CN104950052A - 一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物质量测定方法技术领域，具体为一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，包括制备参照物溶液、制备供试品溶液、分别吸取参照物溶液和供试品溶液，注入气相色谱仪，测定相对保留时间，特征峰的确定和对照图谱的建立，供试品特征图谱中呈现8个特征峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，若在规定值的±5％范围之内则为合格质量的产品；其中气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱；分流比10-20：1；柱温初始温度50-115℃，保持4-5分钟，以每分钟1.5-4℃的速率升温至200℃，保持2-3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；载气流量1-2ml/min。

Description

一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法

技术领域

本发明属于药物质量测定方法技术领域，具体为一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法。

背景技术

薄荷素油滴丸中主要成分为薄荷素油，薄荷素油主要成份为薄荷脑(menthol)，还含有桉油精、(－)-薄荷酮和胡薄荷酮等成份，如何在检测薄荷脑同时还检测其它成份的含量，从而从整体上能够对胆舒滴丸的质量进行控制，保证临床用药的有效性和安全性，是目前所需要的研究发向。

目前薄荷素油滴丸中成份含量测定选择以薄荷脑为主要测定指标，从而通过对薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的测定，来有效的控制其质量。薄荷脑，是一种白色条状或柱状结晶，为单萜类成分, 沸点较低,易挥发，难溶于水，易溶于乙醇、酯等，制成水溶型制剂存在一定的困难。

薄荷素油挥发油中主要成分为薄荷酮、异薄荷酮、胡薄荷酮、胡椒酮、胡椒烯酮、桉油精等。薄荷素油中包含的成分虽然很多，但成分和含量较为固定，因此可采用特征图普法对其质量进行控制。

现在有人运用气相色谱仪来进行原料成份的检测与分析，气相色谱仪是一种多组份混合物的分离、分析工具，它是以气体为流动相，采用冲洗法的柱色谱技术。当多组份的分析物质进入到色谱柱时，由于各组分在色谱柱中的气相和固定液液相间的分配系数不同，因此各组份在色谱柱的运行速度也就不同，经过一定的柱长后，顺序离开色谱柱进入检测器，经检测后转换为电信号送至数据处理工作站，从而完成了对被测物质的定性定量分析。

但采用气相色谱法建立含量和质量测定方法，标准操作步骤不仅仅是仪器的开机、关机等简单的确操作步骤。不同原料种类具有不同的关键测定参数，不同的关键测定参数会得到不同的检测结果。

目前还没有关于用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的相关报道。因此，是否可以用气相色谱仪检测薄荷脑含量的同时检测桉油精、(－)-薄荷酮和胡薄荷酮等成份？如何在测定过程中选择适合薄荷脑、桉油精、薄荷酮和胡薄荷酮的测定参数，从而从整体上来控制薄荷素油滴丸质量？并且如何使选取目标峰的分离度、对称性、理论塔板数均能都达到药典要求的条件？等等。这些问题目前则是未知，需要去探索。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，此方法操作简单，重复性高，稳定性好，检测成本低。

解决以上技术问题的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）制备对照品溶液：取桉油精对照品、(－)-薄荷酮对照品、薄荷脑、胡薄荷酮对照品，称定，分别加乙醇制成溶液，即得；

具体为取桉油精对照品、(－)-薄荷酮对照品、薄荷脑、胡薄荷酮对照品，称定，分别加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，即得；

（2）制备供试品溶液：

取N个批次的供试品，分别称定后置不同的量瓶中，加水和无水乙醇、过滤后取滤液，即得；

具体为取N个批次的供试品，分别称定后置不同的量瓶中，加水，超声处理使溶散，加入无水乙醇，超声处理4-5分钟，放冷，加无水乙醇至所需刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（3）特征峰的确定：

吸取桉油精对照品溶液、(－)-薄荷酮对照品溶液、薄荷脑溶液、胡薄荷酮对照品溶液，分别注入气相色谱仪进行测定，确定峰1为桉油精，峰2为(－)-薄荷酮，峰7为薄荷脑，峰8为胡薄荷酮；

（4）对照图谱的建立：

分别吸取供试品溶液，注入气相色谱仪，进行测定，记录色谱图，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对各个供试品色谱图进行合成，根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，选择8个峰作为特征峰，建立胆舒滴丸特征图谱的对照图谱，与薄荷脑相应的峰为对照峰（S）；

其中，相对保留时间规定值为：峰1 为0.37，峰2为0.73，峰3为0.78，峰4为0.87，峰5为0.90，峰6为0.92，峰S为1.00，峰8为1.05；

（5）检测时，吸取供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图，供试品特征图谱中呈现8个特征峰，分别计算各特征峰与S峰的相对保留时间，若在规定值的±5％范围之内则为合格质量的产品。

本发明优化方案中，所述气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱；分流进样，分流比10-20：1；柱温为程序升温，初始温度50-115℃，保持4-5分钟，以每分钟1.5-4℃的速率升温至200℃，保持2-3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；载气流量1-2ml/min。

又优化方案中，所述超声处理中超声功率200W，频率40kHz。

本发明的优化方案中所述毛细管柱柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm。

所述分流比为10：1。

所述载气流量2ml/min。

所述柱温为程序升温：初始温度80-115℃，保持4-5分钟，以每分钟3-4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃。

进一步优化方案中，所述柱温为程序升温：初始温度115℃，保持5分钟，以每分钟4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃。

所述检测方法中按薄荷脑峰计算，理论板塔数不低于50000。

所述N≥3。

本发明的检测过程中每次吸取供试品溶液量为1μ1。

为了简化操作流程，全面的控制胆舒滴丸的质量，本发明中建立特征图谱有效的控制其质量，保证临床用药的有效性和安全性。

采用气相色谱法对胆舒滴丸中的挥发油成分进行色谱分离，并建立其特征图普。其中柱温、载气流速、分流比为关键参数。柱温，载气流速不同出峰时间、目标峰的对称性、分离度、理论塔板数不同；分流比不同，进入仪器的样品量不同，分流比大，进入仪器的样品量大，分流比小，进入仪器的样品量小。

气相色谱仪要求进行仪器的样品各成分均具有挥发性，在选择溶剂时优先选择具有挥发性，毒性小的溶剂，经过多种溶剂的对比，最终选择无水乙醇作为提取溶剂。

本发明中的检测方法的理论板数为157833、分离度位1.52、重复性为1%和拖尾因子为1.03，均达到《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D  高效液相色谱法中的规定。

附图说明

图1为本发明中实施例5的胆舒滴丸色谱峰指认图

图2为本发明中实施例5的 9批胆舒滴丸特征图谱

图3为本发明中实施例5的胆舒滴丸对照图谱

 图1中：1胡薄荷酮，2薄荷脑，3（-）-薄荷酮，4桉油精

图3中： 峰1：桉油精， 峰2：（-）-薄荷酮 ，峰7（S）：薄荷脑，峰8：胡薄荷酮，

              峰3、4、5、6为相应其它的峰

具体实施方式

以下通过实例对本发明作进一步的说明，其中：

所用实验仪器为Agilent 78090B气相色谱仪；色谱柱：HP-INNOWAX毛细管柱（30*0.53*1）；万分之一天平（赛多利斯 BS110S）、KQ－250B型超声清洗器（昆山超声电子有限公司）。

所用试剂及试药：水为超纯水，无水乙醇为分析纯。

薄荷脑为中国药品生物制品检定所110728-200506；

胆舒滴丸：四川新绿色药业科技发展股份有限公司，批号为1312001，312002，1312003，140501，140502，140503，150401，150402，150403。

实施例1

一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，包括以下步骤：

（1）制备对照品溶液：取桉油精对照品、(－)-薄荷酮对照品、薄荷脑、胡薄荷酮对照品，称定，分别加无水乙醇制成每1ml含2mg的溶液，即得；

在特征图谱项对照品溶液的制备中，选择了薄荷素油中已知同时中国药品生物制品鉴定所已有的4种成分（桉油精、(－)-薄荷酮、薄荷脑、胡薄荷酮）进行参照定性。能够在整体上对胆舒滴丸的质量进行控制。

（2）制备供试品溶液：取本品5丸，精密称定，置50ml量瓶中，加水4ml，超声处理使溶散，加入无水乙醇30ml，超声处理（功率200W，频率40kHz）5分钟，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

 胆舒滴丸的基质为聚乙二醇6000，在水或乙醇中易溶，薄荷素油与乙醇、氯仿或乙醚能任意混合，同时在测定过程当中大量进水样对毛细管柱损伤比较大，因此确定本发明中胆舒滴丸图谱供试品溶液的制备方法。

（3）特征峰的确定：

吸取桉油精对照品溶液、(－)-薄荷酮对照品溶液、薄荷脑溶液、胡薄荷酮对照品溶液，分别注入气相色谱仪，进行测定，记录色谱图，确定峰1为桉油精，峰2为(－)-薄荷酮，峰7为薄荷脑，峰8为胡薄荷酮；

气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度50℃，保持5分钟，以每分钟1.5℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比10：1；载气流量1.5ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50 000；

（4）对照图谱的建立：

分别吸取供试品溶液，注入气相色谱仪，测定峰面积，记录色谱图，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对各个供试品色谱图进行合成，根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，选择8个峰作为特征峰，建立胆舒滴丸特征图谱的对照图谱，与薄荷脑相应的峰为对照峰（S）；

其中，相对保留时间规定值为：峰1 为0.37，峰2为0.73，峰3为0.78，峰4为0.87，峰5为0.90，峰6为0.92，峰S为1.00，峰8为1.05；

（5）检测时，吸取供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图，供试品特征图谱中呈现8个特征峰，分别计算各特征峰与S峰的相对保留时间，在规定值的±5％范围之内则为合格质量的产品。

实施例2

    其它内容如实施例1，其中：

气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度60℃，保持4分钟，以每分钟3℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比20：1；载气流量2ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

实施例3

其它内容如实施例1，其中：

气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度80℃，保持4分钟，以每分钟3.5℃的速率升温至200℃，保持2分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比15：1；载气流量1ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

实施例4

其它内容如实施例1，其中气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度100℃，保持5分钟，以每分钟2.5℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比12：1；载气流量2ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

实施例5

其它内容如实施例1，其中气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度115℃，保持5分钟，以每分钟4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比10：1；载气流量2ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

特征峰的确定：

采用桉油精，（-）-薄荷酮，薄荷脑，胡薄荷酮等对照品进行定位，结果表明：峰1为桉油精，峰2为(－)-薄荷酮，峰7为薄荷脑，峰8为胡薄荷酮。见图1。

对照图谱的建立：

对本品9批样品进行特征图谱的测定，根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择了8个重复性较好的峰作为特征峰。最终规定：供试品特征图谱中应呈现8个特征峰，与参照物峰相应的峰为峰S，计算各特征峰与峰S的相对保留时间，应在规定值的±5％范围之内。相对保留时间规定值为：0.37（峰1），0.73（峰2），0.78（峰3），0.87（峰4），0.90（峰5），0.92（峰6），1.00（峰S），1.05（峰8），见表1：

表1   9批胆舒滴丸相对保留时间

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）对9批样品（进行合成，建立了胆舒滴丸特征图谱的对照图谱。见图2、3。

试验一：溶液稳定性实验

操作步骤如实施例5，取已制备好的同一批供试品溶液，分别于0，4，8，12，24h测定，检测70min内的色谱图，对其中的特征峰进行分析，其相对应的色谱峰相对保留时间均小于0.3%，特征峰的相对峰面积的RSD均小于2.0%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。见表2、3。

表2    稳定性考察—特征峰相对保留时间

表3  稳定性考察—特征峰相对峰面积比值

试验二：进样精密度实验

操作步骤如实施例5，取胆舒滴丸（批号：1312001）供试品溶液，连续进样6次，每次1μl，以峰1（桉油精）、峰2（（-）-薄荷酮）、峰8（胡薄荷酮）作为指标峰，计算同峰S（薄荷脑）的相对保留时间及相对峰面积，结果相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于2.0%，表明该方法进样精密度良好。见表4、5：

表4   进样精密度考察 — 特征峰相对保留时间比值

表5 进样精密度考察—特征峰相对峰面积比值

试验三：重复性实验

操作步骤如实施例5，精密称取胆舒滴丸（批号为1312001）6份，按照拟定方法进行制备及测定，结果各指标特征峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于2.0%，表明该方法重复性好。见表6、7。

表6  重复性考察—特征峰相对保留时间比值

表7   重复性考察—特征峰相对峰面积比值

试验四：耐用性实验

操作步骤如实施例5，采用两台仪器岛津GC-14B及Agilent7890B进行检测，结果各特征峰的相对保留时间均在规定范围内，结果表明本方法对仪器的耐用性良好，结果见表8。

表8 耐用性实验--特征峰相对保留时间比值

表9 耐用性实验--特征峰相对峰面积比值

本发明中的检测方法，在现有仪器条件下，简化操作流程，用外标法对薄荷脑等成份进行测定，结果外表法在最终与用传统方法的内标法检测在检查结果上无差异。本发明中用气相色谱仪检测胆舒滴丸质量，为全自动进样，进样体积重现性很好，不用内标法也具有很好的分析精密度，且操作简单，成本低，重复性，稳定性高。

Claims (10)

1.一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）制备对照品溶液：

取桉油精对照品、(－)-薄荷酮对照品、薄荷脑、胡薄荷酮对照品，称定，分别加乙醇制成溶液，即得；

（2）制备供试品溶液：

取N个批次的供试品，分别称定后置不同的量瓶中，加水和无水乙醇、过滤后取滤液，即得；

（3）特征峰的确定：

吸取桉油精对照品溶液、(－)-薄荷酮对照品溶液、薄荷脑溶液、胡薄荷酮对照品溶液，分别注入气相色谱仪进行测定，确定峰1为桉油精，峰2为(－)-薄荷酮，峰7为薄荷脑，峰8为胡薄荷酮； 

（4）对照图谱的建立：

分别吸取供试品溶液，注入气相色谱仪，记录色谱图，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对各个供试品色谱图进行合成，根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，选择8个峰作为特征峰，建立胆舒滴丸特征图谱的对照图谱，薄荷脑的峰为对照峰（S）；

其中，相对保留时间规定值为：峰1 为0.37，峰2为0.73，峰3为0.78，峰4为0.87，峰5为0.90，峰6为0.92，峰S为1.00，峰8为1.05；

（5）检测时，吸取供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图，供试品特征图谱中呈现8个特征峰，分别计算各特征峰与S峰的相对保留时间，若在规定值的±5％范围之内则为合格质量的产品。

2.根据权利要求1所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱；分流进样，分流比10-20：1；柱温为程序升温，初始温度50-115℃，保持4-5分钟，以每分钟1.5-4℃的速率升温至200℃，保持2-3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；载气流量1-2ml/min。

3.根据权利要求2所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述超声处理中超声功率200W，频率40kHz。

4.根据权利要求2所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述毛细管柱柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm。

5.根据权利要求2所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述分流比为10：1。

6.根据权利要求2所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述载气流量2ml/min。

7.根据权利要求2所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述柱温为程序升温：初始温度80-115℃，保持4-5分钟，以每分钟3-4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃。

8.根据权利要求7所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述柱温为程序升温：初始温度115℃，保持5分钟，以每分钟4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃。

9.根据权利要求1所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述检测方法中按薄荷脑峰计算，理论板塔数不低于50000。

10.根据权利要求1所述的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸质量的方法，其特征在于：所述N≥3。