CN112034054B - 一种水产品中奥美普林含量的检测方法 - Google Patents

一种水产品中奥美普林含量的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112034054B
CN112034054B CN202010713875.1A CN202010713875A CN112034054B CN 112034054 B CN112034054 B CN 112034054B CN 202010713875 A CN202010713875 A CN 202010713875A CN 112034054 B CN112034054 B CN 112034054B
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
solution
concentration
acetonitrile
standard
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010713875.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112034054A (zh
Inventor
熊刚
李平
陈忠河
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xiamen Janko Testing Service Co ltd
Original Assignee
Xiamen Janko Testing Service Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xiamen Janko Testing Service Co ltd filed Critical Xiamen Janko Testing Service Co ltd
Publication of CN112034054A publication Critical patent/CN112034054A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112034054B publication Critical patent/CN112034054B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/047—Standards external
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种水产品中奥美普林含量的检测方法，用乙酸乙酯提取，提取液减压浓缩至干，用乙腈+0.1mol/L盐酸溶液(1+1)溶液洗脱，过混合型阳离子交换柱(MCX)净化，10％乙腈水(含0.1％甲酸)溶解。以乙腈和0.3％甲酸水溶液为流动相，C18柱进行分离，高效液相色谱(含二极管阵列检测器)测定。本发明通过二极管阵列检测器特征光谱可以快速准确定性、定量水产品中的奥美普林的残留量，检出限可达到0.006mg/kg，定量下限可达到0.02mg/kg。

Description

一种水产品中奥美普林含量的检测方法
技术领域
本发明属于兽药检测技术领域，具体涉及一种水产品中奥美普林含量的检测方法。
背景技术
奥美普林为磺胺类增效剂，对多数革兰氏阳性菌和阴性菌有效，磺胺类药物单独使用，会使细菌很易产生耐药性，与磺胺增效药物同时使用，可使细菌的叶酸的叶酸代谢收到双重阻断，由于磺胺类药物在体内作用时间和代谢时间较长，摄入体内的磺胺类药物可能在人体内蓄积，当蓄积到一定浓度时对人体的机能是有害的。
CN103884790A公开了一种动物源性食品中兽药多残留的测定方法，步骤如下：称取样品，添加醋酸乙腈溶液，振荡提取后，进行离心，将离心后得到的乙腈提取液装入有混合填料的离心管中，振荡离心，吸取净化液，氮吹浓缩，定容后UPLC/MS/MS检测，该技术方案针对动物产品中磺胺类(包括奥美普林)、喹诺酮类、β激动剂类等107种兽药能够进行定性、定量，检出限完全能够满足检测需求，但该方法前期投入成本很高，试样处理复杂，对人员要求高，且检测过程繁琐，效率低。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种水产品中奥美普林含量的检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种水产品中奥美普林含量的检测方法，包括如下步骤：
(1)称取奥美普林标准品，用甲醇为溶剂配制标准储备液；
(2)精确称取待测样品，加入无水硫酸钠和乙酸乙酯进行均质，再将所得物料经离心后获取上清液；
(3)将上述上清液减压蒸干后，加入乙腈、浓度为0.1mol/L的盐酸和乙腈饱和正己烷进行涡旋洗脱，获得第一洗脱液；
(4)将上述第一洗脱液经离心分层后，取其下层溶液与浓度为0.1mol/L的盐酸涡旋混合后静置，获得待净化液；
(5)将上述待净化液的下层溶液过经过预活化的混合型阳离子交换柱，再用浓度为0.1mol/L的盐酸和甲醇洗涤，弃去洗液，然后用浓度为5wt％的氨水甲醇溶液洗脱，获得第二洗脱液；
(6)将上述第二洗脱液用氮气吹干，加入浓度为10wt％的乙腈水溶液进行溶解，所得物料过有机滤膜后，获得试样，将该试样送入具有二极管阵列检测器的液相色谱仪进行检测，获得试样中的奥美普林的色谱峰面积，其中检测的具体参数为：采用C18柱，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，流动相为0.3％甲酸水溶液∶乙腈＝85∶15，等度洗脱，检测波长为270nm，分析时间为15min；
(7)用浓度为10wt％的乙腈水溶液稀释标准储备液，配制成浓度为0.2-2μg/mL的若干标准溶液，将该若干标准溶液分别过有机滤膜后，以与步骤(6)相同的具体参数送入具有二极管阵列检测器的液相色谱仪进行检测，获得若干标准溶液的峰面积；
(8)以若干标准溶液的浓度为横坐标，以若干标准溶液的奥美普林的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，将步骤(6)所得的色谱峰面积代入该标准工作曲线中，获得试样中的奥美普林的浓度；
(9)将步骤(8)所得的试样中的奥美普林的浓度代入
Figure BDA0002597223160000021
中，即可获得待测样品中的奥美普林的残留量；其中，X为待测样品中的奥美普林的残留量，单位为mg/kg；c为试样中的奥美普林的浓度，单位μg/mL；V为试样的最终定容体积，单位为mL；m为待测样品的质量，单位为g。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(1)中，所述奥美普林标准品的纯度至少为98％。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)中，待测样品、无水硫酸钠和乙酸乙酯的比例为5g∶5g∶40mL。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)中的离心为3800rpm，5min。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)中的减压蒸干的温度为40℃。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(3)中，所述样品、乙腈、浓度为0.1mol/L的盐酸和乙腈饱和正己烷的比例为5g∶1.5mL∶1.5mL∶4mL。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(4)中的离心15000rpm，5min。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(5)中的盐酸、甲醇和氨水甲醇溶液的体积比为5∶5∶8。
在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(5)中的混合型阳离子交换柱的预活化为用甲醇、水和浓度为0.1mol/L的盐酸预活化，其中该甲醇、水和盐酸的体积比为1∶1∶1。
在本发明的一个优选实施方案中，所述有机滤膜的孔径为0.22μm。
本发明的有益效果是：本发明通过二极管阵列检测器特征光谱可以快速准确定性、定量水产品中的奥美普林的残留量，检出限可达到0.006mg/kg，定量下限可达到0.02mg/kg，且步骤简单，对人员要求低。
附图说明
图1为本发明实施例1中标准溶液色谱图。
图2为本发明实施例2中空白色谱图。
图3为本发明实施例3中试样加标色谱图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
1、仪器与试剂：
(1)仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪(配二极管阵列检测器)，色谱柱：ThemroC18柱(4.6mm×250mm，5μm)；BS223S电子天平 北京赛多利斯；XLJ-IIB低速离心机 上海安亭科学仪器厂；TGL-16G高速离心机 上海安亭科学仪器厂；XK80-A漩涡混合器 江苏新康医疗器械有限公司；ASPE06U全自动固相萃取仪 睿科仪器(厦门)有限公司；超声波提取仪 昆山市超声仪器有限公司；水浴氮吹仪 上海安普科学仪器有限公司；高速均质器(德国IKA)
(2)试剂和耗材：甲醇 色谱纯；乙腈 色谱纯；甲酸 色谱纯；正己烷 色谱纯 水 一级水；混合性阳离子交换柱(MCX)60mg/3mL；乙酸乙酯 分析纯；氨水 分析纯；盐酸 分析纯；无水硫酸钠 分析纯 一次性吸管1mL；一次性针筒1mL；10mL玻璃离心管；0.22μm有机系滤膜；样品瓶2mL。
(3)标准物质与标准溶液：
标准物质奥美普林标准品，纯度大于98％；
标准储备液的配制奥美普林标准储备液：准确称取奥美普林标准品50.0mg于10mL烧杯中，用少量甲醇溶液溶解，转移到50mL棕色容量瓶，甲醇定容至50mL，浓度为1.0mg/mL。
标准中间液的配制：从奥美普林标准储备液中吸取0.1mL至100mL棕色容量瓶中，并用甲醇定容，混匀，浓度为1.0μg/mL。
2、试验方法
(1)提取：称待测样品(鳗鱼)5.00g(精确至0.01g)，准确加入5g无水硫酸钠，20mL乙酸乙酯均质，20mL乙酸乙酯清洗均质头，合并提取液振摇，3800r/min离心5min，上清液倒入鸡心瓶，40℃减压蒸干，加入1.5mL乙腈、1.5mL 0.1mol/L盐酸和4mL乙腈饱和正己烷，涡旋洗脱，洗脱液转至10mL离心管中，15000r/min高速离心5min，将下层溶液吸入另一10ml离心管，加入4mL 0.1mol/L盐酸，涡旋混合，静置，获得待净化液。
(2)净化：取带净化液的下层溶液过MCX柱(用3mL甲醇、3mL水和3mL 0.1mol/L盐酸预活化)，5mL0.1mol/L盐酸和5mL甲醇洗涤，弃去洗液，8mL5％氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于10mL玻璃离心管，洗脱液氮气吹干，准确加入1.0mL 10％乙腈水溶液洗脱，过0.22μm有机滤膜，获得试样上机测试，其中液相色谱条件具体为：色谱柱：Thermo C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；流动相：0.3甲酸水溶液∶乙腈＝85∶15，等度洗脱；检测波长：270nm；分析时间15min。
(3)空白试验：除不加试样外，均按试样同法操作
3、结果判定
(1)定性判定：
取试样溶液和相应浓度的标准溶液，作多点校准，按外标法以峰面积计算。试样溶液的质量色谱峰与奥美普林标准工作液的质量色谱峰的保留时间一致；标准溶液和试样溶液中奥美普林的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述液相色谱条件下，标准溶液、空白以及试样加标色谱图见如图1至图3。
(2)定量测定：
分别用10％乙腈水溶液稀释标准中间液和标准储备液，配制标液曲线0.2μg/mL，0.4μg/mL，0.8μg/mL，1.0μg/mL，2.0μg/mL(该溶液应临用现配)；外标法定量。以标准溶液的浓度为横坐标，奥美普林的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
Figure BDA0002597223160000041
式中：X为待测样品中的奥美普林的残留量，单位为mg/kg；c为试样中的奥美普林的浓度，单位μg/mL；V为试样的最终定容体积，单位为mL；m为待测样品的质量，单位为g。
4、结论
(1)线性范围、检出限及定量下限：按照方法进行分析，以不低于3倍信噪比(S/N≥3)且满足方法准确度要求时对应的目标物浓度为检出限(LOD)，以S/N≥10对应的目标物浓度为定量下限(LOQ)。奥美普林在0.2μg/mL-2.0μg/mL范围内呈良好的线性关系(R2＞0.999)，LOD为0.006mg/kg，LOQ为0.02mg/kg(详见表1)。
表1线性范围、检出限及定量下限
Figure BDA0002597223160000051
(2)回收率与相对标准偏差：以空白鳗鱼为基质进行加标回收实验，加标水平为0.05mg/kg，0.1mg/kg和0.2mg/kg，每个加标浓度平行测定6次，计算回收率及批内相对标准偏差(RSD)。
表2回收率和相对标准偏差
Figure BDA0002597223160000052
(3)结论：数据表明方法的线性范围、回收率范围和精密度均能够满足GB/T27404-2008的要求(详见表3)，检出限(LOD)为0.006mg/kg，定量下限(LOQ)为0.02mg/kg，可用于日常水产品中奥美普林的微量残留量检测。
表3本发明结果与GB/T 27404-2008要求的对比
项目 本实施例结果 GB/T 27404-2008要求
校准曲线相关系数 0.99989 ≥0.99
回收率范围 75.2％～104.8％ 60％～120％
精密度 5.28％～7.38％ ≤15％
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (1)

1.一种水产品中奥美普林含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）称取纯度至少为98%的奥美普林标准品，用甲醇为溶剂配制标准储备液；
（2）精确称取待测样品，加入无水硫酸钠和乙酸乙酯进行均质，再将所得物料经离心后获取上清液；待测样品、无水硫酸钠和乙酸乙酯的比例为5g：5g：40mL；离心为3800rpm，5min；减压蒸干的温度为40℃；
（3）将上述上清液减压蒸干后，加入乙腈、浓度为0.1mol/L的盐酸和乙腈饱和正己烷进行涡旋洗脱，获得第一洗脱液；样品、乙腈、浓度为0.1mol/L的盐酸和乙腈饱和正己烷的比例为5g：1.5mL：1.5mL：4mL；
（4）将上述第一洗脱液经离心分层后，取其下层溶液与浓度为0.1mol/L的盐酸涡旋混合后静置，获得待净化液；离心为15000rpm，5min；
（5）将上述待净化液的下层溶液过经过预活化的混合型阳离子交换柱，再用浓度为0.1mol/L的盐酸和甲醇洗涤，弃去洗液，然后用浓度为5wt%的氨水甲醇溶液洗脱，获得第二洗脱液；盐酸、甲醇和氨水甲醇溶液的体积比为5：5：8；混合型阳离子交换柱的预活化为用甲醇、水和浓度为0.1mol/L的盐酸预活化，其中该甲醇、水和盐酸的体积比为1：1：1；
（6）将上述第二洗脱液用氮气吹干，加入浓度为10wt%的乙腈水溶液进行溶解，所得物料过孔径为0.22μm的有机滤膜后，获得试样，将该试样送入具有二极管阵列检测器的液相色谱仪进行检测，获得试样中的奥美普林的色谱峰面积，其中检测的具体参数为：采用 C18柱，流速为1.0mL/min，进样量为20μL，流动相为0.3%甲酸水溶液:乙腈=85：15，等度洗脱，检测波长为270nm，分析时间为15min；
（7）用浓度为10wt%的乙腈水溶液稀释标准储备液，配制成浓度为0.2-2μg/mL的若干标准溶液，将该若干标准溶液分别过有机滤膜后，以与步骤（6）相同的具体参数送入具有二极管阵列检测器的液相色谱仪进行检测，获得若干标准溶液的峰面积；
（8）以若干标准溶液的浓度为横坐标，以若干标准溶液的奥美普林的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，将步骤（6）所得的色谱峰面积代入该标准工作曲线中，获得试样中的奥美普林的浓度；
（9）将步骤（8）所得的试样中的奥美普林的浓度代入
Figure 349072DEST_PATH_IMAGE002
中，即可获得待测样品中的奥美普林的残留量；其中，X为待测样品中的奥美普林的残留量，单位为mg/kg；c为试样中的奥美普林的浓度，单位μg/mL；V为试样的最终定容体积，单位为mL；m为待测样品的质量，单位为g。
CN202010713875.1A 2020-07-10 2020-07-22 一种水产品中奥美普林含量的检测方法 Active CN112034054B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010666179X 2020-07-10
CN202010666179 2020-07-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112034054A CN112034054A (zh) 2020-12-04
CN112034054B true CN112034054B (zh) 2022-09-02

Family

ID=73582948

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010713875.1A Active CN112034054B (zh) 2020-07-10 2020-07-22 一种水产品中奥美普林含量的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112034054B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106896172A (zh) * 2017-01-19 2017-06-27 烟台出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一种动物源性食品中兽药多残留快速检测方法
JP2019182777A (ja) * 2018-04-09 2019-10-24 頂宏生物科技股▲分▼有限公司 ジャワフトモモの水抽出物の加水分解物および該加水分解物を製造する方法ならびに該加水分解物の使用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106896172A (zh) * 2017-01-19 2017-06-27 烟台出入境检验检疫局检验检疫技术中心 一种动物源性食品中兽药多残留快速检测方法
JP2019182777A (ja) * 2018-04-09 2019-10-24 頂宏生物科技股▲分▼有限公司 ジャワフトモモの水抽出物の加水分解物および該加水分解物を製造する方法ならびに該加水分解物の使用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Effect of cooking on residues of ormetoprim and sulfadimethoxine in the muscle of channel catfish;Dehai Xu等;《Food Research International》;19960531;第29卷(第3-4期);第339-344页 *
Oxytetracycline, sulfadimethoxine, and ormetoprim residues in channel catfish by HPLC;W.X.DU等;《Journal of food science》;19951130;第60卷(第6期);第1220-1224页 *
动物源性食品中磺胺类药物增效剂残留的高效液相色谱-串联质谱法测定;蒋原等;《分析测试学报》;20090731;第28卷(第07期);第834-837页 *
高效液相色谱法同时测定鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物;林海丹等;《食品科学》;20050131;第26卷(第1期);第176-179页 *
高效液相色谱法测定动物组织中8种磺胺类药物残留量;王曼霞等;《化学分析计量》;20040228;第13卷(第2期);第14-16页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112034054A (zh) 2020-12-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109596751B (zh) 一种清热养阴活血祛瘀的脉络宁口服液成分检测方法
CN102119961B (zh) 一种复方丹参滴丸的检测方法
CN106124639A (zh) 杜仲药材的多成分含量测定方法
CN111487344B (zh) 益母草颗粒指纹图谱的检测方法
CN107449846B (zh) Hplc-ms测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法
CN109085285B (zh) 一种肠炎宁颗粒的质量控制方法
CN112730674B (zh) 一种罗汉茶的质量检测方法
CN103822975A (zh) 一种党参方的生脉制剂的检测方法
CN103454374B (zh) 骨康药物的检测方法
CN112034054B (zh) 一种水产品中奥美普林含量的检测方法
CN110568111B (zh) 一种巴戟天配方颗粒中寡聚糖的检测方法
CN106324167B (zh) 一种uplc测定黄芪提取物中黄酮类成分的方法
CN111650306A (zh) 一种同时测定六味地黄丸中八种有效成分的hplc方法
CN105675734B (zh) 一种复方丹参浸膏中低聚糖成分的含量测定方法
CN110967422A (zh) 一种益气补血片中黄芪甲苷含量测定方法
CN116242929A (zh) 同时测定红花药物组合物中9种成分的方法
CN1877322B (zh) 一种益母草中水苏碱含量的高效液相色谱检测方法
CN111948331B (zh) 一种无糖型清肝颗粒的质量检测方法
CN110687224B (zh) 雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法
CN111579684B (zh) 一种胶囊剂的囊材中辣椒总碱的含量测定方法
CN101169396A (zh) 化妆品中倍他米松的高效液相色谱检测方法
CN108398493B (zh) 一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法
CN114646690A (zh) 一种枳实薤白桂枝汤中化学成分的检测方法及指纹图谱的建立方法
CN115308317B (zh) 一种糖尿病创面愈合萃取物中指标性成分的高效液相色谱检测方法
CN102078363A (zh) 地锦草中药制剂的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant