CN104297379B - 高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法 - Google Patents

高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104297379B
CN104297379B CN201410599135.4A CN201410599135A CN104297379B CN 104297379 B CN104297379 B CN 104297379B CN 201410599135 A CN201410599135 A CN 201410599135A CN 104297379 B CN104297379 B CN 104297379B
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
pyrogallic acid
pyrogallic
solution
standard
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410599135.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104297379A (zh
Inventor
汪咏梅
张亮亮
徐曼
陈笳鸿
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
WUFENG CHICHENG BIOTECH Co.,Ltd.
Original Assignee
Institute of Chemical Industry of Forest Products of CAF
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Chemical Industry of Forest Products of CAF filed Critical Institute of Chemical Industry of Forest Products of CAF
Priority to CN201410599135.4A priority Critical patent/CN104297379B/zh
Publication of CN104297379A publication Critical patent/CN104297379A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104297379B publication Critical patent/CN104297379B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

一种通过使用鞣花酸作为内标物质,使用高效液相色谱内标定量分析,精确检测焦性没食子酸含量的方法。该发明避免了采用外标法作为定量分析时测定焦性没食子酸含量时仪器不稳定带来的检测不确定度,也避免了采用面积归一法作为定量分析方法时由于各类物质在同一检测条件下灵敏度不一致所带来的检测不确定度,该方法方便快速,检测结果准确可靠。

Description

高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种采用内标法作为定量分析方法的高效液相色谱法测定焦性没食 子酸的新方法,属于化学分析方法技术领域。
背景技术
[0002] 焦性没食子酸,是我国重要林特产五倍子的精深加工产品,广泛用于合成医药、农 药、染料中间体、感光材料、电子化学品制造业,也是重要的化学试剂,在重要分析中测定 铋、锑、银、汞等,在气体分析中用于吸收氧气,还是强酸条件下测定废水COD的最佳试剂。 中国是焦性没食子酸的主要生产国,产品主要销往日本、美国和欧洲。
[0003]日本焦性没食子酸产品工业标准中对焦性没食子酸的测定采用气相色谱法,但由 于该方法需要先对焦性没食子酸进行衍生化反应,使得操作过程复杂,且焦性没食子酸在 高温条件下容易发生分解,给检测结果的准确性带来了一定的影响。
[0004] 发明专利《高效液相色谱法测定焦性没食子酸》(专利号CN102759584A)中所报 道的高效液相色谱法测定焦性没食子酸方法,定量方法采用焦性没食子酸的主要原料没食 子酸作为内标物质,但由于生产工艺原因,焦性没食子酸在生产过程中不可避免的含有少 量的没食子酸,使得这种方法测得的焦性没食子酸含量偏高。焦性没食子酸的测定值往往 会超过100%,使得这种方法不具有实际应用性。采用高效液相色谱测定焦性没食子酸时, 定量方法也有采用面积归一化法的,但由于在检测条件下,焦性没食子酸与没食子酸、单宁 酸等杂质的灵敏度不一样,所以检测的结果不确定性大导致结果不准确。
发明内容
[0005] 本发明的目的是提供一种能克服现有焦性没食子酸检测技术中检测结果不确定 度大,准确度低等方面的不足,即提供一种高效液相色谱内标定量检测技术,该方法简单、 结果准确可靠。
[0006] 本发明的技术方案是:一种高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸的方法,以 鞣花酸作为内标物质,用液相色谱仪在一定的色谱操作条件下,采用内标法对焦性没食子 酸进行定量检测;具体包括配制焦性没食子酸标准溶液,鞣花酸标样,待测试样溶液,然后 测定试样中焦性没食子酸与内标物峰面积之比的平均值,标样溶液中焦性没食子酸与内标 物峰面积之比的平均值。
[0007] 所述的液相色谱仪为ShimadzuAB20,LCsolution色谱工作站和紫外检测器; HypersilC18(250mmX4. 6mm, 5ym)色谱柱;色谱分析条件的流动相为:甲醇:含0• 1%wt 三氟乙酸的水溶液,采用梯度洗脱;流速I.OmL/min;检测波长266nm;柱温:室温;进样量: 20yL;焦性没食子酸保留时间约4. 33min;鞣花酸保留时间约19. 25min。
[0008] 所述的焦性没食子酸标准溶液浓度为2.Omg/mL;鞣花酸内标溶液浓度为0. 4mg/ mL;焦性没食子酸试样溶液浓度为I.Omg/mL。
[0009] 所述的内标法对焦性没食子酸进行定量检测的方法具体为:先绘制标准曲线, 精密吸取焦性没食子酸标样溶液适量,加内标鞣花酸溶液稀释成:焦性没食子酸浓度为 2000,1000, 500, 250,125,62. 5yg/mL,内标鞣花酸浓度为400yg/mL的标样混合溶液,分 别进样20yL,测定峰面积,以焦性没食子酸与内标峰面积的比值作为纵坐标,以焦性没食 子酸质量分数yg/mL为横坐标,绘制标准曲线,进行线性回归,得回归方程1:
Figure CN104297379BD00041
[0011] 式中:1¾一焦性没食子酸的质量,g;r2-试样中焦性没食子酸与内标物峰面积之 比的平均值;P-焦性没食子酸的质量分数,%邱2-焦性没食子酸试样的质量,g;ri-标样 溶液中焦性没食子酸与内标物峰面积之比的平均值;
[0012] 按上述色谱条件分别进行试样测定,记录峰面积,以内标法标样与内标峰面积比 值进行回归计算出样品中的焦性没食子酸质量百分含量X。
[0013] 有益效果:
[0014] (1)虽然同时采用高效液相色谱法检测焦性没食子酸,但本发明利用内标法作为 定量分析方法,检测结果比现有焦性没食子酸检测方法采用的外标法、面积归一化法作为 定量分析的结果更加稳定可靠,方法更加科学、先进。
[0015] (2)解决了文献中选用没食子酸作为内标物所造成测定结果偏高的问题。其鞣花 酸作为内标物质更易于获取与保存。鞣花酸标样比文献报道的没食子酸标样其物化性质更 加稳定,标样易于保存。
[0016] (3)本发明实现了内标法作为定量分析方法在高效液相色谱分析中应用的突破。 有效避免了外标法中由于仪器不稳定所带来的测定不确定度。
附图说明
[0017]图1为实施例1的标样溶液(a)和试样溶液(b)色谱图,其中1.焦性没食子酸; 2.鞣花酸。
[0018] 图2焦性没食子酸标准曲线。
[0019] 图3以3, 4, 5-三甲氧基苯甲酸作为内标物的焦性没食子酸色谱图。
具体实施方式
[0020] 本发明提供一种高效液相色谱内标定量检测焦性没食子酸含量的方法,以鞣花酸 作为内标物质,用液相色谱仪在一定的色谱操作条件下,采用内标法对焦性没食子酸进行 定量检测。包括配制焦性没食子酸标准溶液,鞣花酸标样,测定标样溶液和试样溶液中焦性 没食子酸与鞣花酸色谱吸收峰面积比值,利用回归方程测定焦性没食子酸含量。
[0021] 1试剂与仪器
[0022] 甲醇:分析纯;三氟乙酸(TFA),色谱柱;水:二次蒸馏水;焦性没食子酸质量分 数:彡99%;鞣花酸质量分数:彡99%。
[0023]液相色谱仪:ShimadzuAB20;色谱柱:HypersilC18(250mmX4. 6mm, 5ym)柱; LCsolution色谱工作站;微量进样针:50yL0
