CN106596750B - 一种七叶皂苷钠制剂中六种有关物质的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种七叶皂苷钠制剂中六种有关物质的含量测定方法，该方法包括将待测样品用醇稀释后用高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为190～220nm，所述高效液相色谱仪的色谱柱为C8色谱柱，流动相为0.05％磷酸水溶液、正己烷、乙腈的混合液，柱温为25～35℃。本发明所采用的色谱条件分离效果好，出峰时间短，检测结果重现性好，准确度高。采用该方法使七叶皂苷钠制剂的质量更加可控。

Description

一种七叶皂苷钠制剂中六种有关物质的含量测定方法
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及七叶皂苷钠制剂中有关物质的含量测定方法。
背景技术
七叶皂苷是从七叶树科七叶树属植物种子提取得到的总皂苷，属于三萜皂苷类。七叶皂苷的水溶解度较差，为增加其溶解度，常将其制成钠盐。七叶皂苷钠具有抗炎、抗水肿等多种功效，可用于脑水肿、创伤等疾病的治疗。
目前七叶皂苷钠的制剂有注射剂、口服制剂、乳剂、搽剂等，这些制剂的质量标准中，大多仅对总皂苷和七叶皂苷A进行了含量测定，没有对其它皂苷类成分即有关物质进行检测，导致产品的质量控制不严格。
发明内容
本发明的目的是针对上述缺陷，提供一种七叶皂苷钠制剂中六种有关物质的含量测定方法，以更好地控制产品质量。
本发明提供的方法包括将待测样品用醇稀释后用高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为190～220nm，所述高效液相色谱仪的色谱柱为C8色谱柱，流动相为0.05％磷酸水溶液、正己烷、乙腈的混合液，柱温为25～35℃，理论板数按七叶皂苷A峰计不低于5000，所述六种有关物质的结构为式Ⅰ～Ⅵ所示：
优选地，所述紫外检测器的设定检测波长为210nm。
优选地，所述流动相中，0.05％磷酸水溶液、正己烷、乙腈的体积比为30～35∶2～5∶60～70，最优为34∶5∶61。
优选地，所述柱温为27℃。
本发明中，所述百分比浓度均指重量百分比浓度，如0.05％磷酸水溶液指的是每100g磷酸水溶液中含有0.05g磷酸。
本发明的有益效果是：采用本发明提供的方法能同时准确检测出七叶皂苷钠制剂中六种有关物质的含量，所采用的色谱条件分离效果好，出峰时间短，检测结果重现性好，准确度高。采用该方法使七叶皂苷钠制剂的质量更加可控。
附图说明
图1是0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61为流动相，柱温27℃，220nm检测波长的色谱图。
图2是0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61为流动相，柱温27℃，210nm检测波长的色谱图。
图3是0.5％磷酸水溶液：乙腈＝38:62为流动相，柱温27℃，210nm检测波长的色谱图。
图4是0.05％磷酸水溶液：乙腈＝38:62为流动相，柱温27℃，210nm检测波长的色谱图。
图5是0.05％磷酸水溶液：乙酸乙酯：乙腈34:5:61为流动相，柱温27℃，210nm检测波长的色谱图。
图6是0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝30:5:65为流动相，柱温27℃，210nm检测波长的色谱图。
图7是0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝32:2:66为流动相，柱温27℃，210nm检测波长的色谱图。
图8是0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61为流动相，柱温25℃，210nm检测波长的色谱图。
图9是0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61为流动相，柱温35℃，210nm检测波长的色谱图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明进行详细地说明。
实施例1 检测波长的选择
试验样品：七叶皂苷钠搽剂(商品名：艾辛可)，用甲醇稀释制成每1ml约含七叶皂苷钠2.5mg的溶液。
仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪系列(美国安捷伦科技公司，包括四元泵、手动进样器、柱温箱、紫外检测器、M8301AA色谱工作站)
流动相：0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61
柱温：27℃
检测波长：220nm、210nm
进样量：10ul
结果：从图1、图2中可以看出，在210nm条件下，各有关物质色谱峰响应较大(等吸收线图中，210nm比220nm有关物质色谱峰颜色更深，表示吸收更强)，所显示的有关物质色谱峰比220nm下色谱峰多8个，故在210nm条件是最合适检测有关物质的波长。
实施例2 流动相的选择
流动相：(1)0.5％磷酸水溶液：乙腈＝38:62
(2)0.05％磷酸水溶液：乙腈＝38:62
(3)0.05％磷酸水溶液：乙酸乙酯：乙腈34:5:61
(4)0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈34:5:61
检测波长：210nm
其它条件与实施例1相同。
结果：从图2～5中可以看出，图3中8min、15min、29min等色谱峰峰形较差，不能准确判断是否色谱峰完全分离，图4中皂苷11峰(18min)未和17min色谱峰完全分离，不能满足准确测定，图5中11峰(18min)未和17min色谱峰依然未完全分离，图2中以0.05％磷酸水溶液、正已烷、乙腈混合溶剂为流动相，色谱峰型和分离度最好，保留时间最短。
实施例3 流动相比例的选择
流动相：(1)0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61
(2)0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝32:2:66
(3)0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝30:5:65
其它条件与实施例2相同。
结果：从图2、6、7中可以看出，图6中保留时间过长，100min时七叶皂苷色谱峰未完全出峰完成，图7中17min色谱峰重合且分离度较差，图2中以0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61为流动相，色谱峰型和分离度最好，保留时间最短。
实施例4 柱温的选择
流动相：0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈34:5:61
柱温：25℃、27℃、35℃
检测波长：210nm
结果：从图2、8、9可以看出，图8保留色谱峰分离度良好，但保留时间过长，100min时所有皂苷成分还未能完全出峰，若需保证所有的七叶皂苷色谱峰完全出现，则需更长的时间，从资源利用考虑，不适合常规检测，图9保留时间提前，但所测目标峰中皂苷11峰未能完全分离，图2柱温27℃的色谱采集时间100min时，所有的峰完全出峰，且各色谱峰峰形良好，22个色谱峰分离度符合要求。
实施例5 方法验证
1.六种有关物质的定位与系统适应性试验
(1)试验方法
试验样品：七叶皂苷钠搽剂(商品名：艾辛可)，用甲醇稀释制成每1ml约含七叶皂苷钠2.5mg的溶液。
仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪系列(美国安捷伦科技公司，包括四元泵、手动进样器、柱温箱、紫外检测器、M8301AA色谱工作站)
流动相：0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61
柱温：27℃
检测波长：210nm
进样量：10ul
(2)计算方法：
CA为对照七叶皂苷A浓度
C样品为样品的浓度
A特定皂苷成分为各特定皂苷成分峰面积
AA为七叶皂苷A峰面积
f校正因子为各特定皂苷成分的校正因子
(3)分析方法验证
对照品溶液的配制：分别精密称取适量的七叶皂苷A、化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ的标准品置10ml的容量瓶中，配成分别含七叶皂苷A、化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ各1mg/ml的溶液。
供试品溶液的配制：精密量取七叶皂苷钠搽剂适量，置25ml的容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，制成每1ml含七叶皂苷钠2.5mg的样品溶液。
测定方法：按上述液相色谱条件分别进样测定。
测定结果见表1。
表1 六种有关物质的定位与系统适应性试验结果表
物质名称 对应的峰 保留时间 相对保留时间 分离度
七叶皂苷A 15峰 32.52 - 7.67
化合物Ⅰ 6峰 9.607 0.30 6.06
化合物Ⅱ 7峰 11.416 0.35 3.96
化合物Ⅲ 11峰 20.001 0.62 2.14
化合物Ⅳ 12峰 23.438 0.72 4.20
化合物Ⅴ 13峰 25.055 0.77 1.72
化合物Ⅵ 18峰 46.848 1.44 4.50
2.线性
在定量限浓度至不低于150％指标浓度的范围内取6个浓度点进行研究。线性关系以测得的响应信号(峰面积)对被分析物浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归，由相关系数R2证实良好的线性关系，要求该线性回归系数R2的数值应不小于0.990，结果见表2。
表2 六种有关物质的标准曲线、相关系数及校正因子
编号 标准曲线 相关系数 校正因子
七叶皂苷A Y＝6.0881x+3.1480 R<sup>2</sup>＝0.9982 1.00
化合物Ⅰ Y＝3.2704x-9.7809 R<sup>2</sup>＝0.9956 0.54
化合物Ⅱ Y＝6.0999x-5.8924 R<sup>2</sup>＝0.9996 1.00
化合物Ⅲ Y＝5.7934x-5.0041 R<sup>2</sup>＝0.9978 0.95
化合物Ⅳ Y＝5.9605x-1.0745 R<sup>2</sup>＝0.9987 0.98
化合物Ⅴ Y＝4.1099x-2.6446 R<sup>2</sup>＝0.9961 0.68
化合物Ⅵ Y＝5.0855x-6.0015 R<sup>2</sup>＝0.9980 0.84
3.重复性
配制6个相同浓度的样品溶液并进行测试，每个溶液进样1针，要求6次含量测定结果的相对标准差应不大于2.0％，结果见表3。
表3 六种有关物质含量测定的重复性试验结果
结果表明：各成分的RSD值在要求范围内，表明检测方法的重复性结果良好。
4.准确度
通过加入已知量的各组分，再测定加样样品中已知组分的测定结果和理论值的比值，从而计算出回收率，以百分率％表达，要求回收率在92.0％-105.0％之间，结果见表4。
表4 六种有关物质的回收率测定结果
结果表明：该方法测定各有关物质的准确度良好。
实施例6 样品测定
(1)供试品溶液的制备：取七叶皂苷钠粉针剂，用甲醇溶解并稀释成每1ml约含七叶皂苷钠2.5mg的溶液，作为供试品溶液。
(2)对照品溶液的制备：精密称取七叶皂苷A单体适量，置10ml的容量瓶中，加入甲醇适量溶解，定容至刻度，制成每1ml含七叶皂苷A1mg的样品溶液。精密量取适量置10ml的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含七叶皂苷A100ug的样品溶液。
(3)色谱条件与系统适应性：仪器：Agilent1260型高效液相色谱仪系列(美国安捷伦科技公司，包括四元泵、手动进样器、柱温箱、紫外检测器、M8301AA色谱工作站)
流动相：0.05％磷酸水溶液：正已烷：乙腈＝34:5:61
柱温：27℃
检测波长：210nm
进样量：10ul
(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定。
(5)计算公式：见实施例5中(2)。
(6)结果：所测得的各有关物质的含量见表5
表5 6批样品中有关物质的含量

