CN114127554A - 通过质谱法测定抗抑郁药 - Google Patents

通过质谱法测定抗抑郁药 Download PDF

Info

Publication number
CN114127554A
CN114127554A CN202080051203.7A CN202080051203A CN114127554A CN 114127554 A CN114127554 A CN 114127554A CN 202080051203 A CN202080051203 A CN 202080051203A CN 114127554 A CN114127554 A CN 114127554A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antidepressant
sample
mass spectrometry
antidepressants
ions
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080051203.7A
Other languages
English (en)
Inventor
A·德玛缇罗斯安
E·沙博尔
K·托马森
S·瑞泽
A·沙阿
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Quest Diagnostics Investments LLC
Original Assignee
Quest Diagnostics Investments LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Quest Diagnostics Investments LLC filed Critical Quest Diagnostics Investments LLC
Publication of CN114127554A publication Critical patent/CN114127554A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/493—Physical analysis of biological material of liquid biological material urine
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01J—ELECTRIC DISCHARGE TUBES OR DISCHARGE LAMPS
    • H01J49/00—Particle spectrometers or separator tubes
    • H01J49/004—Combinations of spectrometers, tandem spectrometers, e.g. MS/MS, MSn
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/045—Standards internal
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/08—Preparation using an enricher
    • G01N2030/085—Preparation using an enricher using absorbing precolumn
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N2030/626—Detectors specially adapted therefor calibration, baseline
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8804—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 automated systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/78—Detectors specially adapted therefor using more than one detector
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood
    • G01N33/492—Determining multiple analytes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

描述了用于检测或确定样品中抗抑郁药和/或抗抑郁药代谢物的量的方法。更具体地，描述了用于检测和定量样品中的抗抑郁药和/或抗抑郁药代谢物的质谱法。

Description

通过质谱法测定抗抑郁药
相关专利申请的交叉引用
本申请要求于2019年5月31日提交的美国临时申请号62/855,863的权益，其全部内容通过引用并入本文。
背景技术
基线测试有助于临床医生在治疗前确定患者使用或不使用一种或多种抗抑郁药。监测服用抗抑郁药的患者以确保依从性并避免意外使用多种药物至关重要。一些抗抑郁药，比如选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)，可能具有有害的副作用，不应与同类药物混合使用。需要对抗抑郁药和代谢物进行精确测试。
发明内容
一方面，本文提供了通过质谱法检测和定量抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的方法。
本文提供了通过质谱法检测样品中抗抑郁药和/或抗抑郁药代谢物的存在或量的方法。该方法包括在适合产生一种或多种可通过质谱法检测的离子的条件下使样品电离；通过质谱法测定一种或多种离子的量；并且使用一种或多种离子的量来确定样品中抗抑郁药和/或抗抑郁药代谢物的存在或量。
在一些实施方式中，质谱法包括串联质谱法。在这些实施方式中，该方法包括：a)在适合产生前体离子的条件下电离样品；b)使前体离子碎片化以产生一种或多种碎片离子；c)确定在步骤a)和b)中产生的一种或多种离子的量；和d)使用在步骤c)中确定的一种或多种离子的量来确定样品中抗抑郁药和代谢物的存在或量。
在一些实施方式中，本文提供用于检测或确定一种或多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量的方法，该抗抑郁药和抗抑郁药代谢物包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、去甲肾上腺素和多巴胺再摄取抑制剂、三环抗抑郁药、镇静剂和/或抗抑郁药代谢物代谢物。
在一些实施方式中，本文提供用于检测或确定一种或多种选自以下的抗抑郁药或抗抑郁药代谢物：氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、西酞普兰、艾司西酞普兰、氟伏沙明、维拉佐酮、度洛西汀、文拉法辛、去甲文拉法辛、羟基安非他酮、丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多塞平、曲米帕明、地昔帕明、普罗替林、阿莫沙平、氯丙咪嗪、麦普替林、曲唑酮、米氮平、沃替西汀、去甲西酞普兰、去甲氯丙咪嗪、去甲多塞平、去甲氟西汀、去甲氟伏沙明(norfluvoxamine)、去甲舍曲林、和1,3-氯苯基哌嗪。
在一些实施方式中，本文提供用于检测或确定一种或多种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、西酞普兰、艾司西酞普兰、氟伏沙明、维拉佐酮)；5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(度洛西汀、文拉法辛、去甲文拉法辛)；去甲肾上腺素和多巴胺再摄取抑制剂(羟基安非他酮)；三环类抗抑郁药(丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多塞平、曲米帕明、地昔帕明、普罗替林、阿莫沙平、氯丙咪嗪、麦普替林)的量的方法。该试验中使用的其他抗抑郁药也可作为镇静剂，并且为曲唑酮、米氮平和沃替西汀。测试的代谢物是去甲基西酞普兰，去甲氯丙咪嗪、去甲基多塞平、去甲氟西汀、去甲氟伏沙明、去甲舍曲林和1,3-氯苯基哌嗪。
在一些实施方式中，本文提供用于同时检测或确定10种或更多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量的方法。
在一些实施方式中，本文提供用于同时检测或确定20种或更多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量的方法。
在一些实施方式中，本文提供用于同时检测或确定30种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量的方法。
在一些实施方式中，本文提供的方法包括添加一种或多种内标。在一些实施方式中，一种或多种内标包括氘代内标。在一些实施方式中，氘代内标选自1,3-氯苯基哌嗪-D8、羟基安非他酮-D6、去甲基-文拉法辛-D6、去甲基西酞普兰-D3、曲米帕明-D3、阿米替林-D3、去甲替林-D3、帕罗西汀-D6、普罗替林-D3、西酞普兰-D6、文拉法辛-D6、丙咪嗪-D3、曲唑酮-D6、维拉佐酮-D4和沃替西汀-D8。
在一些实施方式中，样品包括生物样品。在一个优选的实施方式中，样品是尿液。在一些实施方式中，样品是血浆或血清。在一些实施方式中，样品是血液。
在一些实施方式中，样品在电离之前经受液相色谱。在一些实施方式中，液相色谱包括高效液相色谱。
在一些实施方式中，该方法能够检测约4ng/mL至约5000ng/mL范围内的水平的抗抑郁药和抗抑郁药代谢物，包括端值。
在一些实施方式中，该方法能够检测约25ng/mL至约5000ng/mL范围内的水平的抗抑郁药和抗抑郁药代谢物，包括端值。
在一些实施方式中，质谱法是串联质谱法。在一些实施方式中，串联质谱法通过选择的反应监测、多反应监测、前体离子扫描或产物离子扫描进行。
在优选的实施方式中，串联质谱法通过选择的反应监测进行。
在一些实施方式中，本文提供确定抗抑郁药和抗抑郁药代谢物，其包括检测包含以下质荷比(m/z)的离子。
Figure BDA0003470128660000021
Figure BDA0003470128660000031
Figure BDA0003470128660000041
在一些实施方式中，本文所述的方法能够检测4ng/mL至5000ng/mL范围内的水平的抗抑郁药和抗抑郁药代谢物，包括端值。在一些实施方式中，本文所述的方法能够检测25ng/mL至5000ng/mL范围内的水平的抗抑郁药和抗抑郁药代谢物，包括端值。
在一些实施方式中，本文所述的方法能够在10ng/mL的下限对抗抑郁药和抗抑郁药代谢物进行定量。在一些实施方式中，本文描述的方法能够在50ng/mL的下限对抗抑郁药和抗抑郁药代谢物进行定量。
在一些实施方式中，样品在电离之前经过萃取柱，比如固相萃取(SPE)柱。在一些相关实施方式中，SPE和质谱分析是通过在线处理进行的。
在一些实施方式中，样品在电离之前经过分析柱，比如高效液相色谱(HPLC)柱。在一些相关的实施方式中，HPLC和质谱是通过在线处理进行的。
在一些实施方式中，该方法可用于确定生物样品(比如血浆或血清)中抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的存在或量。在一些相关实施方式中，通过一个或多个步骤处理生物样品以生成经处理的样品，然后可对其进行质谱分析。在一些实施方式中，一个或多个处理步骤包括一个或多个纯化步骤，比如蛋白质沉淀、过滤、液-液萃取、固相萃取、液体层析、任何免疫纯化过程等，以及它们的任何组合。
在本文公开的方法的某些优选实施方式中，质谱法是在正离子模式下进行。可选地，质谱法在负离子模式下进行。在本发明的实施方式中可以使用各种电离源，包括例如大气压化学电离(APCI)或电喷雾电离(ESI)。在某些实施方式中，使用正离子模式测量抗抑郁药和抗抑郁药代谢物。
在优选的实施方式中，在样品中提供可单独检测的内标，其量也在样品中确定。在这些实施方式中，样品中存在的目标分析物和内标二者的全部或部分被电离以产生在质谱仪中可检测的多种离子，并且通过质谱法检测各自产生的一种或多种离子。在这些实施方式中，由目标分析物产生的离子的存在或量可以与样品中目标分析物的量的存在有关。
在其他实施方式中，样品中抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量可以通过与一种或多种外部参考标准进行比较来确定。示例性的外部参考标准包括掺入抗抑郁药和抗抑郁药代谢物或其同位素标记的变体的空白血浆或血清。
如本文所用，除非另有说明，单数形式“一(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”包括复数形式。因此，例如，提及“一种蛋白质”包括多个蛋白质分子。
如本文所用，术语“纯化(purification)”或“纯化(purifying)”并非指从样品中除去目标分析物以外的所有材料。相反，纯化是指相对于样品中可能干扰目标分析物检测的其他组分，富集一种或多种目标分析物的量的步骤。通过各种方式纯化样品可以允许相对减少一种或多种干扰物质，例如，一种或多种可能干扰或可能不干扰通过质谱法检测选定母离子或子离子的物质。相对减少，如该术语使用时，不需要通过纯化完全去除与待纯化材料中的目标分析物一起存在的任何物质。
如本文所用，术语“免疫纯化(immunopurification)”或“免疫纯化(immunopurify)”是指利用抗体(包括多克隆或单克隆抗体)来富集一种或多种目标分析物的纯化步骤。可以使用本领域公知的任何免疫纯化方法进行免疫纯化。通常免疫纯化步骤利用结合、缀合或以其他方式附接到固体承载体(例如柱、孔、管、凝胶、胶囊、颗粒等)的抗体。如本文所用的免疫纯化包括但不限于本领域中通常称为免疫沉淀的步骤，以及本领域中通常称为亲和层析的步骤。
如本文所用，术语“免疫颗粒”是指具有结合、缀合或以其他方式附接到其表面(颗粒上和/或颗粒中)的抗体的胶囊、珠粒、凝胶颗粒等。在利用免疫纯化的某些实施方式中，免疫颗粒包括琼脂糖凝胶或琼脂糖珠粒。在利用免疫纯化的替代实施方式中，免疫颗粒包括玻璃、塑料或二氧化硅珠粒，或二氧化硅凝胶。
如本文所用，术语“样品”是指可能包括目标分析物的任何样品。如本文所用，术语“体液”是指可从个体的身体分离的任何流体。例如，“体液”可以包括血液、血浆、血清、胆汁、唾液、尿液、眼泪、汗液等。在一些实施方式中，样品包括体液样品；优选地血浆或血清。
如本文所用，术语“固相萃取”或“SPE”是指由于溶解或悬浮在溶液(即，流动相)中的各组分对溶液通过或围绕其的固体(即，固相)的亲和性而将化学混合物分离成各组分的步骤。如本文所用，SPE与免疫纯化的不同之处在于流动相中的组分对固相的亲和力是化学或物理相互作用的结果，而不是免疫亲和力的结果。在一些情况下，当流动相穿过或围绕固相时，流动相的不期望组分可被固相保留，导致流动相中分析物的纯化。在其他情况下，分析物可被固相保留，从而允许流动相的不期望组分通过或围绕固相。在这些情况下，然后使用第二个流动相从固相中洗脱保留的分析物以进行进一步处理或分析。SPE，包括TFLC，可以通过单一或混合模式机制运行。混合模式机制利用同一色谱柱中的离子交换和疏水保留；例如，混合模式SPE柱的固相可表现出强阴离子交换和疏水保留；或者可以是表现出强阳离子交换和疏水保留的色谱柱。
如本文所用，术语“色谱法”是指其中由液体或气体携带的化学混合物在围绕固定相或固相流动或流过其时由于化学实体的不同分布而使该化学混合物分离成各组分的步骤。
如本文所用，术语“液相色谱”或“LC”是指流体溶液的一种或多种组分在流体均匀地渗透通过细碎物质柱或通过毛细管通道时选择性延迟的过程。当该流体相对于固定相(一种或多种)移动时，延迟是由混合物的组分在一种或多种固定相和主体流体(即，流动相)之间的分布引起的。“液相色谱”的实例包括反相液相色谱(RPLC)、高效液相色谱(HPLC)和湍流液相色谱(TFLC)(有时称为高湍流液相色谱(HTLC)或高通量液相色谱)。
如本文所用，术语“高效液相色谱”或“HPLC”(有时称为“高压液相色谱”)是指通过迫使流动相在压力下通过固定相(通常是密集填充柱)来增加分离度的液相色谱。
如本文所用，术语“湍流液相色谱”或“TFLC”(有时称为高湍流液相色谱或高通量液相色谱)是指利用待测定物通过柱填料的湍流作为进行分离的基础的色谱形式。TFLC已应用于在通过质谱法分析之前制备含有两种未命名药物的样品。参见，例如，Zimmer etal.,JChromatogr A 854:23-35(1999)；也参见美国专利号5,968,367、5,919,368、5,795,469和5,772,874，它们进一步解释了TFLC。本领域普通技术人员理解“湍流”。当流体缓慢而平稳地流动时，这种流动称为“层流”。例如，以低流速移动通过HPLC柱的流体是层流的。在层流中，流体颗粒的运动是有序的，其中颗粒通常沿直线移动。在更快的速度下，水的惯性克服了流体摩擦力并产生湍流。不与不规则边界接触的流体“超过”因摩擦减慢或因凹凸不平的表面偏转的流体。当流体湍流流动时，它以涡流和旋涡(或漩涡)的形式流动，其比层流时具有更多的“阻力”。许多参考资料可用于帮助确定流体流动是层流还是湍流(例如，Turbulent Flow Analysis:Measurement and Prediction,P.S.Bernard&J.M.Wallace,John Wiley&Sons,Inc.,(2000)；An Introduction to Turbulent Flow,Jean Mathieu&Julian Scott,Cambridge University Press(2001))。
如本文所用，术语“气相色谱”或“GC”是指其中将样品混合物蒸发并注入移动通过含有由液体或颗粒物质组成的固定相的柱的载气流(如氮气或氦气)并根据化合物对固定相的亲和力分离成其组分化合物的色谱法。
如本文所用，术语“大颗粒柱”或“萃取柱”是指含有大于约50μm的平均粒径的色谱柱。如在该上下文中所用，术语“约”是指±10％。
如本文所用，术语“分析柱”是指具有足够的色谱板以实现从柱中洗脱的样品中的材料的分离足以允许确定分析物的存在或量的色谱柱。这种柱通常与“提取柱”不同，“提取柱”的一般目的是从非保留材料中分离或提取保留材料，以获得纯化样品以供进一步分析。如在该上下文中所使用，术语“约”是指±10％。在优选的实施方式中，分析柱包含直径约5μm的颗粒。
如本文所用，例如在“在线自动化方式”或“在线提取”中使用的术语“在线(on-line)”和“在线(inline)”是指无需操作员干预而进行的步骤。相反，本文使用的术语“离线”是指需要操作员手动干预的步骤。因此，如果对样品进行沉淀，然后将上清液手动加载到自动进样器中，则沉淀和加载步骤与后续步骤离线。在方法的各种实施方式中，一个或多个步骤可以在线自动化方式进行。
如本文所用，术语“质谱法”或“MS”是指通过化合物的质量来鉴定化合物的分析技术。MS是指根据离子的质荷比或“m/z”来过滤、检测和测量离子的方法。MS技术通常包括(1)电离化合物以形成带电荷化合物；(2)检测带电荷化合物的分子量并计算质荷比。可以通过任何合适的方式对化合物进行电离和检测。“质谱仪”通常包括离子发生器和离子检测器。一般来说，一个或多个目标分子被电离，随后离子被引入质谱仪，在质谱仪中，由于磁场和电场的结合，离子在空间中遵循一个取决于质量(“m”)和电荷(“z”)的路径。参见，例如，美国专利号6,204,500，其名称为“Mass spectrometry From Surfaces”；6,107,623，其名称为“Methods and Apparatus for Tandem Mass spectrometry”；6,268,144，其名称为“DNADiagnostics Based On Mass spectrometry”；6,124,137，其名称为“Surface-EnhancedPhotolabile Attachment And Release For Desorption And Detection Of Analytes”；Wright et al.,Prostate Cancer and Prostatic Diseases 1999,2:264-76；以及Merchant和Weinberger,Electrophoresis2000,21:1164-67。
如本文所用，术语“以负离子模式运行”是指产生和检测负离子的那些质谱法。如本文所用，术语“以正离子模式运行”是指产生和检测正离子的那些质谱法。
如本文所用，术语“电离(ionization)”或“电离(ionizing)”是指产生净电荷等于一个或多个电子单位的分析物离子的过程。负离子是具有一个或多个电子单位的净负电荷的那些离子，而正离子是具有一个或多个电子单位的净正电荷的那些离子。
如本文所用，术语“电子电离”或“E1”是指气相或蒸气相中的目标分析物与电子流相互作用的方法。电子与分析物的撞击产生分析物离子，然后可将其用于质谱技术。
如本文所用，术语“化学电离”或“Cl”是指其中反应气(例如，氨)受到电子撞击，并且分析物离子通过反应气离子和分析物分子的相互作用而形成的方法。
如本文所用，术语“快速原子轰击”或“FAB”是指其中一束高能原子(通常为Xe或Ar)撞击非挥发性样品，解吸并电离样品中含有的分子的方法。测试样品被溶解在粘性液体基质中，比如甘油、硫代甘油、间硝基苯甲醇、18-冠-6冠醚、2-硝基苯基辛基醚、环丁砜、二乙醇胺和三乙醇胺。为化合物或样品选择合适的基质是一个经验过程。
如本文所用，术语“基质辅助激光解吸电离”或“MALDI”是指其中非挥发性样品暴露于激光照射的方法，其通过各种电离途径解吸和电离样品中的分析物，包括光-电离、质子化、去质子化和簇衰变。对于MALDI，样品与能量吸收基质混合，这有助于分析物分子的解吸。
如本文所用，术语“表面增强激光解吸电离”或“SELDI”指其中将非挥发性样品暴露于激光照射的另一种方法，其通过各种电离途径，包括光电离、质子化、去质子化和簇衰变，使样品中的分析物解吸和电离。对于SELDI，样品通常结合到优先保留一种或多种目标分析物的表面。与MALDI一样，该过程也可以采用能量吸收材料来促进电离。
如本文所用，术语“电喷雾电离”或“ESI”是指其中溶液沿毛细管的短长度通过的方法，其中在毛细管的末端施加高正或负电势。到达管末端的溶液被蒸发(雾化)成溶剂蒸气中非常小的溶液液滴的射流或喷雾。这种雾滴流过蒸发室。随着液滴变小，表面电荷密度增加，直到相同电荷之间的自然排斥导致离子以及中性分子被释放之时。
如本文所用，术语“大气压化学电离”或“APCI”是指类似于ESI的质谱法；然而，APCI通过在大气压下等离子体内发生的离子-分子反应产生离子。等离子体由喷雾毛细管和反电极之间的放电维持。然后通常使用一组差分泵送分离器站(skimmer stage)将离子提取到质量分析器中。干燥且预热的N2气体的逆流可用于改善溶剂的去除。在分析极性较小的物质时，APCI中的气相电离比ESI可以更有效。
如本文所用，术语“大气压光电离”或“APPI”是指其中分子M光电离的机制是光子吸收和电子发射以形成分子离子M+的质谱法形式。因为光子能量通常刚好高于电离电位，所以分子离子不太容易解离。在许多情况下，可以在不需要色谱的情况下分析样品，从而节省大量时间和费用。在水蒸气或质子溶剂存在下，分子离子可以提取H以形成MH+。如果M具有高质子亲和力，则往往会发生这种情况。这不会影响定量精确度，因为M+和MH+的总和是恒定的。质子溶剂中的药物化合物通常被观察为MH+，而非极性化合物比如萘或睾酮通常形成M+。参见，例如，Robb et al.,Anal.Chem.2000,72(15):3653-3659。
如本文所用，术语“电感耦合等离子体”或“ICP”是指其中样品在足够高的温度下与部分电离的气体相互作用，从而使大多数元素原子化和电离的方法。
如本文所用，术语“场解吸”是指其中将非挥发性测试样品置于电离表面上，并使用强电场产生分析物离子的方法。
如本文所用，术语“解吸”是指从表面去除分析物和/或使分析物进入气相。激光解吸热解吸是其中含有分析物的样品通过激光脉冲热解吸到气相中的技术。激光击中带有金属底座的特制96孔板的背面。激光脉冲加热该底座，并且热量使样品转变成气相。然后将气相样品被吸入质谱仪。
如本文所用，术语“选择性离子监测”是用于质谱仪的检测模式，其中仅检测相对窄质量范围内的离子，通常约一个质量单位。
如本文所用，“多反应模式”有时称为“选择反应监测”，是一种用于质谱仪的检测模式，其中选择性地检测前体离子和一种或多种碎片离子。
如本文所用，术语“量化下限”、“定量下限”或“LLOQ”是指测量变得具有定量意义的点。该LOQ下的分析物响应是可识别的、离散的且可重现的，其相对标准偏差(RSD％)小于20％，且精确度为85％至115％。
如本文所用，术语“检测限”或“LOD”是测量值大于与其相关联的不确定度的点。LOD是某个值超出与其测量相关的不确定度的点，定义为零浓度下平均值RSD的三倍。
如本文所用，体液样品中分析物的“量”通常是指反映样品体积中可检测的分析物质量的绝对值。然而，量还考虑与另一分析物量相比的相对量。例如，样品中分析物的量可以是大于样品中正常存在的分析物的对照或正常水平的量。
涉及不包括离子质量的测量的定量测量的本文所用的术语“约”是指指示值加上或减去10％。质谱仪在确定给定分析物的质量方面可能略有不同。在离子质量或离子的质荷比的上下文中，术语“约”是指+/-0.50原子质量单位。
上述的发明内容是非限制性的，并且本发明的其他特征和优点将从本发明的以下详细描述和权利要求中显而易见。
附图说明
图1显示了所有分析物和代谢物的LC-MS/MS曲线。
图2显示了(A)阿米替林、(B)麦普替林和(C)文拉法辛(分析物：左图，内标(IS)：右图)的基线分离实例。
图3显示了西酞普兰与另一个实验相比的精确度。显示没有大于±20％值的偏差。
图4显示了代谢物去甲基西酞普兰与另一个实验相比的精确度。显示没有大于±20％值的偏差。
图5显示了分离的环苯扎林干扰物。该图显示了100×下5ng/mL马普替林+环苯扎林。
图6显示了去甲基文拉法辛vs.曲马多的质谱差异。
图7显示了分离的曲马多干扰物。该图显示了100×下5ng/mL去甲基文拉法辛+曲马多。
图8显示了阿米替林、麦普替林和文拉法辛的基线分离。
图9显示了去甲替林、普罗替林、去甲文拉法辛基线分离。
图10显示了去甲多塞平和米氮平基线分离。
图11显示了通过不同转变识别的地昔帕明vs米氮平。
图12显示了在米氮平阳性的患者中对于地昔帕明，离子比和/或相对保留时间(RRT)将失败。
具体实施方式
在某些实施方式中，可以使用本文所述的抗抑郁药组，其中对有此类药物使用和/或滥用历史/风险的患者进行依从性监测。在开出此类药物之前，基线测试会提醒提供者注意多药药物冲突的可能性。依从性监测要求为这些患者群体提供处方药并且没有非处方药。
某些大脑化学物质、神经递质与抑郁症有关，更具体地说是5-羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺。大多数抗抑郁药通过影响这些神经递质来治疗抑郁症。不同类型/类别的抗抑郁药以不同方式影响这些神经递质。这些类型包括：SSRI、SNRI、NDRI、三环、非典型、MAOI和其他(见下文)。
选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)。医生通常从开出SSRI处方开始。与其他类型的抗抑郁药相比，这些药物更安全，并且通常引起更少的麻烦的副作用。SSRI包括氟西汀(Prozac、Selfemra)、帕罗西汀(Paxil、Pexeva)、舍曲林(Zoloft)、西酞普兰(Celexa)、艾司西酞普兰(Lexapro)、氟伏沙明(Faverin、Fevarin、Floxyfral、Dumyrox、Luvox)、维拉唑酮(Viibryd)。
5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)——度洛西汀(Cymbalta)、文拉法辛(Effexor XR)、去甲基文拉法辛(文拉法辛主要代谢物的合成形式，O-去甲基文拉法辛；Pristiq、Khedezla)和左旋米那普仑(Fetzima)。SNRI在提高5-羟色胺和去甲肾上腺素水平方面具有独特的双重作用；因此，SNRI与抑郁症的不止一个原因作斗争。
去甲肾上腺素和多巴胺再摄取抑制剂(NDRI)。安非他酮(Wellbutrin、Aplenzin、Forfivo XL)属于这一类。它是少数不经常与性副作用相关的抗抑郁药之一。
三环类抗抑郁药(TCA)往往比新抗抑郁药引起更多副作用。三环类抗抑郁药通常不会被开具，除非患者首先尝试了SSRI而没有改善。TCA包括丙咪嗪(Tofranil)、去甲替林(Pamelor)、阿米替林(Elavil、Endep、Lentizol、Levate、Saroten、Tryptanol、Tryptizol)、多塞平(Adapin、Curatin、Silenor、Sinequan)、曲米帕明(Surmontil)、地昔帕明(Norpramin)、普罗替林(Vivactil)、阿莫沙平(Asendin)、氯丙咪嗪(Anafranil)和麦普替林(Ludiomil)。
非典型抗抑郁药。这些药物并不完全适合任何其他抗抑郁药类别。它们包括曲唑酮(Oleptro)、米氮平(Remeron)和沃替西汀(Brintellix)。这些是镇静剂，并且通常在晚上服用。
该测定不包括单胺氧化酶抑制剂(MAOI)。这些药物不能与SSRI联合使用。常见的MAOI包括反苯环丙胺(Parnate)、苯乙肼(Nardil)和异卡波肼(Marplan)。
描述了用于测量样品中分析物的量的方法。更具体地，描述了用于检测和/或量化生物样品(比如人血浆或血清)中的分析物的质谱方法。该方法可以利用液相色谱法，然后是串联质谱法来定量样品中的分析物。
用于本发明方法的合适的测试样品包括可包含目标分析物的任何测试样品。在一些优选的实施方式中，样品是生物样品；即，从任何生物来源，比如动物、细胞培养物、器官培养物等获得的样品。在某些优选的实施方式中，样品获自哺乳动物，比如狗、猫、马等。特别优选的哺乳动物是灵长类动物，最优选男性或女性人类。优选的样品包括体液，比如尿液、血液、血浆、血清、唾液、脑脊液或组织样品；优选尿液。这种样品可以，例如，从患者获得；即，活着的人，男性或女性，其为了疾病或病症的诊断、预后或治疗而出现在临床环境中。在一些实施方式中，优选的样品可以从具有生育潜力的女性人类获得。在样品包含生物样品的实施方式中，当样品从生物来源获得时，该方法可用于确定样品中来氟米特代谢物的量(即，样品中的内源性来氟米特代谢物的量)。
本发明还考虑用于抗抑郁药定量测定的试剂盒。用于抗抑郁药定量测定的试剂盒可包括包含本文提供的组合物的试剂盒。例如，试剂盒可以包括包装材料和测量量的同位素标记的内标，其量足以用于至少一种测定。通常，试剂盒还将包括使用包装的试剂用于抗抑郁药定量测定的以有形形式(例如，包含在纸或电子介质上)记录的说明书。
用于本发明实施方式的校准和QC池优选地使用与预期样品基质相似的基质制备，前提是分析物基本上不存在。
质谱分析的样品制备
在为质谱分析做准备时，可以通过本领域已知的各种方法，包括例如液相色谱、过滤、离心、薄层色谱法(TLC)、电泳(包括毛细管电泳)、亲和分离(包括免疫亲和分离)、提取法(包括乙酸乙酯或甲醇提取)，以及使用离液剂或上述的任何组合等，相对于样品中的一种或多种其他组分(例如，蛋白质)富集分析物。
蛋白质沉淀是制备测试样品的一种方法，尤其是生物测试样品，比如血清或血浆。蛋白质纯化法是本领域公知的。例如，Polson et al.,Journal of Chromatography B2003,785:263-275描述了适用于本发明方法的蛋白质沉淀技术。蛋白质沉淀可用于从样品中去除大部分蛋白质，将分析物留在上清液中。可以将样品离心以将液体上清液与沉淀的蛋白质分离；可选地，可以过滤样品以去除沉淀的蛋白质。然后所得上清液或滤液可直接用于质谱分析；或替代地，用于其他纯化方法，比如液相色谱法和随后的质谱分析。在某些实施方式中，使用蛋白质沉淀，比如，例如，乙腈蛋白质沉淀，可以避免在质谱或高效液相色谱(HPLC)且质谱之前对TFLC或其他在线提取的需要。
另一种可在质谱分析之前使用的样品纯化法是液相色谱法(LC)。某些液相色谱法，包括高效液相色谱(HPLC)，依赖于相对缓慢的层流技术。传统的HPLC分析依赖于柱填料，其中样品通过柱的层流是从样品中分离目标分析物的基础。技术人员将理解，在这种柱中的分离是分配过程并且可选择LC，包括适用于分析物的HPLC、仪器和柱。色谱柱通常包括介质(即，填充材料)以促进化学部分的分离(即，分馏)。介质可包括微小颗粒。颗粒通常包括与各种化学部分相互作用以促进化学部分分离的键合表面。一种合适的键合表面是疏水键合表面，比如烷基键合、氰基键合或联苯键合表面。烷基键合的表面可以包括C-4、C-8、C-12或C-18键合的烷基。在优选的实施方式中，柱是联苯柱。色谱柱包括用于接收样品的入口端口和用于排放包括分馏样品的流出物的出口端口。样品可以直接供应到入口端口，或来自SPE柱，比如在线萃取柱或TFLC柱。在一些实施方式中，可在HPLC柱之前使用在线保护柱以在样品到达HPLC柱之前去除样品中的微粒和磷脂。在一些实施例中，保护柱可以是联苯保护柱。
在一个实施方式中，样品可以在入口端口处施加到LC柱，用溶剂或溶剂混合物洗脱，并在出口端口处排放。可以选择不同的溶剂模式来洗脱目标分析物(一种或多种)。例如，液体色谱可以使用梯度模式、等度模式或多型(即，混合)模式进行。在色谱期间，材料的分离受比如洗脱液(也称为“流动相”)的选择、洗脱模式、梯度条件、温度等变量影响。
在某些实施方式中，可以通过在目标分析物被柱填充材料可逆地保留而一种或多种其他材料不被保留的条件下将样品施加到柱来纯化分析物。在这些实施方式中，可以采用第一流动相条件，其中目标分析物被柱保留，并且一旦非保留材料被洗涤通过，随后可以采用第二流动相条件从柱中去除保留材料。可选地，可以通过在其中目标分析物与一种或多种其他材料相比以不同的速率洗脱的流动相条件下将样品施加到柱来纯化分析物。这种步骤可以相对于样品的一种或多种其他组分富集一种或多种目标分析物的量。
在一个优选实施方式中，HPLC用联苯柱色谱系统进行。在某些优选实施方式中，使用联苯分析柱(例如，来自RestekInc.的Pinnacle DB联苯分析柱(5μm粒度，50×2.1mm，或等效物)。在某些优选实施方式中，使用HPLC级0.1％甲酸水溶液作为溶剂A和0.1％甲酸的乙腈溶液作为溶剂B进行HPLC。
通过仔细选择阀门和连接器管道，可以根据需要连接两个或多个色谱柱，从而使得材料可以从一个色谱柱传递到另一个色谱柱，而无需任何手动步骤。在优选实施方式中，阀门和管道的选择由预先编程的计算机控制以进行必要的步骤。最优选地，色谱系统也以这种在线方式连接到检测器系统，例如，MS系统。因此，操作员可以将一托盘样品放入自动进样器中，其余操作在计算机控制下进行，从而对所有选择的样品进行纯化和分析。
在一些实施方式中，TFLC可用于在质谱分析之前纯化分析物。在这种实施方式中，可以使用捕获分析物的TFLC柱来提取样品。然后将分析物洗脱并在线转移至分析型HPLC柱。例如，样品提取可以用TFLC提取柱完成，也可以用大粒径(50μm)填充柱完成。从该柱上洗脱的样品然后在线转移到HPLC分析柱，用于在质谱法之前进一步纯化。由于这些色谱程序中涉及的步骤可以自动方式连接，因此可以最小化在分析物纯化期间对操作员参与的要求。该特征可节省时间和成本，并消除操作员出错的机会。
通过质谱法检测和定量
在各种实施方式中，分析物可以通过技术人员已知的任何方法电离。使用质谱仪进行质谱分析，该质谱仪包括用于电离分馏样品并产生带电荷分子以供进一步分析的离子源。例如，样品的电离可以通过电子电离、化学电离、电喷雾电离(ESI)、光子电离、大气压化学电离(APCI)、光电离、大气压光电离(APPI)、激光二极管热解吸(LDTD)、快速原子轰击(FAB)、液体二次电离(LSI)、基质辅助激光解吸电离(MALDI)、场电离、场解吸、热喷雾/等离子喷雾电离、表面增强激光解吸电离(SELDI)、电感耦合等离子体(ICP)和粒子束电离进行。本领域技术人员将理解，电离方法的选择可基于待测量的分析物、样品类型、检测器类型、正模式对负模式的选择等来确定。
分析物可以以正负模式电离。在一些实施方式中，分析物以正模式电离。
在质谱技术中，通常在样品被电离后，可以分析由此产生的带正电或带负电的离子以确定质荷比(m/z)。用于确定m/z的合适的分析仪包括四极杆分析仪、离子阱分析仪和飞行时间分析仪。在Bartolucci,et al.,Rapid Commun.Mass Spectrom.2000,14:967-73中描述了示例性离子阱方法。
根据本发明的一些方法，高分辨率/高精度质谱法用于分析物的定量。即，使用能够表现出至少10,000的分辨能力(FWHM)的质谱仪进行质谱分析，其对于目标离子具有约50ppm或更小的精度；优选地，质谱仪表现出20,000或更好的分辨能力(FWHM)和约20ppm或更小的精度；比如分辨能力(FWHM)为25,000或更好，精度约为5ppm或更小；比如，分辨能力(FWHM)为25,000或更好，精度约为3ppm或更小。能够展现分析物离子所需性能水平的三个示例性质谱仪是包括轨道阱质量分析仪、某些TOF质量分析仪或傅立叶变换离子回旋共振质量分析仪的那些质谱仪。
在生物活性分子中发现的元素，比如碳、氧和氮，自然以多种不同的同位素形式存在。例如，大多数碳以12C形式存在，但所有天然存在的碳中约有1％以13C形式存在。因此，一些天然存在的含碳分子的一部分将含有至少一个13C原子。在分子中包含天然存在的元素同位素会产生多种分子同位素形式。分子同位素形式的质量差异至少为1个原子质量单位(amu)。这是因为元素同位素至少相差一个中子(一个中子的质量≈1amu)。当分子同位素形式被电离为多电荷态时，同位素形式之间的质量差异可能变得难以辨别，因为质谱检测基于质荷比(m/z)。例如，质量相差1amu的两种同位素形式都被电离至5+态，其m/z的差异仅为0.2(1amu/5电荷态的差异)。高分辨率/高精度质谱仪能够区分高度多电荷离子的同位素形式(例如电荷为±4、±5、±6、±7、±8、±9或更高的离子)。
由于天然存在的元素同位素，每个分子离子通常存在多种同位素形式(如果使用足够灵敏的质谱仪进行分析，其每种都可能产生单独可检测的光谱峰)。多种同位素形式的m/z比和相对丰度共同构成了分子离子的同位素特征。在一些实施方式中，可利用两种或多种分子同位素形式的m/z和相对丰度来确认所研究的分子离子的身份。在一些实施方式中，来自一种或多种同位素形式的质谱峰用于定量分子离子。在一些相关实施方式中，来自一种同位素形式的单个质谱峰用于定量分子离子。在其他相关实施方式中，使用多个同位素峰来定量分子离子。在这些后面的实施方式中，多个同位素峰可以进行任何适当的数学处理。数种数学处理在本领域中是已知的并且包括但不限于对多个峰下的面积求和或对来自多个峰的响应求平均。
在质谱技术中，通常可以使用几种检测模式来检测离子。例如，可以检测选定的离子，即，使用选择性离子监测模式(SIM)，或者替代地，由撞击激活解离(CAD)产生的质量转换，例如多反应监测(MRM)或选择反应监测(SRM)。CAD通常用于生成碎片离子以供进一步检测。在CAD中，前体离子通过与惰性气体撞击获得能量，然后通过称为“单分子分解”的过程碎裂。必须在前体离子中沉积足够的能量，以便离子内的某些键可以因振动能量的增加而断裂。可选地，可以监测中性丢失(neutral loss)。
在一些实施方式中，使用四极分析仪确定质荷比。例如，在“四极”或“四极离子阱”仪器中，振荡射频场中的离子受到的力与施加在电极之间的直流电势、RF信号的幅度和质荷比成正比。可以选择电压和幅度，使得只有具有特定质荷比的离子行进通过四极杆的长度，而所有其他离子都被偏转。因此，四极杆仪器可以作为注入到仪器的离子的“质量过滤器”和“质量检测器”。
可以通过采用“串联质谱法”或“MS/MS”来增强MS技术的特异性。在该技术中，可以在MS仪器中过滤由目标分子产生的前体离子(也称为母离子)，然后前体离子随后被碎裂以产生一个或多个碎片离子(也称为子离子或产物离子)，然后在第二MS程序中分析碎片离子。通过仔细选择前体离子，只有某些分析物产生的离子才会进入碎裂室，在碎裂室中与惰性气体的原子撞击产生碎片离子。因为前体离子和碎片离子二者都是在给定的一组电离/碎片条件下以可重现的方式产生的，所以MS/MS技术可以提供非常强大的分析工具。例如，过滤/破碎的组合可用于消除干扰物质，并且可能在复杂样品比如生物样品中特别有用。
操作串联质谱仪的替代模式包括产物离子扫描和前体离子扫描。关于这些操作模式的说明，参见，例如，E.Michael Thurman,et al.,Chromatographic-MassSpectrometric Food Analysis for Trace Determination of Pesticide Residues，第8章(Amadeo R.Fernandez-Alba,ed.,Elsevier 2005)(387)。
通过本领域已知的多种方法，可将分析物测定的结果与原始样品中分析物的量关联。例如，如果仔细控制采样和分析参数，可以将给定离子的相对丰度与将相对丰度转换为原始分子绝对量的表格进行比较。可选地，可以与样品一起运行外部标准，并根据这些标准生成的离子构建标准曲线。使用这样的标准曲线，可以将给定离子的相对丰度转化为原始分子的绝对量。在某些优选实施方式中，使用内标来生成用于计算分析物数量的标准曲线。产生和使用这种标准曲线的方法是本领域公知的，并且普通技术人员能够选择合适的内标。例如，具有与分析物相似的m/z的同位素标记分子的一种或多种形式可以用作内标。在本文所述的一些实施方式中，示例性内标是同位素标记的地西泮，但可以使用许多其他化合物(同位素标记的或以其他方式标记的)。将离子的量与原始分子的量相关联的许多其他方法将是本领域普通技术人员公知的。
如本文所用，当通过质谱技术分析时，“同位素标记”在标记的分子中相对于未标记的分子产生质量位移。合适的标记物的实例包括氘(2H)、13C和15N。一种或多种同位素标记物可以并入分子中的一个或多个位置，并且一种或多种同位素标记物可以用在同一个同位素标记的分子上。
方法的一个或多个步骤可以使用自动化机器进行。在某些实施方式中，一个或多个纯化步骤在线进行，更优选地，所有纯化和质谱步骤都可以以在线方式进行。
在特别优选的实施方式中，如下使用MS/MS检测和/或定量样品中的分析物。样品优选地经受液体色谱，优选地HPLC；来自色谱柱的液体溶剂流进入MS/MS分析仪的加热雾化器接口；并且溶剂/分析物混合物在接口的加热带电荷管中转化为蒸气。在这些过程期间，分析物(即，抗抑郁药或代谢物)被分析。离子，例如，前体离子，穿过仪器的孔口并进入第一四极杆。四极杆1和3(Q1和Q3)是质量过滤器，允许根据其质荷比(m/z)选择离子(即，分别选择Q1和Q3中的“前体”和“碎片”离子)。四极杆2(Q2)是撞击池，离子在其中被碎片化。质谱仪的第一四极杆(Q1)选择具有分析物质荷比的分子。允许具有正确质荷比的前体离子进入撞击室(Q2)，而具有任何其他质荷比的不期望离子与四极杆的侧面撞击并被消除。进入Q2的前体离子与中性氩气分子发生撞击并碎片化。生成的碎片离子进入四极杆3(Q3)，在四极杆3中选择分析物的碎片离子，同时消除其他离子。
这些方法可能涉及在正离子或负离子模式下进行的MS/MS；优选地是正离子模式。使用本领域公知的标准方法，普通技术人员能够鉴定可用于四极杆3(Q3)中的选择的分析物的特定前体离子的一种或多种碎片离子。
当离子与检测器撞击时，它们会产生电子脉冲，该脉冲被转换为数字信号。获取的数据被传送到计算机，计算机绘制收集到的离子计数与时间的关系图。生成的质谱图类似于传统HPLC-MS方法中生成的色谱图。对应于特定离子的峰下面积或这种峰的幅度可以被测量并且与目标分析物的量相关联。在某些实施方式中，测量碎片离子(一个或多个)和/或前体离子的曲线下面积或峰幅度以确定分析物的量。如上所述，可以使用基于内部或外部分子标准的一种或多种离子的峰的校准标准曲线，将给定离子的相对丰度转化为原始分析物的绝对量。
以下实施例用于说明本发明。这些实施例绝不旨在限制方法的范围。
实施例
实施例1：样品制备
我们描述了一种经过验证的LC-MS/MS方法，用于同时分析以下表1中提供的23种处方抗抑郁药分析物及其代谢物。
表1.通过该测定确定的抗抑郁药和代谢物
Figure BDA0003470128660000151
Figure BDA0003470128660000161
质量控制、校准品和内标：5、12.5和4,000ng/mL的校准标准品(4-5,000ng/mL)和质量控制(QC’s)是通过将分析物储备溶液加标到不含药物的尿液对照(UTAK)中来制备。内标(IS)是1,3-氯苯基哌嗪-D8、羟基安非他酮-D6、去甲基文拉法辛-D6、去甲基西酞普兰-D3、曲米帕明-D3、阿米替林-D3、去甲替林-D3、帕罗西汀-D6、普罗替林-D3、西酞普兰-D6、文拉法辛-D6、丙咪嗪-D3、曲唑酮-D6、维拉佐酮-D4和沃替西汀-D8的25-100ng/mL混合物。
样品制备：将尿液样品、校准品和QC(各25μL)与IS(25μL)在1mL、96孔提取板中混合，用450μL的10mM甲酸铵水溶液(流动相A)稀释，然后以1,100rpm涡旋2分钟，然后移至LC-MS/MS进行进样和分析。
实施例2：液相色谱-质谱法
LC-MS/MS：将提取的样品(25μL)在
Figure BDA0003470128660000163
Phenyl-Hexyl 50x4.6mm 2.6μ色谱柱(Phenomenex)上使用流动相A/流动相B(乙腈中的25％甲醇)梯度进行色谱分离。在PreludeLX-4MDTM(ThermoFisher Scientific)上，采用4柱LC多路复用器来最大化通量。Sciex 4500Triple QuadTM质谱仪用于选择的反应监测。图1是所有分析物的代表性色谱图，并且图2展示了密切相关分析物的基线分离。
表2提供了在质谱法测定中检测每种分析物的质量转换
表2.用于检测抗抑郁药和代谢物的质谱转换(m/z)
Figure BDA0003470128660000162
Figure BDA0003470128660000171
Figure BDA0003470128660000181
Figure BDA0003470128660000191
实施例3：验证和结果
验证：以下特性由标准实验室方法确定：定量限(LOQ)、线性度(包括稀释的线性度上限[ULOL])、精密度、精度、150多种不同药物的干扰、稳定性、提取样品稳定性、基质效应和交叉污染(carryover)。
线性度：
5-9点校准曲线在其目标的±20％范围内表现出一致的线性和重现性，其中回归系数(r)>0.990。
CV在7.5％到10％之间。
所有抗抑郁药分析物和代谢物的分析测量范围(AMR)为4至5,000ng/mL，LOQ为10ng/ml(有1个例外)，并且ULOL为50,000ng/mL。例外是代谢物去甲舍曲林，其AMR为25至5,000ng/mL，LOQ为50ng/mL。
精密度：
一项为期5天的精密度研究显示出一致的结果，低、中和高水平QC的σ值大于3。
精度：
精度研究是通过将4至20,000ng/mL浓度范围内的65个样品与另一个实验室的另外65个结果相关联来进行的。实例如图3和图4所呈现。
平均而言，戴明回归显示相关系数为1.022，截距为-0.0681，没有偏差。
干扰：
(超过150多种违禁药物和处方药以100倍的临界值进行了测试。这些测试是在阴性基质对照和掺入相关物质的LOQ对照中完成的)
所测试的干扰药物均未在LOQ下导致组药物的信号强度偏差≥20％。
稳定性：
样品在室温下稳定7天，冷藏14天，并且冷冻30天。提取后，样品稳定持续24小时。
基质效应：
将样品在3个不同水平(0.5×、2×和0.8×ULOL)与纯基质和稀释基质进行比较。
没有观察到基质效应。
交叉污染：
将两个样品以4000ng/mL的浓度背对背掺入，然后是4个空白样品，以确定交叉污染效应。这是以一式三份运行的。
没有观察到交叉污染。
文章、专利和专利申请的内容，以及本文提及或引用的所有其他文件和电子可用信息，均通过引用整体并入本文，其程度与每个单独的出版物均被明确且单独指出并入一样引用。申请人保留将来自任何这种文章、专利、专利申请或其他物理和电子文件的任何和所有材料和信息实际并入到本申请中的权利。
在不存在本文未具体公开的任何要素(一个或多个)、限制(一个或多个)的情况下，本文说明性描述的方法可以适当地实施。因此，例如，术语“包括(comprising)”、“包括(including)”、“含有(containing)”等应被广泛地而不是限制地解读。此外，本文所采用的术语和表达被用作描述性而非限制性的术语，并且在使用这种术语和表达时不旨在排除所显示和描述的特征或其部分的任何等价物。应当认识到，在要求保护的本发明的范围内可以进行各种修改。因此，应当理解，虽然本发明已经通过优选实施方式和任选特征具体公开，但是本领域技术人员可以采用本文所公开的本发明的修改和变化，并且这种修改和变化被认为在本发明的范围内。
本发明已经在本文中广泛地且一般地进行了描述。属于一般公开内容的每个更窄的种类和亚属分组也形成方法的一部分。这包括带有从所属中去除任何主题的附带条件或否定限制的一般性方法描述，而不管在本文中是否具体陈述所去除的材料。
其他实施方式在所附权利要求内。此外，在根据马库什组描述方法的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到本发明也由此根据马库什组的任何个体成员或成员子组来描述。

Claims (20)

1.一种通过质谱法检测或确定样品中一种或多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量的方法，所述方法包括：
a.在适合产生可被质谱检测到的一种或多种离子的条件下对所述样品进行电离；
b.通过质谱法确定一种或多种离子的量；和
c.使用在步骤(b)中确定的所述一种或多种离子的量来确定所述样品中抗抑郁药或抗抑郁药代谢物的量。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂、去甲肾上腺素和多巴胺再摄取抑制剂、三环类抗抑郁药、镇静剂和抗抑郁药代谢物代谢物。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物选自氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、西酞普兰、艾司西酞普兰、氟伏沙明、维拉佐酮、度洛西汀、文拉法辛、去甲文拉法辛、羟基安非他酮、丙咪嗪、去甲替林、阿米替林、多塞平、曲米帕明、地昔帕明、普罗替林、阿莫沙平、氯丙咪嗪、麦普替林、曲唑酮、米氮平、沃替西汀、去甲西酞普兰、去甲氯丙咪嗪、去甲多塞平、去甲氟西汀、去甲氟伏沙明、去甲舍曲林以及1,3-氯苯基哌嗪。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括同时检测或确定10种或更多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括同时检测或确定20种或更多种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括同时检测或确定30种抗抑郁药和抗抑郁药代谢物的量。
7.根据权利要求1所述的方法，其中添加一种或多种内标。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述一种或多种内标包括氘代内标。
9.根据权利要求8的方法，其中所述氘代内标选自1,3-氯苯基哌嗪-D8、羟基安非他酮-D6、去甲基-文拉法辛-D6、去甲西酞普兰-D3、曲米帕明-D3、阿米替林-D3、去甲替林-D3、帕罗西汀-D6、普罗替林-D3、西酞普兰-D6、文拉法辛-D6、丙咪嗪-D3、曲唑酮-D6、维拉佐酮-D4以及沃替西汀-D8。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品包括生物样品。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品包括尿液。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品在电离之前经受液相色谱。
13.根据权利要求12的方法，其中所述液相色谱包括高效液相色谱。
14.根据权利要求1的方法，其中所述方法能够检测约4ng/mL至约5000ng/mL范围内的水平的抗抑郁药和抗抑郁药代谢物，包括端值。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法能够检测约25ng/mL至约5000ng/mL范围内的水平的抗抑郁药和抗抑郁药代谢物，包括端值。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱法是串联质谱法。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述串联质谱法是通过选择的反应监测、多反应监测、前体离子扫描或产物离子扫描进行的。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述串联质谱是通过选择的反应监测进行的。
19.根据权利要求1所述的方法，其中定量下限是10ng/mL。
20.根据权利要求1所述的方法，其中定量下限是50ng/mL。
CN202080051203.7A 2019-05-31 2020-05-29 通过质谱法测定抗抑郁药 Pending CN114127554A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962855863P 2019-05-31 2019-05-31
US62/855,863 2019-05-31
PCT/US2020/035233 WO2020243503A1 (en) 2019-05-31 2020-05-29 Determination of antidepressants by mass spectrometry

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114127554A true CN114127554A (zh) 2022-03-01

Family

ID=73551405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080051203.7A Pending CN114127554A (zh) 2019-05-31 2020-05-29 通过质谱法测定抗抑郁药

Country Status (8)

Country Link
US (2) US11887828B2 (zh)
EP (1) EP3977138A4 (zh)
JP (1) JP2022534288A (zh)
CN (1) CN114127554A (zh)
BR (1) BR112021024111A2 (zh)
CA (1) CA3141326A1 (zh)
MX (1) MX2021014426A (zh)
WO (1) WO2020243503A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115078610A (zh) * 2022-07-22 2022-09-20 郑州大学第一附属医院 一种检测体液中疏水性药物含量的方法

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110806449B (zh) * 2019-11-29 2023-03-28 济南和合医学检验有限公司 同时检测血液中氯米帕明和n-去甲氯米帕明含量的方法
CN112578059A (zh) * 2020-12-14 2021-03-30 北京和合医学诊断技术股份有限公司 氟西汀和去甲氟西汀的检测方法
CN112697919B (zh) * 2020-12-22 2023-02-28 北京和合医学诊断技术股份有限公司 度洛西汀的检测方法
CN114965720B (zh) * 2021-02-20 2024-02-23 成都康弘药业集团股份有限公司 一种测定氢溴酸伏硫西汀有关物质的方法
CN113075340A (zh) * 2021-05-14 2021-07-06 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 一种高效液相色谱法测定宠物血浆中米氮平浓度的方法
CN114994198B (zh) * 2022-05-20 2023-02-28 上海市精神卫生中心（上海市心理咨询培训中心） 一种液相色谱质谱联用法同时定量检测78种神经精神类药物的方法
CN114778747B (zh) * 2022-06-23 2022-09-02 北京和合医学诊断技术股份有限公司 Uplc-ms/ms法同时检测血液中16种药物及其代谢物的方法
CN116148401B (zh) * 2023-04-20 2023-07-07 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种同步高效检测污泥中36种抗抑郁药物残留量的方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102175778A (zh) * 2010-12-03 2011-09-07 杭州谷歌科技有限公司 一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法
US20140047906A1 (en) * 2010-10-29 2014-02-20 Cohesive Technologies Inc. Lc-ms configuration for purification and detection of analytes having a broad range of hydrophobicites
US20160231341A1 (en) * 2015-02-05 2016-08-11 Castle Medical, LLC Multidrug analysis in urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry
US20160370388A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 Amy J. Reisinger Rapid and Sensitive Method of Forensic Toxicology in Post-Mortem Subjects Using Oral Fluid Testing
CN106770857A (zh) * 2016-12-13 2017-05-31 南京医科大学 一种基于代谢组学的动物模型抑郁程度评价的实验方法
US20180017580A1 (en) * 2014-12-05 2018-01-18 Myriad Genetics, Inc. Biomarkers for distinguishing mood disorders
WO2018078018A2 (en) * 2016-10-27 2018-05-03 Glostrup Hospital Detection of hypocretin-1 and -2
US20180267015A1 (en) * 2015-01-15 2018-09-20 Centre For Addiction And Mental Health Peripheral measure of central brain inflammation, markers therefor and uses thereof
CN109085264A (zh) * 2018-08-03 2018-12-25 杭州佰勤医疗器械有限公司 液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗抑郁药物的试剂盒及其应用
CN109085263A (zh) * 2018-08-03 2018-12-25 杭州佰勤医疗器械有限公司 液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018078017A1 (en) 2016-10-28 2018-05-03 Surgivisio Method and system for determining a trajectory of an x-ray imaging system

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140047906A1 (en) * 2010-10-29 2014-02-20 Cohesive Technologies Inc. Lc-ms configuration for purification and detection of analytes having a broad range of hydrophobicites
CN102175778A (zh) * 2010-12-03 2011-09-07 杭州谷歌科技有限公司 一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法
US20180017580A1 (en) * 2014-12-05 2018-01-18 Myriad Genetics, Inc. Biomarkers for distinguishing mood disorders
US20180267015A1 (en) * 2015-01-15 2018-09-20 Centre For Addiction And Mental Health Peripheral measure of central brain inflammation, markers therefor and uses thereof
US20160231341A1 (en) * 2015-02-05 2016-08-11 Castle Medical, LLC Multidrug analysis in urine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry
US20160370388A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 Amy J. Reisinger Rapid and Sensitive Method of Forensic Toxicology in Post-Mortem Subjects Using Oral Fluid Testing
WO2018078018A2 (en) * 2016-10-27 2018-05-03 Glostrup Hospital Detection of hypocretin-1 and -2
CN106770857A (zh) * 2016-12-13 2017-05-31 南京医科大学 一种基于代谢组学的动物模型抑郁程度评价的实验方法
CN109085264A (zh) * 2018-08-03 2018-12-25 杭州佰勤医疗器械有限公司 液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗抑郁药物的试剂盒及其应用
CN109085263A (zh) * 2018-08-03 2018-12-25 杭州佰勤医疗器械有限公司 液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
贾晶莹等: "液相色谱-串联质谱法同时测定7种抗抑郁类和5种抗精神病类药物的血药浓度", 中国药物应用与监测, vol. 7, no. 05, 25 October 2010 (2010-10-25), pages 272 - 275 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115078610A (zh) * 2022-07-22 2022-09-20 郑州大学第一附属医院 一种检测体液中疏水性药物含量的方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2022534288A (ja) 2022-07-28
US20240120188A1 (en) 2024-04-11
CA3141326A1 (en) 2020-12-03
US20200381228A1 (en) 2020-12-03
EP3977138A1 (en) 2022-04-06
BR112021024111A2 (pt) 2022-03-22
EP3977138A4 (en) 2023-08-30
US11887828B2 (en) 2024-01-30
WO2020243503A9 (en) 2021-01-07
MX2021014426A (es) 2022-01-18
WO2020243503A1 (en) 2020-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11879900B2 (en) Mass spectrometric quantitation assay for metabolites of leflunomide
US11887828B2 (en) Determination of antidepressants by mass spectrometry
US11830715B2 (en) Mass spectrometric determination of fatty acids
JP6301362B2 (ja) 質量分析によるｃペプチド検出
US7952068B2 (en) Methods for detecting catecholamines by mass spectrometry
US11624737B2 (en) Methods for detecting lacosamide by mass spectrometry
CN111148993A (zh) 通过质谱法检测和定量胍基乙酸、肌酸和肌酐

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination