CN114354801B - （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法 - Google Patents

（R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114354801B
CN114354801B CN202111668211.9A CN202111668211A CN114354801B CN 114354801 B CN114354801 B CN 114354801B CN 202111668211 A CN202111668211 A CN 202111668211A CN 114354801 B CN114354801 B CN 114354801B
Authority
CN
China
Prior art keywords
aminopyridine
isomers
contents
boc
aminopiperidine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111668211.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114354801A (zh
Inventor
徐东
文霞
张文玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zibo High And New Technology Industry Development Districk Biomedicine Research Institute
Shandong University
Original Assignee
Zibo High And New Technology Industry Development Districk Biomedicine Research Institute
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zibo High And New Technology Industry Development Districk Biomedicine Research Institute, Shandong University filed Critical Zibo High And New Technology Industry Development Districk Biomedicine Research Institute
Priority to CN202111668211.9A priority Critical patent/CN114354801B/zh
Publication of CN114354801A publication Critical patent/CN114354801A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114354801B publication Critical patent/CN114354801B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种(R)‑3‑Boc‑氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法。所述的分析方法，利用三重四级‑气质联用仪一次性测定(R)‑3‑Boc‑氨基哌啶中2‑氨基吡啶、3‑氨基吡啶和4‑氨基吡啶的含量，采用直接进样，色谱柱采用DB‑624MS毛细管柱，质谱采用MRM模式，以标准曲线法分析三种氨基吡啶异构体的含量。本发明的分析方法克服了三种氨基吡啶同分异构体性质相近、分离困难的难点，且节约了检测时间，检测方法高效，结果准确。

Description

(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，具体涉及一种(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法。
背景技术
苯甲酸阿格列汀是一种能高效、高度选择性抑制二肽基肽酶-Ⅳ的降血糖药物，主要用于Ⅱ型糖尿病的治疗。目前苯甲酸阿格列汀主要是以3-氰基溴苄和3-甲基6-氯尿嘧啶为起始原料，经过一步反应后与(R)-3-Boc-氨基哌啶反应生成阿格列汀，再与苯甲酸成盐制得。
因此，在降血糖药物苯甲酸阿格列汀的合成过程中，有可能因原料的因素而引入氨基吡啶类基因毒性杂质，而对上述药物的用药安全性造成影响。
此外，2-氨基吡啶、3-氨基吡啶和4-氨基吡啶均为极性化合物，在反相色谱条件下保留较弱，且3种氨基吡啶化合物互为同分异构体，理化性质较为相似，为这些化合物的分离和测定带来了严峻的挑战。
专利CN105974036A提供给了一种氨基吡啶异构体的检测方法，该方法是采用高效液相色谱法进行的，包括下述步骤：(1)配制起始原料样品溶液；(2)将样品溶液注高效液相色谱仪，采用流动相进行等度洗脱，并记录色谱图；其中，所述高效液相色谱法的色谱柱固定相用直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为填充剂；流动相正庚烷-异丙醇-二乙胺为流动相。该专利并未给出检测方法的精密度和检测限分析，无法得知该检测方法的灵敏度和准确性，且其采用高效液相色谱法，由于高效液相色谱法检测器固有的局限性，其灵敏度远不如质谱。质谱对化合物的分离能力更强，即使在色谱上没有完全分离开，但通过MS的特征离子质量色谱图也能分别画出它们各自的色谱图来进行定性定量；且与高效液相色谱法相比，质谱法所能达到的检测限更低，且具备高灵敏度，特别是对于那些没有紫外吸收的样品，用质谱检测优势更为明显。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：提供一种(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，克服了同分异构体性质相近、分离困难的难点，且节约了检测时间，检测方法高效，结果准确。
本发明所述的(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，利用三重四级-气质联用仪一次性测定(R)-3-Boc-氨基哌啶中2-氨基吡啶、3-氨基吡啶和4-氨基吡啶的含量，采用直接进样，色谱柱采用DB-624 MS毛细管柱，质谱采用MRM模式，以标准曲线法分析三种氨基吡啶异构体的含量。
具体地，所述(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，包括以下步骤：
(1)设置三重四级-气质联用仪的气相色谱及质谱的参数条件；
(2)将配制好的对照品和供试品溶液置于液相小瓶中，采用直接进样，采集数据，然后进行分析测试；
(3)分析结束之后，利用标准曲线，根据待测供试品溶液中测得三种氨基吡啶异构体的峰面积计算溶液中三种氨基吡啶异构体浓度，进行定量分析。
所述气相色谱的参数条件为：
进样方式为直接进样；
进样量为2.0μl；
色谱柱为DB-624 MS毛细管柱，30m×0.32mm，厚1.8μm；
载气为氦气；
载气流速为1.5ml/min，分流比为5:1；
进样口温度为250℃；
升温程序为以80℃为初始柱温，保持5min，以45℃/min的速率升至240℃，保持10min。
所述质谱的参数条件为：
采用MRM模式，离子对为94>67；
接口温度为260℃；
离子源温度为230℃；
溶剂延迟时间为1.0min。
所述标准曲线是通过配制线性标准溶液，依次注入气质联用仪，以各线性溶液浓度对峰面积作回归曲线。
作为一种优选方案，标准曲线可以采用以下方法制作：
(1)以乙腈为溶剂，配制2-氨基吡啶、3-氨基吡啶和4-氨基吡啶3种混标贮备液，浓度为2μg/ml；
(2)分别精密量取2μg/ml的3种混标贮备液适量，用乙腈稀释制得60ng/ml、150ng/ml、300ng/ml、450ng/ml、600ng/ml的线性溶液；
(3)设置气相色谱及质谱的参数条件，然后依次分析线性溶液，以各线性溶液浓度对峰面积分别作回归曲线。
三种氨基吡啶异构体的回归曲线方程如下：
2-氨基吡啶：Y＝7777.738X-10901.6，r＝0.9958；
3-氨基吡啶：Y＝5073.312X-30744.42，r＝0.9961；
4-氨基吡啶：Y＝4351.43X-10929.28，r＝0.9986。
所述供试品溶液的制备方法为：取供试品5mg，精密称定，置液相小瓶中，加乙腈1ml，涡旋溶解，即得供试品溶液。
将配制好的供试品溶液置于液相小瓶中，采用直接进样，采集数据，然后根据三种氨基吡啶异构体的峰面积计算溶液中三种氨基吡啶异构体浓度，以标准曲线法分析三种氨基吡啶异构体的含量。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明的检测分析方法无需利用传统方法进行有机物含量的提取、浓缩、净化等前处理工作，减轻了供试品前处理工作。
(2)本发明的检测分析方法可同时测定3种氨基吡啶，3种氨基吡啶异构体之间的分离度良好，专属性强、精密度好，准确度高，方便快捷，效率高；
(3)本发明的检测分析方法气相进样口、色谱柱和质谱检测器离子源污染程度减轻，维护工作相对简单。
附图说明
图1为2-氨基吡啶标准曲线图；
图2为3-氨基吡啶标准曲线图；
图3为4-氨基吡啶标准曲线图；
图4为线性溶液C5中3种氨基吡啶的总离子流图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例中所用到的仪器设备如下：
三重四级-气质联用仪，质谱为Agilent Technologies 7000三重四级杆；气相为Agilent Technologies 7890A。
实施例中所用到的试剂、溶液如下：
以乙腈为溶剂配制的2μg/ml的2-氨基吡啶、3-氨基吡啶和4-氨基吡啶3种混标贮备液。
实施例中的分析条件参数如下：
气相色谱的参数条件为：进样方式为直接进样；进样量为2.0μl；色谱柱为DB-624MS毛细管柱，30m×0.32mm，厚1.8μm；载气为氦气；载气流速为1.5ml/min，分流比为5:1；进样口温度为250℃；升温程序为以80℃为初始柱温，保持5min，以45℃/min的速率升至240℃，保持10min。
质谱的参数条件为：采用MRM模式，离子对为94>67；接口温度为260℃；离子源温度为230℃；溶剂延迟时间为1.0min。
实施例1
线性、线性范围分析：
步骤如下：
分别精密量取2μg/ml的3种混标贮备液适量，用乙腈稀释制得60ng/ml、150ng/ml、300ng/ml、450ng/ml、600ng/ml的线性溶液；进样检测，然后依次分析线性溶液，以各线性溶液浓度对峰面积分别作回归曲线。
结果讨论：
2-氨基吡啶标准曲线如图1所示，Y＝7777.738X-10901.6，r＝0.9958；2-氨基吡啶在60.63～606.30ng/ml之间呈线性关系；相关系数r＝0.9958，大于0.995；截距比为0.46％，小于25％。
3-氨基吡啶标准曲线如图2所示，Y＝5073.312X-30744.42，r＝0.9961；3-氨基吡啶在59.29～592.85ng/ml之间呈线性关系；相关系数r＝0.9961，大于0.995；截距比为2.09％，小于25％。
4-氨基吡啶标准曲线如图3所示，Y＝4351.43X-10929.28，r＝0.9986；4-氨基吡啶在60.45～604.49ng/ml之间呈线性关系；相关系数r＝0.9986，大于0.995；截距比为0.84％，小于25％。
3种氨基吡啶在供试品溶液浓度的12ppm～120ppm(60～600ng/ml)之间呈良好线性关系。
实施例2
精密度分析：
步骤如下：
136％加标供试品溶液：精密称取(R)-3-Boc-氨基哌啶约5mg，置液相小瓶中，加约2μg/ml的3种混标贮备液150μl，再加乙腈850μl，涡旋溶解，即得；同法配制6份。
结果讨论：
2-氨基吡啶、3-氨基吡啶、4-氨基吡啶的精密度考察结果分别如表1-3所示。
表1 2-氨基吡啶的精密度考察结果
表2 3-氨基吡啶的精密度考察结果
表3 4-氨基吡啶的精密度考察结果
实施例3
准确度分析：
步骤如下：
(1)68％加标供试品溶液：精密称取(R)-3-Boc-氨基哌啶约5mg，置液相小瓶中，加约2μg/ml的3种混标贮备液75μl，再加乙腈925μl，涡旋溶解，即得；同法配制3份。
(2)136％加标供试品溶液：精密称取(R)-3-Boc-氨基哌啶约5mg，置液相小瓶中，加约2μg/ml的3种混标贮备液150μl，再加乙腈850μl，涡旋溶解，即得；同法配制3份。
(3)204％加标供试品溶液：精密称取(R)-3-Boc-氨基哌啶约5mg，置液相小瓶中，加约2μg/ml的3种混标贮备液225μl，再加乙腈775μl，涡旋溶解，即得；同法配制3份。
结果讨论：
2-氨基吡啶、3-氨基吡啶、4-氨基吡啶的准确度分析结果分别如表4-6所示。
表4 2-氨基吡啶的准确度分析结果
表5 3-氨基吡啶的准确度分析结果
表6 4-氨基吡啶的准确度分析结果
实施例4
检测限分析：
步骤如下：
分别精密量取2μg/ml的3种混标贮备液适量，用乙腈稀释制得40ng/ml的检测限溶液，进样检测，然后依次分析。
结果讨论：
3-氨基吡啶、3-氨基吡啶、4-氨基吡啶的检测限分析结果如表7所示。
表7检测限分析结果
实施例5
供试品分析：
步骤如下：
分别取不同批次的供试品约5mg，精密称定，置液相小瓶中，加乙腈1ml，涡旋溶解，即得供试品溶液；将配制好的供试品溶液置于液相小瓶中，采用直接进样，采集数据，然后根据三种氨基吡啶异构体的峰面积计算溶液中三种氨基吡啶异构体浓度，以标准曲线法分析三种氨基吡啶异构体的含量。
杂质含量(ppm)＝(C*V样)/M样；
其中：C：仪器测得浓度(ng/ml)；
V样：溶解供试品使用的溶剂体积(ml)，1ml；
M样：称取供试品的质量(mg)。
结果讨论：
不同批次的供试品中2-氨基吡啶、3-氨基吡啶、4-氨基吡啶的含量分析结果如表8所示。
表8供试品中三种氨基吡啶含量的分析结果
由上述实施例可见，本发明的分析方法可同时测定3种氨基吡啶，2-氨基吡啶、3-氨基吡啶、4-氨基吡啶之间的分离度良好，专属性强、精密度好，准确度高，检出限低，检测方法高效、准确。

Claims (5)

1.一种(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，其特征在于：利用三重四级-气质联用仪一次性测定(R)-3-Boc-氨基哌啶中2-氨基吡啶、3-氨基吡啶和4-氨基吡啶的含量，包括以下步骤：
(1)设置三重四级-气质联用仪的气相色谱及质谱的参数条件；
(2)将配制好的对照品和供试品溶液置于液相小瓶中，采用直接进样，采集数据，然后进行分析测试；
所述供试品溶液的制备方法为：取供试品5mg，精密称定，置液相小瓶中，加乙腈1ml，涡旋溶解，即得供试品溶液；
(3)分析结束之后，利用标准曲线，根据待测供试品溶液中测得三种氨基吡啶异构体的峰面积计算溶液中三种氨基吡啶异构体浓度，进行定量分析；
所述气相色谱的参数条件为：
进样方式为直接进样；
进样量为2.0μl；
色谱柱为DB-624MS毛细管柱，30m×0.32mm，厚1.8μm；
载气为氦气；
载气流速为1.5ml/min，分流比为5:1；
进样口温度为250℃；
升温程序为以80℃为初始柱温，保持5min，以45℃/min的速率升至240℃，保持10min；
所述质谱的参数条件为：
采用MRM模式，离子对为94>67；
接口温度为260℃；
离子源温度为230℃；
溶剂延迟时间为1.0min。
2.根据权利要求1所述的(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，其特征在于：所述标准曲线是通过配制线性标准溶液，依次注入气质联用仪，以各线性溶液浓度对峰面积作标准曲线。
3.根据权利要求2所述的(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，其特征在于：标准曲线采用以下方法制作：
(1)以乙腈为溶剂，配制2-氨基吡啶、3-氨基吡啶和4-氨基吡啶3种混标贮备液，浓度为2μg/ml；
(2)分别精密量取2μg/ml的3种混标贮备液适量，用乙腈稀释制得60ng/ml、150ng/ml、300ng/ml、450ng/ml、600ng/ml的线性溶液；
(3)设置气相色谱及质谱的参数条件，然后依次分析线性溶液，以各线性溶液浓度对峰面积分别作标准曲线。
4.根据权利要求1-3任一项所述的(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，其特征在于：三种氨基吡啶异构体的标准曲线方程如下：
2-氨基吡啶：Y＝7777.738X-10901.6，r＝0.9958；
3-氨基吡啶：Y＝5073.312X-30744.42，r＝0.9961；
4-氨基吡啶：Y＝4351.43X-10929.28，r＝0.9986。
5.根据权利要求1所述的(R)-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法，其特征在于：定量分析过程为：将配制好的供试品溶液置于液相小瓶中，采用直接进样，采集数据，然后根据三种氨基吡啶异构体的峰面积计算溶液中三种氨基吡啶异构体浓度，以标准曲线法分析三种氨基吡啶异构体的含量。
CN202111668211.9A 2021-12-31 2021-12-31 （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法 Active CN114354801B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111668211.9A CN114354801B (zh) 2021-12-31 2021-12-31 （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111668211.9A CN114354801B (zh) 2021-12-31 2021-12-31 （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114354801A CN114354801A (zh) 2022-04-15
CN114354801B true CN114354801B (zh) 2023-07-18

Family

ID=81104880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111668211.9A Active CN114354801B (zh) 2021-12-31 2021-12-31 （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114354801B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115184486B (zh) * 2022-06-27 2023-07-18 河北一品生物医药有限公司 一种高效液相色谱法检测磷酸二氨基吡啶有关物质的方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1475632B1 (en) * 2002-02-14 2013-05-22 Ajinomoto Co., Inc. Method of analyzing aminofunctional compound and analytical reagent
CN105974036A (zh) * 2016-07-31 2016-09-28 合肥远志医药科技开发有限公司 一种氨基吡啶异构体的检测方法
CN110618208A (zh) * 2019-09-10 2019-12-27 威海迪素制药有限公司 一种（s）-（+）-3-羟基四氢呋喃对映异构体含量检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114354801A (zh) 2022-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106814150B (zh) 一种同位素稀释超高效液相色谱质谱联用测定维生素k1的方法
Sun et al. Determination of volatile organic acids in oriental tobacco by needle-based derivatization headspace liquid-phase microextraction coupled to gas chromatography/mass spectrometry
CN114354801B (zh) （R）-3-Boc-氨基哌啶中三种氨基吡啶异构体含量的分析方法
CN106033079B (zh) 甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法
CN108061767B (zh) Hplc法分离测定利伐沙班中间体及其相关杂质的方法
CN113092639A (zh) 一种超高效液相色谱质谱联用检测利伐沙班有关物质含量的方法
CN117092251A (zh) 一种半胱氨酸原料中牛磺酸、磺基丙氨酸的检测方法及其应用
CN114280191A (zh) 一种双半胱氨酸及其制剂中有关物质的检测方法
CN113311087B (zh) 一种共聚聚酯塑料中对苯二甲酸含量测定方法
CN111426760B (zh) 一种多索茶碱原料药中基因毒性杂质的测定方法
CN108776180B (zh) 一种同时测定曲咪新乳膏中多种透皮吸收促进剂的检测方法
CN110095554B (zh) 高效液相色谱分析米力农有关物质的方法
CN114354802A (zh) 苯甲酸阿格列汀中两种氰基溴苄异构体含量的分析方法
CN108226340B (zh) 一种分离测定双氟米松及其6β双氟米松和16β双氟米松的方法
CN111077246A (zh) 一种应用超高效液相色谱-串联质谱检测4-甲氧基邻苯二胺的方法
CN112305100B (zh) 一种药物中基因毒性杂质溴化苄含量的检测方法
CN108956809B (zh) 一种检测1-(1-氯乙基)-2,3-二甲苯有关物质的方法
CN109507327B (zh) Gc-aed的无关校正曲线法（cic法）定量测定tnt含量
CN117470991A (zh) 同时测定药品中6-氧代-8-氯辛酸及相关杂质的方法
CN111122742B (zh) 一种待测样品中二巯基聚乙二醇残留量的检测方法
CN109521120B (zh) Gc-aed的无关校正曲线法（cic法）定量测定dntf含量
CN105527365B (zh) 分析α‑氟代丙烯酸甲酯及其有关物质的方法
CN114280190A (zh) 一种用于检测双半胱氨酸有关物质的试剂盒
CN116338025A (zh) 液相色谱-质谱联用仪测定n-亚硝基伐尼克兰的方法
CN118225933A (zh) 一种采用单四级杆质谱仪检测环己氨基甲酸乙酯含量的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant