CN112557574B - 一种测定cbz-aeea含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明一种测定CBZ‑AEEA含量的方法，高效液相色谱条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB‑C18，检测波长为210nm，柱温为35℃，流动相A为0.1%磷酸，流动相B为乙腈，流动相流速为1ml/min；洗脱程序：0‑5min内，流动相A由95%将至70%，流动相B由5%升至30%，5‑15min内，流动相A由70%将至50%，流动相B由30%升至50%，15‑25min内，流动相A由50%将至30%，流动相B由50%升至70%，25‑28min内，流动相A由30%将至0，流动相B由70%升至100%，28‑40min内，流动相A保持0，流动相B保持100%，40‑41min内，流动相A由0升至95，流动相B由100%降至5%，41‑45min内，流动相A保持95%，流动相B保持5%。本发明可有效将CBZ‑AEEA与CBZ‑2A、CBZ‑3A、CBZ‑4A、CBZ‑6A、CBZ‑8A，以及CBZ‑β‑Ala分离，从而实现准确检测待测样品中CBZ‑AEEA的含量。

Description

一种测定CBZ-AEEA含量的方法
技术领域
本发明属于化学分析领域，具体涉及一种测定CBZ-AEEA含量的方法。
背景技术
CBZ-AEEA生产过程中，不免产生各种杂质，其中以同系列的CBZ-2A、CBZ-3A、CBZ-4A、CBZ-6A、CBZ-8A，以及CBZ-β-Ala为主，且由于CBZ-AEEA与CBZ-β-Ala性质相近，不易分离。现有技术中，并无一种检测方法可以有效将CBZ-AEEA与上述杂质分离，以测定CBZ-AEEA的含量。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种测定CBZ-AEEA含量的方法，该方法基于高效液相色谱仪，可有效将CBZ-AEEA与CBZ-β-Ala分离，以及与其同系列杂质分离，从而准确测定CBZ-AEEA的含量。
一种测定CBZ-AEEA含量的方法，高效液相色谱条件为：色谱柱为Agilent ZORBAXSB-C18，检测波长为210nm，柱温为35℃，流动相A为0.1%磷酸，流动相B为乙腈，流动相流速为1ml/min；洗脱程序：0-5min内，流动相A由95%将至70%，流动相B由5%升至30%，5-15min内，流动相A由70%将至50%，流动相B由30%升至50%，15-25min内，流动相A由50%将至30%，流动相B由50%升至70%，25-28min内，流动相A由30%将至0，流动相B由70%升至100%，28-40min内，流动相A保持0，流动相B保持100%，40-41min内，流动相A由0升至95，流动相B由100%降至5%，41-45min内，流动相A保持95%，流动相B保持5%。
进一步的，进样量为3μL。
进一步的，待测样品浓度为5mg/mL。
进一步的，待测样品的稀释剂为乙腈。
进一步的，所述色谱柱规格为250×4.6mm,5μm。
进一步的，所述方法，具体包括以下步骤：
（1）设置高效液相色谱条件；
（2）绘制标准曲线：将CBZ-AEEA标准品配置成不同浓度的试样，不同浓度的标准品试样进入高效液相色谱仪进行检测，得到不同浓度的主产品CBZ-AEEA的峰对应的峰面积，绘制出标准曲线，得到回归方程；
（3）检测待测样品：将待测样品稀释至5mg/mL，将待测样品进入高效液相色谱仪中进样检测，记录待测样品中CBZ-AEEA峰的峰面积，并将其带入步骤（2）所得回归方程中，计算出CBZ-AEEA的浓度，再根据计算浓度与实际稀释浓度计算出含量。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明方法流动相A为0.1%磷酸，0.1%的磷酸可以减少拖尾，有助于分离物质，且本发明中流动相联合洗脱程序，在45分钟内，可以有效将CBZ-AEEA与CBZ-2A、CBZ-3A、CBZ-4A、CBZ-6A、CBZ-8A，以及CBZ-β-Ala分离，且CBZ-AEEA与CBZ-β-Ala的分离度达1.3，CBZ-AEEA与其他同系列的杂质的分离度大于2，从而实现准确检测待测样品中CBZ-AEEA的含量。
附图说明
图1为CBZ-AEEA与各杂质分离图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，并不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例
（1）设置高效液相色谱条件；色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，规格为250×4.6mm，5μm，检测波长为210nm，柱温为35℃，流动相A为0.1%磷酸，流动相B为乙腈，流动相流速为1ml/min；洗脱程序：0-5min内，流动相A由95%将至70%，流动相B由5%升至30%，5-15min内，流动相A由70%将至50%，流动相B由30%升至50%，15-25min内，流动相A由50%将至30%，流动相B由50%升至70%，25-28min内，流动相A由30%将至0，流动相B由70%升至100%，28-40min内，流动相A保持0，流动相B保持100%，40-41min内，流动相A由0升至95，流动相B由100%降至5%，41-45min内，流动相A保持95%，流动相B保持5%；
（2）绘制标准曲线：将CBZ-AEEA标准品配置成不同浓度的试样，具体为3 mg/mL，4mg/mL，5 mg/mL，6 mg/mL，7 mg/mL，8 mg/mL，并将制得的不同浓度的标准品试样进入高效液相色谱仪进行检测，得到不同浓度的主产品CBZ-AEEA的峰对应的峰面积，绘制出标准曲线，得到回归方程，y=169x+906，其中y=为峰面积，x为样品浓度，R2为0.9998，即在3-8mg/mL范围内线性良好；
（3）检测待测样品：将待测样品稀释至约5mg/mL，将待测样品进入高效液相色谱仪中进样检测，记录待测样品中CBZ-AEEA峰的峰面积，并将其带入步骤（2）所得回归方程中，即可计算出CBZ-AEEA的浓度，从而计算出CBZ-AEEA的含量，CBZ-AEEA含量=C计算CBZ-AEEA的浓度/C样品实际稀释浓度*100%。
方法学验证：
（1）准确度实验：精密称取CBZ-AEEA标准品约40mg、50mg和60mg各三份，分别置于10mL容量瓶中，分别加稀释剂至刻度，摇匀，按照上述色谱条件进行进样，记录峰面积，根据上述回归方程计算浓度，根据测定值=浓度*10mL得到测定值，结果见表1，因此本发明有良好的准确度。
表1
（2）重复性：精密称取CBZ-AEEA标准品约50mg，置于10mL容量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，取六份作为待测样品，按照上述色谱条件进行进样，测定该六份待测样品，记录峰面积，根据上述回归方程计算根据上述回归方程计算浓度，根据测定值=浓度*10mL，得到测定值，结果见表2，因此本发明有良好的重复性。
表2
（3）中间精密度：六个不同操作人员，分别在六个不同日期，使用六台不同仪器，对重复性验证中六份待测样品进行进样，记录峰面积，根计算根据上述回归方程计算浓度，根据测定值=浓度*10mL，得到测定值，结果见表3，因此本发明有良好的中间精密度。
表3

Claims (6)

1.一种测定CBZ-AEEA含量的方法，其特征在于，高效液相色谱条件为：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，检测波长为210nm，柱温为35℃，流动相A为0.1%磷酸，流动相B为乙腈，流动相流速为1ml/min；洗脱程序：0-5min内，流动相A由95%降至70%，流动相B由5%升至30%，5-15min内，流动相A由70%降至50%，流动相B由30%升至50%，15-25min内，流动相A由50%降至30%，流动相B由50%升至70%，25-28min内，流动相A由30%降至0%，流动相B由70%升至100%，28-40min内，流动相A保持0%，流动相B保持100%，40-41min内，流动相A由0%升至95%，流动相B由100%降至5%，41-45min内，流动相A保持95%，流动相B保持5%；
测定样品中包括CBZ-2A、CBZ-3A、CBZ-4A、CBZ-6A、CBZ-8A和CBZ-β-Ala；
所述测定样品的主要成分为CBZ-AEEA；
CBZ-AEEA与CBZ-β-Ala的分离度达1.3；
CBZ-AEEA与CBZ-2A、CBZ-3A、CBZ-4A、CBZ-6A、CBZ-8A的分离度均大于2。
2.根据权利要求1所述的一种测定CBZ-AEEA含量的方法，其特征在于，进样量为3μL。
3.根据权利要求1所述的一种测定CBZ-AEEA含量的方法，其特征在于，待测样品浓度为5mg/mL。
4.根据权利要求1所述的一种测定CBZ-AEEA含量的方法，其特征在于，待测样品的稀释剂为乙腈。
5.根据权利要求1所述的一种测定CBZ-AEEA含量的方法，其特征在于，所述色谱柱规格为250×4.6mm,5μm。
6.根据权利要求1-4任一项所述的一种测定CBZ-AEEA含量的方法，其特征在于，所述方法，具体包括以下步骤：
（1）设置高效液相色谱条件；
（2）绘制标准曲线：将CBZ-AEEA标准品配置成不同浓度的标准品试样，不同浓度的标准品试样进入高效液相色谱仪进行检测，得到不同浓度的CBZ-AEEA的峰对应的峰面积，绘制出标准曲线，得到回归方程；
（3）检测待测样品：将待测样品稀释至5mg/mL，将待测样品进入高效液相色谱仪中进样检测，记录待测样品中CBZ-AEEA峰的峰面积，并将其带入步骤（2）所得回归方程中，计算出CBZ-AEEA的浓度，再根据计算浓度与实际稀释浓度计算出含量。
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