CN111175429B - 杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法 - Google Patents

杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111175429B
CN111175429B CN202010015491.2A CN202010015491A CN111175429B CN 111175429 B CN111175429 B CN 111175429B CN 202010015491 A CN202010015491 A CN 202010015491A CN 111175429 B CN111175429 B CN 111175429B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mobile phase
fingerprint
medicinal material
solution
bactericidal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010015491.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111175429A (zh
Inventor
王冬梅
姜楠
赵磊
程世娟
高燕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guizhou Changsheng Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Guizhou Changsheng Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guizhou Changsheng Pharmaceutical Co ltd filed Critical Guizhou Changsheng Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN202010015491.2A priority Critical patent/CN111175429B/zh
Publication of CN111175429A publication Critical patent/CN111175429A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111175429B publication Critical patent/CN111175429B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：S1.混合对照品溶液的制备：分别精密称取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；S2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备；S3.单味对照药材溶液的制备；S3.测定。该指纹图谱标定了16个共有峰，并确定了其归属于处方中的5种药材，建立的指纹图谱技术含量高，避免了现有质量控制方法的单一性和片面性。为杀菌止痒洗剂的生产提供了有效的质量控制依据，并且为其药效物质基础同药理作用的相关性研究奠定了基础。

Description

杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法
技术领域
本发明涉及医药检测领域，具体涉及一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法。
背景技术
杀菌止痒洗剂是贵州长生药业独家生产，由黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、冰片、苍术6味中药制备而成，具有清热解毒、杀虫止痒的功效，适用于改善滴虫性、霉菌性、非特异性阴道炎及外阴瘙痒症所致的带下量多、阴痒等症。
现有研究如《杀菌止痒洗剂的HPL指纹图谱研究》中建立了一种杀菌止痒洗剂的C指纹图谱技术，但仅对苦参碱、槐果碱两种苦参成分特征峰进行了考察，并未对黄柏、蛇床子、土茯苓、苍术等其他药材的特征峰进行归属。杀菌止痒洗剂成分较为复杂，仅以苦参成分作为质量控制指标显然是不全面的，具有一定的局限性。因此，开发建立一种简便易行，准确性高，重复性良好且能尽可能多地反映复方制剂所含多成分的指纹图谱检测方法对于杀菌止痒洗剂的质量控制和评价非常必要。
发明内容
本发明的发明目的是，针对上述问题，提供一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，标定了16个共有峰，并确定了其归属于处方中的5种药材，建立的特征图谱技术含量高，避免了现有质量控制方法的单一性和片面性。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
S1.混合对照品溶液的制备：
分别精密称取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品，加甲醇制成混合对照品溶液。
S2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备：
精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，得供试品溶液。
S3.单味对照药材溶液的制备：
将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，即分别得黄柏对照药材溶液、苦参对照药材溶液、蛇床子对照药材溶液、土茯对照药材溶液苓、苍术对照药材溶液。
S4.测定：
分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得杀菌止痒洗剂的指纹图谱。
优选的，所述检测条件包括：色谱柱为Waters XBridge C18色谱柱；以体积分数0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流动相流速为0.8～1.2mL/min；柱温为20～35℃，检测波长为285nm，进样量为5～15μl。
优选的，流动相流速为0.8mL/min；柱温为25℃，进样量为10μl。
优选的，所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
0min，流动相A 85％，流动相B15％；
15min，流动相A 64％，流动相B 36％；
22min，流动相A 60％，流动相B 40％；
45min，流动相A 50％，流动相B 50％；
50min，流动相A 35％，流动相B 65％；
55min，流动相A 24％，流动相B 76％；
70min，流动相A 18％，流动相B 82％。
优选的，步骤S2中，精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000r/min离心10min，得供试品溶液。
优选的，步骤S3中，将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000r/min离心10min，分别得各单味对照药材溶液。
优选的，对指纹图谱的共有峰进行药材归属，确定指纹图谱的16个共有峰中，第1、10、11、15号峰属于蛇床子药材，第4、5、8号峰属于土茯苓药材，第7、9、13、14号峰属于黄柏药材，第3、6、12号峰属于苦参药材，第2、16 号峰属于苍术药材。
优选的，对指纹图谱的共有峰进行活性成分归属，其中3号峰为苦参碱，4 号峰为落新妇苷，7号峰为黄柏碱，9号峰为盐酸小檗碱，10号峰为蛇床子素， 16号峰为苍术素。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
1.本发明所建立的杀菌止痒洗剂指纹图谱，标定了16个共有峰，并确定了其归属于处方中的5种药材，建立的特征图谱技术含量高，避免了现有质量控制方法的单一性和片面性。为杀菌止痒洗剂的生产提供了有效的质量控制依据，并且为其药效物质基础同药理作用的相关性研究奠定了基础。
2.本发明所建立的杀菌止痒洗剂指纹图谱，具有16个共有峰，且对其进行了指认和归属分析，各特征峰分离效果较好，能够较全面的反映出产品的质量信息，有利于全面监控产品质量，及鉴别产品的真伪。对16个峰中的6个峰的所对应的活性成分进行了确认，有效的将指纹峰与治疗功效关联起来，可进一步控制好杀菌止痒洗剂的生产质量。
指纹图谱的16个共有峰中，第1、10、11、15号峰属于蛇床子药材，其中 10号峰为蛇床子素；第4、5、8号峰属于土茯苓药材，其中4号峰为落新妇苷；第7、9、13、14号峰属于黄柏药材，其中7号峰为黄柏碱，9号峰为盐酸小檗碱；第3、6、12号峰属于苦参药材，其中3号峰为苦参碱；第2、16号峰属于苍术药材，其中16号峰为苍术素。可见，杀菌止痒洗剂组成药材的主要成分(除冰片成分无紫外吸收外)均在本技术得到的指纹图谱中得到了整体表征。
3.本发明杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立，采用高效液相色谱图的方法对杀菌止痒洗剂进行定性和定量的检测，根据杀菌止痒洗剂的有效成分的特性，确定了最优的色谱条件，得到了准确的指纹图谱。其中，流动相选择0.1％磷酸水、乙腈，并按程序连续改变流动相中各相之间的比例进行梯度洗脱，可使各成分的色谱峰之间的分离度好，干扰小，峰形好，基线平稳，且较低浓度的酸溶液有利于保护色谱柱。
说明书附图
图1为本发明实验例比较不同波长的色谱图；
图中，1：220nm；2：240nm；3：260nm；4：285nm；5：290nm；6：300nm； 7：320nm；8：340nm；
图2为本发明实验例比较不同色谱柱的色谱图；
图中，1：Waters XBridge C18；2：Comatex C18－AA；3：ZORBAX Eclipse Plus；4：Zorbax SB；5：Phenomenex luna；
图3为本发明实验例比较不同流动相的色谱图；
图中，1：纯水-乙腈；2：0.1％磷酸水-乙腈；3：0.05％甲酸水-乙腈；4：0.04％三乙胺缓冲液－乙腈；
图4为本发明实验例比较不同柱温的色谱图；
图中，1：35℃；2：30℃；3：25℃；
图5为本发明实验例比较不同流速的色谱图；
图中，1：1.2m L/min；2：1.0m L/min；3：0.8m L/min；
图6为本发明实验例比较不同提取溶剂的色谱图；
图中，1：30％甲醇；2：50％甲醇；3：80％甲醇；4：无水甲醇；
图7为本发明实验例比较不同提取方法的色谱图；
图中，1：加热回流；2：超声；
图8为本发明实验例比较不同提取时间的色谱图；
图中，1：60min；2：45min；3：30min；4：15min；
图9为本发明实验例10批次杀菌止痒洗剂样品HPLC叠加图；
图10为本发明实验例对照品混合溶液HPLC图谱；
图中，1、苦参碱；2、落新妇苷；3、黄柏碱；4、盐酸小檗碱；5、蛇床子素；6、苍术素；
图11为本发明实验例对照药材HPLC叠加图；
图中，1、特征指纹图谱2、土茯苓3、蛇床子4、黄柏5、苦参6、苍术。
图12为本发明杀菌止痒洗剂的指纹图谱。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例和附图，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
材料：
本发明实施例使用的仪器见下表1。
表1使用仪器
Figure BDA0002358716150000051
本发明实施例使用试剂为：
苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素标准品，购自中国食品药品检定研究院。各标准品纯度均大于98.0％。
样品：10批次杀菌止痒洗剂(批号20190301、20190302、20190303、20190304、20190305、20190601、20190602、20190603、20190604、20190605)，及黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术各单味药材由贵州长生药业有限公司提供。
乙腈(色谱纯)、甲酸(色谱纯)购自美国sigma公司。
实施例1
一种杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
S1.混合对照品溶液的制备：
分别取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度分别为248.3、190.7、154.1、198.5、251.4、 183.6μg/mL的混合对照品溶液。
S2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备：
精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000r/min离心10min，得供试品溶液。
S4.单味对照药材溶液的制备：
将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，取各单味药材粉末约0.2g，精密称定，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液 13000r/min离心10min，即分别得黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术的药材供试品溶液。
S4.测定
分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得杀菌止痒洗剂的指纹图谱。
所述检测条件包括：色谱柱为Waters XBridge C18色谱柱；以体积分数0.1％磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流动相流速为0.8mL/min；柱温为25℃，检测波长为285nm，进样量为10μl。
所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
0min，流动相A 85％，流动相B15％；
15min，流动相A 64％，流动相B 36％；
22min，流动相A 60％，流动相B 40％；
45min，流动相A 50％，流动相B 50％；
50min，流动相A 35％，流动相B 65％；
55min，流动相A 24％，流动相B 76％；
70min，流动相A 18％，流动相B 82％。
实验例：
1.提取条件考察
1.1波长的考察
在相同的条件下，分别比较不同波长下的色谱图，结果见图1。
其中，1：220nm；2：240nm；3：260nm；4：285nm；5：290nm；6：300nm； 7：320nm；8：340nm。
结果显示：从色谱峰数目、峰强度、基线稳定性以及分离效果等方面综合考虑，确定285nm为最终检测波长。
1.2色谱柱的考察
取相同杀菌止痒洗剂样品溶液，在同样的色谱条件下，分别考察了以下5 种不同C18色谱柱的分离效果，包括：Waters XBridge C18(4.6×250mm,5μm)； Comatex C18－AA(250mm×4.6mm，5μm)；ZORBAX Eclipse Plus C18 (4.6×250mm,5μm)；Zorbax SB-C18(4.6×250mm,5μm)；Phenomenex luna C18 (4.6×250mm,5μm)；结果见图2。
图2中不同色谱柱下的高效液相指纹图谱1：Waters XBridge C18；2：ComatexC18－AA；3：ZORBAX Eclipse Plus；4：Zorbax SB；5：Phenomenex luna。
结果表明，采用同样的色谱条件，不同色谱柱分离得到的具有不同峰型、保留时间以及分离效果的色谱图，综合考虑各方面，用Waters XBridge C18色谱柱能更好的分离杀菌止痒洗剂的化学成分，因此使用此色谱柱完成杀菌止痒洗剂样品的指纹图谱测定。
1.3流动相的考察
本实验对不同的流动相系统进行了考察，结果见图3。
图中3不同流动相下的高效液相指纹图谱：
1：纯水-乙腈；2：0.1％磷酸水-乙腈；3：0.05％甲酸水-乙腈；4：0.04％三乙胺缓冲液－乙腈(磷酸调pH至6.5)
结果表明在0.1％磷酸水-乙腈溶剂为流动相条件下，色谱峰存在较好的分离度，故选择该溶剂为流动相。
1.4柱温的考察
考察不同柱温的影响，包括：25℃、30℃和35℃，结果见图4。
图4中不同柱温下的高效液相色谱图1：35℃；2：30℃；3：25℃。
结果显示色谱分离效果差异不大，故选择对色谱柱保护最大的室温25℃为最佳柱温。
1.5流速的考察
考察了不同流速(0.8m L/min、1.0m L/min和1.2m L/min)对杀菌止痒洗剂色谱指纹图谱分离效果的影响，结果见图5。
图5中不同流速下的高效液相色谱图1：1.2m L/min；2：1.0m L/min；3： 0.8m L/min。
结果显示，流速为1.2m L/min时峰数目较少，对比0.8m L/min、1.0m L/min流速下样品色谱峰的，峰数、峰型、分离度等无明显差异，故选择对溶剂耗量少的0.8m L/min为最佳流速。
综上，经过一系列条件优化，最终确认杀菌止痒洗剂最优的色谱条件为：以Waters XBridge C18(4.6×250mm,5μm)为色谱柱，流动相为0.1％磷酸水(A) -乙腈(B)，梯度如下：
0min，流动相A 85％，流动相B15％；
15min，流动相A 64％，流动相B 36％；
22min，流动相A 60％，流动相B 40％；
45min，流动相A 50％，流动相B 50％；
50min，流动相A 35％，流动相B 65％；
55min，流动相A 24％，流动相B 76％；
70min，流动相A 18％，流动相B 82％。
体积流量为0.8m L/min；检测波长为285nm；柱温25℃；进样量10μL。
2.提取条件优化
2.1提取溶剂的选择
精确称量杀菌止痒洗剂样品4份，每份2ml，倒入锥形瓶中，分别加入50ml 无水甲醇、80％甲醇、50％甲醇和30％甲醇作为溶剂，超声提取，过滤收集滤液，将样品溶液13000r/min离心10min，抽取10μL 注入高效液相色谱仪中，对色谱图进行采集(图6)。
图6中不同提取溶剂的高效液相色谱图1：30％甲醇；2：50％甲醇；3： 80％甲醇；4：无水甲醇。
结果显示，以无水甲醇为提取溶剂所得的色谱图中色谱峰最多，分离度较好，各峰的峰面积值较大，说明无水甲醇提取的较完全，确定无水甲醇为提取溶剂。
2.2提取方式的选择
精确称量杀菌止痒洗剂样品2份，每份2ml，分别采用超声、回流两种不同的提取方法，过滤收集滤液，将样品在13000r/min离心10min，抽取10μL注入高效液相色谱仪中，采集色谱图(图7)。
图7中不同提取方式的高效液相色谱图1：加热回流；2：超声
结果显示两种提取方法效果相似，由于超声提取的操作较方便易行、重现性好，所以选用超声法提取杀菌止痒洗剂。
2.3提取时间选择
精确称量杀菌止痒洗剂样品4份，每份2ml，置锥形瓶中，以无水甲醇为溶剂，分别超声提取15min、30min、45min和60min，过滤收集滤液，将样品溶液在13000r/min条件下离心10min，抽取10μL注入高效液相色谱仪中，采集色谱图(图8)。
图8中不同提取时间下的高效液相色谱图
1：60min；2：45min；3：30min；4：15min。
结果显示不同提取时间所得色谱图效果相似，为节省人力物力以及确保样品较完全提取，最后选取超声提取30min。
综上，确定最后的提取工艺为：加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000r/min离心10min，得供试品溶液。
3.方法学考察
3.1精密度试验
取S1号样品，按实施例1的提取方法制备供试品溶液，按实施例1下的色谱方法进行样品信息采集，连续进样6针，将6次进样样品HPLC图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度计算，结果相似度均在0.99以上。以分离度较好、峰面积适中的9号峰为参照峰，计算16个共有峰相对保留时间的RSD<0.05％，相对峰面积RSD<2％，结果见表1。表明实验所用仪器的精密度较好，分析结果稳定可靠，符合指纹图谱的要求。
3.2稳定性试验
取S1号样品，按实施例1下的提取方法制备供试品溶液，按实施例1下的色谱方法进行样品信息采集，分别于0h、2h、4h、8h、12h和24h注入液相色谱仪，将6个时间段样品HPLC指纹图谱数据导入相似度评价系统进行计算，结果6个时间段样品图谱相似度均在0.99以上。以9号峰为参照峰，计算16 个共有峰的相对保留时间RSD<0.20％，相对峰面积RSD为<3％，结果见表2。表明样品在24h内稳定。
3.3重复性试验
取S1号样品精密称定，平行制备6份供试品溶液，将6份样品HPLC指纹图谱数据导入相似度评价系统进行计算，结果6批次样品图谱相似度均在0.96 以上。以9号峰为参照峰，计算16个共有峰的相对保留时间RSD<0.3％，相对峰面积的RSD<3.09％，说明方法重复性良好。结果见表2。
表2分析结果
Figure BDA0002358716150000101
Figure BDA0002358716150000111
4.指纹图谱的建立
分别精密吸取10批杀菌止痒洗剂样品溶液、对照品混合溶液以及各单味对照药材溶液各10μL，按实施例1下的色谱方法将样品注入高效液相色谱仪中，记录色谱图。结果见图9、10、11。
其中，图9为10批次杀菌止痒洗剂样品HPLC叠加图。
图10对照品混合溶液HPLC图谱1、苦参碱；2、落新妇苷；3、黄柏碱； 4、盐酸小檗碱；5、蛇床子素；6、苍术素。
图11对照药材HPLC叠加图。1、特征指纹图谱2、土茯苓3、蛇床子4、黄柏5、苦参6、苍术。
5.共有指纹图谱的建立及相似度评价
将10批样品HPLC色谱图数据导入相似度评价系统，使用中位数法进行自动匹配，加以多点校正，形成保留时间较为稳定、峰形明显的16个共有峰图谱作为样品共有特征HPLC指纹图谱(见图12)，计算相似度结果见表3，表明各批次样品之间HPLC图谱有良好的相似性。
表3 10批杀菌止痒洗剂样品相似度计算结果
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
S1 1 0.992 0.992 0.985 0.985 0.99 0.99 0.992 0.985 0.992
S2 0.992 1 0.991 0.983 0.982 0.992 0.992 0.999 0.982 0.988
S3 0.992 0.993 1 0.983 0.982 0.992 0.992 0.991 0.982 0.978
S4 0.985 0.983 0.983 1 0.989 0.976 0.976 0.983 0.976 0.983
S5 0.985 0.982 0.982 0.987 1 0.976 0.975 0.982 0.921 0.982
S6 0.99 0.992 0.992 0.976 0.976 1 0.976 0.992 0.976 0.992
S7 0.99 0.992 0.992 0.976 0.975 0.988 1 0.992 0.975 0.992
S8 0.992 0.987 0.987 0.983 0.982 0.992 0.992 1 0.982 0.934
S9 0.985 0.982 0.982 0.988 0.985 0.976 0.975 0.982 1 0.982
S10 0.992 0.978 0.987 0.983 0.982 0.992 0.992 0.954 0.982 1
R 0.995 0.997 0.997 0.992 0.992 0.993 0.993 0.997 0.992 0.997
6指纹图谱共有峰的指认与归属:
根据色谱峰的保留时间信息，对指纹图谱的共有峰进行药材归属，确定指纹图谱的16个共有峰中，第1、10、11、15号峰属于蛇床子药材，其中 10号峰为蛇床子素；第4、5、8号峰属于土茯苓药材，其中4号峰为落新妇苷；第7、9、13、14号峰属于黄柏药材，其中7号峰为黄柏碱，9号峰为盐酸小檗碱；第3、6、12号峰属于苦参药材，其中3号峰为苦参碱；第2、16 号峰属于苍术药材，其中16号峰为苍术素。可见，杀菌止痒洗剂组成药材的主要成分(除冰片成分无紫外吸收外)均在本技术得到的指纹图谱中得到了整体表征。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (6)

1.杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.混合对照品溶液的制备：
分别精密称取苦参碱、落新妇苷、黄柏碱、盐酸小檗碱、蛇床子素、苍术素对照品，加甲醇制成混合对照品溶液；
S2.杀菌止痒洗剂样品溶液的制备：
精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，得供试品溶液；
S3.单味对照药材溶液的制备：
将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，提取，过滤，取上清液，即分别得黄柏对照药材溶液、苦参对照药材溶液、蛇床子对照药材溶液、土茯对照药材溶液苓、苍术对照药材溶液；
S4.测定：
分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液和各单味对照药材溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得杀菌止痒洗剂的指纹图谱；
检测条件包括：色谱柱为 Waters XBridge C18色谱柱；以体积分数0.1%磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流动相流速为0.8～1.2mL/min；柱温为20～35℃，检测波长为 285nm，进样量为5～15μl；
所述梯度洗脱过程中，流动相A和流动相B的变化为：
0min，流动相A 85％，流动相B 15％；
15min，流动相A 64％，流动相B 36％；
22min，流动相A 60％，流动相B 40％；
45min，流动相A 50％，流动相B 50％；
50min，流动相A 35％，流动相B 65％；
55min，流动相A 24％，流动相B 76％；
70min，流动相A 18％，流动相B 82％。
2.根据权利要求1所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，流动相流速为0.8mL/min；柱温为25℃，进样量为10μl。
3.根据权利要求1所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤S2中，精确称量杀菌止痒洗剂，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000 r/min 离心10min，得供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤S3中，将黄柏、苦参、蛇床子、土茯苓、苍术药材粉碎成粉末，分别取各单味药材粉末，精密称定，加无水甲醇，超声提取30min，放冷，减压抽滤，取上清液13000 r/min 离心10min，分别得各单味对照药材溶液。
5.根据任一权利要求1-4所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，对指纹图谱的共有峰进行药材归属，确定指纹图谱的16个共有峰中，第1、10、11、15号峰属于蛇床子药材，第4、5、8号峰属于土茯苓药材，第7、9、13、14号峰属于黄柏药材，第3、6、12号峰属于苦参药材，第2、16号峰属于苍术药材。
6.根据任一权利要求1-4所述的杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，对指纹图谱的共有峰进行活性成分归属，其中3号峰为苦参碱，4号峰为落新妇苷，7号峰为黄柏碱，9号峰为盐酸小檗碱，10号峰为蛇床子素，16号峰为苍术素。
CN202010015491.2A 2020-01-07 2020-01-07 杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法 Active CN111175429B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010015491.2A CN111175429B (zh) 2020-01-07 2020-01-07 杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010015491.2A CN111175429B (zh) 2020-01-07 2020-01-07 杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111175429A CN111175429A (zh) 2020-05-19
CN111175429B true CN111175429B (zh) 2022-06-14

Family

ID=70657981

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010015491.2A Active CN111175429B (zh) 2020-01-07 2020-01-07 杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111175429B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109633055B (zh) * 2018-12-29 2023-01-13 贵州长生药业有限责任公司 杀菌止痒洗剂多成分含量测定方法
CN113138253A (zh) * 2021-06-04 2021-07-20 西南民族大学 一种刷格痛风散的检测方法
CN114414685B (zh) * 2022-01-10 2023-09-05 保定天浩制药有限公司 一种中药胶囊指纹图谱检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103784664A (zh) * 2014-01-27 2014-05-14 贵州师范大学 一种防治慢性盆腔炎的双相胶囊及其制备方法和检测方法
TW201525459A (zh) * 2013-12-20 2015-07-01 Green Global State Biotech Ltd 苦參鹼含量測定方法
CN109453336A (zh) * 2018-10-16 2019-03-12 吴蓓莉 一种用于治疗湿症的中药组合物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI285262B (en) * 2005-06-20 2007-08-11 Dev Center Biotechnology Characteristic mass spectrum fingerprinting setting method and rapid identification method of Chinese herb medicine and prescription
CN104965033B (zh) * 2015-07-14 2017-01-18 贾忠 一种苍柏袪痛制剂hplc指纹图谱的测定方法
JP6256932B2 (ja) * 2015-12-29 2018-01-10 株式会社アイスティサイエンス 濃度の大きく異なる複数成分を含有する試料の分析前処理方法
CN109633055B (zh) * 2018-12-29 2023-01-13 贵州长生药业有限责任公司 杀菌止痒洗剂多成分含量测定方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201525459A (zh) * 2013-12-20 2015-07-01 Green Global State Biotech Ltd 苦參鹼含量測定方法
CN103784664A (zh) * 2014-01-27 2014-05-14 贵州师范大学 一种防治慢性盆腔炎的双相胶囊及其制备方法和检测方法
CN109453336A (zh) * 2018-10-16 2019-03-12 吴蓓莉 一种用于治疗湿症的中药组合物

Also Published As

Publication number Publication date
CN111175429A (zh) 2020-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111175429B (zh) 杀菌止痒洗剂指纹图谱的建立方法
CN107589185B (zh) 脉络通颗粒的指纹图谱检测方法及其指纹图谱
CN113917041B (zh) 一种牡丹皮标准汤剂质量检测方法
CN103760254A (zh) 一种治疗冠心病的中药制剂的指纹图谱测定方法
CN113848278A (zh) 一种穿破石标准汤剂质量控制方法
CN105675739A (zh) 一种治疗风热感冒中药的hplc特征图谱的构建方法
CN102441057B (zh) 一种养血清脑颗粒的hplc指纹图谱检测方法
CN107561192A (zh) 一种测定板蓝根药材及其制品中r‑告依春和s‑告依春含量的方法
CN102028773A (zh) 固公果根提取物的鉴别方法
CN113759035B (zh) 小承气汤指纹图谱的构建方法
Liu et al. Quality evaluation of Shenmaidihuang Pills based on the chromatographic fingerprints and simultaneous determination of seven bioactive constituents
CN107402265A (zh) 康媛颗粒指纹图谱的检测方法
CN102175629B (zh) 一种基于生物活性检测的熟地黄品质评价方法
CN104007198B (zh) 一种灵芝皇制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法和应用
CN113533614A (zh) 小承气汤物质基准的建立方法
CN105158352B (zh) 一种冠心宁片的指纹图谱的建立方法及其应用
CN114441685B (zh) 一种重楼标准汤剂质量检测方法
CN106290677B (zh) 冯了性风湿跌打药酒指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
CN115144507A (zh) 桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法
CN113341007A (zh) 一种基于hplc特征图谱的枣仁安神胶囊全药味多成分含量测定方法
CN101008632A (zh) 五味子水煎液的hplc标准指纹图谱及其建立方法
CN108845059B (zh) 脉络舒通颗粒hplc指纹图谱的建立方法及其标准图谱
CN111751472A (zh) 一种槐芩软膏的质量评价方法
CN104678045A (zh) 苦桉祛疹凝胶药品的检测方法
CN117347532B (zh) 归知糖疽颗粒制剂的hplc特征图谱的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant