CN117147754A - 一种莲须或其制剂的薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种莲须及其制剂的薄层鉴别方法，制备对照药材溶液、药材供试品溶液、配方颗粒与标准汤剂供试品溶液，取对照药材溶液与供试品溶液分别点于同一薄层板上，以展开剂展开后，喷上显色剂显色，在紫外光灯下检视，获得紫外光下的薄层色谱图，从而完成鉴别操作。本发明方法操作简便快速、色谱斑点分离度好、检测成本低、安全、环保。
Description
技术领域
本发明涉及中药质量控制方法，具体涉及一种莲须及其制剂的薄层鉴别方法。
背景技术
莲须为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥雄蕊。莲须具有固肾涩精的功能。用于治疗遗精滑精，带下，尿频。在古代，莲须主要用于治疗遗精梦泄、精滑不禁、久近痔漏、除泻痢、遗尿、尿频、带下、止血等。在现代，在临床上具有美白、抗血栓、抗乙肝病毒等作用。现代研究表明，莲须含黄酮类、生物碱、挥发类等成分，其中黄酮类成分是其主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗癌、神经保护和心脏保护性等作用。
现有莲须薄层鉴别方法文献报道较少，较为单一，主要为《中国药典》2020年版一部中收载的莲须药材薄层鉴别方法。但2020年版《中国药典》中方法不能全面地展示莲须中特有的黄酮及黄酮苷类成分，缺少专属性，且应用于莲须配方颗粒时薄层斑点较少，分离度较差，无法准确的进行质量评价。
发明内容
发明目的：针对现有技术的不足与缺陷，本发明提供一种莲须或其制剂的薄层鉴别方法，该方法最大程度地呈现了莲须的专属性成分，操作简便快速，色谱斑点分离度好，检测成本低、安全、环保。
技术方案：本发明所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，包括下述步骤：
(1)取莲须对照药材加水煎煮或加热回流处理，滤过，滤液浓缩至近干，加醇类溶剂超声处理，蒸干，用水溶解后加乙酸乙酯振摇提取，静置分层后合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加醇类溶剂溶解，获得对照药材溶液；
(2)取莲须药材加水煎煮或加热回流处理，滤过，滤液浓缩至近干，加醇类溶剂超声处理，蒸干，用水溶解后加乙酸乙酯振摇提取，静置分层后合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加醇类溶剂溶解，获得饮片供试品溶液；
和/或，取莲须配方颗粒和/或标准汤剂样品，加醇类溶剂超声提取，滤过，滤液蒸干，用水溶解后加乙酸乙酯振摇提取，静置分层合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加醇类溶剂溶解，获得配方颗粒供试品溶液和/或标准汤剂供试品溶液；
(3)取对照药材溶液与供试品溶液分别点于同一薄层板上，以展开剂展开后，喷上显色剂显色，置紫外光灯下检视，得到紫外薄层色谱图并进行对比鉴别。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(1)中莲须对照药材加水煎煮时，或步骤(2)中莲须药材加水煎煮时，药材与水的质量体积为1∶50g/mL～200g/mL，煎煮或加热回流的处理时间为15min～60min。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(2)中莲须配方颗粒与标准汤剂加醇类溶剂提取时，莲须配方颗粒、标准汤剂与醇类溶剂的质量体积为1∶40g/mL～200g/mL，超声处理的功率为250-300W、频率为40kHz、时间为15min～60min，乙酸乙酯振摇提取的次数为1～4次，乙酸乙酯溶液与样品的醇类溶液体积比为0.5∶2～1。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(3)中展开剂为正丁醇、丙酮、冰醋酸、水的混合溶液。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(3)中展开剂为正丁醇-丙酮-冰醋酸-水的体积比为2∶2∶1∶6～2∶2∶1∶10。优选地，正丁醇-丙酮-冰醋酸-水的体积比为2∶2∶1∶7。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(3)中对照药材溶液与供试品溶液的点样量为1μl～4μl。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(3)中紫外光灯波长为360-370nm，显色剂为3％三氯化铝乙醇溶液，在喷上显色剂显色后自然晾干或热风吹干。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(3)中薄层板为聚酰胺薄膜。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述的步骤(3)中薄层色谱图进行对比鉴别是指观察供试品溶液色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点。
所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，所述醇类溶剂包括甲醇。
原理分析：依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用适宜的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着选用的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下(日光、紫外光灯或显色剂显色)，呈现出各自不同的颜色斑点，获得多信息的薄层色谱图。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下显著优点：本发明采用简便、快捷的前处理方法得到供试品溶液、对照药材溶液，分别点于同一块薄层板上，用适宜展开剂展开，喷以显色剂后在紫外光下检视，得到多信息的莲须薄层色谱图。与药典法和现有文献报道相比，该方法操作简便快速，色谱斑点分离度好，且能呈现莲须特有的黄酮类成分，具有专属性，检测成本低，更有利于质量监督。
附图说明
图1是本发明实施例1中莲须配方颗粒的薄层色谱图；
图2是本发明实施例1中莲须标准汤剂的薄层色谱图；
图3是本发明实施例1中莲须药材的薄层色谱图；
图4是本发明实施例2中不同点样量的薄层色谱图；
图5是本发明实施例2中不同温度的薄层色谱图；
图6是本发明实施例2中不同湿度的薄层色谱图；
图7是本发明对比例1中莲须配方颗粒不同展开体系的薄层色谱图；
图8是本发明对比例2中莲须配方颗粒不同展开剂比例的薄层色谱图；
图9是本发明对比例3中莲须配方颗粒及对照药材不同制备方式的薄层色谱图。
具体实施方式
下面结合附图及具体实施方式对本发明的技术方案做进一步的描述。
本发明采用仪器与试药如下：
仪器：薄层自动成像仪(CAMAG TLC VISUALIZER)、万分之一天平(瑞士梅特勒-托利多公司)、GKC控温水浴锅(南通华泰实验仪器有限公司)、硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)、聚酰胺薄膜(台州市路桥四甲生化塑料厂)。
试药：甲醇(国药集团化学试剂有限公司)、乙醇(国药集团化学试剂有限公司)、乙酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司)、正丁醇(国药集团化学试剂有限公司)、丙酮(上海凌峰化学试剂有限公司)、冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司)、环己烷(国药集团化学试剂有限公司)、无水甲酸(阿拉丁化学试剂有限公司)均为分析纯；水为纯水。
莲须对照药材(批号：121392-202102)购于中国食品药品检定研究院。
莲须药材、莲须标准汤剂、莲须配方颗粒均由江阴天江药业有限公司提供。
本发明中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1：
药材供试品溶液的制备：取莲须药材1g，加水50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
配方颗粒供试品溶液的制备：取本品0.5g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
标准汤剂供试品溶液的制备：取本品0.3g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：取莲须对照药材1g，加水50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
薄层鉴别步骤：照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取供试品溶液1μ1、对照药材溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外灯光(365nm)下检视。
评价要求：供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
结果分析：图1中1～3为不同批次莲须配方颗粒的供试品色谱，S为莲须对照药材色谱。图2中1～19为不同批次莲须标准汤剂的供试品色谱，S为莲须对照药材色谱。图3中1～3为不同批次莲须药材的供试品色谱，S为莲须对照药材色谱。莲须药材、颗粒、标汤都与对照药材色谱一一对应。
实施例2：
对实施例1中的薄层鉴别进行耐用性验证，具体包括：
(1)不同点样量的考察：
取莲须配方颗粒(批号：22090059)和莲须对照药材，分别按实施例1所述的方法制成供试品溶液和对照药材溶液，并分别取莲须配方颗粒供试品溶液0.5μL、1μL、1.5μL、2μL和莲须对照药材溶液1μL、2μL、3μL、4μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图4，图4中1～4分别对应的是0.5μL、1μL、1.5μL、2μL的莲须配方颗粒供试品色谱，5～8分别对应的是1μL、2μL、3μL、4μL的莲须对照药材色谱，由图4可知，当点样量为1μL～4μL时，莲须配方颗粒色谱与对照药材色谱在相应的位置显清晰的斑点，无其他干扰。
不同温度的考察：
取莲须配方颗粒(批号：22090059)和莲须对照药材，分别按实施例1所述的方法制成供试品溶液和对照药材溶液，并分别取莲须配方颗粒供试品溶液1μL和莲须对照药材溶液2μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶7)为展开剂，分别在低温(T：4℃、RH：55.2％)、常温(T：19.2℃、RH：55.2％)和高温(T：32.2℃、RH：55.2％)条件下展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图5，图5中1～3分别对应的是莲须配方颗粒供试品色谱，S对应的是莲须对照药材色谱，由图5可知，不同温度条件下，莲须配方颗粒供试品色谱与对照药材色谱的相应位置上显相同颜色的荧光斑点，且分离效果都较好。实验结果表明，温度对莲须配方颗粒薄层鉴别影响较小，说明该薄层鉴别方法对不同温度的耐用性好。
(3)不同湿度的考察：
取莲须配方颗粒(批号：22090059)和莲须对照药材，分别按实施例1所述的方法制成供试品溶液和对照药材溶液，并分别取莲须配方颗粒供试品溶液1μL和莲须对照药材溶液2μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶7)为展开剂，分别在不同湿度(RH：18％、55.2％、88％)条件下展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，热风吹干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图6，图6中1～3分别对应的是莲须配方颗粒供试品色谱，S对应的是莲须对照药材色谱，由图6可知，不同湿度条件下，莲须配方颗粒供试品色谱与对照药材色谱的相应位置上显相同颜色的荧光斑点，且分离效果都较好。实验结果表明，湿度对莲须配方颗粒薄层鉴别影响较小，说明该薄层鉴别方法对不同湿度的耐用性好。
对比例1：
本对比例对比采用莲须配方颗粒对比了不同展开剂体系，具体过程如下：
供试品溶液的制备：取莲须配方颗粒0.5g，研细，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：取莲须对照药材1g，加水50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
不同展开体系：1)《中国药典》2020年版一部莲须项下的薄层展开剂：环己烷-乙酸乙酯-无水甲酸(9∶3∶0.7)，显色剂为10％硫酸乙醇溶液；2)甲醇-冰醋酸-水(12∶1∶1)，显色剂为3％三氯化铝乙醇溶液；3)本发明展开剂：正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶7)，显色剂为3％三氯化铝乙醇溶液。吸取上述方法三制备的莲须配方颗粒供试品溶液和方法一制备的对照药材溶液，点于聚酰胺薄膜上，按上述不同薄层鉴别条件展开，喷以规定的显色剂，置紫外灯光(365nm)下检视，
结果分析：图7中①～③分别对应3种不同展开体系。①为《中国药典》2020年版中莲须药材薄层鉴别的展开剂，但结果显示该展开剂体系应用于配方颗粒时，薄层斑点较少，分离度差，故不适合莲须配方颗粒鉴别；同时采用②中展开体系时，分离较差。采用③即本发明方法中展开剂体系时，配方颗粒供试品分离度好，斑点信息丰富且与对照药材一一对应。
对比例2：
本对比例对比采用莲须配方颗粒对比了展开剂不同比例，具体过程如下：
供试品溶液的制备：取莲须配方颗粒0.5g，研细，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：取莲须对照药材1g，加水50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
不同展开剂比例：1)正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶10)；2)正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶8)；3)正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶7)；4)正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶6)，吸取上述方法三制备的莲须配方颗粒供试品溶液和方法一制备的对照药材溶液，点于聚酰胺薄膜上，按上述不同薄层鉴别条件展开，喷以规定的显色剂，置紫外灯光(365nm)下检视，
结果分析：图8中①～④分别对应4种不同展开剂比例。采用①展开剂比例时，薄层斑点较少，分离度差；采用②中展开剂比例时，分离较差。采用③中展开剂比例时，配方颗粒供试品分离度好，斑点信息丰富且与对照药材一一对应，Rf值适中；采用④展开剂比例时，色谱斑点有重合拖尾现象。
对比例3：
本对比例对比了不同展开剂体系，同时对比考察了采用本发明展开剂下《中国药典》方法项下的供试品和对照药材溶液制备方法、展开剂用于莲须配方颗粒的检测，具体过程如下：
(1)不同莲须配方颗粒供试品制备方法：1)取莲须配方颗粒0.5g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2)取莲须配方颗粒0.5g，研细，加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
3)取莲须配方颗粒0.5g，研细，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
(2)不同莲须对照药材溶液制备方法：S1：取莲须对照药材1g，加水50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
S2：取莲须对照药材1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取上述3种供试品溶液各1μL与2种对照药材溶液各2μL，点于同一聚酰胺薄层板上，以正丁醇-丙酮-冰醋酸-水(2∶2∶1∶7)为展开剂展开，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。
结果分析：图9中1～3为分别为对应3种制备方法制成的莲须配方颗粒的供试品色谱，S1～S2分别为对应2种制备方法制成的莲须对照药材色谱。莲须配方颗粒样品供试品制备采用方法1、2时，样品斑点分离模糊，采用方法3时斑点清晰、圆整；对照药材供试品制备方法采用方法1时，斑点分离度好，且此时对颗粒方法3斑点一一对应。
综合分析：本发明提供的一种莲须及其制剂的薄层鉴别方法，供试品制备操作简单快速。本发明中的展开剂既可用于莲须药材的薄层鉴别，也可用于莲须制剂的薄层鉴别，色谱斑点更为丰富，分离度好，克服了现有的薄层鉴别方法中供试品斑点少、莲须制剂薄层图谱斑点信息少的问题，同时采用三氯化铝乙醇作为显色剂，是黄酮类成分特有的显色剂，因此该薄层鉴别方法呈现了莲须特有的黄酮类成分。同时，本发明方法采用聚酰胺薄膜为薄层板，大大减小了点样量，即可达到斑点信息丰富、分离度佳的效果。
Claims (10)
1.一种莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：包括下述步骤：
(1)取莲须对照药材加水煎煮或加热回流处理，滤过，滤液浓缩至近干，加醇类溶剂超声处理，蒸干，用水溶解后加乙酸乙酯振摇提取，静置分层后合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加醇类溶剂溶解，获得对照药材溶液；
(2)取莲须药材加水煎煮或加热回流处理，滤过，滤液浓缩至近干，加醇类溶剂超声处理，蒸干，用水溶解后加乙酸乙酯振摇提取，静置分层后合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加醇类溶剂溶解，获得饮片供试品溶液；
和/或，取莲须配方颗粒和/或标准汤剂样品，加醇类溶剂超声提取，滤过，滤液蒸干，用水溶解后加乙酸乙酯振摇提取，静置分层合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加醇类溶剂溶解，获得配方颗粒供试品溶液和/或标准汤剂供试品溶液；
(3)取对照药材溶液与供试品溶液分别点于同一薄层板上，以展开剂展开后，喷上显色剂显色，置紫外光灯下检视，得到紫外薄层色谱图并进行对比鉴别。
2.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(1)中莲须对照药材加水煎煮时，或步骤(2)中莲须药材加水煎煮时，药材与水的质量体积为1：50g/mL～200g/mL，煎煮或加热回流的处理时间为15min～60min。
3.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(2)中莲须配方颗粒与标准汤剂加醇类溶剂提取时，莲须配方颗粒、标准汤剂与醇类溶剂的质量体积为1：40g/mL～200g/mL，超声处理的功率为250-300W、频率为40kHz、时间为15min～60min，乙酸乙酯振摇提取的次数为1～4次，乙酸乙酯溶液与样品的醇类溶液体积比为0.5：2～1。
4.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(3)中展开剂为正丁醇、丙酮、冰醋酸、水的混合溶液。
5.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(3)中展开剂为正丁醇-丙酮-冰醋酸-水的体积比为2：2：1：6～2：2：1：10。
6.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(3)中对照药材溶液与供试品溶液的点样量为1μl～4μl。
7.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(3)中紫外光灯波长为360-370nm，显色剂为3％三氯化铝乙醇溶液，在喷上显色剂显色后自然晾干或热风吹干。
8.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(3)中薄层板为聚酰胺薄膜。
9.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述的步骤(3)中薄层色谱图进行对比鉴别是指观察供试品溶液色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光斑点。
10.根据权利要求1所述的莲须或其制剂的薄层鉴别方法，其特征在于：所述醇类溶剂包括甲醇。
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