CN113125627B - 一种治疗肾病的中药组合物的有效成分检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗肾病的中药组合物的有效成分检测方法，其包括采用薄层色谱法对黄连、丹参、陈皮和/或牛膝的有效成分，如盐酸小檗碱、蜕皮甾酮、橙皮苷和/或原儿茶醛等有效成分的检测。本发明的薄层色谱法可定性检测治疗肾脏病的中药组合物的有效成分，其操作简便，重复性和稳定性好，结果准确，作为中药复方制剂有效成分的定性检测方法，增强了整个有效成分检测方法的合理性和可靠性。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测领域，具体涉及一种治疗肾病的中药组合物的有效成分检测方法。
背景技术
肾功能衰竭等肾脏疾病是临床常见重病，通常采用透析和肾移植治疗，但医疗费用过高，一般家庭经济无法负担，且透析治疗过程中易引发并发症。肾移植手术后还普遍存在排斥反应，对此，患者及其家属普遍较难承受。应用传统中药如肾衰宁胶囊等则能够有效避免上述情况发生，其能够有效缓解症状，减少患者痛苦，但为保障临床疗效更显著，还需对其进行改进。
为保障以高质量的例如肾衰宁胶囊的这些治疗肾病的中药进行治疗，并使其在临床中充分发挥功效，使患者尽早恢复健康，此类药物的有效成分检测至关重要，而现有的治疗肾病的药物—肾衰宁胶囊的有效成分检测方法，其君药大黄及黄连的有效成份未得以充分监控，其鉴别项质量控制方法仅纳入大黄、丹参、太子参的薄层色谱鉴别，并不能很好地反应制剂的质量。因此，为了维护患者利益，很有必要在现有技术基础之上研究并设计出能测定和控制多种药材的方法。
在防病治病方面，中药及其提取制剂占据着重要的位置，其有效成分检测方法主要是显微鉴别、薄层鉴别与含量测定。目前在各类国家质量标准中，鉴别的收载率都比较低，约为处方中药味数的30～40％，无法全方位控制产品质量。而且多是单一药材的鉴别和单一成分的定量。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。一个含5～6项鉴别和一项含量测定的质量标准检测完成一般要花费4～5天的时间，如遇复试花费时间更长，检测速度严重制约着中药现代化生产速度。所以寻找简便、快捷、全方位控制中药质量的检测方法，成为中药质量控制必须突破的难关。
发明内容
为解决上述问题，本发明的第一方面提供了一种用于治疗肾病的中药组合物的有效成分检测方法，所述方法采用一步法制备所述中药组合物的四种供试品溶液，以这些供试品溶液分别通过薄层色谱法确定该中药组合物中选自黄连、丹参、牛膝和陈皮中的一种或多种药材有效成分的存在。所述检测方法无需针对中药组合物中的各种药材分别制备不同的供试品溶液，大大降低了检测成本，提高了检测效率。
具体地，本发明提供的包含丹参、陈皮、黄连和牛膝的治疗肾病的中药组合物的有效成分检测方法包括以下步骤：
(1)取中药组合物，加入甲醇进行提取，蒸干甲醇，加入水使溶解，加入乙醚萃取，乙醚层挥干乙醚，加无水乙醇溶解，作为原儿茶醛供试品溶液；水层加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层蒸干乙酸乙酯，加入甲醇溶解，作为陈皮供试品溶液；水层加入正丁醇萃取，正丁醇层蒸干溶剂，加入甲醇溶解，制得牛膝或黄连供试品溶液；
(2)制备黄连、牛膝、陈皮对照药材溶液和/或原儿茶醛对照品溶液；
(3)取步骤(1)制得的一种、两种或更多种供试品溶液和步骤(2)制备的与所述一种或多种供试品溶液对应的对照药材溶液或对照品溶液，点样于薄层板，置于展开剂展开；
(4)将步骤(3)中展开的薄层板晾干并检视。氢氧化钠溶液
优选地，所述检测方法包括以下步骤：
(1)取中药组合物，加入甲醇，加热回流，冷却，过滤，收集滤液，蒸干甲醇，加入水使溶解，加入乙醚萃取，乙醚层挥干乙醚，残渣加无水乙醇溶解，作为原儿茶醛供试品溶液；水层加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层蒸干乙酸乙酯，加入甲醇溶解，作为陈皮供试品溶液；水层加入水饱和正丁醇萃取，正丁醇层加入0.01g/ml氢氧化钠溶液洗涤，再加入水洗涤，弃去洗涤液，将正丁醇液蒸干溶剂，加入甲醇溶解，制得牛膝或黄连供试品溶液；
(2)制备黄连、牛膝、陈皮对照药材溶液和/或原儿茶醛对照品溶液；
(3)取步骤(1)制得的一种、两种或更多种供试品溶液和步骤(2)制备的与所述一种或多种供试品溶液对应的对照药材溶液或对照品溶液，点样于薄层板，置于展开剂展开；其中黄连、牛膝和丹参的有效成分检测采用硅胶G薄层板，陈皮的有效成分检测采用聚酰胺薄层板；
(4)将步骤(3)中展开的薄层板晾干，置紫外灯下检视或喷以显色剂使其显色后检视。
优选地，在所述步骤(2)中，制备黄连对照药材溶液包括取黄连对照药材，加入甲醇，超声提取，制得黄连对照药材溶液；制备牛膝对照药材溶液包括取牛膝对照药材，加入甲醇水溶液，加热回流，冷却，过滤，加入水，加入乙醚洗涤，收集水层，加入水饱和正丁醇萃取，正丁醇层蒸干正丁醇，加入甲醇使溶解，制得牛膝对照药材溶液；制备陈皮对照药材溶液包括取陈皮对照药材，加入水，加热回流，冷却，过滤，加入乙醚萃取，弃去乙醚层，收集水层，加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯液蒸干乙酸乙酯，加入甲醇使溶解，作为陈皮对照药材溶液；制备原儿茶醛对照溶液包括取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成溶液，作为原儿茶醛对照品溶液。
优选地，所述检测方法还包括以下步骤：所述黄连供试品溶液、黄连对照药材溶液与盐酸小檗碱对照品溶液一同点样于薄层板，置于展开剂展开；所述牛膝供试品溶液、牛膝对照药材溶液与蜕皮甾酮对照品溶液一同点样于薄层板，置于展开剂展开；和/或所述陈皮供试品溶液、陈皮对照药材溶液与橙皮苷对照品溶液一同点样于薄层板，置于展开剂展开。
优选地，所述盐酸小檗碱对照品溶液、蜕皮甾酮对照品溶液或橙皮苷对照品溶液的制备方法包括：分别取盐酸小檗碱、蜕皮甾酮或橙皮苷对照品，加入甲醇，制成相应的对照品溶液。
在所述检测方法中，优选地，所述供试品溶液的点样量为：黄连供试品溶液为2-20μl，优选为10μl；牛膝供试品溶液为2-20μl，优选为10μl；陈皮供试品溶液为1-5μl，优选为3μl；原儿茶醛供试品溶液为1-15μl，优选为10μl。
在所述检测方法中，优选地，所述展开剂为：
黄连的有效成分的检测：体积比为6：3：1.5：1.5：0.3的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水；
牛膝的有效成分的检测：体积比为10：2：0.05的二氯甲烷-甲醇-甲酸；
陈皮的有效成分的检测：体积比为100：20：17的二氯甲烷-丙酮-甲醇；
丹参的有效成分的检测：体积比为12∶1∶1的三氯甲烷-丙酮-甲酸。
优选地，所述中药组合物包含丹参、大黄、太子参、黄连、牛膝、半夏、红花、茯苓、陈皮和甘草。
更优选地，按重量份数计，所述中药组合物包含：太子参20-30份，半夏20-30份，茯苓16-24份，丹参56-84份，红花8-12份，黄连8-12份，陈皮8-12份，大黄32-48份，牛膝16-24份和甘草8-12份。
进一步优选地，按重量份数计，所述中药组合物包含：太子参25份，半夏25份，茯苓20份，丹参70份，红花10份，黄连10份，陈皮10份，大黄40份，牛膝20份和甘草10份。
最优选地，所述中药组合物是肾衰宁胶囊。
根据本发明的一个实施方案，本发明所述的检测方法包括以下步骤：
(1)取中药组合物，加入甲醇，加热回流，冷却，过滤，收集滤液，蒸干甲醇，加入水使溶解，加入乙醚萃取三次，合并乙醚层，乙醚层挥干乙醚，残渣加无水乙醇溶解，作为原儿茶醛供试品溶液；水层加入乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯层，乙酸乙酯层蒸干乙酸乙酯，加入甲醇溶解，作为陈皮供试品溶液；水层加入水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层，正丁醇层加入0.01g/ml氢氧化钠溶液洗涤三次，再加入水洗涤一次，弃去洗涤液，将正丁醇液蒸干溶剂，加入甲醇使溶解，制得牛膝或黄连供试品溶液；另取黄连对照药材，加入甲醇，超声提取，作为黄连对照药材溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加入甲醇制成溶液，作为对照品溶液；吸取黄连供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以体积比为6：3：1.5：1.5：0.3的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂的饱和氨水展开缸内，饱和，展开，取出，晾干，置于波长为365nm的紫外灯下检视；
(2)取(1)项的牛膝供试品溶液，另取牛膝对照药材，加入体积比为50％的甲醇水溶液，加热回流，冷却，过滤，加入水，加入乙醚洗涤两次，收集水层，加入水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层，蒸干正丁醇，加入甲醇使溶解，作为对照药材溶液；另取蜕皮甾酮对照品，加入甲醇制成溶液，作为对照品溶液；吸取牛膝供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以体积比为10：2：0.05的二氯甲烷-甲醇-甲酸为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸-乙醇溶液，105℃加热至显色。
(3)取(1)项的陈皮供试品溶液，另取陈皮对照药材，加入水，加热回流，冷却，过滤，加入乙醚萃取三次，弃去乙醚层，收集水层，加入乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯液，蒸干乙酸乙酯，加入甲醇使溶解，作为对照药材溶液；另取橙皮苷对照品适量，加入甲醇，制成饱和溶液，作为为对照品溶液；吸取陈皮供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一聚酰胺薄层板上，置于以体积比为100：20：17的二氯甲烷-丙酮-甲醇为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝-乙醇溶液反应，置于波长为365nm的紫外灯下检视。
(4)取(1)项的原儿茶醛供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成溶液，作为对照品溶液；吸取两种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为12∶1∶1的二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁试液显色。
根据本发明的一个具体实施方案，本发明所述的检测方法包括以下步骤：
(1)取中药组合物15g，加入甲醇100ml，加热回流1h，冷却，过滤，收集滤液，蒸干甲醇，加入水100ml使溶解，加入乙醚萃取三次，每次25ml，合并乙醚层，乙醚层挥干乙醚，残渣加无水乙醇溶解，作为原儿茶醛供试品溶液；水层加入乙酸乙酯萃取三次，每次50ml，合并乙酸乙酯层，乙酸乙酯层蒸干乙酸乙酯，加入甲醇溶解，作为陈皮供试品溶液；水层加入水饱和正丁醇萃取三次，每次50ml，合并正丁醇层，正丁醇层加入0.01g/ml氢氧化钠溶液，洗涤三次，每次50ml，再加入100ml水洗涤一次，弃去洗涤液，将正丁醇液蒸干溶剂，加入甲醇4ml使溶解，制得牛膝或黄连供试品溶液。另取黄连对照药材1g，加入甲醇10ml，超声提取40分钟(功率250W，50KHz)，作为黄连对照药材溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加入甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取黄连供试品溶液5～10μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(体积比6：3：1.5：1.5：0.3)为展开剂的饱和氨水展开缸内，饱和30分钟，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显至少三个相同颜色的荧光主斑点；在对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(2)取(1)项的牛膝供试品溶液。另取牛膝对照药材1g，加入体积比为50％的甲醇溶液50ml，加热回流1小时，冷却，过滤，加入水30ml，加入乙醚洗涤两次，每次25ml，收集水层，加入水饱和正丁醇萃取三次，每次20ml，合并正丁醇层，蒸干正丁醇，加入甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；另取蜕皮甾酮对照品，加入甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取牛膝供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以二氯甲烷-甲醇-甲酸(体积比10：2：0.05)为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸-乙醇溶液，105℃加热至显色。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)取(1)项的陈皮供试品溶液。另取陈皮对照药材2g，加入水20ml，加热回流30min，冷却，过滤，加入乙醚萃取三次，每次25ml，弃去乙醚层，收集水层，加入乙酸乙酯萃取三次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，蒸干乙酸乙酯，加入甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液；另取橙皮苷对照品适量，加入甲醇，制成饱和溶液，作为为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取陈皮供试品溶液3μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，置于以二氯甲烷-丙酮-甲醇(体积比100：20：17)为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝-乙醇溶液，反应30min，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显至少一个相同颜色的荧光主斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取(1)项的原儿茶醛供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸(体积比12∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明第二方面提供了一种包含丹参、陈皮、黄连和牛膝的治疗肾病的中药组合物中盐酸小檗碱、蜕皮甾酮、橙皮苷和原儿茶醛中的一种、两种或更多种的检测方法，其通过本发明第一方面所述的检测方法来实现。
本发明依据国家确保制剂安全有效的政策，利用薄层色谱鉴别技术，制定了包含丹参、陈皮、黄连和牛膝的治疗肾病的中药组合物中药材有效成分的检测方法。该检测方法与常规方法相比，简便、快捷、效率高、成本低、无污染，有效提高了结果的准确性与重现性，可用于控制所述中药组合物的质量。本发明建立的中药组合物，例如肾衰宁胶囊的薄层鉴别方法中以丹参、黄连、牛膝、陈皮为对照药材，供试品溶液只制备一次，可供多种药材检查使用、节约前处理时间、不用苯等毒性大的试剂，符合环保和安全要求。所建立的薄层鉴别方法分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，此方法操作简便，专属性强，重现性好。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别，展距：9cm，温度：26℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺黄连)；4.黄连对照药材(批号：120913-201611)；5.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图2显示肾衰宁胶囊中黄连成分不同点样量的薄层色谱鉴别，展距：9cm，温度：8℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.2μl点样量；2.5μl点样量；3.10μl点样量；4.15μl点样量；5.20μl点样量；6.阴性样品(缺黄连)；7.黄连对照药材(批号：120913-201611)；8.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图3显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别耐用性实验，展距：9cm，温度：8℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺黄连)；4.黄连对照药材(批号：120913-201611)；5.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图4显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别耐用性实验，展距：9cm，温度：26℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺黄连)；4.黄连对照药材(批号：120913-201611)；5.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图5显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别耐用性实验，展距：9cm，温度：40℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺黄连)；4.黄连对照药材(批号：120913-201611)；5.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图6显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别耐用性实验，硅胶板：青岛海洋硅胶G板，展距：9cm，温度：25℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺黄连)；4.黄连对照药材(批号：120913-201611)；5.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图7显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别耐用性实验，硅胶板：邦凯硅胶G板，展距：9cm，温度：25℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺黄连)；4.黄连对照药材(批号：120913-201611)；5.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图8显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别耐用性实验，硅胶板：基亿达硅胶G板，展距：9cm，温度：25℃，湿度：10％，展开剂：甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺黄连)；4.黄连对照药材(批号：120913-201611)；5.盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图9显示14批肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别，1～5、9～13、17～20为14批肾衰宁胶囊样品(批号依次为：20180805、20180806、20180907、20180908、20190108、20190206、20190207、20190302、201900303、20190403、20190404、20190406、20190407、20190409)。6、14、21为肾衰宁胶囊黄连阴性样品；7、15、22为黄连对照药材(批号：120913-201611)，8、16、23为盐酸小檗碱(批号：110713-201814)。
图10显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，展距：9cm，温度：22℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺牛膝)；4.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；5.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图11显示肾衰宁胶囊中牛膝成分不同点样量的薄层色谱鉴别，展距：9cm，温度：8℃，湿度：10％，展开剂：二氯甲烷-丙酮-甲醇(10：2：0.05)。1.2μl点样量；2.5μl点样量；3.10μl点样量；4.15μl点样量；5.20μl点样量；6.阴性样品(缺牛膝)；7.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；8.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图12显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别耐用性试验，展距：9cm，温度：8℃，湿度：10％，展开剂：二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺牛膝)；4.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；5.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图13显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别耐用性试验，展距：9cm，温度：22℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺牛膝)；4.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；5.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图14显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别耐用性试验，展距：9cm，温度：30℃，湿度：15％，展开剂：二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺牛膝)；4.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；5.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图15显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别耐用性试验，展距：10cm，温度：22℃，湿度：34％，硅胶板：黄海高效硅胶G板，展开剂：二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺牛膝)；4.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；5.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图16显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别耐用性试验，展距：9cm，温度：22℃，湿度：34％，硅胶板：邦凯高效硅胶G板，展开剂：二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺牛膝)；4.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；5.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图17显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别耐用性试验，展距：10cm，温度：22℃，湿度：34％，硅胶板：青岛海洋高效硅胶G板，展开剂：二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺牛膝)；4.牛膝对照药材(批号：121066-201809)；5.蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图18显示14批肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，1～5、9～13、17～20为14批肾衰宁胶囊样品(批号依次为：20180805、20180806、20180907、20180908、20190108、20190206、20190207、20190302、201900303、20190403、20190404、20190406、20190407、20190409)。6、14、21为肾衰宁胶囊牛膝阴性样品；7、15、22为牛膝对照药材(批号：121066-201809)；8、16、23为蜕皮甾酮(批号：111638-201706)。
图19显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴定，展距：9cm，温度：26℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷-丙酮-甲醇(10：2：1.7)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺陈皮)；4.陈皮对照药材(批号：120969-201510)；5.橙皮苷(批号：110721-201818)。
图20显示肾衰宁胶囊陈皮成分不同点样量的薄层色谱鉴定，展距：9cm，温度：26℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷-丙酮-甲醇(10：2：1.7)。1.1μl点样量；2.2μl点样量；3.3μl点样量；4.5μl点样量；5.10μl点样量；6.陈皮对照药材(批号：120969-201510)；7.橙皮苷(批号：110721-201818)。
图21显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴定耐用性实验，展距：9cm，温度：8℃，湿度：10％，展开剂：二氯甲烷-丙酮-甲醇(10：2：1.7)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺陈皮)；4.陈皮对照药材(批号：120969-201510)；5.橙皮苷(批号：110721-201818)。
图22显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴定耐用性实验，展距：9cm，温度：22℃，湿度：35％，展开剂：二氯甲烷-丙酮-甲醇(10：2：1.7)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺陈皮)；4.陈皮对照药材(批号：120969-201510)；5.橙皮苷(批号：110721-201818)。
图23显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴定耐用性实验，展距：9cm，温度：30℃，湿度：38％，展开剂：二氯甲烷-丙酮-甲醇(10：2：1.7)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺陈皮)；4.陈皮对照药材(批号：120969-201510)；5.橙皮苷(批号：110721-201818)。
图24显示14批肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，1～5、9～13、17～20为14批肾衰宁胶囊样品(批号依次为：20180805、20180806、20180907、20180908、20190206、20190207、20190108、20190302、201900303、20190403、20190404、20190406、20190407、20190409)。6、14、21为肾衰宁胶囊陈皮阴性样品；7、15、22为陈皮对照药材(批号：120969-201510)；8、16、23为橙皮苷对照品(批号：110721-201818)。
图25显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别，展距：9cm，温度：24℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺丹参)；4.原儿茶醛(110810-201608)。
图26显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别，展距：9cm，温度：24℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)，1.1μl点样量，2.3μl点样量，3.5μl点样量，4.10μl点样量，5.15μl点样量，6.阴性样品(缺丹参)，7.原儿茶醛(110810-201608)。
图27显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别耐用性实验，展距：9cm，温度：24℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺丹参)；4.原儿茶醛(110810-201608)。
图28显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别耐用性实验，展距：9cm，温度：8℃，湿度：10％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺丹参)；4.原儿茶醛(110810-201608)。
图29显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别耐用性实验，展距：9cm，温度：30℃，湿度：54％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)，1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)，2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)，3.阴性样品(缺丹参)，4.原儿茶醛(110810-201608)。
图30显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别耐用性实验，薄层板：青岛海洋硅胶G板，展距：9cm，温度：24℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺丹参)；4.原儿茶醛(110810-201608)。
图31显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别耐用性实验，薄层板：基伊达硅胶G板，展距：9cm，温度：24℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺丹参)；4.原儿茶醛(110810-201608)。
图32显示肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别耐用性实验，薄层板：邦凯硅胶G板，展距：9cm，温度：24℃，湿度：34％，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)。1.肾衰宁胶囊(批号：20180806)；2.肾衰宁胶囊(批号：20180907)；3.阴性样品(缺丹参)；4.原儿茶醛(110810-201608)。
图33显示14批肾衰宁胶囊中丹参的薄层色谱鉴别，1～14为14批肾衰宁胶囊样品(批号依次为：20180805、20180806、20180907、20180908、20190108、20190206、20190207、20190302、201900303、20190403、20190404、20190406、20190407、20190409)。15为阴性样品(缺丹参)；16为原儿茶醛(110810-201608)。
图34显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别。薄层板：硅胶GF254薄层板，展开剂：三氯甲烷—甲醇—水—甲酸(7：3：0.5：0.05)，显色：254nm紫外荧光显色。1：20180806(肾衰宁胶囊批号，以下同)；2：20180907；3：牛膝对照药材；4：蜕皮甾酮。
图35显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别。薄层板：硅胶GF254薄层板，展开剂：正丁醇—甲醇—水(6：1：5)，显色：254nm紫外荧光显色。1：20180806；2：20180907；3：牛膝对照药材；4：蜕皮甾酮。
图36显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶GF254薄层板，展开剂：③正丁醇—甲醇—水(6：1：1)、②正丁醇—甲醇(6：1)、①正丁醇—甲醇—水(6：1：2)，显色：254nm紫外荧光显色。1、5、9：20180806；2、6、10：20180907；3、7、11：牛膝对照药材；4、8、12：蜕皮甾酮。
图37显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：③环己烷—丙酮—乙酸乙酯(5：2：1)、②三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—氨水(2：4：8：1)、①三氯甲烷—甲醇—水—甲酸(7：3：0.5：0.05)，显色：喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色。1、5、9：20180806；2、6、10：20180907；3、7、11：牛膝对照药材；4、8、12：蜕皮甾酮。
图38显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：甲苯—乙酸乙酯—乙酸(14：4：0.5)，显色：喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干。1：牛膝阴性样品；2：牛膝对照药材；3：齐墩果酸；4：20180907。
图39显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：石油醚—三氯甲烷—甲醇(5：10：0.5)，显色：喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干。1：牛膝阴性样品；2：牛膝对照药材；3：齐墩果酸；4：20180907。
图40显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：环己烷—三氯甲烷—乙酸乙酯—乙酸(20：5：8：0.5)，显色：喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干。1：牛膝阴性样品；2：牛膝对照药材；3：齐墩果酸；4：20180907。
图41显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：环己烷—丙酮—乙酸乙酯(5：2：1)，显色：喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干。1：牛膝阴性样品；2：牛膝对照药材；3：齐墩果酸；4：20180907。
图42显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：石油醚—甲醇(10：0.5)，显色：喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干。1：牛膝阴性样品；2：牛膝对照药材；3：齐墩果酸；4：20180907。
图43显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：石油醚—甲醇—乙酸(10：1：0.5)，显色：喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干。1：牛膝阴性样品；2：牛膝对照药材；3：齐墩果酸；4：20180907。
图44显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：石油醚—甲醇—乙酸(10：0.5：0.5)，显色：喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干。1：牛膝阴性样品；2：牛膝对照药材；3：齐墩果酸；4：20180907。
图45显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：高效硅胶G薄层板，展开剂：三氯甲烷—甲醇—水—甲酸(7：2：0.5：0.05)，显色：喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色。1：牛膝对照药材；2：牛膝对照药材；3：牛膝对照药材；4：0.005g/ml氢氧化钠溶液洗涤样品；5：牛膝对照药材；6：0.01g/ml氢氧化钠溶液洗涤样品；7：牛膝对照药材；8：蜕皮甾酮；9：牛膝对照药材。
图46显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：高效硅胶G薄层板，展开剂：二氯甲烷—甲醇—甲酸(7：1：0.05)，显色：喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色。1：牛膝对照药材；2：0.005g/ml氢氧化钠溶液洗涤样品；3：牛膝对照药材；4：0.01g/ml氢氧化钠溶液洗涤样品5：牛膝对照药材；6：蜕皮甾酮；7：牛膝对照药材。
图47显示肾衰宁胶囊中牛膝的薄层色谱鉴别，薄层板：高效硅胶G薄层板，展开剂：二氯甲烷—甲醇—甲酸(7：1：0.05)，显色：喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色。1：牛膝对照药材；2：蜕皮甾酮；3：牛膝对照药材；4：0.01g/ml氢氧化钠溶液洗涤样品；5：牛膝对照药材；6：0.005g/ml氢氧化钠溶液洗涤样品；7：牛膝对照药材。
图48显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.20180805回流；2.20180805超声；3.20180806回流；4.20180806超声；5.陈皮对照药材5μl；6.陈皮对照药材5μl；7.陈皮对照药材5μl。
图49显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约13cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。0.缺大黄对照；1.20180805回流；2.20180805超声；3.20180806回流；4.20180806超声；5.陈皮对照药材5μ1。
图50显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，以石油醚-乙酸乙酯(1：1)为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.20180805回流；2.20180805超声；3.缺大黄对照；4.陈皮药材对照药材。
图51显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(5.5：4.5：0.1)为展开剂，展开到8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.20180805超声；2.缺大黄对照；3.陈皮对照药材；4.橙皮苷。
图52显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：聚酰胺薄膜，以二氯甲烷-丙酮-甲醇(5：1：1)展开剂，展开到7cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.20180805超声；2.缺大黄对照；3.陈皮对照药材。
图53显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：聚酰胺薄膜，以二氯甲烷-丙酮-甲醇(5：1：1)为展开剂，展至约7cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.缺大黄对照；2.陈皮对照药材；3.橙皮苷；4.肾衰宁胶囊；5.大黄粉；6.大黄膏。
图54显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(5.5：4.5：0.1)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.甲醇提取乙醚萃取层；2.甲醇超声提取部；3.甲醇提取-乙酸乙酯萃取层；4.甲醇提取-萃取正丁醇层；5.水提取-乙酸乙酯萃取层；6.水提取-正丁醇萃取层；7.水提取-乙醚萃取层；8.陈皮对照药材；9.橙皮苷。
图55显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.水提取-正丁醇萃取层2μ1；2.水提取-正丁醇萃取层醇4μ1；3.水提取-正丁醇萃取层5μ1；4.水提取-正丁醇萃取层7μ1；5.水提取-正丁醇萃取层10μ1；6.缺陈皮阴性对照；7.陈皮药材对照；8.阴性对照。
图56显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：聚酰胺薄膜，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.水提取-乙醚萃取层；2.水提取-乙酸乙酯萃取层；3.水提取-正丁醇萃取层；4.水提取-萃取后水层；5.橙皮苷；6.陈皮对照药材；7.阴性对照。
图57显示肾衰宁胶囊中陈皮的薄层色谱鉴别，薄层板：0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。1.水提取-乙醚萃取层-甲醇溶解；2.乙醇提取；3.水提取-乙酸乙酯萃取层；4.水提取-乙醚萃取层；5.水提取-正丁醇萃取层；6.甲醇超声；7.阴性对照；8.陈皮对照药材；9.橙皮苷。
图58显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别，薄层板：高效硅胶G薄层板，展开剂：苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.3)，晾干，置365nm紫外光灯下检视。1：20180805；2：20180806；3：黄连对照药材；4：盐酸小檗碱。
图59显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别，薄层板：高效硅胶G薄层板，展开剂：苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.2)，晾干，置365nm紫外光灯下检视。1：20180607半成品；2：20180607；3：2倍取样量20180607；4：20180713；5：20180805；6：20180806；7：黄连对照药材；8：盐酸小檗碱。
图60显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别，薄层板：高效硅胶G板，展开剂：苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.1)，晾干，置365nm紫外光灯下检视。1：20180607；2：20180608；3：20180614；4：20180805；5：20180806；6：黄连对照药材；7：盐酸小檗碱。
图61显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.3)晾干，置365nm紫外光灯下检视。1，6：乙醚萃取；2：乙酸乙酯萃取；3：石油醚萃取；4：黄连对照药材；5：盐酸小檗碱。
图62显示肾衰宁胶囊中黄连的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.3)，晾干，置365nm紫外光灯下检视。1：甲醇提乙醚萃；2：1％盐酸甲醇提乙醚萃；3：盐酸小檗碱；4：黄连对照药材。
图63显示肾衰宁胶囊中原儿茶醛的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：三氯甲烷—丙酮—甲酸(8：1：1)，显色：喷以三氯化铁试液显色。1：20180806；2：20180907；3：原儿茶醛。
图64显示肾衰宁胶囊中原儿茶醛的薄层色谱鉴别，薄层板：硅胶G薄层板，展开剂：二氯甲烷—丙酮—甲酸(8：1：1)，显色：喷以三氯化铁试液显色。1：20180806；2：原儿茶醛。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的描述，根据下述实施例可以更好地理解本发明。然而，本领域技术人员应容易理解的是，以下实施例只是描述性的，不意味着将本发明局限于这些具体实施方式。本领域技术人员应该意识到，本发明涵盖了权利要求书范围内可能包括的所有改进方案、备选方案和等效方案。
实施例1
1.1仪器与试药
天平：OHAUS AR224-N电子天平(万分之一)，EX125ZH电子分析天平(十万分之一)，奥豪斯仪器(常州)有限公司；
仪器：DK-98ⅡA电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；
超声仪：SB25-12DTD超声仪，宁波新芝生物科技股份有限公司；
紫外观察仪：TU-II，上海科哲生化科技有限公司；
薄层板：青岛海洋硅胶板，基亿达硅胶板，邦凯硅胶板，黄海硅胶板。
黄连对照药材，中国食品药品检定研究院，批号120913-201611。
牛膝对照药材，中国食品药品检定研究院，批号121066-201809。
陈皮对照药材，中国食品药品检定研究院，批号120969-201510。
盐酸小檗碱，中国食品药品检定研究院，批号110713-201814。
蜕皮甾酮，中国食品药品检定研究院，批号111638-201706。
橙皮苷，中国食品药品检定研究院，批号110721-201818。
原儿茶醛，中国食品药品检定研究院，批号110810-201608。
肾衰宁胶囊样品：均由云南雷允上理想药业有限公司生产提供(批号：20180805，20180806，20180907，20180908，20190108，20190206，20190207，20190302，20190303，20190403，20190404，20190406，20190407，20190409)
阴性样品：所使用药材均统一采购于东川中药饮片厂，按制法制备。
试剂均为分析纯。
1.2黄连的薄层色谱鉴别
1.2.1黄连薄层色谱鉴别方法的建立
本发明经研究发现，由于肾衰宁胶囊中黄连、牛膝、陈皮主要成分极性不同，可采用同一提取方法提取溶液，加入不同极性溶剂进行萃取获得主要成分，制备不同供试品溶液，故黄连、牛膝、陈皮、丹参均为同一提取方法。
取肾衰宁胶囊内容物15g，加入100ml甲醇，加热回流1h，冷却，过滤，收集滤液，蒸干甲醇，加入100ml水溶解，乙醚洗涤三次，每次加入25ml，合并乙醚层备用；水层加入乙酸乙酯萃取三次，每次50ml，合并乙酸乙酯层备用，收集水层；水层加入水饱和正丁醇萃取三次，每次50ml，合并正丁醇层；正丁醇层加入0.01g/ml氢氧化钠溶液洗涤三次，每次50ml，正丁醇层红色明显淡去，再加入100ml水洗涤一次，正丁醇层蒸干溶剂，加入甲醇4ml使溶解，作为黄连和牛膝的供试品溶液。
取黄连对照药材1g加入甲醇10ml，超声提取40分钟，作为黄连对照药材溶液；另取盐酸小檗碱，加入甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取黄连供试品溶液10μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)为展开剂的饱和氨水展开缸内，饱和30分钟，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图1所示。
结果显示供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰。
1.2.2黄连薄层色谱鉴别方法的专属性实验
按所建立的黄连薄层色谱鉴别方法用不同的点样量(2μl、5μl、10μl、15μl、20μl)进行考察：
结果显示(如图2)，不同点样量情况下，2μl及5μl点样量在与盐酸小檗碱及黄连对照药材所对应的斑点处对应，且良好分离，但斑点亮度不佳，10μl、15μl、20μl点样量均与相应斑点对应，分离较好，斑点清晰明亮，但由于15μl及20μl过于明亮及要求操作从简的原因，故选用10μl点样量进行实验。
1.2.3黄连薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
1.2.3.1不同温湿度下黄连薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
按所建立的黄连薄层色谱鉴别方法在不同的温湿度(8℃，10％湿度；26℃，10％湿度；40℃，10％湿度)条件下进行考察：
结果显示，在不同的温湿度(见图3、图4、图5)环境下，供试品色谱中，在与黄连对照药材及盐酸小檗碱相应的位置上，均能显示相同颜色的明亮荧光斑点。
1.2.3.2不同生产厂家硅胶板黄连薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
按所建立的黄连薄层色谱鉴别方法在不同的生产厂家(青岛海洋硅胶板，邦凯硅胶板，基伊达硅胶板)所生产的硅胶板条件下进行考察：
结果显示，在相同的温湿度(25℃，10％湿度)(见图6、图7、图8)环境下，供试品色谱中，在与黄连对照药材及盐酸小檗碱相应的位置上，均能显示相同颜色的明亮斑点。
1.2.4 14批肾衰宁胶囊中黄连薄层色谱的鉴别
取14批肾衰宁胶囊依法进行试验，结果见图9。
结果显示14批肾衰宁胶囊供试品色谱中，在与黄连对照药材及盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰。
通过专属性、耐用性及14批样品试验，结果显示供试品色谱中，在与黄连对照药材及盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且分离效果好，斑点清晰明亮，阴性对照无干扰，此方法操作简便，专属性强，重现性好。
1.3牛膝的薄层色谱鉴别
1.3.1牛膝薄层色谱鉴别方法的建立
供试品溶液取1.2.1中制得的牛膝的供试品溶液。
取牛膝对照药材1g，加入50ml 50％的甲醇溶液，加热回流1小时，冷却，过滤，加入30ml水；加入25ml乙醚洗涤，两次，收集水层，加入20ml水饱和正丁醇萃取，三次，合并正丁醇层，蒸干正丁醇，加入2ml甲醇溶解，作为牛膝对照药材溶液；另取蜕皮甾酮，加入甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，置于以二氯甲烷-甲醇-甲酸(10：2：0.05)为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸-乙醇溶液，105℃加热至显色。供试品色谱中，在与牛膝对照药材及蜕皮甾酮色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图10。
结果显示供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰。
1.3.2牛膝薄层色谱鉴别方法的专属性实验
按所建立的牛膝薄层色谱鉴别方法用不同的点样量(2μl、5μl、10μl、15μl、20μl)进行考察：
结果显示(如图11)，不同点样量情况下，2μl及5μl点样量在与蜕皮甾酮及牛膝对照药材所对应的斑点处对应，且良好分离，但颜色深度不佳，颜色较浅，斑点较小，10μl、15μl、20μl点样量均与相应斑点对应，分离较好，斑点颜色深度较好，但由于15μl及20μl点样量斑点相比10μl有些过大及要求操作从简的原因，故选用10μl点样量进行实验。
1.3.3牛膝薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
1.3.2.1不同温湿度牛膝薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
按所建立的牛膝薄层色谱鉴别方法在不同的温湿度(8℃，10％湿度；22℃，34％湿度；30℃，15％湿度)条件下进行考察：
结果显示，在不同的温湿度(见图12、图13、图14)环境下，供试品色谱中，在与牛膝对照药材相应的位置上，均能显示相同颜色的斑点。
1.3.2.2不同生产厂家硅胶板牛膝薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
按所建立的牛膝薄层色谱鉴别方法在不同的生产厂家(青岛海洋高效硅胶板，黄海高效硅胶板，邦凯高效硅胶板)生产的硅胶板条件下进行考察：
结果显示，在相同的温湿度(25℃，10％湿度)(见图15、图16、图17)环境下，供试品色谱中，在与牛膝对照药材及蜕皮甾酮相应的位置上，均能显示相同颜色的斑点。
1.3.4 14批肾衰宁胶囊中牛膝薄层色谱的鉴别
取14批肾衰宁胶囊依法进行试验，结果见图18。
结果显示14批肾衰宁胶囊供试品色谱中，在与牛膝对照药材及蜕皮甾酮对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰。
通过专属性、耐用性及14批样品试验，结果显示供试品色谱中，在与牛膝对照药材及蜕皮甾酮对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，此方法操作简便，专属性强，重现性好。
1.4陈皮薄层色谱鉴别试验
1.4.1陈皮薄层色谱鉴别方法的建立
取1.2.1中制得的肾衰宁胶囊提取乙酸乙酯层备用溶液，蒸干乙酸乙酯溶液，加入4ml甲醇溶解，作为陈皮供试品溶液。
取2g陈皮，加入水20ml，加热回流30min，冷却，过滤，加入乙醚25ml萃取三次，收集水层，加入乙酸乙酯25ml萃取三次，合并乙酸乙酯溶液，蒸干乙酸乙酯，加入5ml甲醇溶解，作为对陈皮照药材溶液；另取橙皮苷适量，加入甲醇，制成饱和溶液，作为为陈皮对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液3μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一聚酰胺薄层板上，置于以二氯甲烷-丙酮-甲醇(100：20：17)为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝-乙醇溶液，反应30min，置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱和橙皮苷色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图19。
1.4.2陈皮薄层色谱鉴别方法的专属性实验
按所建立的陈皮薄层色谱鉴别方法用不同的点样量(1μl、2μl、3μl、5μl、10μl)进行考察：
结果显示(如图20)，不同点样量情况下，1μl及2μl点样量在与橙皮苷及陈皮对照药材所对应的斑点处对应，且良好分离，但亮度不佳，5μl点样量开始分离不佳，10μl则严重拖尾，无法鉴定，3μl情况最好，与橙皮苷及陈皮对照药材对应的斑点相对应，且良好分离，斑点明亮，故点样量选用3μl。
1.4.3陈皮薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
按所建立的陈皮薄层色谱鉴别方法在不同的温湿度(8℃，10％湿度；22℃，35％湿度；30℃，38％湿度)条件下进行考察：
结果显示，在不同的温湿度(见图21、图22、图23)环境下，供试品色谱中，在与橙皮苷对照品和陈皮对照药材相应的位置上，均能显示相同颜色的荧光斑点。
1.4.4 14批肾衰宁胶囊中陈皮薄层色谱的鉴别
取14批肾衰宁胶囊依法进行试验，结果见图24。
结果显示14批肾衰宁胶囊供试品色谱中，在与陈皮对照药材和橙皮苷对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点，且分离效果好，斑点清晰明亮，阴性对照无干扰。
通过专属性、耐用性及14批样品试验，结果显示供试品色谱中，在与陈皮对照药材及橙皮苷对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，此方法操作简便，专属性强，重现性好。
1.5丹参的薄层色谱鉴别
1.5.1丹参薄层色谱鉴别方法的建立
取1.2.1中制得的肾衰宁胶囊备用乙醚层，挥干乙醚，加入4ml甲醇溶解，作为丹参供试品溶液。
取原儿茶醛对照品，加入无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取丹参供试品溶液10μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)为展开剂的展开缸内，饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁溶液显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。如图25。
1.5.2丹参薄层色谱鉴别方法的专属性实验
按所建立的丹参薄层色谱鉴别方法用不同的点样量(1μl、3μl、5μl、10μl、15μl)进行考察：
结果显示(如图26)，不同点样量情况下，1μ、3μl及5μl点样量在与原儿茶醛所对应的斑点处对应，且良好分离，但斑点颜色不佳，10μl、15μl点样量均与相应斑点对应，分离较好，斑点颜色清晰，但由于10μl及15μl过于深及要求操作从简的原因，故选用10μl点样量进行实验。
1.5.3丹参薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
1.5.3.1不同温湿度下丹参薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
按所建立的丹参薄层色谱鉴别方法在不同的温湿度(8℃，10％湿度；24℃，34％湿度；30℃，54％湿度)条件下进行考察：
结果显示，在不同的温湿度(见图27、图28、图29)环境下，供试品色谱中，在与原儿茶醛相应的位置上，均能显示相同颜色的斑点。
1.5.3.2不同生产厂家硅胶板丹参薄层色谱鉴别方法的耐用性试验
按所建立的丹参薄层色谱鉴别方法在不同的生产厂家(青岛海洋硅胶板，邦凯硅胶板，基伊达硅胶板)所生产的硅胶板条件下进行考察：
结果显示，在相同的温湿度(24℃，34％湿度)(见图30、图31、图32)环境下，供试品色谱中，在与原儿茶醛相应的位置上，均能显示相同颜色的斑点。
1.5.3.3 14批肾衰宁胶囊中丹参薄层色谱的鉴别
取14批肾衰宁胶囊依法进行试验，结果见图33。
结果显示14批肾衰宁胶囊供试品色谱中，在与原儿茶醛对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰。
通过专属性、耐用性及14批样品试验，结果显示供试品色谱中，在与原儿茶醛对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，此方法操作简便，专属性强，重现性好。
实施例2
2.1牛膝薄层色谱鉴定
探讨了多个提取方法、展开系统，经历了以蜕皮甾酮、齐墩果酸为对照品进行鉴定，最终确定了以硅胶G板为展开板，二氯甲烷—甲醇—甲酸(10：2：0.05)为展开系统，蜕皮甾酮为对照品，辅以牛膝对照药材，10％硫酸乙醇，105℃加热显色的一套牛膝薄层色谱鉴定方法(见图34至47)。
2.1.1
供试品溶液按1.2.1中方法制得的牛膝的供试品溶液。
对照品溶液取1.3.1中方法制得的对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(7：3：0.5：0.05)，正丁醇—甲醇—水(6：1：5)，③正丁醇—甲醇—水(6：1：1)、②正丁醇—甲醇(6：1)、①正丁醇—甲醇—水(6：1：2)为展开剂。置于展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱中相应的位置上，显斑点或不显斑点；对照品色谱相应的位置上，显斑点显斑点或不显斑点。如图34至图36。
2.1.2
供试品溶液按1.2.1中方法制得的牛膝的供试品溶液。
对照品溶液取1.3.1中方法制得的对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以③环己烷—丙酮—乙酸乙酯(5：2：1)、②三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—氨水(2：4：8：1)、①三氯甲烷—甲醇—水—甲酸(7：3：0.5：0.05)，为展开剂。置于展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色。供试品色谱中，在与对照药材色谱中相应的位置上，显斑点或不显斑点；对照品色谱相应的位置上，显斑点或不显斑点。如图37。
2.1.3
供试品溶液按1.2.1中方法制得的牛膝的供试品溶液。
对照品溶液取1.3.1中方法制得的对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯—乙酸乙酯—乙酸(14：4：0.5)，石油醚—三氯甲烷—甲醇(5：10：0.5)，环己烷—三氯甲烷—乙酸乙酯—乙酸(20：5：8：0.5)，环己烷—丙酮—乙酸乙酯(5：2：1)，石油醚—甲醇(10：0.5)，石油醚—甲醇—乙酸(10：1：0.5)，石油醚—甲醇—乙酸(10：0.5：0.5)，为展开剂。置于展开缸内，展开，取出，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，晾干至显色。供试品色谱中，在与对照药材色谱中相应的位置上，显斑点或不显斑点；对照品色谱相应的位置上，显斑点或不显斑点。如图38至图44。
2.1.4
供试品溶液按1.2.1中方法制得的牛膝的供试品溶液。
对照品溶液取1.3.1中方法制得的对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水—甲酸(7：2：0.5：0.05)，二氯甲烷—甲醇—甲酸(7：1：0.05)，为展开剂。置于展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至显色。供试品色谱中，在与对照药材色谱中相应的位置上，显斑点；对照品色谱相应的位置上，显斑点。如图45至图47。
2.2陈皮薄层色谱鉴定
探讨了多个提取方法、展开系统，经历了陈皮对照药材和橙皮苷进行鉴定，最终确定了以聚酰胺薄层板为展开板，二氯甲烷—丙酮—甲醇(100：20：17)为展开系统，橙皮苷为对照品，辅以陈皮对照药材，2％三氯化铝-乙醇溶液反应，365nm紫外灯下检视的一套陈皮薄层色谱鉴定方法(见图48至57)。
2.2.1
供试品溶液取肾衰宁胶囊内容物各2份2g粉末，一份加甲醇40ml加热回流30分钟，一份加甲醇40ml超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解；加乙酸乙酯振摇提取3次(20ml，20ml，10ml)，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液取1.4.1中方法制得的对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液3μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，(1)以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm；(2)乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约13cm；(3)石油醚-乙酸乙酯(1：1)为展开剂，展至约8cm。置于展开缸内，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱中相应的位置上，显斑点或不显斑点；对照品色谱相应的位置上，显斑点或不显斑点。如图48至图50。
2.2.2
供试品溶液取肾衰宁胶囊内容物各2份2g粉末，一份加甲醇40ml加热回流30分钟，一份加甲醇40ml超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解；加乙酸乙酯振摇提取3次(20ml，20ml，10ml)，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液取1.4.1中方法制得的对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液3μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，置于展开缸内，(1)以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm；(2)乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约13cm；(3)石油醚-乙酸乙酯(1：1)为展开剂，展至约8cm，(4)环己烷-乙酸乙酯-甲酸(5.5：4.5：0.1)为展开剂，展开到8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱中相应的位置上，显斑点或不显斑点；对照品色谱相应的位置上，显斑点或不显斑点。如图48至图51。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取供试品溶液3μl、对照药材溶液5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜G薄层板上，置于展开缸内，以二氯甲烷-丙酮-甲醇(5：1：1)展开剂，展开到7cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱中相应的位置上，显斑点或不显斑点；对照品色谱相应的位置上，显斑点或不显斑点。如图52。
2.2.3
供试品溶液取大黄粉和大黄稠膏各2g，加乙酸乙酯20ml，回流加热半个小时，过滤，滤渣蒸干，加10ml甲醇超声40分钟，过滤，滤液浓缩至2ml。
取肾衰宁胶囊内容物2g粉末，加乙酸乙酯20ml，回流加热半个小时，过滤，滤渣蒸干，残渣加10ml甲醇超声40分钟，浓缩至2ml，作为供试品溶液。
取缺大黄对照粉末2g，加甲醇10ml超声40分钟，过滤，滤液作为供试品溶液。
对照品溶液：取陈皮对照药材0.1g，加甲醇回流30分钟，过滤，滤液滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解；加乙酸乙酯振摇提取3次(20ml，20ml，10ml)，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，分别吸取上述3种供试品溶液，橙皮苷和缺大黄对照溶液各5μ1及对照药材溶液10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以二氯甲烷-丙酮-甲醇(5：1：1)为展开剂，展至约7cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。如图53。
2.2.4
供试品溶液：取肾衰宁胶囊内容物2g粉末，加甲醇20ml，超声半个小时，过滤，滤液蒸干，加20ml水使溶解，用乙醚萃取2次(25ml，25ml)，水层备用；合并乙醚液，用氨试液洗2次(25ml，25ml)，合并乙醚层，挥干，加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。
取水层，加乙酸乙酯萃取2次(25ml，25ml)，水层备用；合并乙酸乙酯液，用氨试液洗2次(25ml，25ml)，合并乙酸乙酯层，蒸干，加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。
取水层，加水饱和正丁醇萃取2次(20ml，20ml)，水层备用；合并正丁醇液，用氨试液洗2次(20ml，20ml)，合并正丁醇层，蒸干，加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。
取水层蒸干，加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。
取缺大黄对照粉末2g，加甲醇10ml超声40分钟，过滤，滤液作为供试品溶液。
对照品溶液：取陈皮对照药材0.1g，加甲醇回流30分钟，过滤，滤液滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解；加乙酸乙酯振摇提取3次(20ml，20ml，10ml)，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，分别吸取供试品溶液各2μ1，及对照药材和橙皮苷溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以(1)环己烷-乙酸乙酯-甲酸(5.5：4.5：0.1)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液，(2)以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。如图54至图55。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，分别吸取供试品溶液各2μ1，及对照药材和橙皮苷溶液各5μ1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20：10：1：1)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。如图56
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，分别吸取供试品溶液各2μ1，及对照药材和橙皮苷溶液各5μ1，分别点于同一0.005g/ml氢氧化钠溶液制备的硅胶G，以乙酸乙酯-甲醇-水(100：17：13)为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以1％三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视。如图57。
2.3黄连薄层色谱鉴定
探讨了多个提取方法、展开系统，经历了黄连对照药材、盐酸小檗碱进行鉴定，最终确定了以硅胶G薄层板为展开板，甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6：3：1.5：1.5：0.3)为展开系统，盐酸小檗碱为对照品，辅以黄连对照药材，365nm紫外灯下检视的一套黄连薄层色谱鉴定方法(见图58至62)。
2.3.1
供试品溶液取肾衰宁胶囊内容物各2g，加入50ml 1％盐酸-甲醇溶液，超声40分钟溶解，过滤，取滤液，蒸干溶剂，加水30ml超声溶解，过滤，加入20ml乙醚溶液萃取，取水溶液，蒸干溶剂，加入5ml甲醇溶液，超声30分钟溶解，过滤，制备成供试品溶液。
对照药材溶液取对照药材0.1g，加入10ml甲醇溶液，超声40分钟溶解，过滤，制备成对照药材溶液。
对照品溶液取盐酸小檗碱5mg，加入10ml甲醇溶液，超声40分钟溶解，过滤，制备成对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取黄连供试品溶液10μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，置于饱和氨水展开缸内饱和30分钟，以苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.3)，苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.2)，苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或不显斑点。如图58至图60。
2.3.2
供试品溶液取肾衰宁胶囊内容物各2g，加入50ml 1％盐酸-甲醇溶液，超声40分钟溶解，过滤，取滤液，蒸干溶剂，加水30ml超声溶解，过滤，加入20ml乙醚溶液萃取，取水溶液，蒸干溶剂，加入5ml甲醇溶液，超声30分钟溶解，过滤，制备成供试品溶液。
对照药材溶液取对照药材0.1g，加入10ml甲醇溶液，超声40分钟溶解，过滤，制备成对照药材溶液。
对照品溶液取盐酸小檗碱5mg，加入10ml甲醇溶液，超声40分钟溶解，过滤，制备成对照品溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取黄连供试品溶液10μl、对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于饱和氨水展开缸内饱和30分钟，以苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.3)，甲苯—乙酸乙酯—异丙醇—甲醇—水(6：3：1.5：1.5：0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或不显斑点。如图61、图62和图1。
2.4丹参薄层色谱鉴定
探讨了多个提取方法、展开系统，经历了原儿茶醛进行鉴定，最终确定了以硅胶G薄层板为展开板，二氯甲烷-丙酮-甲酸(12∶1∶1)为展开系统，原儿茶醛为对照品，三氯化铁试液显色的一套丹参薄层色谱鉴定方法(见图63、图64和图25)。
供试品溶液取肾衰宁胶囊内容物5g，加水20ml，浸渍30分钟，再加乙醇80ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液浓缩至约5ml，加水30ml，加热10分钟，放冷，滤过，滤液加盐酸调节pH值至2，用乙醚振摇提取2次，每次25m1，合并乙醚液，用水25ml洗涤，弃去洗液，乙醚液挥干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解。
对照品溶液取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶1)，二氯甲烷—丙酮—甲酸(8：1：1)，二氯甲烷—丙酮—甲酸(12：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
通过本实施例的筛选，建立肾衰宁胶囊中以丹参、黄连、牛膝、陈皮为对照药材和以原儿茶醛、盐酸小檗碱、β-蜕皮甾酮、橙皮苷为对照的薄层鉴别方法，供试品溶液只制备一次，可供多种对照药材检查使用、节约前处理时间、避免使用苯和三氯甲烷等毒性大试剂，减少毒性试剂对检验人员的危害，保护检验人员的身体健康，减少化学试剂对环境的污染，符合环保和安全要求。所建立的薄层鉴别方法分离效果好，斑点清晰，阴性对照无干扰，此方法操作简便，专属性强，重现性好。
Claims (7)
1.一种包含丹参、陈皮、黄连和牛膝的治疗肾病的中药组合物的有效成分检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
(1)取中药组合物，加入甲醇，加热回流，冷却，过滤，收集滤液，蒸干甲醇，加入水使溶解，加入乙醚萃取三次，合并乙醚层，乙醚层挥干乙醚，残渣加无水乙醇溶解，作为原儿茶醛供试品溶液；水层加入乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯层，乙酸乙酯层蒸干乙酸乙酯，加入甲醇溶解，作为陈皮供试品溶液；水层加入水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层，正丁醇层加入0.01g/ml氢氧化钠溶液洗涤三次，再加入水洗涤一次，弃去洗涤液，将正丁醇液蒸干溶剂，加入甲醇使溶解，制得牛膝或黄连供试品溶液；另取黄连对照药材，加入甲醇，超声提取，作为黄连对照药材溶液；另取盐酸小檗碱对照品，加入甲醇制成溶液，作为对照品溶液；吸取黄连供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以体积比为6：3：1.5：1.5：0.3的甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂的饱和氨水展开缸内，饱和，展开，取出，晾干，置于波长为365nm的紫外灯下检视；
(2)取(1)项的牛膝供试品溶液，另取牛膝对照药材，加入体积比为50％的甲醇水溶液，加热回流，冷却，过滤，加入水，加入乙醚洗涤两次，收集水层，加入水饱和正丁醇萃取三次，合并正丁醇层，蒸干正丁醇，加入甲醇使溶解，作为对照药材溶液；另取蜕皮甾酮对照品，加入甲醇制成溶液，作为对照品溶液；吸取牛膝供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，置于以体积比为10：2：0.05的二氯甲烷-甲醇-甲酸为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸-乙醇溶液，105℃加热至显色；
(3)取(1)项的陈皮供试品溶液，另取陈皮对照药材，加入水，加热回流，冷却，过滤，加入乙醚萃取三次，弃去乙醚层，收集水层，加入乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯液，蒸干乙酸乙酯，加入甲醇使溶解，作为对照药材溶液；另取橙皮苷对照品适量，加入甲醇，制成饱和溶液，作为对照品溶液；吸取陈皮供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液，分别点于同一聚酰胺薄层板上，置于以体积比为100：20：17的二氯甲烷-丙酮-甲醇为展开剂的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铝-乙醇溶液反应，置于波长为365nm的紫外灯下检视；
(4)取(1)项的原儿茶醛供试品溶液，另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成溶液，作为对照品溶液；吸取两种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为12∶1∶1的二氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁试液显色。
2.权利要求1所述的检测方法，其中所述供试品溶液的点样量为：黄连供试品溶液为2-20μl；牛膝供试品溶液为2-20μl；陈皮供试品溶液为1-5μl；原儿茶醛供试品溶液为1-15μl。
3.权利要求2所述的检测方法，其中所述供试品溶液的点样量为：黄连供试品溶液为10μl；牛膝供试品溶液为10μl；陈皮供试品溶液为3μl；原儿茶醛供试品溶液为10μl。
4.权利要求1至3中任一项所述的检测方法，其中所述中药组合物包含丹参、大黄、太子参、黄连、牛膝、半夏、红花、茯苓、陈皮和甘草。
5.权利要求4所述的检测方法，其中按重量份数计，所述中药组合物包含：太子参20-30份，半夏20-30份，茯苓16-24份，丹参56-84份，红花8-12份，黄连8-12份，陈皮8-12份，大黄32-48份，牛膝16-24份和甘草8-12份。
6.权利要求5所述的检测方法，按重量份数计，所述中药组合物包含：太子参25份，半夏25份，茯苓20份，丹参70份，红花10份，黄连10份，陈皮10份，大黄40份，牛膝20份和甘草10份。
7.一种包含丹参、陈皮、黄连和牛膝的治疗肾病的中药组合物中盐酸小檗碱、蜕皮甾酮、橙皮苷和原儿茶醛中的一种、两种或更多种的检测方法，其通过权利要求1至6中任一项所述的检测方法来实现。
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