[0024] 2试验方法
[0025]2. 1流动相的配制
[0026] V(甲醇):V(7jC,含〇. 1%TFA) = 10:90,流动相使用前用0.45ym滤膜过滤脱气。
[0027] 2.2内标液的配制
[0028] 称取0.lg(精确至0. 0002g)鞣花酸于250mL容量瓶中,用甲醇溶解后稀释至刻 度,超声IOmin使其充分溶解后待用。
[0029] 2.3色谱操作条件
[0030] 柱温:室温;流速:1.OmL/min;检测波长:266nm;进样量:20yL。
[0031] 流动相梯度表
[0032]
Figure CN104297379BD00051
[0033] 焦性没食子酸保留时间约4. 33min;鞣花酸保留时间约19. 25min。
[0034] 2. 4测定步骤
[0035] 2. 4. 1标样溶液的配制
[0036] 称取焦性没食子酸0. 200g(精确至0. 0002g)于IOOmL容量瓶中,用内标液稀释至 刻度,摇匀,使其充分溶解后待用。
[0037] 2. 4. 2试样溶液的配制
[0038] 称取0•100g焦性没食子酸产品(精确至0• 0002g)于IOOmL容量瓶中,用内标液 稀释至刻度,摇匀,使其充分溶解后待用。
[0039] 2. 4. 3 测定
[0040] 在上述操作条件下,待仪器基线稳定后,先注入数针标样溶液,直至相邻两针的峰 面积之差小于1. 5%后,按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进样测定,色谱图 见图1。
[0041] 2.4.4 计算
[0042] 将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中焦性没食子酸和内标物峰 面积比分别进行平均。焦性没食子酸的质量分数X按式(1)计算:
Figure CN104297379BD00052
[0044] 式中:1¾一焦性没食子酸的质量,g;r2-试样中焦性没食子酸与内标物峰面积之 比的平均值;P-焦性没食子酸的质量分数,%邱2-焦性没食子酸试样的质量,g;ri-标样 溶液中焦性没食子酸与内标物峰面积之比的平均值。
[0045] 本发明于高效液相色谱法中采用了内标法定量检测技术,解决了目前焦性没食子 酸日常检测中存在的检测结果准确度低的问题。本发明解决了内标物质的选择问题。一 般来说,高效液相色谱分析中较少使用内标法作为定量分析方法,因为不同物质在不同波 长下的吸收值不同,很难找到在主成分检测所选择的波长处有合适灵敏度并满足其它条件 的内标物质。本发明通过使用鞣花酸作为内标物质,解决了这一难题。实现了对焦性没食 子酸的准确检测。方法标准偏差0. 0026,变异系数0. 014,线性相关系数0. 9997,回收率 103.6%。方法精密度好,准确度高。
[0046] 实施例1
[0047] 1.用本发明技术内容中所采用的仪器和试剂。
[0048] 2.采用本发明技术内容中所采用的高效液相色谱流动相操作条件。
[0049] 3•配制标准溶液。
[0050] 本发明采用鞣花酸作为内标物进行焦性没食子酸含量测定。
[0051] 3. 1内标液的配制:称取0.lg(精确至0. 0002g)鞣花酸于250mL容量瓶中,用甲 醇溶解后稀释至刻度,超声IOmin使其充分溶解后待用。
[0052] 3. 2焦性没食子酸标准溶液:2.Omg/mL。准确称取焦性没食子酸0• 200g(精确至 0.0002g)于IOOmL容量瓶中,用内标液稀释至刻度,摇匀,使其充分溶解后待用。
[0053] 4.焦性没食子酸含量测定
[0054] 4. 1回归方程的制作
[0055] 精密吸取焦性没食子酸标样溶液适量,加内标鞣花酸溶液稀释成:焦性没食子酸 浓度为2000,1000, 500, 250,125,62. 5yg/mL,内标鞣花酸浓度为400yg/mL的标样混合溶 液,分别进样20yL,测定峰面积,以焦性没食子酸与内标峰面积的比值(Y)作为纵坐标,以 焦性没食子酸质量分数(X,yg/mL)为横坐标,绘制标准曲线(图2),进行线性回归,得回 归方程:Y=L3139X10 4X-O. 0065,R= 0• 9992。
[0056] 4. 2焦性没食子酸含量的测定
[0057] 称取0.100g焦性没食子酸样品(精确至0. 0002g)于IOOmL容量瓶中,用内标液 稀释至刻度,摇匀,使其充分溶解。按上述色谱条件分别进行液相色谱测定,记录峰面积,用 公式(1)以内标法标样与内标峰面积比值进行回归计算,测得焦性没食子酸的质量百分比 X。
[0058] 实施例2 :
[0059] 按照实施例1描述的分析方法和试验步骤,采用3, 4, 5-三甲氧基苯甲酸代替鞣花 酸作为内标物进行焦性没食子酸含量测定。得到了以3, 4, 5-三甲氧基苯甲酸作为内标物 的焦性没食子酸高效液相色谱图(图3)。由色谱图可以看出,选择以3, 4, 5-三甲氧基苯甲 酸作为内标物并不能将被分析物焦性没食子酸及内标物实现很好的分离。因此,按照本发 明方法描述的分析方法和试验步骤不能选择3, 4, 5-三甲氧基苯甲酸作为内标物。
[0060] 以上的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进 行限定。在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通工程技术人员对本发明的技术方 案作出的各种变形和改进,均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。

Claims (3)

1. 一种高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸的方法,其特征在于:以鞣花酸作为 内标物质,用液相色谱仪在一定的色谱操作条件下,采用内标法对焦性没食子酸进行定量 检测;具体包括配制焦性没食子酸标准溶液,鞣花酸标样,待测试样溶液,然后测定试样中 焦性没食子酸与内标物峰面积之比的平均值,标样溶液中焦性没食子酸与内标物峰面积之 比的平均值;所述的液相色谱仪为Shimadzu AB20, LCsolution色谱工作站和紫外检测器; Hypersil C18色谱柱250mmX4. 6mm, 5 μπι;色谱分析条件的流动相为:甲醇:含0. 1% wt三 氟乙酸的水溶液,采用梯度洗脱;流速1.0 mL/min ;检测波长266nm ;柱温:室温;进样量: 20 μ L ;焦性没食子酸保留时间约4. 33min ;鞣花酸保留时间约19. 25min ;流动相梯度表
Figure CN104297379BC00021
2. 根据权利要求1所述的高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸的方法,其特征在 于:所述的焦性没食子酸标准溶液浓度为2. Omg/mL ;鞣花酸内标溶液浓度为0. 4mg/mL ;焦 性没食子酸试样溶液浓度为1.0 mg/mL。
3. 根据权利要求1所述的高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸的方法,其特征 在于:所述的内标法对焦性没食子酸进行定量检测的方法具体为:先绘制标准曲线,精密 吸取焦性没食子酸标样溶液适量,加内标鞣花酸溶液稀释成:焦性没食子酸浓度为2000, 1000, 500, 250,125,62. 5 μ g/mL,内标鞣花酸浓度为400 μ g/mL的标样混合溶液,分别进样 20 μ L,测定峰面积,以焦性没食子酸与内标峰面积的比值作为纵坐标,以焦性没食子酸质 量分数yg/mL为横坐标,绘制标准曲线,进行线性回归,得回归方程1 :
Figure CN104297379BC00022
式中:1¾一焦性没食子酸的质量,g;r2-试样中焦性没食子酸与内标物峰面积之比的 平均值;P-焦性没食子酸的质量分数,%邱2-焦性没食子酸试样的质量,g ;Γι-标样溶液 中焦性没食子酸与内标物峰面积之比的平均值; 按上述色谱条件分别进行试样测定,记录峰面积,以内标法标样与内标峰面积比值进 行回归计算出样品中的焦性没食子酸质量百分含量X。
CN201410599135.4A 2014-10-29 2014-10-29 高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法 Active CN104297379B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410599135.4A CN104297379B (zh) 2014-10-29 2014-10-29 高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410599135.4A CN104297379B (zh) 2014-10-29 2014-10-29 高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104297379A CN104297379A (zh) 2015-01-21
CN104297379B true CN104297379B (zh) 2015-11-18

Family

ID=52317200

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410599135.4A Active CN104297379B (zh) 2014-10-29 2014-10-29 高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104297379B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108459126A (zh) * 2018-05-10 2018-08-28 吉林省水产科学研究院 内标标准曲线法计算水产品中多氯联苯含量检测结果的不确定度评定方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003059371A1 (en) * 2001-12-28 2003-07-24 Inter American University Of Puerto Rico Anti-bacterial plant compositions
CN102759584A (zh) * 2012-06-20 2012-10-31 遵义林源医药化工有限责任公司 高效液相色谱法测定焦性没食子酸

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003059371A1 (en) * 2001-12-28 2003-07-24 Inter American University Of Puerto Rico Anti-bacterial plant compositions
CN102759584A (zh) * 2012-06-20 2012-10-31 遵义林源医药化工有限责任公司 高效液相色谱法测定焦性没食子酸

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Huang, Min;Winters, Doug;Sullivan, Darryl.Application of Ultra-High-Performance Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry for the Measurement of Vitamin D in Infant Formula and Adult/Pediatric Nutritional Formula: First Action 2011.11.《JOURNAL OF AOAC INTERNATIONAL》.2012,第95卷(第2期),319-321. *
焦性没食子酸制备工艺概况;张健;《企业技术开发》;19970630(第6期);6-8 *
焦性没食子酸含量测定方法的研究;吴冬梅,陈笳鸿,汪咏梅,吴在嵩;《生物质化学工程》;20070331;第41卷(第2期);41-43 *
焦性没食子酸的制备方法及应用;杜运平,张宗和;《生物质化学工程》;20110131;第45卷(第1期);47-52 *
高效液相色谱法测定焦性没食子酸;邓自西,刘林,李文娟;《精细化工中间体》;20120630;第42卷(第3期);70-72 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN104297379A (zh) 2015-01-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102759584B (zh) 高效液相色谱法测定焦性没食子酸
CN108802256B (zh) 一种单乙醇胺含量的检测方法
CN109060984A (zh) 一种检测缬沙坦及其制剂中n-二甲基亚硝胺含量的方法
CN105021740A (zh) N1,n1-二异丙基乙二胺的高效液相色谱分析方法
CN106033079B (zh) 甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法
CN103235051B (zh) 一种测定干性食品包装纸中着色剂溶剂绿7的方法
CN104297379B (zh) 高效液相色谱-内标法测定焦性没食子酸含量的方法
CN108828089A (zh) 衍生化HPLC-UV/Vis法测定氯霉素或其制剂中4-硝基苯甲醛的方法
CN105319296A (zh) 一种甲醇含量的测定方法
CN103995062B (zh) 一种高效液相色谱法测定艾塞那肽及其杂质的方法
CN109324135B (zh) 用于同时检测复合乳化剂中3种乳化剂的方法
CN106053698A (zh) 一种硫酸乙二胺盐定量分析方法
CN103364517B (zh) 一种苯噻菌胺·烯酰吗啉复配制剂中有效成分含量的分析方法
CN103063772B (zh) 一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检测方法
CN111366649A (zh) 离子色谱法测定鸡蛋及卤鸡蛋制品中5种阴离子的方法
CN109507339A (zh) 液相色谱-高分辨质谱法用于人体尿液中甲基苯丙胺的测定方法
CN108088917B (zh) 萘二磺酸同分异构体的检测方法
CN103776925A (zh) 一种工业氯化钾的目标物质含量检测方法
Vuković et al. One-step solid-phase UV spectrophotometric method for phenol determination in vaccines: Development and quality assessment
CN103558174A (zh) 一种利用紫外分光光度法测定来苏儿中甲酚含量的方法
CN104634886B (zh) 一种测定有机羧酸绝对含量的方法
CN102565229B (zh) 离子色谱—化学发光检测法测定儿茶酚胺类物质
CN104280470A (zh) 液相色谱测定llm-105生产废水中中间体的方法
CN112557573A (zh) 一种测定aeea-aeea含量的方法
CN110220856B (zh) 流动注射法检测电解铜箔的电沉积液中氯离子含量的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20200617

Address after: No.8 Tianchi Road, yuyangguan Town, Wufeng, Yichang City, Hubei Province 443413

Patentee after: WUFENG CHICHENG BIOTECH Co.,Ltd.

Address before: Five suojin village of Nanjing city in Jiangsu province 210042 No. 16

Patentee before: INSTITUTE OF CHEMICAL INDUSTRY OF FOREST PRODUCTS, CAF