Claims (3)

1.一种七叶皂苷钠制剂中六种有关物质的含量测定方法，该方法包括将待测样品用醇稀释后用高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为190～220nm，所述高效液相色谱仪的色谱柱为C8色谱柱，流动相为0.05％磷酸水溶液、正己烷、乙腈的混合液，所述流动相中，0.05％磷酸水溶液、正己烷、乙腈的体积比为30～35∶2～5∶60～70，柱温为25～35℃，理论板数按七叶皂苷A峰计不低于5000，所述六种有关物质的结构为式Ⅰ～Ⅵ所示，
2.如权利要求1所述的七叶皂苷钠制剂中有关物质的含量测定方法，其特征在于：所述紫外检测器的设定检测波长为210nm。
3.如权利要求1所述的七叶皂苷钠制剂中有关物质的含量测定方法，其特征在于：所述柱温为27℃。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112964817A (zh) * 2021-02-05 2021-06-15 上海珈凯生物科技有限公司 用高效液相色谱同时测定七叶树及提取物中6种皂苷成分的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1017591A (ja) * 1996-06-27 1998-01-20 Jintan Dorufu:Kk 抗炎症剤
CN102020691A (zh) * 2010-10-14 2011-04-20 吉林大学 七叶皂苷四种单体组分的高效液相色谱分离方法
CN103808665A (zh) * 2012-11-09 2014-05-21 山东绿叶制药有限公司 一种测定娑罗子提取物纯化过程中多指标成分含量的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH1017591A (ja) * 1996-06-27 1998-01-20 Jintan Dorufu:Kk 抗炎症剤
CN102020691A (zh) * 2010-10-14 2011-04-20 吉林大学 七叶皂苷四种单体组分的高效液相色谱分离方法
CN103808665A (zh) * 2012-11-09 2014-05-21 山东绿叶制药有限公司 一种测定娑罗子提取物纯化过程中多指标成分含量的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Determination of four major saponins in the seeds of Aesculus chinensis Bunge using accelerated solvent extraction followed by high-performance liquid chromatography and electrospray-time of flight mass spectrometry;Junhui Chen et al.;《Analytica Chimica Acta》;20070612;273-280
HPLC-ELSD法在注射用七叶皂苷钠质量控制中的应用;李菁等;《中草药》;20000831;第31卷(第8期);582-583
高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析娑罗子中皂苷类成分;陈军辉等;《分析化学》;20080331;第36卷(第3期);285-291

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