CN109239217B - 一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法 - Google Patents

一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法。所述方法包括如下步骤：(1)称取顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品，配制标准品溶液；(2)以顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸组成的混合物为供试样品，配制供试样品溶液；(3)分别取标准品溶液和供试样品溶液进行高效液相色谱分析，条件：C18液相色谱柱，柱温25～45℃，流动相甲醇和磷酸水溶液，流速0.5～2.0mL/min，紫外检测器检测波长200～235nm，外标法获得含量；步骤(1)、(2)的先后顺序不限。本方法能快速同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量，具有高灵敏性、准确性、稳定性和重现性。

Description

一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法
技术领域
本发明涉及精细化工技术领域，具体涉及一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法。
背景技术
硫代苹果酸是多官能团化合物，由于巯基较强的还原和螯合配位性能，使其有着广泛的用途，硫代苹果酸可用作络合滴定掩蔽剂、重金属解毒剂，并能用于荧光探头中以探测金属离子，是多种含硫药物制备的原料，也是冷烫剂的主要成分及清洁镀金添加剂，具有重要的应用价值。
有关硫代苹果酸的合成，已报道的主要有天冬氨酸法、硫代磷酸酯法、顺丁烯二酸法和硫脲法。其中硫脲法因原料价廉易得而成为生产中常用的方法，该方法以硫脲和顺丁烯二酸酐为起始原料，先合成中间体化合物2-脒基硫烷基丁二酸酐，再在碱性或酸性溶液中水解制备硫代苹果酸。在合成制备的过程中需要对原料及产品含量进行快速、准确的分析。
而关于硫代苹果酸的定量分析，目前的方法就是通过铁氰化物滴定巯基，进而对硫代苹果酸进行定量，但是原料硫脲的存在会对结果造成干扰。
“张丹勇,杨永健.二巯基丁二酸钠及其有关物质的高效液相色谱-电化学检测法测定[J].中国医药工业杂志,2011,42(9):686-689.”提出利用疏基能够被电极氧化从而被检测的原理，建立了高效液相色谱-电化学检测法测定二巯基丁二酸钠及其有关物质的含量。采用C18色谱柱，以50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH2.5)-乙腈(89:11)为流动相，优化波形的积分脉冲安培法检测。二巯基丁二酸钠在2～10μg/mL范围内线性关系良好。
“乐健,王麟达,陈桂良,等.HPLC测定二巯丁二酸的有关物质[J].中国药学杂志,2011,46(13):1030-1033.”建立二巯丁二酸中有关物质的HPLC测定方法。方法色谱柱为UltimateXB-C18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相A:硫酸氢四丁基铵磷酸盐溶液(含硫酸氢四丁基铵3.2g/L、磷酸二氢钠6.5g/L和乙二胺四乙酸二钠0.09g/L)-甲醇(85:15)；流动相B:甲醇；流速:1.0mL/min；检测波长220nm；线性梯度洗脱:0min，100％A；10min，100％A；20min，80％A；50min，80％A。结果二巯丁二酸与丁炔二酸、各杂质峰之间分离良好。二巯丁二酸在14.0～112.0μg/mL内线性良好，r＝0.9993，检测限为1.8μg/mL，丁炔二酸在10.3～82.3μg/mL内线性良好，r＝1.0000，检测限为0.4μg/mL，丁炔二钠的平均加样回收率为98.3％。该方法专属性强、准确度高，适合测定二巯丁二酸的有关物质。虽然上述两种方法适合测定二巯基丁二酸有关物质，但对于硫代苹果酸、硫脲和顺丁烯二酸酐的测定并不适用。
因此，需要开发一种成本低、操作简单、结果可靠、灵敏度高的可同时定量分析硫代苹果酸、顺丁烯二酸酐和硫脲的方法。
发明内容
鉴于现有技术中存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种成本低、操作简单、结果可靠、灵敏度高的可同时定量分析硫代苹果酸、顺丁烯二酸酐和硫脲的方法。
为达此目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，包括如下步骤：
(1)称取顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品，加入溶剂，配制标准品溶液；
(2)以顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸组成的混合物为供试样品，加入溶剂配制成供试样品溶液；
(3)分别取步骤(1)所得标准品溶液和步骤(2)所得供试样品溶液，进行高效液相色谱分析，分析条件为：色谱柱为C18液相色谱柱，柱温为25～45℃，例如25℃、28℃、30℃、32℃、35℃、38℃、40℃、42℃或45℃等，流动相A为甲醇，流动相B为磷酸水溶液，流速为0.5～2.0mL/min，例如0.5mL/min、0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min、1.5mL/min、1.8mL/min或2.0mL/min等，紫外检测器的检测波长为200～235nm，例如200nm、202nm、205nm、208nm、210nm、211nm、213nm、217nm、220nm、225nm、228nm、230nm、233nm或235nm等，通过外标法获得顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量；
其中步骤(1)和步骤(2)的先后顺序不限，可以是步骤(1)在步骤(2)之前，也可以是步骤(2)在步骤(1)之前，还可以是步骤(1)与步骤(2)同时进行，只要步骤(1)和步骤(2)都在步骤(3)之前即可。
本发明所述的“包括”，意指其除所述步骤外，还可以包括其他步骤，这些其他步骤赋予所述方法不同的特性。除此之外，本发明所述的“包括”，还可以替换为封闭式的“为”或“由……组成”。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。对于高效液相色谱的检测而言，其存在诸如固定相的种类，流动相的种类，流动相的浓度，进样量，流动相的流速，检测温度，样品前处理等等多种变量，所述的各种变量均应根据样品的极性、溶解性等各种复杂的性能来进行选择，但是即便对样品的极性、溶解性做了充分的考虑，选择一个合适的固定相、流动相等操作条件也是极其困难的。本发明通过选择检测条件合适的流动相和固定相，与其他分析条件互相配合，实现了顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的有效吸附和适时脱附，实现三者的高效分离，能够快速地同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量，且具有较高的灵敏性、准确性、稳定性和重现性。
其中本发明步骤(3)所述外标法为公知手段，具体包括：分别记录液相色谱图中各峰的峰面积，并按照顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品溶液的峰面积对照顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品的浓度，得到回归方程，带入供试样品溶液的峰面积，得到供试样品中顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量。
优选地，步骤(1)和步骤(2)所述的溶剂各自独立地包括去离子水、醇类有机溶剂或酮类有机溶剂中的任意一种或至少两种的组合，其中典型但非限制性的组合为：去离子水与醇类有机溶剂的组合，醇类有机溶剂与酮类有机溶剂的组合，去离子水与酮类有机溶剂的组合，离子水、醇类有机溶剂与酮类有机溶剂的组合。
优选地，步骤(1)和步骤(2)所述的溶剂各自独立地为去离子水、甲醇、乙醇、丙酮或4-甲基-2-戊酮中的任意一种或至少两种的组合；其中典型但非限制性的组合为：去离子水与甲醇的组合，去离子水与丙酮的组合，乙醇与或4-甲基-2-戊酮的组合，去离子水、甲醇、与丙酮的组合，去离子水、甲醇、乙醇、丙酮与4-甲基-2-戊酮的组合。
优选地，步骤(2)所述供试样品包括：由顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸组成的固体混合物，和/或，制备硫代苹果酸过程的反应液。
优选地，步骤(3)所述紫外检测器的检测波长为211nm。
优选地，步骤(3)所述流动相A与所述流动相B的体积比为(0～40):(60～100)，例如0:100、2:98、10:90、20:80、30:70或40:60等，优选为(2～30):(70～98)，进一步优选为(10～20):(80～90)；
优选地，所述磷酸水溶液中磷酸的浓度为0.05～0.2wt％，例如0.05wt％、0.08wt％、0.1wt％、0.12wt％、0.15wt％、0.18wt％或0.2wt％等，优选为0.05～0.1wt％，进一步优选为0.1wt％。
优选地，步骤(3)所述柱温为25～45℃，例如25℃、28℃、30℃、32℃、35℃、38℃、40℃、42℃或45℃等，优选为25～35℃，进一步优选为25℃。
优选地，步骤(3)所述流速为0.5～2.0mL/min，例如0.5mL/min、0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min、1.5mL/min、1.8mL/min或2.0mL/min等，优选为0.5～1.0mL/min。
优选地，步骤(3)所述高效液相色谱分析时，标准品溶液和供试样品溶液的进样量各自独立地为5～25μL，例如5μL、8μL、10μL、12μL、15μL、18μL、20μL、22μL或25μL等，优选为10～20μL。
优选地，步骤(3)所述C18液相色谱柱包括ZORBAX Extend-C18液相色谱柱或ZORBAX SB-Aq液相色谱柱。
优选地，步骤(3)所述C18液相色谱柱的尺寸为：长150mm，直径2.1～4.6mm，例如2.1mm、2.2mm、2.5mm、3.0mm、3.2mm、3.5mm、3.8mm、4.0mm、4.2mm或4.6mm等，涂层厚度为3.5～5μm，例如3.5μm、3.8μm、4.0μm、4.2μm、4.5μm、4.8μm或5μm等。
作为本发明优选的技术方案，所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法包括如下步骤：
(1)称取顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品，加入溶剂，配制标准品溶液；
(2)以由顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸组成的固体混合物为供试样品，加入溶剂配制成供试样品溶液；或，以制备硫代苹果酸过程的反应液为供试样品，加入溶剂稀释成供试样品溶液；
(3)分别取步骤(1)所得标准品溶液和步骤(2)所得供试样品溶液，进行高效液相色谱分析，分析条件为：色谱柱为C18液相色谱柱，长150mm，直径2.1～4.6mm，涂层厚度为3.5～5μm，柱温为25～45℃，流动相A为甲醇，流动相B为磷酸水溶液，所述磷酸水溶液中磷酸的浓度为0.05～0.2wt％，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(0～40):(60～100)，标准品溶液和供试样品溶液的进样量各自独立地为5～25μL，流速为0.5～2.0mL/min，紫外检测器的检测波长为200～235nm，通过外标法获得顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量。
本发明所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法具有广泛的用途，适用于需要对硫代苹果酸、顺丁烯二酸酐或硫脲进行定量分析的情况。例如，所述方法用于定量分析合成硫代苹果酸的原料纯度，或定量分析合成硫代苹果酸反应液中顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量，或定量分析硫代苹果酸的纯度。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1.本发明提供的快速定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法样品前处理过程简单，且所述方法操作简便，通过选择检测条件合适的流动相和固定相，与其他分析条件互相配合，实现了顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的有效吸附和适时脱附，实现三者的高效分离，能够快速地同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量，且具有较高的灵敏性、准确性、稳定性和重现性；硫脲检测限低于0.52mg/L，顺丁烯二酸酐检测限低于0.55mg/L，硫代苹果酸检测限低于0.23mg/L；硫脲精密度RSD低于0.54％，顺丁烯二酸酐精密度RSD低于0.16％，硫代苹果酸精密度RSD低于0.78％；稳定性RSD低于0.29％；重复性RSD低于0.36％，硫脲回收率在99.20wt％以上，顺丁烯二酸酐回收率在99.68wt％以上，硫代苹果酸回收率在99.94wt％以上；
2.本发明以高效液相色谱为测定仪器，C18柱为色谱柱，甲醇-磷酸水溶液为流动相，可方便地测定顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，方法适用性强；其专属性、重复性、准确度表现也良好；对仪器的要求和操作人员的操作熟练程度的要求较低，很容易普及推广。
附图说明
图1为本发明实施例1中标准品溶液的液相色谱图；
图2为本发明实施例1中供试样品溶液的液相色谱图；
图3为本发明实施例1得到的顺丁烯二酸酐的线性回归曲线；
图4为本发明实施例1得到的硫脲的线性回归曲线；
图5为本发明实施例1得到的硫代苹果酸的线性回归曲线。
图中A1为供试样品中硫脲的峰面积；A2为供试样品中顺丁烯二酸酐的峰面积；A3为供试样品中硫代苹果酸的峰面积；c1为供试样品高效液相色谱中硫脲的浓度；c2为供试样品高效液相色谱中顺丁烯二酸酐的浓度；c3为供试样品高效液相色谱中硫代苹果酸的浓度。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。但下述的实施例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。
本发明所述的具体实施方式所用的实验仪器与试剂如下：
Agilent高效液相色谱系统：四元泵G1311A，在线脱气机G1379A，自动进样器G1329A，可变波长检测1314A；
试剂：所用甲醇为色谱纯，磷酸为优级纯试剂，标准品为色谱纯。
顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸含量的检测步骤为：
(1)称取顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品，加入溶剂，配制标准品溶液；
(2)称取供试的顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸样品，加入溶剂使样品溶解，或直接移取硫代苹果酸制备过程反应液，加溶剂稀释，得到供试样品溶液；
(3)分别取标准品溶液和供试样品溶液，进行高效液相色谱分析，分析条件为：色谱柱为C18液相色谱柱，柱温25～45℃，流动相为甲醇和磷酸水溶液，流速0.5～2.0mL/min、检测波长200～280nm条件下；分别记录峰面积，并按照顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品的峰面积对照顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品的浓度，得到回归方程，带入供试样品溶液的峰面积，得到样品中顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量。
实施例1
一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，包括如下步骤：
(1)配制标准品溶液：
分别称取0.0487g硫脲标准品、0.0509g顺丁烯二酸酐标准品和0.2234g硫代苹果酸标准品置于100mL容量瓶中，用溶剂溶解后定容至刻度，摇匀作为基准标准品溶液，基准标准品溶液的浓度记为X；将基准标准品溶液用溶剂稀释，配成浓度为0.01X、0.02X、0.04X、0.1X、0.2X、0.5X和1.0X的标准品溶液；
(2)将步骤(1)配制的标准溶液注入液相色谱仪进行测定；
所述液相色谱仪采用紫外检测器，检测波长为211nm；色谱柱为ZORBAX Extend-C18液相色谱柱(150×4.6mm，5μm)；柱温25℃；流动相为甲醇:磷酸水溶液＝10:90；磷酸水溶液浓度为0.1wt％；流速1.0mL/min；样品进样量为10μL；
(3)记录液相色谱仪检测到的峰面积，如图1所示，分别依据顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的峰面积和对应浓度进行线性回归分析，得到回归曲线：
硫脲：A1＝43.0615c1+244.8828,R2＝0.9953
顺丁烯二酸酐：A2＝14.5405c2+37.7548,R2＝0.9995；
硫代苹果酸：A3＝2.509c3+10.3277,R2＝0.9999
其中，A1为供试样品中硫脲的峰面积；A2为供试样品中顺丁烯二酸酐的峰面积；A3为供试样品中硫代苹果酸的峰面积；c1为供试样品高效液相色谱中硫脲的浓度；c2为供试样品高效液相色谱中顺丁烯二酸酐的浓度；c3为供试样品高效液相色谱中硫代苹果酸的浓度。所得到的回归曲线如图3～5所示。
(4)确定检测限
将顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的标准品溶液逐级稀释，分别注入液相色谱仪，记录检测峰的高度(峰高)，当峰高为基线噪声的10倍高时，此时的浓度为检测限：其中，硫脲的检测限为0.48mg/L，顺丁烯二酸酐的检测限为0.51mg/L，硫代苹果酸的检测限为0.19mg/L；
(5)确定仪器的精密度
在步骤(2)所述的色谱条件下，精密吸取顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的标准品溶液10μL，重复进样6次，测定其峰面积积分值，结果见表1。由测定结果可以看出，硫脲、顺丁烯二酸酐和硫代苹果酸的相对偏差RSD均小于1.0％，测定结果的可靠性可以满足分析要求。
表1
Figure BDA0001811678150000101
(6)确定检测方法的稳定性
分别称取0.0149g硫脲，0.0309g顺丁烯二酸酐和0.0916g硫代苹果酸样品于50mL容量瓶中，用溶剂溶解并定容，充分摇匀，0.45μm微膜过滤，制成供试溶液，在0h、2h、4h、6h、8h、10h和12h时注入液相色谱仪进行分析，测定其峰面积，观察峰面积的变化，以此来验证HPLC方法的稳定性，结果见表2。
表2
Figure BDA0001811678150000102
由表2中结果可以看出，在12h内，硫脲、顺丁烯二酸酐和硫代苹果酸的峰面积积分值变化不大，所有RSD均小于0.5％，说明供试品在12小时内稳定可以满足分析要求。
(7)测试方法的重复性
精密称取与步骤(6)硫脲、顺丁烯二酸酐和硫代苹果酸样品各5份，置于50mL容量瓶中，用高纯水溶解并定容至刻度，充分摇匀，0.45μm微膜过滤，每种样品均制成5份供试溶液；以步骤(2)所述的液相色谱仪的检测条件进行测定，通过测定的峰面积，结合相应的回归曲线，计算硫脲、顺丁烯二酸酐和硫代苹果酸样品的含量，结果见表3。
表3
编号 硫脲含量(wt％) 顺丁烯二酸酐含量(wt％) 硫代苹果酸含量(wt％)
1 99.22 99.37 98.39
2 98.92 99.58 98.93
3 99.15 99.75 99.21
4 99.19 99.43 99.03
5 99.03 99.67 98.67
RSD 0.08％ 0.16％ 0.32％
由测定结果可以看出：
硫脲的平均含量为99.15％；顺丁烯二酸酐样品的平均含量为99.56％；硫代苹果酸样品的平均含量为98.85％；且三种样品含量的RSD均小于0.5％，说明本研究建立的HPLC方法的重复性好。
(8)测试方法的回收率
分别称取9份与步骤(6)同一批的硫脲、顺丁烯二酸酐和硫代苹果酸样品适量(约相当于含样品12.5mg)，置于100mL容量瓶中，每种样品都分为3组，每组3份，每组分别加入标示量80％、100％、120％的硫脲、顺丁烯二酸酐和硫代苹果酸对照品，加溶剂溶解，稀释至刻度进行定容，得到添加有标准品的供试样品溶液；以步骤(2)所述的液相色谱仪的检测条件进行测定，通过测定的峰面积，结合对应样品的回归曲线，计算样品的含量；计算加标回收率＝(实测量-样品量)/加入量×100％，结果见表4～6，表4为硫脲的加标回收率测试结果，表5为顺丁烯二酸酐的加标回收率测试结果，表6为硫代苹果酸的加标回收率测试结果。
由测定结果可以看出：硫脲、顺丁烯二酸酐和硫代苹果酸的平均加标回收率分别为99.28％、99.75％和100.24％，且加标回收率的相对标准偏差RSD均小于1.5％，说明建立的同时分析检测三者的HPLC方法的加标回收率合格。
表4
Figure BDA0001811678150000121
表5
Figure BDA0001811678150000131
表6
Figure BDA0001811678150000132
实施例2
一种定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲原料纯度的测定方法，采用实施例1所确立的测试方法，对于顺丁烯二酸酐和硫脲原料的纯度进行测定，具体包括如下步骤：
(1)配制供试样品溶液：精密称取顺丁烯二酸酐50mg和硫脲40mg置于100mL容量瓶中，加入去离子水完全溶解固体样品，并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过即得供试样品溶液；
(2)将步骤(1)得到的供试样品溶液注入高效液相色谱仪中，进行分析，分析条件为：
ZORBAXSB-Aq液相色谱柱(150×2.1mm，3.5μm)；柱温35℃；流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液＝30:70；流速为1.0mL/min；检测波长为211nm；样品进样量为10μL；
(3)记录高效液相色谱仪中顺丁烯二酸酐和硫脲的峰面积，并带入实施例1得到的硫代苹果酸的回归曲线，求得硫代苹果酸的纯度；
结果显示，本实施例中顺丁烯二酸酐的峰面积为7273.6，顺丁烯二酸酐含量497.63mg/L，纯度为99.5％(标示值为>99.5％)，硫脲的峰面积为17329.8，硫脲的含量为396.76mg/L，纯度99.2％(标示值>99％)。
实施例3
一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，采用实施例1所确立的测试方法，对于硫代苹果酸制备反应液中顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量进行测定，具体包括如下步骤：
(1)配制供试样品溶液：精确移取硫代苹果酸制备反应液0.5mL置于50mL容量瓶中，加入高纯水稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过即得供试样品溶液；
(2)将步骤(1)得到的供试样品溶液注入高效液相色谱仪中，进行分析，分析条件为：ZORBAXExtend-C18液相色谱柱(150×4.6mm，5μm)；柱温25℃；流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液＝10:90；流速为1.0mL/min；检测波长为211nm；样品进样量10μL；
(3)记录高效液相色谱仪中顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的峰面积，并带入实施例1得到的回归曲线，得顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量；
结果显示，本实施例中反应液中顺丁烯二酸酐含量为5.73mg/mL，硫脲含量为3.52mg/mL，硫代苹果酸含量为28.8mg/mL，顺丁烯二酸酐转化率为97.75％，硫脲转化率为98.08％，硫代苹果酸收率为96.03％。
实施例4
一种同时定量分析硫代苹果酸纯度的测定方法，采用实施例1所确立的测试方法，对于制备的硫代苹果酸产品纯度进行测定，具体包括如下步骤：
(1)配制供试样品溶液：精密称取硫代苹果酸产品17.5mg置于50mL容量瓶中，加入4-甲基-2-戊酮溶剂完全溶解固体样品，并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过即得供试样品溶液；
(2)将步骤(1)得到的供试样品溶液注入高效液相色谱仪中，进行分析，分析条件为：ZORBAXSB-Aq液相色谱柱(150×2.1mm，3.5μm)；柱温35℃；流动相为甲醇-0.1％磷酸水溶液＝10:90；流速0.5mL/min；检测波长211nm；样品进样量20μL；
(3)记录高效液相色谱仪中硫代苹果酸的峰面积，并带入实施例1得到的硫代苹果酸的回归曲线，求得硫代苹果酸的纯度；
结果显示，本实施例中硫代苹果酸的峰面积883.8，硫代苹果酸的含量为348.14mg/L，纯度为99.5％。
实施例5
与实施例1的区别仅在于：检测波长为235nm。
实施例6
与实施例1的区别仅在于：检测波长为200nm。
实施例7
与实施例1的区别仅在于：柱温为45℃。
实施例8
与实施例1的区别仅在于：流动相为甲醇:磷酸水溶液＝40:60。
实施例9
与实施例1的区别仅在于：磷酸水溶液浓度为0.2wt％。
实施例10
与实施例1的区别仅在于：流动相为甲醇:磷酸水溶液＝20:80。
实施例11
与实施例1的区别仅在于：磷酸水溶液浓度为0.05wt％。
实施例12
与实施例1的区别仅在于：流速为0.5mL/min。
实施例13
与实施例1的区别仅在于：流速为2.0mL/min。
实施例14
与实施例1的区别仅在于：样品进样量为5μL。
实施例15
与实施例1的区别仅在于：样品进样量为25μL。
实施例16
色谱柱型号为ZORBAX SB-Aq液相色谱柱(150×2.1mm，3.5μm)。各实施例的检测限、精密度、稳定性、重复性等数据整理于表7～8。
表7
Figure BDA0001811678150000171
表7中脲表示硫脲，酐表示顺丁烯二酸酐，酸表示硫代苹果酸。
表8
Figure BDA0001811678150000181
表8中脲表示硫脲，酐表示顺丁烯二酸酐，酸表示硫代苹果酸。
本发明通过选择检测条件合适的流动相和固定相，与其他分析条件互相配合，实现了顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的有效吸附和适时脱附，实现三者的高效分离，能够快速地同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量，且具有较高的灵敏性、准确性、稳定性和重现性，硫脲检测限低于0.52mg/L，顺丁烯二酸酐检测限低于0.55mg/L，硫代苹果酸检测限低于0.23mg/L；硫脲精密度RSD低于0.54％，顺丁烯二酸酐精密度RSD低于0.16％，硫代苹果酸精密度RSD低于0.78％；稳定性RSD低于0.29％；重复性RSD低于0.36％，硫脲回收率在99.20wt％以上，顺丁烯二酸酐回收率在99.68wt％以上，硫代苹果酸回收率在99.94wt％以上。
此外，实施例6～9与实施例5的检测限、精密度、稳定性、重复性数据等效果相当，将实施例10～16与实施例1的检测限、精密度、稳定性、重复性数据等效果相当。说明本发明通过优化检测条件优化了测试方法的灵敏性、准确性、稳定性和重现性准确度，各条件之间具有协同作用。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细分析方法和分析流程，但本发明并不局限于上述详细分析方法和分析流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细分析方法和分析流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明流动相组成，柱温、流速、进样量，色谱柱的等效替换等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (18)

1.一种同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)称取顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品，加入溶剂，配制标准品溶液；
(2)以顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸组成的混合物为供试样品，加入溶剂配制成供试样品溶液；
(3)分别取步骤(1)所得标准品溶液和步骤(2)所得供试样品溶液，进行高效液相色谱分析，分析条件为：色谱柱为C18液相色谱柱，柱温为25～45℃，流动相A为甲醇，流动相B为磷酸水溶液，流速为0.5～2.0mL/min，紫外检测器的检测波长为200～235nm，通过外标法获得顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量；
其中步骤(1)和步骤(2)的先后顺序不限；
步骤(1)和步骤(2)所述的溶剂各自独立地为去离子水、甲醇、乙醇、丙酮或4-甲基-2-戊酮中的任意一种或至少两种的组合；
步骤(3)所述流动相A与所述流动相B的体积比为(0～40):(60～100)。
2.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(2)所述供试样品包括：由顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸组成的固体混合物，和/或，制备硫代苹果酸过程的反应液。
3.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述紫外检测器的检测波长为211nm。
4.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述流动相A与所述流动相B的体积比为(2～30):(70～98)。
5.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述流动相A与所述流动相B的体积比为(10～20):(80～90)。
6.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，所述磷酸水溶液中磷酸的浓度为0.05～0.2wt％。
7.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，所述磷酸水溶液中磷酸的浓度为0.05～0.1wt％。
8.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，所述磷酸水溶液中磷酸的浓度为0.1wt％。
9.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述柱温为25～45℃。
10.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述柱温为25～35℃。
11.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述柱温为25℃。
12.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述流速为0.5～2.0mL/min。
13.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述流速为0.5～1.0mL/min。
14.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述高效液相色谱分析时，标准品溶液和供试样品溶液的进样量各自独立地为5～25μL。
15.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述高效液相色谱分析时，标准品溶液和供试样品溶液的进样量各自独立地为10～20μL。
16.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述C18液相色谱柱包括ZORBAX Extend-C18液相色谱柱或ZORBAX SB-Aq液相色谱柱。
17.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，步骤(3)所述C18液相色谱柱的尺寸为：长150mm，直径2.1～4.6mm，涂层厚度为3.5～5μm。
18.如权利要求1所述的同时定量分析顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)称取顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸标准品，加入溶剂，配制成标准品溶液；
(2)以由顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸组成的固体混合物为供试样品，加入溶剂配制成供试样品溶液；或，以制备硫代苹果酸过程的反应液为供试样品，加入溶剂稀释成供试样品溶液；
(3)分别取步骤(1)所得标准品溶液和步骤(2)所得供试样品溶液，进行高效液相色谱分析，分析条件为：色谱柱为C18液相色谱柱，长150mm，直径2.1～4.6mm，涂层厚度为3.5～5μm，柱温为25～45℃，流动相A为甲醇，流动相B为磷酸水溶液，所述磷酸水溶液中磷酸的浓度为0.05～0.2wt％，所述流动相A与所述流动相B的体积比为(0～40):(60～100)，标准品溶液和供试样品溶液的进样量各自独立地为5～25μL，流速为0.5～2.0mL/min，紫外检测器的检测波长为200～235nm，通过外标法获得顺丁烯二酸酐、硫脲和硫代苹果酸的含量。
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