CN108760961B - 一种液相色谱法检测固体福美钾纯度的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种液相色谱法检测固体福美钾纯度的方法，所述液相色谱法，流动相由流动相a、流动相b、流动相c组成；所述流动相c为碱性有机胺类化合物。本发明所述样品进行液相分析前不需要衍生化或前期处理，溶解、脱气后直接进样分析；本发明得到的液相色谱谱图，样品中所有杂质峰均被检出，主峰与杂质峰分离效果好，峰值正常，主峰的峰形对称，无拖尾现象；检测时间短。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用液相色谱法检测固体福美钾纯度的方法，属于仪器分析技术领域。
背景技术
以福美钾（学名二甲基二硫代氨基甲酸钾)为起始原料合成的二硫代氨基甲酸盐衍生物可与铜离子络合形成复合物,具有抗细菌、抗病毒和抗肿瘤等生物活性。该抗癌药物合成对福美钾的纯度、福美钾中杂质结构、含量要求更为严格，现有技术中有针对福美钾类似结构系列产品的液相色谱法，但操作繁琐，进样前需要提纯、浓缩等预处理，耗时耗力，是研究人员长期困扰的问题，如果对福美钾溶解后直接进行液相色谱检测，则存在：主峰与杂质峰不能很好的分离，主峰峰值较低，峰形不对称；出峰时间长；主峰拖尾现象严重。
发明内容
为解决现有技术中存在的不足，本发明提供一种液相色谱法检测固体福美钾纯度的方法，以实现以下发明目的：
（1）样品进行液相分析前不需要衍生化或前期处理，溶解、脱气后直接进样分析。
（2）得到的液相色谱谱图，样品中所有杂质峰均被检出，主峰与杂质峰分离效果好，峰值正常，主峰的峰形对称，无拖尾现象；检测时间短。
为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：
一种液相色谱法检测固体福美钾纯度的方法，所述液相色谱法，流动相由流动相a、流动相b、流动相c组成；所述流动相c为碱性有机胺类化合物。
以下是对上述技术方案的进一步改进：
所述碱性有机胺类化合物，为三乙胺或二异丙醇胺。
所述流动相a为 1%的磷酸二氢钾溶液，其中含体积分数为0.05%的四丁基氯化铵；所述流动相b为乙腈。
所述流动相的体积配比为Va:Vb:Vc=65:35:1。
所述流动相用磷酸调节pH值为6.4-6.6。
所述液相色谱法，检测波长为260nm；流速为0.78-0.81mL/min；
进样体积为19-22μL；柱温为30℃。
所述液相色谱法，采用的色谱柱为 Kromstar C18，规格为4.6×250mm 5μm。
采用上述技术方案，本发明取得以下技术效果：
1、样品进行液相分析前不需要衍生化或前期处理，样品溶解后可以直接注样，操作简便，不带入影响检测结果准确性的杂质，检测结果真实反映固体福美钾中各个组分的含量；
2、本发明在流动相有机相使用乙腈，在流动相中加入有机胺，得到的液相色谱谱图，样品中所有杂质峰均被检出，主峰与杂质峰分离效果好，峰值正常，主峰的峰形对称，无拖尾现象；检测时间短。
流动相中的有机相使用乙腈。与使用甲醇相比，甲醇的极限波长为210nm左右，与样品检测波长相近，存在紫外吸收，会影响检测结果，其极性常数为0.95，会延长出峰时间，使组分保留时间延长，增加拖尾；而乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力比甲醇低很多，极限波长为190nm，增加了检测出低波长下才有吸收的杂质的可能性，其极性常数只有0.65，可以加快出峰，减少拖尾；且经实验后表明，用乙腈做为有机相，基线更稳定、杂质峰与主峰分离更明显。
在流动相中加入有机胺。在操作条件上，流动相的配比选择为Va:Vb:Vc=65:35:1，可以达到如下效果:有效减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象，消除鬼峰、基线峰，平衡基线、减少飘移，促使杂质峰与主峰分离更明显，主峰峰形更对称，检测结果更准确。
（3）能够同时检测分析主要成分福美钾的含量以及其中的其它杂质的含量；
本发明在行业上第一次将固体福美钾合成中生成的N-甲基二硫代氨基甲酸钾、二甲基二硫代氨基甲酸、N-甲基二硫代氨基甲酸与福美钾完全分离，分析精度高，分析误差小，能够将其它杂质全部检出。
附图说明：
附图1：采用实施例1的技术方案分析样品所得色谱图；
附图2：采用实施例2的技术方案分析样品所得色谱图；
附图3：采用实施例3的技术方案分析样品所得色谱图；
附图4：采用实施例4的技术方案分析样品所得色谱图。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
1、仪器的选择：
（1）FL2200液相色谱仪，配紫外检测器，N2000色谱工作站
（2）色谱柱 Kromstar C18 4.6×250mm 5μm
（3）恒温柱箱：日普利RPL-C2000
（4）超声波脱气装置。
2、检测条件的设定：
（1）流动相：a. 水（含体积分数0.05%四丁基氯化铵）；
b. 甲醇（色谱纯）；
流动相配比Va:Vb=60：40；
（2）检测波长：260nm（用二极管阵列检测器确定）
（3）流速：0.8mL/min
（4）进样体积：20μL
（5）柱温：30℃。
3、样品处理：
准确称取0.01g二甲基二硫代氨基甲酸钾，用流动相a溶解，定容于100mL容量瓶中，经水系膜过滤后脱气备用。
4、检测步骤：
将配好的流动相先经0.45μm膜过滤，然后超声脱气15分钟后，倒入色谱仪流动相储液瓶中，开机预热，待系统稳定后，抽取待测样品20μL进样检测，待出峰结束后，用面积归一法计算百分含量。按上述色谱条件分析样品，得到的色谱图如附图1所示。
附图1中：1，2为鬼峰，3为N-甲基二硫代氨基甲酸钾，4为二甲基二硫代氨基甲酸钾，5为N-甲基二硫代氨基甲酸。
样品检测结果见表1。
表1实施例1的液相色谱检测结果
由以上检测结果可以看出，此条件下虽然检出峰较多，但有鬼峰出现，影响对同系物峰的判断，且主峰峰值较低，峰形不对称，出峰时间长，因此不能真实
由以上检测结果可以看出，此条件下虽然检出峰较多，但有鬼峰出现，影响对同系物峰的判断，且主峰峰值较低，峰形不对称，出峰时间长，因此不能真实反应物质含量。
实施例2
1、仪器的选择：
（1）FL2200液相色谱仪，配紫外检测器，N2000色谱工作站
（2）色谱柱 Kromstar C18 4.6×250mm 5μm
（3）恒温柱箱：日普利RPL-C2000
（4）超声波脱气装置。
2、检测条件的设定：
（1）流动相：a. 1%磷酸二氢钾溶液（含体积分数0.05%四丁基氯化铵）；
b. 甲醇（色谱纯）；
流动相配比Va:Vb=60：40；
（2）检测波长：260nm（用二极管阵列检测器确定）
（3）流速：0.8mL/min
（4）进样体积：20μL
（5）柱温：30℃。
3、样品处理：
准确称取0.01g二甲基二硫代氨基甲酸钾，用流动相a溶解，定容于100mL容量瓶中，经水系膜过滤后脱气备用。
4、检测步骤：
将配好的流动相先经0.45μm膜过滤，然后超声脱气15分钟后，倒入色谱仪流动相储液瓶中，开机预热，待系统稳定后，抽取待测样品20μL进样检测，待出峰结束后，用面积归一法计算百分含量。按上述色谱条件分析样品，得到的色谱图如附图2所示。
附图2中：出峰较多，杂质峰与主峰未分离，基线出现飘移，峰形不对称，鬼峰较多，影响对同系物峰的判断。
样品检测结果见表2。
表2实施例2的液相色谱检测结果
由以上检测结果可以看出，此条件下虽然检出峰较多，但鬼峰较多，影响对同系物峰的判断，主峰与杂质峰未分离，峰形不对称，因此不能真实反应物质含量。
实施例3
1、仪器的选择：
（1）FL2200液相色谱仪，配紫外检测器，N2000色谱工作站
（2）色谱柱 Kromstar C18 4.6×250mm 5μm
（3）恒温柱箱：日普利RPL-C2000
（4）超声波脱气装置。
2、检测条件的设定：
（1）流动相：a. 1%磷酸二氢钾溶液（含体积分数0.05%四丁基氯化铵）；
b. 乙腈（色谱纯）；
流动相配比Va:Vb=65：35；
（2）检测波长：260nm（用二极管阵列检测器确定）
（3）流速：0.8mL/min
（4）进样体积：20μL
（5）柱温：30℃。
3、样品处理：
准确称取0.01g二甲基二硫代氨基甲酸钾，用流动相a溶解，定容于100mL容量瓶中，经水系膜过滤后脱气备用。
4、检测步骤：
