KR20030070906A

KR20030070906A - 협심증용 식물 조성물, 이의 제조 방법 및 용도

Info

Publication number: KR20030070906A
Application number: KR10-2003-7008306A
Authority: KR
Inventors: 시준 얀; 나이펑 우; 찌신 구오; 쩡리앙 예; 얀 리우
Original assignee: 티안진 태슬리 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 차이나
Priority date: 2000-12-22
Filing date: 2001-12-18
Publication date: 2003-09-02
Also published as: BG66440B1; KR100577498B1; NO331678B1; DK1351698T3; NO20032893L; PL362562A1; HK1067072A1; PL209402B1; AU2002246730B2; BG108001A; MXPA03005666A; SK288060B6; CN1520307A; CN100475233C; HUP0303906A2; ES2403240T3; BRPI0116589B1; WO2002058625A3; CA2434050A1; BR0116589A

Abstract

본 발명은 살비아에 밀티오리자에 근(Radix Salviae Miltiorrhizae), 노토진셍 근(Radix Notoginseng)의 추출물 및 보르네올을 포함하는 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 치료적 적용을 위한 활성 성분인 노토진세노사이드 (Notoginsenoside) R₁및 진세노사이드(ginsenoside) R_g1을 포함한다. 본 발명은 또한 상기 조성물의 제조 방법과 상기 조성물의 개개의 유효 성분의 양의 확인 및 분석 방법을 제공한다. 끝으로, 본 발명은 본 조성물의 여러 용도를 제공한다.

Description

협심증용 식물 조성물, 이의 제조 방법 및 용도{HERBAL COMPOSITION FOR ANGINA PECTORIS, METHOD TO PREPARE SAME AND USES THEREOF}

만성 안정성 협심증은 일시적 심근 허혈에 기인한다. 아스피린, 질산염, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 및 칼슘 채널 차단제를 단독 또는 서로 조합하여 사용하는 것이 협심증용으로 통상 사용되는 약물이다.

항혈전증제로서의 아스피린은 만성 안정성 협심증 증상에 따른 치료제이다.

질산염은 협심증 전력을 치료하는데 사용되고, 예상되는 증상의 환자에서 예방용으로 성공적으로 사용될 수 있다. 모든 질산염에서 문제점인 두통으로 인해 어떤 감수성 개인에서 사용되는 것이 방지될 수 있다.

베타-아드레날린 수용체 차단제는, 비록 협심증 치료의 초석으로서 설정되어 있지만, 폐색성 기도 질환 및 중증 심실 장애를 가진 환자에게는 특히 금기이고, 당뇨 및 만성 혈관 질환, 서맥 또는 심장 폐색 환자에서는 비교적 금기이다.

칼슘 길항제는 관상동맥 및 말초 순환에서의 평활근 이완에 의해 그 효과를 달성하여, 심근 공급을 증가시키고 심근 작업을 감소시키므로 협심증에 명백히 유효하다.

대부분 환자들이 질산염 및 베타-아드레날린 수용체 차단제 또는 칼슘 길항제로 치료를 시작하여 협심증에 대한 약물 조합 치료에 진보가 있음에도 불구하고, 매우 유효하고 장시간 동안 복용할 수 있으면서도 매우 낮은 독성을 갖는 만성 안정성 협심증 약물에 대한 필요성이 있다.

상기 언급된 약물에 관련된 문제에 비추어, 만성 안정성 협심증의 표준 치료법의 대체물로서 식물 약품을 적용하기 위한 주목할만한 노력이 이루어지고 있다. 전통 중국 의약(TCM: Tranditional Chinese Medicine)이 이 점에서 많이 기여하고 있다.

미국특허 제5288485호 및 5433957호는 협심증과 같은 혈액순환 장애에 의해 야기되는 질병을 치료 또는 예방하기 위한 하이페리쿰 에렉툼 툰브(Hypericum erectum thunb)로부터의 추출물을 언급하고 있다.

미국특허 제5776463호는 협심증을 포함하는 순환성 심장 질환과 관련된 스트레스의 치료 및 예방을 위한 보리지 꽃잎(borage petals)의 추출물 또는 보리지 꽃잎을 포함하는 경구용 약학 조성물을 언급하고 있다.

또한, 하이페리쿰 에렉툼 툰브 및 보리지 꽃잎에 더하여, 다른 많은 식물들이 협심증 치료에 사용되고 있다. 이러한 식물의 하나가 서양길초(Valeriana officinalis latifolia)이다. 양 등(Yang GYet al.,1994)은 협심증 환자 82인이서양길초로 치료되었으며, 이들 중 ST-T 허혈성 변화가 치료 전 50 케이스에 ECG 상에 나타났다고 한다. 단순 협심증(검출 가능한 허혈성 발견이 없는)에 대한 그의 총 유효율은 87.80%이고; 허혈성 발견이 있는 협심증은 88.0%이었다. 또한, 서양길초가 혈장 지질 역시 저하시킬 수 있음이 밝혀졌다. 간, 신장 및 조혈 조직에 대한 어떠한 독성 작용도 발견되지 않았다(1).

우(Wu Y, 1990)는 협심증 환자 267인의 세팅에서 진통캉(xintongkang) 캡슐로 치료된 환자의 93.3%가 효과적이었다고 보고하였다.

쉔샤오 통관 피안(Shenshao tongguan pian)으로 불리우는 또 다른 식물 제제가 협심증 치료에 사용되었다. 1990년에 휴 등(Hu JXet al.)은 쉔샤오 통관 피안이 주로 인삼과 작약(Radix Paeoniae Alba) 등의 줄기 및 잎으로부터 얻은 사포닌으로 구성된다고 보고하였다. 협심증 치료의 총 유효 비율은 94.71%였다. 그리고 ECG 개선 비율은 63.38%였다. 또한, 실험실 시험에서도 쉔샤오 통관 피안이 좌심실 출력을 증진시키고, 혈액 점도를 저하시키고, 그리고 혈소판의 응집을 저해할 수 있다고 밝혔다. 급성 및 만성 독성 시험에서는 쉔샤오 통관 피안이 어떠한 독성이나 부작용도 없음을 보여주었다.

쿠오-관(Kuo-guan) 과립은 또다른 협심증용 식물 제제이다. 이 등(Li Yet al.,1990)은 협심증을 수반하는 관상동맥 심장 질환 환자 31 인에서 1 달 동안 쿠오-관 과립을 투여하기 전과 후에 혈장 아연, 구리 및 적혈구 글루타치온 퍼옥시다제의 변화를 원자흡광광도계 및 DTNB 색상 전개에 의해 측정하였음을 보고하였다. 결과로서, 치료 전에는 정상 대조군보다 환자에서 혈장 아연과 적혈구 글루타치온퍼옥시다제는 낮고 구리는 높으며(p<0.01), 치료 후에는 혈장 아연과 적혈구 글루타치온 퍼옥시다제가 증가하고 구리는 감소하였음(p<0.01)을 나타내었다. 이러한 결과는 협심증을 수반하는 관상동맥 심장 질환에 대한 쿠아-관 과립의 치료 메카니즘이 체내 미량 원소 교란에 대한 그 조절과 관련될 수 있음을 제시한다.

트리불루스 테레스트리스(Tribulus terrestris)의 사포닌은 협심증 치료를 위한 또 다른 식물 조성물이다.

푸팡 단쉔 피안(Fufang Danshen Pian)은 관상동맥 허혈에 기인하는 만성 안정성 협심증의 치료에 지시되고 1977년 이래 중국약전에 공식적으로 수록되어 수십 년 동안 임상적으로 응용되어 온 단쉔 정제(Dan Shen Tablet)의 민간 처방이다.

푸팡 단쉔 피안은 단쉔(Danshen; Radix Salviae Miltiorrhizae;단삼) 및 산치(Sanchi; Radix Notoginseng; 삼칠)을 포함하는 식물의 복합 활성 추출물을 포함한다. 두 식물은 모두 200년에 완성된 쉔 농 벤 카오 징(Shen Nong Ben Cao Jing)(Shen-nong's Herbal Pharmacopoeia)에 최초 기재되었다. 푸팡 단쉔 피안은 또한 천연 보르네올의 변형인 합성 보르네올(Bingpian)도 포함한다. 천연 보르네올은 659년 경에 편찬된 탕 벤 카오(탕 왕조의 식물 약전)에 최초 기재되었다.

리 쳉-주 등(Li Cheng-zhuet al, 1979)은 (Acta. Acad. Med. Prim. Shanghai)에 단쉔(Radix Salviae Miltiorrhizae)의 혈소판 저해 효과 실험에 대하여 보고하였다.in vitro혈전증, 혈소판의 기능 및 응고, 섬유소 분해에 대한 효과가 토끼에서 관찰되었다. 단쉔(Radix Salviae Miltiorrhizae)의 주사후, 다음 3 경로가in vitro혈전증의 저해에 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다: (1) 혈소판 기능의 저해; (2) 응고 기능의 저해; 및 (3) 섬유소 분해 촉진. 이중에서, 전자의 2 메카니즘이 더 중요하게 기능한다. 결과는 혈전증 질환, 특히 동맥 혈전증 질환의 치료에서와 일치한다.

치앙 등(Chiang WTet al, 1982)은 (Acta. Acad. Med. Prim. Shanghai)에 개 허혈성 심근 및 분리된 돼지 관상동맥에서 살비아 밀티오리짜(Salvia miltiorrhiza)의 "단쉔수(Danshensu)" 및 다른 두 수용성 성분의 효과를 보고하였다. 살비아 밀티오리자 분제(Salvia miltiorrhiza Bunge)로부터 분리된 3 가지 새로운 수용성 성분, 즉 단쉔수(DS-182, D(+)-3,4-디하이드록시페닐 락트산), 프로토카투-알데히드(protocathu-aldehyde; PCAD) 및 정제되지 않은 디테르펜 산(DS-187)의 효과가 디피리다몰의 효과와 비교되었다. 결과는 (1) 마우스에서 DS-182는 저산소증에 대하여 유의적인 보호를 한 반면, PCAD는 효과가 없었고; (2) DS-182는 피투이트린(pituitrin)-유도의 심전도상의 허혈성 ST-T 증가를 무효화할 수 있지만, 감소된 심박수에 대한 영향은 없었다. DS-187, PCAD 및 디피리다몰은 불완전한 보호만을 나타내었고; (3) 좌측 관상동맥의 전부 하향 분지의 결찰로 만들어진 급성 경색 개 모델에서, DS-182의 정맥주사에 의해 달성된 잇점은 좌심실 기능, 좌심실 피크 수축기 압력(LVPSP) 및 좌심실 말단 확장기 압력(LVEDP)에 있어서, DS-187 및 PCAD 보다 우수함을 입증하였다. 반면에, PCAD는 LVPST 및 LVEDP에 대하여 부정적인 결과를 낳았다. 정맥주사로 투여된 디피리다몰은, 비록 LVEDP를 변화시키지는 못하였지만, 현저한 저혈압 효과와 함께 LVPSP를 유의적으로 억제하였다. 살비아의 이 모든 성분들과 디피리다몰은 최종 심근경색 크기를 유의적으로 감소시켰으며(N-BT 평가); DS-182는 더 효과적이고, 디피리다몰과 DS-187은 그 다음인 반면, PCAD는 가장 적었으며; (4) 분리된 관류 돼지 관상동맥 표본에서, DS-182는 관상동맥의 저항을 유의적으로 감소시킨 반면, DS-187, PCAD 또는 살비아의 다른 성분인 탄쉬논(Tanshinone) 나트륨 Ⅱ-A 설포네이트의 하나는 그것을 증가시켰다. 분리된 관상동맥 표본에 대한 모르핀과 프로프라놀롤의 수축 작용은 DS-182의 사전 투여에 의하여 길항되었다. 이 모든 것은 허혈성 심장질환의 치료에서 단쉔수가 살비아 밀티오리자의 주된 활성 성분일 수 있다는 것과, 프로프라놀롤 또는 모르핀과 그의 동시 사용이 유익할 수 있음을 제시한다.

리 쳉-주 등(L Cheng-zhuet al, 1983)은 (Chin. J. Integr. Med.)에 살비아에 밀티오리자에 근(Radix Silviae Miltiorrhizae)의 항응고 효과를 보고하였다. 단쉔수(Danshensu)는 살비아에 밀티오리자에 근으로부터 추출한 수용성 단량체이다. 이는 시판되는 살비아에 밀티오리자에 근의 주성분이기도 하다. 본 연구에서는 단쉔수가in vitro에서 (ADP에 의하여 유도되는) 혈소판의 응고인 혈전증, 그리고 내부 및 외부 응고 시스템을 저해하고; 혈소판의 수를 감소시키고 피브린 또는 피브리노겐의 파괴를 촉진한다는 것을 입증하였다. 이 효과는 토끼에서 20 ㎎/㎏의 1 회 주사 후 30 분에 피크에 도달하여 1 시간 동안 지속되고 서서히 회복되었다. 주사 4.5 시간 후에는,in vitro혈전증 테스트를 제외하고는 모든 것이 정상으로 회복되었다.

첸 장후아(Chen Zhanghua, 1987)는 Acta. Acad. Med. Prim. Shanghai에 실험적 미소순환 교란 및 혈장 젖산 농도에 대한 "단쉔수(Danshensu)"의 효과에 대하여보고하였다. 천연 단쉔수는 살비아에 밀티오리자에 근(RSM)으로부터 추출한 수용성 단량체이다. 토끼에서 미소순환 교란은 고분자량 덱스트란의 정맥주사에 의하여 유도되었다. 천연 단쉔수(4-6 ㎎/㎏ 용량)는 구상 결막에서 모세혈관의 수를 현저하게 증가시키고, 또한 토끼에서 혈장 젖산의 농도도 감소시켰다. 장간 미소순환 부전이 마우스에서 국소 노르아드레날린(4 g) 점적에 의하여 생성되었다. 천연 단쉔수는 동맥을 확장하고 혈류 속도를 가속하여 미소순환 혈액 정체를 제거하였다. 본 실험에서는, 합성 단쉔수의 효과가 함께 측정되었다. 결과적으로, 미소순환 교란의 경감에 있어서 천연 및 합성 단쉔수 사이에는 어떠한 유의적인 차이도 없음을 보여주었다.

선 지-밍 등(Sun Xi-minget al, 1991)은 단쉔(Salvia miltiorrhiza) 추출물의 새로운 약물학적 작용을 보고하였다. 이 논문에서는 세포 배양 연구에서 D(+)-(3,4-디하이드록시페닐)락트산의 나트륨 염을 포함하는 단쉔(Salvia miltiorrhiza) 추출물이 세포내 콜레스테롤의 생합성 및 항-리포프로테인 산화를 감소시키는 새로운 작용을 갖는다는 것을 보고하고 있다. 대조군과 비교할 때, 그의 전기이동 속도는 현저하게 감소하고 MDA 함량 및 세포독성은 명백히 감소하였다. 이들 결과는 D(+)-(3,4-디하이드록시페닐)락트산의 염이 동맥경화증의 예방 및 치료에 유효할 수 있음을 나타낸다.

젱 루오-주안 등(Zheng Ruo-xuanet al, 1992)은 (Chin. J. Integr. Med.)에 마우스에서 관상동맥 결찰에 의하여 유도되는 심근 허혈에 대한 살비아에 밀티오리자에 근의 예방 효과를 보고하였다. 관상동맥 결찰에 의한 마우스에서의 급성 심근허혈에 대한 명백한 예방 효과는 살비아에 밀티오리자에 근의 물 추출물(5 g 조약물(crude drug)/㎏)의 i.p.후에 얻어질 수 있었다. 대조군과 비교할 때 치료군에서 심근 허혈에 기인한 ECG 상에서의 S-T 단편 상승은 훨씬 낮았고, 좌심실의 허혈 크기는 작고 생존율은 높았다.

우 야오-종 등(Wu Yao-zhonget al, 1995)은 (Acta. Nanjing Univ. Trad. Chin. Mater. Med.)에 울혈 제거에 의한 혈류 개선에 있어서의 살비아에 밀티오리자에 근의 효과에 대하여 보고하였다. 살비아에 밀티오리자에 근의 약물학적 연구는 통상적인 것이다. 그러나, 혈소판에 의하여 생성된 PGI2, ET, 및 TXA2를 평가하는 것에 의한 실비아에 밀티오리자에 근에서의 유동학적 연구는 거의 없다. 토끼에서 혈전증, PT, KPTT, FG, ESR 및 HCT의 변화, 및 혈소판의 응집에 대한 실비아에 밀티오리자에 근의 영향이 본 발명에서 평가되고 있다. 결론은 실비아에 밀티오리자에 근이 TXA2의 합성을 감소시키고, 혈소판 응집 및 혈전증의 증진 효과를 감소시킨다는 것이다.

