CN108802233A - 一种肉桂中多种药效成分的检测方法 - Google Patents

一种肉桂中多种药效成分的检测方法 Download PDF

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CN108802233A CN201810712313.8A CN201810712313A CN108802233A CN 108802233 A CN108802233 A CN 108802233A CN 201810712313 A CN201810712313 A CN 201810712313A CN 108802233 A CN108802233 A CN 108802233A
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田禾苗
姜鹏
詹常森
张正光
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Abstract

本发明提供一种肉桂中多种药效成分的检测方法，包括以下步骤：1）供试品溶液的制备：取肉桂药材加入甲醇，超声提取后冷却，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；2）对照品溶液的制备：将桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2‑甲氧基桂皮醛对照品，加入甲醇溶解并定容，配成对照品溶液；3）检测：采用高效液相色谱法分别测定步骤1）中的供试品溶液和步骤2）中的对照品溶液，根据相对保留时间，确定供试品溶液中4种肉桂成分，并采用外标法确定供试品溶液中4种药效成分的含量。本发明可以对肉桂中4种主要药效成分同时进行有效的定性和定量分析，方法同步、简便、可行、准确，更全面地控制肉桂药材的内在质量。

Description

一种肉桂中多种药效成分的检测方法
技术领域
本发明属于中药成分检测的技术领域，涉及一种肉桂中多种药效成分的检测方法。
背景技术
肉桂作为中药材，是樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮。其味辛、甘，性大热，有补火助阳，引火归元，散寒止痛，温通经脉的功效。目前，肉桂药材中治疗心血管疾病的主要活性成分为桂皮醛，在《中华人民共和国药典》2015版一部中已收载针对肉桂中桂皮醛的含量测定标准。同时，根据相关参考文献报道，肉桂中还含有肉桂酸、香豆素等化学成分。其中肉桂酸具有多种生理活性，例如：治疗动脉粥样化、抗肿瘤、抗菌、消炎、抗氧化、抗血栓形成和保护心脏等功能。香豆素类化合物具有抗肿瘤、抗凝血、抗氧化等作用。为了更全面地控制肉桂药材的内在质量，保障肉桂药材批次间质量和疗效的稳定性，有必要建立肉桂中多种药效成分的检测方法，作为现行质量控制标准的补充和提高。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种肉桂中多种药效成分的检测方法，采用优化条件的前处理和仪器检测方法对肉桂中4种主要药效成分：桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛，同时进行定性定量分析，进而反映肉桂药材的内在质量，为保障肉桂药材批次间质量和疗效的稳定性提供依据。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种肉桂中多种药效成分的检测方法，包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取肉桂药材加入甲醇，超声提取后冷却，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：将桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛对照品，加入甲醇溶解并定容，配成对照品溶液；
3)检测：采用高效液相色谱法分别测定步骤1)中的供试品溶液和步骤2)中的对照品溶液，根据相对保留时间，确定供试品溶液中4种肉桂成分，并采用外标法确定供试品溶液中4种药效成分的含量。
优选地，所述肉桂中多种药效成分共4种，分别为桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛。
更优选地，所述桂皮醛的CAS号为104-55-2，所述肉桂酸的CAS号为140-10-3，所述香豆素的CAS号为91-64-5，所述2-甲氧基桂皮醛的CAS号为1504-74-1。
优选地，步骤1)中，所述肉桂药材为破碎后过三号筛的肉桂药材粉末。
优选地，步骤1)中，所述甲醇的加入量为肉桂药材的20～50倍量。更优选地，所述甲醇的加入量为肉桂药材的50倍量。具体来说，所述甲醇的加入量为肉桂药材的20～50倍量是指，甲醇加入体积量为所述肉桂药材含量的20～50倍，即如每0.5g的肉桂药材中加入甲醇10～25ml。
优选地，步骤1)中，所述超声提取时间为10～40min。更优选地，所述超声提取时间为30min。
优选地，步骤1)中，所述肉桂药材加入甲醇后，需精密称重。
优选地，步骤1)中，所述冷却后需再称重，并用甲醇补足失重。
优选地，步骤1)中，所述过滤是指：取摇匀后溶液的上清液过滤膜，放弃初滤液后，即得续滤液。
更优选地，所述滤膜为0.45μm滤膜。
优选地，步骤1)或2)中，所述甲醇为100％纯甲醇。
优选地，步骤2)中，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：桂皮醛为52.6440-677.0000μg/ml、肉桂酸为3.7636-48.4000μg/ml、香豆素为3.8569-49.6000μg/ml、2-甲氧基桂皮醛为7.6205-98.0000μg/ml。更优选地，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：桂皮醛为250μg/ml、肉桂酸为10μg/ml、香豆素为18μg/ml、2-甲氧基桂皮醛为35μg/ml。
优选地，步骤3)中，所述高效液相色谱法中的色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)。
优选地，步骤3)中，所述高效液相色谱法中的检测波长为280～290nm。更优选地，所述高效液相色谱法中的检测波长为280nm。
优选地，步骤3)中，所述高效液相色谱法中的柱温为25～35℃。更优选地，所述高效液相色谱法中的柱温为30℃。
优选地，步骤3)中，所述高效液相色谱法中的流速为1.0～1.4ml/min。更优选地，所述高效液相色谱法中的流速为1.2ml/min。
优选地，步骤3)中，所述高效液相色谱法中的进样量为1～20μl。更优选地，所述高效液相色谱法中的进样量为10μl。
优选地，步骤3)中，所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.02-0.04％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.02-0.04％磷酸水溶液；分析时间为40min；梯度洗脱。
更优选地，所述0.02-0.04％磷酸水溶液为体积百分数为0.02-0.04％的磷酸水溶液。
更优选地，所述流动相为乙腈-0.03％磷酸水溶液。
更优选地，所述梯度洗脱以流动相A相：B相体积比为24：76-42：58梯度变化洗脱。
进一步优选地，所述梯度洗脱的具体程序为：
0～20min，A相：B相体积比为24：76-24：76；
20～30min，A相：B相体积比为24：76-35：65；
30～40min，A相：B相体积比为35：65-42：58。
优选地，步骤3)中，所述外标法是指：分别移取一系列不同浓度的步骤2)所述对照品溶液，采用高效液相色谱仪进样分析，获得对照品溶液中4种药效成分含量与峰面积的线性关系，以每一种药效成分色谱峰面积对应其相应的含量，绘制相应的标准工作曲线，计算得到各标准工作曲线的回归方程。再将供试品溶液采用高效液相色谱仪检测，将获得的供试品溶液中4种药效成分的色谱峰面积，分别代入所述各标准工作曲线的回归方程中，可得到相应4种药效成分的含量。
如上所述，本发明提供的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，采用优化条件的前处理和仪器检测方法对肉桂中4种主要药效成分(桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛)进行同时、简单、准确的定量定性检测。本发明通过对肉桂中4种药效成分的定量分析，定量分析结果中4种药效成分的回归方程的相关系数R2均大于0.99990，回收率为96.06～101.50％，RSD均小于3％，测定方法的精密度、重复性、稳定性良好。本发明的定性定量分析方法同步、简便、可行、准确，更全面地控制肉桂药材的内在质量，保障肉桂药材批次间质量和疗效的稳定性，并作为现行质量控制标准的补充和提高。
附图说明
图1显示为本发明的肉桂中4种药效成分的对照品的液相色谱图。
图2显示为本发明的肉桂中4种药效成分的供试品的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置；所有压力值和范围都是指相对压力。
此外应理解，本发明中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；还应理解，本发明中提到的一个或多个设备/装置之间的组合连接关系并不排斥在所述组合设备/装置前后还可以存在其他设备/装置或在这些明确提到的两个设备/装置之间还可以插入其他设备/装置，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
以下实施例使用的试剂和仪器如下：
1、试剂
甲醇(分析纯，上海展云化工有限公司)；乙腈(色谱纯，美国TEDIA公司)；磷酸(色谱纯，美国TEDIA公司)；去离子水(Mili-Q超纯水仪制备)；桂皮醛(纯度≥99.0％，批号：110710-201212，中国食品药品检定研究院)；肉桂酸(纯度≥99.4％，批号：110786-200503，中国食品药品检定研究院)；香豆素(纯度≥98％，批号：SLBF4096V，Sigma-Aldrich公司)；2-甲氧基桂皮醛(纯度≥98％，批号：MKBL5406V，Sigma-Aldrich公司)。
肉桂药材，由上海和黄药业有限公司提供，共12批次，批号见下表1。
表1肉桂药材批号
编号 批号 编号 批号
S1 130901 S7 J151110
S2 J140101 S8 J151211
S3 J140603 S9 J151212
S4 J140804 S10 J160403
S5 J141005 S11 J160604
S6 J141206 S12 J160605
2、仪器
Agilent 1260型高效液相色谱仪(配置在线真空脱气机、自动进样器、四元泵、DAD检测器、恒温柱温箱、Agilent ChemStation C 01.05色谱工作站，USA Agilent Co.ltd)；SB-5200型超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)；Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)。
实施例1
1、样品前处理
供试品溶液的制备：将肉桂药材破碎后过三号筛，获得肉桂药材粉末。精密称定0.5g肉桂药材粉末，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声提取，冷却后，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀。其中，甲醇的加入量为肉桂药材的50倍量。超声提取时间为30min。然后，取摇匀后溶液的上清液过0.45μm滤膜，放弃初滤液后，取续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：分别精密称取桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛对照品，加入甲醇溶解并定容，摇匀，配成对照品溶液。其中，对照品溶液中各成分的含量范围为：桂皮醛为250μg/ml、肉桂酸为10μg/ml、香豆素为18μg/ml、2-甲氧基桂皮醛为35μg/ml。
2、色谱条件
高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1.2ml/min；进样量：10μl；流动相：乙腈-0.03％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.03％磷酸水溶液；分析时间为40min；梯度洗脱。
梯度洗脱的具体程序为：
0～20min，A相：B相体积比为24：76-24：76；
20～30min，A相：B相体积比为24：76-35：65；
30～40min，A相：B相体积比为35：65-42：58。
3、测定
采用外标法，分别移取一系列不同浓度的步骤1中的所述对照品溶液，采用步骤2中的色谱条件的高效液相色谱仪进样分析，获得对照品溶液中4种药效成分含量与峰面积的线性关系，以每一种药效成分色谱峰面积对应其相应的含量，绘制相应的标准工作曲线，计算得到各标准工作曲线的回归方程。再移取10μl的供试品溶液，采用高效液相色谱仪检测，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间，确定供试品溶液中4种药效成分；并将获得的供试品溶液中4种药效成分的色谱峰面积，分别代入所述各标准工作曲线的回归方程中，可得到相应4种药效成分的含量，具体检测结果见图1、2。
实施例2
1、样品前处理
供试品溶液的制备：将肉桂药材破碎后过三号筛，获得肉桂药材粉末。精密称定肉桂药材粉末，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，超声提取，冷却后，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀。其中，甲醇的加入量为肉桂药材的20～50倍量，即每0.5g的肉桂药材中加入甲醇10～25ml。超声提取时间为10～40min。然后，取摇匀后溶液的上清液过0.45μm滤膜，放弃初滤液后，取续滤液作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：分别精密称取桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛对照品，加入甲醇溶解并定容，摇匀，配成对照品溶液。其中，对照品溶液中各成分的含量范围为：桂皮醛为52.6440-677.0000μg/ml、肉桂酸为3.7636-48.4000μg/ml、香豆素为3.8569-49.6000μg/ml、2-甲氧基桂皮醛为7.6205-98.0000μg/ml。
2、色谱条件
高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)；检测波长：280～290nm；柱温：25～35℃；流速：1.0～1.4ml/min；进样量：1～20μl；流动相：乙腈-0.02-0.04％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.02-0.04％磷酸水溶液；分析时间为40min；梯度洗脱。
所述梯度洗脱以流动相A相：B相体积比为24：76-42：58梯度变化洗脱。
梯度洗脱的具体程序为：
0～20min，A相：B相体积比为24：76-24：76；
20～30min，A相：B相体积比为24：76-35：65；
30～40min，A相：B相体积比为35：65-42：58。
3、测定
采用外标法，分别移取一系列不同浓度的步骤1中的所述对照品溶液，采用步骤2中的色谱条件的高效液相色谱仪进样分析，获得对照品溶液中4种药效成分含量与峰面积的线性关系，以每一种药效成分色谱峰面积对应其相应的含量，绘制相应的标准工作曲线，计算得到各标准工作曲线的回归方程。再移取10μl的供试品溶液，采用高效液相色谱仪检测，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间，确定供试品溶液中4种药效成分；并将获得的供试品溶液中4种药效成分的色谱峰面积，分别代入所述各标准工作曲线的回归方程中，可得到相应4种药效成分的含量。
实施例3
根据现有多种前处理及仪器检测条件，对本发明的肉桂中多种药效成分的检测方法进行前处理及仪器检测条件的优化选择。
1、提取方法的选择
精密称定过三号筛的肉桂药材粉末0.5g(批号：J140603)，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，分别采用3种提取方法进行提取，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀。3种提取方法分别为冷浸过夜、超声提取(功率300W，频率40kHz)30分钟、冷浸过夜后再超声提取30分钟。然后，取摇匀后溶液的上清液过0.45μm滤膜，放弃初滤液后，取续滤液分别进行HPLC分析，不同提取方法对肉桂中4种药效成分的检测结果见表2。
表2
由表1可知，以4种药效成分的峰面积为主要指标进行比较，可以发现超声提取法提取效果最佳，且超声提取操作简便快速，因此提取方法选用超声提取。
2、提取时间的选择
精密称定过三号筛的肉桂药材粉末0.5g(批号：J140603)，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，分别采用超声提取(功率300W，频率40kHz)10分钟、20分钟、30分钟、40分钟，冷却，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀。然后，取摇匀后溶液的上清液过0.45μm滤膜，放弃初滤液后，取续滤液分别进行HPLC分析，不同提取方法对肉桂中4种药效成分的检测结果见表3。
表3
由表3可知，以4种药效成分的峰面积为主要指标进行比较，可以发现超声提取10-40分钟均具有一定的提取效果，但其中提取30分钟效果最佳。
3、色谱柱的选择
按照实施例1中步骤1的样品前处理，采用3种不同的色谱柱对同一批号的肉桂样品(批号J140603)进行考察，其中，3种色谱柱分别为(1)Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)、(2)Waters symmetryshieldTMRP18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)、(3)Alltima C18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)，HPLC其它色谱条件同实施例1中步骤2。采用不同型号色谱柱所得到的分离效果差异较大，其中，Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)可完全较好地分离峰1香豆素与相邻杂质，同时峰4也能获得满意的分离效果，且峰2与峰3的保留时间适宜。故选用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(5μm,4.6mm×250mm)作为分析肉桂药材中4种药效成分的专用色谱柱。
实施例4
对本发明中的肉桂中4种药效成分的检测方法进行方法学验证，其性能指标结果如下。
1、精密度
取肉桂药材粉末(批号：J140603)，按实施例1中步骤1的样品前处理制备获得供试品溶液，精密吸取同一供试品溶液，按实施例1中步骤2的色谱条件，连续进样分析6次，测定峰面积，精密度具体结果见表4。结果表明，4种药效成分的色谱峰面积RSD均小于0.99％，说明该方法精密度良好。
表4
2、重复性
取同一批肉桂药材粉末(批号：J140603)6份，按实施例1中步骤1进行样品前处理，并按实施例1中步骤2的色谱条件，分别进样分析，测定峰面积，重复性具体结果见表5。结果表明，54种药效成分的色谱峰面积RSD均小于0.92％，说明该方法重复性良好。
表5
3、稳定性
取肉桂药材粉末(批号：J140603)，按实施例1中步骤1的样品前处理制备获得供试品溶液，精密吸取同一供试品溶液，按实施例1中步骤2的色谱条件，分别于0、4、8、12、24、48h进样分析，测定峰面积，稳定性具体结果见表6。结果表明，4种药效成分的色谱峰面积RSD均小于0.69％，说明该方法稳定性良好。
表6
4、检测方法的线性关系
精密称取实施例1中步骤1的对照品溶液适量，加甲醇溶解并定容至刻度，通过逐级稀释制备成含有不同质量浓度成分的对照品溶液。按实施例1中步骤2的色谱条件，精密吸取各个不同浓度的对照品溶液10μl进样，测定并计算获得4种药效成分的标准回归方程、相关系数和线性范围，具体结果见表7。根据表7可知，标准回归方程以色谱峰面积为纵坐标(y)，化合物质量为横坐标(x)。4种药效成分在一定线性范围内均呈良好的线性关系，其标准回归方程的相关系数R2均大于0.99993。
表7
化合物 标准曲线 R2 线性范围(μg)
香豆素 y＝34.86274x-2.95329 0.99999 3.8569～49.600
肉桂酸 y＝70.58484x-31.83677 0.99993 3.7636～48.400
桂皮醛 y＝77.98894x-121.16604 0.99998 52.644～677.00
2-甲氧基桂皮醛 y＝48.83061x-16.34409 0.99994 7.6205～98.000
5、回收率
精密称取6份已知浓度的肉桂样品(批号J140603)0.25g，分别准确加入一定量的4种药效成分对照品，按实施例1中步骤1进行样品前处理，并按实施例1中步骤2的色谱条件，分别进样分析，结果见表8。由表8可知，4种药效成分的平均回收率为96.06～101.50％，RSD为1.07～2.19％，其测定结果的回收率良好。
表8
实施例5
1、实际样品测定
取如表1所示的多批次肉桂药材，样品涵盖2013年至2016年的用于生产麝香保心丸的12批肉桂原料。将上述肉桂药材按实施例1中步骤1进行样品前处理，并按实施例1中步骤2的色谱条件，分别进样分析，含量测定结果见表9。由表9可知，12批肉桂药材中香豆素的含量范围为0.04～0.92％；肉桂酸的含量范围为0.04～0.11％；桂皮醛的含量范围为1.70～7.79％；2-甲氧基桂皮醛的含量范围为0.15～0.28％。
表9
2、结果讨论
另外，由表9可知，有部分批次的成品中出现桂皮醛色谱峰异常增大以及一个新的色谱峰导致成品相似度低于0.90，我们追溯相应批次麝香保心丸成品对应的原药材，确定异常原因是由于相应批次肉桂原料(J151211、J151212)中桂皮醛以及香豆素的含量大幅度高于以往的肉桂原料，并且成品图谱中的新异常峰经对照品指认确定为香豆素，由此可见肉桂原料的质量稳定均一决定了成品质量的稳定性。
并且，J151211、J151212两批肉桂药材的多药效成分含量测定结果中发现，香豆素含量的增高与桂皮醛含量的高低有一定的关联性，为了保证麝香保心丸成品的相似度稳定，限定香豆素的含量既可以保证香豆素色谱峰不发生异常增大又能间接控制桂皮醛的含量，可见本发明提供的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，能够全面地控制肉桂药材的内在质量，保障肉桂药材批次间质量和疗效的稳定性。同时，我们根据以往肉桂多批次数据(香豆素含量为0.04～0.09％)对肉桂原料中的香豆素含量进行追加限定，规定肉桂药材中含香豆素不得高于0.20％，可见本发明提供的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，还能用于对现行质量控制标准进行补充和提高。
综上所述，本发明可以对肉桂中4种主要药效成分同时进行有效的定性和定量分析，方法同步、简便、可行、准确，更全面地控制肉桂药材的内在质量。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种肉桂中多种药效成分的检测方法，包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取肉桂药材加入甲醇，超声提取后冷却，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：将桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛对照品，加入甲醇溶解并定容，配成对照品溶液；
3)检测：采用高效液相色谱法分别测定步骤1)中的供试品溶液和步骤2)中的对照品溶液，根据相对保留时间，确定供试品溶液中4种肉桂成分，并采用外标法确定供试品溶液中4种药效成分的含量。
2.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，所述肉桂中多种药效成分共4种，分别为桂皮醛、肉桂酸、香豆素、2-甲氧基桂皮醛。
3.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述肉桂药材为破碎后过三号筛的肉桂药材粉末；所述甲醇的加入量为肉桂药材的20～50倍量。
4.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述超声提取时间为10～40min。
5.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，包括以下条件中任一项或多项：
A1)所述肉桂药材加入甲醇后，需精密称重；
A2)所述冷却后需再称重，并用甲醇补足失重；
A3)所述过滤是指：取摇匀后溶液的上清液过滤膜，放弃初滤液后，即得续滤液。
6.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：桂皮醛为52.6440-677.0000μg/ml、肉桂酸为3.7636-48.4000μg/ml、香豆素为3.8569-49.6000μg/ml、2-甲氧基桂皮醛为7.6205-98.0000μg/ml。
7.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述高效液相色谱法中的色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱；所述高效液相色谱法中的检测波长为280～290nm。
8.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.02-0.04％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.02-0.04％磷酸水溶液；分析时间为40min；梯度洗脱；所述梯度洗脱以流动相A相：B相体积比为24：76-42：58梯度变化洗脱。
9.根据权利要求8所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的具体程序为：0～20min，A相：B相体积比为24：76-24：76；20～30min，A相：B相体积比为24：76-35：65；30～40min，A相：B相体积比为35：65-42：58。
10.根据权利要求1所述的一种肉桂中多种药效成分的检测方法，其特征在于，步骤3)中，包括以下条件中任一项或多项：
B1)所述高效液相色谱法中的柱温为25～35℃；
B2)所述高效液相色谱法中的流速为1.0～1.4ml/min；
B3)所述高效液相色谱法中的进样量为1～20μl。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113237961A (zh) * 2020-11-18 2021-08-10 上海和黄药业有限公司 一种药物制剂中肉桂与苏合香的主要药效成分的检测方法
CN113759014A (zh) * 2020-08-31 2021-12-07 北京康仁堂药业有限公司 一种佩兰及其制剂的质量控制方法、香豆素含量的测定方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102169110A (zh) * 2011-05-26 2011-08-31 浙江中烟工业有限责任公司 高效液相色谱测定香精香料中邻氨基苯甲酸肉桂酯的方法
CN104815025A (zh) * 2015-05-25 2015-08-05 陈世忠 一种桂枝茯苓制剂的制备工艺和质量控制方法
CN105067747A (zh) * 2015-08-06 2015-11-18 上海和黄药业有限公司 一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102169110A (zh) * 2011-05-26 2011-08-31 浙江中烟工业有限责任公司 高效液相色谱测定香精香料中邻氨基苯甲酸肉桂酯的方法
CN104815025A (zh) * 2015-05-25 2015-08-05 陈世忠 一种桂枝茯苓制剂的制备工艺和质量控制方法
CN105067747A (zh) * 2015-08-06 2015-11-18 上海和黄药业有限公司 一种麝香保心丸中苏合香药味成分指纹图谱的检测方法及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PENGFEI YUAN 等: "Quantification of seven phenylpropanoid compounds in Chinese Cinnamomi Cortex and Ramulus by HPLC", 《JOURNAL OF CHINESE PHARMACEUTICAL SCIENCES》 *
刘威 等: "HPLC测定不同商品规格桂枝中香豆素、肉桂醇、肉桂酸、桂皮醛的含量", 《中国实验方剂学杂志》 *
张医平: "《中药材生产质量管理规范实施手册》", 31 December 2002, 金版电子出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113759014A (zh) * 2020-08-31 2021-12-07 北京康仁堂药业有限公司 一种佩兰及其制剂的质量控制方法、香豆素含量的测定方法及其应用
CN113237961A (zh) * 2020-11-18 2021-08-10 上海和黄药业有限公司 一种药物制剂中肉桂与苏合香的主要药效成分的检测方法

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