将配好的流动相先经0.45μm膜过滤，然后超声脱气15分钟后，倒入色谱仪流动相储液瓶中，开机预热，待系统稳定后，抽取待测样品20μL进样检测，待出峰结束后，用面积归一法计算百分含量。按上述色谱条件分析样品，得到的色谱图如附图3所示。
附图3中：1为N-甲基二硫代氨基甲酸钾，2为二甲基二硫代氨基甲酸钾，3为N-甲基二硫代氨基甲酸，4为二甲基二硫代氨基甲酸，5为未知杂质峰。
样品检测结果见表3。
表3实施例3的液相色谱检测结果
由以上检测结果可以看出，此条件下主峰峰值正常，出峰也较多，但在反峰前有很多未知峰出现，无法判断是基线峰还是未知物质峰，影响检测结果。
实施例4
1、仪器的选择：
（1）FL2200液相色谱仪，配紫外检测器，N2000色谱工作站
（2）色谱柱 Kromstar C18 4.6×250mm 5μm
（3）恒温柱箱：日普利RPL-C2000
（4）超声波脱气装置。
2、检测条件的设定：
（1）流动相：a. 1%磷酸二氢钾溶液（含体积分数0.05%四丁基氯化铵）；b. 乙腈（色谱纯）；c.三乙胺（色谱纯）。流动相配比Va:Vb:Vc=65:35:1，然后用磷酸调节pH值=6.5；
（2）检测波长：260nm（用二极管阵列检测器确定）
（3）流速：0.8mL/min
（4）进样体积：20μL
（5）柱温：30℃。
3、样品处理：
准确称取0.01g二甲基二硫代氨基甲酸钾，用流动相a溶解，定容于100mL容量瓶中，经水系膜过滤后脱气备用。
4、检测步骤：
将配好的流动相先经0.45μm膜过滤，然后超声脱气15分钟后，倒入色谱仪流动相储液瓶中，开机预热，待系统稳定后，抽取待测样品20μL进样检测，待出峰结束后，用面积归一法计算百分含量。
按上述色谱条件分析样品，得到的色谱图如附图4所示。
附图4中：1为N-甲基二硫代氨基甲酸钾，2为二甲基二硫代氨基甲酸钾，3为N-甲基二硫代氨基甲酸，4为二甲基二硫代氨基甲酸，5为未知杂质峰。
样品检测结果见表4。
表4实施例4的液相色谱检测结果
由以上检测结果可以看出，此条件下，无鬼峰出现,样品中所有杂质峰均被检出，且分离效果好，峰值正常，主峰的峰形对称，无拖尾，所有的峰均在20分钟内出完，检测时间短。
实施例5 线性关系考察
准确称取规定量的福美钾标准品（美国进口样品），置于容量瓶中，分别配成浓度为0.1mg/ml、0.08mg/ml、0.06mg/ml、0.04mg/ml、0.01mg/ml的溶液，将上述溶液各取20μl进样， 按实施例4的方法进行液相色谱检测，其线性方程为 ：y＝4231674+32834756x，r＝0.997，本方法在10～100mg/L范围内线性良好。
所述福美钾标准品，质量百分含量是99.20%以上，美国产品。
x-加入的福美钾标准品的浓度；mg/ml
y-是峰面积。
实施例6 回收率测定
向已知含量的试样中分别加入一定量的福美钾标准品（美国进口样品），按实施例4的方法测定，其回收率、相对标准偏差RSD见表1。
所述所述福美钾标准品，质量百分含量是99.20%以上（美国进口样品）。
表5回收率数据
实施例7精密度的实验
按实施例4的方法，在相同实验条件下，对同一样品进行5次平行测定（配置的福美钾样品含量为0.1mg/mL），测定结果见表2。
表6精密度测试数据
除非特殊说明，本发明所述百分比为质量百分比。
Claims (2)
1.一种液相色谱法检测固体福美钾纯度的方法，其特征在于：所述液相色谱法，流动相由流动相a、流动相b、流动相c组成；所述流动相c为碱性有机胺类化合物；所述碱性有机胺类化合物，为三乙胺或二异丙醇胺；所述流动相a为 1%的磷酸二氢钾溶液，其中含体积分数为0.05%的四丁基氯化铵；所述流动相b为乙腈；所述流动相的体积配比为Va:Vb:Vc=65:35:1；所述流动相用磷酸调节pH值为6.4-6.6；所述方法可以将N-甲基二硫代氨基甲酸钾、二甲基二硫代氨基甲酸、N-甲基二硫代氨基甲酸与福美钾分离。
2.根据权利要求1所述的一种液相色谱法检测固体福美钾纯度的方法，其特征在于：所述液相色谱法，检测波长为260nm；流速为0.78-0.81mL/min；
进样体积为19-22μL；柱温为30℃。
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