CN107941937B - 一种燕麦生物碱d及二氢燕麦碱d的分离分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种燕麦生物碱D及二氢燕麦碱D的分离分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱柱为以环糊精为固定相的手性色谱柱，其流动相由体积比为25～30∶70～75的有机相和水相组成，有机相为甲醇、乙醇、乙腈或四氢呋喃，水相以水为溶剂并含有0.1～1％体积百分比的缓冲剂和0.1～1％体积百分比的pH调节剂，该缓冲剂为磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐、三乙胺，该pH调节剂为冰醋酸或磷酸；其自动进样量为0.5uL，上述流动相流速为0.5‑1.5mL/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。本发明通过选择适当的固定相和流动相，以及适当的测定条件，为准确的完成燕麦生物碱D及其加氢产物‑二氢燕麦碱D的分析分离提供一种可靠的方法。

Description

一种燕麦生物碱D及二氢燕麦碱D的分离分析方法
技术领域
本发明属于化学物质分析分离技术领域，具体涉及一种燕麦生物碱D及二氢燕麦碱D的分离分析方法。
背景技术
燕麦生物碱D作为唯一在燕麦中发现的一类酚类化合物，因其结构中含有的功能性酰胺键而具备一定的生物活性:降血糖，降血脂、抗氧化性、抗炎、血管舒张、抗增殖和止痒等。CN106511110A公开了二氢燕麦碱D是合成二氢燕麦碱盐类化合物的原料，二氢燕麦碱D盐类化合物是化妆品的活性成分。对燕麦生物碱进行C＝C双键的选择性加氢合成二氢燕麦碱D是一个重要的合成过程，其中原料和产物的分离分析是必不可少的手段。
燕麦生物碱D的结构式如下所示：
二氢燕麦生物碱D的结构式如下所示：
燕麦生物碱D和其选择性加氢产物二氢燕麦碱D，其分子量均较大，因此沸点均超过300℃，不利于实施气相色谱分析操作。现有技术中并无此方面的涉及，而应用中这是不可缺少的一环。此外，虽然燕麦生物碱D和其选择性加氢产物二氢燕麦碱D的分子量均较大，但相差极小，结构上基本相同，因此带来极性上较小的差异。利用高效液相色谱分离分析该两种物质，流动相的种类、pH值、流速和色谱柱固定相的种类、柱长柱温以及进样量的大小均对分离分析产生较大影响。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种燕麦生物碱D及二氢燕麦碱D的分离分析方法。
本发明的技术方案如下：
一种燕麦生物碱D及二氢燕麦碱D的分离分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱柱为以环糊精为固定相的手性色谱柱，其流动相由体积比为25～30:70～75的有机相和水相组成，有机相为甲醇、乙醇、乙腈或四氢呋喃，水相以水为溶剂并含有0.1～1％体积百分比的缓冲剂和0.1～1％体积百分比的pH调节剂，该缓冲剂为磷酸三乙胺盐、乙酸三乙胺盐、三乙胺，该pH调节剂为冰醋酸或磷酸；
其自动进样量为0.5uL，上述流动相流速为0.5-1.5mL/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。
在本发明的一个优选实施方案中，所述色谱柱为以β-环糊精为固定相的手性色谱柱。
在本发明的一个优选实施方案中，所述流动相由体积比为30:70的有机相和水相组成。
在本发明的一个优选实施方案中，所述有机相为乙腈。
在本发明的一个优选实施方案中，所述缓冲剂为三乙胺。
在本发明的一个优选实施方案中，所述pH调节剂为冰醋酸。
在本发明的一个优选实施方案中，所述水相含有0.1～0.5％体积百分比的缓冲剂。
进一步优选的，所述水相含有0.3％体积百分比的缓冲剂。
本发明的有益效果是：本发明通过选择适当的固定相和流动相，以及适当的测定条件，为准确的完成燕麦生物碱D及其加氢产物-二氢燕麦碱D的分析分离提供一种可靠的方法。
附图说明
图1为本发明中按照实施例1条件分离的燕麦生物碱D原料的HPLC图。
图2为本发明中按照实施例2条件分离的标准二氢燕麦碱D样品的HPLC图。
图3为本发明中按照实施例3条件分离的燕麦生物碱D和标准二氢燕麦碱D混合样品的HPLC图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
仪器：ULtimate 3000高效液相色谱仪；紫外检测器
色谱柱：手性HDL柱(β-环糊精为固定相)
流动相：主流动相：30％乙腈，70％水(0.3％三乙胺，0.3％冰醋酸)，将560mL的水，240mL的乙腈，1.7mL的三乙胺，1.7mL的冰醋酸混合，超声脱气30min。放置于色谱进样口；
流动相流速：0.8mL/min
检测波长：254nm
柱温：30℃
进样体积：0.8uL
试验步骤：称取燕麦生物碱原料粉末10mg，同置于50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20mL置25mL样品瓶中，摇匀，作为原料样品溶液，放置于自动进样盘中。
设置检测方法和序列：其中自动进样量为0.5uL，流动相流速为0.8mL/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图1。图1中1号峰为燕麦生物碱D粗样中的杂质，图1中2号峰为燕麦生物碱D的主峰。因此燕麦生物碱D出峰时间在6.7min左右。
实施例2
仪器：ULtimate 3000高效液相色谱仪；紫外检测器
色谱柱：手性HDL柱(β-环糊精为固定相)
流动相：主流动相：30％乙腈，70％水(0.3％三乙胺，0.3％冰醋酸)，将560mL的水，240mL的乙腈，1.7mL的三乙胺，1.7mL的冰醋酸混合，超声脱气30min。放置于色谱进样口。
流速：0.8mL/min
检测波长：254nm
柱温：30℃
进样体积：0.8uL
试验步骤：称取标准的二氢燕麦生物碱原料粉末10mg，同置于50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20mL置25mL样品瓶中，摇匀，作为原料样品溶液，放置于自动进样盘中。
设置检测方法和序列：其中自动进样量为0.5uL，流动相流速为0.8mL/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图2。图2中1号峰为标准二氢燕麦生物碱D中的少量杂质，图2中2号峰为标准二氢燕麦生物碱D的主峰。因此二氢燕麦生物碱D的出峰时间为5.6min左右。
实施例3
仪器：ULtimate 3000高效液相色谱仪；紫外检测器
色谱柱：手性HDL柱(β-环糊精为固定相)
流动相：主流动相：30％乙腈，70％水(0.3％三乙胺，0.3％冰醋酸)，将560mL的水，240mL的乙腈，1.7mL的三乙胺，1.7mL的冰醋酸混合，超声脱气30min。放置于色谱进样口。
流速：0.8mL/min
检测波长：254nm
柱温：30℃
进样体积：0.8uL
试验步骤：称取燕麦生物碱D和标准二氢燕麦碱D混合样品共10mg，同置于50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20mL置25mL样品瓶中，摇匀，作为原料样品溶液，放置于自动进样盘中。
设置检测方法和序列：其中自动进样量为0.5uL，流动相流速为0.8mL/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见图3。图3中1号峰为标准燕麦生物碱D和标准二氢燕麦生物碱D中存在的同一类杂质，图3中2号峰出峰时间在5.6min左右，因此为标准二氢燕麦生物碱D，图3中3号峰出峰时间在6.7min左右，因此为标准燕麦生物碱D。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (5)

1.一种燕麦生物碱D及二氢燕麦碱D的分离分析方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，其色谱柱为以β-环糊精为固定相的手性色谱柱，其流动相由体积比为25~30:70~75的有机相和水相组成，有机相为乙腈，水相以水为溶剂并含有0.1~1%体积百分比的缓冲剂和0.1~1%体积百分比的pH调节剂，该缓冲剂为三乙胺，该pH调节剂为冰醋酸或磷酸；
其自动进样量为0.5uL，上述流动相流速为0.5-1.5mL/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。
2.如权利要求1所述的分离分析方法，其特征在于：所述流动相由体积比为30:70的有机相和水相组成。
3.如权利要求1所述的分离分析方法，其特征在于：所述pH调节剂为冰醋酸。
4.如权利要求1所述的分离分析方法，其特征在于：所述水相含有0.1~0.5%体积百分比的缓冲剂。
5.如权利要求1所述的分离分析方法，其特征在于：所述水相含有0.3%体积百分比的缓冲剂。
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