CN110927320B - 田七跌打风湿软膏的鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种田七跌打风湿软膏的鉴别方法，所述的鉴别方法包括采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏、大黄、独活、白芷、甘草。发明人经常长期研究的基础上，挑选田七跌打风湿软膏方剂中的黄柏、大黄、独活、白芷、甘草作为质量鉴别指标，通过薄层层析进行鉴别，能够很好的反应整个方剂的质量。

Description

田七跌打风湿软膏的鉴别方法

技术领域

本发明涉及中药检测技术领域，特别是涉及一种田七跌打风湿软膏的鉴别方法。

背景技术

田七跌打风湿软膏为中药复方制剂，由三七、当归尾、骨碎补、续断、桃仁、独活、威灵仙等25味中药组成，具有活血祛瘀、舒筋活络、消肿止痛、祛风除湿之效，主治软组织损伤、风湿腰痛等病。该产品组方合理，疗效确切。

作为一种重要的中药复方制剂，田七跌打风湿软膏质量检测非常重要。但是目前对田七跌打风湿软膏的质量检测标准仅为载于部颁标准中中药成方制剂第六册(WS3-B-1114-92)的标准，该标准仅能检测田七跌打风湿软膏中的甘草、大黄，这对于方剂复杂的田七跌打风湿软膏的质量鉴别是不够的，不利于质量把控。

因此，亟待提供一种能够全面反映田七跌打风湿软膏质量的检测方法。

发明内容

基于此，本发明的主要目的是提供一种田七跌打风湿软膏的质量检测方法。该检测方法以田七跌打风湿软膏方剂中的黄柏、大黄、独活、白芷、甘草作为鉴别指标，通过薄层层析进行鉴别，能够很好的反应整个方剂的质量。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种田七跌打风湿软膏的质量检测方法，所述的质量检测方法包括采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏、大黄、独活、白芷、甘草。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取黄柏对照药材粉末，加醋酸-甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，所得残渣加甲醇溶解，制成黄柏对照药材溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成盐酸小檗碱对照品溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏，加二氯甲烷，加热回流至溶解；分取水层，加盐酸，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层层析：取所述黄柏对照药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取黄柏对照药材粉末0.08-0.12g，加体积分数为0.5-1.5％的醋酸-甲醇15-25ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，制成黄柏对照药材溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.8mg的盐酸小檗碱对照品溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏5-15g，加二氯甲烷20-30ml，加热回流至溶解；分取水层，加0.5-1.5mol/L盐酸20-30ml，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层层析：取所述黄柏对照药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸体积比(2-8)：(2-8)：(0.5-2.5)为展开剂，展开，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取黄柏对照药材粉末0.08-0.12g，加体积分数为0.7-1.2％的醋酸-甲醇19-23ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，所得残渣加甲醇1.7-2.2ml使溶解，制成黄柏对照药材溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.4-0.7mg的盐酸小檗碱对照品溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏8-13g，加二氯甲烷23-26ml，加热回流至溶解；分取水层，加0.9-1.1mol/L盐酸23-26ml，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇1.7-2.2ml使溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层层析：取所述黄柏对照药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸体积比(4-6)：(4.5-5.5)：(1.8-2.3)为展开剂，展开，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的大黄包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取大黄对照药材粉末，加甲醇浸泡，滤过取滤液，蒸干，所得残渣加水溶解，再加盐酸，加热回流，冷却，用乙醚萃取，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，制作大黄对照药材溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏，加二氯甲烷，加热回流至溶解；分取水层，加盐酸，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：吸取所述大黄对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的大黄包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取大黄对照药材粉末0.08-0.12g，加甲醇15-25ml浸泡，滤过取续滤液1-10ml，蒸干，所得残渣加水5-15ml溶解，再加盐酸0.5-1.5ml，加热回流，冷却，用乙醚萃取，蒸干，所得残渣加甲醇0.5-1.5ml溶解，制作大黄对照药材溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏5-15g，加二氯甲烷20-30ml，加热回流至溶解；分取水层，加0.5-1.5mol/L盐酸20-30ml，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：吸取所述大黄对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积比为(10-16)：(4-7)：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的大黄包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取大黄对照药材粉末0.08-0.12g，加甲醇15-25ml浸泡，滤过取续滤液4-7ml，蒸干，所得残渣加水9-11ml溶解，再加盐酸0.9-1.1ml，加热回流，冷却，用乙醚萃取，蒸干，所得残渣加甲醇0.9-1.1ml溶解，制作大黄对照药材溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏8-13g，加二氯甲烷23-26ml，加热回流至溶解；分取水层，加0.9-1.1mol/L盐酸23-26ml，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇1.7-2.2ml使溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：吸取所述大黄对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积比为(14-16)：(5-6)：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的独活、白芷包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取白芷对照药材粉末，加乙醇，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加甲醇溶解，作为白芷对照药材溶液；取独活对照药材粉，加甲醇，超声处理，滤过，取滤液作为独活对照药材溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏，加乙醇，加热回流至溶解，冷却，离心，取上清液蒸干，所得残渣加水，弃去所得水溶物油层之后所得下层调节pH值至碱性，加二氯甲烷萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：吸取所述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的独活、白芷包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取白芷对照药材粉末0.1-0.8g，加乙醇20-30ml，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加0.5-1.5ml甲醇溶解，作为白芷对照药材溶液；取独活对照药材粉末0.5-1.5g，加甲醇5-15ml，超声处理，滤过，取滤液作为独活对照药材溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏20-30g，加乙醇70-80ml，加热回流至溶解，冷却，离心，取上清液蒸干，所得残渣加水25-35ml，弃去所得水溶物油层之后所得下层调节pH值至12-13，加二氯甲烷萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：吸取所述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇体积比为(15-25):1为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的独活、白芷包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取白芷对照药材粉末0.1-0.8g，加乙醇24-26ml，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加0.9-1.1ml甲醇溶解，作为白芷对照药材溶液；取独活对照药材粉末0.9-1.1g，加甲醇9-12ml，超声处理，滤过，取滤液，作为独活对照药材溶液；

(2)供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏23-25g，加乙醇73-77ml，加热回流至溶解，冷却，离心，取上清液蒸干，所得残渣加水28-32ml，弃去所得水溶物油层之后所得下层调节pH值至12-13，加二氯甲烷萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加甲醇1.9-2.2ml溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：吸取所述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇体积比为(18-22):1为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的甘草包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取甘草对照药材粉末，加甲醇，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加水溶解；加正丁醇萃取，所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为酸性；再用乙酸乙酯萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加乙醇溶解，过中性氧化铝柱，依次用乙醇、乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇溶液的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，作为甘草对照药材溶液；取甘草苷对照品，加甲醇制成甘草苷对照品溶液；

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏，加水、二氯甲烷，加热回流溶解；分取水层，加石油醚，加热回流；分取水层，用水饱和的正丁醇萃取；所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为酸性；再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液蒸干，所得残渣加乙醇溶解，所得溶液用乙醇溶解，过中性氧化铝柱，再依次用乙醇、乙醇溶液洗脱，收集用所述乙醇溶液洗脱的洗脱液，蒸干，加甲醇溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：分别吸取所述甘草苷对照品溶液、甘草对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液显色，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的甘草包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取甘草对照药材粉末0.3-0.8g，加甲醇25-35ml，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加水10-20ml溶解；加正丁醇萃取，所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；再用乙酸乙酯萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱，依次用乙醇25-35ml、体积分数为65-75％乙醇溶液35-45ml洗脱，收集所述体积分数为65-75％乙醇溶液的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml溶解，作为甘草对照药材溶液；取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.8mg的甘草苷对照品溶液；

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏10-15g，加水5-15ml、二氯甲烷20-30ml，加热回流溶解；分取水层，加石油醚20-30ml，加热回流；分取水层，用水饱和的正丁醇萃取；所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液蒸干，所得残渣加乙醇溶解，所得溶液用5-10ml乙醇溶解，过中性氧化铝柱，再依次用25-35ml乙醇、35-45ml 65-75％乙醇溶液洗脱，收集所述用65-75％乙醇溶液洗脱的洗脱液，蒸干，加1.5-2.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：分别吸取所述甘草苷对照品溶液、甘草对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水体积比为(14-17)：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)：(1.5-2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液显色，检视。

在其中一些实施例中，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的甘草包括如下步骤：

(1)对照品溶液制备：取甘草对照药材粉末0.3-0.8g，加甲醇28-33ml，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加水12-16ml溶解；加正丁醇萃取，所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；乙酸乙酯萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱，依次用乙醇29-33ml、体积分数为68-72％乙醇溶液38-43ml洗脱，收集所述体积分数为68-72％乙醇溶液的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml溶解，作为甘草对照药材溶液；取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.8mg的甘草苷对照品溶液；

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏12-13g，加水8-12ml、二氯甲烷23-28ml，加热回流溶解；分取水层，加石油醚23-28ml，加热回流；分取水层，用水饱和的正丁醇萃取；所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液蒸干，所得残渣加乙醇溶解，所得溶液用5-10ml乙醇溶解，过中性氧化铝柱，再依次用28-32ml乙醇、38-43ml 68-72％乙醇溶液洗脱，收集所述用68-72％乙醇溶液洗脱的洗脱液，蒸干，加1.5-2.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

(3)薄层色谱：分别吸取所述甘草苷对照品溶液、甘草对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水体积比为(14-15)：(1-1.1)：(0.9-1)：(1.9-2.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液显色，检视。

