CN116953117A - 石莲子提取物、苦石莲提取物薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种石莲子提取物、苦石莲提取物薄层鉴别方法，包括：取石莲子提取物预处理，得到供试品溶液；取苦石莲提取物预处理，得到苦石莲提取物溶液；取石莲子对照药材，加水煎煮，得到对照药材溶液；将供试品溶液、苦石莲提取物溶液和对照药材溶液进行薄层色谱检测，薄层板为硅胶G薄层板；展开剂为正丁醇‑异丙醇‑水‑冰乙酸；置紫外光灯下检视，若供试品和对照药材溶液在Rf相等处有相同样色的荧光斑点，同时在Rf＝0.64～0.79处无荧光斑点，则为石莲子提取物；若在Rf＝0.64～0.79处有荧光斑点，则为苦石莲提取物。本发明通过薄层色谱图谱在比移值范围内是否有荧光斑点，用于区分石莲子提取物及苦石莲提取物。
Description
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，尤其是涉及一种石莲子提取物、苦石莲提取物薄层鉴别方法。
背景技术
石莲子为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥成熟果实。具有补益脾胃、清心除烦、祛热毒的功效,用于噤口痢、冷热呕吐、食物不下、淋浊等病症。石莲子中含有莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱、莲心单碱等生物碱以及淀粉和棉子糖。
苦石莲为豆科植物南蛇竻的干燥成熟种子，是石莲子的误用品。具有散瘀止痛、清热、祛湿的功效,可用于治疗哕逆、痢疾、淋浊、尿血、跌打损伤。
石莲子与苦石莲的大小、形状、颜色、质地等较为相似,所以一些药店及中药房将二者视为一物、相互替代或者互相混淆应用。通过理化鉴别和性状鉴别能对二者药材进行区分，但其提取物，经过提取后，性状消失，无法用于鉴别提取物。
因此，需要制定出专属性更强、重复性更强、有效可控的方法为石莲子提取物的定性鉴别提供准确的依据。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供石莲子提取物、苦石莲提取物薄层鉴别方法。
本文术语“包括”、“包含”和“具有”之间可互换使用，旨在表示方案的包含性，意味着所述方案可存在除所列出的元素之外的其他元素。同时应当理解，在本文中使用“包括”、“包含”和“具有”描述，也提供“由……组成”方案。
本申请中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，A和/或B，可以表示:单独存在A，同时存在A和B，单独存在B的情况。其中A,B可以是单数或者复数。
本申请中，“至少一个”是指一个或者多个，“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达，是指的这些项中的任意组合，包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。
应理解，在本申请的各种实施例中，下述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后，部分或全部步骤可以并行执行或先后执行，各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定，而不应对本申请实施例的实施过程构成任何限定。
本发明提供了一种石莲子提取物薄层鉴别方法，石莲子提取物与石莲子对照药材薄层色谱图相比，显相同颜色斑点，可用于石莲子提取物的鉴别。供试品与石莲子对照药材薄层色谱图相比，在比移值0.64～0.79处位置，石莲子无荧光斑点出现，而其混伪品苦石莲提取物则有明显的蓝色荧光斑点，可作为鉴别点，用于区分石莲子与苦石莲提取物。本薄层方法能快速、有效的鉴别出已失去饮片形态的石莲子提取物并区分石莲子提取物与苦石莲子提取物，操作简便、精密度和灵敏度高、稳定性好，具有良好的应用前景。
本发明提供了一种石莲子提取物、苦石莲提取物薄层鉴别方法，包括：
A)取石莲子提取物预处理，得到供试品溶液；
取苦石莲提取物预处理，得到苦石莲提取物溶液；
B)取石莲子对照药材，加水煎煮，得到对照药材溶液；
C)将供试品溶液、苦石莲提取物溶液和对照药材溶液进行薄层色谱检测，薄层板为硅胶G薄层板；展开剂为正丁醇-异丙醇-水-冰乙酸；
D)置紫外光灯下检视，若供试品和对照药材溶液在Rf相等处有相同样色的荧光斑点，同时在Rf＝0.64～0.79处无荧光斑点，则为石莲子提取物；若在Rf＝0.64～0.79处有荧光斑点，则为苦石莲提取物。
本发明提供石莲子提取物、苦石莲提取物首先取石莲子提取物预处理，得到供试品溶液。
本发明所述石莲子提取物或苦石莲提取物预处理具体为：
a)将石莲子提取物或苦石莲提取物加氨水润湿，再加三氯甲烷回流，滤过，挥干，残渣加水溶解，通过C18固相萃取小柱，用30％甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇洗脱，收集洗脱液；
b)将洗脱液回收溶剂至干，残渣加稀乙醇溶解后通过中性氧化铝柱，用乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加70％乙醇超声，即得。
本发明提供的石莲子提取物预处理首先将石莲子提取物加数滴氨水润湿，再加三氯甲烷回流20～30min，滤过，挥干，残渣加水溶解，通过C18固相萃取小柱，用30％甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇洗脱，收集洗脱液
在本发明一些实施例中，所述石莲子提取物/苦石莲提取物、水、30％甲醇和甲醇的质量体积比为1g：10mL：10mL：10mL
将洗脱液回收溶剂至干，残渣加稀乙醇溶解后通过中性氧化铝柱，用乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加70％乙醇超声，即得
在本发明一些实施例中，所述稀乙醇、乙醇和70％乙醇的体积比为5:25:10；
在本发明一些实施例中，所述超声时间为20～30min。
在本发明一些实施例中，所述超声时间为30min。
本发明对于苦石莲提取物预处理的具体步骤不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
取石莲子对照药材，加水煎煮，得到对照药材溶液。
本发明所述石莲子对照药材和水的质量体积比为1g：50mL；所述煎煮的时间为50～70min；更优选为60min。
将供试品溶液、苦石莲提取物溶液和对照药材溶液进行薄层色谱检测。
优选为：吸取供试品溶液，对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展开剂展开，取出，晾干，紫外光灯下检视。所述紫外光波长为365nm。
按照本发明，展开剂为正丁醇-异丙醇-水-冰乙酸；
在本发明其中一部分优选实施方式中，所述正丁醇-异丙醇-水-冰乙酸的质量比为7:5:1:1。
本发明所述薄层板为硅胶G薄层板；优选为GF254薄层板。可以选自天津思利达，默克，青岛海洋预制硅胶GF254板。结果表明，该方法耐用性良好，均能达到鉴别要求。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。
置紫外光灯下检视，若供试品和对照药材溶液在Rf相等处有相同样色的荧光斑点，同时在Rf＝0.64～0.79处无荧光斑点，则为石莲子提取物；
若在Rf＝0.64～0.79处有荧光斑点，则为苦石莲提取物。
在本发明优选实施方式中，若供试品和对照药材溶液在Rf相等处有相同样色的荧光斑点，同时在Rf＝0.714处无荧光斑点，则为石莲子提取物；
若在Rf＝0.714处有荧光斑点，则为苦石莲提取物。
本发明所述薄层色谱供试品点样量为1～7μL，对照药材溶液的点样量为5～15μL。
本发明检视温度为4℃～25℃。
该方法对不同温度的耐用性较好。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。
该方法对不同湿度的耐用性较好。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。
本发明提供了一种石莲子提取物、苦石莲提取物薄层鉴别方法，包括：A)取石莲子提取物预处理，得到供试品溶液；取苦石莲提取物预处理，得到苦石莲提取物溶液；B)取石莲子对照药材，加水煎煮，得到对照药材溶液；C)将供试品溶液、苦石莲提取物溶液和对照药材溶液进行薄层色谱检测，薄层板为硅胶G薄层板；展开剂为正丁醇-异丙醇-水-冰乙酸；D)置紫外光灯下检视，若供试品和对照药材溶液在Rf相等处有相同样色的荧光斑点，同时在Rf＝0.64～0.79处无荧光斑点，则为石莲子提取物；若在Rf＝0.64～0.79处有荧光斑点，则为苦石莲提取物。本发明建立的石莲子提取物薄层鉴别色谱方法，用于快速、准确、有效的鉴别石莲子提取物。同时通过观察薄层色谱图谱在某一比移值范围内是否有荧光斑点，作为鉴别点，用于区分石莲子提取物及苦石莲提取物。
附图说明
图1点样量考察；
图2专属性考察；
图3为不同薄层板考察-天津思利达；
图4不同薄层板考察-默克；
图5不同薄层板考察-青岛裕民源；
图6不同温度-4℃；
图7不同温度-25℃；
图8不同湿度-32％；
图9不同湿度-75％；
图10不同次验证；
图11为石莲子提取物及苦石莲提取物鉴别点Rf值确定；
图12为对比例1的方法结果图；
图13为对比例2的方法结果图；
图14为对比例3的方法结果图；
图15为对比例4的方法结果图。
具体实施方式
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种贯众药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒UPLC特征图谱构建方法进行详细描述。
加热板、超声机、薄层成像系统：CAMAG TLC Visualizer、硅胶GF254薄层板(青岛海洋化工厂，批号：20180527、天津思利达科技有限公司，批号：191016、默克，批号：HX87183353)。
乙醇、正丁醇、异丙醇、冰乙酸均为分析纯，水为超纯水(实验室自制)。
石莲子对照药材(上海鸿永生物科技有限公司，批号：230011-202201)。石莲子提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司，批号：SY2211001；SY2211002；SY2211003)苦石莲提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司，批号：SY2212001；SY2212002；SY2212003)。
实施例1
供试品溶液的制备
取本品粉末1g，加氨水数滴润湿，再加三氯甲烷回流30min，滤过，挥干，残渣加水10ml溶解，通过C18(300mg)固相萃取小柱，用30％甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加稀乙醇5ml溶解后通过中性氧化铝柱，用乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加70％乙醇10mL超声30min，取滤液作为供试品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取对照药材10μl，供试品5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-异丙醇-水-冰乙酸(7:5:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
对照药材溶液的制备
取石莲子对照药材1g，加水50ml煎煮1h，滤过，蒸干，然后同供试品溶液制成对照药材溶液。
实施例2方法学考察
2.1点样量考察
在以上拟定的实验条件下，分别取石莲子对照药材溶液5μl、10μl、15μl、石莲子提取物溶液1μl、3μl、5μl、7μl点在同一硅胶G薄层板上。按拟定的薄层色谱条件展开，检视，结果见图1，由图可看出，当对照药材溶液点样5～15μl，供试品溶液点样1～7ul时，薄层色谱荧光斑点显色清晰，确定对照药材溶液点样量为5～15μl、供试品溶液点样量为1～7μl。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。
图1点样量考察。注：1～3为石莲子对照药材点样量5μl、10μl、15μl；4～7为石莲子提取物点样量1μl、3μl、5μl、7μl。
2.2专属性考察
按照以上供试品制备方法制备石莲子对照药材溶液、石莲子提取物溶液、阴性溶液，分别点于同一薄层板上，按拟定的薄层色谱条件展开，检视，结果见图2，结果表明，阴性样品对石莲子对照药材、石莲子提取物供试品无干扰，该方法专属性较好。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。
图2专属性考察。注:1注：1为阴性溶液；2为石莲子对照药材；3为石莲子提取物。
2.3耐用性的考察
2.3.1不同薄层板的比较
选取天津思利达，默克，青岛海洋预制硅胶GF254板，分别按拟定的试验方法进行试验，见图3～5，结果3个品牌薄层板均能达到鉴别要求，表明方法耐用性良好。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。
结果如图3，图3为不同薄层板考察-天津思利达。注:1石莲子对照药材；2为石莲子提取物。图4不同薄层板考察-默克注:1石莲子对照药材；2为石莲子提取物。图5不同薄层板考察-青岛裕民源，注:1石莲子对照药材；2为石莲子提取物。
2.3.2不同温度的比较
取点样后的薄层板，分别在低温4℃和常温25℃的温度环境下进行展开。由图6～7可看出，该方法对不同温度的耐用性较好。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。图6不同温度4℃；注：1石莲子对照药材；2为石莲子提取物。图7不同温度25℃；注：1石莲子对照药材；2为石莲子提取物。
2.3.3不同湿度的比较
取点样后的薄层板，分别在32％和75％的湿度环境下进行展开，见图8～9。由图可看出，该方法对不同湿度的耐用性较好。与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。图8不同湿度-32％，注:注：1石莲子对照药材；2为石莲子提取物；图9不同湿度-75％，注：1石莲子对照药材；2为石莲子提取物。
2.3.4验证
3批石莲子提取物进行薄层鉴别验证，实验结果见图10，结果表明，与对照药材图谱比较，供试品图谱与对照药材图谱在相应位置上，显相同颜色的斑点。
图10不同批次验证。注:1石莲子对照药材；2-4为石莲子提取物SY2211001；SY2211002；SY2211003。
2.4石莲子提取物及苦石莲提取物鉴别点Rf值确定
将石莲子提取物及苦石莲提取物采用实施例1相同的方法进行检定，结果如图11所示，图11为石莲子提取物及苦石莲提取物鉴别点Rf值确定；注：1石莲子对照药材；2-5为石莲子提取物SY2211001；SY2211002；SY2211003；6-8为苦石莲提取物。
结果表明，在比移值0.714处位置，石莲子无荧光斑点出现，而其混伪品苦石莲提取物则有明显的蓝色荧光斑点，可作为鉴别点，用于区分石莲子与苦石莲提取物。
对比例1
取石莲子提取物1g，加浓氨2ml润湿，再加入70％乙醇10ml，超声30分钟，取续滤液，滤过即得。另取石莲子对照药材lg，加水煎煮30min，滤过，蒸干，残渣加浓氨2ml润湿，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种种溶液各5～15μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-丙酮(7：2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。实验结果见图12。
图12为对比例1的方法结果图。注：注：1、3、5为石莲子对照药材点样量5μl、10μl、15μl；2、4、6为石莲子提取物点样量5μl、10μl、15μl；
结果表明，采用上述薄层鉴别方法，石莲子提取物斑点与石莲子对照药材斑点一致。但薄层色谱效果较差，不适用于石莲子提取物的鉴别。
对比例2
取石莲子提取物1g，加入70％乙醇，冷浸过夜，滤过，滤液浓缩至1ml，再滤过作为供试品溶液。另取石莲子对照药材lg，加水煎煮30min，滤过，蒸干，同供试品方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液5～15μ1，对照药材溶液5～15μ1，分别点于同一薄层硅胶GF254板上，以正丁醇-异丙醇-氨水-冰醋酸(7：5：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，实验结果见图13所示。
图13为对比例2的方法结果图。注：1～3为石莲子对照药材点样量5μl、10μl、15μl；4～6为石莲子提取物点样量5μl、10μl、15μl。
结果表明，采用上述薄层鉴别方法，石莲子提取物斑点与石莲子对照药材斑点一致。但薄层色谱效果较差，不适用于石莲子提取物的鉴别。
对比例3
取石莲子提取物1g，加氨水数滴润湿，再加三氯甲烷回流30分钟，滤过，挥干，残渣加水10ml溶解，通过C18(300mg)固相萃取小柱，用30％甲醇10ml洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加稀乙醇5ml溶解后通过中性氧化铝柱，用乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加70％乙醇10mL超声30分钟，取滤液作为供试品溶液。取石莲子对照药材1g，加水50ml煎煮1小时，滤过，蒸干，然后同供试品溶液制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取对照药材10μl，供试品5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-异丙醇-氨水-冰乙酸(7：5：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，实验结果见图14所示。
图14为对比例3的方法结果图。注：1、3、5为石莲子对照药材点样量5μl、10μl、15μl；2、4、6为石莲子提取物点样量5μl、10μl、15μl。
结果表明，采用上述薄层鉴别方法，石莲子提取物斑点与石莲子对照药材斑点一致。但薄层色谱效果较差，不适用于石莲子提取物的鉴别。
对比例4
取本品粉末1g，加氨水数滴润湿，再加三氯甲烷回流30分钟，滤过，挥干，残渣加水10ml溶解，通过C18(300mg)固相萃取小柱，用30％甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加稀乙醇5ml溶解后通过中性氧化铝柱，用乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加70％乙醇10mL超声30分钟，取滤液作为供试品溶液。取石莲子对照药材1g，加水50ml煎煮1小时，滤过，蒸干，然后同供试品溶液制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取对照药材10μl，供试品5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(4：1：5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
图15为对比例4的方法结果图。注：1～3为石莲子对照药材点样量5μl、10μl、15μl；4～6为石莲子提取物点样量5μl、10μl、15μl。
结果表明，采用上述薄层鉴别方法，石莲子提取物斑点与石莲子对照药材斑点一致。但薄层色谱效果较差，不适用于石莲子提取物的鉴别。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种石莲子提取物、苦石莲提取物薄层鉴别方法，包括：
A)取石莲子提取物预处理，得到供试品溶液；
取苦石莲提取物预处理，得到苦石莲提取物溶液；
B)取石莲子对照药材，加水煎煮，得到对照药材溶液；
C)将供试品溶液、苦石莲提取物溶液和对照药材溶液进行薄层色谱检测，薄层板为硅胶G薄层板；展开剂为正丁醇-异丙醇-水-冰乙酸；
D)置紫外光灯下检视，若供试品和对照药材溶液在Rf相等处有相同样色的荧光斑点，同时在Rf＝0.64～0.79处无荧光斑点，则为石莲子提取物；若在Rf＝0.64～0.79处有荧光斑点，则为苦石莲提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A)所述石莲子提取物或苦石莲提取物预处理具体为：
a)将石莲子提取物或苦石莲提取物加氨水润湿，再加三氯甲烷回流，滤过，挥干，残渣加水溶解，通过C18固相萃取小柱，用30％甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇洗脱，收集洗脱液；
b)将洗脱液回收溶剂至干，残渣加稀乙醇溶解后通过中性氧化铝柱，用乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加70％乙醇超声，即得。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述回流时间为20～30min；所述石莲子提取物/苦石莲提取物、水、30％甲醇和甲醇的质量体积比为1g：10mL：10mL：10mL；
步骤b)所述稀乙醇、乙醇和70％乙醇的体积比为5:25:10；所述超声时间为20～30min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B)所述石莲子对照药材和水的质量体积比为1g：50mL；
所述煎煮的时间为50～70min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述薄层色谱供试品点样量为1～7μL，对照药材溶液的点样量为5～15μL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C)所述正丁醇-异丙醇-水-冰乙酸的质量比为7:5:1:1。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤D)所述紫外光波长为365nm。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤D)所述硅胶G薄层板为GF254薄层板。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤D)检视温度为4℃～25℃；所述检视湿度为32％rh～75％rh。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤D)所述Rf值为0.714。
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