CN109085263A - 液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，包括：药物标准品：氨磺必利，阿立哌唑，脱氢阿立哌唑，氯丙嗪，氯氮平，N‑去甲氯氮平，利培酮，9‑羟利培酮，喹硫平，奥氮平，齐拉西酮；药物内标化合物：氨磺必利‑d5，阿立哌唑‑d8，氯丙嗪‑d3，氯氮平‑d8，利培酮‑d4,9‑羟利培酮‑d4，喹硫平‑d8，奥氮平‑d8，齐拉西酮‑d8；药物萃取组合物：体积占比为60％的甲醇溶液，20％的乙腈溶液，10％的异丙醇溶液以及10％的纯化水；阴性血浆；以及稀释剂：50％甲醇水溶液，所述试剂盒可被用于同时检测抗精神分裂药物及其活性代谢物，并且其检测时间短通量大。

Description

液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂 盒及其应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别涉及一液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒及其应用，所述试剂盒被适用于使用串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物。

背景技术

精神分裂症(schizophrenia)是一种非常顽固、使人非常痛苦的精神疾病，而且患者人数众多。目前，临床上使用精神分裂症控制药物来控制精神分裂症，然而像是抗精神分裂药物虽然在法律层面上不属于毒品范畴，却能够影响人的思维、情感和意志等心理过程，继而改变个体的行为及活动，长期服用会产生耐药性和依赖性，过量使用易引起中毒，严重者导致死亡。所以在患者使用这种抗精神药物时需要严格把控用药浓度，药物浓度低了达不到药效，而药物浓度高了又会对机体产生副作用。然后每年都会发生大量的药物中毒事件，特别是精神药物的中毒事件，从而快速筛查抗精神药物的浓度对于临床诊断和治疗来说非常重要。

实际上，药物的实际医用疗效与用药剂量之间没有直接的关联，而是与个体血清中的药物活性代谢物浓度关联性更大。目前针对精神药物的筛查有很多方法：气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-二极管阵列检测法和色相色谱-质谱联用法等，然而在这么多检测方法当中液相色谱-三重四极质谱法因其高灵敏度和高选择性已成为中毒药物的金标准方法。

目前市面上关于通过液相色谱串联质谱法检测精神药物也有了一定的发展，比如中国申请号CN 107807178A公开了一种“血液中毒品和抗精神疾病类药物液相色谱‐质谱检测方法”，用于同时检测9种毒品和14种抗精神疾病药物，再比如2010年张秀尧等(“超高效液相色谱‐串联质谱法同时快速确证检测血浆和尿液中的42种精神药物及其代谢产物”，色谱，2010，28(1)：23‐33)提出了一种同时快速检测血浆和尿液中的42种精神药物及其代谢产物的超高效液相色谱‐串联质谱法，所述42种药物包括抗抑郁药、抗癫痫药、解热镇痛药等，然而现有技术的检测方法存在如下弊端：虽然检测的药物种类很多，但是其检测的精度往往不能控制地很高，很容易受到基质效应的影响，并且检测时间长，效率低，不能满足临床高通量的样品检测需求。另外目前的检测方法大多只检测特定药物的浓度而忽略了其活动代谢物的情况，从而限制了抗精神药物检测的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，所述试剂盒被应用检测人血清或血浆样本中的抗精神分裂药物及其代谢物，所述试剂盒内含有高效血清血浆药物萃取组合物，所述血清血浆药物萃取组合物高效萃取对应药物和代谢物，提高了试剂盒对检测标的的响应值，从而提高了检测的灵敏度以及特异性。

使用本试剂盒进行抗精神分裂药物质谱检测时具有如下好处：

1、使用稳定同位素内标法：因稳定同位素内标与分析的物质具有几乎相同的物理化学性质，可以有效减少基质效应，使检测结果更加准确。

2、同时检测药物和活性代谢物：有些药物不仅自身具有药理活性，其代谢物也具有与原药相同的药理作用，例如文拉法辛和O-去甲文拉法辛，氟西汀和去甲氟西汀等。将药物的活性代谢物也纳入到监测的范围，可以更好的解释患者血药浓度与治疗效果的相关性。

3、同时检测多种精神类药物，检测时间缩短到2分钟，大大提高了检测通量：普通高效液相法的检测时间通常是10分钟到20分钟不等，而且一次只能检测一种或两种药物，可以同时测定十几种甚至更多药物，而且检测时间只有2分钟，大大提高了检测通量，可以满足临床高通量的样品检测需求。

为了实现上述目的，本发明提供一液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒及其应用，所述抗精神分裂药物试剂盒被应用于使用液相色谱串联质谱法检测抗精神分裂药物，其中所述抗精神分裂药物包括以下11种：氨磺必利，阿立哌唑，脱氢阿立哌唑，氯丙嗪，氯氮平，N-去甲氯氮平，利培酮，9-羟利培酮，喹硫平，奥氮平，齐拉西酮。

所述液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒包括以下试剂：

1、药物标准品：氨磺必利，阿立哌唑，脱氢阿立哌唑，氯丙嗪，氯氮平，N-去甲氯氮平，利培酮，9-羟利培酮，喹硫平，奥氮平，齐拉西酮

2、药物内标化合物：氨磺必利-d5，阿立哌唑-d8，氯丙嗪-d3，氯氮平-d8，利培酮-d4,9-羟利培酮-d4，喹硫平-d8，奥氮平-d8，齐拉西酮-d8。

3、药物萃取组合物：体积占比为60％的甲醇溶液，20％的乙腈溶液，10％的异丙醇溶液以及10％的纯化水。

4、阴性血浆。

5、稀释剂：50％甲醇水溶液

利用所述试剂盒配置药物标准溶液：利用药物萃取组合物溶解药物标准品，并稀释制成1mg/mL的药物标准溶液，值得注意的是，此时指的所述药物标准溶液中包含其上提到的11种抗精神药物标准品，从而便于后续液相色谱串联检测时可同时检测多种抗精神药物标准品。

所述药物标准溶液被50％甲醇水溶液稀释得到的浓度分别为1.0ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL。

所述药物内标化合物利用所述药物萃取组合物溶解，得到100μg/mL的内标溶液，用50％甲醇水溶液稀释后得到25ng/mL的内标工作液，相同地，所述内标工作液内也包括11种抗精神药物内标化合物。

往阴性血浆中加入低、高浓度的药物标准溶液，得到高低质控溶液的浓度为2.5ng/mL、400ng/mL，分别记录为QCL、QCH。

另外，所述试剂盒中被应用于制备各种溶液的制备方法如下，值得一提的是，以下仅提供一具体的制备数据，但其制备数据不作为限制：

1、药物标准溶液的制备：

各取10mg的药物标准品，置于10mL量瓶中，用药物萃取组合物溶解，定容并稀释，得到1.0mg/mL的药物标准溶液。

用50％甲醇水溶液溶解并定容、稀释，制成不同浓度的标准溶液，得到浓度分别为1.0ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的标准溶液。

2、药物内标溶液的制备：

取用药物内标化合物，使用药物萃取组合物溶解所述药物内标化合物，并转移至10mL量瓶，得到浓度为100μg/mL的内标溶液，稀释后得到浓度为25ng/mL的内标工作液。

3、质控品溶液的制备：

精密吸取阴性血浆90μL，分别加入低、高浓度标准溶液10μL，使其得到最终标准品的终浓度分别为2.5ng/mL、400ng/mL，标记为QCL、QCH。

所述试剂盒也被应用于检测人血清/血浆中的抗精神分裂药物，通过使用液相色谱串联质谱法进行检测，使用方法如下：

1.制备药物标准溶液，药物内标工作液，高低质控品；

2.混合设定比例的药物标准溶液和药物内标工作液，利用液相色谱串联质谱法进行检测，以标准溶液中各化合物的峰面积与内标化合物的峰面积的比值为纵坐标，以标准溶液中各化合物相应的浓度为横坐标进行线性回归，获得各化合物线性回归方程；

3.混合设定比例的药物内标工作液至检测药品中，利用液相色谱串联质谱法进行检测，将实际样品中各化合物的峰面积与内标化合物的峰面积的比值带入标准曲线线性方程计算实际样本的浓度。

综上所述，本发明提供一液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，所述试剂盒被应用于结合液相色谱串联质谱法检测人血清/血浆中的抗精神分裂药物，并且所述试剂盒的设置中内标物的选择极大程度地减少了基质效应，并且可同时检测药物及其活动代谢物。

附图说明

图1到图3是根据本发明的实施例的液相色谱串联质谱法检测抗精神分裂药物的试剂盒检测待测样本时得到的质谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

可以理解的是，术语“一”应理解为“至少一”或“一个或多个”，即在一个实施例中，一个元件的数量可以为一个，而在另外的实施例中，该元件的数量可以为多个，术语“一”不能理解为对数量的限制。

本发明提供的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒的试剂组合如下所示：

所述试剂盒被应用于通过液相色谱串联质谱检测血浆/血清中抗精神分裂药物，以下将以一具体的实施例说明其检测过程：

实施例1：

1.材料：

1.1仪器与试剂：

仪器：10mL量瓶、定容瓶、涡旋仪，离心机，液相色谱系统，三重四级杆质谱仪。

试剂:试剂盒，检测血清和/或检测血浆。

2.试剂准备步骤：

2.1药物标准溶液的制备：

各取10mg的药物标准品，置于10mL量瓶中，用药物萃取组合物溶解，定容并稀释，得到1.0mg/mL的药物标准溶液。

用50％甲醇水溶液溶解并定容、稀释，制成不同浓度的标准溶液，得到浓度分别为1.0ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的标准溶液。

2.2药物内标溶液的制备：

取用的药物内标化合物，使用药物萃取组合物溶解所述药物内标化合物，并转移至10mL量瓶，得到浓度为100μg/mL的内标溶液，稀释后得到浓度为25ng/mL的内标工作液。

2.3质控品溶液的制备：

精密吸取阴性血浆90μL，分别加入低、高浓度标准溶液10μL，使其得到最终标准品的终浓度分别为2.5ng/mL、400ng/mL，标记为QCL、QCH。

3、检测样品准备：

标准检测样品的制备：

取不同浓度的药物标准溶液100μL，加入400μL内标工作液，涡旋混合3min，于4℃11000rpm离心15min，取上清液300μL于4℃11000rpm离心15min准备进样分析。

实验检测样品的制备：

精密吸取血清样品100μL，加入400μL内标工作液，涡旋混合3min，于4℃11000rpm离心15min，取上清液300μL于4℃11000rpm离心15min准备进样分析。

质控检测样品的制备：

取QCL和QCH溶液10μL,加入400μL内标工作液，涡旋混合3min，于4℃11000rpm离心15min，取上清液300μL于4℃11000rpm离心15min进样分析。

4.检测：

取相同分量的标准检测样品、实验检测样品以及质控检测样品分别利用液相色谱串联质谱法进行检测，并且其条件设置为一致，以得到以标准检测样品中各化合物的峰面积与内标化合物的峰面积的比值为纵坐标，以标准检测样品中各化合物相应的浓度为横坐标进行线性回归，获得各化合物线性回归方程。将实验检测样品中各化合物的峰面积与内标化合物的峰面积的比值带入标准曲线线性方程计算实验检测样品的浓度。

检测的条件设置如下：

离子源为电喷雾电离离子源(ESI，正离子模式)；毛细管电压3.0kV；去溶剂气温度500℃；去溶剂气流速800L·h-1；锥孔反吹气流速50L·h-1；源温度150℃；去溶剂气和锥孔反吹气为氮气(纯度99.9％)；碰撞气为氩气(纯度99.999％)；扫描方式为多重反应离子监测(MRM)，优化后的离子检测参数：母离子、子离子、锥孔电压、碰撞能量详细数值见表一：

表一：各抗精神分裂药物和内标的质谱参数

序号	药物名称	缩写	母离子	子离子	锥孔电压	碰撞电压
							1	氨磺必利	AHBL	370.07	241.97	54	26
2	阿立哌唑	ALPZ	448.03	285.1	54	26
							3	脱氢阿立哌唑	TQALPZ	446.03	285.11	44	22
4	氯丙嗪	LBQ	319.03	86.05	38	20
							5	氯氮平	LDP	327.03	270.06	44	24
6	N-去甲氯氮平	QJLDP	313.03	270.1	46	24
							7	利培酮	LPT	411.16	191.17	48	28
8	9-羟利培酮	PPLT	427.09	207.11	50	28
							9	喹硫平	KLP	384.09	253.08	44	20
10	奥氮平	ADP	313.03	256.05	48	22
							11	齐拉西酮	QLXT	412.96	194.03	54	30
12	氨磺必利-d5	AHBL-d5	375.08	241.98	52	27
							13	阿立哌唑-d8	ALPZ-d8	456.03	293.15	54	26
14	氯丙嗪-d3	LBQ-d3	321.84	89	38	20
							15	氯氮平-d8	LDP-d8	335.1	274.95	50	21
16	利培酮-d4	LPT-d4	415.22	195.07	48	28
							17	9-羟利培酮	PPLT-d4	430.9	211.04	52	28
18	喹硫平-d8	KLP-d8	392.1	257.78	48	25
							19	奥氮平-d8	ADP-d8	321.1	260.11	48	22
20	齐拉西酮-d8	QLXT-d8	420.99	193.9	56	30

2.结果与讨论：

表二：各抗精神分裂药物的线性范围

如表二所示，快速有效地得到11种抗精神药物的线性方程，如图1到图3所示，可得到检测样品的检测图谱，并且从所述检测图谱中可以看到其检测效果更加准确，并且其11种物质同时检测的效率高，检测时间缩短到2分钟，大大提高了检测通量。图中：LDP-氯氮平、QJLDP-(N-去甲氯氮平)、QLXT-齐拉西酮、ALPZ-阿里哌唑、KLP-喹硫平、LBQ-氯丙嗪、TQALPZL-脱氢阿立哌唑、9-OH-LPT-(9-羟基-利培酮)、LPT-利培酮、AHBL-氨磺必利、ADP-奥氮平。

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，其特征在于，包括：

药物标准品：氨磺必利，阿立哌唑，脱氢阿立哌唑，氯丙嗪，氯氮平，N-去甲氯氮平，利培酮，9-羟利培酮，喹硫平，奥氮平，齐拉西酮；

药物内标化合物：氨磺必利-d5，阿立哌唑-d8，氯丙嗪-d3，氯氮平-d8，利培酮-d4,9-羟利培酮-d4，喹硫平-d8，奥氮平-d8，齐拉西酮-d8；

药物萃取组合物：体积占比为60％的甲醇溶液，20％的乙腈溶液，10％的异丙醇溶液以及10％的纯化水；

阴性血浆；以及

稀释剂：50％甲醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，其特征在于，所述药物标准品被所述药物萃取组合物溶液溶解定容后，得到药物标准溶液。

3.根据权利要求2所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，其特征在于，所述药物内标化合物被所述药物萃取组合物溶液溶解定容后，得到药物内标溶液。

4.根据权利要求3所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，其特征在于，往所述阴性血浆中添加高低浓度的药物标准溶液，得到高质控品和低质控品。

5.根据权利要求4所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，其特征在于，所述药物标准溶液的浓度为1.0mg/mL，所述药物内标溶液的浓度为100μg/mL，所述高质控品的浓度为2.5ng/mL，所述低质控品的浓度为400ng/mL。

6.根据权利要求5所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒，其特征在于，所述药物标准溶液用所述稀释剂稀释为浓度范围在1.0ng/mL-500ng/mL的不同浓度，所述药物内标溶液被所述稀释剂稀释得到内标工作液，浓度为25ng/mL。

7.根据权利要求4-6任一所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒的应用，被应用于通过液相色谱串联质谱法检测人血清血浆中的抗精神分裂药物，其中所述抗分裂药物包括：氨磺必利，阿立哌唑，脱氢阿立哌唑，氯丙嗪，氯氮平，N-去甲氯氮平，利培酮，9-羟利培酮，喹硫平，奥氮平，齐拉西酮。

8.根据权利要求7所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒的应用，混合药物标准溶液和药物内标溶液制备药物检测样品，混合检测样本和药物内标溶液，涡旋混合，离心后取上清液再离心后，放置于液相色谱串联质谱检测系统中检测。

9.根据权利要求8所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒的应用，所述液相色谱串联质谱的条件为：离子源为电喷雾电离离子源(ESI，正离子模式)；毛细管电压3.0kV；去溶剂气温度500℃；去溶剂气流速800L·h-1；锥孔反吹气流速50L·h-1；源温度150℃；去溶剂气和锥孔反吹气为氮气(纯度99.9％)；碰撞气为氩气(纯度99.999％)；扫描方式为多重反应离子监测(MRM)。

10.根据权利要求9所述的液相色谱串联质谱法检测血清血浆中抗精神分裂药物的试剂盒的应用，各抗精神分裂药物及其内标物的质谱参数为：