CN103163244B - 一种倍半萜类和姜黄素类成分同时测定的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种倍半萜类和姜黄素类成分同时检测的方法，特别是莪术中所含倍半萜类和姜黄素类成分的同时检测，采用本方法可简便可靠的对莪术中的五个倍半萜类成分和三个姜黄素类成分进行定量检测，同时检测这两大类成分有助于更全面的控制莪术的质量，本测定方法分别展开了线性关系考察，精密度试验，稳定性试验，重复性试验和加样回收率试验，结果认为该方法准确可靠。

Description

一种倍半萜类和姜黄素类成分同时测定的方法

技术领域

本发明涉及一种倍半萜类和姜黄素类成分同时检测的方法，特别是莪术中倍半萜类和姜黄素类成分的含量检测。

背景技术

莪术为姜科植物蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Valeton)、广西莪术(CurcumakwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)或温郁金(Curcuma wenyujin Y·H·Chen et C·Ling)的干燥根茎，具有破气行血、消积止痛的功效和抗癌、抗病毒、抗炎、抗凝血、抗氧化和保肝等生理作用。

根据文献报道莪术油具有抗病毒和抗肿瘤活性，莪术油中的倍半萜类（包括莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯等）则是其主要活性成分。同时莪术中的姜黄素类成分（包括双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素）也具有抗病毒和抗肿瘤活性。

目前，GC–MS,HPLC,LC-MS,LC-MS/MS已经应用于定量莪术及其制剂中倍半萜类、姜黄素类成，但没有同时测定倍半萜及姜黄素类成分的研究报道。本发明建立了HPLC-DAD同时测定莪术中倍半萜及姜黄素类成分的方法，有助于更全面的控制莪术的质量。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种倍半萜类及姜黄素类成分同时测定的方法，特别适用于莪术中这两大类成分的含量测定。

根据本发明提供的一种倍半萜类及姜黄素类成分同时测定的方法，步骤和条件如下：

色谱条件：色谱柱：直径和长度为4.6mm×250mm,5μm的Hanbon ODS-2C18，流动相：A：0.05%甲酸乙腈，B：0.05%甲酸水，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长216nm，430nm,流速1.0ml/min，进样量20μl，采样时间65min；

梯度洗脱液的配制方法如下：

对照品溶液的制备：精密称取莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、姜黄素，去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对照品适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液；分别精密取各储备液适量，配制成混和标准品储备液，以上8个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为0.1674,0.098,0.0406,0.016,0.1125,0.0173,0.0193,0.0011mg/mL；

供试品溶液的制备：取含倍半萜和姜黄素类成分的药材，粉碎后过三号筛，得粉末0.5g，精密称定，加50mL90%乙醇，索氏回流提取至无色，50℃水浴挥干溶剂，残渣加甲醇定容至5ml，摇匀，过直径为0.45μm的微孔滤膜，20μl进样；

含量测定:精密吸取对照品及供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

上述倍半萜和姜黄素类成分同时检测的方法，供试品溶液的制备中所述含倍半萜和姜黄素类成分的药材为莪术。

有益效果：采用本方法可简便可靠的对含倍半萜和姜黄素类成分的药材，特别是莪术中的五个倍半萜类成分和三个姜黄素类成分进行定量检测，同时检测这两大类成分有助于更全面的控制莪术的质量，本测定方法分别展开了线性关系考察，精密度试验，稳定性试验，重复性试验和加样回收率试验，结果认为该方法准确可靠。

附图说明

图1为检测波长216nm的混合标准品溶液高效液相色谱图，图2为检测波长430nm的混合标准品溶液高效液相色谱图，图3为检测波长216nm的样品1溶液高效液相色谱图，图4为检测波长430nm的样品1溶液高效液相色谱图。图中1为莪术二酮；2为莪术醇；3为吉马酮；4为呋喃二烯；5为β-榄香烯；6为双去甲氧基姜黄素；7为去甲氧基姜黄素；8为姜黄素。

具体实施方式

本发明所述的倍半萜类和姜黄素类成分同时测定的方法是经过大量筛选试验得到的最优方案，结合具体实施方式，对本发明进一步说明如下：

1药材、仪器与试剂

药材来源：莪术药材购自莪术主产地（浙江、广西、四川），经南京中医药大学巢建国教授鉴定为姜科植物蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Valeton)、广西莪术(Curcuma kwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)或温郁金(Curcuma wenyujin Y·H·Chen etC·Ling)的干燥根茎。粉碎过60目筛备用。药材情况及生产批号见表1：

表1样品一般情况

Agilent1200型高效液相色谱仪（包括在线脱气系统、双元梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器），KQ-500E型医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司），Mettler AG285电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多集团)，FA1104型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司），数显恒温水浴锅HH-4（国华电器有限公司）。Milli-Q超纯水，乙腈为色谱纯，甲酸(分析纯，南京试剂厂)。甲醇（分析纯，南京化学试剂有限公司）。

2方法与结果

2.1测定波长的选择

对含有倍半萜及姜黄素类成分的混标溶液及供试品溶液进行200～400nm全波长扫描，兼顾各成分的吸收强度，最终确定216nm和430nm作为检测波长。

2.2色谱条件

直径和长度为4.6mm×250mm,5μm的Hanbon ODS-2C18，流动相：A：0.05%甲酸乙腈，B：0.05%甲酸水，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长216nm，430nm,流速1.0ml/min，进样量20μl，采样时间65min；

梯度洗脱液的配制方法如下：

2.3对照品溶液的制备精密称取莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、姜黄素，去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对照品适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液。分别精密取各储备液适量，配制成混和标准品储备液，以上8个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为0.1674,0.098,0.0406,0.016,0.1125,0.0173,0.0193,0.0011mg/mL.

2.4供试品溶液的制备取莪术粉末（过三号筛）0.5g，精密称定，加50mL90%乙醇，索氏回流提取至无色，50℃水浴挥干溶剂，残渣加甲醇定容至5ml，摇匀，过微孔滤膜(0.45μm)，20μl进样。

2.5线性关系考察

精密吸取上述混合标准品储备液1μl，4μl，6μl，8μl，10μl，14μl，16μl，20μl进样分析，每个体积进样2次，测定其峰面积，取平均值。以进样量对峰面积进行回归处理，得各对照品的标准曲线，结果表明各化合物在相应范围内线性关系良好，见表2。表2.线性关系考察结果

2.6精密度试验

取上述混合标准品贮备液，于同一天内连续进样6次，并于第二天、第三天各进样2次，每次进样10μL，测定莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的峰面积值，计算得其RSD值。日间精密度及日内精密度结果见表3。

表3精密度数据

2.7稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液20μL分别于制备后0,6,12,24,48h进样，测定峰面积，计算莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的RSD值。结果见表4。

表4稳定性结果(n=6)

2.8重复性试验

称取莪术粉末约0.5g，共6份，精密称定，按“2.4”项下制备样品，测定莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素的平均含量为0.3776,0.5917，0.3006,0.068,0.7504,0.0065,0.1219,0.1294mg/g，RSD值分别为4.2%，3.8%，6.5%,1.1%，2.8%，1.5%，1.4%，1.5%。

2.9加样回收率

精密称取已知8个成分含量的莪术粉末约0.25g，共9份。根据样品中各成分含量的80%、100%与120%，分别加入对照品溶液各3份，按2.4项下方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件进行HPLC分析，根据测得量和加入量计算回收率，见表5。

表5加样回收率实验结果(n=3，平均值)

2.10样品含量测定，见表6。

表6莪术中倍半萜和姜黄素类成分含量测定(n=3)

3结论

本发明采用高效液相色谱法双波长同时测定莪术中的5个倍半萜类成分和3个姜黄素类成分，结果表明不同品种不同产地的莪术药材及饮片中这8个成分的含量差异显著，已有文献研究表明这8个成分均为莪术中的活性成分，因此，选定这8个成分作指标进行莪术药材及饮片的多成分含量测定，可以更好的控制莪术药材的质量，保证临床疗效。

Claims (1)

1.一种倍半萜和姜黄素类成分同时检测的方法，其特征在于，步骤和条件如下：

色谱条件：色谱柱：5μm的Hanbon ODS-2C18，直径和长度分别为4.6mm及250mm,流动相：A：0.05％甲酸乙腈，B：0.05％甲酸水，梯度洗脱，柱温30℃，检测波长216nm，430nm,流速1.0ml/min，进样量20μl，采样时间65min；

梯度洗脱液的配制方法如下：

对照品溶液的制备：精密称取莪术二酮、莪术醇、吉马酮、呋喃二烯、β-榄香烯、姜黄素，去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素对照品适量，加甲醇分别制成单个标准品储备液；分别精密取各储备液适量，配制成混和标准品储备液，以上8个化合物在混合标准品储备液中的质量浓度分别为0.1674,0.098,0.0406,0.016,0.1125,0.0173,0.0193,0.0011mg/mL；

供试品溶液的制备：取莪术药材，粉碎后过三号筛，得粉末0.5g，精密称定，加50mL90％乙醇，索氏回流提取至无色，50℃水浴挥干溶剂，残渣加甲醇定容至5ml，摇匀，过直径为0.45μm的微孔滤膜，20μl进样；

含量测定:精密吸取对照品及供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。