CN111044636A - 米卡芬净含量的分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了米卡芬净含量的分析方法，包括：色谱柱选用C18色谱柱，流动相由水、缓冲液和有机溶剂组成，按体积分数设置等度洗脱；以及采用反相液相色谱外标法进行定量分析。其分析方法中，色谱柱规格为250mm*4.6mm，5μm，流动相由磷酸二氢氨溶液、乙腈和水组成，检测波长为215nm，流速为1.5ml/min，柱温30℃，进样体积20μL。本发明提供的米卡芬净含量的分析方法，适用于大批量检测，大大提高检测效率；其次该法具有操作简单、快速、准确度高、精密度高、稳定性好的优点。

Description

米卡芬净含量的分析方法
领域
本发明涉及药物分析技术领域，特别涉及米卡芬净含量的分析方法。
背景
米卡芬净(Micafungin)是通过对Coleophoma empetri的天然产物进行改造，化学合成得到的新型棘白菌素类抗真菌药物；它对念珠菌如白念珠菌、光滑念珠菌、热代念珠菌、克柔念珠菌和近平滑念珠菌有较好的抑制活性，对于曲霉也有良好的体外抑制活性，但对于新生隐球菌、镰刀菌、结合菌和白吉利毛孢子菌等无抑制活性。
为了保证米卡芬净后续的研发和生产质量，需要对原料药及其制剂的质量进行控制。因此，研究获得一种米卡芬净的含量测定的检测方法，这对医药生产企业来说显得尤为迫切。通过查阅中外文献及专利，目前对米卡芬净含量的检测方法较为单一，不利于企业对产品质量的把控，所以亟需一种有效测定米卡芬净含量的分析方法。
概述
本公开涉及米卡芬净含量的分析方法，其包括：
通过反相液相色谱进行测定，色谱柱选用C18色谱柱，流动相由水、缓冲液和有机溶剂组成，按体积分数设置等度洗脱；以及
采用外标法进行定量分析。
附图简要说明
图1示出了本公开的空白溶液(甲醇)的色谱图。
图2示出了本公开实施例1的米卡芬净对照品溶液的色谱图。
图3示出了本公开实施例1的米卡芬净供试品溶液的色谱图。
详述
在以下的说明中，包括某些具体的细节以对各个公开的实施方案提供全面的理解。然而，相关领域的技术人员会认识到，不采用一个或多个这些具体的细节，而采用其他方法、部件、材料等的情况下仍实现实施方案。
除非本公开中另有要求，在整体说明书和所附的权利要求中，词语“包括”、“包含”、“含有”和“具有”应解释为开放式的、含括式的意义，即“包括但不限于”。
在整体说明书中提到的“一实施方案”、“实施方案”、“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”意指在至少一实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，在整个说明书中不同位置出现的短语“在一实施方案中”或“在实施方案中”或“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”不必全部指同一实施方案，此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或多个实施方案中结合。
定义
在本公开中，术语“外标法”是指用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法。
在本公开中，术语“等度洗脱”是指在样品组分的分析周期中，流动相的组成和流速恒定不变的洗脱方式。
具体实施方式
本公开涉及米卡芬净含量的分析方法，其包括：
通过反相液相色谱进行测定，色谱柱选用C18色谱柱，流动相由水、缓冲液和有机溶剂组成，按体积分数设置等度洗脱；以及
采用外标法进行定量分析。
在某些实施方案中，其还包括液相色谱检测前溶液的制备，所述溶液包括：
空白溶液，所述空白溶液是由稀释剂组成；
供试品溶液，所述供试品溶液是由所述米卡芬净制剂与稀释剂组成；以及
对照品溶液，所述对照品溶液是由米卡芬净对照品与稀释剂组成。
在某些实施方案中，米卡芬净对照品为米卡芬净纯物质。
在某些实施方案中，米卡芬净制剂选自米卡芬净前体发酵液或米卡芬净注射剂。
在某些实施方案中，稀释剂选自甲醇、乙醇、乙腈、水或其混合物。
在某些实施方案中，稀释剂选自甲醇。
在某些实施方案中，色谱柱规格为(250mm*4.6mm，5μm)。
在某些实施方案中，水相包括水和磷酸盐缓冲液。
在某些实施方案中，磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢铵缓冲液或磷酸二氢钾缓冲液。
在某些实施方案中，磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢铵缓冲液。
在某些实施方案中，流动相中水相pH值为9.2，所述pH值通过所述磷酸盐缓冲液调节。
在某些实施方案中，有机相的溶剂选自乙腈、乙醇、甲醇或其混合物。
在某些实施方案中，有机相的溶剂选自乙腈。
在某些实施方案中，流动相中水相与有机相的体积比为2:3。
在某些实施方案中，色谱柱的检测波长为205nm至220nm。
在某些实施方案中，色谱柱的检测波长为215nm。
在某些实施方案中，色谱柱的流速为0.5ml/min至1.5ml/min。
在某些实施方案中，色谱柱的流速为1.5ml/min。
在某些实施方案中，色谱柱的柱温为25℃至35℃。
在某些实施方案中，色谱柱的柱温为30℃。
在某些实施方案中，色谱柱的进样量为10μL至20μL。
在某些实施方案中，色谱柱的进样量为20μL。
实施例1
高效液相色谱法测定米卡芬净前体发酵液的含量。
实施例中所述检测方法的色谱条件：
所用的仪器为：安捷伦Agilent1260高效液相色谱仪；色谱柱：Phenomenex luna5u C18(2)，规格为250mm×4.6mm；流动相为800ml水中加入3.5g磷酸二氢铵流动相与1200ml乙腈的混合溶液。
空白溶液(稀释剂)为甲醇；流速为1.5ml/min；柱温为30℃；进样体积为20μl；
实验步骤：
溶液配制：(1)对照品的制备：精密称取米卡芬净对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各约含0.35mg的混合溶液，作为对照品溶液。(2)供试品溶液的配制：精密移取一定量的米卡芬净前体发酵液，加稀释剂溶解并稀释成每1ml中约含0.3mg米卡芬净的溶液，作为供试品溶液。
精密吸取对照品性溶液、空白溶液、供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪进行测定，得到色谱图。
米卡芬净发酵液的含量＝(对照品浓度×米卡芬净发酵液的峰面积)/(对照品的峰面积×米卡芬净发酵液的浓度)×100％
理论塔板数＝16×(保留时间/峰宽)2或者理论塔板数＝5.54×(保留时间/半峰宽)2
实验结果：对照品的浓度为0.35mg/ml、米卡芬净发酵液的峰面积为5200.7、对照品的峰面积为9964.8、米卡芬净发酵液的浓度为0.3mg/ml、保留时间为25.486min、峰宽具体值为1.528。
根据色谱图，按照不加校正因子的自身对照法计算其杂质，采用外标法计算米卡芬净发酵液的含量为60.9％。
结果表明，空白溶剂不干扰米卡芬净的含量检测。对照品溶液中，米卡芬净分离度符合要求，峰形良好，峰纯度良好，理论塔板数为4451(大于3000)，拖尾因子小于1.5，符合标准。如果有必要的话，调整流动相中乙腈的体积，每升流动相可以加入50ml的乙腈。
实施例2
米卡芬净注射剂的含量测定。
实施例中所述检测方法的色谱条件：
所用的仪器为：安捷伦Agilent1260高效液相色谱仪；色谱柱：Phenomenex luna5u C18(2)，规格为250mm×4.6mm；流动相为800ml水中加入3.5g磷酸二氢铵流动相与1200ml乙腈的混合溶液。
空白溶液(稀释剂)为甲醇；流速为1.5ml/min；柱温为30℃；进样体积为20μl；
实验步骤：
溶液配制：(1)对照品的制备：精密称取米卡芬净对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各约含0.35mg的混合溶液，作为对照品溶液。
(2)供试品溶液的配制：精密移取一定量的米卡芬净注射剂，加稀释剂溶解并稀释成每1ml中约含0.3mg米卡芬净的溶液，作为供试品溶液。
精密吸取对照品性溶液、空白溶液、供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪进行测定，得到色谱图。
米卡芬净发酵液的含量＝(对照品浓度×米卡芬净发酵液的峰面积)/(对照品的峰面积×米卡芬净发酵液的浓度)×100％
理论塔板数＝16×(保留时间/峰宽)2或者理论塔板数＝5.54×(保留时间/半峰宽)2
实验结果：对照品的浓度为0.35mg/ml、米卡芬净注射剂的峰面积为865.3、对照品的峰面积为9872.9、米卡芬净注射剂的浓度为0.3mg/ml、保留时间为25.547min、峰宽具体值为1.514。
根据色谱图，按照不加校正因子的自身对照法计算其杂质，采用外标法计算米卡芬净发酵液的含量为10.2％。
结果表明，空白溶剂不干扰米卡芬净的含量检测。对照品溶液中，米卡芬净分离度符合要求(均大于1.5)，峰形良好，峰纯度良好，理论塔板数为4556(大于3000)，拖尾因子小于1.5，符合标准。如果有必要的话，调整流动相中乙腈的体积，每升流动相可以加入50ml的乙腈。
从前述中可以理解，尽管为了示例性说明的目的描述了本公开的具体实施方案，但是在不偏离本公开的精神和范围的条件下，本领域所述技术人员可以作出各种变形或改进、这些变形或修改都应落入本公开所附权利要求的范围。

Claims (8)

1.米卡芬净含量的分析方法，其包括：
通过反相液相色谱进行测定，色谱柱选用C18色谱柱，流动相由水、缓冲液和有机溶剂组成，按体积分数设置等度洗脱；以及
采用外标法进行定量分析。
2.如权利要求1所述的分析方法，其还包括液相色谱检测前溶液的制备，所述溶液包括：
空白溶液，所述空白溶液是由稀释剂组成；
供试品溶液，所述供试品溶液是由所述米卡芬净制剂与稀释剂组成；以及
对照品溶液，所述对照品溶液是由米卡芬净对照品与稀释剂组成。
3.如权利要求1或2所述的分析方法，其中：所述米卡芬净制剂选自米卡芬净前体发酵液或米卡芬净注射剂；所述稀释剂选自甲醇、乙醇、乙腈、水或其混合物，优选所述稀释剂选自甲醇。
4.如权利要求3所述的分析方法，其中所述水相包括水和磷酸盐缓冲液，优选所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢铵缓冲液或磷酸二氢钾缓冲液，更优选所述磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢铵缓冲液。
5.如权利要求3或4所述的分析方法，其中所述流动相中水相pH值为9.2，所述pH值通过所述磷酸盐缓冲液调节。
6.如权利要求3至5中任一权利要求所述的分析方法，其中所述有机相的溶剂选自乙腈、乙醇、甲醇或其混合物，优选所述有机相的溶剂选自乙腈。
7.如权利要求6所述的分析方法，其中所述流动相中水相与有机相的体积比为2:3。
8.如权利要求6或7所述的分析方法，其中：所述色谱柱的检测波长为205nm至220nm，优选所述色谱柱的检测波长为215nm；所述色谱柱的流速为0.5ml/min至1.5ml/min，优选所述色谱柱的流速为1.5ml/min；所述色谱柱的柱温为25℃至35℃，优选所述色谱柱的柱温为30℃；所述色谱柱的进样量为10μL至20μL，优选所述色谱柱的进样量为20μL。
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