CN110441437A - 一种米氏酸含量的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种米氏酸含量的测定方法，其特征在于，利用高效液相色谱分别测定米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液中米氏酸的峰面积；根据所得的峰面积，用外标法计算米氏酸供试品溶液中米氏酸的质量含量。本发明具体限定了高效液相色谱测定米氏酸含量的色谱条件，提高了检测方法的准确度。本发明通过高效液相色谱进行含量分析检测，是一种简便、分离效果好、准确度高、精密度高的含量检测方法；其检测范围大，检测结果准确。

Description

一种米氏酸含量的测定方法
技术领域
本发明涉及一种米氏酸含量的测定方法，属于有机物含量检测技术领域。
背景技术
米氏酸，英文名：Meldrum’s acid，CAS号为2033-24-1，分子式为C6H8O4，分子量为144.125，熔点为94℃，结构式如下所示：
米氏酸是一种重要的有机合成中间体,可用于杂环化合物、天然产物、医药和农药的合成。其在温和条件下就可以进行亲电取代、亲核取代、加成重排等多种类型反应，因此其具有很高的应用价值。目前国内外对其含量检测方法的研究较少。梅尔.克里斯托弗在文献中介绍过薄层色谱的方法，但薄层色谱法只能用来半定量，无法用于精确的定量分析。西格玛奥德里奇、阿法埃莎网站上显示用酸碱滴定的方法检测其含量，但实际检测的是米氏酸水解后产物的含量，该方法不能直接体现米氏酸的含量，并且滴定前需要配置氢氧化钠滴定液、盐酸滴定液，比较繁琐，并且滴定误差较大。
现有技术中未公开通过高效液相色谱测定米氏酸含量的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种米氏酸含量的测定方法。
为了解决上述问题，本发明提供以下技术方案：
一种米氏酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)：利用高效液相色谱分别测定米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液中米氏酸的峰面积；
步骤2)：根据所得的峰面积，用外标法计算米氏酸供试品溶液中米氏酸的质量含量；
所述步骤1)中高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；
流动相：甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐溶液按体积比为(10～30):(70～90)，磷酸二氢钾缓冲盐的浓度为：0.02～0.05mol/L，并用三乙胺调节pH＝7.0；
流速：0.8～1.5mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长：257～259nm；
进样量：5～20μL。
优选地，所述检测波长为259nm。
优选地，所述流动相中磷酸二氢钾溶液的浓度为0.05mol/L，甲醇与磷酸二氢钾缓冲盐溶液的体积比为10:90。
优选地，所述流动相使用前用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。
优选地，所述色谱柱为YMC-Triart C18柱，其尺寸为4.6mm×250mm，填料的粒径为5μm。
优选地，所述流动相的体积流量为1.0mL/min。
优选地，所述米氏酸标准品溶液、米氏酸供试品溶液中分别由米氏酸标准品、米氏酸供试品稀释得到，所采用的稀释液为甲醇、水、甲醇水混合溶液或甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐组成的混合溶液。
更优选地，所述甲醇-磷酸二氢钾缓冲盐混合液中甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐的体积比为1:9。
优选地，所述步骤2)中外标法的计算公式为：
优选地，所述米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液在使用前分别用0.45μm的滤膜过滤。
本发明具体限定了高效液相色谱测定米氏酸含量的色谱条件，提高了检测方法的准确度。本发明通过高效液相色谱进行含量分析检测，是一种简便、分离效果好、准确度高、精密度高的含量检测方法；其检测范围大，检测结果准确。
附图说明
图1为实施例1中米氏酸标准品的液相色谱图；
图2为实施例1得到的标准曲线方程。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
本发明提供了一种米氏酸含量的测定方法，包括以下步骤：
利用高效液相色谱分别测定米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液中米氏酸的峰面积；
步骤1)：利用高效液相色谱分别测定米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液中米氏酸的峰面积；
步骤2)：根据所得的峰面积，用外标法计算米氏酸供试品溶液中米氏酸的质量含量；
所述步骤1)中高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；
流动相：甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐溶液按体积比为(10～30):(70～90)，磷酸二氢钾缓冲盐的浓度为：0.02～0.05mol/L，并用三乙胺调节pH＝7.0；
流速：0.8～1.5mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长：257～259nm；
进样量：5～20μL。
本发明利用高效液相色谱分别测定米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液中米氏酸的峰面积。实施例1-3采用Agilent 1260Infinity高效液相色谱仪进行高效液相色谱分析。本发明对所述米氏酸标准品溶液中米氏酸标准品的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。
实施例1-3中所采用的检测波长为259nm。所述流动相为甲醇：磷酸二氢钾缓冲盐溶液(0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，用三乙胺调节pH＝7.0)＝10:90(V/V)组成的混合溶液。所述流动相使用前优选用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。本发明对所述脱气处理的具体方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方法即可。所述色谱柱的长度为150mm、200mm或250mm。所述色谱柱为YMC、Hypersil或Venusil的C18柱。所述进样量为10μL。
所述米氏酸标准品溶液、米氏酸供试品溶液中分别由米氏酸标准品、米氏酸供试品稀释得到，所采用的稀释液为甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐组成的混合溶液，甲醇-磷酸二氢钾缓冲盐混合液中甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐的体积比为1:9。分别将10mg的米氏酸标准品和米氏酸供试品使用稀释剂稀释至100mL，分别得到所述米氏酸标准溶液和米氏酸供试品溶液。所述米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液优选在使用前分别用0.45μm滤膜过滤。
得到所述米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液中米氏酸的峰面积后，本发明根据所述峰面积，用外标法计算米氏酸供试品溶液中米氏酸的含量，计算公式如下：
实施例1
精密称量标准品10mg，置于100mL容量瓶中，加入水溶解，用水定容至刻度，摇匀。用注射器吸取1.5mL，然后用0.45μm有机滤头过滤转移到1.5mL的进样瓶中，得到标准品溶液；精密称取米氏酸样品10mg，置于100mL容量瓶中，加入水溶解，然后用水定容至刻度，摇匀。用注射器吸取1.5mL，然后用0.45μm有机滤头过滤转移到1.5mL的进样瓶中，得到供试品溶液。
色谱条件：安捷伦Agilent1260Infinity高效液相色谱，YMC-Triart C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液(用三乙胺调节pH＝7.0)＝10:90(V/V)组成的混合溶液；检测波长259nm；流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量10μL；采集时间20min。
图1为米氏酸标准品的高效液相色谱图，由图1可以看出，本发明的含量测定方法能够实现米氏酸含量的测定。
按照上述色谱条件，对米氏酸标准品和供试品进样，6次标准品溶液进样的峰面积平均值为8102，RSD为0.10％；供试品溶液进样的峰面积值为7969。
将上述数值带入计算公式中，得到供试品米氏酸含量为98.36％。
方法学考察：
1、精密度考察；称取6份米氏酸供试品，每个样品测定一次，记录6次测定的峰面积。由表1可以看出，6次测定的平均峰面积为7969，峰面积的RSD为0.21％，结果表明本HPLC法检测米氏酸含量精密度高，重现性好。
表1 称取6份米氏酸供试品的峰面积测定结果
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 7990 7953 7969 7984 7970 7948
2、线性范围
根据上述方法，配制浓度为500μg/mL的米氏酸标准品，加入水分别稀释成1μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL的溶液，按照本方法进行线性回归，得到的标准方程如图2所示，回归方程为y＝81.55465x+40.45349，R2＝0.99996。结果表明，米氏酸在1μg/mL～500μg/mL范围内，线性关系良好。
3、准确度试验
称取已知含量的米氏酸供试品适量，分别加入一定量的米氏酸标准品，配制成80％、100％、120％浓度的样品，每个样品各配制3份，按上述方法测定，计算回收率。结果表明，该方法的平均回收率为99.16％，RSD为0.45％，则该方法准确度较好。
实施例2
样品及标准品配制同实例1
色谱条件：安捷伦Agilent1 260Infinity高效液相色谱，Venusil C18 Plus柱(4.6×200mm，5μm，120A)；流动相：甲醇-磷酸二氢钾缓冲盐溶液(0.02mol/L磷酸二氢钾溶液，用三乙胺调节pH＝7.0)＝30:70(V/V)组成的混合溶液；检测波长257nm；流速1.5mL/min；柱温35℃；采集时间20min。
按上述色谱条件，对标准品连续进样6次，测的其平均峰面积为8090，RSD为0.12％；供试品的峰面积为7951，按外标法计算米氏酸供试品含量为98.28％。
实施例3
样品及标准品配制同实例1
色谱条件：安捷伦Agilent1 260Infinity高效液相色谱，HypersilODS-2柱(150×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-磷酸二氢钾缓冲盐溶液(0.03mol/L磷酸二氢钾溶液，用三乙胺调节pH＝7.0)＝20:80(V/V)组成的混合溶液；检测波长258nm；流速0.8mL/min；柱温30℃；采集时间20min。
按上述色谱条件，对标准品连续进样6次，测的其平均峰面积为8120，RSD为0.15％；供试品的峰面积为7982，按外标法计算米氏酸供试品含量为98.30％。
实施例1-3的数据表明：每个样品运行时间20min即可完成，说明检测速度快；每次用量约10mg，进样量为10μL，样品用量少，可极大节省样品用量；其峰面积的RSD为0.21％，说明其精密度较高；平均回收率为99.16％，RSD为0.45％，说明其准确度高；在1～500μg/mL范围内，线性关系良好，检测范围大。

Claims (10)

1.一种米氏酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)：利用高效液相色谱分别测定米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液中米氏酸的峰面积；
步骤2)：根据所得的峰面积，用外标法计算米氏酸供试品溶液中米氏酸的质量含量；
所述步骤1)中高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；
流动相：甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐溶液按体积比为(10～30):(70～90)，磷酸二氢钾缓冲盐的浓度为：0.02～0.05mol/L，并用三乙胺调节pH＝7.0；
流速：0.8～1.5mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长：257～259nm；
进样量：5～20μL。
2.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述检测波长为259nm。
3.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述流动相中磷酸二氢钾溶液的浓度为0.05mol/L，甲醇与磷酸二氢钾缓冲盐溶液的体积比为10:90。
4.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述流动相使用前用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。
5.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述色谱柱为YMC-TriartC18柱，其尺寸为4.6mm×250mm，填料的粒径为5μm。
6.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述流动相的体积流量为1.0mL/min。
7.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述米氏酸标准品溶液、米氏酸供试品溶液中分别由米氏酸标准品、米氏酸供试品稀释得到，所采用的稀释液为甲醇、水、甲醇水混合溶液或甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐组成的混合溶液。
8.如权利要求7所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述甲醇-磷酸二氢钾缓冲盐混合液中甲醇和磷酸二氢钾缓冲盐的体积比为1:9。
9.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述步骤2)中外标法的计算公式为：
10.如权利要求1所述的米氏酸含量的测定方法，其特征在于，所述米氏酸标准品溶液和米氏酸供试品溶液在使用前分别用0.45μm的滤膜过滤。
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