabraňuje vzniku zrazeniny krvi v cieve. DSP sa môže použiť na zníženie dávok nitroglycerínu, ktorý sa často aplikuje na zmiernenie a zabránenie angíny. DSP sa tiež môže používať na zníženie hladiny cholesterolu v plazme a tým sa môže zabrániť vzniku nového atero8

SK 288060 Β6 sklerotického ochorenia. Ateroskleróza je často iniciovaná pruhom cholesterolu usadeným na stenách ciev.

Vynález uvádza spôsob kontroly kvality lieku štandardizovaním zloženia a koncentrácie účinných látok v lieku analýzou a identifikovaním účinných zložiek použitím analytických techník, ktoré zahŕňajú tieto kroky:

(a) frakcionáciu liečiva použitím analytických techník a (b) identifikáciu a stanovenie množstva účinných látok porovnaním s analytickou vzorkou relevantných čistých látok ako štandardu.

V uskutočnení uvedeného vynálezu sú príkladmi analytických techník chromatografia na tenkej vrstve, vysokoúčinná kvapalinová chromatografia a iné. Vyčistený štandard terapeutických zložiek je väčšina identifikovaných aktívnych zložiek lieku. Napríklad čistým štandardom aktívnych zložiek pre DSP, ale nie je to obmedzené, sú saponíny, fenolické kyseliny také ako Danshensu, bomeol a ďalšie. Aktívne zložky v DSP sú identifikované porovnaním polôh DSP frakcií prostredníctvom retenčného času vo vysoko účinnej kvapalinovej chromatografii alebo polohy a farby DSP frakcií v chromatogarfii s tenkou vrstvou, a tak ďalej, s charakteristikami čistých štandardov. Kvantita aktívnych zložiek DSP je vyjadrená porovnaním veľkosti aktívnych frakcií DSP s veľkosťou hodnôt známych množstiev štandardov. Napríklad, množstvo saponínu obsiahnutého v DSP je zistené porovnaním s kalibračnou krivkou známeho množstva čistého saponínu.

V ďalšom vyhotovení podľa vynálezu DSP obsahuje 5-40 % vo vode rozpustnej kyseliny fenolovej z Radix Salviae Miltorrhizae, 1 - 10 % vo vode rozpustného saponínu z Panax Notoginseng a 1 - 3 % bomeolu.

V inom vyhotovení podľa vynálezu DSP obsahuje 10 - 30 % vo vode rozpustnej kyseliny fenolovej z Radix Salviae Miltorrhizae, 2 - 6 % vo vode rozpustného saponínu z Panax Notoginseng a 1 - 3 % bomeolu.

Vynález opisuje aj kvapkacie zariadenie na výrobu tabletiek malých veľkostí, ktoré sa ľahko rozpúšťajú hneď po použití, a teda sa ľahko dopravia do orgánov, ktoré pozostáva z nasledujúcich častí:

(a) (kvapkacej nádoby) (kvapkacích nádob), v ktorých sa rozsah teplôt pohybuje v rozmedzí (60 - 100) (výhodne medzi 89 - 93 °C), (b) chladiaceho roztoku tekutého parafínu, ktorého teplota je nižšia než 8 °C, (c) kvapkacej hlavice s 1,8 mm vnútorným priemerom a 2,35 mm vonkajším priemerom, (d) vzdialenosť kvapkacej hlavice od povrchu chladiaceho roztoku je približne 15 m.

Uskutočnením tohto vynálezu je aj použitie tohto zariadenia na výrobu tabletiek malých veľkostí, ktoré sa rýchlo rozpúšťajú hneď po podaní.

V ďalšom uskutočnení vynálezu je velkosť malých tabletiek:

(a) 0,33 - 0,34 cm v priemere, (b) 21,25 - 28,75 mg v hmotnosti a (c) 1,13 - 1,40 mg/mm³ v hustote.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Obrázok č. 1 Várka č.: 19990806.

Obrázok č. 2 Várka č.: 19990815.

Obrázok č. 3 Várka č.: 19990823.

Poloha vrcholov na diagramoch: Skupina I pozostáva z vrcholov 1 a 2 (retenčná doba je v rozsahu od 7 do 15 minút). Skupina II pozostáva z vrcholov 3 a 4 (retenčná doba je v rozsahu od 15 do 20 minút). Skupina III pozostáva z vrcholov 5, 6, 7 a 8 (retenčná doba je v rozsahu od 20 do 40 minút). Z celkového pohľadu početnosť vrcholov v skupine I je najväčšia a výška vrcholu 1 je skoro rovnaká ako výška vrcholu 2. Vrcholy v skupine II stoja jeden vedľa druhého, majú skoro rovnakú výšku a početnosť je veľmi malá. Skupina III sa skladá zo štyroch vrcholov a ich výška sa postupne zvyšuje. Tieto tri skupiny predstavujú diagramy zlúčeniny Danshen Dripping piluliek.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Výroba Dan Shen piluliek (DSP)

DSP je malá tabletka približne 25 mg, obsahujúca ako účinné zložky vo vode rozpustné extrakty z Notoginseng, vo vode rozpustné extrakty zo Salviae a syntetický bomeol.

Pri výrobe DSP, Notoginseng a Salviae sú oddelene extrahované horúcou vodou v cirkulačných systémoch a filtrované. Filtráty sa kondenzujú za zníženého tlaku, filtrujú sa a zrážajú. Koncentráty sa čistia použitím živicových kolón a zahusťujú sa za nízkeho tlaku. Týmto spôsobom získané vyčistené vo vode rozpustné extrakty sa miešajú so syntetickým bomeolom a farmaceutickými nosičmi. Zo zmesi sa vyrábajú malé pilulky na špeciálnom kvapkacom zariadení. Kvalita DSP je kontrolovaná štandardizovaním množstva ako aj pomeru ich hlavných terapeutických zložiek Saponon, kyselina fenolová, ako je Danshensu, a bomeol. Na identifikovanie a vyjadrenie množstva účinných zložiek v DSP sa používa chromatografia na tenkej vrstve,

SK 288060 Β6 vysoko účinná kvapalinová chromatografie, metóda odtlačkov a iné analytické techniky.

Výroba DSP

1. Extrakcia vo vode rozpustných zložiek Panax Notoginseng:

(a) luhovanie byliniek s 5 - 7-násobným množstvom vody, (b) extrakcia zložiek rozpustných vo vode z Panax Notoginseng varom pod tlakom v nádrži pri 0,04 - 0,06 mPa počas dvoch hodín, (c) opakovanie extrakcie počas 1,5-hodiny za rovnakých podmienok, (d) filtrovanie extraktu na site s otvormi 150 pm (100-mesh), (e) čistenie filtrátu použitím makropórovitej adsorpčnej živice eluovaním s etanolom, (f) zahustenie eluovaného extraktu za zníženého tlaku pri 0,04 - 0,06 mPa a za vákua pri -0,076 - -0,088 mPa do hustoty 1,33 - 1,35.

2. Extrakcia vo vode rozpustných zložiek z Radix Salviae Miltorrhizae:

(a) luhovanie byliniek s 5 - 7-násobným množstvom vody, (b) extrakcia zložiek rozpustných vo vode z Radix Salviae Miltorrhizae varom pod tlakom v nádrži pri tlaku 0,04 - 0,06 mPa počas dvoch hodín, (c) opakovanie extrakcie počas 1,5-hodiny za rovnakých podmienok, (d) filtrovanie extraktu na site s otvormi 150 pm, (e) zahustenie filtrátu za vákua pri tlaku -0,076 - -0,088 mPa dovtedy, kým sa z jedného kilogramu počatočných bylín nezíska jeden liter, (f) vyzrážanie koncentrátu s etanolom, (g) filtrácia roztoku zrazeniny vyzrážanej etanolom cez sito s otvormi 150 pm, (h) zahustenie filtrátu za zníženého tlaku pri 0,04 - 0,06 mPa a za vákua pri -0,076 - -0,088 mPa, (i) čistenie koncentrátov chromatografiou na polyamide prepieraním s etanolom, (j) zahustenie prečistených extraktov na hustotu 1,33 - 1,35.

3. Výroba DSP (a) Extrakty Panax Notoginseng, extrakty Radix Salviae Milthorrhizae, syntetický bomeol a polyetylén glykol 6000 sa zmiešajú v pomere 4,0 : 20,6: 1,9 : 79,5.

(b) Zmes sa roztaví.

(c) Roztavená zmes sa spracuje na DSP použitím kvapkacieho zariadenia za nasledovných podmienok: teplota v odkvapkávacej nádoba je konštantné 89 - 93 °C, teplota chladiaceho roztoku kvapalného parafínu je pod 8 °C, vnútorný priemer odkvapkávacej hlavice je 1,8 mm, vonkajší priemer odkvapkávacej hlavice je 2,4 mm, vzdialenosť medzi odkvapkávacou hlavicou a povrchom chladiaceho roztoku je 15 cm.

(d) Olej sa odstráni odstredením tabletiek pri 800 - 1100 rpm za 15 minút.

Kontrola kvality DSP

V DSP boli identifikované ako účinné liečebné zlúčeniny protokatechový aldehyd a saponín ako aj rôzne iné zložky. Obsah týchto zlúčenín v rastlinách je veľmi rozdielny. Na štandardizáciu obsahu liečebných zložiek v DSP a súčasne na kontrolu kvality DSP spôsob bol vyvinutý spôsob identifikácie a kvantifikácie účinných látok v lieku. Príklad tohto postupu zahrnuje:

(a) rozpustenie 30 DSP v 3 ml metanolu a pôsobenie ultrazvuku v priebehu 10 minút, (b) odstreďovanie v priebehu 5 minút, (c) frakcionáciu kalu použitím štandardnej analytickej techniky, ako je chromatografia na tenkej vrstve, vysoko účinná kvapalná chromatografia a podobne, (d) identifikáciu liečebných zložiek v DSP, takých ako Sodium Danshensu, protokatechový aldehyd, saponín atď. porovnaním rozmerov a farieb frakcií DSP s príslušnými čistými štandardami, (e) identifikáciu a stanovenie množstva terapeutických komponentov v DSP porovnaním polohy, veľkosti a farby frakcií DSP s polohou, veľkosťou a farbou čistých štandardov, (f) identifikovanie terapeutických komponentov v DSP porovnaním s relatívnym retenčným časom a relatívnou plochou vrcholov v štandardnej vzorke.

Identifikácia DSP s TLC:

Metóda identifikácie Sodium Danshensu a protokatechového aldehydu v rastlinnej kompozícii schopnej liečiť chronickú stabilnú angínu pectoris chromatografiou na tenkej vrstve zahrnuje tieto kroky:

(a) Prípravu vzorky nasledovným postupom:

i. 30 tabliet uvedeného zloženia sa rozpustí v 3 ml metylalkoholu za 10 minútového pôsobenia ultrazvuku za vzniku roztoku, ii. 5 minútová centrifúgácia roztoku a zozbieranie supematantu, iii. kontaktovanie 10 μΐ roztoku s kremičitou gélovou doštičkou obsahujúcou 0,5 % CMC-Na, iv. uvedenie vytvorenej doštičky do styku s vytvoreným roztokom chloroformu, acetónu a kyseliny mrav10

SK 288060 Β6 čej v pomere 10:4: 1,6,

v. vysušenie a fumigácia doštičky s amoniakom a položenie doštičky na 15 minút smerom nahor, vi. skontrolovanie doštičky pod ultrafialovým svetlom, škvrna znázorňujúca zloženie reprezentujúcej vzorky by mala zodpovedať polohe a farbe štandardnej vzorky.

(b) Použitie Sodium Danshensu a protokatechového aldehydu ako štandardov.

Metóda identifikácie gypenosidu z rastlinnej kompozície schopnej liečiť chronickú stabilnú angínu pectoris chromatografiou na tenkej vrstve zahŕňa tieto kroky:

(a) príprava vzorky zahŕňa kroky:

(i) 30 tabliet uvedeného zloženia sa rozpustí v 5 ml amoniaku za pôsobenia ultrazvuku za vzniku roztoku, (ii) adsorpciu získaného roztoku na makropórovitej živicovej kolóne, rýchlosť je 0,5/minútu, (iii) po premytí kolóny makropórovitej adsorpčnej živice s 20 ml destilovanej vody, kolóna makropórovitej adsorpčnej živice sa vymýva s 2 ml metanolového roztoku, (iv) zozbieranie eluentov, (v) kontaktovanie 10 μΐ uvedeného eluentu s doštičkou zo silikónového gélu obsahujúcou 0,5 % CMCNa, (vi) čistenie vytvorenej platničky s 10 ml roztoku získaného zo spodnej vrstvy roztoku chloroformu, acetónu a vody v pomere 6:3: 1 za 2 hodiny pri 10 °C, (vii) vysušenie a osprej ovanie s 10 % etanolsulfátom a vypaľovanie doštičky pri 105 °C niekoľko minút, (viii) skontrolovanie doštičky pod normálnym svetlom, škvrna zodpovedajúca uvedenému zloženiu by mala zodpovedať rovnakej polohe a farbe štandardu, (b) použitie celkového gypenozidu, saponínu R1 a ginsenozidu Rgl ako štandardov.

Diagramy kardiotonických tabliet

1. Zhotovenie diagramov (1) Chromatografický systém a systém vhodnosti

Alkyl silán spájajúci siliko-18 bol použitý ako stacionárna fáza a zmes A a B ako mobilná fáza. A bol metanol a B bola zmes voda-N,N-dimetyl-formamid-ľadová kyselina octová (100 : 45 : 4). Koncentrácia A sa menila od 5 % do 30 % s časom gradientovej elúcie od 0 do 25 minút. Detekčná vlnová dĺžka bola stanovená pri 281 nm. Počet teoretických priehradiek kolóny nebol menší ako 2000, keď sa počítalo s píkom Danshensu.

(2) Aparatúra a činidlá

Chromatograf: HP 1100 kvapalinový chromatograf

Detektor: HP VWD priechodový ultrafialový detektor

Kolóna: Alltech Company, Alltima 5u, 250x4,6 mm, ODS kolóna

Predradená kolóna: Autech Company, Alltima C_[8 5u predradená kolóna

Teplota kolóny: 30 °C (3) Zhotovenie kontrolnej vzorky

Kyselina šalviová B, Danshensu a protokatechový aldehyd sa jednotlivo rozpustili v metanole na prípravu troch kontrolných roztokov, v ktorých každý ml obsahoval 50 pg, 40 pg a 10 pg príslušnej látky.

(4) Príprava testovacej vzorky kusov kardiotonických piluliek sa vložilo do 25 ml odmemej nádoby, pridalo sa 20 ml metanolu a zmes sa ponechala 20 minút pod vplyvom ultrazvuku, potom sa schladila, zriedila sa s metanolom až po risku odmemej nádoby, odstredila sa a supematant sa zobral ako testovací roztok.

(5) Postup

Presne 10 pl z každého kontrolného roztoku a testovacieho roztoku sa injektovalo do kolóny, zaznamenaný bol chromatografický diagram a vypočítaný bol obsah.

2. Diagramy rôznych šarží kardiotonických piluliek.

Dvadsať šarží vzoriek kardiotonických tabliet bolo skúšaných opísanou metódou. Štatistické údaje sú uvedené v tabuľke 1, tabuľke 2 a tabuľke 3. Tieto údaje ukazujú, že kardiotonické tabletky majú špecifické vlastné diagramy obsahujúce osem spoločných vrcholov, čiže tieto vrcholy by mali byť súčasne v každej šarži DSP. Ak sa zoberie vrchol protokatechového aldehydu ako referenčný vrchol, ktorého retenčný čas je 1, priemerné hodnoty relatívnych retenčných časov ôsmich vrcholov boli 0,672, 1,000, 1,417, 1,512, 2,016, 2,235, 2,407, 2,757. Hodnoty relatívnych retenčných časov a relatívnych plôch ôsmich vrcholov boli veľmi stabilné, a medzi ôsmimi spoločnými vrcholmi, vrchol číslo 1 bol Danshensu, vrchol číslo 2 bol protokatechový aldehyd a vrchol číslo 7 bola kyselina šalviová B, a pomer relatívnych plôch bol 0,476 - 0,668 : 1 : : 0,391 -0,641.

Diagramy troch šarží kardiotonických tabliet sú znázornené na obrázkoch 1 až 3.

Priemerná 8,289 0,672 12,343 1,000 17,493 1,417 18,664 1,512 24,883 2,016 27,586 2,235 29,714 2,407 34,030 2,757 hodnota

KÍKíKít4K»KíKífc4 ‘ ggg

M H M M o e o so Ό ~

ÔÔÔOÔÔÔO O ©Í S S 09000000 O O *- h- h- bn h u h m © OKÍKÍO^KÍOKÍ M © © N O N Os ©\ CA M 9 Os

o w ω oooooooo oooooooooooooeeoo k wk wkk kk k> n>k>is>k> k> K> w k» w MOO^MMMCA 9099099900 M W W Λ _ __2£

Kí CA 04 -4

M ©

ua<

s

S.®

2.2. ŕ? g*

09000000

4 4 4 4 4 4 4^ o o o o o o o o —1—l-J—1-4—1—1^ oooooooo oooooooooooo

4 4 4 4^ 4 4 4 4_ 4 4 4_

O O O O O o o o o o o o ^4^4-4-4^4-4^4^4^4^-4^ MKÍKÍKÍKÍKÍKÍKÍKÍKÍOO

KÍKÍKÍKÍKÍKÍKÍKÍ NMNNNNWWN^MN

L* L» 1» t* L* L* L» 1*> ú* I*> Ú* L» L» £ 1*» L* t* 1* tUl » 'Jl A 71 £ Λ n uiu^^mwStitiuoí· «-«σιΊΟΜ'β'β WMO->0-4<kNeaeT1H

B

O f

8* 3 5

M J* S,

S b % ?

^s á g<g>

ee »» r* 13 SP I š o

B*

O

P*

M —4 —J —4 —4 —J —1 -4 —J -4-4—1-4—4—1-4—4—4—4—4—4

44444444 444444444444

71717« ΙΛ Λ 71 A ΙΛΤ1 £ I» S> WXMWTJWMe MOOO-ll-i94kUl9Giei A-JTíhiCTiMN 0iWOW-IW^-eWMl-tJ fg

Kí a 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4. 4_ 4_ 4 4_

A A A A A A A AAAAAAAAAAA. 1-6 O Mk μ-k b- x-k Kí H6 X* H* Kí x* Kí Kí x* Uí Cjí

A O Kí x* x^ x- ©©OOM»©x1mmXWm

99099990 oooooooooooo

44444 444 4 4 4 4 «* 4 4 s* 4 4 4 4 (Α»7ΐΐΛ»σι»9ι β\βι»»»»σι-»-ΐσι-Ι« «Ο ΤίΛ Λ H e Μβ aseiTljik-l-IWW-JS' -ITJM-IHO»» -Jfcieoww-J-J'ew'e tntnlnlntnXntnmlntn tnl/iln υι tn ln ln ln ln ln oooooooo *- ι—. ι-* >»* *- —» ι-* *- ι-» ι-- t-» S* »0071»-)4Μ4 7JWUt-INAWÍi-)7l',Ak

4t -U

4

-4 00 £ O 9> -4

K> k>

S

U

K4 Κ»

2

Κ»

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Ab

Ab

A

A

A

A

A

A

y*

CA

CA

M tj

kj

kj

O O

O

00

O

O

O

O

^0

's©

o

3

1©

(A

o

o

A- O

o

o

O

O

CA

O

O

©s

o

C4

-4

Ak (A

o

w o

M

•*4

14

Kí

hí

O

Uí

O

CA

A

hí

Κ» M

M

t4

M M

J4

Kí

|4

K>

Kí

Kí

J4

Kí

Kí

J4

Kí

g š

O

g

O O

O

O

O

o

O

o

O

o

O

O

O

XA )wfc

1-6

h*

M*

h*

x*

M*

Kí

Kí

Kí

C4

W tA

•*4

o

M *4

(A

<A

(A

o

O

*4

*4

CA

Ό

O

K> M

M

w

M K>

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

*4 <»

•*4

M

*4 *4

•4

*4

*4

*4

«4

<4

•4

M

S

*4

*4

44444444 -4-41414-4-4 4_ M> -4-4-4-4

Λ 71 A A A A 7171 (Λ (Λ <A ln ln O O- O- -4 —1 -4 96

S O

CA

í5

o w

Uí ©s A

o

©í

ä S©

o A

*4

δ o

2

©s H*

CA

A Kí

o 04

o CA

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

Kí

M K. 14 14 1J 1» K> M k> k> M 1-» Κ» M k, 1j K. Íj Íl Ι-»

......................ω U 7) W W -U A, 71 71

BlBl-JB-4.fc.99W τι ω τι λ

999

Kí	Kí	Kí	04 04	04	04
ω	CA	*4	O CA	A	CA	S
Kí	Kí	Kí	Kí Kí	Kí	Kí	Kí
o	o	o	SO	O	X©	o
Ia	Ta	4 CA	©\O	M	4	4 >•4
Kí	CA	*4	>-6 A	04	Kí	O
A	04	Kí	04 A	O		O
Kí	Kí	Kí	Kí Kí	Kí	Kí	Kí

-4 -4 4 9 -β 9 <4 4 4 4 4 «4

-4-4-4-4 W N ¢. A -J M -I W oe Q£ oo . -β fc 71 -I Ol

WNMUNWMNNNW tí w tí tí tí w tí fc fcfcfcfcfcfcfcfcfcfcfcfc 440044990 9091-11-1 i_. m —i — M fc W OM9MWUIQ0fc -1-0 -) O - - © W 'O 71 N 71

WWWWWWWW WWWWWWWWWWWW WfcWWWWfcfc fcfcfcfcfcfc.fc.fcfcfc.fc.fc >4444444 444 4_ 4_ 4 4_ 4_ 4 4 4_ 4

49499909 0000®®®®*“**©>-* *SW--4i-l-« »ΜβΜΗΐ-*«-Ι7ΐ0ί-Ο >- >— M 00 fc W Η» -1 BiBi-lB1fc-l®etnSiS>

NMNMMMWM NNMWMNNNNIslŕJN

44444444 444444444444

7lUlUlUlUiyiCÄVlO\>ÍMO\ 999-19**Ας»ί 99OM9*4©sOO^x--4 nt

B,

8* 3 S “ s S’ a fX 9 * X

Sä

B *<.

g*g g U M 8* SP ?jg

H

M

o.

S

M»

S* 3 £ “Ii

M

8* S* <· Ä n s fX

B

S £ ä

3* S

M X rn s

«<» f 1 g í|

B

B f*

W

O í* <

ä ©

f*

CA fX ©\ ©

P* o

s?

I

B ex

B '<.

«<

S o

&

S ť>

w<

B

JOBrSSSSSSSSSSSSS©©©©©©®©©© tn8—-O©©©9©©©©©®®^£— ©©2222 S“2e©ee®®®®2®'©©^®''®''®22225 ^eSBeeeee©©©©©*^-·— *— —* ® 2 ® S S e^S.S©4©®SSAWt4 — t4 — --©©©©oooooe w ui σ\ ftH e

6K

3«

Λ —

Λ1034,276 0,572 1817,065 1,000 376,547 0,208 328,011 0,181 486,626 0,267 525,432 0,289 940,963 0,516 1547,495 0,850

8,486 5,612 5,612 0,000 10,914 9,354 12,55311,003 18,59212,698 16,851 11,766 18,29212,061 14,739 8,647

1*4 o

o t-4 o

rt<

0000900000000 tn In In Ια 1a 9 Ια Ia tn tn In uj 9 © 96 © © 96 9 © 00 μμ μμ t-4 )— -1 © t-4 © © t-4 μμ «b OS © 1-4 6*4

1*41-> wu o o © e o e o e μμ^4μμμμμμμμμμμμμμμμμμμμμμ ©©©©©9©9©©©^tn ©6*4-46*49x-tň©*kh4©£9 © 9 oo 1-4 1*4 μμ © © 06 o 6*4 © © oeeeee©©o©©©2 ooo©e®oeee©©o

S® o © e e o ® §o © e e e © o o e o e o e e © e e e ©

6*46*46*46*4C*4At»4M (*4Α(Λ©©©ΙΛ9 A © 6*4 © © © -O ©

U Ια Κ» K> © O 00 © 6Ab*^2«g§é©S©S©e©©SS©©

6*4 «s t-4 —

W		w	6*4	A	6*4		A	6*4	.u
00	O	Ό	-4	6*4	(4	Í*	©	©	M
M	00	O	©	μμ	6*4	Ό	M	—	W
© Ul	K>	ts>	©	©	© (4	© 00	A	1©	'sO

6*46*46«46*4t)4b46*4t4A axNww^'J’Ow μ-1 <A 1-4 6*4 H* tA -U * 9

Íj tn m 1-» Ia ® © © X μμ μμ μμ © X o © © © © © © © © o © ©e©

O	M	©	SO	H*	©	t-4	t-4	A	-4
ςμ	M	-4	00	H-	A	©	-4	©	W
	M	t-4	Ki	K>	6*4	6*4	(*4	V	M
w	M	-4	00	so	t-4	μμ	(*4	A
j»»	M	tn		-4	©	4	A	-4	O
© M		© 0	I/l	© OS	A	© ©	© *-k	© ©	© VI
	£	o>	VI		tn	t-4	OS	©

© _ 9 (*4 — ______ — o o o o o o o o o o o o o o

0 O O © © © © O © © O © © ® © ® ® ,® Vj í·© bJ ©© ©© ©© ©© V)

0-400®©9©9©©©©©9©®®OOA ©©©tnt-4x-6*4A©©6*49©X- © © A 9 © (A

U tk U U

6*49tnAAtn®6Atn6A^*k-UA-tn6A (-)^006^^0 9-^^9^-4^10-526 _ — — t4 6A®^©ta©l-400©©>-AA©®e,

Ί4 1-41/4 1-* o 9 μ— 6Λ -j o 1-4 -«4 6*4 1*4 © t-4 tA a 1*4 2uÍu«©S8ÍôoSm£!±<m©©9©^w©

0©©0©0990©ββ0000©©© o © © © © © © © © ® ® ® ® ® ® ® 2 .2 J® .

S$ŠŠá6SCK2$ŔS83§5ÍSá&

a . 00 © tn 9 μ-k ©

6Λ 6Λ tn 6Λ S) μ (4 (-) β μβ

M o o

Ό *β ô S 2. B jf ^rt < I r

α *d f B ť!

BP »

H <3 β *B |b .0 Λ o ·

O «<

o fX

6*4 <

O ex <

e rt<

tn

Tabuľka 2: Plocha vrcholov & pomer plochy 20 šarží DSP

C >1 n

o fx t<4 tn a « 96 6*4 . 00 © 6*4 © © tn tn © ©

6*4 9 © -4 M © ooSoeoeeôe©©©©©®®® o © e © © e © © © ® ® ® ® ® ® 2 2 .2 'Ulrf'Ulj'U'U'U'Ulj'U'U'U'U'U'k'U νν © μ·* κ4(*4Κ4©44<ηκ4μμ©μ-μ>μμ- 9 A tn © tn g b4O©t-*©©ex— μ-- 9 μμ 06 9 © 9 Ia 9 j S»t40-4W90«02J007|WOS 4

6*4 © 14 N -4 ©

ÍS2

A 96 © © 1-4 1*4 a -J μμ 6*4

- xfl S B

S

S 96

S © μι» μ κι tn μμ t->

tn -u 9 tn © -4 © μοβ M 9 © 1*4 M

O t4 A 6*4 — 1-4 9 1-4 © O © ©

96 μμ © -4 9 ae © Kí ao © © © W © © © a tn 9 6*4 © © tn 9 -4 9 96 9

O 9 (A 9 -4 -4 oe © t-4 μμ tn tn μμ t-4 6*4 6*4 © W 1*4 1*4 1-4 m 1-4 1*4

S© © © © © o © © o © o o o © a a In In tn 9 9 μμ © μμ μμ >4 μμ μμ μμ μμ 6*4 ^2(4

S6A -4 -4 _

Α 9 -u tn t-4 Α -4 -4 © 6*4 © ©©©©©©© α -4 1λ © μμ © © © © © © © © ο ο ο ο ο © ο ο tn tn μμ

6*4 δ

Ο © Μ 9 © -4 © 4 Κ4 © Ο © t-> tn w © μμ ©©©©_© © _ Α -4 a Α μμ © t-4 Ο Α 6*4 t-4 Ο © © © © © © © © © © © © lnlnln*k

1-4 © © tn 9 t-4 -4 4 £2 Α μμ q »g ® š 2. B

S·

O <x

6*4 © tn 9 © tn

-4 t-4 μμ 6*4 © 9 © 06 « M A 06 © © © © © ©_

O μ* 4 06 4 O © O © © A © ©© © © © O © © ©

-4 -4 © tn w © μμ © o

O

0

0

e

0

©

©

0

O

9

0

©

0

© 00

© so

© «4

© ©

© ©

© ©

© ©

00

00

M

<1

M

so

0

SO

A

tn

9

©

VI

00

O

t-4

A

00

00

VI

tn

©

©

t-4

SO

1^

9

tn

0

o © o © © © © © 9 ©O © © -4 -4 υ «e o 8 2. B •t

O ©

fx ©

Tabuľka č. 3 Štatistické údaje ôsmich vrcholov odvodených z diagramov 20 šarží DSP

Vrchol č.	Retenčný čas	Relatívny retenčný čas	Vyjadrenie pravdepodob- nosti	Plocha	Pomer plochy	Rozmedzie pomeru plôch
1	8,289	0,672	100%	1034,276	0,572	0,572±0,096
2	12,343	1,000	100%	1817,065	1,000	l,000±0,000
3	17,493	1,417	100%	376,547	0,208	0,208±0,040
4	18,664	1,512	100%	328,011	0,181	0,181±0,059
5	24,883	2,016	100%	486,626	0,267	0,267±0,097
6	27,586	2,235	100%	525,432	0,289	0,289±0,052
7	29,714	2,407	100%	940,963	0,516	0,516±0,125
8	34,030	2,757	100%	1547,495	0,850	0,850±0,163

Kvantitatívna analýza Danshensu v DSP

Chromatografia a systémové prispôsobenie podmienkam, aparatúra a činidlá:

1. Zhotovenie diagramov (1) Parametre chromatografú a nastavenia systému.

Alkyl silán-spájajúci siliko-18 bol použitý ako náplň a vodaacetonitril-ľadová kyselina octová (87 : 12 : 1) ako mobilná fáza. Detekčná vlnová dĺžka je pri 281 nm. Počet teoretických priehradiek by nemal byť menší než 2500 vypočítaný z vrcholu Danshensu a stupeň separácie musí zodpovedať stanoveným požiadavkám.

(2) Aparatúra a činidlá

Chromatograf: HP 1100 kvapalný chromatograf.

Detektor: HP VWD-stĺpcový ultrafialový detektor.

Kolóna: Alltech Company 5u, 250 x 4,6 mm, ODS-Ci₈ kolóna.

Predradená kolóna: Alltech Company, Alltima Ci₈ 5u predradená kolóna.

Teplota kolóny: 30 °C.

Acetonitril: chromatograficky čistý, Tianjin Siyou Biomedical & Technical Co. Ltd. Ľadová kyselina octová: analyticky čistá, Tianjin Tianhe Reagent Company.

(3) Príprava kontrolnej vzorky

Ako kontrolná vzorka bolo použitých 25,0 mg šalviátu sodného a 5,0 mg protokatechového aldehydu: presne odvážené obe vzorky sa dali do 50 ml odmemých nádob. Na rozpustenie sa pridala mobilná fáza a roztok sa zriedil až po rysku na odmemej nádobe, dôkladne sa potriasli a uložili ako zásobný roztok. Presne odvážené malé množstvo kyseliny para-aminobenzoovej sa rozpustilo v množstve 0,2 mg/ml mobilnej fázy a bol zobraný ako vnútorný štandardný zásobný roztok. Napipetovalo sa náležité množstvo A šalviátu sodného, protokatechového aldehydu a vnútorného štandardného roztoku s presne odčítanými objemami, ktoré boli zriedené s mobilnou fázou na prípravu roztoku obsahujúceho 50 pg sodnej soli kyseliny šalviovej A, 10 pg protokatechového aldehydu a 80 pg para-aminobenzoovej kyseliny. Takto pripravený roztok sa považoval za kontrolný roztok.

(4) Zhotovenie skúšobnej vzorky.

kardiotonických tabliet a 1 ml vnútorného štandardného zásobného roztoku sa dalo do 25 ml odmemej nádoby, rozpustilo sa s mobilnou fázou a zriedilo sa s roztokom doplnením po rysku odmemej nádoby.

ml kontrolného a skúšobného roztoku sa jednotlivo vstreklo do chromografu a zaznamenali sa diagramy.

Príprava roztoku: presne odvážené množstvo 25,0 mg tanshinolu sodného sa dalo do odmerky, v ktorej sa mobilnou fázou rozpustil a zriedil doplnením po rysku odmerky. Obsah odmerky sa potriasol a udržiaval sa ako zásobný roztok. Presne odvážené množstvo kyseliny para-aminobenzoovej sa rozpustilo s mobilnou fázou na prípravu 0,2 mg/ml roztoku. Roztok sa udržiaval ako vnútorný štandardný zásobný roztok. Zobrali sa primerané dávky kontrolného zásobného roztoku a vnútorného štandardného zásobného roztoku a pripravil sa z nich kontrolný roztok obsahujúci 50 pg tanshinolu sodného a 80 pg kyseliny paraaminobenzoovej na mililiter.

Príprava testovacieho roztoku: 10 tabliet toho istého druhu a 1 ml vnútorného zásobného roztoku sa vložilo do 25 ml odmerky, rozpustilo sa doplnením po rysku odmerky a pripravil sa skúšobný roztok.

Zaznamenali sa samostatne diagramy 10 1 kontrolného roztoku a 10 1 skúšobného roztoku a spracovali sa výsledky.

Rastlinná kompozícia obsahujúca DSP by mala obsahovať 0,14 - 0,18 mg Danshensu na tabletku.

Kvantitatívna analýza Ginsenoside Rgl a Sanchinoside R1 v DSP (1) Chromatografický systém a vhodnosť systému

Alkyl silán spájajúci siliko-18 bol použitý ako stacionárna fáza a zmes vody a acetonítrilu ako mobilná fáza. Koncentrácia acetonítrilu bola 25 % od 0 do 15 minút a 35 % po 15 minútach. Rozprašovací plyn mal prietokovú rýchlosť 2,5 litra za minútu a teplota v prúdovej rúrke bola 93,8 °C. Počet teoretických priehradiek v kolóne nebol menší ako 5 000 po vypočítaní s vrcholom Ginsenoside Rgl.

(2) Aparatúra a činidlá

Chromatograf: Agilent 1100 kvapalný chromatograf.

Detektor: Alltech ELSD 2000 detektor (odparovací detektor rozptylu svetla).

Kolóna: Alltech Company 5u, 250 x 4,6mm, ODS-C₎₈ kolóna.

Predradená kolóna: Alltech Company, Alltima Ci₈ 5u predradená kolóna

Teplota kolóny: 30 °C.

(3) Príprava kontrolnej vzorky

Ginsenoside Rgl a Sanchinoside R1 sa separátne rozpustili v metanole na účely prípravy dvoch kontrolných roztokov, ktoré v každom ml obsahovali 0,98 mg, respektívne 0,25 mg látky.

(4) Príprava testovanej vzorky kardiotonických tabliet sa dalo do 5 ml odmerky, pridal sa 4 % amoniak až po rysku a roztok sa ponechal pôsobeniu ultrazvuku v priebehu 20 minút, roztok sa dá do pripravenej malej C₁₈ kolóny (STRATA C18- E od Phenomenex Company, 500 mg a 3cc trubica), vymyje sa 10 ml vody, eluát sa zahodí, potom sa vymyje 2 ml metylalkoholu, eluát sa vloží do odmerky a zriedi s metylalkoholom po rysku odmerky a zoberie sa ako skúšobný roztok.

(5) Postup

Vstrekne sa presne 10 pg z každého kontrolného roztoku a zo skúšobného roztoku do kolóny a zaznamená sa chromatograf a vyráta sa obsah.

(6) Výsledok

Vzorky kardiotonických tabliet z dvadsiatich šarží boli testované uvedenou metódou.

Štatistické údaje sú uvedené v tabuľke 4. V uvedenej tabuľke rastlinná kompozícia DSP obsahuje 0,401 % - 0,712 %, priemerne 0,550 % Sanchinoside R1 a 2,069 % - 4,044 %, priemerne 2,847 % Ginsenoside Rgl.

Tabuľka 4 Množstvá Sanchinoside R1 a Ginsenoside Rgl v DSP

Šarža č.	Sanchinoside R1 (pg/pilulku)	Ginsenoside Rgl (pg/pilulku)
20000106	17,22	80,93
20000216	16,92	80,78
20000323	15,16	70,76
20000406	13,65	62,51
20000422	14,24	68,72
20000513	15,27	71,16
20000606	14,86	68,21
20000726	14,59	72,35
20000728	14,25	57,37
20000804	15,30	70,55
Priemerná hodnota	15,15	70,33
RSD%	7,53	9,67
nie menej ako	12,12	56,26

Charakteristiky vyrobeného DSP sú nasledovné:

(a) DSP obsahuje b-3,4-dihydroxyfenyl kyselinu mliečnu, danshens sodný, saponín a bomeol, (b) na baktérie je negatívny: obsahuje menej než 1000 baktérií, (c) na plesne je negatívny: obsahuje menej než 100 plesní, (d) negatívny je na ťažké kovy: obsahuje menej než bezpečné hodnoty definované čínskou vládou, (e) skladovateľnosť je štyri roky pri teplote miestnosti.

SK 288060 Β6

Klinické štúdie DSP

Angína pectoris sa hodnotí históriou angíny, množstvom tuku v sére, elektrokardiografom (EKG), EKG po cvičení, scintiografickým posúdením ischémie, koronárnym angiografom atď. Po posúdení terapeutickej účinnosti využitím týchto koncových bodov sa preukázalo, že DSP je účinný na liečenie angíny pectoris.

DSP je účinný na angínu pectoris.

157 pacientov s koronárnou srdcovou chorobou bolo liečených s 10 DSP na t.i.d., orálnou aplikáciou v priebehu 4 týždňov. Posudzujúc frekvenciu, intenzitu a dĺžku trvania angíny, stiesnený pocit v hrudi a tlkot srdca symptómy zmizli alebo poľavili u 95,3 % pacientov.

DSP je účinnejší na zmierňovanie angíny pectoris ako Dan Shen tablety.

Dan Shen tablety sú ďalším čínskym liekom na liečenie angíny pectoris, ktoré sa v súčasnosti používajú v

Čine. Bola porovnaná účinnosť DSP a Dan Shen tabliet. Pacienti s koronárnou srdcovou chorobou boli náhodne rozdelení na dve skupiny. 107 pacientov bolo liečených s DSP a 50 bolo liečených Dan Shen tabletami. Porovnaním frekvencie opakovania záchvatov angíny a spotreby nitrátov sa zistilo, že DSP bol účinnejší ako Dan Shen tablety na liečenie angíny pectoris. Pozri tabuľku 5.

Tabuľka 5 Porovnanie DSP a Dan Shen tabliet

Počet pacientov Celkovo Reagujúcich

DSP ÍÔ7 102 (95,3 %)

Dan Shen tablety 50 38 (76 %)

Dokázalo sa, že DSP je účinnejší ako Dan Shen tablety. Účinnosť DSP bola porovnávaná aj s inými liek20 mi, ktoré sa aktuálne používajú na liečenie chronickej stabilnej angíny pectoris v USA.

Porovnanie DSP a nitroglycerínu

Nitroglycerín sa často používa na zmiernenie angíny. Bol porovnaný účinok DSP a nitroglycerínu pri zmiernení angíny. Pri záchvatoch angíny sa pacienti liečili buď DSP, alebo nitroglycerínom, a sledoval sa čas potrebný na zmiernenie angíny. DSP aj nitroglycerín zmierňujú angínu u pacientov počas 15 minút. Účinky DSP boli trošku nižšie ako účinky nitroglycerínu. Pozri tabuľka 6.

Tabuľka 6 Porovnanie DSP a nitroglycerínu # reagujúci pacienti v rozmedzí 1 - 5 minút 6-10 minút 11-15 minút

DSP Π 14 5

Nitroglycerín 17 12 1

Celkovo: 30 pacientov zo skupiny

DSP nemení tep

Údaje dokazujú, že DSP efektívne zmierňuje angínu. Skúmalo sa, či pri zmierňovaní angíny DSP zvyšuje tep. Tep srdca po liečení s DSP bol ekvivalentný s tepom srdca pred liečením, čo indikuje, že DSP zmierňuje angínu bez pôsobenia na tep srdca (tabuľka 7).

Tabuľka 7 DSP nepôsobí na tep srdca

Tep srdca _Pred liečením_Po liečení

DSP 84,3 ±23,1 82,8 ±22,8

Porovnanie účinnosti DSP s nitrátom izosorbid dinitrátom

Dokázané je, že DSP zmierňuje angínu tak účinne ako nitroglycerín. Skúmalo sa, či aj DSP môže pred40 chádzať angíne. Účinnosť DSP a nitrátu izosorbid dinitrátu bola porovnaná. Izosorbid dinitrát je nitrát s dlho trvajúcim účinkom, ktorý sa často používa na prevenciu chronickej stabilnej angíny pectoris v USA. Pacienti boli liečení buď s DSP trikrát denne orálnym podaním 10 piluliek, alebo s izosorbid dinitrátom trikrát denne orálnym podaním 10 mg. Sledovaná bola funkcia srdcového svalu a elektrokardiogram.

Funkcia srdcového svalu

Účinnosť DSP a nitrátov na funkciu srdcového svalu boli hodnotené meraním srdcového výkonu na úder (CO), objem úderu za minútu (SV), vypustenej krvnej frakcie (EF), frakcie skrátenej rýchlosti ľavej dutino16

SK 288060 Β6 vej krátkej osi (FS). DSP zlepšuje funkciu srdcového svalu účinnejšie než nitráty. Pozri tabuľka 8. Tabuľka 8 Vplyv DSP a nitrátov na funkciu srdcového svalu

	Pred-	DSP Po-	Izosorbid Pred-	dinitrát Po-
SV	75,38 ±8,32	83,45 ±9,11	74,96 ±8,44	79,47 ± 8,72
CO	5,61 ± 1,34	6,94 ± 1,36	6,54 ± 1,36	6,12 ± 1,41
EF	0,57 ± 0,02	0,79 ± 0,02	0,59 ± 0,03	0,70 ± 0,03
FS	17,14 ±3,4	16,69 ±3,6	17,32 ±3,1	18,46 ±4,2

Pred-: pred liečením Po-: po liečení

DSP zlepšuje EKG

ST-T účinná rýchlosť bola hodnotená pri evidencii frekvencie zmeny v ST-T segmente. DSP a izosorbid dinitrát značne znížili frekvenciu zmien v ST-T. Ale DSP bol účinnejší. Pozri tabuľku 9.

Tabuľka 9 Porovnanie vplyvu DSP a nitrátu na EKG

Frekvencia ST-T zmien Pred liečením Po liečení

ĎŠP Ϊ31 35 izosorbid dinitrát 129 42

Porovnanie DSP a aspirínu na zníženie zhlukovania krvi

Krvácanie v aterosklerotických Iéziách indukuje aktiváciu krvných doštičiek. Koronárne trombózy a nahromadenia krvi majú za následok oslabenie obehu krvi. Zlepšenie krvného obehu sa dosahuje chronickým 15 podávaním inhibítora aktivácie doštičiek, ktorým je aspirín, čo sa doporučuje pacientom s angínou. DSP a aspirín účinne zlepšujú krvný obeh a boli vyhodnotené porovnaním (Hb, Lb, P a toku vzduchu). DSP zlepšuje krvný obeh tak účinne ako aspirín. Pozri tabuľka 10.

Tabuľka 10 DSP a aspirín zlepšujú krvný obeh

		DSP	aspirín
	Pred-	Po-	Pred-	Po-
Hb	6,23 ± 1,67	4,35 ± 1,02	6,12 ± 1,56	4,28	± 1,07
LB	10,92 ±2,21	8,30 ± 1,14	10,38 ± 1,96	8,21	±0,3
P	1,95 ±0,08	1,77 ±0,08	1,89 ±0,12	1,67	±0,7
Tok vzduchu	1,79 ±0,13	1,39 ±0,11	1,8 ±0,17	1,40	±0,10

Celkový počet pacientov: 25 dostali DSP a 28 dostalo aspirín

DSP zmenšuje zhlukovanie krvi inhibíciou krvných doštičiek

Tromboxán B2 aktivuje krvné doštičky. Aktivované krvné doštičky uvoľňujú rôzne látky, vrátane doštičkového β mikroglobulínu, ktorý spôsobuje nahromadenie krvi a tým oslabuje krvný obeh. Bola skúmaná účinnosť DSP pri inhibícii aktivácie krvnej doštičky. DSP znižuje koncentráciu tromboxánu B2 a inhibuje účinne zrážanie krvných doštičiek. Izosorbid dinitrát, ktorý nie je schopný zabraňovať aktivovaniu krvnej doštičky použitý ako kontrola, denie, neznižuje tromboxán B2 alebo nezabraňuje aktivácii krvnej doštičky. Pozri tabuľka 11.

Tabuľka 11 DSP inhibuje aktiváciu krvnej doštičky

Pred liečením Po liečení

βΡΜ	DSP	62,44 ± 14,37	45,65 ± 12,25
	nitráty	59,89 ± 15,42	54,36 ± 13,18
Τχβ2	DSP	1312 ±535	738 ±384
	nitráty	1315 ±507	1218 ±445

DSP znižuje hladinu cholesterolu v plazme.

Zvýšený cholesterol v plazme predstavuje začiatok aterosklerózy. Na zabránenie vzniku nových aterosklerotických lézií, na znižovanie cholesterolu v plazme sa odporúča buď upraviť stravu, alebo užívať lieky. Zisťovalo sa, či DSP znižuje cholesterol v plazme. DSP znižuje hladinu cholesterolu o 0,3 mmol, čo je štatisticky významné pri hodnote P 0,05. Pozri tabuľku 12.

Tabuľka 12 DSP znižuje hladinu cholesterolu v plazme

Cholesterol v plazme (mmol/1)

Pred liečením Po liečení ĎŠP 5,15 ±0,16 4,84 ±0,2

Počet pacientov: 80

Účinok kardiotonických tabletiet na LPO a SOD v krvnom sére pacientov chorých na koronárnu srdcovú chorobu

Metóda: Liečebnej skupine 24 pacientov, v súlade s čínskym referenčným štandardom diagnózy koronárneho srdcového ochorenia upraveným v roku 1979, sa podávajú kardiotonické pilulky v množstve 10 tabliet naraz, 3-krát denne. Skupine 20 zdravých ľudí sa neposkytlo žiadne lekárske ošetrenie.

Výsledky: hladina LPO u chorých pacientov trpiacich na koronárnu srdcovú chorobou je jasne vyššia ako u zdravých ľudí, zatiaľ čo obsah SOD je jasne nižší (P<0,01). Po ošetrení pacientov s kardiotonickými tabletami ich LPO sa evidentne znížil (P<0,01) a ich SOD sa samozrejme zvýšil (P<0,01). Pozri tabuľku 13.

Tabuľka 13 Porovnanie obsahov LPO a SOD zdravej a liečenej skupiny (x±s)

Skupiny	Pacienti	SOD (ng/ml)	LPO (nmollml)
Normálna skupina	20	348 ±106	4,64 ± 1,52
Liečená skupina	24	Pred liečením	267 ± 76*	7,16 ± 1,48*
		Po liečení	309 ± 187#.	4,68 ± 1,72##

Poznámka: V porovnaní s normálnou skupinou, *p< 0,05. V porovnaní s predliečenými skupinami, #p<0,05, ##p<0,01.

Súhrn: Chronická ischémia srdcového svalu u chorých pacientoch trpiacich na koronárnu srdcovú chorobu a anoxiu tkaniva vedie k zníženiu aktivity SOD, obzvlášť bunkového SOD a zvýšeniu voľných radikálov kyslíka, čo spôsobuje zvyšovanie LPO a ďalšiu spotrebu SOD. Po preliečení pacientov s kardiotonickými pilulkami sa rapídne zníži hladina LPO, zatiaľ čo obsah SOD sa samozrejme zvyšuje. Toto dokazuje, že kardiotonická tabletka má silné účinky na odstránenie voľných radikálov kyslíka, čo je tiež jedným z mechanizmov liečenia koronárneho srdcového ochorenia.

Vpyv kardiotonických tabliet na aktivitu LPO a antioxidázy pri liečení pľúcnych srdcových chorôb

Metóda: Subjekty: 48 chorých pacientov na pľúcnu srdcovú chorobu je rozdelených do troch skupín. V normálnej skupine 16 pacientov je liečených komplexom terapií, takými ako protizápalová terapia, antiastmatická terapia, vdychovanie kyslíka, atak ďalej. V skupine liečenej kardiotonikami, 14 pacientov je liečených s kardiotonickými tabletami v množstve 10 tabliet naraz, 3-krát denne. V Gantangzhi skupine je 18 pacientov liečených vnútrožilovou infúziou - 200 mg Gantangzhi rozpusteného v 250 ml 5 % glukózy, 1-krát denne počas 10 dní.

Výsledky: po liečení s kardiotonickými tabletami, hodnota GSH- Px stúpne, hodnota LPO klesne, a preto GSH- Px stúpne. V porovnaní s bežným spôsobom liečenou skupinou zaznamenáva sa významný rozdiel. Pozri tabuľku 14.

SK 288060 Β6

Tabuľka 14 Exponenty pred a po liečení

	GSH-Ρχ (U/mgHb)	CAT (U/gHb)	SOD (U/gHb)	LPO (nmol/ml)	GSH- PX/LPO
Liečená skupina ľudí	140,6±35,2	312,7±58,1	5799,8±948	4,2±1,2	34,2±8,7
Normálna skupina	Pred liečením	101,3±23,6	300,4±107,7	5740,5±939,0	5,6±1,9	20,4±8,8
Po liečení	120,6±20,6#	390± 184,3#	6076,8±1091	4,3±1,2##	31,3±15,1#
Skupina s kar- diotonickými skupinami	Pred liečením	108,8±28,3	233,l±70,2	5863,3±1072,7	5,9±2,0	18,5±7,6
Po liečení	158,2±40,7##**	328,4±78,5##*	5582,8± 1094,7#*	4,1 ±1,6##**	36,4±6,7##**

Poznámka: Porovnanie pred liečením a po liečení #p>0,05, ##p<0,05, *p>0,05, **p<0,05.

Súhrn: Kardiotonické tabletky majú antioxidačnú fúnkciu a môžu osvetliť reakciu peroxidácie tukov a zvýšiť schopnosť antioxidácie ľudského tela.

Liečenie kardiotonickými tabletami pri základnej hypertenzii

Metóda: (1) Výber pacientov: Vybrali sa pacienti, ktorí trpeli I. alebo II. fázou primárnej hypertenzie, ale bez sekundárnej hypertenzie alebo bez zlyhania fúnkcie srdca, pečene alebo obličiek.

(2) Podávanie: Pacientom sa zastavilo podávanie západných a tradičných čínskych liekov (s výnimkou liekov znižujúcich krvný tlak) na dva týždne, a potom v treťom týždni sa merajú reologické indexy krvi a zapíšu sa do ich do lekárskej správy. Prijala sa skúška s dvojitým slepým pokusom. V skupine užívajúcej kardiotonické tabletky subjekty užívali kardiotonické tablety orálne 10 tabliet naraz, 3-krát denne. V skupine užívajúcej Dan Shen tablety subjekty užívali Dan Shen sa tiež poberali orálne, 5 tabliet naraz, trikrát denne. V kontrolnej skupine sa užívala neaktívna substancia a doba liečenia bola šesť týždňov.

Výsledky: (1) Vplyv na viskozitu celej krvi. Po liečení, celková viskozita krvi pacientov značne klesla v oboch skupinách, v skupine liečenej kardiotonickými tabletami aj v skupine liečenej tabletami Dan Shen, ale krivka viskozity celej krvi v skupine liečenej kardiotonickými tabletami prudšie klesá v porovnaní so skupinou užívajúcou Dan Shen tabletu. Pozri tabuľka 15.

Tabuľka 15 Efekt kardiotonických tabliet na viskozitu celej krvi (mPas, (x±s))

Skupiny	3,83 s'1	28,3 s’1	192 s'1
Kardiotonická skupina (30 osôb)	Pred liečením	18,27 ±2,85	5,82+0,93	4,54 ± 0,78
Po liečení	11,79 ±3,75**##&&	4,78 ±0,84**##&&	3,98 ± 0,65**##&&
Skupina so zlúčeninou Danshen tabliet (30 osôb)	Pred liečením	17,69 ± 1,96	5,86 ±0,79	4,69 ± 0,54
po liečení	14,68 ± 3,41‘*&&	5,69 ± 0,81‘&	4,42 ± 0,59**&&
Kontrolná skupina (15 osôb)	Pred liečením	17,65 ±2,07	5,69 ± 0,79	4,75 ± 0,58
Po liečení	18,02 ±2,32	5,71 ±2,76	4,86 ± 0,65

Poznámka: V porovnaní s rovnakými skupinami pred liečením, *p<0,05, **P<0,01. Porovnanie s kardiotonickými tabletkami po liečení, #p<0,05, ##p<0,01. Porovnanie s kontrolnou skupinou po liečení, &p<0,05, &&p<0,01.

(2) Deformačný účinok a zhlukovanie červených krviniek. Po liečení, deformácia erytrocytov je v skupine liečených kardiotonickými tabletkami zjavne väčšia ako pred liečením a plocha a index zhlukovania je badateľne menší ako pred liečením. V porovnaní so skupinou liečenou Danshen tabletami v skupine liečenej kardiotonickými tabletami klesá omnoho rýchlejšie (p<0,01). Pozri tabuľku 16.

SK 288060 Β6

Tabuľka 16 Vplyv kardiotonických tabliet na deformáciu a zhlukovanie erytrocytov (x±s)

Skupiny	Index deformácie	Index zhlukovania	Plocha zhlukovania (integrál)
Kardiotonická skupina (30 osôb)	Pred liečením	0,4115 ±0,0360	4,06 ± 0,39	841,12 ±67,68
Po liečení	0,4274 ± 0,034’*	3,41 ±0,36***	683,52 ± 69,09***
Skupina liečená Danshen tabletami (osôb)	Pred liečením	0,4066 ± 0.0290	3,98 ± 0,34	806,90 ± 66,30
Po liečení	0,4180 ±0,0281**	3,64 ± 0,39	716,12 ±84,29*
Kontrolná skupina (15 osôb)	Pred liečením	0,4091 ±0,0376	4,02 ± 0,41	812,52 ±65,64
Po liečení	0,4001 ±0,0381	4,01 ±0,39	804,44 ± 68,06

Poznámka: V porovnaní so skupinami pred liečením, *p<0,05, **P<0,01. Porovnanie so skupinou liečenou kardiotonickými tabetami po liečení, #p<0,05, ##p<0,01. Porovnanie s kontrolnou skupinou, &p<0,05, &&p<0,01.

(3) Vplyv na krvný tlak. Po liečení systolický tlak a diastolický tlak u pacientov liečených kardiotonickými tabletami aj Danshen tabletami značne klesol (p<0,01) a neprejavuje sa zjavný rozdiel medzi obidvomi skupinami. Pozri tabuľku 17.

(3) Účinok na symptómy vysokého tlaku. U pacientov v skupine liečenej kardiotonickými tabletami aj v skupine liečenej Danshen tabletami sa strácajú také príznaky ako bolesť hlavy, závraty a necitlivosť končatín (p<0,01), ale nezlepšuje sa nespavosť. Pozri tabuľku 18.

Tabuľka 17 Účinok kardiotonických piluliek na krvný tlak (mmHg, x±s)

Skupiny	Systolický tlak	Diastolický tlak
Kardiotonická skupina (30 osôb)	Pred liečením	155,00 ±8,08	90,70 ± 7,93
Po liečení	149,20 ±8.89**	86,59 ± 8,30**
Skupina s kompozícou Danshen tabletiek (30 osôb)	Pred liečením	152,93 ±9,59	92,59 ± 8,30
Po liečení	146,02 ±10,20**	88,55 ± 7,22**
Kontrolná skupina (15 osôb)	Pred liečením	154,06 ±7,05	90,90 ±9,10
Po liečení	152,08 ±9,25	91,10 ±8,70

Poznámka: V porovnaní s tými istými z tej istej skupiny pred liečením, **P<0,01. Porovnanie s kontrolnou skupinou po liečení &&p<0,01.

Tabuľka 18 Vplyv kardiotonických tabliet na príznaky spojené so zvýšeným tlakom (pacienti)

Skupiny	Bolesti hlavy	Závrate		Tŕpnutie končatín	Nespavosť
Áno	Nie	Áno	Nie	Áno	Nie	Áno	Nie
Kardiotonická skupina (30 osôb)	Pred liečením	20	10	16	14	12	18	8	22
Po liečení	7	23’	2	28'	3	27'	4	26
Skupina s kompozíciou Danshen tabliet (30 osôb)	Pred liečením	22	8	17	13	10	20	6	24
Po liečení	15	15'	8	22'	3	27'	6	248
Kontrolná skupina (15 osôb)	Pred liečením	8	7	6	9	4	11	4	11
Po liečení	7	8	5	10	3	12	2	13

Poznámka: V porovnaní s tou istou skupinou pred liečením, *P<0,01.

Záver: Reologické vlastnosti erytrocytov pacientov trpiacich na hypertenziu sú zreteľne abnormálne. Deformácia erytrocytov sa zreteľne zníži, zatiaľ čo zhlukovanie jasne stúpa. Experiment ukázal, že kardiotonické tabletky účinne znižujú viskozitu krvi a index a plochu zhlukovania erytrocytov, pričom značne zvyšujú schopnosť deformácie erytrocytov. Kardiotonické tabletky tiež môžu znižovať krvný tlak a zlepšovať klinické príznaky u pacientov. Na základe uvedeného kardiotonické tabletky sú účinné pri prevencii alebo odďaľovaní výskytu primárnej hypertenzie a kardiocerebrálneho syndrómu.

Toxicita

DSP je bezpečný a netoxický. V Číne bolo okolo 5 miliónov pacientov liečených s DSP bez vedľajších účinkov. Mierne vedľajšie účinky, bolesť hlavy alebo závraty, boli hlásené len pri malej časti pacientovi. Prehľad klinických štúdií

DSP predstavuje novú generáciu čínskych liekov, ktoré sa uplatňujú pri liečení koronárnej srdcovej choroby. Klinické štúdie dokazujú, že DSP zmierňuje a predchádza angíne pectoris zlepšením funkcie srdcového svalu, zmenšuje ischémiu myokardu, inhibuje aktiváciu krvných doštičiek, čím zabraňuje nahromadeniu krvi a znižuje množstvo cholesterolu v plazme. Terapeutické výsledky potvrdzujú, že DSP je účinnejší ako čínsky liek Dan Shen tablety. DSP je taký účinný ako lieky používané v USA. DSP zmierňuje angínu tak účinne ako nitroglycerín, zabraňuje angíne tak účinne ako nitrát izosorbid dinitrátu s dlhotrvajúcim účinkom, a zabraňuje zhlukovaniu krvných doštičiek tak účinne ako aspirín. DSP je netoxický: okolo 5 miliónov ľudí bolo liečených vo väčšine prípadov bez zreteľných vedľajších účinkov.

Predklinické štúdie

Predklinické štúdie odhalili mechanizmus, ktorým DSP predchádza a zmierňuje angínu. DSP zmierňuje angínu zvýšením krvného obehu.

Wistar potkany, približne 260 g, boli anestezované s uretánom, otvorila sa im hruď, vybralo sa im srdce, ktoré sa perfiindovalo Langendorŕfovým spôsobom pri 37 °C. Konštantný perfúzny koronárny tlak bol 65 cm H₂O.

Po stabilizácii tepu rôzne množstvá DSP alebo Danshen tabliet boli aplikované cez bočnú vetvu srdcovej tepny. Potom sa odmeral koronárny prietok a tep. DSP zvyšuje koronárny prietok v širokom rozmedzí dávok. Danshen tablety, naproti tomu, zvyšujú koronárny prietok v úzkom rozmedzí dávok. Pozri tabuľku 19.

Tabuľka 19 DSP zvyšuje koronárny prietok

Koronárny prietok

	Dávka (mg/ml)	Pred liečením	Po liečení
	bez	7,0 ± 1,1	7,1 ±0,97
DSP	5,8	7,2 ±1,1	7,0 ± 1,4
	290	6,7 ± 1,6	8,7 ± 1,4
	580	6,7 ± 1,5	9,3 ± 2,9
DS tablety	5,8	6,7 ±1,4	7,1 ± 1,5
	290	7,3 ± 1,7	9,1 ±2,1
	580	6,8 ± 1,4	7,1 ± 1,5

Sledoval sa účinok DSP a Danshen tabliet na tep. DSP ani Danshen tablety vôbec nemenia tep. Pozri tabuľku 20.

Tabuľka 20 DSP nezvyšuje tep srdca

		Koronárny prietok
	Dávka (mg/ml)	Pred liečením	Po liečení
	bez	194 ± 17	193 ± 12
DSP	5,8	180± 11	189 ±9
	290	188 ±7	184 ±8
	580	173 ± 14	167 ± 13
DS tablety	5,8	180± 11	189 ±9
	290	189 ± 16	183 ± 14
	580	186 ±23	171 ±8

SK 288060 Β6

DSP zvyšuje koronárny prietok uvoľnením hladkého svalu cievy, čo uľahčuje rozšírenie cievy.

Skúmaný bol účinok DSP na draslíkom indukovanú vazokontrakciu pásika aorty králika. DSP uvoľňuje hladký sval, a tým účinne rozťahuje cievy. Podobné účinky boli pozorované v experimentoch, v ktorých sa použil prsteň koronárnej artérie prasaťa.

DSP zabraňuje zhlukovaniu krvných doštičiek

Skúmaný bol vplyv DSP na zhlukovanie krvných doštičiek. Pri králikovi liečenom s DSP sa krvné doštičky nezhlukovali. DSP zabraňuje zhlukovaniu krvných doštičiek. Pozri tabuľku 21.

Tabuľka 21 DSP zabraňuje zhlukovaniu krvných doštičiek

DSP (mg/ml)	#zvieratá	zhlukovací pomer (%)	inhibícia (%)
0	6	6,7 ± 4,4	0
1,8	6	42,7 ± 2,5	8,3 ± 4,5
3,5	6	33 ± 3,4	23,6 ± 6,7’
7	6	25,3 ±2,1	37,6 ± 5,9’
14	6	15,8 ±3,0	69,0 ± 6,9'

V tabuľke 22 je ukázaný pomer mikrojadier pri myšiach v rozdielnom čase po liečbe rastlinnou kompozíciou podľa vynálezu (8 400 mg/kg).

Tabuľka 22

Čas (h)	Polychromatický RBCs	Mikrojadrové bunky	Mikro-pomery (%) (x±SD)
12	6,000	9	1,5 ±0,8
24	6,000	11	1,8 ±0,7
36	6,000	11	1,8 ± 1,2
48	6,000	11	1,8 ± 1,5
72	6,000	13	2,2 ± 0,7
Rozpúšťadlo 24	6,000	9	1,5 ± 1,4

Tabuľka 23 znázorňuje pomer mikrojadier pri myšiach po 24 hodinách po podaní DSP a CP.

Tabuľka 23

Dávka (mg/kg)	Polychromatický RBCs	Mikrojadrové bunky	Mikro-pomery (%) (x±SD)
8,400	6,000	12	2,0 ±0,6
840	6,000	9	1,5 ± 1,0
84	6,000	11	1,8 ± 1,0
Rozpúšťadlo	6,000	9	1,5 ± 1,4
CP (80 mg/kg)	6,000	138	23,0 ±4,0'

* Porovnanie s rozpúšťadlom P<0,01.

Tabuľka 24 znázorňuje odhadované kritériá stupňovania účinnosti skúšaného lieku.

Tabuľka 24

Parametre) Účinok	Veľmi vysoký účinok	Vysoký účinok	Účinok	Žiaden účinok
RBC zhlukovanie	žiadne	malé	Pozorovateľné	Silné
Čas nábehu	<90	90-180	180-300	>300
Mikroprietok krvi	Lepší ako normálne	Obrat na normál	Zlepšený	Zhoršený
Dĺžka trvania (min.)	>15	15-10	10-5	<5

SK 288060 Β6

DSP zlepšuje mikrocirkuláciu

Skúmaný bol vplyv DSP na mikrocirkuláciu na čínskom škrečkovi. DSP zlepšuje mikrocirkuláciu za 23 minút v priebehu 111 minút orálneho podávania pri všetkých zvieratách. Pozri tabuľku 25.

Tabuľka 25 DSP zlepšuje mikrocirkuláciu _Čas nábehu (min.)_Čas trvania (min.) Účinok dávkv (%)

DSP 111 23 100

Tabuľka 26 znázorňuje ochranný účinok DSP na srdcovom svale vyvolanom pituitrínom pri potkanoch (druhá perióda).

Tabuľka 26 (n=8)

Skupina	Dávka (g/kg)	Pred liečením	Po liečení
Pred pituitrínom	Po pituitríne (40 s - 15 minút) Počet potkanov s abnormálnym EKG
Kontrolná		Normál	Normál	7
DSP	0,4	Normál	Normál	3*
0,8	Normál	Normál	p*
1,2	Normál	Normál	1 *♦
DST	0,4	Normál	Normál	4
0,8	Normál	Normál	i **

Porovnané s kontrolou *p<0,05; **p<0,01.

Tabuľka 27 znázorňuje inhibičný účinok DSP na ischémiu myokardu vyvolaný pituitrínom pri potkanoch.

Tabuľka 27

Skupina	Dávka (g/kg)	Inhibícia (%)
DSP	0,4	71,4*
0,8	85,7*
1,2	71,4*
DST	0,4	42,8*
0,8	85,7*

Porovnané s kontrolnou skupinou *p<0,05.

Tabuľka 28 znázorňuje ochranný účinok DSP na ischémiu myokardu indukovaný pituitrínom pri potkanoch (prvá perióda).

Tabuľka 28 (n=8)

Skupina	Dávka (g/kg)	Zmeny v T-ST EKG-)vzor 11) v prvej perióde
Pred liečením	Po liečení
Pred pituitrínom	Po pituitríne (0-40 s)
zvýšené T	obrátené T	celkovo
Kontrolná	-	Normál	Normál	4	3	7
DSP	0,4	Normál	Normál	3	0	3*
0,8	Normál	Normál	1	1	2*
1,2	Normál	Normál	2	1	3*
DST	0,4	Normál	Normál	3	2	5
0,8	Normál	Normál	1	1	2*

Porovnané s kontrolou *p<0,05.

SK 288060 Β6

Účinok kardiotonických piluliek na odstránenie voľných radikálov kyslíka

Štúdium vplyvu kardiotonických piluliek na odstránenie voľných radikálov kyslíka bolo vykonané použitím elektrónovej paramagnetickej rezonancie (EPR) a zachytávaním špinu, so superoxidovými aniónmi a hydroxylovými aniónmi vytvorenými použitím systému xantín-xantín oxidáza a H₂O₂-Fe²⁺ systému.

Metóda: (1) Produkcia hydroxy radikálov. Nastavil sa pokusný model podľa Fenton princípu. Zmes H₂O₂, ferisulfátov a DMPO (5,5-etán-pyrolín-l-oxid) sa s EPR otestuje. Výsledný signál slúži ako kontrolný. Liečenej skupine sa podá kardiotonická pilulka.

(2) Produkcia superoxidových aniónov. Nastavil sa pokusný model založený na reakcii xantín-xantín oxidáza. Zmieša sa xantín, dietryléntriamín kyselina pentaoctová, DMPO a xantín oxidáza a potom sa uskutoční EPR testovanie. Výsledný signál slúži ako kontrolný. Potom sa liečenej skupine podá kardiotonická pilulka.

Desať vzoriek z každej zo štyroch skupín sa testovalo a výsledky sú vyjadrené v priemere. T- test bol použitý v štatistických analýzach.

Výsledky: (1) Zisťoval sa účinok kardiotonických piluliek na odstránenie voľných hydroxylových radikálov, ktoré boli vytvorené systémom H₂O₂-Fe²⁺. Adukt DMPO-OH bol vytvorený, keď sa hydroxylový radikál zachytí DMPO. Vrcholová hodnota v kontrolovanej skupine je 11,8 ± 0,6 pomerných jednotiek, zatiaľ čo v skupine kardiotonických piluliek je 4,1 ± 0,5 relatívnych jednotiek. Medzi skupinami je významný rozdiel (p<0,01) a rýchlosť odstránenia pri kardiotonických pilulkách je 65 %.

(2) Účinok kardiotonických piluliek na odstránenie superoxidových aniónov vytvorených systémom xantín-xantín oxidáza. Adukt DMPO-OOH bol vytvorený zachytením superoxidového aniónu s DMPO. Vrcholová hodnota aduktu v kontrolnej skupine je 10,6 ± 67 relatívnych jednotiek, zatiaľ čo spektrálne signály v skupine, pri ktorej sa aplikovali kardiotonické piplulky, úplne nevymizli. V porovnaní s kontrolnou skupinou bol zaznamenaný významný rozdiel (p<0,01) a odstránenie bolo 100 %.

Experimenty ukazujú, že kardiotonické pilulky sú účinné pri odstraňovaní superoxidových aniónov vytvorených systémom xantín-xantín oxidáza a hydroxylových radikálov vytvorených systémom H₂O₂-Fe²⁺.

Účinok kardiotonických tabliet na voľné radikály pri mozgovej ischémii reinfuziou poškodeného tkaniva pri potkanoch.

Metóda: 30 SD potkanov sa náhodne roztriedi do troch skupín, ktorými sú skupina, pri ktorej sa vykoná fiktívna operácia (operácia sa vykoná, ale cievy a nervy sa nepodviažu), modelová skupina s reinfúziou mozgovej ischémie a skupina, ktorej sa podávajú kardiotonické pilulky (4 g/kg). Po troch dňoch kontinuálneho intraperitoneálneho (Ip) podávania a dve hodiny po podaní na tretí deň sa potkany anestezovali s 20 % etyluretánom a ich artérie na oboch stranách krku a blúdivé nervy sa separovali a podviazali. Po 30 minútach reinfúzie sa im odrezali hlavy a vybral sa im mozog. Zobralo sa asi 500 mg kortikálneho tkaniva z ľavého mozgu a tkaniva hippocampu na oboch stranách a vzorka sa homogenizovala v tekutom dusíku. Takto získané homogenáty sa vložili do ľadového fyziologického roztoku a homogenát sa centrifugoval. Supematant sa zobral a stanovili sa aktivity CAT a SOD a obsah MOD a GSH.

Výsledky: Pozri tabuľku 29. (1) Účinok kardiotonických piluliek na CAT a obsah GSH v mozgovom tkanive. Aktivity CAT mozgovej kôry a tkaniva hippocampusu a obsah GSH v mozgovej kôre v modeli skupiny s reinfúziou mozgovej ischémie je omnoho nižší ako v skupine fiktívne operovanej. Aktivita CAT tkaniva hippocamusu aj obsah GSH v mozgovej kôre sú v skupine, ktorej sa podávali kardiotonické pilulky, omnoho väčšie ako v modelovej skupine.

Tabuľka 29 Aktivity CAT a SOD a obsah MDA a GSH v mozgovom tkanive potkanov (mPa, x±s) (n=10)

Skupiny	CAT aktivita (U/mg proteínu)	GSH (pmol/mg proteínu)	SOD aktivita (U/mg proteínu)	MDA (nmol/mg proteínu)
Mozgová kôra	Hipokam- pus	Mozgová kôra	Hipokampus	Mozgová kôra	Hipokampus	Mozgová kôra	Hipokampus
Skupina fingovane operovaná	2,94+0,17	2,78+0,14	18,49+0,70	16,87+0,92	14,24+0,90	20,34+0,74	0,502+0,054	1,084+0,117
Modelová skupina	2,17+0,248	1,97+0,23’	14,76+1,128	13,80+0,74	10,44+0,79’	18,18+0,628	0,718+0,070’	1,449+0,140’
Skupina s kardiotonickou pilulkou	2,55+0,35	2,79+0,213	17,14+0,76	15,76+1,183	13,31+0,773	20,59+0,593	0,483+0,0653	1,069+0,1313

Poznámka: V porovnaní s fiktívne operovanou skupinou, *p<0,05, porovnanie s modelovou skupinou, #p<0,05.

SK 288060 Β6 (2) Účinok kardiotonických piluliek na aktivitu SOD a obsah MDA v mozgovom tkanive. Aktivita SOD v mozgovom tkanive v modelovej skupine je značne menšia ako v skupine fiktívne operovanej, zatiaľ čo obsah MDA je značne vyšší. Aktivita SOD v mozgovej kôre a v tkanive hipokampu v skupine, ktorej sa podávali kardiotonické pilulky, bola značne vyššia, zatiaľ čo obsah MDA sa významne znížil.

Záver: Po reinfúzii mozgovej ischémie obsah MDA v tkanive mozgu vzrástol, zatiaľ čo obsah GSH sa znížil. Aktivity CAT a SOD, dvoch dôležitých enzýmov odstraňujúcich voľné radikály kyslíka v tkanivách, sa významne znižujú, čo dokazuje, že v priebehu reinfúzie mozgovej ischémie sa vytvára veľké množstvo voľných radikálov kyslíka, pretože zlyháva ich odstraňovanie. To zapríčiňuje peroxidáciu tukov, a tým sa mozog poškodzuje. Kardiotonické pilulky znižujú obsah MDA v mozgovej kôre a v tkanive hipokampu reinfúziovaných potkanov a zvyšujú značne obsah GSH a aktivity CAT a SOD, čo dokazuje, že kardiotonické pilulky majú funkciu, ktorou zjavne obmedzujú reakcie voľných radikálov kyslíka, kontrolujú peroxidáciu tukov a ochraňujú mozgové bunky poškodené ischemickou reinfúziou.

Antioxidácia kardiotonických tabliet pri chronickom poškodení pečene

Metóda: Indukoval sa model mierneho chronického poškodenia pečene s CCL4 vysokomastným jednoduchým proteínom na Wisterovom potkanovi. Jednej skupine sa kardiotonické pilulky perfúndovali do žalúdkov potkanov v dávkach 4 g/kg, zatiaľ čo v normálnej a modelovej skupine bolo perfúndované rovnaké množstvo fyziologického roztoku. Aktivita SOD bola stanovená použitím metódy xantín oxidázy, zatiaľ čo obsah MDA bol stanovený použitím zdokonalenej metódy s kyselinou tiobarbiturovou.

Výsledky: Pozri tabuľku 30. Porovnaním modelovej skupiny s normálnou skupinou sa zistilo, že aktivita SOD klesá, zatiaľ čo MDA stúpa. V skupine, v ktorej sa aplikovali kardiotonické pilulky, však aktivita SOD stúpa, zatiaľ čo MDA klesá, čo skupinu, pri ktorej boli aplikované kardiotonické pilulky, vracia do normálneho stavu.

Tabuľka 30 Aktivity SOD a obsah MDA pri chronickom poškodení pečene

Skupiny	Potkany	SOD (NU/mg.pr)	MDA (nM/mg.pr)
Normálna skupina	12	l,717±0,521	15,21 ±4,35
Modelová skupina	12	l,326±0,3218	19,39±4,62*
Skupina s kardiotonickými pilulkami	11	l,710±0,415#	15,16±4,29#

Poznámka: V porovnaní s normálnou skupinou, *p<0,05. V porovnaní s modelovou skupinou, #p<0,05.

Záver: MDA je hlavným produktom degradácie peroxidácie tukov. MDA môže vážne poškodzovať štruktúru membrány bunky, a tým aj pečeňové bunky. SOD odstraňuje voľné radikály superoxidového aniónu voíných radikálov, a tým zabraňuje peroxidácii tukov pôsobením voľných radikálov. Kardiotonické tablety významne zvyšujú aktivitu SOD a znižujú množstvo MDA, čím sa znižuje peroxidácia tukov a zabraňuje sa poškodeniu pečene.

DSP nie je mutagénny

Mutagenicita DSP sa skúmala pomocou Amesovho testu. DSP nebol mutagénny. Pozri tabuľku 31.

SK 288060 Β6

Tabuľka 31 Mutagenicita DSP (Amesov test)

		Počet kolónií na misku
	S9	TA97	Ta98	TA 100	TA 102
DSP	-
0,0	-	141±13	36±3	161±21	303±44
0,5	-	140±17	35±2	148±21	288±15
5	-	136±14	34±4	154±26	280±16
50	-	133±20	33±5	142±25	292±37
500	-	109±15	34±3	154±16	311±32
5000	-	67±8*	30±4	149±27	298±32
0,0	+	141±13	44±6	176±19	296±39
0,5	+	148±13	42±9	161±27	296±37
5,0	+	152±11	44±7	161±16	292±38
50,0	+	140±18	37±6	166±9	307±55
500,0	+	135±21	42±7	152±22	287±16
5000,0	+	119±17	38±7	162±17	363±57
Dexon
50	-	2155±814	952±187	831±114	1510±211
2-AF
40	-	125±18	38±3*	161±16
	+	1404±644*	1598±124	1222±309
DAN
100	-	364±50
	+	943±102*

Výroba surovej drogy

1. Dan Shen (1) Kontrola kvality

Surová droga Dan Shen bola odobraná z rôznych produkčných oblastí z celej Číny. Tieto vzorky boli podrobené chemickej analýze vzhľadom na ich hlavné zložky. Výsledky ukazujú, že kvalita Dan Shenu z oblasti Shangluo je najlepšia a že klíma Shangluo je najvhodnejšia na pestovanie Dan Shenu. Účinnými zložkami Dan Shenu sú tanshinón a kyselina šalviová A, ktoré z tejto oblasti mali najlepšiu kvantitu.

(2) Topografia

Shangluo sa geograficky nachádza na poludníku východnej dĺžky 108°34'20 - 11TT25 a rovnobežke severnej šírky 33°2'30 - 34°24'40 s priemernou nadmorskou výškou 900 metrov. Región sa rozprestiera na ploche s nízkymi a mierne vysokými horami, ktorá nie je znečistená. Neznečistený čistý vzduch je ideálny pre rast rastliny, z ktorej sa získava droga.

(3) Klíma

Podnebie je teplé a polovlhké, typické pre kopcovité oblasti prechodného pásma od subtropického po mierne pásmo. Ovplyvnené juhovýchodným monzúnom má zreteľne oddelené ročné obdobia a veľké množstvo dažďa. Vylúčené množstvo zrážok v priebehu roka v tejto oblasti sa odhaduje na 733,9 - 899 mm. Slnečno je 1874,1 - 2185 hodín za rok, s ročným slnečným žiarením 119,57- 124 kcal/cm². Teplota kolíše od 18 do 40,8 °C. V priebehu roka nemrzne 198-218 dní.

(4) Pôda % pôdy v Shangluo je piesočnatej, najviac ornej pôdy pozostáva z neutrálnej a slabo zásaditej pôdy s pH 6,5 - 8. Orná pôda je s hrúbkou 0 - 20 cm, výživa v pôde pozostáva z: 1,36 % organických látok, 0,085 % dusíka, 18 ppm veľmi účinného fosforu, 136 ppm veľmi účinného draslíka a 60 ppm alkalickohydrolyzovaného dusíka. Ťažké kovy a iné toxické látky neprekračujú poľnohospodárske normy stanovené krajinou. Oblasť je bohatá na rastliny a zvieratá. Miestni farmári používajú organické hnojivá.

(5) Ťažké kovy

Osem kovov, vrátane olova, kadmia, ortuti, arzénu a tak ďalej, zvyšky pesticídov, vzduch a voda, všetko zodpovedá environmentálnym štandardom krajiny.

(6) Štandardizácia

SK 288060 Β6

Sadenie a oranie Dan Shenu sa vykonáva podľa štandardnej poľnohospodárskej praxe (GAP). Technologické skúsenosti týkajúce sa hlavne rastu Dan Shenu sú kompilované v brožúrach, ktoré sa distribuujú medzi pestovateľov Dan Shen v oblasti. Počas rastu sa vysielajú na polia špecialisti a poskytujú pestovateľom na mieste výcvik a technickú pomoc, aby sa štandardizovalo pestovanie Dan Shen vo veľkom meradle.

(7) Produkcia z oblasti Shangluo je založená na báze pestovania 20 rôznych odrôd Dan Shen. Rôzne odrody Danshenu boli pozorované a porovnávané v rôznych obdobiach rastu, vo výťažku, vzhľade a chemickom zložení v priebehu troch rokov. Najlepšie odrody z hľadiska kvality boli vybraté na pestovanie vo veľkom meradle.

(8) Kultivácia tkaniva a technológia klonovania bola adaptovaná pri kultivácii Dan Shen na urýchlenie procesu a skrátenie obdobia rastu.

(9) Po 30 dňovej perióde pestovania v skúmavke sa prešlo na rozšírený reprodukčný proces. Trvá 40 dní pred koreňovou periódou. Pri koreňovej perióde, ktorá trvá d’aľších 10 dní, rastú a rozširujú sa korene. Rýchlosť zakoreňovania obyčajne dosahuje 90 % alebo viac. Rastlina sa môže potom premiestniť do škôlky, kde sa podmienky a rozvinuté zavlažovacie sprejovacie zariadenie riadia počítačovou technológiou. Rastliny sa na polia presádzajú po mesiaci pestovania v škôlke.

(10) Podľa expertov Dan Shen vypestovaný z našej produkčnej oblasti je nielen na vysokej kvalitatívnej úrovni, ale má aj výnosný produkčný koreň (hmotnosť koreňa je o 50 % väčšia ako hmotnosť koreňa z iných oblastí), a má veľmi dobré chemické zloženie (o 70 % viac aktívnej látky v porovnaní s produkciou z iných oblastí).

2. Prírodný bomeol (1) Podmienky rastu

Oblasť pestovania prírodného bomeolu je Xinhuang provincie Hunan v Číne. Je to oblasť so stredne vysokými kopcami 300 až 600 metrov nad morom. 60 % oblasti je pokrytých lesom. Pôda pozostáva zo žltej a červenej piesočnatej pôdy s pH 5 - 6. Voda a vzduch v oblasti nie sú znečistené.

(2) Biologické charakteristiky stromov

Extrémne silná schopnosť rastu, tvoria húštiny, 300 - 400 stromov na mu (rovná sa 666,7 m²), zbierajú sa časti nad vetvami s listami, čistý výťažok je 1 000 kg na mu.

(3) Reprodukcia a presádzanie

Na reprodukciu sa požíva technológia vrúbľovania a odrezkov. Rastliny sa pestujú v škôlkach v priebehu prvého roka a na jar druhého roka sa presádzajú do záhonov. Záhony sa musia zúrodňovať a pravidelne rýľovať.

(4) Rastlina dorastá do výšky 30 cm a do 80 - 100 cm v najväčšom priemere. Obsahuje prírodný gáfor v rôznych častiach rastliny: v listoch, vetvách, v kmeni a v koreni. Najviac gáfru obsahujú listy.

(5) Gáfor bomeolového typu z Xinghuang je jedným z prírodných obmien Cimamonium glandullferm (steny) Noes. Gáfrové stromy obsahujú rôzne množstvo gáfru a bomeolu.

Niektoré obsahujú menej bomeolu a viac gáfru, zatiaľ čo iné viac bomeolu a menej gáfru. Testovaním veľkého počtu vzoriek a na základe mnohých HPLC analýz bol vybratý druh gáfrovníka, ktorý obsahoval nad 80 % bomeolu s malým množstvom nečistôt.

3. Radix Notoginseng

a. Semená rastliny (1) Určenie Radix Notoginseng

Reakciou PCR na stanovenie molekulárnej hmotnosti boli skúmané škvrny Radix Notoginseng. Radix Notoginseng mal charakteristiký diagram DNA.

(2) Tvar a vlastnosti

Semená Radix Notoginseng majú zaoblený kruhový tvar. Semená môžu byť z rozdielneho obdobia pestovania, a to z druhého alebo tretieho roka. Dvojročné semeno je 0,45 - 0,55 cm v priemere a váži 95 - 103 gramov vo vysušenom stane. Trojročné semienka sú 0,54 - 0,65 cm v priemere a vážia 98 - 109 gramov v sušenom stave.

(3) Vhodná teplota na klíčenie semien

Vhodná teplota na klíčenie semien je 10 - 30 °C, ideálna teplota je 15-20 °C.

(4) Obsah vody

Množstvo obsiahnutej vody je od 60 - 70 %, ak obsah vody je dlhodobejšie pod 20 %, tak semienka strácajú vitalitu.

(5) Vegetatívny pokoj

Semienka majú tendenciu prejsť do vegetatívneho pokoja 45 - 65 dní po zbere.

(6) Životnosť

Semienka majú v prirodzenom stave 15-dňovú životnosť po zbere.

(7) Požiadavky na zber semien

SK 288060 Β6

Zber semien by sa mal uskutočňovať z rastlín, ktoré rastú viac ako dva roky a prosperujú a sú bez škodcov. Doporučuje sa zber z trojročných rastlín.

(8) Riadenie výsadby v rezervácii

Výsadba semien v rezervácii by mala byť lepšie riadená ako obvyklé produkčné polia. Nakazené rastliny by mali byť odstránené v každom čase a púčiky by sa nemali dostať do kontaktu so škodcami za žiadnych okolností. V priebehu periódy rašenia púčikov a listov, 3000 ppm z YunDa 120 a 400-násobným roztokom Yang Kang biologickým umelým hnojivom by mali byť postrekované dvakrát. A v priebehu kvitnutia a vytvárania plodov sa postrekuje fytokinínom.

(9) Obdobie zberu semien

Obdobie zberu semien Radix Notoginseng je od konca októbra do začiatku decembra.

(10) Spôsob zberu semien

Zber semien je závislý od zrelosti semien. Semená zo stromov, ktoré rastú silnejšie, sa zbierajú a uskladňujú osobitne. V zásade je prísny zákaz zberu z nevyvinutých rastlín.

(11) Spracovanie

Rastliny sa hneď po zbere umývajú, pričom dužina a nakazené semená sa oddeľujú. Po premytí sa rastliny sušia na slnku.

(12) Uskladnenie

Semená Radix Notoginsengu sa spracujú použitím 300-násobného roztoku 58 % metalaxyl manganátu zinku počas 30 minút. Povrch semien sa vysuší a semená sa uskladňujú vo vlhkom piesku, ktorý obsahuje 20 % vody. Je to rozhodujúci krok tohto postupu.

(13) Balenie

Konečné produkty sa balia do nekontaminovaných kontajnerov, ktoré sú označené dátumom zberu, spôsobom spracovania a číslom várky produktu.

(14) Preprava

Produkty sa prevážajú v čistých, nepremokavých a vetraných dopravných prostriedkoch takým spôsobom, aby sa zabránilo znečisteniu produktu toxickými látkami. Ak doprava trvá viac ako 8 hodín, semená by sa mali premiešať s vlhkým pieskom.

(15) Test vitality semien

Používa sa TTC metóda: Odváži sa presne jeden gram tetrazóliového prášku a rozpustí sa v 1000 ml destilovanej vody za vzniku 0,1 % roztoku TTC. Vzorka sa ponorí do roztoku a nechá sa tam 24 hodín, potom sa vyberie a polovica sa umiestni na kultivačnú platňu. Použitím pripraveného 0,1 % TTC sa vzorka zafarbí v priebehu 30 minút. Vitalita semien sa stanovuje podľa zafarbenia.

(16) Kontrola škodcov (i) Semeno sa prezerá voľným okom po uložení 500 - 1000 guľôčok vzorky na bielom hárku papiera alebo na skle. Ak sa objavia neobvyklé škvrny alebo škodcovia na povrchu vzorky, nesporne to dokazuje kontamináciu. Kontaminované vzorky sa oddelia a stanoví sa hladina kontaminácie.

(ii) Rez a kontrola: Použije sa skalpel na vyrezanie 2 otvorov na dve vzorky, z ktorých každá obsahuje 100 semien. Výpočtom počtu kontaminovaných semien sa stanoví hladina kontaminácie.

(iii) Ovoniavanie vzorky: Vzorka sa vezme do ruky a ovoňaním sa zistí akýkoľvek plesnivý zápach. Alebo jednoducho sa nechá vzorka v pohári s ohriatou vodou (60 - 70 °C), zakryje sa na 2 - 3 minúty, voda sa vyleje a semienka sa ovoňajú. Semienka by mali mať príjemnú vôňu, ak nie, tak sú pravdepodobne kontaminované.

(17) Kontrola farby

Nekontaminované semeno je svetložltej alebo bielej farby.

(18) Kontrola mikroskopom

Náhodne sa vyberie 5 skúšobných vzoriek (každá vzorka obsahuje nie menej než 50 semien), vzorky sa umiestnia na kultivačnú platňu na 24 hodín. Pozorujú sa pod mikroskopom a ak sa zistí akákoľvek choroboplodná baktéria, tak sa vypočíta úroveň znečistenia.

b. Klíčenie rastliny (1) Teplota klíčenia

Teplota klíčenia Radix Notoginseng je 1 - 20 °C, ideálna teplota je 15 °C.

(2) Obsah vody

Obsah vody v pôde používanej na klíčenie rastliny je 20 - 25 %.

(3) Uskladnenie

Vývoj Radix Notoginseng od spiaceho puku do obdobia klíčenia potrebuje 90 dní vegetatívneho pokoja. 100 ppm giberelínu môže skrátiť dormančnú dobu Radix Notoginseng.

(4) Zušľachťovanie

Čas zušľachťovania Radix Notoginseng je od začiatku decembra do konca januára. Počas zušľachťovania treba s koreňmi zaobchádzať opatrne. Sadiť treba hneď po zušľachtení.

(5) Transport

Radix Notoginseng sa nemôže prevážať na veľké vzdialenosti, pretože sa môže poškodiť. Ak je to nevyhnutné, Radix Notoginseng by mal byť umiestnený vo vetranej prepravnej skrini so zeminou, bez priameho slnečného svetla.

(6) Kontrola kvality (i) Na zváženie každej jednotky sa vyberie 300 - 500 sadeníc ako vzorka, rozdelí sa do skupín po 100 sadeníc, ktoré sa odvážia na váhe a vypočíta sa hmotnosť jednotky.

(ii) Kontrola pesticídov: zoberú sa štyri skupiny vzoriek, z ktorých každá obsahuje 100 sadeníc. Vzorky sa umiestnia na sklenú platňu a pozorujú sa voľným okom alebo sa 5 - 10-krát zväčšia na kontrolu pesticídov.

(iii) V štyroch skupinách vzoriek, z ktorých každá obsahuje 100 rastlín, sa vzorky pokrájajú a pozorujú sa pod mikroskopom.

c. Pestovanie sadeníc (1) Poľné podmienky

Sadenice Radix Notoginseng sú kultivované v čo najlepších podmienkach. Základom je používanie sústredeného pestovania a metódy pestovania vo veľkom.

(2) Prostredie

Oblasť je absolútne neznečistená. Čistota ovzdušia je nad úrovňou 2 z GB 3059-96 štandardu.

(3) Vodné zdroje

Vodné zdroje pozostávajú z dažďovej vody, podzemnej vody a prírodnej tečúcej vody. Kvalita vody v oblasti je monitorovaná s GB 5084-92 štandardom.

(4) Pôda

Radix Notoginseng sa nemôže sadiť do bahnitej pôdy, hodnota ťažkých kovov v pôde vhodná pre Radix Notoginseng musí byť v rozmedzí štandardu krajiny.

(5) Ideálna pôda

Na dosiahnutie očakávaných dobrých výsledkov sa vybrala kyslá pôda (pH 5,5 - 7,0) so stúpaním nie väčším ako 15°. Nadmorská výška nie vyššia ako 1 600 m s 8 - 12 % slnečného svitu a pri nadmorskej výške nad 1 600 m nad morom by malo byť 10-20 % slnečného svitu.

(6) Teplota

Počas klíčenia atmosférická teplota by mala byť 20 - 25 °C a teplota zeme 10 - 15 °C. V priebehu plodenia je najvhodnejšia atmosférická teplota 20 - 25 °C a najlepšia teplota pôdy je 15-20 °C.

(7) Obsah vody

Obsah vody v pôde by mal byť 25-30 %.

(8) Príprava pôdy

Pred sadením pôdu 3-krát vyhodnotíme. Pôda by mala byť vystavená slnku, aby sa vyhubili baktérie v pôde.

(9) Zaobchádzanie s pôdou

Koreň sa pred zničením chráni nasypaním 75 - 100 g vápna na štvorcový meter pred presádzaním.

(10) Význam a riadenie tieňa

Tieň je 1,8 m nad zemou s 2 m hlbokým výkopom. Najlepší prienik slnečného svetla je 8-10 %, ak oblasť je nižšie ako 1 600 m nad morom alebo 10 - 15 %, ak je oblasť vyššie ako 1 600 m nad morom. Terén by mal byť rovný; vrstva pôdy v hĺbke by mala byť sypká; zatiaľ čo povrchová vrstva zeme by mala byť pevná. Najvhodnejším obdobím na výsadbu je koniec decembra až koniec januára. Pred vysadením by mali byť semienka ponorené do 58 % metalaxylového zinku (500 - 800x) alebo 1,5 % antimycínu (200 ppm) na 30 - 50 minút a vysušené do sucha. Tým sa chráni rastlina pred chorobami (semienka s povlakom nemusia podstúpiť túto procedúru). Rastliny sa vysádzajú vo vzdialenosti 4 x 5 cm alebo 5x5 cm, 100 - 200 tisíc semien na mu zeme. Použitím špeciálneho nástroja sa vytvára plytký jarok a použitím stroja alebo ručne sa rastlina vysieva a sadí. Semienka sa úplne pokrývajú dobrou pôdou.

Potom sa vykonáva hnojenie, zavlažovanie a pletie. Burina sa stále vytrháva. Ak by sa tieň porušil, musí sa to ihneď napraviť a musí sa zaistiť správne prenikanie slnečného svetla. Ako hnojivá sa používajú prírodné hnojivá, výkaly z hydiny, popol z pecí a kostná múčka (ľudský odpad sa nemôže používať).

d. Pestovanie Radix Notoginseng (1) Topológia

Najvhodnejšia pôda je na miernom svahu pod 15°, ktorá je dobre vystavená slnečnému žiareniu.

(2) Textúra pôdy

Najvhodnejšia je hlboká sypká a piesočnatá pôda.

(3) pH pôdy by malo byť okolo 5,5 - 7.

(4) Predpestované plodiny

Kukurica, pšenica, fazuľa sa predpestovávajú na nových poliach, aby sa zamedzilo zničeniu pôdy.

(5) Nadmorská výška

Na pestovanie Radix Notoginsenguje najvýhodnejšia nadmorská výška 1 400 - 1 800 m s 23,5° stúpaním.

(6) Slnečný svit

Radix Notoginseng je rastlinou, ktorá vyžaduje len 8-20 % slnečného svitu. Množstvo slnečného svitu by sa malo upravovať v závislosti od obdobia vývinu. Veľa slnečného svitu stagnuje vývoj rastliny.

(7) Obsah vody

Obsah vody v pôde by mal byť 25 - 30 %.

(8) Hnojivá

Organické hnojivá sa používajú spolu s hnojivami obsahujúcimi zlúčeniny, mikroživiny alebo stopové prvky.

(10) Teplota

V oblasti pestovania Radix Notoginseng je odhadovaná priemerná teplota 15 - 18 °C počas roka. V priebehu klíčenia najvýhodnejšia atmosférická teplota je 20 - 25 °C a teplota pôdy 15 °C. Počas vývoja a kvitnutia je výhodné, ak sa teplota udržiava pri 25 °C. Ak je teplota nižšia ako 15 °C, môže to mať vplyv na kvitnutie.

(11) Príprava poľa

Pred pestovaním by sa malo pole poorať a až trikrát prehmúť, až kým sa štruktúra pôdy nestane prašnou.

(12) Úprava pôdy

Pred výsadbou a presádzaním sa použije 75-100 g nehaseného vápna na sterilizáciu pôdy.

(13) Štandardy na vytvorenie lôžka

HÍbka základnej zeminy je 20 - 25 cm na rovine, v kopcovitej oblasti je to 15-20 cm. Šírka lôžka je od 120 do 140 cm v tvare dlaždice. Pôda na dne základne by mala byť sypká a smerom navrch by sa mala spevňovať, čím sa zlepuje penetrácia.

(14) Namáčanie semien

V priebehu presádzania sa semeno namočí na 30 - 50 minút do 58 % metalaxylu (500 - 800x) a potom sa usuší, čím sa predchádza chorobám rastlín a eliminujú sa škodcovia.

(15) Hustota výsadby

Udržiava sa vzdialenosť 10 x 12,5 cm - 10 x 15 cm medzi rastlinami. Predstavuje to 26 - 32 tisíc rastlín na každý mu.

(16) Metódy presádzania

Sadenice sa sadia v rovnakom smere, aby sa zjednodušila kontrola. V prípade, že sa zvažuje svah, sadenice sa sadia od spodného konca smerom nahor. Prvý rad sadeníc je obrátený smerom hore, zatiaľ čo druhý rad smerom dole. Klíčky smerujú tiež nahor a spodok smeruje dovnútra.

(16) Pokrývanie pôdou

Na úplné zakrytie sadeníc tak, aby nevytŕčali korene ani klíčky, sa používa prachová, sypká a vlhká pôda.

(17) Hnojenie

Používajú sa výkaly z hydiny, popol z pece, kostná múčka, horečnato-vápenatý fosfát atď. ako špeciálne hnojivá.

Claims (7)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Spôsob prípravy Dan Shen piluliek na liečenie chronickej stabilnej angíny pectoris, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kroky:

   (a) oddelenej extrakcie Radix Salviae Miltorrhizae, Panax Notoginseng refluxom v horúcej vode a oddelenej filtrácie, (b) oddelenej koncentrácie filtrátov, (c) oddeleného prečistenia koncentrátov s použitím živicových kolón a koncentrácie, a získania prečisteného vo vode rozpustného extraktu Radix Salviae Miltorrhizae a prečisteného vo vode rozpustného extraktu Panax Notoginseng, (d) zmiešania prečistených vo vode rozpustných extraktov z kroku c) s príslušným množstvom bomeolu.
2. 2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že (1) extrakcia vo vode rozpustných zložiek Panax Notoginseng zahŕňa nasledujúce kroky:

   (a) rozdrobenie rastlín s 5 až 7-násobným množstvom vody, (b) extrakciu vo vode rozpustných zložiek Panax Notoginseng varením v nádobe pri tlaku vzduchu medzi 0,04 až 0,06 mPa počas 2 hodín, (c) opakovanie extrakcie za tých istých podmienok počas 1,5-hodiny, (d) filtráciu extraktu na site s veľkosťou ôk 150 pm, (e) prečistenie filtrátu s použitím makropórovitej adsorpčnej živice elúciou s etanolom, (f) koncentrácie eluovaných extraktov za zníženého tlaku od 0,04 do 0,06 mPa a za vákua od - 0,076 do - 0,088 mPa na hustotu 1,33 až 1,35, (2) extrakcia vo vode rozpustných zložiek Radix Salviae Miltorrhizae zahŕňa nasledujúce kroky:

   (a) rozdrobenie rastlín s 5 až 7-násobným množstvom vody, (b) extrakciu vo vode rozpustných zložiek Radix Salviae Miltorrhizae varením v nádobe pri tlaku medzi 0,04 až 0,06 mPa počas 2 hodín, (c) opakovanie extrakcie za tých istých podmienok počas 1,5-hodiny, (d) filtráciu extraktu na site s veľkosťou ôk 150 pm, (e) koncentráciu filtrátov za zníženého tlaku s tlakom vo vákuu -0,076 až -0,088 mPa, kým sa z 1 kg rastliny nezíska 1 liter, (í) precipitáciu koncentrátov s etanolom, (g) filtráciu etanolového roztoku precipitátov cez sito s veľkosťou ôk 150 pm, (h) koncentráciu filtrátov za zníženého tlaku od 0,04 do 0,06 mPa a za tlaku vo vákuu -0,076 až -0,088 mPa, (i) prečistenie koncentrátov polyamidovou chromatografiou elúciou s etanolom, (j) koncentráciu prečistených extraktov na hustotu 1,33 až 1,35, (3) a ďalej zahŕňa výrobu piluliek pozostávajúcu z nasledujúcich krokov:

   (a) zmiešanie extraktov Panax Notoginseng, extraktov Radix Salviae Miltorrhizae, syntetického bomeolu a polyetylénglykolu 6000 v pomere 4,0 : 20,6 : 1,9 : 79,5, (b) roztopenie zmesi, (c) spracovanie roztopenej zmesi na pilulky s použitím odkvapkávacieho zariadenia s nasledujúcimi charakteristikami: konštantná teplota odkvapkávacieho hrnca 89 až 93 °C, chladiaci roztok je tekutý parafín s teplotou nižšou než 8 °C, vnútorný priemer odkvapkávacej hlavice je 1,8 mm, vonkajší priemer odkvapkávacej hlavice je 2,4 mm, vzdialenosť medzi odkvapkávacou hlavicou a povrchom chladiaceho roztoku je 15 cm, (d) centrifugácia piluliek pri 800 až 1100 ot./min. na odstránenie olejov.
3. 3. Dan Shen pilulky na liečenie chronickej stabilnej angíny pectoris, vyznačujúce sa tým, že sú pripraviteľné spôsobom podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 a 2.
4. 4. Dan Shen pilulky podľa nároku 3, vyznačujúce sa tým, že obsahujú 5 až 40 % vo vode rozpustnej fenolovej kyseliny Radix Salviae Miltorrhizae, 1 až 10 % vo vode rozpustného saponínu Panax Notoginseng a 1 až 5 % bomeolu.
5. 5. Dan Shen pilulky podľa nároku 3, vyznačujúce sa tým, že obsahujú 10 až 30 % vo vode rozpustnej fenolovej kyseliny Radix Salviae Miltorrhizae, 2 až 6 % vo vode rozpustného saponínu Panax Notoginseng a 1 až 3 % bomeolu.
6. 6. Dan Shen pilulky podľa nároku 3, vyznačujúce sa tým, že obsahujú od 0,14 do 0,18 mg Danshensu na pilulku, viac než 12,12 pg sanchinozidu R1 na pilulku a viac než 56,26 pg ginsenosidu Rgl na pilulku.
7. 7. Dan Shen pilulky podľa ktoréhokoľvek z nárokov 3 až 6 na použitie na liečenie stabilnej angíny pectoris, zmiernenie angíny pectoris, zlepšenie ischemického elektrokardiogramu, zníženie užívania nitroglycerínu, zníženie zhlukovania krvných doštičiek v krvi, antioxidáciu a vychytanie voľných radikálov, liečenie poškodenia mozgu spôsobeného lipidovou peroxidáciou indukovanou voľnými kyslíkovými radikálmi, liečenie poškodenia pečene spôsobeného lipidovou peroxidáciou indukovanou voľnými kyslíkovými radikálmi, liečenie koronárneho ochorenia srdca spôsobeného lipidovou peroxidáciou indukovanou voľnými kyslíkovými radikálmi, liečenie podstatnej hypertenzie, zníženie príjmu glycerínu pacientmi s angínou a zníženie hladiny cholesterolu v sére.