CN111323528A - 一种红菲咯啉含量的分析检测方法 - Google Patents

一种红菲咯啉含量的分析检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，利用高效液相色谱分别测定红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的峰面积；根据所得的峰面积，用外标法计算红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的质量含量。本发明具体限定了高效液相色谱测定红菲咯啉含量的色谱条件，提高了检测方法的准确度。本发明通过高效液相色谱进行含量分析检测，是一种简便、分离效果好、准确度高、精密度高的含量检测方法；其检测范围大，检测结果准确。

Description

一种红菲咯啉含量的分析检测方法
技术领域
本发明涉及一种红菲咯啉含量的分析检测方法，属于有机物含量检测技术领域。
背景技术
红菲咯啉，英文名：Bathophenanthroline，CAS号为1662-01-7，分子式为C24H16N2，分子量为332.40，熔点为218-220℃，结构式如下所示：
Figure BDA0002446861130000011
红菲咯啉是一种螯合剂，通过光度法或萃取光度法可测定金属或其他复杂物质中的铁和铜，如可广泛应用于血清和尿液中铁的测定。它作为缓冲层，可提高有机光伏电池的效率。并且它是一种非常有用的清洗剂，用于去除试剂溶液中的微量铁和铜，用于痕量金属的测定。
目前西格玛、梯希爱、阿尔法等各大网站显示该产品用非水滴定的方法检测产品的含量。红菲咯啉的结构中含有2个N，理论上2个N是都能被滴定的，但是经过多次试验发现实际只有1个N能被检测到，故用滴定的方法不能准确的表达产品的实际含量。不仅是红菲咯啉这一个产品存在该问题,类似这种多苯环含氮的对称结构很多都存在该问题，如2,9-二甲基-4,7-二苯基-1,10-菲绕啉；4,7-二甲基-1,10-邻二氮杂菲；1,10-菲罗啉；2,2'-联吡啶等。以上列举的实例均亲自做过非水滴定实验，非水滴定的反应比是1:1，故产品中只有一个N能被滴定出来。
现有技术中未公开通过高效液相色谱测定红菲咯啉含量的方法。以下介绍的方法不仅适用于红菲咯啉这一个产品，同时适用于与红菲咯啉结构类似的产品。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种红菲咯啉含量的分析检测方法。
为了解决上述问题，本发明提供以下技术方案：
一种红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)：利用液相色谱分别测定红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的峰面积；
步骤2)：根据所得的峰面积，用外标法计算红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的质量含量；
所述步骤1)中液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；
流动相：乙腈、水和三氟乙酸按体积比为(70～90)：(10～30)：(0.05～0.1)；
流速：0.8～1.5mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长：283～287nm；
进样量：5～20μL。
优选地，所述色谱柱采用YMC-Triart C18柱，其尺寸为4.6mm×250mm，填料的粒径为5μm。
优选地，所述流动相中三氟乙酸水溶液(即三氟乙酸与水的混合物)的质量浓度为0.1％，乙腈与三氟乙酸水溶液的体积比为70:30。
优选地，所述流动相的体积流量为1.0mL/min。
优选地，所述流动相使用前用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。
优选地，所述检测波长为285nm。
优选地，所述红菲咯啉标准品溶液、红菲咯啉供试品溶液分别由红菲咯啉标准品、红菲咯啉供试品稀释得到，所采用的稀释液为乙腈与三氟乙酸缓冲溶液组成的混合溶液。
优选地，所述乙腈与三氟乙酸缓冲缓冲溶液组成的混合液中乙腈和三氟乙酸缓冲液的体积比为7:3。
优选地，所述红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液在使用前分别用0.45μm的滤膜过滤。
优选地，所述步骤2)中外标法的计算公式为：
Figure BDA0002446861130000021
本发明具体限定了高效液相色谱测定红菲咯啉含量的色谱条件，提高了检测方法的准确度。本发明通过高效液相色谱进行含量分析检测，是一种简便、分离效果好、准确度高、精密度高的含量检测方法；其检测范围大，检测结果准确。
附图说明
图1为实施例1中红菲咯啉标准品的液相色谱图；
图2为实施例1得到的标准曲线方程。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
本发明提供的一种红菲咯啉含量的分析检测方法，包括以下步骤：
利用高效液相色谱分别测定红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的峰面积；
步骤1)：利用高效液相色谱分别测定红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的峰面积；
步骤2)：根据所得的峰面积，用外标法计算红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的质量含量；
所述步骤1)中高效液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；
流动相：乙腈、水和三氟乙酸按体积比为:(70～90)：(10～30)：(0.05～0.1)；流速：0.8～1.5mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长：283～287nm；
进样量：5～20μL。
