TW201525459A

TW201525459A - 苦參鹼含量測定方法

Info

Publication number: TW201525459A
Application number: TW102147374A
Authority: TW
Inventors: Jian-Hu Cai
Original assignee: Green Global State Biotech Ltd
Priority date: 2013-12-20
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2015-07-01

Abstract

一種苦參鹼含量測定方法，其係包括（A）分析前準備測定步驟；以及（B）高效液相層析儀測定步驟；而（A）分析前準備測定步驟進行標準品、樣品及移動相之製作，並透過（B）高效液相層析儀測定步驟進行量測、分析及數據計算，可有效並準確測定出苦參鹼含量，以達含量檢測準確性高之功效。

Description

苦參鹼含量測定方法

本發明係苦參鹼含量測定方法，尤指一種應用於中藥製品中苦參鹼含量測定方法之所屬技術領域者。

苦參鹼是由豆科植物苦參的乾燥根、植株、果實經有機溶劑提取製成，其係為一種生物鹼。

按目前習知苦參鹼含量測定方法，其係以薄層掃描法測定中藥之苦參鹼含量，即以含苦參鹼之供試品鹼化後加入氯仿提取，再將氯仿蒸乾加入乙醇定容，將定容後測定物進行點樣、分離，並以薄層掃描器進行掃描，以進行苦參鹼的峰值面積測定，透過該峰值面積測定計算出苦參鹼含量，然經由上述檢測得到的結果在業界普遍認為測定準確性差。

本發明有鑑於習知苦參鹼含量測定方法測定準確性差之問題，乃完成本發明之苦參鹼含量測定方法。

本發明的目的在於提供一種苦參鹼含量測定方法，其係包括（A）分析前準備測定步驟；以及（B）高效液相層析儀測定步驟；而（A）分析前準備測定步驟係為（A1）標準品製備：精秤苦參鹼標準品10mg置於10ml定量瓶中，加入甲醇至定量瓶標線，配置後濃度為1000ppm標準品容液，再將1000ppm苦參鹼標準品以序列稀釋方式，利用甲醇稀釋配成750、500、400、300、200、100、50、25與5ppm，各濃度標準品經過0.45µm濾膜過濾後，存放於-4°C保存備用；（A2）樣品制備：取待測物01.ml加入甲醇進行稀釋至500ppm，樣品稀釋後以0.45µm濾膜過濾後，再以高效液相層析儀（HPLC）進行分析；（A3）移動相製備：移動相為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，分別以量筒取550ml甲醇，及450ml去離子水（DIWater），依序裝入1L血清瓶中，之後加入0.02ml乙二胺，並進行超音波震盪除氣候使用；另（B）高效液相層析儀測定步驟係為（B1）分析方法：使用分析型C18-WP管柱（250×4.6mm，5µm）進行苦參鹼含量分析，移動相容液為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，流速設定為1ml/min，檢測器波長225nm，樣品注射器loop為20µl，實驗時間20分鐘；（B2）檢量線製作：依序將苦參鹼標準品溶液（5、25、50、100、200、300、400、500與750ppm）由低濃度至高濃度注射分析，將所得到之圖譜數據，已波鋒面積與濃度作圖，得到苦參鹼檢量線，其線性迴歸係數（R-squared，R² ）需大於0.99，以供樣品中苦參鹼含量測定使用；（B3）樣品分析及定量：將過濾之稀釋樣品重複多次進樣分析，並以上述檢量線回推換算每次注射分析樣品所含苦參檢含量，再多次計算取平均值；經由上述（A）分析前準備測定步驟進行標準品、樣品及移動相之製作，再透過（B）高效液相層析儀測定步驟進行量測、分析及數據計算，可有效並準確測定出苦參鹼含量，以達含量檢測準確性高之功效。

為使　貴審查委員能進一步瞭解本發明之結構，特徵及其他目的，玆以如后之較佳實施例附以圖式詳細說明如后，惟本圖例所說明之實施例係供說明之用，並非為專利申請上之唯一限制者。

請配合參閱第1至3圖所示，係本發明苦參鹼含量測定方法之檢測步驟、（A）分析前準備測定步驟及（B）高效液相層析儀測定步驟示意圖，其步驟係包括：

（A）分析前準備測定步驟；以及（B）高效液相層析儀測定步驟；而（A）分析前準備測定步驟係為（A1）標準品製備：精秤苦參鹼標準品10mg置於10ml定量瓶中，加入甲醇至定量瓶標線，配置後濃度為1000ppm標準品容液，再將1000ppm苦參鹼標準品以序列稀釋方式，利用甲醇稀釋配成750、500、400、300、200、100、50、25與5ppm，各濃度標準品經過0.45μm濾膜過濾後，存放於-4°C保存備用；（A2）樣品制備：取待測物01.ml加入甲醇進行稀釋至500ppm，樣品稀釋後以0.45μm濾膜過濾後，再以高效液相層析儀（HPLC）進行分析；（A3）移動相製備：移動相為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，分別以量筒取550ml甲醇，及450ml去離子水（DIWater），依序裝入1L血清瓶中，之後加入0.02ml乙二胺，並進行超音波震盪除氣候使用；另（B）高效液相層析儀測定步驟係為（B1）分析方法：使用分析型C18-WP管柱（250×4.6mm，5µm）進行苦參鹼含量分析，移動相容液為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，流速設定為1ml/min，檢測器波長225nm，樣品注射器loop為20µl，實驗時間20分鐘；（B2）檢量線製作：依序將苦參鹼標準品溶液（5、25、50、100、200、300、400、500與750ppm）由低濃度至高濃度注射分析，將所得到之圖譜數據，已波鋒面積與濃度作圖，得到苦參鹼檢量線，其線性迴歸係數（R-squared，R² ）需大於0.99，以供樣品中苦參鹼含量測定使用；（B3）樣品分析及定量：將過濾之稀釋樣品重複多次進樣分析，並以上述檢量線回推換算每次注射分析樣品所含苦參檢含量，再多次計算取平均值；

藉由上述檢測步驟以完成本發明之苦參鹼含量測定方法。

請配合參閱第1至3圖所示，係本發明苦參鹼含量測定方法之檢測步驟、（A）分析前準備測定步驟及（B）高效液相層析儀測定步驟示意圖，其（A）分析前準備測定步驟係為（A1）標準品製備：精秤苦參鹼標準品10mg置於10ml定量瓶中，加入甲醇至定量瓶標線，配置後濃度為1000ppm標準品容液，再將1000ppm苦參鹼標準品以序列稀釋方式，利用甲醇稀釋配成750、500、400、300、200、100、50、25與5ppm，各濃度標準品經過0.45µm濾膜過濾後，存放於-4°C保存備用；（A2）樣品制備：取待測物01.ml加入甲醇進行稀釋至500ppm，樣品稀釋後以0.45µm濾膜過濾後，再以高效液相層析儀（HPLC）進行分析；（A3）移動相製備：移動相為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，分別以量筒取550ml甲醇，及450ml去離子水（DIWater），依序裝入1L血清瓶中，之後加入0.02ml乙二胺，並進行超音波震盪除氣候使用；另（B）高效液相層析儀測定步驟係為（B1）分析方法：使用分析型C18-WP管柱（250×4.6mm，5µm）進行苦參鹼含量分析，移動相容液為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，流速設定為1ml/min，檢測器波長225nm，樣品注射器loop為20µl，實驗時間20分鐘；（B2）檢量線製作：依序將苦參鹼標準品溶液（5、25、50、100、200、300、400、500與750ppm）由低濃度至高濃度注射分析，將所得到之圖譜數據，已波鋒面積與濃度作圖，得到苦參鹼檢量線，其線性迴歸係數（R-squared，R² ）需大於0.99，以供樣品中苦參鹼含量測定使用；（B3）樣品分析及定量：將過濾之稀釋樣品重複多次進樣分析，並以上述檢量線回推換算每次注射分析樣品所含苦參檢含量，再多次計算取平均值；經由上述（A）分析前準備測定步驟進行標準品、樣品及移動相之製作，再透過（B）高效液相層析儀測定步驟進行量測、分析及數據計算，可有效並準確測定出苦參鹼含量，以達含量檢測準確性高之功效。

綜上所述，本發明確實可達到上述諸項功能及目的，故本發明應符合專利申請要件，爰依法提出申請。

（A）‧‧‧分析前準備測定步驟
（A1）‧‧‧標準品製備
（A2）‧‧‧樣品制備
（A3）‧‧‧移動相製備
（B）‧‧‧高效液相層析儀測定步驟
（B1）‧‧‧分析方法
（B2）‧‧‧檢量線製作
（B3）‧‧‧樣品分析及定量

[第1圖]係本發明苦參鹼含量測定方法之檢測步驟示意圖； [第2圖]為本發明苦參鹼含量測定方法之（A）分析前準備測定步驟示意圖； [第3圖]為本發明苦參鹼含量測定方法之（B）高效液相層析儀測定步驟示意圖；

(A)‧‧‧分析前準備測定步驟

(B)‧‧‧高效液相層析儀測定步驟

Claims

一種苦參鹼含量測定方法，其步驟係包括：（A）分析前準備測定步驟；以及（B）高效液相層析儀測定步驟；而（A）分析前準備測定步驟係為（A1）標準品製備：精秤苦參鹼標準品10mg置於10ml定量瓶中，加入甲醇至定量瓶標線，配置後濃度為1000ppm標準品容液，再將1000ppm苦參鹼標準品以序列稀釋方式，利用甲醇稀釋配成750、500、400、300、200、100、50、25與5ppm，各濃度標準品經過0.45µm濾膜過濾後，存放於-4°C保存備用；（A2）樣品制備：取待測物01.ml加入甲醇進行稀釋至500ppm，樣品稀釋後以0.45μm濾膜過濾後，再以高效液相層析儀（HPLC）進行分析；（A3）移動相製備：移動相為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，分別以量筒取550ml甲醇，及450ml去離子水（DIWater），依序裝入1L血清瓶中，之後加入0.02ml乙二胺，並進行超音波震盪除氣候使用；另（B）高效液相層析儀測定步驟係為（B1）分析方法：使用分析型C18-WP管柱（250×4.6mm，5µm）進行苦參鹼含量分析，移動相容液為甲醇：二次水：乙二胺＝55：45：0.02混和液，流速設定為1ml/min，檢測器波長225nm，樣品注射器loop為20µl，實驗時間20分鐘；（B2）檢量線製作：依序將苦參鹼標準品溶液（5、25、50、100、200、300、400、500與750ppm）由低濃度至高濃度注射分析，將所得到之圖譜數據，已波鋒面積與濃度作圖，得到苦參鹼檢量線，其線性迴歸係數（R-squared，R² ）需大於0.99，以供樣品中苦參鹼含量測定使用；（B3）樣品分析及定量：將過濾之稀釋樣品重複多次進樣分析，並以上述檢量線回推換算每次注射分析樣品所含苦參檢含量，再多次計算取平均值。