CN108535399B - 一种妇炎康丸的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种妇炎康丸的检测方法，属于中药制药检测领域。包括丹参、赤芍、当归、黄柏、延胡索的薄层鉴别，苦参中苦参碱、氧化苦参碱总量的含量测定，还包括莪术、土茯苓鉴别方法和盐酸小檗碱含量测定方法，这样增加了十三味中药组方中2个鉴别、1个含量测定，结合原来的1个含量测和5个鉴别使产品质量得到有效控制；能满足生产出优质产品的需要，使产品能确保最佳的治疗效果。

Description

一种妇炎康丸的检测方法
技术领域
本发明属于中药制药检测领域，具体涉及妇炎康丸的检测方法。
背景技术
妇炎康丸是由川楝子231g、延胡索231g、当归385g、丹参385g、香附154g、赤芍231g、三棱231g、莪术231g、土茯苓385g、芡实385g、黄柏231g、苦参231g、山药462g 制成的。
以上十三味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g药粉加炼蜜35～45g，及水泛丸，干燥，制成水蜜丸5280g；或每100g药粉加炼蜜130～150g，制成大蜜丸1000丸，即得。
本品为棕褐色的水蜜丸或深褐色的大蜜丸；味苦，微甘。
功能主治：活血化瘀，软坚散结，清热解毒，消炎镇痛。用于慢性附件炎、盆腔炎、阴道炎、膀胱炎、慢性阑尾炎、尿路感染。
用法与用量：口服，水蜜丸一次5g，大密丸一次1丸，一日2次。
现有妇炎康丸检测方法中有5个鉴别和1个含量测定，其分别是：方中丹参、赤芍、当归、黄柏、延胡索的薄层鉴别，苦参中苦参碱、氧化苦参碱总量的含量测定。
妇炎康丸经多年使用，疗效好，深受广大患者的好评，已成为治疗妇科病的良药。但由于研发时受限于当时生产技术、检测手段等技术水平，制定的检测方法水准低，方中黄柏具有清热燥湿，泻火除蒸等作用，为方中主要药味，没有对其有效成分的检测，使得产品的有效性、安全性不能更好的体现，以致于不能确保产品应有的临床疗效。因此，需要我们在原有的检测方法的基础上，制定有关原料的含量测定和鉴别项目，全面提升产品的质量，确保临床疗效，临床用药安全性。
发明内容
本发明提供一种妇炎康丸的检测方法，以解决目前检测方法中存在的水准低，使得产品的有效性、安全性不能更好的体现，以致于不能确保产品应有的临床疗效的问题。
本发明采取的技术方案是：包括丹参、赤芍、当归、黄柏、延胡索的薄层鉴别，苦参中苦参碱、氧化苦参碱总量的含量测定，还包括如下鉴别方法和含量测定方法：
鉴别(1)、取本品水蜜丸5g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温挥至近干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取莪术对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法、通则0502试验，吸取对照药材溶液4μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯＝93：7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸乙醇溶液(1→10)，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别(2)、取本品水蜜丸2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取土茯苓对照药材1g，加甲醇20ml，同法制得对照药材溶液；再取落新妇苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg 的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法、通则0502试验，吸取对照品溶液4μl、对照药材溶液2μl、供试品溶液4μl，分别点于同一聚酰胺薄膜板上，以36％乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
含量测定(3)盐酸小檗碱照高效液相色谱法、通则0512测定步骤：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.033mol/L磷酸二氢钾＝28：72为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 48μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品水蜜丸10g，粉碎成细粉，过3号筛，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：盐酸＝100：1，溶液25ml，密塞，超声处理，功率250w，频率40kHz，30分钟，放冷，用甲醇：盐酸＝100：1溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每g含黄柏以盐酸小檗碱C20H17NO4·HCl计，不得少于2.00mg。
本发明的有益效果是：增加鉴别、含量项目测定，在鉴别项中增加莪术、土茯苓的鉴别项目，含量测定增加盐酸小檗碱测定，这样增加了十三味中药组方中2个鉴别、1 个含量测定，结合原来的1个含量测和5个鉴别使产品质量得到有效控制；能满足生产出优质产品的需要，使产品能确保最佳的治疗效果。
附图说明
图1是莪术鉴别耐受性试验1薄层图；
图2是莪术鉴别耐受性试验2薄层图；
图3是莪术鉴别耐受性试验3薄层图；
图4是莪术鉴别耐受性试验4薄层图；
图5是土茯苓鉴别耐受性试验1薄层图；
图6是土茯苓鉴别耐受性试验2薄层图；
图7是土茯苓鉴别耐受性试验3薄层图；
图8是盐酸小檗碱紫外吸收光谱图；
图9是盐酸小檗碱标准曲线图；
图10是妇炎康丸对照品HPLC色谱图；
图11是妇炎康丸供试品HPLC色谱图；
图12是妇炎康丸阴性对照HPLC色谱图。
具体实施方式
妇炎康丸是由川楝子231g、延胡索231g、当归385g、丹参385g、香附154g、赤芍231g、三棱231g、莪术231g、土茯苓385g、芡实385g、黄柏231g、苦参231g、山药462g 制成的。
以上十三味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g药粉加炼蜜35～45g，及水泛丸，干燥，制成水蜜丸5280g；或每100g药粉加炼蜜130～150g，制成大蜜丸1000丸，即得。
本品为棕褐色的水蜜丸或深褐色的大蜜丸；味苦，微甘。
包括如下鉴别方法和含量测定方法：
鉴别(1)、取本品水蜜丸5g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温挥至近干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取莪术对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法、通则0502试验，吸取对照药材溶液4μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯＝93：7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸乙醇溶液(1→10)，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别(2)、取本品水蜜丸2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取土茯苓对照药材1g，加甲醇20ml，同法制得对照药材溶液；再取落新妇苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg 的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法、通则0502试验，吸取对照品溶液4μl、对照药材溶液2μl、供试品溶液4μl，分别点于同一聚酰胺薄膜板上，以36％乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
含量测定(3)盐酸小檗碱照高效液相色谱法、通则0512测定步骤：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.033mol/L磷酸二氢钾＝28：72为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 48μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品水蜜丸10g，粉碎成细粉，过3号筛，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：盐酸＝100：1，溶液25ml，密塞，超声处理，功率250w，频率40kHz，30分钟，放冷，用甲醇：盐酸＝100：1溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每g含黄柏以盐酸小檗碱C20H17NO4·HCl计，不得少于2.00mg。
还包括丹参、赤芍、当归、黄柏、延胡索的薄层鉴别，苦参中苦参碱、氧化苦参碱总量的含量测定，具体如下：
丹参鉴别，取本品水蜜丸20g，粉碎；或取大蜜丸45g，剪碎，加乙醚80ml，置具塞锥形瓶中，振摇，放置1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液，另取丹参酮IIA对照品，加乙酸乙酯制每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯(19：1)为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
赤芍鉴别，取本品水蜜丸20g，粉碎；或取大蜜丸45g，剪碎，加甲醇80ml，置具塞锥形瓶中，冷浸30分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液，另取赤芍对照药材0.5g，加甲醇15ml，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸＝40：5：10：0.2为展开剂，展开，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
当归鉴别，取本品水蜜丸20g，粉碎；或取大蜜丸45g，剪碎，加乙醚80ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液，另取当归对照药材1g，加乙醚20ml，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(通则0502) 试验，吸取上述两种溶液各1～2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷：乙酸乙酯＝9：1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
黄柏鉴别，取本品水蜜丸5g，粉碎；或取大蜜丸9g，剪碎，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为供试品溶液，另取黄柏对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙醋：甲醇：异丙醇：浓氨试液＝4：3：1.5： 1.5：0.5为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
延胡索鉴别，取本品水蜜丸30g，粉碎；或取大蜜丸65g，剪碎，加甲醇100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用浓氨试液调节pH值至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(通则0502) 试验，吸取上述三种溶液各2～3μl，分别点于同一以1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正已烷：三氯甲烷：甲醇＝7.5：4：1为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏约5分钟，在空气中挥尽薄层板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
苦参碱、氧化苦参碱含量测定，照高效液相色谱法(通则0512)测定；
色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈：无水乙醇：3％磷酸溶液＝80：10：10为流动相；检测波长为220nm，理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈：无水乙醇＝80：20混合溶液溶解，分别制成每1ml含苦参碱0.1mg，含氧化苦参碱0.2mg 的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品水蜜丸50g，粉碎成细粉，过3号筛，取10g，精密称定；或取本品大蜜丸，剪碎，取10g，精密称定，加硅藻土适量，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷50ml，浓氨试液1ml，密塞，称定重量，放置24小时，超声处理，功率250w，频率40kHz，1小时，放至室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣用乙腈：无水乙醇＝80：20 混合溶液适量分次使溶解并移至10ml量瓶中，加乙腈：无水乙醇＝80：20混合溶液稀释至刻度，摇匀，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品含苦参以苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量计，水蜜丸每 1g不得少于0.50mg，大蜜丸每丸不得少于1.80mg。
下边通过本发明检测方法的研究说明来进一步说明本发明的效果。
为了有效提高成品检测方法，在原检测方法的基础上，经试验研究，增加了莪术和土茯苓薄层色谱鉴别；增加采用高效液相色谱法测定成品中盐酸小檗碱含量，现就增加的莪术和土茯苓的薄层鉴别试验说明如下：
一、鉴别(1)项下为莪术的薄层鉴别
以莪术对照药材为对照，经三批样品及阴性对照的试验观察，结果表明此法重现性好，阴性无干扰，故将此法列入检测方法，进行了薄层色谱鉴别耐受性试验，即在不同条件下进行薄层鉴别，选择四个条件进行试验：
(1)室温环境，自制硅胶G薄层板；
(2)室温环境，青岛海洋化工厂生产的硅胶G预制板；
(3)人工环境：温度10℃，相对湿度40％，手铺硅胶G薄层板；
(4)人工环境：温度30℃，相对湿度75％，手铺硅胶G薄层板；
结果表明莪术薄层色谱鉴别耐受性良好，结果见图1～图4，莪术薄层鉴别试验可采用自制硅胶G薄层板进行操作。
鉴别(2)项下为土茯苓的薄层鉴别
以土茯苓对照药材和落新妇苷对照品为对照，经三批样品及阴性对照的试验观察，结果表明此法重现性好，阴性无干扰，故将此法列入检测法，同时进行了薄层色谱鉴别耐受性试验，即在不同条件下进行薄层鉴别，选择三个条件进行试验：
(1)室温环境，聚酰胺薄膜板；
(2)人工环境：温度10℃，相对湿度40％，聚酰胺薄膜板；
(3)人工环境：温度30℃，相对湿度75％，聚酰胺薄膜板；
结果表明土茯苓薄层色谱鉴别耐受性表现良好，结果见图5～图7，土茯苓薄层鉴别试验可采用聚酰胺薄膜板进行操作。
二、对方中黄柏所含有效成分盐酸小檗碱的含量进行测定，试验方法如下：
妇炎康丸中黄柏具有清热燥湿，泻火除蒸等作用，为方中主要药味，为了提高检测标准，更好控制产品质量，我们拟定采用高效液相色谱法，
1仪器与试药：高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪；检测器： SPD-10A紫外检测器；KQ-250型超声波处理器，盐酸小檗碱对照品；
2色谱条件：色谱柱为安捷伦色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)；以乙腈-0.033mol/L 磷酸二氢钾(28：72)为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
3不同流动相的选择我们在实验中，采用多种流动相进行了考察，曾采用乙腈 -0.033mol/L磷酸二氢钾(30：70)、乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾(29：71)没有取得满意效果，后经摸索采用以乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾(28：72)为流动相，可取得较好分离效果，故采用；
4供试品溶液的制备
4.1提取溶媒考察试验
为选择适宜提取溶媒，采用超声提取方式，对70％乙醇、甲醇及甲醇：盐酸(100：1)溶液三种溶媒的提取效果进行考察，具体操作如下：
4.1.1取本品研细粉末约0.5g，精密称取，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(一)；
4.1.2取本品研细粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40kHz)30分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(二)；
4.1.3取本品研细粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：盐酸(100：1)溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40kHz)30分钟，再称定重量，用甲醇：盐酸(100：1)溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(三)；
4.1.4精密吸取各供试品溶液10μl，按含量测定项下方法操作，测定供试品溶液中盐酸小檗碱含量，测定结果见表1。
表1不同溶媒提取试验结果
Figure GDA0002406664380000081
从表1可知，采用甲醇：盐酸(100：1)溶液作为溶媒，提取液中盐酸小檗碱的含量较高，故选用甲醇：盐酸(100：1)溶液为溶剂制备供试品溶液。
4.2提取方法选择试验
采用超声提取、加热回流提取两种提取方式制备供试品溶液，并对二种方法的提取效果进行考察，具体操作如下：
4.2.1取本品研细粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：盐酸(100：1)溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40kHz)30分钟，再称定重量，用甲醇：盐酸(100：1)溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(一)。
4.2.2取本品研细粉末约0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇：盐酸(100： 1)溶液25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇：盐酸(100： 1)溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液(二)。
4.2.3精密吸取各供试品溶液10μl，按含量测定项下方法操作，测定供试品溶液中盐酸小檗碱含量，测定结果见表2。
表2不同提取方法试验结果
Figure GDA0002406664380000091
从表2可知，采用超声提取和加热回流制得的供试品溶液中盐酸小檗碱含量没有差别，为了节省工时，采用超声提取方法制备供试品溶液。
4.3提取时间考察试验
为了选择适宜的超声提取时间，对不同超声提取时间的提取效果进行了考察，操作如下：取本品研细粉末约0.5g，三份，精密称定，按质量标准方法操作，分别超声处理 (功率250W，频率40kHz)20、30、40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇—盐酸(100： 1)溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，测定盐酸小檗碱的含量，结果见表 3。
表3、不同超声提取时间的比较
Figure GDA0002406664380000092
表3结果表明，超声提取30分钟以上，可使盐酸小檗碱提取完全，为了缩短检测时间，故确定超声提取时间为30分钟。
三、对照品来源及纯度
盐酸小檗碱对照品(110713-201212)购自中国食品药品检定研究院，盐酸小檗碱纯度标定为86.7％。
四、方法学考察
1、盐酸小檗碱检测波长的选择
取浓度为每1ml含48.9μg的盐酸小檗碱对照品溶液，在190～400nm波长范围内测定吸收度，绘制曲线，确定检测波长为265nm，盐酸小檗碱紫外吸收光谱图见图8。
2、线性关系的考察
精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.0489mg的溶液，精密吸取此溶液各2、4、8、12、16、20μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，测定结果见表4。以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图，绘制标准曲线，得回归方程为：y＝1969302.453x+8556.465，r＝0.9999，表明盐酸小檗碱进样量在0.0978～0.978μg 范围内，进样量与峰面积积分值线性关系良好(见图9)。
表4盐酸小檗碱对照品线性考察测定结果
Figure GDA0002406664380000101
3、阴性对照考察
取去黄柏的全处方药味，依制法项下操作，制备阴性样品。取阴性样品0.5g，按含量测定项下“供试品溶液的制备”方法操作，制得阴性对照液，吸取盐酸小檗碱对照品溶液、妇炎康丸供试品溶液及黄柏阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，阴性HPLC图谱中，在与盐酸小檗碱相应的保留时间上没有吸收，表明阴性无干扰，见图10～12。
4、精密度的考察
取本品研细粉末约0.5g，精密称定，制备供试品溶液，精密吸取此溶液10μl，重复进样6次，测定盐酸小檗碱的峰面积，计算RSD值，结果见表5。
表5精密度的考察结果
Figure GDA0002406664380000102
表5试验结果表明，精密度良好。
5、重现性实验
取批号为20160301的妇炎康丸0.5g，6份，精密称定，分别按盐酸小檗碱含量测定项下的方法操作，测定盐酸小檗碱含量，测定结果见表6。
表6重现性试验结果
Figure GDA0002406664380000111
6、供试品溶液稳定性试验
取妇炎康丸供试品溶液(批号：20160301)，于放置0小时、2小时、4小时、6小时、 8小时及24小时，分别进样10μl，测定盐酸小檗碱的峰面积积分值，结果见表7。
表7、供试品溶液稳定性试验结果
Figure GDA0002406664380000112
表7结果表明，供试品溶液至少在24小时内稳定。
7、加样回收率实验
精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(0.988mg/ml)0.6ml，挥干，加入已测知盐酸小檗碱含量的样品约0.25g(批号：20160301，盐酸小檗碱含量：2.374mg/g)，精密称定，按盐酸小檗碱含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，进样10μl，测定峰面积，计算回收率，测定结果见表8，结果表明加样回收率实验良好。
表8、盐酸小檗碱回收率试验测定结果
Figure GDA0002406664380000121
Figure GDA0002406664380000122
五、妇炎康丸中盐酸小檗碱的含量测定
按妇炎康丸质量标准含量测定盐酸小檗碱项下方法操作，制备供试品溶液，测定十批妇炎康丸中盐酸小檗碱含量含量，测定结果见表9。
表9、十批妇炎康丸中盐酸小檗碱测定结果
Figure GDA0002406664380000123
结果表明，妇炎康丸中盐酸小檗碱含量基本稳定，限定妇炎康丸每g含黄柏以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得少于2.00mg。
六、黄柏药材中盐酸小檗碱的含量测定
在实验研究中，我们采用与制剂相同的液相色谱条件，对黄柏药材中盐酸小檗碱含量进行了测定，方法如下：
取三批黄柏药材，粉碎成粗粉，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇：盐酸(100：1)溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40kHz) 30分钟，放冷，用甲醇：盐酸(100：1)溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相，进行测定，结果见表10。
表10、三批黄柏药材中盐酸小檗碱含量测定结果
Figure GDA0002406664380000131
由表10结果表明：三批药材中盐酸小檗碱含量稳定，暂限定黄柏按干燥品计算，含盐小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得少于5.5％。

Claims (1)

1.一种妇炎康丸的检测方法，包括丹参、赤芍、当归、黄柏、延胡索的薄层鉴别，苦参中苦参碱、氧化苦参碱总量的含量测定，其特征在于：还包括如下鉴别方法和含量测定方法：
鉴别(1)、取本品水蜜丸5g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，低温挥至近干，加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取莪术对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液4μl、供试品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯＝93：7为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％的香草醛硫酸乙醇溶液1→10，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
鉴别(2)、取本品水蜜丸2g，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸至近干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取土茯苓对照药材1g，加甲醇20ml，同法制得对照药材溶液；再取落新妇苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液4μl、对照药材溶液2μl、供试品溶液4μl，分别点于同一聚酰胺薄膜板上，以36％乙酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
含量测定(3)、盐酸小檗碱照通则0512高效液相色谱法测定步骤：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.033mol/L磷酸二氢钾＝28：72为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含48μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品水蜜丸10g，粉碎成细粉，过3号筛，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：盐酸＝100：1溶液25ml，密塞，超声处理，功率250w，频率40kHz，30分钟，放冷，用甲醇：盐酸＝100：1溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每g含黄柏以盐酸小檗碱C20H17NO4·HCl计，不得少于2.00mg。
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