CN115267027A - 一种蛋白沉淀剂及包含其的用于精神类药物检测的试剂盒和检测方法 - Google Patents
一种蛋白沉淀剂及包含其的用于精神类药物检测的试剂盒和检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种蛋白沉淀剂及包含其的用于精神类药物检测的试剂盒和检测方法，所述蛋白沉淀剂包括以下组分：甲醇，乙腈，乙醇，异丙醇，二甲基亚砜，所述甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜的体积比为30‑68：30‑68：0.5‑3：0.5‑3：0.1‑0.3。将本发明的蛋白沉淀剂配制成沉淀内标剂后用于精神类药物检测，可提高待测药物的提取效率，且能更有效的沉淀蛋白，使检测样本的残留占比显著下降；进一步通过该蛋白沉淀剂的使用还可优化检测步骤，只需一步加样就能完成前处理。
Description
技术领域
本发明涉及精神类药物检测技术领域，具体涉及到一种蛋白沉淀剂及包含其的用于精神类药物检测的试剂盒和检测方法。
背景技术
目前已有的精神类药物浓度检测的方法主要有三类技术：第一类技术是免疫学技术，它通过抗原抗体结合来检测药物浓度，但由于有些药物难以制备相应的抗原抗体所以能检测的药物并不多，并且由于抗原抗体的非特异性结合会使结果产生偏差；第二类技术是高压液相色谱法，它通过流动相使待测药物进入色谱柱,在柱内各成分被分离后进入检测器进行检测，液相色谱所配备的检测器主要是紫外检测器，但由于有些精神类药物治疗浓度较低，紫外检测器灵敏度无法达到要求；第三类液相色谱串联质谱法，它通过各类药物质荷比不同来检测药物浓度，该方法具有特异性强，灵敏度高的优点，但目前该方法的缺点是前处理步骤多为手工操作，且步骤多而繁琐极易产生误差。
蛋白沉淀剂是待测样本进行检测前处理常用的去除蛋白质沉淀的添加剂，如专利文献CN111521702A记载的用于血清或血浆中抗精神药物的液质检测方法中，采用的蛋白沉淀剂为体积比1:1～5:1的有机溶剂(乙腈或甲醇)和纯水的混合液。但采用该蛋白沉淀剂的提取效率仍有待提高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种蛋白沉淀剂及包含其的用于精神类药物检测的试剂盒和检测方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
第一方面，本发明提供了一种蛋白沉淀剂，包括以下组分：
甲醇，
乙腈，
乙醇，
异丙醇，
二甲基亚砜，
所述甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜的体积比为30-68：30-68：0.5-3：0.5-3：0.1-0.3。
作为优选方案，所述蛋白沉淀剂中，甲醇与乙腈的总体积占比93-99％。
作为优选方案，所述乙醇与异丙醇的体积比为1:1。
作为优选方案，所述甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜的体积比为47.88-49.33：47.88-49.33：0.5-2：0.5-2：0.1-0.3，最优选体积比为48.93：48.93：1：1：0.1。
本发明在前期的实验中发现，在蛋白沉淀剂中加入乙醇的作用是利用乙醇易挥发的特点使化合物在色谱柱上的残留减少，但加入过多会导致目标化合物峰形的变化影响检测结果；加入异丙醇的作用是让目标化合物更容易在色谱柱上洗脱下来，但加入过多异丙醇由于异丙醇本身粘性较高，容易附着在色谱柱上。
本发明在前期的实验中发现，在蛋白沉淀剂中添加微量的二甲基亚砜作为助沉剂可提高蛋白沉淀效果，且不会对检测峰值有影响。而若添加比例过高时，则会导致检测峰值受影响。
本发明通过甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇和二甲基亚砜的组合，通过各组分的协同作用，可显著提升蛋白沉淀效果和待测药物提取效率。
第二方面，本发明提供了一种沉淀内标剂，包括前述的蛋白沉淀剂和药物内标，所述药物内标在沉淀内标剂中的浓度为4-20ng/ml。
作为优选方案，所述药物内标在沉淀内标剂中的浓度为4-8ng/ml。更优选浓度为5ng/ml。
作为优选方案，所述药物内标为精神类药物内标，所述精神类药物包括喹硫平、奥氮平、舍曲林、帕罗西汀、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、N-去甲氯氮平、利培酮、9-羟利培酮中的任一种。
第三方面，本发明提供了一种用于检测精神类药物的试剂盒，包括前述的蛋白沉淀剂和药物内标；或包括前述的沉淀内标剂。
作为优选方案，所述药物内标为精神类药物内标，所述精神类药物包括喹硫平、奥氮平、舍曲林、帕罗西汀、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、N-去甲氯氮平、利培酮、9-羟利培酮中的任一种。
第四方面，本发明提供了一种检测精神类药物的方法，包括以下步骤：
S1、将待测样本加入到含有前述的内标沉淀剂的加样板或8连管中，封闭；
S2、将步骤S1处理后的加样板或8连管震荡混匀，然后离心；
S3、将离心后的加样板直接上机检测，或离心后的8连管中吸取上清液进行上机检测，并以标准品拟合标准曲线，从而得到待测样本的检测值。
10、根据权利要求9所述的检测精神类药物的方法，其特征在于，步骤S1中，所述待测样本为血清样本；
步骤S2中，所述加样板进行震荡混匀的转速为500转/分、震荡时间为5分钟；所述8连管进行震荡混匀的转速为500转/分、震荡时间为30秒；
所述离心的转速为4000-13000转/分、离心时间为10-20分钟；
步骤S3中，所述上机检测采用的仪器为液相色谱串联质谱仪。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1.本发明通过采用特定组分配比的蛋白沉淀剂，提高了待测药物的提取效率。
2.采用本发明的蛋白沉淀剂能更有效的沉淀蛋白，使检测样本的残留占比显著下降。
3.本发明通过采用特定的蛋白沉淀剂，可优化检测步骤，在常规模式的检测方法中，只需一步加样就能完成前处理，且前处理后的加样板无需再做处理，可直接上机检测。
4.本发明基于该特定组分配比的蛋白沉淀剂的喹硫平检测试剂盒及检测方法的线性宽度宽(10-1000ng/ml),下限低于建议浓度(100ng/ml)下限的90％，上限高于建议浓度(500ng/ml)上限的100％。
5.本发明的检测方法通过2种进样方式，不仅满足了大批量样本的处理(常规模式的检测方法)，也满足了急诊样本的单独优先处理(急诊模式的检测方法)，且两种检测方法的互通性好。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为最佳拟合曲线和一阶拟合曲线的关系。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例提供了一种蛋白沉淀剂，包括以下体积比的各组分：甲醇：乙腈：乙醇：异丙醇：二甲基亚砜为48.93：48.93：1：1：0.1。
以喹硫平为例，本实施例还提供了一种喹硫平的检测试剂盒，包括前述的蛋白沉淀剂和喹硫平-D8混合配制的沉淀内标剂，还包括标准品。
所述沉淀内标剂中，蛋白沉淀剂和喹硫平-D8的体积比为99.96：0.04，喹硫平-D8在沉淀内标剂中的浓度为5ng/ml。将所述沉淀内标剂500ul加到96孔空白上样板上，密封-20℃保存待用。
所述标准品包括喹硫平S1-S6，其配置方法为：
1)制备工作液：取喹硫平纯品稀释到10ug/ml作为工作液；
2)制备喹硫平S6：取工作液110ul与小牛血清990ul混合，得喹硫平S6；
3)制备喹硫平S5：取喹硫平S6 100ul与小牛血清100ul混合，得喹硫平S5；
4)制备喹硫平S4：取喹硫平S6 50ul与小牛血清200ul混合，得喹硫平S4；
5)制备喹硫平S3：取喹硫平S6 20ul与小牛血清180ul混合，得喹硫平S3；
6)制备喹硫平S2：取喹硫平S6 10ul与小牛血清190ul混合，得喹硫平S2；
7)制备喹硫平S1：取喹硫平S6 5ul与小牛血清495ul混合，得喹硫平S1。
以上述检测试剂盒进行喹硫平检测，并以下表1中的各对比蛋白沉淀剂(各组分体积比)作为对照组进行对比实验(各对照组分别与喹硫平-D8混合，配制相应的沉淀内标剂，各沉淀内标剂中对比蛋白沉淀剂与喹硫平-D8的体积比均为99.96：0.04，喹硫平-D8在各对照组制备的沉淀内标剂中的浓度为5ng/ml)，考察本发明的蛋白沉淀剂(实验组)与对照组的对比蛋白沉淀剂的提取效率和残留占比。
表1
具体检测方法采用液相色谱串联质谱法，以同位素稀释液相色谱串联质谱法为检测原理。方法是将待测血清加入到沉淀剂中，高速离心后将其从血清当中萃取出来。利用液相色谱串联质谱分离并检测血清喹硫平平和内标特异的离子。用喹硫平与内标峰面积比计算血清喹硫平浓度。具体包括以下步骤(用于常规模式的检测方法)：
1.加样：取喹硫平S1-S6、待测样本(病人血清标本)各100ul加入到含有各沉淀内标剂的96孔上样板中，封板。
2.振荡混匀离心：将加样好的上样板以500转/分进行震荡5分钟，然后以4000转/分进行离心20分钟。
3.将离心后的加样板直接上机检测，并以喹硫平S1-S6拟合标准曲线，从而得到待测样本的检测值。以Waters TQD为例，采用的色谱推荐参数如表2所示(其中，水相流动相为0.1％甲酸—2mmol/L甲酸铵-水溶液，有机相流动相为甲醇，流速为0.4ml/min,推荐的色谱柱为Waters BEH C18 17um 2.1*50mm色谱柱)，质谱推荐参数如表3和表4所示。
表2
| 分析时间(min) | 水相流动相(％) | 有机流动相(％) | 曲线 |
| 初始 | 90 | 10 | 初始 |
| 0.5 | 90 | 10 | 6 |
| 1.1 | 70 | 30 | 6 |
| 2.0 | 10 | 90 | 6 |
| 2.5 | 10 | 90 | 6 |
| 3.5 | 90 | 10 | 6 |
表3离子源参数
表4化合物质谱参数
4.以回收率＝(加样后样本浓度-基础浓度)/加入理论浓度*100％，计算得到各检测样本的低值回收率和高值回收率；以偏差＝(测得样本浓度-理论浓度)/理论浓度
*100％，计算得到基础样本偏差，结果如表5所示。回收率在100％±15％说明回收率符合要求，越接近100％，说明方法正确度高结果可靠。由表5的结果可见，采用实验组的蛋白沉淀剂能更高效的沉淀蛋白，使待测物更好的提取出来。
表5
| 低值回收率 | 高值回收率 | 基础样本偏差 | |
| 对照组1 | 86.87％ | 89.26％ | -11.98％ |
| 对照组2 | 113.83％ | 87.58％ | -8.41％ |
| 对照组3 | 88.62％ | 93.55％ | -10.66％ |
| 对照组4 | 119.97％ | 114.17％ | -5.28％ |
| 对照组5 | 105.13％ | 112.98％ | 4.13％ |
| 对照组6 | 102.34％ | 109.27％ | 4.07％ |
| 对照组7 | 103.48％ | 110.61％ | 4.03％ |
| 实验组 | 100.20％ | 106.81％ | 3.94％ |
5.以最高检测限后一针空白残留峰面积/最低检测限峰面积，计算得到各检测样本的残留情况，结果如表6所示。残留在20％以内说明符合要求，残留越低说明蛋白沉淀效果好。表6的结果证明：采用实验组的蛋白沉淀剂能更有效的沉淀蛋白。
表6
6.正确度试验
目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
方法：定量检测方法的回收实验是评估准确度的方法之一，用于评估定量检测方法准确测定待测分析物的能力，结果用回收率表示。
实验样本的基本要求和制备方法：
(1)选择合适浓度的常规检测样本，分为体积相同的3份。
(2)在其中2份样本中加入不同浓度相同体积的待测物标准液制备待回收分析样本，加入体积小于原体积的10％，制成2个不同加入浓度的待回收分析样本，计算加入的待测物的浓度。
(3)在另一份样本中加入同样体积的无待测物的溶剂，制成基础样本。
结果判断：
计算项目平均回收率的差值需小于±10％；
计算样本检测均值需小于理论浓度±15％；
计算系统比例误差需小于1/2TEA。
采用实施例1方法获得的检测结果为:喹硫平4个样本回收率与平均回收率的差值<±10％；喹硫平的4个样本检测均值在理论浓度<±15％；喹硫平比例系统误差＝2.54％<1/2TEA12.5％，故喹硫平的回收实验(准确度)可接受。
7.精密度实验
7.1重复精密度
目的：考察仪器检测方法的随机误差
方法：制备3个浓度喹硫平标本(单位：ng/ml)各20份进行：连续重复测定20次，计算SD，CV，得到批内精密度。
结果判断：高、中、低三个浓度需小于1/4TEA。
重复性精密度验证试验结果如表7所示。喹硫平浓度低值CV＝2.73％<1/4TEA6.25％，喹硫平浓度中值CV＝3.08％<1/4TEA6.25％，喹硫平浓度高值CV＝4.19％<1/4TEA6.25％，故喹硫平批内精密度符合要求。
表7
7.2批间精密度
目的：考察目前实验室检测方法批间精密度。
方法：制备3个浓度喹硫平标本，每个批次每个浓度样本分5次进行处理，连续测定3个批次，总样本数为45份，分别评估每个浓度样本的批内精密度和总精密度。
结果判断：高、中、低三个浓度需小于1/3TEA。
批间精密度验证结果如表8所示。喹硫平浓度低值CV＝6.17％<1/3TEA8.33％；喹硫平浓度中值CV＝4.76％<1/3TEA8.33％；喹硫平浓度高值CV＝4.81％<1/3TEA8.33％，故喹硫平批间精密度通过验证。
表8
| 喹硫平：单位ng/ml | 低值 | 中值 | 高值 |
| 1 | 71.53 | 254.11 | 1035.52 |
| 2 | 68.83 | 255.18 | 1045.48 |
| 3 | 65.85 | 249.24 | 1048.19 |
| 4 | 68.22 | 262.09 | 1050.86 |
| 5 | 66.75 | 257.63 | 1026.39 |
| 6 | 68.47 | 264.11 | 1040.4 |
| 7 | 70.07 | 287.436 | 1108.15 |
| 8 | 68.07 | 275.27 | 1095.02 |
| 9 | 70.62 | 271.93 | 1105.11 |
| 10 | 76.43 | 288.89 | 1149.24 |
| 11 | 73.91 | 279.86 | 1088.21 |
| 12 | 75.52 | 283.75 | 1159.31 |
| 13 | 59.89 | 256.84 | 979.11 |
| 14 | 67.51 | 269.87 | 1107.17 |
| 15 | 64.44 | 273.89 | 1006.33 |
| 平均值 | 69.074 | 268.6731 | 1069.633 |
| SD | 4.265186 | 12.80047 | 51.41258 |
| CV％ | 6.17％ | 4.76％ | 4.81％ |
| 判断CV<8.33％ | 通过 | 通过 | 通过 |
8.可报告范围(线性确认)
目的：在确定项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围检测结果的准确性。
方法：根据CLIS EP6-A和WS/T 408-2012，制备一份高浓度标本和一份低浓度标本，按照EP6-A中的稀释方案进行稀释，得到11个浓度水平的样本。
结果判断：根据EP6-A的方法对结果进行统计分析，判断线性是否符合临床需求。
根据EP6-A的方法对结果进行统计分析，线性范围验证试验结果见表9。结果显示判断线性10-1000ng/ml通过验证。
表9
| 理论浓度 | 第一次 | 第二次 | 第三次 | SD | MEAN | CV％ | 与理论浓度偏差％ | |
| 1 | 10 | 11.75 | 11.84 | 12.07 | 0.165025 | 11.88667 | 1.388322 | -18.86666667 |
| 2 | 109 | 91.41 | 91.75 | 96.8 | 3.018559 | 93.32 | 3.234633 | 14.3853211 |
| 3 | 208 | 178.64 | 186.95 | 182.95 | 4.155964 | 182.8467 | 2.272923 | 12.09294872 |
| 4 | 307 | 273.4 | 311.55 | 293.54 | 19.08491 | 292.83 | 6.517402 | 4.615635179 |
| 5 | 406 | 370.31 | 375.92 | 378.62 | 4.239068 | 374.95 | 1.130569 | 7.647783251 |
| 6 | 505 | 475.58 | 449.59 | 476.28 | 15.21143 | 467.15 | 3.25622 | 7.495049505 |
| 7 | 604 | 541.32 | 596.15 | 577.87 | 27.91771 | 571.78 | 4.882596 | 5.334437086 |
| 8 | 703 | 650.81 | 661 | 653.67 | 5.255863 | 655.16 | 0.802226 | 6.80512091 |
| 9 | 802 | 738.97 | 776.59 | 794.89 | 28.51082 | 770.15 | 3.701983 | 3.971321696 |
| 10 | 901 | 943.11 | 871.52 | 976.58 | 53.67025 | 930.4033 | 5.768493 | -3.263411025 |
| 11 | 1000 | 935.31 | 954.69 | 1002.31 | 34.47765 | 964.1033 | 3.576136 | 3.589666667 |
对线性范围统计分析，所得最佳拟合曲线和一阶拟合曲线结果如图1所。图1的结果显示：本实验的曲线和一阶拟合曲线的高度相关性。
9.临床标本比对
目的：对本技术质谱试剂盒与胶乳免疫比浊法试剂盒进行比对评估
方法：选取50例临床标本分为二份，其中一份用本实施例的质谱法进行检测，另一份用现有的胶乳免疫比浊法进行检测，至少80％份样品测量结果的偏差<1/2TEa；计算回归方程，计算在医学决定性水平下的系统误差(偏倚％)，应<1/2TEa。
两种检测方法比对偏差结果如表10所示，比对偏移结果如表11所示。结果判断：本实施例的质谱法与胶乳免疫比浊法符合率为98.00％(＞80％)，符合要求；选择Passing-Baklok模型进行拟合回归并代入医学决定水平(分别为参考下限，参考上限，警戒限)评估偏移，喹硫平拟合的方程为：Y＝-0.18+0.979X，在3个医学决定水平偏移％分别为-2.31％、-2.16％、-2.14％均小于12.5％符合要求。
表10
表11喹硫平比对偏移％
本实施例还提供了基于上述检测试剂盒进行喹硫平检测的另一种方法，具体步骤如下(用于急诊模式的检测方法)：
1)加样：取喹硫平S1-S6、待测样本(病人血清标本)各30ul加入到含有各沉淀内标剂的8连管中，封管。
2)振荡混匀离心：将加样好的8连管以500转/分进行瞬时震荡30秒，然后以4000转/分进行离心20分钟。
3)吸取离心后的8连管中上清液40ul进行上机检测，并以喹硫平S1-S6拟合标准曲线，从而得到待测样本的检测值。采用的色谱、质谱条件与前述步骤3的条件相同。
本实施例还通过进行比对实验来证明前述常规模式和急诊模式的两种检测方法的互通性，比对实验用留样再测判断标准和精密度来判断，留样再测要求5个不同浓度的样本80％结果小于1/3总允许误差，精密度要求在比对方法(急诊模式)3倍最低检测浓度时CV≤15％。留样再测的结果如表12所示，实验证明：两种模式互通性好。
表12
| 样本编号 | 常规模式 | 急诊模式 | 偏差(<8.33％) |
| 1 | 29.41 | 27.14 | -7.72％ |
| 2 | 243.59 | 247.11 | 1.45％ |
| 3 | 60.68 | 61.56 | 1.45％ |
| 4 | 83.64 | 86.59 | 3.53％ |
| 5 | 419.93 | 417.3 | -0.63％ |
实施例2
本实施例提供了一种蛋白沉淀剂，包括以下体积比的各组分：甲醇：乙腈：乙醇：异丙醇：二甲基亚砜为47.88：47.88：2：2：0.2。
以喹硫平为例，本实施例还提供了一种喹硫平的检测试剂盒，所述试剂盒与实施例1基本相同，不同之处仅在于：采用本实施例的蛋白沉淀剂和喹硫平-D8混合配制沉淀内标剂。
采用本实施例的试剂盒进行检测，检测方法与实施例1相同，所得回收率结果如表7所示；所得残留占比如表8所示。
实施例3
本实施例提供了一种蛋白沉淀剂，包括以下体积比的各组分：甲醇：乙腈：乙醇：异丙醇：二甲基亚砜为49.33：49.33：0.5：0.5：0.3。
以喹硫平为例，本实施例还提供了一种喹硫平的检测试剂盒，所述试剂盒与实施例1基本相同，不同之处仅在于：采用本实施例的蛋白沉淀剂和喹硫平-D8混合配制沉淀内标剂。
采用本实施例的试剂盒进行检测，检测方法与实施例1相同，所得回收率结果如表13所示；所得残留占比如表14所示。
表13
| 低值回收率 | 高值回收率 | 基础样本偏差 | |
| 实施例2 | 100.47％ | 106.36％ | 3.88％ |
| 实施例3 | 100.15％ | 106.24％ | 3.74％ |
表14
实施例4
本实施例提供了一种奥氮平的检测试剂盒，包括实施例1的蛋白沉淀剂和奥氮平-D6混合配制的沉淀内标剂，还包括标准品。
所述沉淀内标剂中，蛋白沉淀剂和奥氮平-D6的体积比为99.96：0.04，奥氮平-D在沉淀内标剂中的浓度为5ng/ml。将所述沉淀内标剂500ul加到96孔空白上样板上，密封-20℃保存待用。
所述标准品包括奥氮平S1-S6，其配置方法为：
1)制备工作液：取奥氮平纯品稀释到500ng/ml作为工作液；
2)制备奥氮平S6：取工作液80ul与小牛血清120ul混合，得奥氮平S6；
3)制备奥氮平S5：取奥氮平S6 40ul与小牛血清160ul混合，得奥氮平S5；
4)制备奥氮平S4：取奥氮平S6 20ul与小牛血清180ul混合，得奥氮平S4；
5)制备奥氮平S3：取奥氮平S6 8ul与小牛血清192ul混合，得奥氮平S3；
6)制备奥氮平S2：取奥氮平S6 4ul与小牛血清196ul混合，得奥氮平S2；
7)制备奥氮平S1：取奥氮平S6 2ul与小牛血清198ul混合，得奥氮平S1。
以上述检测试剂盒进行奥氮平检测，具体检测方法与实施例1的用于常规模式的检测方法基本相同，不同之处在于：采用的色谱推荐参数如表15所示(其中，水相流动相为0.1％甲酸、2mmol/L甲酸铵形成的水溶液,有机相流动相为甲醇，推荐的色谱柱为WatersBEH C18 17um 2.1*50mm色谱柱)，质谱推荐参数如表16和表17所示。
表15
| 分析时间(min) | 水相流动相(％) | 有机流动相(％) | 曲线 |
| 初始 | 90 | 10 | 初始 |
| 0.5 | 90 | 10 | 6 |
| 1.1 | 70 | 30 | 6 |
| 2.0 | 10 | 90 | 6 |
| 2.5 | 10 | 90 | 6 |
| 3.5 | 90 | 10 | 6 |
表16离子源参数
表17化合物质谱参数
本实施例同样考察了不同蛋白沉淀剂对奥氮平检测的结果，以实施例1中相同的蛋白沉淀剂为实验组和对照组(参照表1)，各组所得回收率结果如表18所示；所得残留占比如表19所示。
表18
| 低值回收率 | 高值回收率 | 基础样本偏差 | |
| 对照组1 | 98.79％ | 109.83％ | -9.43％ |
| 对照组2 | 94.41％ | 113.61％ | -8.41％ |
| 对照组3 | 87.34％ | 94.55％ | 8.99％ |
| 对照组4 | 106.97％ | 108.31％ | -7.11％ |
| 对照组5 | 107.21％ | 92.98％ | 5.37％ |
| 对照组6 | 107.32％ | 95.56％ | 4.66％ |
| 对照组7 | 109.98％ | 107.35％ | 4.55％ |
| 实验组 | 103.47％ | 105.77％ | 4.14％ |
表19
需要说明的是，本发明的蛋白沉淀剂不仅限于用于喹硫平、奥氮平的检测试剂盒及其检测，还可用于其他精神类药物的检测，尤其是舍曲林、帕罗西汀、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、N-去甲氯氮平、利培酮、9-羟利培酮也同样适用，并具有相似的效果，本发明实施例中不再一一列举。
本发明具体应用途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，以上实施例仅用于说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种蛋白沉淀剂，其特征在于，包括以下组分：
甲醇，
乙腈，
乙醇，
异丙醇，
二甲基亚砜，
所述甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜的体积比为30-68：30-68：0.5-3：0.5-3：0.1-0.3。
2.根据权利要求1所述的蛋白沉淀剂，其特征在于，所述蛋白沉淀剂中，甲醇与乙腈的总体积占比93-99％。
3.根据权利要求1所述的蛋白沉淀剂，其特征在于，所述乙醇与异丙醇的体积比为1:1。
4.根据权利要求1所述的蛋白沉淀剂，其特征在于，所述甲醇、乙腈、乙醇、异丙醇、二甲基亚砜的体积比为48.93：48.93：1：1：0.1。
5.一种沉淀内标剂，其特征在于，包括权利要求1或2所述的蛋白沉淀剂和药物内标，所述药物内标在沉淀内标剂中的浓度为4-20ng/ml。
6.根据权利要求3所述的沉淀内标剂，其特征在于，所述药物内标在沉淀内标剂中的浓度为4-8ng/ml。
7.根据权利要求3所述的沉淀内标剂，其特征在于，所述药物内标为精神类药物内标，所述精神类药物包括喹硫平、奥氮平、舍曲林、帕罗西汀、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、氯丙嗪、氯氮平、N-去甲氯氮平、利培酮、9-羟利培酮中的任一种。
8.一种用于检测精神类药物的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的蛋白沉淀剂和药物内标；或包括权利要求5-7任一项所述的沉淀内标剂。
9.一种用于精神类药物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将待测样本加入到含有权利要求5-7任一项所述的内标沉淀剂的加样板或8连管中，封闭；
S2、将步骤S1处理后的加样板或8连管震荡混匀，然后离心；
S3、将离心后的加样板直接上机检测，或离心后的8连管中吸取上清液进行上机检测，并以标准品拟合标准曲线，从而得到待测样本的检测值。
10.根据权利要求9所述的检测精神类药物的方法，其特征在于，
步骤S1中，所述待测样本为血清样本；
步骤S2中，所述加样板进行震荡混匀的转速为500转/分、震荡时间为5分钟；所述8连管进行震荡混匀的转速为500转/分、震荡时间为30秒；
所述离心的转速为4000-13000转/分、离心时间为10-20分钟；
步骤S3中，所述上机检测采用的仪器为液相色谱串联质谱仪。
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