CN112051124A - 一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法 - Google Patents

一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法，属于中药检测技术领域。本发明提供了海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法，使海龙和甘草的检测可使用同一供试品溶液，简化了操作步骤；海龙和甘草的展开系统分别为两相系统和三相系统，简单易控，检测效率提高；薄层斑点清晰，分离度好，比移值合适，且阴性样品无干扰。由实施例的结果表明，本发明建立的快速薄层鉴别方法专属性和重现性均较好，且大大降低了检测成本，提高了检测效率，可对海龙胶口服液中的海龙和甘草进行快速有效的鉴别。

Description

一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法
技术领域
本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法。
背景技术
海龙胶口服液是由海龙、黄明胶、甘草、枸杞子等11味中药组成的中药制剂，具有温补肾阳的功效，主要用于治疗肾阳不足所致的腰酸足软，精神萎糜，面色无华等症。海龙胶口服液现执行标准中规定以海龙和甘草的薄层鉴别方法对海龙胶口服液进行质量检定，现有技术中，海龙和甘草的薄层鉴别方法的供试品溶液分别使用不同的制备方法制备，两种方法制备的供试品溶液不能通用，大大降低了对海龙胶口服液质量检定的效率；同时，海龙的鉴别方法专属性较低，阴性干扰严重，且样品制备方法复杂；甘草的薄层鉴别展开系统为四相系统，操作较复杂，同时薄层斑点分离度较差，对照品斑点比移值较小。为提高海龙胶口服液检测效率和质量标准，有效控制产品质量，急需对海龙和甘草薄层鉴定方法进行改进。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法。本发明提供的的快速薄层鉴别方法供试品溶液制备方法简单、操作方便，鉴别方法专属性高，薄层斑点清晰，分离度好，且阴性样品无干扰。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种用于海龙胶口服液中海龙和/或甘草快速薄层鉴别的供试品溶液的制备方法，包括如下步骤：将海龙胶口服液与第一有机溶剂混合、离心，取上清液蒸干；将所得残渣加水溶解，加入第二有机溶剂提取两次，提取液合并蒸干，将所得残渣加甲醇溶解，得到供试品溶液；
所述海龙胶口服液与第一有机溶剂的体积比为1:2～2.5；所述水的用量为海龙胶口服液体积的1/2～3/2；所述第二有机溶剂每次提取的用量为海龙胶口服液体积的3/4～5/4；所述甲醇的用量为海龙胶口服液体积的1/20～1/10。
优选的，所述第一有机溶剂为甲醇、无水乙醇和乙腈中的一种，优选为无水乙醇；所述第二有机溶剂为水饱和正丁醇。
本发明提供了一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法，供试品溶液为上述技术方案中所述制备方法得到的供试品溶液；
当鉴别的成分为海龙时，鉴别方法包括如下步骤：
1)取供试品溶液、海龙对照溶液；
2)将供试品溶液和海龙对照溶液点于第一硅胶G薄层板上，用展开剂展开；
3)将展开后的薄层板显色，实现海龙的薄层鉴别；
所述海龙对照溶液为海龙对照药材溶液和胆固醇对照品溶液；用于所述第一硅胶G薄层板的展开剂为石油醚和丙酮混合剂；
当鉴别的成分为甘草时，鉴别方法包括如下步骤：
a取供试品溶液、甘草对照溶液；
b将供试品溶液和甘草对照溶液点于第二硅胶G薄层板上，用展开剂展开；
c将展开后的薄层板显色，实现甘草的薄层鉴别；
所述甘草对照溶液为甘草对照药材溶液和甘草苷对照品溶液；
用于第二硅胶G薄层板的展开剂为三氯甲烷、丙酮和甲酸混合剂；
当鉴别的成分为海龙和甘草时，同时进行上述两个检测，两个检测使用同一份供试品溶液。
优选的，所述海龙对照药材溶液和甘草对照药材溶液的制备过程包括：将海龙对照药材和甘草对照药材分别水煎、过滤，将所得滤液与第一溶剂混合离心；取上清液蒸干，将所得残渣加水溶解，加入第二溶剂提取两次，提取液合并蒸干，残渣加甲醇溶解，得到海龙对照药材溶液和甘草对照药材溶液；
所述水煎包括浸泡和煎煮，所述浸泡的时间为15～30min；所述煎煮的时间为30～60min；所述浸泡中水的体积和药材的质量比为7.5～25ml:1g；所述第一溶剂与浸泡中所加水的体积比为1.5～2.5:1；所述第二溶剂的体积与药材的质量比为7.5～25ml:1g；所述甲醇的体积与药材的质量比为0.5～2ml:1g；所述第一溶剂为甲醇、无水乙醇和乙腈中的一种；所述第二溶剂为水饱和正丁醇。
优选的，所述第一溶剂为无水乙醇；所述第二溶剂为水饱和正丁醇。
优选的，所述胆固醇对照品溶液和甘草苷对照品溶液的浓度独立地为0.8～1.2mg/ml；所述胆固醇对照品溶液中溶剂为丙酮，所述甘草苷对照品溶液中溶剂为甲醇。
优选的，所述供试品溶液、海龙对照溶液和甘草对照溶液的点样量独立地为1～5μl。
优选的，用于所述第一硅胶G薄层板的展开剂中石油醚和丙酮的体积比为(3～5):1；用于第二硅胶G薄层板的展开剂中三氯甲烷、丙酮和甲酸的体积比为(4～6):(9～11):1。
优选的，所述石油醚和丙酮的体积比为4:1；所述三氯甲烷、丙酮和甲酸的体积比为5：10：1。
优选的，第二硅胶G薄层板为含1％氢氧化钠的硅胶G薄层板。
优选的，所述显色的显色剂为硫酸乙醇，所述硫酸乙醇的体积百分浓度为10％～50％。
有益效果：
本发明提供了一种用于海龙胶口服液中海龙和/或甘草快速薄层鉴别的供试品溶液的制备方法，包括如下步骤：将海龙胶口服液与第一有机溶剂混合、离心，取上清液蒸干；将所得残渣加水溶解，加入第二有机溶剂提取两次，提取液合并蒸干，将所得残渣加甲醇溶解，得到供试品溶液。本发明采用能与水互溶的高浓度的第一有机溶剂破坏蛋白质的水化膜，从而使蛋白质类成分沉淀，除去蛋白后，采用不与水互溶的大极性第二有机溶剂提取有效成分，除去杂质，可以进一步改善阴性干扰严重，分离效果差等情况；使用该方法制备得到的供试品溶液可同时用于海龙和甘草的薄层鉴别，且制备过程简单，操作方便，大大提高了检定效率。
进一步的，本发明还提供了海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层层析方法，采用上述技术方案中所述制备方法得到的供试品进行检测，简化了操作步骤；海龙和甘草的展开系统分别为两相系统和三相系统，简单易控，检测效率提高；薄层斑点清晰，分离度好，比移值合适，且阴性样品无干扰。由实施例的结果表明，本发明建立的方法专属性和重现性均较好，且大大降低了检测成本，提高了检测效率，可对海龙胶口服液中的海龙和甘草进行快速有效的鉴别。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单的介绍。
图1海龙胶口服液中海龙和甘草的快速薄层鉴别方法的流程图；
图2实施例1海龙薄层鉴别方法在365nm荧光下的薄层色谱图；
图3实施例1海龙薄层鉴别方法在日光下的薄层色谱图；
图4实施例2甘草薄层鉴别方法在365nm荧光下的薄层色谱图；
图5实施例3不同供试液提取溶剂对海龙薄层鉴别方法的影响；
图6实施例4不同供试液提取溶剂对甘草薄层鉴别方法的影响；
图7实施例5不同点样量效果图；
图8对比例1海龙薄层鉴别原方法薄层色谱图；
图9对比例2甘草薄层鉴别原方法薄层色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种用于海龙胶口服液中海龙和/或甘草快速薄层鉴别的供试品溶液的制备方法，包括如下步骤：将海龙胶口服液与第一有机溶剂混合、离心，取上清液蒸干；将所得残渣加水溶解，加入第二有机溶剂提取两次，提取液合并蒸干，将所得残渣加甲醇溶解，得到供试品溶液；
所述海龙胶口服液与第一有机溶剂的体积比为1:2～2.5；所述水的用量为海龙胶口服液体积的1/2～3/2；所述第二有机溶剂每次提取的用量为海龙胶口服液体积的3/4～5/4；所述甲醇的用量为海龙胶口服液体积的1/20～1/10。
本发明将海龙胶口服液与第一有机溶剂混合、离心，取上清液蒸干。在本发明中，所述海龙胶口服液与第一有机溶剂的体积比优选为1:2～2.5，进一步优选为1:2；所述第一有机溶剂为甲醇、无水乙醇和乙腈中的一种，优选为无水乙醇；本发明所述海龙胶口服液与第一有机溶剂的混合时间无特殊要求，所述混匀时间进一步优选为10～20min；本发明对所述混匀的方式无特殊要求，手动摇匀即可。本发明所述混合后，进行离心，所述离心的转速优选为5000～8000rpm，进一步优选为6500rpm；所述离心的时间优选为5～15min，进一步优选为10min。
蒸干后，本发明优选将所得残渣加水溶解，加入第二有机溶剂提取两次，提取液合并蒸干，将所得残渣加甲醇溶解，得到供试品溶液。在本发明中，所述水的用量优选为海龙口服液体积的1/2～3/2，进一步优选为水为海龙口服液体积的1倍；所述第二有机溶剂每次提取的用量优选为海龙口服液体积的3/4～5/4，进一步优选为第二有机溶剂每次提取的用量优选为海龙口服液体积的1倍；在本发明中，所述第二有机溶剂优选为水饱和正丁醇；所述甲醇的用量优选为海龙口服液体积的1/20～1/10，进一步优选为1/20。
本发明采用能与水互溶的高浓度的第一有机溶剂破坏蛋白质的水化膜，从而使蛋白质类成分沉淀，除去蛋白后，采用不与水互溶的大极性第二有机溶剂提取有效成分，除去杂质，可以进一步改善阴性干扰严重，分离效果差等情况；使用该方法制备得到的供试品溶液可同时用于海龙和甘草的薄层鉴别，且制备过程简单，操作方便，大大提高了检定效率。
本发明提供了一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法，供试品溶液为上述技术方案中所述制备方法得到的供试品溶液；
当鉴别的成分为海龙时，鉴别方法包括如下步骤：
1)取供试品溶液、海龙对照溶液；
2)将供试品溶液和海龙对照溶液点于第一硅胶G薄层板上，用展开剂展开；
3)将展开后的薄层板显色，实现海龙的薄层鉴别；
所述海龙对照溶液为海龙对照药材溶液和胆固醇对照品溶液；用于所述第一硅胶G薄层板的展开剂为石油醚和丙酮混合剂；
当鉴别的成分为甘草时，鉴别方法包括如下步骤：
a取供试品溶液、甘草对照溶液；
b将供试品溶液和甘草对照溶液点于第二硅胶G薄层板上，用展开剂展开；
c将展开后的薄层板显色，实现甘草的薄层鉴别；
所述甘草对照溶液为甘草对照药材溶液和甘草苷对照品溶液；
用于第二硅胶G薄层板的展开剂为三氯甲烷、丙酮和甲酸混合剂；
当鉴别的成分为海龙和甘草时，同时进行上述两个检测，两个检测使用同一份供试品溶液。
本发明供试品溶液为上述技术方案中所述制备方法得到的供试品溶液。所述供试品溶液可以同时检测海龙和甘草，简化了供试品溶液的制备过程，且制备得到的供试品溶液有效去除了杂质，改善了阴性干扰严重的情况。
当鉴别的成分为海龙时，本发明提供海龙对照溶液。在本发明中，所述海龙对照溶液优选为海龙对照药材溶液和胆固醇对照品溶液，优选由海龙标准品制备得到；所述海龙标准品优选为海龙对照药材和胆固醇对照品；本发明优选以胆固醇作为海龙的对照品。本发明选择胆固醇为海龙的对照品是提高海龙专属性的原因之一。
本发明所述海龙对照药材溶液的制备过程优选包括：将海龙对照药材水煎、过滤，将所得滤液与第一溶剂混合离心；取上清液蒸干，将所得残渣加水溶解，加入第二溶剂提取两次，提取液合并蒸干，残渣加甲醇溶解，得到海龙对照药材溶液。在本发明中，所述第一溶剂优选为甲醇、无水乙醇和乙腈中的一种，进一步优选为无水乙醇；所述第二溶剂优选为水饱和正丁醇。
在本发明中，所述水煎优选包括依次进行的浸泡和煎煮，所述浸泡的时间优选为15～30min，进一步优选为30min；所述煎煮的时间优选为30～60min，进一步优选为60min；所述浸泡中水的体积和药材的质量比优选为7.5～25ml:1g，进一步优选为10ml:1g；所述第一溶剂与浸泡中所加水的体积比优选为1.5～2.5:1，进一步优选为2:1；所述第二溶剂的体积与药材的质量比优选为7.5～25ml:1g，进一步优选为20ml:1g；所述甲醇的体积与药材的质量比优选为0.5～2ml:1g，进一步优选为0.5ml:1g。
制备供试品溶液、海龙对照溶液后，本发明将供试品溶液和海龙对照溶液点于第一硅胶G薄层板上，用展开剂展开。在本发明中，所述第一硅胶G薄层板优选为普通硅胶G板即可。在本发明中，用于所述第一硅胶G薄层板的展开剂为石油醚和丙酮混合剂。在本发明中，用于所述第一硅胶G薄层板的展开剂中石油醚和丙酮的体积比优选为(3～5):1，进一步优选为4:1。在本发明中，所述供试品溶液和海龙对照溶液的点样量独立地优选为1～5μl，进一步优选为3μl。本发明海龙的展开系统为两相系统，简单易控，同时展开时间缩短，提高了检测效率；使用本发明的展开剂，斑点清晰、分离度好、比移值合适、阴性样品无干扰，专属性好。
薄层板展开后，本发明将展开后的薄层板显色，实现海龙的薄层鉴别。本发明优选将展开的薄层板取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热至斑点清晰，置紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。在本发明中，所述显色的显色剂优选为硫酸乙醇，所述硫酸乙醇的体积百分浓度优选为10％～50％，进一步优选为50％。
当鉴别的成分为甘草时，本发明提供甘草对照溶液。在本发明中，所述甘草对照溶液为甘草对照药材溶液和甘草苷对照品溶液，优选由甘草标准品制备得到；所述甘草标准品优选为甘草对照药材和甘草苷对照品；本发明优选甘草苷作为甘草的对照品。
本发明所述甘草对照药材溶液的制备过程优选包括：将甘草对照药材分别水煎、过滤，将所得滤液与第一溶剂混合离心；取上清液蒸干，将所得残渣加水溶解，加入第二溶剂提取两次，提取液合并蒸干，残渣加甲醇溶解，得到甘草对照药材溶液。
在本发明中，所述水煎优选包括依次进行的浸泡和煎煮，所述浸泡的时间优选为15～30min，进一步优选为30min；所述煎煮的时间优选为30～60min，进一步优选为60min；所述浸泡中水的体积和药材的质量比优选为7.5～25ml:1g，进一步优选为20ml:1g；所述第一溶剂与浸泡中所加水的体积比优选为1.5～2.5:1，进一步优选为2:1；所述第二溶剂的体积与药材的质量比优选为7.5～25ml:1g，进一步优选为20ml:1g；所述甲醇的体积与药材的质量比优选为0.5～2ml:1g，进一步优选为1ml:1g。在本发明中，所述第一溶剂优选为甲醇、无水乙醇和乙腈中的一种，进一步优选为无水乙醇；所述第二溶剂优选为水饱和正丁醇。
本发明在海龙胶口服液、海龙对照药材溶液和甘草对照药材溶液的制备过程中依次使用第一溶剂和第二溶剂；在本发明中，所述第一溶剂的作用是初步沉淀除杂，除去大分子杂质如蛋白质、多糖等；所述第二溶剂的作用是提取有效成分。本发明采用能与水互溶的高浓度的第一溶剂破坏蛋白质的水化膜，从而使蛋白质类成分沉淀，除去蛋白后，采用不与水互溶的大极性第二溶剂提取有效成分，除去杂质，可以进一步改善阴性干扰严重，分离效果差等情况。
在本发明中，所述胆固醇对照品溶液和甘草苷对照品溶液的浓度独立地优选为0.8～1.2mg/ml，进一步优选为1.0mg/ml；所述胆固醇溶液中溶剂优选为丙酮，所述甘草苷溶液中溶剂优选为甲醇。
制备供试品溶液和甘草对照溶液后，本发明将供试品溶液和甘草对照溶液点于第二硅胶G薄层板上，用展开剂展开。在本发明中，所述第二硅胶G薄层板优选为含有1％氢氧化钠的硅胶G薄层板，使用含有1％氢氧化钠的硅胶G薄层板鉴别甘草时斑点清晰度更好。在本发明中，用于第二硅胶G薄层板的展开剂为三氯甲烷、丙酮和甲酸混合剂。在本发明中，用于第二硅胶G薄层板的展开剂中三氯甲烷、丙酮和甲酸的体积比优选为(4～6):(9～11):1，进一步优选为5:10:1。在本发明中，所述供试品溶液和甘草对照溶液的点样量独立地优选为1～5μl，进一步优选为3μl。本发明甘草的展开系统为三相系统，简单易控，同时展开时间缩短，提高了检测效率；使用本发明的展开剂，斑点清晰、分离度好、比移值合适、阴性样品无干扰，专属性好。
薄层板展开后，本发明将展开后的薄层板显色，实现甘草的薄层鉴别。本发明甘草的显色步骤优选与海龙相同。
当鉴别的成分为海龙和甘草时，同时进行上述两个检测，两个检测使用同一份供试品溶液。
本发明的海龙胶口服液中海龙和甘草的快速薄层鉴别方法的检测流程图见图1。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的海龙胶口服液中海龙和甘草的快速薄层鉴别方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
海龙薄层鉴别方法
(1)供试品溶液制备：取海龙胶口服液20ml，加无水乙醇40mL，摇匀，离心，上清液蒸干，残渣加水20ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每次20ml。合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液，共制备3份，批号分别为1812001、1907001、200110-1，均来自东阿阿胶股份有限公司。
(2)对照药材溶液制备：取海龙对照药材2g，加水30mL，浸泡30min，煎煮60min，滤过，滤液加无水乙醇40ml，其余步骤同供试品溶液制备方法制备对照药材溶液。
(3)对照品溶液制备：取胆固醇对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的对照品溶液，备用。
(4)阴性对照溶液制备：取缺海龙的海龙胶口服液20ml，同“供试品溶液制备”方法制备海龙阴性对照溶液。
(5)薄层层析方法：吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4﹕1的石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干，喷以50％的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。置紫外光灯365nm下和日光下检视，检测结果见图2和图3。
(6)试验结果：图2为海龙薄层鉴别方法在365nm荧光下的薄层色谱图，图3为海龙薄层鉴别方法在日光下的薄层色谱图；其中自左而右1号条带为胆固醇对照品溶液，2号条带为海龙对照药材溶液，3-5号条带顺次对应1号供试品溶液(批号：1812001)、2号供试品溶液(批号：1907001)和3号供试品溶液(批号：200110-1)，6号条带对应海龙阴性对照溶液。经阴性对照(6号条带)，由图2和图3可知，供试品色谱中，在与对照药材和对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，且3批供试品溶液的检测结果一致，说明检测结果重复性好；阴性样品无干扰，海龙鉴别方法专属性好。
实施例2
甘草薄层鉴别方法
(1)供试品溶液制备：同“实施例1”供试品溶液，共制备4份，批号分别为1812001、1907001、200110-1、200110-2，均来自东阿阿胶股份有限公司。
(2)对照药材溶液制备：取甘草对照药材1g，加水20mL，浸泡30min，煎煮30min，滤过，滤液加无水乙醇40ml，其余步骤同实施例2“供试品溶液制备”方法制成甘草对照药材溶液。
(3)对照品溶液制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液。
(4)阴性对照溶液制备：取缺甘草的海龙胶口服液20ml，同实施例2“供试品溶液制备”方法制备甘草阴性对照溶液。
(5)薄层层析方法：吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液、甘草苷对照品溶液和阴性对照溶液各3μL，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为5﹕10﹕1的三氯甲烷-丙酮-甲酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以50％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。置紫外光灯365nm下检视，检测结果见图4。
(6)试验结果：图4中自左而右1号条带为甘草苷对照品溶液，2号条带为甘草对照药材溶液，3～6号条带顺次对应1号供试品溶液(批号：1812001)、2号供试品溶液(批号：1907001)、3号供试品溶液(批号：200110-1)和4号供试品溶液(批号：200110-2)，7号条带对应甘草阴性对照溶液。由图4的结果可知，供试品色谱中，在与对照药材和对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，且4批供试品溶液的检测结果一致，说明检测结果重复性好；阴性样品无干扰，甘草鉴别专属性好。
实施例3
步骤同实施1，不同之处在于供试液的处理。
供试品溶液制备：取海龙胶口服液(批号为1907001)20ml，共3份，分别加无水乙醇、甲醇和乙腈40ml，摇匀，其余步骤同实施例1中供试品溶液制备方法制备3份供试品溶液，检测结果见图5。
检测结果：图5自左而右1号条带为胆固醇对照品溶液，2号条带为海龙对照药材溶液，3～5号条带顺次对应无水乙醇提取的供试品溶液、甲醇提取的供试品溶液和乙腈提取的供试品溶液，6号条带对应海龙阴性对照溶液；由图5可知，用无水乙醇、甲醇和乙腈三种溶剂对海龙进行提取，结果无明显差异。
实施例4
步骤同实施2，不同之处在于供试液为实施例3处理的供试液，检测结果见图6。图6自左而右1号条带为甘草苷对照品溶液，2号条带为甘草对照药材溶液，3～5号条带顺次对应无水乙醇提取的供试品溶液、甲醇提取的供试品溶液和乙腈提取的供试品溶液，6号条带对应甘草阴性对照溶液；由图6可知，用无水乙醇、甲醇和乙腈三种溶剂对甘草进行提取，结果无明显差异。
实施例5
不同点样量效果
(1)检测方法：取“实施例1”中供试品溶液，分别点样1μl、3μl、5μl，胆固醇对照品溶液、海龙对照药材溶液以及海龙阴性对照溶液点样量分别为3μl，按海龙的薄层鉴别方法进行检测和分析，得到的薄层色谱图如图7所示，其中，自左而右1号条带为胆固醇对照品溶液，2号条带为海龙对照药材溶液，3～5号条带顺次对应供试品溶液的点样量分别为1μl、3μl、5μl，6号条带对应海龙阴性对照溶液；
(2)试验结果：结果显示，供试品溶液点样量1～5μl斑点均较明显，点样量为3μl时薄层斑点大小较合适。
实施例6
不同浓度显色剂效果
(1)检测方法：按“实施例1”和“实施例2”中鉴别方法进行样品制备和薄层层析，将两块薄层板分别喷以10％的硫酸乙醇，105℃加热至斑点显色清晰，观察显色过程，并将得到的薄层板分别与“实施例1”和“实施例2”中薄层板(50％的硫酸乙醇显色)进行比较；
(2)试验结果：两种不同浓度的显色剂均能使薄层板显色，显色结果无明显差异，但50％的硫酸乙醇较10％的硫酸乙醇显色较快。
对比例1：海龙薄层鉴别原方法
(1)供试品溶液制备：取海龙胶口服液(批号：1907003、200110-1)各10ml，加在预处理好的阳离子交换树脂柱(柱高为10cm，湿法装柱，用盐酸(7→100)处理成强酸型)上，用水洗脱至洗脱液无色后，再用氨溶液(4→100)洗脱，至洗脱液呈碱性时，收集洗脱液50ml，水浴上浓缩至1ml，作为供试品溶液；其中，盐酸(7→100)是指取市售浓盐酸(质量浓度36％～38％)7ml加水稀释至100ml；氨溶液(4→100)是指取市售氨水(质量浓度为25％～28％)4ml加水稀释至100ml。
(2)对照药材溶液制备：取尖海龙对照药材1g，加水20ml，煎煮15min，滤过，滤液浓缩至5ml，其余步骤同对比例1供试品溶液制备方法制成对照药材溶；
(3)阴性对照溶液制备：取缺海龙的海龙胶口服液10ml，其余步骤同对比例1供试品溶液制备方法制备海龙阴性对照溶液；
(4)薄层层析方法：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液2μl，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以体积比为5：1：1的正丁醇-醋酸-水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2％茚三酮乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；
(5)试验结果：得到的薄层色谱图如8所示，其中，自左而右1号条带为海龙对照药材溶液，2、3号条带分别对应1号供试品溶液(批号：1907003)和2号供试品溶液(批号：200110-1)，4号条带对应海龙阴性对照溶液。由图8可知，阴性样品干扰严重，海龙鉴别无专属性。
对比例2：甘草薄层鉴别原方法
(1)供试品溶液制备：取海龙胶口服液(批号：1812001、1907001、200110-1、200110-2)各20ml，加乙醇40ml，混匀，放置10分钟，7000rpm离心5min，取上清液，蒸至无醇味，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次15ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
(2)对照药材溶液制备：取甘草对照药材1.5g，加水20ml，煎煮10min，滤过得滤液，其余步骤同对比例2供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
(3)对照品溶液制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
(4)阴性对照溶液制备：取缺海龙的海龙胶口服液20ml，其余步骤同对比例2供试品溶液制备方法制备海龙阴性对照溶液；
(5)薄层层析方法：吸取供试品溶液10μl、对照药材及对照品各3μl，分别点于同一用1％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以50％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，至紫外光灯365nm下检视。
(6)试验结果：得到的TLC图如9所示，其中，自左而右1号条带为甘草苷对照品溶液，2号条带为甘草对照药材溶液，3-6号条带分别对应1号供试品溶液(批号：1812001)、2号供试品溶液(批号：1907001)、3号供试品溶液(批号：200110-1)、4号供试品溶液(批号：200110-2)，7号条带对应甘草阴性对照溶液。由图9的结果可知，阴性样品无干扰，鉴别专属性好，但该方法中展开系统为四相系统，溶液配制较复杂，且展开时间较长，大于1.5h，同时对照品斑点比移值约为2.0，比移值较小，斑点分离度相对较差。
由上述具体实施例可以看出，本发明采用同一供试品溶液，同时进行海龙和甘草的薄层鉴别。该检测方法大大降低了检测成本，提高了检测效率。该方法中供试品溶液制备方法简单，操作较方便；海龙和甘草的展开系统分别为两相系统和三相系统，简单易控，展开时间较短，检测效率提高。同时，展开的薄层斑点清晰，分离度好，比移值合适，准确度提高；本发明建立的海龙和甘草的薄层鉴别方法专属性和重现性均较好，阴性样品无干扰，可实现海龙胶口服液中的海龙和甘草的快速有效的鉴别，为海龙胶口服液的质量控制，提供了行之有效的快速薄层鉴别方法。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其它实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一种用于海龙胶口服液中海龙和/或甘草快速薄层鉴别的供试品溶液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将海龙胶口服液与第一有机溶剂混合、离心，取上清液蒸干；将所得残渣加水溶解，加入第二有机溶剂提取两次，提取液合并蒸干，将所得残渣加甲醇溶解，得到供试品溶液；
所述海龙胶口服液与第一有机溶剂的体积比为1:2～2.5；所述水的用量为海龙胶口服液体积的1/2～3/2；所述第二有机溶剂每次提取的用量为海龙胶口服液体积的3/4～5/4；所述甲醇的用量为海龙胶口服液体积的1/20～1/10。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一有机溶剂为甲醇、无水乙醇和乙腈中的一种；所述第二有机溶剂为水饱和正丁醇。
3.一种海龙胶口服液中海龙和/或甘草的快速薄层鉴别方法，其特征在于，供试品溶液为权利要求1或2所述制备方法得到的供试品溶液；
当鉴别的成分为海龙时，鉴别方法包括如下步骤：
1)取供试品溶液、海龙对照溶液；
2)将供试品溶液和海龙对照溶液点于第一硅胶G薄层板上，用展开剂展开；
3)将展开后的薄层板显色，实现海龙的薄层鉴别；
所述海龙对照溶液为海龙对照药材溶液和胆固醇对照品溶液；用于所述第一硅胶G薄层板的展开剂为石油醚和丙酮混合剂；
当鉴别的成分为甘草时，鉴别方法包括如下步骤：
a取供试品溶液、甘草对照溶液；
b将供试品溶液和甘草对照溶液点于第二硅胶G薄层板上，用展开剂展开；
c将展开后的薄层板显色，实现甘草的薄层鉴别；
所述甘草对照溶液为甘草对照药材溶液和甘草苷对照品溶液；
用于第二硅胶G薄层板的展开剂为三氯甲烷、丙酮和甲酸混合剂；
当鉴别的成分为海龙和甘草时，同时进行上述两个检测，两个检测使用同一份供试品溶液。
4.根据权利要求3所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述海龙对照药材溶液和甘草对照药材溶液的制备过程包括：将海龙对照药材和甘草对照药材分别水煎、过滤，将所得滤液与第一溶剂混合离心；取上清液蒸干，将所得残渣加水溶解，加入第二溶剂提取两次，提取液合并蒸干，残渣加甲醇溶解，得到海龙对照药材溶液和甘草对照药材溶液；
所述水煎包括浸泡和煎煮，所述浸泡的时间为15～30min；所述煎煮的时间为30～60min；所述浸泡中水的体积和药材的质量比为7.5～25ml:1g；所述第一溶剂与浸泡中所加水的体积比为1.5～2.5:1；所述第二溶剂的体积与药材的质量比为7.5～25ml:1g；所述甲醇的体积与药材的质量比为0.5～2ml:1g；所述第一溶剂为甲醇、无水乙醇和乙腈中的一种；所述第二溶剂为水饱和正丁醇。
5.根据权利要求3所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述胆固醇对照品溶液和甘草苷对照品溶液的浓度独立地为0.8～1.2mg/ml；所述胆固醇对照品溶液中溶剂为丙酮，所述甘草苷对照品溶液中溶剂为甲醇。
6.根据权利要求3所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述供试品溶液、海龙对照溶液和甘草对照溶液的点样量独立地为1～5μl。
7.根据权利要求3所述的薄层鉴别方法，其特征在于，用于所述第一硅胶G薄层板的展开剂中石油醚和丙酮的体积比为(3～5):1；用于第二硅胶G薄层板的展开剂中三氯甲烷、丙酮和甲酸的体积比为(4～6):(9～11):1。
8.根据权利要求7所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述石油醚和丙酮的体积比为4:1；所述三氯甲烷、丙酮和甲酸的体积比为5：10：1。
9.根据权利要求7所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述第二硅胶G薄层板为含1％氢氧化钠的硅胶G薄层板。
10.根据权利要求3所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述显色的显色剂为硫酸乙醇，所述硫酸乙醇的体积百分浓度为10％～50％。
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