CN107045029A - 高效液相色谱测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量的方法 - Google Patents

高效液相色谱测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高效液相色谱测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量的方法，取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加盐酸：甲醇=（1：100）的混合溶液制成1ml含盐酸小檗碱20μg的溶液；供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细后过三号筛，称取0.1g，精密称定，置于塞锥形瓶中，精密加入盐酸：甲醇=（1∶100）混合溶液25 ml，密塞，称定重量，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪。更改为高效液相色谱法，方法简易，数据相对稳定，便于中间品放行。薄层色谱法测定含量繁琐，数据偏差大。

Description

高效液相色谱测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量的方法
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及中药的检测方法，尤其是一种清胃黄连丸的质量控制方法。
背景技术
目前公司的清胃黄连丸在2015年版药典中的含量测定方法为薄层色谱法。薄层色谱法测定含量存在数据重复性差，数据可控性差，含量结果偏差大，出现多余或者不适用的谱图。薄层色谱法测定含量，过程繁琐，结果出具耗时长，导致车间下一步生产等待浪费。所以新研发高效液相色谱测定清胃黄连丸中间品盐酸小檗碱含量的内控检验方法。
清胃黄连丸含量测定液相法的开发，有助于把员工平时工作中的经验实质化，不断提高检验员的素质和检验能力，新的检验方法，能缩短检验周期，减少检验员工作强度，检验结果出具速度快，大大缩短车间的生产等待时间，消除车间的等待浪费，新的方法简单、易操作，因此拥有较强的实用前景。
高效液相色谱法是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
薄层色谱法:系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或通过薄层扫描仪测斑点的吸光度进行含量测定的方法.
高效液相色谱法直接对试样进行分析，主要是测定含量、测定杂质和有关物质，数据稳定、准确。薄层色谱法需要与对照物作对比，虽然方法简单但是准确度、重现性差，检验结果偏差大，现在已经很少使用薄层色谱法。
发明内容
为提供一种能够定量检测药物成分的清胃黄连丸的质量控制方法，本方法具有检测手段简单、检测结果更加准确的特点，本方法采用的技术方案为：
一种高效液相色谱测定盐酸小檗碱含量的方法，
1.色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节PH值至3.0）（25∶75）为流动相，检测波长为345nm， 理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000，分离度应符合规定；分离度≥1.5，信噪比应不小于10；
2.对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加盐酸：甲醇=（1：100）的混合溶液制成1ml含盐酸小檗碱20μg的溶液；
3.供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细后过三号筛，称取 0.1g，精密称定，置于塞锥形瓶中，精密加入盐酸 ：甲醇=（1∶ 100）混合溶液 25 ml，密塞，称定重量，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
4.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得.
本品每1g含黄连按黄柏以盐酸小檗碱（C20H17NO4·HCl）计，不得少于8.0mg。
本实用新型的优点是:1、更改为高效液相色谱法，方法简易，数据相对稳定，便于中间品放行。 2、薄层色谱法测定含量繁琐，耗时长，设备陈旧，数据偏差大。3、减少人员等待时间，提高生产效率。
附图说明
图1为盐酸小檗碱对照品溶液色谱图。
图2为清胃黄连丸样品溶液色谱图。
图3为清胃黄连丸阴性样品溶液色谱图。
具体实施方式
实施例
含量测定方法：按照照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）进行测定。
高效液相色谱法色谱条件与系统适应性试验如下所述。
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节PH值至3.0）（25∶75）为流动相；检测波长为345nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000；分离度≥1.5，灵敏度：信噪比应不小于10。
对照品溶液的制备。
取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加盐酸-甲醇（1：100）的混合溶液制成1ml含盐酸小檗碱20μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备。
取装量差异项下的本品，研细后过三号筛，称取 0.1g ，精密称定，置于塞锥形瓶中，精密加入盐酸 - 甲醇（ 1 ∶ 100 ）混合溶液 25 ml ，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率33kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1g含黄连、黄柏以盐酸小檗碱（C20H17NO4·HCl）计，不得少于8.0mg。
具体实施步骤如下所述。
1.仪器与试剂
1.1.本次实验所用的仪器清单：
仪器名称 编号 规格/型号 生产厂家
电子分析天平 Z-122 JA2003 天津天马衡基仪器有限公司
电子分析天平 Z-013 AG135 瑞士梅特勒托利多
电子分析天平 Z-107 XP-26 Mettlertoledo
高效液相色谱仪 Z-106 U3000 Thremo Fisher
高效液相色谱仪 Z-125 LC-20AT 岛津公司
高效液相色谱仪 Z-080 U3000 Thremo Fisher
薄层扫描仪 Z-151 CD-60 德国迪赛克
1.2. 本次实验所用的试剂试药
名称 批号号 来源
清胃黄连丸 1609001、1612001、1612002 华润三九（枣庄）药业有限公司
阴性样品 ╱ 华润三九（枣庄）药业有限公司
盐酸小檗碱对照品 110713-201212 中国食品药品检定研究院
乙腈 20161228002 天津赛孚瑞科技有限公司
甲醇 20161221001 天津赛孚瑞科技有限公司
磷酸二氢钠 F20110125 国药集团化学试剂有限公司
磷酸 20160506 国药集团化学试剂有限公司
盐酸 151106306H 国药集团化学试剂有限公司
2.方法与结果
2.1 HPLC色谱条件与系统适应性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节PH值至3.0）（25∶75）为流动相；检测波长为345nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000；分离度应符合规定；灵敏度：信噪比应不小于10。