本发明利用高效液相色谱分别测定红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的峰面积。实施例1-3采用Agilent 1260Infinity高效液相色谱仪进行高效液相色谱分析。本发明对所述红菲咯啉标准品溶液中红菲咯啉标准品的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。
实施例1-3中所采用的检测波长为285nm。所述流动相为乙腈与0.1wt％三氟乙酸缓冲溶液组成的混合溶液。所述流动相使用前优选用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。本发明对所述脱气处理的具体方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方法即可。所述色谱柱的长度为150mm、200mm或250mm。所述色谱柱为YMC、Hypersil或Venusil的C18柱。所述进样量为10μL。
所述红菲咯啉标准品溶液、红菲咯啉供试品溶液中分别由红菲咯啉标准品、红菲咯啉供试品稀释得到，所采用的稀释液为乙腈和三氟乙酸缓冲溶液组成的混合溶液，乙腈/0.1wt％三氟乙酸缓冲溶液混合液中乙腈和0.1wt％三氟乙酸缓冲溶液的体积比为7:3。分别将10mg的红菲咯啉标准品和红菲咯啉供试品使用稀释剂稀释至100mL，分别得到所述红菲咯啉标准溶液和红菲咯啉供试品溶液。所述红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液优选在使用前分别用0.45μm滤膜过滤。
得到所述红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的峰面积，本发明根据所述峰面积，用外标法计算红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的含量，计算公式如下：
Figure BDA0002446861130000041
实施例1
精密称量标准品10mg，置于100mL容量瓶中，加入三氟乙酸水溶液溶解，用水定容至刻度，摇匀。用注射器吸取1.5mL，然后用0.45μm有机滤头过滤转移到1.5mL的进样瓶中，得到标准品溶液；精密称取红菲咯啉样品10mg，置于100mL容量瓶中，加入水溶解，然后用水定容至刻度，摇匀。用注射器吸取1.5mL，然后用0.45μm有机滤头过滤转移到1.5mL的进样瓶中，得到供试品溶液。
色谱条件：安捷伦Agilent1260Infinity高效液相色谱，YMC-Triart C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈/0.1wt％三氟乙酸缓冲溶液(两者体积比为70:30)组成的混合溶液；检测波长285nm；流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量10μL；采集时间25min。
图1为红菲咯啉标准品的高效液相色谱图，由图1可以看出，本发明的含量测定方法能够实现红菲咯啉含量的测定。
按照上述色谱条件，对红菲咯啉标准品和供试品进样，6次标准品溶液进样的峰面积平均值为5009，RSD为0.17％；供试品溶液进样的峰面积值为4934。
将上述数值带入计算公式中，得到供试品红菲咯啉含量为98.50％。
方法学考察：
1、精密度考察；称取6份红菲咯啉供试品，每个样品测定一次，记录6次测定的峰面积。所得数据如表1所示。
表1
次数 1 2 3 4 5 6
峰面积 4938 4947 4920 4919 4950 4930
由表1可以看出，6次测定的平均峰面积为4934，峰面积的RSD为0.27％，结果表明本HPLC法检测红菲咯啉含量精密度高，重现性好。
2、线性范围
根据上述方法，配制浓度为1000μg/mL的红菲咯啉标准品，加入水分别稀释成1μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL、的溶液，按照本方法进行线性回归，得到的标准方程如图2所示，回归方程为y＝12.18566x+22.96304，R2＝0.99991。结果表明，红菲咯啉在1μg/mL～1000μg/mL范围内，线性关系良好。
3、准确度试验
称取已知含量的红菲咯啉供试品适量，分别加入一定量的红菲咯啉标准品，配制成80％、100％、120％浓度的样品，每个样品各配制3份，按上述方法测定，计算回收率。结果表明，该方法的平均回收率为99.21％，RSD为0.38％，则该方法准确度较好。
实施例2
样品及标准品配制同实施例1。
色谱条件：安捷伦Agilent1 260Infinity高效液相色谱，Venusil C18 Plus柱(4.6×200mm，5μm，120A)；流动相：乙腈/0.1wt％三氟乙酸缓冲溶液(两者体积比为30:70)组成的混合溶液；检测波长284nm；流速1.5mL/min；柱温35℃；采集时间25min。
按上述色谱条件，对标准品连续进样6次，测的其平均峰面积为4995，RSD为0.16％；供试品的峰面积为4921，按外标法计算红菲咯啉供试品含量为98.52％。
实施例3
样品及标准品配制同实例1
色谱条件：安捷伦Agilent1 260Infinity高效液相色谱，HypersilODS-2柱(150×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈/0.1wt％三氟乙酸缓冲溶液(两者体积比为20:80)组成的混合溶液；检测波长286nm；流速0.8mL/min；柱温30℃；采集时间25min。
按上述色谱条件，对标准品连续进样6次，测的其平均峰面积为5030，RSD为0.20％；供试品的峰面积为4949，按外标法计算红菲咯啉供试品含量为98.39％。
实施例1-3的数据表明：每个样品运行时间25min即可完成，说明检测速度快；每次用量约10mg，进样量为10μL，样品用量少，可极大节省样品用量；峰面积的RSD为0.27％，说明其精密度较高；平均回收率为99.21％，RSD为0.38％，说明其准确度高；在1～1000μg/mL范围内，线性关系良好，检测范围大。

Claims (10)

1.一种红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)：利用液相色谱分别测定红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的峰面积；
步骤2)：根据所得的峰面积，用外标法计算红菲咯啉供试品溶液中红菲咯啉的质量含量；
所述步骤1)中液相色谱的色谱条件为：
色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充物；
流动相：乙腈、水和三氟乙酸按体积比为(70～90)：(10～30)：(0.05～0.1)；
流速：0.8～1.5mL/min；
柱温：25～35℃；
检测波长：283～287nm；
进样量：5～20μL。
2.如权利要求1所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述色谱柱采用YMC-Triart C18柱，其尺寸为4.6mm×250mm，填料的粒径为5μm。
3.如权利要求1所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述流动相中三氟乙酸水溶液的质量浓度为0.1％，乙腈与三氟乙酸水溶液的体积比为70:30。
4.如权利要求1或3所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述流动相的体积流量为1.0mL/min。
5.如权利要求1或3所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述流动相使用前用0.45μm滤膜过滤并脱气处理。
6.如权利要求1所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述检测波长为285nm。
7.如权利要求1所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述红菲咯啉标准品溶液、红菲咯啉供试品溶液分别由红菲咯啉标准品、红菲咯啉供试品稀释得到，所采用的稀释液为乙腈与三氟乙酸缓冲溶液组成的混合溶液。
8.如权利要求7所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述乙腈与三氟乙酸缓冲缓冲溶液组成的混合液中乙腈和三氟乙酸缓冲液的体积比为7:3。
9.如权利要求1或7所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述红菲咯啉标准品溶液和红菲咯啉供试品溶液在使用前分别用0.45μm的滤膜过滤。
10.如权利要求1所述的红菲咯啉含量的分析检测方法，其特征在于，所述步骤2)中外标法的计算公式为：
Figure FDA0002446861120000021
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