与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：

本申请以田七跌打风湿软膏方剂中的黄柏、大黄、独活、白芷、甘草作为质量鉴别指标，通过薄层层析进行鉴别，能够很好的反映整个方剂的质量。

本申请分别对黄柏、大黄、独活、白芷、甘草进行鉴别时，通过对供试品溶液、展开剂配方的综合调整，供试品成分能够很好的得到提取并很好的在层析板上将不同成分展开，显斑清晰并且斑点对应性好，鉴别准确。而且还提升了该检测方法的耐用性，克服了常规薄层层析效果通常受到层析板种类、温度、适度等影响的弊端，也避免了其他药材干扰。

附图说明

图1、田七跌打风湿软膏中黄柏薄层色谱检测图。

图2、田七跌打风湿软膏中黄柏薄层色谱法的耐用性检测结果图。

图3、田七跌打风湿软膏中大黄薄层色谱检测图。

图4、图5、田七跌打风湿软膏中大黄薄层色谱法的耐用性检测结果图。

图6、田七跌打风湿软膏中独活、白芷薄层色谱检测图。

图7、田七跌打风湿软膏中独活、白芷薄层色谱法的耐用性检测结果图。

图8、田七跌打风湿软膏中甘草薄层色谱检测图。

图9、田七跌打风湿软膏中甘草薄层色谱法的耐用性检测结果图。

图10、对比例1所得薄层色谱检测图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

实施例1

本实施例提供一种田七跌打风湿软膏的质量检测方法，该质量检测方法包括如下步骤：

第一、黄柏的鉴别

(1)对照品溶液制备：

取黄柏对照药材粉末0.1g，加1％(v/v)的醋酸-甲醇20ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成黄柏对照药材溶液。

取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏10g，加二氯甲烷25ml，加热回流至溶解；分取水层，加1mol/L盐酸25ml，加热回流20min，冷却；加二氯甲烷萃取2次，每次20ml，合并二氯甲烷液，蒸干溶剂；残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)空白对照页的制备：

按照处方和工艺制备不含黄柏的样品(不含黄柏，但其他成分与供试品相同)，取该样品按照供试品溶液制备方法制备。

(4)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取黄柏对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl、供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(体积比5:5:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品溶液色谱中，在与黄柏对照药材溶液及对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，空白对照无干扰。具体请参见图1，图中：1、盐酸小檗碱对照品溶液，2、黄柏对照药材溶液，3、黄柏空白对照溶液，4、供试品溶液(180202)，5、供试品溶液(180305)，6、供试品溶液(180312)。

上述黄柏鉴别的耐用性试验(结果见图2)包括：

(1)不同的薄层板：采用青岛海洋化工厂分厂、青岛胜海精细硅胶化工有限公司和自制的硅胶G薄层板，分别按薄层鉴别方法，展开，观察各薄层板对软膏中黄柏薄层鉴别的影响，结果分别见图2中A、B、C。结果：不同厂家及自制薄层板对黄柏的薄层鉴别无影响。

(2)高湿实验：将氯化钠饱和水溶液(相对湿度为75％)，置于干燥器底部，放置过夜，作为高湿环境，将展开缸敞口置于高湿环境中，平衡约2小时，选用自制的薄层板，进行软膏剂中黄柏薄层鉴别，结果见图2中D。结果：在高湿条件下可检出黄柏，说明高湿对黄柏薄层鉴别无明显影响。

(3)低温实验

将放有适量展开剂的展开缸置于冰箱中，预平衡30分钟，选用自制的薄层板，进行软膏剂中黄柏薄层鉴别，结果见图2中E。结果：在低温条件下可检出黄柏，说明低温对黄柏薄层鉴别无明显影响。图2A、2B、2C、2D、2E中，自左至右依次是盐酸小檗碱对照、黄柏对照药材、供试品溶液180202、供试品溶液180305、供试品溶液180312。

第二、大黄的鉴别

(1)对照品溶液制备：

取大黄对照药材粉末0.1g，加甲醇20ml，浸泡1h，滤过，取续滤液5ml，蒸干，残渣加水10ml溶解，再加盐酸(质量浓度为36-38％)1ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏10g，加二氯甲烷25ml，加热回流至溶解；分取水层，加1mol/L盐酸25ml，加热回流20min，冷却；加二氯甲烷萃取2次，每次20ml，合并二氯甲烷液，蒸干溶剂；残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)空白对照溶液制备：按照处方和工艺制备不含大黄的样品(不含大黄，但其他成分与供试品相同)，取该样品按照供试品溶液制备方法制备。

(4)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取上述大黄对照药材溶液5μl、供试品溶液10μl、空白对照溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(体积比15:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，结果见图3。图3中左侧是紫外光鉴别图，右侧是氨蒸气熏蒸所得鉴别图。图中，从左至右依次是：大黄对照药材、空白对照、供试品溶液180202、供试品溶液180305、供试品溶液180312。

上述大黄的鉴别的耐用性试验包括不同的薄层板、高湿实验、低温实验，同上述“第一、黄柏的鉴别”部分的耐用性试验。结果参见图4、图5。图4中，A、B、C采用的薄层板依次为青岛海洋化工厂分厂、青岛胜海精细硅胶化工有限公司和按照常规的方法自制的硅胶G薄层板。图5中，A是高湿环境下所得鉴别图，B是低温环境下所得鉴别图。其中，图4A、4B、4C、5A、5B中左边为紫外光鉴别图、右侧为氨熏鉴别图。紫外光鉴别图、氨熏鉴别图中，自左至右依次是4A大黄对照药材、供试品180202、供试品180305、供试品180312，4B大黄对照药材、供试品180202、供试品180305、供试品180312，4C大黄对照药材、供试品180202、供试品180305、供试品180312，5A大黄对照药材、供试品180202、供试品180305、供试品180312，5B大黄对照药材、供试品180202、供试品180305、供试品180312。其中每个图左边是紫外光鉴别图，右边是氨熏。

第三、独活、白芷鉴别

(1)对照品溶液制备：

白芷对照药材粉末0.5g，加乙醇25ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为白芷对照药材溶液。

取独活对照药材粉末1.0g，加甲醇10ml，超声处理20min，滤过，取续滤液作为独活对照药材溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏25g，加乙醇75ml，加热回流至溶解，冰浴冷却，离心(2500rpm)10min，取上清液蒸至近干，趁热加水30ml，置于分液漏斗，弃去油层之后所得下层用10wt％氢氧化钠溶液调节pH值至12～13，加二氯甲烷萃取2次，每次30ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)空白对照溶液制备：

白芷空白对照溶液的制备：按照处方和工艺制备不含白芷的样品，取该样品按照供试品溶液制备方法制备。

独活空白对照溶液的制备：按照处方和工艺制备不含独活的样品，取该样品按照供试品溶液制备方法制备。

(4)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取上述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(20:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，空白无干扰。薄层图谱见图6。图6中，从左到右依次是：1、白芷对照药材溶液，2、白芷空白对照溶液，3、供试品溶液(180202)，4、供试品溶液(180305)，5、供试品溶液(180312)，6、独活对照药材溶液，7、独活空白对照溶液。

上述白芷、独活的鉴别方法的耐用性试验包括不同的薄层板、高湿实验、低温实验，同上述“第一、黄柏的鉴别”部分的耐用性试验。结果请参见图7。图7中，A、B采用的薄层板分别来自青岛胜海精细硅胶化工有限公司、青岛海洋化工厂分厂，C是高湿环境下所得鉴别图，D是高湿环境下所得鉴别图。图中，自左至右依次为：1、白芷对照药材溶液，2、供试品溶液(180202)，3、供试品溶液(180305)，4、供试品溶液(180312)，5、独活对照药材溶液。通过该结果可知，本发明方法采用不同厂家薄层板对白芷、独活的薄层鉴别无影响，在高湿条件下可检出白芷、独活，说明高湿对白芷、独活薄层鉴别无明显影响。在低温条件下可检出白芷、独活，说明低温对白芷、独活薄层鉴别无明显影响。

第四，甘草鉴别

(1)对照品溶液制备：

取甘草对照药材粉末0.5g，加甲醇30ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml微热使溶解，加正丁醇萃取2次，25ml/次，合并正丁醇液；用氨试液洗涤2次，25ml/次，合并氨洗液，用HCl调至pH值1-2，再用乙酸乙酯萃取2次，25ml/次，合并乙酸乙酯液；蒸干，残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱(5g，内径1.5cm)，依次用乙醇30ml、70％乙醇40ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，，作为甘草对照药材溶液。

取甘草苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏12.5g，精密称定，加水10ml、二氯甲烷25ml，水浴加热回流至软膏溶解，趁热置于分液漏斗中，静置分取水层；再加石油醚(60～90℃)25ml，水浴加热回流10min，再置于分液漏斗中，静置分取水层；用水饱和的正丁醇萃取4次(20ml、20ml、20ml、10ml)，合并正丁醇液；用氨试液洗涤2次，每次30ml，合并氨洗液；用HCl调至pH值1-2，再用乙酸乙酯萃取2次，25ml/次，合并乙酸乙酯液；蒸干，残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱(5g，内径1.5cm)，依次用乙醇30ml、70％乙醇40ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)空白对照溶液的制备：

按照处方和工艺制备不含甘草的样品(与供试品的差别仅是不含有甘草)，取该样品按照供试品溶液制备方法制备。

(4)照薄层色谱法(通则0502)试验：

分别吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液2μl、空白对照溶液4μl、供试品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％(v/v)硫酸乙醇溶液，在80℃加热至斑点显色清晰，于紫外(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，空白无干扰。请参见图8，图中自左至右依次是：1、甘草苷对照品溶液，2、甘草对照药材溶液，3、甘草空白对照溶液，4、供试品溶液(180202)，5、供试品溶液(180305)，6、供试品溶液(180312)。

在甘草的鉴别中，以甘草对照品及甘草对照药材为标准，去除了前后相同颜色荧光斑点干扰，检出甘草斑点，阴性无干扰。

上述甘草的鉴别方法的耐用性试验包括不同的薄层板、高湿实验、低温实验，同上述“第一、黄柏的鉴别”部分的耐用性试验。结果见图9。图中，A、B、C是分别选用青岛胜海精细硅胶化工有限公司、青岛海洋化工厂分厂、按照常规手段自制的薄层板获得的鉴别结果，根据该结果可知不同厂家及自制薄层板对甘草的薄层鉴别无明显影响。D是在高湿条件下获得的鉴别结果，根据该结果可知，在高湿条件下可检出甘草，说明高湿对甘草薄层鉴别无明显影响。E是低温条件下获得的鉴别结果，在低温条件下可检出甘草，说明低温对甘草薄层鉴别无明显影响。图A、图B、图C、图D、图E的每幅图中，自左至右依次是：1、甘草苷对照品溶液，2、甘草对照药材溶液，3、供试品溶液(180202)，4、供试品溶液(180305)，5、供试品溶液(180312)。

本实施例经过对标准改进，黄柏、甘草、白芷、大黄、独活斑点显色明显。

实施例2

本实施例提供一种田七跌打风湿软膏的质量检测方法，该质量检测方法包括如下步骤：

第一、黄柏的鉴别

(1)对照品溶液制备：

取黄柏对照药材粉末0.08g，加0.7％(v/v)的醋酸-甲醇19ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2.2ml使溶解，制成黄柏对照药材溶液。

取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.8mg的对照品溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏13g，加二氯甲烷26ml，加热回流至溶解；分取水层，加1.1mol/L盐酸23ml，加热回流20min，冷却；加二氯甲烷萃取2次，每次20ml，合并二氯甲烷液，蒸干溶剂；残渣加甲醇1.7ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取黄柏对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl、供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(体积比4:4.5:1.8)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品溶液色谱中，在与黄柏对照药材溶液及对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

第二、大黄的鉴别

(1)对照品溶液制备：

取大黄对照药材粉末0.1g，加甲醇15ml，浸泡1h，滤过，取续滤液7ml，蒸干，残渣加水11ml溶解，再加盐酸1.1ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1.1ml使溶解，作为对照药材溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏13g，加二氯甲烷23ml，加热回流至溶解；分取水层，加1.1mol/L盐酸23ml，加热回流20min，冷却；加二氯甲烷萃取2次，每次20ml，合并二氯甲烷液，蒸干溶剂；残渣加甲醇2.2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取上述大黄对照药材溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)-甲酸乙酯-甲酸(体积比16:5:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。

第三、独活、白芷鉴别

(1)对照品溶液制备：

白芷对照药材粉末0.5g，加乙醇24ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1.1ml使溶解，作为白芷对照药材溶液。

取独活对照药材粉末0.9g，加甲醇12ml，超声处理20min，滤过，取续滤液作为独活对照药材溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏23g，加乙醇73ml，加热回流至溶解，冰浴冷却，离心(2500rpm)10min，取上清液蒸至近干，趁热加水28ml，置于分液漏斗，弃去油层之后所得下层用10wt％氢氧化钠溶液调节pH值至12～13，加二氯甲烷萃取2次，每次30ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2.2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取上述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(18:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

第四，甘草鉴别

(1)对照品溶液制备：

取甘草对照药材粉末0.5g，加甲醇28ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水12ml微热使溶解，加正丁醇萃取2次，25ml/次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，25ml/次，合并氨洗液，用HCl调至pH值1-2，再用乙酸乙酯萃取2次，25ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱(5g，内径1.5cm)，依次用乙醇29ml、68％乙醇溶液38ml洗脱，收集68％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为甘草对照药材溶液。

取甘草苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的对照品溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏12g，精密称定，加水12ml、二氯甲烷28ml，水浴加热回流至软膏溶解，趁热置于分液漏斗中，静置分取水层；再加石油醚(60～90℃)28ml，水浴加热回流10min，再置于分液漏斗中，静置分取水层；用水饱和的正丁醇萃取4次(20ml、20ml、20ml、10ml)，合并正丁醇液；用氨试液洗涤2次，每次30ml，合并氨洗液；用HCl调至pH值1-2，再用乙酸乙酯萃取2次，25ml/次，合并乙酸乙酯液；蒸干，残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱(5g，内径1.5cm)，依次用乙醇28ml、72％乙醇38ml洗脱，收集72％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(通则0502)试验：

分别吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液2μl、供试品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(14:1.1:1:1.9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％(v/v)硫酸乙醇溶液，在80℃加热至斑点显色清晰，于紫外(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例3

本实施例提供一种田七跌打风湿软膏的质量检测方法，该质量检测方法包括如下步骤：

第一、黄柏的鉴别

(1)对照品溶液制备：

取黄柏对照药材粉末0.1g，加1.5％(v/v)的醋酸-甲醇25ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2.5ml使溶解，制成黄柏对照药材溶液。

取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.7mg的对照品溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏15g，加二氯甲烷30ml，加热回流至溶解；分取水层，加1.5mol/L盐酸20ml，加热回流20min，冷却；加二氯甲烷萃取2次，每次20ml，合并二氯甲烷液，蒸干溶剂；残渣加甲醇1.5ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取黄柏对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl、供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(体积比8:2:2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品溶液色谱中，在与黄柏对照药材溶液及对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

第二、大黄的鉴别

(1)对照品溶液制备：

取大黄对照药材粉末0.1g，加甲醇25ml，浸泡1h，滤过，取续滤液1ml，蒸干，残渣加水10ml溶解，再加盐酸1.5ml，加热回流30min，冷却，用乙醚萃取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1.5ml使溶解，作为对照药材溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏15g，加二氯甲烷30ml，加热回流至溶解；分取水层，加1.5mol/L盐酸20ml，加热回流20min，冷却；加二氯甲烷萃取2次，每次20ml，合并二氯甲烷液，蒸干溶剂；残渣加甲醇2.5ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取上述大黄对照药材溶液5μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(体积比16:4:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。

第三、独活、白芷鉴别

(1)对照品溶液制备：

白芷对照药材粉末0.5g，加乙醇30ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1.5ml使溶解，作为白芷对照药材溶液。

取独活对照药材粉末1.5g，加甲醇15ml，超声处理20min，滤过，取续滤液作为独活对照药材溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏20g，加乙醇80ml，加热回流至溶解，冰浴冷却，离心(2500rpm)10min，取上清液蒸至近干，趁热加水35ml，置于分液漏斗，弃去油层之后所得下层用10wt％氢氧化钠溶液调节pH值至12～13，加二氯甲烷萃取2次，每次30ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2.5ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(中国药典2015版通则0502)试验：

吸取上述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(25:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

第四，甘草鉴别

(1)对照品溶液制备：

取甘草对照药材粉末0.5g，加甲醇35ml，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml微热使溶解，加正丁醇萃取2次，25ml/次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，25ml/次，合并氨洗液，用HCl调至pH值1～2，再用乙酸乙酯萃取2次，25ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇5～10ml溶解，过中性氧化铝柱(5g，内径1.5cm)，依次用乙醇35ml、75％乙醇45ml洗脱，收集75％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2.5ml使溶解，作为甘草对照药材溶液。

取甘草苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.8mg的对照品溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏15g，精密称定，加水15ml、二氯甲烷30ml，水浴加热回流至软膏溶解，趁热置于分液漏斗中，静置分取水层；再加石油醚(60～90℃)30ml，水浴加热回流10min，再置于分液漏斗中，静置分取水层；用水饱和的正丁醇萃取4次(20ml、20ml、20ml、10ml)，合并正丁醇液；用氨试液洗涤2次，每次30ml，合并氨洗液；用HCl调至pH值1-2，再用乙酸乙酯萃取2次，25ml/次，合并乙酸乙酯液；蒸干，残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱(5g，内径1.5cm)，依次用乙醇35ml、65％乙醇45ml洗脱，收集65％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法(通则0502)试验：

分别吸取对照品溶液、甘草对照药材溶液2μl、供试品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1.5:1.5:2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％(v/v)硫酸乙醇溶液，在80℃加热至斑点显色清晰，于紫外(365nm)下检视。

供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

对比例1

本对比例是实施例1的对比例，提供一种田七跌打风湿软膏的质量检测方法，相对于实施例1的主要差别之处包括：

第一、黄柏的鉴别

步骤(3)采用的展开剂配方不同，具体地，本对比例采用的展开剂为正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)。其余步骤同实施例1。

检视结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点，见图10中A，A图中左侧是小檗碱、右侧是供试品。但是，本对比例中对照品斑点与供试品斑点对应不整齐。

第二、大黄鉴别

步骤(2)供试品溶液制备工艺不同，具体地，本对比例的供试品溶液制备包括如下步骤：取田七跌打风湿软膏加入甲醇浸泡1h，二者的体积比为1g:200ml，过滤，取滤液于60-80℃水浴上蒸干，在蒸干后剩余固体中加入水使其完全溶解，再加入盐酸加热回流30min，立即冷却，用乙醚分2次震摇提取，合并两次的乙醚提取物，蒸干，在蒸干后剩余固体中加入三氯甲烷使其完全溶解，作为供试品溶液。其余步骤同实施例1。检视结果：在紫外灯(365nm)照射下，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显不同颜色斑点。氨熏后在可见光下，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点。但对照品和供试品应有5个斑点，供试品和对照品实际只有2个斑点(自下而上第1个及第5个斑点)。结果参见图10中B(紫外光鉴别图)、C(氨熏鉴别图)。B、C中左侧是大黄对照药材、右侧是供试品。

第三、独活、白芷鉴别

(1)对照药材溶液制备：取独活、白芷各1克，分别加乙醇20ml，置水浴上温热约1小时，滤过，滤液蒸干，残渣分别加无水乙醇溶解，滤过，白芷对照药材溶液的调整体积为3.5ml，独活对照药材溶液调整体积为7ml，作为对照药材溶液。

(2)供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏加乙醇50ml搅拌均匀后，置水浴上加热约20分钟，冷却，除去表层上的凝结物，滤过，回收乙醇，残渣加盐酸(1mol/L)20ml溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，加氯仿80ml提取，将氯仿置蒸发皿中，挥干，残渣加无水乙醇2ml溶解，作为供试品溶液。

(3)照薄层色谱法试验

1)吸取供试品溶液6μl、白芷对照品药材溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。检视结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显不同颜色斑点。见图10E，E中左侧为白芷对照药材、右侧为供试品。

2)吸取供试品溶液3μl、独活对照药材溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄板上，以石油醚-甲苯-醋酸乙酯(8:2:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。检视结果：供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显不同颜色斑点。见图10中D，D中左侧为独活对照药材、右侧为供试品。

第四、甘草的鉴别

步骤(1)、步骤(2)照品溶液与供试品溶液的制备是按照如下方法进行的：

(1)取甘草对照药材，加乙醚40ml，加热回流并滤过，弃去醚液，向药渣加甲醇30ml，加热回流并滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照品；

(2)向1.6g田七跌打风湿软膏中加水40ml使溶解，用正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品。其余同实施例1。检视结果：在紫外灯下镜检，无斑点。见图10F，F中左侧为甘草对照药材、右侧为供试品。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种田七跌打风湿软膏的鉴别方法，其特征在于，所述的鉴别方法包括采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏、大黄、独活、白芷、甘草；

采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏包括如下步骤：

（1）对照药材溶液和对照品溶液制备：取黄柏对照药材粉末，加醋酸-甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，所得残渣加甲醇溶解，制成黄柏对照药材溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成盐酸小檗碱对照品溶液；

（2）供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏，加二氯甲烷，加热回流至溶解；分取液相，加盐酸，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层层析：取所述黄柏对照药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸体积比（2-8）：（2-8）：（0.5-2.5）为展开剂，展开，晾干，检视；

采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的大黄包括如下步骤：

（1）对照药材溶液制备：取大黄对照药材粉末，加甲醇浸泡，滤过取滤液，蒸干，所得残渣加水溶解，再加盐酸，加热回流，冷却，用乙醚萃取，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，制作大黄对照药材溶液；

（2）供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏，加二氯甲烷，加热回流至溶解；分取液相，加盐酸，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层色谱：吸取所述大黄对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积比为（10-16）：（4-7）：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视；

采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的独活、白芷包括如下步骤：

（1）对照药材溶液制备：取白芷对照药材粉末，加乙醇，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加甲醇溶解，作为白芷对照药材溶液；取独活对照药材粉，加甲醇，超声处理，滤过，取滤液作为独活对照药材溶液；

（2）供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏，加乙醇，加热回流至溶解，冷却，离心，取上清液蒸干，所得残渣加水，弃去所得水溶物油层之后所得下层调节pH值至碱性，加二氯甲烷萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层色谱：吸取所述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇体积比为（15-25）:1为展开剂，展开，取出，晾干，检视；

采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的甘草包括如下步骤：

（1）对照药材溶液和对照品溶液制备：取甘草对照药材粉末，加甲醇，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加水溶解；加正丁醇萃取，所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为酸性；再用乙酸乙酯萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加乙醇溶解，过中性氧化铝柱，依次用乙醇、乙醇溶液洗脱，收集所述乙醇溶液的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇溶解，作为甘草对照药材溶液；取甘草苷对照品，加甲醇制成甘草苷对照品溶液；

（2）供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏，加水、二氯甲烷，加热回流溶解；分取水层，加石油醚，加热回流；分取水层，用水饱和的正丁醇萃取；所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为酸性；再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液蒸干，所得残渣加乙醇溶解，所得溶液用乙醇溶解，过中性氧化铝柱，再依次用乙醇、乙醇溶液洗脱，收集用所述乙醇溶液洗脱的洗脱液，蒸干，加甲醇溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层色谱：分别吸取所述甘草苷对照品溶液、甘草对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水体积比为（14-17）：（0.5-1.5）：（0.5-1.5）：（1.5-2.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液显色，检视。

2.根据权利要求1所述的田七跌打风湿软膏的鉴别方法，其特征在于，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的黄柏包括如下步骤：

（1）对照药材溶液和对照品溶液制备：取黄柏对照药材粉末0.08-0.12g，加体积分数为0.5-1.5%的醋酸-甲醇15-25ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，制成黄柏对照药材溶液；取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.8mg的盐酸小檗碱对照品溶液；

（2）供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏5-15g，加二氯甲烷20-30ml，加热回流至溶解；分取液相，加0.5-1.5mol/L盐酸20-30ml，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层层析：取所述黄柏对照药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸体积比（2-8）：（2-8）：（0.5-2.5）为展开剂，展开，晾干，检视。

3.根据权利要求1所述的田七跌打风湿软膏的鉴别方法，其特征在于，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的大黄包括如下步骤：

（1）对照药材溶液制备：取大黄对照药材粉末0.08-0.12g，加甲醇15-25ml浸泡，滤过取续滤液1-10ml，蒸干，所得残渣加水5-15ml溶解，再加盐酸0.5-1.5ml，加热回流，冷却，用乙醚萃取，蒸干，所得残渣加甲醇0.5-1.5ml溶解，制作大黄对照药材溶液；

（2）供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏5-15g，加二氯甲烷20-30ml，加热回流至溶解；分取液相，加0.5-1.5mol/L盐酸20-30ml，加热回流、冷却；加二氯甲烷萃取，蒸干二氯甲烷，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml使溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层色谱：吸取所述大黄对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积比为（10-16）：（4-7）：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

4.根据权利要求1所述的田七跌打风湿软膏的鉴别方法，其特征在于，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的独活、白芷包括如下步骤：

（1）对照药材溶液制备：取白芷对照药材粉末0.1-0.8g，加乙醇20-30ml，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加0.5-1.5ml甲醇溶解，作为白芷对照药材溶液；取独活对照药材粉末0.5-1.5g，加甲醇5-15ml，超声处理，滤过，取滤液作为独活对照药材溶液；

（2）供试品溶液制备：取田七跌打风湿软膏20-30g，加乙醇70-80ml，加热回流至溶解，冷却，离心，取上清液蒸干，所得残渣加水25-35ml，弃去所得水溶物油层之后所得下层调节pH值至12-13，加二氯甲烷萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层色谱：吸取所述白芷对照药材溶液、独活对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇体积比为（15-25）:1为展开剂，展开，取出，晾干，检视。

5.根据权利要求1所述的田七跌打风湿软膏的鉴别方法，其特征在于，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的甘草包括如下步骤：

（1）对照药材溶液和对照品溶液制备：取甘草对照药材粉末0.3-0.8g，加甲醇25-35ml，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加水10-20ml溶解；加正丁醇萃取，所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；再用乙酸乙酯萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱，依次用乙醇25-35ml、体积分数为65-75%乙醇溶液35-45ml洗脱，收集所述体积分数为65-75%乙醇溶液的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml溶解，作为甘草对照药材溶液；取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.8mg的甘草苷对照品溶液；

（2）供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏10-15g，加水5-15ml、二氯甲烷20-30ml，加热回流溶解；分取水层，加石油醚20-30ml，加热回流；分取水层，用水饱和的正丁醇萃取；所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液蒸干，所得残渣加乙醇溶解，所得溶液用5-10ml乙醇溶解，过中性氧化铝柱，再依次用25-35ml乙醇、35-45ml 65-75%乙醇溶液洗脱，收集所述用 65-75%乙醇溶液洗脱的洗脱液，蒸干，加1.5-2.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层色谱：分别吸取所述甘草苷对照品溶液、甘草对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水体积比为（14-17）：（0.5-1.5）：（0.5-1.5）：（1.5-2.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液显色，检视。

6.根据权利要求5所述的田七跌打风湿软膏的鉴别方法，其特征在于，采用薄层层析鉴别所述田七跌打风湿软膏中的甘草包括如下步骤：

（1）对照药材溶液和对照品溶液制备：取甘草对照药材粉末0.3-0.8g，加甲醇28-33ml，加热回流，滤过，所得滤液蒸干，所得残渣加水12-16ml溶解；加正丁醇萃取，所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；乙酸乙酯萃取，蒸干所得萃取液，所得残渣加乙醇5-10ml溶解，过中性氧化铝柱，依次用乙醇29-33ml、体积分数为68-72%乙醇溶液38-43ml洗脱，收集所述体积分数为68-72%乙醇溶液的洗脱液，蒸干，所得残渣加甲醇1.5-2.5ml溶解，作为甘草对照药材溶液；取甘草苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.8mg的甘草苷对照品溶液；

（2）供试品溶液制备：

取田七跌打风湿软膏12-13g，加水8-12ml、二氯甲烷23-28ml，加热回流溶解；分取水层，加石油醚23-28ml，加热回流；分取水层，用水饱和的正丁醇萃取；所得萃取液用氨试液洗涤，调节所得洗涤液pH值为1-2；再用乙酸乙酯萃取，所得萃取液蒸干，所得残渣加乙醇溶解，所得溶液用5-10ml乙醇溶解，过中性氧化铝柱，再依次用28-32ml乙醇、38-43ml 68-72%乙醇溶液洗脱，收集所述用 68-72%乙醇溶液洗脱的洗脱液，蒸干，加1.5-2.5ml甲醇溶解，作为供试品溶液；

（3）薄层色谱：分别吸取所述甘草苷对照品溶液、甘草对照药材溶液、供试品溶液，分别点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水体积比为（14-15）：（1-1.1）：（0.9-1）：（1.9-2.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇溶液显色，检视。

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