CN102175778A

CN102175778A - 一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法

Info

Publication number: CN102175778A
Application number: CN2010105810384A
Authority: CN
Inventors: 申屠建中; 窦静
Original assignee: HANGZHOU GUGE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: HANGZHOU GUGE SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2010-12-03
Filing date: 2010-12-03
Publication date: 2011-09-07

Abstract

本发明公开了一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，该方法为对待测样品经过预处理后，在分析色谱柱分离，然后用质谱检测器进行检测。该方法样品取样少，前处理过程简单，分析周期短，检测灵敏度高，能同时测定多种抗抑郁药的血药浓度，适用面广，成本低，适合于临床常规血药浓度的监测。

Description

一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法

技术领域

本发明属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，尤其涉及一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法。

背景技术

抑郁症(depression)是一种常见的情感障碍性精神疾病，具有高发病率，高复发率、高致残率、高负担率的特征。

舍曲林(Sertraline)、西酞普兰(Citalopram)、氟西汀(Fluoxetine)、帕罗西汀(Paroxetine)、文拉法辛(Venlafaxine)是传统的一线抗抑郁治疗药物。由于这些药物在人体内的药代动力学个体差异较大、治疗窗窄，药物间相互作用对药动学的影响较大，药动学特性与抗抑郁的效果、药物不良反应的发生有密切的联系，因此开展对上述药物的治疗药物监测有临床意义。

目前我国抗抑郁药的药物浓度监测的方法主要为高效液相色谱法(HPLC)和免疫测定法(IM)。这类方法特异性相对较好，经济又方便。但是HPLC法的灵敏度对于治疗窗在纳克级的药物检测不能完全达到临床要求(如通常患者的舍曲林治疗浓度为10-50ng·ml^-1)，此外，HPLC法的特异性虽然优于免疫测定法，但是仅仅由保留时间作为物质的判断依据可靠性欠妥。且生物样本中干扰物较多，在保证高灵敏度、高分离度的条件下，并不能很好的进行抗抑郁药物浓度监测。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法。提供一种简便、快速、灵敏的测定多种抗抑郁药血药浓度的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，包括以下步骤：

(1)待测样品的预处理：

(a)取血浆待测样品，按照1∶2.5(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1％v/v甲酸)，涡旋30s，13000rpm离心5min，上清液取出。

(b)取尿液待测样品，经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液按照1∶3(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1％v/v甲酸)，涡旋30s，13000rpm离心5min，上清液取出。

(2)样品分离与分析：将步骤(1)预处理后得到的上清液注入快速液相色谱系统，在合适的液相条件下进行分离分析，最后进入三重四极质谱检测器，在合适的质谱条件下检测，最终通过色谱软件采集处理数据，计算样品中的药物浓度。

进一步地，所述合适的液相条件是：色谱柱Zorbax SB-C18(3.5μm，3.0×150mm)，流动相：甲醇(含0.1％v/v甲酸)∶水(含0.1％v/v甲酸)＝66∶34，流速0.4mL·min^-1，柱温25℃。所述合适的质谱条件是：舍曲林Sertraline m/z306.4→159.2(fragmentor 120，CE 30)，西酞普兰Escitalopram m/z 325.5→109.3(fragmentor 120，CE 30)，氟西汀Fluoxetine m/z 310.3→44.4(fragmentor 120，CE 10)，帕罗西汀Paroxetine m/z 330.3→192.3(fragmentor 120，CE 20)，文拉法辛Venlafaxine m/z 278.3→58.4(fragmentor 120，CE 20)，异丙嗪(内标)Promethazine m/z 285.3→86.3(fragmentor 120，CE 15)。

本发明的有益效果是，本发明同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法快速准确，灵敏可靠，分析成本低，适用于临床常规检测和药动学研究。在本发明方法测定条件下，人体内源性物质以及常用合并用药均不干扰测定。药物线性范围分别是舍曲林2.0～2000.0ng·mL^-1，西酞普兰0.5～500.0ng·mL^-1，氟西汀1.0～1000.0ng·mL^-1，帕罗西汀3.0～3000.0ng·mL^-1，文拉法辛0.4～4000.0ng·mL^-1，线性相关系数(r²)大于0.99，方法回收率大于80％，RSD小于15％。

附图说明

图1是空白血浆色谱图；

图2是空白血浆+标准品色谱图；

图3是提取离子后的空白血浆+标准品色谱图；其中，(A)为文拉法辛，(B)为异丙嗪(内标)，(C)为舍曲林，(D)为氟西汀，(E)为西酞普兰，(F)为帕罗西汀。

具体实施方式

本发明采用快速液相-三重四极质谱联用技术(LC-MS)的方法，保留了高效液相色谱法的优势，且利用质谱的高灵敏度、高特异性的特点，对联合用药引起的多类抗抑郁药复杂组分可同时监测，包括监测六类抗抑郁药物：三环类抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂、5-HT再摄取抑制剂、5-HT/NE再摄取抑制剂、NE/特异性5-HT受体拮抗剂、5-HT平衡抗抑郁剂等，不仅满足对单位药物的浓度监测，还可以满足同时测定多种药物及代谢产物的需求，方法灵敏，准确度高。

本发明同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，具体如下：

1待测样品的预处理：

(1)取血浆待测样品，按照1∶2.5(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1％v/v甲酸)，涡旋30s，13000rpm离心5min，上清液取出。

(2)取尿液待测样品，经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液按照1∶3(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1％v/v甲酸)，涡旋30s，13000rpm离心5min，上清液取出。

2样品分离与分析

将上述预处理后得到的上清液注入快速液相色谱系统(Agilent RPLC1200)，在合适的液相条件下进行分离分析，最后进入三重四极质谱检测器(6410Triple Quad LC/MS三重四极杆质谱仪)，在合适的质谱条件下检测，最终通过色谱软件Agilent MassHunter Workstation Software version B.01.04采集处理数据，计算样品中的药物浓度。该方法可以使样品中药物的检出灵敏度达到纳克级。

本发明可用于血浆样品、尿液样品中五种抗抑郁药的浓度测定。

血浆样品中五种抗抑郁药的浓度测定：取血浆待测样品按1∶2.5(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1％v/v甲酸)，涡旋，离心，取上清液进样，质谱检测器检测。上述测定方法中，加入的蛋白沉淀剂为乙腈(含0.1％v/v甲酸)。

尿液样品中五种抗抑郁药的浓度测定：取尿液待测样品，经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液按照1∶3(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1％v/v甲酸)，涡旋，离心，取上清液进样，质谱检测器检测。

上述测定方法中合适的液相条件是色谱柱Zorbax SB-C18(3.5μm，3.0×150mm)，流动相：甲醇(含0.1％v/v甲酸)∶水(含0.1％v/v甲酸)＝66∶34，流速0.4mL·min^-1，柱温25℃。

上述测定方法中合适的质谱条件是舍曲林Sertraline m/z 306.4→159.2(fragmentor 120，CE 30)，西酞普兰Escitalopram m/z 325.5→109.3(fragmentor120，CE 30)，氟西汀Fluoxetine m/z 310.3→44.4(fragmentor 120，CE 10)，帕罗西汀Paroxetine m/z 330.3→192.3(fragmentor 120，CE 20)，文拉法辛Venlafaxine m/z 278.3→58.4(fragmentor 120，CE 20)，异丙嗪(内标)Promethazinem/z 285.3→86.3(fragmentor 120，CE 15)。

下面根据附图和实施例详细描述本发明，本发明的目的和效果将变得更加明显。

实施例1：

色谱条件：

美国Agilent RPLC 1200高效液相色谱仪，包括在线脱气、二元泵、柱温箱、自动进样器、6410Triple Quad LC/MS/MS三重四极杆质谱仪和色谱工作站；色谱柱：Zorbax SB-C18(3.5μm，3.0×150mm)；流动相：甲醇(含0.1％甲酸)∶水(含0.1％甲酸)＝66∶34，流速0.4mL·min^-1，柱温25℃。

样品预处理：

取血浆样品200μL，精密加入336ng·mL^-1异丙嗪溶液(内标)20μL，涡旋混合10s，再精密加入600μL乙腈，涡旋混合30s，13000rpm高速离心5min，取上清液10μL进样。

线性实验：

分别精密称取舍曲林、西酞普兰、氟西汀、帕罗西汀、文拉法辛对照品适量，用流动相溶解，配成不同浓度的工作溶液，空白血浆稀释定容，制成含舍曲林2.031，4.062，20.31，101.55，203.1，507.75，1015.5，2031ng·mL^-1、西酞普兰0.642，1.284，6.42，32.1，64.2，160.5，321，642ng·mL^-1、氟西汀0.988，1.976，9.88，49.4，98.8，247，494，988ng·mL^-1、帕罗西汀3.274，6.548，32.74，163.7，327.4，818.5，1637，3274ng·mL^-1、文拉法辛0.412，0.824，4.12，20.6，41.2，103，206，412ng·mL^-1的系列浓度标准血样。各取含药物血浆200μL按“样品预处理”方法操作。以待测组分与内标峰面积比与待测组分的浓度作加权线性回归，表1为回归方程和线性相关。

表1：回归方程和线性相关准确度和精密度

分别精密称取舍曲林、西酞普兰、氟西汀、帕罗西汀、文拉法辛对照品适量，用流动相溶解，配成不同浓度的工作溶液，空白血浆稀释定容，制成含舍曲林2.031，507.75，2031ng·mL^-1、西酞普兰0.642，160.5，642ng·mL^-1、氟西汀0.988，247，988ng·mL^-1、帕罗西汀3.274，818.5，3274ng·mL^-1、文拉法辛0.412，103，412ng·mL^-1的系列浓度标准血样。各取含药物血浆200μL按“样品预处理”方法操作，考察批内与批间精密度和准确度。根据线性回归方程计算其实测浓度，以流动相代替空白血浆配置上述各浓度样品测得的浓度为绝对浓度，计算每种浓度的实测平均值及相对标准偏差(RSD)，(C_实测/C_绝对)×100％即为回收率。表2为批内精密度，表3为批间精密度，表4为回收率实验结果。

表2：批内精密度

表3：批间精密度

表4：回收率

小结

由上述表格可见，此分析方法专属性好，人体内源性物质以及常用合并用药均不干扰测定。药物线性范围分别是舍曲林2.0～2000.0ng·mL^-1，西酞普兰0.5～500.0ng·mL^-1，氟西汀1.0～1000.0ng·mL^-1，帕罗西汀3.0～3000.0ng·mL^-1，文拉法辛0.4～4000.0ng·mL^-1，线性相关系数(r2)大于0.99，方法回收率大于80％，RSD小于15％。批内批间精密度良好。

Claims

1.一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)待测样品的预处理：

2.根据权利要求1所述同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，其特征在于，所述合适的液相条件是：色谱柱Zorbax SB-C18(3.5μm，3.0×150mm)，流动相：甲醇(含0.1％v/v甲酸)∶水(含0.1％v/v甲酸)＝66∶34，流速0.4mL·min^-1，柱温25℃。

3.根据权利要求1所述同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，其特征在于，所述合适的质谱条件是：舍曲林Sertraline m/z 306.4→159.2(fragmentor 120，CE 30)，西酞普兰Escitalopram m/z 325.5→109.3(fragmentor 120，CE 30)，氟西汀Fluoxetine m/z 310.3→44.4(fragmentor 120，CE 10)，帕罗西汀Paroxetinem/z 330.3→192.3(fragmentor 120，CE 20)，文拉法辛Venlafaxine m/z 278.3→58.4(fragmentor 120，CE 20)，异丙嗪(内标)Promethazine m/z 285.3→86.3(fragmentor 120，CE 15)。