CN102119961A - 一种复方丹参滴丸的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种复方丹参滴丸的检测方法，该方法包括以下内容：性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定，本发明的检测方法，包括对药物成分三七的鉴别方法，所述方法采用薄层层析法，参照物选用三七对照药材、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品；本发明的检测方法，还包括对药物成分丹参的鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法采用亚2μm液相色谱技术进行色谱指纹图谱鉴别，参照物选用丹参素钠，含量测定方法用亚2μm液相色谱技术对丹参中的成分丹参素，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1进行含量测定。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及复方丹参滴丸的检测方法。
背景技术
复方丹参滴丸是由丹参、三七及冰片等药味组成的复方制剂，具有活血化瘀、理气止痛的功效。现质量标准收载在《中国药典》2005年版一部中检测的内容如下：
表1
现有复方丹参滴丸存在质量控制方法简单，产品质量不易控制的缺点，从而将影响产品的生产和保证质量。
为有效控制产品质量，我们建立了本发明的质量控制方法，该方法对君药-丹参采用亚2μm液相色谱技术方法，以丹参素为定量及参照物指标，制订了丹参的定量及色谱指纹图谱鉴别方法；同时修改了三七薄层鉴别方法，增加三七成分的定量方法。
发明内容
本发明提供的是针对复方丹参滴丸的质量控制方法，本发明所述质量控制方法可包括以下内容：性状的观察，内容物的鉴别，内容物的检查，指纹图谱比较，对含有的成分进行含量测定，因此，本发明的质量控制方法其主要的内容是对复方丹参滴丸的成分进行检测。该方法可以更加准确的把握有关药品的质量，降低用药风险，提高产品质量。
本发明提供一种复方丹参滴丸的检测方法，本发明的检测方法，包括对药物成分三七的鉴别方法，所述方法采用薄层层析法，参照物选用三七对照药材、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品。
本发明的检测方法，还包括对药物成分丹参的鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法采用亚2μm液相色谱技术进行色谱指纹图谱鉴别，参照物选用丹参素钠，含量测定方法用亚2μm液相色谱技术对丹参中的成分丹参素，三七皂苷R1，人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1进行含量测定。
本发明的检测方法，还包括对药物成分三七的含量测定方法，
本发明的检测方法，其中各种数据均为实验获得，在实际操作过程中会有误差，该误差在±20％以内均可，因此本发明的方法中的数值为在本发明记载的数值基础上±20％以内。
任何人在±20％以内使用本发明的数值均落在本发明范围内。
本发明的检测方法，其中的三七的鉴别方法采用薄层色谱法，以三七为对照药材，鉴别处方中三七，具体步骤如下：
供试品溶液的制备：取本品20丸，置离心管中，加入稀氨溶液(8ml→100ml)9ml，超声处理使溶解，离心，取上清液，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为0.7cm，柱高为5cm)，用水15ml洗脱，弃去水洗脱液，再用甲醇洗脱，弃去初洗脱液约0.4ml，收集续洗脱液约5ml，浓缩至约2ml，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：取三七对照药材(批号：120941-200405)0.5g，置离心管中，加入稀氨溶液(8ml→100ml)9ml，超声处理15分钟，离心，取上清液，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为0.7cm，柱高为5cm)，用水15ml洗脱，弃去水洗脱液，再用甲醇洗脱，弃去初洗脱液约0.4ml，收集续洗脱液约5ml，作为对照药材溶液。
对照品溶液的制备：分别精密称取三七皂苷R1对照品(批号：110745-200415)、人参皂苷Rb1对照品(批号：110704-200420)、人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-200424)、人参皂苷Re对照品(批号：110754-200421)，加甲醇制成每1ml分别含1mg、0.5mg、0.5mg、0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。
阴性供试品溶液的制备：按处方制备缺三七阴性滴丸，取阴性样品20丸，置离心管中，加入稀氨溶液(8ml→100ml)9ml，超声处理使溶解，按照供试品项下的方法自“离心，取上清液”开始提取制备，作为阴性对照溶液。
薄层条件：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液4～8μl、阴性供试品溶液2μl、对照药材溶液2μl，对照品溶液2μl分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)5～10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开12cm以上，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。
本发明的检测方法，其中的丹参的鉴别方法，采用丹参的指纹图谱比较法，
所述指纹图谱比较法包括以下步骤
步骤1、制定标准对照指纹图谱；
步骤2、测定制剂的指纹图谱；
步骤3、将标准对照指纹图谱和制剂的指纹图谱进行比较。
比较可用目测，也可采用计算软件比较，供试品指纹图谱与标准品对照指纹图谱相似度大于0.80为合格，优选0.90，更优选0.95。
所述采用计算软件比较，是采用由国家药典委员会提供的一种中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，属于已知操作法。
本发明的指纹图谱比较法具体步骤如下：
色谱条件与系统适用性试验Waters Acquity UPLCTM HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)色谱柱，以含0.02％(ml/ml)磷酸的80％乙腈为流动相A；以0.02％(ml/ml)的磷酸水溶液为流动相B，按流动相梯度洗脱表进行洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温40℃；记录时间为10分钟，理论板数按丹参素峰计算应不低于8000。
流动相梯度洗脱参照表：
表2
对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含0.16mg的溶液(相当于每1ml含丹参素0.144mg)，即得。
复方丹参滴丸供试品溶液的制备取本品10丸，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理(功率120W，频率40kHz)15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl～4μl注入液相色谱仪，测定。
复方丹参滴丸供试品色谱图与对照指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，相似度应不低于0.9。
本发明的检测方法，其中的含量测定方法包括对丹参中丹参素的含量进行测定，其以丹参素为定量指标，采用亚2μm液相色谱技术，测定处方中丹参素含量，本品每丸含丹参以丹参素(C9H10O5)计，不得少于0.10mg，其具体步骤与丹参的指纹图谱相同，完成指纹图谱与含量测定同时检测。
本发明的检测方法，其中的含量测定方法包括对三七中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量进行测定，具体步骤如下：
色谱条件及系统适用性试验Waters Aqucity UPLCTM BEH Shield RP18(2.1×100mm，1.7μm)色谱柱，以水溶液为流动相A；以乙腈溶液为流动相B，按流动相梯度洗脱参考表进行洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为203nm；柱温40℃；记录时间为16分钟，理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于8000。
流动相梯度洗脱参照表
表3
对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备取复方丹参滴丸10丸，精密称定，加4％氨水5ml，超声使溶解，溶液全部通过预处理好的C-18小柱(80-100目1.0g，甲醇20ml、水20ml活化)，并用水洗至中性，再用甲醇洗脱至5ml容量瓶中，定容至刻度，用0.22μm有机滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定，用外标法计算含量，本品含三七以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1总量计，每丸不低于0.10mg。
本发明的优点是：质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性均好，确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控”。使该药物生产标准化，达到疗效确切，质量稳定，工艺先进合理的目的。
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步叙述，以使公众对发明内容有更深入的了解，并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所进行的任何本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。
附图说明
图1为丹参对照指纹图谱。
具体实施方式
实施例1：
复方丹参滴丸指纹图谱分析方法的建立
液相色谱仪：Waters超高效液相色谱仪(UPLC)
Agilent快速高分离液相色谱仪(RRLC)
Shimadzu超快速液相色谱仪(UFLC)
以上三种液相色谱仪采用的是亚2μm液相色谱技术，其与普通的HPLC具有相同理论及原理，所不同的亚2μm液相色谱涵盖了小颗粒填料、低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量，使其灵敏度更高，理论塔板数更高，分离效果更好，出峰时间更短，同时减少有毒溶剂的使用量，更有利于环保。选择亚2μm液相色谱技术开发指纹图谱与含量测定的条件，能更简便、快速及准确的控制产品的质量。
供试品溶液的制备
复方丹参滴丸供试品的制备精密称取复方丹参滴丸10丸，至10mL容量瓶中，加水适量，超声使溶解，定容至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得。
色谱方法的确定
(1)流动相组成的选择
实验比较了甲醇-水、乙腈-乙酸-水、乙腈-水、乙腈-磷酸-水等不同流动相体系，
试验结果表明：甲醇-水流动相体系的洗脱能力不佳，且甲醇-水体系产生的系统压力较高；乙腈-水流动相体系下的色谱峰拖尾，在体系中加入酸可以明显改善峰形，避免拖尾；最终选择了分离效果较好的乙腈-磷酸-水系统作为样品分离的流动相。
(2)检测波长的选择
建立的UPLC方法主要控制丹参中酚酸类的水溶性成分，酚酸类成分由具有较强的紫外吸收。样品的紫外全波长扫描图谱，酚酸类成分有较280nm处的有较强的吸收，因此选择280nm作为检测波长。
(3)洗脱梯度的选择
采用上述选定的流动相，在柱温30℃下，以含0.02％(ml/ml)磷酸的80％乙腈为流动相A，以0.02％(ml/ml)的磷酸水溶液为流动相B，分别使用不同比例的等度条件(30％A、50％A)与梯度条件(0～20min 5～100％A)进行洗脱。实验结果表明，梯度洗脱能有效提高色谱的分离能力。
通过优化最终确定了梯度条件
(4)柱温条件的选择
在流动相梯度条件和进样条件相同的情况下，分别选定柱温条件为30℃，35℃，40℃，考察柱温的变化对复方丹参滴丸指纹图谱的影响。结果表明谱峰保留时间随柱温的改变成一定的规律，谱峰保留时间随柱温的升高而减小，对色谱峰的分离度影响不大，最终选择柱温为40℃，从而减小系统压力。
(5)色谱柱的选择
不同型号或批号的色谱柱是指纹图谱的主要影响因素之一。实验中共对4根色谱柱进行了考察，各色谱柱型号见表4。同一台仪器上，使用这4根色谱柱分别对同一批(20090106)复方丹参滴丸样品进行分析。色谱柱1对于色谱峰的分离效果不佳；色谱柱2峰形较差。最终确定丹参指纹图谱所使用的色谱柱为：Acquity UPLCTM HSST3(2.1×100mm，1.8μm)。
表4试验选用的色谱柱及其型号
(6)分析仪器的选择
在相同试验条件下，不同色谱仪器系统对样品的分析结果可能也会有所影响。实验中，采用1批复方丹参滴丸供试品溶液在其它实验条件均相同的情况下，考察不同仪器对指纹图谱分析结果的影响。在其它实验条件均相同的情况下，Agilent和Waters及岛津三种系统对谱峰分离及整体谱图情况影响较小，对保留时间影响较大，但通过相似度评价软件的校正，不影响相似度的计算，表5给出了采用不同仪器分析得到的复方丹参滴丸HPLC指纹图谱的相似度计算结果。
表5不同仪器得到的复方丹参滴丸指纹图谱相似度比较
(7)检测器带宽的选择
在色谱仪的二极管阵列检测器参数设置中，除了选择检测波长外，还要选择带宽，在其他色谱条件不变的情况下，考察了在1.2，2.4，3.6，4.8，7.2，9.6nm带宽条件下的色谱图，结果带宽的选择对结果没有影响。综合考虑确定带宽为3.6nm。
(8)进样量的选择
制备一份丹参样品溶液，分别进样1μl、2μl和4μl，通过直观比较发现，进样量1μl时各峰面积吸收值低。从进样精密度及不同仪器色谱峰的响应值等方面综合考虑，最终选定进样量为2～4μl。
复方丹参滴丸供试品制备方法确定
分别以水、50％甲醇、甲醇、50％乙腈、乙腈、50％乙醇、乙醇作为溶剂，按前述方法制备样品，结果发现采用甲醇、乙腈和乙醇为溶剂时不能完全溶解样品，而在其它溶剂条件下，样品均能完全溶解。根据观察分析得到的图谱，发现以水、50％甲醇、50％乙腈和50％乙醇为溶剂时，所测得的谱图基本一致，由于以水为溶剂制样更加方便，所以最终采用水为制样溶剂。
另外，在室温下以水为溶剂，按前述方法制备样品，设定超声时间分别为5min、10min、15min、20min和30min，结果所有样品均能溶解，而且测得的谱图基本一致，说明只要能使复方丹参滴丸样品完全溶解，在一定的超声时间范围内，样品不会受到破坏，谱图变化不大。最终选定的超声时间为15min。
复方丹参滴丸指纹图谱测定方法
色谱条件与系统适用性试验Waters Acquity UPLCTM HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)色谱柱，以含0.02％(ml/ml)磷酸的80％乙腈为流动相A；以0.02％(ml/ml)的磷酸水溶液为流动相B，按流动相梯度洗脱表进行洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温40℃；记录时间为10分钟，理论板数按丹参素峰计算应不低于8000。
流动相梯度洗脱参照表：
表6
对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含0.16mg的溶液(相当于每1ml含丹参素0.144mg)，即得。
复方丹参滴丸供试品溶液的制备取本品10丸，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理(功率120W，频率40kHz)15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl～4μl注入液相色谱仪，测定。
实施例2
采用薄层色谱法，以三七为对照药材，鉴别处方中三七。
供试品溶液的制备：取本品20丸，置离心管中，加入稀氨溶液(8ml→100ml)9ml，超声处理使溶解，离心，取上清液，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为0.7cm，柱高为5cm)，用水15ml洗脱，弃去水洗脱液，再用甲醇洗脱，弃去初洗脱液约0.4ml，收集续洗脱液约5ml，浓缩至约2ml，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：取三七对照药材(批号：120941-200405)0.5g，置离心管中，加入稀氨溶液(8ml→100ml)9ml，超声处理15分钟，离心，取上清液，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为0.7cm，柱高为5cm)，用水15ml洗脱，弃去水洗脱液，再用甲醇洗脱，弃去初洗脱液约0.4ml，收集续洗脱液约5ml，作为对照药材溶液。
对照品溶液的制备：分别精密称取三七皂苷R1对照品(批号：110745-200415)、人参皂苷Rb1对照品(批号：110704-200420)、人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-200424)、人参皂苷Re对照品(批号：110754-200421)，加甲醇制成每1ml分别含1mg、0.5mg、0.5mg、0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。
阴性供试品溶液的制备：按处方制备缺三七阴性滴丸，取阴性样品20丸，置离心管中，加入稀氨溶液(8ml→100ml)9ml，超声处理使溶解，按照供试品项下的方法自“离心，取上清液”开始提取制备，作为阴性对照溶液。
薄层条件：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液4～8μl、阴性供试品溶液2μl、对照药材溶液2μl，对照品溶液2μl分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)5～10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开12cm以上，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。试验中，将显色后的薄层板分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，阴性样品均无干扰，三批样品均符合规定。因此，在结果的判定上，将显色后的薄层板分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视亦作为判定依据。
耐用性试验
两种薄层板的比较：分别采用高效硅胶G板(烟台市化学工业研究所)、硅胶G板-铝板(Merck)，按色谱条件点样、展开12cm以上、显色后分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。
温度、湿度的比较：采用高效硅胶G板(烟台市化学工业研究所)，按色谱条件点样、分别在展开、显色后分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。
结果上述不同条件，对本项试验基本无影响。
实施例3
丹参素含量测定
丹参素的含量测定方法：
同指纹图谱鉴别方法，以丹参素为定量指标，采用亚2μm液相色谱技术，测定处方中丹参素含量。
仪器与试药
仪器：Waters ACQUITY超高效液相色谱仪(UPLC)
对照品：丹参素钠对照品：中国药品生物制品检定所，批号：110855-200608
样品：复方丹参滴丸由天津天士力制药股份有限公司提供(批号为20080705、090201，090202，090203，090204，090205，090206，090207，090208，090209，090210)。
乙腈：(色谱纯)德国Merck公司，批号：I409030804
磷酸：(分析纯)天津市化学试剂二厂，批号：070406
阴性样品溶液的制备
按处方配比，取除丹参外的其他药材，按复方丹参滴丸的工艺方法，制得阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。在与丹参素对照品色谱峰相对应的保留时间处，无色谱峰出现，阴性样品溶液无干扰。
标准曲线的制定
丹参素钠对照品溶液的配制：精密称取丹参素钠对照品(五氧化二磷真空干燥12h以上)42.45mg置50ml量瓶内，加75％甲醇适量，超声溶解，放冷，定容，制成浓度为0.78mg·ml-1的对照品储备溶液。
标准曲线：精密吸取对照品溶液适量，分别用75％甲醇配制成浓度为0.0382、0.0764、0.2292、0.3821、0.4585、0.6113、0.7641mg·ml-1的丹参素对照品溶液，各吸取2μL注入液相色谱仪中，测定峰面积。以丹参素钠进样浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表7，
表7丹参素标准曲线测定结果
以丹参素的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行回归。回归方程为y＝3.55×106X+2.1×104，其相关系数r＝0.9999。由此可知：丹参素的浓度为0.0382～0.7641mg·ml-1时，线性关系良好。
进样精密度试验
取批号为20080705批样品1份，按供试品溶液制备项下操作，吸取2μl，连续进样6次，样品中丹参素峰面积的RSD为0.25％。结果表明，符合要求，结果见表8。
表8进样精密度试验
重复性试验
取批号为20080705样品6份，按供试品溶液制备项下操作，吸取2μl，测定每份样品丹参素含量，结果测得样品平均含量为0.186mg/丸，RSD为1.26％，结果表明，重复性试验符合要求，结果见表9。
表9重复性试验
稳定性试验
取批号为20080705样品1份，按供试品溶液制备项下操作，吸取2μl，分别于0、2、4、8、12小时进样，测得丹参素含量RSD为0.23％，结果表明，供试品溶液在12小时内测定稳定，结果见表10。
表10稳定性试验
回收率测定
取批号为20080705样品9份，每份5丸，至10ml量瓶中，对照品加入量为3个水平，为80％、100％、120％，每水平等量3份，丹参素钠对照品加入量分别为0.769、0.965、1.153mg。按供试品溶液制备项下操作，计算回收率。结果丹参素平均回收率为100.1％，RSD为1.94％，结果见表11，
表11丹参素的回收率试验
样品测定
取复方丹参滴丸10批，按供试品溶液制备项下操作，测定每批样品丹参素含量，结果见表12，含量测定结果均符合规定。
表12样品测定
不同仪器对含量测定的影响
取批号为090203样品溶液，使用Waters Acquity UPLCTM HSS T3(2.1×100mm，1.8μm)色谱柱，分别使用不同的仪器(Waters：UPLC；Agilent：RRLC岛津：UFLC)测定样品中丹参素的含量。结果显示，采用相同色谱柱，不同仪器对测定结果均无太大的影响。
实施例4
三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量测定
三七成分含量测定方法：
色谱条件及系统适用性试验Waters Aqucity UPLCTM BEH Shield RP18(2.1×100mm，1.7μm)色谱柱，以水溶液为流动相A；以乙腈溶液为流动相B，按流动相梯度洗脱参考表进行洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为203nm；柱温40℃；记录时间为16分钟，理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于8000。
流动相梯度洗脱参照表
表13
对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备取复方丹参滴丸10丸，精密称定，加4％氨水5ml，超声使溶解，溶液全部通过预处理好的C-18小柱(80-100目1.0g，甲醇20ml、水20ml活化)，并用水洗至中性，再用甲醇洗脱至5ml容量瓶中，定容至刻度，用0.22μm有机滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定。本品含三七以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1总量计，每丸不低于0.10mg。
Claims (10)
1.一种复方丹参滴丸，由丹参、三七及冰片制成，其特征在于，其有效成分通过薄层鉴别、指纹图谱鉴别及含量测定方法进行全面、准确、科学控制。
2.权利要求1的复方丹参滴丸的检测方法，其特征在于，包括对药物成分三七的鉴别方法、丹参的指纹图谱鉴别方法、丹参的含量检测方法和三七的含量检测方法。
3.权利要求2的检测方法，其特征在于，所述三七的鉴别方法采用薄层层析法，参照物选用三七对照药材、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品。
4.权利要求3的检测方法，其特征在于，所述薄层层析法，步骤如下：供试品溶液的制备：取本品20丸，置离心管中，加入稀氨溶液9ml，超声处理使溶解，离心，取上清液，通过D101型大孔吸附树脂柱，用水15ml洗脱，弃去水洗脱液，再用甲醇洗脱，弃去初洗脱液约0.4ml，收集续洗脱液约5ml，浓缩至约2ml，作为供试品溶液，对照药材溶液的制备：取三七对照药材0.5g，置离心管中，加入稀氨溶液9ml，超声处理15分钟，离心，取上清液，通过D101型大孔吸附树脂柱，用水15ml洗脱，弃去水洗脱液，再用甲醇洗脱，弃去初洗脱液约0.4ml，收集续洗脱液约5ml，作为对照药材溶液，对照品溶液的制备：分别精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml分别含1mg、0.5mg、0.5mg、0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液，薄层条件：照中国药典2005版附录VIB试验，吸取供试品溶液4～8μl、对照药材溶液2μl，对照品溶液2μl分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝13∶7∶25～10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开12cm以上，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。
5.权利要求2的检测方法，其特征在于，所述丹参的鉴别方法采用指纹图谱比较法，参照物选用丹参素钠。
6.权利要求5的检测方法，其特征在于，所述指纹图谱比较法，步骤如下：色谱条件与系统适用性试验Waters Acquity UPLCTM HSS T3色谱柱，以含0.02％ml/ml磷酸的80％乙腈为流动相A；以0.02％ml/ml的磷酸水溶液为流动相B，按流动相梯度洗脱表进行洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为280nm；柱温40℃；记录时间为10分钟，理论板数按丹参素峰计算应不低于8000，
流动相梯度洗脱参照表：
时间(分钟) 流动相A 流动相B
0～1.6 9→22 91→78
1.6～1.8 22→26 78→74
1.8～8.0 26→39 74→61
8.0～8.4 39→9 61→91
8.4～10 9 91
对照品溶液的制备取丹参素钠对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含0.16mg的溶液相当于每1ml含丹参素0.144mg，即得，复方丹参滴丸供试品溶液的制备取本品10丸，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量，超声处理15分钟使溶解，放冷，加水至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，即得，测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl～4μl注入液相色谱仪，测定，复方丹参滴丸供试品色谱图与对照指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，相似度应不低于0.9。
7.权利要求2的检测方法，其特征在于，所述丹参的含量测定，是对其中丹参素的含量进行测定，采用亚2μm液相色谱技术，测定处方中丹参素含量。
8.权利要求7的检测方法，其特征在于，所述丹参素的含量测定方法，步骤与指纹图谱方法相同，达到指纹图谱鉴别与含量测定同时检测，用外标法计算含量，本品每丸含丹参以丹参素计，不得少于0.10mg。
9.权利要求2的检测方法，其特征在于，所述三七的含量测定，是对其中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量进行测定，采用亚2μm液相色谱技术，测定处方中三七成分的含量。
10.权利要求9的检测方法，其特征在于，所述三七皂苷R1，人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量测定，步骤如下
色谱条件及系统适用性试验Waters Aqucity UPLCTM BEH Shield RP18色谱柱，以水溶液为流动相A；以乙腈溶液为流动相B，按流动相梯度洗脱参考进行洗脱；流速为每分钟0.4ml；检测波长为203nm；柱温40℃；记录时间为16分钟，理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于8000，
流动相梯度洗脱参照表
时间(分钟) 流动相A 流动相B
0～7.0 83→79 17→21
7.0～13.5 79→64 21→36
13.5～13.6 64→10 36→90
13.6～14.5 10 90
14.5～15.0 10→83 90→17
15.0～16.0 83 17
对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得，供试品溶液的制备取复方丹参滴丸10丸，精密称定，加4％氨水5ml，超声使溶解，溶液全部通过预处理好的80-100目1.0g的C-18小柱，并用水洗至中性，再用甲醇洗脱至5ml容量瓶中，定容至刻度，用0.22μm有机滤膜滤过，即得，测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各2μl注入超高效液相色谱仪，测定，用外标法计算含量，本品含三七以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1总量计，每丸不低于0.10mg。
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