쉬 린 등(Shi Linet al, 1990)은 (Acta. Pharmacol. Sin.)에 경동맥에서의 PGI₂증가 및 혈소판에서의 TXA2 감소에 대한 파낙스 노토진셍(Panax Notoginseng;삼칠)의 총 사포닌의 효과에 대하여 보고하였다. 파낙스 노토진셍(PNS)의 총 사포닌은 8 주 동안 토끼에게 경구로 100 ㎎/(㎏·일)을 주었다. 대동맥 동맥경화증 병변 형성은 대조군과 비교할 때 억제되었다. 경동맥에서의 프로스타사이클린 및 토끼의 혈소판에서의 트롬복산 A2의 함량에 대한 PNS의 효과를 검사하기 위하여 방사선면역검사가 사용되었다. 10일 동안 PNS 25, 50, 100 ㎎/(㎏·일)의 경구 투여는 대조군과 비교할 때 경동맥에서 프로스타사이클린의 증가 및 혈소판에서 트롬복산 A2의 감소를 야기하였다. 이들 결과는 PNS의 항-동맥경화 작용이 프로스타사이클린과 트롬복산 A2 사이의 불균형 정정의 결과일 수 있음을 보여주었다.

리 징 등(Li Xinget al, 1990)은 (Acta. Pharmacol. Sin.)에 래트에서 허혈과 재관류에 의하여 유도된 실험적 심근 손상에 대한 파낙스 노토진셍 사포닌의 보호 효과를 보고하였다. 심장 허혈과 재관류에 의하여 유도된 심근 손상에 대한 파낙스 노토진셍(PNS) 및 PNS로부터의 정제된 진세노사이드 R_b1및 R_g1의 총 사포닌의 효과가in situ및in vitro에서 래트 심장을 사용하여 연구되었다. 페노바비탈-마취된 래트에서, PNS 전처치(100 및 200 ㎎/㎏)는 좌측 하향 관상동맥 결찰(40 분) 및 재관류(120 분) 후 심근 경색 크기에서 대조군과 비교하여 유의적인 감소를 제공하였다. PNS 12.5 및 25 ㎎/ℓ, R_b110 ㎎/ℓ 및 R_g110 ㎎/ℓ은 광범위한 허혈(40 분)과 재관류(15 분)가 있는 관류된 유리 래트 심장에서 대조군과 비교하여 심장 CPK 유리를 저하시키고, 심근 Ca⁺⁺축적을 약화시키고, 말론디알데히드(MDA) 생산을 감소시키고 수퍼옥사이드 디스뮤타제(SOD) 활성의 감소를 방지하였다. 결과로서는, PNS, R_b1및 R_g1이 심장 허혈을 방지한다는 것과 이 작용이 지질 과산화의 저해와 관련되는 것으로 사료된다는 것이다.

황 콩 등(Huang Conget al, 1991)은 (Chin. Bull. Pharmacol.)에 의식 있는 토끼에서 심근 허혈과 재관류 손상에 대한 파낙스 노토진셍 사포닌의 효과를 보고하였다. 의식 있는 토끼에서 심근 허혈과 재관류 손상에 대한 파낙스 노토진셍 사포닌(PNGS)의 효과가, 심전도(ECG), 크레아티닌 포스포키나제(CPK)의 활성 및 락테이트 데하이드로게나제(LD)에서의 변화와 허혈 면적 크기의 관찰과 함께 연구되었다. 50 ㎎/㎏ 및 100 ㎎/㎏ 용량에서의 PNGS는 심근 허혈 면적의 크기를 유의적으로 감소시켰다. 이들 결과는 PNGS가 심근 허혈과 재관류 손상에 대한 보호 효과를 갖는 것임을 제시한다.

모 퀴-지안 등(Mo Qi-xianet al, 1987)은 (Propriet. Trad. Chin. Med. Res.)에³H-보르네올의 동력학을 보고하였다. 보르네올 향료의 회복을 유도하는 메카니즘에 집중하기 위해, 3H-보르네올의 동력학이 정맥 주사와 경구 투여에 의하여 시행되었다. 결과로서는, 반감기가 3H-보르네올의 1회 정맥 주사 후 2.8 분이었음을 밝혔다. 이는 약물이 투여후 관련 기관 및 조직으로 신속하게 분포되고 신속한 효과를 발휘한다는 것을 제시한다. 생체내 분포는 심장, 폐, 간, 신장 및 뇌 등과 같이 혈류가 풍부한 기관 및 조직에 집중되었다. 이는 어떤 이론적 근거에서 임상적 응용을 제공한다. 약물의 경구 투여후 감소 반감기가 5.3 시간이므로, 이는 경구 보르네올이 축적을 유도하지 않을 수 있지만 생체이용률이 낮다는 것을 제시한다. 약물 용량과 제형과의 관계를 검토하기 위하여 추가적인 연구가 행하여졌다.

첸 티에-펭 등(Chen Tie-fenget al, 1990)은 (Acta. Pharmacol. Sin.)에 합성 보르네올에 의한 테트라메틸피라진의 흡수 증진을 보고하였다. 스프라그-돌리 래트에 테트라메틸피라진 포스페이트(TMP) 5 ㎎/㎏을 보르네올 5 ㎎/㎏과 함께, 또는 보르네올 없이 급여하였다. 혈장 TMP 농도는 GC법에 의하여 분석하고 데이터는 NONLIN 프로그램에 의해 처리하였다. Cmax는 각각 931 및 562 ng/㎖인 한편 (p<0.01); AUC는 각각 68849 및 37174였다(p<0.05). 이는 보르네올이 TMP의 흡수를 증진하지만 제거에 있어서는 그렇지 않음을 제시한다.

주 웨이 등(Xu Weiet al, 1995)은 (Pharmacol. Chin. Med. Clin.)에 래트와 마우스 뇌에서 설파다이아진 나트륨과 에반스 블루의 분포에 대한 멘톨과 보르네올의 효과를 보고하였다. 멘톨(1.5 g/㎏, ig) 및 보르네올(1.5 g/㎏)은 래트에서 설파다이아진 나트륨 분포 반감기 t_1/2를 연장시켰다. 경구적으로 주어진 상기 용량의 멘톨과 보르네올은 래트 뇌에서 설파다이아진 나트륨의 농도를 증가시켰다. 멘톨 (ig 0.5 g/㎏ 3 일 동안) 및 보르네올(ig 0.5 g/㎏ 3 일 동안)은 마우스 뇌에서 에반스 블루의 농축을 촉진하였지만 농축값은 허혈-재관류 손상으로 고통받는 마우스보다 유의적으로 낮았다. 결과로서는, 멘톨과 보르네올이 뇌-혈관 장벽에 손상 없이 뇌-혈관 장벽에서 설파다이아진 나트륨 전달을 증진시킬 수 있음을 제시한다.

미국에서는 관상동맥경화증성 심장 질환이 심장혈관 부전 및 사망의 가장 흔한 원인이다.

아테롬성 동맥경화증(Atherosclerosis)은 대형 및 중형-크기 동맥 벽의 내층에서의 콜레스테롤, 지질, 및 세포 파편의 황색 플라크로 특징지어지는 동맥 질환이다. 증상은 지방성 줄무늬로 시작하여 점차 섬유상 플라크나 아테롬성 병변을 형성한다. 혈관벽은 두껍고, 섬유성, 그리고 석회화된다. 동맥내강은 좁아진다.

많은 아테롬성 동맥경화증 플라크가 안정적으로 남아있거나 점차 진전된다. 다른 경우 파열되어 출혈, 혈소판 활성화, 이에 따른 혈관내 혈전증을 야기한다. 관상동맥 혈전증은 부분적 또는 완전한 혈관 폐색을 야기하고, 혈류를 손상시키고, 이에 따라 불안정성 협심증 또는 심근 경색으로 진행된다. 또는, 파열된 플라크가 재안정화되어, 종종 더 심한 협착증으로 될 수 있다.

운동과 정신적인 스트레스가 심근 산소 요구를 증가시킨다. 정상적인 생리 조건 하에서 증가된 심근 산소 요구는 소동맥 확장에 의하여 충족되어 혈류가 증가된다. 동맥경화증이 있을 경우, 소동맥은 기초적인 요구에 맞추기 위하여 최대한으로 확장될 수 있다. 이러한 확장된 소동맥은 증가된 심근 산소 요구에 맞추지 못할 수 있다. 산소 요구가 산소 공급을 능가할 때, 심근의 허혈이 일어난다. 또는, 심한 혈관 폐색이 혈류를 제한하여 심근 허혈을 야기할 수도 있다. 일시적 심근 허혈의 임상적 발현이 협심증으로, 이는 질식 및 임박한 사망의 느낌을 수반하거나 수반하지 않는, 종종 팔, 특히 좌측 팔로 전파되는 격발성 흉부 통증이다.

협심증은 두 가지로 세분된다: 안정성 및 불안정성. 안정성 협심증은 대부분의 경우 증가된 심근 산소 요구에 의해 야기된다. 따라서 안정성 협심증은 운동, 정신적 스트레스 등과 같은 심근 산소 요구를 증가시키는 자극에 따라 예상 가능한 빈도 및 지속 시간으로 발작한다. 대조적으로 불안정성 협심증은 자극 없이 발작하고 보통 심근으로의 감소된 산소 공급에 의하여 야기된다. 플라크 파열, 혈소판 응집, 및 관상동맥 혈전증은 심근으로의 산소 공급을 감소시킨다.

협심증은 여러가지 약물, 외과적 절차, 관상동맥 바이패스 이식, 풍선-혈관술(balloon-angioplasty), 스텐트 배치(stent placement) 등으로 치료된다. 안정성 협심증을 위한 요법은 일차적으로 예방적 수단 뿐 아니라 심근 산소 요구를 최소화하는 것이다. 급성 증상의 불안정성 협심증을 위한 요법은 일차적으로 혈소판 활성화 저해 및 혈전 용해이다.

만성 안정성 협심증을 위한 최근의 치료제는 니트로글리세린, 다른 질산염들, 칼슘 채널 차단제 및 베타-아드레날린 작동성 수용체 차단제이다. 다른 약물과 함께 또는 단독으로 투여되는 이들 약물은 협심증을 치료하기 보다는 경감 또는 예방한다.

협심증 발작시, 니트로글리세린은 증상을 완화시키기 위해 설하 (sublingually)로 투여된다. 니트로글리세린은 운동 및 스트레스로 야기되는 협심증 발작을 예방하기 위해 적용되기도 한다. 질산염은 협심증 발작을 예방하기 위하여 적용된다. 니트로글리세린과 질산염은 일차적으로 혈관 평활근을 이완시키고, 심근 활성을 감소시키고, 이에 따라 심근 산소 요구를 감소시키는 것에 의해 그 효과를 중재한다. 부작용은 맥동성 두통, 현기증, 쇠약감, 직립성 저혈압, 빈박 등이다.

프로프라놀롤과 같은 베타-아드레날린 작동성 수용체 차단제는 운동 및 스트레스 동안 심근 산소 요구를 감소시키는 것에 의하여 협심증을 예방하는데 적용된다. 주된 적용 금기는 기관지 경련성 질환, 서맥성 부정맥, 및 명백한 심부전이다. 천식 및 다른 기도 폐색 형태의 환자에 있어서, 베타-차단제는 그 증상을 악화시킬 수 있다.

칼슘 길항제는 심근의 산소 요구를 감소시킴으로써 협심증을 예방하도록 적용된다. 심근은 정상적 기능을 위해 칼슘 유입에 의존한다. 칼슘 유입을 저해하는 것에 의해, 칼슘 길항제는 혈관 평활근을 이완시키고, 심근 활성을 저하시키고, 심근에 의한 산소 요구를 감소시키고, 이에 따라 협심증을 예방할 수 있다. 칼슘 길항제는 부작용을 갖는다. 완화한 부작용은 홍조, 부종, 현기증, 오심 등이다. 심근으로의 칼슘 유입의 과도한 저해는 심장 정지, 서맥, 동맥심실 폐색, 울혈성 심부전 등과 같은 심한 부작용을 야기할 수 있다. 베타-아드레날린 작동성 약물과의 조합으로, 종종 칼슘 길항제의 부작용이 증가한다.

중국에서는, 기원전 200년(쉔-농의 식물 약전) 이후 파낙스 노토진셍 및 살비아에 밀티오리자에 근이 심장혈관 질환 치료에 사용되어왔다. 파낙스 노토진셍은 협심증 치료에 사용되어왔다. 살비아에 밀티오리자에 근은 혈액순환을 촉진하고 혈액 정체를 분산시키기 위하여 사용되어왔다. 많은 전임상 및 임상 연구에서 파낙스 노토진셍과 살비아에 밀티오리자에 근의 유효성과 안전성이 알려져있다.

전통 중국 의약은 여러 가지 식물의 혼합물로 달이는 것을 필요로 한다. 관상동맥 심장 질환을 치료하기 위한 변형된 형태의 중국 의약이 단쉔 정제이다. 단쉔 정제는 종종 직경이 1 ㎝만큼 큰 대형의 유질성 구이다. 단쉔 정제는 살비아에 밀티오리자에의 추출물, 파낙스 노토진셍 분말 및 합성 보르네올로 만들어지고, 1977년 이래 중국 약전에 수재되어 있고, 수십 년 동안 심장혈관 질환을 치료하는데 사용되어왔다.

개시된 단쉔 환(Danshen pill; DSP) 또는 소위 강심제 환은 관상동맥 심장질환을 위한 신세대의 중국 의약이다. 중국 의약은 식물의 종류 뿐 아니라 식물의 비율이 처방마다 다른 여러 식물로 구성된다. 품질 관리를 위하여, DSP는 표준 제형으로 제조된다. DSP의 치료 성분은 살비아에 밀티오리자에 근의 수용성 추출물 10-30 % 및 때때로 약 20 %, 파낙스 노토진셍의 수용성 추출물 (2-6 %), 및 보르네올 (1-3 %)이다. 또한, 협심증을 신속하게 경감시키기 위해, DSP는 설하 투여로 즉시 용해되고, 심근으로 빨리 전달되고, 이에 따라 협심증을 신속히 경감시킬 수 있는 소형의 환제로 제조된다.

DSP는 전임상 및 임상 연구에서 관상동맥 허혈에 의해 야기되는 심장혈관 질환의 예방 및 치료에 효과적이고 비독성인 것으로 입증되어있다. 또한, 관상동맥 질환 치료에 있어서 단쉔 정제에 대한 DSP의 우수한 효능은 임상 및 전임상 연구에서 알려져있다.

DSP는 1998년 이래 중국 약전의 추보판에 수재되어 있으며, 중국 보건성에 의해 승인되어, 1993년 이래 중국에서 의약품으로 시판되고, 5백만 이상의 사람들에 의해 사용되고 있다.

본 출원 전체를 통하여 여러 간행물이 언급되고 이 간행물들의 완전한 인용은 청구의 범위 앞의 명세서 말단에 있는 참고문헌에서 발견될 것이다. 이들 간행물의 개시는 여기에 기술되고 청구된 발명의 시기에 본 분야의 당업자의 상태를 충분히 기술하기 위하여 본 출원에 참고로 도입된다.

도 1은 제조번호 1999086,

도 2는 제조번호 19990815,

도 3은 제조번호 19990823.

핑거프린트 피크의 위치: 피크 1 및 2로 구성되는 그룹 Ⅰ(유지 시간 범위 7 내지 15 분); 피크 3 및 4로 구성되는 그룹 Ⅱ(유지 시간 범위 15 내지 20 분); 피크 5, 6, 7 및 8로 구성되는 그룹 Ⅲ(유지 시간 범위 20 내지 40 분). 전체적으로 보면, 그룹 Ⅰ 내 피크의 빈도가 가장 크고, 피크 1의 높이가 피크 2와 비슷하다. 그룹 Ⅱ 내 피크들은 나란히 서서 거의 같은 높이를 갖고 빈도는 매우 작다. 그룹 Ⅲ은 4 개의 피크를 포함하고, 이들의 높이는 점차 증가한다. 이들 3 그룹은 단쉔 점적 환제(dripping pills)의 대표적 핑거프린트를 포함한다.

개시된 단쉔 환(Dan Shen Pill; DSP)은 표준화된 처방으로 제조되는 관상동맥 심장질환 치료를 위한 신세대 중국 의약품이다. DSP는 표준화된 양의 파낙스 노토진셍 추출물, 살비아에 밀티오리자에 추출물 및 보르네올을 포함한다.

파낙스 노토진셍은 협심증을 경감 및 예방하기 위하여 포함된다. 살비아에 밀티오리자에 근은 혈소판 활성화를 저해하고, 관상동맥 혈전증을 예방하고, 이에따라 혈액순환을 촉진하기 위하여 포함된다. 보르네올은 심근으로 치료 성분의 효과적인 전달을 위하여 포함된다.

DSP는 약 25 ㎎ 정도의 작은 환제로서 제조되는데, 이것은 설하 투여로 즉시 용해되어 그 치료 효과를 신속하게 전달할 수 있다. 협심증을 경감 및 예방하는 DSP의 효능은 전임상 및 임상 연구에서 입증되었다.

본 발명은 DSP 또는 다른 작은 크기의 환제가 제조될 수 있는 점적 장치를 개시한다.

본 발명은 박층크로마토그래피(TLC), 고속액체크로마토그래피(HPLC) 등과 같은 분석 기술을 적용하여 약물 중의 치료 성분을 확인 및 정량하는 것에 의하여 약물의 품질을 관리하는 방법을 개시한다.

본 발명은 다음을 포함하는 단쉔 환(DSP) 약물의 조성물을 개시한다:

(a) 살비아에 밀티오리자에 근(Radix Salviae Miltorrhizae)의 [수용성] 추출물, 파낙스 노토진셍(Panax notoginseng)의 [수용성] 추출물, 및 [합성] 보르네올;

(b) 살비아에 밀티오리자에 근, 노토진셍, 보르네올, 및 담체; 그리고

(c) 살비아에 밀티오리자에 근, 파낙스 로토진셍, 보르네올, 및 약제학적 담체.

상기 약물의 실시예에서, 살비아에 밀티오리자에 근 및 파낙스 노토진셍은 중국에서 AD 200년 이래로 관상동맥 심장질환 치료에 사용되었다. 파낙스 노토진셍은 협심증 치료에 사용되고, 살비아에 밀티오리자에 근은 혈액순환을 촉진하기 위해 사용된다. 보르네올은 표적 기관으로 치료 성분의 신속한 전달을 양호하게 하기 위하여 채용된다. 천연 보르네올은 중국에서 AD 600년 이래로 사용되어왔다. 보르네올이 거의 멸종이므로, DSP는 합성 보르네올을 포함한다.

본 발명은 다음을 위한 DSP의 사용을 제공한다:

(a) 관상동맥 심장질환의 치료;

(b) 다른 약물과 함께 관상동맥 심장질환의 치료;

(c) 관상동맥 심장질환의 1차적 예방;

(d) 다른 약물과 함께 관상동맥 심장질환의 1차적 예방;

(e) 관상동맥 심장질환의 2차적 예방;

(f) 다른 약물과 함께 관상동맥 심장질환의 2차적 예방;

(g) 협심증 환자에 의한 질산염 섭취의 감소; 및

(h) 혈청 콜레스테롤 농도의 감소.

DSP의 한 실시예에서, 적응증은 관상동맥경화증으로, 예를 들어 협심증을 경감시키고, 운동과 스트레스에 의해 야기되는 협심증을 예방하고, 그리고 혈소판 응집을 저해하는 것에 의해 혈액순환을 촉진하여 관상동맥 혈전 형성을 방지하기 위해 사용되는데 이에 한정되는 것은 아니다. DSP는 협심증을 경감 및 방지하기 위하여 종종 사용되는 니트로글리세린 섭취를 감소시키기 위하여 적용될 수 있다. DSP는 또한 혈장 콜레스테롤 농도를 감소시키기 위하여 적용되어 새로운 동맥경화증 병변의 형성을 방지하기 위하여 적용될 수 있다. 동맥경화증은 혈관벽에 침착되는 콜레스테롤 층에 의하여 종종 개시된다.

본 발명은 다음 단계를 포함하는 분석 기술을 사용하여 치료 성분을 분석 및 확인하는 것에 의하여 약물 내의 치료 성분의 조성 및 농도를 표준화함으로써 약물의 품질을 관리하기 위한 방법을 개시한다:

(a) 분석 기술을 사용하여 약물을 분획하고; 그리고

(b) 표준품으로서 관련된 정제 성분의 분석 프로파일과 비교하는 것에 의해 약물 내에 함유된 치료 성분을 확인 및 정량하는 것.

상기 발명의 한 실시예에서, 분석 기술의 예는 박층크로마토그래피, 고속액체크로마토그래피 등이다. 치료 성분의 정제된 표준품은 약물에서 확인된 주요 활성 성분이다. 예를 들어, DSP 활성 성분의 정제된 표준품은 사포닌, 단쉔수와 같은 페놀산, 보르네올 등이다. DSP의 활성 성분은 고속액체크로마토그래피에서 유지 시간과 같은 DSP 분획의 위치 또는 박층크로마토그래피에서 DSP 분획의 위치 및 색상을 정제된 표준품의 특성과 비교하는 것 등에 의하여 확인되는데, 이들만으로 한정되는 것은 아니다. DSP의 활성 성분은 DSP의 활성 분획의 크기를 알려진 양의 표준품의 크기와 비교하는 것에 의하여 정량된다. 예를 들어, DSP에 포함된 사포닌의 양은 알려진 양의 정제된 사포닌의 표준 곡선과 비교하는 것에 의하여 결정된다.

다른 실시예에서, DSP는 살비아에 밀티오리자에 근의 수용성 페놀산 5-40 %, 파낙스 노토진셍의 수용성 사포닌 1-10 %, 및 보르네올 1-5 %를 포함한다.

또 다른 실시예에서, DSP는 살비아에 밀티오리자에 근의 수용성 페놀산 10-30 %, 파낙스 노토진셍의 수용성 사포닌 2-6 %, 및 보르네올 1-3 %를 포함한다.

본 발명은 쉽게 용해되어 기관으로 용이하게 전달될 수 있는 소형 약물을 제조하기 위한 점적 장치(dropping machine)를 개시하는데, 이는 다음 부품을 포함한다:

(a) 온도 범위가 [60-100][더욱 바람직하게는 89-93 ℃]인 [하나의 점적 포트(a dropping pot)][점적 포트들(dropping pots)];

(b) 온도가 8 ℃ 보다 낮은 유동 파라핀 냉각 용액;

(c) 내경 1.8 ㎜ 및 외경 2.35 ㎜의 점적 헤드; 그리고

(d) 냉각 용액의 표면으로부터 약 [15 m] 거리에 있는 [점적 헤드(dropping head)].

상기 장치의 용도의 한 실시예는 투여 즉시 용해될 수 있는 소형 환제를 제조하는 것이다.

다른 실시예에서, 소형 환제의 크기는 다음과 같다:

(a) 직경 0.33-0.34 ㎝;

(b) 중량 21.25-28.75 ㎎; 그리고

(c) 비중 1.13-1.40 ㎎/㎣.

단쉔 환(DSP)의 제조

DSP는 약 25 ㎎의 소형 환제로, 치료 성분으로 삼칠(Notoginseng)의 수용성 추출물, 단삼(Salviae)의 수용성 추출물, 및 합성 보르네올을 포함한다.

DSP의 제조를 위하여, 삼칠과 단삼을 별도로 환류 시스템에서 열수로 추출하고 여과한다. 여액을 감압 조건 하에서 농축하고, 여과 및 침전시켰다. 농축물을 수지 컬럼을 사용하여 정제하고 감압 조건 하에서 농축하였다. 이와 같이 얻어진 정제된 수용성 추출물을 합성 보르네올 및 약제학적 담체와 혼합하였다. 혼합물을 특정 점적 장치를 사용하여 소형 환제로 만들었다. DSP의 품질은 그 주요 치료 성분인 사포닌, 단쉔수와 같은 페놀산 및 보르네올의 양 뿐 아니라 비율을 표준화하는 것에 의하여 관리된다. 박층크로마토그래피, 고속액체크로마토그래피, 핑거프린팅 및 다른 분석 기술이 DSP 내의 치료 성분을 확인하고 정량하는데 사용된다.

DSP의 제조

1. 파낙스 노토진셍의 수용성 성분의 추출

(a) 5-7 배의 물로 식물을 희석.

(b) 공기압 0.04-0.06 mPa의 탱크 내에서 2 시간 끓이는 것에 의해 파낙스 노토진셍의 수용성 성분을 추출.

(c) 동일 조건 하에서 1.5 시간 추출을 반복한다.

(d) 100-메쉬 망으로 추출물을 여과.

(e) 대형기공의 흡수 수지를 사용하여 에탄올로 용출시켜 여액을 정제한다.

(f) 0.04-0.06 mPa 까지의 공기 유입 및 -0.076∼-0.088 mPa 까지의 진공을 갖는 감압 조건 하에서 밀도가 1.33-1.35로 될 때까지 용출된 추출물을 농축.

2. 살비아에 밀티오리자에 근의 수용성 성분의 추출

(a) 5-7 배의 물로 식물을 희석.

(b) 공기압 0.04-0.06 mPa의 탱크 내에서 2 시간 끓이는 것에 의해 살비아에 밀티오리자에 근의 수용성 성분의 추출.

(c) 동일 조건 하에서 1.5 시간 추출을 반복한다.

(d) 100-메쉬 망으로 추출물을 여과.

(e) -0.076∼-0.088 mPa의 진공압을 갖는 감압 조건 하에서 개시 식물 1 ㎏이 1 ℓ가 될 때까지 추출물을 농축.

(f) 에탄올로 농축물의 침전.

(g) 100-메쉬 망을 통해 에탄올 추출물 용액을 여과.

(h) 유입 공기압이 0.04-0.06 mPa이고 진공압이 -0.076∼-0.088 mPa인 감압 조건 하에서 여액을 농축.

(i) 폴리아미드 크로마토그래피에 의해 에탄올로 용출하면서 농축물을 정제한다.

(j) 밀도가 1.33-1.35로 될 때까지 정제된 추출물을 농축한다.

3. DSP 생산

(a) 파낙스 노토진셍의 추출물, 살비아에 밀티오리자에 근의 추출물, 합성 보르네올 및 폴리에틸렌글리콜 6000을 4.0:20.6:1.9:79.5의 비율로 혼합한다.

(b) 혼합물을 용해.

(c) 다음 특징을 갖는 점적 장치를 사용하여 용해된 혼합물을 DSP로 제조:

점적 포트의 온도는 항상 89-93 ℃로 유지하고, 냉각 용액은 그 온도가 8 ℃ 보다 낮은 유동 파라핀이고, 점적 헤드의 내경은 1.8 ㎜, 점적 헤드의 외경은 2.4 ㎜, 점적 헤드와 냉각 용액 표면 사이의 거리는 15 ㎝.

(d) 오일을 제거하기 위해 800-1100 rpm에서 15 분 동안 환제를 원심분리.

DSP의 품질 관리

DSP는 확인된 치료 성분인 프로토카테퀵 알데히드(protocatechuic aldehyde)와 사포닌 뿐 아니라 여러 다른 성분들을 함유한다. 식물 중 이들 화합물의 함량은 식물의 롯드(lot) 별로 다르다. DSP 내 치료 성분들의 함량을 표준화하여 DSP의 품질을 관리하기 위하여, 약물 중 치료제를 확인 및 정량하는 방법이 개발되었다. 이 방법의 한 실시예는 다음을 포함한다:

(a) 메탄올 30 ㎖에 DSP 30 개를 용해하고 10 분 동안 초음파 처리한다.

(b) 5 분간 원심분리.

(c) 박층크로마토그래피, 고속액체크로마토그래피 등을 사용하여 표준 분석기술에 의해 상등액을 분획한다.

(d) DSP 분획을 관련된 정제 표준품과 위치, 크기 및 색상을 비교하는 것에 의하여, 단쉔수, 프로토카테퀵 알데히드, 사포닌 등과 같은 DSP의 치료성분을 확인.

(e) DSP 분획의 위치, 크기 및 색상을 관련된 정제 표준품의 위치, 크기 및 색상과 비교하는 것에 의하여 DSP 중의 치료 성분을 확인 및 정량.

(f) 핑거프린트에서 피크의 상대적 유지 시간 및 상대적 면적을 표준 핑거프린트에서의 피크의 상대적 유지 시간 및 상대적 면적과 비교하는 것에 의하여 DSP 중의 치료 성분을 확인.

DSP의 TLC 확인

박층 크로마토그래피에 의해 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물의 단쉔수 나트륨 및 프로토카테퀵 알데히드를 확인하는 방법은 다음 단계를 포함한다:

a) 다음 단계를 포함하는 분석을 준비하고:

ⅰ. 메탄올 30 ㎖에 상기 조성물 30 펠렛을 넣고 10 분간 초음파 처리하여 용해시켜 용액으로 하고;

ⅱ. 용액을 5 분간 원심분리하고 상등액을 수집하고;

ⅲ. 0.5 % CMC-Na를 포함하는 실리콘 G 겔 플레이트 상으로 용액 10 ㎕를 접촉시키고;

ⅳ. 10:4:1.6 비율의 클로로포름, 아세톤 및 메탄올로 구성된 전개용액으로플레이트를 전개시키고;

ⅴ. 플레이트를 건조하고 암모니아 증기를 쐬서 15 분 동안 정치하고;

ⅵ. 플레이트를 자외선 하에서 검사하여, 상기 조성물을 나타내는 반점이 표준품의 대응하는 위치에 있고 동일 색상을 보이는가를 검사한다.

b) 표준품으로서 단쉔수 나트륨과 프로토카테퀵 알데히드를 사용.

박층 크로마토그라피에 의해 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물의 지페노사이드(gypenoside)를 확인하는 방법은 다음 단계를 포함한다:

a) 다음 단계를 포함하는 분석을 준비하고:

ⅰ. 암모니아 용매 5 ㎖에 상기 조성물 30 펠렛을 넣고 10 분간 초음파 처리하여 용해시켜 용액으로 하고;

ⅱ. 상기 용액을 대형기공 흡수 수지 컬럼에 넣고; 속도는 0.5/분;

ⅲ. 대형기공 흡수 수지 컬럼을 증류수 20 ㎖로 세척한 후, 대형기공 흡수 수지 컬럼을 메탄올 용액 2 ㎖로 용출시키고;

ⅳ. 용출액을 수집하고;

ⅴ. 0.5 % CMC-Na를 포함하는 실리콘 G 겔 플레이트 상으로 상기 용출액 10 ㎕를 접촉시키고;

ⅵ. 10 ℃에서 2 시간 후, 6:3:1의 비율의 클로로포름, 아세톤 및 물 용액의 하부 투명층인 전개용액 10 ㎖로 플레이트를 전개시키고;

ⅶ. 건조하고 10 % 에탄올 설페이트로 분무한 후, 플레이트를 105 ℃에서 수 분간 건조하고.

ⅷ. 플레이트를 표준광 하에서 검사하여, 상기 조성물을 나타내는 반점이 표준품의 대응하는 위치에 있고 동일 색상을 보이는가를 검사하고.

b) 표준품으로 총 지페노사이드, 사포닌 R1 및 진세노사이드 Rg1을 사용한다.

강심제 환의 핑거프린트

1. 핑거프린트의 제조

(1) 크로마토그래피 시스템 및 시스템 적합성

알킬 실란-링킹 실리코-18이 고정상으로, 그리고 A와 B의 혼액이 이동상으로 사용되었다. A는 메탄올이고 B는 물-N,N-디메틸포름아미드-빙초산(100:45:4)의 혼액이었다. 구배 용출 시간이 0에서 25 분으로 흐를 때 A의 농도는 5 %에서 30 %로 변화한다. 검출 파장은 281 ㎚로 조정되었다. 단쉔수의 피크로 계산할 때 컬럼의 이론적 플레이트는 2000 이상이었다.

(2) 기기 및 시약

크로마토그래프: HP 1100 액체크로마토그래프

검출기: HP VWD-stile UV 검출기

컬럼: Alltech company 5u, 250×4.6 ㎜, ODS 컬럼

전-컬럼(pre-column): Alltech company, Alltima C₁₈5u pre-column

컬럼 온도: 30 ℃

(3) 대조군 샘플의 제조

살비안산 B(Salvianic acid B), 단쉔수 및 프로토카테퀵 알데히드를 각각 메탄올에 용해시켜, 1 ㎖ 당 각각 50 ㎍, 40 ㎍ 및 10 ㎍를 포함하는 3 개의 대조군 용액을 제조하였다.

(4) 검체 샘플의 제조

강심제 환 10 환을 25 ㎖ 용량 플라스크에 넣고 메탄올 20 ㎖를 가하여 20 분간 초음파 처리하고 냉각되도록 한 후, 메탄올로 눈금까지 희석하고 원심분리하여 상등액을 검체 용액으로 하였다.

(5) 방법

대조군 용액과 검체 용액 각 10 ㎕를 정확하게 컬럼에 주입하고 크로마토그래프 차트를 기록하고 함량을 계산한다.

2. 강심제 환의 다른 배치의 핑거프린트.

강심제 환 20 배치를 상기 방법으로 검사하였으며, 통계적 데이터는 표 1, 표 2 및 표 3에 나타낸다. 이들 데이터는 강심제 환이 자신의 특정 핑거프린트를 갖고 있으며 이 핑거프린트는 8 개의 표준 피크, 즉 DSP의 각 배치에 동시에 존재하는 피크를 포함한다는 것을 나타낸다. 상대적 유지 시간이 1인 프로토카테퀵 알데히드 피크를 참고 피크로 할 때, 8 개 피크의 상대적 유지 시간의 평균값은 0.672, 1.000, 1.417, 1.512, 2.016, 2.235, 2.407, 2.757이었다. 8 개 피크의 상대적 유지 시간 및 상대적 면적의 값은 안정적이고, 이들 통상의 8 개 피크 중에서 피크 1이 단쉔수, 피크 2가 프로토카테퀵 알데히드, 그리고 피크 7이 살비안산 B이고, 상대적 면적값의 비율은 각각 0.476-0.668:1:0.391-0.641이었다.

강심제 환 3 개 배치의 핑거프린트는 도 1 내지 도 3에도 제공된다.

다음 표 1은 DSP 20 배치의 피크 유지 시간 및 상대적 유지 시간이고, 표 2는 DSP 20 배치의 피크 면적 값 및 면적 비율이고, 표 3은 DSP 20 배치의 핑거프린트로부터 유도되는 8 개 피크의 통계적 데이터를 나타낸다.

피크번호	유지시간	상대적유지시간	외견확률	면적	면적비율	면적비율범위
1	8.289	0.672	100%	1034.276	0.572	0.572±0.096
2	12.343	1.000	100%	1817.065	1.000	1.000±0.000
3	17.493	1.417	100%	376.547	0.208	0.208±0.040
4	18.664	1.512	100%	328.011	0.181	0.181±0.059
5	24.883	2.016	100%	486.626	0.267	0.267±0.097
6	27.586	2.235	100%	525.432	0.289	0.289±0.052
7	29.714	2.407	100%	940.963	0.516	0.516±0.125
8	34.030	2.757	100%	1547.495	0.850	0.850±0.163

DSP 내의 단쉔수의 정량분석

크로마토그래피 및 시스템 적응 조건, 기기 및 시약:

1. 핑거프린트의 제조

(1) 크로마토그램 & 시스템 조정

알킬 실란-링킹 실리코-18이 충전재료로서 사용되고, 물-아세토니트릴-빙초산(87:12:1)이 이동상으로 사용되었다. 검출 파장은 281 ㎚였다. 단쉔수의 피크와 계산할 때 이론적 플레이트 수는 2500 이상이고, 분리도는 요구에 부합하여야 한다.

(2) 기기 & 시약

크로마토그래프: HP 110액체 크로마토그래프

검출기: HP VWD-stile 자외선 검출기

컬럼: Alltech Company 5u, 250×4.6 ㎜, ODS 컬럼

전-컬럼(pre-column): Alltech Company, Alltima C18 5u pre-column

컬럼 온도: 30 ℃

아세토니트릴: 크로마토그래프 등급 정제, Tianjin Siyou Biomedical & Technical Co. Ltd.

빙초산: 분석 등급 정제, Tianjin Tianhe Reagent Company.

(3) 대조 샘플의 제조

살비안산 나트륨(sodium salvianic acid) 25 ㎎과 프로토카테퀵 알데히드 5.0 ㎎을 대조 샘플로 사용한다: 두 샘플을 정확히 칭량하여 50 ㎖ 용량 플라스크에 넣는다. 이동상을 넣어 이들을 용해시키고 플라스크의 눈금선까지 희석한 후, 완전히 진탕하여 저장 용액으로 한다. 파라아미노벤조산 소량을 정확히 칭량하여 이동상으로 0.2 ㎎/㎖의 용액이 되도록 용해하고 내부 표준 저장 용액으로 한다. 살비안산 나트륨 A, 프로토카테퀵 알데히드 및 내부 표준 용액 적당량을 그들의 용적을 정확히 읽어 취하고, 이들을 이동상으로 희석하여 살비안산 나트륨 A 50 ㎍, 프로토카테퀵 알데히드 10 ㎍ 및 파라아미노벤조산 80 ㎍을 함유하는 용액을 제조한다. 제조된 용액을 대조 용액으로 하였다.

(4) 검체 샘플의 제조

강심제 환 10 환 및 내부 표준 저장 용액 1 ㎖를 취하여 25 ㎖ 용량 플라스크에 넣고 이동상으로 용해시키고 눈금선까지 희석한다.

대조 및 검체 샘플 용액 10 ㎕를 각각 취하여 주입하고 크로마토그래프 차트를 기록한다.

대조 용액의 제조: 탄쉬놀 나트륨(sodium tanshinol) 25 ㎎을 취하여 정확히 칭량하고 용량 플라스크에 넣는다. 이동상을 넣고 용해시켜 눈금까지 희석한다. 용액을 진탕하고 대조용 저장 용액으로 보존한다. 파라아미노벤조산을 정확하게 칭량하여 이동상으로 0.2 ㎎/㎖ 용액으로 희석한다. 용액을 내부 표준 저장 용액으로보존한다. 대조용 저장 용액 및 내부 표준 저장 용액 적량을 취하여 밀리리터당 탄쉬놀 나트륨 50 ㎍과 파라아미노벤조산 80 ㎍를 포함하는 대조 용액으로 만든다.

검액의 제조: 본 제품 10 환 및 내부 저장 용액 1 ㎖를 취한다. 이들을 25 ㎖ 용량 플라스크에 넣고 눈금까지 희석하여 검액으로 만든다.

대조 용액 10 ㎕와 검액 10 ㎕를 각각 취하여 핑거프린트를 내려 결과를 계산한다.

DSP를 포함하는 식물 조성물은 1 환당 0.14-0.18 ㎎의 단쉔수를 함유하여야 한다.

DSP 중 진세노사이드 Rg1 및 산키노사이드(Sanchinoside) R1의 정량분석

(1) 크로마토그래피 시스템 및 시스템 적합성

알킬 실란-링킹 실리코-18을 고정상으로 사용하고 물과 아세토니트릴의 혼액을 이동상으로 사용하였다. 아세토니트릴의 농도는 0 내지 15 분까지는 25 %, 15 분 후는 35 %로 하였다. 분무 가스 이동 속도는 2.5 ℓ/분이고 드리프트 튜브 온도는 93.8 ℃였다. 진세노사이드 Rg1의 피크로 계산할 때 컬럼의 이론적 플레이트 수는 5000 이상이었다.

(2) 기기 및 시약

크로마토그래프: Agilent 1100 액체크로마토그래프

검출기: Alltech ELSD 2000 검출기 (증발성 광분산 검출기)

컬럼: Alltech Company 5u, 250×4.6 ㎜, ODS-C₁₈컬럼

전-컬럼: Alltech Company, Alltima C₁₈5u pre-column

컬럼 온도: 30 ℃

(3) 대조 샘플의 제조

진세노사이드 Rg1 및 산키노사이드 R1을 각각 메탄올에 용해하여 ㎖ 당 각각 0.98 ㎎ 및 0.25 ㎎을 함유하는 두 개의 대조 용액을 생산하였다.

(4) 검체 샘플의 제조

강심제 환 50환을 5 ㎖ 용량 플라스크에 넣고 눈금까지 4 % 암모니아를 가한 후 20 분간 초음파 처리하고, 이 용액을 앞서 만든 작은 C₁₈컬럼(STRATA C18-E 컬럼, Phenomenex Company, 500 ㎎ 및 3 ㏄ 튜브)에 적용하여, 물 10 ㎖로 용출한 후 용출액을 버리고, 메탄올 2 ㎖로 용출하여 용출액을 용량 플라스크에 수집하고 눈금선까지 메탄올로 채운 후 이 용액을 검액으로 한다.

(5) 방법

대조 용액과 검액을 각각 정확히 10 ㎕를 컬럼에 주입하고, 크로마토그래프 차트를 읽어 함량을 계산한다.

(6) 결과

20 배치의 강심제 환 샘플을 상기 방법으로 시험하였으며, 통계적 데이터는 표 4에 나타낸다. 상기 표에서, DSP를 포함하는 식물 성분은 0.401-0.712 %, 평균 0.550 %의 산키노사이드 R1 및 2.069-4.044 %, 평균 2.847 %의 진세노사이드 Rg1을 함유한다. 표 4는 DSP에서 진세노사이드 Rg1 및 산키노사이드 R1의 함량.

배치 No.	산키노사이드 R1(μg/환)	진세노사이드 Rg1(μg/환)
20000106	17.22	80.93
20000216	16.92	80.78
20000323	15.16	70.76
20000406	13.65	62.51
20000422	14.24	68.72
20000513	15.27	71.16
20000606	14.86	68.21
20000726	14.59	72.35
20000728	14.25	57.37
20000804	15.30	70.55
평균값	15.15	70.33
RSD%	7.53	9.67
다음 값 이상	12.12	56.26

이와 같이 제조된 DSP의 특징은 다음과 같다:

(a) DSP는 b-3,4-디하이드록시페닐 락트산, 단쉔수 나트륨, 사포닌, 및 보르네올을 함유하고,

(b) 세균 음성: 1,000 박테리아 미만 함유,

(c) 진균 음성: 100 곰팡이 미만 함유,

(d) 중금속 음성: 중국 정부에 의하여 정의된 안전한 양보다 적게 함유,

(e) DSP의 저장 기간은 실온에서 4 년.

DSP의 임상 연구

협심증은 앙기나(angina), 혈청지질 농도, 심전도(ECG), 운동 ECG, 허혈의 신티오그래프 평가, 관상동맥 앙기오그래피 등의 연구에 의하여 평가된다. 이들 목표 포인트를 사용한 치료적 효능을 평가하여, DSP는 협심증 치료에 효과적임을 보여준다.

DSP는 협심증에 유효하다.

관상동맥 심장질환자 157 인을 4 주 동안 경구로 t.i.d. 당 10 DSPs로 치료하였다. 협심증, 가슴의 압박감과 심계항진의 빈도, 강도 및 지속을 평가하였으며, 증상은 95.3 % 환자에서 소실 또는 완화되었다.

DSP는 협심증의 경감에 있어서 단쉔 정제 보다 더 유효하다.

단쉔 정제는 중국에서 협심증 치료에 현재 사용되는 또 다른 중국 의약품이다. DSP 및 단쉔 정제의 효능을 비교하였다. 관상동맥 심장질환자를 임의로 2 그룹으로 나누었다. 107 인의 환자들을 DSP로 치료하고 50 인의 환자들을 단쉔 정제로 치료하였다. 협심증 발작의 빈도와 질산염의 소비를 비교하였으며, DSP는 협심증 치료에 단쉔 정제보다 더 유효하였다. 다음 표 5를 참고한다. 표 5는 DSP와 단쉔 정제의 비교.

	환자수
	전체	반응성
DSP	107	102 (95.3 %)
단쉔 정제	50	38 (76 %)

DSP가 단쉔 정제보다 더 효과적임을 입증하기 위하여, DSP의 효능을 현재 미국에서 만성 안정성 협심증 치료에 사용되는 여러 약물과 비교하였다.

DSP와 니트로글리세린의 비교

니트로글리세린은 협심증을 경감시키기 위하여 종종 사용된다. 협심증을 경감시키는 DSP와 니트로글리세린의 효능을 비교하였다. 협심증 개시시 환자들은 DSP 또는 니트로글리세린으로 치료받았으며, 협심증을 경감시키는데 요하는 시간을 비교하였다. DSP와 니트로글리세린 양자는 모든 환자에서 15 분 이내에 협심증을 경감시켰다. DSP의 효능은 니트로글리세린보다 약간 낮았다. 다음 표 6을 참고한다. 표 6은 DSP 및 니트로글리세린의 비교.

	반응 환자 #
	1-5 분 이내	6-10 분 이내	11-15 분
DSP니트로글리세린	1117	1412	51

전체: 그룹 당 30 환자

DSP는 심박수를 변화시키지 않음

위 결과는 DSP가 협심증을 효과적으로 경감시키는 것을 보여준다. DSP가 심박수를 증가시키는 것에 의하여 협심증을 경감시키는지 여부를 조사하였다. DSP 투여후 심박수는 치료전 심박수과 동등하였으며, 이는 DSP가 심박수에 영향을 주지 않고 협심증을 경감시키는 것을 나타낸다(표 7).

	심박수
	치료전	치료후
DSP	84.3±23.1	82.8±22.8

질산염 이소소르비드 디니트레이트와 DSP의 효능 비교

DSP가 니트로글리세린만큼 효과적으로 협심증을 경감시키는 것을 입증하기 위하여, DSP가 협심증을 예방할 수 있는지 여부를 시험하였다. DSP와 질산염 이소소르비드 디니트레이트의 효능을 비교하였다. 이소소르비드 디니트레이트는 미국에서 만성 안정성 협심증을 예방하는데 종종 사용되는 장시간-작용 질산염이다. 환자들은 DSP를 1 일 3 회 경구로 매 치료시 10 환씩, 또는 이소소르비드 디니트레이트를 1 일 3 회 경구로 매 치료시 10 ㎎으로 치료받았다. 심장 기능 및 심전도를 검사하였다.

심장 기능

심장 기능에 대한 DSP와 질산염의 효능을 스트로크 당 심장출력(CO), 1 분 당 스트로크 용적(SV), 분출 혈액 분획(EF), 좌심실 단축(short axis)의 단축율 (shortened rate) 분획(FS)를 측정하는 것에 의하여 평가하였다. DSP는 질산염보다 더 효과적으로 심장 기능을 증진시켰다. 다음 표 8을 참고한다. 표 8은 심장 기능에 대한 DSP와 질산염의 효과.

	DSP	이소소르비드 디니트레이트
	전	후	전	후
SVCOEFFS	75.38±8.325.61±1.340.57±0.0217.14±3.4	83.45±9.116.94±1.360.79±0.0216.69±3.6	74.96±8.446.54±1.360.59±0.0317.32±3.1	79.47±8.726.12±1.410.70±0.0318.461±4.2

전: 치료전

후: 치료후

DSP는 ECG를 개선

ST-T 유효율을 ST-T 구간에서 변화의 빈도를 기록하는 것에 의하여 평가하였다. DSP와 이소소르비드 디니트레이트 모두 ST-T에서 변화의 빈도를 유의적으로 감소시켰다. 그러나, DSP가 더 효과적이었다. 다음 표 9를 참고한다. 표 9는 ECG 상에서 DSP와 질산염의 효과 비교.

	ST-T 변화의 빈도
	치료전	치료후
DSP이소소르비드 디니트레이트	131129	3542

혈액 정체를 감소시키는데 있어서 DSP와 아스피린의 비교

동맥경화성 병변에서의 출혈은 혈소판 활성화, 관상동맥 혈전증 및 혈액 정체를 유도하여 혈류를 손상시킨다. 따라서, 협심증 환자에게는 혈류를 개선하기 위해, 혈소판-활성화 저해제인 아스피린의 만성 투여가 권장된다. DSP와 아스피린의 혈류를 개선시키는 효능을 [Hb, Lb, P 및 기류]를 평가하는 것에 의하여 비교하였다. DSP는 아스피린만큼 효과적으로 혈류를 개선하였다. DSP는 아스피린만큼 효과적으로 혈류를 개선하였다. 다음 표 10을 참고한다. 표 10은 DSP 및 아스피린이 혈류를 개선하는 것을 보여준다.

	DSP	이소소르비드 디니트레이트
	전	후	전	후
HbLBP기류(air flow)	6.23±1.6710.92±2.211.95±0.081.79±0.13	4.35±1.028.30±1.141.77±0.081.39±0.11	6.12±1.5610.38±1.961.89±0.121.82±0.17	4.28±1.078.21±0.31.67±0.71.40±0.10

전체 환자수: DSP에서 25 인 및 아스피린에서 28 인.

DSP는 혈소판 활성화를 저해하는 것에 의하여 혈액 정체를 감소

트롬복산 B2는 혈소판을 활성화시킨다. 활성화된 혈소판은 β 혈소판 마이크로글로불린을 포함하여 여러 물질을 분비하는데, 이는 혈액정체를 야기하여, 혈류를 손상시킨다. DSP의 혈소판 활성화 저해 효능을 검사하였다. DSP는 트롬복산 B2 농도를 낮추고 혈소판 응집을 효과적으로 저해한다. 혈소판 활성화를 저해할 수 없는 것으로 알려져 있어 대조군으로서 사용된 이소소르비드 디니트레이트는 트롬복산 B2를 감소시키거나 혈소판 활성화를 저해하지 못하였다. 다음 표 11을 참고한다. 표 11은 DSP가 혈소판 활성화를 저해하는 것을 보여준다.

	치료전	치료후
βPM	DSP질산염	62.44±14.3759.89±15.42	45.65±12.2554.36±13.18
Txβ2	DSP질산염	1312±5351315±507	738±3841218±445

DSP는 혈장 콜레스테롤 농도를 저하

증가된 혈장 콜레스테롤은 동맥경화증의 개시에 관련된다. 새로운 동맥경화 병변의 형성을 방지하기 위하여, 식이요법 또는 약물의 변형에 의한 혈장 콜레스테롤의 감소가 권장된다. DSP가 혈장 콜레스테롤을 감소시키는지 여부를 검사하였다. DSP는 콜레스테롤 농도를 0.3 mmol/ℓ만큼 저하시켰는데, 이는 P 값 0.05에서 통계적으로 유의적이다. 다음 표 12를 참고한다. 표 12는 DSP가 혈장 콜레스테롤을 감소시키는 것을 보여준다.

	혈장 콜레스테롤(mmol/ℓ)
	치료전	치료후
DSP	5.15±0.16	4.84±0.2

환자수: 80

관상동맥 심장질환자의 혈청중 LPO 및 SOD에 대한 강심제 환의 효과

방법: 치료 그룹에서 24 인의 환자는, 1979 년에 개정된 관상동맥 심장질환을 위한 중국 문헌 진단 표준에 따라, 강심제 환을 10 환/회, 3 회/일로 투여받았다. 정상 그룹에서 20 인의 건강한 사람들은 어떠한 약물 치료도 받지 않았다.

결과: 관상동맥 심장질환자의 LPO 농도는 건강인의 그것보다 명백히 높았으며, 반면에 SOD의 함량은 명백히 낮았다(p<0.01). 환자가 강심제 환으로 치료받은 후, 그들의 LPO는 명백히 감소하였으며(p<0.01), 그들의 SOD는 명백히 증가하였다 (p<0.01). 다음 표 13을 참고한다. 표 13은 정상 및 치료 그룹에서 SOD 및 LPO 함량의 비교.(x±s)

그룹	환자	SOD (ng/ml)	LPO (nmol/ml)
정상인 그룹	20	348±106	4.64±1.52
치료 그룹	24	치료전	267±76*	7.16±1.48*
치료 그룹	24	치료후	309±87#.	4.68±1.72##

주: 정상인과 비교하여 *p<0.05. 치료전과 비교하여 #p<0.05, ##p<0.01.

결론: 관상동맥 심장질환자에서 심근의 만성적 허혈 및 조직 산소결핍은 SOD, 특히 세포외 SOD 활성의 감소, 산소 유리기의 증가로 이끄는데, 이는 LPO의 증가 및 SOD의 더한 소비를 야기한다. 환자가 강심제 환으로 치료받은 후, LPO의 농도는 명백히 감소하였으며, 반면에 SOD의 함량은 명백히 증가하였다. 이는 강심제 환이 산소 유리기에 대하여 강한 제거 작용을 갖는 것을 입증하는데, 이는 관상동맥 심장질환을 치료하는 메카니즘의 하나이기도 하다.

폐 심장 질환의 치료에 있어서 LPO 및 안티옥시다제의 활성에 대한 강심제 환의 효과

방법: 대상: 폐 심장 질환자 48 인을 임의로 3 그룹으로 나누었다. 정상인 그룹에서는 16 인의 환자가 항염 요법, 항천식제, 산소 흡입 등 복합적 요법으로 치료받았다. 강심제 환 그룹에서는 14 인의 환자가 강심제 환 10 환/회, 3 회/일로 치료받았다. 간탕지(Gantangzhi) 그룹에서는 18 인의 환자가 정맥내 점적---5 % 포도당 250 ㎖ 내에 용해된 간탕지 200 ㎎ 주사 1 회/일, 10 일/주기로 치료받았다.

결과: 강심제 환으로 치료 후, GSH-Px 값은 상승하고 LPO 값은 하강하고, 따라서 GSH-Px/LPO는 상승한다. 정상인 치료 그룹과 비교하면, 유의적인 차이가 있다. 다음 표 14를 참고한다. 표 14는 치료 전후의 지수.

	GSH-P_x(U/㎎Hb)	CAT(U/gHb)	SOD(U/gHb)	LPO(nmol/㎖)	GSH-P_x/LPO
건강인 그룹	140.6±35.2	312.7±58.1	5799.8±948	4.2±1.2	34.2±8.7
정상인그룹	치료전	101.3±23.6	300.4±107.7	5740.5±939.0	5.6±1.9	20.4±8.8
정상인그룹	치료후	120.6±20.6^#	390±184.3^#	6076.8±1091	4.3±1.2^##	31.3±15.1^##
강심제환그룹	치료전	108.8±28.3	233.1±70.2	5863.3±1072.7	5.9±2.0	18.5±7.6
강심제환그룹	치료후	158.2±40.7^##**	328.4±78.5^##*	5582.8±1094.7^#*	4.1±1.6^##**	36.4±6.7^##**

주: 치료 전과 치료 후를 비교할 때, #p>0.05, ##p<0.05, *p>0.05, **p<0.05.

결론: 강심제 환은 항산화 기능을 갖고, 지질 과산화 반응을 약화시키고 인체의 항산화능을 올려준다.

강심제 환에 의한 본태성 고혈압(Essential Hypertension)의 치료

방법: (1) 환자 선택: 2차적 고혈압 또는 심장, 간 및 신 부전이 없는 페이스 Ⅰ 또는 Ⅱ 본태성 고혈압 환자를 선택한다.

(2) 투여: 2 주 동안 환자에서 어떠한 양약 및 전통 한약(강압제 제외)도 중지시키고, 다음 3 주째에 이들의 혈압과 혈액 유동성 지표를 측정하고 이들의 임상적 발현을 기록한다. 이중맹검법이 채용된다. 강심제 환 그룹에서, 대상은 강심제환을 경구로 10 환/회, 및 3 회/일 섭취한다. 복합 단쉔 정제 그룹에서, 대상은 복합 단쉔 정제를 경구로 5 정/회, 및 3 회/일 섭취한다. 대조군에서 대상은 위약을 섭취하고, 치료 기간은 6 주이다.

결과: (1) 전혈의 점도에 대한 효과. 치료 후, 강심제 환 그룹과 복합 단쉔 정제 그룹 양쪽 환자에서 전혈의 점도가 현저하게 떨어졌지만, 강심제 환 그룹에서 전혈의 점도의 곡선은 어떠한 전단 속도에서도 복합 단쉔 정제 그룹보다 더 급격하게 떨어졌다. 표 15를 참고한다. 표 15는 전혈의 점도에 대한 강심제 환의 효과. (mPas, x±s)

그룹	3.83s^-1	28.3 s^-1	192 s^-1
강심제 그룹(대상 30인)	치료전	18.27±2.85	5.82±0.93	4.54±0.78
강심제 그룹(대상 30인)	치료후	11.79±3.75^**##&&	4.78±0.84^**##&&	3.98±0.65^**##&&
복합 단쉔정제 그룹(대상 30인)	치료전	17.69±1.96	5.86±0.79	4.69±0.54
복합 단쉔정제 그룹(대상 30인)	치료후	14.68±3.41^**&&	5.69±0.81^*&	4.42±0.59^**&&
대조군(대상 15인)	치료전	17.65±2.07	5.69±0.79	4.75±0.58
대조군(대상 15인)	치료후	18.02±2.32	5.71±2.76	4.86±0.65

주: 치료전 동일 그룹과 비교시, *p<0.05, **p<0.01. 치료후 강심제 환 그룹과 비교시, #p<0.05, ##p<0.01. 치료후 대조군과 비교시, &p<0.05, &&p<0.01.

(2) 적혈구 응집 및 변형에 대한 효과. 치료후, 강심제 환 그룹에서의 적혈구 변형은 치료 전보다 현저하게 커졌고, 응집 지수 및 면적은 치료 전보다 식별 가능하게 작았다. 그리고 복합 단쉔 정제 그룹과 비교시, 강심제 환 그룹은 훨씬 빠르게 감소하였다(p<0.01). 표 16을 참고한다. 표 16은 적혈구의 변형 및 응집에대한 강심제 환의 효과. (x±s)

그룹	변형 지수	응집 지수	응집 면적 (적분)
강심제 그룹(대상 30인)	치료전	0.4115±0.0360	4.06±0.39	841.12±67.68
강심제 그룹(대상 30인)	치료후	0.4274±0.034^*&	3.41±0.36^**#&&	683.52±69.09^**#&&
복합 단쉔정제 그룹(대상 30인)	치료전	0.4066±0.0290	3.98±0.34	806.90±66.30
복합 단쉔정제 그룹(대상 30인)	치료후	0.4180±0.0281^*&	3.64±0.39^**&&	716.12±84.29^**&
대조군(대상 15인)	치료전	0.4091±0.0376	4.02±0.41	812.52±65.64
대조군(대상 15인)	치료후	0.4001±0.0381	4.01±0.39	804.44±68.06

(3) 혈압에 대한 효과. 치료후 강심제 환 그룹과 복합 단쉔 정제 그룹 모두에서 환자의 수축기 혈압과 확장기 혈압이 현저하게 떨어졌고(p<0.01), 두 그룹 사이에 명백한 차이는 없었다. 표 17을 참고한다. 표 17은 혈압에 대한 강심제 환의 효과. (mmHg, x±s)

그룹	수축기 혈압	확장기 혈압
강심제 그룹(대상 30인)	치료전	155.00±8.08	90.70±7.93
강심제 그룹(대상 30인)	치료후	149.20±8.89**&&	86.59±8.30**&&
복합 단쉔정제 그룹(대상 30인)	치료전	152.93±9.59	92.59±8.30
복합 단쉔정제 그룹(대상 30인)	치료후	146.02±10.20**&&	88.55±7.22**&&
대조군(대상 15인)	치료전	154.06±7.05	90.90±9.10
대조군(대상 15인)	치료후t	152.08±9.25	91.10±8.70

주: 치료전 동일 그룹과 비교시, **p<0.01. 치료후 대조군과 비교시,&&p<0.01.

(4) 고혈압의 증상에 대한 효과. 강심제 환 그룹과 복합 단쉔 정제 그룹 모두의 환자들은 두통, 현기증 및 사지 무감각과 같은 항목에서 많이 개선되었지만, 불면증은 개선되지 않았다. 표 18을 참고한다. 표 18은 고혈압의 임상 증상에 대한 강심제 환의 효과. (환자)

그룹	두통	현기증	사지 무감각	불면증
그룹	예	아니오	예	아니오	예	아니오	예	아니오
강심제 그룹(대상 30인)	치료전	20	10	16	14	12	18	8	22
강심제 그룹(대상 30인)	치료후	7	23^*	2	28^*	3	27^*	4	26
복합 단쉔 정제 그룹(대상 30인)	치료전	22	8	17	13	10	20	6	24
복합 단쉔 정제 그룹(대상 30인)	치료후	15	15^*	8	22^*	3	27^*	6	248
대조군(대상 15인)	치료전	8	7	6	9	4	11	4	11
대조군(대상 15인)	치료후	7	8	5	10	3	12	2	13

주: 치료전 동일 그룹과 비교시, *p<0.01.

결론: 본태성 고혈압 환자의 적혈구의 유동적 특성은 명백히 비정상이었다. 적혈구의 변형은 명백히 저하된 반면, 응집은 명백히 증가하였다. 이 실험은 강심제 환이 전혈의 점도 및 적혈구 응집 면적과 지수를 감소시키고, 적혈구의 변형능을 크게 증가시키는 기능을 갖는다는 것을 보여준다. 강심제 환은 또한 혈압을 저하시키고 환자의 임상증상을 개선할 수 있다. 따라서, 강심제 환은 본태성 고혈압 및 심장-뇌 증상의 발생을 예방 또는 늦추는데 크게 유효하다.

독성

DSP는 안전하고 비독성이다. 중국에서 500만이 넘는 환자가 심한 부작용 없이 DSP로 치료받고 있다. 완화한 부작용, 두통 또는 현기증은 소수의 환자에서 보고되었다.

임상 연구 요약

DSP는 관상동맥 심장 질환을 치료하는 신세대 중국 의약품이다. 임상 연구에서 DSP는 삼장 기능을 개선하고 심근 허혈을 감소시키고, 혈소판 활성화를 저해하여 혈액 정체를 감소시키고 혈장 콜레스테롤을 낮추는 것에 의하여 협심증을 경감 및 예방하는 것으로 나타났다. DSP의 치료적 효능은 다른 형태의 중국 의약인 단쉔 정제보다 우수하였다. DSP는 미국에서 사용되는 약물만큼 효과적이다. DSP는 니트로글리세린 만큼 효과적으로 협심증을 경감시키고, 장시간 작용 질산염 이소소르비드 디니트레이트 만큼 효과적으로 협심증을 예방하고, 그리고 아스피린 만큼 효과적으로 혈소판 응집을 저해한다. DSP는 비독성으로: 500만 이상이 대부분의 경우 주목할만한 부작용 없이 치료되고 있다.

전임상 연구

전임상 연구에서는 DSP가 협심증을 예방 및 경감시키는 메카니즘을 밝힌다.

DSP는 혈류 증가에 의하여 협심증을 경감시킨다.

약 260 g의 위스타 래트(Wistar rats)를 우레탄으로 마취하고, 흉부를 열어 심장을 절개한 후 랑겐도르프 모드에서 37 ℃, 65 ㎝ H₂O의 일정 관상동맥 관류 압력으로 관류하였다.

심박수를 안정화시킨 후, 여러가지 양의 DSP 또는 단쉔 정제를 대동맥 캐뉼라의 측면 가지를 통해 매 시간 적용하였다. 이어서, 관상동맥 혈류와 심박수를 측정하였다. DSP는 광범위한 용량에서 관상동맥 혈류를 증가시켰다. 한편, 단쉔 정제는 좁은 범위의 용량에서 관상동맥 혈류를 증가시켰다. 다음 표 19를 참고한다. 표 19는 DSP가 관상동맥 혈류를 증가시키는 것을 보여준다.

용량(㎎/㎖)	관상동맥 혈류
	치료전	치료후
			DSP	05.8290580	7.0±1.1	7.1±0.97
					7.2±1.16.7±1.66.7±1.5	7.0±1.48.7±1.49.3±2.9
			DS 정제	5.8290580	6.7±1.47.3±1.76.8±1.4	7.1±1.59.1±2.17.1±1.5

심박수에 대한 DSP와 단쉔 정제의 효과를 검사하였다. DSP와 단쉔 정제 모두 심박수를 변화시키지 않았다. 다음 표 20을 참고한다. 표 20은 DSP가 심박수를 증가시키지 않는 것을 보여준다.

용량(㎎/㎖)	심박수
	치료전	치료후
			DSP	05.8290580	194±17180±11188±7173±14	193±12189±9184±8167±13
			DS 정제	5.8290580	180±11189±16186±23	189±9183±14171±8

DSP는 혈관 평활근 이완에 의한 혈관 확장에 따른 관상동맥 혈류를 증가

토끼 대동맥 결찰에서 칼륨-유도 혈관수축에 대한 DSP의 효과를 검사하였다.DSP는 평활근을 이완하여 유의적으로 혈관을 확장시켰다. 돼지 관상동맥 링을 사용한 실험에서 유사한 효과가 관찰되었다.

DSP는 혈소판 응집을 저해

혈소판 응집에 대한 DSP의 효과를 검사하였다. 토끼 혈소판을 DSP로 처리하고 응집을 검사하였다. DSP는 혈소판 응집을 유의적으로 저해하였다. 다음 표 21을 참고한다. 표 21은 DSP가 혈소판 응집을 저해함을 보여준다.

DSP (㎎/㎖)	동물수	응집율 (%)	저해 (%)
01.83.5714	66666	6.7±4.442.7±2.533.4±3.425.3±2.115.8±3.0	08.3±4.523.6±6.737.6±5.969.0±6.9*

표 22는 본 발명의 식물 조성물로 치료후 다른 시간에 마우스에서의 미소핵 속도를 나타낸다. (8400 ㎎/㎏)

시간(h)	다색성 RBCs	미소핵 세포	미소 속도 (%) (x±SD)
12	6,000	9	1.5±0.8
24	6,000	11	1.8±0.7
36	6,000	11	1.8±1.2
48	6,000	11	1.8±1.5
72	6,000	13	2.2±0.7
용매(solvent 24)	6,000	9	1.5±1.4

표 23은 DSP & CP 투여후 마우스에서 24 시간에 동일한 미소 속도를 보여준다

용량(mg/kg)	다색성 RBCs	미소핵 세포	미소-속도(%) (x±SD)
8,400	6,000	12	2.0±0.6
840	6,000	9	1.5±1.0
84	6,000	11	1.8±1.0
용매	6,000	9	1.5±1.4
CP (80mg/kg)	6,000	138	23.0±4.0*

*용매와 비교 p<0.01,

표 24는 시험된 약물의 등급 유효성을 위한 평가 기준을 보여준다.

인자＼효과	매우 높은 효과	높은 효과	효과	효과 없음
RBC 응집 상태	없음	약간	현저함	심함
개시 시간	<90	90-180	180-300	>300
미소-혈류 흐름 상태	정상보다 양호	정상으로 돌아옴	개선	떨어짐
경과(분)	>15	15-10	10-5	<5

DSP는 미소순환을 개선

중국 햄스터에서 미소순환에 대한 DSP의 효과를 검사하였다. DSP는 모든 동물에서 구강 투여 111 분 이내에 23 분 동안 미소순환을 개선시켰다. 다음 표 25를 참고한다. 표 25는 DSP가 미소순환을 개선하는 것을 보여준다.

	개시 시간(분)	경과(분)	효과율(%)
DSP	111	23	100

표 26은 래트에서 피투이트린에 의해 유도된 심근에 대한 DSP의 보호 효과를 보여준다(제 2 시기). (n=8)

그룹	용량(g/kg)	치료전	치료후
그룹	용량(g/kg)	치료전	피투이트린전	피투이트린 후(40s-15 분)비정상 ECG 래트의 수
대조군		정상	정상	7
DSP	0.4	정상	정상	3*
	0.8	정상	정상	1**
	1.2	정상	정상	1**
DST	0.4	정상	정상	4
DST	0.8	정상	정상	1**

대조군과 비교 *p<0.05, **p<0.01.

표 27은 래트에서 피투이트린에 의해 유도된 심근 허혈에 대한 DSP의 저해 효과를 보여준다.

대조군	용량(g/kg)	저해(%)
DSP	0.4	71.4*
	0.8	85.7*
	1.2	71.4*
DST	0.4	42.8*
DST	0.8	85.7*

대조군과 비교 *p<0.05.

표 28은 래트에서 피투이트린에 의해 유도된 심근 허혈에 대한 DSP의 보호 효과를 보여준다(제 1 기). (n=8)

그룹	용량(g/kg)	제1기에서 ECG-(lead II) T-ST의 변화
		치료전	치료후
			피투이트린전	피투이트린 후(0-40s.)비정상 ECG 래트의 수
			피투이트린전	증가된 T	역전된 T	계
대조군	-	정상	정상	4	3	7
DSP	0.4	정상	정상	3	0	3*
	0.8	정상	정상	1	1	2*
	1.2	정상	정상	2	1	3*
DST	0.4	정상	정상	3	2	5
DST	0.8	정상	정상	1	1	2*

대조군과 비교 *p<0.05.

산소 유리 라디칼에 대한 강심제 환의 클리어런스 작용

산소 유리 라디칼에 대한 강심제 환의 클리어런스 작용 연구는, 각각크산틴-크산틴 옥시다제 시스템과 H₂O₂-Fe²⁺시스템을 이용하여 생산된 수퍼옥사이드 음이온과 하이드록시 라디칼을 가지고 전자 상자성 공명(EPR; electron paramagnetic resonance) 및 스핀 트래핑을 이용하여 수행되었다.

방법: (1) 히드록시 라디칼의 생산. 펜톤 원리에 따라 검사 모델을 세팅한다. H₂O₂, 페리설파스(ferrisulphas) 및 DMPO(5,5-디메틸-피롤린-1-옥사이드)를 혼합하고, EPR 검사를 시행하였다. 결과 신호는 대조군으로 하였다. 치료군에 강심제 환을 가하였다.

(2) 수퍼옥사이드 음이온의 생산. 크산틴-크산틴 옥시다제 반응을 기초로 한 검사 모델을 세팅하였다. 크산틴, 디에틸렌트리아민 펜타아세트산, DMPO 및 크산틴 옥시다제를 혼합하고 EPR 검사를 시행하였다. 결과 신호는 대조군으로 하였다. 치료군에 강심제 환을 가하였다.

4 개 그룹 각각에서 10 샘플을 검사하고, 결과를 평균으로 표시하였다. T-테스트는 통계적 분석에 응용되었다.

결과: (1) H₂O₂-Fe²⁺시스템에 의해 생산되는 하이드록시 라디칼에 대한 강심제 환의 클리어런스 작용. 하이드록시 라디칼이 DMPO에 의하여 잡힐 때 내전 (adduct) DMPO-OH가 발생될 것이다. 대조군에서 내전의 피크값은 11.8±0.6 상대 단위인 반면, 강심제 환 그룹에서는 4.1±0.5 상대 단위였다. 이들 사이에는 유의적인 차이가 있고(p<0.01), 강심제 환의 클리어런스 율은 65 % 이상이다.

(2) 크산틴-크산틴 옥시다제 시스템에 의해 생산된 수퍼옥사이드 음이온에 대한 강심제 환의 클리어런스 작용. 수퍼옥사이드 음이온이 DMPO에 의하여 잡힐 때 내전(adduct) DMPO-OH가 발생될 것이다. 대조군에서 내전의 피크값은 10.6±0.67 상대 단위인 반면, 강심제 환 그룹에서는 분광 신호(spectral signal)가 완전히 사라졌다. 대조군과 비교하여 유의적인 차이가 있고(p<0.01), 강심제 환의 클리어런스 율은 100 %이다.

상기 실험은 강심제 환이 크산틴-크산틴 옥시다제 시스템에 의하여 생산된 수퍼옥사이드 음이온 및 H₂O₂-Fe²⁺시스템에 의하여 생산된 하이드록시 라디칼에 대한 효과적인 클리어런스 작용을 갖는다는 것을 보여준다.

래트의 뇌 허혈 재관류 손상 조직의 유리 라디칼에 대한 강심제 환의 효과

방법: SD 래트 30 마리를 가공의 실시 그룹(실시되지만 혈관과 신경은 연결되지 않음), 뇌 허혈 재관류 모델 그룹 및 강심제 환 그룹(4 g/㎏)의 3 그룹으로 임의 분할하였다. 3-일 연속적인 복막내(Ip) 투여후, 그리고 3 일째 투여 2 시간 후, 래트를 20 % 에틸우레탄으로 마취하고 이들의 목과 미주신경 양쪽에서 이들의 안내 동맥을 분리 및 연결하였다. 30 분간의 재관류후, 이들의 미리를 절단하고 뇌를 얻었다. 양쪽에서 이들의 좌측 뇌의 피질 조직과 해마 조직 500 ㎎을 취하여 액체 질소에 넣고 균질화하였다. 이들을 냉동 생리식염수로 균질화물로 만든 후, 균질화물을 원심분리하였다. 상등액을 취하여 CAT 및 SOD의 활성과 MAD 및 GSH의 함량을 결정하였다.

결과: 표 29를 참고한다. (1) 뇌 조직의 GSH 함량과 CAT의 활성에 대한 강심제 환의 효과. 뇌 허헐 재관류 모델 그룹에서 뇌 피질과 해마 조직의 CAT 활성과 뇌 피질의 GSH 함량은 가공의 실시 그룹보다 훨씬 낮았다. 강심제 환 그룹에서 해마 조직의 CAT 활성과 뇌 피질의 GSH 함량은 모델 그룹에서보다 유의적으로 더 높았다. 표 29는 래트의 뇌 조직 MDA 및 GSH 함량과 CAT 및 SOD 활성. (mPas, x±s) (n=10)

그룹	CAT 활성(U/mg 단백질)	GSH(μmol/mg 단백질)	SOD 활성(U/mg 단백질)	MDA(nmol/mg 단백질)
그룹	뇌 피질	해마	뇌 피질	해마	뇌 피질	해마	뇌 피질	해마
가공의실시그룹	2.94±0.17	2.78±0.14	18.49±0.70	16.87±0.92	14.24±0.90	20.34±0.74	0.502±0.054⁸	1.084±0.117
모델그룹	2.17±0.24⁸	1.97±0.23⁸	14.76±1.12⁸	13.80±0.74	10.44±0.79⁸	18.18±0.62⁸	0.718±0.070⁸	1.449±0.140⁸
강심제 환 그룹	2.55±0.35	2.79±0.21³	17.14±0.76	15.76±1.18³	13.31±0.77³	20.59±0.59³	0.483±0.065³	1.069±0.131³

가공의 실시 그룹과 비교시 *p<0.05, 모델 그룹과 비교시 #p<0.05.

(2) 뇌 조직의 SOD 활성과 MDA 함량에 대한 강심제 환의 효과. 모델 그룹에서 뇌 조직의 SOD 활성은 가공의 실시 그룹에서보다 유의적으로 낮은 반면, MDA 함량은 유의적으로 높았다. 강심제 환 그룹에서 뇌 피질 및 해마 조직의 SOD 활성은 유의적으로 증가한 반면, MDA 함량은 유의적으로 저하하였다.

결론: 뇌 허혈 재관류후, 뇌 조직에서 MDA 함량은 증가한 반면, GSH 함량은 감소하였다. 조직에서 산소 유리 라디칼을 청소하기 위한 두 가지 중요한 효소인 CAT 및 SOD의 활성은 유의적으로 감소하였는데, 이는 뇌 허혈 재관류 동안 유리 라디칼 클리어런스 시스템의 기능 실패로 인하여 많은 산소 유리 라디칼이 존재하는것을 보여준다. 이는 지질 과산화를 야기하고, 이에 따라 뇌 손상을 야기한다. 강심제 환은 재관류된 래트에서 뇌 피질 및 해마 조직의 MDA 함량을 감소시키고, GSH 함량과 CAT 및 SOD 활성을 증가시키는데, 이는 강심제 환이 산소 유리 라디칼의 반응을 현저하게 억제하고 지질 과산화를 제어하고 허혈 재관류에 의하여 야기된 손상된 뇌 세포를 보호하는 기능을 갖는 것을 보여준다.

만성 간 손상에서의 강심제 환의 항산화

방법: 위스터 래트의 CCl₄-고지방-저단백으로 유도된 완화한 만성 간 손상 모델이 채용되었다. 강심제 환 그룹에서는 강심제 환을 4 g/㎏의 용량으로 래트 위로 관류하는 한편, 정상 및 모델 그룹에서는 동량의 생리식염수를 관류하였다. SOD 활성은 크산틴 옥시다제 방법을 사용하여 결정하고, MDA 함량은 개선된 티오바르비투르산 방법을 사용하여 결정하였다.

결과: 표 30을 참고한다. 모델 그룹을 정상 그룹과 비교할 때, SOD 활성은 저하한 반면, MDA는 증가하였다. 그러나, 강심제 환 그룹에서는 SOD 활성이 증가한 반면, MDA가 저하되어, 강심제 환 그룹을 정상으로 되돌아가도록 만들었다. 표 30은 만성 간 손상에서 SOD 활성 및 MDA 함량.

그룹	래트	SOD (NU/mg.pr)	MDA (nM/mg.pr)
정상 그룹	12	1.717±0.521	15.21±4.35
모델 그룹	12	1.326±0.3218	19.39±4.62*
강심제 환 그룹	11	1.710±0.415#	15.16±4.29#

주: 정상 그룹과 비교시 *p<0.05. 모델 그룹과 비교시 #p<0.05.

결론: MDA는 지질 과산화의 주된 분해 산물이다. MDA는 세포막의 구조를, 그리고 이에 따라 간세포를 나쁘게 손상시킬 수 있다. SOD는 수퍼-옥사이드 음이온 유리 라디칼의 청소부이고, 유리 라디칼에 의해 야기되는 지질 과산화를 억제할 수 있다. 강심제 환은 유의적으로 SOD 활성을 증가시키고 MDA 함량을 감소시킬 수 있는데, 이는 지질 과산화의 레벨을 저하시키고 간 손상을 가볍게 할 것이다.

DSP는 돌연변이원이 아니다.

DSP가 돌연변이원인지 여부를 아메스 분석(Ames assay)으로 검사하였다. DSP는 돌연변이원이 아니었다. 다음 표 31을 참고한다. 표 31은 DSP의 돌연변이원성. (Ames test)

조 약물(crude drugs)의 제조

1. 단쉔(Dan shen)

(1) 품질 관리

단쉔 조 약물은 중국 전역의 생산지로부터 샘플링되었다. 화학적 분석은 이들의 주성분과 다른 기지로부터의 샘플에 대하여 시행되었다. 결과는 샹글루오 (Shangluo)라는 지역으로부터의 단쉔의 품질이 전체중에서 최고인 것으로 나타났으며, 샹글루오의 기후가 단쉔의 성장에 가장 적합한 것으로 입증되었다. 탄쉬논 및 살비안산 A와 같은 단쉔의 활성성분이 양에서 최고임이 입증되었다.

(2) 지형학(topography)

샹글루오는 지리적으로 해발 900 미터로 동위 108°34′20″∼111°1′25″, 북위 33°2′30″∼34°24′40″에 위치한다. 이 지역은 낮고 중간 높이의 산들이 있는 지방으로 오염이 없다. 오염되지 않은 깨끗한 공기 환경이 약용 식물의 성장을 이상적으로 만든다.

(3) 기후

아열대로부터 온대로의 전이 지방의 산악 지역에 전형적인 온난하고 중등도-습한 기후이다. 남동 몬순의 영향을 받아 계절이 명확하게 구별되고 강우량이 많다. 이 지역의 일년 강수량의 예상은 733.9-899 ㎜로 예상된다. 일조 기간은 일년에 약 1874.1-2185 시간에 연간 일조량 119.57-124.36 ㎉/㎠이다. 온도는 18-40.8 ℃로 변화한다. 얼지 않는 기간은 일년에 198-218일 지속된다.

(4) 토양

샹글루오에서 토양의 80 %는 모래땅이고, 경작지 대부분은 pH 6.5-8의 중성 및 알칼리성 토양으로 되어있다. 경작층의 0-20 ㎝ 내 토양 영양소는 다음으로 구성된다: 1.36 % 유기물질; 0.085 % 질소; 18 ppm 속효성 인; 136 ppm 속효성 칼륨; 및 60 ppm 알칼리-가수분해 질소. 토양 중에 함유되는 중금속과 다른 독성 물질은 국가에서 정한 농업 표준을 초과하지 않는다. 지역은 식물과 동물이 풍부하다. 지역 농부들은 유기 비료를 사용한다.

(5) 중금속

납, 카드뮴, 수은, 비소 등을 포함하는 8 개 금속, 살충제 잔사, 공기 및 물은 모두 국가 환경 표준에 부합한다.

(6) 표준화

단쉔의 파종 및 경작은 우수 농업 실시(GAP; Good Agriculture Practice) 표준에 따른다. 단쉔의 성장에 관련되는 기술적 노하우는 기본적으로 책자로 편집되어 단쉔 경작자들에게 배포된다. 파종기 동안에는 기술자들이 경작자들에게 장소에 대한 훈련과 기술적 지원을 제공하기 위하여 야외로 파견되어, 대형 농원 유사한 규모로 단쉔의 재배를 표준화한다.

(7) 샹글루오 생산 기지는 20 가지 다른 단쉔 품종을 개량 및 경작한다. 다른 단쉔은 3 년 동안 그들의 성장 상태, 수확량, 외형 및 화학적 성분을 관찰하고 비교한다. 품질에서 최고 품종이 대형 규모의 농원용으로 선택된다.

(8) 조직 배양 및 복제 기술이 단쉔 배양에 채용되어 이 과정을 가속화하고 성장 주기를 단축시킨다.

(9) 30 일의 시험관 이식 기간 후, 확장된 번식 과정이 이루어진다. 이는 뿌리 기간(root period) 이전 40 일간 지속된다. 뿌리 기간은 식물이 그들의 뿌리를 발생 및 강화시키는 기간으로 별도로 10 일 걸린다. 뿌리 성장 속도는 보통 90 % 또는 그 이상에 도달한다. 다음에 식물은 묘상으로 옮겨지는데, 여기에는 진보된 스프레이 관개 장치와 조건이 컴퓨터 기술에 의해 제어된다. 묘상에서 1 달의 배양후 식물은 야외로 이식될 수 있다.

(10) 숙련자에 따라, 우리 생산 기지로부터 배양된 단쉔은 고품질일 뿐 아니라 그들의 생산성 뿌리(다른 지역의 것들 보다 뿌리 중량이 50 % 높다)와 높은 화학적 조성(다른 지역 샘플보다 활성 약물 성분에서 70 % 높다)으로 인해 생산성이 높다.

2. 천연 보르네올

(1) 성장 조건

천연 보르네올의 성장 지역은 중국 후난 지역의 진황(Xinhuang) 지방으로, 해발 300-600 m의 중간-높이 구릉 지대이다. 이 지역의 60 %가 눈으로 덮여있다. 땅은 pH 5-6의 황색과 적색의 모래토양으로 구성된다. 지역 내에 공기 또는 물 오염은 발견되지 않는다.

(2) 수목의 생물학적 특성

매우 강한 성장 능력으로, 관목숲 들판에서 자라,mu(666.7 ㎡와 동등) 당 300-400 개; 가지 잎 위의 부분을 수집하고; 순 증가(net gain)는mu당 1000 ㎏이다.

(3) 번식 및 이식

번식을 위해 접목과 꺾꽂이 기술을 이용한다. 식물은 첫해 동안 묘상 정원에서 성장하고 두 번째 해의 봄에 야외로 이식된다. 야외는 기름지고 주기적으로 갈아 엎을 필요가 있다.

(4) 식물은 높이 30 ㎝에 최장 지름 80-100 ㎝까지 성장할 수 있다. 이는 식물의 다른 부위에서 천연 캄포(camphor)를 포함한다: 잎, 가지, 줄기 및 뿌리. 무엇보다도, 잎은 가장 많은 캄포 함량을 갖는다.

(5) 징황 산 보르네올-타입 캄포는 시르나모니움 글란둘페름(월) 노에스 (Cirnamonium glandullferm (wall) Noes)의 천연 변종의 하나이다. 캄포 나무는 캄포와 보르네올 함량이 다양한데, 일부는 보르네올이 낮고 캄포가 높은 반면, 다른 것들은 보르네올이 높고 캄포가 낮다. 다량의 샘플과 많은 HPLC 분석에 의한 검사를 통해, 불순물이 적고 80 % 이상의 보르네올을 함유하는 종류의 캄포 나무를 선택하였다.

3. 노토진셍 근 (Radix Notoginseng)

a. 식물의 종자

(1) 노토진셍 근의 분석

분자량 표지를 위한 PCR 반응으로, 노토진셍 근을 염색 관찰할 수 있었으며, 노토진셍 근은 그의 특징적인 DNA 핑거프린트를 갖는다.

(2) 형태 및 특성

노토진셍 근 종자는 둥글고 원형 몸체를 갖는다. 다른 성장 시기의 종자로,노토진셍 근은 2-년 또는 3-년 종자를 갖는다. 2-년 종자는 건조된 곡물에서 직경 0.45-0.55 ㎝이고 중량 95-103 g이다. 3-년 종자는 건조된 곡물에서 직경 0.54-0.65 ㎝이고 중량 98-109 g이다.

(3) 종자 발아에 적합한 온도

종자 발아에 적합한 온도는 10-30 ℃, 이상적인 온도는 15-20 ℃이다.

(4) 물 함량

포함된 물의 양은 60-70 %이어야 하는데, 물 함량이 장시간 동안 20 % 보다 낮으면 종자는 생명력을 잃게 된다.

(5) 휴면

종자는 수집 후 45-60 일 동안 휴면을 겪는 성향을 갖는다.

(6) 수명

종자는 수집된 후 자연 상태에서 15 일의 수명을 갖는다.

(7) 종자의 저장을 위한 요건

저장을 위한 종자는 2 년 이상 성장한 식물로부터 수집되어야 하고 수목은 땅 위 부분이 무성하게 자라야 하고 해충이 없어야 한다. 종자는 3-년 식물로부터 수집하는 것이 권장된다.

(8) 종자 보존 장소를 위한 관리

종자 보존 장소는 일반 생산 장소 보다 더 잘 관리되어야 하고, 오염된 식물은 항상 처리되어야 하며, 해충은 어떠한 환경 하에서도 눈에 접촉하지 못하도록 해야 한다. 눈과 잎의 발아 기간 동안, 3000 ppm의 윤다-120(YunDa-120)과양강(Yang Kang) 생물 비료의 400 배 용액이 2 회 분무되어야 한다. 그리고, 개화 및 결실 기간 동안에는 피토키닌(phytokinin)을 분무한다.

(9) 종자의 수확 기간

노토진셍 종자의 수확 기간은 10월 말부터 12월 시작까지이다.

(10) 종자의 수집 방법

종자의 수집은 종자의 성숙도에 따라 결정된다. 보다 튼튼하게 성장한 나무의 종자가 수집되어 분리 저장될 것이다. 기지는 미성숙 나무의 수집을 엄격하게 금지한다.

(11) 처리

수집 직후 식물을 세척하는 한편, 펄프와 병든 종자는 골라낸다. 세척 후 식물을 햇볕에 말린다.

(12) 저장

58 % 메탈락실 망간 아연(metalaxyl manganous zinc) 용해액의 300 배 용액을 사용하여 노토진셍 근 종자를 30 분 동안 처리한다. 종자 표면이 건조되도록 하고, 20 % 물을 함유하는 습 모래에 종자를 저장한다. 이것이 처리에서 결정적인 단계이다.

(13) 포장

최종 산물을 오염되지 않은 용기에 포장한다. 수집 날짜, 처리 및 제품 배치 번호를 나타내는 표시가 있어야 한다.

(14) 운송

제품이 유해 물질에 오염되는 것을 방지하기 위해, 청결하고, 방수 및 환기가 되는 운송 차량이 운송에 사용되어야 한다. 운송에 8 시간 이상이 소요될 경우, 제품 종자는 습 모래와 함께 두어야 한다.

(15) 종자의 생명력 검사

TTC 방법을 사용한다: 테트라졸리움 분말 1 g을 정확히 칭량하고 증류수 1000 ㎖에 용해시켜 0.1 % TTC 용액을 조제한다. 샘플을 용액에 담그고 24 시간 동안 보존한 후, 꺼내서 반으로 잘라 반을 배양 디스크로 옮긴다. 조제된 0.1 % TTC를 사용하여 샘플을 30 분 동안 염색한다. 종자의 생명력은 종자의 색상에 의해 결정된다.

(16) 해충 검사

ⅰ. 500-1000 샘플 펠렛을 유리 또는 종이의 흰 시트 상에 놓고 종자를 육안으로 관찰한다. 샘플 표면에 비정상적인 반점 또는 해충이 나타난다면 오염이 결정될 수 있다. 오염된 샘플은 분리하여 그의 오염도를 확인하여야 한다.

ⅱ. 절단 및 검사: 외과용 메스를 사용하여 각각 100 종자를 함유하는 2 샘플을 절단 및 개봉한다. 오염된 종자의 수를 계산하여 오염도를 결정한다.

ⅲ. 검사 샘플의 냄새: 이들을 손에 놓고 어떠한 곰팡이 냄새가 나는가를 코로 검사한다. 또는 간단히 샘플을 열수(60-70 ℃)가 담긴 컵에 넣고 2-3 분 덮어서 물을 따라 버리고 종자의 냄새를 맡는다. 종자는 섬세한 향을 방출해야 하고, 그렇지 않으면 아마도 오염된 것이다.

(17) 색상 검사

오염되지 않은 종자는 연황색 및 백색을 가져야 한다.

(18) 현미경 검사

임의로 5 시험 샘플을 고르고(각 샘플은 종자 50 개 이상을 포함한다), 샘플을 배양 디스크에 24 시간 동안 보존한다. 이들을 현미경 하에서 관찰하여 어떠한 병원성 세균이 있는가를 검사하고, 그럴 경우 오염도를 계산한다.

b. 식물의 묘목

(1) 발아를 위한 온도

노토진셍 근의 발아를 위한 온도는 1-20 ℃, 이상적인 온도는 15 ℃이다.

(2) 물 함량

식물의 묘목에 사용되는 토양의 물 함량은 20-25 %이다.

(3) 저장

노토진셍 근의 발생은 휴면 눈으로부터 발아까지 90 일의 휴면 시기를 필요로 한다. 지베렐린 100 ppm은 노토진셍 근의 휴면 시기를 단축시키는 데 도움이 될 수 있다.

(4) 정제

노토진셍 근의 정제 시기는 12월의 시작으로부터 1월 끝까지이다. 정제중에 뿌리는 조심스럽게 다루어야 한다. 정제 직후 심는다.

(5) 운송

노토진셍 근은 장거리에 걸쳐 운송될 수 없으며, 그렇지 않을 경우 손상될 것이다. 피할 수 없다면, 노토진셍 근은 직사광선에 노출되지 않도록 하여, 흙과함께 환기가 되는 용기에 두어야 한다.

(6) 품질 검사

ⅰ. 각 유닛의 중량에 따라, 300-500 묘목을 샘플로 고르고 각각 100 묘목을 한 그룹으로 하여 저울 위에서 칭량하여 단위 중량을 계산한다.

ⅱ. 살충제 검사: 각각 100 묘목을 포함하는 4 개 샘플 그룹을 설정한다. 샘플들을 유리 디스크 위에 놓고 육안 또는 5-10 배율 확대 렌즈로 샘플을 관찰하여 살충제를 검사한다.

ⅲ. 각각 100 식물을 포함하는 4 개 샘플 그룹을 설정하여, 현미경 하에서의 관찰을 위해 샘플들을 잘게 썬다.

c. 묘목의 재배

(1) 야외 조건

노토진셍 근 묘목은 최고-조건의 지역에서 재배된다. 기지는 중앙 집중의 재배 및 대규모 재배 방법을 사용한다.

(2) 환경

지역은 완전히 오염 없는 곳이다. 공기의 품질은 GB 3059-96 표준의 레벨 2 위이다.

(3) 물의 원천

물의 원천은 빗물, 지하수, 및 자연적인 흐르는 물로 구성된다. 이 지역 물의 품질은 GB 5084-92 표준으로 모니터링된다.

(4) 토양

노토진셍 근은 진흙에서는 심을 수 없고, 노토진셍 근을 위해 선택된 토양 내 중금속의 양은 관련된 국가 표준 내에 있어야 한다.

(5) 이상적 토양

좋은 결과가 예상되도록, 15 °이하의 경사를 갖는 산성 토양(pH 5.5-7.0)을 선택하였다. 해발 1600 m 이하의 높이는 태양광 8-12 %이고, 1600 보다 높은 높이에서는 태양광 10-20 %이어야 한다.

(6) 온도

발아 기간 동안 대기 온도는 20-25 ℃, 토양 온도는 10-15 ℃이어야 한다. 수확 기간 동안 20-25 ℃가 최적 대기 온도이고, 15-20 ℃가 최적 토양 온도이다.

(7) 물 함량

토양의 물 함량은 25-30 % 이어야 한다.

(8) 토양 준비

토양 정리는 재배 전 3 회 반복하여야 하고, 토양이 태양광 하에 노출되어 토양 중의 세균 물질을 박멸하는 것을 돕는다.

(9) 토양 손질

뿌리 손상을 방지하기 위하여, 75-100 g의 석회가 이식 전 매 평방미터에 사용된다.

(10) 차양의 구조 및 관리

차양은 땅위 1.8 m로 땅 밑에 2 m 깊이의 트렌치를 갖는다. 태양광 투과는 해발 1600 m 이하인 지역이라면 8-10 %, 1600 m 보다 높으면 10-15 %가 최적이다.바닥은 평평하고; 흙의 깊은 층은 성글고; 흙의 표면 레벨은 단단해야 한다. 식재 철은 12월 말부터 1월 말까지가 가장 좋다. 식재 전, 종자를 58 % 메탈락실 아연 (500-800x) 또는 1.5 % 안티마이신(200 ppm)에 30-50 분 동안 담그고 건조되도록 한다. 이는 식물을 질병으로부터 보호하기 위한 것이다(코팅된 종자는 상기 과정을 거치지 않는다). 식재 밀도는 땅mu당 100-200천 종자로 4×5 ㎝ 또는 5×5 ㎝가 되도록 한다. 얕은 도랑을 형성하기 위하여 특수 기구를 사용하고, 기계 또는 손을 사용하여 파종 및 식재한다. 종자는 미세 토양으로 완전히 덮인다.

마지막으로, 토질을 비옥하게 하고, 관개 및 제초 작업이 수행된다. 잡초는 매번 제거되어야 한다. 차양이 파손되면, 즉시 수리되어 태양광의 적절한 투과가 보장되어야 한다. 천연 비료는 가금류 폐기물, 난로 재, 및 골재(인간 폐기물은 적용되지 않음)를 포함한다.

d. 노토진셍 근 재배

(1) 지세(topology)

땅은 15 ° 아래의 중등도 경사를 갖고 햇볕에 양호한 노출을 갖는 것이 최적이다.

(2) 토질

땅은 성글고 모래 토질이 깊이 위치하는 것이 최적이다.

(3) 토양의 pH는 5.5-7이어야 한다.

(4) 예비-재배 작물(Pre-planted crops)

토양 파괴를 피하여 옥수수, 밀, 및 콩이 새로운 장소에서 예비-재배된다.

(5) 해발

위도 23.5 ° 가까이 해발 1400-1800 m가 가장 적합한 노토진셍 근 재배 지역이다.

(6) 태양광

노토진셍 근은 8-20 % 태양광만을 필요로 하는 종류의 식물이다. 태양광 양은 성장의 다른 시기에 따라 증가하도록 변화되어야 한다. 그러나, 너무 많은 태양광 노출은 정체된 식물을 야기할 것이다.

(7) 물 함량

토양 내의 물 함량은 25-30 %이어야 한다.

(8) 비료

유기 비료가 복합 비료, 미소영양소 비료, 또는 미량-원소 비료와 함께 사용된다.

(9) 온도

노토진셍 근 지역에서 일년 중 평균 온도는 15-18 ℃로 추정된다. 발아 시기 동안, 대기 온도는 가장 적합한 것이 20-25 ℃, 토양 온도는 15 ℃이어야 한다. 영양소 전개 및 개화 시기 동안, 온도는 25 ℃로 유지되는 것이 좋다. 온도가 15 ℃ 아래이면 개화는 영향을 받을 것이다.

(10) 구획 정리

재배 전에, 밭은 그 구조가 분말화될 때까지 3 회 갈고 풀어놓아야 한다.

(11) 토양 관리

파종 및 이식 전에, 소독을 위해 생석회 75-100 g을 토양에 뿌린다.

(12) 모판의 표준화

높이 20-25 ㎝의 평평한 바닥의 흙 모판으로, 경사지에서는 15-20 ㎝가 되어야 한다. 모판의 폭은 타일 형태로 120 내지 140 ㎝ 사이에 있다. 모판의 바닥에서 토양은 성글고 꼭대기는 단단하여야 침투에 좋다.

(13) 종자 함침

이식 중에 종자를 58 % 메탈락실(500-800x) 중에 30-50 분 동안 함침하고 건조되도록 하는데, 이는 식물의 질병을 방지하고 해충을 제거할 것이다.

(14) 식재 밀도

식물 밀도에 있어서 10×12.5 ㎝-10×15 ㎝의 거리를 유지한다. 이것은 매mu마다 26-32천 식물이다.

(15) 이식 방법

묘목은 관리 목적을 위해 동일 방향을 향하도록 심는다. 경사진 바닥의 경우, 묘목은 낮은 끝에서 높은 바닥으로 심는다. 묘목의 제 1 열은 위를 향하도록 하는 반면 제 2 열은 바닥을 향하도록 한다. 눈도 위를 향하도록 하고 기부는 아래로 향한다.

(16) 토양의 도포

분말의 성글고 습한 토양을 사용하여 뿌리 또는 눈이 노출되지 않도록 묘목을 완전히 덮는다.

(17) 비료

특수 비료로서 가금류 폐기물, 난로재, 골재, 인산칼슘마그네슘 등을 사용한다.

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Claims

다음 단계를 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물 중의 단쉔수(Danshensu) 나트륨 및 프로토카테퀵 알데히드(protocatechuic aldehyde)의 박층크로마토그래피에 의한 확인 방법:

a) 다음 단계를 포함하는 분석을 준비하고:

ⅰ. 메탄올에 상기 조성물 적량을 용해시키고;

ⅱ. 용액의 적량을 0.5 % CMC-Na를 포함하는 실리콘 G 겔 플레이트 상에 접촉시키고;

ⅲ. 10:4:1.6 비율의 클로로포름, 아세톤 및 메탄올로 구성되는 전개용액으로 플레이트를 전개시키고;

ⅳ. 플레이트를 건조하고 암모니아 증기를 쐬서 15 분 동안 정치시키고;

ⅴ. 플레이트를 자외선 하에서 검사하여, 상기 조성물을 나타내는 반점이 표준품의 대응하는 위치에 있고 동일 색상을 보이는가를 검사하고; 그리고

b) 표준품으로서 단쉔수 나트륨과 프로토카테퀵 알데히드를 사용한다.
다음 단계를 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물의 박층크로마토그라피에 의한 지페노사이드(gypenoside)의 확인 방법:

a) 다음 단계를 포함하는 분석을 준비하고:

ⅰ. 암모니아 용매에 상기 조성물 적량을 용해시키고;

ⅱ. 용해된 조성물을 대형기공 흡수 수지 컬럼에 넣고; 속도는 0.5/분;

ⅲ. 대형기공 흡수 수지 컬럼을 세척하고 대형기공 흡수 수지 컬럼을 메탄올로 용출시키고;

ⅳ. 용출액을 수집하고;

ⅴ. 0.5 % CMC-Na를 포함하는 실리콘 G 겔 플레이트 상에 용출액을 접촉시키고;

ⅵ. 전개용액 10 ㎖로 플레이트를 전개시키고;

ⅶ. 건조하고 10 % 에탄올 설페이트로 분무한 후, 플레이트를 105 ℃에서 수 분간 건조하고;

ⅷ. 플레이트를 표준광 하에서 검사하여, 상기 조성물을 나타내는 반점이 표준품의 대응하는 위치에 있고 동일 색상을 보이는가를 검사하고; 그리고

b) 표준품으로 총 지페노사이드, 사포닌 R1 및 진세노사이드 Rg1을 사용한다.
다음 단계를 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물의 확인 방법:

a) 다음 단계를 포함하는 분석을 준비하고:

ⅰ. 내부 표준 파라-아미노벤조산 용매 중에 단쉔 점적 펠렛(Dan Shen Dropping Pellet) 조성물의 적량을 용해시키고;

ⅱ. 메탄올로 용액을 희석하고 원심분리하고;

ⅲ. 상등액을 수집하고;

b) 단쉔수(Danshensu) 및 프로토카테퀵 알데히드를 표준품으로 사용하고;

c) HPLC 분석을 실시하고; 그리고

d) 내부 표준법에 따라 계산한다.
제 3 항의 방법에 따를 때 도 1에 나타낸 8 개 피크를 형성하는 제품을 포함하는 조성물.

제 3 항의 방법에 따를 때 다음 표에 나타낸 핑거프린트를 형성하는 제품을 포함하는 조성물:

[표 3]

1 환 당 단쉔수(Danshensu) 약 0.14 내지 약 0.18 ㎎을 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물.
1 환 당 산키노사이드(sanchinoside) R1 12.12 ㎍ 이상 및 1 환 당 진세노사이드(ginsenoside) Rg1 56.26 ㎍ 이상을 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물.
살비아에 밀티오리자에 근(Radix Salviae Miltorrhizae)으로부터의 수용성 페놀산 성분 약 10-30 %, 노토진셍 근(Radix Notoginseng)으로부터의 사포닌의 추출물 2-6 %, 및 보르네올 약 1-3 %와 약제학적으로 적합한 담체를 함께 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물.
다음 단계를 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물을 얻는 방법:

a) 살비아에 밀티오리자에 근(Radix Salviae Miltorrhizae)을 다기능성 추출 탱크에 넣고; 식물 위 15-20 ㎝가 될 때까지 물을 가하고(식물의 양의 약 5-7 배); 증기로 끓을 때까지 가열하여, 내부 공기압이 0.04-0.06 mPa 사이로 제어되도록 하고; 탱크를 끓는 상태로 유지한다. 첫번째는 2 시간 동안, 다음은 1.5 시간 동안 2 회 끓인다. 추출물을 추출 탱크의 바닥에서 100-메쉬 망을 통하여 저장 탱크로 여과하고, 나머지는 버리고;

b) 용액을 저장 탱크로부터 진공 탱크로 옮긴다. 증기를 0.05 mPa 아래로 제어한다. 한편, 진공은 0.076∼-0.088 mPa까지 조정하여 탱크를 끓는 상태로 유지시킨다. 대략 용액 용적(리터)과 식물 중량(킬로그램)이 1:1의 비율로 용액을 농축시키고;

c) 여과하고, 용액의 에탄올 농도가 에탄올 비중계로 측정하여 70 %에 도달할 때까지 24 시간 동안 느리게 교반하면서 95 % 에탄올을 용액에 가하고;

d) 탱크를 개방하고, 에탄올 침전 용액의 상등액을 100 메쉬 망을 통해 진공 농축 탱크로 옮겨, 0.04-0.06 mPa 까지의 공기 입력 및 -0.076∼-0.088 mPa 까지의 진공으로 조정하여 탱크가 끓도록 유지하고, 에탄올을 식물 용액으로 회수하여 대략 용액 용적(리터)과 식물 중량(킬로그램)이 1:1의 비율로 되도록 하고;

e) 단계 (d)로부터의 용액을 예비-처리된 폴리아미드 크로마토그래피에 적하 용적 5 ㎖/g 폴리아미드로 적하하고 컬럼을 3 배 용적의 물로 세척하고, 컬럼을 5-10 배의 95 % 에탄올로 용출시키고; 그리고

f) 에탄올을 단계 (d)에서와 같이 회수하여 1.33-1.35의 밀도까지 농축시킨다.
다음 단계를 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물을 얻는 방법:

a) 노토진셍 근(Radix Notoginseng)을 다기능성 추출 탱크에 넣고; 식물 위 15-20 ㎝가 될 때까지 물을 가하고(식물의 양의 약 5-7 배); 증기로 끓을 때까지 가열하여, 내부 공기압이 0.04-0.06 mPa 사이로 제어되도록 하고; 탱크를 끓는 상태로 유지하고, 첫번째는 2 시간 동안, 다음은 1.5 시간 동안 2 회 끓이고, 추출물을 추출 탱크의 바닥에서 100-메쉬 망을 통하여 저장 탱크로 여과하고, 나머지는 버리고;

b) 대형기공 흡수 수지(macroporous adsorption resin).

ⅰ. 대형기공 흡수 수지 예비-처리: 95 % 에탄올에 24 시간 동안 함침시킨 후, 입자 크기 0.3-1.2 ㎜이고 평균 구멍 130-300 Å의 비극성 대형기공 흡수 수지 ZTC-1를 컬럼에 충전한다. 용출액이 동리 용적의 물로 투명할 때까지 컬럼을 에탄올과 동일 용적의 물로 세척하거나; 또는 컬럼을 0.1-1 ㏖/ℓ NaOH 또는 HCl로 세척한 후, 용출액이 더 이상 에탄올 냄새가 없거나 또는 pH 중성으로 될 때까지 컬럼을 물로 세척하고;

ⅱ. 단계 (a)로부터의 노토진셍 근의 추출물을 유속 0.5-5 ㎝/㎠/분으로 lg/lg 수지에 적하하고, 용출액이 맑게 될 때까지 컬럼을 세척하고, 70 % 에탄올로 용출한다. 유속은 0.5-5 ㎝/㎠/분이다. 용출액을 수집하고;

ⅲ. 회수 수지. 용출액이 동일 용적의 물을 가한 후 무색이고 투명하게 될 때까지 컬럼을 95 % 에탄올로 세척한다. 다음에 에탄올 냄새가 없을 때까지 컬럼을 물로 세척하고;

c) 75 % 에탄올 용출액을 100 메쉬 망을 통해 진공 농축 탱크로 옮겨, 0.04-0.06 mPa 까지의 공기 입력 및 -0.076∼-0.088 mPa 까지의 진공으로 조정하여 탱크가 끓도록 유지한다. 용출액의 밀도가 1.33-1.35에 도달할 때까지 에탄올을 회수하고, 이에 따라 노토진셍 사포닌의 추출물을 얻는다.
다음 단계를 포함하는, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물의 점적 펠렛을 얻는 방법:

a) 살비아에 밀티오리자에 근(Radix Salviae Miltorrhizae), 노토진셍 근(Radix Notoginseng)으로부터의 사포닌, 보르네올 및 폴리 6000의 유질을 용융 탱크 내에서 교반으로 혼합하여 혼합물을 균질화하고, 그것을 증기에 의해 80-85 ℃까지 가열하고, 용융된 혼합물 내에 덩어리 입자가 없을 때까지 30-40 분 동안 혼합물을 용융시키고;

b) 온도가 약 89-93 ℃이고; 냉각 용액은 온도가 8 ℃ 보다 낮은 유동 파라핀이고; 점적 헤드의 내경은 1.7 ㎜, 점적 헤드의 외경은 2.4 ㎜이고, 약물액과 점적 헤드 사이의 거리는 5-6 ㎝; 점적 헤드와 냉각 용액 사이의 거리는 26-31 ㎝, 냉각 용액의 깊이는 약 1 미터; 점적 속도는 60-90 펠렛/분인 점적 장치의 점적 포트로 용용된 혼합물을 이동시키고;

c) 냉각 오일로부터의 점적 펠렛을 취하고 탈-오일화를 위해 원심분리기에 넣고; 속도는 800-1100 rpm/분으로 15 분 동안 실시하여, 점적 펠렛을 생산한다.
제 10 항에 있어서, 대형기공 수지는 컬럼 내에 패킹되는 방법.
제 10 항에 있어서, 크로마토그래프 재료는 대형기공 수지(모델 D101)에 더하여 다공성 폴리머, 실리콘 겔, 산화알루미늄, 폴리아미드, 활성탄, 셀룰로스 또는 세파덱스로부터 선택되는 방법.
제 10 항에 있어서, 크로마토그래피프 컬럼 용출액은 60 ℃ 하에 감압에서상대 밀도 1.33-1.35까지 농축되는 방법.
외관이 방향, 쓴맛을 갖는 동일한 적갈색 또는 갈흑색으로 균질한 둥근 볼 형상인, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물.
중량편차가 21.25-28.75 ㎎ 사이의 범위 내에서 약 ±15 %이고(평균 펠렛 중량은 0.02500 g, RED=0.21); 밀도는 1.13-1.40 ㎎/㎣; 그리고 펠렛의 직경이 0.33-0.34 ㎝, RED=3.42인, 만성 안정성 협심증을 치료할 수 있는 식물 조성물.
제 9 항 내지 15 항의 어느 한 항의 방법에 의하여 생산된 제품을 포함하는 조성물.
제 3, 5, 6, 7 및 8 항의 어느 한 항의 조성물의 유효량과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
제 19 항의 제형에 있어서, 제형이 환제, 캡슐제, 과립제, 정제, 현탁제, 주사제, 시럽제, 또는 팅크제인 제형.
본 발명은 상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 대상에서 안정성 협심증을 치료하는 방법을 제공한다.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 대상에서 안정성 협심증을 치료하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 허혈성 심전도를 개선하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 협심증을 경감시키는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 니트로글리세린의 사용을 감소시키는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 빈박을 경감시키는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 비정상의 혈중 지질을 갖는 대상에서 콜레스테롤 및 트리글리세리드 혈중 농도를 감소시키는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 혈액 내 혈소판 응집을 감소시키는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여, 운동 내성을 개선하고 운동 지속시간, 운동 개시와 협심증 발생 사이의 간격 및 운동 개시와 ST 구획의 1 ㎜ 감소 사이의 간격을 연장시키는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여, 관상동맥 심장질환에 의하여 유도되는 여러 가지 종류 및 정도의 협심증을 치료하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 유리 라디칼을 청소 및 항산화하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여, 산소 유리 라디칼-유도의 지질 과산화에 의하여 야기되는 뇌 손상을 치료하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여, 산소 유리 라디칼-유도의 지질 과산화에 의하여 야기되는 간 손상을 치료하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여, 산소 유리라디칼-유도의 지질 과산화에 의하여 야기되는 심장 손상을 치료하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여, 산소 유리 라디칼-유도의 지질 과산화에 의하여 야기되는 만성 심장질환을 치료하는 방법.
상기 약제학적 조성물의 유효량을 대상에 투여하는 것에 의하여 본태성 고혈압을 치료하는 방법.
a) 살비아에 밀티오리자에 근(Radix Salviae Miltorrhizae)의 추출물, 파낙스 노토진셍(Panax Notoginseng)의 수용성 추출물, 및 보르네올;

b) 살비아에 밀티오리자에 근, 노토진셍, 보르네올, 및 담체; 그리고

c) 살비아에 밀티오리자에 근, 파낙스 로토진셍, 보르네올, 및 약제학적 담체를 포함하는, 단쉔 환(DSP; Dan Shen Pill)의 조성물.
다음을 위한 DSP의 용도:

a) 관상동맥 심장질환의 치료;

b) 다른 약물과 함께 관상동맥 심장질환의 치료;

c) 관상동맥 심장질환의 1차적 예방;

d) 다른 약물과 함께 관상동맥 심장질환의 1차적 예방;

e) 관상동맥 심장질환의 2차적 예방;

f) 다른 약물과 함께 관상동맥 심장질환의 2차적 예방;

g) 협심증 환자에 의한 질산염 섭취의 감소; 및

h) 혈청 콜레스테롤 농도의 감소.
다음 단계를 포함하는 분석 기술을 사용하여 치료 성분을 분석 및 확인하는 것에 의하여 약물 내의 치료 성분의 조성 및 농도를 표준화함으로써 약물의 품질을 관리하는 방법:

(a) 분석 기술을 사용하여 약물을 분획하고; 그리고

(b) 표준품으로서 관련된 정제 성분의 분석 프로파일과 비교하는 것에 의해 약물 내에 함유된 치료 성분을 확인 및 정량한다.
다음 부품을 포함하는, 쉽게 용해되어 기관으로 용이하게 전달될 수 있는 소형 약물을 제조하기 위한 점적 장치(dropping machine):

a) 온도 범위가 60-100 ℃인 점적 포트;

b) 온도가 8 ℃ 보다 낮은 유동 파라핀 냉각 용액;

c) 내경 1.8 ㎜ 및 외경 2.35 ㎜의 점적 헤드;

d) 냉각 용액의 표면으로부터 약 15 ㎝ 거리에 있는 점적 헤드;

e) 냉각 용액으로부터 약 0.5-1.5 m 거리에 있는 점적 헤드; 및

f) 분 당 30 펠렛 이상의 속도를 갖는 점적 헤드.
파낙스 노토진셍(Panax Notoginseng) 추출물 1-10 %를 포함하는 조성물로 심장 혈관 질환을 치료 및 예방하는 방법.
살비아에 밀티오리자에 근(Radix Salviae Miltorrhizae) 추출물 5-40 %를 포함하는 조성물로 심장 혈관 질환을 치료 및 예방하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물이 보르네올 1-5 %를 추가로 포함하는 방법.
제 2 항에 있어서, 상기 조성물이 보르네올 1-5 %를 추가로 포함하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 조성물이 청구항 2를 더욱 포함하는 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 조성물이 보르네올 1-5 %를 추가로 포함하는 방법.
제 1 항 내지 제 6 항의 어느 한 항의 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 심장 혈관 질환 관상동맥 심장질환을 치료 및 예방하는 방법.
제 1 항 내지 제 6 항의 어느 한 항의 유효량을 다른 약물과 함께 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 심장 혈관 질환을 치료 및 예방하는 방법.
제 1 항 내지 제 6 항의 어느 한 항의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 니트로글리세린 섭취를 감소시키는 방법.
제 1 항 내지 제 6 항의 어느 한 항의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 혈청 콜레스테롤 농도를 감소시키는 방법.
다음 단계를 포함하는, 약제학적 조성물이 심장 혈관 질환을 치료 및 예방할 수 있는지 여부를 결정하는 방법:

a) 고속액체크로마토그래피(HPLC)에 의해 약제학적 조성물을 분획하고;

b) 약제학적 조성물의 분획의 유지 시간을 사포닌 R1, 사포닌 Rg 및 사포닌 Re의 유지 시간과 비교하고; 그리고

c) 사포닌 R1, 사포닌 Rg 및 사포닌 Re의 유지 시간과 유지 시간이 등가인 분획을 약제학적 조성물이 포함하고 있는지를 결정한다.
다음 단계를 포함하는, 약제학적 조성물이 심장 혈관 질환을 치료 및 예방할 수 있는가를 결정하는 방법:

a) 박층크로마토그래피(TLC)에 의해 약제학적 조성물을 분획하고;

b) 약제학적 조성물의 분획의 위치 및 색상을 3,4-디하이드록시페닐 락트산 및 프로토카테퀵 알데히드의 위치 및 색상과 비교하고; 그리고

c) 3,4-디하이드록시페닐 락트산 및 프로토카테퀵 알데히드의 위치 및 색상과 그 위치 및 색상이 등가인 분획을 약제학적 조성물이 포함하고 있는지를 결정한다.
다음 단계를 포함하는, 약제학적 조성물이 심장 혈관 질환을 치료 및 예방할 수 있는가를 결정하는 방법:

a) 약제학적 조성물로 또는 약제학적 조성물 없이 심근을 처치하고;

b) 약제학적 조성물로 또는 약제학적 조성물 없이 처치된 심근 내 칼슘 유입률을 비교하고; 그리고

c) 약제학적 조성물이 심근으로의 칼슘 유입을 감소시키는가를 결정한다.