2.2对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加盐酸-甲醇（1：100）的混合溶液制成1ml含盐酸小檗碱20μg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品，研细（过三号筛），取约 0.1g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸 ：甲醇=（ 1 ∶ 100 ）混合溶液 25 ml ，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率33kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4阴性对照溶液的制备 ：取除黄连、黄柏外的其他药材，按样品处方比例及制备工艺制成缺黄连、黄柏的制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
2.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.方法学考察
3.1专属性：吸取对照品溶液、阴性样品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，考察对照品溶液在主峰处并无杂质干扰。
3.2系统适用性
对照品重复性
吸取第一个对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，连续进样5次，考察对照品溶液主色谱峰面积的RSD值，RSD值应≤2.0％。
3.3重复性
由一名检验人员对一批次产品按照2.3项制备方法处理，分别制备6份样品溶液。吸取上述对照品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，分别计算6份供试品含量，结果RSD应≤2.0％。
3.4中间精密度
由两名检验人员分别独立对同三批次产品按照2.3项方法分别进行处理，使用不同的两台仪器进行检验，RSD≤3.0％(相同批次不同检验员在不同仪器上检验的4份结果计算)，三批次均应符合规定。
3.5线性范围
精密称取盐酸小檗碱对照品5mg，置100ml量瓶中，加盐酸-甲醇（1：100）的混合溶液溶解并稀至刻度，摇匀，作为线性储备液；分别精密量取线性储备液2.0ml，4.0ml，6.0ml，8.0ml，10.0ml,置10ml容量瓶中，用盐酸-甲醇（1：100）的混合溶液稀释至刻度，摇匀，作为线性系列溶液。精密量取线性系列溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以平均峰面积与浓度，进行线性回归。(备注：可接受标准为线性方程回归系数R应大于0.999)
3.6准确度（加样回收试验）
在已知含量的样品中加入盐酸小檗碱对照品，按以下操作方法测定，计算加样回收率，回收率范围应92%～105%。
（1）50%回收率：取已知含量的样品0.1g，精密称定，再精密加入盐酸小檗碱对照品0.4mg，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸 - 甲醇（ 1 ∶ 100 ）混合溶液 50 ml ，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率33kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（平行制备两份）
（2）100%回收率：取已知含量的样品0.1g，精密称定，再精密加入盐酸小檗碱对照品0.8mg，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸 - 甲醇（ 1 ∶ 100 ）混合溶液 50 ml ，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率33kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（平行制备两份）
（3）150%回收率：取已知含量的样品0.1g，精密称定，再精密加入盐酸小檗碱对照品1.2mg，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸 - 甲醇（ 1 ∶ 100 ）混合溶液 50 ml ，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率33kHz）45
分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（平行制备两份）
精密量取对照品溶液（10.3）和回收率溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录图谱，根据盐酸小檗碱的加入量和测得量计算回收率。
3.7定量限
移取上述10.6.5对照品最低浓度的稀释溶液适量，不断稀释，精密量取各溶液10µl，分别注入液相色谱仪，如果测得信噪比（S/N）≈10，即为定量限。
3.7耐用性（色谱柱）
吸取上述对照品和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，选择两种不同的品牌的色谱柱分别进样，测得的2份结果含量 RSD≤2.0％。
4 样品含量测定
按供试品溶液制备项下方法分别制得 3 批供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μL，依次进样，测定。计算出盐酸小檗碱的含量。

Claims (2)

1.一种高效液相色谱测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量的方法 ，其特征在于：
(1).色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节PH值至3.0）（25∶75）为流动相，检测波长为345nm，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000，分离度≥1.5，信噪比应不小于10；
（2）.对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加盐酸：甲醇=（1：100）的混合溶液制成1ml含盐酸小檗碱20μg的溶液；
（3）.供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细后过三号筛，称取 0.1g，精密称定，置于塞锥形瓶中，精密加入盐酸 ：甲醇=（1∶ 100）混合溶液 25 ml，密塞，称定重量，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（4）.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，本品每1g含黄连按黄柏以盐酸小檗碱（C20H17NO4·HCl）计，不得少于8.0mg。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱测定清胃黄连丸中盐酸小檗碱含量的方法，其特征在于：步骤3中，超声处理使用的超声波处理器功率为250w，频率为33kHz。
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