CN102028773A - 固公果根提取物的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱：供试品溶液的制备；参照物溶液的制备；采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯度洗脱；以儿茶素计算，理论塔板数为5000-20000；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，用液相色谱法测定，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；第二步，用与第一步相同的方法测定待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱；第三步，将待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱与固公果根提取物酚酸酸类成分标准指纹图谱对比，鉴别固公果根提取物的质量。本发明为完整、准确评价固公果根提取物的质量提供了新的方法和手段。
Description
技术领域
本发明涉及一种固公果根提取物的鉴别方法。
背景技术
中药固公果根是蔷薇科蔷薇属植物固公果Rose odorata Sweet var.gigantea(Coll.etHemsl.)Rehd.et Wils的根，性平、味酸，具有涩肠止泻的功效，能迅速杀死致病菌，保护消化道黏膜，加快肠壁血液循环，加快溃烂肠黏膜愈合，常用于治疗腹泻、菌痢等疾病[1]，是一味应用历史悠久的彝族民间药材。同时该药材也是云南曲靖制药厂生产治疗肠炎腹泻的中成药“肠舒片”原料。固公果根源于彝族民间验方，对各种腹泻均有很好的治疗效果。但是对于该中药提取物及其产品制剂的质量控制方法相对简单，并不能完全反映该药材以及该中成药的产品质量。只是按照1974年云南地方药品标准(滇Q/WS 269-1974)中关于固公果根药材的检测方法项下和目前国家药品监督管理局制定的肠舒片试行标准项下要求进行固公果根药材中鞣质的定性定量鉴别。其质量控制方法的不全面性及生产过程中的不稳定性导致各批次产品之间质量可能会出现差异，很难说能从通过“量”达到控制“质”的目的。且如果仅通过单一指标来说明其特殊的药理活性，专属性较差，但鉴于实际又不可能对各种成分进行一一测定，因此，需要一种快速、相对准确的固公果根提取物及其制剂的鉴别方法，用以科学、有效地鉴别并控制中药固公果根提取物及其制剂的质量。
参考文献：
[1]任洁，何广新.苗药-固公果阿江制剂-“肠康胶囊”的质量标准研究.中国民族民间医药杂志，1998，31：41.
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种固公果根提取物的鉴别方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：
第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下：
(a)供试品溶液的制备：精密称取固公果根药材适量，加入含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液、含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液、体积分数为0％～2％的盐酸水溶液、体积分数为1％～100％甲醇水溶液或体积分数为1％～95％的乙醇水溶液为提取溶剂，所述提取溶剂的加入质量为药材质量的4～12倍，振摇后浸泡提取2～12h，提取1-3次，过滤，合并提取液，在25～60℃加热减压干燥至干，得到固公果根提取物；用体积分数为0％～100％的甲醇水溶液或体积分数为0％～100％的乙醇水溶液溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg～20mg/mL的供试品溶液；所述含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％；所述含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％；
(b)参照物溶液的制备：精密称取对照品儿茶素，用体积分数为0％～100％甲醇水溶液或体 积分数为0％～100％乙醇水溶液溶解稀释，配置成0.01mg～5mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件：采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯度洗脱；流速0.7mL/min；检测波长为260-320nm；色谱柱温度为25-35℃；以儿茶素计算，理论塔板数为5000-20000；
(d)测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱法测定，紫外检测器或者二极管阵列检测器进行检测，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；
所述固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱中，有二十个共有色谱峰，以参照物儿茶素的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述二十个共有色谱峰分别是1号峰：平均相对保留时间RRT为0.43±0.01，相对峰面积为13％，2号峰平均相对保留时间RRT为0.88±0.01，相对峰面积为63％，3号峰平均相对保留时间RRT为0.93±0.01，相对峰面积为61％，4号峰平均相对保留时间RRT为0.97±0.01，相对峰面积为75％，5号峰平均相对保留时间RRT为1.00，相对峰面积为100％，6号峰平均相对保留时间RRT为1.04±0.01，相对峰面积为118％，7号峰平均相对保留时间RRT为1.22±0.01，相对峰面积为21％，8号峰平均相对保留时间RRT为1.26±0.01，相对峰面积为48％，9号峰平均相对保留时间RRT为1.28±0.01，相对峰面积为25％，10号峰平均相对保留时间RRT为1.29±0.01，相对峰面积为66％，11号峰平均相对保留时间RRT为1.30±0.01，相对峰面积为16％，12号峰平均相对保留时间RRT为1.39±0.01，相对峰面积为40％，13号峰平均相对保留时间RRT为1.41±0.01，相对峰面积为50％，14号峰平均相对保留时间RRT为1.52±0.01，相对峰面积为32％，15号峰平均相对保留时间RRT为1.53±0.01，相对峰面积为50％，16号峰平均相对保留时间RRT为1.55±0.01，相对峰面积为66％，17号峰平均相对保留时间RRT为1.62±0.01，相对峰面积为98％，18号峰平均相对保留时间RRT为1.75±0.01，相对峰面积为135％，19号峰平均相对保留时间RRT为1.78±0.01，相对峰面积为73％，20号峰平均相对保留时间RRT为1.80±0.01，相对峰面积为98％，所述二十个色谱峰峰面积的相似度不小于0.65；
第二步，用与第一步相同的方法测定待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱；
第三步，将待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱与固公果根提取物酚酸酸类成分标准指纹图谱对比，鉴别固公果根提取物的质量。
所述第一步(a)供试品溶液的制备优选为：精密称取固公果根药材50g，加入含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液或含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液为提取溶剂，所述提取溶剂的加入质量为药材质量的10倍，振摇后浸泡提取10h，提取2次，过滤，合并提取液，在25～60℃加热减压回收溶剂，浓缩后喷雾干燥，得到固公果根提取物；用甲醇或乙醇溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg～15mg/mL的供试品溶液；所述含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～1％；所述含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％。
所述第一步(b)参照物溶液的制备为：精密称取对照品儿茶素，用甲醇溶解稀释，配制成1mg/mL的供试品溶液为参照物溶液。
固公果根提取物标准指纹图谱中1号峰为没食子酸、2号峰为原花青素B1、3号峰为表没食子酸儿茶素、4号峰为原花青素B3、5号峰为儿茶素，6号峰为绿原酸、10号峰为表儿茶素、13号峰为没食子儿茶素没食子酸酯、14号峰为(-)-fisetinidol-(4α，8)-(-)-catechin、16号峰为(-)-fisetinidol-(4α，8)-(-)-epicatechin、17号峰为鞣花酸、18号峰为(+)-guibourtinidol-(4α，8)-(-)-catechin、19号峰为(+)-guibourtinidol-(4α，8)-(-)-epicatechin、20号峰为2，4，7，9-tetrahydroxy benzopyrano5，4，3-cdebenzopyran-5，10-dione。
步骤(c)中乙腈和冰醋酸的水溶液由A相和B相组成，按质量比A相组成为：冰醋酸∶水＝2∶98，按质量比B相组成为：乙腈∶水∶冰醋酸＝80∶19.6∶0.4，所述梯度洗脱程序如下：
所述检测器的型号为岛津SPD-M20A检测器。
本发明是结合大量生产批次统计情况和试验研究工作，建立了固公果根酚酸类成分标准指纹图谱，能较好地保证固公果根提取物的均一性和有效性，到目前为止，上述标准指纹图谱尚无公开报道。本发明具有下述特点：
1.整体性、宏观性和模糊性，本发明克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷。本发明为完整、准确评价固公果根提取物的质量提供了新的方法和手段。
2.研究表明：酚酸类成分是固公果根提取物及其制剂中主要活性成分，利用体外抑菌活性模型，确定鞣花酸类成分、原花青素二聚体类成分，儿茶素类成分，能够不同程度抑制耐药金葡萄球菌和金葡萄球菌的活性，是固公果根中的抑菌活性成分。以儿茶素为参照物建立起来的HPLC指纹图，代表着固公果根类成分的生物活性，酚酸类活性成分的监控与跟踪具有代表性。
3.用视觉直观辨识图谱的异同；用半定量指标量化样品的真伪、优劣；用相似度计算方法评价质量及稳定性。
附图说明
图1是中药固公果根提取物的HPLC标准指纹图谱；
图2是固公果根提取物指纹图谱和标准品对照图谱。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1：一种固公果根提取物的鉴别方法
1.仪器与试药
1.1仪器
岛津高效液相色谱仪(LC-20AT双泵，SPD-M20AUV检测器，CTO-20A柱温箱，日本 岛津公司)，SHIMADZU VP-ODS柱(250×4.60mm，5micron)。
1.2试药
儿茶素对照品由SIGMA公司提供；提取用甲醇、乙醇、盐酸、冰醋酸等均为分析纯；液相分析用试剂甲醇、乙腈均为色谱纯。固公果根采自云南省，自制提取物，批号：20050918、20051009、20061123、20061128、20071021、20071029。
2.方法与结果
色谱柱的选择：在相同的色谱条件下，考察了：Ultimate XB-C18(150mm×4.6mm，5μm)柱、SHIMADZU VP-ODS柱(250×4.60mm，5μm)和Phenomenex Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)柱两根不同的色谱柱，比较两者分离度和色谱峰数量、峰面积等因素，结果SHIMADZU VP-ODS柱(250×4.60mm，5μm)分离效果较好，确定为试验用柱。理论塔板数应为5000-20000。
流动相的选择：因供试品所含成分复杂，故采用梯度洗脱方法分析。通过考察甲醇-水-冰醋酸和乙腈-水-冰醋酸等流动相系统在不同酸度，不同梯度程序下对色谱峰的影响，最终选择乙腈-水-冰醋酸做为流动相。
液相条件：柱温：30℃；紫外检测波长：280nm；流速：0.7mL/min；进样量：10uL；乙腈和冰醋酸的水溶液由A相和B相组成，按质量比A相组成为：冰醋酸∶水＝2∶98，按质量比B相组成为：乙腈∶水∶冰醋酸＝80∶19.6∶0.4，梯度洗脱程序见下表。
3.指纹图谱测定
3.1固公果根提取物指纹图谱建立
(a)供试品溶液的制备：精密量取固公果根药材适量，加入药材量的12倍的含有盐酸的体积分数为100％的甲醇水溶液振摇后浸泡提取2h，提取2次，过滤，合并提取液，在25℃加热减压干燥至干，得到固公果根提取物；用甲醇溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg/mL的供试品溶液；
(b)参照物溶液的制备：精密量取对照品儿茶素，用甲醇溶解稀释，配置成5mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件：采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯度洗脱；流速0.7mL/min；检测波长为280nm；色谱柱温度为25℃；以儿茶素计算，理论塔板数5000；
(d)测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱法测定，紫外检测器进行检测，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；
共有峰确定
通过6批固公果根药材提取物指纹图谱测定，比较其图谱，确定共有峰为20个，以参照物儿茶素的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算6批样品共有峰相对保留时间以及相对峰面积。结果见表1。
表1：6批样品的相对保留时间统计
| 峰号 | 20050918 | 20051009 | 20061123 | 20061128 | 20071021 | 20071029 |
| 1 | 0.43 | 0.42 | 0.43 | 0.43 | 0.43 | 0.44 |
| 2 | 0.88 | 0.88 | 0.87 | 0.88 | 0.89 | 0.88 |
| 3 | 0.93 | 0.93 | 0.93 | 0.93 | 0.93 | 0.93 |
| 4 | 0.97 | 0.96 | 0.97 | 0.97 | 0.98 | 0.97 |
| 5 | 1.00 | 1.00 | 1.01 | 1.00 | 1.00 | 1.00 |
| 6 | 1.04 | 1.04 | 1.04 | 1.04 | 1.04 | 1.04 |
| 7 | 1.22 | 1.22 | 1.22 | 1.22 | 1.22 | 1.22 |
| 8 | 1.26 | 1.26 | 1.25 | 1.26 | 1.27 | 1.26 |
| 9 | 1.28 | 1.28 | 1.28 | 1.28 | 1.28 | 1.28 |
| 10 | 1.29 | 1.29 | 1.29 | 1.29 | 1.29 | 1.29 |
| 11 | 1.30 | 1.30 | 1.30 | 1.30 | 1.30 | 1.30 |
| 12 | 1.39 | 1.39 | 1.39 | 1.38 | 1.39 | 1.39 |
| 13 | 1.41 | 1.41 | 1.41 | 1.41 | 1.41 | 1.41 |
| 14 | 1.52 | 1.52 | 1.52 | 1.52 | 1.52 | 1.52 |
| 15 | 1.53 | 1.53 | 1.53 | 1.53 | 1.53 | 1.53 |
| 16 | 1.55 | 1.55 | 1.55 | 1.55 | 1.55 | 1.55 |
| 17 | 1.62 | 1.62 | 1.62 | 1.62 | 1.62 | 1.62 |
| 18 | 1.75 | 1.74 | 1.74 | 1.74 | 1.75 | 1.75 |
| 19 | 1.78 | 1.78 | 1.78 | 1.78 | 1.78 | 1.78 |
| 20 | 1.80 | 1.80 | 1.80 | 1.80 | 1.80 | 1.80 |
[0050] 表2：6批样品的峰面积比值统计
| 峰号 | 20050918 | 20051009 | 20061123 | 20061128 | 20071021 | 20071029 |
| 1 | 0.13 | 0.13 | 0.13 | 0.13 | 0.13 | 0.13 |
| 2 | 0.63 | 0.63 | 0.63 | 0.63 | 0.63 | 0.63 |
| 3 | 0.61 | 0.61 | 0.61 | 0.61 | 0.61 | 0.61 |
| 4 | 0.75 | 0.75 | 0.75 | 0.75 | 0.75 | 0.75 |
| 5 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 | 1.00 |
| 6 | 1.18 | 1.18 | 1.18 | 1.18 | 1.18 | 1.18 |
| 7 | 0.21 | 0.21 | 0.21 | 0.21 | 0.21 | 0.21 |
| 8 | 0.45 | 0.45 | 0.45 | 0.45 | 0.45 | 0.45 |
| 9 | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
| 10 | 0.66 | 0.66 | 0.66 | 0.66 | 0.66 | 0.66 |
| 11 | 0.16 | 0.16 | 0.16 | 0.16 | 0.16 | 0.16 |
| 12 | 0.40 | 0.40 | 0.40 | 0.40 | 0.40 | 0.40 |
| 13 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 |
| 14 | 0.32 | 0.32 | 0.32 | 0.32 | 0.32 | 0.32 |
| 15 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 | 0.50 |
| 16 | 0.66 | 0.66 | 0.66 | 0.66 | 0.66 | 0.66 |
| 17 | 0.98 | 0.98 | 0.98 | 0.98 | 0.98 | 0.98 |
| 18 | 1.35 | 1.35 | 1.35 | 1.35 | 1.35 | 1.35 |
| 19 | 0.73 | 0.73 | 0.73 | 0.73 | 0.73 | 0.73 |
| 20 | 0.98 | 0.98 | 0.98 | 0.98 | 0.98 | 0.98 |
(注：针对色谱峰以5号参照物峰的峰面积为1，统计6批样品的峰面积比值)
3.3共有特征峰的描述
特征峰共有20个，所以参照物儿茶素的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述二十个共有色谱峰分别是1号峰为没食子酸，平均相对保留时间RRT为0.43，相对峰面积为13％，2号峰为原花青素B1平均相对保留时间RRT为0.88，相对峰面积为61％，3号峰为EGC平均相对保留时间RRT为0.93，相对峰面积为61％，4号峰为原花青素B3，平均相对保留时间RRT为0.97，相对峰面积为75％，5号峰为儿茶素，平均相对保留时间RRT为1.00，相对峰面积为100％，6号峰为绿原酸，平均相对保留时间RRT为1.04，相对峰面积为118％，7号峰平均相对保留时间RRT为1.22，相对峰面积为21％，8号峰平均相对保留时间RRT为1.26，相对峰面积为48％，9号峰平均相对保留时间RRT为1.28，相对峰面积为25％，10号峰为表儿茶素，平均相对保留时间RRT为1.29，相对峰面积为66％，11号峰平均相对保留时间RRT为1.30，相对峰面积为16％， 12号峰平相对保留时间RRT为1.39，相对峰面积为40％，13号峰为GCG，平均相对保留时间RRT为1.41，相对峰面积为50％，14号峰为(-)-fisetinidol-(4α，8)-(-)-catechin平均相对保留时间RRT为1.52，相对峰面积为32％，15号峰平均相对保留时间RRT为1.53，相对峰面积为50％，16号峰为(-)-fisetinidol-(4α，8)-(-)-epicatechin，平均相对保留时间RRT为1.55，相对峰面积为66％，17号峰为鞣花酸，平均相对保留时间RRT为1.62，相对峰面积为98％，18号峰为(+)-guibourtinidol-(4α，8)-(-)-catechin，平均相对保留时间RRT为1.75，相对峰面积为135％，19号峰为(+)-guibourtinidol-(4β，8)-epicatechin，平均相对保留时间RRT为1.78，相对峰面积为73％，20号峰为2，4，7，9-tetrahydroxy benzopyrano5，4，3一cdebenzopyran-5，10一dione，平均相对保留时间RRT为1.80，相对峰面积为98％，所述二十个色谱峰峰面积的相似度不小于0.65。
3.4指纹图谱精密度试验
按照指纹图谱精密度规定方法操作，以批号为20051009的固公果根提取物为供试品，依法制备，连续进样5次，分析色谱图，各色谱峰的相对保留时间的RSD％为0.03-0.23％，相对保留面积RSD％为0.49-3.73％(n＝5)，符合指纹图谱要求，结果见表3。
3.5指纹图谱稳定性试验
按照指纹图谱稳定性测定方法操作，以批号为20051009的固公果根提取物为供试品，依法制备，在20h内每隔4小时进样，分析色谱图。结果表明：在20h内，供试品各色谱峰的相对保留时间RSD％为0.01-0.27％，相对保留面积RSD％为0.30-1.97％(n＝5)，符合指纹图谱要求，结果见表3。
3.6指纹图谱重现性试验
按照指纹图谱重现性测定方法操作，以批号为20051009的固公果根提取物为供试品，依法制备5份，分别对共有峰时间以及峰面积比值进行统计，各色谱峰的相对保留时间的RSD％为0.13-0.44％，相对保留面积RSD％为0.88-4.65％(n＝5)，符合指纹图谱要求，结果见表3。
表3稳定性、精密度和重现性的测定结果
以上试验结果表明，应用此方法对固公果根提取物种的酚酸类成分标准指纹图谱进行测定，方法可靠，能比较全面地反映本品中的化学信息，确保了产品质量。
实施例2
一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：
第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下：
(a)供试品溶液的制备：固公果根提取物标准指纹图谱的建立(批号20051009)
步骤同实施例1中的3.1，所不同的是提取条件中，加入药材量的10倍的含有体积分数为80％甲醇溶液振摇后浸泡提取12h，过滤，合并提取液，在60℃减压干燥至干得到固公果根提取物。然后甲醇溶解稀释，配置成5mg/mL的供试品溶液。
(b)参照物溶液的制备：精密称取对照品儿茶素，用体积分数为甲醇溶解稀释，配置成0.01mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件：采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯 度洗脱；流速0.7mL/min；检测波长为280nm；色谱柱温度为30℃；以儿茶素计算，理论塔板数为10000；
(d)测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱法测定，二极管阵列检测器进行检测，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；
第二步、第三步同实施例1。
实施例3
一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：
第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下：
(a)供试品溶液的制备：固公果根提取物标准指纹图谱的建立(批号20051009)
固公果根提取物标准指纹图谱的建立(批号20051009)
步骤同实施例1中的3.1，所不同的是提取条件中，加入药材量的10倍的含有体积分数为80％甲醇溶液振摇后浸泡提取12h，过滤，合并提取液，在60℃减压干燥至干得到固公果根提取物。然后乙醇溶解稀释，配置成20mg/mL的供试品溶液。
(b)参照物溶液的制备：精密称取对照品儿茶素，用水溶解稀释，配置成20mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件：除检测波长为260nm；色谱柱温度为25℃；以儿茶素计算，理论塔板数为20000外，其它同实施例1；
(d)测定：同实施例1；
第二步、第三步同实施例1。
实施例4
一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：
第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下：
(a)供试品溶液的制备：固公果根提取物标准指纹图谱的建立(批号20051009)步骤同实施例1中的3.1，所不同的是提取条件中，加入药材量的4倍的体积分数为50％的乙醇水溶液振摇后浸泡提取12h，过滤，合并提取液，在60℃减压干燥至干得到固公果根提取物。然后用体积分数为50％甲醇水溶液溶解稀释，配置成5mg/mL的供试品溶液。
(b)参照物溶液的制备：精密称取对照品儿茶素，用水溶解稀释，配置成5mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件：除检测波长为320nm；色谱柱温度为35℃；以儿茶素计算，理论塔板数为10000外，其它同实施例1；
(d)测定：同实施例1；
第二步、第三步同实施例1。
实施例5
一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：
第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下：
(a)供试品溶液的制备：固公果根提取物标准指纹图谱的建立(批号20051009)
步骤同实施例1中的3.1，所不同的是提取条件中，加入药材量的4倍的含有盐酸的体积分 数为50％的甲醇水溶液，其盐酸的体积分数为2％，振摇后浸泡提取12h，过滤，合并提取液，在60℃减压干燥至干得到固公果根提取物。然后用体积分数为50％乙醇水溶液溶解稀释，配置成5mg/mL的供试品溶液。
(b)参照物溶液的制备：精密称取对照品儿茶素，用水溶解稀释，配置成5mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件：除检测波长为280nm；色谱柱温度为30℃；以儿茶素计算，理论塔板数为6000外，其它同实施例1；
(d)测定：同实施例1；
第二步、第三步同实施例1。
下表是实施例6-17是第一步建立酚酸类成分标准指纹图谱中(a)供试品溶液的制备，以后的步骤同实施例1
经检测实施例2-17的任一一种固公果根提取物的鉴别方法，均可以对固公果根提取物的质量进行评价。
Claims (5)
1.一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：
第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下：
(a)供试品溶液的制备：精密称取固公果根药材适量，加入含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液、含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液、体积分数为0％～2％的盐酸水溶液、体积分数为1％～100％甲醇水溶液或体积分数为1％～95％的乙醇水溶液为提取溶剂，所述提取溶剂的加入质量为药材质量的4～12倍，振摇后浸泡提取2～12h，提取1-3次，过滤，合并提取液，在25～60℃加热减压干燥至干，得到固公果根提取物；用体积分数为0％～100％的甲醇水溶液或体积分数为0％～100％的乙醇水溶液溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg～20mg/mL的供试品溶液；所述含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％；所述含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％；
(b)参照物溶液的制备：精密称取对照品儿茶素，用体积分数为0％～100％甲醇水溶液或体积分数为0％～100％乙醇水溶液溶解稀释，配置成0.01mg～5mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件：采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯度洗脱；流速0.7mL/min；检测波长为260-320nm；色谱柱温度为25-35℃；以儿茶素计算，理论塔板数为5000-20000；
(d)测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱法测定，紫外检测器或者二极管阵列检测器进行检测，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；
所述固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱中，有二十个共有色谱峰，以参照物儿茶素的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述二十个共有色谱峰分别是1号峰：平均相对保留时间RRT为0.43±0.01，相对峰面积为13％，2号峰平均相对保留时间RRT为0.88±0.01，相对峰面积为63％，3号峰平均相对保留时间RRT为0.93±0.01，相对峰面积为61％，4号峰平均相对保留时间RRT为0.97±0.01，相对峰面积为75％，5号峰平均相对保留时间RRT为1.00，相对峰面积为100％，6号峰平均相对保留时间RRT为1.04±0.01，相对峰面积为118％，7号峰平均相对保留时间RRT为1.22±0.01，相对峰面积为21％，8号峰平均相对保留时间RRT为1.26±0.01，相对峰面积为48％，9号峰平均相对保留时间RRT为1.28±0.01，相对峰面积为25％，10号峰平均相对保留时间RRT为1.29±0.01，相对峰面积为66％，11号峰平均相对保留时间RRT为1.30±0.01，相对峰面积为16％，12号峰平均相对保留时间RRT为1.39±0.01，相对峰面积为40％，13号峰平均相对保留时间RRT为1.41±0.01，相对峰面积为50％，14号峰平均相对保留时间RRT为1.52±0.01，相对峰面积为32％，15号峰平均相对保留时间RRT为1.53±0.01，相对峰面积为50％，16号峰平均相对保留时间RRT为1.55±0.01，相对峰面积为66％，17号峰平均相对保留时间RRT为1.62±0.01，相对峰面积为98％，18号峰平均相对保留时间RRT为1.75±0.01，相对峰面积为135％，19号峰平均相对保留时间RRT为1.78±0.01，相对峰面积为73％，20号峰平均相对保留时间RRT为1.80±0.01，相对峰面积为98％，所述二十个色谱峰峰面积的相似度不小于0.65；
第二步，用与第一步相同的方法测定待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱；
第三步，将待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱与固公果根提取物酚酸酸类成分标准指纹图谱对比，鉴别固公果根提取物的质量。
2.根据权利要求1所述的一种固公果根提取物的鉴别方法，其特征是所述第一步(a)供试品溶液的制备为：精密称取固公果根药材50g，加入含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液或含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液为提取溶剂，所述提取溶剂的加入质量为药材质量的10倍，振摇后浸泡提取10h，提取2次，过滤，合并提取液，在25～60℃加热减压回收溶剂，浓缩后喷雾干燥，得到固公果根提取物；用甲醇或乙醇溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg～15mg/mL的供试品溶液；所述含有盐酸的体积分数为0％-100％的甲醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～1％；所述含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％。
3.根据权利要求1所述的一种固公果根提取物的鉴别方法，其特征是所述第一步(b)参照物溶液的制备为：精密称取对照品儿茶素，用甲醇溶解稀释，配制成1mg/mL的供试品溶液为参照物溶液。
4.根据权利要求1所述的一种固公果根提取物的鉴别方法，其特征是固公果根提取物标准指纹图谱中1号峰为没食子酸、2号峰为原花青素B1、3号峰为表没食子酸儿茶素、4号峰为原花青素B3、5号峰为儿茶素，6号峰为绿原酸、10号峰为表儿茶素、13号峰为没食子儿茶素没食子酸酯、14号峰为(-)-fisetinidol-(4α，8)-(-)-catechin、16号峰为(-)-fisetinidol-(4α，8)-(-)-epicatechin、17号峰为鞣花酸、18号峰为(+)-guibourtinidol-(4α，8)-(-)-catechin、19号峰为(+)-guibourtinidol-(4α，8)-(-)-epicatechin、20号峰为2，4，7，9-tetrahydroxy benzopyrano5，4，3-cdebenzopyran-5，10-dione。
5.根据权利要求1所述的一种固公果根提取物的鉴别方法，其特征在于步骤(c)中乙腈和冰醋酸的水溶液由A相和B相组成，按质量比A相组成为：冰醋酸∶水＝2∶98，按质量比B相组成为：乙腈∶水∶冰醋酸＝80∶19.6∶0.4，所述梯度洗脱程序如下：
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Cited By (6)
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|---|---|---|---|---|
| CN102342986A (zh) * | 2011-10-17 | 2012-02-08 | 中国人民武装警察部队后勤学院 | 固公果根中治疗腹泻的有效部位及制备方法 |
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| CN103389353A (zh) * | 2012-05-07 | 2013-11-13 | 天士力制药集团股份有限公司 | 一种用超高效液相色谱法测定养血清脑颗粒中酚酸类成分含量的方法 |
| CN104407087A (zh) * | 2014-12-04 | 2015-03-11 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法 |
| CN109655558A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-04-19 | 贵阳中医学院 | 一种黑骨藤有效部位群的检测方法 |
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 《中国优秀硕士论文电子期刊网》 20071130 朱珊 固公果根活性成分研究 , 1 * |
| 《中国天然药物》 20100131 刘岱琳 固公果根中的三萜类成分 第8卷, 第1期 2 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102426211A (zh) * | 2011-07-20 | 2012-04-25 | 石河子大学 | 大麦籽粒中酚酸类化合物的定量测定方法 |
| CN102342986A (zh) * | 2011-10-17 | 2012-02-08 | 中国人民武装警察部队后勤学院 | 固公果根中治疗腹泻的有效部位及制备方法 |
| CN103389353A (zh) * | 2012-05-07 | 2013-11-13 | 天士力制药集团股份有限公司 | 一种用超高效液相色谱法测定养血清脑颗粒中酚酸类成分含量的方法 |
| CN103389353B (zh) * | 2012-05-07 | 2016-06-08 | 天士力制药集团股份有限公司 | 一种用超高效液相色谱法测定养血清脑颗粒中酚酸类成分含量的方法 |
| CN104407087A (zh) * | 2014-12-04 | 2015-03-11 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法 |
| CN104407087B (zh) * | 2014-12-04 | 2016-03-30 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 一种同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法 |
| CN109655558A (zh) * | 2019-01-08 | 2019-04-19 | 贵阳中医学院 | 一种黑骨藤有效部位群的检测方法 |
| CN109655558B (zh) * | 2019-01-08 | 2021-08-24 | 贵阳中医学院 | 一种黑骨藤有效部位群的检测方法 |
| CN110196290A (zh) * | 2019-04-02 | 2019-09-03 | 贵州医科大学 | 一种刺梨中鞣花酸含量测定方法 |
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