CN110133123B - 低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法,属于有机酸测定技术领域,包括,配制标准溶液、标准使用液和混合标准曲线工作液;将待测水蜜桃果肉采取旋涡振荡辅助超声提取获得待测液;分别将所述标准溶液和待测液进行高效液相色谱分析,对比水蜜桃色谱图与标准溶液色谱图,根据保留时间进行定性分析,确定有机酸成分;根据各有机酸的峰面积和标准曲线对待测液中有机酸进行定量分析,获得有机酸的浓度;将获得的有机酸的浓度代入公式,计算得到水蜜桃中各有机酸的含量。本发明有机酸测定方法能够提升有机酸在其中的溶解性,提高有机酸的提取率及有机酸的纯度,提高测定方法的准确性、分析速度和灵敏度。

Description

低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
技术领域
本发明属于有机酸测定技术领域,具体涉及低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法。
背景技术
水蜜桃(Prunus persica)在我国的栽培有着悠久的历史,品种繁多,因肉甜汁多、香气浓郁、营养物质丰富而深受人们的青睐。但水蜜桃的采收时间和果实本身薄皮、多汁等特点,导致其极易出现腐败变质,耐贮性较差,以至于可能在采后几天内即完全失去食用及经济价值,我国水蜜桃因采后贮运过程中腐烂、褐变等问题给水蜜桃产业的发展带来极大困难。因此,研究水蜜桃的贮藏保鲜技术非常必要。低温贮藏是多年来贮藏水蜜桃的常用措施,以达到降温去热、隔离有害环境等目的,但果实冷害又极大地降低了该措施的有效性。自发气调包装是用保鲜膜包装水蜜桃,使果实表面的气体浓度维持在稳定的状态下,从而抑制果实的呼吸和乙烯释放,延长保质期的保鲜技术,但还需相关技术的配套使用才能达到最佳效果。辐射保鲜是用高能射线杀灭果实中的病原微生物或抑制果实的生理过程,长期或大量的辐射会降低食品中的纤维素和芳香类物质的含量,影响营养价值。减压贮藏具有操作简单、无化学试剂残留、食用安全性高等优点,但时间过长会导致果实的低氧伤害影响口感。可食性膜具有较好的抗菌防霉效果,可达到有效延长水蜜桃的货架期的作用,但操作不变,要求较高。可见现有的保鲜技术已不能完全满足水蜜桃保鲜的需要,因此,对采后水蜜桃生理变化和保鲜技术的研究具有重大现实意义和商业价值。
水蜜桃含有大量的维生素、蛋白质和各种微量元素,是公认的健康水果,其中的各种有机酸不仅对水果的风味和营养有着重要影响,而且部分有机酸还有着特殊的功效,如抗氧化、防腐和抑菌等。有机酸是三羧酸循环中的一个重要生化特征,水果采摘后,其新陈代谢过程依然在继续,并且不断变化,因此,有机酸也是水果质量的动态判断指标,有机酸组成和含量决定了水蜜桃的口感和营养。因此,有机酸也是水果质量的动态判断指标,现存的有机酸的测定分析方法有很多,主要有液相色谱法,气相色谱法、气象色谱-质谱联用、毛细管电泳-质谱联用法、离子色谱法、酸碱滴定法、纸色谱法、薄层色谱法等,其中应用研究最为广泛的是液相色谱法。液相色谱法的准确度和重复性都比较好,虽然此方法是国标规定的方法,但依然有其局限性,主要体现在样品制备过程中需要使用强阴离子交换固相萃取柱进行分离萃取,然后再洗脱、调pH值、定容方可进样,过程十分繁琐耗时,并且商品化得固相色谱柱并不便宜,增加了检测成本,不利于大批量生产检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够提升有机酸在其中的溶解性,提高有机酸的提取率及有机酸的纯度,提高测定方法的准确性、分析速度和灵敏度的低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法,包括,
S1:配制标准溶液、标准使用液和混合标准曲线工作液;
S2:将待测水蜜桃果肉采取旋涡振荡辅助超声提取获得待测液;
S3:分别将所述标准溶液和待测液进行高效液相色谱分析,对比水蜜桃色谱图与标准溶液色谱图,根据保留时间进行定性分析,确定有机酸成分;
S4:根据各有机酸的峰面积和标准曲线对待测液中有机酸进行定量分析,获得有机酸的浓度;
S5:将获得的有机酸的浓度代入公式,计算得到水蜜桃中各有机酸的含量。
本发明有机酸测定方法在制备待测液中,采取旋涡振荡辅助超声提取浆液中的有机酸,旋涡振荡能使浆液均匀分散于溶剂中,再使用超声加快细胞内物质的溶解、扩散及释放,从浆液中分离沉淀蛋白质、果胶等干扰物质,能较好地保留目标物质,有机酸得率最高,提高测定方法的准确性;此外,不需要使用强阴离子交换固相萃取柱进行分离萃取、再洗脱、调pH值、定容等步骤即可进样。本发明有机酸测定方法待测液制备过程简单,采取旋涡振荡辅助超声提取,就能实现水蜜桃中有机酸的有效分离,耗时短且操作简单,进行仪器分析后,测定方法的分析速度快、灵敏度好、准确性高。
优选的,有机酸分别为:酒石酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸。
优选的,S1的具体步骤为:
标准溶液配制:分别称取酒石酸0.05g,苹果酸0.10g,柠檬酸0.10g,琥珀酸0.25g于50mL小烧杯中,加去离子水溶解,用水转移到100mL容量瓶中,定容,混匀;
标准使用液:标准溶液稀释五个不同浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20mg/mL的标准使用液;
混合标准曲线工作液:分别吸取标准溶液0.5mL酒石酸、1mL苹果酸、1mL柠檬酸、2.5mL琥珀酸于10mL容量瓶中,用磷酸溶液定容至刻度,混匀。
优选的,S2的具体步骤为:水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用溶剂定容,旋涡振荡1-3min,然后在超声功率为200-400W下超声提取10-20min,过滤,滤液于4000-6000r/min下离心8-15min,抽滤,然后将滤液于10000-15000r/min下离心10-20min,静置过夜,上清液过0.22μm滤膜,即为待测液。
更为优选的,溶剂为纯净水。为了进一步提高有机酸的提取效果,溶剂为含有氨基脲或缩二脲或双缩脲的40-60%乙醇。水蜜桃体内中的有机酸通常与蛋白质、多糖以氢键和疏水键形式形成稳定的化合物,而本发明用溶剂具有氢键断裂的作用,尿素可以提供自己胺基上的氢和羰基上的氧去形成氢键,破坏蛋白质中原有氢键,从而使蛋白质构象的维持力降低甚至消失,有利于有机酸的提取,且本发明用溶剂能够提升有机酸在其中的溶解性,提高有机酸的提取率,提高测定方法的准确性。为了提高检定结果的准确性,溶剂中氨基脲或缩二脲或双缩脲的浓度为0.4-0.6M。
更为优选的,定容为:40-60g浆液定容至500mL。
优选的,S2中高效液相色谱条件为:色谱柱:C18柱;柱温:30-40℃;进样量:15-25uL;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇溶液;流速:0.5-1.0ml/min;检测波长:215nm。
更为优选的,0.1%磷酸溶液-甲醇溶液中0.1%磷酸溶液和甲醇溶液的体积比为25-44:1。
优选的,公式为X=(C×V×1000)/(m×1000×1000),式中:
X-试样中有机酸的含量,单位为g/kg;
C-由标准曲线求得试样溶液中某有机酸的浓度,单位为μg/mL;
V-样品溶液定容体积,单位为mL;
m-最终样液代表的试样质量,单位为g;
1000-换算系数。
本发明的另一目的在于提供一种降低果实损耗,可有效延缓水蜜桃品质的下降,显著提高水蜜桃的保鲜效果,延长货架期的水蜜桃的保鲜方法。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为:
一种水蜜桃的保鲜方法,采用100-300V的低压静电场,于0~4℃条件下保鲜。
低压静电场下的水蜜桃有机酸总降幅为25%,酒石酸和苹果酸分别比初期达到了34%和25%的积累,琥珀酸从初期开始一直减少至2.37g/kg,柠檬酸末期则降至0g/kg,本发明保鲜方法可以有效抑制有机酸的消耗,保持水蜜桃品质,保鲜过程中水蜜桃一直保持良好的感官性状。水蜜桃属呼吸跃变型果实,跃变峰出现越早越不耐贮,与其他贮藏条件相比,低压静电场处理可显著减慢有机酸的代谢速率,使水蜜桃呼吸跃变推迟了90天,可达到120d长时间保鲜。综上所述,本发明保鲜方法可以降低果实损耗,可有效延缓水蜜桃品质的下降,显著提高水蜜桃的保鲜效果,延长货架期,品质保证,极大节约成本,方便高效,利于推广应用。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:本发明有机酸测定方法待测液制备过程简单,采取旋涡振荡辅助超声提取,就能实现水蜜桃中有机酸的有效分离,耗时短且操作简单,进行仪器分析后;本发明用溶剂能够提升有机酸在其中的溶解性,提高有机酸的提取率及有机酸的纯度,提高测定方法的准确性、分析速度和灵敏度;本发明保鲜方法可以降低果实损耗,可有效延缓水蜜桃品质的下降,显著提高水蜜桃的保鲜效果,延长货架期,品质保证,极大节约成本,方便高效,利于推广应用。
本发明采用了上述技术方案提供低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法,弥补了现有技术的不足,设计合理,操作方便。
附图标记
图1为本发明实施例1中有机酸混合标准色谱图;
图2为本发明实施例9中保鲜30d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图;
图3为本发明实施例9中保鲜60d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图;
图4为本发明实施例9中保鲜90d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图;
图5为本发明实施例9中保鲜120d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图;
图6为本发明实施例9中水蜜桃有机酸的变化曲线;
图7为本发明试验例1中水蜜桃有机酸的含量。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将对本发明进行更全面的描述,并给出了本发明的较佳实施例。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。
本发明提供一种低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法,包括,
S1:配制标准溶液、标准使用液和混合标准曲线工作液;
S2:将待测水蜜桃果肉采取旋涡振荡辅助超声提取获得待测液;
S3:分别将所述标准溶液和待测液进行高效液相色谱分析,对比水蜜桃色谱图与标准溶液色谱图,根据保留时间进行定性分析,确定有机酸成分;
S4:根据各有机酸的峰面积和标准曲线对待测液中有机酸进行定量分析,获得有机酸的浓度;
S5:将获得的有机酸的浓度代入公式,计算得到水蜜桃中各有机酸的含量。
本发明有机酸测定方法在制备待测液中,采取旋涡振荡辅助超声提取浆液中的有机酸,旋涡振荡能使浆液均匀分散于溶剂中,再使用超声加快细胞内物质的溶解、扩散及释放,从浆液中分离沉淀蛋白质、果胶等干扰物质,能较好地保留目标物质,有机酸得率最高,提高测定方法的准确性;此外,不需要使用强阴离子交换固相萃取柱进行分离萃取、再洗脱、调pH值、定容等步骤即可进样。本发明有机酸测定方法待测液制备过程简单,采取旋涡振荡辅助超声提取,就能实现水蜜桃中有机酸的有效分离,耗时短且操作简单,进行仪器分析后,测定方法的分析速度快、灵敏度好、准确性高。
其中,有机酸分别为:酒石酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸。
S1的具体步骤为:
标准溶液配制:分别称取酒石酸0.05g,苹果酸0.10g,柠檬酸0.10g,琥珀酸0.25g于50mL小烧杯中,加去离子水溶解,用水转移到100mL容量瓶中,定容,混匀;
标准使用液:标准溶液稀释五个不同浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20mg/mL的标准使用液;
混合标准曲线工作液:分别吸取标准溶液0.5mL酒石酸、1mL苹果酸、1mL柠檬酸、2.5mL琥珀酸于10mL容量瓶中,用磷酸溶液定容至刻度,混匀。
S2的具体步骤为:水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将40-60g浆液定容至500mL,旋涡振荡1-3min,然后在超声功率为200-400W下超声提取10-20min,过滤,滤液于4000-6000r/min下离心8-15min,抽滤,然后将滤液于10000-15000r/min下离心10-20min,静置过夜,上清液过0.22μm滤膜,即为待测液。
上述溶剂为纯净水。为了进一步提高有机酸的提取效果和检定结果的准确性,溶剂为含有0.4-0.6M氨基脲或缩二脲或双缩脲的40-60%乙醇。水蜜桃体内中的有机酸通常与蛋白质、多糖以氢键和疏水键形式形成稳定的化合物,而本发明用溶剂具有氢键断裂的作用,尿素可以提供自己胺基上的氢和羰基上的氧去形成氢键,破坏蛋白质中原有氢键,从而使蛋白质构象的维持力降低甚至消失,有利于有机酸的提取,且本发明用溶剂能够提升有机酸在其中的溶解性,提高有机酸的提取率,提高测定方法的准确性。在待测液的提取过程中会有空气进入提取液,使有机酸类物质与O2接触,从而发生氧化、聚合等反应,使有机酸提取率下降,为了避免有机酸类物质与O2接触而发生氧化、聚合等反应,本发明用溶剂中进一步含有浓度为2-5mM的单宁酸,这使得溶剂不仅能够优先和空气中的O2接触,进一步提高有机酸的提取效果,进而提高测定方法的准确性。此外,本发明用溶剂还能在后续提取过程中配合旋涡振荡和超声提取,使得浆液中的蛋白质发生絮凝沉淀,能较好地保留目标物质及提高有机酸的纯度,提高测定方法的分析速度和灵敏度。
上述S2中高效液相色谱条件为:色谱柱:C18柱;柱温:30-40℃;进样量:15-25uL;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇溶液;流速:0.5-1.0ml/min;检测波长:215nm。
上述0.1%磷酸溶液-甲醇溶液中0.1%磷酸溶液和甲醇溶液的体积比为25-44:1。
公式为X=(C×V×1000)/(m×1000×1000),式中:
X-试样中有机酸的含量,单位为g/kg;
C-由标准曲线求得试样溶液中某有机酸的浓度,单位为μg/mL;
V-样品溶液定容体积,单位为mL;
m-最终样液代表的试样质量,单位为g;
1000-换算系数。
本发明还提供一种水蜜桃的保鲜方法,采用100-300V的低压静电场,于0~4℃条件下保鲜。
低压静电场下的水蜜桃有机酸总降幅为25%,酒石酸和苹果酸分别比初期达到了34%和25%的积累,琥珀酸从初期开始一直减少至2.37g/kg,柠檬酸末期则降至0g/kg,本发明保鲜方法可以有效抑制有机酸的消耗,保持水蜜桃品质,保鲜过程中水蜜桃一直保持良好的感官性状。水蜜桃属呼吸跃变型果实,跃变峰出现越早越不耐贮,与其他贮藏条件相比,低压静电场处理可显著减慢有机酸的代谢速率,使水蜜桃呼吸跃变推迟了90天,可达到120d长时间保鲜。综上所述,本发明保鲜方法可以降低果实损耗,可有效延缓水蜜桃品质的下降,显著提高水蜜桃的保鲜效果,延长货架期,品质保证,极大节约成本,方便高效,利于推广应用。
下面,结合具体实施例对本发明实施方式作进一步说明。
实施例1:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
1材料与方法
1.1材料
1.1.1样品和试剂
水蜜桃样品采自江苏无锡;DL-苹果酸、柠檬酸一水合物、DL-酒石酸、丁二酸标准品,纯度≥99%,购于上海安谱实验科技股份有限公司;甲醇(色谱纯),纯度≥99.9%;磷酸(色谱纯),纯度为85~90%,均购于上海晶纯生化科技股份有限公司。其他试剂均为分析纯。
1.1.2主要仪器和设备
Angilent1100高效液相色谱仪;低温高速离心机:株式会社日立制作所;均质仪:常州市均质机械有限公司;涡旋振荡仪:南京东迈科技仪器有限公司;真空抽气泵:东莞市港发真空设备有限公司。
1.2方法
1.2.1试剂配制
标准溶液配制:分别称取酒石酸0.05g,苹果酸0.10g,柠檬酸0.10g,琥珀酸0.25g于50mL小烧杯中,加去离子水溶解,用水转移到100mL容量瓶中,定容,混匀,于4℃保存,此酒石酸溶液、苹果酸溶液,柠檬酸溶液,琥珀酸溶液的质量浓度分别为0.5mg/mL、1mg/mL、1mg/mL、2.5mg/mL。
标准使用液:标准溶液稀释五个不同浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20mg/mL的标准使用液。
酒石酸,苹果酸,柠檬酸,琥珀酸混合标准曲线工作液:分别吸取标准溶液0.5、1、1、2.5mL于10mL容量瓶中,用磷酸溶液定容至刻度,混匀,于4℃保存。
1.2.2样品的前处理
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用纯净水定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
1.2.3色谱条件
C18色谱柱;柱温35℃;进样量20uL;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇溶液;流速0.8ml/min;检测波长215nm。其中,0.1%磷酸溶液-甲醇溶液中0.1%磷酸溶液和甲醇溶液的体积比为30:1
1.3计算
试样中有机酸的含量按下式计算:
X=(C×V×1000)/(m×1000×1000)
式中:
公式为X=(C×V×1000)/(m×1000×1000),式中:
X-试样中有机酸的含量,单位为g/kg;
C-由标准曲线求得试样溶液中某有机酸的浓度,单位为μg/mL;
V-样品溶液定容体积,单位为mL;
m-最终样液代表的试样质量,单位为g;
1000-换算系数。
1.4数据统计分析
通过Agilent ChemStion工作站,根据色谱图中标准品的保留时间和标准品的保留时间比对进行定性分析,根据各有机酸的峰面积和标准曲线对样品中的有机酸进行定量分析,部分数据运用Excel进行分析。
2结果
2.1流速和检测波长的确定
分别在0.8、0.5mL/min的流速下对混合酸进行分离。流速为0.5mL/min时,20min分离分析完成,分析时间较长。流速为0.8mL/min,时,仅10min,就能分析完全,时间缩短一倍,并且分离效果较好,故选择流速为0.8mL/min。四种有机酸在215nm附近均有最大吸收,灵敏度较高并且噪音较小,所以波长选用215nm。
2.2标准曲线的确定
参考GB5009.157-2016方法,将五个不同浓度的标准使用液,在0.01mg/mL-0.20mg/mL的浓度水平内得出不同峰面积的响应值,以进样浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线并计算回归方程,得到有机酸混标色谱图如图1,在该浓度下色谱图检测到5中物质,按时间依次标记为1~5号峰(1~5号峰分别是D-酒石酸、苹果酸、柠檬酸、L-酒石酸、丁二酸)。经实验验证分析可知,由于酒石酸标准品中存在D型L型构象,它们分别被检测出来。标准曲线结果如表1所示。由表1可知,各组分在各自浓度范围内线性关系良好,线性相关系数R2>0.99。
表1标准品的回归方程
Figure BDA0002041837640000081
Figure BDA0002041837640000091
实施例2:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
与实施例1不同之处为样品的前处理,具体为:
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用含有0.5M氨基脲的50%乙醇定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
实施例3:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
与实施例1不同之处为样品的前处理,具体为:
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用含有0.5M缩二脲的50%乙醇定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
实施例4:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
与实施例1不同之处为样品的前处理,具体为:
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用含有0.5M双缩脲的50%乙醇定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
实施例5:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
与实施例1不同之处为样品的前处理,具体为:
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用含有0.5M氨基脲、4mM单宁酸的50%乙醇定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
实施例6:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
与实施例1不同之处为样品的前处理,具体为:
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用含有0.5M缩二脲、4mM单宁酸的50%乙醇定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
实施例7:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
与实施例1不同之处为样品的前处理,具体为:
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用含有0.5M双缩脲、4mM单宁酸的50%乙醇定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
实施例8:
低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法
与实施例1不同之处为样品的前处理,具体为:
水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用50%乙醇定容至500mL,旋涡振荡2min,然后在超声功率为300W下超声提取15min,用纱布过滤,取溶液5000r/min离心10min,抽滤,溶液12000r/min离心15min,静置过夜,上清液过0.22um滤膜,待进样检测。
实施例9:
一种水蜜桃的保鲜方法,采用200V的低压静电场,于0~4℃条件下保鲜。按照实施例1方法提取和测定样品,分别对30、60、90、120d存放下的水蜜桃进行测定。
保鲜30d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图如图2,可以看出,初期水蜜桃中有机酸丰富,均被检测出峰,可知除主要有机酸外的有机酸含量均很少。保鲜30d下,琥珀酸含量较高,为8.01g/kg,柠檬酸最少,只有0.20g/kg,酒石酸和苹果酸分别有4.40g/kg、2.31g/kg,四种有机酸均以一定比例存在,水蜜桃的鲜度、营养价值和口感都很好,总酸含量在影响果实风味方面起着重要作用。酒石酸的酸味比柠檬酸和苹果酸都强,约为柠檬酸的l.2~1.3倍,略带涩味,初期酒石酸含量较少,并不影响口感。柠檬酸和苹果酸为水蜜桃中主要有机酸,在前30d都呈下降趋势,与新鲜水蜜桃相比,水蜜桃中有机酸作为果实呼吸作用的基质被消耗,有机酸比糖多,所以首先被呼吸代谢。
保鲜60d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图如图3,可以看出,随着保鲜时间的延长,琥珀酸含量大大减少,前后两者相差5.46g/kg,消耗率达68.16%,可能是此阶段琥珀酸参与贮藏过程中代谢物质的转化,其他三种有机酸均有一定程度的增加,其中酒石酸增长率最大,为134.7%,苹果酸上升至4.2g/kg,柠檬酸略微上升,有0.67g/kg,水蜜桃的感官性状不受影响。有机酸是果实呼吸作用的基质,过程中随呼吸作用消耗而降低,氧气不足呼吸作用减小,有机酸消耗随之减慢。与其他贮藏条件下的水蜜桃相比,低压静电场保鲜已达到贮藏时间延长,品质保证,可以有效延缓有机酸的代谢速度。
保鲜90d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图如图4,可以看出,90d时柠檬酸含量已降为0g/kg,酒石酸和苹果酸均增长至初期含量的四倍之多,分别有18.89g/kg、9.68g/kg,琥珀酸只有略微减少至2.33g/kg。酸是水果的重要呈味物质之一,此阶段苹果酸及有机酸含量最大,有氧呼吸将有机酸分解为二氧化碳和水,适宜条件可延缓有机酸分解速度,低压静电场保鲜下,水蜜桃呼吸作用减小,低温低氧可降低呼吸强度,缓解有机酸迅速代谢,可以达到较高品质的贮藏保鲜目的。
保鲜120d水蜜桃中有机酸的高效液相色谱图如图5,可以看出,有机酸含量总体有所减少,酒石酸与苹果酸出现下降,分别有5.91g/kg、2.91g/kg,但相比初期达到一定积累,柠檬酸并没有有所增加,琥珀酸变化平稳,仍有2.37g/kg,但此阶段水蜜桃仍有很好的感官性状。有机酸是衡量水果鲜度的重要指标之一,有机酸变化越大,水蜜桃腐败的越快,而低压静电场下可以降低呼吸强度,减小有机酸的变化幅度,从而达到良好的保鲜效果。
利用高效液相色谱分析比较不同时间段内水蜜桃的高效液相色谱图的保留时间和峰面积,根据标准曲线得到待测液中有机酸的浓度,水蜜桃保鲜过程中有机酸含量变化见图6。由图6可以看出,酒石酸的含量在保鲜前期一直呈增长趋势,90d时含量达到峰值18.89g/kg,之后30d有所下降,酒石酸的增加应该是其他物质转化所得,可以在保证其他有机酸减少的同时,保持适当的糖酸比,使水蜜桃保持一定的风味。苹果酸为水蜜桃中主要有机酸,也是水蜜桃贮藏过程中参与代谢的主要有机酸,保鲜初期,苹果酸含量为2.31g/kg,开始含量迅速上升,在后期逐渐缓慢下降,在120d降至2.91g/kg,相比正常低温贮藏,苹果酸在90-120d下降明显,可见低压静电场下可降低呼吸强度,延缓苹果酸的下降。保鲜初期,柠檬酸含量有略微上升,在60d之后开始大幅度下降,90d含量降至0g/kg,下降速度十分明显,在整个保鲜过程中,柠檬酸含量在四种酸中下降最明显,从初始到最后降幅达100%,可能是在贮藏较长时间后柠檬酸会代谢转化为其它类型有机酸。在0-60d保鲜过程中,琥珀酸含量逐渐降低,四种酸中降幅最大,至第60d消耗率达68.16%,而最后60d变化较为平稳,出现小幅回升,在整个保鲜过程中琥珀酸基本呈下降趋势,但水蜜桃的保鲜并没有很大影响,说明这处在允许范围内的波动趋势。有机酸总含量在前期缓慢上升,后期迅速下降。上述四种有机酸均比其他保鲜方式下的有机酸变化波动小,可见低压静电场可缓解有机酸快速代谢,达到较高品质的贮藏保鲜目的。
有机酸是决定水蜜桃风味的主要因素之一,正常存放下有机酸含量降低明显,而低压静电场处理下的有机酸减少得到抑制,四种有机酸总量降低25%,酒石酸和苹果酸达到34%和25%的累积,琥珀酸仍有2.37g/kg,柠檬酸降低至0g/kg,说明低压静电场处理可以有效抑制有机酸的消耗,保持水蜜桃品质。水蜜桃属呼吸跃变型果实,跃变峰出现越早越不耐贮,低压静电场保鲜120d水蜜桃仍一直保持较高的硬度和良好的风味,说明此环境下的水蜜桃处于第一次呼吸跃变前后,而现有贮藏手段最长只可延长贮藏期至60d,还达不到市场所需要的保鲜时间。同时,低压静电场处理操作方便,易于控制,适合大批量水蜜桃的处理,可以工厂化推广,也可与低温结合,达到更好的保鲜效果。综上所述,低压静电场保鲜水蜜桃,可以降低果实损耗,保持鲜度,延长货架期,品质保证,属于先进创新技术,有广阔的市场应用前景。
试验例1:
有机酸的得率
选择200V的低压静电场,0~4℃条件下保鲜30d的水蜜桃,按照实施例1-7方法提取待测液,高效液相色谱法测量有机酸的浓度,结果如图7A和B所示。可以看出,实施例2、3和4提取得到的酒石酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸均高于实施例1和实施例8,这说明含有氨基脲或缩二脲或双缩脲的40-60%乙醇能提高有机酸的提取率。实施例5、6和7提取得到的酒石酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸均高于实施例1-4和实施例8,这说明单宁酸的存在能进一步提高有机酸的提取效果。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术,故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明,而并非对本发明的限制,本领域的普通技术人员,在不脱离本发明的精神和范围的情况下,还可以做出各种变化和变型。因此,所有等同的技术方案也属于本发明的范畴,本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (3)

1.低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法,其特征在于:包括,
S1:配制标准溶液、标准使用液和混合标准曲线工作液;
S2:水蜜桃果肉切块,搅碎,匀浆,将浆液用溶剂定容,旋涡振荡1-3min,然后在超声功率为200-400W下超声提取10-20min,过滤,滤液于4000-6000r/min下离心8-15min,抽滤,然后将滤液于10000-15000r/min下离心10-20min,静置过夜,上清液过0.22μm滤膜,即为待测液;
S3:分别将所述标准溶液和待测液进行高效液相色谱分析,对比水蜜桃色谱图与标准溶液色谱图,根据保留时间进行定性分析,确定有机酸成分;
S4:根据各有机酸的峰面积和标准曲线对待测液中有机酸进行定量分析,获得有机酸的浓度,计算得到水蜜桃中各有机酸的含量;
其中,所述有机酸分别为:酒石酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸;所述水蜜桃采用100-300V的低压静电场,于0~4℃条件下保鲜;
所述S2中溶剂为含有氨基脲或缩二脲的40-60%乙醇,溶剂中氨基脲或缩二脲的浓度为0.4-0.6M;
所述S2中定容为:40-60g浆液定容至500mL;
所述高效液相色谱条件为:色谱柱:C18柱;柱温:30-40℃;进样量:15-25uL;流动相:0.1%磷酸溶液-甲醇溶液;流速:0.5-0.8ml/min;检测波长:215nm;所述0.1%磷酸溶液-甲醇溶液中0.1%磷酸溶液和甲醇溶液的体积比为30:1。
2.根据权利要求1所述的低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法,其特征在于:所述S1的具体步骤为:
标准溶液配制:分别称取酒石酸0.05g,苹果酸0.10g,柠檬酸0.10g,琥珀酸0.25g于50mL小烧杯中,加去离子水溶解,用水转移到100mL容量瓶中,定容,混匀;
标准使用液:标准溶液稀释五个不同浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20mg/mL的标准使用液;
混合标准曲线工作液:分别吸取标准溶液0.5mL酒石酸、1mL苹果酸、1mL柠檬酸、2.5 mL琥珀酸于10mL容量瓶中,用磷酸溶液定容至刻度,混匀。
3.根据权利要求1所述的低压静电场保鲜水蜜桃的有机酸测定方法,其特征在于:所述S2用溶剂中还含有浓度为2-5mM的单宁酸。
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