CN103822975B - 一种党参方的生脉制剂的检测方法 - Google Patents
一种党参方的生脉制剂的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103822975B CN103822975B CN201310342928.3A CN201310342928A CN103822975B CN 103822975 B CN103822975 B CN 103822975B CN 201310342928 A CN201310342928 A CN 201310342928A CN 103822975 B CN103822975 B CN 103822975B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- radix codonopsis
- mobile phase
- formulation
- need testing
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000756943 Codonopsis Species 0.000 title claims abstract description 87
- 239000009877 shengmai Substances 0.000 title claims abstract description 79
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 72
- YEFOAORQXAOVJQ-RZFZLAGVSA-N schisandrol a Chemical compound C1[C@H](C)[C@@](C)(O)CC2=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2OC YEFOAORQXAOVJQ-RZFZLAGVSA-N 0.000 claims abstract description 56
- YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 30
- NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethylfurfural Chemical compound OCC1=CC=C(C=O)O1 NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 229930193195 schizandrin Natural products 0.000 claims abstract description 28
- YEFOAORQXAOVJQ-UHFFFAOYSA-N wuweizischun A Natural products C1C(C)C(C)(O)CC2=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C2C2=C1C=C(OC)C(OC)=C2OC YEFOAORQXAOVJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- MMMUDYVKKPDZHS-MXFZCOKBSA-N (2R,3R,4S,5S,6R)-2-[(4E,6R,7R,12E)-1,7-dihydroxytetradeca-4,12-dien-8,10-diyn-6-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound C\C=C\C#CC#C[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O)\C=C\CCCO MMMUDYVKKPDZHS-MXFZCOKBSA-N 0.000 claims abstract description 27
- MMMUDYVKKPDZHS-UHFFFAOYSA-N (4E,6R,7R,12E)-tetradeca-4,12-dien-8,10-diyne-1,6,7-triol-7-O-beta-D-glucopyranoside Natural products CC=CC#CC#CC(O)C(C=CCCCO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O MMMUDYVKKPDZHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- MMMUDYVKKPDZHS-JGOWZFCDSA-N Lobetyolin Natural products CC=CC#CC#C[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O)C=CCCCO MMMUDYVKKPDZHS-JGOWZFCDSA-N 0.000 claims abstract description 27
- DENOGTWTGDLIBH-SZMQGJMYSA-N lobetyolin Natural products CC=CC#CC#C[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O)C=CCCO DENOGTWTGDLIBH-SZMQGJMYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 23
- RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N hydroxymethylfurfural Natural products COC1=CC=C(C=O)O1 RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 88
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 54
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- IAWPVNMEXASPFO-UHFFFAOYSA-N C(CCCCCCCCCCCCCCCCC)[SiH3].[C] Chemical compound C(CCCCCCCCCCCCCCCCC)[SiH3].[C] IAWPVNMEXASPFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 claims description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 239000012925 reference material Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 9
- 240000006079 Schisandra chinensis Species 0.000 abstract description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 3
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 3
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 3
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000011003 system suitability test Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000721047 Danaus plexippus Species 0.000 description 1
- 240000002948 Ophiopogon intermedius Species 0.000 description 1
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000008862 fructus schizandrae, radix ginseng, radix ophiopogonis drug combination Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明公开了一种党参方的生脉制剂的检测方法，检测其中5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的含量，所述方法为，将待测样品制成供试品溶液，经高效液相色谱检测，获得供试品溶液的高效液相色谱图，然后以各个对照品制得的标准曲线方程计算得到党参方的生脉制剂中5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷和五味子醇甲的含量。本发明方法重现性、稳定性良好，操作简单便捷。采用同一色谱条件同时测定4种化合物的含量，提高了党参方的生脉制剂的质量评价水平，同时可为原料药中党参与五味子的鉴别提供一定依据。
Description
技术领域
本发明属于中药分析的领域，涉及一种中药复方制剂的含量测定方法，具体涉及生脉制剂（党参方）的含量测定方法。
背景技术
生脉（党参方）是在传统古方生脉散的基础上，以党参代替人参的配方。方中党参为君药，补中益气，辅以麦冬养阴生津，五味子敛肺止汗，三药合用，一补一清一敛，共奏益气复脉、养阴生津之功效。与原生脉方（人参方）相比，党参较温和，因此，党参方一般用于轻症和慢性证，而人参方则多用于急症重症。国家食品药品监督管理局数据显示，全国生产生脉（党参方）不同药物剂型的厂家已达100家，剂型包括口服液、颗粒剂、糖浆剂、软胶囊剂等，其中以口服液为主，生脉饮（党参方）的生产厂家达79家。现党参方的生脉制剂已被广泛用于临床治疗或辅助治疗各类休克及心脏类疾病。
随着党参方的生脉制剂的广泛使用，为保证临床用药的安全有效，其质量标准的研究和建立日益重要。国家中成药标准汇编中收载有生脉饮（党参方）的质量标准，仅包括党参的薄层鉴别，基本的密度检查和PH值范围限定等，方法专属性不强，不足以科学全面地对生脉饮（党参方）的质量进行评价。现有文献中，对党参方的生脉制剂质量标准研究的报道较少。韦向红等（HPLC法测定生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量.广西中医药,2005,28(4):57-58）曾报道了采用HPLC法测定生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量；韩雪等（RP-HPLC测定生脉饮（党参方）中党参炔苷的含量.中成药,2008,30(5)）曾报道了测定生脉饮（党参方）中党参炔苷的含量；在公开号CN1840078A，申请号为200610200057.1的中国专利中，公开了一种对生脉制剂（党参方）（在CN1840078A专利中为生脉颗粒（党参方））中五味子醇甲进行含量测定的方法。以上方法均仅对这一组方的中成药中单一成分含量进行了测定，以此评价生脉制剂（党参方）的质量不尽科学全面，无法真正反映制剂的质量。
发明内容
本发明的技术目的是在对生脉制剂（党参方）物质基础研究和现有含量测定方法的基础上，建立同时测定已明确的4个主要成分含量的方法，以期更科学全面地评价生脉制剂（党参方）产品的内在质量，为建立更高水平的质量标准提供依据。
本发明的内容在于，提供一种生脉制剂（党参方）的多成分含量测定方法。
本发明采用的技术方案是：
一种党参方的生脉制剂的检测方法，所述党参方的生脉制剂包括党参方的液体生脉制剂和固体生脉制剂，所述方法检测党参方的生脉制剂中5-羟甲基糠醛（简称5-HMF）、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的含量，所述方法包括以下步骤：
（1）制备供试品溶液：党参方的固体生脉制剂用蒸馏水溶解，配成浓度1g/mL的党参方的固体生脉制剂的溶液，党参方的固体生脉制剂的溶液或党参方的液体生脉制剂与乙腈按体积比92:8混合，高速离心后取上清液，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；
（2）样品检测：将供试品溶液经高效液相色谱检测，得供试品溶液的高效液相色谱图，色谱条件为：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径≤5μm；流动相为体积分数0.1%的甲酸或乙酸的水溶液与乙腈的混合溶液，梯度洗脱；柱温为20-30℃；流速为0.8-1.2mL/min；紫外检测器，检测波长为250-270nm；
（3）绘制标准曲线：取5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的标准对照品，配制成混合对照品溶液，取不同量的混合对照品溶液按照步骤（2）相同条件进行测试，得混合对照品溶液的高效液相色谱图，分别对各个对照品，以进样质量为横坐标，以混合对照品溶液的高效液相色谱图中相应的吸收峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，分别得到5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的标准曲线和线形回归方程；
（4）根据供试品溶液的高效液相色谱图中相应吸收峰的峰面积及各对照品的标准曲线，计算得到供试品溶液中5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的含量，然后根据供试品溶液的稀释比例，计算得到党参方的生脉制剂5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的含量。
本发明所述步骤（2）中，所述梯度洗脱中，流动相为体积分数0.1%的甲酸或乙酸的水溶液与乙腈的混合溶液，以乙腈为流动相A，以体积分数0.1%的甲酸或乙酸的水溶液为流动相B，所述梯度洗脱程序为以下之一：
（一）起始时，流动相A的体积百分比浓度为5-10%，设定0至25min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至12-22%，25至40min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至25-35%，40至55min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100%，然后继续洗脱10～15min；
（二）起始时，流动相A的体积百分比浓度为5-10%，设定0至35min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至25-35%，35至45min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至45-55%，45至55min内，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100%，然后继续洗脱10～15min。
进一步，优选所述梯度洗脱中，以乙腈为流动相A，以体积分数0.1%的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱程序为下列之一：
（a）起始时，流动相A的体积百分比浓度为7%，设定0至25min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至12%，25至40min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至30%，40至55min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100%，然后继续洗脱10～15min；
（b）起始时，流动相A的体积百分比浓度为8%，设定0至25min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至12%，25至40min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至30%，40至55min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100%，然后继续洗脱10～15min；
（c）起始时，流动相A的体积百分比浓度为7%，设定0至35min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至30%，35至45min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至50%，45至55min内，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100%，然后继续洗脱10～15min；
（d）起始时，流动相A的体积百分比浓度为6%，设定0至35min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至30%，35至45min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至50%，45至55min内，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100%，然后继续洗脱10～15min。
所述步骤（1）中，所述微孔滤膜的孔径通常为0.45μm或0.22μm。
所述步骤（1）中，所述高速离心优选在13000rpm转速下高速离心10min。
所述步骤（2）中，所述流速优选为1.0mL/min。
所述步骤（2）中，所述检测波长优选为254nm。
所述步骤（2）中，高效液相色谱的进样量通常为1～20μL，优选为10μL。
所述步骤（2）中，所述碳十八烷基硅烷键合硅胶的粒径≤5μm；进一步优选粒径为5μm、3.5μm或1.8μm。
所述步骤（2）中，色谱柱的理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于3000，常用的市售色谱柱都能达到此要求。
本发明针对现行的单一成分的含量测定方法，首次提出对生脉制剂（党参方）同时测定多成分含量的方法，以生脉制剂（党参方）方中含量较高、色谱分离较好的5-羟甲基糠醛（5-HMF）、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲4种化合物作为指标性成分，对含量测定方法中的色谱柱、检测器、检测波长、色谱流动相、柱温以及样品前处理方法进行了优化。本发明使生脉制剂（党参方）的质量评价方法更具科学性、特征性和专属性，同时也可为原料药中党参与五味子的鉴别提供一定参考，为进一步提高生脉制剂（党参方）的质量标准提供科学依据。
本发明的有益效果在于：
1.本发明提供的含量测定方法重现性、稳定性良好，可以从定性定量的角度较为全面地反映生脉制剂（党参方）中的主要成分及其含量变化情况，提高了其质量评价和质量控制水平。
2.对组分复杂的中药制剂进行多成分的含量测定，工作量和检验成本均较大。本发明提供的检测方法，可以采用同一色谱条件同时测定生脉制剂（党参方）中4个成分的含量，大大节省了检测时间及实验成本，提高了党参方的生脉制剂的质量控制标准，也可为原料药中党参与五味子的鉴别提供一定依据。
附图说明
图1：实施例1中不同检测波长下生脉饮（党参方）供试品溶液的液相色谱图。
图2：实施例1中不同流动相系统下生脉饮（党参方）供试品溶液的液相色谱图。
图3：实施例2中供试品溶液制备条件1下供试品溶液①的液相色谱图。
图4：实施例2中供试品溶液制备条件2下供试品溶液②的液相色谱图。
图5：实施例2中供试品溶液制备条件3下供试品溶液③的液相色谱图。
图6：实施例2中供试品溶液制备条件4下供试品溶液④的液相色谱图。
图7：实施例3中洗脱程序1下供试品溶液的液相色谱图。
图8：实施例3中洗脱程序2下供试品溶液的液相色谱图。
图9：实施例3中洗脱程序3下供试品溶液的液相色谱图。
图10：实施例3中洗脱程序4下供试品溶液的液相色谱图。
图11：实施例4中5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲混合对照品溶液HPLC色谱图。
图12：实施例5中生脉颗粒（党参方）供试品溶液的液相色谱图。
具体实施方式
下面以色谱条件的优化、供试品溶液制备条件的选择、生脉饮（党参方）及生脉颗粒（党参方）为实施例进一步详细说明本发明，该实施例仅用于说明本发明而对本发明并没有限制。
实施例1色谱条件的优化（以生脉饮（党参方）为例）
1.检测波长的选择
考察了不同波长203,220,254,280nm下生脉饮（党参方）供试品溶液的液相色谱图（图1），供试品溶液的制备方法为：精密移取920μL生脉饮（党参方）样品，加80μL乙腈，高速离心10min（转速13000rpm），取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。色谱条件为：色谱柱：Agilent Extend C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液，按下表的洗脱程序设定进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL。
表1：洗脱程序表
表1表示：起始时，流动相A的体积百分比浓度为8%，设定0至25min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至12%，25至40min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至30%，40至55min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100%，然后继续洗脱。表1表示的是在高效液相色谱系统中按照表1设定时间和浓度参数，系统会自动控制流动相比例，在不同时间段内按照起始浓度和终浓度进行浓度的线性渐变，并不是突变。本领域技术人员根据表1即可知道色谱仪的设定条件，这是通用的表示方法。以下洗脱程序表意义相同，不再赘述。
从图1中可看出，4个待测成分色谱峰在254nm处均有较好的紫外吸收，故选择254nm作为检测波长。
2.流动相选择
供试品溶液的制备方法同1，考察了多种流动相系统：乙腈-水，甲醇-水，乙腈-0.1v%甲酸水，乙腈-0.1v%乙酸水，以上各体系中A为有机相（乙腈或甲醇），B为水相（水、体积分数0.1%甲酸水溶液或体积分数0.1%乙酸水溶液）。其他色谱条件为：色谱柱：AgilentExtend C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；梯度洗脱，洗脱程序表同表1；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：254nm；进样量：10μL。所得液相色谱图见图2，图中可看出，当用乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱效果最佳，而且各色谱峰分离度好，峰形尖锐。
3．柱温的影响
供试品溶液的制备方法同1，考察了不同柱温（20℃、25℃、30℃）下色谱峰的分离情况。色谱条件为：色谱柱：Agilent Extend C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液，进行梯度洗脱，洗脱程序表同表1；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；进样量：10μL。结果表明，各色谱峰的分离情况类似，20℃-30℃范围内，温度对色谱峰的分离影响不大。
实施例2供试品溶液制备条件的选择
①供试品溶液制备条件1：精密移取920μL生脉饮（党参方）样品，加80μL乙腈，高速离心10min（转速13000rpm），取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液①，高效液相色谱仪检测，色谱条件为：色谱柱：Agilent Extend C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液，进行梯度洗脱，洗脱程序表同表1；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：254nm;进样量：10μL。所得色谱图见图3。
②供试品溶液制备条件2：精密量取10mL生脉饮（党参方）样品，用正丁醇萃取3次，10mL/次，合并正丁醇层，回收正丁醇，残渣溶于适量水溶液并定容于10mL量瓶中，得供试品溶液②，取样进行高效液相色谱仪检测，色谱条件同实施例2中①。色谱图见图4。
③供试品溶液制备条件3：精密量取10mL生脉饮（党参方）样品，上D101大孔树脂柱(约30mL，柱体积为12mL)，用60mL（5倍柱体积）蒸馏水洗脱，弃去。再用120mL（10倍柱体积）30％的乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，残渣溶于适量水溶液并定容于10mL量瓶中,得供试品溶液③，取样经高效液相色谱仪检测，色谱条件同实施例2中①。色谱图见图5。
④供试品溶液制备条件4：精密量取1mL生脉饮（党参方）样品，用waters Oasis HLB固相小柱（柱体积1ml）萃取法中以水、纯甲醇溶液依次洗脱。方法为先进行柱活化过程：3mL（3倍柱体积）甲醇活化，而后用3mL去离子水（即超纯水）平衡。再精密吸取上述生脉饮（党参方）样品1mL上柱后，固相柱压干，用1mL甲醇溶液洗脱，定容于1mL量瓶中,得供试品溶液④。取样经高效液相色谱仪检测，色谱条件同实施例2中①。色谱图见图6。
从图3-图6的对比，可以看出，经过正丁醇萃取、固相小柱萃取之后，大部分的5-HMF被萃取掉，损失较大；经D101大孔树脂的洗脱，小极性物质（如党参炔苷、五味子醇甲）不能被30%乙醇洗脱出来。
为了保持4个成分测定结果的准确，最终选择的供试品溶液的制备方法为：精密移取920μL生脉饮（党参方）样品，加80μL乙腈，高速离心10min（转速13000rpm），取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
实施例3不同梯度洗脱程序下样品的分离情况（以生脉饮（党参方）供试品溶液为例）
供试品溶液的制备方法为：精密移取920μL生脉饮（党参方）样品，加80μL乙腈，高速离心10min（转速13000rpm），取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
1.洗脱程序1，色谱图见图7.
2.洗脱程序2，色谱图见图8.
3.洗脱程序3，色谱图见图9.
4.洗脱程序4，色谱图见图10.
以上样品均在Agilent Extend C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）中洗脱，流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：254nm；进样量：10μL。
以上洗脱程序下，各目标成分的色谱峰均能达到很好的分离。
实施例4生脉饮（党参方）中4种成分（5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲）的含量测定
（一）色谱条件与系统适应性试验
（1）仪器与试药：
Agilent Technologies1260infinity高效液相色谱系统（包括四元梯度泵（G1311B，1260Quat Pump）、在线脱气机、自动进样器（G1329B，1260ALS）、柱温箱（G1316A，1260TCC）、UV检测器（G1314F，1260VWD）、色谱数据工作站）；奥豪斯AR224w（万分之一电子天平）；十万分之一电子天平（METTLER XS205）；纯水仪（Millipore,Bedford,MA,USA）；5-HMF（批号：11053101）、原儿茶酸（批号：11103006）、党参炔苷（批号：11111901）、五味子醇甲（批号：12031012），对照品均购自成都曼斯生物有限公司，经高效液相检测，纯度均在98%以上；甲酸（色谱纯，上海阿拉丁试剂有限公司），乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司），水为超纯水（实验室自制）。
（二）色谱条件：
同实施例2中供试品溶液①所用色谱条件。
（三）对照品溶液的制备：
精密称取5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲适量，配制成5-HMF浓度为0.4036mg/mL，原儿茶酸浓度为0.0504mg/mL，党参炔苷浓度为0.0872mg/mL，五味子醇甲浓度为0.0350mg/mL的混合对照品溶液。对照品溶液色谱图见图11。
（四）供试品溶液的制备：
精密移取920μL生脉饮（党参方）样品，加80μL乙腈，高速离心10min（转速13000rpm），取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。供试品溶液色谱图见图10。
（五）标准曲线的绘制
分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、8、12、16μL注入液相色谱仪，测得峰面积。以各自标准品的进样量（X,μg）为横坐标、各自标准品相应的峰面积（Y,mAU）为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程见下表。
生脉饮（党参方）4种成分标准曲线
（六）精密度实验
在上述色谱条件下，精密吸取混合对照品溶液连续进样6次，测定5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲峰面积。结果峰面积的RSD分别为1.5%、1.6%、2.0%、1.3%，表明仪器精密度良好。
（七）稳定性试验
取同一样品（J企业，批号：1206001），按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，分别于2、4、8、16、24、48h测定。结果显示供试品溶液中5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的峰面积的RSD在48h内分别为0.16%、0.72%、2.0%、1.1%，表明供试品溶液在48h内稳定性良好。
（八）重复性试验
取同一批样品（J企业，批号：1206001）6份，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，进行测定。结果样品中5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲（n=6）平均含量为0.4083、0.0104、0.0363、0.0130mg/mL；RSD分别为1.3%、1.0%、1.7%、1.4%，表明样品的重复性良好。
（九）加样回收率试验
精密量取已知含量的同一批样品（J企业，批号：1206001）0.5mL，分别精密加入0.5mL已配好的5-HMF，原儿茶酸，党参炔苷，五味子醇甲混合对照品溶液，混匀，按供试品溶液制备项下操作，平行操作6份，按上述色谱条件测定含量，计算加样回收率，结果见下表。
加样回收率结果
（十）样品含量测定
按照拟定的含量测定方法对来源于10个厂家的生脉饮（党参方）的12批样品进行测定，结果见下表。代表性生脉饮（党参方）的色谱图见图10。
不同厂家不同批次生脉饮（党参方）多成分含量测定样品测定结果（mg/mL）
注：“-”表示峰面积已低于定量限或没有峰出现。
以上对生脉饮（党参方）含量测定的方法学考察结果表明：该方法精密度、重复性、回收率结果均较好，能够准确、快捷地同时测定成品中5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷和五味子醇甲4种成分的含量，可用于生脉饮（党参方）的质量评价研究中。
实施例5生脉颗粒（党参方）中4种成分（5-HMF、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲）的含量测定
（一）色谱条件与系统适应性试验
（1）仪器与试药：
同实施例4中“仪器与试药”项下。
（二）色谱条件
同实施例4中色谱条件。
（三）对照品溶液的制备：
同实施例4中“对照品溶液的制备”。
（四）供试品溶液的制备：
取装量差异项下的生脉颗粒（党参方）10g，以蒸馏水定容于10mL容量瓶中，精密移取920μL生脉颗粒（党参方）样品溶液，加80μL乙腈，高速离心10min（转速13000rpm），取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
（五）标准曲线的绘制
所用标准曲线同实施例4.
（六）样品含量测定
按照拟定的含量测定方法对2个企业的2批生脉颗粒（党参方）进行测定，结果见下表。代表性生脉颗粒（党参方）的色谱图见图12。
不同厂家生脉颗粒（党参方）多成分含量测定样品测定结果（mg/g）
注：“-”表示峰面积已低于定量限或没有峰出现。
Claims (4)
1.一种党参方的生脉制剂的检测方法，所述党参方的生脉制剂包括党参方的液体生脉制剂和固体生脉制剂，其特征在于所述方法检测党参方的生脉制剂中5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的含量，所述方法包括以下步骤：
(1)制备供试品溶液：党参方的固体生脉制剂用蒸馏水溶解，配成浓度1g/mL的党参方的固体生脉制剂的溶液，党参方的固体生脉制剂的溶液或党参方的液体生脉制剂与乙腈按体积比92:8混合，高速离心后取上清液，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；
(2)样品检测：将供试品溶液经高效液相色谱检测，得供试品溶液的高效液相色谱图，色谱条件为：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径≤5μm；流动相为体积分数0.1％的甲酸或乙酸的水溶液与乙腈的混合溶液，梯度洗脱；柱温为20-30℃；流速为0.8-1.2mL/min；紫外检测器，检测波长为250-270nm；
所述梯度洗脱中，流动相为体积分数0.1％的甲酸或乙酸的水溶液与乙腈的混合溶液，以乙腈为流动相A，以体积分数0.1％的甲酸或乙酸的水溶液为流动相B，所述梯度洗脱程序为下列之一：
(c)起始时，流动相A的体积百分比浓度为7％，设定0至35min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至30％，35至45min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至50％，45至55min内，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100％，然后继续洗脱10～15min；
(d)起始时，流动相A的体积百分比浓度为6％，设定0至35min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至30％，35至45min，流动相A的体积百分比浓度线性上升至50％，45至55min内，流动相A的体积百分比浓度线性上升至100％，然后继续洗脱10～15min；
(3)绘制标准曲线：取5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的标准对照品，配制成混合对照品溶液，取不同量的混合对照品溶液按照步骤(2)相同条件进行测试，得混合对照品溶液的高效液相色谱图，分别对各个对照品，以进样质量为横坐标，以混合对照品溶液的高效液相色谱图中相应的吸收峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，分别得到5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的标准曲线和线形回归方程；
(4)根据供试品溶液的高效液相色谱图中相应吸收峰的峰面积及各对照品的标准曲线，计算得到供试品溶液中5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的含量，然后根据供试品溶液的稀释比例，计算得到党参方的生脉制剂5-羟甲基糠醛、原儿茶酸、党参炔苷、五味子醇甲的含量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，所述流速为1.0mL/min。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，所述检测波长为254nm。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，高效液相色谱的进样量为10μL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310342928.3A CN103822975B (zh) | 2013-08-07 | 2013-08-07 | 一种党参方的生脉制剂的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310342928.3A CN103822975B (zh) | 2013-08-07 | 2013-08-07 | 一种党参方的生脉制剂的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103822975A CN103822975A (zh) | 2014-05-28 |
| CN103822975B true CN103822975B (zh) | 2015-10-28 |
Family
ID=50758139
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310342928.3A Active CN103822975B (zh) | 2013-08-07 | 2013-08-07 | 一种党参方的生脉制剂的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103822975B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105823830B (zh) * | 2015-01-09 | 2019-11-19 | 天士力医药集团股份有限公司 | 一测多评法测定益心复脉颗粒中丹酚酸b和五味子醇甲含量的方法 |
| CN109633044A (zh) * | 2018-12-10 | 2019-04-16 | 江苏七0七天然制药有限公司 | 一种参芪膏的检测方法 |
| CN109470792B (zh) * | 2018-12-13 | 2021-06-18 | 重庆医科大学 | 一种同时测定党参药材中八种活性成分的hplc方法 |
| CN110196305A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-09-03 | 远大医药黄石飞云制药有限公司 | 一种应用于肥儿宝颗粒中党参炔苷含量的分析方法 |
| CN110412178A (zh) * | 2019-09-11 | 2019-11-05 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种生脉散主要成分含量测定方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1840078A (zh) * | 2006-01-20 | 2006-10-04 | 贵州同济堂制药有限公司 | 生脉颗粒剂的质量控制方法 |
| CN102078503A (zh) * | 2009-11-30 | 2011-06-01 | 江西济民可信药业有限公司 | 生脉饮中药制剂的检测方法 |
-
2013
- 2013-08-07 CN CN201310342928.3A patent/CN103822975B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1840078A (zh) * | 2006-01-20 | 2006-10-04 | 贵州同济堂制药有限公司 | 生脉颗粒剂的质量控制方法 |
| CN102078503A (zh) * | 2009-11-30 | 2011-06-01 | 江西济民可信药业有限公司 | 生脉饮中药制剂的检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HPLC同时测定生脉饮（党参方）中多组分的含量;楚楚 等;《中药材》;20130531;第36卷(第5期);第820-823页 * |
| HPLC法测定生脉饮（党参方）中五味子醇甲的含量;韦向红 等;《广西中医药》;20050831;第28卷(第4期);第57-58页 * |
| RP-HPLC测定生脉饮（党参方）中党参炔苷的含量;韩雪 等;《中成药》;20080531;第30卷(第5期);第附4-附6页 * |
| 生脉制剂含量测定的研究进展;周霞 等;《时珍国医国药》;20070531;第18卷(第5期);第1243-1244页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103822975A (zh) | 2014-05-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103822975B (zh) | 一种党参方的生脉制剂的检测方法 | |
| CN104297026B (zh) | 一种提取中药陈皮中的黄酮类有效成分的方法 | |
| CN102119961B (zh) | 一种复方丹参滴丸的检测方法 | |
| CN102466658B (zh) | 一种注射剂中5-羟甲基糠醛含量的测定方法 | |
| CN104407072A (zh) | 一种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法 | |
| CN103808835B (zh) | Hplc-dad法同时测定四物汤煎剂中10种化学成分含量的方法 | |
| CN101721516B (zh) | 栀子提取物的制备方法 | |
| CN102520103B (zh) | 六味地黄丸中成分的定量检测方法 | |
| CN104730158B (zh) | 一种加味藿香正气软胶囊的含量测定方法 | |
| CN103698432B (zh) | 测定荔枝核提取物中皂苷含量的方法 | |
| CN110568111B (zh) | 一种巴戟天配方颗粒中寡聚糖的检测方法 | |
| CN102552515A (zh) | 一种养血当归糖浆的质量检测方法 | |
| CN1947740B (zh) | 独一味药材、中间体及其注射液的指纹图谱检测方法 | |
| CN110967422A (zh) | 一种益气补血片中黄芪甲苷含量测定方法 | |
| CN110806457A (zh) | 四君甘露饮指纹图谱的检测方法 | |
| CN102008541B (zh) | 无糖型复方扶芳藤制剂中3种主要活性成分的同时检测方法 | |
| CN101987115A (zh) | 玉屏风口服制剂及其制备和检测方法 | |
| CN106442748B (zh) | 一种舒肝丸的含量测定方法 | |
| CN100484558C (zh) | 参麦冻干粉针及其质量控制方法 | |
| CN104678011B (zh) | 一种通脉养心丸的检测方法 | |
| CN109932437A (zh) | 一种药物组合物的检测方法 | |
| CN103792303B (zh) | 翼首草药材的检测方法 | |
| CN108593794B (zh) | 一种多指标成分uplc检测红花中有效成分含量方法 | |
| CN113671099A (zh) | 一种紫叶丹胶囊的检测方法 | |
| CN113504325A (zh) | 一种肠炎宁制剂的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |