CN102621265B - 参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法 - Google Patents

参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法,属于中药制剂质量控制的技术领域。本发明采用高效液相色谱法,在同一色谱条件下同时对参芎葡萄糖注射液中丹参素、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A6种化合物进行含量测定。本发明较现行的单一成分简单的含量测定方法更具整体性、特征性和稳定性,能够综合反映制剂的内在质量,为进一步提高参芎葡萄糖注射液的质量控制水平,确保产品质量稳定性提供试验依据。

Description

参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法
技术领域
本发明涉及一种参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法,属于中药制剂质量控制的技术领域。
背景技术
参芎葡萄糖注射液由丹参和盐酸川芎嗪配伍组成,具有抗血小板聚集,扩张冠状动脉作用,临床用于闭塞性脑血管病及其它缺血性血管疾病的治疗。参芎葡萄糖注射液现行质量标准(WS-10001-(HD-1136)-2002)的含量测定项目只对丹参素和盐酸川芎嗪进行定量控制,难以全面反映制剂的化学成分特征。随着我国药品生产质量控制水平的提高和对注射剂安全、疗效、质量可控等问题重视程度的不断深入,国家食品药品监督管理局相继提出了“国家药品标准提高行动计划”和“中药注射剂安全性再评价工作”,以全面提升药品质量控制水平。因此,建立一种能快速、准确、全面地控制参芎葡萄糖注射液质量的方法,实现对它物质群的全面控制,具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法。
本发明针对现行的单一成分简单的含量测定方法,首次提出对参芎葡萄糖注射液同时进行多成分的含量测定,将参芎葡萄糖注射液中含量较高、色谱分离较好的丹参素、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A6种化学成分作为含量测定参数,使参芎葡萄糖注射液的含量测定方法更具整体性、特征性和稳定性,并且对仪器、色谱柱、检测器、检测波长、色谱流动相、柱温等进行了优化,通过多指标成分的定量控制,能够综合反映参芎葡萄糖注射液的内在质量,提升制剂的质量控制水平。
本发明所述的多成分含量测定方法是在同一色谱条件下,同时对参芎葡萄糖注射液中所含的丹参素、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A6种化学成分的高效液相色谱含量测定。
本发明所述的多成分含量测定方法由以下步骤组成:
一、色谱条件与系统适用性试验
仪器:超快速液相色谱系统(UFLC,岛津,包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Lcsolution工作站);
色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相:A为乙腈,B为0.05%H3PO4,按表1中的规定进行梯度洗脱;
流速:1mL/min;
柱温:40℃;
检测波长:220nm;
进样量:10μL。
表1流动相梯度洗脱表
二、对照品溶液的制备分别精密称取丹参素钠、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A适量,分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得质量浓度分别为1.056,7.649,1.084,1.020,1.046,1.036mg·mL-1的对照品储备液。分别精密量取上述6种对照品储备液8,6,2,1.2,1.2,1.2mL置同一个20mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,得混合对照品中间液。精密量取混合对照品中间液0.25,0.5,1,2,4,8mL分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得。
三、供试品溶液的制备精密量取本品10mL,加5%葡萄糖溶液稀释,定容至25mL,摇匀即得供试品溶液。
四、测定法按照本发明所述多成分含量测定方法下的色谱条件测定,即得。
本研究基于参芎葡萄糖注射液UPLC-Q-TOF质谱定性分析和组成该注射液复方的药味丹参的化学成分,最终确定了参芎葡萄糖注射液中6种主要化学成分作为质量控制的指标成分,建立了相应的多成分含量测定方法。
本发明所述的多成分含量测定研究方法是经过大量的筛选试验得到的最佳方案,以下实验研究为本发明的优选过程:
一、色谱条件与系统适用性试验
1、仪器与试药
超快速液相色谱系统(UFLC,岛津,包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Lcsolution工作站);AE2401/10万电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)。乙腈(德国MERCK公司)为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。丹参素钠(批号110855200508),盐酸川芎嗪(批号110817-200305),原儿茶醛(批号110810-200705)对照品购于中国药品生物制品检定所;迷迭香酸(批号MUST-10120901),丹酚酸B(批号MUST-11031401),丹酚酸A(批号MUST-10012901)对照品购于北京恒元启天化工技术研究院;参芎葡萄糖注射液(贵州景峰注射剂有限公司提供)。
2、色谱条件的选择
试验曾对甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.05%磷酸、乙腈-0.5%乙酸等不同配比流动相系统进行考察,经等度或梯度试验比较,结果表明,以乙腈-0.05%磷酸为流动相梯度洗脱分离效果较好,所检测的6个成分色谱峰既能达到基线分离,又缩短了分析时间。用二极管阵列检测器分别对6种成分进行全波长扫描得知,丹参素、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A的最大吸收波长分别为221,215,230,219,221,221nm,为兼顾各组分的检测信号强度和检测灵敏度,选择220nm作为检测波长。通过对仪器、流动相、检测波长、柱温等色谱条件进行优化考察的基础上,获得了能适用于多成分含量测定的色谱条件:
仪器:超快速液相色谱系统(UFLC,岛津,包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Lcsolution工作站);
色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相:A为乙腈,B为0.05%H3PO4,按表2中的规定进行梯度洗脱;
流速:1mL/min;
柱温:40℃;
检测波长:220nm;
进样量:10μL。
表2流动相梯度洗脱表
二、对照品溶液的制备:
分别精密称取丹参素钠、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A适量,分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得质量浓度分别为1.056,7.649,1.084,1.020,1.046,1.036mg·mL-1的对照品储备液。分别精密量取上述6种对照品储备液8,6,2,1.2,1.2,1.2mL置同一个20mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,得混合对照品中间液。精密量取混合对照品中间液0.25,0.5,1,2,4,8mL分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得。
三、供试品溶液的制备:
精密量取本品10mL,加5%葡萄糖溶液稀释,定容至25mL,摇匀即得供试品溶液。
四、标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品系列溶液,按拟定的色谱条件注入UFLC测定,以峰面积对进样质量进行线性回归,得各被测成分的回归方程、相关系数及线性范围,见表3。
表36个被测成分的线性关系
五、精密度试验
按本发明所述多成分含量测定方法下色谱条件,精密量取参芎葡萄糖注射液供试品溶液10μL连续进样5次,分别测定6种化合物,使峰面积积分并计算RSD,见表4。其中,A为丹参素钠,B为盐酸川芎嗪,C为原儿茶醛,D为迷迭香酸,E为丹酚酸B,F为丹酚酸A。由结果可知,本发明所述多成分含量测定方法的精密度良好。
表4精密度试验结果
六、重复性试验
取同一批号参芎葡萄糖注射液,照本发明所述多成分含量测定方法下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液6份,分别测定,计算含量和RSD,见表5。其中,A为丹参素钠,B为盐酸川芎嗪,C为原儿茶醛,D为迷迭香酸,E为丹酚酸B,F为丹酚酸A。由结果可知,本发明所述多成分含量测定方法的重复性良好。
表5重复性试验结果
七、稳定性试验
取同一参芎葡萄糖注射液供试品溶液,分别于0,2,4,6,12h进样测定,使峰面积积分并计算RSD,见表6。其中,A为丹参素钠,B为盐酸川芎嗪,C为原儿茶醛,D为迷迭香酸,E为丹酚酸B,F为丹酚酸A。由结果可知,本发明所述多成分含量测定方法的供试品溶液在12h内稳定。
表6稳定性试验结果
八、回收率试验
精密量取同一批号的参芎葡萄糖注射液5mL共6份,分别置25mL量瓶中,精密加入混合对照品溶液适量,按本发明所述多成分含量测定方法下供试品溶液的制备方法制备,按本发明所述多成分含量测定方法下优化后的色谱条件测定,计算回收率及RSD,见表7。其中,A为丹参素钠,B为盐酸川芎嗪,C为原儿茶醛,D为迷迭香酸,E为丹酚酸B,F为丹酚酸A。由结果可知,本发明所述多成分含量测定方法的回收率良好。
表7回收率试验结果
九、样品含量测定
取不同批次的参芎葡萄糖注射液,每个样品平行做2份,照本发明所述多成分含量测定方法下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,按本发明所述多成分含量测定方法下的色谱条件测定6种化学成分的含量,见表8。其中,A为丹参素钠,B为盐酸川芎嗪,C为原儿茶醛,D为迷迭香酸,E为丹酚酸B,F为丹酚酸A。
表8参芎葡萄糖注射液中6种化学成分的测定结果(n=2)mg·L-1
由结果可知,各批次参芎葡萄糖注射液中所含的6个被测成分的含量基本一致,说明不同批次间产品的质量一致性良好。5个批次样品中:丹参素钠的平均含量为209.004mg·L-1,盐酸川芎嗪的平均含量为1071.139mg·L-1,原儿茶醛的平均含量为21.454mg·L-1,迷迭香酸的平均含量为29.630mg·L-1,丹酚酸B的平均含量为35.299mg·L-1,丹酚酸A的平均含量为21.020mg·L-1
经综合评价,结合各系统适用性参数情况,并经方法学验证,该法精确度、重复性、稳定性、回收率等指标均良好,通过多指标成分的定量控制,能够综合反映制剂的内在质量,可用于参芎葡萄糖注射液的质量控制。
附图说明
图1:丹参素钠对照品溶液紫外光谱图。
图2:盐酸川芎嗪对照品溶液紫外光谱图。
图3:原儿茶醛对照品溶液紫外光谱图。
图4:迷迭香酸对照品溶液紫外光谱图。
图5:丹酚酸B对照品溶液紫外光谱图。
图6:丹酚酸A对照品溶液紫外光谱图。
图7:丹参素钠、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A对照品溶液UFLC色谱图(220nm)。色谱峰分别对应:A为丹参素钠,B为盐酸川芎嗪,C为原儿茶醛,D为迷迭香酸,E为丹酚酸B,F为丹酚酸A。
图8:供试品溶液UFLC色谱图(220nm)。色谱峰分别对应:A为丹参素钠,B为盐酸川芎嗪,C为原儿茶醛,D为迷迭香酸,E为丹酚酸B,F为丹酚酸A。
具体实施方式:
下面列举实施例进一步详细说明本发明,该实施例仅用于说明本发明而对本发明并没有限制。
实施例1:参芎葡萄糖注射液中所含的丹参素钠、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A6种化学成分的高效液相色谱含量测定
一、色谱条件与系统适用性试验
仪器:超快速液相色谱系统(UFLC,岛津,包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Lcsolution工作站);
色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);
流动相:A为乙腈,B为0.05%H3PO4,按表1中的规定进行梯度洗脱;
流速:1mL/min;
柱温:40℃;
检测波长:220nm;
进样量:10μL。
表1流动相梯度洗脱表
二、对照品溶液的制备分别精密称取丹参素钠、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A适量,分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得质量浓度分别为1.056,7.649,1.084,1.020,1.046,1.036mg·mL-1的对照品储备液。分别精密量取上述6种对照品储备液8,6,2,1.2,1.2,1.2mL置同一个20mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,得混合对照品中间液。精密量取混合对照品中间液0.25,0.5,1,2,4,8mL分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得。
三、供试品溶液的制备精密量取本品10mL,加5%葡萄糖溶液稀释,定容至25mL,摇匀即得供试品溶液。
四、测定法按照本发明所述多成分含量测定方法下色谱条件测定,即得。

Claims (1)

1.参芎葡萄糖注射液的多成分含量测定方法,其特征在于:所述多成分含量测定方法是在同一色谱条件下,同时对参芎葡萄糖注射液中所含的丹参素、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A6种化学成分进行液相色谱含量测定;
所述多成分含量测定方法按下述步骤进行:
(1)色谱条件:
色谱柱:Diamonsil C18色谱柱;
流动相:A为乙腈,B为0.05%H3PO4,按表1中的规定进行梯度洗脱;流速:1mL/min;
柱温:40℃;
检测波长:220nm;
进样量:10μL;
表1流动相梯度洗脱表
(2)对照品溶液的制备:分别精密称取丹参素钠、盐酸川芎嗪、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A适量,分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得质量浓度分别为1.056,7.649,1.084,1.020,1.046,1.036mg·mL-1的对照品储备液;分别精密量取上述6种对照品储备液8,6,2,1.2,1.2,1.2mL置同一个20mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,得混合对照品中间液;精密量取混合对照品中间液0.25,0.5,1,2,4,8mL分别置于6个10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得;
(3)供试品溶液的制备:精密量取参芎葡萄糖注射液10mL,加5%葡萄糖溶液稀释,定容至25mL,摇匀即得供试品溶液。
(4)测定法:按照步骤(1)所述色谱条件测定,即得。
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Denomination of invention: Method for determining the multi-component content of Shenxiong Glucose Injection

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Pledgee: Qingdao Qishun Investment Management Co.,Ltd.

Pledgor: GUIZHOU JINGFENG INJECTION Co.,Ltd.

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