CN111148993A - 通过质谱法检测和定量胍基乙酸、肌酸和肌酐 - Google Patents

通过质谱法检测和定量胍基乙酸、肌酸和肌酐 Download PDF

Info

Publication number
CN111148993A
CN111148993A CN201880063889.4A CN201880063889A CN111148993A CN 111148993 A CN111148993 A CN 111148993A CN 201880063889 A CN201880063889 A CN 201880063889A CN 111148993 A CN111148993 A CN 111148993A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sample
creatine
creatinine
mass
ions
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880063889.4A
Other languages
English (en)
Inventor
T·C·里恩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Quest Diagnostics Investments LLC
Original Assignee
Quest Diagnostics Investments LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Quest Diagnostics Investments LLC filed Critical Quest Diagnostics Investments LLC
Publication of CN111148993A publication Critical patent/CN111148993A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
    • G01N30/724—Nebulising, aerosol formation or ionisation
    • G01N30/7266—Nebulising, aerosol formation or ionisation by electric field, e.g. electrospray
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/70—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/045—Standards internal
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2560/00—Chemical aspects of mass spectrometric analysis of biological material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

提供了通过质谱法检测或确定胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量的方法。

Description

通过质谱法检测和定量胍基乙酸、肌酸和肌酐
相关专利申请的交叉引用
本申请要求2017年8月14日提交的美国临时申请62/545,349的权益，其全部内容通过引用并入本文。
背景技术
以L-精氨酸：甘氨酸脒基转移酶(AGAT)、胍基乙酸甲基转移酶(GAMT)和X-连锁肌酸转运蛋白(SLC6A8)的缺陷为特征的三种人类障碍引起脑肌酸缺乏综合征(CCDS)。由于呈现的临床特征(例如，精神运动迟缓、生长迟缓、智力障碍、癫痫、自闭症行为、痉挛和运动异常)是非特异性特征，因此它们是诊断不足的。在AGAT和GAMT中口服补充肌酸可纠正大脑肌酸含量。诊断取决于尿液和血浆中胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的测量。尿液或血浆中这些个体分析物浓度的升高或降低可以区分这三种疾病。
需要对胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐进行准确而灵敏的测定。
发明内容
本文提供了通过质谱法(包括串联质谱法)检测或确定样品中胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量的方法。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA、肌酸和肌酐；(b)电离样品中的GAA、肌酸和肌酐；(c)通过质谱法检测或确定GAA、肌酸和肌酐离子(一种或多种)的量；其中GAA、肌酸和肌酐离子(一种或多种)的量与样品中GAA、肌酸和肌酐的量有关。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定胍基乙酸(GAA)的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA；(b)电离样品中的GAA；(c)通过质谱法检测或确定GAA离子(一种或多种)的量；其中GAA离子(一种或多种)的量与样品中GAA的量有关。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定肌酸的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA、肌酸和肌酐；(b)电离样品中的肌酸；(c)通过质谱法检测或确定肌酸离子(一种或多种)的量；其中肌酸离子(一种或多种)的量与样品中肌酸的量有关。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定肌酐的量，其包括：(a)纯化样品中的肌酐；(b)电离样品中的肌酐；(c)通过质谱法检测或确定肌酐离子(一种或多种)的量；其中肌酐离子(一种或多种)的量与样品中肌酐的量有关。
在一些实施方式中，在质谱法之前，胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐是未衍生化的。
在一些实施方式中，样品是尿液或血清或血浆。在优选的实施方式中，样品是尿液。在一些实施方式中，样品是全血。在一些实施方式中，样品是唾液。
在一些实施方式中，本文提供的纯化包括液相色谱法。在一些实施方式中，液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。
在一些实施方式中，本文提供的纯化包括固相萃取(SPE)。
在一些实施方式中，电离包括电喷雾电离(ESI)。在一些实施方式中，电离包括以正模式电离。在一些实施方式中，电离包括以负模式电离。
在一些实施方式中，本文提供的方法进一步包括添加内标。在一些实施方式中，内标是同位素标记的。
在某些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于1mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.9mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.8mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.7mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.6mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.5mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.4mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.3mg/L。
在某些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于1mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.9mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.8mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.7mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.6mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.5mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.4mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.3mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.2mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.1mg/L。
在一些实施方式中，所述电离包括产生质/荷比为118.1±0.5的胍基乙酸(GAA)前体离子。在一些实施方式中，所述方法进一步包括产生质/荷比为72.1±0.5的一种或多种碎片离子。在一些实施方式中，所述电离包括产生质/荷比为132.1±0.5的肌酸前体离子。在一些实施方式中，所述方法进一步包括产生质/荷比为90.1±0.5的一种或多种碎片离子。在一些实施方式中，所述电离包括产生质/荷比为114.1±0.5的肌酐前体离子。在一些实施方式中，所述方法进一步包括产生质/荷比为44.1±0.5的一种或多种碎片离子。
在一些实施方式中，方法可包括将试剂以足以使样品脱蛋白的量添加到样品中。
如本文所用，除非另有说明，否则单数形式“一(a/an)”和“该(the)”包括复数指代。因此，例如，提到“蛋白质”包括多种蛋白质分子。
如本文所用，术语“纯化”或“使纯化”不指从样品中除去除目标分析物(一种或多种)以外的所有物质。相反，纯化是指相对于样品中可能干扰目标分析物检测的其他组分，富集一种或多种目标分析物的量的过程。本文中通过多种手段纯化样品以允许去除一种或多种干扰物质，例如干扰通过质谱法检测所选分析物母体和子体离子的一种或多种物质。
如本文所用，术语“测试样品”是指可包含分析物的任何样品。如本文所用，术语“体液”是指可以从个体身体分离的任何流体。例如，“体液”可包括血液、血浆、血清、胆汁、唾液、尿液、泪液、汗液等。
如本文所用，术语“衍生化”是指使两个分子反应以形成新分子。衍生剂可包括异硫氰酸酯基团、二硝基-氟苯基基团、硝基苯氧基羰基基团和/或邻苯二甲醛(phthalaldehyde)基团等。
如本文所用，术语“色谱法”是指这样的过程，其中当化学实体在固定液相或固相周围或上方流动时，由于化学实体的差异分布，通过液体或气体携带的化学混合物被分离成多个组分。
如本文所用，术语“液相色谱法”或“LC”是指当流体均匀地渗透通过细分物质的柱或通过毛细管通道时，流体溶液的一种或多种组分的选择性延迟的方法。延迟是由于当该流体相对于固定相(一个或多个)移动时，混合物组分在一个或多个固定相与本体流体(即流动相)之间的分布导致的。“液相色谱法”的实例包括反相液相色谱法(RPLC)、高效液相色谱法(HPLC)和高湍流液相色谱法(HTLC)。
如本文所用，术语“高效液相色谱法”或“HPLC”是指这样的液相色谱法，其中通过在压力下迫使流动相通过固定相(通常为密集填充柱)来提高分离度。
如本文所用，术语“高湍流液相色谱法”或“HTLC”是指色谱法的一种形式，其利用被测定物质的湍流通过柱填料作为进行分离的基础。在通过质谱法分析之前，HTLC已用于制备包含两种未命名药物的样品。参见，例如，Zimmer等，J.Chromatogr.A 854：23-35(1999)；还参见，美国专利号5,968,367、5,919,368、5,795,469和5,772,874，其进一步解释了HTLC。本领域普通技术人员理解“湍流”。当流体缓慢而平稳地流动时，该流动被称为“层流”。例如，以低流速移动通过HPLC柱的流体是层流的。在层流中，流体颗粒的运动是有序的，其中颗粒大体上沿直线运动。在更快的速度下，水的惯性克服了流体摩擦力和湍流产生。不与不规则边界接触的流体“超出”了由于摩擦而变慢或由于不平整表面而偏转的流体。当流体湍流地流动时，它会以漩涡和旋转(或涡流)流动，其具有比当流动是层流时更大的“阻力”。许多参考资料可用于帮助确定流体流动何时是层流或湍流(例如，Turbulent Flow Analysis：Measurement and Prediction，P.S.Bernard和J.M.Wallace，John Wiley&Sons，Inc.，(2000)；An Introduction to Turbulent Flow，Jean Mathieu和JulianScott，剑桥大学出版社(2001))。
如本文所用，术语“气相色谱法”或“GC”是指这样的色谱法，其中将样品混合物汽化并注入载气流(作为氮气或氦气)，该载气流移动穿过包含由液体或颗粒固体组成的固定相的柱，并根据化合物对固定相的亲和力分离成其组分化合物。
如本文所用，术语“大颗粒柱”或“萃取柱”是指包含平均粒径大于约35μm的色谱柱。如本文所用，术语“约”是指±10％。在优选的实施方式中，该柱包含直径为约60μm的颗粒。
如本文所用，术语“分析柱”是指具有足够色谱板以实现样品中物质分离的色谱柱，该物质从柱上洗脱下来，足以允许确定分析物的存在或量。此类柱通常区别于“萃取柱”，萃取柱具有从非保留物质中分离或萃取保留物质的一般目的，以获得纯化的样品用于进一步分析。如本文所用，术语“约”是指±10％。在优选的实施方式中，分析柱包含直径为约4μm的颗粒。
如本文所用，术语“在线(on-line)”或“线上(inline)”，例如“在线自动化的方式”或“在线萃取”中所用的，是指无需操作员干预而进行的过程。相反，本文所用的术语“离线(off-line)”是指需要操作员手动干预的过程。因此，如果样品进行沉淀，并然后将上清液手动加载到自动进样器中，则沉淀和加载步骤与后续步骤是离线的。在该方法的多种实施方式中，可以以在线自动化的方式进行一个或多个步骤。
如本文所用，术语“质谱法”或“MS”是指通过化合物的质量鉴定化合物的分析技术。MS是指基于离子的质荷比或“m/z”过滤、检测和测量离子的方法。MS技术一般包括(1)电离化合物以形成带电化合物；和(2)检测带电化合物的分子量并计算质荷比。化合物可以通过任何适合的方法被电离和检测。“质谱仪”一般包括电离器和离子检测器。一般地，将一个或多个目标分子电离，并随后将离子引入质谱仪中，在质谱仪中由于磁场和电场的组合，离子沿着空间中的路径，该路径取决于质量(“m”)和电荷(“z”)。参见，例如标题为“MassSpectrometry From Surfaces(表面质谱法)”的美国专利号6,204,500；标题为“Methodsand Apparatus for Tandem Mass Spectrometry(串联质谱法的方法和装置)”的美国专利号6,107,623；标题为“DNA Diagnostics Based On Mass Spectrometry(基于质谱法的DNA诊断)”的美国专利号6,268,144；标题为“Surface-Enhanced Photolabile AttachmentAnd Release For Desorption And Detection Of Analytes(用于分析物解吸和检测的表面增强的光不稳定性附着和释放)”的美国专利号6,124,137；Wright等，Prostate Cancerand Prostatic Diseases 2：264-76(1999)；以及Merchant和Weinberger，Electrophoresis 21：1164-67(2000)。
如本文所用，术语“以负离子模式运行”是指其中产生和检测负离子的那些质谱方法。如本文所用，术语“以正离子模式运行”是指其中产生和检测正离子的那些质谱方法。
如本文所用，术语“电离”或“电离化”是指产生具有等于一个或多个电子单位的净电荷的分析物离子的方法。负离子是那些具有一个或多个电子单位的净负电荷的离子，而正离子是那些具有一个或多个电子单位的净正电荷的离子。
如本文所用，术语“电子电离”或“EI”是指这样的方法，其中气态或气相中目标分析物与电子流相互作用。电子与分析物的撞击产生了分析物离子，然后可以将其进行质谱技术。
如本文所用，术语“化学电离”或“CI”是指这样的方法，其中反应气体(例如氨)经历电子撞击，并且通过反应气体离子与分析物分子的相互作用形成分析物离子。
如本文所用，术语“快原子轰击”或“FAB”是指这样的方法，其中高能原子束(通常为Xe或Ar)撞击非挥发性样品，这解吸和电离样品中包含的分子。将测试样品溶解在粘性液体基质中，例如甘油、硫代甘油、间硝基苄醇、18-冠-6冠醚、2-硝基苯辛醚、环丁砜、二乙醇胺和三乙醇胺。用于化合物或样品的适合基质的选择是一个经验过程。
如本文所用，术语“基质辅助激光解吸电离”或“MALDI”是指这样的方法，其中将非挥发性样品暴露于激光辐照，该方法通过多种电离途径使样品中的分析物解吸和电离，所述电离途径包括光电离、质子化、去质子化和簇衰变。对于MALDI，将样品与能量吸收基质混合，其有助于分析物分子的解吸。
如本文所用，术语“表面增强激光解吸电离”或“SELDI”是指另一种方法，其中将非挥发性样品暴露于激光辐照，该方法通过多种电离途径使样品中的分析物解吸和电离，所述电离途径包括光电离、质子化、去质子化和簇衰变。对于SELDI，样品一般与优先保留一种或多种目标分析物的表面相结合。如同在MALDI中，此方法也可以使用能量吸收物质以促进电离。
如本文所用，术语“电喷雾电离”或“ESI”是指这样的方法，其中溶液沿毛细管的短长度通过，向该毛细管的末端施加高的正或负电势。到达管末端的溶液被汽化(雾化)成溶剂蒸汽中非常小的溶液滴的喷流或喷雾。该液滴雾气流经蒸发室，该蒸发室稍微加热以防止冷凝并蒸发溶剂。随着液滴变小，电表面电荷密度增加，直到同极性电荷之间的自然排斥导致离子以及中性分子被释放时为止。
如本文所用，术语“大气压化学电离”或“APCI”是指类似于ESI的质谱方法；然而，APCI通过离子-分子反应产生离子，该反应在大气压下于等离子体内发生。等离子体通过喷雾毛细管和对电极之间的放电来保持。然后，通常通过使用一组差动泵送撇取器站(differentially pumped skimmer stage)将离子提取到质量分析仪中。干燥和预热的N2气体的逆流可用于改善溶剂的去除。用于分析极性较小的种类时，APCI中的气相电离可以比ESI中的更有效。
如本文所用，术语“大气压光电离”或“APPI”是指质谱法的形式，其中用于分子M光电离的机制是光子吸收和电子喷射以形成分子离子M+。因为光子能一般地刚好在电离势之上，因此分子离子不易解离。在许多情况下，有可能无需色谱法来分析样品，从而节省大量时间和费用。在水蒸气或质子溶剂的存在下，分子离子可以提取H以形成MH+。如果M具有高质子亲和力，则该情况倾向于发生。这不会影响定量准确度，因为M+和MH+的总和是恒定的。质子溶剂中的药物化合物通常以MH+被观察到，而非极性化合物(例如萘或睾酮)通常形成M+。Robb，D.B.，Covey，T.R.和Bruins，A.P.(2000)：参见，例如Robb等，Atmosphericpressure photoionization：An ionization method for liquid chromatography-MassSpectrometry(大气压光电离：用于液相色谱-质谱法的电离方法)，Anal.Chem.72(15)：3653-3659。
如本文所用，术语“电感耦合等离子体”或“ICP”是指这样的方法，其中样品在足够高的温度下与部分电离的气体相互作用，以便大多数元素被原子化和电离。
如本文所用，术语“场解吸”是指这样的方法，其中将非挥发性测试样品放置在电离表面上并且使用强电场产生分析物离子。
如本文所用，术语“解吸”是指从表面去除分析物和/或使分析物进入气相。
如本文中所使用的，术语“量化限”、“定量限”或“LOQ”是指这样的点，在该点测量变得在定量上有意义。在此LOQ处的分析物响应是可鉴别的、离散的且可复现的，具有20％的精密度和80％至120％的准确度。
如本文中所使用的，术语“检测限”或“LOD”是这样的点，在该点测量值大于与其相关联的不确定性。LOD任意限定为距离零浓度的2个标准偏差(SD)。
如本文所用，体液样品中分析物的“量”一般是指反映体液体积中可检测的分析物质量的绝对值。然而，量也考虑与另一个分析物量相比的相对量。例如，体液中分析物量可以是大于或小于正常存在的分析物的对照或正常水平的量。
如本文参考定量测量中所使用的术语“约”是指指示值加或减10％，该定量测量不包括离子质量的测量。质谱仪在确定给定分析物质量方面可略有不同。在离子的质量或离子的质/荷比的上下文中，术语“约”是指+/-0.5原子质量单位。
上面描述的发明内容是非限制性的，并且通过以下的本发明的具体实施方式和所附权利要求，本发明的其他特征和优点将变得显而易见。
附图说明
图1显示了胍基乙酸标准品/校准品的典型色谱图。
图2显示了肌酸标准品/校准品的典型色谱图。
图3显示了肌酐标准品/校准品的典型色谱图。
图4显示了胍基乙酸校准曲线，其包括从0.4至2500mg/L的9个数据点。
图5显示了肌酸校准曲线，其包括从0.4至2500mg/L的9个数据点。
图6显示了肌酐校准曲线，其包括从0.8至5000mg/L的9个数据点。
具体实施方式
脑肌酸缺乏综合症(CCDS)——肌酸代谢的先天性错误——包括两种肌酸生物合成障碍(胍基乙酸甲基转移酶[GAMT]缺乏症和L-精氨酸：甘氨酸脒基转移酶[AGAT或GATM]缺乏症)以及X-连锁肌酸转运蛋白[SLC6A8]缺乏症。所有三种CCDS共同的是智力障碍和癫痫。患有GAMT缺乏症的大多数个体具有行为障碍，其可以包括自闭症行为和自残；相当一部分具有锥体/锥体外发现。发病在三个月和三岁龄之间。受影响的男性中SLC6A8缺乏症的表型范围从轻度智力障碍和言语发展迟缓到严重智力障碍、癫痫和行为障碍，具有2至66岁范围内的诊断年龄。SLC6A8缺乏的杂合女性可能具有学习和行为问题。CCDS的生化诊断依赖于尿液和血浆中胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的测量。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA、肌酸和肌酐；(b)电离样品中的GAA、肌酸和肌酐；(c)通过质谱法检测或确定GAA、肌酸和肌酐离子(一种或多种)的量；其中GAA、肌酸和肌酐离子(一种或多种)的量与样品中GAA、肌酸和肌酐的量有关。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定胍基乙酸(GAA)的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA；(b)电离样品中的GAA；(c)通过质谱法检测或确定GAA离子(一种或多种)的量；其中GAA离子(一种或多种)的量与样品中GAA的量有关。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定肌酸的量，其包括：(a)纯化样品中的GAA、肌酸和肌酐；(b)电离样品中的肌酸；(c)通过质谱法检测或确定肌酸离子(一种或多种)的量；其中肌酸离子(一种或多种)的量与样品中肌酸的量有关。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于检测或确定肌酐的量，其包括：(a)纯化样品中的肌酐；(b)电离样品中的肌酐；(c)通过质谱法检测或确定肌酐离子(一种或多种)的量；其中肌酐离子(一种或多种)的量与样品中肌酐的量有关。
在一些实施方式中，在质谱法之前，胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐是未衍生化的。
在一些实施方式中，样品是尿液或血清或血浆。在优选的实施方式中，样品是尿液。在一些实施方式中，样品是全血。在一些实施方式中，样品是唾液。
在一些实施方式中，本文提供的纯化包括液相色谱法。在一些实施方式中，液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。
在一些实施方式中，本文提供的纯化包括固相萃取(SPE)。
在一些实施方式中，电离包括电喷雾电离(ESI)。在一些实施方式中，电离包括以正模式电离。在一些实施方式中，电离包括以负模式电离。
在一些实施方式中，本文提供的方法进一步包括添加内标。在一些实施方式中，内标是同位素标记的。
在某些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于1mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.9mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.8mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.7mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.6mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.5mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.4mg/L。在一些实施方式中，所述方法的定量限小于或等于0.3mg/L。
在某些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于1mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.9mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.8mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.7mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.6mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.5mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.4mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.3mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.2mg/L。在一些实施方式中，所述方法的检测限小于或等于0.1mg/L。
在一些实施方式中，方法可包括将试剂以足以使样品脱蛋白的量添加到样品中。
适合的测试样品包括可能包含目标分析物的任何测试样品。在一些优选的实施方式中，样品是生物样品；就是说，从任何生物来源例如动物、细胞培养物、器官培养物等获得的样品。在某些优选的实施方式中，样品从哺乳动物例如狗、猫、马等中获得。具体优选的哺乳动物是灵长类动物，最优选为男性或女性人类。具体优选的样品包括血液、血浆、血清、头发、肌肉、尿液、唾液、泪液、脑脊液或其他组织样品。这样的样品可以例如从患者即活着的人(男性或女性)获得，其在临床环境中呈现自身，用于疾病或状况的诊断、预后或治疗。测试样品优选地从患者例如血清中获得。
用于质谱法的样品制备
可用于相对于样品中的其他组分(例如蛋白质)富集分析物的方法包括例如过滤、离心、薄层色谱法(TLC)、包括毛细管电泳在内的电泳、包括免疫亲和分离在内的亲和分离、包括乙酸乙酯萃取和甲醇萃取在内的萃取方法、以及离液剂的使用或上述任意组合等。
蛋白质沉淀是制备测试样品的一种优选方法。这样的蛋白质纯化方法是本领域众所周知的，例如，Polson等，Journal of Chromatography B 785：263-275(2003)，描述了适用于该方法的蛋白质沉淀技术。蛋白质沉淀可用于从样品中去除大部分蛋白质而将分析物留在上清液中。可以离心样品以分离液体上清液与沉淀的蛋白质。然后可以将所得上清液应用于液相色谱法和随后的质谱分析。在某些实施方式中，使用蛋白质沉淀，例如乙腈蛋白质沉淀消除了在HPLC和质谱法之前对高湍流液相色谱法(HTLC)或其他在线萃取的需要。因此，在这样的实施方式中，该方法涉及(1)进行目标样品的蛋白质沉淀；和(2)将上清液直接加载到HPLC质谱仪上，而无需使用在线萃取或高湍流液相色谱法(HTLC)。
在一些优选的实施方式中，HPLC单独或与一种或多种纯化方法组合可在质谱法之前用来纯化分析物。在这样的实施方式中，可以使用捕获分析物的HPLC提取柱(extractioncartridge)提取样品，然后在电离之前在第二HPLC柱上或在分析型HPLC柱上洗脱和色谱分析。因为可以以自动方式关联这些色谱过程中涉及的步骤，所以可以最小化在分析物纯化期间对操作员参与的需求。该特征可以导致时间和成本的节省，并消除操作员出错的机会。
相信湍流例如由HTLC柱和方法提供的湍流，可以提高质量传递速率，这改善了分离特性。HTLC柱借助通过包含硬质颗粒的填充柱的高色谱流速来分离组分。通过采用高流速(例如3-5mL/min)，该柱中产生了湍流，其导致固定相和目标分析物(一种或多种)之间几乎完全的相互作用。使用HTLC柱的优势在于，避免了与生物流体基质相关的大分子堆积，这是因为在湍流条件下不会保留高分子量种类。在一个过程中结合多个分离的HTLC方法减少了冗长的样品制备的需求，并以显著更快的速度运行。此类方法还实现了优于层流(HPLC)色谱法的分离性能。HTLC允许直接注入生物样品(血浆、尿液等)。由于变性蛋白质和其他生物碎片会迅速阻塞分离柱，因此在传统形式的色谱法中很难实现直接注入。HTLC还允许小于1mL的非常低的样品体积，优选地为小于0.5mL，优选地为小于0.2mL，优选为0.1mL。
在其他地方已经描述了在通过质谱分析之前应用于样品制备的HTLC实例。参见，例如，Zimmer等，J.Chromatogr.A 854：23-35(1999)；还参见，美国专利号5,968,367；5,919,368；5,795,469；和5,772,874。在方法的某些实施方式中，在加载到HTLC柱之前，将样品进行如上所述的蛋白质沉淀；在可选的优选实施方式中，样品可以直接加载到HTLC上而不进行蛋白质沉淀。HTLC萃取柱优选是大颗粒柱。在多种实施方式中，可以以在线、自动化方式进行方法的多个步骤之一。例如，在一个实施方式中，以在线、自动化方式进行步骤(i)-(v)。在另一方面，电离和检测步骤在步骤(i)-(v)之后在线进行。
包括高效液相色谱法(HPLC)在内的液相色谱法(LC)依赖于相对缓慢的层流技术。传统的HPLC分析依赖于柱填充，其中通过柱的样品层流是用于将目标分析物与样品分离的基础。技术人员将理解，在这种柱中的分离是扩散过程。HPLC已成功地应用于生物样品中的化合物分离，但是在分离和随后以质谱仪(MS)分析之前，需要显著量的样品制备，这使该技术劳动力密集。此外，大多数HPLC系统没有充分利用质谱仪的完全潜能，只允许一个HPLC系统连接到单个MS仪上，这导致由于进行大量测定造成的冗长时间需求。
已经描述了在质谱法分析之前使用HPLC进行样品净化的多种方法。参见，例如，Taylor等，Therapeutic Drug Monitoring 22：608-12(2000)；和Salm等，Clin.Therapeutics 22Supl.B：B71-B85(2000)。
本领域技术人员可以选择适合与分析物一起使用的HPLC仪和柱。色谱柱通常包括介质(即填充物质)以促进化学部分的分离(即分馏)。介质可以包括微小的颗粒。颗粒包括与多种化学部分相互作用以促进化学部分分离的结合表面。一种适合的结合表面是疏水结合表面，例如烷基结合表面。烷基结合表面可以包括C-4、C-8、C-12或C-18结合烷基基团，优选地为C-18结合基团。色谱柱包括用于接收样品的入口和用于排出包括分馏样品的流出物(effluent)的出口。在一个实施方式中，将样品(或预纯化的样品)在入口处施加到柱，用溶剂或溶剂混合物洗脱，并在出口处排出。可以选择不同的溶剂模式以洗脱目标分析物(一种或多种)。例如，可以使用梯度模式、等度模式或多型(polytyptic)(即混合)模式进行液相色谱法。在色谱法期间，物质的分离通过变量例如洗脱液(也称为“流动相”)的选择、洗脱模式、梯度条件、温度等实现。
在某些实施方式中，可以通过在如下条件下将样品施加到柱来纯化分析物，在该条件下将目标分析物通过柱填充物质可逆地保留，同时不保留一种或多种其他物质。在这些实施方式中，可以使用第一流动相条件，其中目标分析物被柱保留，并且一旦将非保留的物质洗涤通过，可以随后使用第二流动相条件以从柱中移出保留的物质。可选地，可以通过在流动相条件下将样品施加到柱来纯化分析物，在该流动相条件下目标分析物在与一种或多种其他物质相比不同的速率下洗脱。此类过程可以相对于样品的一种或多种其他组分，富集一种或多种目标分析物的量。
在一个优选的实施方式中，在疏水性柱色谱系统上，HTLC之后可以是HPLC。在某些优选的实施方式中，使用来自Cohesive Technologies的基于TurboFlow Cyclone
Figure BDA0002432553500000121
聚合物的柱(粒径为60μm，柱尺寸为50×1.0mm，孔径为
Figure BDA0002432553500000122
)。在相关的优选实施方式中，使用了来自Phenomenex Inc.的Synergi
Figure BDA0002432553500000123
带有亲水性封端的醚连接苯基分析柱(粒径为4μm，柱尺寸为150×2.0mm，孔径为
Figure BDA0002432553500000124
)。在某些优选的实施方式中，使用HPLC级超纯水和100％甲醇作为流动相进行HTLC和HPLC。
通过仔细选择阀门和连接器管道，根据需要可以连接两个或更多个的色谱柱，使得物质从一个色谱柱传递到下一个色谱柱，而无需任何手动步骤。在优选的实施方式中，阀门和管道的选择通过预编程以进行必要步骤的计算机控制。最优选地，色谱系统还以这种在线方式连接至检测器系统，例如MS系统。因此，操作员可以将一托盘样品放在自动进样器中，并且在计算机控制下进行剩余操作，这导致所有选定的样品的纯化和分析。
在某些优选的实施方式中，可以在电离之前纯化样品中的分析物或其片段。在具体优选的实施方式中，色谱法不是气相色谱法。
通过质谱法检测和定量
在多种实施方式中，可以通过技术人员已知的任何方法将分析物或其片段电离。使用质谱仪进行质谱法，质谱仪包括用于离子化分馏样品并创建带电分子以进一步分析的离子源。例如，可以通过电子电离、化学电离、电喷雾电离(ESI)、光子电离、大气压化学电离(APCI)、光电离、大气压光电离(APPI)、快原子轰击(FAB)、液体二次电离(LSI)、基质辅助激光解吸电离(MALDI)、场电离、场解吸、热喷雾/等离子喷雾电离、表面增强激光解吸电离(SELDI)、电感耦合等离子体(ICP)和粒子束电离进行样品电离。技术人员将理解，基于待测量的分析物、样品的类型、检测器的类型、正与负模式的选择等可确定电离方法的选择。
在优选的实施方式中，通过加热电喷雾电离(HESI)以正或负模式将分析物或其片段电离。在可选的实施方式中，通过电喷雾电离(ESI)或大气压化学电离(APCI)以正或负模式将分析物或其片段电离。
在电离样品之后，可以分析由此产生的带正电或带负电的离子以确定质荷比。用于确定质荷比的适合的分析仪包括四极杆分析仪(quadrupole analyzer)、离子阱分析仪和飞行时间分析仪。可以使用数种检测模式检测离子。例如，即，使用选择性离子监测模式(SIM)可以检测选择的离子，或可选地，可以使用例如多种反应监测(MRM)或选择的反应监测(SRM)的扫描模式检测离子。优选地，使用四极杆分析仪确定质荷比。例如，在“四极杆”或“四极离子阱”仪中，振荡的无线射频场中的离子经受与施加在电极之间的直流电势、RF信号的振幅以及质/荷比成比例的力。可以选择电压和振幅，以便只有具有特定质/荷比的离子行进四极杆的长度，而所有其他离子都将偏转。因此，四极杆仪可以充当用于注入仪器中的离子的“质量过滤器”和“质量检测器”二者。
通过采用“串联质谱法”或“MS/MS”增强MS技术的分辨率。在该技术中，可以在MS仪中过滤从目标分子产生的前体离子(也称为母体离子)，和随后将前体离子碎片化以产生一个或多个碎片离子(也称为子体离子或产物离子)，然后其在第二个MS过程中进行分析。通过仔细选择前体离子，只有某些分析物产生的离子传递至碎片化室，在此处与惰性气体原子碰撞产生碎片离子。因为在给定组的电离/碎片化条件下，前体离子和碎片离子二者均以可复现的方式产生，所以MS/MS技术可提供极其强大的分析工具。例如，过滤/碎片化的组合可用于消除干扰物质，并且可能在复杂的样品(例如生物样品)中尤其有用。
质谱仪通常为用户提供离子扫描；也就是说，在给定范围内(例如100至1000amu)具有具体质/荷的每个离子的相对丰度。通过本领域已知的多种方法分析物测定的结果即质谱可以与原始样品中的分析物量有关。例如，假设取样和分析参数被仔细控制，则可以将给定离子的相对丰度与将该相对丰度转换为原始分子绝对量的表格进行比较。可选地，可以将分子标准品与样品一起运行，并基于那些标准品产生的离子构建标准曲线。使用这样的标准曲线，给定离子的相对丰度可以转换为原始分子的绝对量。在某些优选的实施方式中，使用内标以产生用于计算分析物数量的标准曲线。产生和使用这种标准曲线的方法在本领域中是众所周知的，并且本领域的普通技术人员能够选择适当的内标。例如，可以使用分析物的同位素作为内标。对于本领域普通技术人员来说，用于将离子的量与原始分子的量相关联的许多其他方法是众所周知的。
所述方法的一个或多个步骤可以使用自动化机器进行。在某些实施方式中，在线进行一个或多个纯化步骤，并且更优选地，可以以在线方式进行所有纯化和质谱法步骤。
在某些实施方式中，例如MS/MS，其中前体离子被分离用于进一步碎片化，碰撞活化解离通常用来产生碎片离子以进一步检测。在CAD中，前体离子通过与惰性气体碰撞获得能量，并然后通过被称为“单分子分解”的过程碎片化。必须在前体离子中沉积足够的能量，以使离子中的某些键由于增加的振动能而断裂。
在具体优选的实施方式中，如下使用MS/MS检测和/或定量分析物。样品进行液相色谱，优选是HPLC，来自色谱柱的液体溶剂流进入MS/MS分析仪的加热的雾化器接口，并且溶剂/分析物混合物在接口的加热管中转化为蒸气。通过选择的离子发生器将分析物电离。离子例如前体离子穿过仪器的孔并进入第一个四极杆。四极杆1和3(Q1和Q3)是质量过滤器，其允许基于离子(即“前体”和“碎片”离子)的质荷比(m/z)选择离子。四极杆2(Q2)是碰撞室，在其中离子被碎片化。质谱仪的第一个四极杆(Q1)选择具有分析物的质/荷比的分子。允许具有正确分析物的质/荷比的前体离子传递到碰撞室(Q2)，同时具有任何其他质/荷比的不需要的离子碰撞该四极杆的侧面并被消除。进入Q2的前体离子与中性氩气分子碰撞并碎片化。此方法称为碰撞活化解离(CAD)。产生的碎片离子被传递到四极杆3(Q3)中，在此处选择分析物的碎片离子，而其他离子则被消除。
该方法可涉及以正离子或负离子模式进行的MS/MS。使用本领域中众所周知的标准方法，本领域的普通技术人员能够鉴定可用于在四极杆3(Q3)中选择的分析物具体前体离子的一个或多个碎片离子。
如果分析物的前体离子包括醇或胺基团，则通常形成碎片离子，其分别表示前体离子的脱水或脱氨。在前体离子包括醇基团的情况下，这种通过脱水形成的碎片离子是由前体离子损失一个或多个水分子造成的(即，其中前体离子与碎片离子之间的质荷比差异对一个水分子的损失约为18；或对两个水分子的损失约为36等)。在前体离子包括胺基团的情况下，这种通过脱氨形成的碎片离子是由一个或多个氨分子的损失造成的(即，其中前体离子与碎片离子之间的质荷比的差异是一个氨分子的损失约为17，或两个氨分子的损失约为34等等)。同样地，包括一个或多个醇和胺基团的前体离子通常形成这样的碎片离子，其表示一个或多个水分子和/或一个或多个氨分子的损失(即，前体离子和碎片离子之间的质荷比差异对一个水分子的损失和一个氨分子的损失约为35)。一般地，代表前体离子脱水或脱氨的碎片离子不是用于具体分析物的特定碎片离子。因此，在本发明的优选实施方式中，进行MS/MS，致使至少一个分析物的碎片离子被检测到，其不代表由前体离子仅一个或多个水分子的损失和/或一个或多个氨分子的损失。
当离子与检测器碰撞时，它们产生电子脉冲，该电子脉冲被转换为数字信号。所获取的数据被中继到计算机，该计算机绘制所收集的离子数与时间的图。所得的质谱图类似于传统HPLC方法中生成的色谱图。测量对应于具体离子的峰下面积或此类峰的振幅，并且将该面积或振幅与目标分析物的量相关联。在某些实施方式中，测量碎片离子(一种或多种)和/或前体离子的曲线下面积或峰振幅以确定分析物的量。如上所述，可以使用基于分子内标的一个或多个离子的峰的校准标准曲线，将给定离子的相对丰度转换为原始分析物的绝对量。
以下实施例用于说明本发明。这些实施例绝不旨在限制方法的范围。
实施例
实施例1：通过质谱法检测和定量GAA、肌酸和肌酐
通过用超纯水将尿液稀释1:50倍来制备样品。使用的最小样品量为100μL。稀释后，以内标混合物(氘标记的肌酐、C13标记的胍基乙酸)加标样品并混合。使用反相柱(反相BDS 250×4.6mm)将稀释的样品混合物注入到Agilent 1200系列HPLC系统中。HPLC流动相：0.1％甲酸/乙腈。
使用Agilent 6410三重四极杆质谱仪通过正电喷雾电离进行分析。运行时间为10分钟。
校准曲线显示出再现性和线性的一致性。该方法对胍基乙酸和肌酸提供0.4-2500mg/L范围内的线性结果，对于肌酐提供0.8-5000mg/L范围内的线性结果。对于胍基乙酸和肌酐的定量下限为0.3mg/L，对于肌酸的定量下限为0.4mg/L。25-500mg/L下对于胍基乙酸的批间变异系数为8.1至4.7％，25-500mg/L下对于肌酸的批间变异系数为9.9至6.1％，120-2300mg/L下对于肌酐的批间变异系数为1.8至4.1％。
表1：定量限和加标回收率研究
Figure BDA0002432553500000151
表2：胍基乙酸批内和批间精密度和准确度
Figure BDA0002432553500000161
加标物质的理论浓度：低、中和高分别为25、100和500mg/L。
表3：肌酸批内和批间精密度和准确度
Figure BDA0002432553500000162
加标物质的理论浓度：低、中和高分别为25、100和500mg/L。
表4：肌酐批内和批间精密度和准确度
Figure BDA0002432553500000171
加标物质的理论浓度：低、中和高分别为125、750和2500mg/L。
精密度/灵敏度/范围
Figure BDA0002432553500000172
Figure BDA0002432553500000181
对尿液中这三种分析物的测量允许对CCDS的生化诊断。以非常简单的样品制备方法，直接测量尿液中所有三种分析物的能力相比以前包括衍生化和间接计算的方法得以改善。
本文中提到或引用的文章、专利和专利申请以及所有其他文件和电子可得到的信息的内容以其全部内容通过引用并入本文至这样的程度，如同每一单独的出版物被明确且单独地表明通过引用并入。申请人保留将任何和所有来自这些文章、专利、专利申请或其他物理和电子文件的物质和信息物理上并入本申请的权利。
本文说明性描述的方法可在本文没有明确公开的任何一个或多个要素、一个或多个限制不存在的情况下合适地实践。因此，例如，术语“包括(comprising)”、“包含(including)”、“含有(containing)”等应当广义且非限制性地理解。此外，本文所用的术语和表述已经作为描述性术语而非限制性术语使用，并且没有意图使用这种将所示和所述特征的任何等价形式或其部分排除的术语和表述。应当认识到在所要求保护的发明范围内各种改变是可能的。因此，应当理解，尽管本发明通过优选的实施方式和任选特征具体地公开，但是本领域普通技术人员可采取本文公开的其中具体实施的本发明的改变和变化，并且这种改变和变化被认为在本发明的范围内。
本发明在本文中已经作了广泛且一般性的描述。落入一般公开内容中的每一个较窄类别和亚组分组也构成了所述方法的部分。这包括本方法的一般描述，条件或者否定性的限制是从种类中去除了任何主题内容，无论排除的物质是否在本文中明确描述。
其他实施方式在所附权利要求之内。此外，在所述方法的特征或方面按照马库什组进行描述的情况下，本领域普通技术人员应认识到本发明也因此按照马库什组的任何单个成员或成员亚组进行描述。

Claims (18)

1.一种用于检测或确定胍基乙酸(GAA)、肌酸和肌酐的量的方法，其包括：
(a)纯化样品中的GAA、肌酸和肌酐；
(b)电离所述样品中的GAA、肌酸和肌酐，以产生GAA、肌酸和肌酐的一种或多种离子；
(c)通过质谱法检测来自步骤(b)的所述离子(一种或多种)；
其中所述GAA、肌酸和肌酐离子(一种或多种)的量与所述样品中所述GAA、肌酸和肌酐的量有关。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述纯化包括液相色谱法。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述液相色谱法包括高效液相色谱法(HPLC)。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述GAA、肌酸和肌酐是未衍生化的。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离包括电喷雾电离(ESI)。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离包括以正模式电离。
7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括添加内标。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述内标是同位素标记的。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是尿液。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是血清。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法的定量限小于或等于0.4mg/L。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法的定量限小于或等于0.3mg/L。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离包括产生质/荷比为118.1±0.5的胍基乙酸(GAA)前体离子。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述方法进一步包括产生质/荷比为72.1±0.5的一种或多种碎片离子。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离包括产生质/荷比为132.1±0.5的肌酸前体离子。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述方法进一步包括产生质/荷比为90.1±0.5的一种或多种碎片离子。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述电离包括产生质/荷比为114.1±0.5的肌酐前体离子。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述方法进一步包括产生质/荷比为44.1±0.5的一种或多种碎片离子。
CN201880063889.4A 2017-08-14 2018-08-08 通过质谱法检测和定量胍基乙酸、肌酸和肌酐 Pending CN111148993A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762545349P 2017-08-14 2017-08-14
US62/545,349 2017-08-14
PCT/US2018/045790 WO2019036255A1 (en) 2017-08-14 2018-08-08 DETECTION AND QUANTIFICATION OF GUANIDINOACETATE, CREATIN AND CRÉATININE BY MASS SPECTROMETRY

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111148993A true CN111148993A (zh) 2020-05-12

Family

ID=65362438

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880063889.4A Pending CN111148993A (zh) 2017-08-14 2018-08-08 通过质谱法检测和定量胍基乙酸、肌酸和肌酐

Country Status (8)

Country Link
US (2) US11860141B2 (zh)
EP (2) EP4310505A3 (zh)
JP (1) JP7203086B2 (zh)
CN (1) CN111148993A (zh)
BR (1) BR112020003057A2 (zh)
CA (1) CA3073026A1 (zh)
MX (1) MX2020001830A (zh)
WO (1) WO2019036255A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112162028A (zh) * 2020-09-29 2021-01-01 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种用于草莓组织中维生素c的质谱成像方法
CN115290770A (zh) * 2022-07-07 2022-11-04 北京君德同创生物技术股份有限公司 一种胍基乙酸含量的测定方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11860141B2 (en) * 2017-08-14 2024-01-02 Quest Diagnostics Investments Llc Detection and quantitation of guanidinoacetate, creatine, and creatinine by mass spectrometry
CN112881565B (zh) * 2021-03-05 2022-09-13 山东新华制药股份有限公司 三苯双脒有关物质的hplc检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120220493A1 (en) * 2009-10-21 2012-08-30 Pronota N.V. Biomarker for diagnosis, prediction and/or prognosis of acute heart failure and uses thereof
CN102980968A (zh) * 2012-12-29 2013-03-20 国家烟草质量监督检验中心 一种尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5605798A (en) 1993-01-07 1997-02-25 Sequenom, Inc. DNA diagnostic based on mass spectrometry
ATE242485T1 (de) 1993-05-28 2003-06-15 Baylor College Medicine Verfahren und massenspektrometer zur desorption und ionisierung von analyten
US5772874A (en) 1995-11-02 1998-06-30 Cohesive Technologies, Inc. High performance liquid chromatography method and apparatus
CA2242885C (en) 1996-01-19 2006-08-15 Cohesive Technologies, Inc. High performance liquid chromatography method and apparatus
GB9717926D0 (en) 1997-08-22 1997-10-29 Micromass Ltd Methods and apparatus for tandem mass spectrometry
EP1050065A4 (en) 1998-01-23 2004-03-31 Analytica Of Branford Inc SURFACES MASS
CN1226619C (zh) 2003-03-20 2005-11-09 华中科技大学同济医学院附属同济医院 滤纸片气相色谱－质谱分析检测尿有机酸/氨基酸代谢产物的方法
JP5662182B2 (ja) 2010-02-08 2015-01-28 地方独立行政法人神奈川県立病院機構 生体試料中のアミンの測定方法およびその方法を用いる患者のスクリーニング方法
US11860141B2 (en) * 2017-08-14 2024-01-02 Quest Diagnostics Investments Llc Detection and quantitation of guanidinoacetate, creatine, and creatinine by mass spectrometry

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120220493A1 (en) * 2009-10-21 2012-08-30 Pronota N.V. Biomarker for diagnosis, prediction and/or prognosis of acute heart failure and uses thereof
CN102980968A (zh) * 2012-12-29 2013-03-20 国家烟草质量监督检验中心 一种尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法

Non-Patent Citations (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ÁNGEL BARÓN-SOLA ET AL: "First evidence of accumulation in cyanobacteria of guanidinoacetate, a precursor of the toxin cylindrospermopsin", CHEMOSPHERE, vol. 119, pages 1099 - 1104, XP029110022, DOI: 10.1016/j.chemosphere.2014.08.046 *
CHRISTIANE AURAY-BLAIS ET AL: "High-throughput tandem mass spectrometry multiplex analysis for newborn urinary screening of creatine synthesis and transport disorders,Triple H syndrome and OTC deficiency", 《CLINICA CHIMICA ACTA》 *
CHRISTIANE AURAY-BLAIS ET AL: "High-throughput tandem mass spectrometry multiplex analysis for newborn urinary screening of creatine synthesis and transport disorders,Triple H syndrome and OTC deficiency", 《CLINICA CHIMICA ACTA》, vol. 436, 6 June 2014 (2014-06-06), pages 249 - 255, XP029016166, DOI: 10.1016/j.cca.2014.05.024 *
CLAUDIA CARDUCCI ET AL: "Quantitative determination of guanidinoacetate and creatine in dried blood spot by flow injection analysis-electrospray tandem mass spectrometry", 《CLINICA CHIMICA ACTA》 *
CLAUDIA CARDUCCI ET AL: "Quantitative determination of guanidinoacetate and creatine in dried blood spot by flow injection analysis-electrospray tandem mass spectrometry", 《CLINICA CHIMICA ACTA》, vol. 364, 28 September 2005 (2005-09-28), pages 180 - 187 *
DOROTHEA HAAS ET AL: "Diagnosis and therapeutic monitoring of inborn errors of creatine metabolism and transport using liquid chromatography–tandem mass spectrometry in urine, plasma and CSF", 《GENE》 *
DOROTHEA HAAS ET AL: "Diagnosis and therapeutic monitoring of inborn errors of creatine metabolism and transport using liquid chromatography–tandem mass spectrometry in urine, plasma and CSF", 《GENE》, vol. 538, 15 January 2014 (2014-01-15), pages 188 - 194, XP028614868, DOI: 10.1016/j.gene.2014.01.019 *
MASAHARU YASUDA ET AL: "Simultaneous Determination of Creatinine, Creatine, and Guanidinoacetic Acid in Human Serum and Urine Using Liquid Chromatography – Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mass Spectrometry", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》 *
MASAHARU YASUDA ET AL: "Simultaneous Determination of Creatinine, Creatine, and Guanidinoacetic Acid in Human Serum and Urine Using Liquid Chromatography – Atmospheric Pressure Chemical Ionization Mass Spectrometry", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》, vol. 253, 31 December 1997 (1997-12-31), pages 231 - 235 *
R S CARLING ET AL: "Simultaneous determination of guanidinoacetate, creatine and creatinine in urine and plasma by un-derivatized liquid chromatography-tandem mass spectrometry", 《ANNALS OF CLINICAL BIOCHEMISTRY》 *
R S CARLING ET AL: "Simultaneous determination of guanidinoacetate, creatine and creatinine in urine and plasma by un-derivatized liquid chromatography-tandem mass spectrometry", 《ANNALS OF CLINICAL BIOCHEMISTRY》, vol. 45, 31 December 2008 (2008-12-31), pages 575 - 584, XP055571675, DOI: 10.1258/acb.2008.008029 *
R S CARLING ET AL: "Simultaneous determination of guanidinoacetate, creatine and creatinine in urine and plasma by un-derivatized liquid chromatography-tandem mass spectrometry", ANNALS OF CLINICAL BIOCHEMISTRY, vol. 45, pages 575 - 584, XP055571675, DOI: 10.1258/acb.2008.008029 *
SARA BOENZI ET AL: "Simultaneous determination of creatine and guanidinoacetate in plasma by liquid chromatography–tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
SARA BOENZI ET AL: "Simultaneous determination of creatine and guanidinoacetate in plasma by liquid chromatography–tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》, vol. 56, 16 June 2011 (2011-06-16), pages 792 - 798 *
SARAH YOUNG ET AL: "Quantification of Creatine and Guanidinoacetate Using GC-MS and LC-MS/MS for the Detection of Cerebral Creatine Deficiency Syndromes", 《CURRENT PROTOCOLS IN HUMAN GENETICS》 *
SARAH YOUNG ET AL: "Quantification of Creatine and Guanidinoacetate Using GC-MS and LC-MS/MS for the Detection of Cerebral Creatine Deficiency Syndromes", 《CURRENT PROTOCOLS IN HUMAN GENETICS》, 31 July 2007 (2007-07-31), pages 1 - 17 *
戴新华 等: "血清中肌酐的液相色谱-同位素稀释质谱法测定", 《分析测试学报》 *
戴新华 等: "血清中肌酐的液相色谱-同位素稀释质谱法测定", 《分析测试学报》, vol. 27, 30 November 2008 (2008-11-30), pages 39 - 41 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112162028A (zh) * 2020-09-29 2021-01-01 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种用于草莓组织中维生素c的质谱成像方法
CN115290770A (zh) * 2022-07-07 2022-11-04 北京君德同创生物技术股份有限公司 一种胍基乙酸含量的测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP7203086B2 (ja) 2023-01-12
US20190170711A1 (en) 2019-06-06
WO2019036255A1 (en) 2019-02-21
JP2020530904A (ja) 2020-10-29
EP4310505A2 (en) 2024-01-24
EP3669186A1 (en) 2020-06-24
CA3073026A1 (en) 2019-02-21
US20240085386A1 (en) 2024-03-14
EP3669186B1 (en) 2023-12-13
US11860141B2 (en) 2024-01-02
BR112020003057A2 (pt) 2020-08-25
EP4310505A3 (en) 2024-04-10
MX2020001830A (es) 2020-08-17
EP3669186A4 (en) 2021-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11879900B2 (en) Mass spectrometric quantitation assay for metabolites of leflunomide
EP3296740B1 (en) Methods for detecting reverse triiodothyronine by mass spectrometry
EP3757222A1 (en) Methods for detecting estrone by mass spectrometry
US20200182855A1 (en) Vitamin b2 detection by mass spectrometry
US20240085386A1 (en) Detection and quantitation of guanidinoacetate, creatine, and creatinine by mass spectrometry
US11624737B2 (en) Methods for detecting lacosamide by mass spectrometry
CN111148998B (zh) 通过质谱法进行的载脂蛋白e同种型检测
EP3765858A1 (en) Methods for detecting chromogranin a by mass spectrometry

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination