CN117571910B - 一种包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法及其应用 - Google Patents
一种包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法，该薄层鉴别方法包括如下步骤：(1)将包含当归的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少黄柏的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及(2)对该对供试品溶液、该阴性样品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；其中，在该薄层色谱鉴别分析的步骤中，采用三氯甲烷‑甲醇‑水作为展开剂，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(1～20):(1～10):(0.1～5)。本发明的上述薄层鉴别方法通过对于包含当归的中药组合物中的药材黄柏的检测，为包含当归的中药组合物的质量控制和药效物质基础的研究提供了理论依据。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法及其应用。
背景技术
薄层色谱法在中药材及其制剂的定性鉴别中得到广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，成为中药鉴别的重要方法。薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
现有技术中未见包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法的相关报道。
发明内容
基于此，本发明提供了一种包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法，该薄层鉴别方法包括如下步骤：
(1)将包含当归的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少黄柏的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及
(2)对该对供试品溶液、该阴性样品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
其中，在该薄层色谱鉴别分析的步骤中，采用三氯甲烷-甲醇-水作为展开剂，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(1～20):(1～10):(0.1～5)。
进一步地，该包含当归的中药组合物包含当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪。
进一步地，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(10～20)。
进一步地，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约15.48。
进一步地，该包含当归的中药组合物粉末的制备方法包括：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪，破碎至粗颗粒，加水浸泡，武火煎煮至沸，文火煎煮一段时间，得到煎煮液；以及将该煎煮液趁热过滤取滤液，减压浓缩至在15～25℃下相对密度为1.05～1.10的浸膏，预冻或速冻之后将该浸膏在冷冻干燥机中干燥，粉碎，过筛，混匀，得到该包含当归的中药组合物粉末。
进一步地，该粗颗粒的直径为3～6mm，例如4～5mm。
进一步地，该水与该该包含当归的中药组合物的体积/质量之比为25～35，例如约29。
进一步地，该浸泡的时间为10～100min，例如约60min。
进一步地，该武火煎煮时加盖。
进一步地，该文火煎煮时不加盖。
进一步地，该文火煎煮的时间为10～100min，例如约50min。
进一步地，该趁热过滤的温度为80～85℃。
进一步地，该过滤为120目尼龙滤布单层过滤。
进一步地，该滤液与该水的体积之比值为0.2～1，例如约0.5。
进一步地，在该预冻或速冻之前，将该浸膏置于不锈钢盘中，使其铺料厚度为9～11mm。
进一步地，该预冻为在≦-18℃冰柜中将该浸膏预冻过夜。
进一步地，该速冻为使用液氮将该浸膏速冻至内无湿心。
进一步地，该减压浓缩的温度不高于60℃。
进一步地，该减压浓缩的真空度为-0.085～-0.099Mpa。
进一步地，该冷冻干燥的冷阱温度不高于-40℃。
进一步地，该冷冻干燥的真空度不高于100Pa。
进一步地，该冷冻干燥至水分不高于8％。
进一步地，该筛为三号筛。
进一步地，该供试品溶液的制备方法包括：称取适量的包含当归的中药组合物粉末，加入第一溶剂进行溶解，使用第二溶剂进行提取，得到第一溶液；将该第一溶液使用第三溶剂进行提取，得到第二溶液，将该第二溶液进行蒸干，得到残渣；以及在该残渣中加入第四溶剂进行溶解，得到该供试品溶液。
进一步地，该对照药材溶液的制备方法包括：称取适量的对照药材，使用第二溶剂进行处理，过滤取滤液，将该滤液使用第三溶剂进行提取，将所得溶液蒸干，得到残渣；以及在该残渣中加入第四溶剂进行溶解，得到该对照药材溶液。
进一步地，该阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少黄柏的中药组合物粉末，之后的步骤与该供试品溶液的制备方法相同。
进一步地，该缺少黄柏的中药组合物粉末通过如下方法进行制备：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄连、黄芩和黄芪，之后的步骤与该包含当归的中药组合物粉末的制备方法相同。
进一步地，该包含当归的中药组合物与该第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～50)，例如约1:约30。
进一步地，该包含当归的中药组合物与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～50)，例如约1:约20。
进一步地，该包含当归的中药组合物与该第三溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(0.1～50)，例如约1:约20。
进一步地，该包含当归的中药组合物与该第四溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(0.1～5)，例如约1:约1。
进一步地，该第一溶剂为水。
进一步地，该第二溶剂为水饱和正丁醇。
进一步地，该提取的方式为振摇提取、超声提取和/或回流提取，例如振摇提取。
进一步地，该振摇提取的次数为1～5次，例如2次。
进一步地，该第三溶剂为氨试液。
进一步地，该第四溶剂为醇，例如甲醇。
进一步地，该对照药材与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～30)，例如约0.2:约20。
进一步地，该对照药材与该第三溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～30)，例如约0.2:约20。
进一步地，该对照药材与该第四溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(0.1～5)，例如约0.2:约1。
进一步地，该处理的方式为超声处理。
进一步地，该超声处理的时间为10～60min，例如约30min。
进一步地，该供试品溶液的点样量为0.5～10μl，例如约3μl。
进一步地，该对照药材溶液的点样量为0.5～10μl，例如约3μl。
进一步地，该阴性样品溶液的点样量为0.5～10μl，例如约3μl。
进一步地，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(5～15):(3～7):(0.1～2)。
进一步地，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(9～11):(4.5～5.5):(0.5～1.5)。
进一步地，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为约10:约5:约1。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的展开为将薄层板置于氨试液饱和10～30min例如约20min的展开缸内展开。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的显色方式为：将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以碘化铋钾试液进行显色。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的温度条件为5℃～25℃。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的湿度条件为42％～88％。
进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的展距条件为8～18cm，例如约10cm。
进一步地，该薄层板为硅胶G薄层板。
进一步地，该硅胶G薄层板为青岛海洋硅胶G薄层板或青岛胜海硅胶G薄层板。
进一步地，该对照药材为黄柏对照药材。
进一步地，该薄层鉴别的标准包括：查看薄层板在与黄柏对照药材相应位置上，是否显示出相同颜色的特征斑点，以及阴性样品是否有干扰；如果该薄层板具有该特征斑点且该阴性样品无干扰，则在所检测的包含当归的中药组合物中含有黄柏药材。
根据本发明的另一个方面，提供了一种上述薄层鉴别方法在鉴别包含当归的中药组合物中的药材黄柏中的用途。
根据本发明的另一个方面，提供了一种用于鉴别包含当归的中药组合物中的药材黄柏的试剂盒，其包括薄层板和展开剂，其中该展开剂为三氯甲烷-甲醇-水，该薄层板为硅胶G薄层板。
进一步地，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(1～20):(1～10):(0.1～5)。
进一步地，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(5～15):(3～7):(0.1～2)。
进一步地，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(9～11):(4.5～5.5):(0.5～1.5)。
进一步地，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为约10:约5:约1。
本发明的有益效果：
本发明的薄层鉴别方法展开剂选择适当、鉴别效率高、鉴别精度高并且操作方便，通过对于包含当归的中药组合物中的药材黄柏的检测，为包含当归的中药组合物的质量控制和药效物质基础的深入研究提供了理论依据。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本发明要求保护的范围。
图1为本发明的包含当归的中药组合物粉末的制备方法流程图。
图2为供试品制备方法一考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液1；2、供试品溶液2；3、黄柏对照药材1；4、黄柏对照药材2；5、供试品溶液3；6、供试品溶液4；7、黄柏对照药材3；8、黄柏对照药材4。
图3为供试品制备方法二考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液；2、黄柏对照药材；3、阴性样品样品溶液，其中，a为供试品溶液3、黄柏对照药材溶液3与阴性样品溶液3的结果，b为供试品溶液5、黄柏对照药材溶液5与阴性样品溶液5的结果。
图4为不同提取方式考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3；2、黄柏对照药材3；3、供试品溶液6。
图5为不同展开剂考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3；2、黄柏对照药材3；a为以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂；b为以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂。
图6为不同显色方式考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3；2、黄柏对照药材3；3、阴性样品溶液3；其中，a为日光下检视；b为紫外光灯(365nm)下检视；c为稀碘化秘钾试液显色。
图7为点样量考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3---1μl；2、供试品溶液3---3μl；3、供试品溶液3---5μl；4、黄柏对照药材溶液3---1μl；5、黄柏对照药材溶液3---3μl；6、黄柏对照药材溶液3---5μl。
图8为专属性考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3；2、黄柏对照药材3；3、阴性样品溶液3。
图9为不同温度考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3；2、黄柏对照药材3；其中，a为高温(35℃)；b为室温(25℃)；c为低温(5℃)。
图10为不同湿度考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3；2、黄柏对照药材3；其中，a为低湿(相对湿度42％)；b为高湿(相对湿度88％)。
图11为不同厂家薄层板考察TLC结果示意图。其中，从左至右：1、供试品溶液3；2、黄柏对照药材3；其中，a为青岛海洋硅胶G薄层板；b为青岛胜海硅胶G薄层板。
图12为20批中的前10批包含当归的中药组合物物质基准对应实物(冻干粉)黄柏薄层色谱图。其中，从左至右：1、DGLHT-1-1；2、DGLHT-1-2；3、DGLHT-2-1；4、DGLHT-2-2；5、DGLHT-3-1；6、DGLHT-3-2；7、DGLHT-4-1；8、DGLHT-4-2；9、DGLHT-5-1；10、DGLHT-5-2；S、黄柏对照药材3。
图13为20批中的后10批包含当归的中药组合物物质基准对应实物(冻干粉)黄柏薄层色谱图。其中，从左至右：1、DGLHT-6-1；2、DGLHT-6-2；3、DGLHT-7-1；4、DGLHT-7-2；5、DGLHT-8-1；6、DGLHT-8-2；7、DGLHT-9-1；8、DGLHT-9-2；9、DGLHT-10-1；10、DGLHT-10-2；S、黄柏对照药材3。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另外说明，本文所用的所有技术和科学术语和缩略语具有本发明领域或该术语应用领域中普通技术人员通常所理解的含义。虽然本发明实施过程中可使用类似于或等价于本文公开的那些的任何方法、条件、物质或材料，但本文描述了优选的方法、条件物质或材料。
本发明有预期地涵盖所有的选择余地、变体和同等物，这些可能如权利要求所定义的那样包含在现有发明领域。所属领域的技术人员将识别许多类似或等同于在此所描述的方法和物质，这些可以应用于本发明的实践中去。本发明绝非限于方法和物质的描述。
说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”，“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。
在本发明中，术语“包括”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
正如背景技术部分所描述的，现有技术中未见包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法的相关报道。为了解决上述问题，本发明提供了一种包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法，该薄层鉴别方法包括如下步骤：
(1)将包含当归的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少黄柏的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及
(2)对该对供试品溶液、该阴性样品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
其中，在该薄层色谱鉴别分析的步骤中，采用三氯甲烷-甲醇-水作为展开剂，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(1～20):(1～10):(0.1～5)。
在本发明中，体积之比、温度、湿度、速率、时间、浓度、点样量、当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1～20”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1～20”、“1～19”、“1～18”、“1～17”、“1～16”、“1～15”、“1～14”、“1～13”、“1～12”、“1～11”、“1～10”、“1～9”、“1～8”、“1～7”、“1～6”、“1～5”、“1～4”、“1～3”、“1～2”、“2～10”、“2～9”、“2～8”、“2～7”、“2～6”、“2～5”、“2～4”、“2～3”、“3～10”、“3～9”、“3～8”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
在一种优选的实施方式中，该包含当归的中药组合物包含当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪。
在一种优选的实施方式中，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(10～20)。
在一种优选的实施方式中，该当归、该生地黄、该熟地黄、该黄柏、该黄连、该黄芩与该黄芪之间的质量之比为约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约7.74:约15.48。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约7.74”包括7.74的±5％，或从7.353到8.127；“约15.48”包括15.48的±5％，或从14.706到16.254。
在一种优选的实施方式中，该包含当归的中药组合物粉末的制备方法包括：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪，破碎至粗颗粒，加水浸泡，武火煎煮至沸，文火煎煮一段时间，得到煎煮液；以及将该煎煮液趁热过滤取滤液，减压浓缩至在15～25℃下相对密度为1.05～1.10的浸膏，预冻或速冻之后将该浸膏在冷冻干燥机中干燥，粉碎，过筛，混匀，得到该包含当归的中药组合物粉末。
在一种优选的实施方式中，该粗颗粒的直径为3～6mm，例如4～5mm。
在一种优选的实施方式中，该水与该该包含当归的中药组合物的体积/质量之比为25～35，例如约29。
在一种优选的实施方式中，该浸泡的时间为10～100min，例如约60min。
在一种优选的实施方式中，该武火煎煮时加盖。
在一种优选的实施方式中，该文火煎煮时不加盖。
在一种优选的实施方式中，该文火煎煮的时间为10～100min，例如约50min。
在一种优选的实施方式中，该趁热过滤的温度为80～85℃。
在一种优选的实施方式中，该过滤为120目尼龙滤布单层过滤。
在一种优选的实施方式中，该滤液与该水的体积之比值为0.2～1，例如约0.5。
在一种优选的实施方式中，在该预冻或速冻之前，将该浸膏置于不锈钢盘中，使其铺料厚度为9～11mm。
在一种优选的实施方式中，该预冻为在≦-18℃冰柜中将该浸膏预冻过夜。
在一种优选的实施方式中，该速冻为使用液氮将该浸膏速冻至内无湿心。
在一种优选的实施方式中，该减压浓缩的温度不高于60℃。
在一种优选的实施方式中，该减压浓缩的真空度为-0.085～-0.099Mpa。
在一种优选的实施方式中，该冷冻干燥的冷阱温度不高于-40℃。
在一种优选的实施方式中，该冷冻干燥的真空度不高于100Pa。
在一种优选的实施方式中，该冷冻干燥至水分不高于8％。
在一种优选的实施方式中，该筛为三号筛。
在一种优选的实施方式中，该供试品溶液的制备方法包括：称取适量的包含当归的中药组合物粉末，加入第一溶剂进行溶解，使用第二溶剂进行提取，得到第一溶液；将该第一溶液使用第三溶剂进行提取，得到第二溶液，将该第二溶液进行蒸干，得到残渣；以及在该残渣中加入第四溶剂进行溶解，得到该供试品溶液。
在一种优选的实施方式中，该对照药材溶液的制备方法包括：称取适量的对照药材，使用第二溶剂进行处理，过滤取滤液，将该滤液使用第三溶剂进行提取，将所得溶液蒸干，得到残渣；以及在该残渣中加入第四溶剂进行溶解，得到该对照药材溶液。
在一种优选的实施方式中，该阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少黄柏的中药组合物粉末，之后的步骤与该供试品溶液的制备方法相同。
在一种优选的实施方式中，该缺少黄柏的中药组合物粉末通过如下方法进行制备：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄连、黄芩和黄芪，之后的步骤与该包含当归的中药组合物粉末的制备方法相同。
在一种优选的实施方式中，该包含当归的中药组合物与该第一溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～50)，例如约1:约30。
在一种优选的实施方式中，该包含当归的中药组合物与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～50)，例如约1:约20。
在一种优选的实施方式中，该包含当归的中药组合物与该第三溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(0.1～50)，例如约1:约20。
在一种优选的实施方式中，该包含当归的中药组合物与该第四溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(0.1～5)，例如约1:约1。
在一种优选的实施方式中，该第一溶剂为水。
在一种优选的实施方式中，该第二溶剂为水饱和正丁醇。
在一种优选的实施方式中，该提取的方式为振摇提取、超声提取和/或回流提取，例如振摇提取。
在一种优选的实施方式中，该振摇提取的次数为1～5次，例如2次。
在一种优选的实施方式中，该第三溶剂为氨试液。
在一种优选的实施方式中，该第四溶剂为醇，例如甲醇。
在一种优选的实施方式中，该对照药材与该第二溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～30)，例如约0.2:约20。
在一种优选的实施方式中，该对照药材与该第三溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(1～30)，例如约0.2:约20。
在一种优选的实施方式中，该对照药材与该第四溶剂的质量/体积(g/ml)之比为(0.1～5):(0.1～5)，例如约0.2:约1。
在一种优选的实施方式中，该处理的方式为超声处理。
在一种优选的实施方式中，该超声处理的时间为10～60min，例如约30min。
在一种优选的实施方式中，该供试品溶液的点样量为0.5～10μl，例如约3μl。
在一种优选的实施方式中，该对照药材溶液的点样量为0.5～10μl，例如约3μl。
在一种优选的实施方式中，该阴性样品溶液的点样量为0.5～10μl，例如约3μl。
在一种优选的实施方式中，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(5～15):(3～7):(0.1～2)。
在一种优选的实施方式中，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(9～11):(4.5～5.5):(0.5～1.5)。
在一种优选的实施方式中，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为约10:约5:约1。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的展开为将薄层板置于氨试液饱和10～30min例如约20min的展开缸内展开。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的显色方式为：将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以碘化铋钾试液进行显色。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的温度条件为5℃～25℃。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的湿度条件为42％～88％。
在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的展距条件为8～18cm，例如约10cm。
在一种优选的实施方式中，该薄层板为硅胶G薄层板。
在一种优选的实施方式中，该硅胶G薄层板为青岛海洋硅胶G薄层板或青岛胜海硅胶G薄层板。
在一种优选的实施方式中，该对照药材为黄柏对照药材。
在一种优选的实施方式中，该薄层鉴别的标准包括：查看薄层板在与黄柏对照药材相应位置上，是否显示出相同颜色的特征斑点，以及阴性样品是否有干扰；如果该薄层板具有该特征斑点且该阴性样品无干扰，则在所检测的包含当归的中药组合物中含有黄柏药材。
根据本发明的另一个方面，提供了一种上述薄层鉴别方法在鉴别包含当归的中药组合物中的药材黄柏中的用途。
根据本发明的另一个方面，提供了一种用于鉴别包含当归的中药组合物中的药材黄柏的试剂盒，其包括薄层板和展开剂，其中该展开剂为三氯甲烷-甲醇-水，该薄层板为硅胶G薄层板。
在一种优选的实施方式中，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(1～20):(1～10):(0.1～5)。
在一种优选的实施方式中，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(5～15):(3～7):(0.1～2)。
在一种优选的实施方式中，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为(9～11):(4.5～5.5):(0.5～1.5)。
在一种优选的实施方式中，该三氯甲烷、该甲醇与该水之间的体积之比为约10:约5:约1。
在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约29”包括29的±5％，或从27.55到30.45；“约60”包括60的±5％，或从57到63；“约50”包括50的±5％，或从47.5到52.5；“约0.5”包括0.5的±5％，或从0.475到0.525；“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约30”包括30的±5％，或从28.5到31.5；“约20”包括20的±5％，或从19到21；“约0.2”包括0.2的±5％，或从0.19到0.21；“约3”包括3的±5％，或从2.85到3.15；“约10”包括10的±5％，或从9.5到10.5；“约5”包括5的±5％，或从4.75到5.25；“约1”包括1的±5％，或从0.95到1.05；“约20”包括20的±5％，或从19到21。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
实施例
1、仪器与试药
仪器：电子分析天平：JY2002上海浦春；超声清洗机：KQ:500DB型昆山市超声仪器有限公司；紫外仪：ZF:1型上海力晨邦西仪器科技有限公司；超纯水机：AXLK1820-2阿修罗重庆阿修罗科技发展有限公司；电热鼓风干燥箱：G2X:9140MBE上海迅博实业有限公司医疗设备厂；电子恒温水浴锅：HH:S26型金坛市大地自动化仪器厂。试剂：硅胶板(G板，青岛海洋化工有限公司制造规格：100×200mm、20×100mm；厚度：0.20-0.25mm；青岛胜海化工有限公司制造规格：100×200mm、20×100mm；厚度：0.20-0.25mm)；本发明所使用的有机试剂均为分析纯，水为超纯水；对照药材：黄柏对照药材(批号：121510-201606，中国食品药品检定研究院)，包含当归的中药组合物粉末(制备方法如图1所示，以下简称为“本品粉末”)。
包含当归的中药组合物粉末的制备方法描述
【处方量】当归7.74g、生地黄7.74g、熟地黄7.74g、黄柏7.74g、黄连7.74g、黄芩7.74g、黄芪15.48g
【制法】取以上七味(1日剂量)，破碎成直径为4～5mm的粗颗粒，置3L多功能电热煲中，加水1800ml，浸泡60分钟，加盖，武火(220V)煎煮至沸，不加盖，文火(200V)，煎煮50分钟，趁热80～85℃用120目尼龙滤布单层滤过，得滤液约900ml。取滤液，置旋转蒸发仪中减压浓缩(温度不高于60℃，真空度-0.085～-0.099Mpa)，浓缩至相对密度为1.05～1.10(20℃)的浸膏。将浸膏置不锈钢盘中，使铺料厚度为9～11mm，在≦-18℃冰柜中预冻过夜或用液氮速冻至内无湿心，取出，置冷冻干燥机中干燥，冷阱温度≦-40℃，真空度≦100Pa，冷冻干燥至水分≦8.0％，取出，粉碎，过三号筛，混匀，即得。收率范围：22.5％～41.8％。
2、黄柏薄层鉴别方法摸索
根据《中国药典》2015年版一部要求，采用薄层鉴别，以黄柏对照药材作为对照，监测包含当归的中药组合物中的黄柏药材，并对包含当归的中药组合物中黄柏鉴别方法进行了摸索。
①供试品不同制备方法的考察
供试品制备方法一：
取本品粉末1g，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用稀盐酸振摇提取2次，每次20ml，合并酸水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液1；取正丁醇液，蒸干，残渣加1％醋酸甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液2。
另取本品粉末1g，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液3；取正丁醇液，蒸干，残渣加1％醋酸甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液4。
取黄柏对照药材0.2g，加水饱和正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液，用稀盐酸振摇提取2次，每次20ml，合并酸水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为黄柏对照药材溶液1；取正丁醇液，蒸干，残渣加1％醋酸甲醇1ml使溶解，作为黄柏对照药材溶液2。
另取黄柏对照药材0.2g，加水饱和正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为黄柏对照药材溶液3；取正丁醇液，蒸干，残渣加1％醋酸甲醇1ml使溶解，作为黄柏对照药材溶液4。
照薄层色谱法(《中国药典》2015年四部通则0502)试验，吸取以上溶液各各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，置浓氨试液饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
结果表明，供试品溶液1色谱图中在与黄柏对照药材1相应位置上的主斑点拖尾；供试品溶液2色谱图与黄柏对照药材2色谱图中主斑点均较淡，影响分辨；供试品溶液3色谱图中在黄柏对照药材3相应位置上显相同颜色斑点，且斑点清晰与附近斑点分离较好；供试品溶液4色谱图与黄柏对照药材4色谱图中在与其他黄柏对照药材相应位置上主斑点没有显现。综上，择优选择供试品溶液3制备方法进行后续研究。结果如图2所示。
供试品制备方法二：
取本品粉末1g，加1％醋酸甲醇溶液40ml，于60℃超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加1％醋酸甲醇溶液2ml使溶解，即得供试品溶液5。另取黄柏对照药材0.2g，同法制成黄柏对照药材溶液5。再取包含当归的中药组合物缺黄柏阴性冻干粉粉末1g，分别按供试品溶液3与供试品溶液5的制备方法制成阴性样品溶液3与5。
取供试品溶液3、黄柏对照药材溶液3与阴性样品溶液3各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，置浓氨试液饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。另取供试品溶液5、黄柏对照药材溶液5与阴性样品溶液5各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，同法展开。比较供试品不同制备方法对色谱图的影响。
结果表明，供试品溶液5色谱图中在与黄柏对照药材色谱主斑点相应的位置上的斑点非常弱，难以分辨；供试品溶液3色谱图中在与对照药材色谱主斑点相应的位置有相同颜色的斑点，且斑点清晰与附近斑点分离好。故择优选择供试品制备为：用水饱和正丁醇提取，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇使溶解。结果图3所示。
②供试品提取方式考察
对比粉末加水饱和正丁醇超声提取制备与粉末水复溶后振摇提取供试品对色谱图的影响。
取本品粉末1g，加水饱和正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液6。吸取供试品溶液6、供试品溶液3、黄柏对照药材溶液3各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，置用浓氨试液饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
结果表明，供试品溶液6色谱图中在与黄柏对照药材3相应的位置上的主斑点较淡，模糊不清晰；供试品溶液3色谱图中在黄柏对照药材3相应位置上显相同颜色斑点，且斑点清晰与附近斑点分离较好。综上，择优选择供试品制备方法为：取本品粉末1g，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得。结果如图4所示。
③展开剂考察
比较不同展开剂对色谱图的影响。
分别以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)、正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。结果表明，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，斑点分离较好，Rf值适中，故选择三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)作为展开剂，结果如图5所示。
④显色方式的考察
分别于日光、紫外光灯(365nm)下检视、喷以稀碘化秘钾试液显色，比较不同显色方式对色谱图的影响。
结果表明喷以稀碘化秘钾试液显色斑点更为清晰，与附近斑点分离较好，且主斑点阴性无干扰，故选择喷以稀碘化秘钾试液显色。结果如图6所示。
⑤点样量的考察
吸取供试品溶液与黄柏对照药材溶液各1μl、3μl、5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，置氨试液饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化秘钾试液。比较不同点样量对色谱图的影响。
结果表明，供试品与对照药材点样量为1μl时，斑点较淡，当点样量为3μl、5μl时，斑点均较清晰，斑点分离度好，故供试品与对照药材均选择点样量为3μl。结果如图7所示。
⑥专属性的考察
吸取供试品溶液、阴性样品溶液与黄柏对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，置用氨试液饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化秘钾试液。
结果表明，供试品色谱图中在与黄柏对照药材色谱相应的位置上，显5个相同颜色的斑点，阴性样品色谱在相应的位置上只显4个相同颜色的斑点，主斑点阴性无干扰，专属性好。结果如图8所示。
⑦不同温度考察
分别在高温(35℃)、室温(25℃)和低温(5℃)条件下，展开，取出，晾干，喷以稀碘化秘钾试液。
结果表明，在室温(25℃)和低温(5℃)条件下，供试品色谱在与黄柏对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，且主斑点与附近斑点分离效果较好，在高温(35℃)条件下，主斑点有拖尾与附近斑点分离较差，表明温度对该薄层鉴别有影响，但该薄层鉴别方法在温度5℃～25℃耐用性较好。结果如图9所示。
⑧不同湿度考察
分别在低湿(相对湿度42％)和高湿(相对湿度88％)条件下，展开，取出，晾干，喷以稀碘化秘钾试液显色。
结果表明，在低湿(相对湿度42％)和高湿(相对湿度88％)条件下，供试品色谱在与黄柏对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，且主斑点分离较好，Rf值适中，故该薄层鉴别方法湿度在42％～88％耐用性好。结果如图10所示。
⑨不同厂家薄层板考察
分别在两种不同厂家的薄层板上，展开，取出，晾干，喷以稀碘化秘钾试液。
结果表明，两种不同厂家硅胶G薄层板之间未见明显区别，该薄层方法对不同厂家薄层板具有一定的耐用性。结果如图11所示。
3、黄柏薄层鉴别方法总结
确定本发明的包含当归的中药组合物物质基准中黄柏的薄层鉴别方法为：取本品粉末1g，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.20g，加水饱和正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。取本发明的包含当归的中药组合物缺黄柏阴性冻干粉粉末1g，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为阴性样品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，置浓氨试液饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化秘钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4、20批包含当归的中药组合物的黄柏薄层鉴别
表1 20批包含当归的中药组合物物质基准对应实物(冻干粉)性状检测结果表
| 批号 | 性状 |
| DGLHT1-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT1-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT2-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT2-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT3-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT3-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT4-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT4-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT5-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT5-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT6-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT6-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT7-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT7-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT8-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT8-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT9-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT9-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT10-1 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
| DGLHT10-2 | 为棕黄色至黄褐色粉末，气微、味苦。 |
取本品粉末1g，加水30ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.2g，加水饱和正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液，用氨试液振摇提取2次，每次20ml，合并氨水层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年四部通则0502)试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶5∶1)为展开剂，置用浓氨试液饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20批包含当归的中药组合物物质基准对应实物(冻干粉)黄柏薄层色谱如图12和图13所示。
以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (67)
1.一种包含当归的中药组合物中的药材黄柏的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别方法包括如下步骤：
(1)将包含当归的中药组合物进行前处理得到供试品溶液，将缺少黄柏的中药组合物进行前处理得到阴性样品溶液，将对照药材进行前处理得到对照药材溶液；以及
(2)对所述供试品溶液、所述阴性样品溶液和所述对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
其中，所述包含当归的中药组合物包含当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪；
其中，所述供试品溶液的制备方法包括：称取适量的包含当归的中药组合物粉末，加入水进行溶解，使用水饱和正丁醇进行提取，得到第一溶液；将所述第一溶液使用氨试液进行提取，得到第二溶液，将所述第二溶液进行蒸干，得到残渣；以及在所述残渣中加入甲醇进行溶解，得到所述供试品溶液；
其中，在所述薄层色谱鉴别分析的步骤中，采用三氯甲烷-甲醇-水作为展开剂，所述三氯甲烷、所述甲醇与所述水之间的体积之比为(9～11):(4.5～5.5):(0.5～1.5)；
其中，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的显色方式为：将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以碘化铋钾试液进行显色；
其中，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的温度条件为5℃～25℃；
其中，所述薄层板为硅胶G薄层板。
2.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述当归、所述生地黄、所述熟地黄、所述黄柏、所述黄连、所述黄芩与所述黄芪之间的质量之比为(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(1～10):(10～20)。
3.根据权利要求2所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述当归、所述生地黄、所述熟地黄、所述黄柏、所述黄连、所述黄芩与所述黄芪之间的质量之比为(7.353～8.127):(7.353～8.127):(7.353～8.127):(7.353～8.127):(7.353～8.127):(7.353～8.127):(14.706～16.254)。
4.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含当归的中药组合物粉末的制备方法包括：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄柏、黄连、黄芩和黄芪，破碎至粗颗粒，加水浸泡，武火煎煮至沸，文火煎煮一段时间，得到煎煮液；以及将所述煎煮液趁热过滤取滤液，减压浓缩至在15～25℃下相对密度为1.05～1.10的浸膏，预冻或速冻之后将所述浸膏在冷冻干燥机中干燥，粉碎，过筛，混匀，得到所述包含当归的中药组合物粉末。
5.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述粗颗粒的直径为3～6mm。
6.根据权利要求5所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述粗颗粒的直径为4～5mm。
7.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，在所述包含当归的中药组合物粉末的制备方法中，所述水与所述包含当归的中药组合物的体积/质量之比值为25～35ml/g。
8.根据权利要求7所述的薄层鉴别方法，其特征在于，在所述包含当归的中药组合物粉末的制备方法中，所述水与所述包含当归的中药组合物的体积/质量之比值为27.55～30.45ml/g。
9.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述浸泡的时间为10～100min。
10.根据权利要求9所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述浸泡的时间为57～63min。
11.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述武火煎煮时加盖。
12.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述文火煎煮时不加盖。
13.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述文火煎煮的时间为10～100min。
14.根据权利要求13所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述文火煎煮的时间为47.5～52.5min。
15.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述趁热过滤的温度为80～85℃。
16.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述过滤为120目尼龙滤布单层过滤。
17.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述滤液与所述水的体积之比值为0.2～1。
18.根据权利要求17所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述滤液与所述水的体积之比值为0.475～0.525。
19.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，在所述预冻或速冻之前，将所述浸膏置于不锈钢盘中，使其铺料厚度为9～11mm。
20.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述预冻为在≤-18℃冰柜中将所述浸膏预冻过夜。
21.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述速冻为使用液氮将所述浸膏速冻至内无湿心。
22.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述减压浓缩的温度不高于60℃。
23.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述减压浓缩的真空度为-0.085～-0.099Mpa。
24.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述冷冻干燥机的冷阱温度不高于-40℃。
25.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述冷冻干燥机的真空度不高于100Pa。
26.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述冷冻干燥机将所述浸膏冷冻干燥至水分不高于8％。
27.根据权利要求4所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述筛为三号筛。
28.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材溶液的制备方法包括：称取适量的对照药材，使用水饱和正丁醇进行处理，过滤取滤液，将所述滤液使用氨试液进行提取，将所得溶液蒸干，得到残渣；以及在所述残渣中加入甲醇进行溶解，得到所述对照药材溶液。
29.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述阴性样品溶液的制备方法包括：称取适量的缺少黄柏的中药组合物粉末，之后的步骤与所述供试品溶液的制备方法相同。
30.根据权利要求29所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述缺少黄柏的中药组合物粉末通过如下方法进行制备：称取适量的当归、生地黄、熟地黄、黄连、黄芩和黄芪，之后的步骤与所述包含当归的中药组合物粉末的制备方法相同。
31.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，在所述供试品溶液的制备方法中，所述包含当归的中药组合物与所述水的质量/体积之比为(0.1～5)g:(1～50)ml。
32.根据权利要求31所述的薄层鉴别方法，其特征在于，在所述供试品溶液的制备方法中，所述包含当归的中药组合物与所述水的质量/体积之比为(0.95～1.05)g:(28.5～31.5)ml。
33.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含当归的中药组合物与所述水饱和正丁醇的质量/体积之比为(0.1～5)g:(1～50)ml。
34.根据权利要求33所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含当归的中药组合物与所述水饱和正丁醇的质量/体积之比为(0.95～1.05)g:(19～21)ml。
35.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含当归的中药组合物与所述氨试液的质量/体积之比为(0.1～5)g:(0.1～50)ml。
36.根据权利要求35所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含当归的中药组合物与所述氨试液的质量/体积之比为(0.95～1.05)g:(19～21)ml。
37.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含当归的中药组合物与所述甲醇的质量/体积之比为(0.1～5)g:(0.1～5)ml。
38.根据权利要求37所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述包含当归的中药组合物与所述甲醇的质量/体积之比为(0.95～1.05)g:(0.95～1.05)ml。
39.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述提取的方式为振摇提取、超声提取和/或回流提取。
40.根据权利要求39所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述提取的方式为振摇提取。
41.根据权利要求40所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述振摇提取的次数为1～5次。
42.根据权利要求41所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述振摇提取的次数为2次。
43.根据权利要求28所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材与所述水饱和正丁醇的质量/体积之比为(0.1～5)g:(1～30)ml。
44.根据权利要求43所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材与所述水饱和正丁醇的质量/体积之比为(0.19～0.21)g:(19～21)ml。
45.根据权利要求28所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材与所述氨试液的质量/体积之比为(0.1～5)g:(1～30)ml。
46.根据权利要求45所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材与所述氨试液的质量/体积之比为(0.19～0.21)g:(19～21)ml。
47.根据权利要求28所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材与所述甲醇的质量/体积之比为(0.1～5)g:(0.1～5)ml。
48.根据权利要求47所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材与所述甲醇的质量/体积之比为(0.19～0.21)g:(0.95～1.05)ml。
49.根据权利要求28所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述处理的方式为超声处理。
50.根据权利要求49所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述超声处理的时间为10～60min。
51.根据权利要求50所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述超声处理的时间为28.5～31.5min。
52.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述供试品溶液的点样量为0.5～10μl。
53.根据权利要求52所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述供试品溶液的点样量为2.85～3.15μl。
54.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材溶液的点样量为0.5～10μl。
55.根据权利要求54所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材溶液的点样量为2.85～3.15μl。
56.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述阴性样品溶液的点样量为0.5～10μl。
57.根据权利要求56所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述阴性样品溶液的点样量为2.85～3.15μl。
58.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述三氯甲烷、所述甲醇与所述水之间的体积之比为(9.5～10.5):(4.75～5.25):(0.95～1.05)。
59.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的展开为将薄层板置于氨试液饱和10～30min的展开缸内展开。
60.根据权利要求59所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述氨试液饱和的时间为19～21min。
61.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的湿度条件为42％～88％。
62.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的展距条件为8～18cm。
63.根据权利要求62所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别分析的步骤中的展距条件为9.5～10.5cm。
64.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述硅胶G薄层板为青岛海洋硅胶G薄层板或青岛胜海硅胶G薄层板。
65.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照药材为黄柏对照药材。
66.根据权利要求1所述的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别的标准包括：查看薄层板在与黄柏对照药材相应位置上，是否显示出相同颜色的特征斑点，以及阴性样品是否有干扰；如果所述薄层板具有所述特征斑点且所述阴性样品无干扰，则在所检测的包含当归的中药组合物中含有黄柏药材。
67.根据权利要求1至66中任一项所述的薄层鉴别方法在鉴别包含当归的中药组合物中的药材黄柏中的用途。
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