CN102226785A - 高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，包括步骤：采用高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定香精香料中的硫脲和甘素，根据硫脲的标准曲线和甘素的标准曲线得出香精香料中硫脲的含量和甘素的含量；所述的高效液相色谱二极管阵列检测法的条件为：采用C18色谱柱，以乙腈与0.02mol/L的磷酸氢二钾水溶液为流动相，检测波长为240nm-245nm。该方法可以同时且准确地对香精香料中的硫脲和甘素进行定性和定量分析，且分离效果好，线性范围宽，具有操作简便、快速、选择性好、成本低等优点，适于广泛应用。
Description
技术领域
本发明涉及化学分析领域，具体涉及一种高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法。
背景技术
硫脲(Thiourea)即硫代尿素，是一种重要的化工原料，主要用于有机合成、纺织工业、金属加工等行业，由于其具有一定的漂白功能还可应用于纺织品的漂白。然而，近年来有报道称硫脲被作为增白剂和增筋剂而添加于小麦及面条等食品中，危害消费者的饮食健康。硫脲被摄入人体后可抑制甲状腺和造血器官，并对上呼吸道及眼部具有一定的刺激作用。因此必须按照国家规定严格禁止将硫脲添加到食品中。目前，文献报道硫脲的检测方法很多，主要有液相色谱法、液质联用法、分光光度法及电化学分析方法等，但香精香料中硫脲的测定方法未见文献报道。文献报道的硫脲的液相色谱检测方法，一般采用甲醇体积百分浓度为40％的甲醇水溶液作为流动相，如李小亭等人在《高效液相色谱法测定小麦粉中硫脲的含量》(食品工业科技，2009，30(5)315-316.)一文中记载的液相色谱法，该方法仅能较好的检测硫脲，对于其他物质的检测精度还有待研究。
甘素(Dulcin)学名为对乙氧基苯脲，是一种人工合成甜味剂，其甜度相当于蔗糖的200倍。甘素具有致癌性，体内会分解成对乙氧基苯胺，进一步形成对氨基酚，从而导致肝癌等症，因而被列为禁用物质。目前食品中甘素的测定方法主要有液相色谱法、液质联用法、毛细管电泳法等，而香精香料中甘素的测定方法未见文献报道。文献报道的甘素的液相色谱检测方法，一般采用乙腈与水(磷酸二氢钾pH2.5)体积比为40∶60的溶液作为流动相，如LAWRENCE F等人在《Determination of seven artificial sweeteners in diet food preparations by reserse-phase liquid chromatography with absorbance detection》(Journal of the Association of official analytical chemists，1988，71(5)：934-937.)一文中记载的液相色谱法，该方法仅能较好的检测甘素，对于其他物质的检测精度还有待研究。
上述方法中，液相色谱法具有高效快速、灵敏度高的优点，多采用紫外检测器，采用紫外检测器时一般会存在假阳性问题。液-质联用法具有灵敏度高、定性准确的优点，多采用质谱检测器，因此一般存在检测成本高的问题。分光光度法设备简单，费用低，但操作步骤复杂、精度不高。电化学分析方法体积小、操作简单、携带方便、可用于现场监测及成本低测试值，但受温湿度影响较大，精度不高。毛细管电泳法虽然高效、快速，由于其分析系统中的样品量很少，可能会造成分析误差很大。因此，需要考虑多种因素选择合适的检测方法。
为了方便分析测试香精香料中硫脲和甘素的含量，对生活中应用广泛的香精香料的品质进行有效监控，有必要开发一种新的测定精香料中硫脲和甘素含量的方法。
发明内容
本发明提供了一种高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，该方法分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广。
高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点，该方法已成为现代分析技术的重要手段之一，目前在食品添加剂检测方面逐步成为主导地位，本发明通过比较，发现高效液相色谱法比较适合用于硫脲和甘素的检测。
一种高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，包括步骤：
采用高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定香精香料中的硫脲和甘素，根据硫脲的标准曲线和甘素的标准曲线得出香精香料中硫脲的含量和甘素的含量；所述的高效液相色谱二极管阵列检测法的条件为：采用C18色谱柱，以乙腈与0.02mol/L的磷酸氢二钾水溶液为流动相，检测波长为240nm-245nm。
为了达到更好的发明效果，优选：
所述的C18色谱柱的粒径为5μm，规格为4.6mm×250mm或4.6mm×150mm。
所述的色谱柱的柱温为20℃-28℃，优选为25℃。
所述的流动相中乙腈与磷酸氢二钾水溶液的体积比为40∶60；流速为0.6mL/min-1.2mL/min；流速进一步优选为0.8mL/min。
所述的香精香料可选用常用的香精香料，如丁香油。
所述的香精香料最好用流动相稀释并超声处理后进高效液相色谱分析。
所述的硫脲的标准曲线和甘素的标准曲线可采用本领域常规的标准曲线建立方法绘制，如外标法，根据标准品溶液的各浓度和对应峰面积的关系分别绘制为硫脲和甘素的标准曲线。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明方法可以同时且准确地对香精香料中的硫脲和甘素进行定性和定量分析，且分离效果好，线性范围宽，具有操作简便、快速、选择性好、成本低等优点，适于广泛应用。
附图说明
图1为实施例1中丁香油样品中硫脲和甘素的色谱图；其中1号峰为硫脲，2号峰为甘素；
图2为实施例1中硫脲的标准曲线；
图3为实施例1中甘素的标准曲线。
具体实施方式
实施例1
1材料与方法
1.1材料与试剂
乙腈(色谱纯)：国药集团化学试剂有限公司；磷酸氢二钾(A.R)：湖州化学试剂有限公司；香精香料：丁香油样品；硫脲标准品：ACROS公司(纯度99.0％)；甘素标准品：APOLLO SCIENTIFIC LIMITED公司。
1.2仪器与设备
电子分析天平：德国Sartorius公司；超声清洗器：昆山市超声仪器有限公司；Agilent1100高效液相色谱(配有二极管阵列检测器和Rev.A.10.02色谱工作站，美国安捷伦公司)。
1.3方法
1.3.1标准溶液的配置
1000μg/mL标准储备溶液：准确称取0.1g硫脲标准品于100mL容量瓶，用液相色谱流动相溶解并定容至刻度，得到1000μg/mL硫脲标准储备溶液；采用同样的方法用甘素标准品配置1000μg/mL甘素标准储备溶液。
混合标准储备溶液：分别准确移取1.0mL1000μg/mL的硫脲标准储备溶液和1.0mL1000μg/mL的甘素标准储备溶液于10mL容量瓶，用流动相定容至刻度，得到100μg/mL的混合标准储备液。
系列浓度的混合标准溶液：用100μg/mL混合标准储备溶液稀释成以下浓度梯度：10.0μg/mL、5.0μg/mL、2.0μg/mL、1.0μg/mL、0.5μg/mL、0.1μg/mL。
1.3.2样品的处理
将丁香油样品用流动相稀释后，超声处理10min后进高效液相色谱分析，分析得到稀释后的丁香油样品的色谱图如图1。
1.3.3液相色谱检测方法
色谱柱：Welchrom C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱温：25℃；
流动相：乙腈+水(含0.02moL/L的K2HPO4)(40∶60，V/V)；流速：0.8mL/min；
检测波长：245nm；进样量：10μL。
1.3.4标准曲线的建立
采用外标法同时测定硫脲和甘素，将0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL等不同浓度的混合标准溶液从低浓度到高浓度依次进液相色谱分析，得到相应谱图，以浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标作图，可分别绘制如图2所示的硫脲的标准曲线和如图3所示的甘素的标准曲线。
结果显示，硫脲的标准溶液和甘素的标准溶液在0.1～10.0μg/mL的浓度范围内，所得峰面积与浓度的线性关系均较良好，线性回归方程和相关系数分别为：y＝91.001x+0.2533(r＝0.9999)和y＝55.986x-0.6481(r＝0.9999)。
1.3.5精密度和检测限
将浓度为0.1μg/mL的混合标准溶液重复进样7次，计算其RSD值，结果如表1所示。经重复测定，计算硫脲和甘素的RSD值分别为2.56％和2.45％。该方法对硫脲和甘素的定性检测限以3倍标准偏差(SD)计算分别为0.008μg/mL和0.007μg/mL，定量检测限以10倍标准偏差(SD)计算分别为0.026μg/mL和0.024μg/mL。
表1.0.1μg/mL混合标准溶液重复进样7次测定结果
1.3.6回收率试验
取3份稀释后的丁香油样品分别添加100μg/mL的硫脲标准溶液0.05mL、0.25mL、0.40mL和100μg/mL的甘素标准溶液0.05mL、0.25mL、0.40mL，即添加量分别为5.0μg、25.0μg、40.0μg，超声处理10min后进液相色谱分析，根据标准曲线计算其测定值，进而计算回收率。每个添加浓度重复三次试验。硫脲和甘素的回收率试验结果如表2所示。
表2.回收率试验结果
计算结果显示，硫脲和甘素在不同添加量的样品中的回收率分别为92.6％～109.4％和103.2％～114.2％。
2结果与分析
本发明采用Welchrom C18色谱柱，硫脲和甘素基本能与丁香油样品中的物质分开，为进一步优化试验条件，比较了甲醇与磷酸二氢钾、乙腈与磷酸二氢钾、乙腈与磷酸氢二钾等不同组合、不同配比的流动相对分析结果的影响，结果表明，以甲醇与磷酸二氢钾、乙腈与磷酸二氢钾体系时，硫脲和甘素的分离情况、峰形较差，当以乙腈与0.02mol/L的磷酸氢二钾水溶液体积比为40∶60的混合溶液为流动相时，分离结果较好，能获得较好的峰形，且出峰时间适宜，因此优选以乙腈与0.02mol/L的磷酸氢二钾水溶液体积比为40∶60的混合溶液作为流动相。
Claims (8)
1.一种高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，包括步骤：
采用高效液相色谱二极管阵列检测法同时测定香精香料中的硫脲和甘素，根据硫脲的标准曲线和甘素的标准曲线得出香精香料中硫脲的含量和甘素的含量；所述的高效液相色谱二极管阵列检测法的条件为：采用C18色谱柱，以乙腈与0.02mol/L的磷酸氢二钾水溶液为流动相，检测波长为240nm-245nm。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，其特征在于，所述的C18色谱柱的粒径为5μm，规格为4.6mm×250mm或4.6mm×150mm。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，其特征在于，所述的色谱柱的柱温为20℃-28℃。
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，其特征在于，所述的色谱柱的柱温为25℃。
5.根据权利要求1所述的高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，其特征在于，所述的流动相中乙腈与磷酸氢二钾水溶液的体积比为40∶60；流速为0.6mL/min-1.2mL/min。
6.根据权利要求5所述的高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，其特征在于，所述的流速为0.8mL/min。
7.根据权利要求1所述的高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，其特征在于，所述的香精香料为丁香油。
8.根据权利要求1或7所述的高效液相色谱法同时测定香精香料中硫脲和甘素的方法，其特征在于，所述的香精香料用流动相稀释并超声处理后进高效液相色谱分析。
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